PL208651B1

PL208651B1 - Pochodne aplidyny o działaniu przeciwnowotworowym

Info

Publication number: PL208651B1
Application number: PL360531A
Authority: PL
Inventors: Ignacio Rodriguez; Concepción Polanco; Felix Cuevas; Paloma Méndez; Carmen Cuevas; Pilar Gallego; Simon Munt; Ignacio Manzanares
Original assignee: Pharma Mar Sa
Priority date: 2000-06-30
Filing date: 2001-07-02
Publication date: 2011-05-31
Also published as: PT1294747E; NZ523367A; WO2002002596A3; WO2002002596A2; JP5289662B2; BRPI0112375B8; CN104650177A; EP1294747A2; DK1294747T3; HU228998B1; US7348310B2; KR20030013477A; BRPI0112375B1; ATE393775T1; AU6769801A; JP2004502702A; US20080009435A1; HUP0301387A2; CN1449408A; HK1052940B

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku są nowe pochodne aplidyny, mające działanie przeciwnowotworowe. Aplidyna posiada strukturę cykliczną z łańcuchem bocznym, przedstawioną poniżej:

Didemniny tworzą klasę cyklicznych depsypeptydów, które zostały wyizolowane z rozmaitych gatunków rodzaju Trididemnum (Rinehart, Jr., et al., J. Am. Chem. Soc, 103, 1857-59 (1981), Rinehart, Jr., et al., Science, 212, 933-935 (1981), o silnej czynności przeciwnowotworowej i przeciwwirusowej. Wśród nich aplidyna jest jedną z najbardziej czynnych przeciwnowotworowo naturalnych didemnin. Izolację i czynność przeciwnowotworową aplidyny ujawniono w opisie patentowym USA nr 5 834 586.

Ujawniono liczne syntetyczne lub naturalne analogi aplidyny (Rinehart, Jr., et al., J. Med. Chem., 1996, 39, 2819-2834), które zawierają rozmaite modyfikacje w łańcuchu bocznym, ale zachowują identyczną strukturę makrocykliczną.

Ostatnio ujawniono pokrewne didemninom struktury nazwane tamandarynami (Fenical, W., et. al., J. Org. Chem., 2000, 65, 782-792), które wyizolowane z nie zidentyfikowanej osłonicy Ascidiacea z rodziny didemnidae. Odkryto, że cząsteczki te różnią się jedynie obecnością kwasu hydroksyizowalerianowego (Hiv³) zamiast kwasu hydroksyizowalerylopropionowego (Hip³). Określono je jako peptydy o wysokiej czynności przeciwwirusowej, przeciwnowotworowej i immunosupresyjnej.

Celem wynalazku jest opracowanie nowych pochodnych aplidyny, nadających się do stosowania w medycynie.

PL 208 651 B1

Według wynalazku, pochodne aplidyny stanowią związek o wzorze:

w którym:

X niezależnie oznacza -C(R)2-, -O-, -S- lub -NR-, w których R niezależnie oznacza H lub grupę organiczną wybraną spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę heterocykliczną, zawierającą jeden, dwa lub trzy heteroatomy wybrane spośród atomów N, O lub S, grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową;

Y oznacza -CO- lub -COCHCH3CO-,

R4 oznacza H lub grupę organiczą wybraną spośród grupy amidowej RCONH-, grupy acylowej RCO-, grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę heterocykliczną, zawierającą jeden, dwa lub trzy heteroatomy wybrane spośród atomów N, O lub S, grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową;

w każdym przypadku, R oznacza grupę C1-C12 alkilową, grupę C2-C12 alkenylową, grupę C6-C18 arylową, grupę aralkilową oraz ich podstawione pochodne, które są podstawione przez grupę heterocykliczną, zawierającą jeden, dwa lub trzy heteroatomy wybrane spośród atomów N, O lub S, grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową;

X1 oznacza O lub S; oraz w przypadku gdy Y oznacza -CO-, to wówczas

a) X2 oznacza CR, O (R2 jest nieobecny), S (R2 jest nieobecny) lub N, gdzie R niezależnie oznacza H lub grupę organiczną wybraną spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę heterocykliczną, zawierającą jeden, dwa lub trzy heteroatomy wybrane spośród atomów N, O lub S, grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową; oraz

R1 oraz R2, każdy niezależnie, oznacza H lub grupę organiczną wybraną spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej, grupy amidowej RCONH- lub grupy acylowej RCO-, w których R oznacza grupę C1-C12 alkilową, grupę C2-C12 alkenylową, grupę C6-C18 arylową, grupę aralkilową, oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową; oraz R1 lub

R2, jeśli X2 oznacza N, mogą ponadto oznaczać -SO2R, gdzie R jest jak zdefiniowano; lub

b) aa8 oznacza

PL 208 651 B1 gdzie R3 oznacza grupę organiczną wybraną spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej, grupy RSO2- lub grupy acylowej RCO-, w których R oznacza grupę C1-C12 alkilową, grupę C2-C12 alkenylową, grupę C6-C18 arylową, grupę aralkilową, oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową; lub

c) R1 oraz R2 tworzą z X2 ewentualnie podstawioną grupę C3-C12 cykloalkilową, ewentualnie podstawioną grupę C6-C18 arylową lub ewentualnie podstawioną grupę heterocykliczną, wybraną spośród grupy obejmującej kumarynyl, chinolinyl, pirydyl, pirazynyl, pirymidyl, furyl, pirolil, tienyl, tiazolil, oksazolil, imidazolil, indolil, benzofuranyl, benzotiazol, tetrahydrofuranyl, tetrahydropiranyl, piperydynyl oraz morfolino; przy czym ewentualne podstawniki są wybrane spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej, oraz ich podstawione pochodne, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę karbonylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową; lub

d) aa8 jest zastąpiony przez grupę organiczną wybraną spośród grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej, grupy RSO2- lub grupy acylowej RCO-, w których R oznacza grupę C1-C12 alkilową, grupę C6-C18 arylową, grupę aralkilową oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę karbonylową, grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową;

a w przypadku gdy Y oznacza COCHCH3CO-, to wówczas

a) X2 oznacza N, zaś oraz R2 każde niezależnie oznacza H lub grupę organiczą wybraną spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej, grupy amidowej RCONH-, grupy -SO2R lub grupy acylowej RCO-, w których R oznacza grupę C1-C12 alkilową, grupę C2-C12 alkenylową, grupę C6-C18 arylową, grupę aralkilową, oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę heterocykliczną, zawierającą jeden, dwa lub trzy heteroatomy wybrane spośród atomów N, O lub S, grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową; lub

b) aa8 oznacza:

gdzie R3 oznacza grupę RSO2-, w której R oznacza C1-C12 alkil lub R3 oznacza grupę C2-C12 alkenylową, grupę aralkilową, oraz ich podstawione pochodne, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę karbonylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową, lub grupę halogenową; lub

c) R1 oraz R2 tworzą z X2, ewentualnie podstawioną grupę C3-C12 cykloalkilową, ewentualnie podstawioną grupę C6-C18 arylową lub ewentualnie podstawioną grupę heterocykliczną, wybraną spośród grupy obejmującej kumarynyl, chinolinyl, pirydyl, pirazynyl, pirymidyl, furyl, pirolil, tienyl, tiazolil, oksazolil, imidazolil, indolil, benzofuranyl, benzotiazol, tetrahydrofuranyl, tetrahydropiranyl, piperydynyl, oraz morfolino; przy czym ewentualne podstawniki są wybrane spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej oraz ich podstawione pochodne, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę karbonylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową; lub

d) aa8 jest zastąpiony przez grupę organiczną wybraną spośród grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej lub grupy RSO2-, w której R oznacza grupę C1-C12 alkilową, grupę C6-C18 arylową lub grupę aralkilową, oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową;

przy czym grupy aralkilowe są utworzone przez grupę C1-C12 alkilową podstawioną przez grupę C6-C18 arylową; oraz jego farmaceutycznie dopuszczalne sole.

Korzystnie, pochodne aplidyny obejmują te związki, w których X oznacza -NR-, gdzie R ma znaczenie określone powyżej, bardziej korzystnie X oznacza -NH- lub N-Me-, a zwłaszcza X oznacza -NH-.

Korzystnie, związki obejmują te, w których X oznacza -O-.

PL 208 651 B1

Korzystnie, związki obejmują te, w których Y oznacza -CO-.

Korzystnie, związki obejmują te, w których X oznacza -NH- lub -O- oraz Y oznacza CO-CHCH3CO- lub -CO-.

Korzystnie, R4 oznacza metyl.

Korzystnie, X1 oznacza O.

Korzystnie, X2R1 oznacza ewentualnie podstawioną grupę aralkiloksylową, zwłaszcza X2R1 oznacza grupę benzyloksylową.

Korzystnie, X2R1 oznacza ewentualnie podstawioną grupę aminową, a zwłaszcza X2R1 oznacza grupę -NHR1, gdzie R1 oznacza ewentualnie podstawioną grupę C1-C12 alkilową, grupę C2-C12 alkenylową, grupę C6-C18 arylową lub grupę aralkilową.

Korzystnie, R1 oznacza grupę C1-C12 alkilową lub C6-C18 grupę arylową, a zwłaszcza R1 oznacza grupę fenylową lub grupę butylową.

Korzystnie, X2R1 oznacza ewentualnie podstawioną grupę C1-C12 alkilową, a zwłaszcza X2R1 oznacza grupę propylową, grupę izopropylową, grupę pentylową lub grupę biotynową.

Korzystnie, -C(=O)X2R1R2 tworzy ewentualnie podstawioną amino-kwasową grupę acylową.

Korzystnie, ewentualnie podstawioną aminokwasową grupą acylową jest podstawiona prolina.

Korzystnie, podstawioną proliną jest ewentualnie podstawiona norwalino-prolina, ewentualnie podstawiona alanino-prolina, Boc-prolina, ewentualnie podstawiona alkilo-prolina.

Korzystnie, podstawioną proliną jest norwalino-prolina, Z-norwalino-prolina, alanino-prolina, Z-alanino-prolina, Boc-alanino-prolina, izo-butyryloprolina lub ewentualnie chroniona D-laktyloprolina.

Korzystnie, związki obejmują te, w których X1 oznacza S oraz X2R1 oznacza grupę -NHR1, gdzie R1 oznacza ewentualnie podstawioną grupę C1-C12 alkilową, grupę C2-C12 alkenylową, grupę C6-C18 arylową lub grupę aralkilową.

Korzystnie, R1 oznacza grupę C1-C12 alkilową lub grupę C6-C18 arylową, a zwłaszcza R1 oznacza grupę fenylową lub grupę butylową.

Korzystnie, R1 oraz R2 tworzą z X2 ewentualnie podstawioną grupę heterocykliczną, w szczególności grupą heterocykliczną jest kumaryna.

Korzystnie, aa8 jest zastąpiona przez grupę organiczną RSO2-, w której R ma znaczenie jak określone powyżej, a zwłaszcza R oznacza metyl.

Korzystnie, pochodna aplidyny stanowi związek, który jest wybrany spośród następujących:

8-[fenyloureido]-didemnina A,

8-[butyloureido]-didemnina A,

3-[Val]-8-[izobutyrylo]-didemnina A,

3-[Hiv]-9-[izobutyrylo]-aplidyna,

3-[Val]-9-[izobutyrylo]-aplidyna,

3-[Hiv]-8-[izobutyrylo]-didemnina A,

3-[Hiv]-9-[Ala]-aplidyna,

3-[Hiv]-9-[Nva]-aplidyna,

8-[fenylotioureido]-didemnina A,

8-[kumaryno]-didemnina A,

8-[butylotioureido]-didemnina A,

8-[metylosulfonylo]-didemnina A,

3-[Val]-Z-didemnina A,

3-[Hiv]-8-[Val]-didemnina A,

3-[Hiv]-8-[butyrylo]-didemnina A,

3-[Hiv]-9-[Z-ala]-aplidyna,

3-[Hiv]-Z-didemnina A,

3-[Hiv]-9-[Z-Nva]-aplidyna,

3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]-aplidyna,

3-[Hiv]-8-[Boc-Val]-didemnina A,

3-[Hiv]-8-[Val]-9-[izobutyrylo]-didemnina A,

3-[Hiv]-8-[heksanoilo]-didemnina A,

9-[metylosulfonylo]-aplidyna.

Korzystnie, pochodną aplidyny jest 8-[fenyloureido]-didemnina A.

Ponadto, według wynalazku, pochodna aplidyny stanowi związek, który jest wybrany spośród następujących:

PL 208 651 B1

9-[norwalino]-aplidyna,

3-[Val]-didemnina A,

3-[Hiv]-didemnina A,

9-[Z-Nva]-aplidyna,

8-[Gly]-9-[kumaryno]-didemnina A,

8-[biotyno]-didemnina A,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[Boc]-aplidyna,

7,8-[spiro]-9-[pyr]-aplidyna,

3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidyna,

7,8-[spiro]-9-[Boc]-aplidyna,

3-[Val]- 9-[lac(OTBDMS)]-aplidyna,

3-[Hiv]-9-[D-lac(OTBDMS)]-aplidyna,

7,8-[spiro]-9-[izobutyrylo]-aplidyna,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[pyr]-aplidyna,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[izobutyrylo]-aplidyna,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[akryloilo]-aplidyna,

3-[Aip]-aplidyna.

Korzystnie, związek powyżej określony jest w postaci farmaceutycznie dopuszczalnej soli.

Nieoczekiwanie stwierdzono, że pochodne aplidyny według wynalazku, a zwłaszcza preparaty farmaceutyczne, które je zawierają, nadają się do leczenia nowotworów, na przykład guzów nowotworowych, Szczególnie korzystne jest leczenie guzów nowotworowych, takich jak nowotwór pęcherza, piersi, okrężnicy, żołądka, wątroby, nsci, jajnika, trzustki, przełyku, prostaty, nerek, scl, glejak siatkówki, czerniak, włókniakomięsak, chrzęstniakomięsak lub kostniakomięsak, lub leczenie leukemii/chłoniaków, takich jak ALL (leukemia promielocytowa), ALL (ostra limfoblastyczna), CML (przewlekła mielogenowa), ALL (komórek B), leukemia (włosowatych komórek B), leukemia (komórek osocza), chłoniak (komórek T), chłoniak (skórnych komórek T), chłoniak (niezróżnicowany), chłoniak (komórek B Burkitta), chłoniak (histiocytowy), chłoniak (komórek B), chłoniak (puchliny Burkitta).

Przykłady kompozycji farmaceutycznych obejmują jakiekolwiek stałe (na przykład tabletki, pigułki, kapsułki, granulaty) lub ciekłe (roztwory, zawiesiny lub emulsje) z odpowiednimi kompozycjami do podawania doustnego, miejscowego lub pozajelitowego i mogą one zawierać czysty związek, lub w połączeniu z jakimkolwiek nośnikiem lub innymi farmakologicznie czynnymi związkami. Kompozycje te winny być wyjaławiane, jeśli mają być podawane pozajelitowo.

Stosownie, związek może być sprzężony z proteiną nośną lub innym odpowiednim czynnikiem do dostarczania w organizmie zwierzęcia lub człowieka. Sprzężenie może następować bezpośrednio pomiędzy nośnikiem i związkiem, lub pośrednio przez odpowiedni linker.

Podawanie związków według niniejszego wynalazku lub kompozycji, może następować dowolnym sposobem, takim jak infuzja dożylna, w preparacie doustnym, poprzez podawanie dootrzewnowe i doż ylne. Korzystnie są stosowane infuzje trwające do 24 godzin, bardziej korzystnie 2-12 godzin, przy czym 2-6 godzinne są najbardziej korzystne. Krótkotrwałe infuzje, które umożliwiają prowadzenie leczenia bez całodobowej hospitalizacji, są szczególnie korzystne. Jednakże, infuzje mogą być 12 do 24 godzinne lub nawet dłuższe, jeśli konieczne. Infuzja może być przeprowadzana w odpowiednich odstępach, powiedzmy 2 do 4 tygodniowych. Kompozycje farmaceutyczne zawierające związki według wynalazku mogą być dostarczane w liposomach lub kapsułkach nanosferowych, w preparatach o przedł uż onym uwalnianiu, lub innymi standardowymi ś rodkami dostarczania.

Właściwe dostarczanie związków może być zróżnicowane zależnie od danego preparatu, sposobu podawania i szczególnego miejsca (situs), pacjenta oraz nowotworu lub guza poddawanego leczeniu. Również pod uwagę winny być wzięte inne czynniki, takie jak wiek, waga ciała, płeć, sposób odżywiania, czas podawania, szybkość wydalania, stan pacjenta, zestawienia lekowe, czułość reakcji i powaga choroby. Podawanie może być przeprowadzane w sposób ciągły lub okresowo, w obrębie maksymalnej dopuszczalnej dawki.

Związki według niniejszego wynalazku mogą być stosowane z innymi lekami zapewniając terapię skojarzoną. Inne leki mogą stanowić część tej samej kompozycji lub być dostarczone w odrębnej kompozycji do podawania w tym samym czasie lub w innym czasie. Rodzaj tego innego leku nie szczególnie ograniczony, a odpowiednimi kandydatami są:

PL 208 651 B1

a) leki o działaniu antymitotycznym, zwłaszcza te, które są adresowane do elementów cytoszkieletowych, a tym modulatorów mikrotubuli, takie jak leki taksanowe (takie jak taksol, paklitaksel, taksoter, docetaksel), podofilotoksyny lub alkaloidy barwinka (winkrystyna, winblastyna);

b) leki antymetabolitowe, takie jak 5-fluorouracyl, cytarabina, gemcytabina, analogi purynowe (takie jak pentostatyna, metotreksat);

c) środki alkilujące, takie jak iperyty azotowe (takie jak cyklofosfamid lub ifosfamid);

d) leki adresowane do DNA, takie jak leki antracyklinowe, adriamycyna, doksorubicyna, farmorubicyna lub epirubicyna;

e) leki adresowane do topoizomeraz, takie jak etopozyd;

f) hormony oraz agoniści lub antagoniści hormonów, takie jak estrogeny, antyestrogeny (tamoksyfen i związki pokrewne) oraz androgeny, flutamid, leuprorelina, goserelina, cyprotron lub oktreotyd;

g) leki, które są adresowane do transdukcji sygnałowej komórek nowotworowych, a w tym pochodne przeciwciał, takie jak herceptyna;

h) środki alkilujące, takie jak leki platyny (cis-platyna, karboplatyna, oksaliplatyna, paraplatyna) lub nitrozomoczniki;

i) leki potencjalnie oddziaływujące na przerzuty nowotworowe, takie jak inhibitory metaloproteaz substancji międzykomórkowej;

j) środki terapii genowej i antysensownej;

k) terapeutyki z przeciwciałami; oraz

I) inne związki bioaktywne pochodzenia morskiego, zwłaszcza ekteinascydyny, takie jak ET-743.

Jak wyżej podano, grupę korzystnych związków stanowią te, w których -C(=O)X2R1R2 tworzą ewentualnie podstawioną aminokwasowi grupę acylową. Odpowiednio, ewentualnie podstawioną aminokwasową grupą acylową jest ewentualnie podstawiona proliną lub ewentualnie podstawiona glicyna lub ewentualnie podstawiona walina, a bardziej korzystnie ewentualnie podstawioną proliną jest ewentualnie podstawiona norwalino-prolina, ewentualnie podstawiona alanino-prolina, Boc-prolina, ewentualnie podstawiona alkilo-prolina lub ewentualnie podstawioną glicyną jest podstawiona heterocyklem glicyna, lub ewentualnie podstawioną waliną jest walina, Boc-walina lub alkilo-walina.

Korzystnie, ewentualnie podstawioną proliną jest norwalino-prolina, Z-norwalino-prolina, alanino-prolina, Z-alanino-prolina, Boc-alanino-prolina, izobutyrylo-prolina lub ewentualnie podstawiona D-laktylo-prolina, lub podstawioną heterocyklem glicyną jest kumarynylo-glicyna, lub ewentualnie podstawioną waliną jest walina, Boc-walina lub izobutyrylo-walina.

Ponadto, R1, R2, X2, R4 i atom azotu niosący R4 mogą tworzyć oksadiazaspiroalkan N-podstawiony przez R5, gdzie R5 oznacza H. N-podstawionym oksadiazaspiroalkanem korzystnie jest 6-oksa-1,7-diazaspio[4.4]nonan.

Korzystnie, pochodne aplidyny według wynalazku stanowią związki o poniższych wzorach:

Opracowano syntetyczną drogę dla wytworzenia aa3 = [Hiv]³ lub [Val]³ lub [Aip]³, jako części serii wyjątkowo silnych i rzadkich środków przeciwnowotworowych, które przekazano do prób klinicznych, jak tylko udało się pozyskać odpowiednie ilości, oraz jego najprostszych izomerów, w których reszty aminokwasowe zostały poddane permutacjom. Sposób ten jest enancjo- i stereokontrolowany i szybki, i wykorzystuje standardowe metody metodologii syntezy w roztworach.

PL 208 651 B1

Korzystną realizację według niniejszego wynalazku przedstawia wzór I, w którym aa3 niezależnie oznaczają aminokwasy o konfiguracji L lub D. Jeśli stosowne to X niezależnie oznacza C(R)2, O, S lub NR; gdzie R niezależnie oznacza H lub grupę organiczną wybraną z grupy obejmującej grupę alkilową, grupę arylową, grupę aralkilową oraz ich pochodne, podstawione przez grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, grupę aminową, grupę guanidynową, grupę halogenową; który to R korzystnie posiada od 1 do około 12 atomów węgla, bardziej korzystnie 1 do około 8 atomów węgla, jeszcze bardziej korzystnie 1 do około 6 atomów węgla, a najbardziej korzystnie 1, 2, 3 lub 4 atomy węgla.

Szczególnie korzystnymi grupami alkilowymi, według niniejszego wynalazku, są metyl, etyl i propyl obejmują cy izopropyl. Najbardziej korzystnie aa3 oznacza α -(α '-hydroksyizowalerylo)propionyl (Hip), (X = O, Y = -COCHCH₃CO-) - seria A, lub a-(a'-aminoizowalerylo)propionyl (Aip) (X = NH, Y = -COCHCH₃CO-) - seria N, lub walinę (X = NH, Y = -CO-) - seria V, lub α-hydroksyizowaleryl (X = -O-, Y = -CO-) - seria H, lub N-metylowalinę (X = NMe, Y = -CO-) - seria M, w którym aa8 oznaczają niezależnie α-aminokwasy o konfiguracji L lub D, jeśli stosowne; w którym X₂ niezależnie oznacza CR, O, S lub N, gdzie R niezależnie oznacza H lub grupę organiczną wybraną z grupy obejmującej grupę alkilową, grupę alkenylową, grupę arylową, grupę aralkilową oraz ich pochodne podstawione przez grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, grupę aminową, grupę guanidynową, grupę halogenową, gdzie R1, R2, R3 i R4, każdy niezależnie oznacza H lub grupę organiczną wybraną z grupy obejmującej grupę alkilową, grupę arylową, grupę aralkilową oraz ich pochodne, podstawione przez grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, grupę aminową grupę guanidynową, grupę halogenową. Aa8 może również oznaczać resztę proliny, jak we wzorze II, w którym R3 niezależnie oznacza H lub grupę organiczną wybraną z grupy obejmującej grupę alkilową, grupę arylową, grupę aralkilową oraz ich pochodne, podstawione przez grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, grupę aminową, grupę guanidynową, grupę halogenową.

Odnośnie R3, najbardziej korzystnie może oznaczać kwas pirogronowy, grupę aralkiloksykarbonylową lub aminokwas lub peptyd. Grupy alkilowe korzystnie posiadają od 1 do około 12 atomów węgla, bardziej korzystnie 1 do około 8 atomów węgla, jeszcze bardziej korzystnie 1 do około 6 atomów węgla, a najbardziej korzystnie 1, 2, 3 lub 4 atomy węgla. Szczególnie korzystnymi grupami alkilowymi, w związkach według niniejszego wynalazku, są metyl, etyl i propyl obejmujący izopropyl. Stosowany niniejszym termin alkil, o ile nie podano inaczej, odnosi się do grup zarówno cyklicznych jak i niecyklicznych, aczkolwiek grupy cykliczne zawierają co najmniej trzy węglowe człony pierścienia. Korzystnymi aminokwasami są zabezpieczone i niezabezpieczone D lub L glicyna, walina, leucyna, izoleucyna, fenyloalanina, tyrozyna, tryptofan, metionina, cysteina, asparaginian, asparagina kwas glutaminowy, glutamina, lizyna, arginina, proliną, seryna, treonina, histydyna i hydroksyprolina. Korzystne peptydy mogą być tworzone z wyżej wymienionych aminokwasów.

Ponadto, aa8 i R4 mogą być połączone za pomocą pochodnych o strukturze 6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonanu:

w której R5 najbardziej korzystnie może oznaczać kwas pirogronowy, grupę aralkiloksykarbonylową lub aminokwas lub peptyd. Grupy alkilowe korzystnie posiadają od 1 do około 12 atomów węgla, bardziej korzystnie 1 do około 8 atomów węgla, jeszcze bardziej korzystnie 1 do około 6 atomów węgla, a najbardziej korzystnie 1, 2, 3 lub 4 atomy węgla. Szczególnie korzystnymi grupami alkilowymi, w związkach według niniejszego wynalazku, są metyl, etyl i propyl obejmujący izopropyl. Stosowany niniejszym termin alkil, o ile nie podano inaczej, odnosi się do grup zarówno cyklicznych jak i niecyklicznych, aczkolwiek grupy cykliczne zawierają co najmniej trzy węglowe człony pierścienia. Korzystnymi aminokwasami są zabezpieczone i niezabezpieczone D lub L glicyna, walina, leucyna, izoleucyna, fenyloalanina, tyrozyna, tryptofan, metionina, cysteina, asparaginian, asparagina, kwas glutamiPL 208 651 B1 nowy, glutamina, lizyna, arginina, proliną, seryna, treonina, histydyna i hydroksyprolina. Korzystne peptydy mogą być tworzone z wyżej wymienionych aminokwasów.

Stosowany niniejszym termin „grupa organiczna” oznacza grupę węglowodorową, która jest zaklasyfikowana jako grupa alifatyczna, grupa cykliczna lub połączenie grup alifatycznej i cyklicznej (np. grupy aralkilowe). W kontekście niniejszego wynalazku termin „grupa alifatyczna” oznacza nasycony lub nienasycony węglowodór liniowy lub rozgałęziony. Termin ten jest stosowany do objęcia na przykład grup: alkilowej, alkenylowej i alkinylowej. Termin „grupa alkilowa” oznacza nasyconą liniową lub rozgałęzioną grupę węglowodorową obejmującą na przykład metyl, etyl, izopropyl, izobutyl, t-butyl, heptyl, dodecyl, oktadecyl, amyl, 2-etyloheksyl, 2-metylobutyl, 5-metyloheksyl i tym podobne. Termin „grupa alkenylową” oznacza nasyconą liniową lub rozgałęzioną grupę węglowodorową z jednym lub większą liczbą wiązań podwójnych węgiel-węgiel, taką jak grupa winylowa. Termin „grupa alkinylowa” oznacza nasyconą liniową lub rozgałęzioną grupę węglowodorową z jednym lub większą liczbą wiązań potrójnych węgiel-węgiel. Termin „grupa cykliczna” oznacza grupę węglowodorową o zamkniętym pierścieniu, która jest zaklasyfikowana jako grupa alicykliczna, grupa aromatyczna lub grupa heterocykliczna. Termin „grupa alicykliczna” oznacza cykliczną grupę węglowodorową mającą właściwości odzwierciedlające te dla grup alifatycznych. Termin „grupa aromatyczna” lub „grupa arylowa” oznacza mono- lub policykliczną aromatyczną grupę węglowodorową. Termin „grupa heterocykliczna” oznacza węglowodór o zamkniętym pierścieniu, w którym jeden lub więcej atomów w pierścieniu stanowi pierwiastek różny od węgla (np. azot, tlen, siarkę, itd.).

Korzystne grupy alkoksylowe, w związkach według niniejszego wynalazku, obejmują grupy posiadające jedno lub więcej wiązań z tlenem i posiadające od 1 do około 12 atomów węgla, bardziej korzystnie 1 do około 8 atomów węgla, jeszcze bardziej korzystnie 1 do około 6 atomów węgla, a najbardziej korzystnie 1, 2, 3 lub 4 atomy węgla.

Właściwe grupy heteroaromatyczne w związkach według niniejszego wynalazku zawierają jeden, dwa lub trzy heteroatomy wybrane spośród atomów N, O lub S i obejmują np. kumarynyl, a w tym 8-kumarynyl, chinolinyl, a w tym 8-chinolinyl, pirydyl, pirazynyl, pirymidyl, furyl, pirolil, tienyl, tiazolil, oksazolil, imidazolil, indolil, benzofuranyl i benzotiazol. Właściwe grupy heteroalicykliczne w związkach według niniejszego wynalazku zawierają jeden, dwa lub trzy heteroatomy wybrane spośród atomów N, O lub S i obejmują np. grupy: terahydrofuranyl, tetrahydropiranyl, piperydynyl, morfolino i pirolidynyl.

Właściwe karbocykliczne grupy arylowe w związkach według niniejszego wynalazku obejmując związki o monopierścieniowe i o wielu pierścieniach, obejmując związki o wielu pierścieniach, które zawierają izolowane i/lub skondensowane grupy arylowe. Typowe karbocykliczne grupy arylowe zawierają 1 do 3 izolowanych lub skondensowanych pierścieni i od 6 do około 18 atomów węgla w pierścieniach. Szczególnie korzystne karbocykliczne grupy arylowe obejmują fenyl, a w tym podstawiony fenyl, taki jak 2-podstawiony fenyl, 3-podstawiony fenyl, 2,3-podstawiony fenyl, 2,5-podstawiony fenyl, 2,3,5-podstawiony i 2,4,5-podstawiony fenyl, obejmując jeden lub więcej podstawników fenylu, będących grupami elektronoakceptorowymi, jak halogen, grupa cyjankowa, nitrowa, alkanoil, sulfinyl, sulfonyl i tym podobne; oraz naftyl, a w tym 1-naftyl i 2-naftyl; bifenyl; fenantryl; i antracyl.

Ewentualnie zabezpieczone grupy aminowe mogą być zabezpieczone z użyciem grup znanych do celu. Odpowiednie grupy zabezpieczające dla amin obejmują karbaminiany, amidy i inne grupy zabezpieczające, takie jak alkil, aryloalkil, sulfo- lub haloaryloalkil, haloalkil, alkilosililoalkil, aryloalkil, cykloalkiloalkil, alkiloaryloalkil, heterocykloalkil, nitroaryloalkil, acyloaminoalkil, nitroaryloditioaryloalkil, dicykloalkilokarboksyamidoalkil, cykloalkil, alkenyl, aryloalkenyl, nitroaryloalkenyl, heterocykloalkenyl, grupa heterocykliczna, alkiloditio, alkoksy- lub halo-, lub alkilosulfinyloaryloalkil, heterocykloacyl i inne karbaminiany oraz alkanoil, haloalkanoil, aryloalkanoil, alkenoil, heterocykloacyl, aroil, aryloaroil, haloaroil, nitroaroil i inne amidy, jak również alkil, alkenyl, alkilosililoalkoksyalkil, alkoksyalkil, cyjanoalkil, grupa heterocykliczna, alkoksyaryloalkil, cykloalkil, nitroaryl, aryloalkil, alkoksy- lub hydroksyaryloalkil oraz wiele innych grup. Grupy takie mogą podstawione przez uprzednio wymienione grupy podstawników.

Odniesienie się niniejszym do podstawionych grup w związkach według niniejszego wynalazku dotyczy do specyficznego fragmentu, który może być podstawiony w jednej lub większej liczbie dostępnych pozycji przez jedną lub więcej odpowiednich grup, jak np. halogen, taki jak fluor, chlor, brom i jod; grupa cyjankowa; hydroksyl; grupa nitrowa; grupa azydkowa; alkanoil, taki jak grupa C1-6 alkanoilowa, taka jak acyl i podobne; karboksyamido; grupy alkilowe obejmujące grupy mające od 1 do około 12 atomów węgla lub od 1 do około 6 atomów węgla, a bardziej korzystnie 1-3 atomy węgla; grupy alkenylowe i alkinylowe obejmujące grupy mające jedno lub więcej wiązań nienasyconych i od 2 do około 12 atomów węgla, lub od 2 do około 6 atomów węgla; grupy alkoksylowe obejmujące te z jed10

PL 208 651 B1 nym lub większą liczbą wiązań z tlenek i od 1 do około 12 atomów węgla lub od 1 do około 6 atomów węgla; grupy aryloksylowe, takie jak fenoksyl; grupy alkilotio obejmujące te fragmenty mające jedno lub więcej wiązań tioeterowych i od 1 do około 12 atomów węgla lub od 1 do około 6 atomów węgla; grupy alkilosulfinylowe obejmujące te fragmenty mające jeden lub więcej ugrupowań sulfotlenkowych i od 1 do okoł o 12 atomów wę gla lub od 1 do okoł o 6 atomów wę gla; grupy alkilosulfonylowe obejmujące te fragmenty mające jeden lub więcej ugrupowań sulfonowych i od 1 do około 12 atomów węgla lub od 1 do około 6 atomów; grupy aminoalkilowe, takie jak grupy mające jeden lub więcej atomów N i od 1 do około 12 atomów węgla lub od 1 do około 6 atomów; aryl karbocykliczny mające 6 lub więcej atomów węgla, zwłaszcza fenyl (np. R oznaczający podstawiony lub nie podstawiony fragment bifenylowy); oraz aralkil, taki jak benzyl.

Jak ogólnie wiadomo w tej dziedzinie techniki, wysoki stopień podstawienia nie jest tylko dopuszczalny, ale nawet często jest zalecany. Należy spodziewać się podstawień w związkach według niniejszego wynalazku. Dla celów uproszczenia przy omawianiu i cytowaniu określonej terminologii stosowanej w obrębie niniejszego zgłoszenia, terminy „grupa” i „fragment” są używane celem rozróżnienia pomiędzy ugrupowaniami chemicznymi, które mogą służyć do podstawienia lub które mogą być podstawione, a tymi, które nie mogą służyć do podstawienia lub nie mogą być podstawione. A zatem, jeśli termin „grupa” jest stosowany do określenia podstawnika chemicznego, to określany materiał chemiczny obejmuje nie podstawioną grupę i tę grupę z atomami O, N lub S, na przykład w łańcuchu, jak również jako grupę karbonylową lub inne typowe podstawienie. Jeśli stosowany jest termin „fragment” dla określenia związku chemicznego lub podstawnika, to w zamierzeniu obejmuje on tylko nie podstawiony materiał chemiczny. Na przykład, wyrażenie „grupa alkilowa” w zamierzeniu obejmuje nie tylko otwartołańcuchowe nasycone węglowodorowe podstawniki alkilowe, takie jak metyl, etyl, propyl, izobutyl i tym podobne, ale również podstawniki alkilowe niosące kolejne podstawniki znane w dziedzinie, takie jak hydroksyl, alkoksyl, amino, karboksyl, karboksyamido, atomy halogenów, grupa cyjankowa, nitrowa, alkilosulfonyl, itd. Zatem „grupa alkilowa” obejmuje grupy eterowe, haloalkile, alkohole, tiole, karboksyl, aminy, hydroksyalkile, sulfoalkile, itd. Z drugiej strony wyrażenie „fragment alkilowy” ogranicza się do obejmowania tylko otwartołańcuchowych nasyconych czysto węglowodorowych podstawników alkilowych, takich jak metyl, etyl, propyl, izobutyl i tym podobne.

