PT1863430E - Composição baseada em extractos vegetais de ajuga reptans para prevenir a queda de cabelo, estimular o crescimento de cabelo e regular a produção de sebo - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "Composição baseada em extractos vegetais de Ajuga reptans para prevenir a queda de cabelo, estimular o crescimento de cabelo e regular a produção de sebo" 0 presente invento refere-se a uma composição baseada em extractos vegetais de Ajuga reptans para estimular crescimento de cabelo.

Em particular, o presente invento refere-se a preparações baseadas em extractos vegetais de Ajuga reptans para a prevenção e tratamento de alopecia androgenética. É sabido que o pêlo e os cabelos são filamentos queritanizados de uma derivação epidérmica caracteristica de todos os mamíferos incluindo humanos. A vida e o crescimento de pêlos e cabelos em mamíferos são regulados pelo ciclo de proliferação dos queratinócitos presentes na matriz do bolbo enquanto a pigmentação do cabelo deriva da presença de melanócitos entre as células da matriz. Apesar do crescimento do cabelo ser relativamente rápido em mamíferos, desde 0,1 a 0,4 mm por dia em seres humanos, não dura indefinidamente. Com excepção de alguns casos específicos pode continuar durante vários anos sendo a sua duração geralmente curta tipicamente de 2 a 5 meses.

Na fase de crescimento activo (anagénese) as células da matriz em proliferação rápida produzem novo material piloso. A fase de anagénese é por sua vez dividida em seis etapas relativas à maturidade do bolbo, papila e crescimento do cabelo. A fase de crescimento mais longa é a anagénese VI. Em média, 86% do cabelo do couro cabeludo está em anagénese durante um período estimado entre 4 a 8 anos.

Tal é seguido por um período de regressão da matriz em que esta perde contacto directo com a papila dérmica que interrompe o fluxo de nutrientes e oxigénio necessários para a 2 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ fase de crescimento do cabelo (catagénio). Nesta fase tanto o bolbo capilar como a papila dérmica permanecem ligados através de uma lâmina basal e migram lentamente através da superfície da pele. Aproximadamente 1% do cabelo no couro cabeludo está na fase de catagénio durante um periodo de cerca de duas semanas. Na fase terminal do ciclo do cabelo (telogénio) o bolbo capilar adquire uma estrutura em forma de bastonete e desliga-se da papila e esta "regride". A papila e o bolbo continuam a mover-se em direcção à superfície da pele atingindo quase o implante do músculo erector do cabelo. O fio do cabelo pode permanecer nesta situação durante um período de tempo mais ou menos longo mas pode ser facilmente puxado e cair. Antes de cair ocorre diferenciação do folículo piloso dando origem a um novo ciclo. Cerca de 13% do cabelo no couro cabeludo está na fase telogénio durante cerca de 3-4 meses. 0 tipo de cabelo produzido pelo folículo pode mudar e depende dos sinais do tipo hormonal presentes na derme subjacente, em particular hormonas esteróides originárias das gónadas e nalguns casos das glândulas supra-renais, tal como testosterona. Esta hormona ou o seu metabolito mais activo, 5a di-hidrotestosterona, causa durante a puberdade o aparecimento de características sexuais secundárias tal como crescimento de pêlos na região púbica e nas axilas e nos homens, barba com a transformação de penugem em pêlos terminais. Revelou-se recentemente que nos homens afectados por alopecia androgenética ou calvície o cabelo terminal transforma-se em penugem. É bem sabido que a calvície ou alopecia androgenética é o tipo de calvície que afecta a maioria das pessoas que sofre de perda de cabelo. Este problema consiste numa miniaturização e superficialização progressiva dos foliculos capilares. Existe predisposição genética para a alopecia androgenética. As enzimas envolvidas na conversão e recolha de hormonas androgénicas são as mais provavelmente transmitidas, i.e.: as duas formas iso-enzimáticas de 5a-redutase (tipo 1 e tipo 2), p 450 aromatase e receptor citosólico de androgénios. 3 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ

Em homens com uma predisposição para alopecia androgenética, a perda de cabelo pode começar a qualquer momento após a puberdade quando os níveis séricos de androgénio estão a aumentar, consequentemente são necessárias para a expressão de calvície androgenética tanto a testosterona como a 5a-redutase que é capaz de converter testosterona em di-hidrotestosterona. Nos homens a dht parece ser a mais importante para a alopecia androgenética, enquanto nas mulheres a DHEA (de-hidroepiandrosterona) produzida pelas glândulas supra-renais com uma extensão de 95% e a androstenediona produzida 50% pelos ovários e 30% pelas glândulas supra-renais. Estas hormonas têm uma actividade androgénica bastante baixa, contudo ao nível periférico há uma quantidade mais elevada que é convertida a hormonas com uma actividade androgénica. A DHT é nociva para os folículos pilosos do couro cabeludo com predisposição genética. É esta hormona que transforma a penugem em cabelo terminal nos adolescentes. Também se verificou que outras transformações desta hormona causam seborreia. A enzima 5a-redutase é abundante no couro cabeludo para favorecer a acumulação de DHT. Sob acção da DHT, os folículos pilosos tornam-se cada vez mais pequenos e consequentemente os cabelos gerados são também mais pequenos e parecem muito menos numerosos. A produção de pigmento diminui dando a impressão de uma falta de cabelo mesmo que este esteja presente numa forma mais fina e sem pigmento. A fase de crescimento (anagénese) também ficou mais curta e consequentemente o cabelo é menos comprido.

