EA013502B1

EA013502B1 - Композиция на основе растительных экстрактов ajuga reptans для предупреждения или лечения андрогенной алопеции, телогенного выпадения волос и акне

Info

Publication number: EA013502B1
Application number: EA200701190A
Authority: EA
Inventors: Джаммария Джулиани; Анна Бенедуси; Сальваторе Беллинвия
Original assignee: ДЖУЛИАНИ С.п.А.
Priority date: 2005-03-24
Filing date: 2006-03-21
Publication date: 2010-06-30
Also published as: ES2359933T3; WO2006100101A1; NZ555150A; IL183292A; MX2007007957A; KR20070113193A; DK1863430T3; BRPI0606328B8; BRPI0606328A2; ATE495725T1; JP2008534464A; CA2587665A1; US20080003308A1; ITMI20050498A1; PT1863430E; IL183292A0; DE602006019700D1; PL1863430T3; EA200701190A1; UA89510C2

Abstract

Настоящее изобретение относится к композициям на основе растительных экстрактов Ajuga reptans для стимуляции роста волос и стимулирования волосяной луковицы. Композиции по изобретению представлены в виде препаратов, подходящих для перорального введения или местного применения, и особенно подходят для предупреждения и лечения андрогенной алопеции у мужчин и женщин.

Description

Настоящее изобретение относится к композиции на основе растительных экстрактов Ащда гер1ап§ для стимулирования роста волос.

В частности, настоящее изобретение относится к препаратам на основе растительных экстрактов Ащда тер1ап8 для предупреждения и лечения андрогенной алопеции.

Известно, что волос и волосы представляют собой кератинизированные филаменты эпидермального происхождения, характерные для всех млекопитающих, включая людей.

Жизнь и рост волоса и волос у млекопитающих регулируется пролиферативным циклом кератиноцитов, представленных в матриксе луковицы, в то время как пигментация волос обеспечивается присутствием меланоцитов между клетками матрикса. Несмотря на то, что рост волос у млекопитающих относительно быстрый, от 0,1 до 0,4 мм в сутки у людей, он не ограничен. Его продолжительность, как правило, короткая, обычно от 2 до 5 месяцев, за исключением нескольких особых случаев, в которых он может продолжаться в течение нескольких лет.

В фазе активного роста (Анаген) клетки матрикса в состоянии быстрой пролиферации продуцируют новый волосистый материал. Фазу Анагена, в свою очередь, подразделяют на шесть стадий по отношению к зрелости луковицы, сосочка и росту волос. Самой продолжительной фазой роста является Анаген VI. В среднем, 86% волос на волосистой части кожи головы человека находятся в Анагене в течение предполагаемого периода от 4 до 8 лет.

За ним следует период регрессии матрикса, который теряет непосредственный контакт с сосочком дермы с нарушением поступления питательных веществ и кислорода, необходимых для роста волос (фаза Катагена). В этой фазе и волосяная луковица, и сосочек дермы остаются связанными посредством базальной пластинки и медленно перемещаются по направлению к поверхности кожи. Приблизительно 1% волос на волосистой части кожи головы находится в фазе Катагена в течение периода около двух недель. В терминальной фазе волосяного цикла (Телоген) волосяная луковица приобретает булавовидную форму и отделяется от сосочка, который «регрессирует». Сосочек и луковица продолжают двигаться по направлению к поверхности кожи почти до трансплантата мышцы, поднимающей волос. Волосяная прядь может оставаться в этом состоянии в течение более или менее продолжительного периода времени, но может легко ломаться и выпадать. Перед выпадением проходит дифференцировку новый зачаток волосяного фолликула, который дает начало новому циклу. Около 13% волос на волосистой части кожи головы человека находятся в фазе Телогена в течение приблизительно 3-4 месяцев.

Тип волос, образуемых фолликулом, может меняться и зависит от сигналов гормонального типа, представленных в лежащей ниже дерме, в частности, от стероидных гормонов, происходящих из гонад и в некоторых случаях из коры надпочечников, таких как тестостерон. Этот гормон, или его более активный метаболит 5а-дигидротестостерон, в течение пубертатного периода вызывает появление вторичных половых признаков, таких как рост волос в зоне лобка, подмышечных впадинах и, у мужчин, бороды с преобразованием пушковых волос в длинные волосы. Недавно было обнаружено, что у мужчин, пораженных андрогенной алопецией или облысением, длинные волосы превращаются в пушковые волосы.

Хорошо известно, что облысение или андрогенная алопеция представляет собой разновидность облысения, которой поражено большинство субъектов, страдающих выпадением волос. Это поражение заключается в нарастающей миниатюризации и сглаживании волосяных фолликулов. Имеет место генетическая предрасположенность к андрогенной алопеции. Наиболее вероятна передача ферментов, задействованных в преобразовании и накоплении андрогенных гормонов, то есть две изоферментные формы 5а-редуктазы (тип 1 и тип 2), Р450-ароматаза и цитозольный рецептор андрогенов.

У мужчин с предрасположенностью к андрогенной алопеции выпадение волос может начаться в любой момент после пубертатного периода, когда уровни андрогенов сыворотки крови растут, следовательно, необходимыми для экспрессии андрогенного облысения являются и тестостерон, и 5а-редуктаза, способная превращать тестостерон в дигидротестостерон. У мужчин наиболее важным для андрогенной алопеции считают ΌΗΤ (дигидротестостерон), тогда как у женщин - ΌΗΕΑ (дигидроэпиандростерон), продуцируемый в объеме 95% надпочечниками, и андростендион, продуцируемый на 50% яичниками и на 30% надпочечниками. Эти гормоны имеют относительно низкую андрогенную активность на периферическом уровне, однако, значительное количество подвергается преобразованию в гормоны с андрогенной активностью.

