PT1261350E

PT1261350E - Processos para síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-b-d-arabinofuranosil)-9h-purin-6-amina

Info

Publication number: PT1261350E
Application number: PT01910961T
Authority: PT
Inventors: John A Montgomery; Anita T Fowler; John A Secrist
Original assignee: Southern Res Inst
Priority date: 2000-02-18
Filing date: 2001-02-16
Publication date: 2006-11-30
Also published as: DE60121425T2; NZ520852A; US20030023078A1; US7470784B2; WO2001060383A1; JP2003522798A; KR100695717B1; AU2001238516B2; AU3851601A; CA2400470C; EP1261350A4; CA2400470A1; EP1261350B1; MXPA02008075A; JP4555536B2; DE60121425D1; US6949640B2; ATE332910T1; ES2267725T3; DK1261350T3

Description

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DESCRIÇÃO "Processos para síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-|3-D-arabinofuranosil) -9Jí-purin-6-amina"

Campo do invento

Este invento refere-se, de modo geral, a processos para sintetizar um agente quimioterapêutico que é útil no tratamento de várias malignidades. Mais particularmente, este invento refere-se a processos melhorados para a síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-9H-purin-β-amina no qual se faz reagir a forma aniónica de uma 2-cloro-purina, substituída na posição 6, com uma 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose, protegida e activada, seguida de reacção com uma base adequada tal como amoníaco para gerar 2-cloro-9- (2-desoxi-2-fluoro-p-D-arabinofuranosil) -5íí-purin-6-amina. 0 presente invento refere-se também a novos intermediários utilizados na síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-f luoro-p-D-arabinof uranosil)-5lí-purin-6-amina, tal como as 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-6-alcoxi-9.ff-purinas e determinadas 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-ϋ-arabinofuranosil)-9H-purinas substituídas na posição 6 e protegidas nas posições 3,5.

Antecedentes do invento A Clofarabina [2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-p-D-arabino-furanosil)-5íí-purin-6-amina] apresentou citotoxicidade em ratinhos inoculados com leucemia P388. Conforme foi referido por Montgomery et al., "Synthesis and Biologic Activity of 2'-Fluoro-2-Halo Derivatives of 9-p-D-Arabinofuranosyl-adenine", Journal of Medicinal Chemistry, 1992, 35, pp. 397-401, a clofarabina proporcionou um bom aumento na esperança de vida de ratinhos inoculados com leucemia P388. A 2-cloro-9- (2-desoxi-2-f luoro-p-D-arabinofuranosil) -5íí-purin-6-amina foi o composto mais eficaz no sistema testado. Além disso, este composto apresentou reduzida clivagem in vivo da ligação glicosídica quando comparado com a Fludarabina. O processo referido para a síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-f luoro^-D-arabinofuranosil) -9fí-purin-6-amina 2

ΕΡ 1 261 350 /PT compreende um procedimento utilizando brometo de 3-O-acetil- 5- 0-benzoil-2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranosilo para o acoplamento com 2,6-dicloropurina, seguido por uma sequência de aminação/desprotecção. (Ver Montgomery, et al., "9-(2-Deoxy-2-fluoro^-D-arabinofuranosyl)guanine: A Metabolically Stable Cytotoxic Analogue of 2'-Deoxyguanosine", Journal of Medicinal Chemistry, 1986, 29, pp. 2389-2392; e Montgomery et al., "Synthesis and Biologic Activity of 2'-Fluoro-2-halo Derivatives of 9^-D-Arabinofuranosyladenine", Journal of Medicinal Chemistry, 1992, 35, pp. 397-401).

Contudo, o processo referido para a síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-f luoro-p-D-arabinofuranosil) -9lí-purin-6-amina resulta em baixos rendimentos globais de produto, tipicamente na ordem de cerca de 13%. A reacção de acoplamento descrita produziu uma mistura de nucleósidos a partir da qual foi obtido o intermediário 9-β desejado com apenas 32% de rendimento após cromatografia cuidadosa. A aminação/desprotecção directa deste material originou a 2-cloro-9- (2-desoxi-2-f luoro-p-D-arabinofuranosil) -9fí-purin- 6- amina desejada, mais uma 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-Ό-arabinofuranosil)-9fí-purin-6-amina parcialmente benzoilada que requereu ainda tratamento com base. A 2-cloro-9-(2-desoxi-2-f luoro^-D-arabinofuranosil) -9fí-purin-6-amina pura foi obtida apenas após várias recristalizações para remover sais e benzamida residual.

Essas reacções ineficazes inibirão a capacidade de produzir comercialmente 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-ϋ-arabinofuranosil)-9fí-purin-6-amina. Assim, existe uma necessidade para um processo melhor para sintetizar 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro^-D-arabinofuranosil)-9H-purin-6-amina que resulte em rendimentos mais elevados e/ou menos passos de processo.

