EA020848B1 - Спиропиперидиновые соединения в качестве антагонистов рецептора orl-1 - Google Patents

Abstract

Предложен антагонист рецептора ORL-1 формулыего применение и способы его получения. Антагонисты ORL-1, как полагают, пригодны для лечения избыточного веса, ожирения и/или поддержания веса после лечения избыточного веса или ожирения. Некоторые соединения также продемонстрировали на животных моделях, что соединения настоящего изробретения полезны для лечения мигрени.

Description

его применение и способы его получения. Антагонисты ОКЬ-1, как полагают, пригодны для лечения избыточного веса, ожирения и/или поддержания веса после лечения избыточного веса или ожирения. Некоторые соединения также продемонстрировали на животных моделях, что соединения настоящего изробретения полезны для лечения мигрени.

Орфанин РР (ОРР)/ноцицептин представляет собой пептид, состоящий из 17 аминокислот, который имеет высокую афинность к сопряженному с О-белком рецептору (ОРСК) ОКЬ-1. Рецептор ОКЬ-1 представляет собой ОРСК класса А, который экспрессируется в основном в центральной нервной системе и периферической нервной системе, а также в желудочно-кишечном тракте, гладких мышцах и иммунной системе. Несмотря на структурное родство с опиоидными пептидами/рецепторами, система ОРр/ноцицептин не проявляет значительной перекрестной реактивности с классическими опиоидными пептидами/рецепторами и проявляет антиопиоидную активность ίη νίνο (например, сообщалось, что ОКр/ноцицептин проявляет антиноцицептивные свойства).

В многочисленных исследованиях на животных моделях депрессии и пищевого поведения было показано, что антагонисты рецептора ноцицептина/орфанина РР (НОС/ОРР). в частности антагонисты рецептора ОКЬ-1, обладают антидепрессантной активностью и анорексигенной активностью. В связи с этим полагают, что антагонисты ОКЬ-1 подходят для применения для лечения депрессии и/или избыточного веса и ожирения и/или для поддержания веса после лечения избыточного веса или ожирения.

В \УО 2003/095427 описаны некоторые спиропиперидинильные соединения в качестве антагонистов ОКЬ-1 для применения в качестве анальгетиков.

Йошизуми, Такаши и соавторы (Ύοδίιίζιιιηί, ТаказЫ с1 а1. (2008), Рез1дп, зуййез13, апй зткЩге-асЙуку геΙαίίοηκΗίρ зШбу οί а ηονе1 с1азз οί ОКЬ-1 гесерЮг аШадошзГз Ьазеб оп Н-ЫагуНпеЙл! зр1гор1репйте, Вюотдашс & МеЙ1с1па1 СНетМгу Ьейетз, νο1. 18, р. 3778-3782) описали некоторые Ν-биарилметилспиропиперидиновые соединения в качестве селективных антагонистов ОКЬ-1.

Согласно настоящему изобретению предложено семейство 4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'тиено[2,3-с]пирановых] соединений, обладающих высокой антагонистической активностью в отношении рецептора ОКЬ-1 и высокой способностью ш νίνο занимать рецепторы ОКЬ-1 в ЦНС. Кроме того, конкретные соединения имеют благоприятный кардиотоксикологический профиль, определяемый их селективностью в отношении активности каналов ЬЬКО, а также высокой селективностью в отношении других физиологически важных рецепторов (например, мю-, каппа- и дельта-опиоидных, серотониновых и дофаминовых рецепторов). Кроме того, конкретные соединения согласно настоящему изобретению обладают хорошими биофармацевтическими и фармакокинетическими свойствами (такими как растворимость, воздействие при введении пероральным путем и поступление в ЦНС). Конкретные соединения согласно настоящему изобретению проявляют пониженный окислительный метаболизм, что обеспечивает хорошую биодоступность при пероральном введении. На животных моделях с использованием конкретных соединений было также показано, что соединения согласно настоящему изобретению подходят для лечения мигрени.

Согласно настоящему изобретению предложены соединения формулы I

где К¹ представляет собой фтор или хлор;

каждый из К^2а и К^2Ь представляет собой водород или фтор;

К³ представляет собой водород, метил, гидроксиметил или (С₁ -С₃) алкоксиметил;

К⁴ выбран из группы, состоящей из фтора, хлора, циано, цианометила, (С1-С3) алкила, циклопропила, гидроксиметила, метокси, циклопропилметокси, аминокарбонилметокси, (С1-С3) алкоксиметила, циклопропилоксиметила, циклопропилметоксиметила, 1-гидрокси-1-метилэтила, аминокарбонилоксиметила, метиламинокарбонилоксиметила, диметиламинокарбонилоксиметила, аминокарбонила, аминокарбонилметила, СН2-НК⁵К⁶, гидроксиимина, метоксиимина, морфолин-4-ила, морфолин-4-илметила, Аг¹, -СН2Аг¹, тетрагидрофуран-2-ила, 3-оксоморфолин-4-илметила, 2-оксопирролидин-1-илметила и 2-оксопиперидин-1-илметила;

К⁵ представляет собой водород, Ц-С₃ алкил, цианометил, -С(О)СН₃ или аминокарбонилметил;

К⁶ представляет собой водород или метил; и

Аг¹ представляет собой фрагмент, выбранный из группы, состоящей из имидизол-1-ила, имидизол2-ила, 2-метилимидизол-1-ила, пиразол-1-ила, 1,2,3-триазол-1-ила, 1,2,3-триазол-2-ила, 1,2,4-триазол-1ила, изоксазол-3-ила, оксазол-5-ила и 3-метил-1,2,4-оксадиазол-5-ила; или их фармацевтически приемлемые соли.

Согласно другому аспекту изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом. Согласно одному варианту реализации указанного

- 1 020848 аспекта изобретения фармацевтическая композиция также содержит по меньшей мере один дополнительный терапевтический ингредиент, например, антидепрессант группы селективных ингибиторов обратного захвата серотонина (δδΚΙ), например, флуоксетин. Кроме того, согласно указанному аспекту изобретения предложена фармацевтическая композиция, подходящая для лечения депрессии, содержащая соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми эксципиентами, носителями или разбавителями. Согласно другому варианту реализации указанного аспекта изобретения предложена фармацевтическая композиция, подходящая для лечения избыточного веса, ожирения и/или для поддержания веса, содержащая соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми эксципиентами, носителями или разбавителями. Согласно еще одному варианту реализации изобретения предложена фармацевтическая композиция, подходящая для лечения мигрени, содержащая соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми эксципиентами, носителями или разбавителями.

Согласно настоящему изобретению также предложен способ лечения депрессии у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в указанном лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. Согласно другому варианту реализации изобретения предложен способ лечения депрессии у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в указанном лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли и эффективного количества антидепрессанта группы δδΚΙ или его фармацевтически приемлемой соли, например, флуоксетина. Согласно другим вариантам реализации изобретения предложены способы лечения избыточного веса и/или ожирения и/или способ поддержания веса, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в указанном лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. Согласно конкретному варианту реализации указанных аспектов изобретения млекопитающее представляет собой человека.

Согласно настоящему изобретению также предложено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии. В пределах указанного аспекта изобретения предложено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения для лечения депрессии у млекопитающих, в частности человека. Согласно изобретению также предложено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль в комбинации с антидепрессантом группы δδΚΙ или его фармацевтически приемлемой солью, например, флуоксетином, для применения для лечения депрессии у млекопитающих, в частности человека. Также указанный аспект изобретения включает любое из следующего: соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль для применения для лечения избыточного веса; соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль для применения для лечения ожирения; соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль для применения в поддержании веса (для поддержания веса), в частности, после лечения избыточного веса или ожирения; соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль для применения для лечения мигрени.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли при получении лекарственного средства для лечения депрессии. Согласно другому варианту реализации изобретения предложено применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения избыточного веса, ожирения и/или для поддержания веса. Согласно другому варианту реализации изобретения предложено применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения мигрени.

Соединения согласно настоящему изобретению представляют собой основания и, соответственно, реагируют с рядом органических и неорганических кислот с образованием фармацевтически приемлемых солей. Фармацевтически приемлемые соли каждого из соединений согласно настоящему изобретению находятся в рамках настоящей заявки. Термин фармацевтически приемлемая соль при использовании в настоящей заявке относится к любой соли соединения формулы I, которая, по существу, не является токсичной для живых организмов. Указанные соли включают соли, перечисленные в источнике (1оита1 о! Рйагтасеийса1 δοίοηοο. 66, 2-19 (1977)), которые известны специалистам в данной области техники.

Аббревиатуры, используемые в настоящей заявке, имеют следующие значения:

БСА означает бычий сывороточный альбумин.

тСРР означает метахлорфенилпиперазин, неселективный агонист рецептора серотонина.

ЭДТА означает этилендиаминтетрауксусную кислоту.

ЭГТА означает этиленгликольтетрауксусную кислоту.

ГТФ означает гуанозинтрифосфат.

ΗΕΡΕδ означает 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновую кислоту.

ВЭЖХ означает высокоэффективную жидкостную хроматографию.

- 2 020848

1С₅о означает концентрацию, при которой достигается 50% максимального ингибирования.

ЖХ/МС означает жидкостную хроматографию с последующей масс-спектрометрией.

ЖХ/МС/МС означает жидкостную хроматографию с последующей масс-спектрометрией и последующей повторной ионизационной масс-спектрометрией.

шР§Т означает тест вынужденного плавания на мышах, животную модель для оценки активности антидепрессанта.

МС означает масс-спектрометрию.

МС (ИЭР) означает масс-спектрометрию с использованием ионизации электрораспылением.

ЯМР означает ядерный магнитный резонанс.

Индикатор КО означает 2-[(2-фторфенил)метил]-3-(2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран7,4'-пиперидин]-1'-ил)-Х,Х-диметилпропанамид.

КО означает степень занятости рецепторов.

8СХ-колонка означает колонку с сильным катионообменником.

8ΝΑγ означает нуклеофильное ароматическое замещение.

δδΚΙ означает селективный ингибитор обратного захвата серотонина.

1Ви означает трет-бутильный фрагмент.

ТСХ означает тонкослойную хроматографию.

ХКЭ означает рентгеновскую дифракцию.

Предпочтительные соединения согласно настоящему изобретению представляют собой соединения, где

1) К¹ представляет собой хлор;

2) каждый из К^2а и К^2Ь представляет собой фтор;

3) К¹ представляет собой хлор, и каждый из К^2а и К^2Ь представляет собой фтор;

4) К¹ представляет собой фтор, и каждый из К^2а и К^2Ь представляет собой водород;

5) К³ представляет собой водород, метил, гидроксиметил или метоксиметил;

6) К³ представляет собой метил;

7) К³ представляет собой гидроксиметил;

8) К¹ представляет собой хлор, каждый из К^2а и К^2Ь представляет собой фтор, и К³ представляет собой метил;

9) К¹ представляет собой хлор, каждый из К^2а и К^2Ь представляет собой фтор, и К³ представляет собой гидроксиметил;

10) К⁴ представляет собой фтор, гидроксиметил, метоксиметил или пиразол-1-илметил;

11) К⁴ представляет собой фтор;

12) К⁴ представляет собой гидроксиметил;

13) К⁴ представляет собой метоксиметил;

14) К⁴ представляет собой пиразол-1-илметил;

15) любой из предпочтительных вариантов реализации изобретения 1)-9), где К⁴ представляет собой фтор;

16) любой из предпочтительных вариантов реализации изобретения 1)-9), где К⁴ представляет собой гидроксиметил;

17) любой из предпочтительных вариантов реализации изобретения 1)-9), где К⁴ представляет собой метоксиметил;

18) любой из предпочтительных вариантов реализации изобретения 1)-9), где К⁴ представляет собой пиразол-1-илметил.

Конкретные предпочтительные соединения представляют собой [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] -1 '-ил)метил] -3 -метилпиразол-1-ил] -3 -пиридил]метанол; 2-хлор4,4-дифтор-1'-[[3 -метил-1-[3 -(пиразол-1 -илметил)-2-пиридил] пиразол-4-ил]метил]спиро [5Н-тиено [2,3с]пиран-7,4'-пиперидин] и [4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-1-(3-фтор-2-пиридил)пиразол-3-ил]метанол; или их фармацевтически приемлемую соль (т.е. примеры 1, 23, 53, 62 и 63).

Конкретное предпочтительное соединение согласно настоящему изобретению представляет собой [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] -1 '-ил)метил] -3 -метилпиразол-1 ил]-3-пиридил]метанол или его фармацевтически приемлемую соль, например, Ь-тартрат и/или соль НС1, как показано в примерах 1, 62 и 63.

Соединения, в которых каждый из К^2а и К^2Ь представляет собой фтор, являются предпочтительными, так как указанные соединения имеют более благоприятный фармакокинетический профиль, являясь более устойчивыми к окислительному метаболизму, что приводит к общему улучшению биодоступности при пероральном введении указанных соединений.

- 3 020848

Общая химия

Соединения согласно настоящему изобретению могут быть получены в соответствии со следующими схемами синтеза с помощью методов, хорошо известных и широко применяемых в данной области техники. Подходящие условия реакций для осуществления этапов указанных схем хорошо известны в данной области техники, и подходящие альтернативные растворители и реагенты известны специалистам в данной области техники. Аналогичным образом, специалистам в данной области техники очевидно, что промежуточные продукты синтеза при желании или необходимости могут быть выделены и/или очищены с помощью различных хорошо известных методов и что зачастую возможно использование различных промежуточных соединений непосредственно в последующих этапах синтеза с минимальной очисткой или без очистки. Более того, специалистам в данной области техники ясно, что в некоторых случаях порядок введения фрагментов не является определяющим. Конкретная очередность проведения стадий, необходимых для получения соединений формулы I, зависит от конкретного синтезируемого соединения, исходного соединения и относительной функциональной лабильности замещаемых фрагментов, что очевидно специалистам в области химии. Все заместители являются такими, как определено выше, если не указано иное, и все реагенты хорошо известны и применяются в данной области техники.

При использовании условий реакции восстановительного аминирования соединение III подвергают взаимодействию с замещенным соответствующим образом пиразолкарбальдегидом и восстановителем, таким как триацетоксиборгидрид натрия, в подходящем растворителе, таком как тетрагидрофуран, при температуре окружающей среды с получением соединения II. В соответствующих условиях сочетания соединение II сочетают с соединением IV, в котором На1 представляет собой хлор, бром или йод, в присутствии подходящего катализатора, такого как йодид меди, с подходящим основанием, таким как карбонат калия, в растворителе, таком как толуол, при повышенной температуре с получением соединения I', в котором К⁴ представляет собой К⁴ или предшественник К⁴. Когда На1 в соединении IV представляет собой Б или С1, нуклеофильное ароматическое замещение (δΝΑτ) является альтернативным способом получения соединения I'. Более конкретно, соединение II может реагировать с соединением IV в подходящем растворителе, таком как диметилформамид, с подходящим основанием, таким как карбонат калия, при повышенной температуре с получением соединения I'. Соединение III также может реагировать с замещенным соответствующим образом соединением V, представляющим собой альдегид, в условиях восстановительного аминирования, как описано выше, с получением желаемого соединения I'. Когда К⁴ представляет собой предшественник К⁴, указанный К⁴ затем превращают в К⁴ с помощью известных способов.

Соединения Ша, ШЬ и Ше могут быть получены, как показано на схеме 2. Соединения XIV и XV подвергают взаимодействию в подходящем растворителе, таком как дихлорметан, в присутствии подходящей кислоты, такой как трифторуксусная кислота. Полученный трифторацетат подщелачивают вод- 4 020848 ным раствором гидроксида натрия с получением соединения XIII в виде свободного основания. Соединение XIII в подходящем растворителе, таком как метил-трет-бутиловый эфир, обрабатывают раствором сульфурилхлорида в уксусной кислоте при комнатной температуре с получением соединения VIII в виде гидрохлорида. В соединение VIII затем вводят защитную группу для азота в условиях, хорошо известных специалистам в данной области техники, с получением соединения VII (см., например, Огеепе апй ^и!з, Рго!есйуе Огоирз ΐη Огдаше 8уп1йез13, ТЫгй Εάίΐίοη, СНар!егз 2 апй 7, 1оЬп ^йеу апй 8опз Ыс. (1999)). Как правило, защитная группа представляет собой группу Вос(трет-бутилоксикарбонил). Соединение VII подвергают взаимодействию с Ν-бромсукцинимидом в подходящем растворителе, таком как хлорбензол, при облучении с помощью источника света с получением бромсодержащего соединения, которое затем обрабатывают раствором основания, таким как водный раствор бикарбоната натрия, с получением гидроксильного соединения. Гидроксильное соединение, после его выделения или без выделения, затем может быть окислено в подходящих окислительных условиях, например, в присутствии бромида калия, тетраметилпиперидин-Ы-оксида и водного раствора гипохлорида натрия, с получением желаемого соединения VI, представляющего собой кетон. Соединение VI затем подвергают взаимодействию с трифторидом (бис(2-метилэтил)амино)серы в подходящем растворителе, таком как тетрагидрофуран, при повышенной температуре, из полученного продукта удаляют защитную группу с получением соединения Ша.

В соединение формулы XIII вводят защитную группу с получением соединения XII таким же способом, как описано для получения соединения VII. Соединение XII в подходящем растворителе, таком как тетрагидрофуран, при пониженной температуре обрабатывают подходящим основанием, таким как тетраметилпиперидин лития, с последующим добавлением Ν-фторбензолсульфонимида с получением фторсодержащего соединения, из которого удаляют защитную группу с помощью водного раствора НС1 и которое подщелачивают водным раствором №О11 с получением соединения ШЬ.

Соединение IX может быть получено из соединения XII таким же способом, как описано выше для получения соединения VI, путем синтеза в три стадии, такие как бромирование, гидроксилирование и окисление. Каждое промежуточное соединение может быть выделено в виде чистого соединения для дальнейшего взаимодействия или может подвергаться взаимодействию без выделения, как описано в синтезе соединения VI. Соединение IX затем обрабатывают подходящим металл-галогенным обменным реагентом, таким как бутиллитий, в подходящем растворителе, таком как тетрагидрофуран, при пониженной температуре с последующей обработкой фторирующим реагентом, таким как Ν-фтор-бензолсульфонимид, с получением желаемого фторсодержащего продукта, из которого затем соответствующим образом удаляют защитную группу с получением желаемого соединения Шс.

Соединения формулы V могут быть получены, как показано на схеме 3. Соединение XVI подвергают взаимодействию с соединением XVII с получением соединения формулы XV в условиях 8ΝΑτ или условиях сочетания, описанных выше для превращения соединения II в соединение I'. Когда Ζ представляет собой группу сложного эфира, он может быть сначала восстановлен до спирта с помощью подходящего восстановителя, такого как алюмогидрид лития, в подходящем растворителе, таком как тетрагидрофуран. Затем спирт окисляют с получением альдегида с помощью соответствующего окислителя, такого как оксид марганцаПУ), в растворителе, таком как дихлорметан.

Когда К⁴' представляет собой предшественник К⁴, процесс превращения К⁴' в К⁴ включает, но не ограничивается указанными, такие реакции, как восстановительное аминирование с получением желаемого нового амина; восстановление сложного эфира, кетона или альдегида с получением спирта, который можно превращать в алкоксисоединение или карбамат; восстановление нитрила с получением амида или амина; превращение сложного эфира в гетероциклическое соединение, такое как оксадиазол, в подходящих условиях (др. примеры см. в источнике ШсЕагй С. Ьагоск, СошргеЕепз1Уе Огдашс ТгапзГогтайопз, 8есопй Еййюп, СИарЮгз 2 апй 7, 1оИп \\л1еу апй 8опз Шс. (1999)).

Следующие примеры получения и примеры приведены для иллюстрации способов, подходящих для синтеза соединений согласно настоящему изобретению. Названия многих соединений, приведенных в примерах получения и примерах, даны на основании структур, полученных с помощью программы 8утух 1)га\у 3,1 или АШопот 2000 №те.

- 5 020848

Пример получения 1. 4',5'-Дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]

н

3-Тиофенэтанол (123,03 мл, 1,11 моль) добавляли к раствору Ы-трет-бутоксикарбонил-4-пиперидона (185 г, 928,48 ммоль) в дихлорметане (1300 мл) и перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли по каплям (5 мин) трифторуксусную кислоту (280,82 мл, 3,71 моль) при охлаждении с помощью ледяной/водяной бани (при внутренней температуре = 14-30°С, предупрежение: выделение СО₂). Реакционную смесь постепенно нагревали до комнатной температуры и перемешивали при указанной температуре в течение 20 ч. Растворитель выпаривали с получением кристаллического твердого вещества бежевого цвета при охлаждении в вакууме. Указанное твердое вещество суспендировали в метилтрет-бутиловом эфире (200 мл), фильтровали, промывали метил-трет-бутиловым эфиром (2x1000 мл) и сушили в вакууме с получением трифторацетата 4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1ия в виде твердого вещества белого цвета с выходом 95%. МС = (т/ζ): 210 (М+1). 10 М гидроксид натрия (220,36 мл, 2,20 моль) добавляли к перемешанной суспензии трифторацетата 4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ия (285 г, 881,44 ммоль) в дихлорметане (1 л) при охлаждении (ледяная/водяная баня) и полученную смесь перемешивали до получения двухфазной смеси. Фазы разделяли и водный слой экстрагировали дихлорметаном (2x200 мл). Объединенные органические слои концентрировали в вакууме с получением густого масла, которое растирали с водой с получением светло-желтого осадка. Указанный осадок фильтровали, промывали водой (300 мл) и гексаном (200 мл) и сушили в вакууме при 35°С в течение 20 ч с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества светло-желтого цвета с выходом 86%. МС (т/ζ): 210 (М+1).

Пример получения 2. трет-Бутилспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилат

Спиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] (60 г, 286,6 ммоль) в 2-метилтетрагидрофуране (600 мл) перемешивали при 22°С в течение 10 мин. Затем добавляли по каплям трет-бутоксикарбонил-третбутил карбонат (65,6 г, 301 ммоль) в 2-метилтетрагидрофуране (300 мл). Через 12 ч добавляли водный раствор хлорида натрия (250 мл) и отделяли органический слой. Водный слой промывали два раза 2-метилтетрагидрофураном (2x50 мл) и органические слои объединяли и промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения с выходом 99%. МС (т/ζ): 310 (М+1).

