PT1864666E - Agente protector para célula neuronal retiniana contendo derivado de prostaglandina f2 alfa como ingrediente activo - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "AGENTE PROTECTOR PARA CÉLULA NEURONAL RETINIANA CONTENDO DERIVADO DE PROSTAGLANDINA F2 ALFA COMO INGREDIENTE ACTIVO" A presente invenção refere-se a um agente protector para uma célula neuronal retiniana contendo um derivado de prostaglandina F2oí como ingrediente activo, para utilização na prevenção ou tratamento de uma doença ocular associada a lesão celular neuronal retiniana. A retina é um tecido com uma espessura desde 0,1 a 0,5 mm consistindo de dez camadas de membrana limitante interna, camada fibrosa nervosa, camada celular ganglionar, camada plexiforme interna, camada nuclear interna, camada plexiforme externa, camada nuclear externa, membrana limitante externa, camada celular foto-receptora e camada de epitélio de pigmento de retina e estão ai presentes grupos de células neuronais retinianas incluindo células foto-receptoras, células bipolares, células ganglionares, células horizontais, células amácrinas e células de Muller.

As células neuronais retinianas desempenham um papel importante na recepção e transmissão de informação visual, tal como converter a estimulação luminosa num sinal eléctrico e transmitir o sinal ao cérebro.

Para descrever, de um modo especifico, o mecanismo dessa transmissão, a informação visual dos olhos é convertida num 1 sinal eléctrico através de células foto-receptoras e transmitida a células ganglionares por meio de células horizontais, células bipolares e/ou células amácrinas. Em seguida, o sinal eléctrico é transmitido ao cérebro por meio do nervo óptico que é um feixe de fibras de nervo óptico incluindo axónios de células ganglionares.

Por outro lado, quando estas células neuronais retinianas estão danificadas devido a várias causas, a homeostase (uma função de fornecimento de oxigénio ou de nutrição a células neuronais retinianas através da circulação sanguínea retiniana e semelhantes) de células neuronais retinianas não pode ser mantida e a transmissão de informação visual ao cérebro é inibida. Por exemplo, é vastamente conhecido que a disfunção de células neuronais retinianas é provocada em várias doenças retinianas, tais como oclusão vascular retiniana, retinopatia diabética, neuropatia óptica isquémica, glaucoma, degeneração macular, retinite pigmentosa e doença de Leber (Brain Res. Buli., 62(6), 447-453 (2004)).

Recentemente, foi considerado que a morte celular neuronal retiniana devida à isquémia retiniana é uma das causas de lesão celular neuronal retiniana e os seguintes acontecimentos foram relatados relativamente à morte celular neuronal retiniana devida à isquémia retiniana (documento JP-A-2003-146904 e Nature Rev., 2, 448-459 (2003)). 1) O mecanismo de morte celular neuronal retiniana devido a isquémia retiniana é semelhante ao da morte celular neuronal cerebral devida a isquémia cerebral. 2 a camada 2) Na isquémia retiniana a curto prazo, retiniana interna (camada plexiforme interna) é selectivamente danificada. 3) Pode ser observada libertação excessiva de glutamato durante a isquémia retiniana. 4) Ao injectar um aminoácido excitatório, tal como glutamato, no corpo vítreo, é induzida morte celular neuronal retiniana. 5) A sobre-estimulação mediada por receptores N-metil-D-aspartato retinianas (NMDA) promove influxo de cálcio (Ca) nas células, o que resulta em induzir lesão celular por meio de indução de monóxido de azoto (NO). A partir destes factos, considera-se que um fármaco, tal como um inibidor de neurotoxicidade de glutamato e um antagonista receptor de NMDA ou um inibidor de síntese de NO é útil para o tratamento de uma doença ocular provocada por lesão celular neuronal retiniana e realizaram-se vários estudos.

