PT1594520E - Utilização de antagonistas do receptor da bradiquinina-b2 para o tratamento da osteoartrose - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "UTILIZAÇÃO DE ANTAGONISTAS DO RECEPTOR DA BRADIQUININA-B2 PARA O TRATAMENTO DA OSTEOARTROSE" A invenção refere-se à utilização de péptidos com efeito antagonista da bradiquinina para a preparação de medicamentos para o tratamento de doenças degenerativas das articulações.

Nas doenças degenerativas das articulações como a osteoartrose ocorre uma deterioração lenta progressiva da articulação, que é causada em especial pela degradação proteolitica do colagénio pelas colagenases. As colagenases pertencem à superfamilia das metaloproteinases (MP) ou das metaloproteinases de matriz (MMPs). As MMPs são capazes de degradar o colagénio fibrilar e não fibrilar, bem como os proteoglicanos, todos eles componentes importantes da matriz da cartilagem. A MMP 3 participa na degradação biológica da matriz extracelular e encontra-se em concentração aumentada em doentes com osteoartrose, pelo que se atribui à MMP 3 uma importância especial na degradação da matriz da articulação na osteoartrose (Manicourt et al. (1994), Arthritis and Rheumatism, 37: 1774-83) . A bradiquinina é um nonapéptido naturalmente ocorrente, que apresenta alguns efeitos farmacológicos, que levam a inflamações e a dores. Péptidos com efeito antagonista da bradiquinina encontram-se já descritos na Patente Europeia EP 0370453 BI. É ainda conhecido que se podem empregar péptidos com efeito antagonista da bradiquinina no tratamento da osteoartrite ou da 1 artrite reumatóide (AU 638350) . A osteoartrite e a artrite reumatóide são doenças das articulações com fases inflamatórias fortes no decurso da doença. Em Lerner et al. (Arthritis and

Rheumatism (1987), 30, 530-540) descreve-se que, no âmbito da artrite reumatóide, a bradiquinina pode reforçar nomeadamente a ressorpção óssea, mas não estimula ela própria a degradação da matriz da cartilagem.

Na tentativa de encontrar compostos eficazes para o tratamento de doenças degenerativas das articulações, descobriu-se agora que o péptido empregue de acordo com a invenção inibe a libertação de MMPs tal como MMP-3 (bem como MMP-1 e MMP-13) . Pode assim impedir-se a degradação da matriz de modo significativa/mais eficaz, do que apenas pela inibição das próprias MMPs já libertadas ou formadas no tecido. A invenção refere-se por isso à utilização do composto de