Galina V. Zaitseva et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, Vol. 5, N° 24, pp. 2999-3002, 1995, descreve a síntese de 2-cloro-2'-desoxi-2'-fluoroadenosina. Essa síntese compreende a condensação de l-0-acetil-3,5-di-O-benzoil-2-desoxi-2-f luoro^-D-ribof uranose com 2,6-dicloropurina trimetilsililada na presença de cloreto de estanho (IV) em acetonitrilo anidro à temperatura ambiente, o 3

ΕΡ 1 261 350 /PT isolamento do β-nucleósido, a transformação em amina via acção sucessiva de uma solução saturada de amoníaco em 1,2-dimetoxietano e depois amoníaco metanólico e separação por cromatografia em gel. 0 processo é caracterizado por baixos rendimentos globais de produto. Nenhum dos compostos apresentados por essa referência é reivindicado neste pedido.

Em US-A-4751221 apresentam-se determinados nucleósidos de 2-fluoro-arabinofuranosil-purina e seus processos de preparação. Nenhum dos compostos apresentados por essa referência é reivindicado neste pedido.

Em WO 92/20347 apresentam-se determinados 2-fluoro-adeninil-arabinosidos substituídos na posição 2 como agentes anti-cancerígenos e os seus processos de preparação. Nenhum dos compostos apresentados por essa referência é reivindicado neste pedido.

Ma, Tianwei et ai., "Synthesis and Anti-Hepatitis B Virus Activity of 9-(2-deoxy-2-fluoro-p-L-arabinofuranosyl)purine Nucleosides", Journal of Medicinal Chemistry (1997), 40(17), 2750-2754, refere avaliar a actividade anti-vírica contra hepatite B de vários nucleótidos de 9-(desoxi-2-fluoro-p-L-arabinofuranosil)-9H-purina incluindo 2-cloro-9-(desoxi-2-fluoro-p-L-arabinofuranosil)adenina (composto 21). Esse artigo não sugere os processos reivindicados neste pedido, pois, entre outras coisas, não está mesmo relacionado com a síntese de 2-cloro-9-(desoxi-2-fluoro^-D-arabinofuranosil)-9H-purin-6-amina [clofarabina].

Em EP-A-0577303 refere-se especificamente uma glicosilação estéreo-selectiva para preparar um nucleósido rico no anómero β. Esta menciona a conversão opcional da nucleobase num sal de metais por adição de uma base tal como um alcóxido de metal, mas não sugere a reacção do produto de uma 2-cloro-purina substituída na posição 6 e de 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranosilo protegido e activado com um alcóxido para formar um intermediário nucleósido 2-cloro-6-alcoxipurina. Para além disso, não sugere uma purina de partida possuindo um grupo cloro na posição 2, e não sugere uma inter-mutabilidade das formas D e L do composto. Todos os exemplos aqui estão na forma D. 4

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Resumo do invento

Um aspecto do presente invento é proporcionar um processo de rendimento relativamente elevado de síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-f luoro^-D-arabinofuranosil) -9.ff-purin-6-amina que compreende a reacção de uma 2-cloro-purina substituída na posição 6, na forma aniónica, com uma 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose protegida e activada para proporcionar um nucleósido 2,6-dicloropurina substituída na posição 9. Esse produto reage então com um alcóxido para proporcionar um nucleósido 2-cloro-6-alcoxi-purina. Esse composto reage então com amoníaco para proporcionar 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-D-arabinofuranosil) -9fí-purin-6-amina.

Um outro aspecto do presente invento refere-se a um processo para a síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-ϋ-arabinofuranosil)-9fí-purin-6-amina fazendo reagir a forma aniónica de uma 2-cloro-purina substituída na posição 6 com uma 2-fluoro-2-desoxi-D-arabinofuranose protegida e activada para proporcionar um produto de reacção compreendendo um nucleósido de purina, seguido de reacção do nucleósido de purina com uma base adequada tal como amoníaco para gerar 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro^-D-arabinofuranosil)-9H-purin-6-amina. 0 presente invento refere-se também a novos intermediários usados na síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro^-D-arabinofuranosil)-9fí-purin-6-amina. Esses intermediários incluem 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro^-D-arabinofuranosil)-9fí-purinas substituídas na posição 6 e protegidas nas posições 3,5 onde o substituinte na posição 6 é seleccionado do grupo azido e alcoxi.

Outras características e objectivos e vantagens do presente invento tornar-se-ão evidentes a partir da leitura da descrição a seguir apresentada.

Breve descrição dos desenhos A Fig. 1 é um diagrama esquemático de uma concretização de uma reacção que compreende um processo de síntese do presente invento. 5

ΕΡ 1 261 350 /PT A Fig. 2 é um diagrama esquemático de uma concretização alternativa de um outro processo de síntese em conformidade com o presente invento. A Fig. 3 é um diagrama esquemático de uma concretização alternativa ainda de um processo de síntese em conformidade com o presente invento. 0 melhor e vários modos de concretizar o presente invento A referência à Figura 1 ilustra um dos processos de síntese em conformidade com o presente invento. Esta reacção química conforme está ilustrada na Figura 1 proporciona um processo conveniente para a preparação de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-f luoro^-D-arabinof uranosil)-9fí-purin-6-amina (5) em três passos e resultou em rendimentos globais de cerca de 44%.