Por exemplo, o documento JP-A-2001-072591 divulga um agente protector para uma célula neuronal retiniana contendo nipradilol que é um dos bloqueadores β como ingrediente activo. 0 documento WO 01/056606 divulga um agente protector para uma célula ganglionar óptica contendo uma proteína antagonista do receptor de interleucina-1 como ingrediente activo. O documento WO 03/004058 divulga um agente protector para uma célula ganglionar óptica contendo um antagonista receptor ορ, tal como cloridrato de brimonidina como ingrediente activo. Experimental Eye Res., 72, 479-486 (2001) divulga um efeito protector de nervo de latanoprost que é um dos derivados de prostaglandina, etc. 3

Por outro lado, os derivados de prostaglandina F2a são divulgados como agente terapêutico para glaucoma possuindo uma acção redutora da pressão intraocular nos documentos JP-A-59-1418, JP-T-3-501025, JP-T-8-501310, JP-A-10-182465, WO 98/12175, Publicação de Pedido de Patente Europeia N° 850926, JP-A-2004-002462, JP-A-10-259179 , JP-A-2002-293771 e JP-A-2003-321442. O documento JP-A-59-1418 divulga um derivado de prostaglandina F2a natural. O documento JP-T-3-501025 divulga um composto relacionado com latanoprost. O documento JP-T-8-501310 divulga um composto relacionado com bimatoprost. O documento JP-A-10-182465 divulga um composto relacionado com travoprost. O documento WO 98/12175 divulga um derivado de monofluoroprostaglandina F2a. A Publicação de Pedido de Patente Europeia N° 850926 e o documento JP-A-2004-002462 divulgam um derivado de difluoroprostaglandina F2a. O documento JP-A-10-259179 divulga um derivado de prostaglandina F2oí contendo flúor possuindo um grupo ariloxilo multissubstituido. O documento JP-A-2002-293771 divulga um derivado de dif luoroprostaglandina F2cx tipo éter. O documento JP-A-2003-321442 divulga um derivado de amida de dif luoroprostaglandina F2cx.

No entanto, gualguer destes documentos não descreve, de todo, um efeito de um derivado de prostaglandina F2a contendo flúor na protecção de uma célula neuronal retiniana. É um assunto muito interessante encontrar uma nova aplicação farmacêutica de um derivado de prostaglandina F2a (de um modo particular, uma prostaglandina F2a contendo flúor).

Conseguentemente, as presentes requerentes fizeram estudos intensivos de modo a encontrar uma nova aplicação farmacêutica 4 de um derivado de prostaglandina F2a. Como resultado, verificam que o derivado de prostaglandina F2cx inibe a morte celular neuronal retiniana induzida por glutamato, num efeito dependente da concentração em células neuronais retinianas fetais de rato, por outras palavras, o derivado de prostaglandina F2oí actua directamente nas células neuronais retinianas e apresenta um efeito protector, atingindo deste modo a presente invenção. A presente invenção refere-se a um agente protector para uma célula neuronal retiniana contendo um derivado de prostaglandina F2oí como ingrediente activo, para utilização na prevenção ou tratamento de uma doença ocular associada a lesão celular neuronal retiniana.

Além disso, a presente invenção pode ser utilizada num método de protecção de uma célula neuronal retiniana e num método de prevenção ou tratamento de uma doença ocular associada a lesão celular neuronal retiniana.

Na presente invenção, o "derivado de prostaglandina F2a" significa um composto relacionado com prostaglandina F2a derivado do esqueleto do ácido prostanóico, como definido na reivindicação 1.

Em geral, um agente protector para uma célula neuronal retiniana é, por exemplo, um que contém um derivado de prostaglandina F2cx ou um seu sal, tal como um derivado de prostaglandina F2a natural divulgado no documento JP-A-59-1418, um composto relacionado com latanoprost (com a condição de que um composto relacionado com latanoprost ou um seu sal excluir latanoprost) divulgado no documento JP-T-3-501025, um composto relacionado com bimatoprost (de um modo preferido, bimatoprost 5 ou um seu sal) divulgado no documento JP-T-8-501310, um composto relacionado com travoprost (de um modo preferido, travoprost ou um seu sal) divulgado no documento JP-A-10-182465 ou um derivado de prostaglandina F2a contendo flúor divulgado no documento WO 98/12175, Publicação do Pedido de Patente Europeia N° 850926, documentos JP-A-2004-002462, JP-A-10-259179, JP-A-2002-293771 ou JP-A-2003-321442 como ingrediente activo.

