PT1638416E - Utilização de uma fórmula nutricional para função de barreira intestinal óptima - Google Patents

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PT1638416E
PT1638416E PT47630157T PT04763015T PT1638416E PT 1638416 E PT1638416 E PT 1638416E PT 47630157 T PT47630157 T PT 47630157T PT 04763015 T PT04763015 T PT 04763015T PT 1638416 E PT1638416 E PT 1638416E
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Florence Rochat
Gabriela Bergonzelli
Clara Lucia Garcia-Rodenas
Marco Enrico Turini
Irene Corthesy-Theulaz
Christine Cherbut
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Description

DESCRIÇÃO "UTILIZAÇÃO DE UMA FÓRMULA NUTRICIONAL PARA FUNÇÃO DE BARREIRA INTESTINAL ÓPTIMA"
Campo da invenção A presente invenção refere-se a uma composição para induzir um padrão de maturação da barreira intestinal semelhante ao observado com o aleitamento e capaz de melhorar a maturação da barreira intestinal, e. g., durante o stress neonatal. Em particular, a presente invenção refere-se a uma fórmula para lactentes que contém uma combinação de ingredientes específicos concebidos para proporcionar um efeito sinérgico ao longo de todo o tracto gastrointestinal e função de barreira.
Antecedentes da invenção
Durante o desenvolvimento pós-natal, o intestino do recém-nascido sofre um processo de maturação que termina com o estabelecimento de uma barreira funcional a macromoléculas e bactérias patogénicas. Este fenómeno é chamado encerramento do intestino e parece ser afectado pela dieta. Assim, diferentes estudos com lactentes (JPGN, 1995,21: 383-6) e modelos animais (Pediatr. Res., 1990,28: 31-7) mostram que a maturação da barreira é mais rápida em recém-nascidos em aleitamento materno do que nos alimentados com fórmula. Isto poderia explicar a maior prevalência de alergia e infecção em recém-nascidos alimentados com fórmula do que nos alimentados com leite 1 materno .
Um número impressionante de diferentes mecanismos integram esta barreira, mecanismos que actuam sinergicamente para proteger o hospedeiro das agressões luminais. A primeira barreira consiste no epitélio intestinal, uma monocamada contínua de células epiteliais colunares seladas umas às outras por complexos proteicos, tal como as junções oclusivas. A segunda é uma barreira não específica composta por mecanismos que protegem a superfície da mucosa como saliva, acidez gástrica, camada de muco, digestão proteolítica, pH alcalino do intestino, camada não agitada e peristalse intestinal. O sistema imunitário do intestino (GALT) é capaz de responder selectiva e especificamente a moléculas estranhas e microrganismos patogénicos. Finalmente, e não menos importante, a flora intestinal protege directa e indirectamente contra a invasão do hospedeiro por agentes patogénicos e macromoléculas com propriedades antigénicas.
Além disso, o stress físico devido, por exemplo, a antibioterapia, doença ou cirurgia e o stress psicológico induzido, por exemplo, por hospitalização ou separação prolongada da mãe, situações comuns na população de recém-nascidos prematuros, podem prejudicar ainda mais a maturação da barreira intestinal e atrasar a oclusão. Portanto, a flora microbiana demonstrou afectar o status de vários mecanismos da barreira intestinal (camada de muco, junções oclusivas) e tanto o stress físico como psicológico foram relacionados com a permeabilidade aumentada a macromoléculas, pequenos solutos e bactérias. 2
Na técnica foram propostos vários meios para melhorar a função de barreira intestinal ou a saúde gastrointestinal em lactentes. Por exemplo, no documento US 6132710, estirpes purificadas de Lactobacillus plantarum e Lactobacillus salivarius são administradas a lactentes prematuros para evitar lesões causadas por infecção e inflamação no tecido da mucosa, especialmente por administração nasogástrica para evitar lesão do tecido gastrointestinal na enterocolite necrosante neonatal.
Além disso, o documento JP 5030942 proporciona um alimento e bebida contendo componente activo da membrana de glóbulos de gordura do leite (MFGM), que pode controlar a permeabilidade de substâncias de elevado peso molecular, tal como proteínas, através dos vasos intestinais. É útil para a prevenção e terapêutica de doenças alérgicas alimentares.
Em "Growth, development and differentiation: a functional food Science approach" (1998, British Journal of Nutrition), Koletzko et al. discutem a influência de oligossacáridos em relação à protecção contra infecção por agentes enteropatogénicos.
No documento WO 00/35443A e "Probiotics: A novel approach in the management of food allergy" (Journal of Allergy and Clinicai Immunology, Msoby - yearly book, inc. US, Vol. 99 n°2, 1997, páginas 179-186, Majamaa H. et al.) são discutidos os papéis de PUFA e Lactobacillii em relação à barreira da mucosa.