Para o primeiro passo, faz-se reagir uma 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose protegida e activada (2) com uma 2-cloro-purina substituída na posição 6 (1) para proporcionar um produto de reacção compreendendo um nucleósido de purina substituída na posição 9 (3). Nesta concretização do presente invento, o grupo preferido na posição 6 é um halogéneo. A 2-cloro-purina substituída na posição 6 preferida na forma aniónica utilizada neste esquema de reacção é 2,6-dicloropurina. Os exemplos de formas aniónicas adequadas incluem os sais de metais alcalinos, e os sais de amina orgânica. Os sais de metais alcalinos incluem os sais de sódio, potássio e lítio. Os sais de metais podem ser obtidos a partir de hidretos de metais como NaH, KH e LiH ou de alcóxidos tais como NaOCH3 e K0CH3.

As bases orgânicas que formam sais de amina incluem bases fortes de amina impedidas tais como DBU (1,8-diaza-biciclo[5.4.0]undec-7-eno); DBN (1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno); Dabco (1,4-diazabiciclo [2.2.2] octano); e N,N-di-isopropiletilamina.

Uma forma aniónica preferida é o sal de sódio. A forma aniónica é necessária para conseguir a reacção de acoplamento desejada. 6

ΕΡ 1 261 350 /PT A 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose contém grupos protectores nos grupos hidroxilo nas posições 3 e 5 e um grupo activante na posição C-l.

Os grupos protectores de hidroxi conhecidos na arte estão descritos no Capítulo 3 do Protective Groups in Organic Chemistry, McOmie Ed., Plentum Press, New York (1973), e no Capítulo 2 de Protective Groups in Organic Synthesis, Greene, T., John Wiley and Sons, New York (1981 e 1999); cujas apresentações são aqui incorporadas por referência. Os grupos protectores adequados para os grupos hidroxilo incluem os grupos que formam ésteres, carbonatos, éteres de alquilo, éteres de arilo, éteres de sililo e carbonatos. Exemplos de ésteres adequados são o formilo, o acetilo, o acetilo substituído, o propionilo, o butinilo, o pivaloilo, 2-cloroacetilo, benzoilo, benzoilo substituído, fenoxi-carbonilo, metoxiacetilo e toluoilo.

Exemplos de derivados de carbonato são fenoxicarbonilo, etoxicarbonilo, butoxicarbonilo, viniloxicarbonilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo e benziloxicarbonilo.

Exemplos de grupos que formam éter de alquilo e éter de arilo são benzilo, p-clorobenzilo, difenilmetilo, trifenilmetilo, t-butilo, metoximetilo, tetra-hidropiranilo, alilo, tetra-hidrotienilo, 2-metoxietoximetilo.

Exemplos de grupos que formam éter de sililo são trialquilsililo, trimetilsililo, isopropildialquilsililo, alquildi-isopropilsililo, tri-isopropilsililo, t-butil-dialquilsililo e 1,1,3,3-tetra-isopropildisiloxanilo.

Exemplos de carbamatos são o N-fenilcarbamato e o N-imidazoilcarbamato.

Se desejado, podem ser utilizadas misturas de grupos protectores. Por exemplo, a 2-desoxi-2-fluoro-D-arabino-furanose (2) pode possuir dois grupos acilo ou dois grupos éter, ou combinações de grupos acilo e éter.

Exemplos de grupos activantes para o C-l do hidrato de carbono incluem halogéneo tal como Cl, Br e F; 7

ΕΡ 1 261 350 /PT alquilsulfoniloxi, alquilsulfoniloxi substituído; aril-sulfoniloxi, e arilsulfoniloxi substituído.

Os substituintes alquilo adequados contêm 1-8 átomos de carbono e mais tipicamente 1-4 átomos de carbono tal como o metilo, etilo e propilo. Um grupo arilo adequado inclui fenilo.

Exemplos de grupos alquilsulfoniloxi e alquilsulfoniloxi substituído são metanossulfoniloxi e 2-cloroetanos-sulfoniloxi.

Exemplos de grupos arilsulfoniloxi e arilsulfoniloxi substituído são benzenossulfoniloxi, toluenossulfoniloxi, p-nitrobenzenossulfoniloxi e p-bromobenzenossulfoniloxi; enquanto que o mais preferido é metanossulfoniloxi.

Um grupo protector preferido é o benzoílo e um grupo activante preferido é bromo. Um composto específico que pode ser utilizado como composto açúcar (2) é o brometo de 2-desoxi-2-fluoro-3,5-di-O-benzoyl-a-D-arabinofuranosilo, tal como preparado por C.H. Tann, et al., J. Org. Chem., 1985, 50, 3644-3647; cuja apresentação é aqui incorporada por referência. A purina e o derivado de hidrato de carbono activado são utilizados tipicamente em quantidades aproximadamente equivalentes ou com um excesso de purina e mais tipicamente em cerca de 1:1 a cerca de 3:1; de preferência cerca de 1:1 a cerca de 1,5:1 e com mais preferência cerca de 1:1 a cerca de 1:2 de purina para derivado de hidrato de carbono activado.