Uma reacção auto-imune do folículo complica a situação, iniciada e complicada pela DHT na qual o sistema imunitário identifica o folículo danificado pela DHT como um corpo estranho e tenta eliminá-lo. Algumas formas de alopecia caracterizam-se pela presença de infiltrados inflamatórios nas regiões dérmicas perifoliculares. Um estudo efectuado em bolbos capilares obtidos de homens afectados por alopecia androgenética revelou, nas zonas de transição entre as áreas com e sem cabelo, a presença de desgranulação mastocitária e 4 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ infiltração leucocitária presente inicialmente na área da protuberância, uma presumível área de residência de células estaminais do sistema piloso com subsequente extensão à região peribulbar. 0 resultado final do processo flogístico é uma transformação fibrótica e cicatricial do folículo com perda das células estaminais e consequentemente da capacidade de recrescimento do cabelo. Após alguns anos, os folículos deixam de produzir cabelo terminal produzindo um cabelo denominado "penugem", i.e. semelhante ao de bebés recém-nascidos não pigmentado pela cor natural do cabelo e extremamente pequeno, quase invisível. 0 que parece ser importante não é a quantidade de testosterona presente no sangue mas as concentrações, ao nível pilossebáceo, das enzimas necessárias para converter os androgénios mais fracos a androgénios mais fortes e também a concentração do receptor de androgénio. A 5a-redutase de tipo 1 é o tipo cutâneo e localiza-se principalmente nas glândulas sebáceas, no fígado, secundariamente nos queratinócitos da pele e folículo, na papila dérmica e nas glândulas sudoríparas. A 5a-redutase de tipo 2 localiza-se no epidídimo, vesículas seminais, próstata e cútis dos órgãos sexuais do feto, na bainha epitelial dos folículos pilosos e nos fibroblastos da pele dos órgãos sexuais. São inibidores conhecidos de tipo 1 o ácido azeláico e os seus derivados; os inibidores de tipo 2 são: finasteride e Ru5884, enquanto os inibidores de ambos são: duasteride, cobre e Revivogen (uma mistura de substâncias naturais entre as quais o picnogenol).

Outros inibidores descritos na literatura são: progesterona, zinco, ácido gama linoléico, beta-sitosterol, urtiga, chá verde, palmeira anã e alguns polifenóis.

Algumas destas substâncias vegetais tais como beta-sitosterol produzem a sua acção interactuando com a 5 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ 5a-redutase em substituição da testosterona, tal como outros inibidores competitivos tais como finasteride e duasteride.

As preparações baseadas em princípios activos de origem sintética são presentemente utilizadas no tratamento e prevenção de perda de cabelo, tal como por exemplo, minoxidil ou finasteride cujo consumo causa muitas vezes a ocorrência de efeitos secundários que podem ser também bastante significativos.

Alternativamente estão no mercado preparações de origem vegetal cujo consumo, apesar de não apresentar efeitos secundários, não permite a obtenção de resultados interessantes de um ponto de vista estético. 0 presente invento deriva portanto da necessidade de encontrar preparações para estimular o trofismo fisiológico dos bolbos capilares e cuja administração não tenha as desvantagens das preparações da especialidade conhecidas. 0 requerente estabeleceu uma erva seleccionada da qual é possível extrair princípios vegetais que podem ser aplicados para prevenir e abrandar a perda de cabelo através de uma acção protectora sob algumas das componentes do bolbo capilar.

Esta planta seleccionada consiste de Ajuga reptans, uma espécie que pertence à família Labiatae, típica das áreas com erva da Europa, Ásia Ocidental e África. A Ajuga reptans tem sido bem conhecida como planta medicinal desde tempos antigos principalmente para a sua utilização como um agente anti-reumático, tónico, adstringente e como um narcótico ligeiro ou agente anti-hemorrágico e cicatrizante. 0 efeito anti-hemorrágico foi demonstrado experimentalmente (Breschi et al, 1992) e atribuído a um efeito vasoconstritor mediado por α-adrenoreceptores basais. São igualmente conhecidas actividades antipiréticas, 6 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ antibacterianas (Cantrell CL, 1999), anti-helmínticas (Kuria et al, 2002) e de indução de hipoglicemia (Hilaly JE, Lyoussi B. 2002) .

Por a Ajuga ser também conhecida pelas suas propriedades de "repelência de insectos", causou um determinado interesse no campo da agricultura biológica.

Um dos objectivos gerais do presente invento consiste em fornecer composições baseadas em extractos vegetais de uma erva seleccionada que são activos proporcionando uma acção estimulante para crescimento de cabelo.

Outro objectivo do presente invento consiste em fornecer composições com base em extractos vegetais ou princípios activos capazes de prevenir ou tratar alopecia androgenética e deflúvio telogénico.

Um objectivo adicional consiste em proporcionar princípios activos de natureza vegetal que, quando consumidos oralmente ou aplicados localmente proporcionam uma acção estimulante sobre o bolbo capilar sem causar efeitos secundários significativos nos indivíduos tratados.

Tendo em vista os objectivos acima especificados e de acordo com um primeiro aspecto do presente invento, pretende-se a utilização de um extracto de Ajuga reptans para a produção de uma composição ou preparação para estimular crescimento de cabelo, tal como especificado na reivindicação 1 anexa. indicam-se nas reivindicações subsequentes características e aspectos adicionais do invento.

De acordo com uma concretização do invento, proporciona-se a utilização de um extracto de Ajuga reptans para a produção de uma composição ou preparação para a prevenção ou tratamento de alopecia androgenética e deflúvio telogénico. 7 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ A Ajuga reptans é uma planta que produz uma elevada quantidade de compostos que podem ser atribuídos a diferentes grupos químicos. Entre estes encontram-se os iridóides, estruturas de monoterpenos glicosilados que formam os princípios amargos, tal como harpagide e 8-0-acetil-arpagide. Além dos iridóides, na espécie Ajuga, antocianos e dois compostos pertencentes ao grupo dos flavonóides, neo-hesperidoside de Naringina e neo-hesperidoside de Apigenina.

Também se caracterizaram nas folhas de Ajuga reptans compostos pertencentes ao grupo das ecdisonas, triterpenos pentacíclicos com uma estrutura esteróide, em particular beta-ecdisona e Ajugalactona, aos quais se atribuiu uma actividade anti-apetite relativamente a insectos. Outros compostos com uma actividade biológica análoga são os derivados do Clerodano, em particular 14,15-di-hidroajugareptansina, 3a-hidroxiajugavensina B, 3p-hidroxiajugamarina F4 e ajugareptansina. A Ajuga reptans também se caracteriza pela sua capacidade de produzir fenilpropanóides glicosilados, substâncias hidrossolúveis que pertencem a um grupo muito vasto de metabolitos secundários habitualmente denominados glucosídeos de feniletanol. Estes são compostos naturais solúveis em água e largamente distribuídos pelos órgãos das plantas superiores.