Dostarczony jest sposób wytwarzania fragmentu didemniny o strukturze:

ο ο

ΑΑχ

NHBoc

ΟΒη który to sposób obejmuje sprzęganie Boc-D-allo-lleu-OH z litowym enolanem octanu benzylu. Grupa karbonylowa we fragmencie didemniny o wzorze:

może zostać zredukowana z utworzeniem fragmentu didemniny o budowie:

Grupa hydroksylowa w związku o wzorze:

PL 208 651 B1 może zostać zabezpieczona dostarczając fragment didemniny o budowie:

Dalsze odbezpieczenie grupy estru benzylowego dostarcza fragment didemniny o budowie:

Kolejny sposób wytwarzania fragmentu didemniny obejmuje sprzęganie pierwszego reagenta o wzorze strukturalnym:

z drugim reagentem o budowie

dostarczając fragment didemniny o wzorze strukturalnym:

w którym X jest wybrany z grupy obejmującej -O- i -NH-; w którym R oznacza grupę zabezpieczającą grupę aminową; i w którym R oznacza grupę zabezpieczającą grupę hydroksylową. Odpowiednio, X oznacza -O- i R oznacza tert-butylodimetylosilil; lub X oznacza -NH- i R oznacza Boc.

Inny sposób wytwarzania fragmentu didemniny obejmuje sprzęganie pierwszego reagenta o wzorze strukturalnym:

PL 208 651 B1 z drugim reagentem o budowie:

dostarczając fragment didemniny o wzorze strukturalnym:

w którym X jest wybrany z grupy obejmują cej -O-, -NMe- i -NH-; w którym R oznacza grupę zabezpieczającą grupę aminową; i w którym R oznacza H. Odpowiednio, X oznacza -O- i R oznacza H; lub X oznacza -NH- i R oznacza Boc; lub X oznacza -NMe- i R oznacza Boc.

Sposób obejmuje hydrolizę fragmentu didemniny o wzorze:

dostarczając fragment didemniny o budowie:

w którym X jest wybrany z grupy obejmują cej -OH i NH2.

Inny sposób wykorzystuje hydrolizę fragmentu didemniny:

PL 208 651 B1

dostarczając fragment didemniny o budowie:

w którym X jest wybrany z grupy obejmują cej -NH2 i -NHMe.

Dostarczony jest kolejny sposób wytwarzania fragmentu didemniny, który to sposób obejmuje sprzęganie pierwszego reagenta o wzorze strukturalnym:

z drugim reagentem o budowie:

dostarczając fragment didemniny o wzorze strukturalnym:

w którym X jest wybrany z grupy obejmującej -O-, -NMe- i -NH-; w którym Y oznacza -(COCHCH3)nCO-;

gdzie n oznacza 0 lub 1.

Sposób obejmuje hydrolizę fragmentu didemniny:

PL 208 651 B1

dostarczając fragment didemniny o wzorze strukturalnym:

w którym X jest wybrany z grupy obejmującej -O- i -NH-; w którym Y oznacza -(COCHCH3)nCO-; gdzie n oznacza 0 lub 1.

Inny sposób wytwarzania fragmentu obejmuje sprzęganie pierwszego reagenta o wzorze strukturalnym:

z drugim reagentem o budowie:

dostarczając fragment didemniny o wzorze strukturalnym:

Sposób obejmuje odbezpieczenie grupy estru benzylowego fragmentu didemniny o wzorze:

PL 208 651 B1

dostarczając fragment didemniny o budowie:

Sposób wytwarzania fragmentu didemniny obejmuje sprzęganie pierwszego reagenta o wzorze strukturalnym:

z drugim reagentem o budowie:

dostarczając fragment didemniny o wzorze strukturalnym:

Sposób obejmuje odbezpieczenie fragmentu didemniny:

PL 208 651 B1

dostarczając fragment didemniny o budowie:

Kolejny sposób wytwarzania fragmentu didemniny obejmuje cyklizację fragmentu o wzorze:

dostarczając analog didemniny o budowie:

Sposób wykorzystuje hydrolizę analogu didemniny:

PL 208 651 B1 dostarczając analog didemniny o budowie:

Kolejny sposób wytwarzania analogu didemniny obejmuje sprzęganie pierwszego reagenta o wzorze strukturalnym:

oraz drugiego reagenta o budowie:

dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

Inny sposób obejmuje odbezpieczenie fragmentu didemniny o wzorze:

PL 208 651 B1

dostarczając fragment didemniny o budowie:

Sposób wytwarzania fragmentu didemniny obejmuje sprzęganie fragmentu o wzorze:

i drugiego reagenta o budowie:

dostarczając fragment didemniny o wzorze strukturalnym:

Kolejny sposób obejmuje odbezpieczenie fragmentu didemniny o wzorze:

PL 208 651 B1

dostarczając fragment didemniny o budowie:

Sposób wytwarzania analogu didemniny obejmuje sprzęganie analogu didemniny o wzorze:

z fragmentem:

dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

Sposób wytwarzania analogu didemniny obejmuje sprzęganie analogu didemniny o wzorze strukturalnym:

PL 208 651 B1

i fragmentu o budowie:

dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

w którym X jest wybrany z grupy obejmującej -O- i -NH-, oraz R oznacza i-propyl; w którym X oznacza -O- i R oznacza n-propyl, oraz R oznacza n-pentyl.

oraz fragmentu o budowie:

dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

PL 208 651 B1 w którym:

Sposób obejmuje odbezpieczenie analogu didemniny:

dostarczając fragment didemniny o wzorze strukturalnym:

PL 208 651 B1 w którym

X=O, NH

Χ=Ο

Χ=0

Ο

R= ο t>H R- JU ΟΗ

Ο

νη₂

R=

Dostarczony jest sposób wytwarzania didemniny obejmujący sprzęganie analogu didemniny o wzorze strukturalnym:

oraz fragmentu o budowie:

dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

PL 208 651 B1

Sposób ponadto obejmuje odbezpieczenie analogu didemniny:

dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

Dostarczony jest sposób wytwarzania analogu didemniny obejmujący sprzęganie analogu didemniny:

i chlorku izobutyrylu z uzyskaniem analogu didemniny o wzorze strukturalnym:

PL 208 651 B1

Dostarczony jest sposób wytwarzania analogu didemniny obejmujący sprzęganie analogu didemniny o wzorze strukturalnym:

z fragmentem o budowie:

dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

w którym R oznacza Boc, izobutyryl, ketopropionyl lub akryloil.

PL 208 651 B1 oraz fragmentu o budowie:

dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

w którym R oznacza SO2Me lub Z-Nva.

Dostarczono sposób obejmujący odbezpieczenie analogu didemniny:

wytwarzając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

PL 208 651 B1

w którym R2 oznacza Nva.

Podano, sposób wytwarzania analogu didemniny, który obejmuje sprzęganie analogu didemniny o wzorze strukturalnym:

oraz fragmentu o budowie:

dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

w którym R oznacza Boc, izobutyryl lub ketopropionyl.

PL 208 651 B1 oraz fragmentu o budowie:

dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

Przedstawiony jest sposób wytwarzania analogu didemniny obejmujący sprzęganie analogu didemniny o wzorze strukturalnym:

oraz fragmentu o budowie:

dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

PL 208 651 B1

oraz fragmentu o budowie:

dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

PL 208 651 B1

oraz chlorku metylosulfonylu z dostarczeniem analogu didemniny o wzorze strukturalnym:

oraz fragmentu o budowie:

X=C=n-R dostarczając analog didemniny o wzorze strukturalnym:

w którym X oznacza O i S; w którym R oznacza butyl i fenyl.

Należy dostrzec, że wszystkie sposoby te są jedynie ilustratywne i mogą być dowolnie modyfikowane. W szczególności, mogą być zaadoptowane różne grupy zabezpieczające celem zabezpie30

PL 208 651 B1 czenia grup aminowych lub grup hydroksylowych. Do wprowadzenia planowych grup mogą być stosowane różnorodne reagenty. Podstawniki mogą być zmieniane według potrzeb, ze szczególnym uwzględnieniem wzoru ogólnego dla związków według niniejszego wynalazku i przykładów korzystnych znaczeń.

W tym stopniu, jaki mo ż e być konieczny dla zapewnienia, ż e niniejszy opis obejmuje cał o ść ujawnienia z naszych zgłoszeń z datą pierwszeństwa i dla zapewnienia tytułu do pełnego zakresu dat pierwszeństwa, niniejszym powołujemy się na treść naszych zgłoszeń GB 00161148 9 i GB 0103750 6.

Szczegółowy opis korzystnych realizacji

Związki według niniejszego wynalazku można otrzymać syntetycznie. Sposoby przedstawione tu dla syntezy aplidyny i jej pochodnych mogą również być użyte dla szerokiego zakresy didemnin.

Struktury niektórych związków przedstawiono na fig. 1:

tamandaryna A (IV), A = CH didemnina B (III), A = CH (konformacja S), B = OH (konformacja S), B = OH

Fig. 1

Pochodne aa3-aplidyny są syntetycznymi cyklicznymi depsipeptydami podobnymi strukturalnie do aplidyny (związek II) (aa3 = Hip, również znana jako dehydrodidemnina B), która jest naturalna didemniną wyizolowaną z osłonie Ascidiacea, Aplidium albicans (fig. 1). Otrzymane cząsteczki różnią się obecnością kwasu hydroksyizowalerianowego (Hiv) (związek I) lub waliny (związek V), lub metylowaliny (związek VI), lub jednostki a-(a'-aminoizowalerylopropionowej (Hip) (II), która występuje we wszystkich innych naturalnie występujących pokrewnych didemninach. Podobieństwo pomiędzy tymi dwiema strukturami ostatnio odkryto pomiędzy didemniną B (związek III), najbardziej znanym członkiem tej klasy depsypeptydów, a nowo wyizolowanym cyklicznym depsypeptydem z niezidentyfikowanej brazylijskiej osłonicy Ascidiacea z rodziny Didemnidae; tamandaryną A (związek IV). Związki I, V, VI i VII nie są naturalnymi pochodnymi didemniny.

Homologia strukturalna pomiędzy III i IV znajduje odbicie w ich względnej czynności biologicznej. Przy porównywaniu obu związków, IV zachowuje podobny poziom czynności przeciwnowotworowej in vitro w oznaczeniach klonogennych, jak również właściwości inhibitowania biosyntezy protein, oraz jak wykazano, jest nieco bardziej czynna in vitro niż III względem raka trzustki. Jednakże, zwiąPL 208 651 B1 zek IV nie wykazuje jakiejkolwiek specyficzności względem typu nowotworu na 60 komórkowym panelu NCI. Didemniną B okazała się toksyczną w dawkach zbliżonych do zastosowań terapeutycznych i jest prawdopodobne, że IV jest raczej toksyną o szerokim spektrum niż selektywnym środkiem.

[Hiv]³-aplidyna (I) z kolei wykazuje te same korzyści wykryte dla aplidyny (II) w odniesieniu do didemniny B (III), w tym, że jest specyficzna względem nowotworów litych okrężnicy, chrzęstniakomięsaka i kost-niakomięsaka w oznaczeniu MTS. [Val]³-aplidyna (V) i [MeVal]³-aplidyna (VI) są z kolei nowymi związkami, które wykazują wysoki poziom czynności przeciwnowotworowej in vitro. Na zakończenie, związki V, VI i VII prawdopodobnie wykazują, w porównaniu z macierzystą aplidyną, silniejsze wiązania wodorowe w centrum czynnym, a zatem stanowią związki bardziej czynne. Ponadto, obecność wiązania amidowego zastępującego wiązanie estrowe może polepszać stabilność rdzenia cyklodepsypeptydu.

Niniejszym donosimy o pierwszej totalnej syntezie serii pochodnych aplidyny. Przykładowa analiza retrosyntetyczna jest przedstawiona na fig. 2.

Kluczowe etapy obejmują wydajną makrocyklizację liniowych prekursorów 6 i praktyczną stereoselektywną syntezę jednostki Ist-aa3-leu-Pro (A1) oraz prawego fragmentu D1. Finalne sprzęganie makrocykla 4 z rozmaitymi łańcuchami bocznymi dostarcza aa3-aa8-aplidynę i pochodne. Zasadność tej metodologii syntetycznej została potwierdzona pozytywnie przez opracowanie praktycznej syntezy aplidyny II (aa3 = Hip).

PL 208 651 B1

Tworzenie pierścienia makrocyklicznego stanowi kluczowy etap we wszystkich seriach. Uwieńczona sukcesem cyklizacja na wszystkich czterech możliwych wiązaniach amidowych została uzyskana w uprzednich syntezach didemnin.

Jednakże, w niniejszej pracy tworzenie wiązania N(Me)-O(me)-Tyr i Pro zostało wybrane jako punkt makrocyklizacji w oparciu o poprzednią pracę wykonaną podczas totalnej syntezy aplidyny II (G. Jou, I. Gonzales, F. Albericio, P. Lloyd-Williams, E. Giralt, J. Org. Chem., 1997, 62, 354-366 oraz opis patentowy ES-2102322).

NHBoc

NHBoc 'χα

OMe

O O O

NHBoc

Schemat 1

CKl

Bromek fenacvlu

EtaN : Pac

2)

DCC

DMAP/CHzCij

OMe

HO

Zn, AcOH

Rdzeń makrocykliczny docelowej cząsteczki jest rozdzielony na lewą jednostkę A1 tetrapeptydową lst-aa3-Leu-Pro i dipeptyd D1 Boc-Thr-(Z-NMe-OMe-Tyr)-OH.

Synteza prawego fragmentu dipeptydowego D1 została już ujawniona.

Jednakże, synteza przedstawiona na schemacie 1 umożliwia otrzymywanie tego półproduktu w skali kilogramowej.

Funkcję kwasową Boc-Thr(OH)-OH zabezpiecza się bromkiem fenacylu dostarczając bezpośrednio alkohol D3, który estryfikuje się Z-N(Me)-O(Me)-Tyr-OH z użyciem DCC w obecności DMAP dostarczając D2.

Usunięcie grupy fenacylowej 2N kwasem octowym dostarcza czysto fragment D1.

Tworzenie się prekursora A1 jest przedstawione na schemacie 2 dla różnych serii.

Dla serii SHPL, SVPL i SMPL pierwszy etap sprzęgania pomiędzy Leu-Pro-OBzl (A5) i handlowo dostępnym kwasem (B1) daje bezpośrednio A3 gotowy do następnej reakcji z izostatyną (C1).

W przypadku serii SAPL i SNPL droga róż ni się od uprzednio opisanej w tym, że B1 jest (3-ketoestrem syntetyzowanym odpowiednio, z kwasu a-(a'-hydroksyizowalerylo)propionowego i kwasu a-(a'-aminoizowalerylo)propio-nowego.

Syntezę fragmentu B2 (seria SAPL i SNPL) przedstawiono na schemacie 3.

Wodorolizę od B2 do B1 przeprowadza się tuż przed (w jednym naczyniu reakcyjnym) reakcją sprzęgania z A5.

PL 208 651 B1

Otrzymywanie całego fragmentu A1 oparte jest na dostępności części izostatynowej, która została otrzymana w dużych ilościach z nie proteinogennej Boc-D-alloizoleucyny z zabezpieczoną grupą aminową (C5). Drogę syntetyczną dla wytwarzania C1 przedstawiono na schemacie 4.

Aktywowanie funkcji karboksylowej Boc-D-allo-lle za pomocą karbonylodiimidazolu, a następnie kondensacja enolanu litowego octanu benzylu dostarcza β-ketoester (C4). Stereoselektywna redukcja KBH4 w metanolu daje C3. Po zabezpieczeniu drugorzędowej grupy hydroksylowej w postaci eteru TBDMS (C2) i wodorolizie uzyskanego estru benzylowego otrzymuje się izostatynę (C1).

Kolejne etapy prowadzące do związków I, II, V i VII są przedstawione na schemacie 5. Sprzęganie fragmentów A1 i D1 z HBTU/HOBt dostarcza liniowy prekursor typu 7. Wodoroliza grup zabezpieczających Cbz i benzylowej zachodzi czysto i łatwo wobec Pd(OH)2 dostarczając 6. Etap makrocyklizacji z użyciem HATU/HOAt dostarcza półprodukt 5 z dobrą wydajnością (75%). Do rozszczepienia grupy zabezpieczającej Boc użyto chlorowodór w dioksanie uzyskując 6. Związek ten poddano sprzęganiu z Z-NMe-D-Leu-OH dostarczając 3, który poddano wodorolizie wobec Pd/C. Uzyskany związek 2 poddaje się sprzęganiu z łańcuchem bocznym Pyr-Pro-OH, z użyciem DIPCDI, uzyskując odpowiednie związki.

PL 208 651 B1

Ciekawe, że prekursory typu 2, które są analogami we wszystkich uprzednio wspomnianych aspektach, dla didemniny A, służą jako wyjściowe elementy konstrukcyjne w syntezie pewnych interesujących związków pokrewnych, ponieważ N-zakończenie, wolna drugorzędowa grupa aminowa, stanowi centrum dla dołączenia rozmaitych grup acylowych cyklicznego depsypeptydu.

ΌΒη

ZMeN’

NHBoc

X = O; Y=-CO- (seria SHPL)

X =NH; Y=-CO-(seria SVPL)

X =NMe; Y—CO-(seria SMPL)

X = O; Y=-COCHCO-(seria SAPL)

HBTU

HOBT 'Me

XR=NH; Y=-COCHCO-(seria SNPL)

DIEA

MeHN*y_₀ HATU, HOAt

Pd(OH)₂/C

-OMe

HATU, HOAt

HCI, dioksan rt, 12h

Me

SAPL3, X = O,

Y= -COCHCHsCOSNPL3, X=NH,

Y = -COCHCH₃COH_2i Pd-C/10%

SHPL3, X = O, Y = C=O

SvPL3, X = NH, Y = C=O

THF, H,O ^-Me

DIPCDI

CH₂CI₂

SAPL2, X=O

Y= -COCHCHjCOSNPL2, X = NH,

Y = -COCHCH_aCOSHPL2, X = O, Y e C=O

SvPL2, X = NH, Y = C=O 'Me

I (SHPL1), X = O, Y = C=O

II (SAPL1), X = O, Y = -COCHCH3CO

V(SVPL1), X = NH, Y = C=O

VII (SNPL1), X = NH, Y = -COCHCH3COI, II, V, VII

Schemat 5

PL 208 651 B1

We wcześniejszych badaniach (Rinehart, et al., J. Med. Chem., 1996, 39, 2819-2834) pochodne acylowe didemniny A (dA) 3 okazały się również czynne, jak i macierzyste związki 2. Dla serii aa3 wykryto również czynność w przypadku związków 3.

Tablice 1 i 2 przedstawiają wartości IC50 znalezione dla związków 1.

T a b l i c a 1

Cytotoksyczność związków z rodziny [aa3]-aplidyny, IC50 (molowo)

Związek/seria	P388	A549	HT29	MEL28
aplidyna (II))/ SAPU	1,80E-10	1,80E-10	4,50E-10	4,50E-10
[Hivf-aplidyna (I)/ SHPL1	4,74E-10	4,74E-10	4,74E-10	4,74E-10
[Val]³-aplidyna (V)/ SVPL1	1,13E-10	1.13E-10	1,13E-10	1, 13E-10
[Aip]³-aplidyna (VII)/ SNPL1		9,01 E-10	9,01E-10

Metodologia: według Berjeron et al., Biochem. and Bioph. Res. Comm., 1984, 121, 3, 848-854; P388 = chłoniak mysi, A549 = ludzki rak płuc, HT29 = ludzki rak okrężnicy, MEL28 = ludzki czerniak

T a b l i c a 2

Wartości IC50 (molowo) dla rodziny aplidyny

Guzy nowotworowe lite	Linia	Didemnina B 9LSAPL1	Aplidyna SAPL1	[Hiv]³-aplidyna
		III		SHPL1
			II
				I
Pęcherza	5637	2,50E-08	3,59E-08	9,02E-08
Piersi	MX-1	1,54E-06	1,67E-07	N/A
Okrężnicy	HT-29	8,07E-08	6,87E-07	1,02E-08
Żołądka	Hs746t	6,60E-09	2,52E-08	7,16E-08
Wątroby	SK-HEP-1	9,21 E-08	9,44E-08	2,65E-07
NSCL	A549	1,21E-04	2,40E-05	N/A
Jajnika	SK-OV-3	1,63E-07	7,20E-08	-
Trzustki	PANC-1	1,52E-10	1,7E-07	-
Przełyku	FADU	9,79E-08	7,29E-08	3,71 E-08
Prostaty	PC-3	9,00E-08	5,13-07	-
Prostaty	DU-145	-	-	N/A
Prostaty	LNCAP	-	-	1,46E-08
Nerki	786-0	2,90E-07	8,31 E-08	-
SCL	NCI-H187	-	-	N/A
Glejak siatkówki	Y-79	-	-	-
Czerniak	Mel-28	-	-	4,86E-07
Włókniakomięsak	SW694	3,28E-06	1,49E-06	N/A
Chrzęstniakomięsak	CHSA	-	-	3,45E-09
Kostaniakomięsak	OSA-FH	-	-	5,89E-09

PL 208 651 B1 cd. tablicy 2

Leukemie/chłoniaki	Linia	Didemnina B 9LSAPL1	Aplidyna SAPL1	[Hiv]³-aplidyna
		III		SHPL1
			II
				I
ALL (leukemia promielocytowa)	HL-60	1,44E-07	7,89E-08	N/A
ALL (ostra limfoblastyczna)	Molt3	5,45E-07	5,95E-07	1,77E-08
CML (przewlekła mielogenowa)	K562	3,31 E-06	5,72E-07	5,21 E-07
ALL (komórek B)	CORF-SB	6,55E-07	4,72E-07	-
Leukemia (włosowatych komórek B)	Mo-B	-	-	-
Leukemia (komórek osocza)	ARH-77	-	1,78E-07	-
Chłoniak (komórek T)	H9	2,13E-07	5,25E-07	N/A
Chłoniak (skórnych komórek T)	Hut 78	3,56E-08	4,47E-08	-
Chłoniak (niezróżnicowany)	MC116	8,84E-09	9,21 E-07	3,82E-07
Chłoniak (komórek B Burkitta)	RAMOS	-	-	-
Chłoniak (histiocytowy)	U-937	1,87E-07	5,62E-07	-
Chłoniak (komórek B)	MoB	-	-	-
Chłoniak (niezróżnicowany)	MC116	8,84E-09	9,21 E-07	3,82E-07
Chłoniak (puchliny Burkitta)	P3HR1	5,58E-08	5,34E-08	-
Metodologia:		MTT	MTT	MTS (nowa)

N/A = nieaktywny

Związki niniejszym otrzymane przedstawiono na schematach 5 i 6. Związki te zawierają N^a-propionylo-[aa]³-dA, N^a-butyrylo-[aa]³-dA, N^a-izobutyrylo-[aa]³-dA i N^a-pentanoilo-[aa]³-dA.

Analogi, która posiadają dwie acylowe podjednostki po N-zakończeniu rdzenia aa3-dA, otrzymano w celu zbadania czynników strukturalnych wnoszących udział do specyficzności względem określonych nowotworów.

Otrzymano związki diacylowe izobutyrylo-Pro-OH, O-izo-butyrylo-Lac-Pro-OH, N-benzylo-Ala-Pro-OH i poddano kondensacji ze związkami typu 2 metodą DIPCDI, uzyskując odpowiednio, po odbezpieczeniu i oczyszczeniu, [aa]³-[izobutyrylo]⁹-aplidynę, [O-izobutyrylo-Lac]⁹-aplidynę, [Ala]⁹-aplidynę.

PL 208 651 B1

Korzystne pochodne aplidyny: związki z serii: H, V

DIPEA

Seria Η, X = O Seria V, X = NH

X. O·· °J> w 7° ) N HN-ę>° O >X*_R

Me

8ISHPL1, X = O, R = iPr 8BSHPL1, X = O, R = nPr 8HSHPL1,X = O, R = nPentyl 8ISVPL1, X = NH, R = iPr

HO o ,^RA„_ó

DIPCDI

0 9LSHPL2(Ł), X = 0, R = 0 bTBDI 9LSHPL2(O), X = O, R = OTBD 0 9LSVPL2(Ł), X = NH, R = ΐ)ΤΒ	TBFA	O 9LSHPL1 (L), X = O, R = (Tamandaryna A) V O O . 9LSHPL1(D), X = 0, R = ΛΛ 0 ' 9LSVPL1 (L), X = NH, R = 0
VIS ^THFiden MS iden
DMS
9NVSHPL2, X = NH, R =	Pd(OH)2	9NVSHPL1, X = NH, R =
^NHZ	IPrOH, H_ZO	'nh₂
8PSHPL2, X = 0, R = -CO-OtBu -	HCl _x	8PSHPL1, X = O, R = H.HCl
0 9BASHPL2, X = O, R = -	Dioksan iden	9ASHPL1, X = 0, R = _
0 'NHBoc		Śih₃CI
9ZASHPL2, X = 0, R =
'NHZ

PL 208 651 B1

Syntezę spirocyklicznych fragmentów przedstawiono na schemacie 7. Synteza bierze początek z uprzednio ujawnionego zwią zku 8. Cyt.: a) Seebach, D., et al., J. Am. Chem. Soc, 1983, 105, 5390-5398; b) Genin, M. J., et al., J. Org. Chem., 1993, 58, 2334-2337.

PL 208 651 B1

Korzystne pochodne aplidyny: związki z serii A

PL 208 651 B1

Dołączono również spirozwiązki jak w poprzednich seriach dostarczając związki czynne.

T a b l i c a 3

Cytotoksyczność pochodnych aplidyny IC50 (molowo)

Seria	Określenie	MW	P388	A549
1	2	3	4	5
SNPL3	3-[Aip]-Z-didemnina A	1076		9,29E-11
8PUSAPL1	8-[fenyloureido]-didemnina A	1062		9,42E-11
8BUSAPL1	8-[butyloureido]-didemnina A	1042		9,59E-11
8ISVPL1	3-[val]-8-[izobutyrylo]-aplidyna	956		1,05E-10
9NVSAPL1	9-[norwalino]-aplidyna	1139		4,39E-10
9ISHPL1	3-[Hiv]-9-[izobutyrylo]-aplidyna	1054		4,74E-10
9ISVPL1	3-[Val]-9-[izobutyrylo]-aplidyna	1053		4,75E-10
8ISHPL1	3-[hiv]-8-[izobutyrylo]-didemnina A	957		5,22E-10
9ASHPL1	3-[Hiv]-9-[Ala]-aplidyna	1091		9,16E-10
8PSHPL2	3-[Hiv]-8-[Boc-Pro]-didemnina A	1084		9,22E-10
9NVSHPL1	3-[Hiv]-9-[Nva]-aplidyna	1083		9,23E-10
8PTSAPL1	8-[Fenylotioureido]-didemnina A	1078		9,27E-10
8CSAPL1	S-[kumaryno]-didemnina A	1062		9,41 E-10
8BTSAPL1	8-[butylotioureido]-didemnina A	1058		9,45E-10
9LSHPL1(L)	3-[Hiv]-9-[L-Lac]-aplidyna (Tamandaryna A)	1056		9,47E-10
9LSHPL1(D)	3-[Hiv]-9-[D-Lac]- aplidyna	1056		9,47E-10
9LSVPL1 (L)	3-[Val]-9-[Lac]-aplidyna	1055		9,48E-10
8MSAPL1	8-[metylosulfonylo]-didemnina A	1021		9,79E-10
SVPL3	3-[val]-Z-didemnina A	1020	9,8E-10	9,8E-10

PL 208 651 B1 cd. tabeli 3

1	2	3	4	5
8PSHPL1	3-[Hiv]-8-[Pro]-didemnina A	984		1,01E-09
8VSHPL1	3-[Hiv]-8-[Val]-didemnina A	986		1,01E-09
8BSHPL1	3-[Hiv]-8-[butyrylo]-aplidyna	957		1,04E-09
SVPL2	3-[val]-didemnina A	886	1,1 E-09	1,13E-09
SHPL2	3-[Hiv]-didemnina A	886	1,1 E-09	1,13E-09
SAPL3	Z-didemnina A	1077	9,3E-09	2,32E-09
9NVSAPL2	9-[Z-Nva]-aplidyna	1273	7,9E-09	3,93E-09
9ZASHPL2	3-[ H iv]-9-[Z-al a]-a p l i dy n a	1189		4,21 E-09
SAPL2	didemnina A	943	5,30E-09	4,24E-09
8G9CSAPL1	8-[Gly]-9-[kumaryno]-didemnina A	1172		4,26E-09
8BISAPL1	8-[biotyno]-didemnina A	1169		4,27E-09
9SBSHPL1	3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[Boc]-aplidyna	1096		4,56E-09
SHPL3	3-[Hiv]-Z-didemnina A	1021	4,9E-09	4,9E-09
9NVSHPI2	3-[Hiv]-9-[Z-Nva]-aplidyna	1217		8,22E-09
9SPSAPL1	7,8-[spiro]-9-[pyr]-aplidyna	1122		8,55E-09
9LSHPL2(L)	3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidyna	1170		8,55E-09
9BASHPL2	3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]-aplidyna	1155		8,65E-09
9SBSAPL1	7,8-[spiro]-9-[Boc]-aplidyna	1152		8,68E-09
8VSHPL2	3-[Hiv]-8-[Boc-Val]-aplidyna	1086		9,21 E-09
8V9ISHPL1	8-[Val]-9-[izobutyrylo]-didemnina A	1056		9,46E-09
8HSHPL1	3-[Hiv]-8-[heksanoilo]-didemnina A	985		1,01 E-08
9LSVPL2(L)	3-[Val]-9-[Lac(OTBDMS)]-aplidyna	1169		1,02E-08
SNPL2	3-[Aip]-didemnina A	942		1,06E-08
9LSHPL2(D)	3-[Hiv]-9-[D-Lac(OTBDMS)]-aplidyna	1170		8,55E-08
9SISAPL1	7,8-[spiro]-9-[izobutyrylo]-aplidyna	1122		8,9 IE-08
9SPSHPL1	3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[pyr]-aplidyna	1066		9,38E-08
9SISHPL1	3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[izobutyrylo]-aplidyna	1066		9,38E-08
Seria	Określenie	HT29	MEL28	DU145
SNPL3	3-[Aip]-Z-didemnina A	9,29E-11
8PUSAPL1	8-[fenyloureido]-didemnina A	9,42E-11
8BUSAPL1	8-[butyloureido]-didemnina A	9,59E-11
9NVSAPL1	9-[norwalino]-aplidyna	4,39E-10
9ISHPL1	3-[Hiv]-9-[izobutyrylo]-aplidyna	4,74E-10
9ISVPL1	3-[Val]-9-[izobutyrylo]-aplidyna	4,75E-10
8ISHPL1	3-[hiv]-8-[izobutyrylo]-didemnina A	5,22E-10
9ASHPL1	3-[Hiv]-9-[Ala]-aplidyna	9,16E-10
8PSHPL2	3-[Hiv]-8-[BocPro]-didemnina A	9,22E-10

PL 208 651 B1 cd. tabeli 3

1	2	3	4	5
9NVSHPL1	3-[Hiv]-9-[Nva]-aplidyna	9,23E-10
8PTSAPL1	8-[fenylotioureido]-didemnina A	9,27E-10
8CSAPL1	8-[Kumaryno]-didemnina A	9,41 E-10
8BTSAPL1	8-[butylotioureido]-didemnina A	9,45E-10
9LSHPI1(L)	3-[Hiv]-9-[L-Lac]-aplidyna (Tamandaryna A)	9,47E-10
9LSHPL1(D)	3-[Hiv]-9-[D-Lac]-aplidyna	9,47E-10
9LSVPL1(L)	3-[Val]-9-[Lac]-aplidyna	9,48E-10
8MSAPL1	8-[metylosulfonylo]-didemnina A	9,79E-10
SVPL3	3-[val]-Z-didemnina A	9,8E-10	9,8E-10	9,8E-10
8PSHPL1	3-[Hiv]-8-[Pro]-didemnina A	1,01 E-09
8VSHPL1	3-[Hiv]-8-[Val]-didemnina A	1,01 E-09
8BSHPL1	3-[Hiv]-8-[butyrylo]-aplidyna	1,04E-09
SVPI2	3-[val]-didemnina A	1,13E-09	1,13E-09	1,13E-09
SHPL2	3-[Hiv]-didemnina A	1,13E-09	1,13E-09
SAPL3	Z-didemnina A	4,64E-09	4,64E-09
9NVSAPL2	9-[Z-Nva]-aplidyna	3,93E-09	3,93E-09	3,93E-09
9ZASHPL2	3-[Hiv]-9-[Z-ala]-aplidyna	4,21 E-09
SAPL2	didemniną A	8,48E-09	1,13E-09
8G9CSAPL1	8-[Gly]-9-[kumaryno]-didemnina A	4,26E-09
8BISAPL1	8-[biotyno]-didemnina A	4,27E-09
9SBSHPL1	3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[Boc]-aplidyna	4,56E-09
SHPL3	3-[Hiv]-Z-didemnina A	4,9E-09	4,9E-09	4,9E-09
9IWSHPL2	3-[Hiv]-9-[Z-Nva]-aplidyna	8,22E-09
9SPSAPL1	7,8-[Spiroj-9-[pyr]-aplidyna	8,9E-09
9LSHPL2(L)	3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidyna	8,55E-09
9BASHPL2	3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]-aplidyna	8,65E-09
9SBSAPL1	7,8-[spiro]-9-[Boc]-aplidyna	8,68E-09
8VSHPI2	3-[Hiv]-8-[Boc-Val]-aplidyna	9,21 E-09
8V9ISHPL1	8-[Val]-9-[izobutyrylo]-didemnina A	9,46E-09
8HSHPL1	3-[Hiv]-8-[heksanoilo]-didemnina A	1,01 E-08
9LSVPL2(L)	3-[Val]-9-[Lac(OTBDMS)]-aplidyna	8,55E-09
SNPL2	3-[Aip]-didemnina A	1,06E-O8
9LSHPI2(D)	3-[Hiv]-9-[D-Lac(OTBDMS)]-aplidyna	8,55E-08
9SISAPL1	7,8-[Spiro]-9-[izobutyrylo]-aplidyna	8,91 E-08
9SPSHPL1	3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[pyr]-aplidyna	9,38E-08
9SISHPL1	3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[izobutyrylo]-aplidyna	9,38E-08
9SASHPL1	3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[akryloilo]-aplidyna	9,39E-08

Spiro = [(5R)-1-(podstawnik na 9)-7-[(1R)-1-karboksy-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonan]^7-9

PL 208 651 B1 (1) Związek ten ujawniono w literaturze: J. Org. Chem., 2000, 65, 782-792. Synteza została opublikowana przed ich odkryciem. Org. Lett., 2000, vol. 0, nr 0, A-D.

Metodologia: według Berjeron, et al., Biochem. and Bioph. Res. Comm., 1984, 121, 3, 848-854. P388 = chłoniak mysi, A549 = ludzki rak płuc, HT29 = ludzki rak okrężnicy, MEL28 = ludzki czerniak, DU 145 = ludzki rak prostaty.