No que se refere à imunidade da barreira intestinal, o documento WO 9700078 proporciona um hidrolisado de proteínas para subregulação por reacções de hipersensibilidade e para promoção da barreira imune intestinal, que é feita por hidrólise 3 de proteínas com: (a) enzimas derivadas de uma preparação contendo bactérias gastrointestinais probióticas e (ii) um sistema de proteases semelhante ao de Lactobacillus GG e (b) pepsina e/ou tripsina.
Embora estes microrganismos ou ingredientes resultem num grande potencial de efeitos vantajosos para o indivíduo que os incorpora, uma desvantagem reside no facto dos referidos microrganismos ou ingredientes apenas exercerem o seu efeito em partes limitadas do intestino e em mecanismos individuais da barreira intestinal.
Portanto, um objectivo da presente invenção reside em obviar as desvantagens do estado da técnica e proporcionar meios melhorados para promover a maturação simultânea de vários mecanismos da barreira intestinal e isto ao longo de todo o intestino durante a alimentação com fórmula, de modo a induzir um padrão de maturação da barreira intestinal semelhante ao observado com o aleitamento.
Sumário da invenção
Durante os estudos que conduziram à presente invenção, a presente requerente observou um efeito inesperado implicando que o objectivo acima referido pode ser resolvido proporcionando combinações especificas de ingredientes bioactivos que podem ser associados a microrganismos capazes de fornecer pelo menos, um dos referidos ingredientes ao longo de todo o intestino.
Em conformidade, a presente invenção proporciona a utilização de, pelo menos, um microrganismo seleccionado do 4 grupo consistindo em Bifidobacterium CNCM 1-2170, Bifidobacterium CNCM 1-2168, Bifidobacterium CNCM 1-2169, Lactobacillus johnsonii CNCM 1-1255, Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116, Bifidobacterium lactis ATCC 27536 e Bifidobacterium longum BB536, um lípido seleccionado do grupo consistindo em ácido araguidónico (AA), ácido docosa-hexanóico (DHA) e gangliósidos e um hidrato de carbono não digerível, no fabrico de uma composição nutricional para indução de um padrão de maturação da barreira intestinal semelhante ao observado com a amamentação. A invenção estende-se à utilização de, pelo menos, um microrganismo seleccionado do grupo que compreende Bifidobacterium CNCM 1-2170, Bifidobacterium CNCM 1-2168, Bifidobacterium CNCM 1-2169, Lactobacillus johnsonii CNCM 1-1255, Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116, Bifidobacterium lactis ATCC 27536 e Bifidobacterium longum BB536, um lípido seleccionado do grupo compreendendo ácido araquidónico (AA), ácido docosa-hexanóico (DHA) e gangliósidos e um hidrato de carbono não digerível no fabrico de uma composição nutricional para manutenção da homeostase da barreira intestinal após stress físico ou psicológico.
Os microrganismos específicos são utilizados como parte das combinações para administrar substâncias capazes de melhorar a maturação da barreira intestinal a partes específicas do tracto gastrointestinal. Os microrganismos que diferem na sua capacidade de sobreviver nas diferentes partes do tracto gastrointestinal podem ser incorporados num cocktail. 0 lípido e hidrato de carbono, não digerível, específicos são adicionados ao cocktail de microrganismos de modo a reforçar os seus efeitos por estimulação da maturação de mecanismos de barreira 5 diferentes dos estimulados pelos microrganismos.
Estas combinações de ingredientes podem ser incluídas em fórmulas para lactentes prematuros e fórmulas de iniciação para lactentes que, por melhoramento da maturação da barreira, podem também reduzir o risco de alergias e infecções.
Um outro objectivo da presente invenção refere-se à utilização dessas combinações de ingredientes específicos para melhorar a maturação da barreira intestinal e a função de barreira em lactentes, reduzindo assim o risco de desenvolvimento de alergias e de infecções.
Noutra forma de realização, a presente invenção refere-se à utilização dos referidos ingredientes para melhorar a homeostase da barreira intestinal durante o período de amamentação em lactentes saudáveis e nos que sofrem de stress físico ou psicológico.
Num último aspecto, a invenção proporciona um método para melhorar a maturação da barreira intestinal e uma função de barreira óptima em lactentes, compreendendo o passo de administrar ao indivíduo uma combinação de, pelo menos, um ingrediente seleccionado do grupo consistindo em gorduras ou oligossacáridos não digeríveis específicos, estando os referidos ingredientes associados a, pelo menos, um microrganismo.