ΌΗΤ вреден для волосяных фолликулов волосистой части кожи головы с генетической предрасположенностью. Именно этот гормон обеспечивает преобразование пушковых волос в длинные волосы у подростков. Также подтверждено, что другие преобразования этого гормона вызывают себорею. Фермент 5а-редуктаза в изобилии встречается в волосистой части кожи головы, чтобы способствовать накоплению ΌΗΤ. Под действием ΌΗΤ волосяные фолликулы становятся все более мелкими, и, следовательно, образуемые волосы также становятся меньше и выглядят гораздо менее многочисленными. Выработка пигмента снижается, что создает впечатление недостатка волос, даже если это имеет место в пышной и бедной пигментом форме. Фаза роста (анаген) также укорачивается и, следовательно, волос оказывается менее длинным.

Аутоиммунная реакция фолликула, инициированная и осложненная ΌΗΤ, усложняет ситуацию, ко

- 1 013502 гда иммунная система распознает фолликул, поврежденный ΌΗΤ, как чужеродное тело и стремится удалить его. Некоторые формы алопеции характеризуются наличием воспалительных инфильтратов в перифолликулярных участках дермы. Исследование, проведенное на волосяных луковицах, полученных от мужчин, пораженных андрогенной алопецией, показало, что в переходных зонах между участками с волосами и без них наличие мастоцитарной дегрануляции и лейкоцитарной инфильтрации на ранней стадии представлено в области луковицы, предполагаемой области расположения основных клеток волосяной системы, с последующим распространением в перибульбарную область. Конечным результатом воспалительного процесса является фиброзное и рубцовое преобразование фолликула с потерей основных клеток и затем способности к возобновлению роста волос. Спустя несколько лет фолликулы более не образуют длинные волосы, а образуют волосы, называемые «пушковыми», то есть похожие на волосы новорожденных детей, не пигментированные естественным цветом волос и крайне мелкие, почти невидимые.

Важным рассматривается не количество тестостерона, представленного в крови, а концентрация на пилумосальном уровне ферментов, необходимых для преобразования более слабых андрогенов в более сильные андрогены, а также концентрация рецептора к андрогенам.

Тип 1 5а-редуктазы представляет собой кожный тип и преимущественно локализован в сальных железах и в печени, и, во вторую очередь, в кератиноцитах кожи и фолликула, в сосочке дермы, в потовых железах. Тип 2 5а-редуктазы локализован в придатке яичка, семенных пузырьках, простате и роговом слое гениталий плода, в эпителиальном влагалище волосяных фолликулов, в фибробластах кожи гениталий.

Известными ингибиторами 1 типа являются азелаиновая кислота и ее производные; ингибиторами 2 типа являются финастерид и Ки5884; тогда как ингибиторами обоих являются дуастерид, медь и Κονίνοдеп (смесь натуральных веществ, в числе которых пикногенол).

Другими ингибиторами, описанными в литературе, являются: прогестерон, цинк, гамма-линолевая кислота, бета-ситостерол, крапива, зеленый чай, кает райпеНо и некоторые полифенолы.

Некоторые из этих растительных веществ, такие как бета-ситостерол, оказывают свое действие посредством взаимодействия с 5а-редуктазой, замещая тестостерон, как и другие конкурентные ингибиторы, такие как финастерид и дуастерид.

В настоящее время для лечения и предупреждения выпадения волос используют препараты, основанные на активном начале синтетического происхождения, таком как, например, миноксидил или финастерид, употребление которых часто обуславливает развитие побочных эффектов, которые также могут быть довольно значительными.

Альтернативно, на рынке представлены препараты растительного происхождения, употребление которых, хотя и не приводит к возникновению побочных эффектов, не обеспечивает получения интересующих результатов с эстетической точки зрения.

Таким образом, настоящее изобретение возникло в результате необходимости обнаружения препаратов для стимулирования физиологической трофики волосяных луковиц, введение которых не имеет недостатков препаратов известного уровня техники.

Авторы обнаружили отборное растение, из которого возможно экстрагировать растительные действующие вещества, которые можно применять для предупреждения и замедления выпадения волос посредством защитного воздействия на некоторые из компонентов волосяной луковицы.

Это выбранное растение представляет собой А_)цда гсрЛипк - вид, относящийся к семейству ЬаЫа!ае (Губоцветные), типичный для травянистых областей Европы, Западной Азии и Африки.

А_)цда гер!апк широко известна в качестве официнального растения с древнейших времен благодаря, главным образом, ее применению в качестве противоревматического агента, тонизирующего средства, вяжущего средства и в качестве легкого наркотического или кровоостанавливающего и заживляющего агента.

Кровоостанавливающее действие было экспериментально продемонстрировано (ВгексЫ и соавт., 1992) и объяснено сосудосуживающим эффектом, опосредованным сосудистыми α-адренорецепторами. Также известны жаропонижающее, антибактериальное (Сап!ге11 СЬ, 1999), антигельминтное (Кипа и соавт., 2002) и гипогликемическое (Н11а1у ДЕ, Ьуои551 В., 2002) действия.

Поскольку А_)ида также известна своими «отпугивающими насекомых» свойствами, она вызвала определенный интерес в области биологического сельского хозяйства.

Одна из общих задач настоящего изобретения состоит в предложении композиций на основе растительных экстрактов из выбранного растения, которые являются эффективными в обеспечении стимулирующего рост волос действия.

Другая задача настоящего изобретения состоит в предложении композиций на основе растительных экстрактов или активных веществ, способных предупреждать или лечить андрогенную алопецию и телогенное выпадение волос.

Еще одна задача состоит в предложении активных веществ растительной природы, которые при пероральном употреблении или местном применении обеспечивают стимулирующее волосяные луковицы

- 2 013502 действие, не вызывая значительных побочных эффектов у субъектов, получающих лечение.

Принимая во внимание задачи, определенные выше, и согласно первому аспекту настоящего изобретения применение экстракта из Ащда гер1аи8 предусматривает изготовление композиции или препарата для стимулирования роста волос, как определено в прилагаемом п.1 формулы изобретения.

Дальнейшие характеристики и аспекты данного изобретения определены в последующих пунктах формулы изобретения.

Согласно одному воплощению данного изобретения применение экстракта из Афща гер1аи8 предусмотрено для изготовления композиции или препарата для предупреждения или лечения андрогенной алопеции или телогенного выпадения волос.

