CZ304204B6 - Deriváty aplidinu - Google Patents
Deriváty aplidinu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ304204B6 CZ304204B6 CZ2002-4233A CZ20024233A CZ304204B6 CZ 304204 B6 CZ304204 B6 CZ 304204B6 CZ 20024233 A CZ20024233 A CZ 20024233A CZ 304204 B6 CZ304204 B6 CZ 304204B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- group
- groups
- aplidine
- substituted
- hiv
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
Deriváty aplidinu obecného vzorce uvedeného dále, kde substituenty mají specifický význam.
Description
Navrhovaný vynález popisuje způsoby syntézy aplidinu a nových protinádorových derivátů, způsoby jejich přípravy a použití.
Dosavadní stav techniky
Aplidin má cyklickou strukturu s postranními řetězci:
NMe-L-Tyr®
L-Pro5
Ist2 (isostatine)
NMe-D-Leu
L-Pro
Pyr® (piruvyl) jádro didemninů
Aplidin
Didemniny jsou skupinou cyklických depsipeptidů, které byly izolovány z různých druhů Trididemnum (Rinehart, Jr. et al. J. Am. Chem. Soc., 103, 1857-59 (1981), Rinehart, Jr. et al. Science, 212, 933-935 (1981)) a které mají silné protinádorové a antivirové účinky. Aplidin jedním z přirozených didemninů, které vykazuje nejsilnější protinádorové účinky. Popis izolace z přiroze20 ných didemninů, který vykazuje nejsilnější protinádorové účinky. Popis izolace a protinádorových účinků aplidinu je uveden v patentu US 5 834 586.
Celá řada syntetických a přirozených analogů aplidinu již byla popsána dříve (Rinehart, Jr. et al. J. Med. Chem., 1996, 39, 2819-2834) včetně různých úprav postranních řetězců, ale za zacho25 vání stejné makrocyklické struktury.
Byla již také popsána struktura příbuzná didemninům označená jako tamandariny (Fenical, W. et al., J. Org. Chem. 2000, 65, 782-792), izolované z neidentifikované větve rodiny Didemnidae. Tyto molekuly se odlišují pouze přítomností kyseliny hydroxyisovalerové (Hiv3), na místě kyseliny hydroxyisovalerylpropionové (Hip3). Bylo zjištěno, že se jedná o vysoce aktivní peptidy s antivirovým, protinádorovým a imunosupresivním účinkem.
TÁMANDARfNE B: R=fí OMe
Závažné odkazy týkající se stavu techniky dále zahrnují WO 98/17 302, který se týká celkové syntézy amino (Hip) analogu didemninu A; WO 98/17 275 A popisujícím semisyntetické studie vztahující se k analogům didemninu; WO 93/00 362 A, který se týká nových peptidů (didemninů), jejich přípravy a jejich použití; dále EP 0 393 883 A popisujícího nové cytotoxické cyklické depsipeptidy z tunikátu trididemninu sodného; US 3 034 058, který se týká semi-syntetických analogů alanyl didemninu; dokument R. Sakai et al.: Journal of Medicinal Chemistry; 39; č. 14; 1996; str. 2819-2834, který se týká vztahů mezi strukturou a účinností didemninů; dokument Vervoort et al.: J. Org. Chem. 2000, 65, str. 782-792, který se týká tamandarinu A atamandarinu B; ES 2 102 322A se týká přípravy didemninu A; WO 0176616 A se týká tamandarinových a didemninových analogů a způsobů jejich přípravy a jejich použití. US 6 509 315 se týká didemninových analogů a fragmentů a způsobů jejich přípravy a jejich použití. R. Sakai et al.; J. Org. Chem. Vol. 59, str. 5192-5205 popisuje způsob přípravy analogu didemninu a US 4 493 796 Rinehart et al. popisuje didemninové analogy.
Všechny sloučeniny zde popsané ve výše uvedených odkazech jsou mimo rozsah sloučenin předkládaného vynálezu.
Podstata vynálezu
Vynález se týká cyklického derivátu depsipeptidu obecného vzorce aa5
kde
X je nezávisle -C(R)2-, -O-, -S-, nebo -NR-, kde R je nezávisle H nebo organická skupina vybraná zCrCp alkylové skupiny, C2—C)2 alkenylové skupiny, C6-C,s arylové skupiny, aral-2CZ 304204 B6 kýlové skupiny a jejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, které obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, C,-C,2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;
Y je CO nebo -COCHCH3CO-;
R4 je H nebo organická skupina vybraná z aminoskupiny RCONH-, acylové skupiny RCOC,-C,2 alkylové skupiny, C2-C,2 alkenylové skupiny, arylové skupiny, aralkylové skupiny, ajejich substituovaných derivátů, kteréjsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, které obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, C|CI2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;
kde v každém případě
R je C|—C|2 alkylová skupina, C2-C,2 alkenylová skupina, C6-C,8 arylová skupina, aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, kteréjsou substituované heterocyklickou skupinou obsahující jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, C|—Ci2 alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, případně chráněnou amino skupinou, guanidinovou skupinou nebo halogenovou skupinou;
X, je O nebo S; a když Y je CO, pak
a) X2 je CR, O (a R2 chybí), S (a R2 chybí), nebo N, kde R je nezávisle H nebo organická skupina vybraná z C|-C|2 alkylové skupiny, C2-C]2 alkenylové skupiny, C6-C|8 arylové skupiny, aralkylové skupiny ajejich substituovaných derivátů, kteréjsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, které obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, C|-Ci2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; a
Ri a R2 jsou každý nezávisle H nebo organická skupina vybraná z C|-Ct2 alkylové skupiny, C2C|2 alkenylové skupiny, C6-C|8 arylové skupiny, aralkylové skupiny, amidové skupiny RCONHnebo acylové skupiny RCO-, kde R je a Cí-C,2 alkylová skupina, C2-Ci2 alkenylová skupina, C6-C18 arylová skupina, aralkylová skupina ajejich substituované deriváty, kteréjsou substituované jednou nebo více C]—C]2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; a
Ri nebo R2, když X2 je N, dále je -SO2R, kde R je jak definováno výše; nebo
b) aa8 je sloučenina vzorce kde R; je organická skupina vybraná z C,-Ci2 alkylové skupiny, C2-Cl2 alkenylové skupiny, CĎC|8 arylové skupiny, aralkylové skupiny, skupiny RSO2- nebo acylové skupiny RCO-, kde R je Cj—C|2 alkylová skupina, C2-C,2 alkenylová skupina, C6-C18 arylová skupina, aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, kteréjsou substituované jednou nebo více merkapto skupinami případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo
- j CZ 304204 B6
c) Ri a R2 s X2 tvoří případně substituovaný C3-Ci2 cykloalkyl, případně substituovaný C6-Ci8 aryl nebo případně substituovanou heterocyklickou skupinu vybranou z kumarinylu, quinolinylu, pyridylu, pirazinylu, pyrimidylu, furylu, pyrrolylu, thienylu, thiazolylu, oxazolylu, imidazolylu, indolylu, benzofuranylu, benzothiazolu, tetrahydrofuranylu, tetrahydropyranylu, piperidinylu a morfolinu; kde případné substituenty jsou vybrané zCi-C,2 alkylové skupiny, C2-Ci2 alkenylové skupiny, C6-C|8 arylové skupiny, aralkylové skupiny, a jejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovanými skupinami; nebo
d) aa8 je nahrazen organickou skupinou vybranou zCe-Cis arylové skupiny, aralkylové skupiny, skupiny RSO2- nebo acylové skupiny RCO-, kde Rje C|-Cl2 alkylová skupina, C6-Ci8 arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, C]—Cj2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; když Y je -COCHCH3CO-, pak
a) X2 je N, a R| a R2 jsou každý nezávisle H nebo organická skupina vybraná z C|-CJ2 alkylové skupiny, C2-C)2 alkenylové skupiny, Cň-C|8 arylové skupiny, aralkylové skupiny, amidové skupiny RCONH-, skupiny -SO2R nebo acylové skupiny RCO-, kde R je a C,-C|2 alkylová skupina, C2-C|2 alkenylová skupina, Cf,-C|8 arylová skupina, aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami obsahujícími jeden, dva nebo tři heteroatomy vybranými z atomů N, O nebo S, C,-Ci2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo
b) aa8 je sloučenina vzorce kde R3 je skupina RSO2-, kde Rje C,-C|2 alkylová skupina nebo R3 je C2-C|2 alkenylová skupina, alkenylová skupina, aralkylová skupina ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo
c) R, a R2 s X2 tvoří případně substituovanou C3-C|2 cykloalkylovou skupinu, případně substituovanou C6-C,8 arylovou skupinu nebo případně substituovanou heterocyklickou skupinu vybranou z kumarinylu, quinolinylu, pyridylu, pirazinylu, pyrimidylu, furylu, pyrrolylu, thienylu, thiazolylu, oxazolylu, imidazolylu, indolylu, benzofuranylu, benzothiazolu, tetrahydrofuranylu, tetrahydropyranylu, piperidinylu a morfolinu; kde případné substituenty jsou vybrané zC,-Ci2 alkylové skupiny, C2-Ci2 alkenylové skupiny, C6-Cl8 arylové skupiny, aralkylové skupiny, ajejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovanými skupinami; nebo
d) aa8 je nahrazen organickou skupinou vybranou zC6-Ci8 arylové skupiny, aralkylové skupiny, skupiny RSO2-, kde Rje C,-C,2 alkylová skupina, C6-Ci8 arylová skupina nebo aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více Ci-C|2
-4CZ 304204 B6 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;
kde aralkylové skupiny jsou tvořeny Cj—Cí2 alkylovou skupinou substituovanou C6-C)8 arylovou skupinou;
a jeho farmaceuticky přijatelných solí.