Descrição pormenorizada da invenção
Na descrição seguinte, o termo "Fórmula para baixo peso ao nascer (BPN)" significa fórmula concebida especificamente para 6 alimentar o lactente BPN. 0 lactente BPN é definido como um lactente com peso inferior a 2500 g ao nascer. Este lactente pode ser tanto um lactente "prematuro" (i. e., nascido antes da 37a semana de gestação) ou um lactente "nascido a termo pequeno para a idade gestacional" (i. e., um lactente nascido entre a 37a e a 41a semanas de gestação, mas apresentando um desenvolvimento intra-uterino retardado). A fórmula BPN pode ser utilizada logo que for possível a alimentação entérica e até que o lactente BPN atinja um peso corporal semelhante ao peso à nascença de um lactente a termo (2500 g-4000 g) ou durante mais semanas até aos 5000 g. O termo "Fórmula de iniciação" significa fórmula especificamente concebida para alimentar lactentes durante os primeiros 4-6 meses de vida e preencher a totalidade dos seus requisitos nutricionais. A composição da invenção compreende as substâncias especificadas na reivindicação 1 e 2.
De acordo com um primeiro aspecto, as seguintes substâncias podem ser parte de uma combinação que pode melhorar a maturação da barreira ao longo de todo o intestino durante a alimentação da fórmula: - Hidratos de carbono não digeríveis, tais como fruto-oligossacáridos (FOS), galacto-oligossacáridos (GOS), inulina, goma-arábica, xilo-oligossacáridos, amido resistente e semelhantes e - LC-PUFA, como ácido araquidónico (AA) ou ácido docosa-hexanóico (DHA) 7
Oligossacáridos de leite humano, tal como sialil-lactose e/ou - Gangliósidos, tais como os contidos em soro de leite de búfala sem lactose e/ou - Leite ou fracções de colostro, tais como caseína ácida, de coalho ou micelar, soro de leite ácido, doce ou ultrafiltrado, membranas de glóbulos de gordura e semelhantes, e/ou - Proteína hidrolisada extensa, tais como as obtidas da hidrólise de proteínas de soro de leite, e/ou - Poliaminas, tais como espermina ou espermidina e/ou um ou mais precursores de poliaminas, em particular, ornitina e arginina
Os hidratos de carbono não digeríveis são oligossacáridos derivados do leite. Um ou mais destes podem ser utilizados nas doses totais de cerca de 0,01 a 5 g/100 mL e, de um modo preferido, 1-2 g/100 mL. Pode ser utilizada uma mistura de dois ou mais hidratos de carbono, variando cada hidrato de carbono entre os 5% e 95% da mistura de hidratos de carbono. A composição contém AA, DHA. Por exemplo, pode ser utilizada uma quantidade eficaz de AA ou DHA. O AA está presente numa quantidade total de cerca de 0,01 a 6,0% em peso de todos os ácidos gordos da composição, de um modo preferido, numa quantidade total de i—1 O a 1%. 0 DHA está incluído numa quantidade total de cerca de 0,01 a cerca de 6,0% em peso de todos os ácidos gordos da composição, de um modo preferido, numa quantidade total de 0,1 a 1%. A proporção eficaz de AA:DHA é cerca de 1:1 a 2,5:1 e, de um modo preferido, 1:1 a 2:1. A fonte do LC-PUFA pode ser lípidos de ovo, óleo de fungos, óleo de peixe com baixo teor de EPA, óleo de algas, etc.
Os gangliósidos, uma segunda classe de lípidos, também podem ser adicionados à combinação de ingredientes, por exemplo, numa quantidade de cerca de 1-20 fórmula microMol/L e, de um modo preferido, 6-15 microMol/L. A fonte de gangliósidos pode ser leite de vaca, colostro de vaca, mas de um modo preferido, leite, soro de leite ou colostro de búfala, leite, soro de leite ou colostro de cabra e/ou derivados de ambos. A combinação também pode conter poliaminas, em particular, espermidina, espermina ou putrescina e/ou um ou mais precursores de poliaminas, em particular ornitina e arginina. Podem ser utilizadas numa quantidade de cerca de 10 a 2000 microg/100 g de fórmula sólida. A poliamina é, de um modo preferido, pelo menos, duas ou mais seleccionadas do grupo consistindo em espermina, espermidina, putrescina e cadaverina. De um modo preferido, a composição compreende cerca de 10-90% de espermina, 10-90% de espermidina, 0-90% de putrescina e 0-20% de cadaverina.
De um modo preferido, as fracções de leite (enriquecidas em factores de crescimento) podem estar na forma de proteínas de membrana de glóbulos de gordura, caseína ácida, de coalho ou micelar, soro de leite ácido, doce ou ultrafiltrado, hidrolisados de proteínas de soro de leite, por exemplo. Podem ser utilizadas numa quantidade de cerca de 0,01 a 7 g/100 mL de fórmula e, de um modo preferido, 0,5-3 g/100 mL.
