PL225348B1 - Pochodne 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie - Google Patents
Pochodne 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanieInfo
- Publication number
- PL225348B1 PL225348B1 PL407152A PL40715214A PL225348B1 PL 225348 B1 PL225348 B1 PL 225348B1 PL 407152 A PL407152 A PL 407152A PL 40715214 A PL40715214 A PL 40715214A PL 225348 B1 PL225348 B1 PL 225348B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- fluoro
- triazol
- aza
- bicyclo
- dione
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/06—Pyrimidine radicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
- A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
- A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
- A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
- A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D453/00—Heterocyclic compounds containing quinuclidine or iso-quinuclidine ring systems, e.g. quinine alkaloids
- C07D453/02—Heterocyclic compounds containing quinuclidine or iso-quinuclidine ring systems, e.g. quinine alkaloids containing not further condensed quinuclidine ring systems
- C07D453/04—Heterocyclic compounds containing quinuclidine or iso-quinuclidine ring systems, e.g. quinine alkaloids containing not further condensed quinuclidine ring systems having a quinolyl-4, a substituted quinolyl-4 or a alkylenedioxy-quinolyl-4 radical linked through only one carbon atom, attached in position 2, e.g. quinine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/06—Pyrimidine radicals
- C07H19/073—Pyrimidine radicals with 2-deoxyribosyl as the saccharide radical
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są nowe pochodne 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny oraz sposób ich wytwarzania a także zastosowanie jako środków cytotoksycznych.
Choroby nowotworowe stanowią jeden z głównych problemów zdrowotnych ludzi, charakteryzując się najwyższym współczynnikiem umieralności oraz postępującą liczbą zachorowań, związaną głównie ze wzrostem długości oraz stylem życia. Terapia chorób nowotworowych jest trudna, kos ztowna i w wielu przypadkach mało efektywna. Z tego powodu pilnie poszukiwane są nowe substancje o działaniu cytostatycznym. Ich źródłem mogą być produkty naturalne i ich pochodne oraz związki syntetyczne.
Bardzo ważną grupą syntetycznych cytostatyków są pochodne oraz analogi zasad purynowych czy pirymidynowych oraz modyfikowane nukleozydy. Do nich należą m.in. 5-fluorouracyl oraz jego proleki np. 5-fluoro-2'-deoksyurydyna (floksurydyna). Zarówno 5-fluorouracyl jak i 5-fluoro-2'-deoksyurydyna wykazują zbliżoną aktywność cytostatyczną i są od wielu lat zarówno samodzielnie jak i w kombinacjach ze sobą lub innymi lekami stosowane w terapii nowotworów m.in. piersi, żołądka, jelita grubego, jajników i innych. 5-fluoro-2'-deoksyurydyna jest także dzięki lepszemu niż 5-fluorouracyl metabolizmowi wątrobowemu stosowana w terapii raka wątroby. Problemy terapii z wykorzystaniem 5-fluorouracylu oraz 5-fluoro-2'-deoksyurydyny związane są z pojawiającą się opornością komórek rakowych wobec tych leków w wyniku ich długotrwałego stosowania. Poważnym ograniczeniem jest stosunkowo wysoka toksyczność 5-fluorouracylu skutkująca m.in. działaniem neurotoksycznym oraz kardiotoksycznym. Ponadto brak selektywności tych związków w stosunku do komórek rakowych i zdrowych stanowi istotne utrudnienie w stosowaniu tych związków w terapii. Jes zcze innym problemem jest niewielka biodostępność 5-fluoro-2'-deksyurydyny związana z jej silnie ujemnym współczynnikiem podziału (logP = -1.72) sprawiająca, że lek ten jako zbyt polarny nie przechodzi przez lipidowe membrany komórki i jest podawany w formie infuzji dożylnej.
Problemy te próbowano rozwiązać poprzez modyfikacje 5-fluoro-2'-deoksyurydyny np. poprzez zmianę podstawnika w pozycji 3'. Okazało się, że grupa aminowa oraz fluor, chlor, brom i jod obniżają aktywność cytostatyczną. Z kolei pochodna z grupą azydową 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyna (AddFU) wykazuje słabe działanie (IC50 34 pg/mL) (Colla L., Herdewijn P., De Clercq E., Balzarini J., Vanderhaeghe H, Eur. J. Med. Chem. 1985, 20, 295) przeciw nowotworom L1210 u myszy wywoływanym przez retrowirusy MLVs oraz mięsaka 180 in vitro (Lin T.-S., Gao Y.-S., Mancini W. R., J. Med. Chem. 1983, 26, 1691.
Celem wynalazku było opracowanie nowych związków cytotoksycznych pochodnych 5-fluoro-2'-deoksyurydyny o aktywności większej lub porównywalnej ze znaną i stosowaną 5-fluoro-2'-deoksyurydyną oraz 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyną (AddFU).
Przedmiotem wynalazku są pochodne 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny o ogólnym wzorze 1.
gdzie:
- R1 oznacza fragment alkaloidu chinowca pochodzenia naturalnego z kory bądź innych części gatunku Cinchona lub syntetycznego o ogólnych wzorach 2 lub 3 i o zdefiniowanej konfiguracji absoPL 225 348 B1 lutnej na atomach C-8 i C-9 obejmującej wszystkie cztery możliwe formy diastereoizomeryczne tj.
(8R,9S) lub (8S,9R) lub (8R,9R) lub (8S,9S). Do oznaczenia konfiguracji przyjęto zwyczajową numerację stosowaną w chemii alkaloidów chinowca.
w których:
- R2 oznacza grupę hydroksylową, H lub grupę alkoksylową zawierającą od 1 do 12 atomów C w łańcuchu prostym lub rozgałęzionym lub podstawnik cykloalkilowy zawierający od 3 do 10 atomów C, korzystnie grupę metoksylową.
- R3 oznacza grupą winylową, etylową lub acetylenową.
W drugim aspekcie przedmiotem wynalazku są sole pochodnych 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny:
• monosole o wzorze ogólnym 4 oraz 5 • disole o wzorze ogólnym 6, w których dikationem jest podwójnie sprotonowany fragment alkaloidu chinowca.
PL 225 348 B1 gdzie:
- A- oznacza Cl-, Br-, I-, NO3, HCOO-, CH3COO-, CH3SO3·, CH3C6H4SO3-, CH3CH(OH)COC>·,
HOOC(CHOH)2COC>·, HOOC(CH2)2COO-, c,s-C4H3O4-, irans-C4H3O4 -,
HOCH2(CHOH)4COO-, HeHgOe-, CeHyOy-
- B2 oznacza SO42-, HPO42-, -OOC(CH2)2COO-, -OOC(CHOH)2COO-, C(S-C4H2O42-, trans- C4H2O42-,
- C- oznacza Cl-, Br-, I-, NO3-, CH3SO3 -,
R1 oznacza monokation fragmentu alkaloidu chinowca pochodzenia naturalnego z kory bądź innych części gatunku Cinchona lub syntetycznego o ogólnych wzorach 7 lub 8 i o zdefiniowanej konfiguracji absolutnej na atomach C-8 i C-9 obejmującej wszystkie cztery możliwe formy diastereoizomeryczne tj. (8R,9S) lub (8S,9R) lub (8R,9R) lub (8S,9S). Do oznaczenia konfiguracji przyjęto zwyczajową numerację stosowaną w chemii alkaloidów chinowca.
w których:
- R2 oznacza grupę hydroksylową, H lub grupę alkoksylową zawierającą od 1 do 12 atomów C w łańcuchu prostym lub rozgałęzionym lub podstawnik cykloalkilowy zawierający od 3 do 10 atomów C, korzystnie grupę metoksylową.
- R3 oznacza grupą winylową, etylową lub acetylenową
- R4 oznacza podwójnie spontonowany dikation fragmentu alkaloidu chinowca pochodzenia naturalnego z kory bądź innych części gatunku Cinchona lub syntetycznego o ogólnych wzorach 9 lub 10 i o zdefiniowanej konfiguracji absolutnej na atomach C-8 i C-9 obejmującej wszystkie cztery możliwe formy diastereoizomeryczne tj. (8R,9S) lub (8S,R9) lub (8R,9R) lub (8S,9S). Do oznaczenia konfiguracji przyjęto zwyczajową numerację stosowaną w chemii alkaloidów chinowca, Dikation R4 powstaje w wyniku działania silnego kwasu monoprotonowego w ilości większej od jednego równoważnika względem związku wyjściowego o wzorze ogólnym 1.
(10)
PL 225 348 B1 w których:
- R2 i R3 mają podane wyżej znaczenie.
W trzecim aspekcie przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania pochodnych 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny o ogólnym wzorze 1 gdzie R1f R2 i R3 mają wyżej podane znaczenie polegający na katalizowanej miedzią(I) 1,3-dipolarnej cykloaddycji Huisgena 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny (AddFU) o ogólnym wzorze 11
oraz odpowiedniej pochodnej alkinowej alkaloidu chinowca o ogólnym wzorze 12 lub 13,
w których R2 i R3 mają wyżej podane znaczenie.
W tabeli 1 podano przykłady związków według wynalazku oraz odpowiednie pochodne alkinowe alkaloidów chinowca, o wzorach 12 lub 13, stosowane w syntezie danego związku.
Reakcję prowadzi się przy dowolnej proporcji azydku i pochodnej alkinowej alkaloidu, jednak ze względu na wydajność syntezy korzystny jest równomolowy stosunek reagentów. Środowiskiem rea kcji są mieszaniny wodno-organiczne o zawartości wody od 1% do 99% oraz mieszającego się z wodą rozpuszczalnika organicznego z grupy alkoholi alifatycznych, ketonów alifatycznych, cyklicznych eterów lub nitryli alifatycznych. Korzystnie stosuje się metanol, etanol, te/i-butanol, dioksan, aceton lub acetonitryl a najkorzystniej reakcję prowadzi się w mieszaninie dioksan-woda lub metanol-woda o stosunku objętościowym 1:1. Reakcja przebiega w szerokim zakresie temperatur od 0°C do 90°C, ze względów praktycznych korzystne jest prowadzenie reakcji w temperaturze pokojowej.
