KR20070116632A

KR20070116632A - 프로스타글란딘 Ｆ２ａ 유도체를 유효 성분으로서 함유하는망막신경세포 보호제

Info

Publication number: KR20070116632A
Application number: KR1020077023372A
Authority: KR
Inventors: 나루히로 이시다; 아츠시 시마자키
Original assignee: 아사히 가라스 가부시키가이샤; 산텐 세이야꾸 가부시키가이샤
Priority date: 2005-03-31
Filing date: 2006-03-31
Publication date: 2007-12-10
Anticipated expiration: 2026-03-31
Also published as: RU2007140309A; KR101396731B1; US20090234005A1; CN101151034A; DK1864666T3; WO2006106915A1; CA2602573A1; ES2389500T3; PT1864666E; CA2602573C; SI1864666T1; CY1113473T1; NO339794B1; CN102293774A; EP1864666A4; EP1864666B1; RU2414904C2; EP1864666A1; CN101151034B; PL1864666T3

Abstract

본 발명은 프로스타글란딘 F2α 유도체의 새로운 의약 용도를 발견하는 것을 과제로 한다. 프로스타글란딘 F2α 유도체가 래트 태아 망막신경세포에 있어서, 농도 의존적으로 글루타민산 유발 망막신경 세포사를 억제하는 것, 즉, 프로스타글란딘 F2α 유도체가 망막신경세포에 직접 작용하여 보호 작용을 나타내는 것이 발견되었다. 따라서, 프로스타글란딘 F2α 유도체는 망막신경세포 장해가 관여하는 안질환의 예방 또는 치료에 유용하다.

Description

프로스타글란딘 Ｆ２ａ 유도체를 유효 성분으로서 함유하는 망막신경세포 보호제{PROTECTIVE AGENT FOR RETINAL NEURONAL CELL CONTAINING PROSTAGLANDIN F2α DERIVATIVE AS ACTIVE INGREDIENT}

본 발명은 프로스타글란딘 F2α 유도체를 유효 성분으로서 함유하는 망막신경세포 보호제에 관한 것이다.

망막은 내경계막, 신경선유층, 신경절세포층, 내망상층, 내과립층, 외망상층, 외과립층, 외경계막, 시세포층 및 망막색소상피층의 10층으로 이루어진 두께 0.1∼0.5 ㎜의 조직으로서, 그 속에는 시세포, 쌍극세포, 신경절세포, 수평세포, 아마크린세포 및 뮬러세포라는 망막신경세포군이 존재한다.

망막신경세포는 광자극을 전기신호로 변환하여 뇌에 전달한다는 시각 정보의 수용과 전달에 있어서 중요한 역할을 수행하고 있다.

그 전달 메커니즘에 대해서 상세히 설명하면, 눈을 통해 들어온 시각 정보는 시세포에 의해 전기신호화되어 수평세포, 쌍극세포 및/또는 아마크린세포를 경유한 후에 신경절세포로 전달된다. 계속해서, 그 전기신호는 신경절세포의 신경돌기를 포함하는 시신경선유의 다발인 시신경을 경유하여 뇌에 전달된다.

그런데, 이 망막신경세포가 여러 가지 원인에 의해 장해를 입으면 망막신경 세포의 항상성(망막 혈류 순환에 의한 망막신경세포로의 산소나 영양의 공급 기능 등)을 유지할 수 없게 되어 시각 정보의 뇌로의 전달이 방해된다. 예컨대, 망막혈관폐색증, 당뇨병성망막증, 허혈성시신경증, 녹내장, 황반변성증, 망막색소변성증, 레베르병 등의 여러 가지 망막 질환에 있어서, 망막신경세포의 기능 혼란이 발생하고 있는 것이 널리 알려져 있다(비특허 문헌 1).

최근, 망막신경세포에 장해를 일으키는 원인의 하나로서 망막 허혈에 의한 망막신경 세포사를 생각할 수 있게 되어 이 망막 허혈에 의한 망막신경 세포사에 관해서 하기 1) 내지 5) 등이 보고되어 있다(특허 문헌 1, 비특허 문헌 2).