O microrganismo é seleccionado de Bad 4, B128, B129, Lactobacillus johsonii ou Lactobacillus paracasei ST11, todos eles livremente disponíveis de institutos depositários com os números de ordem CNCM 1-2168, CNCM 1-2169, CNCM 1-2170, CNCM 9 1-1225 e CNCM 1-2116, respectivamente. Além disso, pode utilizar-se Bifidobacterium lactis (Bbl2 (ATCC27536)) . São fornecidos por Hansen (Chr. Hansen A/S, 10-12 Boege Alie, PO Box 407, DK-2970 Hoersholm, Dinamarca). Também se pode utilizar Bifidobacterium longum BB536 (fornecido por Morinaga).
Uma vez seleccionado um microrganismo e opcionalmente pré-tratado, o referido microrganismo pode ser incluído numa fórmula BPN, de iniciação ou de transição, ou em comida para bebé como um pó obtido por liofilização ou secagem por atomização, por exemplo, numa quantidade de 105-1013 ufc/100 g.
Os ingredientes acima referidos são convenientemente administrados na forma de um produto aceitável para o consumidor, tal como um transportador ou suporte ingerivel, respectivamente. Exemplos desses transportadores ou suportes são uma composição farmacêutica ou uma composição alimentar ou de ração para animais de estimação. Exemplos não limitativos dessas composições são leite, iogurte, coalhada, queijo, leites fermentados, produtos fermentados à base de leite, produtos à base de cereais fermentados, pós à base de leite, fórmulas para lactentes, suspensões bacterianas liquidas, suplemento oral seco, suplemento oral húmido, alimentação por sonda seca ou alimentação por sonda húmida.
As composições nutricionais estão, de um modo preferido, na forma de uma dieta completa de tal forma que, quando utilizada como a única fonte de nutrição, cobre essencialmente toda a energia, azoto, lípidos, vitaminas, minerais e oligoelementos diários. No entanto, a composição nutricional também pode estar na forma de um suplemento. 10
Numa forma de realização preferida, a presente invenção proporciona uma fórmula para lactentes, que pode estar na forma de uma fórmula para lactentes com baixo peso no nascimento ou uma fórmula de iniciação para lactentes, por exemplo. Pode compreender, além da combinação de ingredientes específicos, como mencionado acima, uma fonte de proteínas, uma fonte de hidratos de carbono e uma fonte de lípidos. A fonte de proteínas pode ser qualquer proteína dietética adequada; por exemplo, proteínas animais (tais como proteínas do leite, proteínas da carne e proteínas do ovo), proteínas vegetais (tais como proteínas de soja, trigo, arroz ou ervilha), misturas de aminoácidos livres ou uma sua combinação. As proteínas do leite, tais como a caseína, as proteínas de soro de leite e as proteínas de soja são particularmente preferidas. Numa forma de realização preferida, a fonte de proteínas compreende cerca de 1,8 a cerca de 4 gramas por 100 kcal de fórmula.
Se a fórmula incluir uma fonte de gorduras, a fonte de gorduras fornece, de um modo preferido, cerca de 5% a cerca de 55% da energia da fórmula nutricional; ou cerca de 3 a 7 gramas por 100 kcal de fórmula; Os lípidos que compõem a fonte de gorduras podem ser quaisquer gordura adequada ou mistura de gorduras. As gorduras vegetais são particularmente adequadas, por exemplo, óleo de soja, óleo de palma, óleo de coco, óleo de cártamo, óleo de girassol, óleo de milho, óleo de canola, lecitinas e semelhantes. As gorduras animais, tal como as gorduras do leite, também podem ser adicionadas se desejado.
Se a fórmula incluir uma fonte de hidratos de carbono, a fonte de hidratos de carbono fornece, de um modo preferido, 11 cerca de 40% a cerca de 80% da energia da fórmula nutricional ou cerca de 6 gramas a cerca de 15 gramas por 100 kcal de fórmula, por exemplo. Podem ser utilizados quaisquer hidratos de carbono adequados, por exemplo, sacarose, lactose, glucose, frutose, sólidos de xarope de milho e maltodextrinas, e as suas misturas. Vitaminas e minerais adequados podem ser incluídos na fórmula nutricional da forma habitual para cumprir as directrizes apropriadas. Um ou mais emulsionantes de qualidade alimentar podem ser incorporados na fórmula nutricional se desejado; por exemplo, ésteres do ácido diacetil-tartárico de mono-diglicéridos, lecitina e mono- e di-glicéridos. Analogamente também podem ser incluídos sais e estabilizadores adequados.