Reakcję katalizuje się jonami Cu(I), które mogą być wprowadzone bezpośrednio jako sole miedzi(I), najkorzystniej w postaci jodku miedzi(I) lub generowane bezpośrednio w środowisku reakcji. Korzystniej, katalizujące reakcję jony Cu(I) wytwarza się in-situ w mieszaninie reakcyjnej poprzez redukcję jonów Cu(II) pochodzących z dowolnej rozpuszczalnej soli miedzi(II), korzystnie pentahydratu siarczanu miedzi(II) oraz reduktora nieorganicznego w szczególności rozpuszczalnych w wodzie siarczynów, metalicznej miedzi, lub reduktora organicznego, w szczególności hydroksyloaminy, hydrochinonu a najkorzystniej askorbinianu sodu. W wariancie z użyciem jako katalizatora soli miedzi(I) stosuje się go w ilości od 0,01 do 1,0 równoważnika jonów Cu(I) w stosunku do 3’-azydo-2’,3’ -dideoksy-5-fluorourydyny. W wariancie z generowaniem jonów miedzi(I) stosuje się sól miedzi(II) w ilości od 0,01 do 1,0 równoważnika jonów Cu(II) w stosunku do 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny, korzystnie 0,75 równoważnika siarczanu miedzi(II) oraz od 0,01 do 1,0 równoważnika reduktora, korzystnie organicznego, w stosunku do 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny, najkorzystniej askorbinianu sodu w ilości 0,75 równoważnika. W wariancie syntezy z generowaniem jonów Cu(I) in situ najkorzystniej jest stosować taką samą bądź większą ilość askorbinianu sodu w stosunku
PL 225 348 B1 do soli miedzi(II) ze względu na nietrwałość jonów miedzi(I) i ich utlenianie się, pod wpływem tlenu do katalitycznie nieaktywnych soli miedzi(II).
Otrzymany produkt izoluje się z mieszaniny poreakcyjnej poprzez usunięcie z mieszaniny rozpuszczalników i oczyszcza za pomocą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym, korzystnie stosując jak fazę ruchomą chloroform a następnie mieszaninę chloroform-metanol zawierającą od 1% do 50% objętościowych metanolu, najkorzystniej 20%.
Monosole pochodnych 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny o ogólnym wzorze 4 otrzymuje się w reakcji związku o wzorze ogólnym 1 z nie więcej niż równomolową ilością odpowiedniego kwasu nieorganicznego lub organicznego.
Monosole o wzorze ogólnym 5 otrzymuje się w reakcji związku o wzorze ogólnym 1 z nie 140 więcej niż połową równoważnika odpowiedniego dwuprotonowego kwasu nieorganicznego lub organicznego.
Disole o wzorze ogólnym 6 otrzymuje się w reakcji jednego równoważnika związku o wzorze ogólnym 1 z więcej niż jednym równoważnikiem odpowiedniego kwasu monoprotonowego, korzystnie stosuje się dwa równoważniki kwasu. W przypadku gdy stosuje się od jednego do dwóch równoważników kwasu otrzymuje się mieszaninę mono-i disoli.
Reakcje otrzymywania soli o wzorach ogólnych 4, 5 lub 6 prowadzi się w polarnych rozpuszczalnikach takich jak: alkohole alifatyczne zawierające od 1 do 3 atomów węgla w łańcuchu, DMF, DMSO, acetonitryl lub mieszaniny tych rozpuszczalników z wodą w ilości od 1 do 90% (v/v) korzystnie w ilości 50% wody lecz najkorzystniej w metanolu lub etanolu.
Otrzymane sole izoluje się poprzez usunięcie rozpuszczalnika na wyparce próżniowej lub powolną krystalizację.
PL 225 348 B1
Tabela 1
PL 225 348 B1
PL 225 348 B1
PL 225 348 B1
W czwartym aspekcie przedmiotem wynalazku jest zastosowanie pochodnych 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny o ogólnym wzorze 1 oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli według wynalazku w terapii przeciwnowotworowej raka piersi, raka szyjki macicy oraz raka wątroby. Badania przeprowadzone in vitro wobec linii komórek nowotworowych raka piersi, raka szyjki macicy oraz raka wątroby potwierdziły działanie cytotoksyczne przewyższające swą aktywnością wyjściową 2'-deoksy-5-fluorourydynę (5FdU) oraz 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydynę (AddFU), stosowanych w tych samych warunkach.
Badania aktywności cytotoksycznej przeprowadzono na liniach komórek nowotworowych: MCF-7 (rak piersi), HeLa (rak szyjki macicy) oraz Hep-G2 (rak wątroby) pochodzących z kolekcji ECACC - European Collection of Cell Cultures.
Testy cytotoksyczności prowadzono za pomocą standardowego oznaczenia z wykorzystaniem sulforodaminy B. Polegały na 72 godzinnej inkubacji linii komórek nowotworowych znajdujących się w fazie wzrostu logarytmicznego z badanym związkiem a następnie oznaczeniu stopnia zahamowania wzrostu komórek z wykorzystaniem adsorpcji barwnika-sulforodaminy B wiążącego się z białkami komórkowymi za pomocą pomiaru spektrofotometrycznego. Oznaczenia prowadzono według procedury opisanej w pracy: Vichai, V., Kirtikara, K. Nature Protocols, 2006, 1, 1112.
Oznaczanie cytotoksyczności
Przygotowanie komórek do doświadczenia:
Komórki badanej linii komórkowej w fazie logarytmicznego wzrostu wysiewa się na 24-studzienkowe płytki w ilości 20 tys. komórek/2 mL pożywki na studzienkę, a następnie inkubuje w cieplarce w temperaturze 37°C, w atmosferze 5% CO2 przez 24 godziny.
Przygotowanie roztworów badanego związku:
Roztwory badanych związków przygotowuje się w DMSO w zakresie stężeń: 0,05; 0,1; 0,5; 1; 5; 10; 50; 100; 500 pM.
W komorze laminarnej, zapewniającej sterylne warunki pracy, komórki testowanych linii traktuje się roztworami badanego związku w ten sposób, że: trzy pierwsze studzienki stanowią kontrolę zawierają tylko 20 pL DMSO, do następnych studzienek dodaje się kolejne roztwory badanego związku (20 pL) począwszy od najniższego stężenia (trzy studzienki na każde stężenie). Następnie płytkę umieszcza się w inkubatorze na 72 godziny.
Po zakończonej inkubacji przyklejone komórki utrwala się przez dodatek 500 pL zimnego (4°C) 50% kwasu trichloroctowego (TCA) i inkubuje w 4°C przez 1 godzinę. Następnie każdą studzienkę płucze się sterylną wodą i suszy. Tę operację powtarza się pięciokrotnie. Utrwalone komórki wybarwia się przez 30 minut poprzez dodatek 500 pL 0,4% roztworu barwnika (sulforodaniny B) rozpuszczonego w 1% kwasie octowym. Niezwiązany barwnik usuwa się zlewając go z płytki a komórki płucze się 4 razy 1% kwasem octowym. Następnie płytkę suszy się na powietrzu przez ok. 5 minut. Związany barwnik rozpuszcza się poprzez dodanie do każdej studzienki 1500 pL 10 mM buforu Tris-base (trishydroksymetyloaminometan) i miesza się przy użyciu wytrząsarki orbitalnej przez 5 minut. Następnie przenosi się po 200 pL roztworu z każdej studzienki do dwóch studzienek na nowej płytce 96-studzienkowej oraz oznacza się absorpcję roztworów spektrofotometrycznie przy długości fali 490-530 nm za pomocą czytnika płytek % zahamowania wzrostu komórek wobec badanego związku oblicza się przyjmując absorpcję roztworu kontrolnego za 100%.
Testy cytotoksyczności dla pozostałych związków i linii komórkowych zostały wykonane w identyczny sposób.
W zależności od rodzaju linii komórkowej stosowano następujące media hodowlane:
• linia MCF-7 była namnażana w medium Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME) firmy Sigma (nr kat. D5796) • linie HeLa i Hep-G2 były namnażane w medium RPMI-1640 firmy Sigma (nr kat. R8758).
Dla wszystkich badanych pochodnych wyznaczono wskaźnik IC50, który oznacza stężenie związku potrzebne do zahamowania wzrostu komórek o 50%. Pochodne wykazujące IC50 < 4 pg/mL są powszechnie uznawane za aktywne (w skrócie: A, ang. active), pochodne mieszczące się w przedziale = IC50 4-30 pg/mL za związki o średniej aktywności (w skrócie: MA, ang. medium active), natomiast pochodne, dla których IC50 >30 pg/mL za związki nieaktywne (w skrócie: NA, ang. non-active).
Dla porównania analogiczne badania przeprowadzono z użyciem znanych środków cytotoksycznych a mianowicie 5-fluoro-2'-deoksyurydyny i 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny.
Wyniki badań aktywności cytotoksycznej związków o wzorze ogólnym 1 przedstawione są w tabeli 2. Podane wartości uśredniono z trzech niezależnych oznaczeń.