Ащда гер1аи8 представляет собой растение, продуцирующее большое количество соединений, которые могут быть отнесены к различным химическим группам. В их числе находятся иридоиды, представляющие собой гликозилированные монотерпеновые структуры, образующие горечи, такие как арпагид и 8-О-ацетил-арпагид. В дополнение к иридоидам, вид Ащда содержит антоцианы и два соединения, принадлежащие к группе флавоноидов, нарингина неоэсперидозид и апигенина неоэсперидозид.

В листьях Ащда гер1аи8 также были обнаружены соединения, принадлежащие к группе экдизонов, пентациклических тритерпенов со стероидной структурой, в частности, бета-экдизон и Ащда-лактон, у которых описана антифидантная активность в отношении насекомых. Другие соединения с аналогичной биологической активностью представляют собой производные клеродана, в частности, 14,15дигидроаюгарептансин, 3а-гидроксиаюгавенсин В, 3в-гидроксиаюгамарин Р4 и аюгарептансин.

Ащда гер1аи8 также характеризуется способностью к продуцированию гликозилированных фенилпропаноидов, растворимых в воде веществ, принадлежащих к очень обширной группе вторичных метаболитов, обычно называемых фенилэтаноловые гликозиды. Это природные вещества, растворимые в воде и широко распространенные в органах высших растений.

Со структурной точки зрения они характеризуются наличием производного коричной кислоты и производного фенилэтанола, связанных с одной и той же молекулой бета-глюкопиранозы, одно посредством сложноэфирной связи, а другое посредством гликозидной связи. Другие молекулы сахаридов, такие как рамноза, ксилоза и апиоза, часто связаны с глюкозой, которая играет роль мостика между двумя ароматическими структурами.

Фенилпропаноиды также классифицируют как фенилпропаноидные глюкозиды ввиду наличия в молекуле Сб-С₃-структуры, такой как кофейная, феруловая или коричная кислота, или как фенилэтаноиды ввиду одновременного наличия производного фенилэтанола или аналогичного продукта. Однако, поскольку фенилэтаноловая часть биосинтетически происходит из фенилпропановой структуры, в настоящее время предпочтительно определять эти структуры как фенилпропаноиды, но различные термины следует рассматривать в качестве синонимов.

Кислоты, связанные с сахаром (коричная, кофейная, феруловая, метилкумаровая и так далее), почти всегда находятся в транс-форме и редко в цис-форме; сахара апиоза, арабиноза, галактоза и глюкоза всегда имеют β-Ό-глюкозидную связь, тогда как рамноза и ксилоза α-Ό-глюкозидную связь.

На основе количества и типа связанных сахаров фенилпропаноидные глюкозиды делят на моносахариды, дисахариды и трисахариды. Моносахариды содержат молекулу глюкопиранозы между фенилэтанольной цепью и кислоту, связанную сложноэфирной связью; дисахаридные глюкозиды происходят из моносахаридов и их классифицируют согласно сахару, связанному с глюкозой.

Однако наиболее распространенной в природе группой остается группа трисахаридов, содержащих рамнозу в качестве второй глюцидной единицы, с которой связана третья, обычно глюкоза, ксилоза, апиоза, галактоза, ликсоза или рамноза. Ароматическими кислотами, наиболее часто связанными с С-4 глюкозы, являются кофейная, феруловая, коричная кислоты.

В настоящее время авторы обнаружили, что профилактическое и/или лечебное воздействие при выпадении волос и/или истончении и стимулирование волосяной луковицы, главным образом, связаны с присутствием фенилпропаноидных глюкозидов.

Типично, их химическая структура характеризуется наличием производного коричной кислоты и производного 2,4-дигидроксифенилэтанола, связанных с одной и той же молекулой Ό-глюкопиранозы посредством сложноэфирной связи и гликозидной связи соответственно. Другие молекулы сахаридов, такие как глюкоза, рамноза, ксилоза и апиоза могут быть связаны по отдельности и в разных положениях с молекулой глюкозы, которая играет роль мостика между двумя ароматическими структурами.

Согласно одному аспекту настоящего изобретения применение фенилпропаноидных глюкозидов предусматривает изготовление композиции или препарата для предупреждения или лечения выпадения волос или стимулирования роста волос. Предпочтительными фенилпропаноидными глюкозидами являются фенилпропаноид А и фенилпропаноид В, имеющие следующую формулу:

- 3 013502

Особенно предпочтительным является фенилпропаноид А, определяемый как тейполиозид β-(3,4дигидроксифенил)этил-О-а-Ь-рамнопиранозил-(1-3')-О-в-О-галактопиранозил-(Г-2)-в-О-(4'-Окофеоил)глюкопиранозид.

Фенилпропаноидные глюкозиды могут быть преимущественно получены из экстракта Арда гер!аи8.

Согласно другому аспекту данного изобретения предложен способ изготовления растительного гомогената или экстракта из растения Арда гер1ап5. содержащего растительную культуру клеточных линий, происходящих из тканевого эксплантата указанного растения.

Согласно одному воплощению, для того чтобы получить экстракт из Арда гер!ап8, выращивают каллусную ткань, предотвращая ее дифференцировку. Получают культуры, которые не приобретают или не воспроизводят типичную морфологию данного растения, но сохраняют потенциальную возможность продуцирования типичных вторичных метаболитов. Изменяя состав культуральной среды, возможно отобрать клеточные линии с различными биохимическими и метаболическими характеристиками. Сохранение эмбриональных характеристик, главным образом, имеет место под действием гормональных веществ, таких как, например, ауксин и цитокины, также называемых «ростовыми факторами», продуцируемыми в природе самими растениями и способными поддерживать меристемную активность у живых организмов. Культуры также типично требуют подходящей культуральной среды, которая учитывает метаболические потребности данных клеток, потерю фотосинтетической способности и подходящие условия окружающей среды. Фаза образования и отбора растительных клеточных линий также зависит от количества осуществленных эксплантатов, поскольку, несмотря на процедуру стерилизации, большинство эксплантатов, от 70 до 80%, подвергаются загрязнению и подходящей ликвидации. Через адекватный период времени, обычно равный 21 суткам хранения в темноте при температуре в диапазоне от 20 до 35°С, предпочтительно 28°С, можно наблюдать выработку недифференцированной каллусной ткани из некоторых фрагментов эксплантатов. Для того, чтобы получить размножение каллуса, ткань переносят на обширную поверхность с новой средой и обычно, спустя еще 7-20 суток, предпочтительно спустя 14 суток, развившиеся части каллуса переносят (субкультивируют) на свежую среду.