Navrhovaný vynález popisuje deriváty aplidinu pro použití v medicíně, konkrétně pak určené pro léčbu nádorů. Navrhovaný vynález rovněž popisuje farmakologické přípravky, které tyto látky obsahují ajsou určené pro léčbu nádorů, například solidních nádorů a použití těchto látek pro přípravu léčiv určených pro léčbu nádorů. Tato léčiva jsou určena pro léčbu solidních nádorů, jako jsou rakovina močového měchýře, prsu, tlustého střeva, jater, NSLC, vaječníků, pankreatu, hltanu, prostaty, cév, SLC, retinoblastomů, melanomů, fibrosarkomů, chondrosarkomů, nebo osteosarkomů, nebo pro léčbu leukemií/lymfomů jako jsou ALL (promyelocytická leukémie), ALL (akutní lymfoblastická leukémie), CML (chronická myelogenní leukémie), ALL (Bbuněčná leukémie), leukémie (vlasatá B-buněčná leukémie), leukémie (plazmatické buňky), lymfom (T buněčný), lymfom (kožní T buňky), lymfom (nediferencovaný), lymfom (Burkittův Bbuněčný), lymfom (histiocytický), lymfom (B-buněčný), lymfom (Burkittův ascitický).
Příklady farmaceutických prostředků podle navrhovaného vynálezu, mohou být pevné lékové formy (např. tablety, váčky, kapsle nebo granule) nebo kapalné lékové formy (roztoky, suspenze nebo emulze) s vhodným složením určeným pro orální, povrchovou nebo parenterální aplikaci a mohou obsahovat buď čistou látku podle navrhovaného vynálezu, nebo může být tato látka přítomná v kombinaci s nějakým nosičem nebo jinou farmakologicky aktivní složkou. Všechny tyto látky musí být sterilní, pokud mají být aplikovány parenterálně. Je také možné, navázat látky podle navrhovaného vynálezu na nosič, kterým může být protein nebo jiné vhodné agens použitelné pro aplikaci do lidského nebo zvířecího organismu. Navázání látky na nosič může být buď přímé, nebo nepřímé prostřednictvím vhodné spojky. Aplikace látek nebo prostředků podle navrhovaného vynálezu může být provedeno jakoukoliv vhodnou technikou, jako je nitrožilní infúze, orální aplikace, intraperitoneální nebo intravenózní aplikace. Nejvhodnější infúzní časy jsou do 24 hodin, lépe pak 2 až 12 hodin a nejlépe 2 až 6 hodin. Nejvhodnější jsou krátké infuze, které nevyžadují, aby byl pacient hospitalizován přes noc. Nicméně pokud je třeba je možné aplikovat léčivo I v dlouhodobých 12 až 24 hodin trvajících infúzích. Tyto infúze by měly probíhat ve vhodném intervalu 2 až 4 týdnů. Farmaceutické prostředky obsahující látky podle navrhovaného vynálezu mohou být aplikovány také ve formě lipozómů, nanokuliček, v postupně se uvolňujících lékových formách nebo pomocí jiných standardních způsobů aplikace.
Správná dávka se bude odlišovat v závislosti na lékové formě, způsobu aplikace, konkrétním místě aplikace, pacientovi a typu léčeného nádoru. Je rovněž nezbytné vzít v úvahu další faktory jako je věk, tělesná váha, pohlaví pacienta, jeho dieta, čas aplikace, míra vylučování, stav pacienta, kombinace léčiv, reakce přecitlivělosti a závažnost onemocnění. Aplikace může být pak kontinuální nebo periodická až do maximální tolerované dávky.
Látky podle navrhovaného vynálezu mohou být použity s ostatními léčivy v kombinované terapii. Ostatní léčiva mohou být součástí příslušné lékové formy, nebo mohou být aplikována nezávisle a až buď současně, nebo vjiný vhodný okamžik. Použití jiných látek není omezené a vhodnými kandidáty mohou být:
a) látky s antimitotickým účinkem, zejména pak takové, které působí proti strukturám cytoskeletu, jako jsou látky působící proti tvorbě mikrotubulů, jako jsou taxany (např. taxol, paklitaxel, taxotere, docetaxel), podofylotoxiny nebo vinca alkaloidy (vincristine, vinblastine);
b) antimetabolity jako jsou 5—fluorouracil, cytarabin, gemcitabin, analogy purinu jako jsou pentostatin, methotrexát);
-5 CZ 304204 B6
c) alkylační agens jako jsou dusíkaté yperity (jako je cyclofosfamid nebo ifosfamid);
d) látky napadající DNA jako jsou antracyklická antibiotika jako je adriamycin, doxorubicin, farmorubicin nebo epirubicin;
e) látky působící cílové topoizomery, jako je etoposid;
f) hormony a agonisté nebo antagonisté hormonů jako jsou estrogeny, antiestrogeny (tamoxifen, příbuzné látky) a androgeny, flutamin, leuprorelín, goserelin, cyprotrone nebo octreotid;
g) látky zabraňující přenosu signálu v nádorových buňkách, včetně derivátů protilátek jako je herceptin;
h) alkylační činidla jako jsou látky obsahující platinu (cis-platina, carbonplatina, oxaliplatina, paraplatina) nebo nitromočovina;
i) látky potenciálně zabraňující tvorbě metastáz jako jsou inhibitory metaloproteáz z mezibuněčné hmoty;
j) genová terapie a antisens agens;
k) terapeutické protilátky; a
l) další bioaktivní látky pocházející z moře, zejména pak ekteinascidiny jako je ET-743.
V jedné konkrétní variantě je popsána sloučenina obecného vzorce:
kde:
X je nezávisle -C(R)2-, -O-, -S-, nebo -NR-, kde R je nezávisle El nebo organická skupina jako např. alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich substituované deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, která může být chráněná, guanidinovou skupinou nebo halogenem;
X2 je nezávisle CR, O (a R2 není přítomna), S (a R2 není přítomna), nebo N, kde R je nezávisle H nebo organická skupina, a jejich deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, která může být chráněná, guanidinovou skupinou nebo halogenem; Y je -(COR')nCO-, kde n je 0 nebo 1
-6CZ 304204 B6 a R' nebo organická skupina jako např. alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, která může být chráněná, guanidinovou skupinou, nebo halogenem;
Xi je O nebo S;
Ri, R2 a R4 jsou nezávisle H nebo organická skupina jako např. amid RCONH- nebo acyl RCO-, kde Rje definováno jako, alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, která může být chráněná, guanidinovou skupinou, nebo halogenem, a Ri nebo R2 kde X2 je N, a R4, může dále být-SO2R, kde Rje definováno;
nebo R, a R2 s X2 mohou tvořit N-substituovaný prolin, kdy N-substituovaný prolin aa8 je podle obecného vzorce:
kde R3 je nezávisle H nebo organická skupina jako např. RSO2- nebo acyl RCO-, kde R je definováno, nebo R3 je alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, která může být chráněná, guanidinovou skupinou, nebo halogenem;
nebo R| a R2 s X2 mohou tvořit cykloalkyl, aryl nebo heterocyklickou skupinu, která může být substituována jednou nebo více skupinami R3; nebo R,, R2, X2, R4 a skupina R4 nesoucí dusík může tvořit oxadiazaspiroalkan N-substituovaný s R5, kde R5 je nezávisle H nebo organická skupina jako např. RSO2- nebo acyl RCO-, kde Rje definováno jako alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, která může být chráněná, guanidinovou skupinou nebo halogenem;
nebo aa8 je nahrazeno organickou skupinou např. RSO2- nebo acyl RCO-, kde R je definováno jako alkylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich deriváty substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, guanidinovou skupinou, nebo halogenem; a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Nejvhodnější látky jsou ty, kde X je -NR-, kde Rje definováno. Lépe pak, X je -NH- nebo -Me-, a nejlépe X je NH-.
Další vhodné látky podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde X je -O-.
Skupina Y je nejlépe -COR'CO-, kde R'je alkyl, a zejména pak kde R'je -CHCH3Další vhodné látky podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde Y je -CO-.
Vzhledem k těmto podmínkám, nej vhodnější skupinou látek je ta, kde X je -NH- nebo -O- a Y je -COCHCH3CO- nebo -CO-.
Výhodně R4 je methyl.
-7CZ 304204 B6
Výhodně X, je =0.
Výhodně X2R, je aralkyloxy skupina, která může být substituovaná, jako např. benzyloxy skupina.