PL 225 348 B1
T a b e l a 2
| Pochodna | Aktywność cytotoksyczna IC50 | Obliczony współczynnik podziału logP | |||||
| Linia MCF-7 (rak piersi) | HeLa (rak szyjki macicy) | Hep-G2 (rak wątroby) | |||||
| [gg/mL] | [pM] | [gg/mL] | [gM] | [gg/mL] | [gM] | ||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| QN5FdU | 0,16 (A) | 0,27 | 0,16 (A) | 0,27 | 3,8 (A) | 6,40 | 0,40 |
| QD5FdU | 0,98 (A) | 1,65 | 1,6 (A) | 2,70 | - | 0,40 | |
| QD5FdU dichlorowodorek | 7,00 (MA) | 10,50 | 8,50 (MA) | 12,75 | - | - | -0,42 |
| CD5FdU | 6,9 (MA) | 12,24 | 7,0 (MA) | 12,42 | - | 0,36 | |
| CN5FdU | 7,0 (MA) | 12,42 | 7,9 (MA) | 14,01 | - | 0,36 | |
| PQN5FdU | 1,5 (A) | 2,37 | 2,0 (A) | 3,16 | 6,2 (MA) | 9,78 | 2,16 |
| PQD5FdU | 2,9 (A) | 4,58 | 2,8 (A) | 4,42 | 6,0 (MA) | 9,47 | 2,16 |
| PQD5FdU dichlorowodorek | 4,9 (MA) | 6,93 | 4,00 (MA) | 5,66 | - | 0,35 | |
| PCD5FdU | 13,0 (MA) | 21,54 | 21,4 (MA) | 35,45 | - | 2,13 | |
| PCD5FdU | 27,2 (MA) | 45,06 | 27,6 (MA) | 45,72 | - | 2,13 | |
| 5-fluoro-2'- -deoksyurydyna | 11,4 (MA) | 46,31 | 13,0 (MA) | 52,80 | -1,72 | ||
| 3’-azydo-2’3’- -dideoksy-5- -fluorourydyna | 2,20 (A) | 8,11 | 3,0 (A) | 11,06 | 16,0 (MA) | 58,99 | -0,38 |
Cytotoksyczność wszystkich związków będących przedmiotem zgłoszenia mieści się w zakresie wysokiej lub średniej aktywności. Dla czterech na osiem związków ich aktywność jest wyższa od st osowanych związków przeciwrakowych np. 5-fluoro-2’-deoksyurydyny lub 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny.
Przedmiotem wynalazku jest w szczególności zastosowanie 5-fluoro-1-[4-(4-{6-[hydroksy(6-metoksychinolin-4-yl)-metyl]-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-yl]}-[1,2,3]triazol-1-yl)-5-hydroksymetyltetrahydrofuran-2-yl]-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji części alkaloidowej (8R,9S) (QN5FdU), 5-fluoro1-[4-(4-{6-[hydroksy-(6-metoksychinolin-4-yl)-metyl]-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-yl}-[1,2,3]triazol-1-yl)-5-hydroksymetyltetrahydrofuran-2-yl]-1H-pirymidyno 2,4-dionu o konfiguracji części alkaloidowej (8R,9S) (QD5FdU), 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo
[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji części alkaloidowej (8S,9R) (PQN5FdU) oraz 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji części alkaloidowej (8R,9S) (PQD5FdU) oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli do sporządzania leków stosowanych w chemioterapii raka piersi.
Badania potwierdziły, że najaktywniejszym, wobec komórek raka piersi (linii HeLa), związkiem jest QN5FdU (IC50 = 0,16 gg/mL), który jest ponad 70 razy aktywniejszy niż 5FdU oraz ponad 13 razy aktywniejszy niż AddFU. Bardzo aktywne są także związki QD5FdU oraz PQN5FdU, których wartość IC50 zawiera się w zakresie 0,98-1,5 gg/Ml - także przekraczające aktywność 5FdU oraz AddFU. Z kolei PQD5FdU wykazuje średnią aktywność, około cztery razy wyższą niż 5FdU i porównywalną z AddFU. Pozostałe związki wymienione w Tabeli 2 mimo, że wykazują najniższą aktywność spośród całej serii, mieszczą się w zakresie średniej aktywności.
PL 225 348 B1
W kolejnym aspekcie przedmiotem wynalazku jest w szczególności zastosowanie 5-fluoro-1-[4-(4-{6-[hydroksy-(6-metoksychinolin-4-yl)-metyl]-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-yl}-[1,2,3]triazol-1-yl)-5-hydroksymetyl-tetrahydro-furan-2-yl]-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji części alkaloidowej (8S,9R) (QN5FdU), 5-fluoro-1-[4-(4-{6-[hydroksy-(6-metoksychinolin-4-yl)-metyl]-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-yl-[1,2,3]triazol-1-yl)-5-hydroksymetyltetrahydro-furan-2-yl]-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji części alkaloidowej (8R,9S) (QD5FdU), 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2.]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji części alkaloidowej (8S,9R) (PQN5FdU) oraz 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3] triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji części alkaloidowej (8R,9S) (PQD5FdU) oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli do sporządzania leków stosowanych w chemioterapii raka szyjki macicy.
Badania potwierdziły, że najaktywniejszym, wobec komórek raka szyjki macicy (linii HeLa), związkiem jest QN5FdU, (IC50 = 0,16 pg/mL) który jest ponad 80 razy aktywniejszy niż 5FdU oraz ponad 18 razy aktywniejszy niż AddFU. Bardzo aktywne są związki QD5FdU, PQN5FdU oraz PQN5FdU, których wartości IC50 zawierają się w zakresie 1,6-2,8 pg/mL - ponad czterokrotnie przekraczając aktywność 5FdU oraz o nieco lepszej niż AddFU aktywności. Z kolei związki CD5FdU oraz CN5FdU są średnio aktywne, jednak aktywniejsze niż 5FdU. Związki PCD5FdU i PCN5FdU mimo, że wykazują najniższą aktywność spośród całej serii, mieszczą się w zakresie średniej aktywności.
W kolejnym aspekcie przedmiotem wynalazku jest w szczególności zastosowanie 5-fluoro-1-[4-(4-{6-[hydroksy-(6-metoksychinolin-4-yl)-metyl]-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-yl}-[1,2,3]triazol-1-yl)-5-hydroksymetyl-tetrahydro-furan-2-yl]-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji części alkaloidowej (8S,9R) (QN5FdU), 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]-okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji części alkaloidowej (8S,9R) (PQN5FdU) oraz 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji części alkaloidowej (8R,9S) (PQD5FdU) oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli do sporządzania leków stosowanych w chemioterapii raka wątroby. Badania potwierdziły, że najaktywniejszym, wobec komórek rak wątroby (linia Hep-G2), związkiem jest QN5FdU (IC50 = 3,8 pg/mL) który jest 4 razy aktywniejszy niż AddFU. Wysoką aktywność posiadają także zawiązki PQN5FdU i PQD5FdU, które są ponad dwukrotnie aktywniejsze niż AddFU.
Aktywność cytotoksyczna związków według wynalazku zależy od konfiguracji absolutnej części alkaloidowej, ponieważ najbardziej aktywne są związki o konfiguracji chininy tj. (8S,9R).
Innym istotnym wskaźnikiem, który określa zdolność leku do przechodzenia przez lipidowe bł ony biologiczne a tym samym jego warunkuje jego transport i dystrybucję jest współczynnik podziału logP. Ujemna wartość tego współczynnika wskazuje, że lek jest zbyt polarny, rozpuszczalny w wodzie i bez zdolności do penetracji błon biologicznych co skutkuje słabą biodostępnością i transportem. Pożądana wartość współczynnika podziału logP dla większości leków mieści się w przedziale od 2 do 4, na przykład wartości średnie logP wyznaczone dla dużych zbiorów leków i produktów naturalnych zawierają się w przedziale 2,2-2,4 (K. Grabowski, G. Schneider, Curr. Chem. Biol., 2007, 1, 115-127; G. Vistoli, A. Pedretti, B.Testa, Drug Discov.Today 2008,13, 285).
5-Fluoro-2'-deoksyurydyna oraz 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyna charakteryzują się niekorzystną, ujemną wartością logP wynoszącego odpowiednio: -1,72 i 0,38.
Obliczenia współczynnika podziału logP związków o ogólnym wzorze 1 (Tabela 2) przeprowadzono za pomocą ogólnie stosowanych algorytmów obliczeniowych korzystając z programu Dragon (A. Mauri, V. Consonni, M. Pavan, R. Todeschini, MATCH Commun. Math. Comput. Chem. 2006, 56, 237-248).
Uzyskane dane (tabela 2 kol. 8) dowodzą, że obecność dużej części alkaloidowej w cząsteczce związków o ogólnym wzorze 1 skutkuje znacznym podwyższeniem ich współczynnika podziału (logP) wobec wyjściowych 5-fluoro-2'-deoksyurydyny oraz 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny. Konsekwencją jest łatwiejsza penetracja błon biologicznych co wpływa na poprawę transportu i dystrybucji. W szczególności korzystny współczynnik podziału charakteryzuje związki PQN5FdU oraz PQD5FdU, który przyjmuje wartość logP = 2.16 mieszcząc się w typowym dla leków przedziale.
Przedmiot wynalazku jest objaśniony przykładami wykonania, które ilustrują ale nie ograniczają wynalazku.
PL 225 348 B1
W przykładach użyto pochodne alkaloidów chinowca otrzymane z naturalnych alkaloidów izolowanych z kory chinowca: chininy, chinidyny, cynchoniny oraz cynchonidyny przy czym do ich przygotowania stosowano procedury opisane w literaturze, i tak: dla pochodnych stosowanych w syntezie związków QN5FdU, QD5FdU, CD5FdU oraz CN5FdU wg.: K. M. Kacprzak, W. Linder, N. M. Maier, Chirality, 2008, 20, 441; a w przypadku syntezy związków PQN5FdU, PQD5FdU, PCD5FdU oraz PCN5FdU wg patentu EP1477488 (2004).
Rozpuszczalniki oraz pozostałe odczynniki chemiczne pochodziły z firm Aldrich, Merck i POCh i były stosowane bez dodatkowych operacji. Chromatografię kolumnową wykonywano stosując jako fazę stacjonarną żel krzemionkowy 60H (0,045-0,075 mm/200-300 mesh) firmy Merck.