Пример получения 3. 2-Фторспиро[4,5-дигидротиено[2,2-с]пиран-7,4'-пиперидин]

1. трет-Бутил-2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилат 2,2,6,6-Тетраметилпиперидин (18,7 мл, 110,5 ммоль) добавляли в тетрагидрофуран (200 мл) и раствор охлаждали в атмосфере азота при -78°С. Добавляли 2,5 М раствор бутиллития в гексане (37,2 мл, 93 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин при -78°С. К свежему раствору 2,2,6,6-тетраметилпиперидина лития добавляли раствор трет-бутилспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилата (20 г, 58,2 ммоль) в тетрагидрофуране (90 мл) при поддержании температуры ниже -70°С. Через 20 мин добавляли через канюлю раствор Ν-фторбензолсульфонимида (30,26 г, 93,07 ммоль) в тетрагидрофуране (200 мл), предварительно охлажденный в атмосфере азота при -20°С. Через 1 ч перемешивания добавляли воду (20 мл) и водный раствор хлорида аммония (50 мл). Затем органический слой отделяли и водный слой промывали два раза метил-трет-бутиловым эфиром (2x25 мл). Органические слои объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали с помощью ВЭЖХ с нормальными фазами с использованием смеси гексан/метил-трет-бутиловый эфир в качестве растворителя с получением трет-бутил-2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилата с выходом 50%. МС (т/ζ): 328 (М+1).

2. 2-Фторспиро[4,5-дигидротиено[2,2-с]пиран-7,4'-пиперидин]

37% Соляную кислоту (11,75 мл, 125,22 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил-2'-фтор-4',5'дигидро-1Н-спиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-карбоксилата (8,2 г, 25,04 ммоль) в изопропило- 6 020848 вом спирте (57,4 мл) при 45°С. Полученный раствор перемешивали при 45°С в течение 6,5 ч. Растворитель концентрировали до образования желтой суспензии. Добавляли воду (50 мл) и смесь подщелачивали 5н водным раствором гидроксида натрия. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (3x100 мл) и объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения с выходом 96%. МС (т/ζ): 228 (М+1).

Пример получения 4. Гидрохлорид 2'-хлор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пирана]

Раствор 4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пирана] (50 г, 238,88 ммоль) в смеси уксусной кислоты (400 мл) и метил-трет-бутилового эфира (40 мл) охлаждали до 15°С. Затем раствор сульфурилхлорида (21,20 мл, 262,77 ммоль) в уксусной кислоте (100 мл) добавляли по каплям в течение 40 мин при указанной температуре (при внутренней температуре = 15-22°С) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Затем добавляли по каплям раствор сульфурилхлорида (11,56 мл, 143,33 ммоль) в уксусной кислоте (50 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и затем добавляли по каплям (30 мин) к метил-трет-бутиловому эфиру (1 л) при охлаждении с помощью ледяной/водяной бани при перемешивании. Образовывалась белая суспензия и твердое вещество фильтровали. После получения второй порции материала фильтрат концентрировали (с помощью роторного вакуумного испарителя при повторном добавлении метил-третбутилового эфира). Полученное в результате твердое вещество суспендировали в метил-трет-бутиловом эфире (300 мл), суспензию перемешивали при кипячении с обратным холодильником (баня 100°С) и добавляли метанол (30 мл) до образования мутной суспензии. Затем суспензию охлаждали до комнатной температуры в течение ночи. Суспензию далее охлаждали на ледяной/водяной бане и фильтровали. Твердое вещество промывали метил-трет-бутиловым эфиром (50 мл) и объединяли с первой порцией с получением указанного в заголовке соединения с выходом 60%. МС (т/ζ): 244 (М+1).

Пример получения 5. 2'-Хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]

1. трет-Бутил-2-хлорспиро [4,5-дигидротиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] -1 '-карбоксилат

К суспензии гидрохлорида 2-хлорспиро[4,5-дигидротиено[2,2-с]пиран-7,4'-пиперидина] (140 г, 0,49 моль) в дихлорметане (1,12 л) порциями добавляли триэтиламин (67,25 мл, 1,05 моль), 4-пиридинамин, Ν,Ν-диметил- (3,05 г, 0,025 моль) и ди-трет-бутилбикарбонат (111,22 г, 0,509 моль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь промывали 1н НС1 (2х) и водой. Органическую фазу сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением трет-бутил-2-хлорспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]1'-карбоксилата с выходом 53%. МС (т/ζ): 244 (М+1-Вос).

2. трет-Бутил-4'-оксо-2'-хлор-4',5'-дигидроспиро [пиперидин-4,7'-тиено [2,3-с]пиран] -1 -карбоксилат

В реактор на 5 л, снабженный рубашкой, добавляли Ν-бромсукцинимид (115,02 г, 639,77 ммоль) к раствору трет-бутил-2-хлорспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилата (200 г, 581,61 ммоль) в хлорбензоле (1,60 л) при комнатной температуре. Полученную суспензию облучали с помощью лампы накаливания (3x100 Вт), почти соприкасающейся со внешней стенкой реактора, и устанавливали температуру реактора при 45°С. Через 4 ч добавляли Ν-бромсукцинимид (26,14 г, 145,40 ммоль) и температуру поддерживали при 40°С в течение 15 ч. Реакционную смесь охлаждали до температуры 0°С и добавляли метил-трет-бутиловый эфир (500 мл). Твердое вещество фильтровали и раствор концентрировали до получения примерно 1000 мл раствора в хлорбензоле. Затем добавляли метил-третбутиловый эфир (1000 мл), твердое вещество фильтровали и фильтрат концентрировали с получением 600 мл раствора хлорбензола. Добавляли диметилсульфоксид (806,47 мл, 11,35 моль) и бикарбонат натрия (95,38 г, 1,14 моль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 24 ч при комнатной температуре добавляли смесь вода/лед (1000 мл) и фазы разделяли. Органическую фазу промывали водой (2x1 л) и концентрировали с получением раствора в хлорбензоле. Затем добавляли дихлорметан (1,2 л) и смесь охлаждали до 5°С (ледяная/водяная баня). Добавляли бромид калия (20,27 г, 170,31 ммоль) и 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-Л-оксид (4,43 г, 28,38 ммоль). Затем к реакционной смеси добавляли при 5°С 6% раствор гипохлорита натрия в воде (644,40 мл, 567,68 ммоль), доведенный до рН 9 бикарбонатом натрия (насыщенным), и полученную смесь перемешивали в течение 1 ч при температуре от

- 7 020848

5°С до комнатной температуры. Добавляли воду (1 л) и фазы разделяли. Органическую фазу промывали водой (2x0,5 л) и охлаждали с помощью ледяной/водяной бани. Затем к реакционной смеси добавляли при 5°С бромид калия (2,03 г, 17,03 ммоль), 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-М-оксид (0,05 г, 0,32 ммоль) и 6% раствор гипохлорита натрия в воде (128,88 мл, 113,54 ммоль), доведенный до рН 9 твердым бикарбонатом натрия, и полученную смесь перемешивали в течение 1 ч при температуре от 5°С до комнатной температуры. Затем добавляли воду (1 л) и фазы разделяли. Органическую фазу промывали водой (2x1 л), сушили и концентрировали с получением твердого вещества темно-коричневого цвета.

Твердое вещество растирали с гексаном (500 мл), смесью метил-трет-бутиловый эфир/гексан, 5%, (250 мл) и смесью метил-трет-бутиловый эфир/гексан, 10%, (250 мл) с получением трет-бутил-4'-оксо-2'хлор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-карбоксилата в виде твердого вещества светло-коричневого цвета с выходом 66%. МС (т/ζ): 258 (М+1 (Вое)).

3. трет-Бутил-2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро [пиперидин-4,7'-тиено [2,3-с]пиран] -1 -карбоксилат

В колбу (перфторалкокси) на 500 мл, заполненную тетрагидрофураном (81 мл), добавляли трифторид(бис(2-метоксиэтил)амино)серы (183,62 г, 829,94 ммоль) и трет-бутил-4'-оксо-2'-хлор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено [2,3-с]пиран]-1-карбоксилат (135 г, 377,24 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 70°С в течение 24 ч. Затем указанную суспензию охлаждали до комнатной температуры и медленно выливали в смесь льда и насыщенного водного раствора бикарбоната натрия (4 л) при перемешивании (выделение газа). Метил-трет-бутиловый эфир использовали для сбора оставшегося в колбах материала. После завершения выделения газа добавляли твердый бикарбонат натрия при перемешивании до достижения рН 8. Полученную смесь экстрагировали метил-трет-бутиловым эфиром (3x500 мл) до тех пор, пока продукт не переставал выявляться с помощью ТСХ в водной фазе. Объединенные органические слои промывали водой (3x500 мл) и солевым раствором (500 мл), сушили над сульфатом магния и концентрировали с получением темного густого масла (250 г). Неочищенный материал растворяли в дихлорметане и фильтровали через пластину с силикагелем при использовании в качестве элюента смеси метил-трет-бутиловый эфир/гексан, 10%, (6 л) и смеси метил-трет-бутиловый эфир/гексан (4 л). Фракции собирали до тех пор, пока продукт не переставал выявляться с помощью ТСХ (20% метил-третбутиловой эфир/гексан, УФ, К(=0,5). Фильтрат концентрировали с получением твердого вещества светло-коричневого цвета, которое сушили в вакууме при 40°С до достижения постоянной массы с получением трет-бутил-2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-карбоксилата с выходом 70%. МС (т/ζ): 324 (М+1-1Ви).

4. 2'-Хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]

37% Соляную кислоту (74,12 мл, 789,78 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил-2'-хлор-4',4'дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-карбоксилата (60 г, 157,96 ммоль) в изопропиловом спирте (420 мл) при 45°С. Полученный раствор перемешивали при 45°С в течение 15 ч. Затем смесь концентрировали до 1/4 объема с получением белой суспензии. Добавляли воду (100 мл) и суспензию подщелачивали 6н водным раствором гидроксида натрия с получением двухслойной смеси, которую экстрагировали метил-трет-бутиловым эфиром (3x100 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом магния и концентрировали с получением твердого вещества светло-коричневого цвета, которое сушили в вакууме до достижения постоянной массы с получением 97% указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 280 (М+1).

Пример получения 6. 2,4,4-Трифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]

1. трет-Бутил-2-бром-4-гидроксиспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилат

Ν-бромсукцинимид (2,2 экв.) добавляли к раствору трет-бутилспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилата (13,5 г) в хлорбензоле (108 мл). Полученную суспензию облучали с помощью лампы накаливания (260 Вт) в течение ночи. Дополнительную порцию Ν-бромсукцинимида (1,7 г) добавляли к смеси и указанную смесь облучали с помощью лампы накаливания (260 Вт) в течение 3 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением осадка, который растворяли в ацетоне (650 мл), и добавляли раствор нитрата серебра (8,8 г) в воде (650 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в темноте в течение ночи. Смесь отфильтровывали и ацетон выпаривали. Добавляли этилацетат и органический слой промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Осадок очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке 1§ео (элюент: гексан/этилацетат 15-60%) с получением трет-бутил-2-бром-4-гидроксиспиро[4,5дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилата с выходом 38%. МС (т/ζ): 426/428

- 8 020848 (М+23/М+2+23).

2. трет-Бутил-2'-бром-4'-оксоспиро [пиперидин-4,7'-тиено [2, 3 -с]пиран] -1 -карбоксилат

Бромид калия (535,67 мг, 4,50 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил-2-бром-4-гидроксиспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-циклогексан]-1'-карбоксилата (7,28 г) и 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-Ы-оксида (281,33 мг, 1,80 ммоль) в дихлорметане (70 мл) при 0°С. В другой сосуд добавляли бикарбонат натрия к 10% водному раствору гипохлорита натрия (22,34 мл, 36,01 ммоль) до достижения рН 9. Указанный раствор гипохлорита натрия-бикарбоната натрия добавляли по каплям при температуре 0°С и полученную темную суспензию перемешивали при температуре 0°С в течение 15 мин. Добавляли дихлорметан (20 мл) и воду (20 мл) и фазы разделяли. Органическую фазу промывали водой (20 мл) и сушили над сульфатом магния. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением третбутил-2'-бром-4'-оксоспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-карбоксилата с выходом 99%. МС (т/ζ): 346/348 (М+1-1Ви/М+3-1Ви).

3. трет-Бутил-2-бром-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилат

В колбу (перфторалкокси) на 100 мл добавляли трифторид (бис(2-метоксиэтил)амино)серы (5,16 мл, 27,96 ммоль) к безводному тетрагидрофурану (3,5 мл). Затем добавляли трет-бутил-2'-бром-4'оксоспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-карбоксилат (4,5 г, 11,19 ммоль). Раствор перемешивали при 70°С в течение ночи. Через указанное время добавляли метил-трет-бутиловый эфир (30 мл) и реакционную смесь осторожно выливали в раствор бикарбоната натрия (насыщенный водный раствор), охлажденный на ледяной бане. Наблюдали выделение СО₂ и добавляли бикарбонат натрия (насыщенный водный раствор) до достижения рН 8. Смесь экстрагировали метил-трет-бутиловым эфиром. Органический слой декантировали, промывали солевым раствором (2х), сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Гсо с использованием в качестве элюента смеси метил-третбутиловый эфир/гексан с получением 3,2 г трет-бутил-2-бром-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилата. МС (т/ζ): 368/370 (М+1-1Ви/М+3-1Ви).

4. трет-Бутил-2,4,4-трифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилат

2,5 М бутиллитий в гексане (47 мл) добавляли к раствору трет-бутил-2-бром-4,4-дифторспиро[5Нтиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилата (1,99 г, 4,69 ммоль) в тетрагидрофуране (50 мл) в атмосфере азота при -78°С. Смесь перемешивали при -78°С в течение 1 ч и добавляли Ν-фторбензолсульфонимид в виде твердого вещества (3,69 г, 11,73 ммоль). Смеси позволяли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и органическую фазу экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния и растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Гсо (гексан/этилацетат 3-12%) с получением 1,3 г трет-бутил-2,4,4-трифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилата, который далее очищали с помощью ВЭЖХ с получением 0,818 г указанного соединения. МС (т/ζ): 308 (М+1-!Ви).

5. 2,4,4-Трифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] трет-Бутил-2,4,4-трифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-карбоксилат (2,00 г, 5,50 ммоль) растворяли в соляной кислоте (4н в диоксане) (10 мл, 40 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем пропускали через картридж, заполненный 50 г §СХ (сильным катионообменником), с получением 1,3 г указанного в заголовке соединения посредством выпаривания фракции 2н аммония в метаноле. МС (т/ζ): 264 (М+1).

Пример получения 7. 2-Хлор-4,4-дифтор-1'-[(3-метил-1Н-пиразол-4-ил)метил]спиро[5Н-тиено[2,3с]пиран-7,4'-пиперидин]

К раствору 2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина (105 г, 375 ммоль) в тетрагидрофуране (1,58 л) добавляли 3-метил-1Н-пиразол-4-карбальдегид (43,40 г, 394,12 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем добавляли тремя порциями порошкообразный триацетоксиборгидрид натрия (95,46 г, 450,42 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Затем реакционную смесь выливали в ледяной насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (400 мл). Фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (100 мл). Объединенные органические слои промывали 50% солевым раствором, и твердое вещество осаждалось в органическую фазу. Органическую фазу концентрировали с получением 170 г указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 374 (М+1).

Соединения согласно примерам получения 8-11 получали, по существу, так же, как описано для

- 9 020848 примера получения 7, с использованием 1,2-дихлорэтана в качестве растворителя.

Пример получения №	Химическое название	Структура	Выход (%)	Физические характе- ристики: МС (ш/ζ)
8	2-Фтор-1’-[(3- метил-1Н-пиразол-4- ил)метил]спиро[4,5- дигидротиено[2,3- с]пиран-7,4’- пиперидин]		93	322 (М+1)
9	2-Хлор-1'-[(3- метил-1Н-пиразол-4- ил)метил]спиро[4,5- дигидротиено[2, 3- с]пиран-7,4’- пиперидин]		99	338 (М+1)
10	2,4,4-Трифтор-1’- [ (3-метил-1Н- пиразол-4- ил)метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидин]	•У	99	358 (М+1)
11	2-Хлор-1’-(1Н- пиразол-4- илметил)спиро[4,5- дигидротиено[2,3- с]пиран-7,4 ’ - пиперидин]		99	324 (М+1)

Пример получения 12. 2-[4-[(2-Хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] пиридин-3 -карбальдегид

В колбу на 250 мл добавляли йодид меди(1) (1,91 г, 10,03 ммоль), 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[(3-метил1Н-пиразол-4-ил)метил]спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] (25 г, 66,87 ммоль), карбонат калия (19,60 г, 140,43 ммоль), толуол (50 мл) и магнитную мешалку. Реакционную смесь дегазировали с помощью 5 циклов вакуумирования/наполнения. Затем добавляли 2-бром-3-формилпиридин (18,66 г, 100,31 ммоль) и транс-Х,№-диметилциклогексан-1,2-диамин (3,16 мл, 20,06 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем указанную смесь помещали на предварительно нагретую масляную баню при 115°С и перемешивали в течение 15 ч при указанной температуре. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разводили 300 мл этилацетата и фильтровали через целит. Указанную смесь промывали этилацетатомом (100 мл) и водным раствором гидроксида аммония (3%) (4x100 мл) для удаления остатков меди и затем промывали водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл). Раствор сушили над сульфатом натрия. Растворитель выпаривали в вакууме с получением твердого вещества рыжеватого цвета. Указанное твердое вещество фильтровали через пластину с силикагелем с использованием в качестве элюента смеси 2-пропанол/дихлорметан (3-5% 2-пропанола) с получением указанного в заголовке соединения с выходом 69%. МС (т/ζ): 479 (М+1).

Пример получения 13. 2-[4-[(2-Фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] пиридин-3 -карбальдегид

Соединение примера получения 13, по существу, получали так же, как описано в примере получе- 10 020848 ния 12, путем использования 2-бромпиридин-3-карбальдегида и 2-фтор-1'-[(3-метил-1Н-пиразол-4ил)метил]спиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина]. Осадок очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Гео с получением указанного в заголовке соединения с выходом 83%. МС (т/ζ): 427 (М+1).

Пример получения 14. ^[(2-Хлор-3-пиридил)метил]ацетамид

К раствору (2-хлор-3-пиридил)метанамина (300 мг, 2,10 ммоль) в дихлорметане (2 мл) при комнатной температуре добавляли уксусный ангидрид (198,88 мкл, 2,10 ммоль) и триэтиламин (293,26 мкл, 2,10 ммоль). Через 1 ч реакцию гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали в вакууме с получением 184 мг ^[(2-хлор-3-пиридил)метил]ацетамида. МС (т/ζ): 185 (М+1).

Пример получения 15. (2-Бром-3-пиридил)метилметансульфонат

1. (2-Бром-3-пиридил)метанол

В круглодонную колбу на 2 л (оснащенную магнитной мешалкой, в атмосфере азота при 0°С), содержащую 2-бром-3-пиридин-карбоксальдегид (22,15 г, 119,08 ммоль) и метанол (200 мл), добавляли боргидрид натрия (1,35 г, 35,72 ммоль) тремя порциями. Через 1 ч при 0°С добавляли воду (200 мл) и реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления метанола. Полученный осадок растворяли в этилацетате и промывали водой (200 мл). Органический экстракт промывали солевым раствором, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением 22 г (2бром-3-пиридил)метанола в виде твердого вещества белого цвета. МС (т/ζ): 188 (М+1), 190 (М+3).

2. (2-Бром-3 -пиридил)метилметансульфонат

Триэтиламин (8,90 мл) добавляли в круглодонную колбу, содержащую раствор (2-бромпиридин-3ил)метанола (8 г, 42,55 ммоль) в дихлорметане (212 мл), при 0°С, затем добавляли метансульфонилхлорид (3,95 мл) и смесь перемешивали при указанной температуре в течение 1,5 ч. Через указанное время смесь промывали водой и органический слой декантировали, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали при пониженном давлении с получением 10,4 г указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки. МС (т/ζ): 266, 268 (М+1; М+3).

Пример получения 16. 2-(2-Бром-3-пиридил)пропан-2-ол Вг ι

Диизопропиламид лития (2 М, 12,5 мл, 25 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (40 мл) и охлаждали до -78°С. По каплям добавляли 2-бромпиридин (3,9 г, 25 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч перед добавлением 1 мл ацетона (который сушили над только что активированными молекулярными ситами) и позволяли нагреваться до комнатной температуры. Реакцию гасили насыщенным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом магния и выпаривали. Осадок очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле при элюировании смесью 20% гексан/трет-бутилметиловый эфир с получением указанного в заголовке соединения (1,4 г, 26%). 'Н-ЯМР (б⁶-диметилсульфоксид): 8,23 (дд, 1=1,9, 4,5 Гц, 1Н), 8,19 (дд, 1=2,0, 7,8 Гц, 1Н), 7,44 (дд, 1=4,5, 7,7 Гц, 1Н), 5,43 (с, 1Н), 2,12 (с, 1Н), 1,46 (с, 6Н).

Пример получения 17. Этил-3-метил-1Н-пиразол-4-карбоксилат

Серную кислоту (18 мл, 337,69 ммоль) добавляли к суспензии 1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты, 3-метил- (10 г, 79,29 ммоль) в этаноле (90 мл) и смесь перемешивали при 85°С в течение 20 ч. Через указанное время растворитель частично удаляли. Осадок подщелачивали 1 М раствором гидроксида натрия до достижения рН 6-7 и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой декантировали, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали при пониженном давлении с получением 10,3 г указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки. МС (т/ζ): 155 (М+1).

- 11 020848

Пример получения 18. Метил-2-фторпиридин-3-карбоксилат

М Диизопропиламид лития (11,3 мл, 22,5 ммоль) медленно добавляли к раствору 2-фторпиридина (2 г, 20,5 ммоль) в тетрагидрофуране (90 мл) в атмосфере азота при -78°С. Через 4 ч при указанной температуре добавляли метилхлорформиат (1,9 мл, 24,6 ммоль) и смесь перемешивали в течение дополнительного ч при -78°С и позволяли достигнуть комнатной температуры в течение ночи. Реакционную смесь медленно выливали в воду и экстрагировали диэтиловым эфиром. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и растворитель выпаривали в вакууме. Осадок очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Гео при элюировании смесью гексан/диэтиловый эфир (9/1) с получением 495,2 мг указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 156 (М+1).

Пример получения 19. 1-(3-Фтор-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-карбальдегид

трет-Бутилат калия (29,25 г, 260,68 ммоль) добавляли к раствору 3-метил-1Н-пиразол-4-карбальдегида (26,00 г, 236,12 ммоль) в диметилформамиде (250 мл), охлажденному на водяной бане. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем добавляли 2,3-дифторпиридин (25 г, 217,24 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Смесь выливали в смесь лед/вода и экстрагировали этилацетатом (3x20 мл). Органический экстракт сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали в вакууме. Осадок очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента смеси гексан/изопропиловый спирт с получением неочищенного материала с остаточным диметилформамидом. Материал затем растворяли в этилацетате (100 мл) и промывали водой (3x20 мл). Водную фазу экстрагировали этилацетатом (2x20 мл). Объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением 19 г указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 206 (М+1).