Další vhodné látky podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde X2Ri je amino skupina, která může být substituovaná, lépe pak takové, kde X2R| je skupina -NHRt, kde Ri je alkyl, který může být substituovaný, alkenyl, aryl, nebo aralkyl, zejména pak alkyl nebo aryl, jako jsou fenyl nebo butyl.
Další vhodné látky podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde X2R| alkyl, který může být substituovaný kde X2R, je propyl, isopropyl, pentyl nebo biotin.
Další vhodné látky podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde -C(=X2)RiR2 tvoří acyl aminokyseliny, který může být substituovaný. Vhodné substituované acyly aminokyselin mohou být prolin, který může být substituovaný, glycin, který může být substituovaný, valin, který může být substituovaný, konkrétně pak vhodný substituovaný prolin může být norvalin-prolin, alanin-prolin, který může být substituovaný, Boc-prolin, alkyl—prolin, který může být substituovaný, nebo vhodný substituovaný glycin může být heterocyclem substituovaný glycin, valin, který může být substituovaný je zejména valin, Boc-valin, nebo alkyl-valin.
Vhodný substituovaný prolin je norvalin-prolin, Z-norvalin-prolin, alanin-prolin, Z-alaninprolin, Boc-alanin-prolin, isobutyrylprolin nebo D-lactylprolin který může být chráněný, nebo heterocyklem substituovaný glycin může být kumarinyl-glycin, a valin, který může být substituovaný je valin, Boc-valin, nebo isobutyrylvalin.
Další vhodnou skupinou látek podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde Xi je S a X2R, je skupina -NHR|, kde R, je alkyl, alkenyl, aryl, aralkyl, který může být substituovaný. R] je nejlépe alkyl nebo aryl, konkrétně pak fenyl nebo butyl.
Ri a R2 s X2 mohou tvořit heterocyklický kruh, který může být substituovaný jednou nebo I více skupinami R3. Touto heterocyklickou skupinou může být například kumarin.
Vhodné látky podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde aa8 je nahrazeno organickou skupinou RSO2-, kde R je, jak bylo definováno, např. methyl. Rb R2, X2, R4 a dusík obsahující R4 mohou tvořit oxadiazaspiroalkan N-substituovaný s R5, kde R5 je H. N-substituovaný oxadiazaspiroalkan je nejlépe 6-oxa-l,7diazaspiro[4,4]nonan.
Příklady látek podle navrhovaného vynálezu jsou:
3-[Aip]-Z-didemnin A,
8-[fenyl-močovina]-didemnin A,
8- [Butyl-močovina]-didemnin A,
3-[val]-8-[isobutyryl]-aplidin,
9- [norvalin]-aplidin,
3-[Hiv]—9-[isobutyryl]- aplidin,
3-[Val]- 9-[isobutyryl ]- aplidin,
3-[hiv]-8-[isobutyryl]-didemnin A,
3-[Hiv]-9-[Ala]-aplidin,
3-[Hiv]-9-[Nva]-aplidin,
8-[fenylthiomoěovina]-didemnin A,
-8CZ 304204 B6
8-[kumarin]-didemnin A,
8-[butylthiomočovina]-didemnin A,
3-[Hiv]-9-[D-Lac]-aplidin,
8- [methylsulfonyl]-didemnin A,
3-[val]-Z-didemnin A,
3-[Hiv]-8-[Val]-didemnin A,
3-[Hiv]—8-[butyryl]—aplidin,
3-[val]-didemnin A,
3-[Hiv]-didemnin A,
Z-didemnin A,
9- [Z-Nva]-aplidin,
3-[Hiv]-9-[Z-ala]-aplidin,
8-[Gly]-8-[kumarin]-didemnin A,
8-[biotin]-didemnin A,
3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[Boc]-aplidin,
3-[Hiv]-Z-didemnin A,
3-[Hiv]-9-[Z-Nva]-aplidin,
7.8- [spiro]—9—[pyr]—aplidin,
3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidin,
3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]-aplidin,
7.8- [spiro]-9-[Boc]-aplidin,
3-[Hiv]-8-[Boc-Val]-aplidin,
8-[Val]-9-[isobutyryl]-didemnin A,
3-[Hiv]-8-[hexanoyl]-didemnin A,
3-[Val]-9-[Lac(OTBDMS)]-aplidin,
3-[Aip]-didemnin A,
3-[Hiv]-9-[D-Lac(OTBDMS)]-aplidin,
7.8- [spiro]-9-[isobutyryl]-aplidin,
3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[Pyr]-aplidin,
3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[isobutyryl]-aplidin,
3—[Hiv]—7,8—[spiro]—9—[akryloyl]—aplidin, [Aip]3—aplidin.
V dalších aspektech podle navrhovaného vynálezu jsou popisovány látky podle obecného vzorce:
-9CZ 304204 B6
a příbuzné struktury.
V další konkrétní variantě, navrhovaný vynález popisuje syntetickou cestu přípravy aa3 = [Hiv]3 nebo [Val]3 nebo [Aip]3, jako část série výrazně účinných a vzácných látek s protinádorovým účinkem o kterých se očekává využití v klinické léčbě jakmile budou dostupná dostatečná množství a jejich jednoduché izomery, u kterých dochází k permutacím aminokyselinových zbytků. Tento postup je kontrolován jak z hlediska vzniku enantiomer, tak stereomer, je rychlý a má řadu výhod standardních syntetických postupů v kapalné fázi.
Jedna vhodná varianta navrhovaného vynálezu je uvedena jako vzorec 1, kde aa3 je nezávisle aaminokyselina L nebo D konfigurace. Pokud je přítomno, X je nezávisle C(R)2> O, S, nebo NR; kde R je nezávisle H nebo organická skupina, kterou může být jako alkylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, ajejich deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickou skupinou, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, guanidinovou skupinou, nebo halogenem. Kde R obsahuje nejlépe 1 až asi 12 uhlíkových atomů, lépe pak 1 až asi 8 uhlíkových atomů, ještě lépe 1 až asi 6 uhlíkových atomů, a nejlépe 1,2, 3 nebo 4 uhlíkových atomů. Methyl, ethyl a propyl včetně isopropylu jsou pravděpodobně nejvhodnější alkylové skupiny pro látky podle navrhovaného vynálezu. Skupina aa3 je nejlépe ct-(cť_hydroxyisovaleryljpropionyl (Hip), (X= O, Y = -COCHCH3CO-) -série A, nebo a-(oť-aminoisovaleryl)propionyl (Aip), (X= NH, Y = -COCHCH3CO-) -série N, nebo valin (X = NH, Y= -CO-) -série V, nebo α-hydroxyisovaleryl (X= -Ο-, Y = -CO-) -série H, nebo N-methylvalin (X= NMe, Y = -CO-) -série M. Skupina aa8 je nezávisle cc-aminokyselina L nebo D konfigurace, pokud je přítomna; X2 je definováno v závislosti na Y.
R3 je nejlépe pyruvát, aralkyloxykarbonylová skupina nebo aminokyselina nebo peptid. Alkylové skupiny by měly mít nejlépe od 1 do asi 12 uhlíkových atomů, lépe pak od 1 do asi 8 uhlíkových atomů, ještě lépe od 1 do asi 6 uhlíkových atomů, a nejlépe od 1, 2, 3 nebo 4 uhlíkové atomy. Methyl, ethyl a propyl včetně isopropylu jsou nejvhodnější alkylové skupiny v látkách podle navrhovaného vynálezu. Jak je zde použit, termín alkyl, pokud není uvedeno jinak, popisuje jak cyklické, tak necyklické skupiny, přičemž cyklické skupiny by měly obsahovat alespoň tři uhlíkové atomy. Nej vhodnější aminokyseliny jsou chráněné nebo nechráněné D nebo L glycin, valin, leucin, isoleucin, fenylalanin, tyrosin, tryptofan, methionin, cystein, aspartát, asparagin, glutamová kyselina, glutamin, lysin, arginin, prolin, serin, threonin, histidin a hydroxyprolin. Nejvhodnější peptidy jsou tvořeny z výše uvedených aminokyselin.
Jak je zde používán, termín „organická skupina“ popisuje uhlovodíkovou skupinu, kterou může být alifatická skupina, cyklická skupina, nebo kombinace alifatických a cyklických skupin (např. aralkylové skupiny). V kontextu navrhovaného vynálezu, termín „alifatická skupina“ popisuje nasycený nebo nenasycený, lineární nebo přímý uhlovodík. Tento termín je používán tak, že zahrnuje například alkyl, alkenyl a alkynylové skupiny. Termín „alkylová skupina“ popisuje
- 10CZ 304204 B6 nasycenou lineární nebo větvenou uhlovodíkovou skupinu zahrnující např., methyl, ethyl, isopropyl, isobutyl, t-butyl, heptyl, dodecyl, oktadecyl, amyl, 2-ethylhexyi, 2-methylbutyl, 5methylhexyl, a podobně. Termín „alkenylová skupina“ popisuje nenasycenou lineární nebo větvenou uhlovodíkovou skupinu s jednou nebo více dvojnými vazbami mezi uhlíky, jako je např. vinyl. Termín „alkynylová skupina“ popisuje nenasycenou lineární nebo větvenou uhlovodíkovou skupinu s jednou nebo více trojnými vazbami mezi uhlíky. Termín „cyklická skupina“ popisuje uhlovodíkovou skupinu uzavřenou do kruhu, která může být klasifikována jako alicyklická skupina, aromatická skupina, nebo heterocyklická skupina. Termín „alicyklická skupina“ popisuje cyklickou uhlovodíkovou skupinu s vlastnostmi, podobnými alifatickým skupinám. Termín „aromatická skupina“ nebo „arylová skupina“ popisuje mono- nebo polycyklickou aromatickou uhlovodíkovou skupinu. Termín „heterocyklická skupina“ popisuje uzavřený kruhový uhlovodík, kdy jeden nebo více atomů tvořících kruh jsou atomy jiné než atomy uhlíku (např. dusík, kyslík, síra apod.).