De um ponto de vista estrutural, eles caracterizam-se pela presença de um derivado do ácido cinâmico e de um derivado de feniletanol ligados à mesma molécula de beta-glucopiranose, um com uma ligação éster e o outro com uma ligação glicósido. Outras moléculas de sacarídeo tais como ramnose, xilose e apiose, estão muitas vezes ligadas a glucose que funciona como uma ponte entre as duas estruturas aromáticas.

Os fenilpropanóides estão também classificados como glucosídeos de fenilpropanóide devido à presença na molécula de uma estrutura C6-C3 tal como ácido cafeico, ferúlico ou cinâmico ou como feniletanóides devido à presença simultânea de um derivado de feniletanol ou um produto análogo. Como a 8 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ parte de feniletanol, contudo, deriva por biossíntese de uma estrutura fenilpropanóica é presentemente preferível definir essas estruturas como fenilpropanóides, mas devem considerar-se as diferentes denominações como sinónimas.

Os ácidos ligados ao açúcar (ácido cinâmico, cafeico, ferúlico, metilcumárico, etc.) são quase sempre na forma trans e raramente na forma cis; os açúcares apiose, arabinose, galactose e glucose têm sempre uma ligação β-D glicosídica, enquanto a ramnose e a xilose têm uma ligação α-D glicosídica.

Com base no número e tipo de açúcares ligados, os glucosídeos de fenilpropanóides dividem-se em monossacáridos, dissacáridos e trissacáridos. Os monossacáridos têm uma molécula de glucopiranose entre a cadeia de feniletanol e o ácido ligado com uma ligação éster; os glucosídeos de dissacárido derivam dos monossacáridos e classificam-se de acordo com o açúcar ligado à glucose.

Contudo, o grupo mais vastamente representado na natureza continua a ser o dos trissacáridos, que contêm ramnose como uma segunda unidade glucídica à qual se liga uma terceira, geralmente glucose, xilose, apiose, galactose, lixose ou ramnose. Os ácidos aromáticos mais frequentemente ligados ao C-4 de glucose são o ácido cafeico, ferúlico, cinâmico.

Os autores verificaram agora que a actividade de prevenção e/ou tratamento da perda e/ou enfraquecimento do cabelo e a estimulação do bolbo capilar refere-se principalmente à presença de glucosídeos fenilpropanóides.

Tipicamente, a sua estrutura química caracteriza-se pela presença de um derivado do ácido cinâmico e um derivado de 2,4-di-hidroxifeniletanol, ambos ligados à mesma molécula de D-glucopiranose através de uma ligação éster e de uma ligação glicosídica, respectivamente. Podem ligar-se outras moléculas de sacárido tais como glucose, ramnose, xilose e apiose, individualmente e em diferentes posições em sequência com a 9 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ molécula de glucose que actua como uma ponte entre as duas estruturas aromáticas.

De acordo com um aspecto do presente invento, proporciona-se a utilização de glucosideos fenilpropanóides para a produção de uma composição ou preparação para prevenir ou tratar perda de cabelo ou estimular crescimento de cabelo. Os glucosideos fenilpropanóides preferidos são Fenilpropanóide A e Fenilpropanóide B com a seguinte fórmula:

R=H: Fenilpropanóide A C35H46O20 PM = 786,738 R=CH3: Fenilpropanóide B C36H48O20 PM = 800, 765 O Fenilpropanóide A definido como Teupolioside β-(3,4-άϊ-hidroxifenil)etil-O-a-L-ramnopiranosil (1"—3')-Ο-β-D-galactopiranosil (1'"-2")-β-D-(4'-O-cafeoil)-glucopiranosídeo, é particularmente preferido.

Os glucosideos fenilpropanóides podem ser vantajosamente obtidos a partir de um extracto de Ajuga reptans.

De acordo com outro aspecto do invento, proporciona-se um método para a preparação de um produto de homogeneização ou extracto vegetal de uma planta Ajuga reptans compreendendo a 10 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ cultura vegetal de linhas celulares provenientes de um tecido explantado da referida planta.

De acordo com uma concretização, de modo a obter um extracto de Ajuga reptans, cresce-se o tecido caloso evitando a sua diferenciação. Obtêm-se culturas que não readquirem ou reproduzem a morfologia típica da planta mas que mantêm a potencialidade de produzir metabolitos secundários típicos. Variando a composição dos meios de cultura é possível seleccionar linhas celulares com diferentes características bioquímicas e metabólicas. A conservação de características embrionárias ocorre principalmente por acção de substâncias hormonais tais como, por exemplo, auxina e citoquinas também denominadas "factores de crescimento" produzidos na natureza pelas próprias plantas e capazes de manter a actividade meristemática em vida. As culturas também requerem tipicamente um meio de cultura adequado que tenha em consideração a necessidade metabólica das células, a perda de capacidade fotossintética e condições ambientais adequadas. A geração e fase de selecção das linhas celulares vegetais também dependem do número de explantes efectuados dado que, apesar do procedimento de esterilização, a maioria dos explantes, entre 70% a 80% estão poluídos e são eliminados de forma conveniente. Após um período de tempo adequado e tipicamente igual a cerca de 21 dias de conservação no escuro a uma temperatura entre 20 e 35 °C, preferentemente 28 °C pode observar-se a produção de tecido caloso indiferenciado a partir de alguns fragmentos de explantes. De modo a obter multiplicação do calo, transfere-se o tecido para uma superfície mais ampla com um novo meio e tipicamente, após 7-20 dias adicionais, preferentemente após 14 dias, transferem-se as partes do calo que se desenvolveram (são subcultivadas) para meio fresco.