Lista skrótów

Różne: AA 1st Hip HIV Aip Lac LC HPLC TLC M.p. Rt Quant. ESI-MS

aminokwas izostatyna kwas hydroksyizowalerylopropionowy kwas hydroksyizowalerianowy kwas aminoizowalerylopropionowy kwas mlekowy chromatografia cieczowa wysokosprawna chromatografia cieczowa chromatografia cienkowarstwowa temperatura topnienia czas retencji wydajność ilościowa widmo masowe z jonizacją elektrospray

Grupy zabezpieczające

BN Boc TBDMS Z Pac

benzyl tert-butyloksykarbonyl tert-butylodimetylosilil benzyloksykarbonyl fenyloacetyl

Rozpuszczalniki

THF Hex ACN DCM EtOAc DMF MTBE Et2O t-BuOH TFA MeOH EtOH

tetrahydrofuran heksan acetonitryI dichlorometan octan etylu dimetyloformamid eter metylo-tert-butylowy eter dietylowy tert-butanol kwas trifluorooctowy metanol etanol

IPA izopropanol

Reagenty:

GDI HOBt HBTU	1,1'-karbonylodiimidazol 1-hydroksybenzotriazol N-tlenek heksafluorofosforanu N-[(1H-benzotriazol-1-ilo)(dimetyloamino)metyleno]-N-
BOP-C1 HATU	metanoaminiowego chlorek bis(2-okso-3-oksazolidynylo)fosfiniowy N-tlenek heksafluorofosforanu N-[(dimetyloamino)-1H-1,2,3 triazolo[4,5-b]pirydyn-1-
HOAt DCC DIPCDI TBAF Ach p-TsOH	- ylometyleno]-N-metylo-metano-aminiowego 1-hydroksy-7-aza-benzotriazol dicykloheksylokarbodiimid N,N'-diizopropylokarbodiimid fluorek tetrabutyloamoniowy kwas octowy kwas p-toluenosulfonowy

PL 208 651 B1

DMAP	4-dimetyloaminopirydyna
NMM	N-metylomorfolina
DIPEA	diizopropyloetyloamina
TEA	trietyloamina
TFA	kwas trifluorooctowy

Procedura ogólna

Wszystkie operacje przeprowadzano w atmosferze gazu obojętnego, argonu. Wszystkie stosowane rozpuszczalniki były klasy czystości chemicznie czysty lub czysty do HPLC (rozpuszczalnik do reakcji lub do oczyszczania). Rozpuszczalniki bezwodne stosowano w takiej postaci, jak dostarczył producent. Tetrahydrofuran destylowano bezpośrednio przed użyciem, w celu usunięcia stabilizatora. Wszystkie inne reagenty stanowiły związki komercyjne o najwyższej dostępnej czystości. Analityczną chromatografie cienkowarstwową (TLC) przeprowadzano na płytkach aluminiowych z żelem krzemionkowym Merck (60, F254) powleczonych wskaźnikiem fluorescencyjnym. Wywoływanie przeprowadzano z użyciem światła ultrafioletowego (254 nm), kwasu fosfomolibdenowego (5% wag./obj.) w 95% etanolu lub waniliny.

13

Widma protonowe i węglowe magnetycznego rezonansu jądrowego (¹H, ¹³C-NMR) rejestrowano spektrometrem Varian-300 z transformacją Fouriera, a przesunięcia chemiczne wyrażono w częściach na milion (ppm) względem CHCI3 użytego jako wzorzec wewnętrzny (7,26 ppm dla ¹H i 77,0 dla ¹³C). Multipletowość oznaczono jako singlet (s), dublet (d), dublet dubletów (dd), dublet trypletów (dt), tryplet (t), kwartet (q), multiplet (m) i szeroki singlet (bs), a stałe sprzężenia (J) wyrażono w Hz. Skręcalności optyczne (w stopniach) mierzono polarymetrem Jasco P1020. Widma masowe z jonizacją elektrospray (ESI-MS) otrzymano na aparacie Hewlett Packard serii 1100 MSD.

Analiza elementarna. Chromatografię kolumnową typu flash przeprawadzono na żelu krzemionkowym Merck 60 (240-400 mesh) lub RP C18 (40-63 μm) z użyciem układu rozpuszczalników wymienionych w indywidualnych eksperymentach.

Poniższe procedury przedstawiają syntezę półproduktów do otrzymywania aplidyny (SAPL), [Aiv]³-aplidyny (SNPL), [Hiv]³-aplidyny (SHPL), [Val]³-aplidyny (SVPL) oraz [MeVal]³-aplidyny (SMPL).

P r z y k ł a d 1

Synteza (4R,5S)-4-(tert-butoksykarbonyloamino)-5-metylo-3-oksoheptanianu benzylu (C4)

Do roztworu Boc-D-allolle-OH (15,26 g, 65,9 mmola) w suchym THF (200 ml) w 0°C w atmosferze argonu, dodano CDI (16,04 g, 98,96 mmola). Po 15 minutach mieszaninę pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej i mieszano przez okres 16 godz. Otrzymany roztwór ochłodzono do -78°C i dodano przez kaniulę do dobrze mieszanego roztworu litowego enolanu benzylowego ochłodzonego do -78°C (625 ml, 0,37 M) [otrzymany przez wkroplenie roztworu octanu benzylu (33,34 ml) w THF (165 ml) do roztworu diizopropyloamidku litu (0,36 M) w mieszaninie THF/heksan 3:1 (645 ml) w -78°C). Temperatura powinna być utrzymywana < -75°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano w -78°C przez 60 min. Następnie pozostawiono ją do osiągnięcia -10°C (30 min.), ponownie ochłodzono do -78°C i potraktowano nasyconym wodnym chlorkiem amonu (200 ml), następnie ekstrahowano DCM (3 x 500 ml) w temperaturze pokojowej. Połączone ekstrakty przemyto kolejno nasyconym wodnym NaHCO3 (500 ml) i solanką (200 ml). Po wysuszeniu (Na2SO4), a następnie usunięciu rozpuszczalnika otrzymano olej, który naniesiono na żel krzemionkowy C18 i załadowano na górę kolumny LC-RPC 18 [Lichroprep RPC-18 (40-60 mikronów)]. Eluowano stosując gradient ACN-H2O (60 do 100% ACN) i otrzymano produkt C4 w postaci bezbarwnego oleju (16,7 g, 70%).

[α]ο²⁰ -20,0 (c 1, CHCI3), TLC: Rf = 0,32 (Merck, RP-C18, ACN-H2O 7:3).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,77 (d, 3H), 0,94 (t, 3H), 1,25 (s, 9H), 1,60 (m, 1H), 1,90 (m, 2H),

3,58 (s, 2H), 4,47 (dd, 1H), 5,00 (d, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,35 (bs, 5H).

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 2

Synteza estru benzylowego (3S,4R,5S)-N-(tert-butoksykarbonylo)izostatyny (C3)

C4 (16,7 g, 45,9 mmola) rozpuszczono w metanolu (690 ml) w 0°C. Do mieszanego roztworu dodano borowodorek potasu (7,43 g, 137,8 mmola) i po 30 min. reakcję zakończono dodając wodny HCI (0,1 N) do pH 4 i ekstrahowano DCM (300 ml). Ekstrakt przemyto kolejno wodnym NaHCO3 (100 ml, nasyc.) i solanką (100 ml). Po wysuszeniu (Na2SO4), a następnie po usunięciu rozpuszczalnika otrzymano alkohol C3 (15,7 g, 93%) w postaci bezbarwnego oleju.

R_f = 0,45 (heksan-EtOAc 2:1); [a]_D = -9,5 (c 0,76, CHCI₃); R_f = 0,45 (EtOAc-heksan 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,81 (d, 3H), 0,90 (t, 3H), 1,20 (m, 1H), 1,36 (m, 1H), 1,40 (s, 9H),

1,90 (m, 1H), 2,55 (dd, 1H), 2,70 (dd, 1H), 3,20 (d, 1H), 3,61 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 4,40 (d, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,40 (bs, 5H).

P r z y k ł a d 3

Synteza Boc-(3S, 4R, 5S)-lst(TBDMS)-OBn (C2)

Do roztworu C3 (15,7 g, 42,9 mmola) w suchym DMF (65 ml) w 0°C dodano imidazol (8,77 g, 128,8 mmola), DMAP (1,57 g, 12,81 mmola) i TBDMS-CI (19,42 g, 128,8 mmola). Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej przez noc, następnie podzielono pomiędzy Et2O (200 ml) i kolejno przemyto wodnym HCI (100 ml, 0,1N), wodnym NaHCO3 (100 ml, nasyc.) i solanką (50 ml). Po wysuszeniu (Na2SO4) i usunięciu rozpuszczalnika, pozostałość oczyszczano za pomocą LC flash (żel krzemionkowy, heksan) otrzymując C2 (19,96 g, 97%).

[a]D = 10,6 (c 1,01, CHCI3); Rf = 0,73 (EtOAc-heksan 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,15 (s, 6H), 0,82 (s, 9H), 0,85 (d, 3H), 0,89 (t, 3H), 1,18 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,41 (s, 9H), 1,77 (m, 1H), 2,45 (dd, 1H), 2,60 (dd, 1H), 3,62 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,40 (d, 1H), 5,05 (d, 1H), 5,15 (d, 1H), 7,40 (bs, 5H).

P r z y k ł a d 4

Synteza Boc-(3S, 4R, 5S)-lst(TBDMS)-OH (C1)

Do roztworu C2 (10,48 g, 21,8 mmola) w THF (110 ml), odgazowanego i przedmuchanego argonem, dodano Pd/C 10% (2,096 g, 20% wagowych). Mieszaninę mieszano pod H2 (1 atm) przez 16 godzin, następnie przesączono przez teflonowy sączek 0,45 mm i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując 7,8 g w postaci bezbarwnego oleju. Po krystalizacji z ACN w -20°C otrzymano bezbarwne kryształy (6 g, 70%).

PL 208 651 B1

[a]²⁰D = 1,8 (c 0,594, DCM) [Lit. [a]_D = 1,74 (c, 2,64 CHCI₃). Synthesis, 1991, 294]; R_f = 0,45 (Merck HPTLC, RP-C 18, ACN-H2O 8:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,18 (s, 6H), 0,82 (s, 9H), 0,85 (d, 3H), 0,89 (t, 3H), 1,10-1,20 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,80 (m, 1H), 2,50 (m, 2H), 3,58 (m, 1H), 4,11 (m, 1H).

P r z y k ł a d 5

Synteza kwasu (2S)-2-tert-butylo(dimetylo)sililoksy-3-metylomasłowego (SAPLB4) γ OH OTBDMS

1) CI-TBDMS/lmid/DMF

2) KOH/H₂O/THF

Kwas (S)-2-hydroksy3-metylomasłowy

SAPLB4

Do mieszanego roztworu kwasu (S)-2-hydroksy-3-metylomasłowego (21,12 g, 181,9 mmola) w DMF (91 ml) w 0°C w atmosferze argonu dodano imidazol (27,24 g, 400,11 mmola) i DMAP (6,94 g,

54,56 mmola). Po 5 minutach dodano tert-butylodimetylochlorosilan (60,31 g, 400,11 mmola). Mieszaninę pozostawiono do ogrzania do 23°C i mieszano przez noc. Surową mieszaninę reakcyjną podzielono pomiędzy Et2O (250 ml) i wodny HCI (250 ml, 0,1N). Warstwę organiczną przemyto kolejno wodnym NaHCO3 (250 ml, nasyc.) i solanką (250 ml), wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując bis-sililowany produkt w postaci jasnożółtego oleju. Roztwór tego produktu w THF (100 ml) dodano wkraplając (10 min.) do zimnego (0°C) roztworu KOH (30,47 g, 543 mmola) w mieszaninie THF/H2O (543 ml : 181 ml). Po 40 minutach mieszaninę reakcyjną podzielono pomiędzy H2O (300 ml) i Et2O (500 ml). Warstwę wodną podzielono pomiędzy zimny (0°C) wodny HCI (200 ml, 3N) i EtOAc (5 x 250 ml). Połączone ekstrakty organiczne wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując SAPLB4 w postaci jasnożółtego oleju (38,38 g, 91%).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,02 (m, 6H), 0,90 (m, 15H), 2,08 (m, 1H), 4,06 (d, 1H).

P r z y k ł a d 6

Synteza estru benzylowego kwasu (4S)-4-tert-butylo(dimetylo)sililoksy-5-metylo-3-oksoheksanowego (SAPLB3)

Do roztworu kwasu (S)-2-(tert-butylodimetylosililoksy)-3-metylomasłowego (15,31 g, 65,9 mmola) w suchym THF (200 ml) w 0°C w atmosferze argonu dodano CDI (16,04 g, 98,96 mmola). Po 15 minutach mieszaninę pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej i mieszano w okresie 16 godzin. Otrzymany roztwór ochłodzono do -78°C i dodano przez kaniulę do dobrze mieszanego roztworu ochłodzonego do -78°C litowego enolanu benzylowego (625 ml, 0,37 M) [otrzymanego przez wkroplenie roztworu octanu benzylu (33,34 ml) w THF (165 ml) do roztworu diizopropyloamidku litu (0,36 M) w mieszaninie THF/heksan 3:1 (642 ml) w -78°C]. Temperatura powinna być utrzymywana < -75°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano w -78°C przez 60 minut. Następnie pozostawiono do osiągnięcia -10°C (30 min.), ponownie ochłodzono do -78°C i potraktowano wodnym roztworem chlorku amonu (200 ml, nasyc.), następnie ekstrahowano DCM (3 x 500 ml) w temperaturze pokojowej. Połączone ekstrakty przemyto kolejno wodnym NaHCO3 (500 ml, nasyc.) i solanką (200 ml). Po wysuszeniu (Na2SO4), a następnie usunięciu rozpuszczalnika otrzymano olej, który naniesiono na żel krzemionkowy C18 i załadowano na górę kolumny LC-RPC 18 (Lichroprep RPC-18, 40-60 mikronów). Eluowano stosując gradient ACN-H2O (60 do 100% ACN) i otrzymano SAPLB3 w postaci bezbarwnego oleju (16,1 g, 70%).

[a]^D20 -25 (c 0,5, MeOH), R_f = 0,32 (Merck, RP-C18, ACN-H₂O 7:3).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,02 (m, 6H), 0,92 (m, 15H), 1,92 (m, 1H), 3,63 (s, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,38 (d, 1H), 5,17 (d, 1H), 5,20 (d, 1H), 7,35 (bs, 5H).

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 7

Synteza estru benzylowego kwasu (4S)-4-tert-butoksykarbonyloamino-5-metylo-3-oksoheksanowego (SNPLB3)

Postępując według procedury opracowanej dla syntezy SAPLB3 z Boc-Val-OH (10 g, 46,0 mmola), otrzymano tytułowy związek po oczyszczeniu za pomocą LC flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc 10:1 do 5:1) w postaci oleju (6,9 g, 43%).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,77 (d, J = 7, 3H), 0,98 (d, J = 7, 3H), 1,44 (s, 9H), 2,22 (m, 1H),

3,58 (s, 2H), 4,31 (m, 1H), 5,03 (m, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,34 (bs, 5H).

ESI-MS, obliczono dla C19H27NO5: 349,19; znaleziono (m/z): 372,1 (M + Na)⁺.

P r z y k ł a d 8

Synteza estru benzylowego kwasu (2R,4S)-4-tert-butylo(dimetylo)sililoksy-2,5-dimetylo-3-oksoheksanowego (SAPLB2)

Ester SAPLB3 (15,12 g, 41,49 mmola) w suchym THF (43 ml) dodano wkraplając do roztworu diizopropyloamidku litu w -78°C (otrzymanego przez wkroplenie butylolitu (1,6 M roztwór w heksanie; 31,12 ml, 49,79 mmola) do diizopropyloaminy (7,26, 51,86 mmola) w suchym THF (83 ml) pod Ar w -78°C przez 30 minut). Mieszaninę mieszano przez 0,5 godz., po czym dodano jodometan (52,11 ml, 829,8 mmola). Mieszaninę pozostawiono do ogrzania do 23°C, po czym mieszanie kontynuowano przez 24 godziny. Dodano dodatkowo jodometan (2,67 ml, 42 mmola) i mieszaninę mieszano 24 godziny aż do zniknięcia materiału wyjściowego. Następnie mieszaninę podzielono pomiędzy wodny NH4CI (50 ml, nasyc.) i EtOAc (2 x 200 ml). Warstwę organiczną przemyto kolejno wodnym NaHCO3 (100 ml, nasyc), solanką (100 ml), wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono otrzymując żółty olej (12 g). Po oczyszczeniu za pomocą LC na żelu krzemionkowym stosując gradient heksan-Et2O 100:0 do 100:2 otrzymano czysty produkt (SAPLB2) w postaci diastereomerycznej mieszaniny epimerów na C2 (10 g, 63%).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,01 (s, 3H), 0,02 (s, 3H), 0,91 (m, 15H), 1,30 (d, 3H), 2,01 (m, H), 4,01 (m, 1H), 5,10 (d, 1H), 5,15 (d, 1H), 7,34 (bs, 5H).

P r z y k ł a d 9

Synteza estru benzylowego kwasu (2RS,4S)-4-tert-butoksykarbonyloamino-2,5-dimetylo-3-oksoheksanowego (SNPLB2)

Postępując według procedury opracowanej dla syntezy SAPLB2 z SNPLB3 (10 g, 46,0 mmola), otrzymano tytułowy związek po oczyszczeniu za pomocą LC flash (żel krzemionkowy, gradient heksanEtOAc 10:1 do 5:1) w postaci diastereomerycznej mieszaniny (1:1) epimerów przy C2 (4,4 g, 62%).

PL 208 651 B1

Rf = 0,4 i 0,37 (żel krzemionkowy, heksan/EtOAc 3:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,72 (m, 3H), 0,86 (m, 3H), 1,37 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 2,22 (m, 1H), 3,79 (m, 1H), 4,43 (m, 1H), 5,02 (m, 1H), 5,16 (m, 2H), 7,34 (m, 5H).

ESI-MS, obliczono dla C20H29NO5: 363,20; znaleziono (m/z): 364,1 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 10

Synteza Leu-Pro-OBn w postaci soli chlorowodorkowej (A5)

Do kolby zawierającej Boc-Leu-Pro-OBn (113,8 g, 272 mmola) dodano roztwór chlorowodoru w dioksanie (209 ml, 5,3 n) i mieszanie kontynuowano przez 5 godzin aż do zakończenia konwersji widocznej na TLC (zniknięcie materiału wyjściowego: Rf = 0,47 (heksan-EtOAc 2:1, żel krzemionkowy). Roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a otrzymany olej rozcierano z CHCI3 (3 x 50 ml), CHCI3-MTBE (30-50 ml), MTBE (50 ml) i heksanem (50 ml). Pozostałość wysuszono w próżni (16 godzin) do usunięcia resztek HCI i otrzymano tytułowy związek w postaci białego ciała stałego. A5 (96,4 g, 100%) użyto bezpośrednio w następnym etapie bez dalszego oczyszczania.

[α]ο²² -85,21 (c = 1, CHCI3).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,92 (d, J = 7,1, 3H), 0,96 (d, J = 7,1, 3H), 1,55 (m, 1H), 1,82-2,14 (m, 5H), 2,26 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 4,32 (bs, 1H), 4,64 (m, 1H), 5,01 (d, J = 11,5, 1H), 5,16 (d, J = 11,5, 1H), 7,34 (m, 5H), 8,40 (bs, 3H).

ESI-MS, obliczono dla C18H26N2O3: 318,19; znaleziono (m/z): 319,2 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 11

Synteza TBDMS-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA4)

Do kolby zawierającej odgazowany roztwór SAPLB2 (20 g, 52,88 mmola) w bezwodnym THF (158 ml), posiadającej rurki wlotu-wylotu gazu, dodano 10% Pd/C (6,0 g, 30% wagowo) pod argonem. Następnie, przepuszczano strumień wodoru w ciągu 8 godzin aż do całkowitej konwersji widocznej na TLC (zanik materiału wyjściowego). Przez otrzymaną mieszaninę przepuszczano argon usuwając wodór, po czym przesączono pod argonem przez warstwę celitu na lejku ze spiekiem do ochłodzonej kolby (-5°C) zawierającej HOBt (7,17 g, 52,88 mmola) i HBTU (21,0 g, 55,53 mmola). W celu przemycia celitu dodano dodatkowo THF (158 ml). Do mieszaniny (-5°C) dodano NMM (5,8 ml, 52,88 mmola) i po 5 minutach ochłodzony świeżo przygotowany roztwór (-5°C) zawierający A5 (31,96 g, 89,81 mmola), NMM (16 ml, 145 mmola) i DMF (120 ml). Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do rt

PL 208 651 B1 i mieszano przez 14 godz. Surową reakcję przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Do pozostałego roztworu DMF dodano EtOAc (300 ml) i przemyto kolejno wodnym HCI (200 ml, 0,1N), wodnym NaHCO3 (200 ml, nasyc.) i solanką (300 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono. Otrzymany materiał pokryto żelem krzemionkowym (EtOAc jako rozpuszczalnik) i poddano chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym eluując gradientem EtOAc : heksan 1:5 do 1:1 i uzyskano SAPLA4 (26,8 g, 78%) w postaci bezbarwnego oleju. Produkt stanowił mieszaninę diastereomerów 1:1.

Rf = 0,5 (żel krzemionkowy, heksan/EtOAc 1:1, ciemnoniebieski/wanilina).

IR (film, DCM) 3295, 3060 i 3040, 2957, 2934, 2880, 2858, 1736, 1634, 1528, 1454, 1387, 1252, 1171, 1070 cm^-1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,01 (s, 3H), 0,03 (s, 3H), 0,85-0,97 (m, 12H), 0,92 (s, 9H), 0,93 (s, 9H), 1,33 (d, J = 7,0, 3H), 1,37 (d, J = 7,0, 3H), 2,40-2,65 (m, 3H), 1,92-2,28 (m, 4H), 3,64-3,76 (m, 1H), 4,69-4,82 (m, 1H), 5,05 (d, J = 11,8, 1H), 5,20 (d, J = 11,8, 2H), 6,73 (d, J = 8,9, 1H), 6,98 (d, J = 9,0, 1H), 7,34 (bs, 5H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ -5,24, -4,81, 15,70, 17,43, 17,57, 18,84, 21,48, 21,61, 18,05, 23,28, 24,43, 24,55, 24,76, 25,68, 28,87, 31,36, 31,77, 41,27, 41,67, 48,68, 48,55, 48,89, 58,71, 66,84, 83,84, 83,29, 128,09, 128,47, 135,40, 169,24, 170,67, 170,89, 171,16, 171,20, 209,11, 211,62. m/z (FAB) 611,5 [(M + Na)⁺, 15], 589,5 [(M + H)⁺, 100]; m/z (FABHRMS) 589,369045,

C32H52N2O6Si odpowiada (M + H)⁺ 589,367291.

P r z y k ł a d 12

Synteza Boc-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA4)

Do odgazowanego roztworu SNPLB2 (2,3 g, 6,32 mmola) w suchym THF (30 ml) dodano 10% Pd/C (0,74 g, 16% wag.) i następnie wodorowano pod ciśnieniem atmosferycznym przez 5 godz. 30 min. aż do zakończenia konwersji, według TLC (zanik materiału wyjściowego). Otrzymaną mieszaninę przesączono przez warstwę celitu i dodano dodatkowy THF (20 ml), aby przemyć celite. Do przesączonego roztworu (w -5°C) dodano BOP-CI (1,77 g, 6,96 mmola) i NMM (765 μΐ, 6,91 mmola) i po minutach ochłodzony (-5°C) roztwór zawierający A5 (3,15 g, 8,85 mmola), NMM (1,88 ml, 8,84 mmola) i DMF (14 ml), przygotowany 10 minut wcześniej. Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do rt i mieszano przez 17 godz. Surową reakcję przesączono, a ciało stałe przemyto EtOAc (100 ml). Połączone roztwory organiczne przemywano kolejno wodnym KHSO4 (50 ml, 10%), wodnym NaHCO3 (50 ml, nasyc.) i solanką (50 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono w próżni, a otrzymany materiał poddano chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym eluując mieszaniną EtOAc : heksan z gradientem od 1:4 do 1:1, uzyskując SNPLA4 (750 mg, 20%) w postaci białego ciała stałego. Produkt stanowił mieszaninę diastereomerów.

Rf = 0,26 i 0,17 (żel krzemionkowy, heksan/EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,74-1,04 (m, 12H),1,31-1,70 (m, 6H), 1,43 (s, 9H), 2,01 (m, 3H), 2,22 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 3,77 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,69 (m, 1H), 5,14 (m, 2H), 6,75 (d, J = 8,7, 1H), 7,04 (d, J = 7,8, 1H), 7,34 (bs, 5H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 16,74, 16,91, 20,22, 21,94, 23,53, 24,80, 25,06, 28,48, 29,14, 41,29, 41,41, 46,98, 49,45, 49,64, 51,26, 59,06, 63,70, 64,27, 67,08, 79,86, 80,10, 128,32, 128,48, 128,74, 135,74, 156,28, 169,15, 169,32, 171,18, 171,91.

ESI-MS, obliczono dla C31H47N3O7: 573,34; znaleziono (m/z): 574,4 [(M + H)]⁺.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 13

Synteza Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPLA4)

Do kolby zawierającej A5 (2,06 g, 4,78 mmola) w DCM (5 ml) w 0°C, dodano mieszając NMM (506 mg, 5,01 mmola). Po 15 minutach dodano w porcjach kwas (2S)-2-hydroksy-3-metylobutanowy (kwas hydroksyizowalerianowy) (487 mg, 4,78 mmol) i DCC (986 mg, 4,78 mmola). Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do 23°C i mieszano przez 14 godzin. Zawiesinę rozcieńczono CHCI3 (25 ml) i podzielono pomiędzy kwas solny (10 ml, 1N), wodny NaHCO3 (10 ml, nasyc.) i solankę (10 ml), wysuszono (Na2SO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą LC flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc 1:1 do 1:3) otrzymując SHPLA4 (1,13 g, 80%) w postaci biał ego ciał a stał ego.

Rf = 0,46 (heksan-EtOAc 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,81, (d, J = 7,0, 3H), 0,92 (m, 6H), 0,97 (d, J = 7,0, 3H), 1,42 (m, 1H), 1,63 (m, 2H), 2,00 (m, 3H), 2,19 (m, 2H), 3,60 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,88 (d, J = 4,8, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,80 (m, 1H), 5,06 (d, J = 12,3, 1H), 5,14 (d, J = 12,3, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,41 (d, J = 8,4, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 15,32, 19,08, 21,38, 23,11, 24,41, 24,69, 28,77, 31,31, 40,54, 46,81, 48,20, 58,82, 66,69, 75,76, 127,93, 128,14, 128,37, 135,28, 171,39, 171,95, 173,94.

P r z y k ł a d 14

Synteza Boc-Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA4)

Do kolby zawierającej Boc-walinę-OH (652 mg, 3 mmola) w DCM (6 ml) w 0°C dodano NMM (0,35 ml, 3,15 mmola). Po 15 minutowym mieszaniu dodano w porcjach A5 (1,065 g, 3 mmola), HOBt (405 mg, 3,0 mmola) i DCC (650 mg, 3,15 mmola). Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do 23°C i mieszano przez 14 godzin. Zawiesinę rozcieńczono DCM (25 ml) i przemyto kolejno wodnym KHSO4 (2 x 10 ml, 10%), wodnym NaHCO3 (2 x 10 ml, nasyc.) i solanką (10 ml), wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą LC flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc 2:1 do 1:1) otrzymując SVPLA4 (1,48 g, 93%) w postaci biał ego ciał a stał ego.

Rf = 0,57 (heksan-EtOAc 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,83-0,95 (m, 12H), 1,2-1,4 (m, 1H), 1,42 (s, 9H), 1,40-1,51 (m, 1H), 1,60-1,75 (m, 1H), 1,82-2,20 (m, 5H), 3,50-3,60 (m, 1H), 3,74-3,78 (m, 1H), 3,91-3,96 (m, 1H), 4,52-4,57 (s, 1H), 4,75-4,77 (m, 1H), 5,04 (bs, 1H), 5,05 (d, J = 12,3, 1H), 5,17 (d, J = 12,3, 1H), 6,60 (d, J = 8,4, 1H), 7,26-7,35 (m, 5H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 7,61, 19,19, 21,66, 23,23, 24,43, 24,78, 24,87, 25,55, 28,20, 28,87, 30,91, 33,86, 41,68, 46,73, 48,86, 58,77, 59,74, 66,82, 79,66, 128,08, 128,21, 128,46, 135,47, 155,66, 170,83, 171,33, 171,60.

ESI-MS, obliczono dla C28H43N3O6: 517,32; znaleziono (m/z): 518,2 [(M + H)]⁺.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 15

Synteza Boc-Me-Val-Leu-Pro-OBn (SMPLA4)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SVPLA4, wychodząc z A5 (1,07 mg, 3,00 mmola) i Boc-(Me)Val-OH (694 mg, 3,00 mmola), otrzymano tytułowy zwią zek w postaci biał ego ciała stał ego (1,39 g, 87%) po oczyszczeniu za pomocą LC flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc2:1 do 1:1).

Rf = 0,51 (heksan-EtOAc 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,83-0,91 (m, 12H), 1,45 (s, 9H), 1,93-2,03 (m, 4H), 2,18-2,22 (m, 2H), 2,76 (s, 3H), 3,40-3,50 (m, 2H) 3,55-3,62 (m, 1H), 3,75-3,85 (m, 1H), 4,00-4,10 (m, 1H), 4,50-4,60 (m, 1H), 4,70-4,82 (m, 1H), 5,07 (d, J = 11,2, 1H), 5,24 (d, J = 11,2, 1H), 6,20 (m, 0,5H), 6,50 (m, 0,5 H), 7,26-7,35 (m, 5H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 18,43, 19,77, 21,53, 23,23, 24,47, 24,77, 25,89, 25,30, 28,85, 41,25, 46,67, 48,51, 58,75, 64,05, 66,79, 128,06, 128,18, 128,44, 135,49, 170,12, 170,80, 171,66.

ESI-MS, obliczono dla C29H45N3O6: 531,33; znaleziono (m/z): 532,3 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 16

Synteza Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA3)

Do kolby zawierającej SAPLA4 (15,86 g, 26,97 mmola) dodano przezroczysty, bezbarwny roztwór fluorku tetrabutyloamoniowego, 1M w THF (80,9 ml, 80,9 mmola), i mieszaninę energicznie mieszano w rt przez 15 minut (lub do całkowitej konwersji sprawdzanej za pomocą TLC). Reakcję zakończono dodając H2O (4 ml) i żel krzemionkowy (50 g). Surowy materiał zatężono i oczyszczano za pomocą LC flash (żel krzemionkowy, gradient heksan : EtOAc 2:1 do 1:1) i uzyskano SAPLA3 (12,2 g, 95%) w postaci białego ciała stałego (mieszanina diastereomerów).

Rf = 0,36 i 0,29 (żel krzemionkowy, heksan : CHCI3: IPA 1:5:1).

IR (film, DCM) v 3450-3293, 3060 i 3040, 2961, 2946, 2883, 2852, 1746, 1632, 1533, 1454, 1357, 1387, 1265, 1173, 1095, 1045, 1018 cm^-1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,71 (d, J = 6,8, 3H), 0,81 (d, J = 6,6, 3H), 0,88 (d, J = 6,5, 3H), 0,91 (d, J = 6,5, 3H), 0,94 (d, J = 6,5, 3H), 0,99 (d, J = 7,1, 3H), 1,07 (d, J = 6,5, 3H), 1,36 (d, 6,5, 3H), 1,43-1,52 (m, 2H), 1,60-1,66 (m, 1H), 1,93-2,10 (m, 3H), 2,12-2,23 (m, 2H), 3,53-3,58 (m, 1H), 3,65 (q, J = 7,1, 1H), 3,67-3,73 (m, 1H), 3,89 (q, J = 7,1, 1H), 3,96 (d, J = 4,2, 1H), 4,22 (d, J = 4,1, 1H), 4,54-4,56 (m, 1H), 4,58-4,62 (m, 1), 4,69-4,73 (m, 1H), 5,1 (d, J = 12,1, 1H), 5,18 (d, J = 12,1, 1H), 6,57 (d, J = 8,5, 1H), 6,63 (d, J = 8,5, 1H), 7,28-7,38 (m, 5H).

PL 208 651 B1 ¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 14,06, 14,26, 15,85, 16,48, 20,07, 20,53, 22,02, 22,25, 25,37, 25,46, 29,45, 29,53, 31,59, 32,09, 41,13, 42,29, 49,93, 50,91, 51,02, 59,52, 67,60, 81,02, 128,78, 129,2, 169,48, 171,58, 172,17, 209,76.

m/z (FAB) 497,4 [(M + Na)⁺, 12], 475,5 [(M + H)⁺, 100].

m/z (FABHRMS) 497,263162, C26H38N2O6 odpowiada (M + Na)⁺ 497,262757.

Analiza dla C₂₆H₃₈N₂O₆:

obliczono: C, 65,82; H, 8,02; N, 5,91;

znaleziono: C, 65,97; H, 8,18; N, 5,76.

P r z y k ł a d 17

Synteza Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA3)

Do roztworu SNPLA4 (750 mg, 1,30 mmola) w dioksanie (15 ml, bezwodny) dodano roztwór chlorowodoru w dioksanie (39 ml, 5,3N) i mieszaninę mieszano przez 5 godzin, aż do całkowitej konwersji, według TLC (zanik materiału wyjściowego). Roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a otrzymany olej rozcierano z CHCI3 (15 ml), MTBE (15 ml) i heksanem (15 ml). Pozostał o ść wysuszono w próżni usuwając resztki HCI i otrzymano piankowe ciało stałe. SNPLA3 (660 mg, ilościowo) użyto bezpośrednio w następnym etapie bez dalszego oczyszczania.

ESI-MS, obliczono dla C26H39N3O5: 473,29; znaleziono 474,2 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 18

Synteza Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA3)

Do kolby zawierającej SVPLA4 (215 mg, 0,41 mmola) dodano roztwór chlorowodoru w dioksanie (1,5 ml, 5,3N) i mieszaninę mieszano przez 5 godzin aż do całkowitej konwersji według TLC. Roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a otrzymany olej rozcierano z CHCI3 (5 ml), MTBE (5 ml) i heksanem (5 ml). Pozostałość wysuszono w próżni usuwając resztki HCI i otrzymano piankowate ciało stałe SVPLA3 (185 mg, ilościowo), które użyto bezpośrednio w następnym etapie bez dalszego oczyszczania.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,86-0,90 (m, 6H), 1,04 (d, J = 6,3, 3H), 1,12 (d, J = 6,3, 3H), 1,45-1,55 (m, 1H), 1,60-1,80 (m, 2H), 1,82-2,11 (m, 2H), 2,11-2,25 (m, 1H), 2,25-2,40 (m, 1H), 3,50-3,70 (m, 1H), 3,80-3,95 (m, 2H), 4,52-4,57 (s, 1H), 4,70-4,85 (m, 1H), 5,05 (d, J = 12, 1H), 5,20 (d, J = 12,3, 1H), 7,27-7,37 (m, 5H), 7,91 (m, 1H), 8,62 (bs, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 18,57, 18,79, 21,83, 23,11, 24,50, 24,67, 24,90, 25,34, 28,92,

30,23, 33,25, 40,40, 47,04, 49,46, 49,94, 59,26, 60,02, 66,88, 128,16, 128,27, 128,51, 135,48, 167,54,

170,80, 171,94.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 19

Synteza (Me)Val-leu-Pro-OBn (SMPLA3)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SVPLA3, wychodząc z SMPLA4 (940 mg, 1,94 mmola) otrzymano tytułowy związek (828 mg, ilościowo) w postaci białego ciała stałego. Ten produkt użyto bezpośrednio w następnym etapie bez dalszego oczyszczania.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,93 (d, J = 6,3, 6H), 1,07 (d, J = 6,3, 3H), 1,21 (d, J = 6,3, 3H), 1,47 (m, 1H), 1,73 (m, 2H), 2,00 (m, 3H), 2,23 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 2,83 (bs, 3H), 3,56-3,65 (m, 2H), 3,77 (m, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,66 (m, 1H), 5,07 (d, J = 12,3, 1H), 5,19 (d, J = 12,3, 1H), 7,27-7,38 (m, 5H), 7,90 (m, 1H), 9,11 (m, 0,5H), 9,61 (m, 0.5H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 13,98, 18,37, 19,57, 21,33, 22,52, 23,16, 24,74, 28,77, 29,78, 31,54, 32,54, 39,87, 46,75, 50,09, 58,91, 66,85, 122,12, 128,06, 128,24, 128,47, 135,43, 166,22, 170,73, 171,54.