Пример получения 20. 2-(4-Формил-3-метилпиразол-1-ил)пиридин-3-карбонитрил

Соединение примера получения 20, по существу, получали так же, как описано в примере получения 19, путем использования 3-метил-1Н-пиразол-4-карбальдегида и 2-фторпиридин-3-карбонитрила. Указанное в заголовке соединение получали с выходом 23%. МС (т/ζ): 213 (М+1).

Пример получения 21. Метил-2-(4-формил-3-метилпиразол-1-ил)пиридин-3-карбоксилат

О

Смесь 3-метил-1Н-пиразол-4-карбальдегида (300 мг, 2,72 ммоль), карбоната калия (565 мг, 4,08 ммоль), метил-2-фторпиридин-3-карбоксилата (507 мг, 3,27 ммоль) и диметилформамида (2 мл) перемешивали при 60°С в течение 16 ч. Добавляли воду и соединение экстрагировали в этилацетате. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и растворитель выпаривали. Неочищенную смесь очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Гео с использованием смеси гексан/этилацетат (2:1) в качестве элюента с получением 422 мг указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 246 (М+1).

Соединение примера получения 22-23 может быть получено, по существу, так же, как описано в примере получения 21, с использованием соответствующего 2-хлорпиридильного реагента.

- 12 020848

Пример полу- чения №	Химическое название	Структура	Выход (%)	Физические характеристики : МС (т/ ζ)
22	Ν-[[2-(4-Формил-З- метилпиразол-1-ил)- 3-пиридил1метил] ацетамид	о ΧΝ О	56	259 (М-1-1)

23	Этил-1-(3-формил- 2-пиридил)-3-	.А~ N О	52	260 (М+1)
	метилпир а зол-4- карбоксилат	0

Пример получения 24. 1-[3-(Диметиламинометил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4-карбальдегид

1. Этил-1-[3 -(диметиламинометил)-2-пиридил] -3 -метилпиразол-4-карбоксилат

Указанное соединение получали, по существу, так же, как описано в примере получения 7, путем использования этил-1-(3-формил-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-карбоксилата и диметиламина, с выходом 95%, и использовали без дополнительной очистки после выделения. МС (т/ζ): 289 (М+1).

2. [1-[3 -(Диметиламинометил)-2 -пиридил] -3 -метилпиразол-4-ил] метанол

К раствору этил-1-[3-(диметиламинометил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4-карбоксилата (217,7 г, 0,75 ммоль) в тетрагидрофуране (5 мл), охлажденному до 0°С, в атмосфере азота добавляли 1 М алюмогидрид лития в тетрагидрофуране (0,9 мл, 0,9 ммоль) и смесь перемешивали при указанной температуре в течение 5 мин. Реакцию гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония и неочищенный продукт экстрагировали этилацетатом. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и растворитель выпаривали в вакууме. В конкретном указанном примере соединение не выделяли посредством органической экстракции, а окончательно выделяли из водного раствора с помощью картриджа, заполненного сильным катионообменником, с получением 146 мг (78%) [1-[3-(диметиламинометил)-2пиридил]-3-метилпиразол-4-ил]метанола, который использовали без дополнительной очистки. МС (т/ζ): 247 (М+1).

3. 1-[3 -(Диметиламинометил)-2-пиридил] -3 -метилпиразол-4-карбальдегид

3,3,3-Триацетокси-3-йодфталид (0,553 г, 1,3 ммоль) добавляли к раствору [1-[3-(диметиламинометил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4-ил]метанола (0,146 г, 0,59 ммоль) в дихлорметане (4 мл) при комнатной температуре. Через 1 ч реакцию гасили путем добавления 2н раствора карбоната натрия и соединение экстрагировали дихлорметаном. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали в вакууме с получением 126 мг 1-[3-(диметиламинометил)-2-пиридил]-3метилпиразол-4-карбальдегида, который использовали без дополнительной очистки. МС (т/ζ): 245 (М+1).

Пример получения 25. 1-(3-Фтор-2-пиридил)-3-(изопропоксиметил)пиразол-4-карбальдегид

1. Этил-3 -(бромметил)-1 -(3 -фтор-2-пиридил)пиразол-4-карбоксилат

К раствору этил-1-(3-фтор-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-карбоксилата (10,2 г, 40,9 ммоль) в хлорбензоле (205 мл) добавляли Ν-бромсукцинимид (8 г) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали и облучали лампой (100 Вт) при комнатной температуре в течение ночи. Затем добавляли дополнительную порцию Ν-бромсукцинимида (2 г), и через 2 ч исходный материал не выявлялся. Твердое вещество фильтровали и растворитель выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Пео с использованием в качестве элюента дихлорметана и метанола с получением 5,3 г этил-3-(бромметил)-1-(3-фтор-2-пиридил)пиразол-4-карбоксилата. МС (т/ζ): 328; 330 (М+1; М+3).

2. Изопропил-1-(3 -фтор-2-пиридил) -3 -(изопропоксиметил)пиразол-4-карбоксилат

К раствору этил-3-(бромметил)-1-(3-фтор-2-пиридил)пиразол-4-карбоксилата (1,5 г, 4,57 ммоль) в пропан-2-оле (23 мл) добавляли изопропоксид лития (3,02 г) и смесь перемешивали в течение ночи при

- 13 020848 комнатной температуре. Через указанное время дополнительно добавляли изопропоксид лития (4,5 г) тремя порциями по 1,5 г каждые 16 ч. После последнего добавления реакционную смесь окончательно перемешивали при 40°С в течение 16 ч. Растворитель выпаривали и осадок растворяли в этилацетате и промывали солевым раствором. Органический слой декантировали и сушили над сульфатом натрия. Растворитель выпаривали и осадок очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке ксо с использованием в качестве элюента дихлорметана и метанола с получением 317 мг изопропил-1-(3фтор-2-пиридил)-3-(изопропоксиметил)пиразол-4-карбоксилата. МС (т/ζ): 322 (М+1).

3. [1-(3 -Фтор-2-пиридил)-3 -(изопропоксиметил)пиразол-4-ил]метанол

К раствору изопропил-1-(3-фтор-2-пиридил)-3-(изопропоксиметил)пиразол-4-карбоксилата (316 мг, 0,98 ммоль) в диэтиловом эфире (4,9 мл) в атмосфере азота, охлажденному до 0°С, добавляли 1 М раствор алюмогидрида лития в тетрагидрофуране (1,2 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Добавляли воду (46 мкл) и смесь перемешивали в течение 5 мин, затем последовательно добавляли 15% водный раствор ΝαΟΗ (46 мкл) и воду (138 мкл). Твердое вещество фильтровали и растворитель выпаривали с получением 241 мг [1-(3-фтор-2-пиридил)-3-(изопропоксиметил)пиразол-4-ил]метанола, который использовали без дополнительной очистки. МС (т/ζ): 266 (М+1).

4. 1-(3-Фтор-2-пиридил)-3-(изопропоксиметил)пиразол-4-карбальдегид

Смесь [1-(3-фтор-2-пиридил)-3-(изопропоксиметил)пиразол-4-ил]метанола (241 мг, 0,91 ммоль) и оксида марганца(1У) (791 мг) перемешивали в дихлорметане (5 мл) при комнатной температуре в течение ночи. Через указанное время реакционную смесь фильтровали через целит и растворитель выпаривали с получением 197 мг указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки. МС (т/ζ): 264 (М+1).

Пример получения 26. 1-(3-Фтор-2-пиридил)-3-(метоксиметил)пиразол-4-карбальдегид

1. Этил-1 -(3 -фтор-2-пиридил)-3 -(метоксиметил)пиразол-4-карбоксилат

К раствору этилового эфира 3-бромметил-1-(3-фторпиридин-2-ил)-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты (1,13 г, 3,44 ммоль) в ацетоне (23 мл) добавляли йодид калия (200,1 мг), карбонат калия (865,33 мг) и метанол (4,18 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч. Выявляли сложный метиловый и сложный этиловый эфир желаемого соединения. Растворители выпаривали. Осадок разводили дихлорметаном и промывали водой. Органический слой декантировали, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке ксо с использованием в качестве элюента этилацетата и гексана с получением 599 мг смеси сложного метилового эфира и сложного этилового эфира. МС (т/ζ): 266 (М+1) и 280 (М+1).

2. [1-(3 -Фтор-2-пиридил)-3 -(метоксиметил)пиразол-4-ил]метанол

Указанное соединение, по существу, получали так же, как описано на 3-ей стадии примера получения 25 (стадия восстановления) с выходом 93%, с использованием в качестве исходного материала этил1-(3-фтор-2-пиридил)-3-(метоксиметил)пиразол-4-карбоксилата (в смеси, содержащей также сложный метиловый эфир). [1-(3-Фтор-2-пиридил)-3-(метоксиметил)пиразол-4-ил]метанол использовали без дополнительной очистки. МС (т/ζ): 238 (М+1).

3. 1-(3 -Фтор-2-пиридил)-3 -(метоксиметил)пиразол-4-карбальдегид

Указанное соединение, по существу, получали так же, как описано на 4-й стадии примера получения 25 (стадия окисления) с выходом 91%, с использованием в качестве исходного материала [1-(3фторпиридин-2-ил)-3-метоксиметил-1Н-пиразол-4-ил]-метанола. Указанное в заголовке соединение использовали без дополнительной очистки. МС (т/ζ): 236 (М+1).

Пример получения 27. 3-Метил-1- (3-морфолино-2-пиридил)пиразол-4-карбальдегид

Смесь 1-(3-фтор-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-карбальдегида (230 мг, 1,12 ммоль) и морфолина (2 мл, 22,93 ммоль) нагревали с помощью микроволнового излучения (температура 160°С, время нарастания 2 мин, время выдерживания 10 мин, мощность 250 Вт). Избыток морфолина удаляли в вакууме и осадок разводили дихлорметаном и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали в вакууме. Осадок очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Псо с использованием смеси гексан/этилацетат в качестве элюента (от 50 до 100% в этилацетате) с получением указанного в заголовке соединения с выходом 72%. МС (т/ζ): 273 (М+1).

- 14 020848

Пример получения 28. 2-Бром-3-(метоксиметил)пиридин

К раствору (2-бромпиридин-3-ил)метанола (20 г, 106,37 ммоль) в 140 мл тетрагидрофурана добавляли 60% раствор гидрида натрия в минеральном масле (6,38 г, 155,5 ммоль) при 0°С в атмосфере азота. Раствор перемешивали при 0°С в течение 30 мин. К раствору добавляли метилйодид (7,95 мл, 127,6 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию гасили путем добавления воды и неочищенный продукт экстрагировали этилацетатом. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали в вакууме с получением 2-бром-3-(метоксиметил)пиридина с выходом 98%, который использовали без дополнительной очистки. МС (т/ζ): 202 (М+1), 204 (М+3).

Соединения примеров получения 29-30 получали, по существу, так же, как описано в примере получения 28, с использованием соответствующих алкилйодидных реагентов.

Пример полу- чения №	Химическое название	Структура	Выход (%)	Физические характеристики: МС (т/ζ)
29	2-Бром-З- (этоксиметил) пиридин	Вг О^ (У	99	216, 218 (М+1, М+3)
30	2-Бром-З- (циклопропилметоксиметил) - пиридин		100	242, 244 (М+1, М+3)

Пример получения 31. 2-Бром-3-(изопропоксиметил)пиридин

1. 2-Бром-3-(бромметил)пиридин

Сосуд Шленка на 25 мл наполняли 2-бром-3-пиридинбензиловым спиртом (1 г, 5,32 ммоль) и дихлорметаном (15 мл). Полученный раствор охлаждали до 0°С на соляной-водяной/ледяной бане при интенсивном перемешивании с помощью магнитной мешалки. Затем по каплям добавляли трехбромистый фосфор (0,55 мл, 5,80 ммоль) для контроля экзотермического эффекта ниже 10°С. Получали густую суспензию и после завершения добавления удаляли баню и суспензию нагревали до комнатной температуры. Затем смесь постепенно нагревали до температуры флегмы в течение 3 ч и затем доводили до комнатной температуры в течение ночи.

К предварительно охлажденной смеси при 0°С добавляли смесь лед/вода и затем рН доводили до щелочного значения 2 М раствором карбоната натрия. Органический слой отделяли и водный раствор промывали дважды дихлорметаном (2х 10 мл). Все органические слои объединяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель выпаривали при пониженном давлении с получением 1,2 г 2бром-3-бромметилпиридина, который использовали без дополнительной очистки.

2. 2-Бром-3 -(изопропоксиметил)пиридин

К раствору изопропилового спирта (7,31 мл, 95,65 ммоль) в диметилформамиде (50 мл) при 0°С добавляли гидрид натрия (3,63 г, 90,87 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин (указанную реакцию проводили с использованием перегородки для специальной защиты). Затем добавляли с помощью шприца 2-бром-3-бромметилпиридин (6 г, 23,91 ммоль) в 10 мл диметилформамида и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли воду и смесь экстрагировали этилацетатом, промывали солевым раствором и водой, сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Ьсо с использованием этилацетата и гексана в качестве элюента (градиент от 5 до 25% этилацетата) с получением 3,67 г указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 230, 232 (М+1, М+3).

- 15 020848

Пример получения 32. 2-(2-Бром-3-пиридил)ацетонитрил

Смесь 2-бром-3-бромметилпиридина (840 мг, 3,35 ммоль) и цианида натрия (187,99 мг, 3,68 ммоль) перемешивали и кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч в смеси вода (10 мл)-этанол (2 мл). Реакционную смесь разводили дихлорметаном и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения с выходом 83%, которое использовали без дополнительной очистки. МС (т/ζ): 197 (М+1), 199 (М+3).

Пример получения 33. 1-[3-(Циклопропоксиметил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4-карбальдегид

1. Этил-1-[3 -(гидроксиметил)-2-пиридил] -3 -метилпиразол-4-карбоксилат

К раствору сложного этилового эфира 1-(3-формилпиридин-2-ил)-3-метил-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты (1 г, 3,9 ммоль) в метаноле (25 мл) добавляли боргидрид натрия (220,2 мг, 5,8 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли и неочищенный продукт растворяли в этилацетате и промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель выпаривали при пониженном давлении с получением 1 г этил-1-[3-(гидроксиметил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4-карбоксилата. МС (т/ζ): 262 (М+1).

2. Этил-3-метил-1-[3-(винилоксиметил)-2-пиридил]пиразол-4-карбоксилат

Трифторацетат палладия(П) (5,1 мг, 15,3 мкмоль) и 4,7-дифенил-фенантролин (5,1 мг, 15,3 мкмоль) растворяли в н-бутилвиниловом эфире (6,1 мл, 61,2 ммоль) и сложном этиловом эфире 1-(3-гидроксиметилпиридин-2-ил)-3-метил-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты (800 мг, 3,1 ммоль) и добавляли несколько капель триэтиламина. Колбу запечатывали и содержимое перемешивали при 75°С в течение 24 ч. Затем смесь охлаждали до 24°С и фильтровали через пластину с целитом. Растворитель удаляли при пониженном давлении и осадок очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Нсо с использованием гексана и этилацетата в качестве элюентов (5-20% в этилацетате) с получением 605 мг этил-3-метил-1-[3-(винилоксиметил)-2-пиридил]пиразол-4-карбоксилата. МС (т/ζ): 288 (М+1).

3. Этил-1-[3 -(циклопропоксиметил)-2-пиридил] -3 -метилпиразол-4-карбоксилат

1,0 М диэтилцинк в гексане (365,7 мкл, 3,5 ммоль) добавляли в атмосфере азота к дихлорметану (0,9 мл). Раствор охлаждали до 0°С и очень медленно добавляли раствор трифторуксусной кислоты (268,4 мкл, 3,5 ммоль) в дихлорметане (0,9 мл). Через 20 мин добавляли раствор дийодметана (286,1 мкл, 3,5 ммоль) в дихлорметане (0,9 мл). Еще через 20 мин добавляли раствор сложного этилового эфира 3метил-1-(3-винилоксиметилпиридин-2-ил)-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты (510 мг, 1,8 ммоль) в дихлорметане (0,9 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли 5% НС1 и водный слой экстрагировали этилацетатом. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Есо с использованием гексана и этилацетата в качестве элюентов (5-20% в этилацетате) с получением 310 мг этил-1-[3-(циклопропоксиметил)-2-пиридил]-3метилпиразол-4-карбоксилата. МС (т/ζ): 302 (М+1).

4. 1-[3-(Циклопропоксиметил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4-карбальдегид

К раствору сложного этилового эфира 1-(3-циклопропоксиметилпиридин-2-ил)-3-метил-1Нпиразол-4-карбоновой кислоты (410 мг, 1,03 ммоль) в тетрагидрофуране (0,15 М) при 0°С в атмосфере азота добавляли 1,0 М алюмогидрид лития в тетрагидрофуране (1,2 экв.). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и водный слой экстрагировали этилацетатом. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный материал растворяли в дихлорметане (14 мл) и добавляли оксид марганцаДУ) (1,2 г, 13,9 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем фильтровали через пластину с целитом и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт пропускали через пластину с силикагелем (элюент: этилацетат и дихлорметан). Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением 90 мг указанного в заголовке продукта. МС (т/ζ): 258 (М+1).

- 16 020848

Пример получения 34. 1-[3-(Метоксиметил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4-карбальдегид

О

1. Этил-1-[3-(метоксиметил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4-карбоксилат

Указанное соединение получали, по существу, так же, как описано в примере получения 12, путем использования этил-3-метил-1Н-пиразол-4-карбоксилата и 2-бром-3-(метоксиметил)пиридина, с выходом 83%. МС (т/ζ): 276 (М+1).

2. [ 1-[3-(Метоксиметил)-2-пиридил] -3 -метилпиразол-4-ил] метанол

Указанное соединение получали, по существу, так же, как описано в примере получения 24 (2 стадия), путем использования этил-1-[3-(метоксиметил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4-карбоксилата, с выходом 88%. МС (т/ζ): 234 (М+1).

3. 1-[3 -(Метоксиметил) -2-пиридил] -3 -метилпиразол-4-карбальдегид

Смесь [1-[3-(метоксиметил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4-ил]метанола (2,2 г, 9,4 ммоль) и оксида марганца(1У) (19 г, 188,8 ммоль) перемешивали в дихлорметане (20 мл) при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через целит и растворитель выпаривали при пониженном давлении с получением 1,8 г указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки. МС (т/ζ): 232 (М+1).

Пример получения 35. 2-Бром-3-(имидазол-1-илметил)пиридин

К раствору (2-бром-3-пиридил)метилметансульфоната (2,5 г, 9,39 ммоль) в этаноле (46,97 мл) при комнатной температуре добавляли карбонат калия (2,62 г) и 1Н-имидазол (1,31 г). Смесь перемешивали при 50°С. Образовывалась густая эмульсия, добавляли 10 мл этанола и полученную почти эмульсию перемешивали при 50°С в течение ночи. Добавляли воду до тех пор, пока твердое вещество не растворялось полностью. Затем полученную смесь концентрировали при пониженном давлении и осадок разводили этилацетатом и промывали бикарбонатом натрия (насыщенным водным раствором). Органический слой декантировали, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный материал очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке 1зсо с использованием в качестве элюента дихлорметана и метанола (98/2-90/10) с получением 1,42 г указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 238, 240 (М+1, М+3).

Соединения примеров получения 36-40 получали, по существу, так же, как описано в примере получения 35, из соответствующих азотсодержащих гетероколец.

Пример получения №	Химическое название	Структура	Выход (%)	Физические характеристики: МС (т/ζ)
36	2-Бром-З- (1,2,4-триазол- 1- илметил)пиридин	Λ—N И \\ Νχ / Вг N (У	39	239, 241 (М+1, М+3)
37	2-Бром-З- (триазол-2- илметил)пиридин	о Ν. ΧΝ Вг N А	33а	239, 241 (М+1, М+3)
38	2-Бром-З- (триазол-1- илметил)пиридин	о Вг N У	63а	239, 241 (М+1, М+3)
39	2-Бром-З- (пиразол-1- илметил)пиридин	в ά	41	238, 240 (М+1, М+3)
40	2-Бром-З-[(2- метилимидазол- 1-ил)метил] пиридин	ЛУ У	61	252, 254 (М+1, М+3)

^а)Оба соединения получали в ходе одной и той же реакции

- 17 020848

Пример получения 41. 2-[(2-Бром-3-пиридил)окси]ацетамид

К раствору 2-бром-3-пиридинола (1,5 г, 8,49 ммоль) в тетрагидрофуране (15 мл) при 0°С добавляли 60% гидрид натрия в минеральном масле (509,44 мг, 12,74 ммоль) и смесь перемешивали при указанной температуре в течение 30 мин. Затем добавляли ацетамид, 2-хлор- (16,98 ммоль) и смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре на выходные. Реакцию гасили водой и смесь экстрагировали этилацетатом. Отделенный органический слой сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения с выходом 75%. Соединение использовали без какой-либо дополнительной очистки. МС (т/ζ): 231 (М+1), 233 (М+3).

Пример получения 42. 2-Бром-3-(циклопропилметокси)пиридин

К раствору 2-бром-3-пиридинола (500 мг, 2,83 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) добавляли при 0°С 60% гидрид натрия в минеральном масле (169,81 мг, 4,25 ммоль). Смесь перемешивали при указанной температуре в течение 15 мин и добавляли бромметилциклопропан (329,66 мкл, 3,40 ммоль). Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, реакцию гасили водой и указанную смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт пропускали через короткую пластину с силикагелем и соединение элюировали дихлорметаном с получением 23% указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 228 (М+1), 230 (М+3).