Após obtenção das linhas em crescimento rápido, mas ainda extremamente variáveis do ponto de vista tanto de morfologia como de produtividade, é possível seleccionar linhas celulares diferentes mas com características uniformes ao longo do tempo. 11 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ

Para a produção de quantidades razoáveis de metabolitos é então necessário transferir as linhas seleccionadas para meio líquido, i.e, prossegue-se com culturas em suspensão contidas em frascos de laboratório ou em culturas em suspensão.

Podem então cultivar-se em suspensão linhas seleccionadas pelas suas propriedades de proliferação e metabólicas em frascos ou em biorreactores, garantindo a produção de quantidades adequadas para o estudo experimental dos produtos.

Para a produção quantitativa a uma escala industrial de princípios activos vegetais individualizados, foi desenvolvida uma técnica que visa a preparação de biorreactores com volume elevado nos quais se suspendem culturas celulares seleccionadas em meio líquido e que têm a possibilidade de produzir grandes quantidades de biomassa. A figura 1 anexa ilustra uma esquematização do processo de extracção de acordo com uma concretização do presente invento.

Relativamente à figura 1, ilustra-se um gráfico de operação de uma concretização de extracção que compreende as fases preliminares de explante de um tecido vegetal adequado, preferentemente consistindo de tecido caloso 1, esterilização e cultura 2 das células vegetais a partir de tecido caloso explantado, selecção em meio sólido 3, aumento de biomassa no líquido 4, inseminação num biorreactor 5, homogeneização da suspensão celular 6, filtração da suspensão e cromatografia do filtrado 7, produção do extracto bruto 8, purificação do princípio vegetal principal 9.

Este método de extracção permite a preparação de produtos diferenciados com características específicas de pureza e titulação.

Nomeadamente, o referido método permite a identificação 12 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ I) ο produto de homogeneização de Ajuga reptans ou o produto de homogeneização de células inteiras que mantém intactos os princípios tróficos e os nutrientes da célula vegetal; II) o extracto purificado de Fenilpropanóide ou uma mistura caracterizada de fenilpropanóides com um título superior a 60%; III) Fenilpropanóides puros correspondentes essencialmente a Fenilpropanóide A com um título superior a 90%.

De acordo com uma primeira concretização, obtém-se o produto de homogeneização de Ajuga reptans a partir de culturas celulares de Ajuga reptans cultivadas de acordo com o método anteriormente descrito. O produto de homogeneização total obtido das células inteiras compreende uma composição rica em nutrientes simples e complexos, princípios activos caracteristicos, factores tróficos e água. O produto de homogeneização de Ajuga reptans baseia-se tipicamente em diferentes espécies activas, compreendendo polissacáridos, proteínas, lípidos e água. Os princípios activos que caracterizam principalmente o perfil de actividade do produto de homogeneização de Ajuga reptans compreendem principalmente antioxidantes não enzimáticos tais como fenilpropanóides, mas também glicoproteínas e a fracção de polissacáridos e água. A presença de fenilpropanóides exerce ao nível da pele efeitos anti-inflamatórios e inibição da enzima 5a-redutase.

Quando estão presentes fenilpropanóides em associação com os outros princípios activos anteriormente mencionados, também se verifica um forte efeito de hidratação acompanhado por uma actividade do tipo trófico capaz de activar as propriedades de reparação da pele. Como a pele é um órgão que é particularmente sensível ao stress oxidativo induzido por noxae, endogen e hexogen, o produto de homogeneização rico em substâncias com uma actividade antioxidante exerce uma actividade anti-inflamatória considerável. As glicoproteínas presentes no produto de homogeneização são capazes de 13 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ coordenar um vasto número de moléculas de água através das suas partes de glicosilação e esta capacidade depende estritamente do papel desempenhado na fase proliferativa da própria célula vegetal; há de facto uma melhoria na elasticidade das paredes celulares que favorece a distensão e crescimento celular e tal pode ter implicações funcionais também ao nível cutâneo principalmente em todas as situações nas quais é útil estimular os processos de reparação tecidular. Devido à sua natureza química e papel biológico os polissacáridos presentes no produto de homogeneização são capazes de coordenar a água, mimetizando o efeito do ácido hialurónico, do dermatan sulfato e do sulfato de condroitina caracteristicamente contidos na pele animal. A fracção de polissacáridos também contém glucanos aos quais se atribuem propriedades imunoestimulantes.

De acordo com uma concretização, o extracto purificado em fenilpropanóide é produzido por uma linha celular de Ajuga reptans progressivamente seleccionada. As células provenientes da cultura celular são partidas mecanicamente e filtradas. 0 filtrado é convenientemente extraído de fenilpropanóides em resina de afinidade e eluído com uma solução hidro-alcoólica.

De acordo com uma concretização preferida os glucósidos de fenilpropanóides são extraídos dos tecidos de Ajuga reptans.

Verificou-se que o produto de homogeneização ou extracto vegetal de Ajuga reptans exerce um efeito de regulação sinérgica do trofismo de algumas estruturas epiteliais com especial referência às glândulas sebáceas e folículos pilosos. Nomeadamente, a administração do extracto ou produto de homogeneização sob a forma de uma composição determina uma redução na excreção de sebo com efeitos benéficos sobre a acne e a seborreia e uma regulação do crescimento fisiológico de pêlo e cabelo com um resultado favorável sobre a alopecia androgenética, o deflúvio telogénico, a hipertricose e o hirsutismo. 14 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ Ο extracto ou produto de homogeneização de Ajuga reptans utilizado no âmbito do invento pode ser tipicamente alcoólico, hidro-alcoólico, glicérico ou acetónico sendo preferida a utilização do hidro-alcoólico ou acetónico.

