PT1406893E - Compostos bicíclicos de pirrolidina - Google Patents

Description

ΡΕ1406893 1 DESCRIÇÃO "COMPOSTOS BICÍCLICOS DE PIRROLIDINA"

Esta invenção dirige-se a compostos originais biciclicos de pirrolidina, às suas utilizações como produtos farmacêuticos e às composições farmacêuticas que os contenham. O tratamento de infecções microbianas em organismos hóspede necessita de meios eficazes para matar o micróbio, prejudicando o mínimo possível o hospedeiro. Assim, são desejáveis para tratamento agentes com características específicas para um microorganismo causador de uma patologia. A penicilina é um exemplo extremamente bem conhecido de um tal agente. A penicilina actua na inibição da biossíntese das paredes celulares bacterianas. Dado que as células de mamíferos não necessitam de paredes celulares para a sobrevivência, a administração de penicilina a um ser humano infectado por bactérias pode matar as bactérias sem matar as células humanas.

Contudo, a utilização de antibióticos e anti-microbianos também tem rsultado num aumento de resistência a esses agentes. Conforme as bactérias se vão tornando resistentes a gentes microbianos mais antigos e mais largamente utilizados, devem ser desenvolvidos novos 2 ΡΕ1406893 antimicrobianos de modo a proporcionar tratamento eficaz para seres humanos e animais não humanos sofrendo de infecção microbiana. A peptidil deformilase (PDF) é uma metalo-peptidase encontrada em organismos procariotas tais como as bactérias. A síntese da proteína em organismos procariotas inicia-se com N-formil metionina (fMet). Após o início da síntese de proteína, o grupo formilo é removido pela enzima PDF; esta actividade é essencial para a maturação das proteínas. Foi demonstrado que a PDF é necessária para o crescimento bacteriano (ver Chang et ai., J. Bacteriol., Vol. 171, pp. 4071-4072 (1989); Meinnel et ai., J. Bacteriol., Vol. 176, N°. 23, pp. 7387-7390 (1994); Mazel et al., EMBO J., Vol. 13, N° 4, pp 914-923 (1994)). Dado que a síntese de proteínas nos organismos eucariotas não depende da fMet para o seu início, os agentes que inibam a PDF são candidatos atractivos para desenvolvimento de novos fármacos antimicrobianos e antibacterianos. Os organismos procariotas, incluindo os procariotas patogénicos, são descritos em Balows, A., H.G. Truper, M. Dworkin, W. Harder e K.-H. Schleifer (eds.), The Prokaryotes, 2a ed., Nova Iorque; Springer-Verlag, 1992; e Holt, J.G. (editor chefe), Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, Vols. 1-4, Baltimore; Williams & Wilkins (1982, 1986, 1989) . A PDF faz parte da superfamília das metalo-proteinases. Apesar da PDF partilhar claramente muitas das características que caracterizam as metaloproteinases, 3 ΡΕ1406893 difere de outros membros da superfamília em diversos aspectos importantes. Primeiro, o ião metálico na enzima activa parece ser Fe(II) ou possivelmente outro metal catiónico divalente, em vez do ião de zinco mais vulgarmente encontrado (ver Rajagopalan et al., J. Am. Chem. Soc., Vol. 119, pp. 12418-12419 (1997)). Segundo, o ião divalente parece ter um papel importante, não apenas na catálise, mas também na integridade da estrutura da proteina. Terceiro, o terceiro ligando do ião divalente é uma cisteina, em vez de uma histidina ou de um glutamato, como noutras metaloproteinases, e não está localizado no lado do terminal C do motivo HEXXH, mas longe, ao longo da sequência de amino ácidos e do terminal N do motivo. Finalmente, a estrutura em solução, mostra diferenças significativas na estrutura secundária e terciária da PDF, em comparação com outras metaloproteinases prototípicas (ver Meinnel et al., J. Mol. Biol., Vol. 262, pp. 375-386 (1996)). Caracterizou-se a PDF de E. coli, Bacillus stearothermophilus e Thermus thermophilus (ver Meinnel et al., J. Mol. Biol., Vol. 267, pp. 749-761 (1997)). A enzima estudada por Meinnel et al. continha um ião de zinco como ião divalente e as caracteristicas estruturais resumidas acima foram obtidas a partir de proteínas contendo zinco. A estrutura da proteína também foi determinada por RMN (ver 0'Connell et al., J. Biomol., NMR, Vol. 13, N°. 4, pp. 311-324 (1999)).

As metaloproteinases são críticas em muitos aspectos do metabolismo normal. A classe conhecida como 4 ΡΕ1406893 metaloproteinases da matriz (MMP) está envolvida na remodelação tecidular, tal como na degradação da matriz extracelular. Acredita-se que estas enzimas tenham um papel em acontecimentos biológicos normais ou benéficos, tais como a formação do corpus luteum durante a gravidez (ver Liu et al., Endocrinology, Vol. 140, N°. 11, pp. 5330-5338 (1999)), cicatrização de feridas (ver Yamagiwa et al., Bone, Vol. 25, N°. 2, pp. 197-203 (1999) e crescimento ósseo em crianças saudáveis (ver Bord et al., Vol. 23, N° 1, pp. 7-12 (1998)). Os distúrbios envolvendo metaloproteinases têm sido implicados em diversas doenças, tais como cancro, artrite e doenças autoimunes.

Dada a importância das MMP nos processos fisiológicos normais, seria preferível desenvolver agentes que inibam a PDF, uma metaloproteinase presente apenas nos procariotas, evitando uma inibição significativa das MMP. Alternativamente, os inibidores da PDF que também inibem as MMP poder ser de utilidade quando os benefícios terapêuticos da inibição da PDF sejam superiores aos efeitos laterais da inibição das MMP.

Tem sido desenvolvida uma grande variedade de compostos como candidatos a inibidores das MMP e de outras metaloproteinases, e também tem sido dirigido muito esforço para métodos de síntese destes compostos e de compostos relacionados (ver izquierdo-Martin et al., J. Am. Chem. Soc. Vol. 114, pp. 325-331 (1992); Cushman et al., Capítulo 5, "Specific Inhibitor of Zinc Metallopeptidases", Topics 5 ΡΕ1406893 in Molecular Pharmacology, Burgen & Roberts, eds. (1981);

Mohler et al., Nature, Vol. 370, pp. 218-220 (1994); Gearing et al., Nature, Vol. 370, pp. 555-557 (1994) ; McGeehan et al., Nature, Vol. 370, pp. 558-561 (1994) ; Patentes U.S. N°s . 4 052 511, 4 303 662, 4 311 705 , 4 321 383, 4 599 361, 4 804 676, 5 128 346, 5 256 657, 5 268 384, 5 447 929, 5 453 423, 5 552 419 7 5 614 625, 5 643 908, 5 712 300 e 5 869 518; publicações das Patentes Europeias ep 236872, EP 274453, EP 334244, EP 423943, EP 489577, EP 489579, EP497192; EP 574758; e Publicações de Pedidos de

Patente Internacional PCT N°s. WO 90/05719, WO 91/02716, WO 92/13831, WO 92/22523, WO 93/09090, WO 93/09097, WO 93/20047, WO 93/24449, WO 93/24475, WO 94/02446, WO 94/02447, WO 94/21612, WO 94/25434, WO 94/25435, WO 95/33731, WO 96/25156, WO 96/26918, WO 97/30707, WO 97/49674, WO 98/55449 e WO 99/02510. A pesquisa de inibidores da PDF é muito menos extensa do que a dos inibidores das MMP. São descritos derivados N-formil hidroxilamina no Pedido Internacional de Patente WO 99/39704. São descritos peptidos aldeidicos inibidores de PDF em Durand et al., Arch. Biochem. Biophys., Vol. 367, N°. 2, pp. 297-302 (1999). O inibidor da PDF (S)-2-0-(H-fosfonoxi)-L-caproil-L-leucil-p-nitri-alilida é descrito em Hao et al., Biochem., Vol. 38, pp. 4712-4719 (1999) e os peptidil H-fosfonatos inibidores da PDF são discutidos em Hu et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., Vol. 8, pp. 2479-2482 (1998). Os péptidos formilados e os pseudopéptidos, como inibidores de PDF, são descritos em 6 ΡΕ1406893

Meinnel et al., Biochem., Vol. 38, N°. 1, pp. 4288-4295 (1999) .

Tendo em vista a importância na identificação de novos antibióticos para tratamento de bactérias resistentes aos antibióticos existentes e a relativamente pequena quantidade de trabalho realizado sobre os inibidores da PDF, é desejável desenvolver compostos oriqinais inibidores da PDF para avaliação e utilização como agentes antibacterianos e antimicrobianos. A presente invenção preenche essa necessidade.

Em particular, a presente invenção proporciona um composto de fórmula (I):

em que

Ri é arilo ou heteroarilo, que está ligado a uma posição a- ou β- ao azoto do anel; R2 é hidrogénio, halogénio ou hidroxilo; R3 é hidrogénio, halogénio, C1-10 alquilo, C1-10 heteroalquilo ou (R2 e R3) colectivamente formam um C4-7 cicloalquilo, desde que, quando R3 é halogénio, R2 não seja hidroxilo; 7 ΡΕ1406893 X é -CH2- ou S; W é NR5 ou CR4R5, em que R4 é hidrogénio, halogénio, Ci_i0 alquilo ou Ci_i0 heteroalquilo e R5 é C1-10 alquilo, ou (R4 e R5) colectivamente formam um C4-7 cicloalquilo, desde que quando W é NR5, R2 e R3 são hidrogénio, C1-10 alquilo ou heteroalquilo; Y é -C00H, -SH, -N(OH)-CHO OU -CO-NH(OH), desde que quando Y é -N (OH)-CHO ou -SH, R2 é hidrogénio e R3 é hidrogénio, Ci_i0 alquilo ou Ci_i0 heteroalquilo, n é de 0 a 3, desde que quando n é 0, X é -CH2-, um sal seu derivado ou um seu pró-fármaco. A menos que indicado de outro modo, os termos que se seguem, tal como utilizados na especificação, possuem os significados que se seguem. O termo "cicloalcano" ou "cicloalquilo" é um grupo alquilo ciclico saturado contendo de 3 a 6 átomos de carbono no anel, e é, e.g., ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclohexenilo. O termo "azaciclo 4_7 alcano" contém um heteroáto-mo no anel, que é um azoto. Contém de 4 a 7, e especialmente 5 átomos no anel, incluindo o heteroátomo. ΡΕ1406893 O termo "tiazaciclo 4-7 alcano" contém dois hete-roátomos no anel, azoto e enxofre. Contém de 4 a 7, e especialmente 5 átomos, no anel incluindo 0 heteroátomo. O azaciclo 4-7 alcano e o tiazaciclo 4-7 alcano são substituídos na posição a- ou β- para o azoto do anel, por um heteroarilo ou arilo, como definido abaixo. O termo "alquilo" refere-se a grupos alifáticos saturados e não saturados, cicloalquilo ou alquilo substituído, incluindo grupos de cadeia linear, ramificada ou ciclicos, possuindo de 1 a 10 átomos de carbono, e é preferencialmente um alquilo inferior saturado possuindo de 1 a 7 átomos de carbono e especialmente 1 a 4 átomos de carbono. Exemplos de alquilo incluem, mas não se limitam a, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo, neopentilo, n-hexilo, ou n-heptilo, ciclopropilo e especialmente n-butilo. O termo "alquilo substituído", refere-se a um grupo alquilo que é substituído com um ou mais substi-tuintes, preferencialmente 1 a 3 substituintes, incluindo, mas não se limitando a substituintes tais como halogénio, alcoxi inferior, hidroxilo, mercapto, carboxilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo e outros do mesmo tipo. Exemplos de grupos arilo substituídos incluem, mas não se limitam a, -CF3, -CF2-CF3, hidroximetilo, 1- ou 2-hidroxietilo, meto-ximetilo, 1- ou 2-etoxietilo, carboximetilo, 1- ou 2-carboxietilo, ciclopentiletilo e outros do mesmo tipo. 9 ΡΕ1406893 O termo "arilo" ou "Ar" refere-se a um grupo carbocíclico aromático com 6 a 14 átomos de carbono, possuindo um único anel (incluindo, mas não se limitando a, grupos tal como fenilo) ou aneis múltiplos condensados (incluindo, mas não se limitando a, grupos tais como naftilo ou antrilo) e é especialmente fenilo. Um grupo arilo pode ser não substituído ou substituído com um ou mais substituintes, preferencialmente um a três subs-tituintes incluindo, mas não se limitando a, grupos tais como alquilo inferior, halogénio ou alcoxi inferior. O termo "heteroarilo" ou "HetAr" refere-se a um heterociclo aromático monocíclico com 4 a 7 membros, heterociclo aromático monocíclico ou bicíclico composto por 4 a 7 membros, heterociclo aromático monocíclico e um anel benzeno fundido. 0 heteroarilopossui pelo menos um hete-roátomo, preferencialmente um ou dois heteroátomos, incluindo, mas não se limitando a, heteroátomos tais como N, O e S, no anel. Exemplos representativos incluem, mas não se limitam a, oxazolilo, tiazolilo, piridinilo e imidazolilo, benzimidazolilo, isoxazolilo, benztiazolilo e outros do mesmo tipo. 0 heteroarilo pode ser não substituído ou substituído por um ou mais substituintes incluindo, mas não se limitando a, alquilo inferior, halo-alquilo inferior, halogénio, hidroxilo, alcoxi inferior, arilo e (preferencialmente arilo) e outros do mesmo tipo. 0 termo "heteroalquilo" refere-se a um alquilo, como definido acima, saturado ou não saturado, possuindo de 1 a 10 átomos de carbono e especialmente a um heteroalquilo 10 ΡΕ1406893 inferior não saturado com 1 a 4 átomos de carbono, contendo um ou mais heteroátomos como parte das cadeias principal, ramificada ou ciclica no grupo. Os heteroátomos são independentemente seleccionados do grupo que consiste em -NR-, onde R é hidrogénio ou alquilo, -S-, -O- e -P-, preferencialmente -NR-, onde R é hidrogénio ou alquilo e/ou -O-. Os grupos heteroalquilo podem estar ligados ao restante da molécula por um heteroátomo (se estiver disponível uma valência) ou a um átomo de carbono.