Este passo do processo é efectuado tipicamente a temperaturas de cerca de 0 o a cerca de 100 °C, mais tipicamente cerca de 20°C a cerca de 70°C e de preferência cerca de 20°C a cerca de 40°C; e a pressões atmosféricas normais. No entanto, se desejado, podem ser utilizadas pressões mais elevadas ou mais baixas. Este passo do processo demora tipicamente cerca de 3 a cerca de 24 horas a terminar. ocorre A reacção do composto de purina (1) descrita anteriormente com o açúcar arabinofuranose (2) 8

ΕΡ 1 261 350 /PT preferencialmente na presença de um solvente. Esse solvente pode ser um solvente bipolar, aprótico, como a acetona, o acetonitrilo, a dimetilformamida, o dimetilsulfóxido, sulfolano, dimetilacetamida e éteres tais como o tetra-hidrofurano, dioxano, e dimetoxietano.

Quando a reacção da purina (1) e o açúcar arabinofuranose (2) estiver completa, a mistura reaccional pode ser filtrada e o solvente pode ser evaporado até se obter uma espuma. A espuma pode ser purificada sobre sílica de flash usando acetato de isopropilo/hexano ou quaisquer outras soluções adequadas como eluente. As fracções contendo o isómero 9-β desejado podem ser combinadas e evaporadas num resíduo que pode ser depois cristalizado a partir do etanol para gerar o nucleósido de purina substituída em 9 desejado (3).

Para o passo seguinte, faz-se reagir o nucleósido de purina substituído na posição 9 (3) com um alcóxido para proporcionar o correspondente nucleósido 2-cloro-6-alcoxi-purina (4) . 0 alcóxido é, de preferência, um alcóxido de metal alcalino e com maior preferência metóxido de sódio.

Este passo do processo é efectuado tipicamente a temperaturas de cerca de 0o a cerca de 100°C, mais tipicamente cerca de 20°C a cerca de 40°C e a pressões atmosféricas normais. Se desejado, podem ser utilizadas pressões mais elevadas ou mais baixas. Este passo do processo demora tipicamente cerca de 3 a cerca de 24 horas a terminar.

Para além disso, este passo do processo ocorre, de preferência, na presença de um solvente, sendo um solvente preferido um álcool que corresponde ao alcóxido usado na reacção. No final, a mistura reaccional pode ser tratada com uma resina de permuta iónica, filtrou-se e evaporou-se num residuo. Uma resina de permuta iónica comercialmente disponível que provou ser útil para este fim é a resina de permuta iónica Dowex 50WX8-400. 0 nucleósido 6-alcoxipurina desejado (4) pode derivar do resíduo obtido neste passo por trituração do resíduo com hexano várias vezes, seguido de decantação do licor sobrenadante. O resíduo assim obtido pode então ser submetido 9

ΕΡ 1 261 350 /PT a recristalização ou a formação de pasta em álcool isopropílico frio em vez de recristalização, para originar o nucleósido 6-alcoxipurina (4).

Finalmente, a 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-p-D-arabino-furanosil)-9ff-purin-6-amina (5) pode ser obtida por reacção do nucleósido 6-alcoxipurina (4) e amoníaco.

Este passo do processo é efectuado tipicamente a temperaturas de cerca de 20°C a cerca de 120°C e mais tipicamente cerca de 70°C a cerca de 100°C; e tipicamente a pressões geradas num vaso fechado às temperaturas anteriores. Este passo do processo demora tipicamente cerca de 12 horas a cerca de 24 horas a terminar.

Este passo do processo pode ser efectuado na presença de um solvente alcoólico tal como o metanol ou etanol ou na ausência de um solvente. 0 amoníaco está presente tipicamente na forma de uma solução alcoólica tal como em metanol ou etanol (tipicamente saturada a 5°C). Numa concretização preferida, esta reacção ocorre numa bomba de aço inoxidável a 80°C (65 psi). Quando a reacção termina, o solvente pode ser removido e o resíduo dissolvido em metanol em refluxo, e preferencialmente filtrado a quente. No arrefecimento, o produto bruto 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-9H-purin-6-amina (5) pode ser isolado por filtração. 0 produto pode sofrer recristalização do metanol para originar 2-cloro-9-(2-desoxi-2-f luoro-p-D-arabinofuranosil)-9il-purin-6-amina (5) de elevada qualidade. Recristalizações posteriores dos filtrados evaporados do metanol são opcionais para obter mais 2-cloro-9- (2-desoxi-2-f luoro-p-D-arabinofuranosil) -9#-purin-6-amina (5) . A referência à Figura 2 ilustra um outro esquema de reacção em conformidade com o presente invento para a síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-p-D-arabino-furanosil)-9H-purin-6-amina (5).

No primeiro passo, faz-se reagir uma 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose (2) protegida e activada com a forma aniónica 10

ΕΡ 1 261 350 /PT de uma 2-cloro-purina substituída na posição 6 (1) para proporcionar um produto de reacção compreendendo um nucleósido de purina substituída em 9 (3). Exemplos de substituintes adequados na posição 6 incluem grupos tais como amina, grupos amina protegida, azida e alcoxi, sendo preferida a amina. Os grupos alcoxi adequados são o metoxi e o etoxi.

Os grupos protectores de amina adequados são acilo, imino e carbamatos. Os grupos acilo adequados são acetil-, benzoíl-, p-metoxibenzoíl, 2-metilbutril- e pivaloílo.