Nejvhodnější alkoxy skupiny v látkách podle navrhovaného vynálezu jsou skupiny obsahující jednu nebo více vazeb s kyslíkem a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů, lépe pak od asi 1 do asi 8 uhlíkových atomů, a nejlépe 1 až asi 6 uhlíkových atomů, a nejlépe 1, 2, 3 nebo 4 uhlíkové atomy.
Vhodné heteroaromatické skupiny v látkách podle navrhovaného vynálezu obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy kterými mohou býtN, O nebo S atomy, např., kumarinyly včetně 8-kumarinylu, quinolinyly včetně 8-chinolinylu, pyridylu, pyrazinylu, pyrimidylu, furylu, pyrrolylu, thienylu, thiazolylu, oxazolylu, imidazolylu, indolylu, benzofuranylu a benzothiazolu. Vhodné heteroalicyklické skupiny v látkách podle navrhovaného vynálezu obsahují, jeden, dva nebo tři heteroatomy např. N, O nebo S atomy včetně např., tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, piperidinyl, morfolino a pyrrolindinyl skupiny.
Vhodné karboxylové arylové skupiny podle navrhovaného vynálezu mohou být látky s jedním nebo více cykly, včetně látek složených z několika cyklů, které obsahují oddělené a/nebo fúzované arylové skupiny. Obvyklá karboxylová arylová skupina obsahuje 1 až 3 nezávislé nebo fúzované cykly a od 6 do asi 18 uhlíkových atomů v cyklu. Nejvhodnější karbocyklická arylová skupina je fenyl, včetně substituovaných fenylů, jako jsou 2-substituovaný fenyl, 3-substituovaný fenyl, 2,3-substituovaný fenyl, 2,5-substituovaný fenyl, 2,3,5-substituovaný fenyl a 2,4,5substituovaný fenyl kde jeden nebo více substituentů fenylu jsou elektronegativní skupiny jako např. halogen, kyano, nitro, alkanoyl, sulfinyl, sulfonyl a podobně, naftyl včetně l-naftyl a 2naftyl, bifenyl, fenantryl a antracyl.
Chráněná aminokyselina může být chráněna pomocí různých skupin známých v současném stavu techniky, které jsou vhodné pro tento účel. Vhodnými chránícími skupinami pro aminy jsou např. karbamáty, amidy, a další chránicí skupiny, jako jsou alky, arylalkyl, sulfo— nebo halo—arylalkyl, haloalkyl, alkylsilylalkyl, arylalkyl, cykloalkylalkyl, alkylarylalkyl, heterocyklylalkyl, nitroarylalkyl, acylaminoalkyl, nitroaryldithioarylalkyl, dicykloalkylkarboxamidoalkyl, cykloalkyl, alkenyl, arylalkenyl, nitroarylalkenyl, heterocyklylalkenyl, heterocyklyl, hydroxyheterocyklyl, alkyldithio, alkoxy- nebo halo- nebo alkylsulfinyI arylalkyl, heterocyklylacyl, a další karbamáty a alkanoyl, haloalkanoyl, arylalkanoyl, alkenoyl, heterocyklylacyl, aroyl, arylaroyl, haloaroyl, nitroaroyl, a další amidy, stejně tak jako alkyl, alkenyl, alkylsilylalkoxyalkyl, alkoxyalkyl, kyanoalkyl, heterocyklyl, alkoxyarylalkyl, cykloalkyl, nitroaryl, arylalkyl, alkoxy- nebo hydroxyarylalkyl a řada dalších skupin. Tyto skupiny mohou být případně substituovány výše uvedenými substitučními skupinami.
Odkazy na skupiny, které mohou substituovat v látkách podle navrhovaného vynálezu, zahrnují konkrétní skupiny, které mohou být substituovány v jedné nebo několika vhodných pozicích jednou nebo více vhodnými skupinami, např. halogenem, jako je fluorid, chlorid, bromid a iodid; kyano skupinou, hydroxylem, nitro-, azido-, alkanoylem, jako je C)_6 alkanoyl jako např. acyl a podobně, karboxamido, alkylovou skupinou včetně skupin obsahujících od 1 do asi 2 uhlíko- 11 CZ 304204 B6 vých atomů, nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů a nejlépe od 1 do 3 uhlíkových atomů; alkenylové a alkynylové skupiny včetně skupin obsahujících jednu nebo více nenasycených vazeb a od do asi 12 uhlíkových atomů nebo od 2 do asi 6 uhlíkových atomů alkoxy skupiny včetně těch, které obsahují jednu nebo více kyslíkových vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů, aryloxy skupiny, jako např. fenoxy; alkylthio skupiny včetně těch skupin obsahujících jednu nebo více thioéterových vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů, včetně těch skupin obsahujících jednu nebo více sulfinylových vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů, alkylsulfínylové skupiny včetně takových skupin obsahujících jednu nebo více sulfonylových vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů, aminoalkylové skupiny které obsahují jeden nebo více atomů dusíku a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů, karbocyklický aryl obsahující 6 nebo více uhlíkových atomů, konkrétně fenyl (např. R může být substituovaný nebo nesubstituovaný bifenyl) a arylalkyl jako je benzyl.
Jak je v současném stavu techniky známo, vyšší stupeň substituce není jen tolerovaný, je také velmi často žádaný. U látek podle navrhovaného vynálezu je substituce předpokládána. Pro zjednodušení diskuse a upřesnění některých termínů používaných v této přihlášce, termíny „skupina“ a „struktura“ jsou používány pro odlišení chemických entit vhodných pro substituci, nebo které je možné substituovat a které neumožňují nebo nemohou být substituovány. Tedy, pokud je použit termín „skupina“ pro popis substituentu, popisovaný chemický materiál zahrnuje nesubstituovanou skupinu a takovou skupinu obsahuj ící např. atomy O, N a S, v řetězci stejně jako karbonylovou skupinu nebo jinou obvyklou substituci. Termín „struktura“ je použit pro popis chemické látky nebo substituentu ale zahrnuje pouze nesubstituované chemické struktury.
Např. termín „alkylová skupina“ tak jak je používán, zahrnuje nejen samotný uhlovodíkový otevřený řetězec nasyceného alkylového substituentu, jako je methyl, ethyl, propyl, isobutyl a podobně, ale také substituenty nesoucí další substituenty známé v současném stavu techniky, jako je např. hydroxy-, alkoxy-, amino-, karboxyl, karboxamido-, atom halogenu, kyano-, nitro-, alkylsulfonyl, atd. Tedy termín „alkylová skupina zahrnuje další skupiny, haloalkyly, alkoholy, thioly, karboxyly, aminy, hydroxyalkyly, sulfoalkyly, atd. Na druhou stranu termín „alkylová struktura“ je omezena tak, že zahrnuje pouze samotný uhlovodíkový otevřený řetězec nasyceného alkylového substituentu, jako je methyl, ethyl, propyl, isobutyl a podobně. V dalších aspektech navrhovaného vynálezu jsou popisovány syntetické techniky.
Je popisován způsob přípravy fragmentu didemninu se strukturou:
NHBoc
OBn způsob zahrnuje navázání Boc-D-allo-Ileu-OH s lithium enolátem 3-fenylpropionové kyseliny. Karbonylová skupina fragmentu didemninu podle vzorce:
OBn
ŇHBoc může být redukována tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce
- 12CZ 304204 B6
NHBoc
Hydroxy skupina látky podle vzorce
může být chráněna tak, aby vznikl fragment didemninů podle vzorce
Následovným odstraněním chránění benzylesterové skupiny vznikne fragment didemninů podle vzorce
Dalším způsobem podle navrhovaného vynálezu pro přípravu fragmentu didemninů zahrnuje navázání prvního reaktantů podle vzorce
a druhého reaktantů podle vzorce
XR Me tak, aby vznikl fragment didemninů podle vzorce
- 13 CZ 304204 B6
kde X patří do skupiny zahrnující -O- a -NH-; kde Rje aminová chránící skupina; a kde Rje hydroxy chránící skupina. Vhodné X je -O- a Rje tent-butyldimethylsilyl; nebo X je -NHa Rje
Boc.