Exemplos de grupos heteroalquilo incluem, mas não se limitam a, grupos tais como -0-CH3, -CH2-0-CH3, -CH2-CH2-0-CH3. -S-CH2-CH2-CH3, -CH2-CH(CH3)-S-CH3 e -CH2-CH2-NH-CH2- ch2- . O grupo heteroalquilo pode ser não substituído ou substituído com um ou mais substituintes, preferencialmente um a três substituintes, incluindo, mas não se limitando a, alquilo, halogénio, alcoxi, hidroxilo, mercapto, carboxi e fenilo. 0(s) heteroátomo(s) tal como os átomos de carbono do grupo, podem ser substituídos. 0(s) heteroátomo(s) também podem estar na forma oxidada. O termo "alcoxi", tal como aqui utilizado, refere-se a um Ci_io alquilo ligado a um átomo de oxigénio ou, preferencialmente, um alcoxi inferior saturado possuindo de 1 a 7 átomos de carbono. Exemplos de grupos alcoxi incluem, mas não se limitam a, grupos tais como metoxi, etoxi, terc-butoxi e aliloxi. 11 ΡΕ1406893 O termo "halogénio" ou "halo", tal como aqui utilizado, refere-se a cloro, bromo, flúor, iodo e é especialmente flúor. "Grupo de protecção" refere-se a um grupo quimico que exibe as seguintes caracteristicas: 1) reage selectivamente com a funcionalidade desejada, com bom rendimento, para dar um substrato protegido, estável nas reacções projectadas, para as quais é desejada a protecção; 2) é selectivamente removível a partir do substrato para dar a funcionalidade desejada; e 3) é removido, com bom rendimento, por reagentes compatíveis com outros grupos funcionais presentes ou gerados em tais reacções projectadas. Exemplos de grupos de protecção adequados podem ser encontrados em Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 2a Ed., John Wiley & Sons, NY (1991). Os grupos protectores de amino preferidos incluem, mas não se limitam a, benziloxicarbonilo (CBz), t-butil-oxicar-bonilo (Boc), t-butildimetilsililo (TBDMS), 9-fluorenil-metil-oxicarbonilo (Fmoc) ou ou grupos de protecção foto-lábeis adequados, tais como 6-nitroveratriloxi carbonilo (Nvoc), nitropiperonilo, pirenilmetoxi.carbonilo, nitroben-zilo, dimetoxibenzilo de dimetilo, 5-bromo-7-mitroindo-linilo e outros do mesmo tipo. Os grupos de protecção de hidroxilo preferidos incluem Fmoc, TBDMS, grupos de protecção fotolábeis tais como éter nitroveratril-oximetílico (Nvom), Mom (metoxi metil éter) e Mem (éter metoxi-etoxi-metílico). Os grupos de protecção particularmente preferidos incluem NPEOC (4-nitrofenetiloxicarbonilo e NPEOM (4-nitrofenetiloxi-metiloxi-carbonilo). 12 ΡΕ1406893

Deve ser tomado em consideração que os compostos da invenção, e.g., os compostos de fórmula (I), podem existir sob a forma de isómeros ópticos, racematos ou diastereoisómeros. Por exemplo, um composto de fórmula (I) em que R2 e R3 são resíduos diferentes, é assimétrico e pode ter uma configuração R ou S. Deve compreender-se que a presente invenção engloba todos os enantiómeros e suas misturas. Aplicam-se considerações semelhantes em relação a materiais de partida exibindo átomos assimétricos de carbono, como mencionado.

Os compostos da invenção, e.g., os compostos de fórmula (I), podem existir sob forma livre ou sob a forma de sal, e.g., sob a forma de um sal farmaceuticamente aceitável. "Sal farmaceuticamente aceitável" de um composto significa um sal do presente composto, fisiológicamente e farmaceuticamente aceitável, que possui a actividade farmacológica desejada e que não provoque efeitos toxicológicos indesejados. Tais sais incluem: (1) sais de adição de ácido, formados com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e outros do mesmo tipo; ou formado com ácido orgânicos,tais com ácido acético, ácido propiónico, ácido hexanóico, ácido ciclopentano-propiónico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido malónico, ácido succínico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido 13 ΡΕ1406893 cítrico, ácido benzóico, ácido 3-(4-hidroxiben-zoil)benzóico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido 1,2-etano-dissulfónico, ácido 2-hidroxi-etanossulfónico, ácido benzenossulfónico, ácido 4-clorobenzenossulfónico, ácido 2-naftalenos-sulfónico, ácido 4-toluenossulfónico, ácido canforssulfónico, ácido 3-fenilpropiónico, ácido trimetilacético, ácido terciário-butilacético, ácido lautilsulfúrico, ácido glucónico, ácido glutâmico, ácido hidroxinaftóico, ácido esteárico, ácido mucónico e outros do mesmo tipo; ou (2) sais formados quando um protão ácido no composto precursor, é substituído por um ião metálico, e.g., um ião de um metal alcalino, um ião de um metal alcalino terroso ou um ião de alumínio, ou se coordena com uma base orgânica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, tro-metamina, N-metilglucamina e outras do mesmo tipo.

Um composto da invenção, e.g., um composto de fórmula (I), pode actuar como um pró-fármaco. Pró-fármaco significa qualquer composto que liberte in vivo um fármaco activo precursor, de acordo com a fórmula (I), quando tal pró-fármaco é administrado a um mamífero. Os pró-fármacos de um composto de fórmula (I) são preparados por modificação de grupos funcionais presentes no composto de fórmula (I), de modo tal que as modificações podem ser clivadas in vivo para libertar o composto original. Os pró- 14 ΡΕ1406893 fármacos incluem compostos de fórmula (I) em que um grupo hidroxilo, amino ou sulfidrilo do composto (I) é ligado a um grupo que pode ser clivado in vivo para regenerar o grupo hidroxilo, amino ou sulfidrilo livre, respec-tivamente. Exemplos de pró-fármacos incluem, mas não se limitam a, esteres (e.g., derivados acetato, formato e benzoato), carbamatos (e.g., N, N-dimetilamino-carbinilo) de grupos funcionais hidroxilo nos compostos de fórmula (I), e outros do mesmo tipo.

Nos compostos da invenção, e.g., os compostos de fórmula (I), são preferidos os seguintes significados, individualmente ou em combinação: 1. Y é COOH, SH, -CO-NH(OH) ou -N(OH)CHO, preferencialmente -CO-NH(OH). 2. X é -CH2-. 3. R2 é hidroxilo, flúor ou hidrogénio. 4. R3 é hidrogénio. 5. W é CR4R5, em que R4 é hidrogénio e R5 é hidrogénio ou Ci_io alquilo, preferencial mente n-butilo; 6 . n é 1. 7. Ri é fenilo ou heteroarilo. 8. Heteroarilo, como Ri, é oxazolilo, tiazo- lilo, piridinilo e benzimidazolilo. Uando o heteroarilo é oxazolilo, 0 oxazolilo pode ser substituído com um alquilo inferior, especialmente metilo. Quando o heteroarilo é ΡΕ1406893 15 tiazolilo, o tiazolilo pode ser substituído por um ou dois substituintes seleccionados do grupo que consiste em alquilo inferior e fenilo. Ri é, preferencialmente, oxazolilo ou metiloxazolilo. 9. Ri está preferencialmente ligado à posição α do azacicloalcano representado na fórmula (I) ·

Os compostos da invenção, e.g., os compostos de

fórmula (I), podem ser preparados de acordo com métodos bem conhecidos na técnica da química orgânica. Os compostos de fórmula (I) podem ser preparados por reacção de um composto de fórmula II

II em que X, Rx, R2, R3 W e n são como definidos acima e Ya é COOH ou um seu derivado funcional, com um agente hidro-xilante, e.g., NH20H e, quando necessário, conversão do composto resultante obtido na forma livre para a forma de sal ou vice versa.

Os derivados funcionais de COOH como Ya são halogenetos, e.g., cloro ácido, esteres ou anidrido ácido.

As reacções acima podem ser efectuadas de acordo com métodos conhecidos na técnica ou como revelado nos Esquemas A a κ e nos Exemplos abaixo. 16 ΡΕ1406893 Não se descreveu em particular até aqui a produção de materiais de partida porque os compostos são conhecidos ou podem ser preparados de forma análoga a métodos conhecidos na técnica ou são revelados nos exemplos abaixo apresentados. São utilizadas as seguintes abreviaturas:

AcOH = ácido acético BuLi = n-butil litio DAST = trifluoreto de dietilaminosulfur DCC = diciclohexilcarbodiimida DCE = dicloroetano DCM = diclorometano DIC = diisopropilcarbodiimida DIAD = diisopropilazodicarboxilato DIEA = diisopropiletilamina DME = 1,2-dimetoxietano DMF = dimetilformamida DMSO = sulfóxido de dimetilo EDC = N-(3-dimetilaminopropil)-Ν'-etilcarbodi- imida

EtOAc = acetato de etilo HATU = hexafluorofosfato de O-(7-aza-benzotri-azol-l-il)N,N,N',Ν'-tetrametilurónio LDA = diisopropilamina de litio MeOH = metanol

NaHMDS = hexametildisilazeto de sódio PyBOP = hexafluorofosfato de benzotriazole-l-il-oxi-tris-pirrolidinofosfónio 17 ΡΕ1406893 ta = temperatura ambiente TEA = trietilamina TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano p-TSA = ácido p-toluenossulfónico TMSCI = cloreto de trimetilsililo PROCEDIMENTO GERAL A: Síntese de n-hidroxi-3-aminocarbonilpropionamida

4- (s)-benzil oxazolidin-2-ona

HATU

Passo 1: Adiciona-se n-BuLi 2,5 M em hexano (22,4 mL, 56 mmol) a uma solução de 4-(S)-benziloxazolidin-2-ona 18 ΡΕ1406893 (56 mmol) (Aldrich, Milwaukee, WI) em THF a -78 °C e agita-se a reacção a esta temperatura durante 2 h. Adiciona-se , via uma canula, uma solução a -78°C de cloreto ácido A-l (R = hexanoílo, 65 mmol) em THF, agita-se a mistura a -78°C durante 2 h, deixa-se aquecer até à ta e agita-se de um dia para o outro. A reacção é depois neutralizada com solução aquosa saturada de NH4C1, extraída com EtOAc, seca e purificada por cromatografia em silica gel (hexanos/EtOAc) para dar N-hexanoíl-4-(S)-benziloxazolidin-2-ona (A-2).

Passo 2: Adicionou-se NaHMDS 1,0 M (8,8 mmol) a uma solução de N-hexanoíl-4-(S)-benziloxazolidin-2-ona A-2 (7,3 mmol) em THF a -78°C e agitou-se a esta temperatura durante lh. Adicionou-se, gota a gota, uma solução de bromoacetato de metilo (8,8 mmoL) em THF, agitou-se a mistura resultante a -78°C durante lhe depois de um dia para o outro à ta. Neutralizou-se a reacção com NH4C1 concentrado, suspendeu-se em EtOAc, lavou-se com HC1 0,5 N e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se e purificou-se por cromatografia em silica gel (EtOAc/he-xanos) para dar o 3-(R)-(n-butil)-3-[4-(S)-benziloxazo-lidin-2-ona-3-ilcarbonil]propionato de metilo (A-3).

Passo 3: Adicionou-se H202 a 30% (5,76 mmol) e hidróxido de lítio sólido (1,44 mmol) ao 3-(R)-(n-butil)-3-[4-(S)-benziloxazolidin-2-ona-3-ilcarbonil]propionato de metilo A-3 (1,44 mmol) em THF/água a 0°C e agitou-se a esta temperatura durante 3 h. Neutralizou-se a reacção com Na2SC>3 2,0 M, concentrou-se, suspendeu-se em EtOAc e 19 ΡΕ1406893 sujeitou-se a processamento aquoso habitual. Purificou-se o produto crú por cromatografia em silica gel (MeOH/DCM) para dar 3-(R)-(n-butil)-propionato de metilo (A-4).

Passo 4: Adicionou-se amina A-5 (1 mmol), DIEA (0,4 mL, 2,3 mmol) e um agente activante (e.g., EDC, PyBOP, DIC, DCC, etc.; 1 mmol) a uma solução do succinato mono-protegido, e.g., ácido mono-4-metil 2-(R)-butil-succinico A-4 (1 mmol) em THF. Agitou-se a mistura de um dia para o outro, diluiu-se com EtOAc, lavou-se com HC1 aquoso (IN), água, NaHC03 saturado, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secou-se (Na2S04) . Concentrou-se o filtrado e purificou-se em silica gel (Merck 60; EtOAc/hexano) para dar 3-amino-carbonilpropionato A-6.

Passo 5: tratou-se o 3-aminocarbonilpropionato A-6 (0,1 mmol) com dioxano (1 mL) e hidroxilamina (50% em água, 2 mL) durante 1-3 dias e purificou-se por HPLC preparativa de fase reversa (C18) para dar a desejada N-hidroxi-3-aminocarbonilpropionamida (A-7). PROCEDIMENTO GERAL B: Síntese de hidroxamida do ácido 2(S)— hidroxi-3(R)-[2(S)-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil]- heptanóico

Passo 1: Adicionou-se, ao longo de 10 min., BuLi (2,5 M em hexano, 40 mL, 100 mmol) a uma solução a 0°C de diisopropilamina (14 mL, 100 mmol) em THF. Agitou-se a mistura, à ta, durante 30 min. e adicionou-se, via cânula, a uma solução a -78°C de malato de dimetilo B-l (7,71 g, 20 ΡΕ1406893 47,6 mmol) em THF (130 mL). Aqueceu-se a mistura até -20°C durante 2 h e depois arrefeceu-se até -78°C. Adicionou-se brometo de crotilo (8,1 g, 60 mmol), deixou-se a mistura aquecer até à ta e agitou-se de um dia para o outro. Arrefeceu-se a solução até -10°C e neutralizou-se com NH4CI (10%, 100 mL). Removeu-se o THF e extraiu-se 0 residuo com EtOAc (2 x 200 mL). Lavaram-se os extratos orgânicos combinados com HC1 (IN, 3 x 5 0 mL), NaHC03 aquoso saturado (3 x 50 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre Na2S04. Filtrou-se a solução e concentrou-se para dar um residuo, que foi purificado em silica gel (EtOAc/Hexano, 1:4) para dar o ester dimetilico (2S,3R)-3-(2-butenil)-2-hidroxisuccinico B-2.

Passo 2: Adicionou-se 10% Pd/C (0,25 g) ao ester 21 ΡΕ1406893 dimetílico de (2S, 3R)-3-(2-butenil)-2-hidroxisuccínico B-2 (2,5 g) em EtOAc (50 mL) e agitou-se a reacção, sob atmosfera de hidrogénio, durante 20 h. Filtrou-se a suspensão através de Celite, lavou-se com EtOAc (3 x) e concentrou-se in vácuo para dar o ester dimetílico de (2S,3R)-3-(n-butil)-2-hidroxisuccinico B-3.

Passo 3: Adicionou-se uma solução de NaOH (2,2 g, 55 mmol) em água (28 mL) ao ester dimetílico de (2S,3R)-3-(n-butil)-2-hidroxisuccinico B-3 em MeOH (28 mL) . Removeu-se o MeOH após 24 h, acidificou-se a reacção em crú com HC1 (6 N, 12 mL) até pH = 1 e extraiu-se com EtOAc (3 x 50 mL). Secaram-se as camadas orgânicas combinadas (Na2S04) e concentraram-se para dar o ácido (2S,3R)-3-(n-butil)-2-hidroxisuccínico B-4.

Passo 4: Adicionou-se p-TSA (20 mg) a uma solução de ácido (2S, 3R)-3-(n-butil)-2-hidroxisuccinico B-4 (300 mg, 1,58 mmol) em 2,2-dimetoxipropano (10 mL) e agitou-se a reacção, à ta, durante 16 h. Diluiu-se a solução com DCM, lavou-se com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se (Na2S04) e purificou-se por cromatografia em silica gel para dar 1,2 mmol de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-1,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5.