Esta fórmula é, de um modo preferido, administrável entericamente, por exemplo, na forma de um pó, de um concentrado líquido ou de uma bebida pronta a beber. Pode ser preparada de qualquer modo adequado, por exemplo, por mistura conjuntamente da fonte de proteínas dietéticas, a fonte de hidratos de carbono e a fonte de gorduras em proporções apropriadas. Se utilizados, os emulsionantes podem ser incluídos na mistura. As vitaminas e minerais podem ser adicionados nesta altura mas são normalmente adicionados mais tarde para evitar a degradação térmica. Quaisquer vitaminas lipófilas, emulsionantes e outros semelhantes podem ser dissolvidos na fonte de gordura antes da mistura. Água, de um modo preferido, água que foi submetida a osmose inversa, pode então ser misturada para formar uma mistura líquida. A temperatura da água é convenientemente de cerca de 50 °C a cerca de 80 °C para auxiliar a dispersão dos ingredientes. Podem ser utilizados liquidificadores disponíveis comercialmente para formar a mistura líquida. A mistura líquida é então homogeneizada; por exemplo, em duas fases. 12 A mistura líquida pode então ser tratada termicamente para reduzir as cargas bacterianas. Por exemplo, a mistura líquida pode ser rapidamente aquecida a uma temperatura na gama de cerca de 80 °C a cerca de 150 °C durante cerca de 5 segundos a cerca de 5 minutos. Isto pode ser feito por injecção de vapor, autoclave ou por permutador de calor, por exemplo, um permutador de calor de placas. A mistura líquida pode então ser arrefecida a cerca de 60 °C a cerca de 85 °C, por exemplo, por refrigeração por vaporização rápida. A mistura líquida pode então ser de novo homogeneizada, por exemplo em duas fases a cerca de 7 MPa a cerca de 40 MPa na primeira fase e cerca de 2 MPa a cerca de 14 MPa na segunda fase. A mistura homogeneizada pode então ser novamente arrefecida para se adicionar quaisquer componentes sensíveis ao calor; tais como vitaminas e minerais. O pH e teor de sólidos da mistura homogeneizada é convenientemente normalizado nesta altura.
Se se desejar produzir uma fórmula nutricional em pó, a mistura homogeneizada é transferida para um aparelho de secagem adequado, tal como um secador por atomização ou liofilizador, e convertida em pó. O pó deve ter um teor de humidade inferior a cerca de 5% em peso.
Se se desejar produzir uma fórmula líquida, de um modo preferido, procede-se ao enchimento asséptico da mistura homogeneizada em recipientes adequados. O enchimento asséptico dos recipientes pode ser realizado por pré-aquecimento da mistura homogeneizada (por exemplo, até cerca de 75 a 85 °C) e depois injecção de vapor na mistura homogeneizada para aumentar a temperatura até cerca de 140-160 °C, por exemplo, a cerca de 150 °C. A mistura homogeneizada pode então ser arrefecida, por exemplo por refrigeração por vaporização rápida, a uma 13 temperatura de cerca de 75 a 85 °C. A mistura homogeneizada pode então ser homogeneizada, adicionalmente arrefecida a cerca da temperatura ambiente e introduzida em recipientes. Um aparelho adequado para efectuar um enchimento asséptico desta natureza está disponível comercialmente. A fórmula liquida pode estar na forma de uma fórmula pronta a alimentar tendo um teor de sólidos de cerca de 10 a cerca de 14% em peso ou pode estar na forma de um concentrado, geralmente com um teor de sólidos de cerca de 20 a cerca de 26% em peso. Podem ser adicionados aromarizantes às fórmulas liquidas de modo que as fórmulas são proporcionadas na forma de bebidas prontas a beber, convenientes e saborosas.
Esta composição pode ser especialmente concebida para lactantes saudáveis, lactentes que sofrem de alterações microflora intestinal, tal como após o tratamento com antibióticos, e crianças que sofrem de stress físico e psicológico resultante, por exemplo, de doença, cirurgia, hospitalização, separação prolongada da mãe, de modo a melhorar a maturação da barreira intestinal e reduzir assim o risco de alergias e infecções. A quantidade de fórmula necessária a ser alimentada ao lactente vai variar dependendo de factores, tais como o estado do lactente, o peso corporal do lactente, a idade do lactente e se a fórmula é a única fonte de nutrição. Em geral, é administrada suficiente composição nutricional para fornecer ao lactente cerca de 1 g de proteínas a cerca de 4,0 g de proteínas por kg de peso corporal por dia, suplementado com os ingredientes de acordo com a presente invenção nas quantidades como indicado acima. Se a composição nutricional for utilizada como um suplemento de outros alimentos, a quantidade da composição nutricional que é administrada por dia pode ser diminuído em conformidade. 14
Os seguintes exemplos não limitativos ilustram adicionalmente a invenção. São precedidos por uma breve descrição das Figuras. A Figura 1 representa a concentração plasmática de FITC-dextrano (A) e HRP (B) em ratos manuseados (NS-) ou privados da mãe (MS) ao DPN 36 alimentados com dietas de controlo (—C) ou suplementada (—S). 0 plasma foi recolhido 150 min após a administraçao da solução de sonda de permeabilidade por sonda intragástrica. É apresentada a média ± MEP de 8 animais. Letras diferentes indicam diferença significativa (p <0,05).