ESI-MS, obliczono dla C24H38CIN3O4: 431,2; znaleziono (m/z): 432,2 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 20

Synteza Boc-lst(TBDMS)-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA2)

Do roztworu SAPLA3 (12,2 g, 25,44 mmola) w bezwodnym DCM (75 ml) w -5°C pod argonem dodano w porcjach DMAP (0,932 g, 7,6 mmola), C1 (11,89 g, 30,53 mmola) i DCC (6,613 g, 32,05 mmola), utrzymując temperaturę < 5°C (łaźnia lód z solą). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 14 godzin w -5°C, po czym przesączono i zatężono. Surowy materiał rozcierano z ACN, ochłodzono (-10°C), przesączono i zatężono ponownie. Otrzymany materiał rozpuszczono w EtOAc (400 ml) i przemyto kolejno wodnym KHSO4 (2 x 200 ml, 10%), solanką (200 ml), wodnym NaHCO3 (200 ml, nasyc), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując bezbarwny olej, który poddano chromatografii na żelu krzemionkowym eluując heksanem-EtOAc z gradientem od 3:1 do 2:1, uzyskując SAPLA2 (19,35 g, 90%) w postaci białej pianki (mieszanina diastereomerów).

IR (film, DCM) v 3365-3200, 3069, 3038, 2959, 2930, 2882, 2857, 1746, 1688, 1640, 1533, 1456, 1389, 1258, 1171, 1086 cm^-1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,01 (s, 3H), 0,03 (s, 3H), 0,05 (s, 3H), 0,07 (s, 3H), 0,77-1,03 (m, 18H), 0,84 (s, 9H), 0,85 (s, 9H), 1,33 (d, J = 7,4, 3H), 1,32-1,36 (m, 2H), 1,49 (d, J = 7,5, 3H), 1,38-1,62 (m, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,44 (s, 9H), 1,51-1,77 (m, 1H), 1,88-2,37 (m, 3H), 2,172,33 (m, 2H), 2,47-2,74 (m, 2H), 3,34-3,72 (m, 1H), 3,72-3,82 (m, 1H), 3,99-4,40 (m, 1H), 4,03-4,16 (m, 1H), 4,49 (d, J = 10,3, 1H), 4,54-4,59 (m, 1H), 4,63-4,70 (m, 2H), 4,75 (d, J = 4,5, 1H), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,95-5,19 (m,

PL 208 651 B1

2H), 5,22 (d, J = 5,2, 1H), 5,32 (d, J = 10,5, 1H), 6,38 (d, J = 10,9, 1H), 6,71 (d, J = 7,4, 1H), 6,76 (d, J = 8,4, 1H), 8,60 (d, J = 9,5, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ -5,05, -4,49, 11,83, 12,03, 13,01, 13,51, 13,83, 14,08, 16,92,

17,10, 17,85, 19,14, 19,65, 21,57, 22,09, 22,96, 23,28, 24,36, 24,60, 24,85, 25,73, 26,97, 27,33,

28,35, 28,46, 28,93, 29,09, 29,65, 34,12, 34,16, 40,45, 40,85, 41,18, 42,20, 46,74, 46,16, 47,99,

48,34, 48,90, 49,42, 57,62, 58,81, 58,96, 60,46, 66,62, 66,88, 68,18, 69,69, 78,98, 79,24, 79,84,

82,95, 128,08, 128,49, 135,48, 135,61, 155,85, 158,27, 157,44, 168,40, 169,07, 170,65, 170,86, 171,42, 171,79, 203,09, 205,97.

m/z (FAB) 846,6 [(M + H)⁺, 15], 746,6 (100);

m/z (FABHRMS) 868,516630, C45H75N3O10Si odpowiada (M + Na)⁺ 868,511930.

P r z y k ł a d 21

Synteza Boc-lst(TBDMS)-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA2)

Do kolby zawierającej SNPLA3 (chlorowodorek) (660 mg, 1,12 mmola) w DCM (15 ml, bezwodny) w 0°C dodano NMM (0,19 ml). Po 15 minutach dodano w porcjach C1 (632 mg, 1,62 mmola), HOBT (266 mg, 1,73 mmola) i DCC (331 mg, 1,60 mmola). Kolbę pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej i mieszanie kontynuowano przez noc. Surową mieszaninę reakcyjną podzielono pomiędzy DCM (50 ml) i wodny KHSO4 (2 x 20 ml, 10%). Warstwę organiczną przemyto kolejno wodnym NaHCO3 (2 x 20 ml, nasycony) i solanką (20 ml), wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymane białe ciało stałe oczyszczano za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc 4:1) uzyskując tytułowy związek w postaci białego ciała stałego (700 mg, 73%, mieszanina diastereoizomerów).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,05 (s, 3H), 0,08 (s, 3H), 0,09 (s, 3H), 0,68-1,05 (18H, m), 0,87 (9H, s), 1,05-1,85 (12H, m), 1,42 (9H, s), 1,85-2,10 (3H, m), 2,11-2,31 (2H, m), 2,32-2,46 (2H, m), 2,47-2,60 (m, 2H), 3,34-3,90 (2H, m), 3,93-4,30 (2H, m), 4,50-4,89 (6H, m), 4,90-5,12 (2H, m), 5,07 (d, J = 12,2, 2H), 5,18 (d, J = 12,2, 2H), 5,60 (1H, d, J = 9,7), 5,67 (1H, d, J = 10,2), 5,89 (1H, d, J = 11,2), 6,56 (1H, d, J = 7,3), 6,70 (1H, d, J = 8,3), 6,76 (1H, d, J = 6,8), 6,94 (d, J = 6,8, 1H), 7,01-7,19 (m, 1H), 7,32 (bs, 5H), 8,17 (1H, d, J = 7,8), 8,28 (d, J = 7,8, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C45H79N4O9Si: 844,54; znaleziono (m/z): 845,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 22

Synteza Boc-lst(TBDMS)-Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPLA2)

PL 208 651 B1

Według procedury opisanej dla syntezy SAPLA2, wychodząc z SHPLA4 (850 mg, 2,0 mmola) i C1 (935 mg, 2,4 mmola), po oczyszczeniu za pomoc ą LC typu flash (ż el krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc 3:1 do 2:1) otrzymano tytułowy związek (1,53 g, 97%).

Rf = 0,63 (heksan-EtOAc 2:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): mieszanina rotamerów BocNH: δ 0,04 (s, 3H), 0,06 (s, 3H), 0,88 (s, 9H), 0,78-1,04 (m, 18H), 1,10-2,80 (m, 11H), 1,44 (s, 9H), 1,46 (s, 9H), 3,57 (m, 2H), 3,74 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,23 (d, J = 4,8, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,90 (d, J = 10, 1H), 5,05 (m, 1H), 5,20 (d, J = 10, 1H), 5,23 (d, J = 10, 1H), 6,64 (d, J = 6,4, 1H), 6,88 (d, J = 8,6, 1H), 7,32 (m, 5H), 8,54 (d, J = 8,3, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ -5,14, -4,58, 11,84, 12,97, 17,78, 17,92, 18,98, 21,05, 23,11, 23,49, 25,61, 26,92, 28,36, 28,70, 30,12, 33,68, 38,72, 42,86, 46,51, 48,18, 58,67, 60,24, 66,52, 71,14, 79,40, 82,66, 127,96, 128,01, 128,33, 135,36, 157,30, 169,92, 171,10, 171,69, 171,97.

ESI-MS, obliczono dla C42H71N3O9: 789,50; znaleziono 790,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 23

Synteza Boc-lst(TBDMS)-Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA2)

Według procedury opisanej dla syntezy SNPLA2, wychodząc z SVPLA3 (chlorowodorek) (1,2 g, 2,64 mmola) i C1 (1,23 g, 3,17 mmola), DCC (654 mg, 3,17 mmola), HOBt (464 mg, 3,43 mmola), NMM (0,35 ml) i DCM (6 ml). Po oczyszczeniu za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc 3:1 do 2:1) otrzymano tytułowy związek w postaci białego ciała stałego (1,87 g, 89%).

¹H NMR (500 MHz, CDCI3): δ 0,07 (bs, 6 H), 0,81-0,96 (m, 27H), 1,11-1,38 (m, 3H), 1,39-1,47 (bs, 7H), 1,51 (bs, 3H), 1,58-1,70 (m, 3H), 1,70-1,84 (m, 1H), 1,86-2,60 (m, 4H), 2,28-2,58 (m, 2H), 3,58-3,62 (m, 1H), 3,62-3,73 (m, 1H), 3,73-3,90 (m, 1H), 4,05-4,12 (m, 1H), 4,13-4,19 (m, 1H), 4,19-4,23 (m, 1H), 4,49-4,54 (m, 1H), 4,77-5,06 (m, 2H), 5,18 (d, J = 12,3, 1H), 5,55 (bs, 1H), 6,44-6,61 (m, 2 H), 7,30-7,35 (m, 5 H), 7,94-7,98 (m, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C42H72N4O8Si: 788,51; znaleziono (m/z): 789,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 24

Synteza Boc-lst(TBDMS)-(Me)Val-Leu-Pro-OBn (SMPLA2)

PL 208 651 B1

Do kolby zawierającej SMPLA3 (chlorowodorek) (176 mg, 0,38 mmola) w DCM (2 ml, bezwodny) w 0°C dodano NMM (41 μ!, 0,38 mmola). Po 15 min. dodano w porcjach C1 (176 mg, 0,46 mmola) i DCC (93 mg, 0,46 mmola). Kolb ę pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej i mieszanie kontynuowano przez noc. Mieszaninę reakcyjną podzielono pomiędzy DCM (10 ml) i wodny KHSO4 (2 x 5 ml, 10%). Warstwę organiczną przemyto kolejno wodnym NaHCO3 (2 x 5 ml, nasycony), solanką (5 ml), wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymane białe ciało stałe oczyszczano za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc 3:1 do 2:1) otrzymując SMPLA2 (127 mg, 42%) w postaci białego ciała stałego.

Rf = 0,51 (heksan-EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ -0,08 (s, 3 H), 0,05 (s, 3H), 0,75-0,86 (m, 27H), 1,00-1,43 (m, 11H), 1,52-1,65 (m, 1H), 1,68-1,80 (m, 1H), 1,83-2,01 (m, 3H), 2,08-2,24 (m, 2H), 2,40 (m, 2 H), 2,87 (s, 3H), 3,50-3,57 (m, 3H), 3,71-3,76 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 4,47-4,63 (m, 4H), 5,01 (d, J = 12,9, 1H), 5,11 (d, J = 12,9, 1H), 6,41 (d, J = 7,8, 0,5 H), 6,62 (d, J = 7,8, 1 H), 7,01 (d, J = 7,8, 0,5 H), 7,23-7,28 (m, 5 H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,56, 13,57, 13,98, 17,83, 18,87, 19,46, 21,77, 22,94, 23,11,

24,50, 24,71, 24,80, 25,64, 25,76, 25,97, 27,29, 28,18, 28,75, 30,40, 34,18, 39,28, 40,85, 46,58, 48,61, 57,03, 58,65, 62,26, 66,63, 69,21, 78,72, 127,92, 128,05, 128,11, 128,33, 135,42, 155,91, 169,76, 170,48, 171,56, 172,01.

ESI-MS, obliczono dla C43H74N4O8Si: 802,53; znaleziono (m/z): 825,5 (M + Na)⁺.

P r z y k ł a d 25

Synteza Ist-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA1)

Do roztworu zawierającego SAPLA2 (19,32 g, 22,8 mmola) w bezwodnym dioksanie (78 ml) dodano roztwór chlorowodoru w bezwodnym dioksanie (4,2N, 220 ml, 924 mmola). Otrzymany roztwór mieszano w 21°C przez 4,30 godz., aż do całkowitego zniknięcia materiału wyjściowego (TLC). Następnie, roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość rozpuszczono w DCM (25 ml) i zatężono usuwając pozostały HCI. Otrzymaną pozostałość wysuszono pod próżnią aż do całkowitego usunięcia HCI (3 godz.) otrzymując 17,3 g SAPLA1 (15,1 g, ilościowo) w postaci białej pianki (mieszanina diastereoizomerów).

P r z y k ł a d 26

Synteza Ist-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA1)

PL 208 651 B1

Według procedury opisanej dla syntezy SAPLA1, wychodząc z SNPLA2 (700 mg, 0,82 mmola) otrzymano, po strąceniu Et2O, tytułowy związek w postaci białego ciała stałego (545 mg, ilościowo) (mieszanina diastereoizomerów).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,86-1,04 (m, 18H), 1,02-1,22 (m, 3H), 1,23-1,58 (m, 5H), 1,60-1,80 (m, 2H), 1,82-2,01 (m, 3H), 2,24 (m, 2H), 2,40-2,85 (m, 2H), 3,24 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,60 (m, 1H), 3,70-4,05 (m, 2H), 4,46 (m, 2H), 4,47-4,75 (m, 2H), 5,10 (bs, 2H), 7,34 (bs, 5H), 7,98 (bs, 1H), 8,10 (bs, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C34H54N4O7: 630,40; znaleziono (m/z): 631,4 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 27

Według procedury opisanej dla syntezy SAPLA1, wychodząc z SHPLA2 (1,53 g, 1,94 mmola) otrzymano, po wytrąceniu za pomocą Et2O, tytułowy związek w postaci białego ciała stałego (1,12 g, ilościowo).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,86-1,04 (m, 18H), 1,10-1,22 (m, 3H), 1,42 (m, 2H), 1,70 (m, 2H), 1,97 (m, 3H), 2,24 (m, 2H), 2,83 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 3,34 (m, 1H), 3,61 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 4,56 (m, 2H), 4,75 (m, 1H), 5,04 (d, J = 11, 1H), 5,18 (d, J = 11, 1H), 7,34 (bs, 5H), 8,21 (bs, 3H).

ESI-MS, obliczono dla C31H49N3O7: 575,36; znaleziono (m/z): 576,3 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 28

Synteza lst-Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA1)

Według procedury opisanej dla syntezy SAPLA1, wychodząc z SVPLA2 (1,87 g, 2,36 mmola) otrzymano, po strąceniu Et2O, tytułowy związek w postaci białego ciała stałego (1,40 g, ilościowo) (mieszanina diastereoizomerów).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,01 (m, 15H), 1,01-1,10 (m, 3H), 1,20-1,79 (m, 5H), 1,81-2,05 (m, 4H), 2,05-2,15 (m, 2H), 2,50-2,68 (m, 2H), 2,82-3,1 (m, 1H), 3,20-3,35 (m, 1H), 3,50-3,70 (m, 1H), 3,80-3,90 (m, 1H), 4,18-4,30 (m, 1H), 4,35-4,45 (m, 1H), 4,45-4,55 (m, 1H), 4,60-4,70 (m, 1H), 5,02 (d, J = 12,3, 1H), 5,15 (d, J = 12,3, 1H), 7,28-7,38 (m, 5H), 7,5 (bs, 1H), 7,9 (bs, 3H), 8,15 (bs, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 10,81, 14,67, 18,29, 19,32, 21,48, 23,14, 24,48, 24,76, 25,81, 30,29, 33,41, 40,31, 46,96, 49,35, 59,14, 59,94, 60,67, 66,94, 128,11, 128,32, 128,54, 135,32, 171,58, 171,74, 171,80, 172,57.

ESI-MS, obliczono dla C31H50N4O6: 574,35; znaleziono (m/z): 575,3 (M + H)⁺.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 29

Ester fenacylowy N-tert-butylokarbonylotreoniny (D3)

Do mieszanej zawiesiny Boc-Thr-OH (21,91 g, 0,1 mola) w EtOAc (200 ml) w 0°C dodano TEA (14 ml, 0,1 mola) i bromoacetofenon (19,0 g, 0,1 mola). Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do 20°C, mieszano przez 2 dni, po czym rozcieńczono EtOAc (500 ml). Po przemyciu kolejno wodnym HCI (200 ml, 0,1N), H2O (100 ml), wodnym NaHCO3 (200 ml, 1N) i solanką (200 ml), wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono w próżni, a pozostałość triflurowano z Et2O i odsączono. Uzyskane ciało stałe wysuszono w ciemności otrzymując D3 (28,6 g, 85%).

R_f = 0,55 (heksan-EtOAc 1:1, żel krzemionkowy). T. t. = 114,2°C; [a]_D ²² -29,4 (c 2, EtOAc).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 1,31 (d, J = 6,6, 3H), 1,46 (s, 9H), 3,77 (br d, OH), 4,44 (dd, J =

9,6, 1H), 4,6 (q, 1H), 5,34 (d, J = 16,5, 1H), 5,37 (br d, OH), 5,68 (d, J = 16,8, 1H), 7,51 (t, 2H), 7,65 (t, 1H), 7,92 (dd, 2H).

P r z y k ł a d 30

N-Benzyloksykarbonylo-N,O-dimetylo-L-tyrozyna (E1)

Do mieszanego roztworu Z-Tyr-OH (63,24 g, 200 mmola) w THF (900 ml) w 0°C dodano dokładnie sproszkowany KOH (112,72 g, 2 mola) w porcjach, po dodaniu kwaśnego siarczanu tetrabutyloamoniowego (6,36 g, 10% wagowych). Następnie dodano wkraplając w ciągu 30 minut siarczan dimetylu (127,2 ml, 1,33 mola), utrzymując temperaturę mieszaniny reakcyjnej poniżej 4°C. Mieszaninę mieszano przez dodatkowe 30 minut i dodano H2O (950 ml). Po 5 godzinnym mieszaniu w 0°C reakcję rozcieńczono eterem (1500 ml), oddzielono warstwę wodną, a warstwę organiczną ekstrahowano wodnym NaHCO3 (2 x 500 ml, nasycony). Połączone wodne roztwory zakwaszono do pH 1 wodnym 1M KHSO4 i ekstrahowano EtOAc (5 x 500 ml). Warstwy organiczne połączono, wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono otrzymując E1 w postaci białego ciała stałego (53,85 g, 78%).

[a]_D ²² -57,16 (c 2,23 CHCI₃) (lit [a]_D -48 (c = 2,23 CHCI₃), JACS, 112,21, 1990).

P r z y k ł a d 31

Fenacylowy ester O-(benzyloksykarbonylo-N,O-dimetylo-L-tyrozylo)-N-tert-butoksykarbonylo-L-treoniny (D2)

PL 208 651 B1

Do roztworu D3 (33,72 g, 100 mmola) w DCM w 0°C dodano DMAP 93,66 g, 30 mmola) i E1 (34,33 g, 100 mmola). Po 10 minutowym mieszaniu w 0°C dodano DCC (22,7 g, 110 mmola). Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Następnie mieszaninę przesączono, a przesącz zatężono do sucha. Pozostałość rozprowadzono w ACN (100 ml), przesączono ponownie i przesącz zatężono. Pozostałość rozpuszczono w EtOAc (200 ml) i podzielono kolejno pomiędzy wodny KHSO4 (100 ml, 10%), wodny NaHCO3 (100 ml, nasycony) i solankę (100 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono. Pozostałość wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono. Pozostałość oczyszczano za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient EtOAc-heksan 1:4 do 1:2) uzyskując D2 (65,5 g, 98%).

[a]_D ²² - 39,56 (c 1,06, CHCI₃);

Rf = 0,55 (EtOAc : heksan 1:1).

P r z y k ł a d 32

O-(benzyloksykarbonylo-N,O-dimetylo-L-tyrozylo)-N-tert-butyloksykarbonylo-L-treonina (D1)

D1

D2

Do homogenicznego roztworu D2 (24,49 g, 38,4 mmola) w wodnym AcOH (211 ml, 90%) w 0°C dodano sproszkowany Zn (18,65 g, 288,3 mmola).

Otrzymaną mieszaninę mieszano w 0°C przez 3 godziny aż do zniknięcia materiału wyjściowego (kontrolowanego na TLC).

Mieszaninę reakcyjną przesączono przez celit i przemyto EtOAc (200 ml).

Przesącz zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozprowadzono Et2O (200 ml) i przesączono.

Przesącz podzielono kolejno pomiędzy wodny KHSO4 (100 ml, 10%) i solankę (100 ml).

Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4) i zatężono otrzymując olej, który oczyszczano za pomocą LC typu flash (Lichroprep RPC18, ACN : H2O 1:1 (800 ml, następnie 7:3 (600 ml) uzyskując D1 (15,53 g, 74%) w postaci białego ciała stałego.

[a]D²⁴ - 27,6 (c 2,187, DCM);

lit: [a]D -20,5 (c 2, DCM). JOC, 62, 2, 1997.

Rf = 0,58 [ACN/H2O (7:3)].

IR (film, DCM) v 3400, 3050, 2900, 1715, 1613, 1514, 1456, 1402, 1368, 1248, 1165, 1061, 1036 cm^-1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 1,29 (d, J = 6,5, 3H), 1,45 (s, 9H), 2,74 (s, 3H), 2,75 (s, 3H), 2,76-3,31 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 4,42-4,52 (m, 1H), 4,66-4,83 (m, 1H), 5,01-5,16 (m, 2H), 5,30-5,53 (m, 2H), 6,72-6,81 (m, 2H), 6,95-7,09 (m, 2H), 7,35 (bs, 5H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 16,44, 16,82, 28,23, 31,71, 31,97, 33,82, 33,68, 55,14, 56,87, 56,75, 60,39, 60,58, 67,51, 67,76, 71,83, 72,47, 80,40, 113,91, 127,59, 128,69, 129,77, 136,42, 156,00, 156,19, 156,71, 158,31, 159,47, 169,78.

m/z (FAB) 567,1 [(M + Na)⁺, 46], 545,1 [(M + H)⁺, 7], 445,1(100);

m/z (FABHRMS) 567,233280, C28H35N2O9 odpowiada (M + Na)⁺ 567,231851.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 33

Synteza Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-lst-Hip-Leu-Pro-Obn (SAPL7)

Do kolby zawierającej HBTU (9,079 g, 23,9 mmola), HOBt (3,490 g, 22,8 mmola), SAPLA1 (15,258 g, 22,8 mmola) i d1 (12,417 g, 22,8 mmola) dodano przez kaniulę roztwór DCM (296 ml) i DMF (148 ml), pod argonem w -5°C.

Po 5 minutach mieszania dodano wkraplając przez strzykawkę DIPEA (15,9 ml, 91,2 mmola), utrzymując temperaturę < 5°C.

Otrzymaną mieszaninę reakcyjną mieszano przez 21 godzin w - 5°C. Dodano MTBE (300 ml) i KHSO4 (200 ml, 10%) i otrzymaną mieszaninę odsą czono i zatężono do 300 ml.

Dodano dodatkowe MTBE (200 ml), warstwy rozdzielono, a warstwę organiczną potraktowano kolejno wodnym KHSO4 (200 ml, 10%), solanką (200 ml), wodnym NaHSO4 (200 ml, nasycony) i solanką (200 ml).

Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując żółty olej (30 g).

Olej rozpuszczono w MTBE i potraktowano heksanem, mieszając.

Strącono ciało stałe dodając więcej heksanu.Produkt był mieszaniną diastereoizomerów.

Rf = 0,80 i 0,59 (heksan : EtOAc 1:2).

IR (film, DCM) v 3350, 2961, 2927, 2893, 1744, 1688, 1638, 1514, 1454, 1368, 1304, 1248, 1171, 1067, 1036 cm^-1, ¹H NMR (500 MHz, CDCI3): δ 0,74-0,92 (m, 18H), 1,05-1,15 (m, 2H), 1,18-1,20 (m, 2H), 1,23 (d, J = 6,8, 3H), 1,25 (d, J = 6,8, 3H), 1,29 (d, J = 6,9, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,45 (s, 9H), 1,50-1,66 (m, 3H), 1,89-2,02 (m, 4H), 2,17-2,25 (m, 2H), 2,37-2,42 (m, 1H), 2,81 (s, 3H), 2,88 (s, 3H), 2,91 (s, 3H), 2,95 (s, 3H), 2,84-2,93 (m, 2H), 3,17-3,25 (m, 1H), 3,53-3,59 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,88-3,98 (m, 4H), 4,49 (d, J = 3,1, 1H), 4,51 (d, J = 3,1, 1H), 4,53-4,57 (m, 1H), 4,68-4,72 (m, 1H), 4,96-4,99 (m, 1H), 5,02-5,33 (m, 4H), 5,02 (d, J = 3,2, 1H), 5,23 (d, J = 3,1, 1H), 5,26-5,33 (m, 1H), 5,47 (1d, J = 9,5, 1H), 6,74 (d, J = 7,8, 2H), 6,77 (d, J = 7,7, 2H), 7,08 (d, J = 7,7, 2H), 7,17 (d, J = 7,5, 1H), 7,21 (d, J = 9,5, 1H), 7,23-7,36 (m, 10H), 7,75 (d, J = 7,9, 1H), 7,79 (d, J = 8,2, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,95, 13,27, 15,16, 16,47, 17,33, 18,79, 21,28, 23,65, 24,65, 24,72, 27,09, 28,08, 28,93, 31,20, 31,32, 33,62, 33,98, 38,38, 41,01, 47,12, 49,38, 54,96, 55,17, 57,89, 58,83, 60,01, 60,16, 67,18, 71,05, 71,32, 80,34, 81,24, 113,89, 127,51, 128,59, 129,69, 129,77, 135,52, 136,77, 156,93, 158,27, 169,87, 170,62, 171,15, 171,85, 172,39, 204,88.

m/z (FAB) 1181,2 [(M + Na)⁺, 20], 1159,2 [(M + H)⁺, 80], 1059,2 (100).

Analiza dla C62H87N5O16:

obliczono: C, 64,30; H, 7,52; N, 6,05;

znaleziono: C, 64,14; H, 7,66; N, 5,95.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 34

Synteza Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-lst-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPL7)

Według procedury opisanej dla syntezy SAPL7, wychodząc z SNPLA1 (150 mg, 0,22 mmola) i D1 (122 mg, 0,22 mmola), po oczyszczeniu za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc 2:1 do 1:3), otrzymano tytułowy związek w postaci białego ciała stałego (130 mg, 51%) (mieszanina diastereoizomerów).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,74-1,03 (m, 18H), 1,16-1,37 (m, 10H), 1,45 (s, 9H), 1,68 (m, 3H), 1,99 (m, 4H), 2,22 (m, 2H), 2,48 (m, 1H), 2,82 (s, 3H), 2,84-3,10 (m, 2H), 3,19 (m, 1H), 3,51-3,69 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,72-4,02 (m, 3H), 4,18 (m, 1H), 4,50-4,73 (m, 4H), 5,00-5,27 (m, 5H), 5,49 (m, 2H), 6,54 (d, J = 9,2, 1H), 6,78 (d, J = 6,8, 2H), 7,02 (d, J = 6,8, 2H), 7,18 (m, 1H), 7,23-7,36 (m, 10H), 7,52 (d, J = 6,8, 1H).

ESI-MS obliczono dla C62H88N6O15: 1156,63, znaleziono 1158,3 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 35

Synteza Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-lst-Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPL7)

PL 208 651 B1

Według procedury opisanej dla syntezy SAPL7, wychodząc z SHPLA1 (1,12 g, 1,94 mmola) i SAPLD1 (544,6 mg, 1,94 mmola), po oczyszczeniu za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAC 1:1 do 1:2), otrzymano tytułowy związek w postaci białego ciała stałego (1,045 g, 61%) (mieszanina diastereoizomerów).

Rf = 0,46 (heksan-EtOAc 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,74-1,02 (m, 18H), 1,20 (m, 5H), 1,40 (m, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,62 (m, 2H), 1,82-2,20 (m, 3H), 2,20 (m, 2H), 2,50 (m, 1H), 2,78 (s, 3H), 2,90 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,58 (m, 1H), 3,67 (s, 3H), 3,79 (m, 1H), 3,88 (m, 1H), 4,06 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 4,82 (m, 2H), 4,94 (m, 1H), 4,98 (m, 1H), 5,08 (m, 1H), 5,28 (m, 3H), 5,56 (d, J = 6,2, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 6,98 (d, J = 6,5, 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,34 (m, 10H), 7,52 (d, J = 6,2, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,27, 13,77, 13,95, 16,75, 17,46, 18,31, 20,78, 20,96, 23,09, 24,35, 24,53, 26,74, 27,93, 28,63, 30,17, 33,76, 39,06, 40,01, 46,69, 48,17, 54,89, 57,04, 57,68, 58,65, 60,20, 60,60, 66,74, 67,08, 68,31, 70,30, 78,49, 79,90, 113,62, 127,36, 127,70, 128,14, 128,18, 128,31, 129,64, 135,19, 136,31, 155,86, 156,61, 158,09, 169,77, 170,70, 171,06, 171,17, 171,78.

ESI-MS, obliczono dla C59H83N5O15: 1101,59; znaleziono 1102,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 36

Synteza Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-lst-Val-Leu-Pro-Bn (SVPL7)

Według procedury opisanej dla syntezy SAPL7, wychodząc z SVPLA1 (1,44 g, 2,37 mmola) i D1 (1,29 g, 2,37 mmola), po oczyszczeniu za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc 2:1 do 1:3), otrzymano tytułowy związek (1,96 g, 75%).

Rf = 0,56 (EtOAc).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,83-0,95 (m, 15H), 1,0-1,22 (m, 4H), 1,23-1,44 (m, 9H), 1,60-1,65 (m, 1H), 1,87-2,01 (m, 4H), 2,09-2,20 (m, 3H), 2,77 (bs, 8H), 2,84-3,01 (m, 1H), 3,17-3,24 (m, 1H), 3,51-3,60 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,80-3,90 (m, 2H), 4,03-4,15 (m, 1H), 4,25-4,40 (m, 2H), 4,40-4,52 (m, 1H), 4,70-4,80 (m, 2H), 5,00-5,26 (m, 4H), 5,34-5,36 (m, 1H), 5,58 (m, 1H), 6,75 (d, 2H, J = 7,8), 6,96-7,09 (m, 1H), 7,04 (d, 2H, J = 8,1), 7,04-7,12 (m, 1H), 7,16-7,20 (m, 1H), 7,18-7,30 (m, 10H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,43, 13,63, 17,17, 18,35, 19,21, 21,40, 23,23, 24,49, 24,67, 26,87, 28,10, 28,79, 30,48, 32,11, 33,84, 38,47, 40,37, 41,22, 46,80, 48,61, 55,04, 56,88, 57,95, 58,75, 59,25, 60,82, 66,87, 67,33, 69,40, 70,50, 76,44, 80,45, 113,58, 127,51, 127,74, 127,88, 128,10, 128,25, 128,33, 128,46, 128,72, 129,64, 129,77, 135,35, 136,37, 156,77, 158,29, 169,83, 170,57, 171,3, 171,4, 172,81.

PL 208 651 B1

ESI-MS, obliczono dla C59H84N6O14: 1100,60; znaleziono (m/z): 1101,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 37

Do roztworu SAPL7 (18,33 g, 15,8 mmola) w THF (wolnym od stabilizatora, 500 ml), odgazowanego i po przepuszczeniu argonu, Pd(OH)2-C (20% Pd, 7,33 g, 40% wag/wag.). Mieszaninę mieszano pod H2 (1 atm.) przez 20 godzin, następnie przesączono przez filtr teflonowy 0,45 μ i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując białe ciało stałe. Dodano toluen (30 ml) i ponownie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i w wysokiej próżni otrzymując SAPL6 (14,78 g, ilościowo) w postaci białego ciała stałego.

¹H NMR (500 MHz, CDCI3): δ 0,79-1,08 (m, 18H), 1,09-1,18 (m, 3H), 1,26 (bs, 3H), 1,29 (d, J = 7,1, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,50-1,66 (m, 3H), 1,84-1,94 (m, 1H), 1,90-2,28 (m, 4H), 2,35-2,50 (m, 4H), 2,30-2,35 (m, 1H), 2,44-3,18 (m, 4H), 2,60 (m, 3H), 3,53-3,61 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,88-4,07 (m, 4H), 4,12-4,72 (m, 4H), 5,18-5,24 (m, 1H), 5,24 (bs, 1H), 6,84 (d, J = 7,9, 2H), 7,08 (d, J = 8,0, 2H), 7,13 (d, J = 8,2, 1H), 7,18 (d, J = 8,2, 1H), 7,62-7,68 (bs, 1H).

m/z (FAB) 972,7 [(M + K)⁺, 33], 934,9 (M)⁺, 100].

P r z y k ł a d 38

Synteza Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-lst-Aip-Leu-Pro-OH (SNPL6)

Do roztworu SNPL7 (130 mg, 0,11 mmola) w mieszaninie IPA:H2O (2:1, 4 ml : 2 ml), odgazowanego i po przepuszczeniu argonu, dodano Pd(OH)2-C (20% Pd, 45 mg, 35% wag/wag.). Mieszaninę mieszano pod H2 (1 atm.) przez 20 godzin, następnie przesączono przez filtr teflonowy 0,45 μ i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując białe ciało stałe. Dodano IPA (10 ml) i zatężono ponownie pod zmniejszonym ciśnieniem i w wysokiej próżni otrzymując SNPL6 (100 mg, ilościowo) w postaci białego ciała stałego.

ESI-MS, obliczono dla C47H76N6O13: 932,55; znaleziono 934,0 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 39

Synteza Boc-Thr(N(Me)-o(Me)-Tyr)-lst-Hiv-leu-Pro-OH (SHPL6)

PL 208 651 B1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL6, materiałem wyjściowym był SHPL7 (1,045 g, 0,95 mmola). Otrzymano tytułowy związek (825 g, 99%) w postaci białego ciała stałego.

ESI-MS, obliczono dla C44H71N5O13: 877,50; znaleziono 878,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 40

Synteza Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-lst-Val-Leu-pro-OH (SVPL6)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL6, materiałem wyjściowym był SVPL7 (250 mg, 0,23 mmola). Otrzymano tytułowy związek (195 g, 97%) w postaci białego ciała stałego.