Tem de facto sido observado que com a extracção é possível obter um produto final rico em fenilpropanóides e em substâncias vegetais activas na inibição selectiva da enzima 5a-redutase, altamente expressa ao nível dos folículos. A composição do invento pode ser utilizada em aplicações tópicas ou sistémicas e provou ser eficaz na prevenção e/ou tratamento de problemas causados pela produção excessiva de sebo tais como acne, seborreia, furunculose e problemas causados pela actividade de 5a-redutase, tais como alopecia androgenética, deflúvio telogénico, enfraquecimento do cabelo e também hipertricose e/ou hirsutismo. A composição do invento é particularmente adequada para o tratamento de alopecia androgenética.

As composições para aplicação tópica do invento podem estar na forma líquida tal como loções e soluções e também na forma sólida, tais como géis, cremes, unguentos, pomadas, máscaras e pachos transdérmicos com uma libertação prolongada.

As composições para aplicação local do invento podem compreender convenientemente aditivos habitualmente utilizados em preparações cosméticas ou farmacêuticas para utilização local tais como conservantes, agentes bacterianos, estabilizantes, agentes emulsionantes, tampões, corantes e outros excipientes habitualmente utilizados em técnicas de preparação cosméticas e farmacêuticas.

No caso de uma formulação líquida, os princípios activos sinérgicos do invento podem ser convenientemente dissolvidos num veículo líquido cosmética/farmaceuticamente aceitável tal como água, álcool, hidro-álcool, solução glicérica e outros tipos adequados para aplicação local. 15 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ A título ilustrativo, as composições do invento em forma líquida são preparadas por dissolução em água das fracções hidrossolúveis de extracto vegetal e em álcool das restantes fracções, combinando-se subsequentemente sob agitação as diferentes fracções. A mistura resultante pode ser então tamponada a uma gama de pH convenientemente seleccionada entre 5 e 7 de modo a ser compatível com o pH da pele e pode ser então filtrada e embalada em recipientes adequados tais como garrafinhas ou frasquinhos. A composição para utilização local do invento utiliza-se para aplicações numa quantidade eficaz directamente na região do corpo afectada a ser tratada.

No tratamento de alopecia androgenética, por exemplo, aplica-se uma loção baseada nos princípios activos do invento directamente no couro cabeludo uma ou duas vezes por dia convenientemente em ciclos que duram 2-3 meses alternando com períodos de descanso.

De igual modo, pode aplicar-se uma composição sob a forma de um creme uma ou duas vezes por dia no rosto de um indivíduo afectado por seborreia ou acne, por exemplo, até à remissão do problema.

No caso de uma formulação sólida ou semi-sólida, os princípios activos sinérgicos do invento são dispersos em veículos cosmética/farmaceuticamente aceitáveis habitualmente utilizados para aplicação local. A aplicação da composição do invento sob a forma de um creme leva a uma redução na excreção de sebo por parte das glândulas sebáceas que é visível após alguns dias de tratamento assim como uma redução da oleosidade da superfície corporal tratada.

As composições do invento para utilização oral podem ser aplicadas sob a forma de comprimidos, cápsulas, soluções 16 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ líquidas e em formas para a libertação controlada dos princípios activos. A preparação para administração oral do invento obtém-se através de técnicas de preparação normal de produtos dietéticos e/ou farmacêuticos por adição de um ou mais veículos fisiologicamente aceitáveis aos princípios activos sinérgicos. Os veículos fisiologicamente aceitáveis são então utilizados numa mistura com conservantes, estabilizantes, excipientes, agentes de transporte e aromatizantes fisiologicamente adequados.

Na composição do invento, os princípios activos sinérgicos do invento estão presentes em quantidades variáveis, que variam tipicamente entre 0,001% em peso a 10% em peso com maior preferência desde 0,1 a 5% em peso.

De acordo com outro aspecto do invento, proporciona-se um método de tratamento cosmético que compreende a aplicação local ao nível do couro cabeludo ou do rosto de uma quantidade eficaz de uma composição descrita anteriormente.

Proporcionam-se os exemplos seguintes a título meramente ilustrativo do presente invento e não devem ser tomados como limitativos do âmbito de protecção, tal como indicado nas reivindicações anexas. EXEMPLO 1

Integrador sob a forma de comprimido adequado para reduzir os danos de stress oxidativo devidos a raios solares ao nível das estruturas de queratina:

Cada comprimido contém:

Pantotenato de cálcio 9 mg d-Biotina 0,150 mg

Ajuga reptans 5 mg

Beta-caroteno 7,2 mg

Ubidecarenona 10,0 mg 17 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ

Zinco (em quelato de aminoácido) 7, 5 mg Cobre (em quelato de aminoácido) 1,20 mg Ácido fólico 0,30 mg Celulose microcristalina 17,0 mg Fosfato de cálcio dibásico di-hidratado 62,0 mg Hidroxipropilmetilcelulose 80,0 mg Estearato de magnésio 7,90 mg Dióxido de silício 1,70 mg EXEMPLO 2

Integrador dietético sob a forma de comprimido com base em Ajuga, Boehmeria nivea e um dador de enxofre (metionina):

Cada comprimido contém: Metionina 300 mg Pantotenato de cálcio 9 mg d-Biotina 0,150 mg Ajuga reptans 5 mg Zinco (em quelato de aminoácido) 7,5 mg Cobre (em quelato de aminoácido) 1,20 mg Manganês (em quelato de aminoácido) 2,25 mg Vitamina B6 3,0 mg Ácido fólico 0,30 mg Celulose microcristalina 17,0 mg Fosfato de cálcio dibásico di-hidratado 62,0 mg Hidroxipropilmetilcelulose 80,0 mg Estearato de magnésio 7,90 mg Dióxido de silício 1,70 mg EXEMPLO 3

Integrador sob a forma de comprimido baseado em fenilpropanóides de Ajuga reptans, com uma actividade anti- envelhecimento. Cada comprimido contém: Pantotenato de cálcio 9 mg d-Biotina 0,150 mg 18 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ

Fenilpropanóide A+B 2,5 mg Zinco (em quelato de aminoácido) 7,5 mg Cobre (em quelato de aminoácido) 1,20 mg Ácido fólico 0,30 mg Celulose microcristalina 17,0 mg Fosfato de cálcio dibásico di-hidratado 62,0 mg Hidroxipropilmetilcelulose 80,0 mg Estearato de magnésio 7,90 mg Dióxido de silicio 1,70 mg EXEMPLO 4