Пример получения 43. Этил-1-(3-фтор-2-пиридил)-4-формилпиразол-3-карбоксилат

1. Этил-4-формил-1Н-пиразол-3 -карбоксилат

Круглодонную колбу на 100 мл наполняли гидрохлоридом семикарбазида (2 г, 17,93 ммоль), этилпируватом (11,8 мл) и этаноатом натрия (2,97 г). Затем добавляли воду (9 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин, затем указанную смесь фильтровали и твердое вещество промывали дополнительной порцией воды. Твердое вещество белого цвета сушили в вакууме в термостате (40°С) в течение ночи. Получали 2,66 г чистого этил-2-(карбамоилгидразоно)пропаноата. К диметилформамиду (7,13 мл) добавляли по каплям фосфорилхлорид (3,28 мл) при 0°С. Охлаждающую баню удаляли для достижения комнатной температуры. Затем смесь нагревали до 40°С и добавляли несколькими порциями предварительно полученный этил-2-(карбомоилгидразоно)пропаноат (2,66 г, 15,36 ммоль) в течение 15-20 мин (выделение газа во время добавления). Когда внутренняя температура составляла 55 °С, нагревающую баню удаляли, таким образом, внутреннюю температуру поддерживали в диапазоне 6070°С. Затем смесь нагревали до 80°С. При стабилизации температуры реакции при 80°С выделение газа практически больше не наблюдалось. Полученную суспензию перемешивали при 80°С в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в смесь лед/вода (30 мл) и перемешивали с получением суспензии. Добавляли по каплям 50% раствор гидроксида натрия до достижения рН 10. Раствор перемешивали при 50°С в течение 5 мин. Указанный раствор затем охлаждали с помощью ледяной/водяной бани и добавляли 35% водный раствор соляной кислоты до достижения рН 7. Смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой декантировали, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Осадок растирали с гексаном и несколькими каплями дихлорметана с получением 1,6 г этил-4формил-1Н-пиразол-3-карбоксилата, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. МС (т/ζ): 169 (М+1).

2. Этил-1-(3 -фтор-2-пиридил)-4 -формилпиразол-3 -карбоксилат

Смесь этил-4-формил-1Н-пиразол-3-карбоксилата (1,6 г, 9,52 ммоль), 2,3-дифторпиридина (1,20 г) и карбоната калия (1,97 г) в диметилформамиде (8 мл) нагревали и перемешивали при 100°С в течение 1,5

ч. Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду и органическую фазу экстрагировали этилацетатом, декантировали, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке 1§со с использованием этилацетата и гексана, с получением 711 мг указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 264 (М+1).

- 18 020848

Пример получения 44. 3-Метил-1-(3-(тетрагидрофуран-2-ил)пиридин-2-ил)-1Н-пиразол-4-карбальдегид

1. 3-(2,5-Дигидрофуран-2-ил)-2-фторпиридин

В пробирку с завинчивающейся крышкой, содержащую ацетат калия (440 мг, 4,5 ммоль), бромид тетрабутиламмония (1,4 г, 4,5 ммоль) и молекулярные сита (4А) в безводном диметилформамиде (1,8 мл), добавляли в атмосфере азота 2-фтор-3-йодпиридин (400 мг, 1,8 ммоль), 2,3-дигидрофуран (1,4 мл, 18 ммоль) и ацетат палладия (20 мг, 0,09 ммоль). Реакционную пробирку быстро запечатывали и содержимое перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь разводили диэтиловым эфиром и полученную смесь фильтровали через целит. Фильтрат промывали водой, сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель выпаривали в вакууме. Полученный осадок очищали с помощью силикагеля с использованием хроматографии на нормально-фазовой колонке Гео при элюировании смесью гексан/ацетон (градиент от 5 до 30% в ацетоне) с получением 170 мг 3-(2,5-дигидрофуран-2-ил)-2-фторпиридина. МС (т/ζ): 166 (М+1).

2. 2-Фтор-3-(тетрагидрофуран-2-ил)пиридин

Круглодонную колбу, содержащую 3-(2,5-дигидрофуран-2-ил)-2-фторпиридин (170 мг, 1 ммоль) и 10% Ρά/С в метаноле (3,1 мл), вакуумировали и наполняли водородом с помощью баллона. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и фильтровали через целит. Растворитель выпаривали в вакууме с получением 148 мг 2-фтор-3-(тетрагидрофуран-2-ил)пиридина. МС (т/ζ): 168 (М+1).

3. 3-Метил-1-(3-(тетрагидрофуран-2-ил)пиридин-2-ил)-1Н-пиразол-4-карбальдегид

В пробирку с завинчивающейся крышкой, содержащую 2-фтор-3-(тетрагидрофуран-2-ил)пиридин (148 мг, 0,88 ммоль) в диметилформамиде (2,2 мл), добавляли 3-метил-1Н-пиразол-4-карбальдегид (81 мг, 0,74 ммоль) и карбонат калия (152 мг, 1,1 ммоль). Реакционную пробирку быстро запечатывали (предупреждение: возможно повышение давления; использовать защитную перегородку) и перемешивали на предварительно нагретой масляной бане при 110°С в течение 18 ч с помощью магнитной мешалки. Смесь разводили водой и экстрагировали этилацетатом. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель выпаривали в вакууме. Полученный осадок очищали с помощью силикагеля с использованием хроматографии на нормально-фазовой колонке Гео при элюировании смесью гексан/ацетон (градиент от 5 до 20% в ацетоне) с получением 116 мг указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 258 (М+1).

Пример получения 45. 3-(2-Бромпирид-3-ил)изоксазол

1. Оксим 2-бромпиридин-3-карбальдегида

К раствору 2-бромпиридин-3-карбальдегида (2,04 г) в этаноле (25 мл) добавляли гидрохлорид гидроксиламина (948 мг, 13,16 ммоль) и этаноат натрия (1,09 г, 13,16 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и осадок распределяли между дихлорметаном и водой. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель выпаривали в вакууме с получением 2 г оксима 2-бромпиридин-3карбальдегида. МС (т/ζ): 201/203 (М+1/М+3).

2. [3 -(2-Бром-3 -пиридил)изоксазол-5 -ил]триметилсилан

К перемешиваемой суспензии оксима 2-бромпиридин-3-карбальдегида (400 мг, 1,99 ммоль) в дихлорметане (3,98 мл) при 0°С добавляли порциями пиридин (201,13 мкл, 2,49 ммоль) с последующим добавлением Ν-хлорсукцинимида (337,19 мг, 2,49 ммоль). Затем добавляли триметилсилилацетилен (350,60 мкл, 2,49 ммоль) с последующим добавлением триэтиламина (346,68 мкл, 2,49 ммоль). Смесь перемешивали при температуре от 0°С до комнатной температуры. Через 2 ч добавляли дополнительную порцию пиридина (321,81 мкл, 3,98 ммоль) и Ν-хлорсукцинимида (539,51 мг, 3,98 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакцию затем гасили насыщенным раствором хлорида аммония. Слои разделяли и органическую фазу сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением [3-(2-бром-3-пиридил)изоксазол-5-ил]триметилсилана с количественным выходом. МС (т/ζ): 297/299 (М+1/М+3).

3. 3-(2-Бром-3-пиридил)изоксазол

К раствору [3-(2-бром-3-пиридил)изоксазол-5-ил]триметилсилана (620 мг, 2,09 ммоль) в метаноле (18 мл) добавляли одной порцией карбонат калия (29,12 мг, 208,59 мкмоль). Смесь перемешивали при

- 19 020848 комнатной температуре в течение 24 ч. Растворитель удаляли в вакууме. Неочищенный продукт распределяли между этилацетатом и насыщенным раствором хлорида аммония. Органическую фазу промывали водой и сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке 1зто с использованием в качестве элюента смеси гексан/этилацетат (от 66/33 до 50/50) с получением 140 мг указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета. МС (т/ζ): 225/227 (М+1/М+3).

Пример получения 46. 1-(3-Хлор-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-карбальдегид н

К раствору 3-метилпиразол-4-карбальдегида (0,5 г, 4,5 ммоль) в безводном диметилформамиде (15 мл) добавляли карбонат калия (2,5 г, 18 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 30 мин и затем добавляли 1-фтор-2-хлорпиридин (0,77 г, 6 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 70°С в течение 16 ч. После завершения нагревания реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разводили водой и затем экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенную смесь очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании смесью гексан/этилацетат (75:25, 65:35) с получением 0,525 г (52%) указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 222 (М+1).

Пример получения 47. 1-(3-Циклопропил-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-карбальдегид н

1. Сложный этиловый эфир 1-(3-бромпиридин-2-ил)-3-метилпиразол-4-карбоновой кислоты

К раствору сложного этилового эфира 3-метилпиразол-4-карбоновой кислоты (2,0 г, 13 ммоль) в безводном диметилформамиде (30 мл) добавляли карбонат калия (7,2 г, 52 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 30 мин и затем добавляли 1-фтор-2бромпиридин (3,0 г, 17 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разводили водой и затем экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенную смесь очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании смесью гексан/этилацетат (85:15, 80:20) с получением 3,2 г (79%) сложного этилового эфира 1(3-бромпиридин-2-ил)-3-метилпиразол-4-карбоновой кислоты. МС (т/ζ): 312 (М+3), 310 (М+1).

2. Сложный этиловый эфир 1-(3-циклопропилпиридин-2-ил)-3-метилпиразол-4-карбоновой кислоты

Смесь сложного этилового эфира 1-(3-бромпиридин-2-ил)-3-метилпиразол-4-карбоновой кислоты (1,5 г, 5,5 ммоль), фосфата калия (4,0 г, 19,2 ммоль), циклопропилбороновой кислоты (0,7 г, 8,2 ммоль) и смеси толуол/вода (2:1, 15 мл) дегазировали с помощью азота и трициклогексилфосфина (0,153 г, 0,54 ммоль) и добавляли ацетат палладия (0,061 г, 0,27 ммоль). Смесь снова дегазировали с помощью азота и реакционный сосуд запечатывали и нагревали при 100°С в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали, разводили водой и экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенную смесь очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании смесью гексан/этилацетат (85:15) с получением 1,6 г (93%) сложного этилового эфира 1-(3-циклопропилпиридин-2-ил)-3-метилпиразол-4-карбоновой кислоты. МС (т/ζ): 272 (М+1).

3. [1-(3 -Циклопропилпиридин-2-ил)-3 -метилпиразол-4-ил]метанол

К перемешанной суспензии алюмогидрида лития (0,44 г, 11,7 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (25 мл) добавляли раствор сложного этилового эфира 1-(3-бромпиридин-2-ил)-3-метилпиразол-4карбоновой кислоты (1,6 г, 5,8 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (5 мл) в атмосфере азота при -78°С. После завершения добавления реакционную смесь нагревали до комнатной температуры, затем перемешивали в течение ночи. Реакцию гасили 1н раствором гидроксида натрия, затем реакционную смесь фильтровали через целит. Органический слой отделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой промывали водой и солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением 1,1 г (84%) [1-(3-циклопропилпиридин-2-ил)-3метилпиразол-4-ил]метанола. МС (т/ζ): 230 (М+1).

4. 1-(3-Циклопропил-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-карбальдегид

К раствору [1-(3-циклопропилпиридин-2-ил)-3-метилпиразол-4-ил]метанола (1,1 г, 5,0 ммоль) в

- 20 020848 безводном дихлорметане (15 мл) добавляли хлорхромат пиридиния (1,2 г, 5,5 ммоль) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и затем фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Неочищенную смесь очищали на силикагеле при элюировании смесью гексан/этилацетат (90:10, 80:20) с получением 0,2 г (20%) указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 228 (М+1).

Пример получения 48. 4-[(2-Бром-3-пиридил)метил]морфолин-3-он Вг о

К раствору 2-бром-3-бромметилпиридина (0,68 г, 2,36 ммоль) в диметилформамиде (10 мл) добавляли гидрид натрия (0,11 г, 60% суспензия, 2,82 ммоль), морфолин-3-он (0,20 г, 1,97 ммоль) и йодид тетрабутиламмония (катализатор) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После завершения перемешивания реакционную смесь распределяли между этилацетатом (25 мл) и водой (25 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (2x25 мл) и объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании смесью гексан/этилацетат (55:45) с получением 0,35 г (66%) указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 271/273 (М+1, М+3).

Соединения примеров получения 49-50 получали, по существу, так же, как описано в примере получения 48, из соответствующего лактамного реагента.

Пример получения №	Химическое название	Структура	Выход (%)	Физические характе- ристики: МС (т/ζ)
49	1- [ (2-Бром-З- пиридил)метил]- пирролидин-2-он	Вг о	80	255/257 (М+1, М+3)
50	1-[(2-Бром-З- пиридил)метил]- пиперидин-2-он	Вг О	59	269/271 (М+1/М+3)

Пример получения 51. Этил-1-(3-хлор-2-пиридил)-4-формилпиразол-3-карбоксилат

К раствору этил-4-формилпиразол-3-карбоксилата (1,70 г, 10,1 ммоль) и 3-хлор-2-фторпиридина (1,99 г, 15,1 ммоль) в диметилформамиде (20 мл) добавляли карбонат калия (2,80 г, 20,2 ммоль) и смесь перемешивали при 100°С в течение 16 ч. После завершения перемешивания реакционную смесь распределяли между водой (25 мл) и этилацетатом (25 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (3x25 мл) и объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия, концентрировали в вакууме и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании смесью гексан/этилацетат (50:50) с получением 1,5 г (54%) указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 280 (М+1).

Пример получения 52. Этил-1-(3-метил-2-пиридил)-4-формилпиразол-3-карбоксилат

Смесь этил-1-(3-хлор-2-пиридил)-4-формилпиразол-3-карбоксилата (1,0 г, 3,5 ммоль), триметилбороксина (0,44 г, 3,50 ммоль) и карбоната калия (1,4 г, 10,1 ммоль) в диоксане (18 мл) и воде (2 мл) дегазировали с помощью азота в течение 10 мин и затем добавляли трифенилфосфин палладия (0,40 г, 0,3 ммоль) и перемешивали при 110°С в течение 16 ч. После завершения перемешивания реакционную смесь распределяли между дихлорметаном (50 мл) и водой (25 мл). Водный слой экстрагировали дихлорметаном (2x25 мл) и объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании смесью гексан/этилацетат (70:30) с получением 0,12 г (13%) указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 260 (М+1).

- 21 020848

Пример 1. (Ь)-Тартрат [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] -3 -пиридил] метанола

К раствору 2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3метилпиразол-1-ил]пиридин-3-карбальдегида (12,50 г, 26,10 ммоль) в дихлорметане (125 мл) при 0°С добавляли боргидрид натрия (0,395 г, 10,44 ммоль) и метанол (37,50 мл). Ледяную баню удаляли и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли воду (50 мл) и смесь концентрировали до половины объема с получением клейкого твердого осадка белого цвета. Добавляли дихлорметан (100 мл) и двухфазную смесь разделяли. Органический слой промывали водой (50 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали до половины объема (около 100 мл). Добавляли метил-трет-бутиловый эфир (100 мл) и раствор концентрировали с получением осадка. Твердое вещество фильтровали и сушили в вакууме с получением 12 г [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]-3-пиридил]метанола. МС (т/ζ): 481 (М+1).

Указанное в заголовке соединение в виде свободного основания (0,48 г, 1 ммоль) растворяли в 3 мл метанола и добавляли раствор (Ь)-винной кислоты (0,15 г, 1 ммоль) в метаноле. Смесь перемешивали в течение 10 мин. Растворитель выпаривали и осадок сушили в вакууме в течение ночи с получением (Ь)тартрата [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] -1 '-ил)метил] -3 -метилпиразол-1-ил]-3-пиридил]метанола с количественным выходом. МС (т/ζ): 481 (М+1).

Пример 2. 2-Хлор-4,4-дифтор-1'-[[1-[3 -(4Н-имидазол-2-ил)-2-пиридил] -3 -метилпиразол-4-ил]метил] спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]

Раствор 40% глиоксала в воде (4,69 мл, 40,71 ммоль) и 2н аммония в метаноле (54,29 мл, 108,57 ммоль) добавляли к суспензии 2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]пиридин-3-карбальдегида (6,50 г, 13,57 ммоль) в метаноле (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин при 0°С и затем при 40°С в течение 1 ч. К суспензии добавляли дихлорметан (10 мл) с почти полным растворением материала. Смесь перемешивали в течение 4 ч с получением светло-коричневого раствора. Раствор перемешивали в течение 8 ч при 40°С. Добавляли 40% глиоксал в воде (2,34 мл, 20,36 ммоль) и 2н аммоний в метаноле (27,14 мл, 54,29 ммоль) и смесь перемешивали при 40°С в течение 15 ч. Реакционную смесь концентрировали до примерно 100 мл и выливали в смесь лед/вода (400 мл) и наблюдали образование твердого осадка бежевого цвета. Твердое вещество фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме (7 г). Указанное твердое вещество объединяли с другим неочищенным материалом, полученным, по существу, таким же способом (10 г). Объединенное твердое вещество растворяли в дихлорметане и фильтровали через пластину с силикагелем при элюировании смесью дихлорметан/метанол (96/4). Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали с получением твердого вещества светло-желтого цвета (11 г). Твердое вещество экстрагировали смесью 10% гексан/дихлорметан при кипячении с обратным холодильником и фильтрат концентрировали. Твердое вещество далее очищали посредством хроматографии на силикагеле при элюировании смесью 2н раствор гидроксида аммония в метаноле/дихлорметан с получением 6,5 г указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 518 (М+1).

- 22 020848

Пример 3. 2-Фтор-1'-[[1-[3-(1Н-имидазол-2-ил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4-ил]метил]спиро[4,5дигидротиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]

Указанное соединение получали, по существу, так же, как описано в примере 2, путем использования 2-[4-[(2-фторспиро [4,5-дигидротиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] -1 '-ил)метил] -3 -метилпиразол-1 ил]пиридин-3-карбальдегида. Осадок очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Гео с получением 32% указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 465 (М+1).

Пример 4. 5-(2-(4-((2'-Хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ил) метил)-3 -метил-1Н-пиразол-1 -ил)пиридин-3 -ил)оксазол

В пробирку с завичивающейся крышкой, содержащую 2-(4-((2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ил)метил)-3-метил-1Н-пиразол-1-ил)никотинальдегид (0,120 г, 0,25 ммоль) в метаноле (2,5 мл), добавляли карбонат калия (0,104 г, 0,75 ммоль) и п-толуолсульфонилметилизоцианид (0,054 г, 0,28 ммоль) в атмосфере азота. Реакционную пробирку быстро запечатывали (предупреждение: возможно повышение давления; использовать защитную перегородку) и перемешивали на предварительно нагретой масляной бане при 65°С в течение 3 ч с помощью магнитной мешалки. Смесь разводили метанолом и очищали с использованием картриджа, заполненного сильным катионообменником (2 г). Растворитель выпаривали в вакууме. Полученный осадок очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Гсо при элюировании смесью гексан/этаноле (5-30%) с получением 0,093 г указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 518 (М+1).

Пример 5. (Ь)-Тартрат 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[[1-(3-фтор-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-ил]метил] спиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина]

К раствору 2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина] (19,99 г, 64,33 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (120 мл) добавляли 1-(3-фтор-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-карбальдегид (12 г, 58,48 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем добавляли порошкообразный триацетоксиборгидрид натрия (18,59 г, 87,72 ммоль) (внутренняя температура 25-35°С) и полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Порциями добавляли насыщенный раствор бикарбоната натрия в ледяной смеси (200 мл) при перемешивании. Фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром (30 мл). Объединенные органические слои промывали водой (50 мл) и 50% солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением вязкого масла, которое очищали посредством хроматографии на силикагеле с использованием смеси дихлорметан/метанол в качестве элюента с получением 18 г вязкого масла, которое растирали с гексаном и смесью 10% трет-бутилметиловый эфир/гексан с получением 16,5 г 2-хлор4,4-дифтор-1'-[[1-(3-фтор-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-ил]метил]спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина]. МС (т/ζ): 469 (М+1).

Тартрат, по существу, получали так же, как описано в примере 1. МС (т/ζ): 469 (М+1).

Соединения примеров 6-15 получали, по существу, так же, как описано в примере 5, с использованием соответствующего альдегида.

- 23 020848

Пример №	Химическое название	Структура	Выход %	Физические характерис- тики: МС(т/г)
б	(Б)-Тартрат 1-[2- [4- [ (2-хлор-4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидин]-1'- ил)метил]-3- метилпиразол-1-ил]- 3-пиридил]-Ν,Ν- диметилметанамина	/	39	508 (М+1)
7	(£)-Тартрат №-[[2- [4- [ (2-хлор-4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидин]-1’- ил)метил]-3- метилпиразол-1-ил]- 3-пиридил]метил] ацетамида	ΑΎ ЛР 0	23	523 (М+1)

8	(Б)-Тартрат 2-фтор- 1[[1-[3- (метоксиметил)-2- пиридил]-3- метилпиразол-4- ил]метил]спиро[4,5— дигидротиено[2,3— с]пиран-7,4’- пиперидина]	\ 1 ом	4ба	443 (М+1)
9	(Б)-Тартрат 2-фтор- 1’-[ [1-(З-фтор-2- пиридил)-3- метилпиразол-4- ил]метил]спиро[4,5- дигидротиено[2,3- с]пиран-7,4’- пиперидина]	99? £9 1.	38а	417 (М+1)
10	(Б)-Тартрат 2,4,4- трифтор- 1 ’-[[1- [3- (метоксиметил)-2- пиридил]-3- метилпиразол-4- ил]метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]	У /	72	479 (М+1)
11	(Ъ)-Тартрат 2-хлор- 4,4-дифтор-1’-[[1- (З-фтор-2-пиридил)- 3-(метоксиметил) пиразол-4- ил]метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]	у? & V	64	499 (М+1)

- 24 020848

12	(Г)-Тартрат 2,4,4- трифтор- 1’-[[1-(3- фтор-2-пиридил)—3— метилпиразол-4- ил]метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]	У α-	51	453 (М+1)
13	(Ζ)-Тартрат 2-хлор- 4,4-дифтор-1* - Г[3- метил-1-(3- морфолино-2- пиридил)пиразол-4- ил]метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]	уй О г «Асу	60	536 (М+1)
14	(Σ)-Тартрат 2-хлор- 1'-[£1-[3- (метоксиметил)-2- пиридил]-3- метилпир азол-4- ил]метил]спиро[4, 5- дигидротиено[2, 3- с]пиран-7,41- пиперидина]	У V 1 «Н /	76	459 (М+1)
15	(ί,)-Тартрат 2-хлор- 1[[1-[3- (циклопропокси- метил)-2-пиридил]- З-метилпиразол-4- ил]метил]-4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4'-пиперидина]	У\ Ас· с	69	521 (М+1)

^аРеакции осуществляли с использованием тетрагидрофурана в качестве растворителя

Пример 16. 2-Хлор-4,4-дифтор-1'-[[3 -метил-1 -(3 -тетрагидрофуран-2-ил-2-пиридил)пиразол-4-ил] метил]спиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]

В пробирку с завинчивающейся крышкой, содержащую смесь 3-метил-1-(3-(тетрагидрофуран-2ил)пиридин-2-ил)-1Н-пиразол-4-карбальдегида (192 мг, 0,75 ммоль), 2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пирана (209 мг, 0,75 ммоль) и уксусной кислоты (43 мкл, 0,75 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (2,6 мл), добавляли триацетоксиборгидрид натрия (238 мг, 1,1 ммоль). Реакционную пробирку запечатывали и содержимое перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч с помощью магнитной мешалки. Смесь разводили метанолом и очищали с использованием картриджа, заполненного сильным катионообменником (10 г), и растворитель выпаривали в вакууме. Полученный осадок далее очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке 1§со при элюировании смесью гексан/ацетон (градиент от 5 до 30% в ацетоне) с получением 113 мг указанного в заголовке соединения в виде рацемической смеси. МС (т/ζ): 521 (М+1).