Um grupo imina adequado é dimetilaminometileno.

Os carbamatos adequados são os isobutil-, t-butil-, benzil-, p-metoxibenzil-carbamatos. A purina preferida é a forma aniónica de 2-cloro-6-aminopurina. Exemplos de formas aniónicas adequadas incluem sais de metal alcalino e sais de amina orgânica como os discutidos anteriormente na primeira concretização do presente invento. As formas aniónicas preferidas são o sal de sódio e os sais de amina tais como o DBU. A porção 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranosilo contém grupos protectores nos grupos hidroxilo nas posições 3 e 5 e um grupo activante na posição C-l.

Exemplos de grupos protectores adequados e de grupos activantes são os discutidos anteriormente para a primeira concretização em conformidade com o presente invento.

Um grupo protector preferido é o benzoílo e um grupo activante preferido é o brometo.

Um composto específico que pode ser utilizado como reagente açúcar (2) é o brometo de 2-desoxi-2-fluoro-3,5-di-O-benzoil-a-D-arabinofuranosilo. A purina e o derivado de hidrato de carbono activado são utilizados tipicamente em quantidades aproximadamente equivalentes ou com um excesso de purina e mais tipicamente 11

ΕΡ 1 261 350 /PT cerca de 1:1 a cerca de 3:1; de preferência cerca de 1:1 a cerca de 1,5:1 e com mais preferência cerca de 1:1 a cerca de 1,2:1 de purina para o derivado de hidrato de carbono activado.

Este passo do processo é efectuado tipicamente a temperaturas de cerca de 0o a cerca de 100°C, mais tipicamente cerca de 20°C a cerca de 70°C e de preferência cerca de 20°C a cerca de 40°C; e a pressões atmosféricas normais. No entanto, se desejado, podem ser utilizadas pressões mais elevadas ou mais baixas. Este passo do processo demora tipicamente cerca de 3 a cerca de 96 horas a terminar. A reacção do composto de purina (1) descrita anteriormente com o açúcar arabinofuranose (2) ocorre, de preferência, na presença de um solvente. Esse solvente pode ser um solvente dipolar, aprótico tal como a acetona, acetonitrilo, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, sulfolano, dimetilacetamida, e éteres tais como o tetra-hidrofurano, o dioxano e o dimetoxietano.

No final da reacção da purina (1) e o açúcar arabinofuranose (2), a mistura reaccional pode ser filtrada e o solvente pode ser evaporado até se obter uma espuma. A espuma pode ser purificada sobre sílica de flash usando acetato de isopropilo/hexano ou qualquer outra solução adequada como eluente. As fracções contendo o isómero 9-β desejado podem ser combinadas e evaporadas num resíduo que pode depois sofrer recristalização a partir do etanol para gerar o desejado nucleósido de purina substituída em 9 (3).

Quando o grupo na posição 6 for amina ou um grupo protector de amina, a desejada 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-D-arabinof uranosil)-5ií-purin-6-amina (5) pode ser obtida por reacção do nucleósido de purina (3) com uma base tal como amoníaco e/ou um alcóxido de metal alcalino tal como o metóxido de sódio, um carbonato de metal alcalino tal como o carbonato de sódio, e um hidróxido de metal alcalino tal como o hidróxido de lítio. Este passo do processo com esses grupos é efectuado tipicamente a temperaturas de cerca de -20°C a cerca de 80°C e mais tipicamente de cerca de 0°C a cerca de 50°C; e tipicamente a pressões geradas num recipiente fechado 12

ΕΡ 1 261 350 /PT às temperaturas anteriores. Este passo do processo demora tipicamente cerca de 1 hora a cerca de 24 horas a completar.

Quando o grupo na posição 6 for azida, a desejada 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-9H-purin-6-amina (5) pode ser obtida por reacção do nucleósido de purina (3A) com um agente redutor tal como um agente de hidrogenação para reduzir o grupo azida a um grupo amina e depois por reacção com uma base conforme foi anteriormente discutido (ver Figura 3). O passo de redução pode ser efectuado, por exemplo, por reacção com hidrogénio na presença de um catalisador de hidrogenação tal como a platina ou o paládio. Este passo do processo é efectuado tipicamente a temperaturas ambientes normais e a uma pressão de cerca de 1 atm a cerca de 3 atm. Para além disso, quando o grupo na posição 6 for azida, a ordem dos passos de reacção pode ser invertida. Em particular, a desejada 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-5íí-purin-6-amina (5) pode também ser obtida por reacção do nucleósido de purina (3) com uma base conforme foi anteriormente discutido e depois por reacção com um agente redutor para reduzir o grupo azida a um grupo amina.

Quando o grupo na posição 6 for alcoxi, a desejada 2-cloro-9- (2-desoxi-2-f luoro-p-D-arabinofuranosil) -3H-purin-6-amina (5) pode ser obtida por reacção do nucleósido de purina (3) com amoníaco.

Este passo do processo é efectuado tipicamente a temperaturas ambientes normais a cerca de 120°C e mais tipicamente cerca de 70°C a cerca de 100°C; e tipicamente a pressões geradas num vaso fechado às temperaturas anteriores. Este passo do processo demora tipicamente cerca de 12 horas a cerca de 24 horas a terminar.