Dalším způsobem podle navrhovaného vynálezu pro přípravu fragmentu didemninu zahrnuje navázání prvního reaktantu podle vzorce
a druhého reaktantu podle vzorce
XR tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce
kde X patří do skupiny zahrnující -O-, -NMe, a -NH-; kde R je aminová chránící skupina; a kde Rje H. Vhodné X je -O- a R je H; nebo X je -NH- a Rje Boc; nebo X je -NMe- a Rje Boc. Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje hydrolýzu fragmentu didemninu podle vzorce:
- 14CZ 304204 B6
tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce
kde X patří do skupiny zahrnující -OH a -NH2.
Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje hydrolýzu fragmentu didemninu
tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce
kde X patří do skupiny zahrnující —NH2 a —NHMe.
Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu fragmentu didemninu navázáním 20 prvního reaktantu podle vzorce
- 15CZ 304204 B6
NH a druhého reaktantů podle vzorce
tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce
kde X patří do skupiny zahrnující -0-, -NMe, a -NH-; kde Y je -(COCHCH3)nCO-; kde n je 0 nebo 1.
Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje hydrolýzu fragmentu didemninu
tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce
- 16CZ 304204 B6
kde X patří do skupiny zahrnující -O-, a -NH-; kde Y je -(COCHCH3)nCO-; kde n je 0 nebo 1.
Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu fragmentu didemninů navázáním prvního reaktantů podle vzorce
io a druhého reaktantů podle vzorce
tak, aby vznikl fragment didemninů podle vzorce
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící benzylesterové skupiny z fragmentu didemninů podle vzorce
- 17CZ 304204 B6
tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce
Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu fragmentu didemninu navázáním prvního reaktantu podle vzorce
tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce
- 18CZ 304204 B6
kde X patří do skupiny zahrnující -0-, a -NH-; kde Y je -(COCHCHqjnCO-; kde n je 0 nebo 1.
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící skupiny z fragmentu didemni nu podle vzorce
kde X patří do skupiny zahrnující — O—, a—NH-; kde Y je -(COCHCHqjnCO—; kde n je 0 nebo 1.
Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu fragmentu didemninu zacyklo váním fragmentu podle vzorce
- 19CZ 304204 B6
kde X patří do skupiny zahrnující -0-, a -NH-; kde Y je -(COCHCH3)„CO-; kde n je 0 nebo 1. 5 Způsob zahrnuje hydrolýzu analogu didemninu
tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce
kde X patří do skupiny zahrnující -0-, a -NH-; kde Y je -(COCHCH3)nCO-; kde n je 0 nebo 1.
Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním prvního reaktantu podle vzorce
-20CZ 304204 B6
kde X patří do skupiny zahrnující -0-, a -NH-; kde Y je -(COCHCH3)„CO-; kde n je 0 nebo 1.
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící skupiny z fragmentu didemni io nu podle vzorce:
tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce
kde X patří do skupiny zahrnující -0-, a-NH-; kde Y je -(CC)CHCH3)nCO-; kde n je 0 nebo 1.
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním fragmen tu podle vzorce
-21 CZ 304204 B6
a druhého reaktantu podle vzorce
tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící skupiny z fragmentu didemninu podle vzorce:
tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce
na fragment
-22CZ 304204 B6
tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce
kde X patří do skupiny zahrnující -O-, a -NH-; kde Y je -(COCHCH3)nCO-; kde n je 0 nebo 1.
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu io didemninu podle vzorce
a fragmentu podle vzorce 15
O
tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce
kde X patří do skupiny zahrnující O-, a -NH-, a Rje i-propyl; kde X je -O- a Rje n-propyl, a Rje n-pentyl.
-23 CZ 304204 B6
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce
a fragmentu podle vzorce
tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce
kde
X=O, NH R=
X=O
O o OTBDMS
R=
OTBDMS
X=O
X=O
R=
O
A/
NHBoc
-24CZ 304204 B6 x=o x=o o
R=
ÍIHZ
R= -CO-OtBu
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící skupiny z analogu didemninů podle vzorce:
kde
X=O, NH R=
X=O
O OH R=
OH
X=O R= nh2
X=O R; nh2
X=O R= H
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce
a fragmentu podle vzorce
io ŇHBoc
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící skupiny z analogu didemninu podle vzorce:
tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce
-26CZ 304204 B6
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce
a isobutyrylchloridu tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce
-27CZ 304204 B6 a fragmentu podle vzorce
kde Rje Boc, isobutyryl, pyruvyl, nebo akryloyl.
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce
a fragmentu podle vzorce
tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce
-28CZ 304204 B6
kde R je SO2Me, nebo Z-Nva.
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící skupiny z analogu didemninu podle vzorce:
tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce
kde R2 je Nva.
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce
-29CZ 304204 B6
tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce
kde Rje Boc, isobutyryl, nebo pyruvyl.
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce ___ OUo
a fragmentu podle vzorce
-30CZ 304204 B6
O
tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce
a fragmentu podle vzorce
O
-31 CZ 304204 B6
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce
a fragmentu podle vzorce
tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu 15 didemninu podle vzorce
a methylsulfonylchloridu, tak aby vznikl analog didemninu podle vzorce
-32CZ 304204 B6
Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce
a fragmentu podle vzorce
X=C=N-R tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce
kde X je O, a S; kde Rje butyl a fenyl.
Je zřejmé, že tyto techniky slouží pouze k ilustraci navrhovaného vynálezu a mohou být podle potřeby upraveny. Konkrétně, je možné použít jiné chránící skupiny pro ochranu amino a hydro20 xy skupin. Pro zavedení požadovaných skupin je možné použít i jiné chemikálie. Substituenty se mohou podle požadavků odlišovat vzhledem k obecnému vzorci pro látky podle navrhovaného vynálezu a příkladů nej výhodnějších variant. Upravené techniky rovněž spadají do rámce navrhovaného vynálezu.
-33 CZ 304204 B6
Pro rozšíření může být nezbytné ujistit se, zda popis zahrnuje všechny varianty nejvýhodnějších aplikací, a že zajišťuje nárok v plném rozsahu vzhledem k současnému stavu techniky, který je zde uveden ve formě odkazů jako GB 0016148,9 a GB 0103750,6.
Přehled obrázků na výkresech
Látky podle navrhovaného vynálezu mohou být připraveny syntetickou cestou. Způsob přípravy aplidinu a jeho derivátů, který je zde popsán, může být rovněž použít pro syntézu širokého ío spektra didemninů.
Struktury některých takových látek jsou uvedeny v obr. 1:
Obr. 1
[HiV]3-aplidin (i), A = C, B = O Tamandarin A (IV), A = CH (konformace S), B = OH
Aplidin (Π), A = C, B = 0 Didemnin Β (ΙΠ), A = CH (konf. S), B = OH
[Val] 3-aplidin (V), A = C,B = 0,R = H [MeValf-aplidin (VI), A - C, B - O, R - Me [Aip]3-aplidin (Vil), A = C, B = O
Aa3 deriváty aplidinu jsou syntetické depsipeptidy strukturou podobné aplidinu (látka II) (aa3 = Hip, označovaný také jako dehydrodidemnin B) což je přirozený didemnin izolovaný zhouby Aplidium albicans (obr. 1). Připravené molekuly se odlišují přítomností kyseliny hydroxyisovalerové (Hiv) (látka 1), nebo valinu (látka V), methylvalinu (látka VI), a-(a'-aminoisovaleryl)propionylu (Aip) (látka VII) namísto hydroxyisovalerylpropionové (Hip) (11) jednotky, která se nachází u všech přirozeně se vyskytujících variant didemninů. Podobnost těchto dvěmi struktur byla rovněž zjištěna mezi didemninem B (látka III), nejznámější člen rodiny desippeptidů a nově izolovanými cyklickými depsipeptidy z neidentifikovaných Brazilských sumek Ascidiacea kmene Didemnidae: Tamandarin A (látka IV). Látka I, V, VI a Vil jsou syntetické deriváty didemninu.
-34CZ 304204 B6
Strukturní podobnost mezi III a IV je také zodpovědná za jejich podobnou biologickou aktivitu. Srovnáním obou látek bylo zjištěno, že IV má podobnou protinádorovou aktivitu jak bylo zjištěno klonogenní technikou stejně jako inhibiční vliv na biosyntézu proteinů a bylo také prokázáno, že může vykazovat vyšší aktivitu v v vitro systému než 111 proti karcinomu pankreasu. Přesto bylo zjištěno, že látka IV nemá žádnou specifitu proti některému typu nádorů, což prokázal NCI60 panel buněk. Didemnin B, jak bylo prokázáno, je toxický v dávkách blízkých těm, které jsou nezbytné pro dosažení terapeutické účinnosti a jedná se, podobně jako v případě látky IV, spíše o širokospektrý toxin, než selektivní agens.
[Hiv]3—aplidin (1) naproti tomu vykazuje stejné pozitivní vlastnosti jako aplidin (II) v porovnání s didemninem B (III(, zejména pak vyšší specifitu proti pevným nádorům, jako je rakovina tlustého střeva, chondrosarkom a osteosarkom, což bylo zjištěno pomocí MTS techniky. [Val]3—aplidin (V) a [MeValý-aplidin (VI) jsou další nové látky, které v vitro vykazují vysokou úroveň protiná15 dorové aktivity. Látky V, VI a VII jsou pravděpodobně schopné vzhledem k aplidinu zvýšit intenzitu vodíkových vazeb v aktivním místě a tím se jejich aktivita zvyšuje. Navíc přítomnost amidové vazby nahrazující esterovou vazbu může zvýšit stabilitu jádra cyklodepsipeptidu.