Widma H NMR, C NMR, F NMR związków zarejestrowano na spektrometrze Varian-Gemini (300 MHz) oraz BrukerAvance (600 MHz) z zastosowaniem jako wzorców wewnętrznych: tetrametyl osilanu (TMS) przy rejestracji widm H NMR i C NMR oraz trichlorofluorometanu (CFCI3) w widmach
F NMR. Widma masowe rejestrowano w technice ESI za pomocą aparatu LC-MS Varian.
P r z y k ł a d 1
Synteza 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny (AddFU) z 5-fluoro-2'-deoksyurydyny
A. 2,3’-anhydro-5’-O-benzoilo-5-fluoro-2’-deoksyurydyna
Do mieszanego roztworu 5-fluoro-2'-deoksyurydyny (3,69 g, 15 mmol) i trifenylofosfiny (5,90 g, 22,5 mmol) w bezwodnym DMF (30 mL) dodano porcjami za pomocą strzykawki roztwór kwasu benzoesowego (2,75 g, 22,5 mmol) oraz azodikarboksylanudizopropylu (DIAD) (4,43 mL, 22,5 mmol) w bezwodnym DMF (7 mL). Po 15 min. dodano porcjami kolejną porcję DIAD (4,43 mL, 22,5 mmol) i trifenylofosfiny (5,90 g, 22,5 mmol) w DMF (7 mL) a mieszanie kontynuowano przez 30 min. Po tym czasie mieszaninę reakcyjną wylano do oziębionego eteru dietylowego (370 mL) a otrzymaną zawiesinę mieszano magnetycznie przez 2 godziny. Biały osad produktu odsączono próżniowo i przemyto porcją eteru dietylowego otrzymując 4,18 g (84%) 2,3’-anhydro-5’-O-benzoilo-5-fluoro-2’-deoksyurydyny, którą bez oczyszczania wykorzystano do kolejnego etapu syntezy.
1HNMR (DMSO-d6) δ: 2,55-2,69 (m, 1H, H-2' δ, H-2”), 3,17 (m, 1H, H-4'), 3,52 (m, 2H, H-5', H-5”), 4,22 (m, 1H, H-3’), 5,08 (pseudo t, 1H, J = 6,1 z, H-1'), 6,84 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-6), 7,52-8,03 (m, 5H, Ph).
13C NMR (DMSO-d6) δ: 31,26, 59,38, 77,52, 85,42, 87,34, 125,59 (d, JC-F = 36,8 Hz), 128,70, 129,13, 130,19, 133,46, 144,27 (d, JC-F = 248,7 Hz), 151,70, 162,93 (d, JC-F = 16,3 Hz), 166,84.
19F NMR (DMSO-d6) δ: -158,46 (d, 1F, J = 5,0 Hz).
MS m/z: 333 [M + H]+; 355 [M + Na]+; 371 [M + K]+; 331 [M-H]; 367, 369 [M + Cl]-.
B. 3’-azydo-5’-benzoilo-2,3 ’-dideoksy-5-fIuorourydyna
Do roztworu otrzymanej w wg. punktu A 2,3'-anhydro-5’-O-benzoilo-5-fluoro-2’-deoksyurydyny (3,99 g, 12 mmol) w HMPA (130 mL) dodano azydek litu (1,18 g, 24 mmol) oraz kwas p-toluenosulfonowy (monohydrat, 2,28 g, 12 mmol). Mieszany roztwór ogrzewano na łaźni olejowej w temp. 120°C przez 3 godziny. Po ochłodzeniu mieszaninę reakcyjną wylano do wody z lodem (1L) a produkt ekstrahowano octanem etylu (3 x 100 mL). Ekstrakty organiczne połączono, przemywano kolejno: nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 (50 mL) oraz wodą (50 mL) i suszono nad bezwodnym MgSO4. Rozpuszczalniki usunięto za pomocą wyparki próżniowej a surowy produkt oczyszczono za pomocą chromatografii kolumnowej na silikażelu stosując jak fazę ruchomą mieszaninę chloroform - metanol (100:1, v/v). Wydajność 3’-azydo-5’-benzoilo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny 2,93 g, 65%.
1HNMR (DMSO-d6) δ: 2,73-2,89 (m, 1H, H-2', H-2”), 4,12-4,15 (m, 1H, H-4'), 4,46-4,69 (m, 2H, H-5', H-5”), 4,78 (m, 1H, H-3’), 6,18 (pseudo t, 1H, J = 6,1 Hz, H-1'), 7,42 (d, 1H, J = 3,2 Hz, H-6), 7,49-8,05 (m, 5H, Ph), 11,38 (s, 1H, H-3).
13C NMR (DMSO-d6) δ: 31,26, 59,87, 63,52, 80,51, 83,42, 125,59 (d, JC-f = 36,8 Hz), 128,75, 129,34, 130,24, 133,58, 144,28 (d, JC-f = 248,7 Hz), 151,74, 162,94 (d, JC-f = 16,3 Hz),166,79.
19F NMR (DMSO-d6) δ:-158,46 (d, 1F, J = 5,0 Hz).
MS m/z: 376 [M + H]+; 398 [M + Na]+; 414 [M + K]+; 374 [M-H]-; 410, 412 [M + Cl]-.
C. 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyna (AddFU)
3’-Azydo-5’-benzoilo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydynę otrzymaną wg. punktu B wyżej (2,5 g) zawieszono w metanolu nasyconym amoniakiem (200 mL) i mieszano magnetycznie w temperaturze pokojowej przez 12 godzin. Następnie usunięto metanol za pomocą wyparki próżniowej a stałą pozo14
PL 225 348 B1 stałość poddano chromatografii kolumnowej na silikażelu stosując jako fazę ruchomą chloroform metanol (40:1, v/v). Wydajność AddFU 1,64 g, 91%.
1HNMR (DMSO-de) δ: 2,31-2,45 (m, 1H, H-2', H-2”), 3,69 (m, 1H, H-4'), 3,84 (m, 2H, H-5', H-5”),
4.40 (m, 1H, H-3), 6,06 (pseudo t, 1H, J = 6,1 Hz, H-1'), 8,20 (d, 1H, J = 6,8 Hz, H-6), 11,98 (s, 1H, H-3).
13C NMR (DMSO- d6) δ: 36,60, 59,55, 60,42, 84,14, 84,30, 124,60 (d, JC-f = 34,3 Hz), 141,12 (d, Jc-f = 231,3 Hz), 149,03, 157,25 (d, JC-f = 26,1 Hz).
19F NMR (DMSO- da) δ:-166,82 (d, 1F, J = 7,2 Hz).
MS m/z: 272 [M + H]+; 294 [M + Na]+; 310 [M + K] +; 270 [M-H]-; 306, 308 [M + Cl]-.
P r z y k ł a d 2
Synteza związku QN5FdU
W kolbie okrągłodennej umieszczono otrzymaną według przykładu 1 AddFU (54 mg; 0,20 mmol) oraz równomolową ilość 10,11-didehydrochininy (64 mg; 0,20 mmol). Substraty rozpuszczono w 1,4 dioksanie (5 mL) i mieszano na mieszadle magnetycznym w temperaturze pokojowej aż do ich całkowitego rozpuszczenia. Następnie dodano askorbinian sodu (30 mg; 0,15 mmol) oraz wodę destylowaną (1 mL). Całość mieszano aż do uzyskania jednorodnego roztworu. Na koniec dodano 1M roztwór CuSO4 (0,15 mL; 0,14 mmol). Mieszaninę reakcyjną intensywnie mieszano w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Po zakończonej reakcji rozpuszczalnik odparowano na wyparce obrot owej, a związek oczyszczono na kolumnie chromatograficznej wypełnionej żelem krzemionkowym, stosując jako eluent mieszaninę chloroform - metanol (20:1, v/v). Po oczyszczeniu chromatograficznym otrzymano 5-fluoro-1-[4-(4-{6-[hydroksy-(6-metoksychinolin-4-yl)-metyl]-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-yl}-[1,2,3]triazol-1-yl)-5-hydroksymetyltetrahydrofuran-2-yl]-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji (8S,9R) części alkaloidowej (QN5FdU) z wydajnością 65%.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,49 (m, 1H, H-7endo), 1,62 (m, 2H, H-5endo, 5-egzo), 1,85 (m, 1H, H-7egzo), 2,07 (szer. s, 1H, H-4), 2,59-2,79 (m, 3H, H-2'/2”, deoksyryboza, H-3), 3,15 (m, 3H, H-2endo, H-2egzo, H-6egzo), 3,40 (m, 2H, H-8, H-6endo), 3,60 (m, 1H, H-5' deoksyryboza), 3,70 (m, 1H, H-5” deoksyryboza), 3,95 (s, 3H, O-CH3), 4,20 (m, 1H, H-4' deoksyryboza), 5,30 (m, 1H, H-3' deoksyryboza), 5,50 (s, 1H, H-9), 5,85 (szer. s, 1H, - OH), 6,34 (t, 1H, J = 6,2 Hz, H-1' deoksyryboza),
7.40 (dd, 1H, J = 2,8, 9,2 Hz, H-7'), 7,54 (d, 1H, J = 4,6 Hz, H-3'), 7,56 (d, 1H, J = 2,5 Hz, H-5'), 7,94 (d, 1H, J= 9,2 Hz, H-8'), 8,14 (s, 1H, H-triazol), 8,34 (d, 1H, J = 7,1 Hz, 6-H), 8,90 (d, 1H, J = 4,2 Hz, H-2').