De um modo preferido, um agente protector para uma célula neuronal retiniana é, por exemplo, um que contém um "derivado de prostaglandina F2a contendo flúor" como ingrediente activo. O "derivado de prostaglandina F2a contendo flúor" significa um derivado de prostaglandina F2a possuindo um ou mais átomos de flúor.

De um modo especifico, um agente protector para uma célula neuronal retiniana é, por exemplo, um que contém um derivado de prostaglandina F2a contendo flúor divulgado no documento WO 98/12175, Publicação do Pedido de Patente Europeia N° 850926, documentos JP-A-2004-002462, JP-A-10-259179, JP-A-2002-293771 ou JP-A-2003-321442 como ingrediente activo.

De um modo mais preferido, um agente protector para uma célula neuronal retiniana é, por exemplo, um que contém um derivado de 15, 15-dif luoroprostaglandina F2oí divulgado na Publicação do Pedido de Patente Europeia N° 850926, documentos JP-A-2004-002462, JP-A-10-259179, JP-A-2002-293771 ou JP-A-2003-321442 como ingrediente activo.

De acordo com a presente invenção, o agente protector para uma célula neuronal retiniana é um que contém um derivado de 15,15-difluoroprostaglandina F2oí representado pela seguinte 6 fórmula geral (1), que é um ainda mais preferido derivado de prostaglandina F2oí contendo flúor ou um seu sal, como ingrediente activo.

HQ

(D

[R representa um grupo carboxilo ou um seu grupo sal ou um grupo alcoxicarbonilo.

Os respectivos grupos e termos definidos nesta descrição serão mostrados abaixo. 0 "halogéneo" refere-se a flúor, cloro, bromo ou iodo. 0 "alquilo" refere-se a alquilo de cadeia linear ou ramificada possuindo 1 a 6 átomos de carbono. Os seus exemplos específicos incluem metilo, etilo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo, isopropilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, isopentilo e semelhantes. 0 "alcoxilo" refere-se a alcoxilo de cadeia linear ou ramificada possuindo 1 a 6 átomos de carbono. Os seus exemplos específicos incluem metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, n-butoxilo, n-pentiloxilo, n-hexiloxilo, isopropoxilo, isobutoxilo, sec-butoxilo, terc-butoxilo, isopentiloxilo e semelhantes. 0 "arilo" refere-se a hidrocarboneto aromático monocíclico, ou bicíclico ou hidrocarboneto aromático policíclico condensado 7 tricíclico possuindo 6 a 14 átomos de carbono. Os seus exemplos específicos incluem fenilo, naftilo, antrilo, fenantrilo e semelhantes. 0 "ariloxilo" refere-se a hidrocarbonoxilo aromático monocíclico, ou bicíclico ou hidrocarbonoxilo aromático policíclico condensado tricíclico possuindo 6 a 14 átomos de carbono. Os seus exemplos específicos incluem fenoxilo, naftiloxilo, antriloxilo, fenantriloxilo e semelhantes. 0 "alquilamino" refere-se a monoalquilamino ou dialquilamino possuindo 1 a 12 átomos de carbono. Os seus exemplos específicos incluem metilamino, etilamino, dimetilamino, di-hexilamino e semelhantes. 0 "arilamino" refere-se a monoarilamino ou diarilamino possuindo 6 a 28 átomos de carbono. Os seus exemplos específicos incluem fenilamino, naftilamino, metilfenilamino, etilfenilamino, difenilamino, diantrilamino e semelhantes.

Um derivado de prostaglandina F2a contendo flúor particularmente preferido é, por exemplo, um derivado de 15,15-dif luoroprostaglandina F2oí da fórmula geral (1) acima mencionada em que R representa um grupo carboxilo ou um seu grupo sal ou um grupo isopropoxicarbonilo.