1) 망막 허혈에 의한 망막신경 세포사의 기서가 뇌허혈시의 뇌신경 세포사의 기서와 유사한 것.

2) 단기간의 망막 허혈에서는 망막내층(내망상층)이 선택적으로 상해를 입는 것.

3) 망막 허혈시에 글루타민산의 과잉 유리를 확인할 수 있는 것.

4) 글루타민산 등의 흥분성 아미노산을 유리체 내에 주사함으로써 망막신경 세포사가 야기되는 것.

5) 망막의 N-메틸-D-아스파르테이트(NMDA) 수용체를 통한 과잉 자극이 세포 내로의 칼슘(Ca) 유입을 촉진하고, 그 결과로서 일산화질소(NO)의 유도를 통해 세포 장해를 야기하는 것.

이들로부터 글루타민산 신경독성 억제약, NMDA 수용체 차단약, NO 합성 저해약 등의 약물이 망막신경세포 장해에 기인한 안질환의 치료에 유용하다고 생각되어 현재 각종 검토가 행해지고 있다.

예컨대, 특허 문헌 2에는 β 차단약의 하나인 니프라딜롤을 유효 성분으로서 함유하는 망막신경세포 보호제가, 특허 문헌 3에는 인터류킨-1 수용체 안타고니스트 단백질을 유효 성분으로서 함유하는 시신경절세포 보호제가, 특허 문헌 4에는 염산브리모니딘 등의 α₁ 수용체 차단약을 유효 성분으로서 함유하는 시신경절세포 보호제가, 비특허 문헌 3에는 프로스타글란딘 유도체의 하나인 라타노프로스트의 신경 보호 작용 등이 개시되어 있다.

한편, 프로스타글란딘 F2α 유도체가 특허 문헌 5, 특허 문헌 6, 특허 문헌 7, 특허 문헌 8, 특허 문헌 9, 특허 문헌 10, 특허 문헌 11, 특허 문헌 12, 특허 문헌 13, 특허 문헌 14 및 특허 문헌 15에, 안압 하강 작용을 갖는 녹내장 치료제로서 개시되어 있다. 특허 문헌 5에는 천연의 프로스타글란딘 F2α 유도체가, 특허 문헌 6에는 라타노프로스트 관련 화합물이, 특허 문헌 7에는 비마토프로스트 관련 화합물이, 특허 문헌 8에는 트라보프로스트 관련 화합물이, 특허 문헌 9에는 모노플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체가, 특허 문헌 10 및 특허 문헌 11에는 디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체가, 또한, 특허 문헌 12에는 다치환 아릴옥시기를 갖는 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체가, 특허 문헌 13에는 에테르형 디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체가, 특허 문헌 14에는 디플루오로프로스타글란딘 F2α 아미드 유도체가 개시되어 있다.

그러나, 어느 쪽 특허 문헌에도 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체의 망 막신경세포 보호 작용에 대해서는 전혀 기재되어 있지 않다.

비특허 문헌 1: Brain Res Bull., 62(6), 447-453(2004)

특허 문헌 1: 일본 특허 공개 제2003-146904호 공보

비특허 문헌 2: Nature Rev., 2, 448-459(2003)

특허 문헌 2: 일본 특허 공개 제2001-072591호 공보

특허 문헌 3: 국제 공개 제01/056606호 팜플렛

특허 문헌 4: 국제 공개 제03/004058호 팜플렛

비특허 문헌 3: Experimental Eye Res., 72, 479-486(2001)

특허 문헌 5: 일본 특허 공개 소화 제59-1418호 공보

특허 문헌 6: 일본 특허 공표 평성 제3-501025호 공보

특허 문헌 7: 일본 특허 공표 평성 제8-501310호 공보

특허 문헌 8: 일본 특허 공개 평성 제10-182465호 공보

특허 문헌 9: 국제 공개 제98/12175호 팜플렛

특허 문헌 10: 유럽 특허 출원 공개 제850926호 명세서

특허 문헌 11: 일본 특허 공개 제2004-002462호 공보

특허 문헌 12: 일본 특허 공개 평성 제10-259179호 공보

특허 문헌 13: 일본 특허 공개 제2002-293771호 공보

특허 문헌 14: 일본 특허 공개 제2003-321442호 공보

발명이 해결하고자 하는 과제

프로스타글란딘 F2α 유도체(특히 불소 함유 프로스타글란딘 F2α)의 새로운 의약 용도를 발견하는 것은 매우 흥미로운 과제이다.