Popisujeme zde první totální syntézu různých sérií derivátů aplidinu. Jako příklad je retrosynte20 tická analýza uvedena v obr. 2.
Klíčovými kroky jsou makrokrystalizace lineárních prekurzorů 6 a praktická stereoselektivní syntéza Ist-aa3-Leu-Pro jednotka (Al), a fragment Dl. Konečná vazba makrokrystalu 4 s různými postranními řetězci dá vzniknout aa3-aa8-aplidinu a derivátům. Důkladnost této syntetické techniky byla úspěšně prokázána při vývoji praktické syntézy aplidinu 11 (aa3=Hip).
Obr.2
X = O; Y= -CO- (SHPL serte)
X =NH; Y= -CO- (SVPL serte)
X =NMe; Y= -CO- (SMPL serte)
X = O; Y= -COCHCO- (SAPL serte) ch3
X = NH; Y= -COCHCO- (SNPL serte) I ch3
-35CZ 304204 B6
Tvorba makrocyklického jádra je klíčový krok ve všech syntetických drahách. Úspěšného zacyklení všech čtyř možných amidových vazeb bylo již dosaženo dříve pří syntéze didemninů.
Přesto, v současném stavu techniky, vazba spojující N(Me)-O(Me)-Tyr a Pro byla zvolena jako jádro makrokrystalizace, což je odvozeno od dřívějších postupů, vyvinutých během totální syntézy aplidinu 11 (G. Jou, I. Gonzales, F. Albericio, P. Lloyd-Williams, E. Giralt., J. Org. Chem. 1997, 62, 354-366 a patent ES 2102322).
io
Schéma 1
O OH
ŇHBoc
Fenacyl bromid
EtaN
PacO'
OH
AA
Me
NHBoc
D3
ŇHBoc
D1
Makrocyklické jádro cílové molekuly je odpojeno od Ist-aa3-Leu-Pro levé jednotky tetrapeptidu Al adipeptidu Boc-Thr-(Z-NMeOMe-Tyr)-OH Dl.
Syntéza pravého fragmentu dipeptidu Dl již byla popsána. Přesto syntéza načrtnutá v schématu l umožňuje přípravu tohoto meziproduktu v kilogramovém množství. Kyselé funkční skupiny
Boc-Thr(OH)-OH byly chráněny fenacylbromidem tak, aby vznikl přímo alkohol D3, který je esterifikovaný Z-N(Me)-O(Me)-Tyr-OH pomocí DCC v přítomnosti DMAP což dá vzniknout D2. Odstraněním fenacylových skupin pomocí Zn v kyselině octové dá vzniknout čistému fragmentu D l.
Tvorba prekurzoru Al je načrtnuta v schématu 2 pro různé série. Pro série SHPL, SVPL a SMPL, první vazebný krok mezi Leu-Pro-OBzl (A5) a komerčně dostupnou kyselinou (Bl) dá přímo
-36CZ 304204 B6 alkohol A3 který je připravený pro další reakci s isostatinem (Cl). Pro syntézu sérií SAPL a SNPL se syntetická dráha odlišuje od předchozí vtom, že Bl je β-ketoester kyseliny oc-(cťhydroxyiso-valeryl)propionové respektive a-(a'-aminoisovaleryl)propionové.
Syntéza fragmentu B2 (SAPL a SNPL série) je naznačena v schématu 3, Hydrogenolýza z B2 na Bl je provedena těsně před vazebnou reakcí s A5.
Schéma 2
DCC
DMAP
SAPLA1 serie, X = O SNPLA1 serie, X = NH
SHPLA1 serie, X = O
SVPLA1 serie, X = NH
SMPLA1 serie, X = NMe
-37CZ 304204 B6
Schéma 3
O
1/TBDMS-CI/lmid/DMF
OH —-->·
OH 2/ KOH/H2O/THF (S)-2-Hydroxy-3methylbutanová kyselina acid
OH OTBDMS
SAPLB4
1/CDI/THF
2/
OLi
Λ
ΌΒπ
Of
OTBDMS
SAPLB3
1/ LDA/THF, -78°C
Mel
AV·
TBDMSO 5
SAPLB2
1/ CDI/THF
OH NHBoc
Boc-Val-OH
OLi
Λ
NHBoc
SNPLB3
O 1/LDA/THF,-78°C 0Bn 21 Mel
BocNH
SNPLB2
OBn
Příprava kompletního fragmentu Al závisí na dostupnosti isostatinu, který může být připraven ve velkých objemech z Boc-D-alloisoleucinu (C5) s chráněnou aminoskupinou. Syntetické dráha pro přípravu Cl je uvedena v schématu 4.
Aktivace karboxylové funkční skupiny Boc-D-allo-Ile pomocí carbonyldiimidazolu je následováno kondenzací s lithium enolátem 3-fenylpropionové kyseliny dá vzniknout ketoesteru C4, Stereoselektivní redukce pomocí KBH4 v methanolu dá vzniknout C3, Chráněním sekundárním hydroxylové skupiny jako je TBDMS éther (C2) a hydrogenolýzou vzniklého benzylesteru, dá vzniknout isostatinu (Cl).
Schéma 4
Následné kroky, které dají vzniknout látkám I, II, V a VII jsou uvedené v schématu 5. Navázáním fragmentů Al a Dl s HBTU/HOBt dá vzniknout lineárnímu prekurzoru typu 7. Hydrogenolýza Cbz a benzylem chráněných skupin probíhá čistě a hladce pomocí Pd(OH)2 tak, aby vznikla látka 6. Makrokrystalizační krok pomocí HATU/HOAt dá vzniknout meziproduktu 5 v dobrém
-38 CZ 304204 B6 výtěžku (75%). Chlorovodík v dioxanu je použit pro odštěpení Boc chráněných skupin což dá vzniknout aminu 4. Tato látka je pak navázána na Z-NMe-D-Leu-OH tak aby vznikla látka 3, která je vystavena hydrogenolýze pomocí PdC. Vzniklá látka 2 je navázána na Pyr-Pro-OH postranní řetězec pomocí DIPCDI tak aby vznikly požadované produkty.
Je zajímavé, že prekurzory typu 2, což jsou analogy ve všech aspektech, které byly popsány výše, didemninu A slouží jako výchozí stavební bloky pro syntézu některých zajímavých variant látek, neboť N-konec, volná sekundární aminoskupina, umožňuje navázání různých acylových skupin k cyklickému depsipeptidu.
Schéma 5
SAPL3, x = o.
Y= -COCHCH3COSNPL3, X=NH,
Y = -COCHCH3COSHPL3, X = O, Y = C=O SVPL3, X = NH, Y = C=O
SAPL2, X=O,
Y= -cochch3coSNPL2, X=NH,
Y =-COCHCHgCOSHPL2, X = O, Y = C=O SVPL2, X = NH, Y = C=O
I (SHPL1), X = O, Y = C=O
II (SAPL.1), X = O, Y = -COCHCHaCOV (SVPL1), X = NH, Y = C=O
VII (SŇPL1), X = NH, Y = -COCHCH3COl, 11, V, Vil
-39CZ 304204 B6
V dřívějších pracech (Rinehart et al J. Med. Chem., 1996, 39, 28192834) bylo zjištěno, že acyl deriváty didemninu A (dl )3 jsou aktivní jako výchozí látky pro látky 2, Pro sérii aa3 jsme zjistili aktivitu rovněž pro látky 3.
Tabulky 1 a 2 ukazují hodnotu IC50 pro látky 1.
io
Tabulka 1: Cytotoxicita látek příbuzných [aa3]-aplidinu IC50 (Molární)
| Látka/ Serie | P388 | A549 | HT29 | MEL28 |
| Aplidin (II)/ SAPL1 | l,80E-10 | I,80E-10 | 4,50E-10 | 4,50E-10 |
| [Hiv]3-aplidine (I)/ SHPL1 | 4,74E-10 | 4.74E-10 | 4,74E-10 | 4,74E-10 |
| [Val]3-aplidin (V)/SVPL1 | l,13E-10 | l,13E-10 | 1.13E-10 | l,13E-10 |
| [Aip]3-aplidin (VII)/SNPL1 | 9,01E-10 | 9,01E-10 |
DU145
Technika dle Berjeron etal., Biochem a Biof Res. Comm., 1984, 121,3, 848-854,
P388 = myší lymfom,
A549 = lidský plicní karcinom,
HT29 = lidský karcinom tlustého střeva,
MEL-28 = lidský melanom,
DU 145 = lidský karcinom prostaty.