Integrador particularmente adequado para alopécia androgenética e deflúvio telogénico em mulheres na perimenopausa e na menopausa: Cada comprimido contém: Pantotenato de cálcio 9 mg d-Biotina 0,150 mg

Isoflavonas de soja (genistelna e daidzeina) 40 mg

Boehmeria nipononivea 100 mg Ajuga 2,5 mg Resveratrol 0,05 mg Zinco (em quelato de aminoácido) 7,5 mg Cobre (em quelato de aminoácido) 1,20 mg Ácido fólico 0,30 mg Celulose microcristalina 17,0 mg Fosfato de cálcio dibásico di-hidratado 62,0 mg Hidroxipropilmetilcelulose 80,0 mg Estearato de magnésio 7,90 mg Dióxido de silício 1,70 mg EXEMPLO 5 integrador sob a forma de comprimido adequado para a prevenção de alopécia androgenética de homens e mulheres:

Cada comprimido contém: 9 mg

Pantotenato de cálcio 863 430/PT 19 d-Biotina 0,150 mg Boehmeria nipononivea 200 mg Ajuga reptans 5 mg Quercetina 0,90 mg Taurina 200 mg Zinco (em quelato de aminoácido) 7,5 mg Cobre (em quelato de aminoácido) 1,20 mg Celulose microcristalina 90,0 mg Fosfato de cálcio dibásico di-hidratado 80,0 mg Hidroxipropilmetilcelulose 52,5 mg Estearato de magnésio 7,90 mg Dióxido de silício 1,70 mg EXEMPLO 6

Creme dermatológico para reduzir os danos no cabelo e bulbos pilosos de exposição a raios UV A composição compreende: Pantotenato de cálcio 9 mg d-Biotina 0,150 mg Ajuga reptans 20, 0 mg Macrogol cetoesteraril éter 5, 0 g Miristato de isopropilo 4,0 g Propilenoglicol 3, 0 g Glicerina 3,0 g Vaselina branca 11, 0 g Álcool cetoestearilico 9, 0 g Paraoxibenzoato de metilo 0,2 g Paraoxibenzoato de propilo 0, 02 g EDTA tetrassódico 0,1 g Água até perfazer 100 g 20 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ EXEMPLO 7

Loção útil para deflúvio telogénico de homens e mulheres para aplicação tópica:

Pantotenato de cálcio 30,0 mg d-Biotina 0,30 mg

Ajuga reptans 5,0 mg

Beta-glucano 0,50 mg

Fitotocotrienóis 20 mg

Extracto de sementes de toranja 30 mg

Edta dissódico 3,0 mg Óleo de castor hidrogenado PEG-40 30 mg

Perfume 6,0 mg Ácido cítrico 1,5 mg Álcool desnaturado do tipo C 1,5 g Água até perfazer 10 g EXEMPLO 8

Composição para uso tópico com base em Ajuga particularmente adequada para acção anti-inflamatória nos casos de acne e seborreia:

Pantotenato de cálcio 30 ,0 mg d-Biotina o, 30 mg Ajuga reptans 5, 0 mg Cetearet-22, Palmeth-2 5, 0 g Triglicerídeo caprílico/cáprico 5, 0 g Vaselina branca 2, 0 g Miristato de octildodecilo 3, 0 g Álcool cetilestearílico 2, 0 g Perfume o, 20 g Tocoferol concentrado o, 05 g 2-fenoxietanol e parabenos o, 6 g Ciclometicona 0, 05 g Propilenoglicol 3, 45 g Glicerina 3, 2 g Polímero reticulado de alquilacrilatos o, 60 g EDTA tetrassódico o, 10 g 21 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ

Aminometilpropanol 0,45 g Água até perfazer 100 g EXEMPLO 9

Composição para a aplicação local sob a forma de uma máscara extemporânea útil nos casos de hipertricose.

Ajuga reptans 20,0 mg Boehmeria nipononivea 8 g Tricloridrato de espermidina 2, 0 mg Pantotenato de cálcio 30, 0 mg d-Biotina 0,30 mg Alginato isagel FM até perfazer 100 g EXEMPLO 10

Gel solar para uso tópico baseado em Ajuga reptans:

Ajuga 20,0 mg

Pantotenato de cálcio 30,0 mg Álcool desnaturado 20,0 g EDTA dissódico 0,05 g

Glicerina 2,0 g

Betaina 0,5 g

Aristoflex 1,2 g

Parsol MCX 5,0 g

Parsol 1789 3,0 g

Eusolex 3,0 g

Butyrospermum parkii 2,0

Trimetilsililamodimeticona 0,5

Rosmarinum officinalis 0,1 g

Caroteno concentrado 0,01 g

Ciclopentaxiloxano 3,00% Água até perfazer 100 g 22 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ EXEMPLO 11

Creme dermatológico 100 g de creme contém: Ajuga reptans 0,1 g PEG 400 20, 0 g PEG 1500 15, 0 g PEG 4000 45, 0 g Álcool cetoestearilico 2, 0 g 2-fenoxietanol 0, 90 g Glicerina 4,0 g Parafina liquida 2, 0 g Água desmineralizada até perfazer 100 g EXEMPLO 12

Loção hidroalcoólica com Ajuga reptans e taurina

Uma dose de 5 ml contém: EDTA dissódico 3,0 mg

Taurina 100,0 mg

Ajuga reptans 5,0 mg Álcool a 95% 750,0 mg Água desmineralizada até perfazer 5,0 ml EXEMPLO 13

Loção hidroalcoólica com Ajuga reptans

Uma dose de 5 ml contém: 3.0 mg 2,5 mg 750.0 mg 5, 0 ml EDTA dissódico Fenilpropanóide A+B Álcool a 95% Água desmineralizada até perfazer 23 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ EXEMPLO 14