Fórmula I A-B-X-E-F-K-(D)-TIC-GM-M-F'-I (I) para a preparação de medicamentos para o tratamento de doenças degenerativas das articulações, em que significam: A ai) átomo de hidrogénio, alquilo- (Ci-Cs) , alcanoilo- (Ci-Cs) , alcooxicarbonilo- (Ci-Cs) ou alquilsulfonilo- (Ci-Cs) , nos quais 1, 2 ou 3 átomos de hidrogénio estão respectivamente substituídos, conforme o caso, por 1, 2 ou 3 resíduos, iguais ou diferentes, de entre a série carboxilo, amino, alquilo-(Ci-C4), alquilamino-(Ci-C4), hidroxilo, alcooxilo-(C1-C3) , halogéneo, di-alquilamino- (C1-C4) , carbamoilo, 2 sulfamoilo, alcooxi- (C1-C4) -carbonilo, arilo-(C6-C12) e aril-(C6-Ci2) -alquilo- (C1-C5) , ou nos quais um átomo de hidroqénio está respectivamente substituído, conforme o caso, por um resíduo de entre a série cicloalquilo- (C3-C8) , alquilsulfonilo- (C1-C4) , alquilsulfinilo- (C1-C4) , aril- (C6-C12) -alquilsulfonilo- (Cq-C4) , aril-(C6-C12)-alquilsulfinilo-(C1-C4) , ariloxi-(C6-C12) , heteroarilo- (C3-C9) e heteroariloxi- (C3-C9) , e 1 ou 2 átomos de hidroqénio estão substituídos por 1 ou 2 resíduos, iguais ou diferentes, de entre a série carboxilo, amino, alquilamino-(C1-C4) , hidroxilo, alcooxilo- (C1-C4) , halogéneo, di-alquilamino-(C1-C4) , carbamoilo, sulfamoilo, alquiloxicarbonilo-(C1-C4) , arilo- (C6-Ci2) e aril-(C6-C12) -alquilo- (C1-C5) , a2) cicloalquilo- (C3-C8) , carbamoilo, que pode estar, conforme o caso, substituído no átomo de azoto por alquilo- (Ci-Ce) ou por arilo- (C6-C12) , arilo- (C6-C12) , ariloilo- (C6-C12) , arilsulfonilo- (C6-C12) ou heteroarilo- (C3-C9) ou heteroariloilo- (C3-C9) , em que nos resíduos definidos em ai) e a2), heteroarilo, ariloilo, arilsulfonilo e heteroariloilo, respectivamente podem estar substituídos, conforme o caso, por 1, 2, 3 ou 4 resíduos, iguais ou diferentes, de entre a série carboxilo, amino, nitro, hidroxilo, ciano, alquilamino-(C1-C4), alquilo-(Ci— C4) , alcooxilo- (C1-C4) , halogéneo, di-alquilamino- (C1-C4) , carbamoilo, sulfamoilo e alcooxicarbonilo- (C1-C4) , ou a3) um resíduo de Fórmula II, em que R(l) se define como A em ai) ou 3.2), R(2) significa átomo de hidrogénio ou metilo, R(3) significa átomo de hidrogénio ou alquilo- (Ci-C6) , em que alquilo não está substituído ou está mono-substituído por amino, amino substituído, hidroxilo, carbamoilo, guanidino; guanidino substituído, ureido, mercapto, metilmercapto, fenilo, 4-clorofenilo, 4-fluorofenilo, 4-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, 4-hidroxifenilo, ftalimido, 4-imidazolilo, 3-indolilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo, 3-piridilo ou ciclo-hexilo, em que amino substituído representa um resíduo -NH-A- e guanidino substituído representa um resíduo -NH-C(NH)-NH-A-, nos quais A se define como em ai) ou a2) ; B Arg, Lys, Orn, 2,4-diaminobutiroilo ou um resíduo de L-homoarginina, em que o grupo amino ou guanidino da cadeia lateral pode estar substituído respectivamente por um A como descrito em ai) ou a2) ; X um composto de Fórmula IIIa ou Illb G'-G'-Gly (11 Ia) G' -NH- (CH2)n-CO (IHb),

em que G' significa independentemente um do outro um resíduo de Fórmula IV R{4) R(5) o

M í! 1V —N-CH-C~~ 4 em que R(4) e R(5) formam em conjunto com os átomos que os suportam um sistema de anéis heterociclico, mono-, bi- ou tri-ciclico, com 2 a 15 átomos de C, e n é 2 a 8/ significa o resíduo de fenilalanina, que está substituído, conforme o caso, por halogéneo na posição 2, 3 ou 4 do anel, ou significa tirosina, O-metiltirosina, 2-tienilalanina, 2-piridilalanina ou naftilalanina; significa, independentemente um do outro, o resíduo de um aminoácido neutro, ácido ou básico, alifático ou aromático, que pode estar substituído na cadeia lateral, ou significa uma ligação covalente;

-Tic o resíduo de Fórmula V 0

V significa G' ou uma ligação covalente; significa o resíduo de um aminoácido básico Arg ou Lys na forma L ou D, ou uma ligação covalente, em que o grupo guanidino ou o grupo amino da cadeia lateral pode estar substituído por A como definido em ai) ou a2), ou um resíduo -NH-(CH2)n- com n igual a 2-8, ou uma ligação covalente; -OH, -NH2 ou -NHC2H5; Κ ο resíduo -ΝΗ-(CH2) X-C0 com x igual a 1 a 4, ou uma ligação covalente; M definido como F, bem como os seus sais fisiologicamente toleráveis.