과제를 해결하기 위한 수단

그래서, 본 발명자들은 프로스타글란딘 F2α 유도체의 새로운 의약 용도를 발견하기 위해 예의 연구한 결과, 프로스타글란딘 F2α 유도체가 래트 태아 망막신경세포에 있어서, 농도 의존적으로 글루타민산 유발 망막신경 세포사를 억제하는 것, 즉, 프로스타글란딘 F2α 유도체가 망막신경세포에 직접 작용하여 보호 작용을 나타내는 것을 발견하여 본 발명을 완성시켰다.

본 발명은 또, 망막신경세포의 보호 방법, 망막신경세포 장해가 관여하는 안질환의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.

본 발명에 있어서의 「프로스타글란딘 F2α 유도체」란 프로스탄산 골격으로부터 유도되는 프로스타글란딘 F2α 관련 화합물을 의미한다.

구체적으로는, 일본 특허 공개 평성 제59-1418호 공보에 개시되어 있는 천연의 프로스타글란딘 F2α유도체, 일본 특허 공표 평성 제3-501025호 공보에 개시되어 있는 라타노프로스트 관련 화합물(단, 라타노프로스트를 제외한 관련 화합물 또는 그의 염), 일본 특허 공표 평성 제8-501310호 공보에 개시되어 있는 비마토프로스트 관련 화합물(바람직하게는 비마토프로스트 또는 그의 염), 일본 특허 공개 평성 제10-182465호에 개시되어 있는 트라보프로스트 관련 화합물(바람직하게는 트라보프로스트 또는 그의 염), 국제 공개 제98/12175호 팜플렛, 유럽 특허 출원 공개 제850926호 명세서, 일본 특허 공개 제2004-002462호 공보, 일본 특허 공개 평성 제10-259179호 공보, 일본 특허 공개 제2002-293771호 공보, 일본 특허 공개 제2003-321442호 공보 등에 개시되어 있는 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체 등의 프로스타글란딘 F2α 유도체 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 망막신경세포 보호제를 들 수 있다.

바람직하게는, 「불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체」를 유효 성분으로서 함유하는 망막신경세포 보호제를 들 수 있고, 이 「불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체」란 1개 또는 복수개의 불소 원자를 갖는 프로스타글란딘 F2α 유도체를 의미한다.

구체적으로는 국제 공개 제98/12175호 팜플렛, 유럽 특허 출원 공개 제850926호 명세서, 일본 특허 공개 제2004-002462호 공보, 일본 특허 공개 평성 제10-259179호 공보, 일본 특허 공개 제2002-293771호 공보, 일본 특허 공개 제2003-321442호 공보 등에 개시되어 있는 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체를 유효 성분으로서 함유하는 망막신경세포 보호제를 들 수 있다.

보다 바람직하게는 상기 유럽 특허 출원 공개 제850926호 명세서, 일본 특허 공개 제2004-002462호 공보, 일본 특허 공개 평성 제10-259179호 공보, 일본 특허 공개 제2002-293771호 공보 및 일본 특허 공개 제2003-321442호 등의 공보 중에 기재되어 있는 15,15-디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체를 유효 성분으로서 함유하는 망막신경세포 보호제를 들 수 있다.

더욱 바람직한 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체로서 하기 화학식 1로 표시되거나 또는 그의 염인 15,15-디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체를 유효 성분으로서 함유하는 망막신경세포 보호제를 들 수 있다.