Exemplo 1: Efeitos de LC-PUFA, Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116 e de FOS/GOS na permeabilidade intestinal.
Os efeitos específicos do stress neonatal na barreira intestinal estão a começar a ser documentados. Diferentes estudos em ratos mostraram que a privação materna intermitente durante o período neonatal resulta em maior permeabilidade intestinal no desmame e mais tarde na vida. Com este estudo, pretendeu-se avaliar o efeito da alimentação de uma dieta suplementada com uma mistura de LC-PUFA, bactérias probióticas e oligossacáridos não digeríveis na permeabilidade intestinal de ratos jovens que sofreram um protocolo de privação materna durante o período neonatal. 15 Métodos :
Animais
Ratos fêmeas Long-Evans Hooded grávidas primíparas foram comprados a Janvier (França), chegando à nossa unidade de cuidados de animais no dia 12 da gestação. Foram alojados individualmente até à entrega a temperatura e humidade constantes, e mantidos num ciclo clarorescuro de 12:12. Alimentos e água foram fornecidos ad libitum. As condições de alojamento foram mantidas durante todo o protocolo.
Um dia após o parto (dia pós-natal 2 - PND2), as parturientes foram removidas das suas gaiolas de maternidade e determinou-se o sexo das crias. Ninhadas padronizadas de oito crias machos foram aleatoriamente distribuídas para adopção.
Stress neonatal
As parturientes e s suas crias foram atribuídas a uma das duas condições de criação: 1) grupos de separação materna, expostos a um período de 180 min de separação materna diária no DPN 2 a 14 (MS), ou 2) controlos manuseados, expostos a manipulação diária (pesagem e manuseamento de 15 min), mas não a separação materna (NS). Às 9 am. as parturientes foram removidas da sua gaiola e mantidas em gaiolas de espera durante o período de separação de 3 horas (parturientes MS) ou período de manuseamento de 15 min (parturientes NS). Cada ninhada MS foi retirada do ninho, pesada e colocada como um grupo numa gaiola de isolamento numa sala 16 adjacente. As gaiolas de isolamento foram mantidas a 32,0 ± 0,5°C. No final do período de separação as crias foram devolvidas à sua gaiola e roladas em cama suja antes de serem reunidos com a sua mãe adoptiva. As ninhadas dos grupos NS foram tratadas de forma semelhante, mas em vez do período de separação de 3 horas, foram manipulados cuidadosamente durante 15 min.
Cinquenta por cento da cama suja da gaiola foram substituídos com cama limpa uma vez por semana.
Protocolo experimental
As crias foram definitivamente separadas das suas mães adoptivas ao DPN 15. Nessa altura, as crias de cada grupo foram randomizadas por peso e distribuídas em 2 grupos de animais MS e 2 grupos de animais NS. As crias de cada um destes quatro grupos foram alojadas em conjunto (8 animais/gaiola) até ao DPN 21. Depois, foram alojados individualmente até ao final do estudo.
Do DPN 15 ao DPN 36, os animais receberam ou dieta de controlo (grupos MS-C e NS-C) ou dieta suplementada (grupos MS-S e NS-S) ad libitum. A dieta foi substituída por um lote fresco todas as manhãs. No PND 36 - após 30 min em jejum e 150 min antes do sacrifício - os animais receberam 1 mL/100 g de solução de sonda de permeabilidade BW por sonda intragástrica. A solução continha 100 mg/mL de FITC-dextrano 70 kDa (Sigma FD-70S) e 20 mg/mL de peroxidase de rábano (HRP do tipo II, Sigma P8250). No momento do sacrifício, os animais foram anestesiados com isoflurano. O sangue foi amostrado na aorta dorsal. O plasma foi obtido por centrifugação e utilizado dentro de horas para a análise das sondas de permeabilidade. 17
Dietas
Os animais foram alimentados do DPN 15 até ao DPN 36 com dietas semi-sintéticos nutricionalmente adaptadas (AIN 93 G modificada) cuja composição está apresentada na tabela 1. A dieta suplementada (S) continha os seguintes ingredientes funcionais: Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116 (chamado ST11) (x IO10 ST11 100 g de dieta); 0,4 g/100 g de fruto-oligossacáridos de dieta (FOS, Raftiline HP, Orafti SA, Bélgica), 3,6 g/100 g de galacto-oligossacáridos de dieta (GOS, Vivinal GOS 10, Borculo Domo Ingredients, Holanda), 2 g/100 g de ácidos gordos Ácido araquidónico (AA, ARASCO, Martek, EUA) e 2 g/100 g de ácidos gordos ácido docosa-hexaenóico (DHA, DHASCO, Martek, EUA) . A dieta de controlo (C) continha MRS fresco -substituindo ST11, maltodextrina (Glucidex D12, Roquette Freres, França) e lactose (Fluka, 61340) - em vez de oligossacáridos - e proporção aumentada de manteiga de cacau e óleo de milho substituindo DHASCO e ARASCO.