Um outro objectivo da invenção é também a utilização, de acordo com a invenção, do composto de Fórmula I, em que significam: B Arg, Orn ou Lys, em que o grupo guanidino ou o grupo amino da cadeia lateral não está substituído ou pode estar substituído por alcanoilo-(Ci-C8) , ariloilo- (C7-C13) , heteroariloilo-(C3-C9) , alquilsulfonilo- (Ci-C8) ou arilsulfonilo- (C6-C12) , em que os resíduos arilo, heteroarilo, ariloilo, arilsulfonilo e heteroariloilo podem estar substituídos, como descrito em a2) , conforme o caso, com 1, 2, 3 ou 4 resíduos iguais ou diferentes; E fenilalanina, 2-clorofenilalanina, 3-clorofenilalanina, 2-fluorofenilalanina, 3-fluorofenilalanina, 4-fluorofenilalanina, tirosina, O-metiltirosina ou β-(2-tienil)-alanina; K é uma ligação covalente e M é uma ligação covalente. A invenção refere-se ainda à utilização, de acordo com a invenção, do composto de Fórmula I, em que significam: 6 A átomo de hidrogénio, (D)- ou (L)-H-Arg ou (D)- ou (L)-H-Lys ou (D)- ou (L)-H-Orn; B Arg, Orn ou Lys, em que o grupo guanidino ou o grupoamino da cadeia lateral pode estar substituído por átomo de hidrogénio, alcanoilo-(C1-C8) , ariloilo- (C6-C12) , heteroariloilo- (C3-C9) , alquilsulfonilo- (Ci-Ce) ou arilsulfonilo- (C6-C12) , em que os resíduos arilo, heteroarilo, ariloilo, arilsulfonilo e heteroariloilo podem estar substituídos, conforme o caso, com 1, 2, 3 ou 4 resíduos iguais ou diferentes de entre a série metilo, metoxilo e halogéneo; C Pro-Pro-Gly, Hyp-Pro-Gly ou Pro-Hyp-Gly; E Phe ou Thia; F Ser, Hser, Lys, Leu, Vai, Nle, Ile ou Thr; K uma ligação covalente; M uma ligação covalente; G o resíduo de um sistema de anéis heterocíclico de Fórmula IV, escolhido de entre os resíduos dos heterociclos pirrolidina (A), piperidina (B), tetra-hidroisoquinolina (C) , eis- ou trans-deca-hidroisoquinolina (D) , cis-endo-octa-hidroindole (E) , cis-exo-octa-hidroindole (E) , trans-octa-hidroindole (E) , cis-endo-, cis-exo-, trans-octa-hidrociclopentano[b]pirrole (F), ou hidroxiprolina (V); 7 F' Arg; I OH. A invenção refere-se também à utilização, de acordo com a invenção, de um composto de Fórmula I, caracterizado por ser escolhido de entre o grupo: H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH, H-(D)-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH, H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH, H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH e H-(D)-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH. A invenção refere-se também à utilização, de acordo com a invenção, de D-arginil-L-arginil-L-prolil-L-prolilglicil-3-(2-tienil)-L-alanil-L-seril-(3R)-l,2,3,4-tetra-hidro-3-isoquino-linocarbonil-(2 S,3aS,7aS)-octa-hidro-lH-indole-2-carbonil-L-arginina; também conhecida pela designação HOE140.

Pela designação "alquilo-(Ci-Cs)" entendem-se residuos de hidrocarbonetos cuja cadeia de carbono é linear ou ramificada e contêm 1 a 8 átomos de carbono, por exemplo metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, terc-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, 2,3-dimetilbutilo, heptilo, neo-hexilo ou octilo.

Pela designação "halogéneo" entende-se flúor, cloro, bromo ou iodo.

Pela designação "cicloalquilo-(C3-C8)" entendem-se residuos derivados de monociclos de 3 a 8 membros, como ciclopropilo, 8 ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-heptilo ou ciclooctilo.

Pela designação "arilo-(C6-Ci2)" entendem-se resíduos de hidrocarbonetos aromáticos com 6 a 14 átomos de carbono no anel. Resíduos arilo- (C6-C12) são por exemplo fenilo, naftilo, por exemplo 1-naftilo, 2-naftilo, bifenililo, por exemplo 2-bifenililo, 3-bifenililo e 4-bifenililo, antrilo ou fluorenilo. Os resíduos bifenililo, naftilo e, em especial, fenilo, são resíduos arilo preferidos.