상기 식에서 R은 히드록시알킬기, 포르밀기, 카르복시기, 알콕시카르보닐기, 아릴옥시카르보닐기, 아미노카르보닐기, 알킬아미노카르보닐기 또는 아릴아미노카르보닐기를 나타내고, R이 아릴옥시카르보닐기 또는 아릴아미노카르보닐기인 경우, 그 아릴 부분은 치환기를 갖고 있어도 좋다. 이하, 동일하다.

여기서 본 명세서 안에서 규정한 각 기 또는 문언에 대해서 이하에 나타낸다.

「할로겐」이란 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 나타낸다.

「알킬」이란 탄소 원자수 1∼6개의 직쇄 또는 분지쇄의 알킬을 나타낸다. 구체예로서 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, n-펜틸, n-헥실, 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 이소펜틸 등을 들 수 있다.

「알콕시」란 탄소 원자수 1∼6개의 직쇄 또는 분지쇄의 알콕시를 나타낸다. 구체예로서 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, n-부톡시, n-펜틸옥시, n-헥실옥시, 이소 프로폭시, 이소부톡시, sec-부톡시, tert-부톡시, 이소펜틸옥시 등을 들 수 있다.

「아릴」이란 탄소 원자수 6∼14개의 단환식 또는 이환식 혹은 삼환식 축합 다환식 방향족 탄화수소를 나타낸다. 구체예로서 페닐, 나프틸, 안트릴, 페난트릴 등을 들 수 있다.

「아릴옥시」란 탄소 원자수 6∼14개의 단환식 또는 이환식 혹은 삼환식의 축합 다환식 방향족 탄화수소옥시를 나타낸다. 구체예로서 페녹시, 나프틸옥시, 안트릴옥시, 페난트릴옥시 등을 들 수 있다.

「알킬아미노」란 탄소 원자수 1∼12개의 모노알킬아미노 또는 디알킬아미노를 나타낸다. 구체적으로서 메틸아미노, 에틸아미노, 디메틸아미노, 디헥실아미노 등을 들 수 있다.

「아릴아미노」란 탄소 원자수 6∼28개의 모노아릴아미노 또는 디아릴아미노를 나타낸다. 구체예로서 페닐아미노, 나프틸아미노, 메틸페닐아미노, 에틸페닐아미노, 디페닐아미노, 디안트릴아미노 등을 들 수 있다.

R이 「아릴옥시카르보닐기」 또는 「아릴아미노카르보닐기」인 경우, 그 아릴 부분은 치환기를 갖고 있어도 좋다. 치환기로서는 할로겐 원자, 알킬기, 할로겐화알킬기 및 알콕시기로부터 선택되는 원자 또는 기가 바람직하고, 치환기 수는 1∼3개가 바람직하다.

더욱 바람직한 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체로서, 상기 화학식 1 중, R이 카르복시기 혹은 그 염기 또는 알콕시카르보닐기를 나타내는 15,15-디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체를 들 수 있다.

특히 바람직한 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체로서, 상기 화학식 1 중, R이 카르복시기 혹은 그 염기 또는 이소프로폭시카르보닐기를 나타내는 15,15-디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체를 들 수 있다.

또한, 별도의 바람직한 화합물로서 상기 국제 공개 제98/12175호 팜플렛에 기재되어 있는 15-모노플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체를 들 수 있다.

이들 프로스타글란딘 F2α 유도체는 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 질산, 황산, 인산 등의 무기산, 아세트산, 푸마르산, 말레산, 호박산, 시트르산 등의 유기산, 리튬, 나트륨, 칼륨 등의 알칼리 금속, 칼슘, 마그네슘 등의 알칼리 토류 금속, 암모니아 등과 염을 형성할 수 있으며, 이들 염도 본 발명에 포함된다.

본 발명에 있어서의 「망막신경세포」란 시각 신호의 뇌로의 전달에 관여하는 신경세포를 의미한다. 구체적으로는 시세포, 수평세포, 쌍극세포, 시신경절세포, 아마크린세포 등을 의미한다.