Passo 5: Adicionou-se pirrolidina biciclica B-5 (1,2 mmol), HATU (1,2 mmol) e DlEA (2,5 mmol) a uma solução de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 (1,2 mmol) em DMA (10 mL) . Agitou-se a mistura de um 22 ΡΕ1406893 dia para o outro, concentrou-se e purificou-se em sílica gel (EtOAc/hexano, 1:4) para dar 275 mg da amida desejada B-6.

Passo 6: Adicionou-se hidroxilamina aquosa a 50% (400 μί) a uma solução fria de B-6 em dioxano (5 mL) e agitou-se a solução a 4°C durante 8 h. Purificou-se a mistura reaccional crúa por hplc preparativa de fase reversa (Cl8) para dar a hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2(S)-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil]-heptanóico B-7 . PROCEDIMENTO GERAL C: Síntese da hidroxamida do ácido 2-fluoro-3-(R)-(2-S-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil)- heptanóico

Passo 1: Adicionou-se metóxido de sódio (catalítica; pH ajustado para 10) a 2,2-dimetil-5-[2(S)-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-pentil]-[1,3]dioxolan-4-ona B-6 (5 mmol, 50%) em MeOH (20 mL) e agitou-se a 23 ΡΕ1406893 solução durante 1 h. Adicionou-se resina Amberlite IR-120 (forma H+), filtrou-se a solução e concentrou-se para dar o ester metílico do ácido 2(S)-hidroxi-3-(2(S)-oxazol-2-il-pirrolidin-l-carbonil)-heptanóico C-l.

Passo 2: Adicionou-se DAST (15 mmol) ao ester metilico do ácido 2(S)-hidroxi-3-(2(S)-oxazol-2-il-pirro-lidin-l-carbonil)-heptanóico C-l (5 mmol) em DCM (5 mL), a -20°C. Agitou-se a solução durante 16 h, à ta. Lavou-se a mistura reaccional com HCCbNa e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se (Na2SC>4), concentrou-se e purificou-se em silica gel (EtOAc/hexanos) para dar o ester metilico do ácido 2(R/S)-fluoro-3-(2(S)-oxazol-2-il-pirrolidin-l-carbonil)-heptanóico C-2. A análise deste produto por 1H RMN sugeriu uma relação dos diastereómeros S/R de aproximadamente 1:2. Os dois isómeros são separados por cromatografia em coluna de silica gel.

Passo 3: Adicionou-se hidroxilamina aquosa a 50% (0,5 mL) ao intermediário C-2 (0,15 mmol, cada isómero é tratado em separado) e agitou-se a reacção durante 16 h a 5°C. Purificou-se a mistura reaccional crúa por HPLC preparativa de fase reversa (Cl8) para dar a hidroxamida do ácido 2-fluoro-3(R)-(2-S-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbo-nil)-heptanóico C-3. 24 ΡΕ1406893 PROCEDIMENTO GERAL D: N-hidroxi-N-{2-R-[2-S-(oxazol-2-il)-pirrolidino-1-carbonil]-hexil}-formamida

Passo 1: Preparou-se o ácido 2-n-butil-acrilico (D—2) (R = a-butilo), como indicado acima.

Passo 2: 4-benzil-3-(2-butil-acriloíl)-oxazoli-din-2-ona (D—3)

Dissolveu-se ácido 2-n-butil acrílico (9,90 g, 77,2 mmol, 1 equiv.) em THF seco (260 mL) e arrefeceu-se até -78°C sob cobertura de azoto. Adicionaram-se base de Hunig (17,5 mL, 100,4 mmol, 1,3 equiv.) e cloreto de pivaloilo (9,5 mL, 77,2 mmol, 1 equiv.) a um ritmo tal que 25 ΡΕ1406893 a temperatura permaneceu abaixo de -60°C. Agitou-se a mistura a -78°C durante 30 min., aqueceu-se até à ta ao longo de 2 h e finalmente arrefeceu-se novamente até -78°C.

Num balão separado, dissolveu-se (S)-(-)-4-benzoíl-2-oxazolidinona (13,49 g, 77,24 mmol) em THF seco (150 mL) e arrefeceu-se até -78°C sob azoto. Adicionou-se lentamente BuLi (2,5 M em hexanos, 30, 9 mL, 77,2 mmol, 1 equiv.) a -78°C e agitou-se a mistura durante 30 min. à ta. Transferiu-se lentamente, via uma cânula, o anião resultante para o recipiente da reacção original. Deixou-se a mistura aquecer até à ta e agitou-se de um dia para o outro à ta. Neutralizou-se a reacção com KHCO3 1 M e removeram-se os solventes sob pressão reduzida. Repartiu-se o resíduo entre EtAOc e água. Lavou-se a camada orgânica com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre Na2S04 anidro, filtrou-se e concentrou-se para dar um óleo amarelo que foi purificado por cromatografia com pressão de azoto (hexano:EtAOc = 4:1) para dar 0 composto D-3 como um sólido branco. 1H RMN ( CDCI3): δ 7,39-7,20 (m, 5H), 5,42- 5,40 (d, J = 7,14 Hz, 2H), 4,76-4,68 (m, 1H), 4,29-4,156 (m, 2H), 3,40-3,35 (dd, J = 3,57, 13,46 Hz, 1H), 2,86-2,79 (dd, J = 9,34, 13,46 Hz , 1H), 2, 42-2, 37 (t, , J = 7,69 Hz, 2H), 1,55-1,30 (m, 4H), 0,951-0,904 (t, J = 7,14 Hz, 3H). ES-MS calc. para C17H21NO3 (287, 35); encontrada: 288.5 [M+H] . 26 ΡΕ1406893

Passo 3: 4-benzil-3-[2-(benziloxiamino-metil)-hexanoíl]-oxazolidin-2-ona (sal do ácido p-toluenos-sulfónico)

Misturou-se o composto D-3 (8,25 g, 28,7 mmol) com O-benzil-hidroxilamina (7,07 g, 57,4 mmol, 2 equiv.) e agitou-se durante 40 h à ta, sob azoto. Dissolveu-se a mistura em EtAOc e adicionou-se p-TSA (21,84 g, 114,8 mmol, 4 equiv.) para precipitar o excesso de O-benzil-hidro-xilamina como um sólido branco. Removeu-se o sólido branco por filtração e concentrou-se o filtrado para dar um óleo crú amarelo. A carga do óleo crú amarelo com um excesso de éter dietilico e arrefecimento até 0°C durante 30 min., deu um sólido que se recolheu por filtração e secou in vacuo para dar o composto em epigrafe como um sólido cristalin branco (diastereómero isolado). 1H RMN (CDC13) : δ 8, 07-8, 04 (d, J = 8,24 Hz, 2H), 7,59-7,39 (m, 10H), 7,18-7,15 (d, J = 7,69 Hz, 2H), 5,49- 5, 40 (q, J = 8, 61 Hz, 2H), 4,65-4,56 (m, 1H), 4,25- O CO (m, 3H) , 3,83-3,79 (d, J = 13,46 Hz, 1H), 3,15- -3,11 (d, J = 13, 46 Hz, 1H), 2,56 (s, 3H), 1,83-1,67 (m, 4H), 1, 40 (s largo, 4H), 1,00-0,951 (t, J = 6,87, 3H). ES-MS calc. para C24H3oN204*C7H803S (582, 71); encontrada: 411,7 [M+H], base livre.

Passo 4: 4-benzil-3-[2-(benziloxiamino-metil)-hexanoíl]-oxazolidin-2-ona (D-5)

Adicionou-se Na2C03 1 M (200 mL, 5 equiv.) a uma 27 ΡΕ1406893 solução do sal de p-TSA (22,9 g, 39,3 mmol) dissolvido em EtOAc (400 mL) e agitou-se à ta durante 30 min. Separaram-se as camadas e extraiu-se a camda aquosa com EtOAc. Secaram-se as camadas orgânicas combinadas sobre Na2S04 anidro, filtraram-se e concentraram-se para dar o composto em epígrafe como um óleo opaco claro. 1H RMN (CDCI3) : δ 7,57-7,38 (m, 10H), 4,98-4,90 (m, 2H), co 1 79 (m, 1H), 4,38-4,28 (m, 3H), 3,64-3,57 (dd, J = = 9,21, 12, 64 Hz, 1H), 3,46-3 .36 (td, J = 3,76, 13,05 Hz, 2H), 2,68-2, 60 (dd, J = 10, 03, 13,46 Hz, 1H), 1, 90-1, 88 (m, 1H) , 1,78-1,71 (m, 1H) , 1,51-1,44 (m, 4H), 1,10-1,06 (t, J = 6,73 Hz, 3H) . ES-MS: calc. para C24H30N2O4 (410,51); encontrada: 411,7 [M+H].

Passo 5: N-[2-(4-benzil-2-oxo-oxazolidine-3- carbonil)-hexil]-N-benziloxi-formamida (D—6)

Arrefeceu-se uma solução de composto D-5 (5,38 g, 13,1 mmol, 1 equiv.) em ácido fórmico (7,4 mL, 196,6 mmol, 15 equiv.) sob azoto, até 0°C. Noutro balão, arrefeceu-se ácido fórmico (7,4 mL, 196,6 mmol, 15 equiv.) até 0°C e adicionou-se, gota a gota, anidrido acético (2,47 mL, 26,2 mmol, 2 equiv.). Agitou-se a solução, a 0°C, durante 15 min. Transferiu-se lentamente, por meio de uma seringa, o anidrido misto resultante, para o recipiente da reacção original. Agitou-se a mistura durante 1 H a 0°C e depois à ta durante 3 h. Concentrou-se a mistura, tomou-se em DCM e lavou-se em sucessão com NaHC03 e solução aquosa saturada 28 ΡΕ1406893 com cloreto de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre Na2S04 anidro, filtrou-se e concentrou-se para dar um óleo opaco que foi purificado por cromatografia com pressão de azoto (hexano:EtOAc = 2:1, depois DCMracetona = 9:1) para dar o composto em epígrafe como um óleo incolor. 1H RMN (CDC13, rotâmeros): δ 8,38 (s, 0,7H), 8,21 S, 0, 3H) , 7,54-7,35 (m, 10H) , 5,0-5,00 (m, 2H), 4,88-4,81 m, 1H), 4,39-4,29 (m, 4H), 4,07-4,03 (m, 1H), 3,43-3,39 m, 1H), 2,66-2,58 (m, 1H), 1,89 (s largo, 1H) , 1,73 (s largo, 1H), 1,49-1,44 (m, 3H), 1,10-1,06 (t, J = 6,73 Hz, 3H) . ES-MS: calc. para C25H30N2O5 (438,52); encontrada: 439,7 [M+H].

Passo 6: ácido 2-[(benziloxi-formil-amino)-me-til]-hexanóico

Dissolveu-se o composto D-6 (0,163 g, 0,372 mmol, 1 equiv.) em THF (4,5 mL) e água (1,5 mL) e arrefeceu-se até 0°C. Adicionou-se, gota a gota, peróxido de hidrogénio (30% em água, 228 μΕ, 2,23 mmol, 6 equiv.), seguido pela adição lenta da uma solução de hidróxido de lítio (0,019 g, 0, 446 mmol, 1,2 equiv.) em água (350 pL) . Agitou-se a mistura resultante a 0°C durante 1,5 h. Parou-se a mistura reaccional básica com resina Amberlite IR-120 (H+) até pH 4-5, a 0°C. Removeu-se a resina por filtração e lavou-se com EtOAc. Concentrou-se a mistura para remover o THF e tomou-se em EtOAc. Separou-se a camada aquosa, secou-se a camada orgânica sobre Na2S04, filtrou-se e concentrou-se 29 ΡΕ1406893 par dar um óleo opaco que foi purificado por cromatografia com pressão de azoto (DCM:acetona = 4:1, depois acetona:MeOH = 99:1) para dar o composto D-7 em epígrafe como um óleo incolor. 1H RMN (CDC13, rotâmeros) : δ 11,2 (s, 1H), 8,20 (s, 0,2H), 7,95 (s, 0,8H), 7,33-7,41 (m, 5H) , 4,87 (s, 2H), 3,71 (s largo, 2H), 2,50 (s largo, 1H), 1,35-1,45 (m, 2H), 1,14-1,28 (m, 4H), 0,857-0,813 (t, J = 13,1 Hz, 3H). ES-MS: calc. para C15H21NO4 (279,33); encontrada: 278, 5 [M-H], 302,5 [M+Na].

Passo 7: amida do ácido 1—{2 —[(benziloxi-formil-amino)-metil]-hexanoíl}-pirrolidino-2-carboxílico

Adicionou-se, em sucessão, base de Hunig (391 mL, 2,24 mmol, 3,3 equiv.) composto A-5 (0,748 mmol, 1,1 equiv.) e HATU (0,284 g, 0,748 mmol, 1,1 equiv.) a uma solução de composto D-7 (0,190 g, 0,680 mmol, 1 equiv.) em dioxano seco (4 mL) à ta e sob azoto. Agitou-se a mistura resultante à ta durante 22 h. Repartiu-se a mistura entre EtOAc e ácido cítrico a 10%. Lavou-se a camada orgânica com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e NaHCCb saturado, secou-se sobre Na2S04 anidro, filtrou-se e concentrou-se. O resíduo foi purificado por cromatografia com pressão de azoto (DCM:acetona = 3:1) para dar o composto em epígrafe como um óleo incolor. 30 ΡΕ1406893

Passo 8: amida do ácido {2-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoíl}-pirrolidino-2-carboxílico (D-8).

Adicionou-se Pd-C (0,059 g, 0,1 euiv.) a uma solução do composto acima (0,550 mmol, 1 equiv.) numa solução 1:1 de EtOAc/etanol (12 mL) sob azoto. Agitou-se a mistura sob atmosfera de hidrogénio durante 36 h. Removeu-se o catalisador por filtração através de Celite. Concentrou-se o filtrado e purificou-se o resíduo por CCF preparativa (DCMracetona = 2:1) para dar o composto em epígrafe como um sólido amorfo. PROCEDIMENTO GERAL E: Sintese de 2-pirrolidin-2-il-oxazole (sal do ácido bromídrico)

Preparou-se o 2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole E-5 (X = CH2, n = 1), como descrito acima.

Passo 1: éster benzílico do ácido 2-cloro-carbonil-pirrolidino-l-carboxílico (E-2)

Aqueceu-se até refluxo, xob azoto, durante 20 31 ΡΕ1406893 min. uma mistura de Z-L-Pro-OH E-l (10,0 g, 40,1 mmol, 1 equiv.)e cloreto de tionilo (30 mL, 401,2 mmol, 10 equiv.) em DCM (200 mL) e concentrou-se in vacuo. Coevaporou-se o óleo residual 3 x com tolueno e concentrou-se para dar o Z-L-Pro-Cl como um óleo opaco.