Энантиомерное расщепление осуществляли в условиях СФХ (сверхкритической флюидной хроматографии) с использованием СЫга1рак ΛΌ-Н® (СЫга1 ТесЬпо1од1е8, 1пс., Уэст-Честер, Пенсильвания, США) в качестве неподвижной фазы и смеси диоксид углерода/метанол/диметилэтиламин (0,2%) в качестве подвижной фазы. Первый вымывающийся энантиомер представлял собой желаемый энантиомер.

- 25 020848

Пример 17. (Ь)-Тартрат 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[[1-(3-фтор-2-пиридил)-3-(изопропоксиметил)пиразол4-ил]метил]спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина]

К раствору 2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина] (170 мг, 0,61 ммоль) в дихлорметане (2,4 мл) добавляли 1-(3-фтор-2-пиридил)-3-(изопропоксиметил)пиразол-4-карбальдегид (192 мг). Смесь перемешивали 10 мин при комнатной температуре. Затем добавляли триацетоксиборгидрид натрия (268,3 мг) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разводили дихлорметаном и медленно гасили бикарбонатом натрия (насыщенным раствором). Органическую фазу затем экстрагировали дополнительной порцией дихлорметана, декантировали, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Осадок очищали с помощью обращено-фазовой ВЭЖХ с получением 67,9 мг 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[[1-(3-фтор-2-пиридил)3-(изопропоксиметил)пиразол-4-ил]метил]спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина]. МС (т/ζ): 527 (М+1).

Тартрат, по существу, получали так же, как описано в примере 1. МС (т/ζ): 527 (М+1).

Пример 18. (Ь)-Тартрат 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[[1-[3-(метоксиметил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4ил]метил]спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина]

В пробирку с завинчивающейся крышкой добавляли йодид меди(1) (1,15 г, 6,02 ммоль), 2-хлор-4,4дифтор-1'-[(3-метил-1Н-пиразол-4-ил)метил]спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] (15 г, 40,12 ммоль), карбонат калия (11,76 г, 84,26 ммоль), 15 мл толуола (через который предварительно барботировали азот в течение 20 мин) и магнитную мешалку. Через реакционную смесь барботировали азот в течение дополнительных 10 мин и затем добавляли 2-бром-3-метоксиметилпиридин (10,54 г, 52,16 ммоль) и транс-^№-диметилциклогексан-1,2-диамин (1,90 мл, 12,04 ммоль). Реакционную пробирку быстро запечатывали (предупреждение: возможно повышение давления; используйте защитную перегородку), перемешивали содержимое при комнатной температуре в течение 5 мин и помещали на предварительно нагретую масляную баню при 115°С на 24 ч. Образец охлаждали до комнатной температуры, разводили этилацетатом и фильтровали через целит. Растворитель выпаривали в вакууме. Осадок очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке ксо с использованием смеси гексан/этилацетат (3070%). Желаемые фракции собирали и выпаривали. Некоторые неочищенные фракции (<2 г) заново очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке ксо с использованием смеси гексан/этилацетат (20-60% в этилацетате) в качестве элюента. Все фракции, содержащие конечное соединение, объединяли и выпаривали досуха в вакууме. Осадок растворяли в дихлорметане и промывали 10% водным раствором гидроксида аммония для удаления остатков меди. Органический растворитель выпаривали и соединение сушили в течение ночи с получением 13 г 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[[1-[3-(метоксиметил)-2-пиридил]-3-метилпиразол-4-ил]метил]спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина]. МС (т/ζ): 495 (М+1).

Тартрат, по существу, получали так же, как описано в примере 1. МС (т/ζ): 495 (М+1).

Соединения примеров 19-35 получали, по существу, так же, как описано в примере 18, из соответствующего 2-бром-3-замещенного пиридина (примеры 19-32 и 34-35) или 2-йод-3-замещенного пиридина (пример 33).

- 26 020848

Пример №	Химическое название	Структура	Выход (%)	Физические характе- ристики: МС (т/ζ)
	(ί.)-Тартрат 2-хлор-
	1 ’-[[1-[3-
	(этоксиметил)-2-	‘ОО
19	пиридил]-3- метилпира зол-4- ил] метил]-4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]	0 у?	он	50	509 (М+1)
	(Σ)-Тартрат 2-хлор-
	1'-[[1—[3~
	(циклопропил-	оо
	метоксиметил)-2-	0
20	пиридил]-3- метилпиразол-4- ил]метил]-4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4'-пиперидина]	УХ? X	он ^он	65	535 (М+1)
	(I)-Тартрат 2-хлор- 4,4-дифтор-1'-[[1- [3-	--ей
21	(изопропоксиметил)- 2-пиридил]-3- метилпиразол-4- ил]метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]	о у -ч	он 4 он	59	523 (М+1)
	(Ζ)-Тартрат 2-хлор-
	4,4-дифтор-1'-[[3-	‘40
22	метил-1-(З-метил-2- пиридил)пиразол-4- ил]метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]	о ν МОчг У о	'^’Ό чон	53	465 (М+1)
	(£)-Тартрат 2-хлор-
	4,4-дифтор-1’-[[3-	«-со
	метил-1-[3-(пиразол-	!о
23	1-илметил)-2- пиридил]пиразол-4- ил]метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]	о Оч	δ	30	531 (М+1)
	(Σ)-Тартрат 2-хлор-	’Ζ
	4,4-дифтор-1’-[[3-	си
	метил-1-[3-(триазол-	‘о
24	2-илметил)-2- пиридил]пиразол-4- ил]метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]	Ν-/ СС °н V	ок хон	44	532 (М+1)

- 27 020848

25	(I)-Тартрат 2-хлор- 4,4-дифтор-1'-[[3- метил-1- [3-(1,2,4- триазол-1-илметил)- 2-пиридил]пиразол-4- ил]метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]		62	532 (М+1)
26	(Ζ)-Тартрат 2-фтор- 1’-[[З-метил-1-[3- (1,2,4-триазол-1- илметил)-2- пиридил]пиразол-4- ил]метил]спиро[4,5- дигидротиено[2, 3- с]пиран-7,4’- пиперидина]		70	480 (М+1)
27	(I)-Тартрат 2-хлор- 4,4-дифтор-1’-[[1- [3-(имидазол-1- илметил)-2-пиридил]- З-метил-пиразол-4- ил ] метил ] спиро [ 5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]		37	531 (М+1)
28	(Ь)-Тартрат 2—[2—[4— [(2-Хлор-4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидин]-1'- ил)метил]-3-метил- пиразол-1-ил]-3- пиридил]ацетонитрила		51	490 (М+1)
29	(Ь)-Тартрат 2-[[2- [4-[(2-хлор-4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидин]-1’- ил)метил]-3-метил- пиразол-1-ил]-3- пиридил]окси] ацетамида	У Ο-νγ V,	13	524 (М+1)
30	(Ь)-Тартрат 2-фтор- 1’-[[З-метил-1-[3- [(2-метилимидазол-1- ил)метил]-2- пиридил]пиразол-4- ил]метил]спиро[4,5- дигидротиено[2,3- с]пиран-7,4’- пиперидина]	\ 1 Он	57	493 (М+1)
31	(Ъ)-Тартрат 2-хлор- 4,4-дифтор-1’-[[3- метил-1-[3-(триазол- 1-илметил)-2- пиридил]пиразол-4- ил]метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4'-пиперидина]	0 . σν	64	532 (М+1)

- 28 020848

32	(Ь)-Тартрат 2-хлор- 4,4-дифтор-1'-[[3- метил-1-[3-[(2- метилимида зол-1- ил)метил]-2- пиридил]пиразол-4- ил 3 метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]	А У У А	62	545 (М+1)
33	(Ь)-Тартрат 2,4,4- трифтор-1’-[[1-(3- метокси-2-пиридил)- З-метилпиразол-4- ил]метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]	А?·	59	465 (М+1)
34	(Ь)-Тартрат 1’-[ [1- [3-(циклопропил- метоксиметил) -2- пиридил]-3- метилпиразол-4- ил]метил]-2- фторспиро[4,5- дигидротиено[2,3- с]пиран-7, 4 пиперидина]	А А’	48	483 (М+1)
35	(Ю-Тартрат 2-хлор- 1’-[ [1-[3- (циклопропил- метокси)-2-пиридил]- З-метилпиразол-4- ил]метил]-4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидина]	.у у А	76	521 (М+1)

Пример 36. 2-Хлор-4,4-дифтор-1'-[[1-(3-метокси-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-ил]метил]спиро[5Нтиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]

В пробирку с завинчивающейся крышкой добавляли йодид меди(1) (23,74 мг, 0,125 ммоль), 2-хлор4,4-дифтор-1'-[(3-метил-1Н-пиразол-4-ил)метил]спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] (233,00 мг, 0,623 ммоль), карбонат калия (182,71 мг, 1,31 ммоль), толуол (2 мл) (через который предварительно барботировали азот в течение 20 мин) и магнитную мешалку. Через реакционную смесь барботировали азот в течение 20 мин и затем добавляли 2-йод-3-метоксипиридин (302,01 мг, 1,25 ммоль) и транс-Ν,Ν'диметилциклогексан-1,2-диамин (39,31 мкл, 0,25 ммоль). Реакционную пробирку быстро запечатывали (предупреждение: возможно повышение давления; используйте защитную перегородку) и перемешивали на предварительно нагретой масляной бане при 110°С в течение 24 ч с помощью магнитной мешалки. Затем смесь наносили на колонку, заполненную сильным катионообменником (25 г), и элюировали метанолом и затем 2н раствором аммония в метаноле. Основную фракцию концентрировали и полученный осадок очищали с помощью основной ВЭЖХ с получением 162 мг указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 481 (М+1).

- 29 020848

Пример 37. 2-Хлор-4,4-дифтор-1'-[[1-(3-изоксазол-3-ил-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-ил]метил] спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]

Указанное соединение, по существу, получали так же, как описано в примере 36, путем использования 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[(3-метил-1Н-пиразол-4-ил)метил]спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина] и 3-(2-бромпирид-3-ил)изоксазола в качестве исходного материала. Осадок очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Нсо (этилацетат использовали в качестве элюента) с получением 45% указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 518 (М+1).

Пример 38. 2-(2-(4-((2'-Хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1ил)метил)-3-метил-1Н-пиразол-1-ил)пиридин-3-ил)пропан-2-ол

В пробирку с завичивающейся крышкой, содержащую 2-(2-бром-3-пиридил)пропан-2-ол (520 мг, 2,41 ммоль) в безводном диметилформамиде (3,2 мл), добавляли в атмосфере азота 4-((2'-хлор-4',4'дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ил)метил)-3-метил-1Н-пиразол (600 мг, 1,6 ммоль), оксид меди(1) (23 мг, 160 мкмоль), (К,К)-(-)-^№-диметил-1, 2-циклогександиамин (68 мг, 480 мкмоль) и карбонат цезия (1040 мг, 3,2 ммоль). Реакционную пробирку быстро запечатывали (предупреждение: возможно повышение давления; используйте защитную перегородку) и содержимое перемешивали на предварительно нагретой масляной бане при 110°С в течение 16 ч с помощью магнитной мешалки. Смесь разводили водой и экстрагировали этилацетатом. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель выпаривали в вакууме. Полученный осадок очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Нсо с силикагелем при элюировании смесью гексан/этанол (градиент от 2 до 15% в этаноле) с получением 310 мг указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 509 (М+1).

Пример 39. (Ь)-Тартрат 1-[2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] -3 -пиридил] -Ν-метилметанамина

Указанное в заголовке соединение в виде свободного основания получали, по существу, так же, как описано в примере получения 7, с использованием 2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]пиридин-3-карбальдегида и метиламина, с выходом 51%. МС (т/ζ): 494 (М+1).

Тартрат, по существу, получали так же, как описано в примере 1. МС (т/ζ): 551 (М+1).

Соединения примеров 40-44 получали, по существу, так же, как описано в примере 39, из соответствующего альдегида и амина (пример 43 получали с использованием 1,2-дихлорэтана в качестве растворителя).

- 30 020848

Пример №	Химическое название	Структура	Выход (%)	Физические характерис- тики: МС (т/ζ)
40	(Ь)-Тартрат N-[[2- [4-[(2-хлор-4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидин]- 1’-ил) метил]-3- метилпиразол-1- ил]-3- пиридил 3 ме тил] пропан-2-амина	А·	34	522 (М+1)
41	(Ь)-Тартрат 2-[[2- [4-[(2-хлор-4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидин]- 1 *-ил) метил]—3- метилпиразол-1- ил]-3-пиридил] метиламино] ацетонитрила	А Г	70	519 (М+1)
42	(!)-Тартрат 2- [ [2- [4-[ (2- фторспиро[4,5- дигидротиено[2, 3- с]пиран-7,4’- пиперидин]-1’ - ил)метил]-3- метилпиразол-1- ил]-3-пиридил] метиламино] ацетонитрила	-/А Α;	27	453 (М+1)

43	(П)-Тартрат 2-[[2- [4-[(2-хлор-4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран- 7,4’-пиперидин]- 1’-ил)метил]-3- метилпиразол-1- ил]-3-пиридил] метиламино] ацетамида	о »	53	485 (М+1)
44	(!)-Тартрат 1- [ [2- [4-[ (2- фторспиро[4,5- дигидротиено[2,3- с]пиран-7,4’- пиперидин]-1’- ил)метил]-3-метил- пиразол-1-ил]-3- пиридил] метиламино]пропан- 2-она	А, А?'	38	537 (М+1)

Пример 45. (Ь)-Тартрат оксима 2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] -1 '-ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] пиридин-3 -карбальдегида

- 31 020848

К раствору 2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3метилпиразол-1-ил]пиридин-3-карбальдегида (0,210 г, 0,438 ммоль) в этаноле (3 мл) добавляли гидрохлорид гидроксиламина (0,038 г, 0,526 ммоль) и этаноат натрия (0,044 г, 0,526 ммоль) и смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 1 ч. Растворитель выпаривали и осадок экстрагировали этилацетатом и водой. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель выпаривали в вакууме. Осадок очищали с помощью основной обращено-фазовой ВЭЖХ с получением 0,110 г оксима 2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]пиридин-3-карбальдегида. МС (т/ζ): 494 (М+1).

Тартрат, по существу, получали так же, как описано в примере 1. МС (т/ζ): 494 (М+1).

Соединения примеров 46-47 получали, по существу, так же, как описано в примере 45, из соответствующего альдегида и гидроксиламина.

Пример №	Химическое название	Структура	Выход (%)	Физические характерис- тики: МС (т/ζ)
46	ЛЬ}-Тартрат 1- [2-[4-[(2-хлор- 4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3- с]пиран-7,4 ’ - пиперидин]-1’- ил)метил]-3- метилпиразол-1- ил]-3-пиридил]- Ν-метокси- метанимина		73	508 (М+1)
47	(Ы-Тартрат 1- [2-[4-[ (2- фторспиро[4,5- дигидротиено[2, 3-с]пиран-7,4'- пиперидин]-1’- ил)метил]-3- метилпиразол-1- ил]-3-пиридил]- М-метокси- метанимина	Ν—о	64	456 (М+1)

Пример 48. (Ь)-Тартрат [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с пиран-7,4'-пиперидин]-1'ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] -3 -пиридил] метанамина

1. 2-[[2-[4-[(2-Хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]-3-пиридил]метил]изоиндолин-1,3-дион

Диизопропилазодикарбоксилат (0,105 мл, 0,54 ммоль) добавляли к раствору [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]-3-пиридил]метанола (0,173 г, 0,36 ммоль), фталимида (0,079 мг, 0,54 ммоль) и трифенилфосфина (0,142 г, 0,54 ммоль) в толуоле (3 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли и осадок сначала очищали с использованием картриджа, заполненного сильным катионообменником (2 г), и после выпаривания фракции 2н аммония в метаноле очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке 1зсо при элюировании смесью гексан/этанол (3-30%) с получением 0,201 г 2-[[2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол1-ил]-3-пиридил]метил]изоиндолин-1,3-диона. МС (т/ζ): 610 (М+1).

2. (Ь)-Тартрат [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3метилпиразол-1 -ил] -3 -пиридил] метанамина

В колбу, содержащую 2-[[2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]-3-пиридил]метил]изоиндолин-1,3-дион (0,201 г, 0,33 ммоль) и 24 мкл

- 32 020848 воды в этаноле (2,5 мл), добавляли моногидрат гидразина (0,04 г, 0,79 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2,5 ч и затем разводили метанолом и очищали с использованием картриджа, заполненного сильным катионообменником (2 г). После выпаривания фракции 2н аммония в метаноле полученный продукт очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Есо при элюировании этанолом и 15% раствором гидроксида аммония (7н в метаноле) в этаноле (градиент 25-90% основного элюента) с получением 129 мг указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 480 (М+1).

Тартрат, по существу, получали так же, как описано в примере 1. МС (т/ζ): 480 (М+1).

Пример 49. (Ь)-Тартрат 2-[4-[(2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил) метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] пиридин-3 -карбоксамида

1. 2-[4-[(2-Фторслиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол1 -ил] пиридин-3 -карбонитрил.

Указанное соединение, по существу, получали так же, как описано в примере получения 7, путем использования 2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина] и 2-(4-формил-3-метилпиразол-1-ил)пиридин-3-карбонитрила. Осадок очищали с помощью сильного катионообменника с получением 2-[4-[(2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол-1ил]пиридин-3-карбонитрила с выходом 32%. МС (т/ζ): 424 (М+1).

2. (Ь)-Тартрат 2-[4-[(2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол-1 -ил] пиридин-3 -карбоксамида.

К раствору 2-[4-[(2-фторспиро [4,5-дигидротиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] -1 '-ил)метил] -3 -метилпиразол-1-ил]пиридин-3-карбонитрила (0,71 ммоль, 0,30 г) в диметилсульфоксиде (7,5 мл) добавляли карбонат калия (0,049 г, 0,35 ммоль) и смесь охлаждали до 0-5°С перед добавлением 33% раствора перекиси водорода в воде (0,39 мл, 3,78 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем осторожно добавляли воду и реакционную смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой декантировали, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Есо с использованием в качестве элюента смеси дихлорметан/метанол с получением 0,252 г, которые дополнительно очищали с помощью обращено-фазовой ВЭЖХ с получением 0,198 г 2-[4-[(2-фторспиро[4,5дигидротиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] -1 '-ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] пиридин-3 -карбоксамида. МС (т/ζ): 442 (М+1).

Тартрат, по существу, получали так же, как описано в примере 1. МС (т/ζ): 442 (М+1).

Пример 50. (Ь)-Тартрат 2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил) метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] пиридин-3 -карбоксамида

Указанное в заголовке соединение получали, по существу, так же, как описано в примере 49, путем использования 2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина] и 2-(4-формил-3-метилпиразол-1-ил)пиридин-3-карбонитрила в качестве исходного материала, с общим выходом 15% (с выходом 22% на первой стадии и с выходом 66% на второй стадии). МС (т/ζ): 494 (М+1).

Пример 51. (Ь)-Тартрат 2-[2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] -3 -пиридил] ацетамида

- 33 020848

К раствору 2-[2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3метилпиразол-1-ил]-3-пиридил]ацетонитрила (170 мг, 346,96 мкмоль) в диметилсульфоксиде (4 мл) добавляли карбонат калия (23,98 мг, 173,48 мкмоль) и смесь охлаждали до 0-5°С. Добавляли 33% раствор перекиси водорода в воде (189,54 мкл, 1,84 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч и затем добавляли дополнительную порцию 33% раствора перекиси водорода в воде (189,54 мкл, 1,84 ммоль) и карбонат калия (23,98 мг, 173,48 мкмоль). Добавляли воду и смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали в вакууме. Соединение очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Гсо с использованием дихлорметана и 2н аммония в метаноле в качестве элюентов (1,5-6% в 2н аммонии в метаноле) с получением 19% указанного в заголовке соединения в виде свободного основания. МС (т/ζ): 508 (М+1).

Тартрат получали, по существу, так же, как описано в примере 1. МС (т/ζ): 508 (М+1).

Пример 52. (Ь)-Тартрат [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] -3 -пиридил] метил-^метилкарбамата

Метилизоцианат (5,80 мкл, 0,096 ммоль) добавляли к раствору 2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Нтиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] - 1'-ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] -3 -пиридил]метанола (0,042 г, 0,087 ммоль) в дихлорметане (1 мл) при комнатной температуре. Через 1 ч, когда с помощью анализа ЖХ/МС не наблюдалось развития реакции, добавляли триэтиламин (12,17 мкл, 87,32 мкмоль) и метилизоцианат (5,8 мкл, 0,096 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли дополнительную порцию триэтиламина (12,17 мкл, 87,32 мкмоль) и метилизоцианата (5,8 мкл, 0,096 ммоль) и через 24 ч растворитель выпаривали и осадок очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Гсо с использованием смеси дихлорметан/2н раствор гидроксида аммония в метаноле (от 0 до 5% в 2н растворе гидроксида аммония в метаноле) в качестве элюента с получением 0,041 г [2-[4-[(2хлор-4,4-дифторспиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] -1 '-ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] -3 -пиридил]метил-^метилкарбамата. МС (т/ζ): 538 (М+1).

Тартрат, по существу, получали так же, как описано в примере 1. МС (т/ζ): 538 (М+1).

Пример 53. (Ь)-Тартрат [4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил) метил] -1-(3 -фтор-2-пиридил)пиразол-3 -ил] метанола

1. Этил-4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-1-(3-фтор2-пиридил)пиразол-3 -карбоксилат

К раствору этил-1-(3-фтор-2-пиридил)-4-формил-пиразол-3-карбоксилата (342,5 мг) в 1,2-дихлорэтане (6,7 мл) добавляли 2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] (280 мг, 1 ммоль). Смесь перемешивали в течение 10 мин. Затем добавляли триацетоксиборгидрид натрия (442 мг) и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли бикарбонат натрия (насыщенный водный раствор) и органическую фазу экстрагировали дихлорметаном, сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Гсо с использованием в качестве элюента этилацетата и гексана с получением 450 мг этил-4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] - 1'-ил)метил] 1-(3-фтор-2-пиридил)пиразол-3-карбоксилата. МС (т/ζ): 527 (М+1).