-40CZ 304204 B6
Tabulka 2, hodnoty IC50 (molární) pro rodinu aplidinů
| Solidní nádory | Linie | Didemnin B | Aplidin | |
| [HiV]3- | ||||
| 9LSAPL1 | SAPL1 | |||
| Aplidin | ||||
| III | II | |||
| SHPL1 | T | |||
| močový měchýř | 5637 | 2,50E-08 | 3,59E-08 | 1 9,02E-08 |
| mléčná žláza | MX-1 | L54E-06 | l,67E-07 | N/A |
| tlusté střevo | HT-29 | 8,07E-08 | 6,87E-07 | 1.02E-08 |
| žaludek | Hs746t | 6.60E-09 | 2,52E-08 | 7,16E-08 |
| játra | SK-HEP- 1 | 9,21 E-08 | 9,44E-08 | 2,65E-07 |
| NSCL | i A549 | 1,21 E-04 | 2,40E-05 | N/A |
| vaječníky | SK-OV-3 | l,63E-07 | 7,20E-08 | - |
| pankreas | PANG-1 | l,52E-10 | l,7E-07 | - |
| hltan | FADU | 9,79E-08 | 7,29E-08 | 3,71 E-08 |
| prostata | PC-3 | 9,00E-08 | 5,13-07 | - |
| prostata | DU-145 | - | - | N/A |
| prostata | LNCAP | - | - | L46E-08 |
| cévy | 786-0 | 2,90E-07 | 8,31 E-08 | - |
| SCL | NCI- | - | - | N/A |
| H187 | ||||
| retmoblastom | Y-79 | - | - | - |
| melanom | Mel-28 | - | - | 4,86E-07 |
| fibrosarkom | SIN 694 | 3,28E-06 | l,49E-06 | NIA |
| chondrosarkom | CHSA | - | - | 3,45E-09 |
| osteosarkom | OSA-FH | - | - | 5,89E-09 |
-41 CZ 304204 B6
| Didemnin B | Aplidin | (Hiv)3 | ||
| Leukémie/Lymfomy | Linie | 9LSAPL1 III | SAPL1 II | Aplidin SHPL1 I N/A |
| ALL (promyelocytická leukémie) | HL-60 | l,44E-07 | 7,89E-08 | |
| ALL (akutní lymfobalstická) | Molt3 | 5,45E-07 | 5,95E-07 | l,77E-08 |
| CML (chronická myelogenní) 07 | K562 | 3,31 E-06 | 5,72E-07 | 5,21 E- |
| ALL (B-buněčná) | CCRF- SB | 6,55E-07 | 4,72E-07 | - |
| leukémie (vlasaté B-buňky) | Mo-B | - | - | - |
| leukémie (plazmatické buňky) | ARH-77 | - | l,78E-07 | - |
| lymfom (T-buněčný) | H9 | 2,13E-07 | 5,25E-07 | N/A |
| lymfom (kožní T-buňky) | Hut 78 | 3,56E-08 | 4,47E-08 | - |
| lymfom (nediferenciovaný) | MCI 16 | 8,84E-09 | 9,21 E-07 | 3,82E-07 |
| lymfom (Burkittův B-buněčný) | RAMOS | - | - | - |
| lymfom (histiocytický) | U-937 | l,87E-07 | 5,62E-07 | - |
| lymfom (B buněčný) | MoB | - | - | - |
| lymfom (Burkittův ascit) | P3HR1 | 5,58E-08 | 5,34E-08 | - |
| Metoda: | MTT | MTT | MTS |
(nové)
N/A = neaktivní
Látky takto připravené jsou zobrazeny ve schématech 5 a 6. Tyto látky zahrnují N“-propionyl[aa]3-dA, N-butyryl-[aaJ1-dA, N“-isobutyryl-[aa]3-dA, a N“-pentanoyl-[aa]3-dA. Analogy s dvěma podjednotkami acylu na N-konci aa3-dA jádra byly připraveny sledováním strukturních faktorů ovlivňujících specifitu pro různé druhy nádorů. Diacyly isobutyryl-Pro-OH, O-isobutyryl-Lac-Pro-OH, N-Benzyl-Ala-Pro-OH byly připraveny a kondenzovány s látkami typu 2 pomocí techniky D1PCDI tak aby byl získán po odstranění chránících skupin a přečištění [aa]-3[isobutyryl]9 aplidin, [O-isobutyryl-Lac]9-aplidin, [Ala]9-aplidin.
o
Nejvhodnější derivát aplidinu: látky ze sérií Η, V
-42CZ 304204 B6
8ISHPL1, X = O, R = iPr 8BSHPL1, X = O, R = nPr 8HSHPL1, X = O, R = nPentyl 8ISVPL1, X = NH, R = iPr
R /
DIPCDI
9ISHPL1, X = O, R = -CO-iPr 91SVPL1, X = NH, R = -CO-iPr
9LSHPL2(Í), X = O, R =
9LSHPL2(D), X = O, R =
9LSVPL2(C), X = NH, R =
O
A- o bTBDMS
OTBDMS
O
TBFA
THF iden
9LSHPL1(L), X = O, R = (Tamandarin A) θ
9LSHPL1(D), X = O, R = 'OTBDMS
9NVSHPL2, X = NH,
NHZ
8PSHPL2, X = O, R = -CO-OtBu O
9BASHPL2, X = O, R =
O 'ŇHBoc
9ZASHPL2, X = O, R = A'NHZ tóen
Pd(OH)2 iPrOH, H2O
HCl
Dioxane iden
9LSVPL1(Í), X = NH, R
O
JJ
Ό ==tt
9NVSHPL1,X = NH,R =
NH,
8PSHPL1, X = O, R = H.HCl O
9ASHPL1, X = O, R =
ŇHgCI
-43 CZ 304204 B6
o
9I8VSHPL1, X = O
Spirocyklické látky je možné rovněž navázat tak, aby vznikly aktivní látky:
9SBSHPL1.X = O, R = Άοβυ
O
9S1SHPL1, X = O, R = ‘'j' o '
9SASHPL1, X = O, R =
O
9SPSHPL1, X = O, R =
Schéma 6
-44CZ 304204 B6
Syntéza spirocyklických fragmentů je uvedena v schématu 7. Syntéza je odvozena od dříve popsané látky 8 viz a) Seebach, D. et al. J. Am. Chem. Soc. 1983, 105, 5390-5398, b) Genin, M. J. et al. J. Org. Chem. 1993, 58, 2334-2337,
i
D-Leu-OBn.HCI
HOAt/DCC/NMM
Boc i
Boc
CO2Bn
OsO4/NalO4
MeOH/H20
O
TEA/DCM
CO2Bn
MeOH
H2/Pd(C)
R = —\
Schéma 7
Nejvhodnější deriváty aplidinu: látky ze série A
-45CZ 304204 Β6
OMe οϋ'ΜθΡ r ο οη ΓÁNH
IqAqxNH ηΖ
Ό π:
D1PCDI
MeSO2CI
8MAPL1
8PUAPL1, X = O, R = Ph 8BUAPL1, X = O. R - Bu 8PTAPL1,X = S,R = Ph 8BTAPL.1, X = S. R = Bu
-46CZ 304204 B6
9NVSAPL1, R =
PdlOHfe
IPA/H2O
9NVSAPL2, R =
Spirocyklické látky je možné aktivní látky:
rovněž navázat na látky z předcházející série tak, aby vznikly
HOW O o A
DIPCDI
O ,O
9SPSAPL1,
Schéma 8
-47CL 304204 B6
Tabulka 3: Cytotoxicita derivátů aplidinu - IC50 (molární)
| Série | Popis | MOM | P388 | A549 |
| SNPL3 | 3-[Aip]-Z-didemnin A | 1076 | 9.29E-11 | |
| 8PUSAPL1 | 8-[Fenylmočovina]-didemnin A | 1062 | 9,42E-11 | |
| 8BUSAPL1 | 8-[Butylmočovina]-didemnin A | 1042 | 9,59E-11 | |
| 8ISVPL1 | 3-[val]-8-[isobutyryl]- aplidin | 956 | l,05E-10 | |
| 9NVSAPLI | 9-[norvalin]-aplidin | 1139 | 4,39E-10 | |
| 9ISHPL1 | 3-[Hiv]-9-[Isobutyryl]- aplidin | 1054 | 4,74E-10 | |
| 91SVPL1 | 3-[Val]-9-[Isobutyryl]- aplidin | 1053 | 4,75E-10 | |
| 8ISHPL1 | 3-[hiv]-8-[isobutyryl]- didemnin A | 957 | 5,22E-10 | |
| 9ASHPL1 | 3-[Hiv]-9-[Ala]- aplidin | 1091 | 9,16E-10 | |
| 8PSHPL2 | 3-[Hiv]-8-[Boc-Pro]- didemnin A | 1084 | 9,22E-10 | |
| 9NVSHPL1 | 3-[Hiv]-9-[Nva]- aplidin | 1083 | 9,23E-10 | |
| 8PTSAPL1 | 8-[Fenylthiomočovina]-didemnin A | 1078 | 9,27E-10 | |
| 8CSAPL1 | 8-[Kumarin]-didemnin A | 1062 | 9,41E-10 | |
| 8BTSAPL1 | 8-[Butylthiomočovina]-didemnin A 3-[Hiv]-9-[L-Lac]- aplidin (Tamandarine | 1058 | 9,45E-10 | |