Passo 2: 2-(trimetil-silanil)—2H—[1,2,3]triazole (E-3)

Adicionou-se TEA (11,05 mL, 79,31 mmol, 1,1 equiv.) a uma solução de 1H-1,2,3-triazole (4,98 g, 72,10 mmol, 1 equiv.) em benzeno seco (145 mL) à ta, sob azoto, seguido por adição gota a gota de TMECI (9,15 mL, 72,10 mmol, 1 equiv.). Desenvolveu-se um precipitado branco. Agitou-se a mistura reaccional à ta, sob azoto, durante 1 h. Removeu-se o precipitado branco resultante por filtração e lavou-se cuidadosamente com benzeno seco. Concentrou-se cuidadosamente o filtrado, para evitar a evaporação do produto altamente volátil, para dar um rendimento quantitativo de TMS-triazole com vestígios de benzeno.

Passo 3: ester benzílico do ácido 2-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carboxílico (E—4)

Adicionou-se, gota a gota, Z-L-Pro-Cl (26,85 g, 100,3 mmol, 1 equiv.) em sulfolano (70 mL) a uma solução de TMS-triazole (14,17 g, 100,3 mmol, 1 equiv.) em sulfolano (290 mL) à ta e sob azoto. Agitou-se a mistura resultante à ta durante 30 min. e elevou-se a temperatura até 140°C 32 ΡΕ1406893 durante 3 h. Após arrefecimento da mistura reaccional até à ta, verteu-se num excesso de solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraiu-se com éter dietilico. Lavaram-se os extratos de éter dietilico com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e evaporou-se. O resíduo foi purificado por cromatografia com pressão de azoto (DCMracetona = 9:1) para dar o composto em epígrafe como um óleo amarelo claro. 1H RMN (CDC13) : δ 7, 79-7, 70 (s, 1H), 7,67-7,47 (m, 5H), 7,37-7,23 (m, 1H) , 5,42-5,19 (m, 2H), 3,92-3,69 (m, 2H), 2,49-2,14 (m, 5H) . ES-MS calc. para C15H16N2O3 (272,30); encontrada: 273.5 [M+H].

Passo 4: 2-pirrolidin-2-il-oxazole (sal do ácido bromídrico) (E—5)

Tratou-se com HBr (5,7 M, 33% em AxOH, 204 mL, 1162 mmol, 50 equiv.) uma solução de composto E-4 (6,33 g, 23, 25 mmol, 1 equiv.) em AcOH (116 mL) à ta e agitou-se a mistura durante 1 h à ta. A carga da mistura reaccional com um excesso de éter dietilico e arrefecimento até 0°C durante 30 min. deu um sólido que foi recolhido por filtração e seco in vacuo para dar o composto em epígrafe como um pó acastanhado. 1H RMN (DMSO-de) : δ 9,98 (s largo, lH), 8,47 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 5,14-5,05 (m, 1H), 3,54-3, 4 6 (m, 2H), 2,62-2,53 (m, 1H), 2,43-2,33 (m, 1H), 2,28-2, 15 (m, 2H) . 33 ΡΕ1406893 ES-MS calc. para C7Hi0N2O*HBr (219,08); encontrada: 139,4 [M+H] base livre. PROCEDIMENTO GERAL F: Síntese de 5-alquil-2(S)-pirrolidin- X-(") w

Cg^CO:; Bocv Boc''"'

HCI4M/ (¾ Doxano^ O F-1

NH + X

Fb HCI.H2I

Fb G^HbHA O F-2 2-il-oxazole R?

Boc·

Boc'

P = Trifluoroacetil Benziloxicarbonilo 5-Metil-2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole (F—5)

Tratou-se uma solução com 1 equiv. de cloreto de (S)-N-(trifluoroacetil)prolilo(Aldrich) em DCM com 1-amino-propan-2-ona (1,5 equiv.) em piridina durante 5 h à ta. Após o processamento habitual, proporcionou a (2-oxo-propil)-amida do ácido 1-trifluoroacetil-pirrolidino-2-carboxílico. 1H RMN (CDCI3) : δ 4,55-4,50 (m, 1H), 4,15 (s, 2H), 3,78-3,69 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,15-1,85 (m, 4H). O tratamento deste intermediário com POCI3 a 70°C durante 2 h deu 2,2,2-trifluoro-l-{2(S)-(5metil-oxazol-2-il)-pirroli-din-l-il}-etanona. 34 ΡΕ1406893 O tratamento deste material com amónia metanólica 2 M durante 5 h deu o composto em epígrafe. EM: m/z = 153,4 (M+l). PROCEDIMENTO GERAL G: Síntese de 2-(alquilado-triaazole)-2- pirrolidina

Preparou-se o 2-(S)-pirrolidin-2-il-(4,5-dimetil-triaazole) G-4 (X = CH2, n = 1, R2 = R3 = CH3), como se segue:

Adicionou-se 3-bromo-2-butanona (0,16 mL, 3 equiv, ) e KHC03 (0, 40 g, 8 equiv.) a uma solução da tioamina G-2 (0,11 g, 1 equiv.) em DME (5 mL) e agitou-se durante 2 h. Arrefeceu-ae a mistura reaccional até 0°C, adicionou-se piridina (0,4 mL, 8,5 equiv,) e anidrido trifluoroacético (0,32 mL, 4 equiv.) e agitou-se a mistura 35 ΡΕ1406893 à ta durante 16 h. Diluiu-se com EtOAc, lavou-se com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se (Na2S04) e concentrou-se sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel, utilizando hexano-EtOAc (1:1) como gradiente de solventes, para dar o intermediário desejado. 1H RMN (CDCls) : δ 5,18-4,86 (m, 1H), 3,68-3,43 (m, 2H), 2,35 e 2,30 (cada um deles s, 2 x 3H), 2,15-1,81 (m, 2H), 2, 54-1, 45 (m, 2H), 1,35 (s, 9H). ES-MD calc. para C14H22N2O2 S (282,14); encontrada: 283.3 [M+l]. O tratamento do composto acima com HC1 4 M em dioxano proporcionou o composto em epígrafe.

Preparou-se o 2-(S)-pirrolidin-2-il-(5-fenil-tiaazole) G-4 (X = CH2, n = 1, R2 = C6H5, R3 = H) fazendo reagir uma solução da tioamina G-2 (0,13 g, 1 equiv.) em D ME (5 mL) com 2-bromo-acetof enona (0,34 g, 3 equiv.) e KHC03 (0,45 g, 8 equiv.) e processando como descrito acima. 1H RMN (CDCI3) : δ 8,25-8,15 (m, 3H) , 7,71-7,45 (m, 3H), 5,39-5,22 (dd, J = 2,8 Hz, 1H), 3,79-3,65 (m, 2H), 2,59-2,41 (m, 1H), 2,38-2,22 (m, 1H) , 2,19-2,12 (m, 2H), 1,551 (s largo, 9H) . ES-MD calc. para Ci8H22N202S (330, 45); encontrada: 331,5 [M+l]. O tratamento do composto acima com HC1 4 M em dioxano proporcionou o composto em epígrafe. 36 ΡΕ1406893 PROCEDIMENTO GERAL H: Síntese de 2-pirrolidin-2-il- benzimidazole

H-2 H-3

Aqueceram-se a amida N-Cbz-Prolina [X = CH2, n = 1] (4 g, 16,1 mmol) e o-fenilenediamina (1,7 g, 15,5 mmol) até 165°C sob atmosfera de azoto durante 2,5 h e aumentou-se depois a temperatura até 220°C durante mais 40 min. Arrefeceu-se a mistura reaccional até à ta, dissolveu-se em DCM, lavou-se com NaHco3 saturado, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre MgS04 e evaporou-se até à secura. Recristalizou-se o resíduo a partir de iPrOH/água e depois éter dietílico/haxanos 2:1, para proporcionar o benzimidazole Cbz-protegido, 630 mg. O material protegido foi depois tomado em AcOH (3 mL) e adicionou-se 33% de HBr em AcOH (6 mL). Após 40 min. adicionou-se éter dietílico e arrefeceu-se a solução até 0°C e recolheu-se o precipitado num filtro de vidro. A recristalização a partir de MeOH/éter dietílico deu o composto em epígrafe como um sal HBr . 1H RMN (CDCI3) : δ 7,63 (dd, J = 3,3, 6,3, 2H), 7,43 (dd, J = 3,0, 6,3, 2H), 5,13 (dd, J = 8,0, 8,0, 1H), 4,57-3,37 (m, 2H) 1 , 2,64- -2,58 (m, 1H), 2,43-2,04 (m, 3H) . ES-MD calc. para C11H13N3 (187,1); encontrada: 188,1 [M+H] . ΡΕ1406893 37

PROCEDIMENTO GERAL I: 2- NJtrobenzeno cloreto de sulfonilo (Nsd) NH2 NaHCCb aq.

NHNs

Resina HHPP PhSH, DMF

P = Me

Passo 1

Adicionou-se, com agitação vigorosa, uma solução de cloreto de 2-nitrobenzeno-sulfonilo (77 mmol) em THF (50 mL) a um cloridrato de ester metilico de um amino ácido 1-4 (P = metilo, Ri = H, 88 mmol) em NaHC03 aquoso saturado (25 mL) . Foi-se adicionando mais NaHC03 ao longo de 2 h para manter um pH básico. Extraiu-se depois a mistura reaccional com DCM (500 mL), lavou-se a camada orgânica com água, secou-se (Na2S04), concentrou-se, recristalizou-se o produto em bruto a partir de água/isopropanol 2:1 e secou-se sobre P205 in vacuo, para dar o ester metilico do N-2-nitrofenilssulfonilamino-ácido 1-2 como cristais incolores. Adicionaram-se lentamente, ao longo de 5 min. DIAD (28 38 ΡΕ1406893 mmol) a uma solução a 0°C do W-2-nitrofenilssulfonil amino ácido 1-2 (28 mmol), um álcool RlOH (25 mmol) e trifenilfosfina (28 mmol) em THF (10 mL) . Deixou-se a reacção aquecer até à ta e agitou-se durante mais 24 h. Removeu-se o solvente e purificou-se o produto crú em sílica gel (Merck 60; hexanos/DCM/THF 12:6:1) para dar o ester metílico do N-2-nitrofenilssulfonil-N-alquil-amino ácido 1-3.

Passo 3

Adicionou-se tiofenol (22 mmol) a uma suspensão agitada do ester metílico do W-2-nitrofenilssulfonil-W-alquil-amino ácido 1-3 (R2 = 2-ciclopentiletilo, 11 mmol) 1,3,4,6,7,8-hexahidro-2H-pirimidino[1,2-a]pirimidina ligada a polímero (12 mmol) em DMF (40 mL) . Após 1 h diluiu-se a mistura reaccional com éter (300 mL), filtrou-se, lavou-se o filtrado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (5 x 50 mL) e NaHC03 saturado (50 mL) . As lavagens aquosas básicas combinadas foram re-extraídas com DCM (2 x 50 mL) e combinaram-se as camadas de DCM. A fase de éter foi então extraída com HC1 0,5 M (5 x 25 mL), tornou-se o extrato aquoso básico com NaHC03, saturado com NaCl e extraído com DCM (5 x 50 mL) . Combinaram-se todas as camadas com DCM, secaram-se (Na2S04), acidificaram-se com HC1 4 N em dioxano e evaporaram-se para dar o sal cloridrato de amina secundária 1-4. Num balão separado, adicionou-se fosgénio (20% em tolueno; 0,11 mmol) a uma suspensão a 0°C, com agitação vigorosa, de NaHC03 (1 mole) em água (125 mL) e 39 ΡΕ1406893 éter (200 mL). A esta adicionou-se gota a gota, ao longo de 30 min. o sal HC1 de amina secundária em água (125 mL) e uma aliquota adicional de fosgénio (0,11 mol). Deixou-se a mistura reaccional aquecer até à ta e agitou-se durante mais 15 min. Separaram-se as fases e lavou-se a fase orgânica com HC1 1 M (2 x 75 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (75 mL), secou-se (MgS04) e evaporou-se para dar o carbamoil cloreto do ester metilico de w-alquil-amino ácido 1-5 (2 passos).

Passo 4

Adicionou-se uma aliquota do carbamoil cloreto do ester metilico de N-alquil-amino ácido 1-5 (4 mmol) dissolvido em DCM (4 mL), a uma solução a 0°C de amina A-5 (5,3 mmol) em piridina (4 mL) . Após 30 min., diluiu-se a mistura reaccional com éter (100 mL), lavou-se com KHS04 a 10% (2 x 25 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL), secou-se (NaS04) e evaporou-se para dar a ureia 1-6 desejada.

Diluiu-se o ester metilico de N-[(2-carboxipirro-lidin-l-carbonil) amino] amino ácido 1-6 (200 μπιοί) em dioxano (2 mL), com hidroxilamina aquosa a 50% (1 mL) e agitou-se a reacção durante 24-36 h. A mistura reaccional crua foi depois purificada por HPLC preprativa de fase reversa (Cl8) para dar a N-hidroxi-2-[(2-amidopirroli-din)amino]acetamida 1-7. 40 ΡΕ1406893 PROCEDIMENTO GERAL J: Síntese de 1-[2-S-(oxazol-2-il)-pirrolidin-l-il]-2-R/S-mercaptometil-alcan-l-ona

Passo_1: 2-Butil-l-(2-S-oxazol-2-il-pirrolidin-l-il)- propenona

Adicionou-se pirrolidina bicíclica F-5 (1,2 mmol), HATU (1,2 mmol) e DIEA (2,5 mmol) a uma solução de ácido 2-butil acrílico D-2 (1,2 mmol) em DMF (10 mL) .

Agitou-se a mistura de um dia para o outro, concentrou-se e purificou-se em silica gel (EtAOc/hexano, 1:4) para dar a amida J-l desejada.

Passo 2: ester S-{2-R/S-[2-S-(oxazol-2-il)- pirrolidino-l-carbonil]-hexil} do ácido tiolacético

Aqueceu-se uma solução de J-l (3 mmol) em ácido tiolacético (15 mL) a 90°C durante 3 h e arrefeceu-se até à 41 ΡΕ1406893 ta. Diluiu-se com EtOAc e lavou-se com solução salina, NaHC03 aq. fria, secou-se sobre Na2S04 e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo em coluna de sílica gel utilizando um gradiente de solventes consistindo em 5%-20% de acetona em DCM, para dar J-2.

Passo 3: 1-[2—S—(5-terc-butil-oxazole-2-il)- pirrolidin-l-il]-2-R/S-mercaptometil-hexan-l-ona

Dissolveu-se J-2 (1 mmol) em MeOH (5 mL), sob árgon, com agitação. Desgaseificou-se, adicionou-se solução 2 M de NaOH (6 mmol) e agitou-se a mistura durante 3 h. Acidificou-se a mistura reaccional com resina IR-120(H+) até pH 2. Removeu-se a resina por filtração e concentrou-se o filtrado sob pressão reduzida para dar o J-3 em epígrafe como um óleo transparente. PROCEDIMENTO GERAL K: Síntese de ácido 2-S-hidroxi-3-R-(2-S-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-alcanóico

42 ΡΕ1406893

Passo 1: 5-R-{l-[2—S—(5-terc-butil-oxazol-2-il)- pirrolidino-l-carbonil]-pentil}-2,2-dimetil-[1,3]dioxolan-4-ona

Adicionou-se base de Hunig (2,1 mL, 12 mmol, 5,5 eq.) a uma solução em dmf (7 mL) de sal de amina biciclica (0,852 g, 2,4 mmol, 1,1 equiv.) e arrefeceu-se a mistura até 0°C. Seguiu-se a adição de acetonido (500 mg, 2,17 mmol, 1,0 equiv.) e de HATU (0,913 g, 2,4 mmol, 1,1 equiv.), a 0°C. Agitou-se a mistura resultante à ta durante 16 h. Repartiu-se a mistura entre um excesso de EtOAc e ácido citrico a 10%. Lavou-se a camada orgânica com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, NaHCCb sat., secou-se sobre Na2SC>4 anidro, filtrou-se e concentrou-se para dar ΚΙ. 0 resíduo transitou tal e qual para o passo final.