13C NMR (75 MHz, DMSO-d6): δ 22,87 (C-7), 25,51 (C-5), 26,56 (C-4), 32,27 (C-3), 37,39 (C-2' deoksyryboza), 42,06 (C-6), 55,75 (6'-OCH3), 54,97 (C-2), 58,69 (C-8), 60,12 (C-5' deoksyryboza), 60,48 (C-3' deoksyryboza), 69,94 (C-9), 84,58 (C-4' deoksyryboza), 84,82 (C-1' deoksyryboza), 119,23 (C-3'), 121,63 (C-5'), 124,66 (C=CH triazol), 125,12 (C-6'), 126,84 (C-7'), 131,20 (C-8'), 138,54 (C-6, tymidyna), 141,59 (C-5 tymidyna), 143,92 (C-4'), 147,49 (C=CH triazol), 149,07 (C-2'), 149,85 (C-10'), 157,02 (C-2 tymidyna), 157,31 (C-4 tymidyna).
19F-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ -166,542 (d, IF, J = 5,8 Hz).
MS (m/z):(-) 592 (M-H)-; 628/630 (M + Cl)-; (+) 594 (M + Na)+; 632 (M + Ka)+; 616 (2M + Na)+.
P r z y k ł a d 3
Synteza związku QD5FdU
Stosując identyczną procedurę jak w przykładzie 2 przeprowadzono reakcje pomiędzy 54 mg (0,20 mmol) AddFU oraz 10,11-didehydrochinidyną (64 mg; 0,20 mmol). Po oczyszczeniu chromatograficznym otrzymano 5-fluoro-1-[4-(4-{6-[hydroksy-(6-metoksychinolin-4-yl)-metyl]-1-aza-bicyklo [2.2.2]okt-3-yl}-[1,2,3]triazol-1-yl)-5-hydroksymetyltetrahydrofuran-2-yl]-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji (8R,9S) części alkaloidowej (QD5FdU) z wydajnością 70%.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 1,42 (m, 1H, H-7endo), 1,67 (m, 2H, H-5endo, H-5egzo), 1,91 (m, 1H, H-7egzo), 2,04 (szer. s, 1H, H-4), 2,70-2,83 (m, 3H, H-6egzo, H-2'/2” deoksyryboza), 2,86 (6endo), 3,08 (m, 1H, H-3), 3,13 (m, 1H, H-2 endo), 3,19 (m, 1H, H-2 egzo), 3,24 (s, 1H, H-8), 3,72 (m, 1H, H-5” deoksyryboza), 3,78 (m, 1H, H-5' deoksyryboza), 3,95 (s, 3H, O-CH3), 4,30 (m, 1H, H-4' deoksyryboza), 5,41 (m, 1H, H-3' deoksyryboza), 5,66 (s, 1H, H-9), 6,43 (t, 1H, J = 6,31 Hz, H-1' deoksyryboza), 7,39 (dd, 1H, J = 2,69, 9,16 Hz, H-7'), 7,52 (d, 1H, J= 4,53 Hz, H-3'), 7,63 (d, 1H, J = 2,46 Hz, H-5'), 7,93 (d, 1H, J = 9,07 Hz, H-8'), 8,29 (s, 1H, H-triazol), 8,39 (d, 1H, J = 6,99 Hz, 6-H), 8,70 (d, 1H, J = 4,06 Hz, H-2').
13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 22,40 (C-7), 25,13 (C-5), 27,80 (C-4), 32,33 (C-3), 37,44 (C-2' deoksyryboza), 47,63 (C-6), 48,74 (C-2), 55,60 (6'-OCH3), 58,24 (C-8), 60,30 (C-5' deoksyryboza), 68,90 (C-9), 69,77 (C-3' deoksyryboza), 84,49 (C-4' deoksyryboza), 85,11 (C-1' deoksyryboza),
PL 225 348 B1
102,66 (C-5'), 119,14 (C-3'), 121,21 (C-7'), 121,99 (C=CH triazol), 126,87 (C-6 fluorourydyna), 128,19 (C-9'), 131,10 (C-8'), 140,82 (C-5 fluorourydyna), 143,87 (C-10', C-4'), 147,43 (C-2'), 148,45 (C=CH triazol), 149,58 (C-2 fluorourydyna), 157,00 (C-4 fluorourydyna), 157,16 (C-6').
19F NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ -166,53; (d, 1F, J = 7,0 Hz, 6-F).
MS(m/z): (-) 592 (M-H)-; (+) 594; (M + Na)+; 616; (2M + Na)+.
P r z y k ł a d 4
Synteza związku CD5FdU
Stosując identyczną procedurę jak w przykładzie 2, przeprowadzono reakcję AddFU (54 mg; 0,20 mmol) oraz 10,11-didehydrocynchonidyny (58 mg; 0,20 mmol). Po oczyszczeniu chromatograficznym otrzymano 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[6-(hydroksy-chinolin-4-yl-metyl)-1-aza-bicyklo
[2.2.2]okt-3-yl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydro-furan-2-yl)-1H-pirymidyno-dion o konfiguracji (8,S.9R) części alkaloidowej (CD5FdU) z wydajnością 65%.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d6): δ 1,29 (m, 1H, H-7endo), 1,95 (m, 2H, 5endo, 5egzo), 2,3 (m, 445 1H, H-7egzo, H-4), 2,60-3,00 (m, 3H, H-2endo/2egzo, H-3), 3,2 (m, 1H, H-8), 3,30-3,90 (m, 6H, H-6egzo/6endo, H-5'/5” deoksyryboza, H-2/2” deoksyryboza), 4,38 (m, 1H, H-4' deoksyryboza), 5,51 (m, 1H, H-3' deoksyryboza), 5,62 (szer. s, 1H, H-9), 6,49 (t, 1H, J = 5,2 Hz, H-1' deoksyryboza), 7,70 (m, 2H, H-3', H-6'), 7,86 (m, 1H, H-7'), 8,12 (d, 1H, J = 7,2 Hz, H-8'), 8,39 (s, 1H, 6-H), 8,45 (m, 2H, H-triazol, H-5'), 8,96 (s, 1H, H-2').
13C NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 18,41 (C-7), 22,65 (C-5), 26,85 (C-4), 30,85 (C-3), 37,50 (C-2' deoksyryboza), 47,65 (C-6), 48,41 (C-2), 59,13 (C-5' deoksyryboza), 60,66 (C-8), 66,65 (C-9), 72,50 (C-3'deoksyryboza), 84,69 (C-4' deoksyryboza), 84,92 (C-1 deoksyryboza), 118,99 (C-3'), 122,14 (C-7'), 123,62 (C=CH triazol), 125,16 (C-5'), 127,05 (C-6'), 128,29 (C-9'), 129,32 (C-7'), 129,84 (C-8'), 138,59 (C-6 fluorourydyna), 146,88 (C-10'), 147,74 455 (C=CH triazol), 149,10 (C-2'), 157,31 (C-5 fluorourydyna), 156,96 (C-2 fluorourydyna), 162,37 (C-4 fluorourydyna).
19F NMR(300 MHz, DMSO- da): δ -166,50 (d, 1F, J = 5,8 Hz, 6-F).
MS (m/z): (-) 562 (M-H) δ 598/600 (M + Cl)- (+) 564 (M + H)+; 686 (M + Na)+, 602 (M + K)+.
P r z y k ł a d 5
Synteza związku CN5FdU
Stosując identyczną procedurę jak w przykładzie 2, przeprowadzono reakcję AddFU (54 mg; 0,20 mmol) oraz 10,11-didehydrocynchoniny (58 mg; 0,20 mmol). Po oczyszczeniu chromatograficznym otrzymano 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[6-(hydroksy-chinolin-4-yl-metyl)-1-aza-bicyklo- [2.2.2] okt-3-yl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydro-furan-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji (8R,9S) części alkaloidowej (CN5FdU) z wydajnością 75%.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,52 (m, 1H, H-7endo), 1,65 (m, 2H, H-5endo/5egzo), 1,80 (m, 1H, H-7egzo), 2,05 (szer. s, 1H, H-4), 2,60-2,80 (m, 3H, H-2'/2” deoksyryboza, H-3), 3,00 (m, 2H, H-2endo, H-6egzo), 3,17 (m, 1H, H-2egzo), 3,28 (m, 2H, H-8, H-6endo), 3,55 (m, 1H, H-5” deoksyryboza), 3,70 (m, 1H, H-5' deoksyryboza), 4,19 (m, 1H, H-4' deoksyryboza), 5,30 (m, 1H, H-3' deoksyryboza), 5,44 (d, 1H, J = 5,7 Hz, H-9), 5,86 (szer. s, 1H,-OH), 6,35 (t, 1H, J = 6,5,7 Hz, H-1' deoksyryboza), 7,58 (d, 1H, J= 4,40 Hz, H-3'), 7,63 (t, 1H, J= 7,50 Hz, H-6'), 7,75 (t, 1H, J = 7,60 Hz, H-7'), 8,03 (d, 1H, J = 8,50 Hz, H-8'), 8,15 (s, 1H, 6-H), 8,34 (s, 1H, H-triazol), 8,36 (s, 1H, H-5'), 8,85 (d, 1H, J = 4,00 Hz, H-2').
13C NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 23,95 (C-7), 26,70 (C-5), 27,42 (C-4), 32,34 (C-3), 37,42 (C-2' deoksyryboza), 41,99 (C-6), 48,65 (C-2), 58,68 (C-8), 60,54 (C-9), 70,33 (C-3' deoksyryboza, C-5' deoksyryboza), 84,58 (C-4' deoksyryboza), 84,83 (C-1' deoksyryboza), 119,14 (C-3'), 124,15 (C-5'), 124,75 126,32 (C-6'), 128,90 (C-7', C-9'), 129,76 (C-8'), 138,94 (C-6 fluorourydyna), 147,90 (C=CH, triazol, C-10'), 149,08 (C-2'), 150,12 (C-2 fluorourydyna), 157,02 (C-5 fluorourydyna), 157,28 (C-4 fluorourydyna).
19F NMR(400 MHz, DMSO- de): δ -166,62 (d, 1F, J = 6,1 Hz, 6-F).