Gel fisiológico para uso tópico com Ajuga reptans. 100 g de gel contém:

Hidroxietilcelulose 0,5 g

Ajuga reptans 0,1 g

Cloreto de sódio 0,9 g

Propilenoglicol 3,0 g

Imidazolidinilureia 0,50 g

Metilcloroisotiazolinona 0,0009 g

Metilisotiazolinona 0,0003 g EDTA dissódico 0,05 g Água desmineralizada até perfazer 100 g EXEMPLO 15

Gel para ionoforese 100 de gel contém:

Hidroxietilcelulose 1,5 g

Ajuga reptans 0,1 g

Cloreto de potássio 4,5 g

Propilenoglicol 1,0 g

Imidazolidinilureia 0,40 g

Metilcloroisotiazolinona 0,0009 g

Metilisotiazolinona 0,0003 g EDTA dissódico 0,05 g Água desmineralizada até perfazer 100 g EXEMPLO 16

Analisou-se a composição em percentagem de produto de homogeneização de Ajuga reptans obtido de culturas celulares de tecido caloso de Ajuga reptans cultivado em biorreactores nos quais se suspendem as células em meio líquido para culturas de células vegetais. 24 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ

Composição

Fracção Teor (% p/p) Polissacáridos 6,89 Complexos fenilpropanóides 0,15 Proteínas 1, 71 Das quais glicoproteínas Não inferior a 20%, igual a 0,34% do total Lípidos 0, 76 Cinzas 0,31 Água 90,19 pH 4, 00 A água presente no produto de homogeneização está estritamente coordenada às moléculas de glicosilação e polissacáridos. A fracção lipidica extraída do produto liofilizado tem uma composição interessante que é indicada na tabela seguinte e é principalmente caracterizada por beta-sitosterol. A fracção ácida consiste principalmente de ácido palmítico, ácido oleico e ácido linoléico.

Composição em esterol 97,85 g/100 g Colesterol 4,05 g/100 g 24-Metilenocolesterol 2,92 g/100 g Campesterol 1,52 g/100 g Campestenol 1,00 g/100 g Estigmasterol 0,68 g/100 g Delta-7-campesterol 17,41 g/100 g Beta-sitosterol 70,52 g/100 g Sitostanol 1,67 g/100 g Delta-5,24-Estigmastadienol 0,20 g/100 g Delta-7-Avenasterol 0,81 g/ lOOg 25 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ

Composição acídica p/p Ácido caprínico 1,29 Ácido láurico 0,34 Ácido mirístico 0,61 Ácido pentadecanóico 0,36 Ácido palmítico 21, 68 Ácido palmitoléico 0, 47 Ácido esteárico 4,38 Ácido oleico 0^ oo oo Ácido linoléico 17, 62 Ácido linolénico 1,98 Ácido beénico 0, 41 Ácido linhoacético 0, 74

Determinação da humidade (70 °C) de uma amostra de produto de homogeneização de Ajuga reptans sem tratamento e neutralizado com arginina a 10%. A determinação da humidade foi efectuada numa mufla (modelo Memmert TV 500) a uma temperatura de 70 °C. Pesou-se aproximadamente 10 g de extracto de Ajuga reptans num gobelé de vidro calibrado numa balança analítica (Gibertini modelo E42) . Fechou-se então o gobelé hermeticamente com folha de alumínio e subsequentemente pesou-se. Colocou-se então numa mufla durante 48 horas a uma temperatura de 70°C. Após o tempo pré-estabelecido, pesou-se novamente o gobelé fechado hermeticamente com folha de alumínio.

Tipo de extracto Humidade a 70 SC (%)

Extracto de Ajuga reptans sem tratamento 70,24 Extracto de Ajuga reptans neutralizado a 64,45 pH 5,57 A neutralização do extracto de Ajuga reptans foi obtida por adição progressiva de uma solução de arginina (10% (p/p) até um valor de pH na gama de 5,50-5,60. 26 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ EXEMPLO 17

Formulação com produto de homogeneização de Ajuga reptans

Pode produzir-se facilmente um produto baseado em sistemas monofásicos, tais como géis, e sistemas bifásicos, tais como emulsões, já que se pode incluir facilmente o extracto de Ajuga reptans em ambos os tipos de formulação, também até 25% p/p. A formulação com o produto de homogeneização de Ajuga reptans, ao nivel de ensaio de laboratório, é de facto fácil de manusear e não necessita de expedientes mecânicos específicos, excepto para concentrações elevadas (superiores a 40%) .

Tolerância dermatológica O ensaio de penso efectuado em voluntários saudáveis confirmou que o produto não apresenta problemas relacionados com tolerância dermatológica. EXEMPLO 18

Efectuou-se um estudo para determinar a actividade de inibição in vivo de 5a-redutase em parte de um extracto total derivado de uma cultura celular de Ajuga reptans. O estudo foi efectuado por determinação dos níveis hemáticos de DHT (5a-di-hidrotestosterona) em ratos após administração do extracto em estudo. Estes níveis foram comparados tanto com níveis basais, como com os obtidos após administração de Finasteride, que representa actualmente o inibidor mais activo da enzima 5a-redutase, responsável pela transformação de testosterona na sua forma mais activa, DHT.

Materiais e métodos

Para o estudo da inibição in vivo de 5a-redutase, utilizaram-se ratos machos adultos Sprague-Dawley (Charles River Itália) com um peso corporal de 200-250 g. 27 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ

Os animais foram mantidos em condições padrão: a uma temperatura de 22/23 °C, com 65% de humidade relativa, expondo-os a ciclos de iluminação de 12 h de luz/12 h de escuridão.

Administrou-se aos ratos uma dieta padrão sob a forma de granulado (dieta padrão, Charles River), com água sem restrições.

Efectuaram-se as experiências de acordo com protocolos autorizados por Comité para o Cuidado e Utilização de Animais "Università degli Studi" de Milão. Os ensaios foram realizados em ratos, efectuados através do plexo retro-orbital, imediatamente antes do tratamento farmacológico (t0) e subsequentemente após 3, 6 e 8 horas da administração. A administração das substâncias em estudo foi efectuada oralmente.