Lotes frescos de dietas foram preparados todas as semanas, distribuídos em doses diárias, que foram acondicionadas em sacos de alumínio sob atmosfera de N2 e pressão negativa e congelados a -20 °C até à utilização. 18
Tabela 1. Composição das dietas.
Dieta de Dieta controlo suplementada (por 100 mg de dieta) K-caseinato (g) 20,00 20,00 Amido de milho (g) 32,95 32,95 Maltodextrina (g) 20, 74 12,58 Sacarose (g) 10,00 10,00 Lactose (g) 4,26 — Raftilina HP (g) — 0,42 Vivinal GOS 10 (g) — 12,00 Mistura de gorduras (g) (ver a composição 7,00 7,00 adiante) Mistura mineral (AIN-93-G) (g) 3,50 3,50 Mistura de vitaminas (AIN-93-VX) (g) 1,00 1,00 L-Cisteina (g) 0,30 0,30 Hidrogenotartarato de colina DAB 10 g) 0,25 0,25 MRS (mL) 0,80 — cultura de ST11 (5xl010 ufc/mL) (mL) 0,8 Mistura de gorduras: g/100 g de mistura de gorduras Óleo de soja 25,12 26,44 Trisun 80 — 2,59 Manteiga de cacau 30,26 27,12 Óleo de milho 44,63 34,22 ARASCO — 4, 70 DHASCO — 4,93
As sondas de permeabilidade foram analisados no plasma dos animais. A concentração de FITC-dextrano foi avaliada num fluorimetro a λβχ 485nm/Xem 535 nm. A HRP foi analisada 19 utilizando substrato TNB (Sigma T0440) e medindo a DO do produto da reacção a 340 nm.
Estatística
Os dados são expressos como média ± MEP. A normalidade e homocedasticidade dos dados foram verificados em cada grupo. As comparações foram feitas por ANOVA a dois factores (dois factores: stress neonatal e dieta) seguida por uma Diferença Mínima Significativa de Fisher (LSD) para avaliar as diferenças entre os grupos.
Resultados
Os resultados estão apresentados na Figura 1. Como esperado, a concentração de dextrano e HRP era ou tendia a ser mais alta nos animais que sofreram o protocolo de privação materna (MS-C vs NS-C). Inversamente, os animais MS alimentados com a dieta suplementada apresentaram concentrações de dextrano e HRP que eram ou tendiam a ser menores do que a encontrada em animais MS alimentados com a dieta de controlo (MS-S vs MS-C) e não significativamente diferentes dos animais que não sofreram o stress neonatal.
Concluiu-se que a separação materna aumenta em ratos a permeabilidade intestinal a proteínas e outras macromoléculas e que uma mistura de ingredientes funcionais contendo LC-PUFA, oligossacáridos e um Lactobacillus restaura a permeabilidade intestinal para níveis normais. 20
Exemplo 2: Fórmula para lactentes de baixo peso à nascença A fórmula tem a seguinte composição (por 100 g de pó) : gorduras totais 24 g, proteínas totais 14,4 g, hidratos de carbono totais 55,9 g, óleo enriquecido em AA (de fungos) 0,87 g, óleo enriquecido em DHA (óleo de peixe com baixo teor de EPA) 0,44 g, FOS/inulina (70/30) 12 g, S. thermophilus Th4 (Chris Hansen) (pó liofilizado, 10E12 ufc/g) 0,1 g, B. lactis ATCC 27536 (pó liofilizado, 5xl0E12 ufc/g) 0,15 g, mistura de Espermina/Espermidina (1/1) 0,1 mg, Sódio 180 mg, Potássio 530 mg, Cloreto 280 mg, Fósforo 320 mg, Cálcio 490 mg, Magnésio 54 mg, Manganês 34 pg, Vitamina A 1500 UI, Vitamina D 490 UI,
Vitamina E 9,8 UI, Vitamina C 79 mg, Vitamina Kl 59 pg. Vitamina BI 0,29 mg, Vitamina B2 0,66 mg, Vitamina B6 0,3 7 mg, Niacina 4,9 mg, Ácido fólico 290 pg. Ácido pantoténico 2,3 mg, Vitamina BI 2 1,1 pg, Biotina 11 pg. Colina 37 mg, Inositol 2 2 mg, Taurina 39 mg, Carnitina 7, 9 mg, Ferro 7, 4 mg, Iodo 49 pg, Cobre 0,44 mg e Zinco 3,7 mg. A fórmula é reconstituída por mistura de 142 g de pó para 900 mL de água para dar 1 L de preparação pronta a beber. A composição apresentada acima pode variar para acomodar directivas locais relativas às quantidades de ingredientes específicos. Outros oligoelementos (e. g., selénio, crómio, molibdénio, flúor) podem ser adicionados numa quantidade adequada de acordo com a idade. 21