MS (m/z): (-) 562 (M-H)-, 598/600 (M + Cl)-; (+) 564 (M + H)+; 686 (M + Na)+, 602 (M + K)+.
P r z y k ł a d 6
Synteza związku PQN5FdU
W kolbie okrągłodennej umieszczono otrzymaną według przykładu 1 AddFU (110 mg; 0,40 mmol) oraz równomolową ilość 9-O-propargilochininy (145 mg; 0,40 mmol). Substraty rozpuszczono w metanolu (5 mL). Następnie dodawano askorbinian sodu (60 mg; 0,3 mmol) oraz wodę destylowaną (2 mL). Całość mieszano aż do uzyskania jednorodnego roztworu. Reakcję zapoczątkowano dodatkiem 1M roztworu CuSO4 (0,3 mL; 0,3 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano intensywnie w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Po zakończonej reakcji rozpuszczalnik odparowano na wyparce
PL 225 348 B1 obrotowej. Po oczyszczeniu chromatograficznym na kolumnie wypełnionej żelem krzemionkowym, przy użyciu mieszaniny chloroform - metanol (20:1, v/v) jako eluentu otrzymano 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]-triazol-2-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-diono konfiguracji (8S,9R) części alkaloidowej (PQN5FdU) z wydajnością 70%.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,28 (m, 1H, H-7endo), 1,50 (m, 1H, H-5egzo), 1,87 H-5endo), 1,97 (m, 1H, H-7egzo), 2,00 (szer. s, 1H, H-4), 2,12 (m, 1H, H-3), 2,70 (m, 2H, H-2” deoksyryboza, H-6egzo), 2,85 (m, 1H, H-2' deoksyryboza), 3,1-3,25 (m, 3H, H-2endo, H-2egzo, H-8), 3,55 (m, 1H, H-5” deoksyryboza), 3,75 (m, 2H, H-5' deoksyryboza, H-6endo), 3,80 (s, 3H, O-CH3), 4,35 (m,
IH, H-4' deoksyryboza), 4,65 (m, 2H, O-CH2), 5,02 (d, 1H, J = 10,4, Hz, H-11a), 5,12 (d, 1H, J = 17,2 Hz, H-11b), 5,44 (m, 1H, H-3' deoksyryboza), 5,54 (s, 1H, H-9), 5,85 (m, 1H, H-10), 6,22 (m, 1H,-OH), 6,45 (t, 1H, J =6,3 Hz, H-1' deoksyryboza), 7,50 (dd, 1H, J = 7,2, 9,3 Hz, H-7'), 7,65 (d, 1H, J = 4,6 Hz, H-3'), 7,75(d, 1H, J = 2,3 Hz, 6-H), 8,05 (d,1H, J = 9,3 Hz, H-8'), 8,44 (d, 1H, J = 7,2 Hz, H-5'), 8,46 (s, 1H, H-triazol), 8,85 (d, 1H, J = 4,6 Hz, H-2'), 11,97 (szer. s, 1H, 3-NH).
13C NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 18,20 (C-7), 23,83 (C-5), 26,69 (C-4), 36,82 (C-3), 37,53 (C-2' deoksyryboza), 42,77 (C-6), 52,90 (C-2), 57,09 (6'-OCH3), 58,45 (C-8), 59,00 (C-3' deoksyryboza), 60,56 (C-5' deoksyryboza), 61,58 (OCH2), 73,18 (C-9), 84,66 (C-L deoksyryboza), 84,91 (C-4' deoksyryboza), 102,17 (C-5 fluorourydyna), 116,35 (C-3'), 118,32 (C-11), 122,30 (C-7'), 124,52 (C-5'), 125,07 (C=CH triazol), 126,63 (C-9'), 131,35 (C-8'), 138,84 (C-6 fluorourydyna), 138,94 (C-10), 147,40 (C=CH triazol), 149,06 (C-2'), 156,96 (C-6'), 158,06 (C-4 fluorourydyna), 174,60 (C-2 fluorourydyna).
19F-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ -166,54 (d, 1F, J = 6,1 Hz).
MS (m/z): ( + ) 634 (M + Na)+; 672 (M + K)+; 656 (M + Na)+.
P r z y k ł a d 7
Synteza związku PQD5FdU
Stosując identyczną procedurę jak w przykładzie 6, przeprowadzono reakcję AddFU (110 mg; 0,40 mmol) oraz 9-O-propargilochinidyny (145 mg; 0,40 mmol). Po oczyszczeniu chromatograficznym otrzymano 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo [2.2.2]okt2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji (8R,9S) części alkaloidowej (PQD5FdU) z wydajnością 75%.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 1,28 (m, 1H, H-7endo), 1,36 (m,1H, H-5endo), 1,63 (m, 1H, H-5egzo), 2,02 (m, 1H, H-7egzo), 1,80 (s, 1H, H-4), 2,45 (m, 1H, H-3), 2,70 (m, 1H, H-2” deoksyryboza), 2,80 (m, 1H, H-2' deoksyryboza), 2,34 (H-6egzo/6endo), 3,12 (m, 1H, H-2endo), 3,20 (m, 1H, H-2egzo), 3,24 (H-8), 3,62 (m, 1H, H-5” deoksyryboza), 3,73 (m, 1H, H-5' deoksyryboza), 3,99 (s, 3H, 0-CH3), 4,21 (m, 1H, H-4' deoksyryboza), 4,55 (m, 2H, O-CH2), 5,05 (m, 2H, H-11a/11b), 5,39 (m, 1H, H-3' deoksyryboza), 5,50 (szer. s, 1H, H-9), 5,90 (m, 1H, H-10), 6,40 (t, 1H, J = 6,0 Hz, H-1' deoksyryboza), 7,44 (m, 1H, H-7'), 7,55 (d, 1H, J = 4,5 Hz, H-3'), 7,60 (m, 1H, H-5'), 7,98 (dd, 1H, J = 4,8, 9,0 Hz, H-8'), 8,36 (d, 1H, J = 7,0 Hz, 6-H), 8,40 (s, 1H, H-triazol), 8,78 (dd, 1H, J = 4,6, 10,7 Hz, H-2'),
II, 9 (szer. s, 1H, 3-NH).
13C NMR (150MHz, DMSO- da): δ 19,65 (C-7), 23,49 (C-5), 27,04 (C-4), 36,90 (C-3), 37,45 (C-2' deoksyryboza), 47,23 (C-6), 48,36 (C-2), 56,26 (6'-OCH3), 58,23 (C-8), 58,68 (C-3' deoksyryboza), 73,20 (C-9), 60,38 (C-5' deoksyryboza), 61,76 (OCH2), 84,28 (C-1' deoksyryboza), 84,71 (C-4' deoksyryboza), 102,12 (C-5'), 116,17 (C-11), 118,89 (C-3'), 121,82 (C-7'), 124,08 (C=CH triazol), 124,73 (C-6 fluorourydyna), 126,88 (C-9'), 131,25 (C-8'), 138,91 (C-10), 140,78 (C-5 fluorourydyna), 144,03 (C-10'), 147,91 (C-2'), (148,99) (C-2 fluorourydyna), 149,00 (C=CH triazol), 156,95 (C-6'), 157,80 (C-4 fluorourydyna).
19F-NMR (300 MHz, DMSO- de): δ -166,55 (d, 1F, J = Hz).
MS (m/z): (-) 632 (M-H)-; 634 (M + H)+ 672 (M + K)+; 656 (M + Na)+.
P r z y k ł a d 8
Synteza związku PCD5FdU
Stosując identyczną procedurę jak w przykładzie 6, przeprowadzono reakcję AddFU (110 mg; 0,40 mmol) oraz 9-O-propargilocynchonidyny (133 mg; 0,40 mmol). Po oczyszczeniu chromatograficznym otrzymano 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[chinolin-4-yl-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji (8S,9R) części alkaloidowej (PCD5FdU) z wydajnością 70%.
1H NMR (300 MHz, CHCl3-ds): δ 1,23 (m, 1H, U-7endo), 1,49 (m, 3H, H5endo, H-7egzo, H-5egzo), 1,70 (s, 1H, H-4), 1,79 (m, 1H, H-3), 2,60-2,80 (m, 4H, H-2'/2” deoksyryboza, H-6egzo,
PL 225 348 B1
H-6endo), 3,0-3,2 (m, 2H, H-2endo, H-2egzo), 3,42 (H-8), 3,60 (m, 1H, H-5” deoksyryboza), 3,75 (m, 1H, H-5' deoksyryboza), 4,19 (m, 1H, H-4' deoksyryboza), 4,46 (m, 2H, O-CH2), 5,05 (m, 2H, H-11a/11b), 5,36 (m, 1H, H-3' deoksyryboza), 5,45 (s, 1H, H-9), 5,94 (m, 1H, H-10), 6,39 (t, 1H, J = 5,4 Hz, H-1' deoksyryboza), 7,58 (d, 1H, J = 4,4 Hz, H-3'), 7,66 (t, 1H, J = 7,3 Hz, H-6'), 7,78 (t, 1H, J = 7,3 Hz, H-7'), 7,96 (s, 1H, 6-H), 8,07 (d, 1H, J = 8,1 Hz, H-8'), 8,32 (s, 1H, H-triazol), 8,37 (d, 1H, J= 7,1 Hz, H-5'), 8,91 (d, 1H, J = 3,4 Hz, H-2').
13C NMR (75MHz, DMSO-d6): δ 23,25 (C-7), 25,35 (C-5), 27,49 (C-4), 35,80 (C-3), 37,48 (C-2' deoksyryboza), 47,79 (C-2), 48,84 (C-6), 58,55 (C-3' deoksyryboza), 60,15 (C-8), 60,40 (C-5' deoksyryboza), 61,88 (OCH2), 78,17 (C-9), 84,60 (C-4' deoksyryboza), 85,03 (C-1' deoksyryboza), 114,89 (C-5 fluorourydyna), 119,62 (C-3'), 123,91 (C-5'), 124,66 (C=CH triazol), 125,12 (C-11), 126,56 (C-6'), 129,11 (C-7'), 129,81 (C-8'), 140,35 (C-6, fluorourydyna, C-10), 143,69 (C-10',C-4'), 147,96 (C=CH triazol), 150,11 (C-2'), 157,27 (C-4 fluorourydyna), 162,32 (C-2 fluorourydyna).