Em correspondência com cada ensaio nos animais tratados, efectuaram-se também ensaios em animais não tratados para determinar o nivel basal de analito. De facto, tanto a testosterona, como a DHT são caracterizadas por uma flutuação circadiana significativa. 0 plasma obtido do sangue completo tratado com edta após centrifugação foi conservado a -20 °C até doseamento.

Determinaram-se as concentrações plasmáticas de DHT (di— hidrotestosterona) com um kit comercial (DSL, Chematil, Angri, SA) após extracção das amostras.

Todas as amostras de um conjunto experimental foram doseadas conjuntamente para reduzir a variabilidade inter-analitica.

Resultados

Os resultados indicam-se na seguinte tabela. 28 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ

Tabela 1: Concentrações séricas de DHT (pg/ml) após administração in vivo em ratos.

Basal Finasteride 1 mg Finasteride 5 mg Ajuga 5 mg 3 h 6 h 8 h 3 h 6 h 8 h 3 h 6 h 8 h 345, 4 397,1 720, 8 298,1 404,1 706, 7 217,1 103,6 201,6 222, 4 80,4 78,5 266, 4 162,7 350, 4 505,3 565,0 140,1 618,6 54, 4 108,8 101,1 54,9 59,3 474,2 273,0 824, 5 300,0 379,6 503,9 151,2 60,7 745,4 177, 8 68,8 62,5 290,8 195,6 615, 7 569,6 592,1 530,1 641,0 49,7 576,6 146, 4 120, 7 125,0 89, 8 138,1 62,5 404,6 148,5 173,1 924,2 128,3 250,9 85,2 58,7 62,5 191,8 434, 4 114, 5 530,0 420,1 110,0 569,4 176,9 300,1 141, 6 117, 4 49,1 337,1 673,6 46,4 81,2 88,6 345,0 905, 3 205,2 102, 7 581,6 63,7 62, 5 867, 6 164, 9 91, 9 506,4 1165,9 171,5 206,2 389, 5 124, 0 152,0 100, 5 n= 39 6 6 6 6 8 6 6 6 6 Média 335, 7 434,6 418,2 360,6 520,2 107,5 363,9 145,7 83,5 72, 8 Erro padrão 44,4 48,3 64, 9 102,6 118,0 20,6 99,8 20,5 11,8 11,1 A representação gráfica da tendência da concentração de DHT após administração está indicada na figura 2, em anexo.

As reduções nas concentrações de DHT são estatisticamente significativas.

Ajuga 6 h em relação a basal p<0,03; Ajuga 8 h em relação a basal p<0,02.

Tal como pode ser observado pelos dados e gráfico, a concentração de DHT encontra-se já reduzida após as primeiras três horas, para atingir às 6 horas os mesmos níveis obtidos com a administração de 5 mg de finasteride. 0 extracto total de Ajuga reptans mostrou assim uma capacidade de inibição de 5a-redutase comparável à de finasteride, mas mais rápida e de acção mais prolongada do que finasteride, em que 8 horas após o tratamento, a DHT aumenta, voltando aos níveis basais.

Lisboa, 2011-04-12

Claims (12)

1. ΕΡ 1 863 430/ΡΤ 1/3 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um glucósido de fenilpropanóide extraído de uma planta de Ajuga reptans, em que o referido fenilpropanóide é seleccionado entre Fenilpropanóide A, Fenilpropanóide B e suas misturas, com a seguinte fórmula:

   R=H: Fenilpropanóide A R=CH3: Fenilpropanóide B C35H46O20 C36H48O20 p.m. = 786,738 p.m. = 800,765 para a produção de uma composição para prevenir terapeuticamente ou tratar a perda de cabelo.
2. 2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o referido fenilpropanóide é Fenilpropanóide A.
3. 3. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 1-2, para a produção de uma composição para a prevenção terapêutica ou tratamento de alopecia androgenética e deflúvio telogénico.
4. 4. Utilização de um produto de homogeneização de células completas de Ajuga reptans obtidas por um método compreendendo a cultura vegetal de linhas celulares provenientes de um ΕΡ 1 863 430/ΡΤ 2/3 explante de tecido da referida planta, para a produção de uma composição com uma acção de inibição de 5a-redutase.
5. 5. Utilização de um extracto purificado de Ajuga reptans compreendendo uma mistura de fenilpropanóides com um título igual ou superior a 50% em peso de glucósido, extraída por um método compreendendo a cultura vegetal de linhas celulares provenientes de um explante de tecido da referida planta, para a produção de uma composição com uma acção de inibição de 5a-redutase.
6. 6. Utilização dos fenilpropanóides extraídos de uma planta de Ajuga reptans por um método compreendendo a cultura vegetal de linhas celulares provenientes de um explante de tecido da referida planta, em que os referidos fenilpropanóides compreendem Fenilpropanóide A com um título igual ou superior a 90%, para a produção de uma composição com uma acção de inibição de 5a-redutase.
7. 7. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 4-6, em que a referida composição é para o tratamento de perda de cabelo ou acne.
8. 8. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 4-7, em que o referido tecido é tecido caloso de Ajuga reptans.
9. 9. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 4-8, compreendendo a transferência de linhas celulares de Ajuga reptans para um meio líquido num biorreactor. ΕΡ 1 863 430/ΡΤ 3/3
10. 10. Utilização de acordo com a reivindicação 9, em que após cultura num biorreactor, as células são sujeitas a homogeneização e filtração para obter um extracto bruto.
11. 11. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 4-10 compreendendo esmagamento e filtração das células vegetais cultivadas e extracção de fenilpropanóides do filtrado numa resina por afinidade.
12. 12. Utilização de acordo com a reivindicação 11, compreendendo a eluição do filtrado com uma solução hidro-alcoólica. Lisboa, 2011-04-12 ΕΡ 1 863 430/ΡΤ 1/2 Figura 1 Tecido vegetal

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