Как только получают линии с быстрым ростом, но все еще чрезвычайно вариабельные с точки зрения как морфологии, так и продуктивности, становится возможным отбор различных клеточных линий, но с одинаковыми характеристиками по времени. Для продуцирования приемлемых количеств метаболитов затем необходимо перенести отобранные линии в жидкую среду, то есть перейти к культурам в суспензии, содержащимся в лабораторных колбах или в суспензионных культурах.

Таким образом, линии, отобранные по их пролиферативным и метаболическим характеристикам, могут быть культивированы в суспензии в колбах или в биореакторах, гарантирующих продуцирование количеств, адекватных для экспериментального изучения данных продуктов.

Для количественного продуцирования в производственном масштабе индивидуализированных растительных активных веществ разработана методика, предусматривающая подготовку биореакторов большого объема, в которых отобранные клеточные культуры суспендируют в жидкой среде и обеспечивают возможность продуцирования больших количеств биомассы.

Схематизация процесса экстракции согласно воплощению настоящего изобретения проиллюстрирована на фиг. 1, которая прилагается.

На фиг. 1 проиллюстрирована блок-схема экстракционного воплощения, включающая фазы предварительного культивирования в искусственной среде подходящей растительной ткани, предпочтительно состоящей из каллусной ткани (1); стерилизации и культивирования (2) растительных клеток экспланти

- 4 013502 рованной каллусной ткани; отбора в твердой среде (3); увеличения биомассы в жидкости (4); осеменения в биореакторе (5); гомогенизации клеточной суспензии (6); фильтрации суспензии и хроматографии фильтрата (7); изготовления сырого экстракта (8); очистки основного растительного действующего вещества (9).

Этот способ экстракции предоставляет возможность изготовления дифференцированных продуктов с определенными характеристиками чистоты и титрующей способности.

В частности, данный способ предоставляет возможность идентификации:

I) гомогената Арда гср1ап5 или гомогената целых клеток, сохраняющих трофические принципы и питательные вещества интактной растительной клетки;

II) очищенного экстракта фенилпропаноида или определенной смеси фенилпропаноидов с титром выше 60%;

III) чистых фенилпропаноидов, по существу соответствующих фенилпропаноиду А с титром выше 90%.

Согласно первому воплощению гомогенат Арда гср1ап5 получают из клеточных культур Арда гер1ап5. культивированных согласно вышеописанному способу. Итоговый полученный гомогенат целых клеток содержит композицию, богатую простыми и сложными питательными веществами, характерными активными веществами, трофическими факторами и водой. Гомогенат Арда тер1ап8 обычно основан на различных активных началах, содержащих полисахариды, белки, липиды и воду. Активные вещества, главным образом определяющие профиль активности гомогената А]ида тер1аи8, преимущественно содержат неферментные антиоксиданты, такие как фенилпропаноиды, а также гликопротеины и полисахаридную фракцию и воду.

Наличие фенилпропаноидов обеспечивает противовоспалительные эффекты и ингибирование фермента 5а-редуктазы в коже.

Когда фенилпропаноиды присутствуют в ассоциации с другими активными веществами, упомянутыми выше, также подтверждается выраженный эффект гидратации, сопровождаемый активностью трофического типа, способной к активации репаративных свойств кожи. Поскольку кожа представляет собой орган, особенно чувствительный к окислительному стрессу, вызванному вредным эндогеном и экзогеном, гомогенат, богатый веществами с антиоксидантной активностью, проявляет значительную противовоспалительную активность. Гликопротеины, присутствующие в гомогенате, способны координировать огромное количество молекул воды посредством своих гликозилированных участков, и эта способность строго зависит от роли, которую они играют в пролиферативной фазе самой растительной клетки; в действительности, имеет место улучшение упругости клеточных стенок, способствующее растяжению и клеточному росту, и это может также иметь функциональные проявления и на уровне кожи, главным образом, в тех ситуациях, когда это полезно для стимулирования тканевых репаративных процессов. Благодаря их химической природе и биологической роли полисахариды, присутствующие в гомогенате, способны координировать воду, имитируя действие гиалуроновой кислоты, дерматансульфата и хондроитинсульфата, типично содержащихся в коже животных. Полисахаридная фракция также содержит гликаны, которым приписывают иммуностимулирующие свойства.

Согласно одному воплощению экстракт, обогащенный по фенилпропаноиду, продуцируется прогрессивно отобранной клеточной линией Арда тер1ап8. Клетки, происходящие из данной клеточной культуры, механически разрушают и фильтруют. Фильтрат подходящим образом экстрагируют для получения фенилпропаноидов на аффинной смоле и элюируют водноспиртовым раствором.

Согласно предпочтительному воплощению глюкозиды фенилпропаноидов экстрагируют из тканей Арда тер1аи8.

Подтверждено, что гомогенат или растительный экстракт Арда тер1ап8 оказывает синергическое регуляторное действие на трофику некоторых эпителиальных структур, особенно в отношении сальных желез и волосяных фолликулов. В частности, введение данного экстракта или гомогената в форме композиции обусловливает снижение секреции кожного сала с благоприятными эффектами в отношении акне и себореи и регуляцию физиологического роста волоса и волос с благоприятным результатом в отношении андрогенной алопеции, телогенного выпадения волос, гипертрихоза и гирсутизма.

Экстракт или гомогенат Арда тер1аи8, применяемый в объеме данного изобретения, обычно может быть спиртовым, водноспиртовым, глицериновым, ацетоновым; применение водноспиртового или ацетонового экстракта или гомогената является предпочтительным.

В действительности наблюдали, что с помощью экстракции возможно получить конечный продукт, богатый фенипропаноидами и растительными веществами, активными в отношении селективного ингибирования фермента 5а-редуктазы, сверхэкспрессирующегося на уровне фолликулов.