본 발명에 있어서의 「안질환」이란 망막신경세포 장해가 관여하는 안질환을 의미한다.

구체적으로는 시야이상, 망막혈관폐색증, 당뇨병성망막증, 허혈성시신경증, 녹내장, 황반변성증, 망막색소변성증, 레베르병 등을 의미하며, 바람직하게는 시야이상, 망막혈관폐색증, 당뇨병성망막증, 허혈성시신경증, 황반변성증, 망막색소변성증, 레베르병을 의미한다.

본 발명의 망막신경세포 보호제는 경구로도, 비경구로도 투여할 수 있다. 투여 제형으로서는 점안제, 안연고, 주사제, 정제, 캡슐제, 과립제, 산제 등을 들 수 있고, 특히 점안제가 바람직하다. 이들은 범용되는 기술, 예컨대 일본 특허 공개 평성 제59-1418호 공보, 일본 특허 공표 평성 제3-501025호 공보, 일본 특허 공표 평성 제8-501310호 공보, 일본 특허 공개 평성 제10-182465호 공보, 국제 공개 제98/12175호 팜플렛, 유럽 특허 출원 공개 제850926호 명세서, 일본 특허 공개 제2004-002462호 공보, 일본 특허 공개 평성 제10-259179호 공보, 일본 특허 공개 제2002-293771호 공보, 일본 특허 공개 제2003-321442호 공보, 국제 공개 제02/22131호 팜플렛 등에 개시되어 있는 기술을 이용하여 제제화할 수 있다.

예컨대, 점안제는 염화나트륨, 농축 글리세린 등의 등장화제, 인산나트륨, 아세트산나트륨 등의 완충화제, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노올레이트, 스테아린산폴리옥실 40, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 등의 계면활성제, 시트르산나트륨, 에데트산나트륨 등의 안정화제, 염화벤잘코늄, 파라벤 등의 방부제 등을 필요에 따라 사용하여 제제화할 수 있다. pH는 안과용 제제에 허용되는 범위 내라면 특별히 문제는 없지만, pH 4∼8의 범위가 바람직하다.

안연고는 백색 바셀린, 유동 파라핀 등의 범용되는 기제를 필요에 따라 사용하여 제제화할 수 있다.

또한, 정제, 캡슐제, 과립제, 산제 등의 경구제는 젖당, 결정 셀룰로오스, 전분, 식물유 등의 증량제, 스테아린산마그네슘, 탈크 등의 활택제, 히드록시프로필셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제, 카르복시메틸셀룰로오스칼슘, 저치환 히드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 붕괴제, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 매크로골, 실리콘 수지 등의 코팅제, 젤라틴 피막 등의 피막제 등을 필요에 따라 사 용하여 제제화할 수 있다.

투여량은 증상, 연령, 제형 등에 따라 적절하게 선택할 수 있지만, 점안제로서는 0.00001∼1%(w/v), 바람직하게는 0.0001∼1%(w/v)인 것을 1일 1∼수회 점안할 수 있다. 경구제로서는 통상 1일에 대해 0.01∼5000 ㎎, 바람직하게는 0.1∼1000 ㎎인 것을 1∼수회에 나누어 투여할 수 있다.

발명의 효과

후술되는 약리 시험의 항에서 상세히 설명하지만, 래트 태아 망막신경세포를 이용한 글루타민산 유발 망막신경 세포사에 대한 프로스타글란딘 F2α 유도체의 효과를 검토하였다. 그 결과, 프로스타글란딘 F2α 유도체는 농도 의존적으로 글루타민산 유발 망막신경 세포사를 억제하였다. 즉, 프로스타글란딘 F2α 유도체는 망막신경세포 보호 작용을 갖고 있고, 망막신경세포 장해가 관여하는 안질환의 예방 또는 치료에 유용하다.

이하에 본 발명의 제제예 및 약리 시험의 결과를 나타낸다. 또한, 이들 예시는 본 발명을 보다 잘 이해하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

[제제예]

이하에 본 발명에 있어서의 프로스타글란딘 F2α 유도체를 함유하는 일반적인 제제예를 나타낸다.