Estes derivados de prostaglandina F2oí podem estar na forma de um sal com um ácido inorgânico, tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido iodrídico, ácido nítrico, ácido sulfúrico ou ácido fosfórico, um ácido orgânico, tal como ácido acético, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico ou ácido cítrico, um metal alcalino, tal como lítio, sódio ou potássio, um metal alcalino-terroso, tal como cálcio ou magnésio, amónia ou semelhantes. Estes sais estão também incluídos na presente invenção.

Na presente invenção, a "célula neuronal retiniana" significa uma célula neuronal envolvida na transmissão de sinal visual ao cérebro. De um modo específico, significa uma célula foto-receptora, uma célula horizontal, uma célula bipolar, uma célula ganglionar óptica, uma célula amácrina ou semelhantes.

Na presente invenção, a "doença ocular" significa uma doença ocular associada a lesão celular neuronal retiniana.

De um modo específico, significa campo visual anómalo, oclusão vascular retiniana, retinopatia diabética, neuropatia óptica isquémica, glaucoma, degeneração macular, retinite pigmentosa, doença de Leber ou semelhantes e, de um modo preferido, significa campo visual anómalo, oclusão vascular retiniana, retinopatia diabética, neuropatia óptica isquémica, degeneração macular, retinite pigmentosa ou doença de Leber. 0 agente protector para uma célula neuronal retiniana da presente invenção pode ser administrado oral ou parentericamente. Os exemplos da forma de dosagem para administração incluem uma gota oftálmica, um unguento oftálmico, uma injecção, um comprimido, uma cápsula, um grânulo, um pó e semelhantes e, de um modo particularmente preferido, é uma gota oftálmica. Tal preparação pode ser preparada por qualquer das técnicas vastamente utilizadas, por exemplo, uma técnica divulgada nos documentos JP-A-59-1418, JP-T-3-501025, JP-T-8-501310, JP-A-10-182465, WO 98/12175, Publicação de Pedido 9 de Patente Europeia N° 850926, JP-A-2004-002462, JP-A-10-259179, JP-A-2002-293771, JP-A-2003-321442, WO 02/22131 ou semelhantes.

Por exemplo, uma gota oftálmica pode ser preparada utilizando um agente de tonicidade, tal como cloreto de sódio ou glicerina concentrada, um tampão, tais como fosfato de sódio ou acetato de sódio, um tensioactivo, tais como monooleato de polioxietileno e sorbitano, estearato de polioxil 40 ou óleo de rícino polioxietileno hidrogenado, um estabilizante, tais como citrato de sódio ou edetato de sódio, um conservante, tais como cloreto de benzalcónio ou parabeno de acordo com a necessidade. O pH da gota oftálmica é permitido desde que esteja dentro da gama que é aceitável como preparação oftálmica. O pH preferido está na gama de 4 a 8.

Um unguento oftálmico pode ser preparado utilizando uma base vastamente utilizada, tal como parafina mole e branca ou parafina líquida, de acordo com a necessidade.

Além disso, uma preparação oral, tal como um comprimido, uma cápsula, um grânulo, um pó, pode ser preparada utilizando um aditivo, tais como lactose, celulose cristalina, amido ou um óleo vegetal, um lubrificante, tais como estearato de magnésio ou talco, um ligante, tais como hidroxipropilcelulose ou polivinilpirrolidona, um desintegrante, tais como carboximetilcelulose cálcica ou hidroxipropilmetilcelulose de baixa substituição, um agente de revestimento, tais como hidroxipropilmetilcelulose, macrogol ou uma resina de silicone, um agente formador de película, tal como película de gelatina ou semelhante, de acordo com a necessidade. 10 A dose pode ser seleccionada, de modo apropriado, dependendo dos sintomas, idade, forma de dosagem e semelhantes. Uma gota ocular pode ser instilada uma a várias vezes ao dia, a uma concentração desde 0,00001 a 1% (p/v), de um modo preferido, de 0, 0001 a 1% (p/v) . Uma preparação oral pode ser administrada uma vez ou dividida em várias vezes numa dose, em geral, desde 0,01 a 5000 mg por dia, de um modo preferido, de 0,1 a 1000 mg por dia.