Композиция по данному изобретению может быть использована как для местного, так и для системного применения, и была доказана ее эффективность в отношении предупреждения и/или лечения поражений, вызванных чрезмерным образованием кожного сала, таких как акне, себорея, фурункулез, и поражений, вызванных активностью 5а-редуктазы, таких как андрогенная алопеция, телогенное выпадение волос, истончение волос, а также гипертрихоз и/или гирсутизм.

- 5 013502

Композиции для местного применения по данному изобретению могут быть в жидкой форме, такой как лосьоны и растворы, а также в твердой форме, такой как гели, кремы, мази, помады, маски, трансдермальные пластыри с пролонгированным высвобождением.

Композиции для местного применения по данному изобретению могут подходящим образом содержать добавки, обычно применяемые в косметических или фармацевтических препаратах для местного применения, такие как консерванты, бактериальные агенты, стабилизаторы, эмульгаторы, буферы, красители и другие эксципиенты, обычно применяемые в косметических/фармацевтических методиках изготовления препаратов.

В случае жидкой композиции синергические активные вещества по данному изобретению могут быть подходящим образом растворены в косметически/фармацевтически приемлемом жидком носителе, таком как водный, спиртовой, водноспиртовой, глицериновый раствор и другие виды, подходящие для местного применения.

Для иллюстративных целей композиции по данному изобретению в жидкой форме изготавливают путем растворения растворимых в воде экстрагированных растительных фракций в воде, а остальных фракций в спирте, с последующим объединением различных фракций при перемешивании. К полученной смеси затем можно добавить буфер для достижения диапазона рН, подходящим образом выбранного от 5 до 7, так чтобы быть совместимым с рН кожи, а затем ее фильтруют и упаковывают в подходящие контейнеры, такие как небольшие бутылочки или флаконы.

Композицию для местного применения по данному изобретению применяют для нанесений в эффективном количестве непосредственно на пораженную область тела, которую следует лечить.

Например, для лечения андрогенной алопеции лосьон на основе активных веществ по данному изобретению наносят непосредственно на волосистую часть кожи головы один или два раза в сутки подходящим образом в течение циклов продолжительностью 2-3 месяца, прерываемых периодами отдыха.

Подобным образом, композицию в форме крема можно наносить на лицо субъекта, пораженного себореей или акне, один или два раза в сутки, например, до тех пор, пока не наступит ремиссия данного поражения.

В случае твердой или полутвердой композиции синергические активные вещества по данному изобретению диспергируют в косметически/фармацевтически приемлемом носителе, обычно используемом для местного применения.

Нанесение композиции по данному изобретению в форме крема приводит к снижению секреции кожного сала частью сальных желез, что становится заметным через несколько суток лечения в виде снижения жирности поверхности тела, подвергаемой лечению.

Композиции по данному изобретению для перорального применения можно применять в форме таблеток, капсул, жидких растворов и в форме с контролируемым высвобождением активных веществ.

Композицию для перорального введения по изобретению получают посредством обычных методик изготовления диетических и/или фармацевтических продуктов добавлением одного или более физиологически приемлемых носителей к синергическим активным веществам. Таким образом, физиологически приемлемые носители применяют в смеси с подходящими консервантами, стабилизаторами, эксципиентами, вспомогательными веществами и ароматизаторами.

В композиции по данному изобретению синергические активные вещества по изобретению присутствуют в варьирующих количествах, обычно в диапазоне от 0,001 до 10 мас.%, более предпочтительно от 0,1 до 5 мас.%.

Согласно другому аспекту данного изобретения предложен способ косметического лечения, включающий местное нанесение на волосистую часть кожи головы или на лицо эффективного количества вышеописанной композиции.

Следующие примеры предложены исключительно для иллюстративных целей настоящего изобретения, и их не следует рассматривать в качестве ограничения объема защиты, указанного в прилагаемой формуле изобретения.

Пример 1.

Интегратор в таблетированной форме, подходящей для снижения повреждения от окислительного стресса из-за солнечных лучей на уровне кератиновых структур.

Каждая таблетка содержит:

- 6 013502

Кальция пантотенат	9 мг
б-Биотин	0,150 мг
А]ида гер1апз	5 мг
Бета-каротин	7,2 мг
Убидекаренон	10,0 мг
Цинк (в виде хелатированной аминокислоты)	7,5 мг
Медь (в виде хелатированной аминокислоты)	1,20 мг
Фолиевая кислота	0,30 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	17,0 мг
Дигидрат двухосновного фосфата кальция	62,0 мг
Г идроксипропилметилцеллюлоза	80,0 мг
Магния стеарат	7,90 мг
Диоксид кремния	1,70 мг

Пример 2.

Диетический интегратор в таблетированной форме на основе Ащда, Воейшепа шуеа и донора серы (метионин):

Каждая таблетка содержит:
Метионин	300 мг
Кальция пантотенат	9 мг
б-Биотин	0,150 мг
А]ида гер1апе	5 мг
Цинк (в виде хелатированной аминокислоты)	7,5 мг
Медь (в виде хелатированной аминокислоты)	1,20 мг
Марганец (в виде хелатированной аминокислоты)	2,25 мг
Витамин Вб	3,0 мг
Фолиевая кислота	0,30 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	17,0 мг
Дигидрат двухосновного фосфата кальция	62,0 мг
Г идроксипропилметилцеллюлоза	80,0 мг
Магния стеарат	7,90 мг
Диоксид кремния	1,70 мг

Пример 3.

Интегратор в таблетированной форме на основе фенилпропаноидов из А)ида гер1ап5 с активностью, замедляющей старение:

Каждая таблетка содержит:
Кальция пантотенат	9 мг
б-Биотин	0,150 мг
Фениллропаноид А+В	2,5 мг
Цинк (в виде хелатированной аминокислоты)	7,5 мг
Медь (в виде хелатированной аминокислоты)	1,20 мг
Фолиевая кислота	0,30 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	17,0 мг
Дигидрат двухосновного фосфата кальция	62,0 мг
Гидроксипропилметилцеллюлоза	80,0 мг
Магния стеарат	7,90 мг
Диоксид кремния	1,70 мг

- 7 013502

Пример 4.