Este passo do processo é preferencialmente efectuado na presença de um solvente alcoólico tal como o metanol ou etanol ou na ausência de um solvente.

As concretizações preferidas para converter (3) em (5) incluem a utilização de amoníaco ou metóxido de sódio. Nos exemplos, onde o grupo (R em (3) na Fig. 2) é amina, amina 13

ΕΡ 1 261 350 /PT protegida tal como acilamino, imino, e carbamato, uma concretização preferida é utilizar metóxido de sódio a cerca de 0°C até temperaturas ambientes normais. Em alternativa, pode ser utilizado amoniaco. 0 amoniaco, quando utilizado, encontra-se presente tipicamente na forma de uma solução alcoólica tal como em metanol ou etanol (tipicamente saturada a 5°C) . Numa concretização preferida, esta reacção ocorre numa bomba de aço inoxidável à temperatura ambiente. Quando a reacção termina, o solvente pode ser removido e o resíduo dissolvido em metanol em refluxo, e preferencialmente filtrado a quente. Sob arrefecimento, o produto bruto 2-cloro-9-(2-desoxi-2-f luoro^-D-arabinof uranosil)-9i7-purin-6-amina (5) pode ser isolado por filtração. 0 produto pode sofrer recristalização do metanol para originar 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-ϋ-arabinofuranosil)-9fí-purin-6-amina (5) de elevada qualidade. Recristalizações posteriores dos filtrados evaporados do metanol são opcionais para obter mais 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-9il-purin-6-amina (5). A pessoa entendida na matéria verá facilmente que podem ser efectuadas algumas modificações às concretizações preferidas do presente invento apresentadas anteriormente. Uma ilustração adicional do presente invento é apresentada nos exemplos que se seguem, que não devem ser entendidos como limitações de qualquer espécie ao invento. Os exemplos ilustram os passos individuais do processo do invento descrito anteriormente.

Exemplo 1 2,6-Dicloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-3,5-di-0-benzoil-p-D- arabinofuranosil)-9fí-purina (3) (Fig 1. R1= Cl)

Tratou-se uma suspensão de 2,6-dicloropurina (4,0 g, 21,2 mmol) em acetonitrilo anidro (130 ml) à temperatura ambiente com NaH (916 mg de 60% de um óleo lavado com heptano, 22,9 mmol), e agitou-se a mistura 15 minutos sob árgon. A esta suspensão agitada, adicionou-se gota a gota uma solução de brometo de 2-desoxi-2-fluoro-3,5-di-O-benzoil-a-D-arabinofuranosilo (C.H. Tann, et al., J. Org. Chem., 1985, 50, 3644-3647; 9 g, 21,3 mmol) em acetonitrilo (29 ml), e 14

ΕΡ 1 261 350 /PT agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante a noite. Removeu-se o material insolúvel por filtração e lavou-se com acetonitrilo e clorofórmio. Evaporaram-se o filtrado e as lavagens combinados até próximo de um vitreo. Aplicou-se uma solução de clorofórmio deste resíduo a uma coluna flash com sílica gel 60 (70-230 mesh, E. Merck). A eluição com clorofórmio proporcionou fracções puras gue se combinaram e cristalizaram de etanol em ebulição para originarem 1,6 g (14%) de produto puro (HPLC, 100% 9-β). Cristalizou-se o material de fracções menos puras de clorofórmio a 5°C, 6,3 g (56%) (HPLC, 97% 9-β, 3% 9-α). Após a confirmação da estrutura por 1H RMN, utilizou-se directamente este material no próximo passo.

Exemplo 2 2-Cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro^-D-arabinofuranosil)-6- metoxi-9H-purina (4)

Fez-se a suspensão de 2,6-dicloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-3,5-di-0-benzoil^-D-arabinofuranosil)-9fí-purina (3) (4,7 g, 8,85 mmol) preparado como no Exemplo 1 em metanol anidro (200 ml) à temperatura ambiente. A esta mistura adicionou-se numa porção uma solução a 25% em massa de metóxido de sódio em metanol (2,23 ml, 9,75 mmol). Depois de 1,5 horas de agitação, a reacção tornou-se uma solução límpida. Após 20 horas, neutralizou-se a reacção com uma resina de permuta de catiões forte (Dowex 50x4 [H+] ) que se recolheu após 15 minutos e lavou com metanol. Submeteu-se o filtrado combinado a evaporação e fez-se proporcionar uma goma que se triturou com duas porções de éter de petróleo a 30-60°C (decantado). Dissolveu-se o restante material em 2-propanol quente (30 ml) (filtrado até se tornar límpido), e deixou-se a solução sedimentar cristais à temperatura ambiente antes de se aquecer (5°C) durante a noite. Recolheu-se o produto, lavou-se com 2-propanol frio em gelo, e secou-se in vacuo para originar o composto do título, 1,7 g (60%), P.f. 199-200°C (HPLC, 98%). A cromatografia flash do filtrado evaporado (sílica gel 60, 70-230 mesh, E. Merck) com clorofórmio-metanol a 95:5 como solvente proporcionou material adicional, 0,55 g (20%), P.f. 196-197°C (HPLC, 96%). 15

ΕΡ 1 261 350 /PT

Exemplo 3 2-Cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-9H- purin-6-amina (5)

Colocou-se 2-Cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro^-D-arabino- furanosil)-6-metoxi-9H-purina (4) (6,2 g, 19,5 mmol) preparada como no Exemplo 2, numa bomba de pressão de aço inoxidável, com 300 ml de etanol saturado (0°C) com amoníaco anidro. Aqueceu-se o vaso fechado a 80°C durante 16 horas.