Passo 2: ácido 3-R-[2—s—(5-terc-butil-oxazol-2-il)-pirrolidino-l-carbonil]-2-S-hidroxi-heptanóico

Dissolveu-se o acetonido K-l em 10 % de (TFA:H20, 95:5)/DCE (10 mL) e agitou-se a mistura reaccional à ta, durante 7 h. Purificou-se o produto final por HPLC preparativa que, após liofilização, deu o composto final K-2 como um pó incolor. EXEMPLO 1: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2(R/S)-piridin-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de 43 ΡΕ1406893 ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 e 2-pirrolidin-2-il-piridina A-5 disponível comercialmente, de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (DMSO): δ 8,6-8,5 (m, 1H), 7,97-7,92 (t, J = 7,4 & 7,1 Hz, 1H), 7,5-7,3 (m, 2H) , 5,14-4,94 (m, 1H), 3,96-3,44 (m, 3H), 3,1-2,9 (m, 1H), 2,3-1,9 (m, 6H), 1.3-1,1 (m, 4H), 0,87-0,9 (m, 3H) . ES-MS calc. para C17H25N3O4 (335,40); encontrada: 336,5 [M+l]. EXEMPLO 2: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[3(R/S)-piridin-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 e 2-pirrolidin-2-il-piridina A-5 disponível comercialmente, de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (DMSO): δ 8,85-8.8 (m, 1H), 8,21-8,14 (m, 2H), 7,8-7,6 (m, 4H), 4,4-3,90 (m, 4H) , 3,8-3,6 (m, 2H), 3, 09-3, 06 (d, J = 9,34 Hz, 1H) , 2,5-2,2 (m, 2H), 1,63 (s

largo, 2H) , 1,38 (s largo, 4H), 1, 06-0, 96 (m, 3H) . ES-MS calc. para C17H25N3O4 (335, 40); encontrada: 336,5 [M+l]. EXEMPLO 3: Hidroxamida do ácido 2 (S)-hidroxi-3(R)-[2-piridin-3-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico (Isómero 1)

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de 44 ΡΕ1406893 ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 e 3-pirrolidin-2-il-piridina A-5 disponível comercialmente, de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (DMSO): δ 8 ,61 ( s, 2H), 7,99-7 ,97 (d , J = 7, 97 Hz, 1H) , 7, 67-7, 63 (m, 1H) , 5,11-5,07 (m, 1H), 4, 02- 3,57 (m, 3H) , 2, 99-2, 93 (m, 1H) , 2,49-2,24 (m, 2H), 1, 96- 1, 76 (m, 4H) , 1,37-1,0 (m, 4H) , 0, 98-0, 78 (m, 3H) . ES-MS calc. para C17H25N3O4 (335, 40), ; encontrada: 336,5 [M+l]. EXEMPLO 4: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2-piridin-3-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico (Isómero 2) O composto em epígrafe é o outro isómero isolado a partir da reacção descrita no Exemplo 3. 1H RMN (DMSO): δ 8,86-8,76 (m, 2H), 8,32-8,3 (d, J = 7,97 Hz, 1H), 7,9-7,88 (m, 1H), 5,4-5,32 (m, 1H), 4,3- 3, 74 (m, 3H), 3, 22-3,16 (t, J = 9,34 Hz, 1H), 2,52-2,46 (m 2H), 2,26-1,98 (m, 3H), 1,63-1,38 (m, 5H), 1,07-1,01 (m 3H) . ES-MS calc. para C17H25N3O4 (335,40); encontrada: 336,5 [M+l]. EXEMPLO 5: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2-piridin-4-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico (Isómero 1)

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de 45 ΡΕ1406893 ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 e 4-pirrolidin-2-il-piridina A-5 disponível comercialmente, de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (DMSO): δ 8,89-8,87 (d, 4,7 Hz, 2H), 7,77-7,75 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 5,3-5,25 (m, 1H), 4,23-3,8 (m, 3H), 3,33-3,15 (m, 1H), 2,52-2, 43 (m, 2H), 2,13-1,86 (m, 3H), 1,56-1,26 (m, 5H), 1,07-1,05 (m, 3H). ES-MS calc. para C17H25N3O4 (335,40); encontrada: 336,5 [M+l] . EXEMPLO 6: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2-piridin-4-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico (Isómero 2) O composto em epígrafe é o outro isómero isolado a partir da reacção descrita no Exemplo 5. 1H RMN (DMSO): δ 8,89-8,85 (t, J = 6,32 & 6,6 Hz 2H) , 7,92-7, 68 ( m, 2H), 5,39-5,36 (dd, 1H) , 4,25-3,8 (m 3H) , 3,25-3, 2 (t , J = 7,96 & 8,8 Hz, 1H), 2,56-2,47 (m 2H) , 2,12-1, 62 ( m, 3H), 1,46-1,38 (m, 5H), 1,07-1,01 (m 3H) . ES-MS calc. para C17H25N3O4 (335, 40); encontrada: 336,5 [M+l]. EXEMPLO 7: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[3(R/S)-piridin-4-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico

Preparou-se 0 composto em epígrafe a partir de 46 ΡΕ1406893 ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 e 4-pirrolidin-3-il-piridina A-5 disponível comercialmente, de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (DMSO) : 6 8,94 (dd, 2H), 8,06-8, 02 (t, 4,12 & 6,32 Hz, 2H), 4,2-3,53 (m, 6H), 3,1-3,02 (dd, 1H), 2,7-2,1 (m, 2H), 1,66-1,28 (m, 6H), 1,05-0,96 (m, 3H). ES-MS calc. para C17H25N3O4 (335,40); encontrada: 336,5 [M+l] . EXEMPLO 8: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2(R/S)-fenil-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico A-5 e 2-fenil-pirrolidina B-5 disponível comercialmente, de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (DMSO): δ 7,6-7,3 (m, 5H), 5,6-5,57 (d, J = 7,14 Hz, 1H), 5,3-5,24 (m, 1H) , 4,21-3,72 (m, 4H), 3,2-

3,14 (t, J = 7,96 & 10,44 Hz, 1H), 2,4-2,33 (m, 1H) , 2,3-1,85 (m, 4H) , 1,6-1,36 (m, 5H) , 1, 04-0, 97 (m, 3H) . ES-MS calc. para Ci8H26N204 (334, 42); encontrada: 335,5 [M+l]. EXEMPLO 9: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[3(R/S)-fenil-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico

Preparou-se 0 composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 e 3-fenil-pirrolidina A-5 disponível comercialmente, de acordo com o Procedimento Geral B. 47 ΡΕ1406893 1Η RMN (DMSO) : δ 7,56-7,4 (m, 5H) , 4,4-3,4 (m, 6H), 3,09-3, 08 (d, J = 3,85 Hz, 1H), 2, 49-1, 97 (m, 3H), 1, 64-1,34 (m, 5H), 1,05-1,02 (m, 3H) . ES-MS calc. para C18H26N2O4 (334,42); encontrada: 335,5 [M+l] . EXEMPLO 10: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[3(R/S)-piridin-3-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 e 3-pirrolidin-3-il-piridina A-5 disponível comercialmente, de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (DMSO): δ 8,89-8,76 (m, 2H), 8,26-8,2 (m, 1H), 7, 79-7, 74 (t, J = 4,7 & 7,7 Hz, 1H) , 4,1-3,5 (m, 6H) , 3,09-3,07 (d, J = 7,42 Hz, 1H), 2,54-1,37 (m, 8H), 1,05-0,97 (m, 3H) . ES-MS calc. para C17H25N3O4 (335, 40); encontrada: 336,5 [M+l]. EXEMPLO 11: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2(S)-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 e 2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole A-5 (síntese descrita no Procedimento E), de acordo com o Procedimento Geral B. 48 ΡΕ1406893 1H RMN (CDCI3) : δ co (s, 1H), 7,3 (s, 1H), 5,45- 5,43 (t, J = 3,9 & 3,8 Hz, 1H) , 4,45 (d, J = = 2,5 Hz, 1H), 4,1-3,96 (m, 2H), 3,54-3,51 (t, J = 5,5 & 2,2 Hz, 1H), 2,5- 2,3 (m, 4H), 1,95-1,91 (m, 2H) , 1,57-1,53 ( m, 4H), 1,12- 1,08 (t, J = 6,04 & 7,14 Hz, 3H) . ES-MS calc. para C15H23N3O5 (325,36); encontrada: 326,4 [M+l]. EXEMPLO 12: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)—[2(S)—(5-metil-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico e 5-metil-2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole F-5 (Ri = H, R2 = CH3; preparação descrita no Procedimento F), de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN ( :cdci3) : δ 7,46 (s, 1H) , 5, 36-5,33 (m, 1H), LO -4,42 (m, 1H), 4,15-3,91 (m, 2H), 3, O 00 l 00 LO (m, 1H) , 2,46 (s, 3H), 1 O C\] -2,21 (m, 4H), 1, 93- -1, 83 (m, 2H), 1,51-1,49 (m, 4H), 1,08 (t, J = 6,9 Hz, 3H). ES-MS calc. para C16H25N3O5 (339,39); encontrada: 340, 6 [M+l]. exemplo 13: Hidroxamida do ácido 2(R)-fluoro-3(R)-(2-S-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico O composto em epígrafe é preparado de acordo com o Procedimento Geral C. Liga-se o ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-1,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 a 5-metil-2-(S)- 49 ΡΕ1406893 pirrolidin-2-il-oxazole A-5 (preparado como descrito no Procedimento E), para dar B-6, que é depois adicionalmente tratado como descrito no Procedimento C, para dar o composto em epígrafe como um dos isómeros. 1H RMN (DMSO) : δ 8, 16 (s, 1H), 7,3 (s, 1H), 5,22- 5,18 ( dd, 1H) , 5,07-4,9 (dd, J = 7,97 & 8,24 Hz, 1H), 3,9- 3, 65 (m, 2H) , 3,4-3,35 (m, 1H), 2,37-2,07 (m, 4H), 1,78- 1, 76 (d, J = = 6,04 Hz, 2H), 1,42 (s largo, 4H) , 1,03 (s largo, 3H) . ES-MS calc. para C15H22FN3O4 (327,56); encontrada: 350,5 [M+23]. EXEMPLO 14: Hidroxamida do ácido 2(S)-fluoro-3-(R)-(2-S-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico O composto em epígrafe é o outro isómero da reacção descrita no Exemplo 13. 1H RMN (DMSO): δ 8,16 (s, 1H), 7,3 (s, 1H), 5,33-5,29 (dd, 1H), 4,97-4, 78 (dd, J = 9,89 & 10,44 Hz, 1H), 3,94-3,7 (m, 2H), 3,38-3,32 (m, 1H), 2, 42-2, 08 (m, 6H), 1,54-1,38 (m, 4H)), 1, 02-0, 99 (m, 3H) . ES-MS calc. para C15H22FN3O4 (327, 56); encontrada: 328, 5 [M+l] . EXEMPLO 15: N-hidroxi-N-[2-(2-oxazol-2-il-pirro-lidino-l-carbonil)-hexil]-formamida

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de 50 ΡΕ1406893 ácido 2-[(benziloxi-formil-amino)-metil]-hexanóico D-7 (R = n-butilo) e 2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole E-5 (preparado como descrito no Procedimento E), de acordo com o Procedimento Geral D. 1H RMN (DMSO-d6) : δ 9,89 (s, 1H) , 8,16 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 5,28-5,21 (m, 1H), 3,88-3,45 (m, 4H), 3,31-3,02 (m, 1H), 2,41-2,27 (m, 1H), 2,20-2,03 (m, 4H), 1,57-1,41 (m, 5H), 1,02 (s largo, 3H). ES-MS calc. para C15H23N3O4 (309,36); encontrada: 310,6 [M+H], 332,5 [M+Na]. EXEMPLO 16: N-hidroxi-N-[3(R)-(2-R/S-piridin-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-hexil]-formamida (Isómero 1)

Preparou-se o composto em epígarfe a partir de ácido 2-[(benziloxi-formil-amino)-metil]-hexanóico D-7 (R = n-butilo) e 2-pirrolidin-2-il-piridina A-5, de acordo com o Procedimento Geral D. 1H RMN (D20) : δ 8,55 (d, J = 4,9, 1H), 7,99-7,96 (rr h 1H), 7, 78 (: 3, 1H), 7,37 -7,28 (m, 2H), 5, 02 (dd, J = 3, 6, 3,6, 1H), 3 ,80-3,63 (m, 1H), 3, 61- -3,52 (m, 1H), 3,32- 3, 25 (m, 1H), 2, 37-2,09 (m, 1H) , 1,98- -1,85 (m, 2H), 1,48- 1, 35 (m, 1H), 1/ 36-1,19 (m, 4H), 0,85 -0,81 (t, J = 11,8, 3H) . ES-MS calc. para C18H27N5O4 (319,2); encontrada: 320,5 [M+H]. 51 ΡΕ1406893 EXEMPLO 17: N-hidroxi-N-[3(R)-(2-R/S-piridin-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-hexil]-formamida (Isómero 2) O composto em epígrafe é o outro isómero isolado da reacção descrita no Exemplo 16. 1H RMN (D20) : δ 8,59 (d, J = 5,8, 1H), 8,41 (dd, J = 7,7, 7,7, 1H), 7, 82-7, 75 (m, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,56-7,49 (m, 1H), 5,22 (dd, J = 4,7, 8,8 Hz, 1H), 4,05-3,89 (m, 1H), 3,87-3, 80 (m, 1H), 3,72-3,62 (m, 1H), 3,54 (dd, J = 3,9, 14,8, 1H), 3,41-3,28 (m, 1H), 2,53-2,44 (m, 2H)2,12-1,94 (m, 4H) , 1, 80-1, 45 (m, 2H), 1,40-1,23 (m, 4H), 0,89 (dd, J = 5,5, 6,9, 3H) . ES-MS calc. para Ci8H27N504 (319,2) ; encontrada: 320,5 [M+H].

Exemplo 18: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2-S-(4,5-dimetil-tiaazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil]-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 e 2-(S)-pirrolidin-2-il-(4,5-dimetil-tiaazole) G-4 (R2 = R3 = CH3, síntese descrita no Procedimento G), de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (CDCI3) : δ 5,41-5,37 (dd, J = 2,5 Hz, 1H), 4,04-4,01 (m, 1H), 3,97 (d, J = 9 Hz, 1H), 3,85-3,79 (m, 1H), 3,14-3,08 (m, 1H), 2,44 & 2,39 (cada um deles, s, 2 x 3H), 2,32-2,11 (m, 4H) , 1,61-1,39 (m, 6H) , 1,03 (t, J = 6,0 52 ΡΕ1406893

Hz, 3H) . ES-MS calc. para C17H27N3O4S (369, 17); encontrada: 370,3 [M+l].