ESI-MS, obliczono dla C44H72N6O12: 876,56; znaleziono (m/z): 877,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 41

Synteza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-lst-Hip-Leu-Pro (SAPL5)

W ochłodzonym (-5°C) 5-litrowym reaktorze zaopatrzonym w mieszadło mechaniczne i zawierającym ACN (3,2 I) dodano HATU (14,436 g, 37,9 mmola) i HOAt (5,254 g, 38,6 mmola), pod Ar, mieszając. SAPL6 (14,77 g, 15,8 g) rozpuszczono w ACN (500 ml) i dodano. Dodano wkraplając NMM

PL 208 651 B1 (3,65 ml, 33,18 mmola) przez strzykawkę utrzymując temperaturę poniżej -5°C. Otrzymaną mieszaninę reakcyjną pozostawiono do osiągnięcia temperatury pokojowej i mieszano przez 20 godzin. Rozpuszczalnik odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Surową pozostałość rozcierano z EtOAc (500 ml) i roztwór odsą czono uzyskując osad. Rozpuszczalnik przemyto kolejno wodnym KHSO4 (2 x 500 ml), solanką (500 ml), wodnym NaHCO3 (500 ml, nasycony) i ponownie solanką (500 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując żółte ciało stałe (17,52 g), które oczyszczano za pomocą chromatografii typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan : EtOAc 3:1 do 1:1) otrzymują c SAPL5 (9,83 g, 68%) w postaci biał ego ciał a stał ego.

R_f = 0,60 (heksan : EtOAc 1:3) [a]_D - 209,4 (c 0,3, CHCI₃).

IR (film, DCM) v 3343, 2961, 2927, 2893, 1734, 1640, 1514, 1454, 1368, 1302, 1248, 1167, 1018 cm^-1.

¹H NMR (500 MHz, CDCI3): δ 0,78 (d, J = 7,1, 3H), 0,85 (d, J = 7,0, 3H), 0,87 (d, J = 7,0, 3H), 0,89-0,93 (m, 9H), 1,10-1,20 (m, 1H), 1,20 (d, J = 6,4, 3H), 1,30 (d, J = 6,9, 3H), 1,36 (m, 2H), 1,40 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,48-1,72 (m, 2H), 1,72-1,78 (m, 1H), 1,83-1,88 (m, 1H), 2,01-2,17 (m, 3H), 2,27-2,29 (m, 1H), 2,47-2,53 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,93 (bs, 1H), 3,14-3,19 (m, 2H), 3,34-3,37 (dd, J1 = 14,8, J2 = 4,1, 1H), 3,54-3,56 (dd, J1 = 10,5, J2 = 4,1, 1H), 3,58-3,63 (m, 1H), 3,68-3,72 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,94-3,98 (m, 1H), 3,98 (q, J = 7,5, 1H), 4,07-4,11 (3d, J = 3,8, 1H), 4,57-4,61 (m, 2H), 4,774,81 (m, 1H), 4,97-4,98 (q, J = 3,5, 1H), 5,02 (d, J = 10,5, 1H), 5,18 (d, J = 4,2, 1H), 6,81 (d, J = 8,5, 2H), 7,05 (d, J = 8,5, 2H), 7,19 (d, J = 10,2, 1H), 7,64 (d, J = 10,1, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,56, 14,68, 14,97, 15,27, 16,61, 18,45, 20,64, 23,50, 24,71, 24,78, 26,92, 27,73, 27,94, 31,55, 33,94, 33,94, 38,27, 38,52, 40,64, 46,86, 49,54, 49,65, 55,16, 55,19, 55,84, 57,12, 65,96, 67,30, 71,00, 80,27, 81,41, 114,02, 130,22, 158,53, 168,30, 169,31, 170,12, 170,29, 171,20, 172,38, 204,51.

m/z (FAB) 938,9 [(M+Na)⁺, 55], 916,9 [(M + H)⁺, 100];

m/z (FABHRMS) 916,532120, C47H73N5O13 odpowiada (M + H)⁺ = 916,528300.

P r z y k ł a d 42

Synteza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-lst-Aip-Leu-pro (SNPL5)

SNPL5

Zgodnie z procedurą opisaną dla SAPL5, wychodząc z SNPL6 (100 mg, 0,11 mmola) otrzymano tytułowy związek (40 mg, 57%) w postaci białego ciała stałego po chromatografii typu flash (żel krzemionkowy, EtOAc : heksan 4:1 do samego EtOAc).

Rf = 0,4 (EtOAc).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,76 (d, J = 6,8, 3H), 0,83-0,96 (m, 15H), 1,10-1,20 (m, 1H), 1,25 (d, J = 6,4, 3H), 1,27 (d, J = 6,3, 3H), 1,32 (d, J = 6,8, 3H), 1,41 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,50-1,70 (m, 2H), 1,99-2,31 (m, 5H), 2,61 (s, 3H), 2,91-3,04 (m, 1H), 3,11-3,37 (m, 2H), 3,48-3,64 (m, 3H), 3,69-3,81 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 4,18 (m, 2H), 4,46-4,67 (m, 3H), 4,81 (t, J = 10,7, 1H), 5,01 (m, 1H), 6,85 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,33 (d, J = 8,7, 1H), 7,65 (d, J = 9,2, 1H), 7,86 (d, J = 10,7, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C47H74N6O12: 914,54; znaleziono (m/z): 915,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 43

Synteza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-lst-Hiv-Leu-Pro (SHPL5)

PL 208 651 B1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL5, wychodząc z SHPL6 (2,45 g, 2,78 mmola) otrzymano tytułowy związek (2,1 g, 88%) w postaci białego ciała stałego po krystalizacji z DCM/n-heptan (1 : 3).

Rf = 0,33 (heksan-EtOAc 1:3).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,04 (m, 18H), 1,19 (m, 5H), 1,41 (s, 9H), 1,42 (m, 2H), 1,63 (m, 1H), 1,77 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 2,00-2,22 (m, 3H), 2,44 (m, 1H), 2,58 (s, 3H), 2,95 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 3,26 (m, 1H), 3,36 (m, 1H), 3,58 (m, 1H), 3,68 (m, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,96 (m, 1H), 4,12 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,94 (m, 1H), 5,03 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,54 (d, J = 7,3, 1H), 7,69 (d, J = 6,4, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,38, 14,57, 15,15, 18,11, 18,45, 20,67, 23,40, 24,70, 26,91, 27,89, 30,20, 33,57, 33,90, 38,51, 39,07, 46,62, 48,13, 55,16, 56,05, 56,23, 56,94, 65,67, 68,60, 71,13, 79,41, 80,01, 113,97, 129,69, 130,25, 155,75, 158,49, 168,51, 169,57, 170,24, 170,94, 171,06, 173,59.

ESI-MS, obliczono dla C44H69N5O12: 859,49, znaleziono (m/z): 860,4 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 44

Synteza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-lst-Val-Leu-Pro (SVPL5)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL5, wychodząc z SVPL6 (90 mg, 0,1 mmola) otrzymano 30 mg (35%) tytułowego związku w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą chromatografii typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc od 1:4 do 1:10).

Rf = 0,35 (EtOAc).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,85-1,00 (m, 18H), 1,14-1,38 (m, 8H), 1,44 (s, 9H), 1,57 (m, 2H), 1,76-1,95 (m, 2H), 2,01-2,21 (m, 2H), 2,33 (dd, J1 = 7,3, J2 = 14,7, 1H), 2,53 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 3,17 (dd, J1 = 10,7, J2 = 14,7, 1H), 3,35 (dd, J1 = 4,4, J2 = 14,2, 1H), 3,56 (dd, J1 = 3,9, J2 = 10,3, 1H), 3,59-3,77 (m, 4H), 3,78 (s, 3H), 4,06 (dt, J1 = 3,9, J2 = 9,3, 1H), 4,33 (dd, J1 = 2,9, J2 = 9,3, 1H), 4,38 (dd, J1 = 6,8, J2 = 10,3, 1H), 4,58 (dd, J1 = 5,4, J2 = 7,3, 1H), 4,79 (t, J = 10,3, 1H), 4,98 (d, J = 9,3, 1H), 5,03 (dd, J1 = 2,4, J2 = 6,3, 1H), 6,81 (bs, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,24 (d, J = 9,8, 1H), 7,54 (d, J = 9,8, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,48, 14,50, 15,20, 18,86, 19,44, 21,03, 23,64, 24,83, 24,96, 26,97, 28,01, 28,135, 30,21, 33,53, 33,96, 38,56, 38,61, 41,05, 41,66, 46,84, 48,53, 55,24, 55,51, 56,31, 57,14, 59,75, 65,85, 70,60, 80,52, 114,11, 129,75, 130,33, 156,77, 158,67, 168,53, 170,21, 170,29, 170,73, 171,02, 174,34.

ESI-MS, obliczono dla C44H70N6O11: 858,51; znaleziono (m/z): 859,5 (M + H)⁺.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 45

Synteza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-lst-Hip-Leu-Pro (SAPL4)

Do kolby zawierającej SAPL5 (8,79 g, 9,6 mmola) w bezwodnym dioksanie (93 ml) dodano roztwór chlorowodoru w bezwodnym dioksanie (5,3N, 122 ml, 647 mmola). Otrzymany roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 8 godz. aż do całkowitego zaniku materiału wyjściowego. Kiedy reakcja zostanie zakończona, roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozcieńczono CHCI3 (100 ml) i zatężono ponownie. Ponownie odparowano białą surową piankę z CHCI3/heksan otrzymując SAPL4 (8,17 g, wydajność 100%) w postaci białego ciała stałego.

m/z (FAB) 838,3 [(M + Na)⁺, 28], 816,3 [(M + H)⁺, 100].

P r z y k ł a d 46

Synteza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-lst-Aip-Leu-Pro (SNPL4)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL4, wychodząc z SNPL5 (40 mg, 43 mola) otrzymano tytułowy związek (36 mg, ilościowo) w postaci białego ciała stałego po strąceniu Et2O.

ESI-MS, obliczono dla C42H55N5O11: 815,47; znaleziono (m/z): 815,5 (M)⁺.

P r z y k ł a d 47

Synteza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-lst-Hiv-leu-Pro (SHPL4)

Zgodnie z procedurą opisana dla syntezy SAPL4, wychodząc z SHPL5 (500 mg, 0,58 mmola).

Otrzymano tytułowy związek (440 mg, ilość.) w postaci białego ciała stałego po strąceniu Et2O.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 48

Synteza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-lst-Val-leu-pro (SVPL4)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL4, materiałem wyjściowym był SVPL5 (25 mg, 29 mola). Otrzymano tytułowy związek (22 mg, ilościowo) w postaci białego ciała stałego po ponownym odparowaniu z MTBE.

ESI-MS, obliczono dla C39H61N5O10: 759,44; znaleziono (m/z): 760,4 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 49

Z-N-metylo-D-leucyna (H1). Źródło: Coggins, J.R.; Benoiton, N.L., Can. J. Chem., 1971, 49, 1968.

Do mieszanego roztworu Z-D-Leu-OH (10,32 g, 38,9 mmola) w bezwodnym THF (120 ml) w 0°C, pod Ar, dodano wkraplając jodometan (8,55 ml, 136,1 mmola) przez strzykawkę. Następnie dodano w porcjach wodorek sodu (4,80 g, 120,6 mmola, 60% dyspersja w oleju mineralnym) utrzymując temperaturę w 0°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Usunięto rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozpuszczono w EtOAc (120 ml) i ekstrahowano wodnym NaHCO3 (300 ml, nasyc). Warstwę wodną przemyto EtOAc (2 x 100 ml). Warstwę wodną ochłodzono, dodano kwas cytrynowy do pH 1-2, a roztwór ekstrahowano EtOAc (4 x 250 ml), wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono. Produkt krystalizowano w EtOAc-heptan (1:3) otrzymując H1 (7,84 g, 72%) w postaci białej krystalicznej substancji. T.t. 71-72°C. [a]_D ²⁵ +23 (c 1,

EtOH).

P r z y k ł a d 50

Synteza Z-didemniny A (SAPL3)

PL 208 651 B1

Do kolby zawierającej HATU (8,76 g, 23,0 mmola), HOAt (3,17 g, 23,1 mmola) dodano SAPL4 (7,09 g, 15,8 mmola) i H1 (3,486 g, 12,5 mmola), bezwodny DCM (100 ml) i bezwodny DMF (50 ml), pod Ar i roztwór mieszano w -5°C (łaźnia lodowa). Dodano wkraplając przez strzykawkę NMM (2,3 ml, 21,0 mmola) i utrzymywano temperaturę -5°C.

Otrzymaną mieszaninę reakcyjną mieszano w -5°C przez 2 godziny, po czym pozostawiono do osiągnięcia temperatury pokojowej przez dodatkowe 14 godzin.

Rozpuszczalnik odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt rozprowadzono EtOAc (100 ml) i roztwór odsączono usuwając nieco osadu.

Rozpuszczalnik przemyto kolejno wodnym KHSO4 (2 x 100 ml, 10%), solanką (100 ml), wodnym NaHCO3 (100 ml, nasycony) i ponownie solanką (100 ml).

Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując żółte ciało stałe, które oczyszczano za pomocą chromatografii typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan : EtOAc 2:1 do 1:1) otrzymując SAPL3 (7,98 g, wydajność 89%) w postaci białego ciała stałego. Rf = 0,18 (heksan/EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,79-1,00 (m, 24H), 1,10-2,25 (m, 10H), 1,18 (d, J = 6,3, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,32 (d, J = 6,8, 3H), 2,28-2,34 (m, 1H), 2,49 (dd, J1 = 10,7, J2 = 17,0, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,83 (s, 3H), 2,95 (m, 1H), 3,02-3,24 (m, 2H), 3,31-3,40 (dd, J1 = 3,9, J2 = 14,1, 1H), 3,53-3,64 (m, 2H), 3,65-3,75 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,92-4,20 (m, 3H), 4,58 (t, J = 4,8, 1H), 4,75-4,85 (m, 3H), 5,00 (m, 1H), 5,12-5,26 (m, 3H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 6,86 (bs, 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,21-7,44 (m, 6H), 7,92 (d, J = 8,3, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,57, 14,05, 15,18, 16,73, 18,52, 20,83, 22,62, 22,96, 23,66, 24,55, 24,81, 25,03, 25,28, 26,90, 27,86, 28,95, 31,28, 31,81, 33,91, 34,02, 38,51, 38,61, 47,03, 49,61, 55,21, 55,38, 55,50, 57,28, 66,10, 67,65, 67,93, 70,47, 81,44, 114,09, 127,83, 128,46, 129,74, 130,29, 158,60, 168,36, 169,59, 170,28, 171,20, 172,22, 204,80.

ESI-MS obliczono dla C57H84N6O14: 1076,60, znaleziono (m/z): 1077,6 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 51

Synteza [Aip]³ Z-didemniny A (SNPL3)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL3, wychodząc z SNPL4 (35 mg, 41 μmola) i H1 (17 mg, 61 μmola) otrzymano tytułowy związek (36 mg, 81%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczeniu za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc od 1:4 do samego EtOAc).

Rf = 0,30 (EtOAc).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,74 (d, J = 6,3, 3H), 0,80-1,00 (m, 21H), 1,10-2,25 (m, 10H),

I, 21 (d, J = 5,8, 3H), 1,24 (s, 3H), 1,34 (d, J = 6,3, 3H), 2,61 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 3,12-3,25 (dd, J1 =

II, 2, J2 = 14,1, 1H), 3,27-3,36 (dd, J1 = 4,3, J2 = 14,1, 1H), 3,52-3,63 (m, 3H), 3,69-3,81 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 4,09 (m, 3H), 4,47-4,63 (m, 3H), 4,76-4,92 (m, 2H), 5,00 (m, 1H), 5,08 (m, 1H), 5,18 (s, 2H), 6,85 (d, J = 8,3, 2H), 6,97 (d, J = 6,97, 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,35 (bs, 5H), 7,48 (d, J = 8,3, 1H), 7,67 (d, J = 8,3, 1H), 7,87 (d, J = 10,2, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C57H85N7O13: 1075,62; znaleziono (m/z): 1076,6 (M + H)⁺.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 52

Synteza [Hiv]³ Z-didemniny A (SHPL3)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL3, wychodząc z SHPL4 (116 mg, 0,15 mmola) i H1 (63 mg, 0,23 mmola) otrzymano tytułowy związek (86 mg, 52%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc od 1:1 do 1:2).

Rf = 0,27 (heksan-EtOAc 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,80-1,08 (m, 24H), 1,18 (m, 3H), 1,21 (m, 4H), 1,58 (m, 2H), 1,74 (m, 1H), 1,80-2,42 (m, 6H), 2,56 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 2,88 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,32 (m, 1H) 3,60 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,83 (m, 1H), 3,98 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 4,84 (m, 1H), 4,92 (d, J = 3,8, 1H), 5,00 (m, 1H), 5,20 (m, 2H), 6,65 (d, J = 6,3, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,34 (m, 5H), 7,50 (d, J = 6,7, 1H), 7,75 (d, J = 7,2, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,58, 14,21, 15,39, 17,64, 18,63, 20,74, 21,88, 22,84, 23,48,

24.22, 24,75, 27,05, 27,84, 29,34, 29,99, 33,42, 33,86, 35,81, 38,52, 39,37, 46,63, 48,14, 55,13, 55,47, 55,53, 55,87, 56,92, 65,68, 67,72, 68,60, 70,61, 79,09, 113,95, 127,71, 127,86, 128,35, 129,63,

130.22, 158,48, 168,46, 169,36, 169,84, 170,29, 170,93, 171,00, 173,73.

ESI-MS: obliczono dla C54H80N6O13: 1020,58, znaleziono (m/z): 1021,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 53

Synteza [Val]³ Z-didemniny A (SVPL3)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL3, wychodząc z SVPL4 (20 mg, 25 pmola) i SAPLH1 (11 mg, 37,5 pmola) otrzymano tytułowy związek (19 mg, 72%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan-EtOAc od 1:1 do 1:5).

Rf = 0,44 (EtOAc).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,85-1,06 (m, 21 H), 1,10-1,4 (m, 5H), 1,16 (d, J = 6,6, 3H), 1,50-1,63 (m, 6 H), 1,72-1,87 (m, 2 H), 1,88-2,40 (m, 6H), 2,58 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 3,17 (dd, J1 = 10,5,

PL 208 651 B1

J2 = 14,2, 1H), 3,36 (dd, J1 = 3,9, J2 = 14,2, 1H), 3,43 (bs, 1H), 3,51-3,72 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 3,98-4,16 (m, 1H), 4,40-4,47 (m, 2H), 4,58 (dd, J1 = 5,7, J2 = 7,8, 1H), 4,67-4,85 (m, 2H), 4,80-5,09 (m, 1H), 5,16 (d, J = 12,4, 1H), 5,24 (d, J = 12,4, 1H), 6,84 (d, J = 8,4, 1H), 6,90-6,94 (bs, 1H), 7,09 (d, J = 8,4, 1H), 7,28-7,50 (m, 6H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,99, 14,37, 15,70, 18,55, 19,82, 21,40, 21,99, 22,81, 23,17, 23,98, 24,62, 25,00, 25,24, 27,28, 28,26, 29,93, 30,23, 33,58, 34,10, 36,16, 38,78, 41,98, 47,10, 48,79, 54,73, 55,45, 56,62, 57,40, 59,51, 66,02, 68,18, 70,37, 71,03, 114,30, 128,00, 128,27, 128,72, 129,86, 130,56, 136,49, 158,28, 158,85, 168,75, 169,27, 170,40, 170,75, 171,04, 173,91, 175,03.

ESI-MS, obliczono dla C54H81N7O12: 1019,59; znaleziono (m/z): 1020,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 54

Synteza didemniny A (SAPL2)

Do roztworu SAPL3 (6,59 g, 6,1 mmola) w THF (pozbawiony stabilizatora, 262 ml) odgazowanego i przedmuchanego argonem, dodano Pd(OH)2-C (20%, 3,2 g, 505 wag./wag.). Mieszaninę mieszano pod H₂ (1 atm.) przez 20 godz., następnie przesączono przez filtr teflonowy 0,45 μm i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując białe ciało stałe. Dodano CHCI3 (2 x 25 ml) i mieszaninę zatężono ponownie pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując SAPL2 (5,51 g, 96%) w postaci białego ciała stałego.

Rf = 0,22 (CHCI3: tBuOH 90:10).

¹H NMR (500 MHz, CDCI3): δ 0,82-0,92 (m, 24H), 1,11-1,19 (m, 1H), 1,22 (d, J = 6,9, 3H), 1,32 (d, J = 6,8, 3H), 1,30-1,35 (m, 1H), 1,35-1,63 (m, 6H), 1,71-1,81 (m, 2H), 1,93-2,07 (m, 1H), 2,07-2,18 (m, 2H), 2,28-2,34 (m, 1H), 2,49-2,52 (dd, J1 = 11, J2 = 10,5, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,72 (bs, 3H), 2,79 (bs, 3H), 2,86-2,94 (bs, 1H), 2,72-2,79 (bd, J = 10,5, 1H), 3,15-3,18 (dd, J1 = 14,5, J2 = 10,5, 1H), 3,33-3,36 (dd, J1 = 14,5, J2 = 4,5, 1H), 3,54-3,57 (dd, J1 = 10,5, J2 = 4,5, 1H), 3,56-3,61 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,96-4,00 (m, 1H), 4,03-4,08 (m, 1H), 4,11-4,80 (bs, 1H), 4,56-4,62 (m, 1H), 4,68-4,81 (m, 3H), 4,99-5,01 (q, J = 3,5, 1H), 5,16 (bs, 1H), 6,83 (d, J = 8,5, 2H), 6,95 (bs, 1H), 7,07 (d, J = 8,5, 2H), 7,21-7,25 (bs, 1H), 7,95 (bs, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,55, 14,95, 15,26, 16,82, 18,56, 20,89, 22,00, 23,08, 23,76, 24,58, 24,85, 25,10, 27,12, 29,35, 29,35, 29,65, 29,69, 31,36, 33,96, 34,14, 38,51, 38,64, 40,14, 55,38, 55,56, 57,31, 66,17, 67,85, 70,58, 80,96, 80,98, 81,57, 114,12, 130,33, 158,63, 168,41, 169,33, 169,70, 170,38, 171,24, 172,28, 172,28, 172,93, 204,83.

m/z (FAB) 944,2 [(M + H)⁺, 100].

P r z y k ł a d 55

Synteza[Aip]³-didemniny A (SAPL2)

PL 208 651 B1

Do roztworu SNPL3 (33 mg, 35 (imola) w mieszaninie IPA/H2O (2:1 ml) odgazowanego i przedmuchanego argonem, dodano Pd(OH)2-C (20%, 20 mg, 60% wag./wag). Mieszaninę mieszano pod

H2 (1 atm.) przez 20 godz., po czym przesączono przez filtr teflonowy 0,45 μm zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując białe ciało stałe. Dodano IPA (2 x 5 ml) i roztwór zatężono ponownie pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując SNPL2 (32 mg, 97%) w postaci białego ciała stałego.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,78 (d, J = 6,8, 3H), 0,82-0,92 (m, 21H), 1,11-2,58 (m, 21H),

2,41 (s, 3H), 2,62 (s, 3H), 2,75-3,00 (m, 4H), 3,15-3,18 (dd, J1 = 10,7, J2 = 14,7, 1H), 3,33-3,36 (dd, J1 = 14,5, J2 = 4,2, 1H), 3,51-3,78 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,92 (m, 1H), 4,01-4,20 (m, 2H), 4,50 (t, J = 4,8, 1H), 4,59 (t, J = 6,3, 1H), 4,75-4,91 (m, 2H), 5,05 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,70 (d, J = 5,8, 1H), 7,78 (d, J = 9,7, 1H), 7,89 (d, J = 6,3, 1H), 8,14 (d, J = 7,8, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C49H79N7O11: 941,58; znaleziono (m/z): 942,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 56

Synteza [Hiv]³-didemniny A (SHPL2)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL2, wychodząc z SHPL3 (86 mg, 0,08 mmola) otrzymano tytułowy związek (73 mg, 97%) w postaci białego ciała stałego.

Rf = 0,36 (CHCI3/MeOH 95:5).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,02 (m, 24H), 1,12-2,42 (m, 16H), 2,54 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,95 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 3,52-3,90 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 4,04 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,57 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 4,91 (d, J = 5,3, 1H), 5,22 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,54 (d, J = 9,2, 1H), 7,60 (d, J = 9,4, 1H), 8,68 (d, J = 6,2, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,78, 14,07, 16,13, 17,90, 18,56, 20,98, 21,74, 22,94, 23,60, 24,44, 24,78, 25,06, 27,17, 27,92, 30,09, 33,34, 33,89, 38,71, 40,30, 46,86, 48,22, 54,99, 55,23, 56,97, 57,21, 65,81, 68,53, 70,37, 79,47, 114,03, 129,76, 130,29, 158,57, 168,18, 169,40, 169,86, 170,20, 170,92, 174,16.

ESI-MS, obliczono dla C46H74N6O11: 886,54; znaleziono (m/z): 887,2 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 57

Synteza [Val]³-didemniny A (SVPL2)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL2, wychodząc z SVPL3 (19 mg, 18 μmola) otrzymano tytułowy związek (16 mg, 97%) w postaci białego ciała stałego.

PL 208 651 B1

Rf = 0,36 (CHCI3/MeOH 95:5).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,02 (m, 21H), 1,85-1,32 (m, 9H), 1,42-1,83 (m, 7H), 1,87-2,23 (m, 8H), 2,34 (bs, 3H), 2,60 (b s, 1H), 2,85 (dd, J1 = 5,7, J2 = 7,8, 1H), 3,16 (dd, J1 = 10,8, J2 = 14,2, 1H), 3,37 (dd, J1 = 4,2, J2 = 14,2, 1H), 3,48 (bs, 1H), 3,57-3,68 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 3,95-4,15 (m, 2H), 4,45-4,52 (m, 2H), 4,61 (dd, J1 = 4,8, J2 = 7,8, 1H), 4,77 (t, J = 9,9, 1H), 5,02-5,15 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,4, 1H), 7,09 (d, J = 8,4, 1H), 7,59-7,62 (m, 2H), 7,78-7,81 (m, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,98, 14,46, 16,14, 18,50, 19,83, 21,50, 22,55, 22,81, 22,95, 23,46, 23,98, 27,33, 28,27, 28,33, 29,94, 33,71, 34,16, 38,94, 41,93, 42,11, 45,72, 47,18, 48,94, 53,64, 55,03, 55,50, 56,72, 57,55, 59,22, 59,56, 66,16, 70,71, 114,36, 118,53, 120,85, 130,02, 130,58, 168,71, 169,74, 170,23, 171,18, 175,10.

ESI-MS, obliczono dla C46H75N7O10: 885,56; znaleziono (m/z): 856,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 58

Synteza Pyr-Pro-OBn (F2)

Do roztworu H-Pro-OBn-HCI (10,0 g, 41,3 mmola) w bezwodnym DMF (50 ml) w 0°C, pod Ar, dodano wkraplając przez strzykawkę NMM (4,55 ml, 43,8 mmola) utrzymując temperaturę w 0°C. Następnie dodano w porcjach HOBt (18,98 g, 124 mmola).

Po 15 min. kwas pirogronowy (8,61 g, 97,79 mmola) rozpuszczono w bezwodnym DCM (10 ml) utrzymując temperaturę poniżej 3°C. Na koniec, dodano wkraplając przez wkraplacz DCC (22,17 g, 107,46 mmola) rozpuszczonego w DCM (80 ml).

Mieszaninę pozostawiono do osiągnięcia temperatury pokojowej (2 godz.) i mieszano przez dalsze 12 godz.

Mieszaninę reakcyjną przesączono usuwając osad i roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem.

Pozostałość rozpuszczono w EtOAc (500 ml) i przemyto kolejno wodnym KHSO4 (100 ml, 10%), wodnym NaHCO3 (400 ml, nasyc), solanką (400 ml), wysuszono (Na2SO4) i przesączono.

Usunięto rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozprowadzono ACN (100 ml), chłodzono w -30°C przez 2 godz. i przesączono usuwając nadmiar N,N-dicykloheksylomocznika.

Otrzymany brązowy olej (15,82 g) oczyszczano za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan do heksan: EtOAc 2:1) i uzyskano F2 (9,06 g, 66% wydajności) w postaci białego ciała stałego.

Rf = 0,25 (heksan : EtOAc 2:1).

IR (film, DCM) v 3035, 2956, 2884, 1744, 1717, 1645, 1499, 1443, 1383, 1352, 1273, 1175, 1092 cm^-1.

¹H NMR (200 MHz, CDCI3): δ 1,75-2,40 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,44 (s, 3H), 3,45-3,82 (m, 2H), 4,52-4,61 (m, 1H), 4,88-4,97 (m, 1H), 5,14-5,15 (m, 2H), 5,17-5,20 (m, 2H), 7,34 (bs, 5H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 22,11, 25,22, 26,5, 27,10, 28,53, 31,48, 47,53, 44,81, 59,76, 67,02, 67,31, 128,11, 128,64, 135,24, 170,1, 170,2, 198,0.

m/z (Cl) 293 [(M + NH4)⁺, 100];

Analiza dla C15H17NO4:

obliczono: C, 65,44; H, 6,22; N, 5,08;

znaleziono: C, 65,04; H, 6,01; N, 5,11.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 59

Synteza Pyr-Pro-OH (F1)

Roztwór F2 (8,63 g, 31,34 mmola) i pallad na aktywowanym węglu (10%, 86 mg, 10% wag/wag.) w odgazowanym MeOH (125 ml) umieszczono w wysokociśnieniowym reaktorze Parra i przepuszczano gazowy azot (2 x 30 psi). Mieszaninę reakcyjną szczelnie zamknięto pod wodorem (30 psi) i mieszano w 23°C przez 4,5 godz. Mieszaninę przesączono przez filtr teflonowy 0,45 μm i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość (6,29 g) zaadsorbowano na SiO2 i naniesiono na szczyt kolumny (LC 5,5 x 10,0 cm) i eluowano mieszaniną heksan : EtOAc 1:2 uzyskując F1 (4,64 g, 80%) w postaci białego ciała stałego.

Rf = 0,22 (heksan : EtOAc 1:1).

[a]D²⁰ -92,4 (c 0,12, CHCI₃).

T. t. 67-69°C.

IR (film, DCM) v 3450-3000, 2961-2870, 1719, 1643, 1615, 1452, 1354, 1205, 1175, 1094, 1018 cm^-1.

¹H NMR (200 MHz, CDCI3): δ 1,85-2,45 (m, 4H), 2,43 oraz 2,47 (s, 3H), 3,42-3,85 (m, 2H), 4,52-4,61 (m, 1H), 4,88-4,97 (m, 1H), 7,21-7,40 (bs, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 22,03, 25,23, 26,48, 27,00, 28,23, 31,44, 47,57, 48,37, 59,61, 59,39, 162,47, 162,52, 175,04, 176,29, 197,18.

m/z (Cl) 220 [(M + N2H7)⁺, 15], 203 [(M + NH4)⁺, 100], 186 [(M + H)⁺, 16].

Analiza dla C8H11NO4: obliczono: C, 51,88;

znaleziono: C, 52,13;

P r z y k ł a d 60 Synteza aplidyny (SAPL1)

H, 5,99; N, 7,56

H, 5,85; N, 7,65

SAPL2 SAPU

Do zimnego (3°C) roztworu F1 (4,908 g, 26,5 mmola) w bezwodnym DCM (40 ml) dodano, pod azotem, roztwór DIPCDI (1,806 mg, 14,3 mmola) w DCM (10 ml) i roztwór mieszano w 3°C przez 60 min. Następnie roztwór SAPL2 (5,0 g, 5,3 mmola) w DCM (50 ml) przeniesiono przez kaniulę do poprzedniego roztworu pod ciśnieniem azotu. Po 90 godz. (4 dni) w tej temperaturze, dodano kwas solny HCI (50 ml, 0,1N) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 15 min. Następnie, warstwę organiczną

PL 208 651 B1 zdekantowano i podzielono pomiędzy wodny KHSO4 (50 ml, 5%), wodny NaHCO3 (50 ml, 5%) i solankę (25 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymane jasnożółte ciało stałe oczyszczano za pomocą LC typu flash (Lichroprep RP-18, 40-63 μm, gradient MeOH : H2O : TFA od 70:30:0,1 do 90:10:0,1) uzyskując SAPU (5,4 g, 93%) (mieszanina rotamerów).

Rf = 0,40 i 0,28 (DCM : AcOEt 2:3), 0,52 i 0,45 (CHCI3-MeOH 9,5 : 0,5).

[a]D -95,9 (c 1,8, CHCI3).

¹H NMR (500 MHz, CDCI3): δ 0,84-0,93 (m, 24H), 1,16-1,70 (m, 9H), 1,72-1,81 (m, 1H), 1,81-1,90 (m, 1H), 1,90-2,24 (m, 6H), 2,30-2,39 (m, 1H), 2,49 (s, 3H) 2,51 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,52-2,64 (m, 1H), 2,85 (bs, 1H), 2,94 (bs, 1H), 3,09 (s, 3H), 3,13 (s, 3H), 3,15-3,18 (m, 1H), 3,21-3,26 (dd, J1 = 15,8, J2 = 6,1, 1H), 3,32-3,36 (dd, J1 = 14,5, J2 = 4,1, 1H), 3,54-3,60 (m, 1H), 3,66-3,72 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,80-3,87 (m, 1H), 3,96-3,99 (m, 1H), 4,03-4,11 (m, 2H), 4,15-4,23 (2q, J = 7,5, 1H), 4,55-4,57 (2d, J1 = 5,5, J2 = 2,2, 1H), 4,59-4,62 (t, 1H), 4,56-4,64 (dd, J1 = 6,5, J2 = 2,5, 1H), 4,68-4,71 (t, 1H), 4,76-4,81 (t, 1H), 5,10-5,18 (m, 1H), 5,17 (d, J = 3,5, 1H), 5,18 (d, J = 3,5, 1H), 5,27-5,31 (m, 2H), 6,82 (d, J = 8,5, 2H), 6,83 (d, J = 8,5, 2H), 7,05 (d, J = 8,5, 2H), 7,06 (d, J = 8,5, 2H), 7,02 (d, J = 7,1, 1H), 7,16 (d, J = 9,5, 1H), 7,17 (d, J = 9,5, 1H), 7,59 (d, J = 5,5, 1H), 7,77 (d, J = 9,5, 1H), 7,83 (d, J = 9,4, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,63, 11,68, 14,11, 14,70, 15,26, 15,30, 16,00, 16,20, 16,88, 16,93, 18,62, 18,85, 20,89, 20,94, 21,62, 21.36, 23,44, 23,57, 23,84, 23,93, 24,66, 24,77, 24,85, 25,02, 26,22, 26,34, 27,09, 27,6, 27,06, 27,30, 27,95, 27,99, 29,33, 29,69, 31,31, 31,37, 33,97, 34,06, 36,02, 36,45, 38,68, 38,76, 41,01, 41,15, 47,00, 48,42, 48,48, 48,86, 49,20, 49,51, 54,65, 54,75, 55,26, 55,58, 55,61, 57,14, 57,27, 57,47, 57,79, 66,24, 67,80, 67,99, 70,34, 70,67, 81,0, 81,52, 114,10, 130,31, 156,0, 158,65, 161,1, 161,60, 168,20, 169,53, 169,59, 170,45, 171,25, 171,80, 171,95, 172,26, 172,33, 197,5, 204,80, 204,85.

m/z (FAB) 1132,6 [(M + Na)⁺, 42], 1110,8 [(M + H)⁺, 100].