Como será descrito em detalhe na secção de Teste Farmacológico abaixo, examinou-se um efeito de um derivado de prostaglandina F2a na morte celular neuronal retiniana induzida por glutamato utilizando células neuronais retinianas fetais de rato. Como resultado, o derivado de prostaglandina F2a inibiu a morte celular neuronal retiniana induzida por glutamato num efeito dependente da concentração. Isto é, o derivado de prostaglandina F2a possui uma acção de protecção de uma célula neuronal retiniana e é útil para a prevenção ou tratamento de uma doença ocular associada a lesão celular neuronal retiniana.

Daqui em diante, serão descritos exemplos de preparação da presente invenção e resultados de um teste farmacológico. No entanto, estes exemplos são descritos com o objectivo de melhor compreender a presente invenção e não pretendem limitar o âmbito da presente invenção.

[Exemplos de Preparação]

Daqui em diante, serão descritos exemplos de preparações gerais contendo um derivado de prostaglandina F2a de acordo com a presente invenção. 11 1) Gota Oftálmica (em 100 mL)

Derivado de prostaglandina F2a 10 mg Glicerina concentrada 2500 mg Polissorbato 80 2000 mg Fosfato de sódio monobásico di-hidratado 200 mg Água purificada estéril q.b. Ácido clorídrico 1 N ou hidróxido de sódio 1 N q.b. pH 6,0

Pode ser obtida uma gota oftálmica pretendida alterando, de um modo apropriado, os tipos e as quantidades do derivado de prostaglandina F2a e aditivos. 2) Unguento oftálmico (em 100 g)

Derivado de prostaglandina F2a 0,1 g Parafina líquida 20 g Parafina mole e branca 77,9 g Lanolina purificada 2 g

Pode ser obtido um unguento oftálmico pretendido alterando, de um modo apropriado, os tipos e as quantidades do derivado de prostaglandina F2oí e aditivos. 12 [Teste Farmacológico]

De modo a descobrir uma nova aplicação farmacêutica de um derivado de prostaglandina F2a, utilizando células neuronais retinianas fetais de rato, foi avaliado e examinado um efeito de um derivado de prostaglandina F2cx na protecção de células neuronais retinianas contra morte celular neuronal retiniana induzida por glutamato.

Incidentalmente, como derivado de prostaglandina F2a que é um composto de teste, utilizou-se 16-fenoxi-15-desoxi-15,15-difluoro-17,18,19,20-tetranor-prostaglandina F2a. (1) Cultura de isolamento de células neuronais retinianas

Uma rata SD prenha foi submetida a uma laparotomia sob anestesia sistémica e transferiu-se o útero para um prato contendo solução salina equilibrada de Hanks (HBSS). Isolou-se um feto de rato do útero e retiraram-se os globos oculares do feto de rato. A retina foi isolada dos globos oculares sob um microscópio esteroscópico e cortada em pedaços com um bisturi. Em seguida, a retina foi ainda quebrada para o nível celular e passada através de uma malha de nylon (N° 305, fabricada por NBC Industries Co., Ltd.) para remover agregados celulares e, em seguida, o filtrado resultante foi centrifugado a 1000 rpm durante 4 minutos. O sobrenadante foi removido e adicionou-se uma quantidade apropriada de um meio de Eagle modificado (MEM) contendo soro fetal bovino (FBS) a 10% às células remanescentes para suspendê-las. Após o número de células ser contado com um hemocitómetro, adicionou-se a estas um meio MEM contendo FBS a 10%, pelo que se obteve uma suspensão celular com uma densidade 13 celular de 0,8 x 106 células/mL. A suspensão celular foi inoculada numa quantidade de 80 pL cada para discos de plástico revestidos com polietilenoimina e deixaram-se permanecer os discos numa incubadora (37 °C, C02 a 5%) . O dia de inoculação celular foi designado dia 1 de cultura e a substituição do meio foi realizada em todos os dias de número par. Incidentalmente, até ao dia 4, utilizou-se um meio MEM contendo FBS a 10% e após o dia 8, utilizou-se um meio MEM contendo soro de cavalo (HS) a 10%. Incidentalmente, no dia 6, utilizaram-se 6 mL de um meio contendo citarabina (Ara-C) (1,5 x 10~5 M num meio MEM contendo FBS a 10%) para remoção de células proliferativas. (2) Preparação de meio MEM contendo HS contendo composto de teste