Exemplo 3: Fórmula de iniciação
Prepara-se uma fórmula de iniciação para lactentes de partida (do nascimento até aos 4-5 meses), em forma de pó. A fórmula tem a seguinte composição (por 100 g de pó) : gorduras totais 25,8 g, proteínas totais 11,5 g, hidratos de carbono totais 57,8 g, óleo enriguecido em AA (de fungos) 1 g, óleo enriquecido em DHA (óleo de peixe com baixo teor de EPA) 1 g, FOS/inulina (70/30) 12 g, L. paracasei CNCM 1-2116 (pó seco por atomização, 10E12 ufc/g) 0,1 g, B. longum BB536 (Morinaga) (pó seco por atomização, 5xlOE12 ufc/g) 0,1 g, Sódio 120 mg,
Potássio 460 mg, Cloreto 360 mg, Fósforo 160 mg, Cálcio 320 mg, Magnésio 35 mg, Manganês 40 pg, Vitamina A 1500 UI, Vitamina D 310 UI, Vitamina E 6,1 UI, Vitamina C 41 mg, Vitamina Kl 42 pg, Vitamina BI 0,31 mg, Vitamina B2 0,69 mg, Vitamina B6 0,38 mg, Niacina 3,8 mg, Ácido fólico 46 pg, Ácido pantoténico 2,3 mg,
Vitamina B12 1,1 pg, Biotina 11 pg, Colina 38 mg, Inositol 23 mg, Taurina 41 mg, Carnitina 8,2 mg, Ferro 6,1 mg, Iodo 25 pg, Cobre 0,31 mg e Zinco 3,8 mg. A fórmula é reconstituída por mistura de 132 g de pó para 900 mL de água para dar 1 L de preparação pronta a beber. A composição apresentada acima pode variar para acomodar directivas locais relativas às quantidades de ingredientes específicos. Outros oligoelementos (e.g. selénio, crómio, molibdénio, flúor) podem ser adicionados numa quantidade adequada de acordo com a idade. 22
Exemplo 4: fórmula de iniciação para lactentes
Prepara-se uma fórmula de iniciação para lactentes como no exemplo 3, mas substituindo FOS/inulina por sialil lactose numa quantidade de 0,5 g. Nesta fórmula, metade das proteínas totais vão ser fornecidas na forma de hidrolisado extenso de proteínas de soro de leite.
Lisboa, 27 de Junho de 2013 23

Claims (4)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de, pelo menos um microrganismo seleccionado do grupo consistindo em Bifidobacterium CNCM 1-2170, Bifidobacterium CNCM 1-2168, Bifidobacterium CNCM 1-2169, Lactobacillus johnsonii CNCM 1-1255, Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116, Bifidobacterium lactis ATCC 27536 e Bifidobacterium longum BB536, um lipido seleccionado do grupo consistindo em ácido araquidónico (AA), ácido docosa-hexanóico (DHA) e um oligossacárido não digerível que é um oligossacárido derivado do leite, no fabrico de uma composição nutricional para indução de um perfil de maturação da barreira intestinal semelhante ao observado com a amamentação.
  2. 2. Utilização de, pelo menos, um microrganismo seleccionado do grupo consistindo em Bifidobacterium CNCM 1-2170, Bifidobacterium CNCM 1-2168, Bifidobacterium CNCM 1-2169, Lactobacillus johnsonii CNCM 1-1255, Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116, Bifidobacterium lactis ATCC 27536 e Bifidobacterium longum BB536, um lipido seleccionado do grupo compreendendo ácido araquidónico (AA), ácido docosa-hexanóico (DHA) e um oligossacárido não digerível que é um oligossacárido derivado do leite, no fabrico de uma composição nutricional para manutenção da homeostase da barreira intestinal após stress físico ou psicológico.
  3. 3. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, em que a composição está na forma de uma dieta completa, de um suplemento ou de um medicamento. 1
  4. 4 . Utilização de acordo com a reivindicação 3, em que a composição é uma fórmula para lactentes com baixo peso à nascença, uma fórmula de iniciação ou de transição ou um alimento para bebés. Lisboa, 27 de Junho de 2013 2
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