Интегратор, особенно подходящий для андрогенной алопеции и телогенного выпадения волос у женщин вблизи или во время менопаузы:

Каждая таблетка содержит:

Кальция пантотенат б-Биотин	9 мг 0,150 мг
Изофлавоны сои (генистеин и даидзеин) Воектепа гмропот/еа Ар1да Резвератрол Цинк (в виде хелатированной аминокислоты) Медь (в виде хелатированной аминокислоты) Фолиевая кислота	40 мг 100 мг 2.5 мг 0,05 мг 7.5 мг 1,20 мг 0,30 мг
Микрокристаллическая целлюлоза Дигидрат двухосновного фосфата кальция Г идроксипропилметилцеллюлоза Кальция пантотенат ФБиотин	17,0 мг 62,0 мг 80,0 мг 9 мг 0,150 мг
ВоаНтепа ηίροηοηίνββ А]ида гер1апз Кверцетин Таурин Цинк (в виде хелатированной аминокислоты) Медь (в виде хелатированной аминокислоты) Микрокристаллическая целлюлоза Дигидрат двухосновного фосфата кальция Г идроксипропилметилцеллюлоза Магния стеарат Диоксид кремния	200 мг 5 мг 0,90 мг 200 мг 7.5 мг 1,20 мг 90,0 мг 80,0 мг 52.5 мг 7,90 мг 1,70 мг

- 8 013502

Пример 6.

Дерматологический крем для уменьшения повреждения волосяных и кожных луковиц от воздействия УФ-лучей:

Композиция содержит:
Кальция пантотенат	9 мг
ά-Биотин	0,150 мг
А]ида гер(апз	20 мг
Макрогол-цетостеариловый эфир	5,0 г
Изопропилмиристат	4,0 г
Пропиленгликоль	3,0 г
Глицерин	3,0 г
Белый вазелин	11,Ог
Цетостеариловый спирт	9,0 г
Метилпараоксибензоат	0,2 г
Пропилпараоксибензоат	0,02 г
Тетранатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) 0,1 г

до 100 г

Вода

Пример 7.

Лосьон для местного применения, полезный при телогенном облысении у мужчин и женщин:

А/ида гергапз

Бета-глюкан

Отдушка

Лимонная кислота а-Биотин

Кальция пантотенат

Фитотокотриенолы

Экстракт семян грейпфрута

Двунатриевая соль ЭДТА

ΡΕΘ-40-гидрогенированное касторовое масло

Денатурированный спирт типа С

Пример 8.

Композиция для местного применения на основе А)ида. особенно подходящая для противовоспалительного действия в случаях акне и себореи:

- 9 013502

Кальция пантотенат	30,0 мг
ά-Биотин	0,30 мг
А/ида гер1апз	5,0 мг
Цетеарет-22, Пальмет-2	5,0 г
Каприловый/каприновый триглицерид	5,0 г
Белый вазелин	2,0 г
Октилдодецил миристат	3,0 г
Цетилстеариловый спирт	2,0 г
Отдушка	0,20 г
Конц, токоферол	0,05 г
2-феноксиэтанол и парабены	0,6 г
Циклометикон	0,05 г
Пропиленгликоль	3,45 г
Глицерин	3,2 г
Алкилакрилатный кроссполимер	0,60 г
Тетранатриевая соль ЭДТА	0,10 г
Аминометилпропанол	0,45 г
Вода	до 100 г

Пример 9.

Композиция для местного применения в форме быстро приготовляемой маски, полезной в случаях гипертрихоза:

А}ида гер1апз	20,0 мг
Воектепа ηΐροηοηίνθθ	8г
Спермидина тригидрохлорид	2,0 мг
Кальция пантотенат	30,0 мг
ФБиотин	0,30 мг
ИзагельЕМ-альгинат	до 100 г

Пример 10.

Гель для загара для местного применения на основе А_)ида гсрЕиъ:

- 10 013502

А]ида

Кальция пантотенат

Денатурированный спирт

Двунатриевая соль ЭДТА Глицерин

Бетаин

Апз1о(1ех

Рагзо! МСХ

Рагзо! 1789

Еизо!ех

Ви1угозрегтит рагкК

Триметилсилиламодиметикон Козталпит оЯютаНз

Конц.каротин

Циклопентаксилоксан

Вода

Пример 11. Дерматологический крем:

100 г крема содержат:

А]ида гер1апз

РЕС 400

РЕС 1500

РЕС 4000

Цетостеариловый спирт

20,0 мг

30,0 мг

20,0 г

0,05 г

2,0 г

0,5 г

1,2 г

5,0 г

3,0 г

2,0 г

0,5 г

0,1 г

0,01 г

3,00% до 100 г

0,1 г

20,0 г

15,0 г

45,0 г

2,0 г

2-Феноксиэтанол

Глицерин

Жидкий парафин

Деминерализованная вода

Пример 12.

Водноспиртовой лосьон с Ащда герГапз и таурином:

Одна 5-мл доза содержит:

Динатриевая соль ЭДТА

Таурин

А]ида гер(ап$

Спирт 95%

Деминерализованная вода

Пример 13.

Водноспиртовой лосьон с А)ида герГапк:

Одна 5-мл доза содержит:

Динатриевая соль ЭДТА

Фенилпропаноид А+В

Спирт 95%

Деминерализованная вода

0,90 г

4,0 г

2,0 г до 5,0 мл

3,0 мг

100,0 мг

5,0 мг

750,0 мг до 5,0 мл

3,0 мг

2,5 мг

750,0 мг до 5,0 мл

- 11 013502

Пример 14.

Физиологический гель для местного применения с Ащда герГаик:

100 г геля содержат:

Пример 15.