2. (Ь)-Тартрат [4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-1-(3фтор-2-пиридил)пиразол-3 -ил] метанола

К раствору этил-4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-1- 34 020848 (3-фтор-2-пиридил)пиразол-3-карбоксилата (250 мг, 0,47 ммоль) в тетрагидрофуране (2,37 мл) в атмосфере азота, охлажденному до 0°С, медленно добавляли 1 М алюмогидрид лития в тетрагидрофуране (569,3 мкл). Смесь перемешивали при указанной температуре в течение 30 мин. Затем добавляли 22 мкл воды и охлаждающую баню удаляли и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин до добавления 22 мкл 15% водного раствора гидроксида натрия и 65 мкл воды. Твердое вещество отфильтровывали и растворитель выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке Ιί^ο с использованием в качестве элюента дихлорметана и метанола с получением 141 мг указанного в заголовке соединения в виде свободного основания. МС (т/ζ): 485 (М+1).

Тартрат, по существу, получали так же, как описано в примере 1. МС (т/ζ): 485 (М+1). Альтернативный пример получения свободного основания примера 53.

1. Этил-4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] -1 '-ил)метил] -1Н-пиразол-3 -карбоксилат

К суспензии 2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина (18,3 г, 65,42 ммоль) в тетрагидрофуране (0,2 л) добавляли этил-4-формил-1Н-пиразол-3-карбоксилат (10 г, 59,47 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем добавляли порошкообразный триацетоксиборгидрид натрия (16,39 г, 77,31 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Затем реакционную смесь выливали в смесь лед/насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (200 мл). Фазы разделяли. Водную фазу подщелачивали насыщенным раствором №-1НСО₃, и экстрагировали этилацетатом (100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором НаНСО₃, сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением 22,5 г указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 432 (М+1).

2. Этил-4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-1-(3-фтор2-пиридил)пиразол-3 -карбоксилат

К раствору этил-4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]1Н-пиразол-3-карбоксилата (22,5 г, 52,10 ммоль) в диметилформамиде (225,00 мл) добавляли карбонат калия (10,80 г, 78,14 ммоль) и 2,3-дифторпиридин (7,19 г, 62,52 ммоль) и полученную суспензию перемешивали при 60°С в течение 15 ч. Затем реакционную смесь выливали в смесь лед/солевой раствор (30 мл) и к полученной суспензии добавляли СН₂С1₂ (50 мл). Раствор промывали Н₂О (2x50 мл). Органические фазы сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного продукта, который очищали посредством фильтрования через §Ю₂ при элюировании смесью 2-пропанол/СН₂С1₂ с получением 18 г указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 527 (М+1).

3. [4-[(2-Хлор-4,4-дифторспиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил] -1 -(3 -фтор-2-пиридил)пиразол-3 -ил] метанол

К раствору этил-4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-1(3-фтор-2-пиридил)пиразол-3-карбоксилата (2,6 г, 4,93 ммоль) в тетрагидрофуране (26,00 мл) в атмосфере Ν₂, охлажденному до -10°С, медленно по каплям добавляли 1 М диизобутилалюмогидрид в толуоле (23,68 мл, 23,68 ммоль). Затем реакционную смесь перемешивали при указанной температуре в течение 15 мин и затем охлаждающую баню удаляли и смесь нагревали до комнатной температуры. Затем по каплям добавляли Н₂О (100 мл) при -10°С. Полученную суспензию экстрагировали ЕЮАс (2x30 мл). Объ- 35 020848 единенные органические слои промывали Н₂О (50 мл) и солевым раствором (50 мл), сушили над №₂8О₄ и концентрировали с получением светло-коричневого масла, которое растворяли в метил-трет-бутиловом эфире (10 мл) и наблюдали образование белых кристаллов. Образованную суспензию перемешивали и добавляли по каплям гексан (10 мл) при перемешивании. Твердое вещество фильтровали с получением 2 г указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 485 (М+1).

Пример 54. 2-(4-((2'-Хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ил) метил)-3 -метил-1Н-пиразол-1 -ил)-3 -(3 -метил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)пиридин

1. Сложный метиловый эфир 2-(4-((2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено [2,3-с]пиран] -1 -ил)метил)-3 -метил-1Н-пиразол-1 -ил)-никотиновой кислоты

В пробирку с завинчивающейся крышкой добавляли оксид меди(1) (11 мг, 0,08 ммоль), 2-хлор-4,4дифтор-1'-[(3-метил-1Н-пиразол-4-ил)метил]спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] (300 мг, 0,8 ммоль), карбонат цезия (523 мг, 1,6 ммоль), безводный диметилформамид (1,6 мл) и магнитную мешалку. Через реакционную смесь барботировали азот в течение 20 мин и затем добавляли метил-2йодпиридин-3-карбоксилат (511 мг, 1,9 ммоль) и транс-^№-диметилциклогексан-1,2-диамин (0,24 ммоль, 34 мг). Реакционную пробирку быстро запечатывали (предупреждение: возможно повышение давления; используйте защитную перегородку) и помещали на предварительно нагретую масляную баню при 110°С на 16 ч с использованием магнитной мешалки. Затем смесь наносили на колонку, заполненную сильным катионообменником (§СХ) (10 г), и элюировали метанолом и затем 2н раствором аммония в метаноле. Основную фракцию концентрировали и полученный осадок очищали с помощью силикагеля с использованием хроматографии на нормально-фазовой колонке 1зсо при элюировании смесью гексан/этанол (градиент от 2 до 15% в этаноле) с получением 307 мг сложного метилового эфира 2-(4-((2'хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро [пиперидин-4,7'-тиено [2,3-с]пиран] -1 -ил)метил)-3 -метил-1Н-пиразол-1-ил)-никотиновой кислоты. МС (т/ζ): 309 (М+1).

2. 2-(4-((2'-Хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ил)метил)-3метил-1Н-пиразол-1-ил)-3-(3-метил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)пиридин

К раствору оксима ацетамида (154 мг, 2,1 ммоль) в 7 мл тетрагидрофурана добавляли в атмосфере аргона 139 мг измельченных молекулярных сит (4А) и гидрид натрия (2,1 ммоль; 84 мг в виде 60% раствора в минеральном масле). Смеси позволяли перемешиваться в течение 30 мин при 50°С. После охлаждения до комнатной температуры добавляли сложный метиловый эфир 2-(4-((2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ил)метил)-3-метил-1Н-пиразол-1-ил) никотиновой кислоты (309 мг, 0,6 ммоль) и затем смесь нагревали при 50°С в течение 40 мин. После охлаждения реакцию гасили водой и реакционную смесь экстрагировали дихлорметаном. После высушивания органической фазы с помощью сульфата магния и выпаривания растворителя осадок разводили в метаноле и очищали с использованием картриджа, заполненного сильным катионообменником (5 г). Полученный осадок далее очищали с помощью полупрепаративной обращено-фазовой ВЭЖХ-МС с использованием колонки ХВгйде (5 мкм, 19x100 мм) и градиента между 60 и 80% В в А в течение 5 мин при скорости потока 25 мл/мин (основные условия А: 20 мМ бикарбонат аммония, рН 9, и В: ацетонитрил) с получением 71 мг указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 533 (М+1).

Пример 55. (Ь)-Тартрат 2-хлор-1'-[[1-(3-хлор-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-ил]метил]-4,4-дифторспиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина]

К раствору 2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пирана] (0,2 г, 0,71 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (5 мл) добавляли 1-(3-хлор-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-карбальдегид (0,19 г, 0,86 ммоль) и несколько капель уксусной кислоты. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (0,315 г, 1,43 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 14 ч. После завершения перемешивания реакционную смесь

- 36 020848 разводили дихлорметаном и промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором. Органическую фазу сушили над сульфатом магния и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью ВЭЖХ с получением 0,195 г (56%) 2-хлор-1'-[[1-(3-хлор-2-пиридил)-3метилпиразол-4-ил]метил]-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина]. МС (т/ζ): 485 (М+1).

Тартрат, по существу, получали так же, как описано в примере 1. МС (т/ζ): 485 (М+1).

Пример 56. (Ь)-Тартрат 2-хлор-1'-[[1-(3-циклопропил-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-ил]метил]-4,4дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина]

Указанное в заголовке соединение получали, по существу, так же, как описано в примере 55, путем использования 2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пирана] и 1-(3-циклопропил-2-пиридил)-3-метилпиразол-4-карбальдегида в качестве исходного материала, с выходом 41%. МС (т/ζ): 491 (М+1).

Пример 57. 4-[[2-[4-[(2-Хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]3 -метилпиразол-1 -ил] -3 -пиридил] метил] морфолин-3 -он

Смесь 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[(3 -метил-1Н-пиразол-4-ил)метил]спиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина] (0,20 г, 0,53 ммоль), 4-[(2-бром-3-пиридил)метил]морфолин-3-она (0,21 г, 0,77 ммоль), йодида меди(1) (0,015 г, 0,078 ммоль) и карбоната цезия (0,36 г, 1,10 ммоль) в диметилформамиде (5 мл) дегазировали путем барботирования аргона в течение 15 мин. Добавляли (1К,2К)-^№-диметилциклогексан-1, 2-диамин (0,02 г, 0,14 ммоль) по мере дегазирования в течение 15 мин и затем смесь нагревали до 130°С в течение 16 ч. После завершения нагревания реакционной смеси позволяли охлаждаться до комнатной температуры и фильтровали через целит. Осадок промывали этилацетатом (2x25 мл) и фильтрат промывали водой (30 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (2x25 мл) и объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании смесью дихлорметан/метанол (96:4) с получением 0,09 г (30%) указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 564 (М+1).

Соединения примеров 58-59 получали, по существу, так же, как описано в примере 57, из промежуточных соединений, описанных в примерах получения 49 и 50, соответственно.

58	1-[[2- [4-[ (2- Хлор-4,4- дифторспиро[5Н- тиено[2,3- с]пиран-7,4'- пиперидин]-1’- ил)метил]-3- метилпиразол-1- ил]-3- лиридил]метил] пирролидин-2-он	XX ГС и	) О	15	548 (М+1)
	1- [ [2-[4-[(2-
	Хлор-4,4-	с
	дифторспиро[5Н-	сн/Т	’Х
	тиено[2,3-
	с]пиран-7, 4*-	с	с
59	пиперидин]-1’-	Уу	15	562 (М+1)
	ил)метил]-3-	V	о
	метилпиразол-1-
	ил]-3-	и	О
	пиридил]метил]
	пиперидин-2-он

- 37 020848

Пример 60. [4-[(2-Хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-1-(3хлор-2-пиридил)пиразол-3-ил]метанол

1. Этил-4-((2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро [пиперидин-4,7'-тиено [2,3-с]пиран] -1 -ил)метил)1 -(3 -хлор-2-пиридил)-1Н-пиразол-3 -карбоксилат

К раствору гидрохлорида 2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пирана] (0,35 г, 1,1 ммоль) и этил-1-(3-хлорпиридин-2-ил)-4-формил-пиразол-3-карбоксилата (0,3 г, 1,0 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (20 мл) добавляли Ν-метилморфолин (0,33 г, 3,2 ммоль) и молекулярные сита (0,10 г). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (0,58 г, 2,7 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После завершения перемешивания реакционную смесь фильтровали через целит и распределяли между дихлорметаном (15 мл) и водой (15 мл). Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (3x30 мл) и объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании смесью дихлорметан/метанол (98:2) с получением 0,4 г (67%) этил-4-((2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ил)метил)-1-(3-хлор-2-пиридил)-1Н-пиразол-3-карбоксилата. МС (т/ζ): 543 (М+1).

2. [4-[(2-Хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-1-(3-хлор-2-пиридил)пиразол-3 -ил] метанол

К раствору этил-4-((2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1ил)метил)-1-(3-хлор-2-пиридил)-1Н-пиразол-3-карбоксилата (0,4 г, 0,73 ммоль) в тетрагидрофуране (5 мл) и этаноле (5 мл) добавляли боргидрид лития (1,80 мл, 2,0 М раствор в тетрагидрофуране, 3,68 ммоль) при 0°С и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После завершения перемешивания реакцию гасили водой (10 мл) и реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (2x25 мл). Объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании смесью дихлорметан/метанол (97:3) с получением 0,14 г (39%) указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 500 (М+1).

Пример 61. [4-[(2-Хлор-4,4-дифторспиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] - 1'-ил)метил]-1-(3 метил-2 -пиридил)пиразол-3 -ил] метанол

Указанное в заголовке соединение получали, по существу, так же, как описано в примере 60, путем использования гидрохлорида 2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидроспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пирана] и 1-(3-метилпиридин-2-ил)-4-формил-пиразол-3-карбоксилата в качестве исходного материала, с выходом 14%. МС (т/ζ): 481 (М+1).

Пример 62. [2-[4-[(2-Хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3метилпиразол-1 -ил] -3 -пиридил] метанол

1. 2-[4-[(2-Хлор-4,4-дифторспиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] -1 '-ил)метил] -3 -метилпиразол- 1 -ил] пиридин-3 -карбальдегид

Смесь 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[(3 -метил-1Н-пиразол-4-ил)метил]спиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пи- 38 020848 перидина] (168,4 г, 451 ммоль), Си1 (12,9 г, 67,7 ммоль) и карбоната калия (131 г, 947 ммоль) в безводном толуоле (340 мл) дегазировали при комнатной температуре в течение 30 мин. Последовательно добавляли 2-бром-пиридин-3-карбоксальдегид (125 г, 677 ммоль) и транс-Л,№-диметилциклогексан-1,2-диамин (21,3 мл, 135,4 ммоль). Содержимое дегазировали в течение 30 мин перед нагревом при 105°С при перемешивании в течение 18 ч. С помощью ЖХ/МС-анализа реакционной смеси выявляли полное исчезновение 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[(3-метил-1Н-пиразол-4-ил)метил]спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидина]. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разводили этилацетатом (1,5 л), перемешивали и фильтровали через пластину с целитом. Исходный раствор промывали последовательно 10% раствором гидроксида аммония (5x100 мл), водой (3x100 мл) и солевым раствором. Затем указанный раствор сушили (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Осадок очищали на силикагеле с использованием 50% этилацетата в гексане, содержащего 1% триэтиламин, с получением 2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1 '-ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]пиридин-3-карбальдегида в виде твердого вещества (156 г, 72% выход). МС (т/ζ): 479 (М+1).

2. [2-[4-[(2-Хлор-4,4-дифторспиро [5Н-тиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] -1 '-ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] -3 -пиридил] метанол

К раствору 2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3метилпиразол-1-ил]пиридин-3-карбальдегида (180 г, 377 ммоль) в безводном дихлорметане (1,5 л) при 0°С последовательно добавляли боргидрид натрия (7,2 г, 188,5 ммоль) и безводный метанол (0,5 л) и содержимому позволяли достигнуть комнатной температуры при перемешивании в течение 30 мин. С помощью ЖХ/МС-анализа реакционной смеси наблюдали завершение реакции. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и полученный осадок распределяли между дихлорметаном (2 л) и водой (300 мл). Слои разделяли и органический слой последовательно промывали 1н водным раствором гидроксида натрия (300 мл), водой (3x300 мл), солевым раствором, сушили (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Осадок очищали на силикагеле с использованием 50-55% раствора этилацетата в гексане, содержащего 1% триэтиламин, с получением [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Нтиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]-3-пиридил]метанола в виде твердого вещества (167 г, 92% выход). МС (т/ζ): 481 (М+1).

Пример 63. Гидрохлорид [2-[4-[(2-Хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'ил)метил] -3 -метилпиразол-1 -ил] -3 -пиридил] метанола

[2-[4-[(2-Хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]-3-пиридил]метанол (157,4 г, 328 ммоль) в этилацетате (1,5 л) нагревали при 80°С до тех пор, пока не получали прозрачный раствор. К горячему раствору, содержащему свободное основание, медленно добавляли 5-6н НС1 в изопропаноле (65,6 мл, 328 ммоль) и содержимое интенсивно перемешивали в течение 2 ч, позволяя смеси достигнуть комнатной температуры. Образование осадка наблюдали при добавлении половины порции НС1. Полученное в результате твердое вещество белого цвета фильтровали, промывали диэтиловым эфиром (3x1 л), сушили в вакууме при 50°С в течение 3 дней с получением гидрохлорида [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]-3-пиридил]метанола в виде твердого вещества не совсем белого цвета (165 г, выход 97%). МС (т/ζ): 481 (М+1).

Соединение, представляющее собой индикатор степени занятости рецепторов: (Ь)-тартрат 2-[(2фторфенил)метил] -3 -(2-фторспиро [4,5-дигидротиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] - 1'-ил)-Х,Ы-диметилпропанамида

1. трет-Бутил-3-(2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)пропаноат 2-Фторспиро[4,5-дигидротиено[2,2-с]пиран-7,4'-пиперидин] (2,7 г, 11,9 ммоль) растворяли в метаноле (60 мл). Затем добавляли триэтиламин (2,65 мл) и трет-бутилакрилат (3,55 мл, 23,76 ммоль) и смесь нагревали до 65°С в течение 5 ч. Нагрев прекращали и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель выпаривали и неочищенный продукт очищали с помощью

- 39 020848 хроматографии на нормально-фазовой колонке кто с использованием в качестве элюента смеси этилацетат/гексан (1/1) с получением 4,2 г желаемого соединения в виде бесцветного масла. МС (т/ζ): 356 (М+1).

2. трет-Бутил-2-[(2-фторфенил)метил]-3-(2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)пропаноат

К перемешанному раствору трет-бутил-3-(2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'пиперидин]-1'-ил)пропаноата (4,9 г, 13,78 ммоль) в тетрагидрофуране (41 мл) в атмосфере Ν₂, охлажденному до -78°С, добавляли по каплям бис(триметилсилил)амид лития 1 М (41,35 мл, 41,45 ммоль). Полученную смесь перемешивали при указанной температуре в течение 3 ч. Затем добавляли 1,3-диметил3,4,5,6-тетрагидро-2(1Н)-пиримидинон (1,33 мл, 11,03 ммоль) и полученный раствор перемешивали при такой же температуре в течение 30 мин. К полученной в результате смеси добавляли 2-фторбензилбромид (2,33 мл, 19,3 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (1 мл) и продолжали перемешивать. Температуре позволяли повышаться от -78°С до комнатной температуры в течение ночи. Неочищенную реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Органический слой декантировали, сушили над сульфатом магния, растворитель выпаривали и полученный неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке кто с использованием смеси этилацетат/гексан (от 5/95 до 20/80) с получением 5,06 г указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. МС (т/ζ): 464 (М+1).

3. Трифторацетатная соль 2-[(2-фторфенил)метил]-3-(2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран7,4'-пиперидин]-1'-ил)пропановой кислоты

Смесь трет-бутил-2-[(2-фторфенил)метил]-3-(2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)пропаноата (5,06 г, 10,91 ммоль) и трифторуксусной кислоты (26,20 мл, 218 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель выпаривали досуха и неочищенный продукт использовали без дополнительной очистки.

4. 2-[(2-Фторфенил)метил]-3-(2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)-Н,Ндиметилпропанамид

Трифторацетатную соль 2-[(2-фторфенил)метил]-3-(2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'пиперидин]-1'-ил)пропановой кислоты (5,68 г, 10,89 ммоль) растворяли в дихлорметане (218 мл), затем к раствору последовательно добавляли при 0°С триэтиламин (12,14 мл, 87,13 ммоль), гидрохлорид диметиламина (1,80 г, 21,78 ммоль), гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (4,18 г, 21,78 ммоль) и гидрат 1-гидроксибензотриазола (3,34 г, 21,78 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Реакционную смесь обрабатывали водным насыщенным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали дихлорметаном (3x20 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на нормально-фазовой колонке кто с использованием в качестве элюента смеси дихлорметан/2н аммоний в метаноле (от 100/0 до 90/10) с получением 4,0 г (84,5%) указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ): 435 (М+1).

5. (Ь)-тартрат 2-[(2-Фторфенил)метил] -3 -(2-фторспиро [4,5-дигидротиено [2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)-Н,Н-диметилпропанамида

Расщепление на энантиомеры рацемической смеси 2-[(2-фторфенил)метил]-3-(2-фторспиро[4,5дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)-Н,Н-диметилпропанамида (2,3 г, 5,29 ммоль) осуществляли с помощью колонки С.’1ига1рак АО® (Скга1 ТесЬηο1οд^е5, 1пс., Уэст-Честер, Пенсильвания, США) с использованием смеси гексан/0,2% диметилэтиламин в этаноле, 9/1. Желаемое соединение получали с выходом 36% в виде первого вымывающегося энантиомера.

Тартрат, по существу, получали так же, как описано в примере 1. МС (т/ζ): 435 (М+1).

Порошковая рентгеновская дифракция

Дифрактограмму кристаллического твердого вещества получали на порошковом рентгеновском дифрактометре Вгикег Ό4 Еηάеаνο^, снабженном источником излучения СиКа (λ=1,54060 А) и детектором УаШес, работающим при 35 кВ и 50 мА. Образец сканировали при углах между 4 и 40° 2Θ с размером шага 0,0087° 2Θ и скоростью сканирования, составляющей 0,5 с/шаг, с отклонением 0,6 мм, фиксированным противорассеивателем (5,28) и щелью детектора 9,5 мм. Сухой порошок помещали на кварцевый держатель образца и с помощью предметного стекла получали гладкую поверхность. Дифрактограммы кристаллической формы получали при комнатной температуре и относительной влажности. Фон удаляли перед получением пиков. В области кристаллографии хорошо известно, что для любой конкретной кристаллической формы относительная интенсивность дифракционных пиков может различаться изза предпочтительной ориентации, связанной с такими факторами, как морфология и форма кристалла. При наличии эффектов предпочтительной ориентации интенсивность пиков изменяется, но положения характерных пиков полиморфа остаются неизменными (см., например, Фармакопею Соединенных Штатов Америки (Т1е ИпкеД 81а1ез РЬагтаторе1а #23, Ν;·ιΙίοπ;·ι1 Ροπηιι1;πΎ #18, р. 1843-1844, 1995)). Кроме того, в области кристаллографии также хорошо известно, что для любой конкретной кристаллической формы угловые положения пиков могут немного отличаться. Например, пики могут сдвигаться в зави- 40 020848 симости от колебаний температуры или влажности, при которых анализируют образец, перемещения образца или присутствия или отсутствия внутреннего стандарта. В настоящем случае вариабельность положения пика при ± 0,1° 2Θ учитывала указанные возможные колебания, не препятствуя бесспорной идентификации указанной кристаллической формы. Кристаллическая форма может быть установлена на основании любой уникальной комбинации различающихся пиков (в единицах ° 2Θ), как правило, наиболее высоких пиков.