Adicionou-se mais amoníaco etanólico (30 ml) à reacção incompleta, e manteve-se o aquecimento durante 4 horas.

Evaporou-se a solução de reacção contendo vestígios de material inicial até uma espuma branca que cristalizou de metanol quente (75 ml), 5,1 g. Dissolveu-se este material relativamente puro em metanol em refluxo (110 ml), filtrou-se, deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente, e depois arrefeceu-se. Obteve-se o composto do título puro em duas colheitas, total 4,6 g (78%), P.f. 231°C (HPLC, 99%).

Exemplo 4 2-Cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-3,5-di-0-benzoil^-D-arabino- furanosil)-5i7-purin-6-amina (3) (Fig. 2, R= amina)

Tratou-se, gota a gota, uma suspensão de 2-cloroadenina (21 mg, 0,12 mmol) em acetonitrilo anidro (2,5 ml) à temperatura ambiente com 98% de DBU (18 μΐ, 0,12 mmol), e agitou-se a mistura 25 minutos sob árgon. A esta suspensão agitada, adicionou-se gota a gota uma solução de brometo de 2-desoxi-2-fluoro-3,5-di-O-benzoil-a-D-arabinofuranosilo (2) (48 mg, 0,1 mmol) em acetonitrilo (0,8 ml). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente até se ter consumido o brometo de 2-desoxi-2-fluoro-3,5-di-O-benzoil-a-D-arabino-furanosilo (2). Após 96 horas, removeu-se o material insolúvel por filtração e lavou-se com CHCI3. Evaporaram-se os filtrados combinados até um resíduo que se dissolveu em CHC13. Aplicou-se esta solução a uma placa de sílica gel de camada preparativa (Analtech, 10x20 cm, 1000 mícron) que se revelou duas vezes em 97:3 de CHCls/MeOH. Extrataram-se as bandas de produto com 1:1 de CHCl3/MeOH, e evaporaram-se os extractos para originar sólidos brancos, 16 mg (28%) (HPLC, 100% 9-β) e 20 mg (34%) (HPLC, 97% 9-a). 16

ΕΡ 1 261 350 /PT A descrição e os exemplos anteriores do presente invento não se destinam a limitar, e reconhece-se que alguém perito na arte distinguirá facilmente variações desta descrição, que se pretendem incluídas no âmbito do invento.