Pela designação "heteroarilo- (C3-C9)" entendem-se resíduos como acridinilo, azetidinilo, benzimidazolilo, benzofuranilo, benzotiofuranilo, benzotiofenilo, benzoxazolilo, benzatiazolilo, benzatriazolilo, benzatetrazolilo, benzisoxazolilo, benzisotiazolilo, benzimidazalinilo, carbazolilo, 4aH-carbazolilo, carbolinilo, cromanilo, cromenilo, cinolinilo, deca-hidrocinolinilo, 2H, 6H-1,5,2-ditiazinilo, di-hidrofurano[2,3-b]-tetra-hidrofurano, furanilo, furazanilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, imidazolilo, lH-indazolilo, indolinilo, indolizinilo, indolilo, 3H-indolilo, isobenzofuranilo, isocromanilo, isoindazolilo, isoindolinilo, isoindolilo, isoquinolinilo (benzimidazolilo) , isotiazolilo, isoxazolilo, morfolinilo, naftiridinilo, octa-hidroisoquinolinilo, oxadiazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, oxazolidinilo, oxazolilo, fenantridinilo, fenantrolinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxatiinilo, fenoxazinilo, ftalazinilo, piperazinilo, piperidinilo, pteridinilo, purinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridooxazolilo, piridoimidazolilo, piridotiazolilo, piridotiofenilo, piridinilo, piridilo, 9 pirimidinilo, pirrolidinilo, pirrolinilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo, 4H-quinolizinilo, quinoxalinilo, quinuclidinilo, tetra-hidrofuranilo, tetra-hidroisoquinolinilo, tetra-hidroquinolinilo, 6H-1,2,5-tiadiazinilo, 1,2,3-tiadiazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, 1,2,5-tiadiazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, tiantrenilo, tiazolilo, tienilo, tienotiazolilo, tienooxazolilo, tienoimidazolilo, tiofenilo, triazinilo, 1,2,3-triazolilo, 1,2,4-triazolilo, 1,2,5-triazolilo, 1,3,4-triazolilo e xantenilo. São preferidos: piridilo; como 2-piridilo, 3-piridilo ou 4-piridilo; pirrolilo; como 2-pirrolilo e 3-pirrolilo; furilo; como 2-furilo e 3-furilo; tiofenilo, tienilo; como 2-tienilo e 3-tienilo; imidazolilo, pirazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tetrazolilo, piridazinilo, pirazinilo, pirimidinilo, indolilo, isoindolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, 1,3-benzodioxolilo, indazolilo, benzimidazolilo, benzoxazolilo, benzotiazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, cromanilo, isocromanilo, cinolinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, ftalazinilo, piridoimidazolilo, piridopiridinilo, piridopirimidinilo, purinilo e pteridinilo.

Os péptidos empregues de acordo com a invenção preparam-se como descrito no documento EP 0370453 BI.

Devido às propriedades farmacológicas os compostos de acordo com a invenção são adequados para a profilaxia e terapia selectivas de doenças degenerativas das articulações, como osteoartrose, espondilose ou atrofia da cartilagem após um traumatismo da articulação ou imobilização prolongada da articulação após ferimentos no menisco ou na rótula ou rupturas de ligamentos. 10

Pela designação "osteoartrose" entende-se uma doença que resulta sobretudo de uma má relação entre o esforço e a capacidade de carga de cada um dos componentes da articulação e o tecido da articulação, que está ligada a uma destruição crescente da cartilagem e que não é predominantemente inflamatória. Em primeiro plano na patologia estão lesões da cartilagem da articulação, como fibrilação, desmarcação ou hialinização, seguidas de alterações reactivas do osso subcondral, bem como de alterações da cápsula.

Pela designação "espondilose" entende-se uma artrose das vértebras, que se caracteriza por uma atrofia não inflamatória da cartilagem das vértebras e dos discos vertebrais. A aplicação dos medicamentos de acordo com a invenção pode efectuar-se por via inalativa ou aplicação transdérmica ou por injecção subcutânea, intraarticular, intraperitoneal ou intravenosa. É preferida a aplicação intraarticular ou tópica.

Formas de composição sólidas ou galénicas adequadas são por exemplo suspensões, emulsões ou soluções injectáveis, bem como preparados com libertação retardada de ingrediente activo, em cuja preparação se utilizam aditivos usuais.

De um modo preferido, preparam-se e administram-se os preparados farmacêuticos em unidades de dosagem, contendo cada unidade, como componente activo, uma determinada dose do composto de Fórmula I de acordo com a invenção. No caso de soluções injectáveis em forma de ampolas, esta dose pode ser de até cerca de 300 mg, um modo preferido, contudo, cerca de 10 a 100 mg, no caso de soluções injectáveis para o tratamento 11 intraarticular de até cerca de 300 micrograma, de um modo preferido de 100 micrograma.

Para o tratamento de um doente adulto são indicadas, conforme a eficácia do composto de Fórmula I, doses diárias de cerca de 0,01 mg/kg a 10 mg/kg de ingrediente activo na aplicação sistémica, na aplicação de soluções injectáveis são indicadas doses diárias de 0,001 mg/kg a 0,005 mg/kg de ingrediente activo e na aplicação tópica ou inalativa são indicadas doses diárias de 0,01 mg/kg a 5 mg/kg de ingrediente activo. Em certas circunstâncias podem contudo ser adequadas doses diárias mais altas ou mais baixas. A administração da dose diária pode efectuar-se tanto por forma única, na forma de uma unidade de dosagem individual, como também em várias unidades de dosagem mais pequenas, ou ainda por toma múltipla de doses divididas em determinados intervalos.