19F NMR (300MHz, DMSO- da): δ -166,56 (d, IF, J = 7,0 Hz, 6-F).
MS ES(m/z):(-) 602 (M-H)-, 638/640 (M + Cl)-; (+) 604 (M + H)+, 626 (M + Na)+.
P r z y k ł a d 9
Synteza PCN5FdU
Stosując identyczną procedurę jak w przykładzie 6, przeprowadzono reakcję AddFU (110 mg; 0,40 mmol) oraz 9-O-propargilocynchoniny (133 mg; 0,40 mmol). Po oczyszczeniu chromatograficznym otrzymano 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[chinolin-4-yl-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3 ]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-dion o konfiguracji (8R,9S) części alkaloidowej (PCN5FdU) z wydajnością 70%.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,62 (m, 2H, H-7egzo, H-5egzo), 1,77 (m,2H, H5endo, H-7endo), 1,84 (s, 1H, H-4), 2,43 (m, 1H, H-3), 2,60-2,85 (m, 4H, H-2'/2” deoksyryboza, H-6egzo, H-6endo), 3,12 (m, 2H, H-2endo, H-2egzo), 3,41 (H-8), 3,64 (m, 1H, H-5' deoksyryboza), 3,76 (m, 1H, H-5” deoksyryboza), 4,18 (m, 1H, H-4' deoksyryboza), 4,55 (m, 2H, O-CH2), 5,00 (dd(AB), 2H, J = 9,93, 17,29 Hz, H-11a 11b), 5,35 (m, 1H, H-3' deoksyryboza), 5,55 (s, 1H, H-9), 5,79 (m, 1H, H-10), 6,40 (t, 1H, J = 6,3 Hz, H-1' deoksyryboza), 7,65 (d, 1H, J = 4,4 Hz, H-3'), 7,71 (t, 1H, J = 7,4 Hz, H-7'), 7,84 (t, 1H, J = 7,6 Hz, H-6'), 8,11 (d, 1H, J = 8,4 Hz, H-5'), 8,25 (s, 1H, 6-H), 8,34 (s, 1H, H-triazol), 8,36 (s, 1H, H-8'), 8,92 (d, 1H, J = 4,6 Hz, H-2').
13C NMR (75MHz, DMSO-d6): δ 22,14 (C-7), 25,71 (C-5), 27,24 (C-4), 37,93 (C-2' deoksyryboza, C-3), 42,86 (C-6), 55,15 (C-2), 59,58 (C-3' deoksyryboza), 60,28 (C-8), 61,00 (C-5', deoksyryboza), 62,87 (OCH2), 77,66 (C-9), 85,30 (C-1' deoksyryboza, C-4' deoksyryboza), 115,71 (C-5 fluorourydyna), 119,94 (C-3'), 124,14 (C-11), 124,59 (C-8'), 125,19 (C=CH triazol), 125,65 (C-7'), 126,39 (C-6', C-9'), 127,58 (C-5'), 130,05 (C-6 fluorourydyna), 139,04 (C-10), 143,92 (C-4'), 145,54 (C-10'), 148,12 (C=CH triazol), 150,64 (C-2'), 157,71 (C-4 fluorourydyna), 158,06 (C-2 fluorourydyna).
19F NMR (400MHz, DMSO-d6): δ -166,17 (d, 1F, J = 6,9 Hz, 6-F).
MS ES(m/z): (-) 602 (M-H)-, 638/640 (M + Cl)-, 682/685 (M + Br)- (+) 604 (M + H)+, 626 (M + Na)+.
P r z y k ł a d 10
Synteza dichlorowodorku QD5FdU
W kolbie okrągłodennej umieszczono QD5FdU (100 mg; 0,16 mmol) który rozpuszczono w metanolu (3mL) następnie dodano 3 równoważniki HC1 w postaci 10% roztworu kwasu solnego (0,48 mmol). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 minut, po czym rozpuszczalnik odparowano na wyparce obrotowej w łaźni wodnej o temperaturze 40°C. Suchą pozostałość dwukrotnie odparowano z metanolem (porcje po 3 mL) celem usunięcia nadmiaru HCl. Otrzymano dichlorowodorek 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji (8R,9S) części alkaloidowej (PQD5FdU) w formie jasnożółtego krzepnącego oleju z wydajnością ilościową.
MS (m/z): (-) 628 (odpowiada masie cząsteczkowej produktu zubożonej o jeden atom chloru (M-Cl)-); (+) 594 (odpowiada masie cząsteczkowej monoprotonowanego produktu zubożonej o dwa atomu chloru, (M+H)+); 616 (M+Na)+.
P r z y k ł a d 11
Synteza dichlorowodorku QN5FdU
Stosując identyczną jak w przykładzie 10 procedurę przeprowadzono reakcję QN5FdU (100 mg, 0,16 mmol) z HC1 (0,48 mmol) otrzymując dichlorowodorek5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahy18
PL 225 348 B1 drofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji (8S,9R) części alkaloidowej (PQN5FdU) w formie jasnożółtego krzepnącego oleju z wydajnością ilościową.
MS (m/z): (-) 628 (odpowiada masie cząsteczkowej produktu zubożonej o jeden atom chloru,
M-CI)-); (+) 594 (odpowiada masie cząsteczkowej monoprotonowanego produktu zubożonej o dwa atomu chloru, (M + H)+; 616 (M + Na)+.
P r z y k ł a d 12
Synteza dichlorowodorku PQD5FdU
Stosując identyczną jak w przykładzie 10 procedurę przeprowadzono reakcję PQN5FdU (100 mg, 0,16 mmol) z HC1 (0,48 mmol) otrzymując dichlorowodorek5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dionu o konfiguracji (8R,9S) części alkaloidowej (PQN5FdU) w formie jasnożółtego krzepnącego oleju z wydajnością ilościową.
MS (m/z): (-) 669 (odpowiada masie cząsteczkowej produktu zubożonej o jeden atom chloru (M-Cl)-); (+) 634 (odpowiada masie cząsteczkowej monoprotonowanego produktu zubożonej o dwa atomu chloru, (M + H)+); 656 (M + Na)+.
Claims (7)
- Zastrzeżenia patentowe1. Pochodne 2',3'-dideoksy-5-fluorourydyny o ogólnym wzorze 1 gdzie R1 oznacza grupę o ogólnym wzorze 2 lub 3PL 225 348 B1 w których- R2 oznacza grupę hydroksylową, H lub grupę alkoksylową zawierającą od 1 do 12 atomów C w łańcuchu prostym lub rozgałęzionym lub podstawnik cykloalkilowy zawierający od 3 do 10 atomów C, korzystnie grupę metoksylową.- R3 oznacza grupą winylową, etylową lub acetylenową.
- 2. Sposób wytwarzania pochodnych 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny o ogólnym wzorze 1 gdzie R1, R2 i R3 mają znaczenie podane w zastrzeżeniu 1 znamienny tym, że polega reakcji cykloaddycji 3’-azydo-2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny o ogólnym wzorze 4 oraz odpowiedniej pochodnej alkinowej alkaloidu chinowca o ogólnym wzorze 5 lub 6, w których R2, i R3 mają wyżej podane znaczenie w obecności jonów miedzi(I).
- 3. Sole pochodnych 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny o wzorach ogólnych 4, 5 i 6PL 225 348 B1 gdzie:- A- oznacza Cl-, Br-, I-, NO3-, HCOO-, CH3COO-, CH3SO3-, CH3C6H4SO3-, CH3CH(OH)COO-, HOOC(CHOH)2COO-. HOOC(CH2)2COO-, CK-C4H3O4, irans-C4H3O4-,HOCH2(CHOH)4COO-, C6H8O6-, C6H7O7-- B2- oznacza SO42- HPO42- ,-OOC(CH2)2COO-, -OOC(CHOH)2COO-, „s^H^2-, irans-C4H2O42-- C- oznacza Cl-, Br-, I-, NO3-, CH3SO3 -,R1 oznacza monokation o ogólnych wzorach 7 lub 8 w których:- R2 oznacza grupę hydroksylową, H lub grupę alkoksylową zawierającą od 1 do 12 atomów C w łańcuchu prostym lub rozgałęzionym lub podstawnik cykloalkilowy zawierający od 3 do 10 atomów C, korzystnie grupę metoksylową.- R3 oznacza grupą winylową, etylową lub acetylenową- R4 oznacza podwójnie sprotonowany dikation o ogólnych wzorach 9 lub 10PL 225 348 B1 w których:- R2 i R3 mają podane wyżej znaczenie.
- 4. Zastosowanie pochodnych 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny o ogólnym wzorze 1 gdzie R1 oznacza grupę o ogólnym wzorze 2 lub 3 w których:- R2 oznacza grupę hydroksylową, H lub grupę alkoksylową zawierającą od 1 do 12 atomów C łańcuchu prostym lub rozgałęzionym lub podstawnik cykloalkilowy zawierający od 3 do 10 atomów , korzystnie grupę metoksylową.- R3 oznacza grupą winylową, etylową lub acetylenową oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli do przygotowania preparatów leczniczych stosowanych w terapii przeciwnowotworowej.PL 225 348 B1
- 5. Zastosowanie według zastrz. 4, znamienne tym, że do sporządzania leków stosowanych w chemioterapii raka piersi stosuje się 5-fluoro-1-[4-(4-{6-[hydroksy-(6-metoksychinolin-4-yl)-metyl]-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-yl}-[1,2,3]triazol-1-yl)-5-hydroksymetyltetrahydro-furan-2-yl]-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji części alkaloidowej (8S,9R), lub 5-fluoro-1-[4-(4-{6-[hydroksy-(6-metoksychinolin-4-yl)-metyl]-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-yl}-[1,2,3]triazol-1-yl)-5-hydroksymetyl-tetrahydrofuran-2-yl]-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji części alkaloidowej (8R,9S) lub 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji części alkaloidowej (8S,9R) lub 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji części alkaloidowej (8R,9S) lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole.