Exemplo 19: Síntese de hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2—S—(4-fenil-tiaazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil]-heptanóico

Preparou-se 0 composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 e 2-(S)-pirrolidin-2-il-(4-fenil-tiaazole) G-4 (R2 = C6H5, R3 = H, síntese descrita no Procedimento G), de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (CDCI3) : δ 8,18-8,10 (m, 3H), 7,64-7,49 (m, 3H), 5,59-5,58 (dd, J = 2,8 Hz, 1H), 4,10-4,01 (m, 1H), 3,95 (d, J = 7 Hz, 1H), 3,91-3,89 (m, 1H), 3,18-3,14 (m, 1H), 2,41-2,19 (m, 4H), 1, 67-1,37 (m, 6H), 1,01 (t, J = 6,0 Hz, 3H) . ES-MS calc. para C21H27N3O4 (417,52); encontrada: 418,5 [M+l]. EXEMPLO 20: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2-S-(4-metil-tiaazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil]-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 e 2-(S)-pirrolidin-2-il-(4-metil-tiaazole) G-4 (R2 = CH3, R3 = H, preparação como descrita no Procedimento G), de acordo com o Procedimento Geral B. 53 ΡΕ1406893

1Η RMN (CDC13): δ 7,49-7,6 (dd,lH), 7,05 (s largo, 1H), 5,71-5,69 (d, J = 6,04 Hz, 1H), 4,45 (s largo, 1H), 4,08-3,94 (d, 2H), 3,51 (s largo, 1H), 2,67-2,63 (t, 3H), 2,3 (s largo, 4H), 1,96 (s largo, 2H), 1,57 (s largo, 4H), 1,12-1,10 (d, 3H) . ES-MS calc. para C16H25N3O4S (355,47); encontrada: 356,3 [M+l]. EXEMPLO 21: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2-S-(benzimidazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil]-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico B-5 e 2-(S)-pirrolidin-2-il-(benzimidazole) G-4 (síntese descrita no Procedimento G), de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (DMSO): δ 7, 78-7, 66 (m, 2H), 7,51-7,37 (m, 2H), 5,41- -5,37 (m, 1H), 5,25-5,21 (t, J = 6,32 Hz, 1H), 3,8-3,52 (m, 2H), 3,02-2,9 (m, 1H), 2,38-2,06 (m, 4H), 1,47-1,03 (m, 6H), 0,87-0,70 (m, 3H) . ES-MS calc. para C19H26N4O4 (374, 44); encontrada: 375,3 [M+l]. EXEMPLO 22: N-hidroxi-2-[N-(2-ciclopentiletil)-N]-[2-S- (4-fenil)-tiaazol-2-il-pirrolidine]-acetamida

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de I-5 e do 2-(S)-pirrolidin-2-il-(5-fenil-tiaazole) G-4 (R2 = ΟδΗ5, R3 = H), de acordo com o Procedimento Geral 1-4. 54 ΡΕ1406893 1H RMN (D 6 DMSO): δ 7, 93 -7, 91 (m, 3H), 8, 41 (dd, J = 7,1, 7,1, 2H), 7,35-7, 30 (m, 1H), 5,31 (dd, J = 6,9, 6,9, 1H), 3,89 (d, J = 16, 2, 1H), 3, 62 (d, J = 16, 2, 1H), 3,58-3,40 (m, 2H), 3,30-3, 15 (m, 2H) , 2,42-2,39 ( m, 1H), 1,96-1,83 (m, 3H), 1,69-1, 60 (m, 3H) , 1,54-1,43 ( m, 6H), 1,07-0,96 (m, 2H). ES-MS calc. para C23H30N4O3S 1 (442 ,2) ; encontrada: 465,3 [M+Na]. EXEMPLO 23: N-hidroxi-2-[N-(2-ciclopentiletil)-N]-[2-(2-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-hexil]-acetamida

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de I-5 e do 5-metil-2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole E-5 (preparado como descrito no Procedimento E), de acordo com o Procedimento Geral 1-5. 1H RMN (D6 DMSO) : δ 7,97 (s, 1H) , 7,09 (s, 1H), 5,07 (dd, J = 7,1, 7,1, 1H), 3,81 (d, J = 16,2, 1H), 3,47- 3,39 (m, 2H), 3,25-2,99 (m, 2H) , 2,26-2,22 (m, 1H), 1,98- 1, 81 (m, 3H), 1,69-1,60 (m, 3H), 1,78-1,42 (m, 7H), 1,04- 1, 02 (m, 2H). ES-MS: calc. para C47H26N4O4 (350,2); encontrada: 373,4 [M+Na]. EXEMPLO 24: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)—[2(S)—(5-terc-butil-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil]-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de 55 ΡΕ1406893 ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolan-5-il)hexanóico e do 5-terc-butil-2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole F-5 (Ri = H, R2 = terc-butilo), de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (D6 DMSO) : δ 6, 87-6,85 (d, J = 5,22 Hz, 1H), 5,25-5,21 (dd, J = 3,02 & 2,74 Hz, 1H), 4,04-3,96 (m, 2H9, 3, 86-3, 79 (m, 1H), 3,13-3,07 (t, J = 9,06 & 9,9 1 HZ), 2,35-2,28 (m, 2H), 2,26-2,05 (m, 2H) , 1, 59-1,37 (m, 6H), 1,013-0,997 (t, J = 4,8 & 6,32 Hz, 3H); ES-MS: calc. para C19H31N3O5 (381, 47); encontrada: 382,4 [M+H] .

Preparou-se 5-terc-butil-2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole como descrito: 1-amino-pinacolona

Adicionou-se azida de sódio (4 g, 5 equiv.) a uma solução a 0°C de 1-bromo-pinacolona (5,4 g, 1 equiv.) em DMF (30 mL), agitou-se a 0°C durante lhe depois levou-se até à ta durante 1 h. Diluiu-se a mistura reaccional com EtOAc (150 mL), lavou-se com água fria e secou-se sobre sulfato de sódio. Tratou-se este composto azido com 10% de Pd-C em etanol-HCl conc. para dar o correspondente composto em epigrafe. 5-terc-butil-2-S-pirrolidin-2-il-oxazole

Tratou-se uma solução de cloreto de Z-L-Pro (1 equiv.) em DCM com 1-amino-pinacolona (1,2 equiv.) em 56 ΡΕ1406893 piridina, à ta., durante 5 h. Após o processamento usual, tratou-se o intermediário amida resultante com POCI3 a 70°C durante 2 h para dar o composto bicilcico Z-N-protegido. 0 tratamento com HBr-AcOH deu o composto em epígrafe. 1H RMN (DMSO) : δ 9,51 (s largo, 1H), 5,04 (s largo, 1H), 3,49 (s largo, 2H), 2,54-2,21 (m, 4H), 1,45 (s largo, 9H) . ES-MS: calc. para ChHi8N20 (194, 14); encontrada: 195,3 [M+H]. EXEMPLO 25: Hidroxamina do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2(S)-(5-fenil-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico e do 5-fenil-2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole F-5 (Ri = H, R2 = fenilo), de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (DMSO): δ 7,86-7,83 (m, 1H), 7,77 (s largo, 1H), 7, 76-7, 62 (m, 3H), 7, 56-7, 52 (m, 1H), 5,6-5,58 (d, J = 6,32 Hz, 1H), 5,32-5, 29 (d, J = 6,59 Hz, 1H) , 4,07-3,92 (m, 2 H), 3,14-3,11 (m, 1H), 2,42-2,18 (m, 4H), 1,56-1,37 (m, 6H), 0, 882 (s largo, 3H) . ES-MS: calc. para C21H27N3O5 (401, 46); encontrada: 402,2 [M+H]. A amina foi preparada seguindo o procedimento descrito no Exemplo 24, a partir de 2-bromoacetofenona. 57 ΡΕ1406893 EXEMPLO 26: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2(S)-(5-butil-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolan-5-il)hexanóico e do 5-fenil-2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole F-5 (Ri = H, R2 = iso-butilo), de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (DMSO) : δ 6,93 (s largo, 1H), 5,23-5,19 (dd, J = 3,57 & 3,02 Hz, 1H), 4,05-3,95 (m, 2H), 3,83-3,78 (dd, J = 6,87 & 7,14 Hz, 1H), 3,13-3,07 (t, J = 9,34 & 8,42 Hz, 1H), 2,7-2,57 (m, 2H), 2,47-1,97 (m, 5H), 1,58-1,35 (m, 6H), 1,13-0,99 (m, 9H) ; ES-MS: calc. para C19H31N3O5 (381,47); encontrada: 282,3 [M+H]. A bromação da 4-metil-2-butanona deu o composto bromo desejado (maioritário) conjuntamente com outros isómeros posicionais com baixo rendimento. Preparou-se a amina a partir deste brometo seguindo 0 procedimento descrito no Exemplo 24. EXEMPLO 27: Hidroxamida do ácido 2(S)-hidroxi-3(R)-[2(S)-(4,5-di-metil-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico e do 58 ΡΕ1406893 4,5-di-metil-2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole F-5 (Rx = Me, R2 = Me), de acordo com o Procedimento Geral B. 1H RMN (DMSO): δ 5,17-5,13 (dd, J = 3,57 & 3,02 Hz, 1H), 4, 06-3,92 (m, 2H), 3, 86-3,82 (dd, J = 7,42 & 4,12 Hz, 1H), 3,12-3,06 (t, J = 8,79 & 8,06 Hz, 1H), 2,56-2,26 (m, 2H), 2,35 (s largo, 3H), 2,18-2,05 (m, 2H), 2,14 (s largo, 3H), 1,57-1,35 (m, 6H), 1,04-1,02 (d, J = 6,043 Hz, 3H) . ES-MS: calc. para C17H27N3O5 (353,41); encontrada: 354,63 [M+H].

Preparou-se o 4,5-di-metil-2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole como se segue: 2-Amino-butan-3-ona

Adicionou-se Cs3C03 (134 g, 3 equiv.) e iodeto de tetrabutilamónio (154 g, 3 equiv.) a uma solução de carboxilato de di-terc-butil imino (28 g, 1 equiv.) em DMF, sob atmosfera de árgon. Após 1 h, adicionou-se 2-cloro-butan-2-ona (40 mL, 3 equiv.), agitou-se a mistura durante 12 h à ta, diluiu-se com EtOAc e filtou-se através de Celite para remover o material inorgânico. Lavou-se o filtrado com NaHC03 aq., ácido cítrico aq. a 10%, secou-se sobre Na2S04 e concentrou-se a pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em silica gel para dar o composto Boc protegido. O tratamento deste intermediário com HC1 4M durante 16 h e evaporação do solvente deu a 2-amino-butan-3-ona. ΡΕ1406893 59 4, 5-di-metil-2-S-pirrolidin-2-il-oxazole

Tratou-se uma solução de cloreto de Z-L-Pro (1 equiv.) em DCM com 2-amino-butan-3-ona (1,5 equiv.) em piridina, à ta., durante 5 h. Após o processamento usual, tratou-se o intermediário amida resultante com P0C13 a 70°C durante 2 h para dar o intermediário biciclico Z-N-protegido. O tratamento deste material com HBr-AcOH deu o composto em epígrafe. 1H RMN (DMSO): δ 4,99-4,94 (t, J = 7,32 & 6,7 Hz, 1H), 3,49-3,42 (m, 2H) , 2,56-2,1 (m, 10H) ; ES-MS: calc. para C9Hi4N20 (166,11); encontrada: 167,3 [M+H] . EXEMPLO 28: Ácido 2(S)-hidroxi-3-R-(2-S-oxazol-2-il-pirrolidino-l-carbonil)-heptanóico

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-(2,2-dimetil-4-oxo-l,3-dioxolan-5-il)hexanóico e do 5-terc-butil-2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole F-5 (R4 = H, R2 = terc-butilo), de acordo com o Procedimento Geral K, seguido por tratamento com TFA aq. a 90%-DCE. 1H RMN (DMSO): δ 6,48 (s, 1H) , 5,21-5,18 (dd, J = 3, 65 & 3,3 Hz , 1H), 4,15-3,92 (m, 3H) , 3, 80-3, 74 (m, 1H), 2, 92-2,86 (m, 2H), 2,32-2,28 ( :m, 1H), 2,14-2,03 (m, 3H), 2, 02-1,36 (m, 15H), 1,012-0,973 (t, J = 6,6 & 5,22 Hz, 3H) ; ES -MS: calc. para Ci9H3oN205 ( 366, .46) ; encontrada: 367,5 [M+H]. 60 ΡΕ1406893 EXEMPLO 29: 1-[2-S-(5-terc-butil-oxazole-2-il)- pirrolidin-l-il]-2-R/S-mercapto-metil-hexan-l-ona

Preparou-se o composto em epígrafe a partir de ácido 2-butil acrílico (D—2) e 5-terc-butil-2-(S)-pirrolidin-2-il-oxazole F-5 (Ri = H, R2 = terc-butilo), de acordo com o Procedimento Geral J, seguido por tratamento com ácido tiolacético a 90°C durante 3 h, para dar o composto S-acetil. A remoção do grupo acetilo com hidróxido de sódio 2n em MeOH, deu a mistura isomérica do composto tio em epígrafe. 1H RMN (CDC13) : d 6,62 (s, 0,6H), 6,55 (s, 0,4H), 4, 09-4, 04 (m, 0,6H), 3,72-3, 74 (m, 2H), 3,62-3,53 (m, 0,4H), 2,95-2,73 (m, 2H), 2,61-2,40 (m, 0,6H), 2,38-2,30 (m, 0,4H), 2,27-2,00 (m, 6H), 1,71-1,64 (m, 4H) , 1,56-1,44 (m, 1H, SH), 1,26 (s largo, 9H); ES-MS: calc. para C18H30N2O5S (338, 51); encontrada: 339, 5 [M+H] .

Os compostos preferidos de acordo com a invenção são, e.g., os compostos dos Exemplos 11 a 15.