Г идроксиэтилцеллюлоза	0,5 г
А]ида гер1ап$	0,1 г
Натрия хлорид	0,9 г
П роп и ле нгл и кол ь	3,0 г
Имидазолидинилмочевина	0,50 г
Метилхлоризотиазолинон	0,0009
Метил изотиазолином	0,0003
Двунатриевая соль ЭДТА	0,05 г
Деминерализованная вода	до 100

Гель для ионофореза

100 г геля содержат:

Г идроксиэтилцеллюлоза	1,5 г
А/ида гер1апз	0,1 г
Калия хлорид	4,5 г
Пропиленгликоль	1,0 г
Имидазолидинилмочевина	0,40 г
Метилхлоризотиазолинон	0,0009 г
Метилизотиазолинон	0,0003 г
Двунатриевая соль ЭДТА	0,05 г
Деминерализованная вода	до 100 г

Пример 16.

Был проанализирован процентный состав гомогената Ащда герГаик, полученного из клеточных культур каллусной ткани А]ида гер1аи8, культивированных в биореакторах, в которых клетки суспендируют в жидкой среде для культивирования растительных клеток.

Композиция

Фракция	Содержание (масс./масс. %)
Полисахариды	6,89
Фенилпропаноидные комплексы	0,15
Белки, из которых гликопротеины	1,71 не менее 20%, что составляет 0,34% от общего количества
Липиды	0,76
Неорганические остатки	0,31
Вода	90,19
рН	4,00

Вода, присутствующая в гомогенате, строго координирована по отношению к гликозилированным и полисахаридным молекулам. Липидная фракция, экстрагированная из лиофилизированного продукта, имеет интересующий состав, который представлен в нижеследующей таблице и который характеризуется главным образом бета-ситостеролом. Кислотная фракция состоит главным образом из пальмитиновой кислоты, олеиновой кислоты и линолевой кислоты.

- 12 013502

Стероидный состав	97,85 г/100 г
Холестерин	4,05 г/100 г
24-Метиленхолестерин	2,92 г/100 г
Кампестерол	1,52 г/100 г
Кампестанол	1,00 г/100 г
Стигмастерол	0,68 г/100 г
Дельта-7-кампестерол	17,41 г/100 г
Бета-ситостерол	70,52 г/100 г
Ситостанол	1,67 г/100 г
Дельта-5,24-стигмастадиенол	0,20 г/100 г
Дельта-7-авенастерол	0,81 г/100 г

Кислотный состав	Масс./масс.
Каприновая кислота	1,29
Лауриновая кислота	0,34
Миристиновая кислота	0,61
Пентадека новая кислота	0,36
Пальмитиновая кислота	21,68
Пальмитолеиновая кислота	0,47
Стеариновая кислота	4,38
Олеиновая кислота	42,78
Линолевая кислота	17,62
Линоленовая кислота	1,98
Бегеновая кислота	0,41
Лигноцетовая кислота	0,74

Определение влажности (70°С) образца гомогената Арда гер!ап§ как такового и нейтрализованного 10% аргинином.

Определение влажности проводили в печи (модель Меттей ТУ 500) при температуре 70°С. Приблизительно 10 г экстракта Арда гер!ап§ в калиброванной стеклянной мензурке взвесили с помощью аналитических весов (СЛегйш модель Е42). Затем мензурку герметично закрыли алюминиевой пленкой и затем определили массу. Затем ее поместили в печь на 48 ч при температуре 70°С. Через заранее установленное время снова определили массу мензурки, герметично закрытой алюминиевой пленкой.

Тип экстракта Влажность при 70°С (%)

Экстракт А]ида гер(апз как таковой 70,24

Экстракт А]ида гер&пз, нейтрализованный при рН 5,57 64,45

Нейтрализации экстракта Арда гер!ап§ добивались путем прогрессирующего добавления раствора аргинина (10% мас./мас.) до достижения значения рН в диапазоне 5,50-5,60.

Пример 17. Композиция с гомогенатом Арда гер!ап§.

Продукт на основе однофазных систем, таких как гели, и двухфазных систем, таких как эмульсии, может быть легко изготовлен, поскольку экстракт Арда гер!ап§ легко можно включить в оба типа композиций, также и до 25% мас./мас. С композицией с гомогенатом Арда гер!аи8 в действительности легко работать на уровне лабораторных тестов, и она, за исключением высоких концентраций (выше 40%), не требует особых механических средств.

Дерматологическая переносимость

Кожная аллергическая проба, осуществленная на здоровых добровольцах, подтвердила, что данный продукт не имеет проблем, связанных с кожной переносимостью.

Пример 18.

На части общего количества экстракта, полученного из клеточной культуры Арда гер!аи8, было проведено исследование для определения ίη νίνο ингибиторной активности в отношении 5а-редуктазы.

Исследование проводили, определяя уровни ΌΗΤ (5а-дигидротестостерон) в крови у крыс после

- 13 013502 введения исследуемого экстракта. Эти уровни сравнивали как с базальными уровнями, так и с теми, что были получены после введения финастерида, который в настоящее время представляет собой наиболее активный ингибитор фермента 5а-редуктазы, ответственного за преобразование тестостерона в его наиболее активную форму - ΌΗΤ.

Материалы и методы

Для исследования ίη νίνο ингибирования 5а-редуктазы использовали взрослых самцов крыс 8ргащ.1С-Эа\\!су (Сйаг1е8 Ищет Пайа) с массой тела 200-250 г.

Животных содержали при стандартных условиях: при температуре 22/23°С и относительной влажности 65%, подвергая их циклам освещения 12 ч свет/12 ч темнота.

Крысам давали стандартное питание в форме пилюль (стандартная диета, С11аг1с5 Втсег) с водой в неограниченном доступе.

Проведение опытов осуществляли согласно протоколам, утвержденным Комитетом по содержанию и использованию животных Иптуегайа бедй 8ΐυ4ί ο£ М11ап. Тесты проводили на крысах, подвергнутых воздействию через ретроорбитальное сплетение непосредственно перед фармакологическим лечением (1о) и впоследствии через промежуток в 3, 6 и 8 ч после введения.

Введение исследуемых веществ осуществляли перорально.

В соответствии с каждым тестом на животных, получающих лечение, также проводили тесты на животных, не получающих лечение, для определения базального аналитического уровня. И для тестостерона, и для ΌΗΤ, в действительности, характерно значительное циркадное колебание.

Плазму, полученную из цельной крови, обработанной ЭДТА, после центрифугирования хранили при -20°С до определения дозы.