- 6. Zastosowanie według zastrz. 4, znamienne tym, że do sporządzania leków stosowanych w chemioterapii raka szyjki macicy stosuje się 5-fluoro-1-[4-(4-{6-[hydroksy-(6-metoksychinolin-4-yl)-metyl]-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-yl}-[1,2,3]triazol-1-yl)-5-hydroksymetyl-tetrahydrofuran-2-yl]-1Hpirymidyno-2,4-dion o konfiguracji części alkaloidowej (8S,9R) lub 5-fluoro-1-[4-(4-{6-[hydroksy-(6-metoksychinolin-4-yl)-metyl]-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-yl}-[1,2,3]triazol-1-yl)-5-hydroksymetyltetrahydrofuran-2-yl]-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji części alkaloidowej (8R,9S) lub 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl][1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji części alkaloidowej (8S,9R) lub 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-diono konfiguracji części alkaloidowej (8R,9S) lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole.
- 7. Zastosowanie według zastrz. 4, znamienne tym, że do sporządzania leków stosowanych w chemioterapii raka wątroby stosuje się 5-fluoro-1-[4-(4-{6-[hydroksy-(6-metoksychinolin-4-yl)-metyl]-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-yl}-[1,2,3]triazol-1-yl)-5-hydroksymetyl-tetrahydrofuran-2-yl]-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji części alkaloidowej (8S,9R) lub 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl]-[1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji części alkaloidowej (8S,9R) lub 5-fluoro-1-(5-hydroksymetyl-4-{4-[(6-metoksychinolin-4-yl)-(5-winyl-1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-2-yl)-metoksymetyl][1,2,3]triazol-1-yl}-tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pirymidyno-2,4-dion o konfiguracji części alkaloidowej (8R,9S) lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole.
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL407152A PL225348B1 (pl) | 2014-02-12 | 2014-02-12 | Pochodne 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie |
| EP14716996.5A EP3105243B1 (en) | 2014-02-12 | 2014-03-04 | 2',3'-dideoxy-5-fluorouridine derivatives, a process for the manufacture thereof and application thereof |
| US14/413,560 US9388209B2 (en) | 2014-02-12 | 2014-03-04 | 2′, 3′-dideoxy-5-fluorouridine derivatives, a process for the manufacture thereof and application thereof |
| JP2015544027A JP5894350B2 (ja) | 2014-02-12 | 2014-03-04 | ２’，３’−ジデオキシ−５−フルオロウリジン誘導体、それらの製造プロセスおよびそれらの利用 |
| CA2887039A CA2887039C (en) | 2014-02-12 | 2014-03-04 | 2',3'-dideoxy-5-fluorouridine derivatives, a process for the manufacture thereof and application thereof |
| PL14716996T PL3105243T3 (pl) | 2014-02-12 | 2014-03-04 | Pochodne 2',3'-dideoksy-5-fluorourydyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie |
| PCT/PL2014/050009 WO2015050467A1 (en) | 2014-02-12 | 2014-03-04 | 2',3'-dideoxy-5-fluorouridine derivatives, a process for the manufacture thereof and application thereof |
| CN201410614221.8A CN104829670A (zh) | 2014-02-12 | 2014-11-04 | 2’,3’-双脱氧-5-氟尿苷衍生物、其制备方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL407152A PL225348B1 (pl) | 2014-02-12 | 2014-02-12 | Pochodne 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL407152A1 PL407152A1 (pl) | 2014-09-01 |
| PL225348B1 true PL225348B1 (pl) | 2017-03-31 |
Family
ID=50478926
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL407152A PL225348B1 (pl) | 2014-02-12 | 2014-02-12 | Pochodne 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie |
| PL14716996T PL3105243T3 (pl) | 2014-02-12 | 2014-03-04 | Pochodne 2',3'-dideoksy-5-fluorourydyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL14716996T PL3105243T3 (pl) | 2014-02-12 | 2014-03-04 | Pochodne 2',3'-dideoksy-5-fluorourydyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9388209B2 (pl) |
| EP (1) | EP3105243B1 (pl) |
| JP (1) | JP5894350B2 (pl) |
| CN (1) | CN104829670A (pl) |
| CA (1) | CA2887039C (pl) |
| PL (2) | PL225348B1 (pl) |
| WO (1) | WO2015050467A1 (pl) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6564369B2 (ja) | 2013-12-09 | 2019-08-21 | デュレクト コーポレイション | 薬学的活性剤複合体、ポリマー複合体、ならびにこれらを伴う組成物及び方法 |
| CN109942547B (zh) * | 2019-05-06 | 2021-08-27 | 河南师范大学 | 具有生物活性的新型喹啉取代三氮唑类化合物及其合成方法和应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2587647B2 (ja) * | 1987-09-07 | 1997-03-05 | 大鵬薬品工業株式会社 | ３′−置換トリアゾール−２′，３′−ジデオキシ−５−置換ピリミジンヌクレオシド誘導体 |
| TWI298067B (en) | 2002-01-31 | 2008-06-21 | Daiso Co Ltd | New optically active compound, method for kinetic resolution of carbonic acid derivatives and catalyst thereof |
| CN102617676B (zh) * | 2012-02-24 | 2014-10-29 | 华中科技大学 | 齐多夫定喹啉共轭化合物及其制备方法和抗肝癌之应用 |
-
2014
- 2014-02-12 PL PL407152A patent/PL225348B1/pl unknown
- 2014-03-04 JP JP2015544027A patent/JP5894350B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2014-03-04 PL PL14716996T patent/PL3105243T3/pl unknown
- 2014-03-04 WO PCT/PL2014/050009 patent/WO2015050467A1/en active Application Filing
- 2014-03-04 US US14/413,560 patent/US9388209B2/en active Active
- 2014-03-04 EP EP14716996.5A patent/EP3105243B1/en not_active Not-in-force
- 2014-03-04 CA CA2887039A patent/CA2887039C/en not_active Expired - Fee Related
- 2014-11-04 CN CN201410614221.8A patent/CN104829670A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL3105243T3 (pl) | 2018-08-31 |
| US9388209B2 (en) | 2016-07-12 |
| US20160152655A1 (en) | 2016-06-02 |
| CA2887039C (en) | 2016-01-05 |
| JP2016500100A (ja) | 2016-01-07 |
| EP3105243A1 (en) | 2016-12-21 |
| CA2887039A1 (en) | 2015-04-09 |
| EP3105243B1 (en) | 2018-02-21 |
| CN104829670A (zh) | 2015-08-12 |
| JP5894350B2 (ja) | 2016-03-30 |
| PL407152A1 (pl) | 2014-09-01 |
| WO2015050467A1 (en) | 2015-04-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108948004B (zh) | 作为fgfr4抑制剂的杂环化合物 | |
| EP3643715A1 (en) | Nitrogen heteroaryl derivative having csf1r inhibitory activity, and preparation method therefor and application thereof | |
| CN117940436A (zh) | 一种7-(萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶衍生物及其制备和应用 | |
| JP2023145548A (ja) | Ｃｄ７３阻害剤、その製造方法と応用 | |
| EA016552B1 (ru) | Производные 7-алкинил-1,8-нафтиридонов, их получение и их применение в терапии | |
| CN112321667B (zh) | 熊果酸哌嗪二硫代甲酸-吡啶钌配合物及其制备方法和应用 | |
| PL225348B1 (pl) | Pochodne 2’,3’-dideoksy-5-fluorourydyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie | |
| CN110156817B (zh) | 双吴茱萸碱分子抗肿瘤衍生物及其制备与应用 | |
| CN103922992A (zh) | 一种抗癌活性吲哚酮衍生物、合成方法及其用途 | |
| CN111303027A (zh) | 一种氟罗沙星的丙烯酮衍生物及其制备方法和应用 | |
| PL225349B1 (pl) | Pochodne 2’,5’-dideoksy-5-fluorourydyny o działaniu cytotoksycznym, sposób ich wytwarzania i zastosowanie | |
| ES2328626T3 (es) | Derivados de imidazopiridina utiles como inhibidores de inos. | |
| CN110283174B (zh) | 一类PI3Kδ抑制剂及其用途 | |
| CN116096372A (zh) | 一种egfr抑制剂、其制备方法和在药学上的应用 | |
| CN111393453A (zh) | 一种左氧氟沙星的丙烯酮衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN103923066B (zh) | 多靶点抗肿瘤化合物及其制备方法和应用 | |
| CN106496271A (zh) | 喹诺里西啶类生物碱衍生物的制备方法和用途 | |
| JPS6216489A (ja) | ビンブラスチン型ビスインド−ルのニトロ誘導体 | |
| PL225283B1 (pl) | Pochodne 2,3’-anhydro-2’-deoksy-5-fluorourydyny o działaniu cytotoksycznym, sposób wytwarzania i zastosowanie | |
| CN114933601A (zh) | 汉防己甲素衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN115557889A (zh) | 2-芳基-3,4-二氢异喹啉衍生物及其作为制备抗肿瘤药物的应用 | |
| CN103265594A (zh) | 一种藤黄酸酰胺类衍生物及其制备方法和用途 | |
| CN111646938A (zh) | 一种培氟沙星的丙烯酮衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN117126164A (zh) | 一种吡咯并三嗪类化合物，其制备方法及用途 | |
| CN114478691A (zh) | 一种嵌合分子及其制备方法和应用 |