1) 점안제 100 ㎖ 중

프로스타글란딘 F2α 유도체 10 ㎎

농축 글리세린 2500 ㎎

폴리소르베이트 80 2000 ㎎

인산2수소나트륨2수화물 200 ㎎

멸균 정제수 적량

1N 염산 또는 1N 수산화나트륨 적량

pH 6.0

프로스타글란딘 F2α 유도체 및 첨가물의 종류 및 양을 적절하게 변경함으로써 원하는 점안제를 얻을 수 있다.

2) 안연고 100 g 중

프로스타글란딘 F2α 유도체 O.1 g

유동 파라핀 20 g

백색 바셀린 77.9 g

정제 라놀린 2 g

프로스타글란딘 F2α 유도체 및 첨가물의 종류 및 양을 적절하게 변경함으로써 원하는 안연고를 얻을 수 있다.

[약리 시험]

프로스타글란딘 F2α 유도체의 새로운 의약 용도를 발견하기 위해서 래트 태아 망막신경세포를 이용하여 프로스타글란딘 F2α 유도체의 글루타민산 유발 망막신경 세포사에 대한 망막신경세포 보호 작용을 평가 검토하였다.

또한, 피검 화합물인 프로스타글란딘 F2α 유도체로서 16-페녹시-15-데옥시15,15-디플루오로-17,18,19,20-테트라노르프로스타글란딘 F2α를 사용하였다.

(1) 망막신경세포의 단리 배양

임신 SD 래트를 전신 마취 하에서 개복하여 자궁을 행크스 평형 염 용액(Hanks's Balanced Salt Solution, HBSS)이 들어 있는 샤알레 속으로 옮겼다. 자궁으로부터 래트 태아를 적출하고, 래트 태아의 안구를 꺼내었다. 실체 현미경 하에서 그 안구로부터 망막을 적출하여 의과용 메스로 미세하게 잘랐다. 또한, 망막을 세포 레벨까지 미세하게 하여 나일론 메쉬[No.305 NBC 고교(주) 제조]를 통해 세포의 덩어리를 제거하고 투과물을 1000 rpm으로 4분간 원심분리하였다. 상청을 제거하고, 남은 세포에 적량의 10% 소 태아 혈청(fetal bovine serum, FBS) 함유 개변 이글 배지(Modified Eagle's Medium, MEM)을 첨가하여 현탁시켰다. 혈구 계산판으로 세포수를 센 후, 10% FBS 함유 MEM 배지를 첨가하여 세포수 0.8×10⁶ cells/㎖의 세포 현탁액을 얻었다. 세포 현탁액을 80 ㎕씩 폴리에틸렌이민 코팅 플라스틱 디스크에 파종하여 인큐베이터(37℃·5% CO₂)에 정치시켰다. 배지 교환은 세포 파종일을 배양 첫 번째 날로 하여 짝수 번째 날에 행하였다. 또한, 4일째까지는 10% FBS 함유 MEM 배지를 사용하고, 8일째 이후는 10% 말 혈청(Horse Serum, HS) 함유 MEM 배지를 사용하였다. 단, 6일째는 증식성 세포를 제거하기 위해서 시타라빈(Ara-C) 함유 배지(10% FBS 함유 MEM 배지 중 1.5×10^-5 M) 6 ㎖를 사용하였다.

(2) 피검 화합물 함유 HS 함유 MEM 배지의 조제

피검 화합물 2 ㎎을 100% 에탄올에 용해하고, HS 함유 MEM 배지로 순차 희석하여 0.1 nM, 1 nM, 10 nM 및 100 nM의 피검 화합물 함유 HS 함유 MEM 배지를 조제하였다.

(3) 피검 화합물 함유 혈청 비함유 MEM 배지의 조제

피검 화합물 2 ㎎을 100% 에탄올에 용해하고, 혈청 비함유 MEM 배지로 순차 희석하여 0.1 nM, 1 nM, 10 nM 및 100 nM의 피검 화합물 함유 혈청 비함유 MEM 배지를 조제하였다.