Em seguida ilustra-se em maior detalhe a invenção com base em exemplos.

As abreviaturas utilizadas para os aminoácidos correspondem ao código de três letras usual em quimica peptidica, como descrito no Europ. J. Biochem. 138, 9 (1984). As restantes abreviaturas utilizadas encontram-se listadas em seguida.

Oic octa-hidro-lH-indole-2-carbonilo

Thia 2-tienilalanil

Tic l,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina-3-ilcarbonil.

Preparou-se HOE 140 como descrito no documento EP 0370453 BI. 12

Exemplos farmacológicos

Para a análise do efeito modificador da doença de HOE140 num modelo de cultura celular relevante para a cartilagem, analisou-se a expressão de MMP3 na linha celular de condrossarcoma SW1353 (ATCC: HTB 94). Para os ensaios cultivaram-se células SW1353 em condições padrão (37 °C, 5% de CO2) em DMEM-Glutamax com 10% de soro de vitela fetal (FKS) em balões de cultura plásticos. Após destripsinização das células, inocularam-se 50.00 células por orifício de uma placa plana de 96 orifícios, em meio sem FSK, e pré-incubaram-se com o composto HOE140 no incubador. Após uma hora efectuou-se a estimulação das células por adição de ILl-β humana (0,1 ng/mL, Roche) num volume total de 300 μ]1. Após 24 horas de incubação em condições padrão removeu-se o sobrenadante da cultura celular, centrifugou-se durante 5 minutos e congelou-se a -20 °C até posterior análise. A análise da expressão de MMP3 nos sobrenadantes da cultura celular efectuou-se então por meio de um sistema de teste MMP3 ELISA comercial (Amersham) segundo as indicações do fabricante. Paralelamente, com as células restantes, efectuou-se um teste de citotoxicidade WST. Para tal utilizou-se o sistema de teste comercial da firma Roche e efectuou-se a determinação segundo as indicações do protocolo do fabricante.

Os resultados são apresentados na Tabela 1 seguinte. A bradiquinina aumenta a libertação de MMP3 por mais de 30%. Esta libertação aumentada de MMP3 foi inibida com HOE140, de uma forma dependente da dose. 13

Tabela 1: Libertação de MMP3 a partir de células SW

Parâmetros de estimulação Libertação de MMP-3 Valores face ao valor de partida MW (OD450 nm) SD não estimulado 93 20 ILla (0,05 ng/mL) 328 17 100 ILla + bradiquinina (0,1 μΜ) 433 32 132, 0 ILla + bradiquinina (0,1 μΜ) + 0,05 μΜ HOE140 458 50 139, 6 ILla + bradiquinina (0,1 μΜ) + 0,1 μΜ HOE140 371 8 113, 1 ILla + bradiquinina (0,1 μΜ) + 0,5 μΜ HOE140 309 18 94,2 ILla + bradiquinina (0,1 μΜ) + 1 μΜ HOE140 306 27 93,3

Lisboa, 02 de Outubro de 2006 14

Claims (3)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Utilização do composto de Fórmula I A-B-X-E-F-K-(D)-TIC-GM-M-F'-I (I) escolhido de entre o grupo: H (D) Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH, H-(D)-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH, H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH, H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH e H-(D)-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH para a preparação de medicamentos para a profilaxia e terapia da osteoartrose, da espondilose ou da atrofia da cartilagem após um traumatismo da articulação ou um repouso prolongado da articulação após ferimentos no menisco ou na rótula ou rupturas de ligamentos.
2. 2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por se empregar o composto D-arginil-L-arginil-L-prolil-L-prolilglicil-3-(2-tienil)-L-alanil-L-seril-(3R)-1,2,3,4-tetra-hidro-3-isoquinolinocarbonil-(2 S,3aS,7aS)-octa-hidro-lH-indole-2-carbonil-L-arginina. 1
3. 3. Utilização do composto de Fórmula I, de acordo com as reivindicações 1 efectuar por intraperitoneal transdérmica. ou 2, caracterizada por injecção subcutânea, ou intravenosa ou a aplicação se intraarticular, por aplicação Lisboa, 02 de Outubro de 2006 2