P r z y k ł a d 61

Synteza [Api]³-aplidyny (SNPL1)

SNPL2 SNPL1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPU, wychodząc z SNPL2 (10 mg, 10,6 umola) i F1 (10 mg, 54 umola) otrzymano tytułowy związek (8 mg, 68%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 10,5 i 12,0 min.) ¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,80-1,03 (m, 24H), 1,11-1,70 (m, 9H), 1,72-1,81 (m, 1H), 1,81-1,90 (m, 1H), 1,90-2,24 (m, 6H), 2,30-2,39 (m, 1H), 2,53 (s, 3H) 2,55 (s, 3H), 2,65 (s, 3H), 2,52-2,66 (m, 2H), 2,94 (m, 1H), 3,07 (s, 3H), 3,11 (s, 3H), 3,15-3,18 (m, 1H), 3,22-3,31 (dd, J1 = 4,3, J2 = 15,1, 1H), 3,54-3,60 (m, 2H), 3,67-3,92 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,98 (m, 1H), 4,13-4,29 (m, 3H), 4,45-4,75 (m, 4H), 4,81 (t, J = 9,7, 1H), 5,09 (m, 1H), 5,18 (m, 1H), 5,26-5,44 (m, 3H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,30 (d, J = 8,3, 1H), 7,36 (d, J = 8,3, 1H), 7,68 (d, J = 9,7, 1H), 7,87 (d, J = 4,3, 1H), 8,09 (d, J = 9,7, 1H), 8,28 (d, J = 10,2, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C57H88N8O14: 1108,64; znaleziono (m/z): 1110,3 (M + H)⁺.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 62 Synteza [Hiv]³-aplidyny (SHPL1)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPU, wychodząc z SHPL2 (72 mg, 0,081 mmola) i F1 (75 mg, 0,405 mmola) otrzymano tytułowy związek (68 mg, 79%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą LC (Lichroprep RPC18, gradient ACN/H20/TFA od 70:30:0,5 do 90:10:0,5).

Rf = 0,49 (ACN/H2O/TFA 90:10:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,80-1,10 (m, 24H), 1,12-1,50 (m, 18H), 1,50-2,30 (m, 6H), 2,42 (m, 1H), 2,53 (s, 3H) 2,55 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 2,96-3,40 (m, 3H), 3,05 (s, 3H), 3,10 (s, 3H), 3,63 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (m, 1H), 4,01 (m, 1H) 4,30 (m, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,69 (m, 1H), 4,86 (m, 1H), 5,02 (d, J = 4,8, 1H), 5,09 (m 1H), 5,20 (m, 1H), 5,30 (m, 1H), 6,83 (d, J = 8,3, 2H), 6,89 (d, J = 6,3, 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (d, J = 9,7, 1H), 7,34 (m, 2H), 7,43 (d, J = 5,3, 1H), 7,74 (d, J = 9,7, 1H), 7,80 (d, J = 10,2, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 12,06, 14,22, 14,30, 16,49, 16,76, 17,84, 19,17, 21,08, 21,41,

21,54, 22,54, 23,79, 23,94, 24,05, 24,16, 24,82, 24,96, 25,05, 25,98, 26,45, 27,37, 27,57, 28,21,

28,59, 30,31, 30.83, 31,56, 31,62, 33,74, 34,24, 36,02, 36,25, 38,91, 38,96, 39,46, 39,86, 46,92,

48,44, 48,71, 49,06, 54,95, 55,49, 57,16, 57,68, 58,23, 59,13, 66,16, 66,28, 69,10, 70,83, 71,14,

79,12, 114,31, 129,96, 130,12, 130,59, 158,86, 168,69, 168,81, 169,75, 169,82, 170,18, 170,45, 170,52, 170,69, 170,84, 171,21, 171,28, 172,47, 173,17, 174,66, 174,82, 197,63, 201,38.

ESI-MS, obliczono dla C54H83N7O14: 1053,60; znaleziono (m/z): 1054,9 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 63

Synteza [Val]³-aplidyny (SVPL1)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPU, wychodząc z SVPL2 (10 mg, 11 μmola) i F1 (10,5 mg, 57 μ^Ό^) otrzymano tytułowy związek (8 mg, 69%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 10,9 i 12,3 min.)

PL 208 651 B1 ¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,02 (m, 24H), 1,13-1,38 (m, 9H), 1,55 (m, 2H), 1,67-1,81 (m, 4H), 1,95-2,02 (m, 3H), 2,10-2,17 (m, 2H), 2,26-2,39 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 2,58 (s, 3H), 2,74-2,92 (m, 1H), 3,10 (s, 3H), 3,15 (s, 3H), 3,20 (m, 1H), 3,36 (dd, J1 = 4,4, J2 = 14,2, 1H), 3,49-3,72 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,97-4,13 (m, 2H), 4,38 (dd, J1 = 4,6, J2 = 14,2, 1H), 4,49 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,68-4,81 (m, 2H), 5,11 (m, 1H), 5,26-5,30 (m, 1H), 5,33-5,40 (m, 1H), 6,84 (d, J = 7,8, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,36-7,52 (m, 2H), 7,48 (d, J = 9,6, 1H), 7,61 (d, J = 6,8, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C54H84N8O13: 1052,62; znaleziono (m/z): 1053,6 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 64

Synteza [Hiv]³-[izobutyrylo]⁸-didemniny A (8ISHPL1)

Do roztworu SHPL2 (10 mg, 11,2 μmola) w DCM (200 μθ w 0°C, pod Ar, dodano DIPEA (3 pl, 16,8 mola) i chlorek izobutyrylu (1,4 pl, 13,4 pmola). Po 3 godz. w 22°C dodano DCM (3 ml) i mieszaninę przemyto kolejno kwasem solnym HCI (2 ml, 0,1N), wodnym NaHCO3 (2 ml, nasyc.) i solanką (2 ml), wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono w próżni. Oczyszczanie pozostałości za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 19 min.) pozwoliło uzyskać tytułowy związek (10 mg, 94%) w postaci białego ciała stałego.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,10 (24H, m), 1,13-1,65 (18H, m), 1,72-2,58 (6H, m), 2,56 (s, 3H), 2,89 (s, 3H), 2,92 (m, 2H), 3,13 (m, 2H), 3,36 (dd, J1 = 4,6, J2 = 15,6, 1H), 3,54-3,73 (m, 3H),

3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,40 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,89 (m, 1H), 4,99 (d, J = 5,3, 1H), 5,03 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 6,73 (d, J = 9,3, 1H), 6,84 (d, J = 9,6, 2H), 7,08 (d, J = 9,6, 2H), 7,55 (d, J = 8,6, 1H), 7,82 (d, J = 11, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,78, 14,63, 15,69, 17,92, 19,03, 19,31, 19,66, 21,03, 22,29,

23,19, 23,85, 24,71, 25,14, 27,27, 28,22, 30,39, 30,51, 31,15, 33,80, 34,25, 35,61, 38,85, 39,63, 46,98, 48,51, 53,29, 53,65, 55,49, 56,01, 56,35, 57,26, 66,07, 69,07, 70,94, 79,33, 114,31, 130,08, 130,60, 158,84, 168,79, 169,75, 170,34, 170,68, 171,36, 171,73, 174,02, 179,84.

ESI-MS, obliczono dla C50H80N6O12: 956,58, znaleziono (m/z): 957,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 65

Synteza [Val]³-[izobutyrylo]⁸-didemniny A (8ISYPL1)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 8ISHPL1, wychodząc z SVPL2 (20 mg, 22,6 pmola) otrzymano tytułowy związek (19 mg, 88%) po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 19 min.).

PL 208 651 B1 ¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,81-1,02 (m, 24 H), 1,14-1-38 (m, 5H), 1,15 (d, J = 6,6, 3H), 1,19 (d, J = 6,6, 3H), 1,38-1,80 (m, 7H), 1,80-2,40 (m, 6 H), 2,57 (s, 3H), 2,58-2,64 (m, 1H), 2,85-2,92 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 3,16 (dd, J1 = 10,5, J2 = 14,4, 1H), 3,36 (dd, J1 = 4,5, J2 = 14,4, 1H), 3,39 (bs, 1H), 3,56 (dd, 1H, J = 4,5, 10,8), 3,59-3,72 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,01 (td, J1 = 3,3, J2 = 10,2, 1H), 4,39-4,47 (m, 2H), 4,58 (dd, J1 = 5,7, J2 = 7,5, 1H), 4,79 (t, J = 9,9, 1H), 5,03-5,14 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,4, 2H), 7,04 (d, J = 7,8, 1H), 7,08 (d, J = 8,4, 1H), 7,36 (d, J = 9,0, 1H), 7,45 (d, J = 10,2, 1H), 7,51 (d, J = 10,2, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 180,24, 175,10, 173,18, 171,14, 170,72, 170,42, 169,38, 168,73, 158,87, 130,60, 130,02, 114,33, 71,31, 70,50, 66,11, 59,47, 57,42, 56,56, 55,51, 54,93, 53,84, 48,83,

47,13, 41,94, 38,94, 35,67, 34,17, 33,63, 31,32, 31,10, 29,96, 28,32, 27,25, 25,30, 25,05, 24,82, 24,01, 23,22, 21,42, 19,88, 19,72, 11,25, 18,51, 15,60, 14,32, 11,96.

ESI-MS, obliczono dla C50H81N7O11: 955,60; znaleziono 956,8 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 66

Synteza [Hiv]³-[butyrylo]⁸-didemninyA(8BSHPL1)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 8ISHPL1, wychodząc z SHPL2 (10 mg, 11,2 μmola) otrzymano tytułowy związek (9 mg, 84%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 18,6 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,10 (m, 24H), 1,11-1,72 (m, 18H), 1,75-2,51 (m, 6H), 2,56 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,92 (m, 2H), 3,15 (m, 2H), 3,35 (dd, J1 = 5,0, J2 = 15,6, 1H), 3,54-3,77 (m, 3H),

3,79 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,40 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,89 (m, 1H), 4,98 (d, J1 = 6,0, 1H), 5,04 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 6,78 (d, J1 = 9,6, 1H), 6,84 (d, J1 = 9,6, 2H), 7,08 (d, J1 = 9,6, 2H), 7,54 (d, J1 = 9,6,

1H), 7,82 (d, J1 = 10,6, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,82, 14,15, 14,55, 15,72, 17,96, 18,67, 19,01, 21,05, 22,37,

23,13, 23,84, 24,71, 25,14, 27,30, 28,21, 29,92, 30,38, 30,63, 33,78, 34,25, 35,69, 35,97, 38,85,

39,61, 46,98, 48,52, 53,27, 55,49, 55,99, 56,25, 57,27, 66,07, 69,07, 70,96, 79,40, 114,31, 130,08,

130,59, 158,85, 168,78, 169,73, 170,42, 170,64, 171,36, 171,65, 174,07, 175,79.

ESI-MS, obliczono dla C50H80N6O12: 956,60; znaleziono (m/z): 957,8 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 67

Synteza [Hiv]³-[heksanoilo]⁸-didemniny A (8HSHPL1)

PL 208 651 B1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 8ISHPL1, wychodząc z SHPL2 (10 mg, 11,2 pmola) otrzymano tytułowy związek (9 mg, 82%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą

HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 27,8 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,10 (m, 24H), 1,11-1,72 (m, 22H), 1,80-2,51 (m, 6H), 2,56 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,93 (m, 2H), 3,14 (m, 2H), 3,35 (dd, J1 = 4,4, J2 = 14,1, 1H), 3,54-3,76 (m, 3H),

3,79 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,41 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 4,98 (d, J1 = 5,3, 1H), 5,03 (m, 1H), 5,19 (m, 1H), 6,76 (d, J1 = 8,7, 1H), 6,84 (d, J1 = 8,7, 2H), 7,08 (d, J1 = 8,7, 2H), 7,51 (d, J1 = 8,8, 1H), 7,81 (d, J1 = 9,7, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,59, 13,94, 14,34, 15,49, 17,73, 18,77, 20,81, 22,14, 22,46, 22,90, 23,60, 24,47, 24,69, 24,90, 27,08, 27,97, 30,14, 30,40, 31,54, 33,53, 33,76, 34,02, 35,47, 38,62, 39,40, 46,76, 48,28, 53,04, 55,26, 55,78, 55,90, 57,04, 65,84, 68,82, 70,72, 79,17, 114,07, 129,84, 130,36, 158,61, 168,54, 169,51, 170,15, 170,41, 171,12, 171,42, 173,86, 175,75.

ESI-MS obliczono dla C52H84N6O12: 984,61, znaleziono (m/z): 985,8 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 68

Synteza izobutyrylo-Pro-OBn

Do roztworu H-Pro-OBn · HCI (500 mg, 2,07 mmola) w DCM (10 ml) dodano pod argonem NMM (680 pl, 6,21 mmola). Po 10 min. dodano chlorek izobutyrylu (240 pl, 2,27 mmola) i mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do 20°C i mieszano przez 5 godz. Mieszaninę przesączono, a przesącz przemyto kolejno kwasem solnym HCI (15 ml, 1N), wodnym NaHCO3 (10 ml, nasyc.) i solanką (10 ml), po czym wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując (560 mg, 998%) tytułowy związek.

Rf = 0,42 (heksan : EtOAc.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 1,20-1,40 (2d, 6H), 1,90-2,35 (m, 4H), 2,35 (q, 1H), 3,40-3,80 (m, 2H), 4,30 (m, 1H), 5,20 (m, 2H), 7,40 (m, 5H).

P r z y k ł a d 69

Synteza izobutyrylo-Pro-OH

Do roztworu izobutyrylo-Pro-OBn (430 mg, 1,56 mmola) w odgazowanym MeOH dodano Pd/C 910%) (43 mg, 10% wag/wag.), po czym przedmuchano kolejno argonem i przepuszczono wodór. Mieszaninę mieszano pod H2 przez 14 godz., po czym odgazowano i przesączono. Roztwór zatężono, a pozostałość krystalizowano z mieszaniny MTBE/heksan otrzymując 140 mg (48%) tytułowego związku w postaci białego ciała stałego.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 1,20 (m, 6H), 1,90-2,10 (m, 3H), 2,50 (m, 1H), 2,70 (q, 1H), 3,40-3,70 (m, 2H), 4,60 (dd, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C9H15NO3: 185,11; znaleziono (m/z): 186,1 (M + H)⁺.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 70

Synteza [Hiv]³-[izobutyrylo]⁹-aplidyny (9ISHPL1)

Do roztworu izobutyrylo-Pro-OH (10 mg, 54 μmola) w DCM (150 μ!) w 0°C dodano DIPCDI (5 μ|, 32 umola). Kontynuowano mieszanie przez 60 min., po czym mieszaninę przeniesiono do kolby zawierającej SHPL2 (10 mg, 11,2 μmola) w DCM (150 μ^. Po 4 d w 2-4°C mieszaninę rozcieńczono DCM (2 ml) i przemyto kolejno kwasem solnym (1 ml, 0,1N), wodnym NaHCO3 (1 ml, nasyc.) i solanką (1 ml), a warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono. Pozostałość oczyszczano za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 13 i 14 min.) i uzyskano 9ISHPL1 (9 mg, 72%) w postaci białego ciała stałego.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,10 (m, 24H), 1,12-1,50 (m, 18H), 1,52-2,70 (m, 10H), 2,56 (s, 3H), 3,00-3,44 (m, 4H), 3,08 (s, 3H), 3,55-3,72 (m, 5H) 3,78 (s, 3H), 4,00 (m, 3H), 4,26 (m, 1H), 4,62 (m, 2H), 4,86 (m, 1H), 5,02 (d, J = 5,3, 1H), 5,30 (m, 2H), 6,84 (d, J = 9,0, 2H), 7,07 (d, J = 9,0, 2H), 7,29 (d, J = 11,0, 1H), 7,80 (d, J = 9,0, 1H); 7,88 (d, J = 11, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 12,04, 14,44, 16,91, 17,94, 18,96, 19,03, 19,15, 21,07, 21,59, 23,87, 24,10, 24,89, 25,08, 26,04, 27,54, 28,21, 28,87, 30,33, 31,61, 32,64, 33,77, 34,24, 36,19, 39,07, 39,33, 39,81, 46,87, 47,52, 48,45, 54,74, 55,49, 56,20, 57,08, 58,50, 66,41, 69,13, 71,48, 79,16, 114,27, 130,30, 130,59, 158,80, 168,55, 169,88, 170,86, 171,06, 171,22, 173,63, 174,92,

176,19.

ESI-MS, obliczono dla C55H87N7O13: 1053,64; znaleziono (m/z): 1054,6 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 71

Synteza [Val]³-[izobutyrylo]⁹-aplidyny (9ISVPL1)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 9ISHPL1, wychodząc z SVPL2 (10 mg, 11,2 μ^Ό^) otrzymano tytułowy związek (9 mg, 77%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 15,3 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,01 (m, 24H), 1,14-1,37 (m, 12H), 1,148-2,35 (m 8H), 2,55 (s, 3H), 2,57-2,68 (m, 1H), 2,77-2,83 (m, 1H), 3,12 (s, 3H), 3,19-3,23 (m, 1H), 3,35-3,41 (m, 2H), 3,52-3,56 (m, 1H), 3,58-3,70 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,03-4,13 (m, 1H), 4,33-4,35 (m, 1H), 4,44-4,48 (m, 1H), 4,55-4,66 (m, 2H), 4,70-4,83 (m, 1H), 5,35-5,39 (m, 2H), 6,82 (d, J = 8,4, 2H), 7,06 (d, J = 8,4, 2H), 7,25 (bs, 2H), 7,37 (d, 10,5, 1H), 7,46 (d, J = 8,7, 1H), 7,60 (d, J = 9,3, 1H), 8,07 (bs, 1H).

PL 208 651 B1 ¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 12,10, 14,44, 16,84, 18,63, 18,95, 19,92, 21,31, 21,61, 23,91, 24,05, 24,86, 25,00, 25,30, 26,06, 27,41, 28,33, 28,93, 30,00, 31,76, 32,65, 33,59, 31,16, 36,21, 39,17, 41,71, 42,19, 47,08, 47,57, 48,88, 54,37, 54,65, 55,50, 56,15, 57,33, 58,70, 59,33, 66,45, 70,92, 71,54, 114,29, 130,28, 130,59, 158,82, 168,41, 170,08, 170,52, 170,69, 171,03, 172,65, 173,80, 175,68, 176,42.

ESI-MS obliczono dla C55H88N8O12: 1052,65, znaleziono (m/z): 1053,8 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 72

Synteza Z-NVa-Pro-OMe

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy F2, zZNVa-OH (261 mg, 1,04 mmola), H-Pro-OMe · HCI (156,6 mg, 0,94 mmola) otrzymano tytułowy związek (315 mg, 87%) w postaci bezbarwnego oleju po oczyszczaniu za pomocą LC na żelu krzemionkowym (heksan-EtOAc, gradient 3:1 do 1:1).

Rf = 0,42 (heksan-EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,97 (t, J = 6,9, 2H), 1,44 (sekstet, J = 7,5, 2H), 1,53-1,65 (m, 1H), 1,68-1,77 (m, 1H), 1,82-2,09 (m, 3H), 2,17-2,24 (m, 1H), 3,43-3,80 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 4,45-4,55 (m, 2H), 5,07 (s, 2H), 5,51 (d, J = 8,4, 1H), 7,32-7,35 (m, 5H).

P r z y k ł a d 73

Synteza NVa-Pro-OH

Do roztworu Z-NVa-Pro-OMe (36 mg, 99 umola) w mieszaninie THF i MeOH (130 pl : 130 pl) w 0°C dodano wodny LiOH (130 μ l, 15% wag/wag.). Po 6 godz. mieszania, mieszaninę reakcyjną podzielono pomiędzy H2O (3 ml) i eter dietylowy (3 x 2 ml). Warstwę organiczną ekstrahowano NaHCO3 (3 x 2 ml). Połączone warstwy wodne zobojętniono (pH = 5) kwasem solnym HCI (0,1N) i podzielono Et2O (3 x 3 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono otrzymując tytułowy związek (36 mg, ilościowo) w postaci bezbarwnego oleju.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,96 (t, J = 6,9, 2H), 1,41 (sekstet, J = 7,4, 2H), 1,53-1,65-1,77 (m, 2H), 1,82-2,10 (m, 3H), 2,17-2,24 (m, 1H), 3,52-3,81 (m, 2H), 4,45-4,58 (m, 2H), 5,07 (bs, 2H), 5,81 (d, J = 8,4, 1H), 7,30-7,35 (m, 5H), 7,41 (bs, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C18H24N2O5: 348,17; znaleziono (m/z): 349,2 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 74

Synteza [ZNVa-Pro]⁹-aplidyny (9NVSAPL2)

PL 208 651 B1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPU, wychodząc z SAPL2 (18 mg, 19 μι^^) i Z-NVa-Pro-OH (34 mg, 97 μmola) otrzymano tytułowy związek (16 mg, 66%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 29 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,84-0,96 (m, 27H), 1,12-1,85 (m, 19H), 2,00-2,25 (m, 7H), 2,30-2,40 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,62 (dd, = 10,5, J2 = 17,7, 1H), 2,93 (d, 4,2, 1H), 3,14 (s, 3H), 3,14-3,20 (m, 1H), 3,28-3,34 (m, 2H), 3,50-3,67 (m, 4H), 3,77-3,80 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,82-3,91 (m, 1H), 4,00-4,17 (m, 2H), 4,27 (dd, = 6,3, J2 = 13,2, 1H), 4,43-4,51 (m, 2H), 4,58-4,63 (m, 1H), 4,69-4,75 (m, 1H), 4,77-4,82 (m, 1H), 5,07 (d, 1H, J = 12,9, 2H), 5,13 (d, J = 12,9, 1H), 5,32-5,41 (m, 2H), 6,07 (d, J = 8,7, 1H), 6,83 (d, J = 8,4, 2H), 7,06 (d, J = 8,4, 2H), 7,17 (d, J = 9,9, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,83 (d, J = 9,0, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,68, 13,74, 14,56, 15,24, 16,39, 16,85, 18,61, 20,94, 21,26, 23,34, 23,70, 24,76, 24,90, 25,02, 26,00, 27,17, 27,81, 28,54, 31,29, 31,40, 33,30, 33,85, 33,86,

36,19, 38,62, 38,84, 41,31, 46,91, 47,21, 49,38, 49,49, 52,50, 54,96, 55,24, 55,25, 56,50, 57,17,

57,96, 62,53, 66,40, 67,93, 70,64, 81,37114,04, 127,89, 127,77, 128,32, 129,97, 130,29, 136,84,

156,72, 158,55, 168,48, 169,36, 169,58, 170,52, 171,27, 171,71, 172,54, 173,22, 205,08.

ESI-MS, obliczono dla C67H100N8O16: 1272,73; znaleziono (m/z): 1273,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 75

Synteza [Hiv]³-[Z-NVa-Pro]⁹-aplidyny (9NVSHPL2)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPU, wychodząc z SHPL2 (10 mg, 11,2 pmola) i Z-NVa-Pro-OH (20 mg, 56 μmola) otrzymano tytułowy związek (8 mg, 60%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 26,7 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,10 (m, 24H), 1,12-1,80 (m, 22H), 1,82-2,35 (m, 6H), 2,42 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,96-3,38 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,48-3,72 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 3,88 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 4,68 (m, 2H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, = 5,3, 1H), 5,08 (m, 2H), 5,28 (m, 1H), 5,42 (m, 1H), 6,10 (d, J = 8,3, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,31 (m, 6H), 7,72 (d, J = 4,3, 1H), 7,78 (d, J = 8,7, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 12,06, 13,88, 14,22,

23,72, 23,98, 25,08, 26,25, 27,57, 28,15, 28,79, 30,32,

39,59, 39,90, 46,87, 47,44, 48,46, 52,76, 55,21, 55,49,

71,14, 79,07, 114,24, 127,87, 128,00, 128,56, 130,25,

170,36, 170,58, 170,77, 171,30, 171,86, 173,28, 174,94.

ESI-MS, obliczono dla C64H96N8O15: 1216,7; znaleziono m/z: 1217,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 76

Synteza [NVa-Pro]⁹-aplidyny (9NVSAPL1)

16,85, 17,76, 18,89, 19,18, 21,12, 21,47, 31,61, 33,45, 33,72, 34,07, 35,95, 38,92, 56,77, 57,17, 58,37, 66,41, 66,65, 69,22, 130,55, 157,00, 158,79, 168,82, 169,86,

PL 208 651 B1

Odgazowaną mieszaninę 9IWSAPL2 (10 mg, 7,8 pmola) i Pd/C (10%, 5 mg) w IPA : H2O (0,2 ml : 0,1 ml), nasycano (utrzymując 1 atm.) wodorem gazowym i mieszając przez 14 godz. Następnie mieszaninę przesączono (filtr teflonowy 0,45 pm) i zatężono w próżni uzyskując tytułowy związek (8,8 mg, ilościowo) w postaci białego ciała stałego.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,85-0,95 (m, 27H), 1,18-1,51 (m, 18H), 1,50-2,45 (m, 7H), 2,59-2,83 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,57-2,80 (m, 3H), 2,81-2,95 (m, 1H), 3,14 (s, 3H), 3,15-3,40 (m, 3H), 3,52-3,79 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 4,45-4,52 (m, 1 H), 4,61-4,65 (m, 1H), 4,70-4,85 (m, 2H), 5,17 (d, J = 3,3, 1H), 5,36-5,39 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,1, 2H), 7,86 (d, J = 8,7, 2H), 7,19 (d, J = 10,2, 1H), 7,82 (d, J = 9,0, 1H), 7,80-7,85 (m, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C59H40N8O14: 1138,69, znaleziono (m/z): 1139,7 [(M + H)]⁺.

P r z y k ł a d 77

Synteza [Hiv]³-[NVa-Pro]⁹-aplidyny (9NVSHPL1)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 9NVSAPL1, wychodząc z 9NVSHPL2 (10 mg, 8,2 pmola) otrzymano tytułowy związek (8 mg, ilościowo) w postaci białego ciała stałego.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,10 (m, 30H), 1,12-1,85 (m, 22H), 1,92-2,35 (m, 6H), 2,42 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,10-3,45 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,50-3,70 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 3,82 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 5,02 (d, J = 5,3, 1H), 5,32 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,38 (d, J = 8,7, 1H), 7,60 (d, J = 4,3, 1H), 7,80 (d, J = 9,3, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 12,03, 14,13, 14,30, 16,80, 17,81, 18,72, 19,15, 21,09, 21,55,

23,73, 23,96, 25,07, 26,16, 27,55, 28,17, 28,72, 29,91, 30,33, 31,52, 33,80, 34,17, 36,00, 38,94, 39,51, 39,84, 46,88, 47,51, 48,45, 55,01, 55,49, 56,91, 57,15, 58,10, 66,37, 69,17, 71,10, 79,12, 114,29, 130,21, 130,57, 158,82, 163,66, 168,91, 169,86, 170,38, 170,75, 170,82, 171,30, 173,22, 174,79.

ESI-MS obliczono dla C56H90N8O13: 1082,66, znaleziono m/z: 1083,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 78

Synteza [Hiv]³-[L-Lac(OTBDMS)]⁹-aplidyny [9LSHPL2(L)]

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPU, wychodząc z SHPL2 (10 mg, 11,2 pmola) i (L)-Lac(OTBDMS)-Pro-OH (17 mg, 56 pmola) otrzymano tytułowy związek (9 mg, 68%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, gradient ACN/H2O 85:15 - 100:0 przez 10 min. (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 30,1 min.).

PL 208 651 B1 ¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,08 (s, 3H), 0,10 (s, 3H), 0,82-1,10 (m, 24H), 1,11-1,72 (m, 18H), 1,75-2,51 (m, 6H), 2,41 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,00-3,40 (m, 5H), 3,11 (s, 3H), 3,53-3,82 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,02 (m, 1H), 4,27 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,63 (m, 2H), 4,87 (m, 1H), 5,01 (d, J =

4.8, 1H), 5,27 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,7, 2H), 7,29 (d, J = 9,7, 1H), 7,63 (d, J =

5.8, 1H), 7,88 (d, J = 9,7, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ -4,26, -4,12, 12,04, 14,40, 16,91, 17,97, 19,14, 20,60, 21,11, 21,66, 23,82, 24,11, 24,96, 25,08, 26,11, 26,37, 27,53, 28,18, 28,37, 30,33, 31,69, 33,75, 34,19, 36,23, 39,00, 39,36, 39,81, 46,87, 47,64, 48,45, 54,91, 55,37, 55,48, 56,81, 57,08, 58,37, 66,38,

69,14, 69,89, 71,42, 79,19, 82,66, 114,23, 130,36, 130,59, 158,77, 168,43, 469,86, 170,72, 171,01, 171,21, 172,03, 173,62, 174,91.

ESI-MS, obliczono dla C60H99N7O14Si: 1169,7; znaleziono m/z: 1170,9 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 79

Synteza [Hiv]³-[D-Lac(OTBDMS)]⁹-aplidyny [9LSHPL2(D)]

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPU, wychodząc z SHPL2 (10 mg, 11,2 pmola) i (D)-Lac(OTBDMS)-Pro-OH (17 mg, 56 μmola) otrzymano tytułowy związek (9 mg, 68%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, gradient ACN/H2O 85:15 - 100:0 w 10 min. (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 30,4 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,03 (m, 3H), 0,06 (m, 3H) 0,87 (s, 9H), 0,82-1,10 (m, 24H), 1,11-1,72 (m, 18H), 1,75-2,30 (m, 6H), 2,41 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,00-3,40 (m, 5H), 3,06 (s, 3H), 3,56 (m, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,61 (m, 2H), 4,86 (m, 1H), 5,00 (d, J = 4,8, 1H), 5,25 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (d, J = 9,7, 1H), 7,74 (d, J = 5,3, 1H), 7,87 (d, J = 9,7, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ -4,87, -4,84, 12,04, 14,38, 16,89, 17,94, 19,14, 20,24, 21,08,

21,60, 23,85, 24,12, 24,90, 25,06, 25,13, 26,01, 26,53, 27,53, 27,83, 28,20, 30,33, 31,51, 33,76,

34,20, 36,16, 38,99, 39,35, 39,82, 46,87, 47,02, 48,46, 54,79, 55,42, 55,48, 57,08, 57,18, 58,28,

66,39, 69,11, 71V43, 72,61, 79,18, 114,25, 130,29, 130,59, 158,79, 168,45, 169,86, 170,77, 170,81, 170,97, 171,20, 172,53, 173,67, 174,84.

ESI-MS, obliczono dla C60H99N7O14Si: 1169,7; znaleziono m/z: 1170,8 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 80

Synteza [Val]³-[L-Lac(OTBDMS)]⁹-aplidyny [9LSVPL2(L)]

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPU, wychodząc z SVPL2 (10 mg, 11,2 μmola) i (L)-Lac(OTBDMS)-Pro-OH (17 mg, 56 μmola) otrzymano tytułowy związek (9 mg, 68%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min., 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 17,8 min.).

PL 208 651 B1 ¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,14 (s, 6H), 0,71-1,06 (m, 27H), 1,10-1,42 (m, 10H), 1,43-1,84 (m, 8H), 1,85-2,40 (m, 11H), 2,57 (s, 3H), 2,80 (d, J = 14,7, 1H), 3,15 (s, 3H), 3,15-3,23 (m, 1H), 3,33-3,42 (m, 2H), 3,54 (dd, J1 = 4,2, J2 = 10,8, 1H), 3,58-3,69 (m, 3 H), 3,79 (s, 3H), 3,88-3,90 (m, 1H), 4,05-4,12 (bt, 1H), 4,32 (bs, 1H), 4,43-4,68 (m, 4H), 4,77 (t, J = 10,5, 1H), 5,31-5,35 (m, 2H), 6,83 (d, J = 8,4, 2H), 7,08 (d, J = 8,7, 2H), 7,39 (d, J = 9,9, 1H), 7,45 (d, J = 9,0, 1H), 7,60 (d, J = 10,5, 1H),

7,83 (d, J = 4,5, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ -4,67, -4,49, 11,84, 14,13, 16,67, 18,19, 18,41,

21,15, 21,40, 23,61, 23,92, 24,72, 24,80, 25,06, 25,88, 26,24, 27,17, 28,04, 28,13, 33,33, 33,81, 35,99, 38,84, 41,56, 41,95, 46,83, 47,52, 48,68, 54,09, 54,64, 55,26,

19,68, 20,48, 29,78, 31,57, 56,63, 57,13,

58,36, 59,12, 66,20, 70,10, 70,57, 71,27, 77,20, 114,01, 130,13, 130,36, 158,55, 168,09, 169,76,

170,07, 170,48, 170,77, 172,21, 172,33, 173,58, 175,45.

ESI-MS, obliczono dla C59H40N8O14: 1168,72, znaleziono (m/z): 1169,8 (M + H)⁺. P r z y k ł a d 81

Synteza [Hiv]³-[L-Lac]⁹-aplidyny [9LSHPL1(L)]: tamandaryna A

Do roztworu 9LSHPL2(L) (16 mg, 14 umola) w THF (500 pl, bezwodny) w 0°C, pod Ar, dodano TBAF (50 pl, 1M w THF). Po 1 godz. w 22°C mieszaninę zatężono w próżni, a surowy produkt oczyszczano za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient DCM : MeOH 1% do 5%) i uzyskano tytułowy związek (813 mg, 88%) w postaci białego ciała stałego. Dane eksperymentalne opublikował Fenical, W., et al., w J. Org. Chem., 2000, 65, 782-792.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-0,96 (m, 18H), 1,02 (d, J = 3,4, 3H), 1,04 (d, J = 3,4, 3H), 1,14-2,28 (m, 14H),1,24 (s, 3H), 1,34 (d, J = 6,8, 3H), 1,43 (d, J = 6,8, 3H), 2,44 (dd, J1 = 7,8, J2 =

17,1, 1H), 2,58 (s, 3H), 3,00 (bs, 1H), 3,10 (s, 3H), 3,14-3,31 (m, 2H), 3,37-3,43 (m, 2H), 3,56-3,72 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,90 (t, J = 7,8, 1H), 4,02 (dt, J1 = 3,4, J2 = 9,8, 1H), 4,25 (d, J = 3,9, 1H), 4,30 (t, J =

6,8, 1H), 4,37 (dd, J1 = 7,3, J2 = 8,3, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,71 (t, J = 7,4, 1H), 4,87 (t, J = 11,2, 1H), 5,03 (d, J = 4,9, 1H), 5,29 (dd, J1 = 3,4, J2 = 11,7, 1H), 5,42 (m, 1H), 6,83 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,34 (d, J = 9,8, 1H), 7,48 (d, J = 5,4, 1H), 7,76 (d, J = 9,8, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C54H85N7O14: 1055,6; znaleziono: 1056,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 82

Synteza [Hiv]³-[D-Lac]⁹-aplidyny [9LSHPL1(D)]

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 9LSHPL1(L), wychodząc z 9LSHPL2(D) (20 mg, pmola) i TBAF (50 pl, 1M w THF) otrzymano tytułowy związek (14 mg, 78%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient DCM: MeOH 1% do 5%).