Lisboa,

Claims

ΕΡ 1 261 350 /PT 1/5 REIVINDICAÇÕES 1. Processo para síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-D-arabinofuranosil)-5H-purin-6-amina, que compreende: a) fazer reagir a forma aniónica de uma 2-cloro-purina substituída na posição 6 com uma 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose protegida e activada; b) fazer reagir o produto de a) com um alcóxido para proporcionar o nucleósido 2-cloro-6-alcoxi-purina; e c) fazer reagir o nucleósido 2-cloro-6-alcoxi-purina com amoníaco para proporcionar 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-D-arabinofuranosil) -9ff-purin-6-amina; onde a referida 2-cloro-purina substituída na posição 6 está substituída na posição 6 com um grupo halogéneo, amino ou amino protegido.
2. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde o grupo substituído na posição 6 da 2-cloro-purina substituída na posição 6 é um halogéneo.
3. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde o grupo substituído na posição 6 da 2-cloro-purina substituída na posição 6 é cloro.
4. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde a forma aniónica é um sal de metal alcalino ou um sal de amina orgânica.
5. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde a forma aniónica é um sal de metal alcalino.
6. Processo de acordo com a reivindicação 5, onde o metal alcalino é sódio.
7. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde o grupo protector nos hidroxilos nas posições 3 e 5 da 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose é seleccionado do grupo que consiste num grupo acilo, grupo éter e combinações destes, e onde o grupo activante no C-l da 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose é seleccionado do grupo que consiste em grupos halogeneto, ΕΡ 1 261 350 /PT 2/5 alquilsulfoniloxi, e arilsulfonilo.
8. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde a 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose é brometo de 2-desoxi-2-fluoro-3,5-di-O-benzoil-a-D-arabinofuranosilo.
9. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde a reacção de 2-cloro-purina, substituída na posição 6, com a 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose ocorre na presença de um solvente dipolar aprótico.
10. Processo de acordo com a reivindicação 9, onde o solvente é seleccionado do grupo que consiste em acetona, acetonitrilo, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, sulfolano, dimetilacetamida e um éter.
11. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde o alcóxido é um alcóxido de metal alcalino.
12. Processo de acordo com a reivindicação 11, onde o alcóxido é metóxido.
13. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde o alcóxido é metóxido de sódio.
14. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde o passo de reacção (b) ocorre na presença de um solvente.
15. Processo de acordo com a reivindicação 14, onde o solvente é um álcool que corresponde ao alcóxido do passo (b).
16. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde o passo de reacção (c) ocorre na presença de um solvente.
17. Processo de acordo com a reivindicação 16, onde o solvente é um álcool.
18. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde o amoníaco está presente na forma de uma solução alcoólica.
19. Processo de acordo com a reivindicação 18, onde a solução alcoólica é metanol ou etanol. ΕΡ 1 261 350 /PT 3/5
20. Processo para síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-D-arabinof uranosil)-3#-purin-6-ainina, que compreende: a) fazer reagir a forma aniónica de uma 2-cloro-purina substituída na posição 6 com uma 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose protegida e activada; onde o grupo substituído na posição 6 na 2-cloro-purina substituída na posição 6 é seleccionado do grupo que consiste em amino, amino protegido e alcoxi; e depois b) fazer a reacção com amoníaco para proporcionar a 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro^-D-arabinofuranosil)-9H-purin-6-amina.
21. Processo de acordo com a reivindicação 20, onde o grupo substituído na posição 6 na 2-cloro-purina substituída na posição 6, é seleccionado do grupo que consiste em amino e amino protegido.
22. Processo de acordo com a reivindicação 20, onde o grupo substituído na posição 6 na 2-cloro-purina substituída na posição 6 é amino.
23. Processo de acordo com a reivindicação 20, onde o grupo substituído na posição 6 na 2-cloro-purina substituída na posição 6 é alcoxi
• 24. Processo de acordo com a reivindicação 23, onde o alcoxi é metoxi ou etoxi.
25. Processo de acordo com a reivindicação 20, onde a forma aniónica é um sal de metal alcalino ou um sal de amina orgânica.
26. Processo de acordo com a reivindicação 20, onde a forma aniónica é um sal de metal alcalino.
27. Processo de acordo com a reivindicação 26, onde o metal alcalino é sódio.
28. Processo de acordo com a reivindicação 20, onde a forma aniónica é um sal de amina orgânica. ΕΡ 1 261 350 /PT 4/5
29. Processo de acordo com a reivindicação 28, onde o sal de amina orgânica é DBU.
30. Processo de acordo com a reivindicação 20, onde o grupo protector nos hidroxilos nas posições 3 e 5 da 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose é seleccionado do grupo que consiste num grupo acilo, num grupo éter e combinações destes, e onde o grupo activante no C-l da 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose é seleccionado do grupo que consiste em grupos halogeneto, alquilsulfoniloxi e arilsulfonilo.
31. Processo de acordo com a reivindicação 20, onde a 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose é brometo de 2-desoxi-2-f luoro-3,5-di-O-benzoil-cx-D-arabinofuranosilo .
32. Processo de acordo com a reivindicação 20, onde a reacção da 2-cloro-purina substituída na posição 6 com a 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose ocorre na presença de um solvente dipolar aprótico.
33. Processo de acordo com a reivindicação 32, onde o solvente é seleccionado do grupo que consiste em acetona, acetonitrilo, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, sulfolano, dimetilacetamida e um éter.
34. Processo de acordo com a reivindicação 20, onde o passo (b) ocorre na presença de um solvente.
35. Processo de acordo com a reivindicação 34, onde o solvente é um álcool.
36. Processo de acordo com a reivindicação 20, onde o amoníaco está presente na forma de uma solução alcoólica.
37. Processo de acordo com a reivindicação 36, onde a solução alcoólica é em metanol ou em etanol.
38. Processo para síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-D-arabinofuranosil)-9H-purin-6-amina, que compreende: a) fazer reagir a forma aniónica de uma 2-cloro-purina, substituída na posição 6, com uma 2-desoxi-2-fluoro-D- ΕΡ 1 261 350 /PT 5/5 arabinofuranose protegida e activada; onde o grupo substituído é amino ou um amino protegido; e depois b) fazer a reacção com uma base para proporcionar a 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-D-arabinofuranosil) -9H-purin-6-amina.
39. Processo de acordo com a reivindicação 38, onde a base é um alcóxido de metal alcalino.
40. Processo para síntese de 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-D-arabinofuranosil)-9fí-purin-6-amina, que compreende: a) a reacção da forma aniónica de 2-cloro-6-azido-purina com uma 2-desoxi-2-fluoro-D-arabinofuranose protegida e activada; b) a reacção com um agente redutor; e c) a reacção com uma base para proporcionar a 2-cloro-9-(2-desoxi-2-fluorο-β-D-arabinofuranosil)-9H-purin-6-amina.
41. Processo de acordo com a reivindicação 40, onde a base é amoníaco.
42. Processo de acordo com a reivindicação 40, onde a base é um alcóxido de metal alcalino.
43. Composto 2-cloro-6-alcoxi-9-(2-desoxi-2-fluoro-3,5-diprotegido-β-D-arabinofuranosil)-9H-purina.
44. Composto 2-cloro-6-azido-9-(2-desoxi-2-fluoro-3,5-diprotegido-β-D-arabinofuranosil)-9H-purina. Lisboa,