Os compostos da invenção, e.g., os compostos de fórmula (I), na forma livre, na forma de um sal farmaceuticamente aceitável ou um seu pró-fármaco, exibem propriedades farmacológicas valiosas, e.g., como agentes anti-infecciosos, e.g., como indicado por testes in vitro e in vivo e são, consequentemente, indicados para terapia. 61 ΡΕ1406893 A. inibição da actividade de deformilase peptídica

Utilizou-se o ensaio de PDF/FDH conjugadas (Lazennec, C. & Meinnel, T., Anal. Biochem., Vol. 224, pp. 180-182 (1997)). Neste ensaio de ligação, o formato libertado pela PDF a partir do seu substrato fMAS é oxidado pela enzima de ligação FDH, reduzindo uma molécula de NAD+ para NADH, o que provoca um aumento de absorção a 340 nm. Todos os ensaios foram realizados à ta, num tampão de 50 mM de HEPES, pH 7,2, 10 mM de NaCl, 0,2 mg/mL de BSA em placas de microtitulação de 96 poços com metada da área (Corning). A reacção é iniciada pela adição de uma mistura de o,5 U/mL de FDH, 1 mM de NAD+ e fMAS À concentração desejada. Para determinação dos valores de IC50 (a concentração necessária para inibir 50% da actividade da enzima), o PDF é incubado durante 10 min. com diversas concentrações de actinonina e a reacção de deformilação é iniciada pela adição de mistura reaccional contendo 4 mM de fMAS. A velocidade inicial da reacção, y, é medida como velocidade inicial de aumento de absorção a 340 nM utilizando um leitor de placas SpectraMax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). A concentração de inibidor [In] a que 50% da actividade da enzima é inibida, IC50, é calculada utilizando a seguinte fórmula: Y = y0/l + [ln]/ic50) onde yO é a velocidade da reacção em ausência de inibidor. 62 ΡΕ1406893 A resolução desta equação para a IC50 na [In] quando y = yo/2, dá o lC5o· 0 IC50 é calculado com base numa regressão não linear dos quadrados mínimos, utilizando uma aplicação comercial (Deltapoint, Inc., Chicago, II).

Utilizando este ensaio, determinam-se os IC50 de diversos compostos. O IC50 para os diversos compostos são contra a enzima deformilase contendo níquel e zinco como ião metálico. Os valores de IC50 dos composto preferidos de fórmula (I), determinados para a deformilase contendo zinco, variaram desde cerca de 0,585 μΜ até cerca de 0,004 μΜ. .Os valores de IC50 dos composto preferidos de fórmula (I), determinados para a deformilase contendo níquel, variaram desde cerca de 0,06 μΜ até cerca de 0,0001 μΜ. B. Ensaio para teste da actividade antimicrobiana

Determinaram-se as concentrações inibitórias mínimas (MIC) utilizando o método da microdiluição em placas e 96 poços. Suspenderam-se os compostos em DMSO, a 5 ou 10 mg/mL e armazenaram-se a 4°C até serem utilizados. Foram depois diluídos em caldo (Broth) de Mueller-Hinton (MHB) ou caldo de Tripticase de Soja (TSB) e utilizados para a determinação da MIC. O intervalo de concentrações testado foi de 64-0,0625 pg/mL de concentração final, utilizando um sistema de diluição duplo. O inoculo foi preparado a partir de células cultivadas em Agar Tripticase de Soja (TSA) incubadas de um 63 ΡΕ1406893 dia para o outro a 35°C, tendo-se utilizado 5-10 colónias para inocular os caldos MHB ou TSB, que foram incubados a 35°C de um dia para o outro. Diluiu-se a cultura a 1:10, incubou-se durante lha 35°C, diluiu-se até ao tamanho adequado de inoculo e aplicou-se nos poços contendo caldo e composto de teste. O tamanho do inoculo foi de 2 x 104 CFU/mL.

Incubaram-se as placas a 35°C durante 48 h e registaram-se as MIC após 18 h de incubação para as bactérias. A MIC é definida como a concentração mais baixa de composto que não produz desenvolvimento visível após incubação. A concentração inibitória mínima para diversos compostos preferidos de fórmula (I) situou-se de cerca de 0,125 μς/ηΜίι a cerca de 2,0 μρ/πΛ contra H. influenza (quatro estirpes), de cerca de 0,25 μρ7ιηΒ a mais de cerca de 64 μς/ιη!, contra S. aureus (quatro estirpes), de cerca de 2 pg/mL a cerca de 16 μg/mL contra S. pneumonia (três estirpes) e de cerca de 0,125 μρ/ΐΐΐΐ, a cerca de 2 μρ/ιτΛ contra M. catarrhalis. A enzima deformilase foi obtida a partir de E. coli. C. Demonstração da inibição selectiva de PDF em comparação com MMP-7 (Matrilisina)

Como anteriormente salientado, os inibidores que sejam selectivos para a PDF sobre as MMP, são desejáveis de modo a evitar efeitos laterais. 64 ΡΕ1406893

De modo a testar os compostos da invenção quanto ao possível efeito inibitório sobre as metaloproteinases da matriz, utilizou-se o ensaio que se segue para a MMP-7 (matrilisina).

Ensaio da MMP-7 (Matrilisina): A actividade da matrilisina é ensaiada utilizando um tio-péptido (Pro-Leu-Gli-S-Leu-Leu-Gli) como substrato. Aquando da hidrólise enzimática, é libertado o tiolato como produto. 0 tiolato assim gerado, reage com dtnb (ditionitrobenzeno), dando origem a uma cor amarela que é monitorizada a 405 nM. O ensaio é efectuado à ta; o tampão de ensaio contém 50 mM de Tricina, pH 7,5, 0,2 M de NaCl, 10 mM de CaCl2 e 0,05% Brij, numa placa de microtitulação de 96 poços com metada da área. A reacção é iniciada por adição de uma mistura de 200 TM de DTNB e 100 TM de tiopéptido em tampão. Para determinação dos IC50 (a concentração necessária para inibir 50% da actividade da enzima), o MMP-7 é pré-incubado durante 10 min. com diversas concentrações de compostos e a hidrólise é iniciada pela adição de mistura reaccional contendo tiopéptido e DTNB. A velocidade da reacção é medida como aumento da OD405, ao longo de 30 min., utilizando um leitor de placas SpectraMax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). A concentração de inibidor [In] a que 50% da actividade da enzima é inibida, IC50, é calculada utilizando a seguinte fórmula: Y = y0/(l + [In] /IC50) 65 ΡΕ1406893 onde γο é a velocidade da reacção em ausência de inibidor. A resolução desta equação para a IC50 na [In] quando y = y0/2, dá o IC50·

Utilizando este ensaio, determinam-se os IC50 de diversos compostos. O IC50 dos diversos compostos preferidos de fórmula (I) contra a MMP-7 é de cerca de 100 μΜ, enquanto que os IC50 destes mesmos compostos contra PDF contendo zinco variaram desde cerca de 0,004 μΜ até cerca de 0,585 μΜ e contra a PDF contendo niquel variaram desde cerca de 0,001 μΜ até cerca de 0,006 μΜ. Consequentemente, pode verificar-se que os compostos proporcionados pela invenção possuem uma selectividade superior para as PDF, em comparação com a sua actividade contra a MMP-7.

Observou-se actividade semelhante dos compostos em relação à PDF, sobre MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-9, MMP-13, MT-MMP-1 e enzima conversora do factor de necrose tecidular. Também se observou selectividade semelhante para outras metaloproteinases, tal como a enzima conversora de angiotensina. D. Modelo de septlcémia em rato, para determinação da eficácia in vivo

Injectaram-se intraperitonealmente murganhos CDl fêmeas, não consanguíneas (Charles River Laboratories), pesando, cada uma, 18-22 g, com 0,5 mL de uma suspensão 66 ΡΕ1406893 contendo 5 x 107 cfu de S. aureus (estirpe Smith) em mucosa gástrica de porco (mucina) a 7%. Trataram-se os murganhos subcutâneamente (sc), intravenosamente (iv) ou oralmente (po), lh e 5h depois da infecção. Deram-se a seis grupos de seis murganhos cada diferentes niveis de dosagem, representando diluições para metade de cada composto (intervalo de 100 mg/kg-0,1 mg/kg). Utilizou-se vancomicina como antibiótico de controlo, administrado sc. Os compostos foram formulados em PBS e os controlos não tratados foram doseados apenas com veiculo.

Monitorizaram-se as mortes em cada grupo, diáriamente durante 6 dias e utilizou-se a mortalidade cumulativa para determinação das doses de protecção a 50% (PD50), que se calcularam utilizando o método de Reed e Muench. As ED50 (sc) nos murganhos, contra S. aureus, para diversos compostos preferidos de fórmula (I), variaram desde cerca de 3,45 mg/kg, até mais de 10 mg/kg. As PD50 (po) nos murganhos, contra S. aureus, para os mesmos compostos de fórmula (I), variaram desde cerca de 7,06 mg/kg, até cerca de 10,83 mg/kg. E. Estudo farmacoclnétlco de inibidores da PDF em murganho

Determinou-se a farmacocinética dos compostos PDF em murganhos não consanguíneos CDl fêmeas (Charles River Laboratories), pesando 20-25 g. Os compostos PDF são formuladas a 20% em ciclodextrina (Aldrich) e filtrados 67 ΡΕ1406893 através de um filtro de 0,22 mM para esterilização. São administrados compostos isolados ou misturas de 4-6 compostos iv e po a 10 mL/kg. A dose variou entre 3-15 mg/kg para cada composto. Recolheram-se amostras de soro, via punção cardíaca sob anestesia, 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4 e 7 horas após a dosagem. Utilizazam-se grupos de quatro murganhos para cada determinação temporal. As amostras de soro são armazenadas a -80°C até análise. A proteína do soro é precipitada pela adição de acetonitrilo. As amostras, depois da precipitação da proteína, são analisadas pelo método de LC/MS/MS. Obtém-se a curva padrão para cada composto que é utilizada para determinação da concentração de composto no soro. Calculam-se s parâmetros farmacocinéticos, incluindo tempo de concentração máxima (Tmáx), concentração máxima (Cmáx), semi-vida terminal (11/2) e a área sob a curva (AUC), de acordo com o método normal. A biodisponibilidade oral é calculada como a relação da AUC na administração po versus a AUC de administração iv. Os compostos preferidos de fórmula (I), exibem uma biodisponibilidade superior a 35%. S. aureus e S.

Os compostos da presente invenção são, consequentemente, úteis para inibição de bactérias ou para o tratamento e/ou prevenção de distúrbios infecciosos causados por uma variedade de organismos bacterianos ou procariotas. Os exemplos incluem, mas não se limitam a, bactérias aeróbicas e anaeróbicas Gram positivas e Gram negativas incluindo Staphylococci, e.g., 68 ΡΕ1406893 epidermidis; Enterococci, e.g., E. faecalis e E. faecium; estreptococci, e.g., S. pneumoniae-, Haemophilus, e.g., H. influenza; Moraxella, e.g., M. catarrhalis; Bacteroides, e.g., Bacteroides fragilis; Clostridium, e.g., Clostridium difficile; Neisseria, e.g., N. meningitidis e N. gonorrhoae-, Legionella e Escherichia, e.g., E. coli. Outros exemplos incluem Mycobacteria, e.g., M. tuberculosis; microbios intracelulares, e.g., Chlamidia e Rickettsiae; Mycoplasma, e.g., M. pneumoniae', Pseudomonas, e.g., P. aeruginosa·, Helicobacter pylori e parasitas, e.g., Plasmodium falciparum.

Tal como aqui utilizado, um "distúrbio infec-cioso" é qualquer distúrbio caracterizado pela presença de uma infecção facteriana, tal como pela presença de bactérias. Tais distúrbios infecciosos incluem, por exemplo, infecções do sistema nervoso central, infecções do ouvido externo, infecções do ouvido médio, tal como otite média aguda, infecções dos seios cranianos, infecções oculares, infecções da cavidade oral, tais como infecções dos dentes, gengivas e mucosa, infecções do trato respiratório superior, infecções do trato respiratório inferior, infecções genitourinárias, infecções gastrointestinais, infecções ginecológicas, septicémia, infecções do osso e articulações infecções da pele e das estruturas dérmicas, endocardite bacteriana, queimaduras, profilaxia antibacteriana da cirurgia, profilaxia antibacteriana em doentes imunosuprimidos, tais como em pacientes recebento quimioterapia do cancro ou pacientes com transplante de 69 ΡΕ1406893 orgãos e doenças crónicas causadas por organismos infec-ciosos, e.g. arterioesclerose.

Os compostos podem ser utilizados para tratar um sujeito ou para tratar, evitar e/ou reduzir a gravidade de uma infecção. Sujeito inclui animais, plantas, produtos sanguíneos, culturas e superfícies tais como as de equipamento médico ou de pesquisa, tais como vidros, agulhas, tubagens e equipamentos cirúrgicos e objectos destinados a implantação temporária ou permanente num organismo. Os animais preferidos incluem mamíferos, e.g., murganho, rato, gato, cão, vaca, ovelha, porco, cavalo, suinos, primatas tais como o macaco rhesus, chimpanzé, gorila e, mais preferencialmente, seres humanos. Tratar um sujeito inclui, mas não se limita a, prevenir, reduzir, e/ou eliminar os sintomas clínicos causados por uma infecção de um sujeito por um microorganismo; prevenir, reduzir e/ou eliminar uma infecção de um sujeito por um microorganismo; ou prevenir, reduzir e/ou eliminar a contaminação de um sujeito por um microorganismo. 0 microorganismo envolvido é, preferencialmente, um procariota, mais preferencialmente uma bactéria.

Para as utilizações acima, a dosagem necessária variará, como é óbvio, dependendo do modo de administração, da condição particular a ser tratada e do efeito desejado. As composições podem conter, por exemplo, desde cerca de 0,1% em peso a cerca de 99% em peso, e.g., cerca de 10 a 60% em peso de material activo, dependendo do método de administração. Quando as composições compreendem unidades 70 ΡΕ1406893 de dosagem, cada unidade conterá, por exemplo, cerca de 1-100 mg, e.g., 1-500 mg de ingrediente activo. A dosagem, para emprego no tratamento de um ser humano adulto situar-se-à, por exemplo, entre cerca de 1-3000 mg/dia, por exemplo, 1500 mg/dia, dependendo da via e da frequência de administração. Tal dosagem corresponde a cerca de 0,015-50 mg/kg/dia. A dosagem adequada será, por exemplo, de cerca de 5-10 mg/kg/dia. As formas de dosagem unitária adequadas conterão ca. 0,25-1500 mg de ingrediente activo.

Um "veiculo farmaceuticamente aceitável" significa um excipiente que é util na preparação de uma coposição farmacêutica, que é na generalidade, seguro, não tóxico e não é, biologicamente ou de qualquer outro modo, indesejável e inclui um excipiente que é aceitável para utilização farmacêutica veterinária, e também humana. Um "veiculo farmaceuticamente aceitável", tal como utilizado mas especificações e nas reivindicações, inclui tanto um, como mais do que um de tais veículos.

Os compostos podem ser administrados por qualquer via convencional, e.g., localmente ou sistemicamente, e.g., oralmente, tópicamente, parenteralmente, subdérmicamente ou por inalação, e pode ser utilizado para o tratamento de infecções bacterianas num sujeito, tal como animais, preferencialmente mamíferos e mais preferencialmente, seres humanos.

As composições podem ser administradas por 71 ΡΕ1406893 qualquer via convencional conhecida na técnica, e.g., subdermicamente, por inalação, oralmente, tópicamente ou parenteralmente, e podem ser utilizadas para o tratamento de infecções bacterianas num sujeito tal como animais, preferencialmente, mamíferos, mais preferencialmente seres humanos.

Os compostos da invenção podem ser formulados para administração por qualquer via conveniente para utilização em medicina humana ou veterinária, por analogia com outros antibióticos. Tais métodos são conhecidos na técnica (ver, e.g., Remington's Pharmaceutical Sciences, Easton, PA; Mack Publishing Co.) e não são aqui descritos em detalhe.