Dissolveram-se 2 mg do composto de teste em etanol a 100% e a solução resultante foi, sequencialmente, diluida com um meio MEM contendo HS, pelo que foi preparado um meio MEM contendo HS contendo o composto de teste a 0,1 nM, 1 nM, 10 nM ou 100 nM. (3) Preparaçao de meio MEM livre de soro contendo composto de teste

Dissolveram-se 2 mg do composto de teste em etanol a 100% e a solução resultante foi, sequencialmente, diluida com um meio MEM livre de soro, pelo que foi preparado um meio MEM livre de soro contendo o composto de teste a 0,1 nM, 1 nM, 10 nM ou 100 nM. 14 (4) Avaliação da morte celular

No dia 10 de cultura, os discos plásticos nos quais as células foram inoculadas e cultivadas foram transferidos para o meio MEM contendo HS contendo o composto de teste e incubados durante 24 horas (37 °C, C02 a 5%). Os discos plásticos foram transferidos para um meio MEM livre de soro contendo glutamato 1 mM e incubados durante 10 minutos e, em seguida, transferidos para o meio MEM livre de soro contendo o composto de teste e incubados durante 1 hora (37 °C, C02 a 5%) . Em seguida, as células foram coradas com uma solução de azul de tripano a 1,5% durante 10 minutos e fixas adicionando a esta solução fixadora de formalina a 10%. Depois de as células serem lavadas com uma solução salina fisiológica, contaram-se as células coradas e as células não coradas sob um microscópio invertido.

Incidentalmente, preparou-se um grupo de administração de veiculo realizando o mesmo teste como descrito acima, excepto que foi utilizado um meio MEM contendo HS em vez do acima mencionado meio MEM contendo HS contendo o composto de teste e foi utilizado um meio MEM livre de soro em vez do acima mencionado meio MEM livre de soro contendo o composto de teste.

Além disso, preparou-se um grupo não tratado realizando o mesmo teste como descrito acima, excepto que foi utilizado um meio MEM contendo HS em vez do acima mencionado meio MEM contendo HS contendo o composto de teste e foi utilizado um meio MEM livre de soro em vez do acima mencionado meio MEM livre de soro contendo o composto de teste e, além disso, não foi realizado um tratamento com um meio MEM livre de soro contendo glutamato. 15 A taxa de sobrevivência foi calculada com base na seguinte equação de cálculo.

Taxa de sobrevivência (%) = { (número de células não coradas)/(número de células não coradas + número de células coradas)} x 100 (5) Resultados e discussão

Como mostrado na Fig. 1, observou-se cerca de 40% de morte celular das células neuronais retinianas devido ao tratamento com glutamato no grupo de adição de veículo. No entanto, quando foi utilizado como meio o meio MEM contendo HS contendo o composto de teste (0,1 nM a 100 nM) , a morte celular neuronal retiniana induzida por glutamato foi inibida num efeito dependente da concentração e confirmou-se que o composto de teste possui uma acção de protecção de uma célula neuronal retiniana. A Fig. 1 é um gráfico que mostra a taxa de sobrevivência para cada concentração no caso de utilização do composto de teste pela adição de glutamato.

Lisboa, 30 de Agosto de 2012 16

Claims (1)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto representado pela seguinte fórmula geral (1) ou um seu sal para utilização na prevenção ou tratamento de uma doença ocular associada a lesão celular neuronal retiniana, em que a doença ocular é campo visual anómalo, oclusão vascular retiniana, retinopatia diabética, neuropatia óptica isquémica, degeneração macular, retinite pigmentosa ou doença de Leber: HQ

   (D em que R representa um grupo carboxilo ou um seu grupo salino ou um grupo alcoxicarbonilo (Ci-Cõ) · Lisboa, 30 de Agosto de 2012 1