Таким образом, полученный кристаллический образец (2-{4-[(2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидро-1Нспиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ил)метил]-3-метил-1Н-пиразол-1-ил}пиридин-3-ил)метанола в виде свободного основания по результатам дифрактографии с использованием излучения СиКа имел дифракционные пики (значения 2-тета), представленные в табл. 1, ниже. Определенная кристаллическая форма может быть установлена с помощью набора отдельных пиков из указанной общей дифрактограммы. Таким образом, согласно одному варианту реализации настоящего изобретения предложена кристаллическая форма (2-{4-[(2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидро-1Н-спиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ил)метил]-3-метил-1Н-пиразол-1-ил}пиридин-3-ил)метанола, имеющая по результатам дифрактографии с использованием излучения СиКа дифракционные пики при 11,1 в комбинации с одним или более пиками, выбранными из группы, состоящей из 5,5, 13,5, 17,8 и 22,3±0,1° 2Θ. Согласно другому варианту реализации изобретения предложена кристаллическая форма гидрохлорида (2-{4-[(2'-хлор-4',4'дифтор-4',5'-дигидро-1Н-спиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ил)метил]-3-метил-1Н-пиразол-1ил}пиридин-3-ил)метанола, имеющая по результатам дифрактографии с использованием излучения СиКа дифракционные пики при 5,5, 11,1, 13,5, 17,8 и 22,3±0,1° 2Θ.

Таблица 1. Порошковые дифракционные пики (2-{4-[(2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидро-1Нспиро [пиперидин-4,7'-тиено [2,3-с]пиран] -1 -ил)метил] -3 -метил-1Н-пиразол-1 -ил}пиридин-3 -ил)метанола в виде свободного основания

Пик	Угол (*2 тета)	Интенсивность %
1	5,5	53,2
2	11, 1	100
3	12, 3	9, 9
4	13/ 5	12
5	15/ 4	5,1
6	16/ б	4,8
7	17, 0	5,5
3	17, 8	12, 1
9	19,3	4,2
10	19,5	5,5
11	19,7	5, б
12	21, 0	11,1
13	22,3	25, 3
14	23, 3	10, 3
15	23, 9	5, 7
16	26,5	7,2
17	27,0	7,1

Аналогично, с помощью дифрактографии с использованием излучения СиКа было показано, что полученный кристаллический образец соли НС1 (2-{4-[(2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидро-1Н-спиро [пиперидин-4,7'-тиено [2,3-с] пиран] -1 -ил)метил] -3 -метил-1Н-пиразол-1 -ил} пиридин-3 -ил)метанола имел дифракционные пики (значения 2-тета), представленные в табл. 2, ниже. Определенная кристаллическая форма может быть установлена с помощью набора отдельных пиков из указанной общей дифрактограммы. Таким образом, согласно одному варианту реализации настоящего изобретения предложена кристаллическая форма гидрохлорида (2-{4-[(2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидро-1Н-спиро[пиперидин4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ил)метил]-3-метил-1Н-пиразол-1-ил}пиридин-3-ил)метанола, имеющая по результатам дифрактографии с использованием излучения СиКа дифракционные пики при 16,2 в комбинации с одним или более из пиков, выбранных из группы, состоящей при 10,8, 12,1 и 21,1±0,1° 2Θ. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения, предложена кристаллическая форма гидрохлорида (2-{4-[(2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'-дигидро-1Н-спиро[пиперидин-4,7'-тиено[2,3-с]пиран]-1-ил) метил]-3-метил-1Н-пиразол-1-ил}пиридин-3-ил)метанола, имеющая по результатам дифрактографии с использованием излучения СиКа дифракционные пики при 10,8, 12,1, 16,2, и 21,2°±0,1° 2Θ.

- 41 020848

Таблица 2. Порошковые дифракционные пики соли НС1 (2-{4-[(2'-хлор-4',4-дифтор-4',5'-дигидро-1Нспиро [пиперидин-4,7'-тиено [2,3-с]пиран] -1 -ил)метил] -3 -метил-1Н-пиразол-1 -ил}пиридин-3 -ил)метанола

Пик	Угол (°2 тета)	Интенсивность %
1	10,8	70,5
2	12,1	41,4
3	16,2	80,1
4	18,7	60,8
5	19,5	38,6
б	20,6	49, 5
7	21,1	64,9
8	22,3	33,1
9	23,0	89, 6
10	23,5	100
11	24, 0	43,8

Литературные данные (М.1. Рг/уб/1а1 апб Ь.К. Не181ег, №с1серби/ОгрЬатп РО рерббе гсссрЮг а§ а Шегареибс 1агде1 Гог оЬекбу, Мпй-Ке\ае\У5 ίη Мебка1 СНетМгу, 2008, ν.8, №8. 796-811; К.К. Кеш8сЬе1б, ТЬе Огрйатп РО/ШсюерРп гесерЮг а§ ηоνе1 бгид 1агде1 ίη ркусЫабзс бшогбеп,, С№ & №иго1од1са1 Эшогбег8 - Эгид ТагдеК 2006, ν.5, Νθ2, 219-224) и данные, полученные в ходе доклинических исследований на животных, подтверждают роль антагонистов ноцицептина для лечения депрессии, ожирения и расстройств пищевого поведения и мигрени. В частности, было обнаружено, что антагонисты рецептора ноцицептина являются эффективными в моделях депрессии на грызунах (как при отдельном использовании, так и в комбинации с трициклическими антидепрессантами или антидепрессантами группы селективных ингибиторов обратного захвата серотонина (88КТ)), в моделях подавления гиперфагии на грызунах, в моделях подавления повторного набора веса после предшествующей потери веса и в моделях лечения мигрени. Более того, исследования, проведенные на нокаутных по гену рецептора ноцицептина мышах, показали, что действие антагонистов ноцицептина в тесте вынужденного плавания (для измерения антидепрессантной активности) и в исследовании приема пищи после голодания (активности, направленной против ожирения) зависит от генотипа, что подтверждает специфический механизм действия антагониста ноцицептина в указанных моделях на животных. Так как ранее описанные расстройства представляют собой общие сопутствующие клинические состояния, антагонист рецептора ноцицептина может, в частности, являться эффективным для лечения указанных специфических групп пациентов, например пациентов, страдающих тяжелыми депрессивными расстройствами, компульсивным перееданием, избыточным весом, ожирением и ожирением с сопутствующими клиническими расстройствами настроения.

Для более подробного описания характеристик соединений согласно настоящему изобретению приведенные в качестве примера соединения исследовали с помощью следующих анализов ίη νίΙΐΌ и ίη νί\Ό.

Связывание с рецептором ίη νίίΐΌ

Анализы связывания радиоактивного лиганда являются стандартными анализами для определения аффинности (К₁) или активности связывания соединения с конкретным рецептором или белкоммишенью. Основанный на фильтровании анализ связывания с рецептором [³Н]-ОР0/ноцицептина разработан на основе известных анализов (Агбаб А., Нсии1п§8сп К.А., Н1де1ш 1., РеиъЛгаб К.К., СтеШ О., Мотта Р.1. 1г. Мо1. РНагтасоР 1997 Мау; 51(5):816-24) с минимальными модификациями. Анализы связывания [³Н]-ОР0/ноцицептина проводили в 96-луночных планшетах с глубокими лунками. Конкурентные анализы связывания [³Н]ОРО (конечная аналитическая концентрация 0,2 нМ) осуществляли с использованием 5-10 мкг мембранного белка (выделенного из клеток яичника китайского хомячка (клеток линии СНО), экспрессирующих клонированные рецепторы ОКЬ-1 человека) в конечном аналитическом объеме 0,5 мл в буфере, содержащем 20 мМ НЕРЕ8, рН 7,4, 5 мМ МдС12, 1 мМ ЭГТА, 100 мМ №С1, 0,1% бычий сывороточный альбумин. Образцы инкубировали в течение 60 мин при комнатной температуре, которая, как было обнаружено, является оптимальной для проведения конкурентных анализов. Анализы завершали фильтрованием через стекловолоконные фильтры (Аа11ас ГШегта! А) [предварительно обработанные в течение 1 ч 0,3% полиэтиленимином (81дта)] с помощью коллектора клеток Тоте1с, и фильтры промывали три раза с помощью 5 мл ледяного 50 мМ трис-НС1, рН 7,4. Указанные фильтры затем сушили и обрабатывали сцинтиллятором А (МеШ1ех) и измеряли радиоактивность с помощью сцинтилляционного счетчика Аа11ас М1сгоЬе1а. Специфическое связывание определяли при замещении [³Н]ОРО немеченым ноцицептином (100 нМ). Кривые изображали на графике как процент специфического связывания и значения ТС50 определяли с использованием сигмоидальной кривой зависимости доза-эффект при разных углах наклона. Значения К₁ рассчитывали на основе Ю₅₀ с помощью уравнения Ченга и Прусоффа (СЬе^, У.С., апб РгтоГГ, А.Н., ВюсНет. РНагтасо1. 22, 3099-3108 (1973)), где К, =!С50х(1+ОхКб^-1)^-1.

Аналогичным образом, К₁ связывания с мю-, каппа- и дельта-опиодными рецепторами, рецептором

- 42 020848 серотонина, рецептором дофамина, адренергическим, мускариновым и гистаминовым рецептором, а также связывания с транспортером норадреналина, натриевым каналом, каналом-переносчиком ионов хлора и кальциевым каналом, может быть определена с использованием мембран клеток, экспрессирующих желаемый рецептор/транспортер/канал, и соответствующих конкурентных молекул радиоактивного лиганда.

Приведенные в примерах соединения анализировали, по существу, так же, как описано выше. Было обнаружено, что указанные соединения имели высокую аффинность к рецептору ОКЬ-1. Было обнаружено, что К₁ для рецептора ОКЬ-1 для приведенных в примерах соединений составляла менее 2 нМ, тогда как К₁ для других исследованных рецепторов/транспортеров/каналов имела значительно большие значения. Соединения примеров 62, 23 и 53 анализировали, по существу, так же, как описано выше. Было обнаружено, что указанные соединения имеют значения аффинности, представленные в табл.3 ниже.

Таблица 3. Данные по селективности

Кх (нМ)	Пример 62	Пример 23	Пример 53
ОКЬ-1	0,18	0, 79	0,45
Мю-о пиоидный	>451	>451	>451
Каппа-опиоидный	>430	>430	>430
Дельта-опиоидный	>479	>479	>479
5-НТ1д	>3180	НВ	>3180
5-НТ1Е	>3580	НВ	>3580
5-НТ1с	НВ	НВ	НВ
5-НТ10	>8550	НВ	>8550
5-НТ1е	>5370	НВ	>5370
5-НТ1Р	>8520	НВ	>8520
5-НТ2д	>5000	НВ	>5000
5-НТгв	693	НВ	220
5-НТ2с	>5650	НВ	>5650
5-НТ4	>4120	НВ	>4120
5-НТ5	>9090	НВ	>9090
5-НТе	НВ	НВ	>5830
5-НТ7	>3980	НВ	>3980
ϋι-дофаминовый	>5000	НВ	>5000
Юг-дофаминовый	>5000	НВ	>5000
АЗ-аденозиновый	>5000	НВ	>5000
Альфах- адренергический	>5000	НВ	>5000
Альфаг- адренергический	>5000	НВ	>5000
Бетаг-адренергический	>5000	НВ	>5000
Бетаг-адренергический	>5000	НВ	>5000
Н1-гистаминовый	>5000	НВ	>5000
М2-мускариновый	>500	НВ	>5000
М3-мускариновый	>5000	НВ	>5000
Транспортер норадреналина	>500	НВ	>500

Ка+-канал	235	НВ	>500
С1-канал	>500	НВ	>500
Са^-канал (сайт связывания дигидропиридинов)	>5000	НВ	>5000
Са^-канал (сайт связывания дилтиазема)	>500	НВ	>500
Са^-канал (сайт связывания верапамила)	>500	НВ	>5000

НВ = не выявлено

Следовательно, предполагается, что физиологически значимые дозы соединений согласно изобретению фактически не взаимодействуют с указанными сайтами ίη νίνο и, таким образом, не вызывают нежелательных эффектов, связанных с указанной активностью.

Функциональное подавление опосредованной агонистом активации О-белка - связывание ГТФу-[35§]

- 43 020848 ίη уйго

Опосредованная агонистом стимуляция сопряженных с О-белком рецепторов приводит к активации мембрано-ассоциированных гетеротримерных белковых комплексов Οαβγ и является первым этапом в передаче внеклеточных сигналов, приводящей к модификации внутриклеточных путей передачи сигнала. Первый этап опосредованной рецептором активации белковых гетеротримерных комплексов Οαβγ заключается в обмене связанного с субъединицей Οα гуанозиндифосфата (ГДФ) на гуанозинтрифосфат (ГТФ). Связывание ГТФ с субъединицей Οα вызывает диссоциацию субъединиц гетеротримерного комплекса, Οβ и Ογ, что приводит к модуляции нескольких внутриклеточных сигнальных каскадов. Опосредованная рецептором активация О-белка может быть измерена с использованием негидролизуемого меченного радиоактивным изотопом аналога ГТФ, ГТФ^-[35§]. С помощью указанного метода измеряли аффинность антагониста (КЬ) на мембранах клеток, экспрессирующих клонированный ОКЬ-1/рецептор ноцицептина человека с использованием анализа связывания ГТФ-','-|355>| согласно описанным ранее протоколам с минимальными модификациями (ИеЬарр с1 а1., ί Рйагтасо1 Ехр Тйег. 1999 Мау; 289 (2):946-55; О/а1й е! а1., Еиг ί Рйагтасо1. 2000 Аид 18; 402 (1-2): 45-53). Анализы проводили в объеме 200 мкл в буфере, имеющем следующий состав: 100 мМ №С1, 20 мМ НЕРЕ8, 5 мМ МдС1₂, 1 мМ ЭДТА, 0,1% БСА, 3 мкМ ГДФ, 0,5 нМ [³⁵§]ГТФγ§. Добавляли суспензию мембран с рецептором ОКЬ-1 в концентрации 20 мкг белка на лунку и стимулировали рецептор с помощью 300 нМ ноцицептина/ОРЦ. Добавляли по 1 мг на лунку гранул для сцинтилляционного анализа близости (§РА-гранул) (Атегкйат, АрлингтонХайтс, Иллинойс), покрытых агглютинином из проростков пшеницы, для выявления связанного с мембраной [³⁵§]ГТФγ§. Планшеты запечатывали и инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем планшеты инкубировали при 4°С в течение ночи, чтобы позволить §РА-гранулам осесть, и затем анализировали с помощью сцинциляционного счетчика \Уа11ас М1сгоЬе1а. Специфическое связывание [³⁵§]ГТФγ§ определяли как различие СРМ, наблюдаемое в отсутствие и в присутствии 10 мкМ немеченого ГТФγ§. Данные выражали в виде процента специфически связанного [³⁵δ]ГТФγ§. Кривые представляли в виде процента специфического связывания и значения 1С₅₀ определяли с использованием сигмоидальной кривой зависимости доза-эффект с различным наклоном. Аффинность антагониста (К_Ь) оценивали согласно источнику (ИеЬарр е1 а1., 1999) с использованием модифицированного уравнения Ченга и Прусоффа (Сйепд апй РгикоГГ. 1973), где К_Ь = IС5₀x(1+^xЕС50^-1)^-1.

Приведенные в примерах соединения анализировали, по существу, так же, как описано выше. Было обнаружено, что указанные соединения являются активными антагонистами рецептора ОКЬ-1. Было обнаружено, что К_Ь для приведенных в примерах соединений для рецептора ОКЬ-1 составляет менее 6 нМ. Соединения примеров 1, 23 и 53 анализировали, по существу, так же, как описано выше. Было обнаружено, что К_Ь указанных соединений для рецептора ОКЬ-1 составляет 0,20, 1,52 и 0,62 нМ, соответственно.

Степень занятости рецепторов ίη У1уо

Измерение степени занятости рецепторов (КО) с использованием ЖХ/МС/МС является общепринятым способом оценки связывания основной мишени предполагаемым антагонистом ОКЬ-1 ίη У1уо. Степень занятости рецепторов (КО) ноцицептина/ОКЬ-1 антагонистом рецепторов ноцицептина/ОКЬ-1 измеряли в гипоталамусе, структуре, которая имеет высокую плотность сайтов связывания ноцицептина/ОКЬ-1, находящихся за гематоэнцефалическим барьером, с использованием нового запатентованного индикатора КО, 2-[(2-фторфенил)метил]-3-(2-фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'пиперидин]-1'-ил)-ИТСдиметилпропанамида (индикатора КО). Указанные измерения проводили без необходимости использования индикатора с радиоактивной меткой согласно опубликованному ранее методу для других рецепторов, с модификациями (Сйегпе! Е., Магйп Ы. Ы Ό., №ей А.В., Вайй ν.Ν., Какй К.8., РйеЬик Ь.А. Ике о£ ЬС/М§ Ю аккекк Ьгаш йасег ЛкйгЬийоп ίη ргесйтса1, ίη у1уо гесерЮг оссирапсу кйкЬек: йоратте Ό2, кегоЮтп 2А апй ΝΙ<-1 гесерЮгк ак ехатр1ек. Ы1с 8ск 78(4):340-6, 2005).

Положительная корреляция была установлена между КО рецепторов ноцицептина/ОКЬ-1 в центральной нервной системе и эффективностью модуляции пищевого поведения и результатами теста вынужденного плавания на грызунах. КО рецептора ноцицептина/ОКЬ-1 в центральной нервной системе измеряли через 6 или 24 ч после перорального введения тестируемого соединения крысам. Самцам крыс линии Зргадие-ОаМеу (Наг1ап Зргадие-ОаМеу, Индианаполис, Индиана) проводили пероральное лечение тестируемым соединением или плацебо (20% каптизол, 25 мМ фосфатный буфер, рН 2,0). Через 6 или 24 ч после введения тестируемого соединения/плацебо всем животным вводили внутривенную дозу 3 мкг/кг индикатора КО. Предполагается, что именно во время указанного введения индикатора КО проводили измерения. Через 40 мин после введения индикатора КО крыс умерщвляли путем смещения шейных позвонков и удаляли гипоталамус. Уровень индикатора КО измеряли в каждом образце ткани.

Основной используемый на сегодняшний день аналитический стандарт согласно литературным данным (-)-цис-1-метил-7-[[4-(2,6-дихлорфенил)пиперидин-1-ил]метил]-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-бензоциклогептен-5-ол (8В612111, см. Мадйа1епа апй Не1к1ег, выше), активный селективный антагонист рецептора ноцицептина/ОКЬ-1, использовали в качестве положительного контроля для определения уровня индикатора КО, соответствующего 100% КО рецептора ноцицептина/ОКЬ-1. 8В612111 вводили внутри- 44 020848 венно в дозировке 30 мг/кг за 1 ч до введения индикатора КО (доза, приводящая приблизительно к 100% КО гипоталамических рецепторов ноцицептина/ОКЬ-1).

Образцы гипоталамуса гомогенизировали в 4 объемах (масса/объем) ацетонитрила, содержащего 0,1% муравьиную кислоту, и центрифугировали при 14000 об/мин в течение 16 мин. Супернатанты собирали и разводили до конечного объема 0,3 мл с помощью стерильной воды. Измерения индикатора КО осуществляли с помощью ВЭЖХ с использованием хроматографа АдПеп! модели 1200 (АдПеп! ТесЪпо1од1ез, Пало-Альто, Калифорния) и масс-спектрометра АР1 4000. Для хроматографического разделения использовали колонку С18 размером 2,1x50 мм (АдЛеШ, партномер 971700-907) и подвижную фазу, состоящую из 38% ацетонитрила в воде с общим содержанием 0,1% муравьиной кислоты. Выявление индикатора КО осуществляли путем мониторирования предшественника ионного перехода продукта с отношением массы к заряду (т/ζ) от 435 до 239, причем уровень указанного индикатора количественно оценивали путем сравнения со стандартами, приготовленными из гомогенатов ткани мозга. За ноль процентов КО принимали уровень индикатора КО в гипоталамусе животных, предварительно получавших лечение плацебо, отражающий сумму неспецифического и специфического связывания (все рецепторы доступны для индикатора). Более низкий уровень индикатора КО у животных, предварительно получавших лечение очень высокой внутривенной дозой 8В612111 (группа положительного контроля), отражает неспецифическое связывание и определяет 100% занятость (нет рецепторов, доступных для индикатора). Для расчета КО для тестируемых соединения находили значение уровня индикатора КО, обнаруженного в гипоталамусе животных из группы, получавшей лечение тестируемым соединением, путем линейной интерполяции данных между двумя указанными точками.

Приведенные в примерах соединения анализировали, по существу, как описано выше. Было обнаружено, что указанные соединения обладали высокой занимающей способностью по отношению к рецепторам ОКЬ-1. Было обнаружено, что степень занятости рецепторов для приведенных в примерах соединений составляла между примерно 40 и примерно 130% через 6 ч после введения дозы 3 мг/кг или между примерно 20 и примерно 96% КО через 24 ч после введения дозы 3 мг/кг. Степень занятости рецепторов для соединений примеров 62, 23 и 53 оценивали, по существу, так же, как описано выше, через 6 ч после введения дозы 3 мг/кг, и было обнаружено, что КО для указанных соединений составляла 104, 80 и 83%, соответственно. Следовательно, предполагается, что соединения согласно настоящему изобретению имеют благоприятную биодоступность и обладают способностью проникновения в ЦНС к рецепторам-мишеням ОКЬ-1.

Активность каналов ЪЕКС

Блокада проведения К+-каналов в сердце связана с кардиотоксичностью, проявляющейся в форме удлинения интервала ЦТ. Аффинность (К!) приведенных в примерах антагонистов рецептора ноцицептина к К+-каналам ЕКС человека (ЪЕКС) определяли на клетках линии НЕК293, экспрессирующих клонированный ЪЕКС, с использованием радиоактивно меченного лиганда [³Н]астемизола, являющегося антагонистом каналов ЪЕКС (конечная аналитическая концентрация 2 нМ), в соответствии с хорошо известными методами (см., например, Рш1аузоп К., е! а1. Еиг 1 РЪагтасо1. 412 (3):203-12, 2001). Анализы связывания [³Н]астемизола осуществляла по контракту научно-исследовательская компания Сегер (Париж, Франция) согласно стандартным процедурам.