(4) 세포사 평가

배양 10일째, 세포를 파종·배양한 플라스틱 디스크를 피검 화합물 함유 HS 함유 MEM 배지로 옮겨 24시간 인큐베이트하였다(37℃·5% CO₂). 플라스틱 디스크를 1 mM 글루타민산 함유 혈청 비함유 MEM 배지로 옮겨 10분간 인큐베이트한 후, 계속해서 피검 화합물 함유 혈청 비함유 MEM 배지로 옮겨 1시간 인큐베이트하였다(37℃·5% CO₂). 세포를 1.5% 트립판 블루액으로 10분간 염색한 후, 10% 포르말린 고정액을 첨가하여 세포를 고정하였다. 생리식염수로 세정한 후, 도립형 현미경 하에서 염색 세포 및 비염색 세포를 계수하였다.

또한, 상기 피검 화합물 함유 HS 함유 MEM 배지 대신에 HS 함유 MEM 배지를 사용하고, 피검 화합물 함유 혈청 비함유 MEM 배지 대신에 혈청 비함유 MEM 배지를 사용하며, 그 이외에는 상기와 동일한 시험을 실시한 것을 기제 투여군으로 하였다.

또한, 상기 피검 화합물 함유 HS 함유 MEM 배지 대신에 HS 함유 MEM 배지를 사용하고, 피검 화합물 함유 혈청 비함유 MEM 배지 대신에 혈청 비함유 MEM 배지를 사용하면서 글루타민산 함유 혈청 비함유 MEM 배지에 의한 처리를 실시하지 않으며, 그 이외에는 상기와 동일한 시험을 실시한 것을 무처치군으로 하였다.

생존율을 하기의 계산식에 기초하여 산출하였다.

(5) 결과 및 고찰

도 1에 도시한 바와 같이, 글루타민산 처치에 의해 망막신경세포는 기제 첨가군에서 생존율 약 4할의 세포사가 인지되었지만, 배지로서 피검 화합물 함유 HS 함유 MEM 배지(0.1 nM∼100 nM)를 사용하였더니 농도 의존적으로 글루타민산 유발 망막신경 세포사가 억제되어 망막신경세포 보호 작용이 확인되었다.

도 1은 글루타민산 첨가에 의한 피검 화합물을 이용한 경우의 각 농도의 생존율을 나타낸 그래프이다.

Claims

프로스타글란딘 F2α 유도체를 유효 성분으로서 함유하는 망막신경세포 보호제.
제1항에 있어서, 프로스타글란딘 F2α 유도체가 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체인 망막신경세포 보호제.
제2항에 있어서, 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체가 15,15-디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체인 망막신경세포 보호제.
제3항에 있어서, 15,15-디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체가 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 그의 염인 망막신경세포 보호제.

화학식 1

[상기 식에서 R은 히드록시알킬기, 포르밀기, 카르복시기, 알콕시카르보닐기, 아릴옥시카르보닐기, 아미노카르보닐기, 알킬아미노카르보닐기 또는 아릴아미 노카르보닐기를 나타내고, R이 아릴옥시카르보닐기 또는 아릴아미노카르보닐기인 경우, 그 아릴 부분은 치환기를 갖고 있어도 좋다.]
제4항에 있어서, 화학식 1에 있어서 R이 카르복시기 혹은 그 염기 또는 알콕시카르보닐기를 나타내는 망막신경세포 보호제.
제2항에 있어서, 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체가 15-모노플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체인 망막신경세포 보호제.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 망막신경세포가 시세포, 쌍극세포, 시신경절세포, 수평세포 또는 아마크린세포인 망막신경세포 보호제.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 안질환의 예방 또는 치료를 위해 사용하는 망막신경세포 보호제
환자에게 프로스타글란딘 F2α 유도체를 유효량 투여하는 것을 포함하는 망막신경세포의 보호 방법.
제9항에 있어서, 프로스타글란딘 F2α 유도체가 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체인 망막신경세포의 보호 방법.
제10항에 있어서, 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체가 15,15-디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체인 망막신경세포의 보호 방법.
제11항에 있어서, 15,15-디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체가 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 그의 염인 망막신경세포의 보호 방법.