PL 208 651 B1 ¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,78-1,08 (m, 18H), 1,02 (d, J = 3,9, 3H), 1,04 (d, J = 3,4, 3H), 1,10-2,36 (m, 14H),1,20 (d, J = 6,3, 3H), 1,34 (d, J = 6,3, 3H), 1,37 (d, J = 6,3, 3H), 2,38-2,50 (dd, J1 =

7.8, J2 = 17,5, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,10 (s, 3H), 3,13-3,20 (m, 1H), 3,22-3,28 (m, 1H), 3,37-3,42 (dd, J1 =

3.9, J2 = 4,3, 1H), 4,61-4,68 (m, 3H), 3,69-3,76 (m, 3H), 3,77 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (t, J = 7,8, 1H), 3,97-4,07 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,41 (q, J = 6,3, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,71 (m, 1H), 4,86 (t, J =

10,7, 1H), 5,01 (d, J = 4,8, 1H), 5,21-5,37 (m, 2H), 6,83 (d, J = 8,3, 2H), 7,06 (d, J = 8,3, 2H), 7,41 (m,2H), 7,77 (d, J = 9,2, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C54H85N7O14: 1055,62; znaleziono: 1056,6 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 83

Synteza [Val]³-[L-Lac]⁹-aplidyny [9LSVPL1(L)]

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 9LSHPL1, wychodząc z 9LSVPL2 (5 mg, 4,3 pmola) otrzymano tytułowy związek (4 mg, 88%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient DCM : MeOH 1% do 5%).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,02 (m, 18H), 1,16-1,42 (m, 4H), 1,32 (d, J = 3,0, 3H), 1,40 (d, J = 6,6, 3H), 1,56-1,83 (m, 8H), 1,95-2,34 (m, 11H), 2,58 (s, 3H), 2,84 (d, J = 14,7, 1H), 3,15 (s, 3H), 3,15-3,23 (m, 1H), 3,36-3,42 (m, 1H), 3,55 (dd, J1 = 9,0, J2 = 10,5, 2H), 3,64-3,66 (m, 3 H), 3,95 (dd, J1 = 3,3, J2 = 9,9, 1H), 4,08 (td, J1 = 7,5, J2 = 17,1, 1H), 4,32 (bs, 1H), 4,41 (dd, = J1 = 6,6, J2 =

9,9, 1H), 4,48 (dd, J1 = 5,1, J2 = 10,5, 1H), 4,61 (dd, J1 = 6,0, J2 = 6,6, 1H), 4,69-4,80 (m, 2H), 5,29-5,35 (m, 1H), 5,57 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,1, 2H), 7,08 (d, J = 8,7, 2H), 7,37 (d, J = 3,9, 1H), 7,40 (d, J = 5,4, 1H), 7,60 (d, J = 10,8, 1H), 7,72 (d, J = 3,9, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C54H86N8O13: 1054,63; znaleziono: 1055,8 (M + H)⁺.

Synteza jednostki spiro[4.4]nonanowej

P r z y k ł a d 84

Synteza N-[(2R)-2-allilo-N-(tert-butoksykarbonylo)prolilo)D-leucyny (9)

Do zimnego (0°C) roztworu 8 (1,53 g, 6 mmola) w bezwodnym DCM (33 ml) pod argonem, dodano: HOAt (980 mg, 7,2 mmola), D-Leu-OBn · pTsOH (2,65 g, 12 mmola), NMM (1,22 g, 12 mmola) i DCC (1,48 g, 7,2 mmola). Mieszaninę mieszano przez 2 godz. w 0°C, po czym 12 godz. w r. t; dodano dodatkowo D-Leu-OBn · pTsOH (0,66 g, 3 mmola) i NMM (0,30 g, 3 mmola) i mieszaninę mieszano przez 3 godziny dłużej. Mieszaninę przesączono, a rozpuszczalnik zatężono w próżni, pozostałość rozpuszczono w EtOAc (30 ml) i przemyto kolejno NaHCO3 (2 x 25 ml, nasyc), kwasem cytrynowym (2 x 25 ml, 10%) i solanką (25 ml). Roztwór organiczny wysuszono (Na2SO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą LC-żelowej (heksan - EtOAc, 6:1) uzyskując 9 (2,63 g, 96%) w postaci bezbarwnego oleju.

[a]D²⁰ 12,4 (d, MeOH). HPLC (kolumna Bondapack C18 (Waters), 10 m, 3,9 x 300 mm, przepływ: 1 ml/min., przy 214 nm, eluent ACN/0,05% TFA (40:60)], tR = 9,08 min.].

PL 208 651 B1 ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 0,86 (m, 6H), 1,37 (s, 9H), 1,55-1,72 (m, 5H), 2,00 (m, 2H), 2,64 (m, 1H), 2,86 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 5,05-5,11 (m, 4H), 5,63-5,72 (m, 1H), 7,28-7,35 (m, 5H).

¹³C-MNR (75 MHz, aceton-d6): δ 21,6, 22,8, 24,6, 28,3, 34,7, 38,2, 41,3, 49,38, 51,0, 66,9,

69,7,80,1, 119,1, 128,3, 132,7, 153,9, 172,8.

Źródło syntezy 8: a) Seebach, D., et al., J. Am. Chem. Soc, 1983, 105, 5390-5398; b) Genin, M. J., et al., J. Org. Chem., 1993, 58, 2334-2337.

P r z y k ł a d 85

Synteza (5R,8RS)-1-(tert-butoksykarbonylo)-7-[(1R)-1-benzyloksykarbonylo-3-metylobutylo]-8-hydroksy-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonanu (10)

Do roztworu 9 (1,56 g, 3,42 mmola) w MeOH/H2O (2:1, 108 ml) pod argonem, dodano roztwór OsO4 (2,5% wag./wag., 2,9 ml) w tert-butanolu. Kontynuowano mieszanie przez 10 min. i dodano NalO4 (2,195 g, 10,3 mmola). Po 24 godz. mieszania mieszaninę reakcyjną rozcieńczono H2O (100 ml) i ekstrahowano EtOAc (3 x 50 ml). Połączone ekstrakty przemyto solanką (50 ml), wysuszono (Na2SO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą LC na żelu krzemionkowym (heksan - EtOAc, gradient 80:20 do 0:100%) uzyskując diastereoizomery 10a i 10b (połączone: 1,17 g, 76%) w postaci białego ciała stałego.

10a: HPLC [kolumna Novapack C18 (Waters), 3,9 x 150 mm, φ = 1 ml/min., λ = 214 nm, eluent: CH3CN/0,05%TFA, (40/60)] = 14,45 min.; t. t.: 140-141 °C, [a]D²⁰ -4° (c 1, MeOH).

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 0,90 (m, 6H), 1,29 (s, 9H), 1,64-2,30 (m, 9H); 2,68 (dd, 1H, J1 = 6, J2 = 13, 1H), 3,37 (m, 2H), 4,51 (dd, 1H), 5,13 (d, J = 15, 2H), 5,79 (t, J = 5, 2H), 7,40 (m, 5H).

¹³C-MNR (75 MHz, aceton-d6): δ 21,8, 23,8, 24,1, 24,9, 28,5, 39,6, 40,8, 41,5, 48,5, 66,8, 79,4,

79,8, 81,2, 129,1, 129,3, 128,6, 171,7, 172,0.

ESI-MS, obliczono dla C25H36N2O6: 460,26; znaleziono m/z: 483,4 (M+Na)⁺.

10b: HPLC [kolumna Novapack C18 (Waters), 3,9 x 150 mm, φ = 1 ml/min., λ = 214 nm, eluent: CH3CN/0,05%TFA, (40/60)] = 18,75 min.; t. t.: 134-135°C, [α]²% +26 (c 1,2, MeOH).

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 0,90 (6H, m), 1,40 (9H, s), 1,50-2,60 (9H, m), 3,40 (2H, m), 4,20-5,40 (5H, m), 7,40 (5H, m).

¹³C-MNR (75 MHz, aceton-d6): δ 21,3, 23,2, 24,1, 24,9, 28,3, 38,9, 40,2, 42,5, 47,9, 53,2, 66,8,

77,5, 79,4, 80,6, 129,1, 171,2, 174,1.

ESI-MS, obliczono dla C25H36N2O6: 460,26; znaleziono m/z: 483,5 (M+Na)⁺.

P r z y k ł a d 86

Synteza (5R)-7-[(1R)-1-benzyloksykarbonylo-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonanu w postaci soli, trifluorooctanu (11)

Do roztworu 10 (430 mg, 0,93 mmola) w TFA (10 ml) dodano NaBH4 (106 mg, 2,8 mmola). Mieszaninę mieszano przez 2 godz., po czym reakcję zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość podzielono pomiędzy H2O (5 ml) i DCM (20 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4) i zatężono w próżni uzyskując 11 w postaci pomarańczowego oleju (318 mg, ilościowo).

[a]²⁰D +15 (c 1, MeOH).

PL 208 651 B1 ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 0,91 (m, 6H), 1,50 (m, 1H), 1,66-1,94 (m, 2H), 2,11-2,72 (m, 6H), 3,48-3,72 (m, 4H), 4,74 (dd, J1 = 6, J2 = 15, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,37 (m, 5H).

¹³C-MNR (75 MHz, aceton-d6): δ 21,2, 23,2, 23,9, 25,5, 30,2, 34,6, 38,0, 42,2, 46,6, 53,9, 67,6,

69,6, 129,3, 161,1, 161,6, 170,9, 172,6.

ESI-MS, obliczono dla C20H28N2O3: 344,21; znaleziono m/z: 345,3 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 87

Synteza (5R)-1-(tert-butoksykarbonylo)-7-[(1R)-1-karboksy-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonanu (12)

Do roztworu 11 (150 mg, 0,44 mmola) w ACN (5 ml) dodano, mieszając pentahydrat wodorotlenku tetrametyloamoniowego (158 mg, 0,87 mmola) i Boc2O (144 mg, 0,66 mmola). Po 6 godz. dodano dodatkowy TMAH · 5H2O (158 mg) i Boc2O (192 mg). Reakcję mieszano przez 2 dni, po czym podzielono pomiędzy H2O (10 ml) i DCM (25 ml). Warstwę wodną liofilizowano i oczyszczano za pomocą LC na żelu krzemionkowym (DCM-MeOH, gradient 92:8 do 60:40) uzyskując 12 (100 mg, 64%) w postaci biał ego ciał a stał ego.

P r z y k ł a d 88

Synteza (5R)-1-(izobutyrylo)-7-[(1R)-1-benzyloksykarbonylo-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonanu (13)

Do roztworu 11 (169 mg, 0,49 mmola) w bezwodnym DCM (10 ml) w 0°C, pod argonem, dodano TEA (199 mg, 1,96 mmola), DMAP (6 mg, 0,049 mmola) i wkroplono chlorek izobutyrylu (104 mg, 0,98 mmola). Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej i mieszano przez 24 godz. Surowy produkt podzielono pomiędzy H2O (10 ml) i DCM (10 ml). Warstwę organiczną przemyto solanką (10 ml), wysuszono (Na2SO4) i zatężono w próżni. Otrzymano czysty związek 13 (150 mg, 74%) w postaci białego ciała stałego po LC na żelu krzemionkowym (heksan-EtOAc, gradient 60:40 do 0:100).

HPLC [kolumna Novapack C18 (Waters), 3,9 x 150 mm, φ = 1 ml/min, λ = 214 nm, eluent:

CH3CN/0,05%TFA, (50/50)] t_R = 4,50 min.; t.t: 87°C, [α]²% +9,6 (c 1,4, MeOH).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,90 (2d, J = 7, 6H), 1,09-1,12 (2d, 6H), 1,37 (septet, J = 6, 1H),

1,61-2,10 (m, 7H), 2,64 (m, 2H), 3,14 (dd, J1 = 9, J2 = 17, 1H), 3,64 (m, 3H), 4,85 (dd, J1 = 5, J2 = 10, 1H), 5,14 (d, J = 6, 2H), 7,32 (m, 5H).

¹³C NMR (300 MHz, CDCI3): δ 18,6, 18,7, 21,2, 23,1, 24,0, 24,8, 29,5, 32,5, 35,7, 37,6, 40,5,

47,8, 52,7, 66,7, 76,3, 170,8, 174,3, 174,9.

ESI-MS, obliczono dla C24H34N2O4: 414,25; znaleziono m/z: 415,4 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 89

Synteza (5R)-1-(ketopropionylo)-7-{(1R)-1-benzyloksykarbonylo-3-metylobutylo}-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonanu (14)

PL 208 651 B1

Chlorek kwasu pirogronowego otrzymano zgodnie z metodą opisaną w literaturze, Pansare, S. V.; Gnana R. R. „Asymmetric Allylation and reduction on an Ephedrine-Derived template: Stereoselective Synthesis of a Hydroksy Acids and derivatives”, J. Org. Chem., 1998, 63, 4120-4124. Do kwasu pirogronowego (115 mg, 1,31 mmola) dodano eter metylowo-a,a-dichlorometylowy (188 mg, 1,57 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 20 min., a otrzymany roztwór ogrzano do 50-55°C, po czym mieszano przez dalsze 30 min. Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do oziębienia do temperatury pokojowej i dodano DCM (3 ml). Do roztworu 11 (150 mg, 0,33 mmola) w bezwodnym DCM (4 ml) w 0°C, pod argonem, dodano TEA (200 mg, 1,98 mmola) i DMAP (4 mg, 0,033 mmola) do świeżo przygotowanego roztworu chlorku kwasu pirogronowego w 0°C. Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej i mieszano przez 6 godz. Surowy produkt przemyto kolejno kwasem cytrynowym (5 ml, 10%), wodnym nasyconym NaHCO3 (5 ml) i solanką (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4) i zatężono. Otrzymano czysty związek 14 (77 mg, 56%) w postaci oleju, po LC na żelu krzemionkowym (heksan-EtOAc, 1:3).

HPLC [kolumna Novapack C18 (Waters), 3,9 x 150 mm, φ = 1 ml/min., λ = 24 nm, eluent: ACN/0,05%TFA, (50/50)] tR = 5,87 oraz 6,72 min.

¹H NMR (200 MHz, CDCI3): δ 0,92 i 0,95 (2d, J = 6, 6H); 1,42 (m, 1H); 1,61-2,39 (m, 7H), 2,44 (s, 3H), 2,77 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 3,56-3,78 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 4,67 i 4,85 (dd, J1 = 6, J2 = 10, 1H), 5,21 (s, 2H), 7,34 (m, 5H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 21,2, 23,0, 24,4, 24,8, 26,4, 29,3, 35,6, 37,3, 40,7, 48,9, 53,0,

66,8, 68,6, 135,0, 166,0, 170,8, 173,0, 198,0.

ESI-MS, obliczono dla C23H30N2O5: 414,22; znaleziono m/z: 415,4 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 90

Synteza (5R)-1-(2-metyloakryloilo)-7-[(1R)-1-benzyloksykarbonylo-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonanu (15)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 13, wychodząc z 11 (200 mg, 0,43 mmola) i chlorku metyloakryloilu (89 mg, 0,86 mmola) otrzymano tytułowy związek (70 mg, 50%) w postaci bezbarwnego oleju, po oczyszczeniu za pomocą LC (żel krzemionkowy, heksan - EtOAc 2:1).

HPLC [kolumna Novapack C18 (Waters), 3,9 x 150 mm, φ = 1 ml/min, λ = 214 nm, eluent: ACN/0,05% TFA, (25/75)] Rt = 6,38 min.

¹H NMR (200 MHz, CDCI3): δ 0,91 (t, J = 6, 6H), 1,44 (m, 1H), 1,64-1,93 (m, 5H), 1,93 (s, 3H), 1,96-2,12 (m, 2H), 2,78 (m, 1H), 3,20 (m,1H), 3,56-3,68 (m, 3H), 4,80 i 4,77 (2d, J = 10, 1H), 5,16 (s, 2H), 5,19 (d, J = 9, 2H), 7,32 (m, 5H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 19,8, 21,4, 23,0, 24,2, 24,9, 29-9, 37,1, 37,7, 41,1, 50,2, 53,2,

66,6, 67,4, 116,9, 128,1, 128,3, 128,4, 135,0, 141,7, 170,7, 174,1.

ESI-MS, obliczono dla C24H32N2O4: 412,24; znaleziono: 413,3 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 91

Synteza (5R)-1-(izobutyrylo)-7-[(1R)-1-karboksy-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonanu (16)

Odgazowany roztwór 13 (134 mg, 0,32 mmola) w metanolu, zawierający 10% Pd/C (27 mg) poddano wodorowaniu przy 16 psi przez 24 godz. Mieszaninę przesączono przez warstwę celitu, po

PL 208 651 B1 czym przesączony roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 16 (100 mg, 95%) w postaci bezbarwnego oleju. T. t. 68-69°C [α]²% -2 (c 1,1, MeOH).

¹H-NMR [300 MHz, aceton-d6]: δ 0,87-0,91 (2d, J = 7, 6H), 1,09-1,12 (2d, 6H), 1,46 (m, 1H), 1,70 (m, 2H), 1,90-2,10 (m, 5H), 2,49 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 3,49 (dt, J1 = 8, J2 = 10, 1H), 3,61-3,75 (m, 2H), 4,71 (dd, J1 = 5, J2 = 11, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 16,4, 16,6, 21,1, 23,0, 24,3, 25,0, 30,8, 32,6, 36,6, 36,9, 40,6, 48,0, 53,4, 67,5,171,8, 174,2, 176,2.

ESI-MS, obliczono dla C17H28N2O4: 324,20; znaleziono: 323,3 (M-1)⁺.

P r z y k ł a d 92

Synteza (5R)-1-(ketopropionylo)-7-[(1R)-1-karboksy-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]-nonanu (17)

Odgazowany roztwór 14 (79 mg, 0,26 mmola) w metanolu (20 mI) zawierający Pd-C (10%, 22 mg) poddano wodorowaniu przy ciśnieniu atmosferycznym przez 45 min. Przesączony roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 17 (79 mg, 95%) w postaci białego ciała stałego.

HPLC [kolumna Novapack C18 (Waters), 3,9 x 150 mm, φ = 1 ml/min, λ = 214 nm, eluent: ACN/0,05% TFA, (20/80)] Rt = 13,14 min.

¹H NMR (200 MHz, CDCI3): δ 0,93 (m, 6H), 1,43 (m, 1H), 1,71-2,22 (m, 7H), 2,34 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 2,74 (m, 1H), 3,31 (m, 1H), 3,74 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 4,80 (dd, J1 = 6, J2 = 10, 1H), 7,07 (bs, 1H).

¹³C NMR (200 MHz, CDCI3): δ 21,3, 23,2, 24,7, 25,1, 27,1, 29,9, 36,0, 37,0, 41,0, 49,3, 53,6,

69,1, 162,1, 172,7, 173,7, 197,5.

ESI-MS, obliczono dla C23H30N2O5: 324,17; znaleziono m/z: 325,1 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 93

Synteza (5R)-1-(2-metyloakryloilo)-7-[(1R)-1-karboksy-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro-[4.4]nonanu (18)

Do roztworu 15 (65 mg, 0,16 mmola) w metanolu (2,5 ml) dodano wodny NaOH (1,6 ml, 1N) i H2O 91,6 ml) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godz. Otrzymaną mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość podzielono pomiędzy H2O (20 ml) i DCM (20 ml). Warstwę wodną zakwaszono do pH = 2 kwasem solnym (10 ml, 0,1N) i ekstrahowano DCM (3 x 20 ml). Połączone warstwy organiczne przemyto solanką (25 ml), wysuszono (Na2SO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 18 (44 mg, 85%) w postaci białego ciała stałego. HPLC (kolumna Novapack C18 (Waters), 3,9 x 150 mm, φ = 1 ml/min, λ = 214 nm, eluent: ACN/0,05% TFA, (25/75)]

Rt = 6,38 min.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,86 (d, J (m, 8H), 2,56 (m, 1H), 3,19-3,44 (m, 2H), 3,57-3, 5,18 (d, J = 6, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 19,5, 21,2, 67,5, 117,5, 140,6, 170,8, 174,2.

ESI-MS, obliczono dla C17H26N2O4: 322,19

5, 3H), 0,89 (d, J = 5, 3H), 1,42 (m, 1H), 1,55-2,25 (m, 2H), 4,78 (d, J = 11, 1H), 4,82 (d, J = 11, 1H),

23,1, 24,2, 25,1, 30,9, 36,5, 37,6, 40,9, 50,5, 53,7, ; znaleziono: 323,2 (M + H)⁺.

PL 208 651 B1

P r z y k ł a d 94

Synteza [(5R)-1-(tert-butoksykarbonylo)-7-[(1R)-1-karboksy-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonan]^7,9-aplidyny (9SBSAPL1)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL3, wychodząc z SAPL4 (10 mg, 13 pmola), 12 (5 mg, 14 pmola), HATU (12,4 mg), HOAt (4,5 mg), NMM (3,3 pl), DCM (140 pl) i DMF (70 pl), otrzymano tytułowy związek (11 mg, 73%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min, 250 x 21 mm, przy 270 nm, Rt = 30 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,85-0,97 (m, 24 H), 1,19-1,34 (m, 18 H), 1,48 (s, 9H), 1,50-2,20 (m, 6 H), 2,32-2,36 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,58-2,72 (m, 2H), 2,97-3,08 (m, 1H), 3,10-3,22 (m, 3H), 3,34 (dd, 1H, J = 3,9, 13,8), 3,46-3,79 (m, 6H), 3,79 (s, 3 H), 4,03-4,12 (m, 2H), 4,28 (dd, 1H, J = 6,6, 13,2), 4,57-4,63 (m, 2H), 4,79-4,88 (m, 2H), 5,15 (d, 1H, J = 3,3), 5,21-5,23 (m, 1H), 6,84 (d, 2 H, J = 8,4), 7,07 (d, 2H, J = 8,7), 7,28 (d, 1H, J = 10,8), 7,79 (d, 1H, J = 6,6), 7,82 (d, 1H, J = 9,9).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,66, 15,21, 15,43, 16,79, 17,23, 18,69, 18,77, 21,24, 23,67, 23,95, 24,10, 24,90, 25,10, 25,38, 27,04, 28,23, 28,75, 29,93, 31,61, 34,50, 33,88, 34,16, 36,20, 36,57, 38,76, 39,09, 39,78, 41,29, 47,27, 47,76, 49,60, 49,96, 52,66, 55,50, 56,26, 57,38, 58,18, 66,74, 66,86, 68,34, 70,53, 80,75, 81,93, 114,33, 130,23, 130,54, 168,08, 169,83, 170,18, 170,80, 171,43, 172,55, 175,04, 205,04.

ESI-MS, obliczono dla C60H93N7O15: 1151,7; znaleziono m/z: 1152,4 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 95

Synteza [Hiv]³-[(5R)-1-(tert-butoksykarbonylo)-7-[(1R)-1-karboksy-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonan]^7,9-aplidyny (9SBSHPL1)

SHPL4 9SBSHPL1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL3, wychodząc z SHPL4 (10 mg, 13 pmola), 12 (5 mg, 14 pmola), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 pl), DCM (150 pl) i DMF (50 pl), otrzymano tytułowy związek (10 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczeniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min, 250 x 21 mm, przy 270 nm, Rt = 28,1 min.).

PL 208 651 B1 ¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,80-1,07 (m, 24H), 1,08-1,67 (m, 12H), 1,48 (s, 9H), 1,68-2,30 (m, 10H), 2,41 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,68 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,07-3,40 (m, 4H), 3,42-3,72 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,29 (m, 1H) 4,63 (m, 1H), 4,77 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J = 4,8, 1H), 5,25 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,31 (d, J = 9,7, 1H), 7,50 (d,

J = 5,8, 1H), 7,85 (d, J = 9,7, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 12,07, 14,25, 17,12, 17,92, 19,15, 21,11, 21,18, 23,80, 24,00, 24,06, 24,86, 25,08, 25,15, 27,58, 28,21, 28,82, 30,33, 31,18, 33,78, 34,28, 35,77, 36,65, 39,07, 39,45, 39,86, 46,91, 48,14, 48,47, 52,62, 55,49, 57,13, 58,42, 66,36, 66,80, 69,14, 70,84, 79,19, 80,55, 114,27, 130,29, 130,59, 154,12, 158,81, 168,25, 169,84, 170,72, 170,80, 170,90, 171,25, 174,89.

ESI-MS, obliczono dla C57H89N7O14: 1095,6; znaleziono m/z: 1096,9 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 96

Synteza [(5R)-1-(izobutyrylo)-7-[(1R)-1-karboksy-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonan]^7,9-aplidyny (9SISAPL1)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL3, wychodząc z SAPL4 (11 mg, 12,9 μmola), 16 (5 mg, 15,4 pmola), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (3,6 pl), DCM (155 pl) i DMF (78 pl), otrzymano tytułowy związek (10 mg, 69%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczeniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min, 250 x 21 mm, przy 270 nm, Rt = 19 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,86-1,00 (m, 24H), 1,12 (d, J = 6,9, 3H), 1,18 (d, J = 6,6, 3H), 1,34 (t, J = 6,6, 2H), 0,90-1,30 (m, 7H), 1,56-2,25 (m, 16 H), 2,30-2,80 (m, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,95-3,06 (m, 1H), 3,15-3,25 (m, 3 H), 3,65 (dd, 1H) 3,52-3,79 (m, 6H), 3,79 (s, 3H), 3,98-4,15 (m, 1H), 4,28 (dd, J1 = 6,6, J2 = 10,3, 1H), 4,59 (m, 2H), 4,79-4,85 (m, 2H), 5,17 (d, J = 3,6, 1H), 5,40-5,44 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,4, 2H), 7,06 (d, J = 8,7, 2H), 7,24 (d, J = 11,1, 1H), 7,90 (d, J = 9,3, 1H), 8,56 (d, J = 5,1, 1H). ¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ: 11,50, 14,92, 15,22, 16,68, 16,95, 18,50, 18,59, 18,81, 20,94,

23,42, 23,80, 24,49, 24,68, 24,90, 25,11, 26,91, 27,98, 30,93, 31,30, 35,58, 33,88, 34,16, 35,85,

36,24, 38,64, 38,84, 39,71, 41,29, 47,01, 47,76, 49,42, 49,62, 52,66, 55,26, 55,73, 57,12, 58,21, 66,57, 67,40, 68,10,70,79, 81,57, 114,07, 130,05, 130,31, 158,57, 168,12, 169,66, 170,08, 170,56, 171,13, 171,96, 72,37, 174,04, 175,41, 205,04.

ESI-MS, obliczono dla C59H91N7O14: 1121,66; znaleziono: 1122,8 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 97

Synteza [Hiv]³-[(5R)-1-(tert-butoksykarbonylo)-7-[(1R)-1-karboksy-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonan]^7,9-aplidyny (9SISHPL1)

PL 208 651 B1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL3, wychodząc z SHPL4 (10 mg, 13 pmola), 16 (4,5 mg, 14 pmola), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 pl), DCM (150 pl) i DMF (50 pl), otrzymano tytułowy związek (10 mg, 72%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min, 250 x 21 mm, przy 270 nm, Rt = 16,9 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,80-1,07 (m, 24H), 1,08-1,47 (m, 12H), 1,48-2,30 (m, 16H), 2,36 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,65 (m, 1H), 2,96 (m, 1H), 3,18 (m, 2H), 3,36 (m, 2H), 3,65 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,72 (m, 2H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J =

4,8, 1H), 5,45 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,7, 2H), 7,27 (d, J = 4,8, 1H), 7,88 (d, J = 9,7, 1H), 8,32 (d, J = 4,8, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C56H87N7O13: 1065,6; znaleziono m/z: 1066,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 98

Synteza [(5R)-1-(ketopropionylo)-7-[(1R)-1-karboksy-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]-nonan]^7,9-aplidyny (9SPSAPL1)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL3, wychodząc z SAPL4 (10 mg, 11,7 pmola), 17 (5 mg, 15,4 pmola), HATU (12 mg), HOAt (5 mg), NMM (5 pl), DCM (140 pl) i DMF (70 pl), otrzymano tytułowy związek (9 mg, 63%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczeniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min, 250 x 21 mm, przy 270 nm, Rt = 14,4 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,90-1,00 (m, 24 H), 1,05-1,40 (m, 12 H), 1,40-2,25 (m, 16H), 2,27-2,41 (m, 1H), 2,42-2,70 (m, 3H), 2,54 (s, 3H), 2,92-2,98 (m, 1H), 3,12-3,38 (m, 4 H), 3,54-3,78 (m, 4 H), 3,79 (s, 3H), 4,01-4,12 (m, 2H), 4,20-4,26 (m, 2H), 4,57-4,62 (m, 2H), 4,77-4,82 (m, 2H), 535,18 (d, J = 3,0, 2H), 5,37-5,42 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,7, 2H), 7,20 (d, J = 9,6, 1H), 7,85 (d, J = 9,6, 1H), 98,04 (d, J = 5,4, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,86, 14,97, 15,47, 16,78, 17,12, 18,84, 21,20, 21,27, 23,62, 24,14, 15,03, 25,15, 25,30, 27,35, 27,51, 28,19, 30,46, 31,52, 34,27, 35,95, 39,01, 40,07, 41,59,

47,25, 49,72, 53,08, 55,51, 55,81, 57,38, 58,21, 66,66, 68,19, 69,23, 70,74, 81,69, 85,15, 114,33, 130,13, 130,56, 158,85, 161,12, 168,49, 169,81, 169,91, 170,81, 171,38, 171,69, 172,60, 173,34, 197,64, 205,19.

ESI-MS, obliczono dla C58H87N7O15: 1121,63, znaleziono 1122,3 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 99 ₃

Synteza [Hiv]³-[(5R)-1-(ketopropionylo)-7-[(1R)-1-karboksy-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]nonan]^7,9-aplidyny (9SPSHPL1)

PL 208 651 B1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL3, wychodząc z SAPL4 (10 mg, 13 pmola), 17 (4,5 mg, 14 pmola), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 pl), DCM (150 pl) i DMF (50 pl), otrzymano tytułowy związek (10 mg, 72%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczeniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min, 250 x 21 mm, przy 270 nm, Rt = 13,6 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,80-1,10 (24H, m), 1,11-1,80 (12H, m), 1,81-2,30 (10H, m), 2,45 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 3,07-3,43 (m, 6H), 3,52-3,77 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,03 (d, J = 4,3, 1H), 5,45 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (d, J = 8,7, 1H), 7,81 (d, = 9,2, 1H), 7,87 (d, J =

4,8, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C55H83N7O14: 1065,6; znaleziono 1066,4 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 100

Synteza [Hiv]³-[(5R)-1-(akryloilo)-7-[(1R)-1-karboksy-3-metylobutylo]-6-okso-1,7-diazaspiro[4.4]-nonan]^7,9-aplidyny (9SASHPL1)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy SAPL3, wychodząc z SHPL4 (10 mg, 13 pmola), 18 (5,8 mg, 14 pmola), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 pl), DCM (150 pl) i DMF (50 pl), otrzymano tytułowy związek (10 mg, 72%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C 18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min, 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 16,4 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,85-0,96 (m, 18H), 1,02-1,05 (m, 6H), 1,14-1,45 (m, 12H), 1,49-1,64 (m, 4H), 1,68-1,77 (m, 1H), 1,89-2,05 (m, 3H), 1,99 (s, 3H), 2,10-2,28 (m, 4H), 2,43 (dd, J1 = 7,8, J2 = 17,1, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,60-2,68 (m, 1H), 2,97 (bs, 1H), 3,13-3,40 (m, 4H), 3,54-3,77 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,89-4,07 (m, 2H), 4,27 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 5,03 (d, J = 4,4, 1H), 5,30 (d, J = 20, 1H), 5,30-5,39 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (s, 1H), 7,88 (d, J = 9,8, 1H), 8,23 (d, J = 7,4, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C56H85N7O13: 1063,6; znaleziono 1064,6 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 101

Synteza [Hiv]³-[Z-Ala]⁹-aplidyny (9ZASHPL2)

SHPL2 9ZASHPL2

Do kolby zawierającej Z-Ala-Pro-OH (36 mg, 112 pmola) w DCM (0,4 ml) w 0°C, pod argonem, dodano DIPCDI (10 pl, 64 pmola) i mieszaninę mieszano przez 60 min. Następnie dodano roztwór

SHPL2 (20 mg, 22,5 pmola) w DCM (0,2 ml) i po 3 dniach reakcję zakończono przez dodanie kwasu

PL 208 651 B1 solnego HCI (3 ml, 0,1N). Mieszaninę mieszano przez 5 min., po czym rozcieńczono DCM (4 ml) i przemyto kolejno wodnym KHSO4 (4 ml, 10%), wodnym NaHCO3 (4 ml, nas.) i solanką (4 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono. Oczyszczanie pozostałości za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C 18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min, 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 18,2 min.) uzyskując 9ZASHPL2 (30 mg, 67%) w postaci białego ciała stałego.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,10 (m, 24H), 1,12-1,50 (m, 18H), 1,52-2,70 (m, 6H), 2,45 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,96-3,38 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,52-3,72 (m, 5H), 3,85 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 4,01 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,71 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J1 = 5,3, 1H), 5,06 (m, 2H), 5,25 (m, 1H), 5,42 (m, 1H), 6,10 (d, J = 8,3, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J =

8,3, 2H), 7,31 (m, 6H), 7,70 (d, J = 4,3, 1H), 7,77 (d, J = 9,7, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,80, 13,97, 16,63, 17,02, 17,48, 18,93, 20,86, 21,15, 23,45, 23,76, 24,78, 25,96, 27,31, 27,92, 28,50, 30,06, 31,36, 33,44, 33,82, 35,66, 38,70, 39,38, 39,63, 46,54, 46,62, 46,98, 47,10, 48,19, 48,59, 54,89, 54,97, 55,22, 56,44, 56,90, 58,14, 66,16, 66,36, 68,95, 70,94, 78,78, 114,00, 127,75, 128,30, 129,90, 130,26, 156,31, 158,53, 168,67, 169,57, 170,06,

170,25, 170,65, 171,97, 173,08, 174,67.

ESI-MS, obliczono dla C62H92N8O15: 1188,67; znaleziono m/z: 1189,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 102

Synteza [Hiv]³-[Boc-Ala]⁹-aplidyny (9BASHPL2)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 9ZASHPL2, wychodząc z SHPL2 (10 mg, 11,2 μmola), Boc-Ala-Pro-OH (17 mg, 57 μmola), DIPCDI (5 μ0 i DCM (300 μθ, otrzymano tytułowy związek (9 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C 18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 w 10 min. (przepływ: 7 ml/min, 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 14,5 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,10 (m, 24H), 1,12-1,50 (m, 15H), 1,40 (s, 9H), 1,52-2,70 (m, 9H), 2,45 (m, 1H), 2,60 (s, 3H), 3,00-3,43 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,62 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,90 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,67 (m, 2H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J1 = 4,3, 1H), 5,26 (m, 1H), 5,40 (m, 1H), 5,76 (d, J = 7,8, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,32 (d, J = 9,7, 1H), 7,73 (d, J = 4,8, 1H), 7,80 (d, J = 9,7, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 12,06, 14,34, 16,88, 17,20, 17,77, 19,17, 21,10, 21,41, 23,72, 24,03, 25,06, 26,17, 27,60, 28,19, 28,60, 30,31, 31,63, 33,74, 35,96, 38,96, 38,93, 39,59, 39,86, 46,86, 47,27, 48,29, 48,45, 55,18, 55,42, 55,49, 56,59, 57,16, 58,44, 66,43, 69,14, 71,30, 79,05, 79,40, 114,29, 130,21, 130,54, 156,06, 158,83, 168,80, 169,87, 170,51, 170,64, 170,94, 171,31, 172,59, 173,45, 174,92.

ESI-MS, obliczono dla C59H94N8O15: 1154,68: znaleziono m/z: 1155,6 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 103

Synteza [Hiv]³-[Ala]⁹-aplidyny (9ASHPL1)

PL 208 651 B1

Do kolby zawierającej 9BASHPL2 (8 mg, 6,92 pmola) dodano roztwór kwasu chlorowodorowego w bezwodnym dioksanie (1,5 ml, 5,3 N, 7,9 mmola). Otrzymany roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 5 godz. aż do zaniku materiału wyjściowego (TLC). Następnie, roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozpuszczono w DCM i zatężono ponownie. Strąciła się surowa, biała pianka w mieszaninie DCM/heksan (2 ml/4 ml) dając 9ASHPL1 (7,2 mg, ilościowo) w postaci białego ciała stałego.

ESI-MS, obliczono dla C54H86N8O13:1054,6; znaleziono m/z: 1055,6 (M + H)+.