Концентрации ΌΗΤ (дигидротестостерон) в плазме определяли с помощью коммерческого набора (О8Ь, СйетаШ, Лпдп. 8А) после экстракции образцов.

Все образцы экспериментальной серии добавляли вместе для уменьшения вариабельности между аналитическими образцами.

Результаты

Результаты приведены в следующей таблице.

Таблица. Концентрации ΌΗΤ в сыворотке (пг/мл) крыс после введения ίη νίνο.

Базальная	Финастерид 1 мг	Финастерид 5 мг	А]ида 5 мг
			3 час	6 час	8 час	3 час	6 час	8 час	3 час	6 час	8 час
345,4	397,1	720,8	298,1	404,1	706,7	217,1	103,6	201,6	222,4	80,4	78,5
266,4	162,7	350,4	505,3	565,0	140,1	618,6	54,4	108,8	101,1	54,9	59,3
474,2	273,0	824,5	300,0	379,6	503,9	151,2	60,7	745,4	177,8	68,8	62,5
290,8	195,6	615,7	569,6	592,1	530,1	641,0	49,7	576,6	146,4	120,7	125,0
89,8	138,1	62,5	404,6	148,5	173,1	924,2	128,3	250,9	85,2	58,7	62,5
191,8	434,4	114,5	530,0	420,1	110,0	569,4	176,9	300,1	141,6	117,4	49,1
337,1	673,6	46.4					81,2
88,6	345,0	905,3					205,2
102,7	581,6	63,7
62,5	867,6	164,9
91,9	506,4	1165,9
171,5	206,2	389,5
124,0	152,0	100,5
	η =	39	6	6	6	6	8	6	6	6	6
Среднее	335,7	434,6	413,2	360,6	520,2	107,5	363,9	145,7	83,5	72,8
Станд. ошибка	44,4	48,3	64,9	102,6	118,0	20,6	99,8	20,5	11,8	11.1

Графическое представление тенденции концентрации ΌΗΤ после введения приведено в прилагаемой фиг. 2.

Снижения концентраций ΌΗΤ статистически достоверны.

Ащда 6 ч против базальной р < 0,03;

Ащда 8 ч против базальной р < 0,02.

Как видно из представленных данных и графика, концентрация ΌΗΤ снижена уже спустя первые 3 ч, достигая к 6 ч тех же уровней, что получены при введении 5 мг финастерида. Следовательно, общий экстракт А_)ида герйиъ показал ингибирующую способность в отношении 5а-редуктазы, сравнимую с таковой для финастерида, но проявляющуюся более быстро и продолжающуюся дольше, поскольку в случае финастерида спустя 8 ч после лечения концентрация ΌΗΤ поднимается, возвращаясь на базальный уровень.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение растительного экстракта из растения А|ида гер!ап8, где указанный экстракт А|ида гср1ап5 содержит по меньшей мере одно активное вещество, выбранное из иридоидов, антоцианов, флавоноидов, экдизонов, фенилпропаноидных глюкозидов, производных клеродана и их смесей, для изготовления композиции с ингибирующим действием в отношении 5а-редуктазы.
2. Применение по п.1 для изготовления композиции для предупреждения или лечения андрогенной алопеции, телогенного выпадения волос и акне.
3. Применение фенилпропаноидного глюкозида, полученного из растения Арда гер1ап5. для изготовления композиции с ингибирующим действием в отношении 5а-редуктазы.
4. Применение по п.3 для изготовления композиции для предупреждения или лечения андрогенной алопеции, телогенного выпадения волос и акне.
5. Применение по п.3, где указанный фенилпропаноидный глюкозид содержит по меньшей мере один сахар, выбранный из глюкопиранозы, рамнозы, глюкозы, ксилозы, апиозы, галактозы, ксилозы.
6. Применение по любому из пп.3-5, где указанный фенилпропаноидный глюкозид содержит ароматическую структуру, выбранную из феруловой кислоты, коричной кислоты, кофейной кислоты, метилкумаровой кислоты или производного фенилэтанола.
7. Применение по любому из пп.3-6, где указанный фенилпропаноидный глюкозид выбран из фенилпропаноидного глюкозида А, фенилпропаноидного глюкозида В и их смесей, имеющих формулу

Р=Н: фенилпропаноидный глюкозид А

С35Н46О20

Молекулярная масса = 786,738

Р=СНз: фенилпропаноидный глюкозид В

СзвНдаОго

Молекулярная масса = 800,765
8. Применение по п.7, где указанный фенилпропаноидный глюкозид представляет собой фенилпропаноидный глюкозид А.
9. Способ получения гомогената или экстракта из растения Ащда тер1ап8, включающий получение культуры клеточных линий из эксплантата каллусной ткани указанного растения; перенос полученных линий в жидкую среду в биореакторе; культивирование их в биореакторе, затем гомогенизацию клеток с получением гомогената и, при необходимости, фильтрацию гомогената с получением фильтрованного экстракта.
10. Способ по п.9, дополнительно включающий разрушение клеток экстракта, фильтрацию и экстракцию фенилпропаноидов из фильтрата с использованием аффинной смолы с получением экстракта, обогащенного фенилпропаноидами.
11. Способ по п.10, где экстракция включает элюирование фенилпропаноидов водно-спиртовым раствором.
12. Применение гомогената целых клеток Ащда гер1ап8, полученного способом по п.9, для изготовления композиции с ингибирующим действием в отношении 5а-редуктазы.
13. Применение по п.12 для изготовления композиции для лечения андрогенной алопеции, телоген ного выпадения волос и акне.
14. Применение очищенного экстракта Ащда терйпк, содержащего смесь фенилпропаноидов с титром, равным или выше 50 мас.% глюкозида, экстрагированного способом по любому из пп.10 и 11 для изготовления композиции с ингибирующим действием в отношении 5а-редуктазы.
15. Применение по п.14, характеризующееся тем, что очищенный экстракт содержат фенилпропаноидный глюкозид А с титром, равным или выше 90%.
16. Применение по любому из пп.14, 15 для изготовления композиции для лечения андрогенной алопеции, телогенного выпадения волос и акне.