화학식 1

[상기 식에서 R은 히드록시알킬기, 포르밀기, 카르복시기, 알콕시카르보닐기, 아릴옥시카르보닐기, 아미노카르보닐기, 알킬아미노카르보닐기 또는 아릴아미노카르보닐기를 나타내고, R이 아릴옥시카르보닐기 또는 아릴아미노카르보닐기인 경우, 그 아릴 부분은 치환기를 갖고 있어도 좋다.]
제12항에 있어서, 화학식 1에 있어서 R이 카르복시기 혹은 그 염기 또는 알콕시카르보닐기를 나타내는 망막신경세포의 보호 방법.
제10항에 있어서, 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체가 15-모노플루오로 프로스타글란딘 F2α 유도체인 망막신경세포의 보호 방법.
제9항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 망막신경세포가 시세포, 쌍극세포, 시신경절세포, 수평세포 또는 아마크린세포인 망막신경세포의 보호 방법.
환자에게 프로스타글란딘 F2α 유도체를 치료상 유효한 양으로 투여하는 것을 포함하는 망막신경세포 장해가 관여하는 안질환의 예방 또는 치료 방법.
제16항에 있어서, 프로스타글란딘 F2α 유도체가 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체인 안질환의 예방 또는 치료 방법.
제17항에 있어서, 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체가 15,15-디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체인 안질환의 예방 또는 치료 방법.
제18항에 있어서, 15,15-디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체가 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 그의 염인 안질환의 예방 또는 치료 방법.

화학식 1

[상기 식에서 R은 히드록시알킬기, 포르밀기, 카르복시기, 알콕시카르보닐기, 아릴옥시카르보닐기, 아미노카르보닐기, 알킬아미노카르보닐기 또는 아릴아미노카르보닐기를 나타내고, R이 아릴옥시카르보닐기 또는 아릴아미노카르보닐기인 경우, 그 아릴 부분은 치환기를 갖고 있어도 좋다.]
제19항에 있어서, 화학식 1에 있어서 R이 카르복시기 혹은 그 염기 또는 알콕시카르보닐기를 나타내는 안질환의 예방 또는 치료 방법.
제17항에 있어서, 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체가 15-모노플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체인 안질환의 예방 또는 치료 방법.
제16항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 망막신경세포가 시세포, 쌍극세포, 시신경절세포, 수평세포 또는 아마크린세포인 안질환의 예방 또는 치료 방법.
망막신경세포 보호제를 제조하기 위한 프로스타글란딘 F2α 유도체의 용도.
제23항에 있어서, 프로스타글란딘 F2α 유도체가 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체인 용도.
제24항에 있어서, 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체가 15,15-디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체인 용도.
제25항에 있어서, 15,15-디플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체가 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 그의 염인 용도.

화학식 1

[상기 식에서 R은 히드록시알킬기, 포르밀기, 카르복시기, 알콕시카르보닐기, 아릴옥시카르보닐기, 아미노카르보닐기, 알킬아미노카르보닐기 또는 아릴아미노카르보닐기를 나타내고, R이 아릴옥시카르보닐기 또는 아릴아미노카르보닐기인 경우, 그 아릴 부분은 치환기를 갖고 있어도 좋다.]
제26항에 있어서, 화학식 1에 있어서 R이 카르복시기 혹은 그 염기 또는 알콕시카르보닐기를 나타내는 용도.
제24항에 있어서, 불소 함유 프로스타글란딘 F2α 유도체가 15-모노플루오로프로스타글란딘 F2α 유도체인 용도.
제23항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 망막신경세포가 시세포, 쌍극세포, 시신경절세포, 수평세포 또는 아마크린세포인 용도.
제23항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 망막신경세포 보호제는 망막신경세포 장해가 관여하는 안질환의 예방제 또는 치료제인 용도.