P r z y k ł a d 104

Synteza [Hiv]³-[Boc-Pro]⁸-didemniny A (8PSHPL2)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 9ZASHPL2, wychodząc z SHPL2 (10 mg, 11,2 pmola), Boc-Pro-OH (13 mg, 57 umola), DIPCDI (5 pl) i DCM (300 pl), otrzymano tytułowy związek (9 mg, 74%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C 18, izokratycznie ACN/H2O 85:15-100:0 w 10 min. (przepływ: 7 ml/min, 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 18,7 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,10 (m, 24H), 1,12-2,30 (m, 22H), 1,47 (s, 9H), 2,41 (m, 1H), 3,04 (s, 3H), 3,10-3,74 (m, 7H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,31 (m, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J = 4,8, 1H), 5,16 (m, 1H), 5,36 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J =

8,3, 2H), 7,17 (d, J = 6,3, 1H), 7,35 (d, J = 9,7, 1H), 7,85 (d, J = 9,7, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 12,04, 14,41, 16,76, 17,97, 19,12, 21,03, 21,66, 23,92, 24,00,

24,77, 25,09, 25,20, 27,53, 28,21, 28,72, 29,67, 30,35, 31,23, 33,80, 34,30, 36,24, 39,05, 39,37, 39,80, 46,90, 47,33, 48,42, 54,48, 55,49, 55,58, 55,84, 57,12, 58,08, 66,31, 69,11, 71,05, 79,23, 80,28, 114,29, 130,23, 130,59, 154,91, 158,82, 168,37, 169,88, 170,66, 170,86, 171,28, 171,40, 174,10, 174,79.

ESI-MS, obliczono dla C56H91N7O14: 1085,6, znaleziono m/z: 1086,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 105

Synteza [Hiv]³-[Pro]⁸-didemniny A (8PSHPL1)

8PSHPL2 8PSHPL1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 9ASHPL1, wychodząc z 8PSHPL2 (7 mg, 6,4 pmola) otrzymano tytułowy związek (6 mg, ilościowo) w postaci białego ciała stałego.

ESI-MS, obliczono dla C51H81N7O12: 983,59; znaleziono m/z: 984,6 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 106

Synteza [Hiv]³-[Pro]⁸-didemniny A (8PSHPL2)

PL 208 651 B1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 9ZASHPL2, wychodząc z SHPL2 (10 mg, 11,2 pmola), Boc-Val-OH (12 mg, 56 pmola), DIPCDI (5 pl) i DCM (300 pl), otrzymano tytułowy związek (9 mg, 82%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C 18, izokratycznie ACN/H2O 85:15-100:0 w 10 min. (przepływ: 7 ml/min, 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 22,1 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,10 (m, 30H), 1,12-1,82 (m, 12H), 1,45 (s, 9H), 1,84-2,40 (m, 6H), 2,56 (s, 3H), 2,96 (s, 3H), 2,97 (m, 3H), 3,13 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,85 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 4,99 (d, J1 = 5,3, 1H), 5,07 (m, 1H), 5,19 (m, 1H), 5,60 (d, J = 8,3, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,03 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,46 (d, J = 10,2, 1H), 7,84 (d, J = 9,2, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C56H91N7O14: 1085,6; znaleziono m/z: 1086,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 107

Synteza [Hiv]³-[Val]⁸-didemniny A (8VSHPL1)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 9ASHPL1, wychodząc z 8VSHPL2 (8 mg, 7,4 pmola) otrzymano tytułowy związek (7 mg, ilościowo) w postaci białego ciała stałego.

ESI-MS, obliczono dla C51H83N7O12: 985,61; znaleziono: (m/z): 986,6 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 108

Synteza [Hiv]³-[Val]⁸-[izobutyrylo]⁹-didemniny A (8V9ISHPL1)

pmola) i chlorek izobutyrylu (2 pl, 19 pmola). Po 5 godz. mieszania, mieszaninę reakcyjną rozcieńczono DCM (5 ml) i przemyto kolejno wodnym KHSO4 (5 ml, 10%), wodnym NaHCO3 (5 ml, nasycony)

PL 208 651 B1 i solanką (5 ml). Roztwór organiczny wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 8V9ISHPL1 (6 mg, 97%) w postaci białego ciała stałego.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,82-1,10 (m, 36H), 1,12-1,85 (m, 10H), 1,90-2,45 (m, 6H), 2,56 (s, 3H) 2,90 (m, 1H), 3,00 (s, 3H,), 3,13 (m, 2H), 3,36 (dd, J1 = 4,3, J2 = 14,1, 1H), 3,64 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,87 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,34 (m, 2H), 4,61 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,98 (d, J =

4,8, 1H), 5,17 (m, 2H), 6,24 (d, J = 6,3, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,32 (d, J =

6,3, 1H), 7,35 (d, J = 4,3, 1H), 7,81 (d, J = 9,7, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C55H89N7O13: 1055,6; znaleziono m/z: 1056,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 109

Synteza [kumaryno]⁸-didemniny A (8CSAPL1)

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 9ZASHPL2, wychodząc z SAPL2 (20 mg, 21 pmola) i kwasu kumaryno-3-karboksylowego (20 mg, 107 pmola) otrzymano tytułowy związek (18 mg, 76%) w postaci biał ego ciał a stał ego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (HyperPrep PEP 100 C 18, izokratycznie ACN/H2O 85:15 (przepływ: 7 ml/min, 250 x 21 mm, przy 270 nm, tR = 16,5 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,78-1,00 (m, 24H), 1,20-2,50 (m, 22H), 2,56 (s, 3H), 2,92 (s, 3H), 3,08-3,25 (m, 2H), 3,90 (m, 1H), 3,60 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,92-4,25 (m, 3H), 4,60 (m, 1H), 4,80 (m, 2H), 5,15 (m, 1H), 5,18 (d, J = 3,4, 1H), 5,28 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,20 (d, J = 6,3, 1H), 7,37 (m, 2H), 7,45 (d, J = 9,7, 1H), 7,58 (m, 2H), 7,96 (m, 1H), 8,23 (m, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C59H82N6O15: 1114,58; znaleziono: 1116,3 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 110

Synteza estru metylowego kwasu kumaryno-3-karbonyloaminooctowego (8G9C2)

Do okrągłodennej kolby zawierającej metyloglicynę (89 mg, 1,00 mmola), 3-karboksykumarynę, bezwodny DCM (25 ml), pod Ar, dodano w temperaturze pokojowej chlorowodorek N'-(3-dimetyloaminopropylo)-N-etylokarbodiimidu (EDC) (479 mg, 2,50 mmola) i DMAP (489 mg, 4,00 mmola). Otrzymaną mieszaninę mieszano przez 1 godz. 30 min. (całkowita konwersja obserwowana na TLC). Następnie dodano DCM (20 ml) i roztwór przemyto kolejno wodnym NaHCO3 (10 ml, nasycony) i solanką (10 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono. Otrzymane pomarańczowe ciało stałe oczyszczano za pomocą LC typu flash (żel krzemionkowy, gradient heksan : EtOAc 1:1 do 2:1) otrzymując tytułowy związek (445 mg, ilościowo) w postaci bezbarwnego oleju.

Rf = 0,08 (heksan/EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 3,79 (s, 3H), 4,25 (d, J = 5,4, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,74 (d, J = 7,3, 1H), 7,68 (m, 2H), 8,91 (s, 1H), 9,25 (s, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C13H11NO5: 261,06; znaleziono: 283,1 (M+Na)⁺.

P r z y k ł a d 111

Synteza kwasu kumaryno-3-karbonyloaminooctowego (8G9C1)

100

PL 208 651 B1

Do roztworu estru metylowego kwasu kumaryno-3-karbonyloaminooctowego (312 mg, 1,19 mmola) w THF (12 ml), pod Ar, w 0°C (łaźnia lodowa) dodano wkraplając roztwór LiOH w H2O (0,2 M). Mieszaninę reakcyjną energicznie mieszano w temperaturze pokojowej aż do całkowitego przekształcenia obserwowanego na TLC (2 godziny). Roztwór częściowo zatężono i dodano Et2O (10 ml). Warstwę organiczną przemyto NaHCO3 (10 ml, nasycony) i połączone warstwy wodne zakwaszono 10% KHSO4 (pH = 3-4) i ekstrahowano eterem (3 x 20 ml). Warstwę organiczną zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 8G9C1 (280 mg, 95%) w postaci białego ciała stałego.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 4,18 (d, J = 5,3, 2H), 7,41 (m, 1H), 7,45 (d, J = 7,8, 1H), 7,74 (d, J = 7,3, 1H), 7,78 (t, J = 8,3, 1H), 7,85 (d, J = 7,8, 1H), 8,89 (s, 1H), 9,41 (m, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C12H9NO5: 247,05, znaleziono: 248,0 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 112

Synteza [Gly]⁸-[kumaryno]⁹-didemniny A (8G9CSAPL1)

SAPL2 8G9CSAPL1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 9ZASHPL2, wychodząc z SAPL2 (20 mg, 21 pmola) i kwasu kumaryno-3-karbonyloaminooctowego (26 mg, 105 pmola) otrzymano tytułowy związek (18 mg, 72%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (Symetry Prep™ C 18, izokratycznie ACN/H2O 60:40 (przepływ: 3 ml/min, 150 x 7,8 mm, przy 270 nm, tR = 17,5 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,85-0,94 (m, 24H), 1,23-2,17 (m, 21H), 2,30-2,44 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,01 (s, 3H), 3,10-3,24 (m, 2H), 3,40 (dd, J1 = 5,4, J2 = 14,2, 1H), 3,59-3,74 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,99-4,21 (m, 4H), 4,37-4,44 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,68 (m, 1H), 4,81 (t, J = 9,8, 1H), 5,18 (d, J =

3,4, 1H), 5,25 (dd, J1 = 2,9, J2 = 5,9, 1H), 5,20-5,45 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,19-7,28 (m, 1H), 7,34-7,42 (m, 2H), 7,63-7,72 (m, 2H), 7,88 (d, J = 8,3, 2H), 9,00 (s, 1H), 9,57 (m, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C61H85N7O16: 1171,61, znaleziono: 1172,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 113

Synteza N-metylosulfonylo-Pro-OBz (P2)

Do roztworu Pro-OBn (HCI) (300 mg, 1,24 mmola) w DCM (25 ml, bezwodny) w 0°C, pod Ar, dodano wkraplając DIPEA (0,7 pl) i chlorek metanosulfonylu (116 pl), mieszając. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Dodano DCM (10 ml) i roztwór przemyto kolejno wodnym KHSO4 (15 ml, 10%), wodnym NaHCO3 (15 ml, nasycony) i solanką (15 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując czysty P2 (350 mg, 1,24 mmola) w postaci białego ciała stałego.

Rf = 0,55 (heksan/AcOEt 1:1).

PL 208 651 B1

101 ¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 1,91-2,08 (m, 3H), 2,19-2,31 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 3,38-3,54 (m, 2H), 3,65 (s, 3H), 4,51 (dd, J1 = 3,4, J2 = 8,3, 1H), 5,11 (d, J = 12,2, 1H),), 5,18 (d, J = 12,2, 1H), 7,31 (m, 5H).

ESI-MS, obliczono dla C13H17NO4S: 283,09; znaleziono: 284,1 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 114

Synteza N-metylosulfonylo-Pro-OH (P1)

Odgazowaną mieszaninę N-metylosulfonylo-Pro-OBz (P2) (250 mg, 0,88 mmola) i Pd(OH)2/C (20% Pd, 100 mg, 40% wag/wag.) w IPA : H2O (26 ml : 13 ml), nasycono H2 i utrzymywano ciśnienie 1 atm. wodoru, mieszając przez 3 godz. Następnie mieszaninę przesączono przez filtr teflonowy (0,45 pm) i zatężono pod próżnią uzyskując tytułowy związek (128 mg, 75% wydajności) w postaci białego ciała stałego bez dalszego oczyszczania.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 1,94-2,03 (m, 2H), 2,07-2,14 (m, 1H), 2,22-2,35 (m, 1H), 2,96 (s, 3H), 3,44 (m, 2H), 4,44 (dd, J1 = 3,9, J2 = 8,8, 2H), 9,10 (m, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 24,96, 31,08, 38,46, 48,06, 60,66, 174,75.

ESI-MS, obliczono dla C6H11NO4S: 193,22; znaleziono: 194,0 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 115

Synteza [metylosulfonylo]⁹-aplidyny (9MSAPL1)

SAPU 9MSAPL1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 9ZASHPL2, wychodząc z SAPL2 (10 mg, 10,7 pmola) i N-metylosulfonylo-Pro-OH (10 mg, 53 pmola) otrzymano tytułowy związek (9 mg, 74%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (Symetry Prep C 18, izokratycznie ACN/H2O 60:40 (przepływ: 3 ml/min, 150 x 7,8 mm, przy 270 nm, tR = 9 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,78-1,00 (m, 24H), 1,20-2,50 (m, 26H), 2,56 (s, 3H), 2,93 (m, 1H), 3,04 (s, 3H), 3,06 (s, 3H), 3,08-3,25 (m, 2H), 3,28-3,50 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 4,05 (m, 2H), 4,17 (m, 1H), 4,60 (m, 2H), 4,81 (m, 2H), 5,10 (m, 1H), 5,19 (d, J = 3,4, 1H), 5,33 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 6,86 (m, 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,09 (m, 1H), 7,82 (d, J = 9,2, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C55H87N7O15S: 1117,60; znaleziono: 1118,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 116

102

PL 208 651 B1

Do roztworu SAPL2 (10 mg, 10,7 pmola) w DCM (200 pl, bezwodny) w 0°C, pod Ar, dodano DIPEA (3 pl) i chlorek metanosulfonylu (0,85 pl). Mieszaninę reakcyjną mieszano w 5°C przez noc. Dodano DCM (10 ml) i roztwór przemyto kolejno wodnym KHSO4 (5 ml, 10%), wodnym NaHCO3 (5 ml, nasycony) i solanką (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując czysty 8MSAPL1 (11 mg, ilościowo) w postaci białego ciała stałego.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,83-0,97 (m, 24H), 1,10-1,45 (m, 10H), 1,50-1,65 (m, 5H), 1,76-1,82 (m, 2H), 2,00-2,20 (m, 3H), 2,27-2,36 (m, 1H), 2,45-2,55 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,02 (s, 3H), 3,08 (d, J = 16,6, 1H), 3,17 (dd, J1 = 10,7, J2 = 14,1, 1H), 3,37 (m, 1H), 3,60 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,99-4,11 (m, 3H), 4,49 (m, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,78 (m, 2H), 5,06 (m, 1H), 5,19 (d, J = 3,9, 1H), 6,68 (d, J = 8,8, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,33 (d, J = 9,8, 1H), 7,61 (d, J = 8,8, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C50H80N6O14S: 1020,55; znaleziono: 1022,1 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 117

Synteza [biotyno]⁸-didemniny A (8BISAPL1)

Do roztworu HATU (24 mg, 61 pmola), HOAt (8 mg, 63 pmola), SAPL2 (20 mg, 21,4 pmola) i d-biotyny (7,8 mg, 32 pmola) w bezwodnym DCM (400 pl) w 0°C, pod Ar dodano wkraplając NMM. Otrzymaną mieszaninę mieszano przez 2 godz. w 0°C, po czym w temperaturze pokojowej przez dalsze 14 godz. Dodano DCM (10 ml) i roztwór przemyto kolejno wodnym KHSO4 (5 ml, 10%), NaHCO3 (5 ml, nasycony) i solanką (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymano tytułowy związek (18 mg, 72%) w postaci białego ciała stałego po oczyszczaniu za pomocą HPLC (Symetry Prep C 18, izokratycznie ACN/H2O 60:40-100:0 w 10 min. (przepływ: 3 ml/min, 150 x 7,8 mm, przy 270 nm, tR = 6 min.).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,78-1,00 (m, 24H), 1,20-1,98 (m, 23H), 2,00-2,62 (m, 7H), 2,53 (s, 3H), 2,80-3,00 (m, 2H), 2,86 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 3,57 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 4,01 (m, 2H), 4,10 (m, 1H), 4,31 (m, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,56 (m, 1H), 4,82 (m, 2H), 5,00 (m, 1H), 5,14 (m, 2H), 5,67 (s, 1H), 6,23 (s, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,28 (d, J = 8,5, 1H), 7,35 (d, J = 7,8, 1H), 8,01 (d, J = 8,7, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C59H92N8O14S: 1168,65; znaleziono: 1169,6 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 118

Synteza [fenyloureido]⁸-didemniny A (8PUSAPL1)

Do roztworu SAPL2 (10 mg, 10,7 pmola) w DCM (200 pl, bezwodny) w 0°C, pod Ar, dodano izocyjanian fenylu (1,3 pl, 12 pmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano w r. t. przez 4 godziny. Dodano

PL 208 651 B1

103

DCM (10 ml) i roztwór mieszano kolejno wodnym KHSO4 (5 ml, 10%), wodnym NaHCO3 (5 ml) i solanką (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono (Na2SO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując czysty 8PUSAPL1 (11 mg, 94%) w postaci białego ciała stałego.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,85-0,94 (m, 24H), 1,11-1,43 (m, 4H), 1,22 (d, J = 6,8, 3H), 1,35 (d, J = 6,8, 3H), 1,49-1,83 (m, 5H), 1,73 (s, 3H), 2,02 (m, 1H), 2,14 (m, 2H), 2,34 (dt, J1 = 3,4, J2 = 6,8, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,91 (s, 3H), 3,04 (d, J = 16,6, 1H), 3,17 (dd, J1 = 11,2, J2 = 14,6, 1H), 3,36 (dd, J1 =

3,9, J2 = 14,2, 1H), 3,57 (dd, J1 = 4,4, J2 = 10,7, 1H), 3,59-3,63 (m, 1H), 3,67-3,75 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,96-4,10 (m, 2H), 4,19 (q, J = 6,8, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,74 (dd, J1 = 3,9, J2 = 8,8, 1H), 4,78-4,85 (m, 1H), 5,05 (m, 2H), 5,17 (d, J = 3,4, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,03-7,09 (m, 3H), 7,22-7,32 (m, 4H), 7,39 (d, J = 8,3, 2H), 7,93 (d, J = 8,8, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,70, 15,51, 17,16, 18,74, 21,11, 22,41, 23,29, 23,98, 24,94, 25,10, 25,32, 26,97, 28,18, 30,36, 31,57, 34,44, 36,51, 38,86, 41,64, 45,23, 47,30, 49,80, 50,08, 54,60, 55,50, 56,06, 57,51, 62,77, 66,45, 68,17, 70,72, 81,93, 114,36, 120,76, 123,86, 129,12, 130,04, 130,57, 138,78, 141,00, 157,78, 158,87, 169,92, 170,68, 171,49, 172,43, 173,44, 181,47, 192,38, 204,93, 206,66.

ESI-MS, obliczono dla C56H83N7O13: 1161,60; znaleziono: 1062,6 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 119

Synteza [fenylotioureido]⁸-didemniny A (8PTSAPL1)

8PTSAPL1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 8PUSAPL1, wychodząc z SAPL2 (10 mg, 10,7 pmola) i izotiocyjanianu fenylu (1,3 pl, 12 pmola), po 15 godz. mieszania otrzymano tytułowy związek (11 mg, 93%) w postaci białego ciała stałego bez dalszego oczyszczania.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,84-0,99 (m, 24H), 1,14-1,46 (m, 9H), 1,46-1,78 (m, 9H), 1,98-2,19 (m, 3H), 2,34 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,91 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 3,08-3,21 (m, 1H), 3,36 (dd, J1 =

4,4, J2 = 14,1, 1H), 3,55-3,64 (m, 2H), 3,66-3,74 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,96-4,12 (m, 2H), 4,21 (q, J = 6,8, 1H), 4,59 (t, J = 5,3, 1H), 4,75 (dd, J1 = 3,4, J2 = 8,3, 1H), 4,83 (t, J = 10,3, 1H), 5,05-5,12 (m, 2H), 5,16 (d, J = 3,4, 1H), 6,30 (t, J = 7,3, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,21-7,37 (m, 6H), 7,93 (d, J = 8,8, 1H), 8,08 (d, J = 8,8, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 11,68, 15,28, 15,85, 17,15, 18,73, 21,12, 22,73, 23,66, 24,01, 25,13, 25,33, 26,62, 28,16, 29,92, 31,53, 32,42, 32,90, 34,41, 36,77, 38,86, 41,69, 47,28, 50,12, 55,50, 56,48, 57,51, 59,87, 66,47, 70,75, 81,91, 114,37, 125,25, 125,95, 126,57, 127,54, 129,12, 129,77, 130,06, 130,57, 135,43, 158,88, 168,54, 169,90, 170,70, 171,49, 172,38, 190,41.

ESI-MS, obliczono dla C56H83N7O12S: 1077,58; znaleziono: 1078,5 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 120

Synteza [butyloureido]⁸-didemniny A (8BUSAPL1)

104

PL 208 651 B1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 8PUSAPL1, wychodząc z SAPL2 (10 mg, 10,7 pmola) i izotiocyjanianu butylu (1,4 pl, 12 pmola), po 4 godzinach mieszania otrzymano tytułowy związek (9 mg, 78%) w postaci białego ciała stałego bez dalszego oczyszczania.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,85-0,94 (m, 24H), 1,10-1,80 (m, 24H), 2,03 (m, 1H), 2,13 (m, 2H), 2,33 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,72 (s, 3H), 3,02 (d, J = 16,1, 1H), 3,17 (dd, = 11,2, J2 = 14,2, 1H), 3,23-3,40 (m, 3H), 3,62-3,78 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,03 (m, 2H), 4,19 (q, J = 6,8, 1H), 4,58 (m, 2H), 4,71 (dd, J1 = 3,4, J2 = 8,3, 1H), 4,82 (m, 1H), 5,00 (m, 2H), 5,16 (d, J = 3,4, 1H), 5,22-5,28 (m, 2 H), 6,85 (d, J = 8,8, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,21-7,29 (m, 1H), 7,96 (d, J = 9,2, 1H).

ESI-MS, obliczono dla C54H87N7O13: 1041,64; znaleziono: 1042,7 (M + H)⁺.

P r z y k ł a d 121

Synteza [butylotioureido]⁸-didemniny A (8BTSAPL1)

SAPL2 8BTSAPL1

Zgodnie z procedurą opisaną dla syntezy 8PUSAPL1, wychodząc z SAPL2 (10 mg, 10,7 pmola) i izotiocyjanianu butylu (1,5 pl, 12 pmola), po 15 godzinach reakcji otrzymano tytułowy związek (10 mg, 86%) w postaci białego ciała stałego bez dalszego oczyszczania.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,86-0,97 (m, 24H), 1,14-1,78 (m, 27H), 1,99-2,14 (m, 3H), 2,34 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,88 (s, 3H), 3,01 (d, J = 16,6, 1H), 3,16 (dd, = 11,2, J2 = 14,6, 1H), 3,36 (dd, J1 = 4,4, J2 = 14,2, 1H), 3,49-3,74 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,02 (d, J = 6,8, 2H), 4,21 (q, J = 6,8, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,70 (dd, J1 = 2,9, J2 = 8,3, 1H), 4,82 (t, J = 10,3, 1H), 5,07-5,12 (m, 2H), 5,09 (d, J =

3,9, 1H), 5,60 (m, 1H), 6,36 (dd, J1 = 5,4, J2 = 8,3, 1H), 6,84 (d, J = 8,8, 2H), 7,08 (d, J = 8,8, 2H), 7,84 (d, J = 8,3, 1H), 7,91 (d, J = 9,3, 1H).

ESI-MS obliczono dla C54H87N7O12S: 1057,61, znaleziono: 1080,7 (M+Na)⁺.

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1. Pochodne aplidyny o wzorze:

w którym:

X niezależ nie oznacza -C(R)2-, -O-, -S- lub -NR-, w których R niezależ nie oznacza H lub grupę organiczną wybraną spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej, oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę heterocykliczną, zawierającą jeden, dwa lub trzy heteroatomy wybrane spośród atomów N, O

PL 208 651 B1

105 lub S, grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową;

Y oznacza -CO- lub -COCHCH3CO-,

R4 oznacza H lub grupę organiczą wybraną spośród grupy amidowej RCONH-, grupy acylowej RCO-, grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę heterocykliczną, zawierającą jeden, dwa lub trzy heteroatomy wybrane spośród atomów N, O lub S, grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową;

w każdym przypadku, R oznacza grupę C1-C12 alkilową, grupę C2-C12 alkenylową, grupę C6-C18 arylową, grupę aralkilową oraz ich podstawione pochodne, które są podstawione przez grupę heterocykliczną, zawierającą jeden, dwa lub trzy heteroatomy wybrane spośród atomów N, O lub S, grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową;

X1 oznacza O lub S; oraz w przypadku, gdy Y oznacza -CO-, to wówczas

a) X2 oznacza CR, O (R2 jest nieobecny), S (R2 jest nieobecny) lub N, gdzie R niezależnie oznacza H lub grupę organiczną wybraną spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę heterocykliczną, zawierającą jeden, dwa lub trzy heteroatomy wybrane spośród atomów N, O lub S, grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową; oraz

R1 oraz R2, każdy niezależnie, oznacza H lub grupę organiczną wybraną spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej, grupy amidowej RCONH- lub grupy acylowej RCO-, w których R oznacza grupę C1-C12 alkilową, grupę C2-C12 alkenylową, grupę C6-C18 arylową, grupę aralkilową oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową; oraz R1 lub R2, jeśli X2 oznacza N, mogą ponadto oznaczać -SO2R, gdzie R jest jak zdefiniowano; lub

b) aa8 oznacza gdzie R3 oznacza grupę organiczną wybraną spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej, grupy RSO2- lub grupy acylowej RCO-, w krórych R oznacza grupę C1-C12 alkilową, grupę C2-C12 alkenylową, grupę C6-C18 arylową, grupę aralkilową oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową; lub

c) R1 oraz R2 tworzą z X2 ewentualnie podstawioną grupę C3-C12 cykloalkilową, ewentualnie podstawioną grupę C6-C18 arylową lub ewentualnie podstawioną grupę heterocykliczną, wybraną spośród grupy obejmującej kumarynyl, chinolinyl, pirydyl, pirazynyl, pirymidyl, furyl, pirolil, tienyl, tiazolil, oksazolil, imidazolil, indolil, benzofuranyl, benzotiazol, tetrahydrofuranyl, tetrahydropiranyl, piperydynyl, oraz morfolino; przy czym ewentualne podstawniki są wybrane spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej, oraz ich podstawione pochodne, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę karbonylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową; lub

d) aa8 jest zastąpiony przez grupę organiczną wybraną spośród grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej, grupy RSO2- lub grupy acylowej RCO-, w których R oznacza grupę C1-C12 alkilową, grupę C6-C18 arylową, grupę aralkilową, oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę karbonylową, grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową;

a w przypadku gdy Y oznacza COCHCH3CO-, to wówczas

a) X2 oznacza N, zaś oraz R2 każde niezależnie oznacza H lub grupę organiczą wybraną spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej, grupy

106

PL 208 651 B1 amidowej RCONH-, grupy -SO2R lub grupy acylowej RCO-, w których R oznacza grupę C1-C12 alkilową, grupę C2-C12 alkenylową, grupę C6-C18 arylową, grupę aralkilową oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę heterocykliczną, zawierającą jeden, dwa lub trzy heteroatomy wybrane spośród atomów N, O lub S, grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową; lub

b) aa8 oznacza:

gdzie R3 oznacza grupę RSO2-, w której R oznacza C1-C12 alkil lub R3 oznacza grupę C2-C12 alkenylową, grupę aralkilową oraz ich podstawione pochodne, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę karbonylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową, lub grupę halogenową; lub

c) R1 oraz R2 tworzą z X2 ewentualnie podstawioną grupę C3-C12 cykloalkilową, ewentualnie podstawioną grupę C6-C18 arylową lub ewentualnie podstawioną grupę heterocykliczną, wybraną spośród grupy obejmującej kumarynyl, chinolinyl, pirydyl, pirazynyl, pirymidyl, furyl, pirolil, tienyl, tiazolil, oksazolil, imidazolil, indolil, benzofuranyl, benzotiazol, tetrahydrofuranyl, tetrahydropiranyl, piperydynyl, oraz morfolino; przy czym ewentualne podstawniki są wybrane spośród grupy C1-C12 alkilowej, grupy C2-C12 alkenylowej, grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej, oraz ich podstawione pochodne, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę karbonylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, ewentualnie zabezpieczoną grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową; lub

d) aa8 jest zastąpiony przez grupę organiczną wybraną spośród grupy C6-C18 arylowej, grupy aralkilowej lub grupy RSO2-, w której R oznacza grupę C1-C12 alkilową, grupę C6-C18 arylową lub grupę aralkilową, oraz ich podstawionych pochodnych, które są podstawione przez co najmniej jedną grupę C1-C12 alkoksylową, grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, grupę aminową, grupę guanidynową lub grupę halogenową;

przy czym grupy aralkilowe są utworzone przez grupę C1-C12 alkilową podstawioną przez grupę C6-C18 arylową;

oraz jego farmaceutycznie dopuszczalne sole.
2. Związek według zastrz. 1, w którym X oznacza -NR-, gdzie R ma znaczenie jak określone w zastrz. 1.
3. Związek według zastrz. 2, w którym X oznacza -NH- lub N-Me-.
4. Związek według zastrz. 3, w którym X oznacza -NH-.
5. Związek według zastrz. 1, w którym X oznacza -O-.
6. Związek według dowolnego z zastrzeżeń 1 do 5, w którym Y oznacza -CO-.
7. Związek według zastrz. 1, w którym X oznacza -NH- lub -O-, oraz Y oznacza -CO-CHCH3CO- lub -CO-.
8. Związek według dowolnego poprzedniego zastrzeżenia, w którym R4 oznacza metyl.
9. Związek według dowolnego poprzedniego zastrzeżenia, w którym X1 oznacza O.
10. Związek według dowolnego poprzedniego zastrzeżenia, w którym X2R1 oznacza ewentualnie podstawioną grupę aralkiloksylową.
11. Związek według zastrz. 10, w którym X2R1 oznacza grupę benzyloksylową.
12. Związek według dowolnego z zastrzeżeń 1 do 9, w którym X2R1 oznacza ewentualnie podstawioną grupę aminową.
13. Związek według zastrz. 12, w którym X2R1 oznacza grupę -NHR1, gdzie R1 oznacza ewentualnie podstawioną grupę C1-C12 alkilową, grupę C2-C12 alkenylową, grupę C6-C18 arylową lub grupę aralkilową.
14. Związek według zastrz. 13, w którym R1 oznacza grupę C1-C12 alkilową lub C6-C18 grupę arylową.
15. Związek według zastrz. 14, w którym R1 oznacza grupę fenylową lub grupę butylową.
16. Związek według dowolnego z zastrzeżeń 1 do 9, w którym X2R1 oznacza ewentualnie podstawioną grupę C1-C12 alkilową.

PL 208 651 B1

107
17. Związek według zastrz. 16, w którym X2R1 oznacza grupę propylową, grupę izopropylową, grupę wentylową lub grupę biotynową.
18. Związek według dowolnego z zastrzeżeń 1 do 9, w którym -C(=O)X2R1R2 tworzy ewentualnie podstawioną aminokwasową grupę acylową.
19. Związek według zastrz. 18, w którym ewentualnie podstawioną aminokwasową grupą acylową jest podstawiona prolina.
20. Związek według zastrz. 19, w którym podstawioną proliną jest ewentualnie podstawiona norwalino-prolina, ewentualnie podstawiona alanino-prolina, Boc-prolina, ewentualnie podstawiona alkilo-prolina.
21. Związek według zastrz. 19, w którym podstawioną proliną jest norwalino-prolina, Z-norwalino-prolina, alanino-prolina, Z-alanino-prolina, Boc-alanino-prolina, izobutyrylo prolina lub ewentualnie chroniona D-laktylo-prolina.
22. Związek według dowolnego z zastrzeżeń 1 do 8, w którym X oznacza S oraz X2R1 oznacza grupę -NHR1 gdzie R1 oznacza ewentualnie podstawioną grupę C1-C12 alkilową grupę C2-C12 alkenylową, grupę C6-C18 arylową lub grupę aralkilową.
23. Związek według zastrz. 22, w którym R1 oznacza grupę C1-C12 alkilową lub grupę C6-C18 arylową.
24. Związek według zastrz. 23, w którym R1 oznacza grupę fenylową lub grupę butylową.
25. Związek według dowolnego z zastrzeżeń 1 do 9, w którym R1 oraz R2 tworzą z X2 ewentualnie podstawioną grupę heterocykliczną.
26. Związek według zastrz. 25, w którym grupą heterocykliczną jest kumaryna.
27. Związek według dowolnego z zastrzeżeń 1 do 8, w którym aa8 jest zastąpiona przez grupę organiczną RSO2-, w której R ma znaczenie jak określone w zastrz. 1.
28. Związek według zastrz. 27, w którym R oznacza metyl.
29. Związek według zastrz. 1, w którym jest wybrany spośród następujących:

8-[fenyloureidoj-didemnina A,

8-butyloureidoj-didemnina A,

3-[Val]-8-[izobutyrylo]-didemnina A,

3-[Hiv]-9-[izobutyrylo]-aplidyna,

3-[Val]-9-[izobutyrylo]-aplidyna,

3-[Hiv]-8-[izobutyrylo]-didemnina A,

3-[Hiv]-9-[Ala]-aplidyna,

3-[Hiv]-9-[Nva]-aplidyna,

8-[fenylotioureido]-didemnina A,

8-[kumaryno]-didemnina A,

8-[butylotioureido]-didemnina A,

8- [metylosulfonylo]-didemnina A,

3-[Val]-Z-didemnina A,

3-[Hiv]-8-[Val]-didemnina A,

3-[Hiv]-8-[butyrylo]-didemnina A,

3-[Hiv]-9-[Z-ala]-aplidyna,

3-[Hiv]-Z-didemnina A,

3-Hiv]-9-[Z-Nva]-aplidyna,

3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]-aplidyna,

3-[Hiv]-8-[Boc-Val]-didemnina A,

3-[Hiv]-8-[Val]-9-[izobutyrylo]-didemnina A,

3-[Hiv]-8-[heksanoilo]-didemnina A,

9- [metylosulfonylo]-aplidyna.
30. Związek, który jest wybrany spośród następujących:

9-[norwalino]-aplidyna,

3-[Val]-didemnina A,

3-[Hiv]-didemnina A,

9-[Z-Nva]-aplidyna,

8-[Gly]-9-[kumaryno]-didemnina A,

8-[biotyno]-didemnina A,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[Boc]-aplidyna,

108

PL 208 651 B1

7.8- [spiro]-9-[pyr]-aplidyna,

3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidyna,

7.8- [spiro]-9-[Boc]-aplidyna,

3-[Val)-9-[lac(OTBDMS)]-aplidyna,

3-[Hiv]-9-[D-lac(OTBDMS)]-aplidyna,

7.8- [spiro]-9-[izobutyrylo]-aplidyna,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[pyr]-aplidyna,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[izobutyrylo]-aplidyna,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[akryloilo]-aplidyna,

3-[Aip]-aplidyna.
31. Związek według zastrz. 29, którym jest 8-[fenyloureido]-didemnina A.
32. Związek według dowolnego poprzedniego zastrzeżenia, który jest w postaci farmaceutycznie dopuszczalnej soli.