Примеры 62, 23 и 53 анализировали, по существу, так же, как описано выше. Было обнаружено, что указанные соединения имеют низкую активность, с К₁, равными 6,08, 1,21 и 8,6 мкМ, соответственно. Для сравнения, плазматическая концентрации ίη У1уо, необходимая для обеспечения 80% КО (ЕС₈₀ КО) рецепторов ноцицептина/ОКЬ-1 в ЦНС, для соединения примера 62 составляет примерно 41 нМ. Следовательно, существует большой разрыв между концентрациями, необходимыми для обеспечения физиологически значимой степени занятости рецепторов ноцицептина/ОКЬ-1 ίη уКо, и концентрациями, необходимыми для влияния на активность К+ каналов ЪЕКС. Следовательно, предполагается, что физиологически значимые дозы соединений согласно изобретению существенно не взаимодействуют с сайтами ЪЕКС ίη У1уо и, таким образом, не оказывают значимого эффекта на удлинение ЦТ.

Тест вынужденного плавания на мышах (тР8Т) тР8Т представляет собой общепринятый анализ ίη У1уо для оценки антидепрессантной активности (Ы е! а1. ί РЪагтасо1 Ехр ТЪег. 319(1):254-9, 2006.). Мыши, которым проводили лечение известными клинически эффективными антидепрессантами (селективными ингибиторами обратного захвата серотонина и/или трициклическими антидепрессантами), после помещения в резервуар с водой проводили меньше времени в неподвижном состоянии (поведение, ассоциированное с чувством отчаянья). тР8Т использовали для оценки потенциальной антидепрессантной активности новых антагонистов рецептора ноцицептина/ОКЬ-1 согласно ранее опубликованным способам (Ы е! а1. ί РЪагтасо1 Ехр ТЪег. 319(1):254-9, 2006). В общих чертах, использовали самцов мышей линии ΝΙΗ-8\νίδδ (Наг1ап 8ргадие-Эа'№1еу, Индианаполис, Индиана) массой 25-30 г. Группу содержащихся в клетках животных переносили из вивария в их же клетках в зону проведения теста и позволяли адаптироваться к новому окружению в течение по меньшей мере 1 ч до начала проведения исследования. Альтернативно, самцов дикого типа и нокаутных по гену рецептора ноцицептина/ОКЬ-1 мышей линии 12986 использовали для подтверждения зависимости отве- 45 020848 та на введение соединения от рецептора ноцицептина/ОКЬ-1. Все соединения готовили в 20% каптизоле, 25 мМ фосфатном буфере, рН 2,0, в день применения. Мышей помещали в цилиндр (диаметр 10 см; высота 25 см), заполненный на 6 см водой (22-25°С) на 6 мин. Оценивали продолжительность периода неподвижности в течение последних 4 мин из 6 мин проведения теста. Мышей считали неподвижными, когда они не делали плавательных движений или делали только движения, необходимые для удержания головы над водой.

Приведенные в качестве примера соединения анализировали, по существу, так же, как описано выше. Было обнаружено, что указанные соединения значительно снижают время неподвижности у мышей дикого типа. Соединения примеров 62, 23 и 53 анализировали, по существу, так же, как описано выше, и было обнаружено, что ΕΌ₆₀ указанных соединений составляет 24,9, 9,5 и 12,9 мг/кг, соответственно, с максимально эффективным восстановлением времени неподвижности на 45, 58 и 54%, соответственно. Следовательно, предполагается, что соединения согласно настоящему изобретению имеют антидепрессантную активность ίη νίνο.

Более того, соединения согласно настоящему изобретению могут применяться в комбинации с другими известными антидепрессантами для достижения повышенной эффективности. Соединение примера 62 анализировали, по существу, так же, как описано выше, в комбинации с дозой 10 мг/кг флуоксетина, и было обнаружено, что указанная комбинация приводит к значительному дополнительному снижению времени неподвижности по сравнению как с флуоксетином, так с соединением примера 62, при их отдельном применении (см. табл. 4, ниже).

Таблица 4. Тест вынужденного плавания на мышах - лечение в комбинации с флуоксетином

Лечение	Время неподвижности (с)	Стандартная ошибка среднего (с)(п=8)
Плацебо	174	16
3 мг/кг пример 62	163	17

10 мг/кг пример 62	129	19
10 мг/кг флуоксетин	168	14
3 мг/кг пример 62 + 10 мг/кг флуоксетин	97*	19
10 мг/кг пример 62 + 10 мг/кг флуоксетин	85*	15
15 мг/кг имипримин (положительный контроль антидепрессанта)	96*	20

*Статистически значимое снижение по сравнению с плацебо, примером 62 отдельно и флуоксетином при отдельном применении

Кроме того, указанный эффект снижения времени неподвижности не наблюдали при использовании нокаутных по гену ОКЕ-1 мышей, созданной линии мышей с отсутствием рецептора ОКЕ-1, что указывает на то, что эффект в самом деле опосредован рецептором ОКЬ-1. Соединение примера 62 анализировали, по существу, так же, как описано выше, с использованием мышей дикого типа в одной группе исследования и нокаутных по гену ОКЬ-1 мышей во второй группе исследования, и было обнаружено, что указанное соединение значительно снижало время неподвижности у мышей дикого типа, но не имело эффекта у нокаутных мышей. Было обнаружено, что антидепрессант, представляющий собой ингибитор обратного захвата норадреналина, имипримин, который использовали в качестве положительного контроля, приводил к снижению времени неподвижности как у мышей дикого типа, так и у нокаутных мышей в одинаковой степени, указывая на то, что действие на поведение, опосредованное механизмом обратного захвата норадреналина, является неизмененным у линии нокаутных мышей.

Подавление вызванной голоданием гиперфагии у мышей

Подавление вызванной голоданием гиперфагии у грызунов представляет собой общепринятую модель расстройств пищевого поведения, проявляющихся гиперфагией (Но11оре1ег О., Епсккоп ТС.. 8ее1еу К.Т, МагкЕ Ό.Τ, Ра1тйег Κ.Ό. Кекропке оГ пеигорерЕбе У-ЕеПаегИ тке ίο Геебшд еГГесЮгк. Кеди1 Рер1. 1998 8ер 25; 75-7 6:383-9). Все эксперименты проводили на ранее не получавших лечение двенадцатинедельных самцах дикого типа и нокаутных по гену ОКЕ инбредных мышах линии 12986. Мышей содержали в отдельных клетках в течение как минимум 3 дней до начала проведения исследования для устранения каких-либо эффектов, связанных со стрессом из-за перевода из группы в отдельную клетку. По три мыши/генотипа рандомизированно включали в каждую лечебную группу в день проведения исследования. Проводили измерения веса до начала голодания, затем пищу на ночь убирали из клеток. Мыши голодали в течение приблизительно 15 ч. На следующее утро мышам давали одну из трех доз лекарственного средства или плацебо путем принудительного кормления за 30 мин до получения доступа к пище. Лекарственные средства растворяли в 20% каптизоле, растворенном в 25 мМ фосфатном буфере, рН 2,0. Измерения веса проводили непосредственно до проведения лечения лекарственным средством или через 24 ч после восстановления доступа к пище. Следует отметить, что все мыши, независимо от генотипа,

- 46 020848 теряли ~5-10% веса после голодания в течение ночи. Измерения потребления пищи регистрировали через 1 ч после получения доступа к пище, как указано, на основе массы пищи, оставшейся через 1 ч. Необходимо отметить, что прием пищи измеряли во время световой фазы, в течение которой мыши, как правило, отдыхали и в норме не принимали пищу. После первоначального тестирования мыши отдыхали в течение 1 недели с неограниченным доступом к пище. Через неделю отдыха мышей повторно тестировали в соответствии с методом латинских квадратов, как показано в табл. 5.

Таблица 5. Метод латинских квадратов использовали для определения кривых зависимости дозаэффект анорексигенного действия новых антагонистов ОКБу мышей дикого типа и нокаутных по ОКБ мышей

Период лечения
Лечебная группа	А	В	С	Ό
	Плацебо	А	С	В
2	А	В	Плацебо	с
3	В	С	А	Плацебо
4	С	Плацебо	В	А

Приведенные в качестве примера соединения анализировали, по существу, так же, как описано выше, и было обнаружено, что указанные соединения значительно снижают вызванную голоданием гиперфагию у мышей. Примеры 62, 23 и 53 анализировали, по существу, так же, как описано выше, и было обнаружено, что указанные соединения фактически подавляют вызванную голоданием гиперфагию. Эффект не наблюдали на нокаутных по гену ОКБ-1 мышах, что указывает на опосредованность указанного эффекта рецептором ОКЬ-1. Агонист 5-НТ_2с, тСРР, использовали в качестве положительного контроля, и было обнаружено, что указанный агонист значительно снижает вызванную голоданием гиперфагию у мышей дикого типа и у нокаутных по гену ОКБ-1 мышей в равной степени. Следовательно, предполагается, что соединения согласно настоящему изобретению применимы для лечения избыточного веса, и/или ожирения, и/или для поддержания веса, например, лечения компульсивного переедания.

Модель экстравазации белков плазмы (РРЕ) через твердую мозговую оболочку на крысах - протокол для перорального введения дозы

Все анализируемые соединения получали в растворе плацебо, содержащем 20% каптизол в 25 мМ фосфатном буфере (рН 2,0). Соединение, используемое в качестве положительного контроля, суматриптан, растворяли в солевом растворе. Самцам крыс линии 8рга§ие-Эато1еу (250-350 г), полученным из Наг1ап БаЬога1опез. которые голодали в течение ночи, вводили дозу тестируемого соединения, суматриптана или плацебо путем принудительного кормления (2 мл/кг). Через 50 мин после введения дозы крыс анестезировали нембуталом (60 мг/кг, внутрибрюшинно) и помещали на стереотаксическую рамку и нож устанавливали на уровень -2,5 мм. После сагиттального разреза скальпа по средней линии в черепе были просверлены 2 пары указанных далее билатеральных отверстий (3,2 мм постериально, 1,8 и 3,8 мм латерально, все координаты приведены относительно брегмы). Пары нержавеющих стальных стимулирующих электродов (КИоОез Ме<Рса1 8уз1етз 1пс), полностью изолированных, за исключением концов, опускали через отверстия в оба полушария на глубину 9,2 мм ниже твердой мозговой оболочки.

Раствор бычьего сывороточного альбумина (БСА), меченного красителем изотиоцианатом флуоросцеина (РГТС) (РГТС-БСА) (20 мг/кг, внутривенно), вводили в бедренную вену за 2 мин до электрической стимуляции тригеминального ганглия для использования в качестве маркера экстравазации белка. Через 60 мин после введения дозы тестируемого соединения или плацебо проводили электрическую стимуляцию левого тригеминального ганглия в течение 5 мин при силе тока 1,0 мА (5 Гц, продолжительность 5 мин).

Через 5 мин после стимуляции крыс умерщвляли путем вымывания крови с помощью 40 мл физиологического раствора, который также вымывал остаточные комплексы РГТС/БСА из кровеносных сосудов. Верхнюю часть черепа удаляли для выделения твердых мозговых оболочек. Образцы мембран отбирали из обоих полушарий, промывали водой и распределяли на предметных стеклах. Стекла сушили в течение 15 мин на столике с подогревом и накрывали покровным стеклом с использованием 70% раствора глицерин/вода.

Флуоресцентный микроскоп, снабженный дифракционным монохроматором и спектрофотометром, использовали для оценки количества комплекса краситель РГТС-БСА в каждом образце твердой мозговой оболочки. Микроскоп был снабжен механизированным столиком, связанным с персональным компьютером, что обеспечивало контролируемое компьютером движение столика с измерениями флуоресценции в 25 точках (шаг 500 мкм) в каждом образце твердой мозговой оболочки. Экстравазация, вызванная электрической стимуляцией тригеминального ганглия, представляла собой ипсилатеральное явление (которое наблюдалось только на той стороне твердой мозговой оболочки, с которой проводили стимуляцию тригеминального ганглия). Это позволяло использовать другую (нестимулированную) половину твердой мозговой оболочки в качестве контроля. Рассчитывали относительную экстравазацию (отношение количества экстравазированных белков в твердой мозговой оболочке стимулированной стороны по сравнению с нестимулированной стороной). Относительная экстравазация у животных, которым вводили

- 47 020848 только дозу плацебо или неэффективную дозу тестируемого соединения, составляла приблизительно 2, тогда как у животных, получавших полное эффективное лечение, указанное отношение составляло приблизительно 1.

Результаты выражены как средние значения со стандартными ошибками среднего (± 8ЕМ). Все статистические оценки проводили с использованием программы ΑΝΟνΑ с последующим сравнением с контрольной группой с помощью метода Даннетта. За статистическую достоверность принимали р<0,05. Статистические анализы проводили с использованием программного обеспечения для статистического анализа 1МР (8Α8 Кекеагсй 1п8Йи!е, версия 6.0.2).

Соединение примера 62 анализировали, по существу, так же, как описано выше. Было обнаружено, что указанное соединение эффективно подавляет экстравазацию дозозависимым образом (см. табл. 5, ниже). Следовательно, предполагается, что соединения согласно настоящему изобретению применимы для лечения мигрени.

Таблица 5. Исследование экстравазации белков плазмы (РРЕ) через твердую мозговую оболочку на крысах при использовании соединения примера 62

Лечение (перорально)	Относительная экстравазация (среднее)	Стандартная ошибка среднего	η
Плацебо	1, 91	0, 04	4
Пример 62 (0,1 мг/кг)	1, 83	0, 06	3
Пример 62 (1,0 мг/кг)	1, 44*	0, 08	3
Пример 62 (10,0 мг/кг)	1,20*	0, 03	3
Пример 62 (30,0 мг/кг)	1,14*	0, 05	3
Суматриптан (1,0 мг/кг)	1,06*	0, 01	3

*Статистически значимые отличия по сравнению с плацебо

Устойчивость к образованию активных метаболитов

Согласно известным литературным данным предполагается корреляция между образованием активных метаболитов и клинической токсичностью, известной как идиосинкратический эффект лекарственных средств (ГОК), хотя прямой причинно-следственное связи не было установлено. При условии, что активные метаболиты могут принимать участие в клинических ГОК, минимизация склонности к окислительной биоактивации была предложена в качестве способа улучшения общего профиля безопасности соединений, имеющих структурные особенности, ассоциированные с указанной активностью (см. ВаППе. Тйотак А., Арргоасйек Ю 1йе АххеххтеШ о£ 81аЬ1е апй СйетюаПу Кеасйуе Игид Ме1аЬо1йе8 ίη Еаг1у СНтса1 Тпак, Сйетка1 Кекеагсй ш Тох1со1оду, уо1. 22(2) 2009). С этой целью проводили скрининг приведенных в качестве примеров соединений согласно настоящему изобретению и родственных соединений с использованием анализа на основе включения в микросомы печени с использованием глутатиона в качестве эндогенного нуклеофила для понимания склонности к окислительной биоактивации тиенильной функциональной группы. Было обнаружено, что в тех соединениях из тестируемых соединений, в которых К^2а и К^2Ь представляли собой водород, наблюдались признаки образования конъюгата глутатиона, что указывает на окисление тиенильной функциональной группы. Было обнаружено, что в тех соединениях из тестируемых соединений, в которых К^2а и К^2Ь представляли собой фтор, не наблюдалось образование конъюгата глутатиона (см. табл. 3 ниже.) Отсутствие образования конъюгата глутатиона у содержащих гем-дифтор молекул указывает на то, что гем-дифторный заместитель снижает внутреннее химическое стремление к биоактивации, как исследовано в анализе.

- 48 020848

Таблица 3. Образование конъюгата глутатиона в гомогенате микросом печени

Соединение	Образование конъюгата глутатиона
(Ъ)-тартрат З-фтор-2-[4-[(2- фторспиро[4,5-дигидротиено[2,3-с}пиран- 7,4’-пиперидин]-1’-ил)метил]-3- метилпиразол-1-ил]бензамида	Да
(Щ-тартрат З-фтор-2-[4-[(2,3- дифторспиро[4, 5-дигидротиено[2,3- с]пиран-7,4’-пиперидин]-1’-ил)метил]-3- метилпиразол-1-ил]бензамида	Да
(Пример 14) (Ь)-тартрат 2-хлор-1’-[[1- [3-(метоксиметил)-2-пиридил]-3- метилпиразол-4-ил]метил]спиро[4,5- дигидротиено[2,3-с]пиран-7,4'- пиперидина]	Да
(Пример 10) (Ь)-тартрат 2,4,4-трифтор- 1'-[[1-[3-(метоксиметил)-2-пиридил]-3- метилпиразол-4-ил]метил]спиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран-7,4’-пиперидина]	Нет

(Пример 18) (Щ-тартрат З-фтор-2-[3- метил-4-[(2,4,4-трифторспиро[5Н- тиено[2,3-с]пиран-7,4’-пиперидин]-1’- ил)метил]пиразол-1-ил]бензамида

Нет

Несмотря на то что соединения, используемые в способах согласно настоящему изобретению, можно вводить непосредственно без включения в состав препарата, указанные соединения обычно вводят в форме фармацевтических композиций, содержащих по меньшей мере одно соединение формулы I или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения в качестве активного ингредиента и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель и/или эксципиент. Указанные композиции можно вводить различными способами, включая пероральное, интраназальное, трансдермальное, подкожное, внутривенное, внутримышечное и легочное введение. Указанные фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники (см., например, К.етшд1оп: ТЬе 8с1еисе аиб РгасЬсе о£ РЬагтасу ШшусгЩу о£ Не §с1еисе8 ίη РЬПайефЫа, ей., 2Г’¹ ей., Прршсой ХУПЬапъ & ХУПкиъ Со., 2005)).

Композиции предпочтительно представлены в виде единичных дозированных форм, причем каждая доза содержит от примерно 0,1 до примерно 500 мг, чаще от примерно 1,0 до примерно 200 мг, например, между примерно 5 и 50 мг, активного ингредиента. Термин единичная дозированная форма относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве однократных доз для человека и других млекопитающих, причем каждая единица содержит заранее определенное количество активного материала, рассчитанное для обеспечения желаемого терапевтического эффекта, вместе по меньшей мере с одним подходящим фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем и/или эксципиентом.

Соединения формулы I в целом являются эффективными в широком диапазоне доз. Например, суточные дозы в норме находятся в диапазоне от примерно 0,01 до примерно 50 мг/кг, чаще от примерно 0,05 до 5,0 мг/кг и, например, между 0,1 и 1,0 мг/кг массы тела. В некоторых примерах доза, меньшая нижнего предела вышеуказанного диапазона, может являться более приемлемой, тогда как в других случаях могут использоваться даже более большие дозы без каких-либо вредных побочных эффектов, и, следовательно, предполагается, что вышеуказанный диапазон доз никоим образом не ограничивает объем изобретения. Следует понимать, что конкретное вводимое количество соединения определяется врачом с учетом соответствующих обстоятельств, включая состояние, подвергаемое лечению, выбранный способ введения, конкретное вводимое соединение или соединения, возраст, массу тела и реакцию конкретного пациента и тяжесть симптомов указанного пациента.

Claims (14)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы

   - 49 020848 где К¹ представляет собой фтор или хлор;

   каждый из К^2а и К^2Ь представляет собой водород или фтор;

   К³ представляет собой водород, метил, гидроксиметил или (С₁-С₃) алкоксиметил;

   К⁴ выбран из группы, состоящей из фтора, хлора, циано, цианометила, (С1-С3) алкила, циклопропила, гидроксиметила, метокси, циклопропилметокси, аминокарбонилметокси, (С1-С3) алкоксиметила, циклопропилоксиметила, циклопропилметоксиметила, 1-гидрокси-1-метилэтила, аминокарбонилоксиметила, метиламинокарбонилоксиметила, диметиламинокарбонилоксиметила, аминокарбонила, аминокарбонилметила, -СН2^К⁵К⁶, гидроксиимина, метоксиимина, морфолин-4-ила, морфолин-4-илметила, Аг¹, СН2Аг¹, тетрагидрофуран-2-ила, 3-оксоморфолин-4-илметила, 2-оксопирролидин-1-илметила и 2оксопиперидин-1-илметила;

   К⁵ представляет собой водород, С₁-С₃ алкил, цианометил, -С(О)СН₃ или аминокарбонилметил;

   К⁶ представляет собой водород или метил; и

   Аг¹ представляет собой фрагмент, выбранный из группы, состоящей из имидизол-1-ила, имидизол2-ила, 2-метилимидизол-1-ила, пиразол-1-ила, 1,2,3-триазол-1-ила, 1,2,3-триазол-2-ила, 1,2,4-триазол-1ила, изоксазол-3-ила, оксазол-5-ила и 3-метил-1,2,4-оксадиазол-5-ила; или его фармацевтически приемлемая соль.
2. 2. Соединение по п.1, где К¹ представляет собой хлор, или его фармацевтически приемлемая соль.
3. 3. Соединение по п.1 или 2, где каждый из К^2а и К^2Ь представляет собой фтор, или его фармацевтически приемлемая соль.
4. 4. Соединение по п.1, где К¹ представляет собой фтор и каждый из К^2а и К^2Ь представляет собой водород, или его фармацевтически приемлемая соль.
5. 5. Соединение по любому из пп.1-4, где К³ представляет собой метил, или его фармацевтически приемлемая соль.
6. 6. Соединение по любому из пп.1-5, где К⁴ представляет собой фтор, гидроксиметил, метоксиметил или пиразол-1-илметил, или его фармацевтически приемлемая соль.
7. 7. Соединение по п.1, представляющее собой [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]-3-пиридил]метанол; 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[[3-метил1-[3-(пиразол-1-илметил)-2-пиридил]пиразол-4-ил]метил]спиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин] или [4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран-7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-1-(3-фтор-2пиридил)пиразол-3-ил] метанол; или его фармацевтически приемлемая соль.
8. 8. Соединение по п.1, представляющее собой [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифторспиро[5Н-тиено[2,3-с]пиран7,4'-пиперидин]-1'-ил)метил]-3-метилпиразол-1-ил]-3-пиридил]метанол, или его фармацевтически приемлемая соль.
9. 9. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-8 или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.
10. 10. Фармацевтическая композиция по п.9, дополнительно содержащая по меньшей мере один дополнительный терапевтический ингредиент.
11. 11. Фармацевтическая композиция по п.10, где дополнительный терапевтический ингредиент представляет собой антидепрессант группы селективных ингибиторов обратного захвата серотонина (55К1).
12. 12. Применение соединения по любому из пп.1-8 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения ожирения или избыточного веса у человека.
13. 13. Применение соединения по любому из пп.1-8 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения мигрени.
14. 14. Применение соединения по любому из пп.1-8 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения депрессии.