As composições podem tomar qualquer forma conhecida na técnica, incluindo, mas não se limitando a, comprimidos, cápsulas, pós, grânulos, lozangos, cremes ou preparações liquidas, tais como soluções ou suspensões orais ou parenterais estéreis. Os compostos também podem ser administrados em formulações lipossomais. Os compostos também podem ser administrados como pró-fármacos, em que o pró-fármaco administrado sofre uma biotransformação no mamífero tratado, para uma forma que é biologicamente activa.

As formulações tópicas da presente invenção podem ser apresentadas como, por exemplo, pomadas, cremes ou loções, soluções, salvas, emulsões, compressar, pomadas 72 ΡΕ1406893 oculares e gotas oculares ou para o ouvido, ligaduras impregnadas e aerossóis, e podem conter aditivos convencionais apropriados, tais como preservantes, solventes para auxiliar a penetração do fármaco e emolientes em pomadas e cremes.

As formulações também podem conter veículos convencionais compatíveis, tais como bases para cremes ou pomadas e etanol ou álcool oleilico para as loções. Tais veículos podem estar presentes, por exemplo, em desde cerca de 1% a cerca de 99% da formulação. Por exemplo, podem formar até cerca de 80% da formulação.

Os comprimidos e cápsulas para administração oral podem estar apresentadas em formada dose unitária e podem conter excipientes convencionais tais como agentes ligantes, por exemplo, xarope, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanto ou polivinilpirrolidona; agentes de volume, por exemplo, lactose, açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol ou glicina; lubrificante de compressão, por exemplo, estearato de magnésio, talco, polietilenoglicol ou sílica; desintegrantes, po exemplo, amido de batata ou agentes molhantes aceitáveis, tal como laurilsulfato de sódio. Os comprimidos podem ser revestidos, de acordo com métodos bem conhecidos na prática farmacêutica vulgar.

As preparações líquidas oraispodem tomar a forma de, por exemplo, suspensões aquosas ou oleosas, soluções, 73 ΡΕ1406893 emulsões, xaropes ou elixires, ou podem ser apresentadas como um produto seco para reconstituição com água ou outro veiculo adequado, antes da utilização. Tais preparações liquidas podem conter aditivos convencionais, tais como agentes de suspensão, por exemplo, sorbitoç, metilcelulose, xarope de glucose, gelatina, hidroxietilcelulose, carbo-ximetilcelulose, gel de estearato de alumínio ou gorduras edíveis hidrogenadas; agentes emulsionantes, por exemplo, lecitina, monooleato de sorbitano ou acácia; veículos não aquosos (que podem incluir óleos edíveis), por exemplo, óleo de amêndoa, esteres oleosos, tais como glicina, propilenoglicol ou álcool etílico; preservantes, por exemplo, p-hidroxibenzoato de metilo ou propilo ou ácido sórbico e, se desejado, agentes aromatizantes ou corantes convencionais.

Para administração parenteral, são preparadas formas de dosagem fluidas, utilizando o composto e um veiculo estéril, sendo preferida a água. A composição, dependendo do veiculo e da concentração utilizados, podem ser suspensos ou dissolvidos no veiculo ou noutro solvente adequado. Na preparação de soluções, o composto pode ser dissolvido em água para injecção e esterilizado por filtração antes do enchimento de frascos adequados ou ampolas e selagem. Agentes, tais como anestésicos locais, preservantes e agentes tampão podem, vantajosamente, ser dissolvidos no veículo. Para melhorar a estabilidade, a composição pode ser congeladas depois do enchimento do frasco e a água removida sob vácuo. O pó liofilizado seco e 74 ΡΕ1406893 então selado no frasco e pode ser fornecido um frasco de água para injecção para reconstituição do liquido antes da utilização. As suspensões parenterais são preparadas substancialmente da mesma forma, excepto que o composto é suspenso no veiculo, em vez de ser dissolvido, e a esterilização pode ser efectuada por filtração. 0 composto pode ser esterilizado por exposição a óxido de etileno antes de ser suspenso no veículo estéril. Um surfactante ou agente molhante é, vantajosamente, incluído na composição, para facilitar a distribuição uniforme do composto.

Os compostos da invenção, e.g., os compostos de fórmula (I), podem ser administrados na forma livre ou na forma de um sal farmaceuticamente aceitável, e.g., como indicado acima. Tais sais podem ser preparados de forma convencional e exibem a mesma ordem de actividade dos compostos livres.

De acordo com o exposto, a resente invenção também proporciona: 1.1 A utilização de um composto de fórmula (I) na manufactura de um medicamento para tratar e/ou evitar um distúrbio infeccioso num sujeito humano um num sujeito animal, incluindo o referido composto um sal farmaceuticamente aceitável seu derivado ou um seu pró-fármaco. 1.2 A utilização de um composto de fórmula (I) ΡΕ1406893 75 na preparação de um medicamento para inibição da peptidil deformilase num sujeito, incluindo o referido composto um sal farmaceuticamente aceitável seu derivado ou um seu pró-fármaco. 2. Um composto de fórmula (I), na forma livre ou na forma de um sal f armaceuticamente aceitável para utilização como produto farmacêutico, e.g., em qualquer método como indicado em 1.1 ou 1.2, acima. 3. Composição farmacêutica, e.g., para utilização em qualquer dos métodos 1.1. ou 1.2, acima, compreendendo um composto de fórmula (I), na forma livre no na forma de um sal farmaceuticamente aceitável e.g., em associação com um diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável. 4. Um composto de fórmula (I), um seu sal farmaceuticamente aceitável ou um pró-fármaco, para utilização como produto farmacêutico ou na preparação de uma composição farmacêutica para utilização em qualquer método, como indicado em 1.1 ou 1.2, acima. "Tratar" ou "tratamento" de uma doença, inclui: (a) prevenir a doença, í.e., evitar que os sintomas clínicos da doença não se desen- 76 ΡΕ1406893 volvam num indivíduo, e.g., um mamífero, que tenha sido exposto ou seja predisposto à doença, mas que não experimente ainda ou exiba sintomas da doença, (b) inibir a doença, í.e., parar ou reduzir o desenvolvimento da doença ou dos seus sintomas clínicos, ou (c) aliviar a doença, í.e., causar a regressão da doença ou dos seus sintomas clínicos.

Os compostos da invenção são utilizados numa quantidade que, quando administrados a um indivíduo, para tratamento de um distúrbio infeccioso susceptível à inibição da peptidil deformilase ou para inibição da peptidil deformilase, seja suficiente para inibir a peptidil deformilase. A referida quantidade variará, dependendo do composto, do seu sal ou pró-fármaco empregue, do microorganismo que é inibido no indivíduo, a idade, peso, sexo, estado médico, espécie, distúrbio e sua gravidade, do indivíduo a ser tratado e da via de administração, mas, apesar de tudo, pode ser facilmente determinada por um técnico da matéria.

Os compostos de fórmula (I), um seu sal farma-ceuticamente aceitável ou um seu pró-fármaco, pode ser administrado só ou em combinação com outro agente terapêutico. Exemplos de tais agentes terapêuticos incluem, mas não se limitam a, outros agentes antibacterianos tais como β-lactamas, e.g., penicilinas; cefalosporinas; 77 ΡΕ1406893 carbapenemos; cetolidos; quinolonas, e.g., fluoroquino-lonas; macrolidos, e.g., claritromicina, azitromicina ou vancomicina; rifamicinas; monobactamas; isoniazido; lico-samidas; mupirocina; sulfonamidas; fenicóis; fosfomicina; glicopéptidos; tetraciclinas; estreptograminas; cloranfe- nicol e oxazolidinona; aqentes anti-inflamatórios, e.g., costicosteróides ou NSAID, e.g., analgésicos narcóticos ou não opiáceos.

De acordo com o precedente, a presente invenção proporciona ainda, noutro aspecto: 5. A utilização, como definida acima, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), de um seu sal farmaceuticamente aceitável ou de um seu pró-fármaco e uma segunda substância farmacológica. 6. Uma combinação terapêutica, e.g., um kit, compreendendo a) um composto de fórmula (I), um seu sal farmaceuticamente aceitável ou um seu pró-fármaco e b) pelo menos um segundo agente activo. O componente a) e o componente b) podem ser utilizados concomitante mente ou em sequência. 0 kit pode incluir instruções para a sua administração.

Seguem-se formulações farmacêuticas representativas, contendo um composto da invenção. 78 ΡΕ1406893

Exemplo A: Formulação para comprimidos

Misturam-se intimamente os ingredientes seguintes, que são depois prensados para formar comprimidos simples.

Ingrediente Quantidade por comprimido (mg) Composto desta invenção 400 Amido de Milho 50 Croscarmelose sódica 25 Lactose 120 Estearato de magnésio 5

Exemplo B: Formulação para cápsulas

Misturam-se intimamente os ingredientes seguintes e enchem-se cápsulas de gelatina dura.

Ingrediente Quantidade por cápsula (mg) Composto desta invenção 200 Lactose seca por pulverização 148 Estearato de magnésio 2

Exemplo C: Formulação para suspensão

Misturam-se os ingredientes que se seguem para formar uma suspensão para administração oral. 79 ΡΕ1406893

Ingrediente Quantidade Composto desta invenção 1,0 g Ácido fumárico 0,5 g Cloreto de sódio 2,0 g Metil parabeno 0,15 g Propil parabeno 0,05 g Açúcar granulado 25,0 g Sorbitol (solução a 70%) 13,0 g Veegum K (Vanderbilt Co.) 1,0 g Aromatizante 0,035 mL Corante 0,5 mg Água destilada q.s. para 100 mL

Exemplo D: Formulação injectável

Misturam-se os ingfredientes que se seguem para formar uma formulação injectável

Ingrediente Quantidade Composto desta invenção Solução tampão de acetato de 0,2-20 mg sódio. 0,4 M 2,0 mL HC1 (1 N) ou NaOH (1 N) q.s. para o pH adequado Água (destilada, estéril) q.s. para 20 mL

Exemplo E: formulação para supositórios

Prepara-se um supositório com um peso total de 2,5 g, misturando o composto da invenção com Witepsol® H-15 (triglicéridos de ácido gordo saturado vegetal; Riches-Nelson, Inc., Nova Iorque) na seguinte composição: 80 ΡΕ1406893

Composto da invenção 500 mg

Witepsol® H-15_até ao peso A presente invenção não se limita à utilização clinica dos compostos da invenção, í.e., no tratamento de infecção num indivíduo. Oscompostos da invenção são úteis para inibição de bactérias sempre que é desejado inibir bactérias, por contacto das bactérias com um ou mais compostos da invenção. Dada a sua capacidade para inibição de bactérias, os compostos da invenção são particularmente úteis para evitar a contaminação de culturas de células. Tal como utilizado neste contexto, o termo "inibir" significa a supressão, controlo, estase ou morte de bactérias. As células eucariotas, em particular células de animais, são frequentemente cultivadas por diversos motivos, tais como a sua capacidade para produção de substâncias como as proteínas. Exemplos de tais células incluem células de ovário de hamster chinês (células CHO), células de rim de macaco verde africano, hibridomas construídos a partir de uma célula mãe (mieloma, etc.) com uma célula normal produtora de uma substância útil (linfócito, etc,) e outras do mesmo género. Os compostos da invenção são tipicamente incorporados no meio de cultura de células numa quantidade inibidora de bactérias, e.g., numa concentração de cerca de 0,0001 a cerca de 10 micro-gramas/mL, preferencialmente de cerca de 0,0001 a cerca de 1 micrograma/mL e mais preferencialmente, de cerca de 0,001 a cerca de 0,1 microgramas/mL. Pode ser utilizado qualquer meio convencional de cultura conhecido na técnica. 81 ΡΕ1406893

De acordo com o antecedente, a presente invenção proporciona, ainda noutro aspecto: 7. Um método para evitar a contaminação bacte-riana de um meio de cultura de células, compreendendo a incorporação no referido meio de cultura de células, de uma quantidade inibidora de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. 8. Um meio para cultura de células compreendendo uma quantidade inibidora de bactérias de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. A precedente invenção foi descrita com algum detalhe com recurso a ilustração e exemplos, para fins de clarificação e compreensão. Será óbvio, para um técnico da matéria, que podem ser praticadas alterações e modificações no âmbito das reivindicações anexas. Consequentemente,deve entender-se que a descrição acima se destina a ser ilustrativa e não restritiva. 0 âmbito da invenção deve, por isso, ser determinado não com referência à adescrição acima, mas, em vez disso, ser determinado com referência às reivindicações apensas que se seguem, conjuntamente com o âmbito completo a que tais reivindicações dizem respeito.

Lisboa, 29 de Junho de 2007

Claims (11)

1. ΡΕ1406893 1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula (I):

   (I) Ri é arilo ou heteroarilo, que está ligado a uma posição a- ou β- ao azoto do anel; R2 é hidrogénio, halogénio ou hidroxilo; R3 é hidrogénio, halogénio, Ci_i0 alquilo, Ci_i0 heteroalquilo ou (R2 e R3) colectivamente formam um C4-7 cicloalquilo, desde que, quando R3 é halogénio, R2 não seja hidroxilo; X é -CH2- ou S; W é NR5 ou CR4R5, em que R4 é hidrogénio, halogénio, C1-10 alquilo ou C1-10 heteroalquilo e R5 é C1-10 alquilo, ou (R4 e R5) colectivamente formam um C4-7 cicloalquilo, desde que quando W é NR5, R2 e R3 são hidrogénio, C1-10 alquilo ou heteroalquilo; Y é -C00H, -SH, -N(OH)-CHO ou -CO-NH(OH), desde que quando Y é -N (OH) -CHO ou -SH, R2 é hidrogénio e R3 é hidrogénio, C1-10 alquilo ou Ci_i0 heteroalquilo, 2 ΡΕ1406893 n é de 0 a 3, desde que quando n é 0, X é -CH2-, um sal seu derivado ou um seu pró-fármaco.
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Y é -CO-NH(OH) ou -N(OH)CHO.
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que W é CR4R5, R4 é hidrogénio e R5 é Ci_i0alquilo.
4. 4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que X é -CH2- e n = 1.
5. 5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que R2 é hidroxi, flúor ou hidrogénio e R3 é hidrogénio.
6. 6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que R4 é heteroarilo, preferencialmente oxazolilo, metiloxazolilo ou piridinilo.
7. 7. Composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um pró-fármaco seus derivados.
8. 8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um sal farmaceuticamente aceitável 3 ΡΕ1406893 ou um pró-fármaco seus derivados para utilização como produto farmacêutico.
9. 9. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1, ou de um sal farmaceuticamente aceitável ou um pró-fármaco seus derivados na manufactura de um medicamento para trtamento e/ou prevenção de um distúrbio infeccioso.
10. 10. Método para prevenir a contaminação bacteriana de um meio de cultura de células, compreendendo a incorporação, no referido meio de cultura, de uma quantidade inibidora de bactérias de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou de um sal farmaceuticamente aceitável seu derivado.
11. 11. Meio de cultura de cálulas compreendendo uma quantidade inibidoras de bactérias de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou de um sal farmaceuticamente aceitável seu derivado. Lisboa, 29 de Junho de 2007