| 9LSHPL1(L) A) 10 | 1056 | 9,47E- | ||
| 9LSHPL1(D) 3-[Hiv]-9-[D-Lac]- aplidin | 1056 | 9,47E-10 | ||
| 9LSVPL1(L) 3-[Val]-9-[Lac]- aplidin | 1055 | 9,48E-10 | ||
| 8MSAPL1 | 8-[Methylsulfonyl]-didemnin A | 1021 | 9,79E-10 | |
| SVPL3 | 3-[val]-Z-didemnin A | 1020 | 9,8E-10 | 9,8E-10 |
| 8PSHPL1 | 3-[Hiv]-8-[Pro]- didemnin A | 984 | E01E-09 | |
| 8VSHPL1 | 3-[Hiv]-8-[Val]- didemnin A | 986 | 1,01 E-09 | |
| 8BSHPL1 | 3-[Hiv]-8-[butyryl]- aplidin | 957 | 1.04E-09 | |
| SVPL2 | 3-[val]-didemnin A | 886 | 1,1E-O9 | l,13E-09 |
| SHPL2 | 3-[Hi v]-didemnin A | 886 | 1,1 E-09 | l,13E-09 |
| SAPL3 | Z-Didemnin A | 1077 | 9,3E-09 | 2,32E-09 |
| 9NVSAPL2 | 9-[Z-Nva]-aplidin | 1273 | 7.9E-09 | 3,93E-09 |
| 9ZASHPL2 | 3-[Hiv]-9-[Z-ala]- aplidin | 1189 | 4,21 E-09 | |
| SAPL2 | Didemnin A | 943 | 5,30E-09 | 4,24E-09 |
| 8G9CSAPL1 | 8-[GIy]-9-[Kumarin]- didemnin A | 1172 | 4,26E-09 | |
| 8BISAPL1 | 8-[Biotin]-didemnin A | 1169 | 4,27E-09 |
| 9SBSHPL1 | 3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Boc]- aplidin | 1096 | 4,56E-09 |
| SHPL3 | 3-[Hiv]-Z-didemnin A | 1021 | 4,9E-09 4,9E-09 |
| 9NVSHPL2 | 3-[Hiv]-9-[Z-Nva]- aplidin | 1217 | 8,22E-09 |
| 9SPSAPL1 | 7,8-[Spiro] -9-[pyr]-aplidin | 1122 | 8,55E-09 |
| 9LSHPL2(L) | 3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]- aplidin | 1170 | 8.55E-09 |
| 9BASHPL2 | 3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]- aplidin | 1155 | 8,65E-09 |
| 9SBSAPL1 | 7,8- [Spiro] -9- [Boc] -aplidin | 1152 | 8.68E-09 |
| 8VSHPL2 | 3-[Hiv]-8-[Boc-Val]- aplidin | 1086 | 9,21E-09 |
| 8V91SHPL1 | 8-[Val]-9-[lsobutyryl]- didemnin A | 1056 | 9,46E-09 |
| 8HSHPL1 | 3-[Hiv]-8-[hexanoyl ]- didemnin A | 985 | 1.01E-08 |
| 9LSVPL2(L) | 3-[Val]-9-[Lac(OTBDMS)]- aplidin | 1169 | 1.02E-08 |
| SNPL2 | 3-[Aip]-didemnin A | 942 | l,06E-08 |
| 9LSHPL2(D) 3-[Hiv]-9-[D-Lac(OTBDMS)]- aplidin | 1170 | 8.55E-08 | |
| 9SISAPL1 | 7,8-[Spiro]-9-[Isobutyryl]-aplidin | 1122 | 8,91E-08 |
| 9SPSHPL1 | 3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Pyr]- aplidin | 1066 | 9,38E-08 |
| 9SISHPL1 | 3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Isobutyryl]- aplidin | 1066 | 9.38E-08 |
| 9SASHPL1 | 3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Akriloyl ]- aplidin | 1064 | 9,39E-08 |
| Série | Popis | HT29 |
| DU145 | ||
| SNPL3 | 3-[Aip]-Z-didemnin A | 9,29E-11 |
| 8PUSAPL1 | 8-[Fenylmočovina]-didemnin A | 9,42E-11 |
| 8BUSAPL1 | 8-[Butylmočovina]-didemnin A | 9.59E-11 |
| 8ISVPL1 | 3-[val]-8-[isobutyryl]- aplidin | l,05E-10 |
| 9NVSAPL1 | 9-[norvalin]-aplidin | 4,39E-10 |
| 91SHPL1 | 3-[Hiv]-9-[Isobutyryl]- aplidin | 4,74E-10 |
| 9ISVPL1 | 3-[Val]-9-[Isobutyryl]- aplidin | 4,75E-10 |
| 8ISHPL1 | 3-[hiv]-8-[isobutyryl]- didemnin A | 5.22E-10 |
| 9ASHPL1 | 3-[Hiv]-9-[Ala]- aplidin | 9.16E-10 |
| 8PSHPL2 | 3-[Hiv]-8-[Boc-Pro]- didemnin A 9,22E10 | |
| 9NVSHPL1 | 3-[Hiv]-9-[Nva]- aplidin | 9.23E10 |
| 8PTSAPL1 | 8-[Fenylthiomočovina]-didemnin A 9,27E10 | |
| 8CSAPL1 | 8-[Kumarin]-didemnin A | 9,41E10 |
MEL28
8BTSAPL1 8-[Butylthiomočovina]-didemnin A 9.45E-10
3-[Hiv]-9-[L-Lac]- aplidin
-49CZ 304204 B6
| 9LSHPL1(L) | (Tamandarin A) | 9,47E-10 | |
| 9LSHPL1(D) | 3-[Hiv]-9-[D-Lac]- aplidin | 9,47E-10 | |
| 9LSVPL1(L) | 3-[Val]-9-[Lac]- aplidin | 9,48E-10 | |
| 8MSAPL1 | 8-[Methylsulfonyl]-didemnin A | 9,79E-10 | |
| SVPL3 | 3-[val]-Z-didemnin A | 9,8E-10 | 9.8E-10 |
| 10 | |||
| 8PSHPL1 | 3-[Hiv]-8-[Pro]- didemnin A | 1.01E-09 | |
| 8VSHPL1 | 3-[Hiv]-8-[Val]- didemnin A | 1.01E-09 | |
| 8BSHPL1 | 3-[Hiv]-8-[butyryl]- aplidin | l,04E-09 | |
| SVPL2 | 3-[val]-didemnin A | 1.13E-09 | l,13E-09 |
| 09 | |||
| SHPL2 | 3-[Hiv]-didemnin A | l,13E09 | l,13E-09 |
| SAPL3 | Z-Didemnin A | 4,64E-09 | 4,64E-09 |
| 9NVSAPL2 | 9-[Z-Nva]-aplidin | 3,93E-09 | 3,93E-09 |
| 3,93E-09 | |||
| 9ZASHPL2 | 3-[Hiv]-9-[Z-ala]- aplidin | 4,21E-09 | |
| SAPL2 | Didemnin A | 8,48E-09 | 1.13E-09 |
| 8G9CSAPL1 | 8-[Gly]-9-[Kumarin]- didemnin A | 4,26E-09 | |
| 8BISAPL1 | 8-[Biotin]-didemnin A | 4,27E-09 | |
| 9SBSHPL1 | 3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Boc]- aplidin | i 4,56E-09 | |
| SHPL3 | 3-[Hiv]-Z-didemnin A | 4,9E-09 | 4,9E-09 |
| 09 | |||
| 9NVSHPL2 | 3-[Hiv]-9-[Z-Nva]- aplidin | 8,22E-09 | |
| 9SPSAPL1 | 7,8-[Spiro]-9-[pyr]-aplidin | 8,9E-09 | |
| 9LSHPL2(L) | 3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidin | 8,55E-09 | |
| 9BASHPL2 | 3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]- aplidin | 8.65E-09 | |
| 9SBSAPL1 | 7,8-[Spiro]-9-[Boc]-aplidin | 8,68E-09 | |
| 8VSHPL2 | 3-[Hiv]-8-[Boc-Val]- aplidin | 9,21E09 | |
| 8V9ISHPL1 | 8-[Val]-9-[Isobutyryl]- didemnin A 9,46E-09 | ||
| 8HSHPL1 | 3-[Hiv]-8-[hexanoyl]- didemnin A | l,01E-08 | |
| 9LSVPL2(L) | 3-[Val]-9-[Lac(OTBDMS)]- aplidin | 8.55E09 | |
| SNPL2 | 3-[Aip]-didemnin A | 1.06E08 | |
| 9LSHPL2(D) | 3-[Hiv]-9-[D-Lac(OTBDMS)]- aplidin | 8,55E08 | |
| 9SISAPL1 | 7,8-[Spiro]-9-[Isobutyryl]-aplidin | 8,91E08 | |
| 9SPSHPL1 | 3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Pyr]- aplidin | 9, 38E08 |
9,8E1,13E
4,9E-50CZ 304204 B6
9SISHPL1 3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Isobutyryl]-aplidin 9,38E08
9SASHPL1 3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Akriloyl]- aplidin 9,39EO8
Spiro = [(5R)-l-(subtituent na 9)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo 7 9 l,7-diazaspiro[4,4]nonan] ' (1) tato látka byla popsána v literatuře: Joc Org. Chem. 2000, 65, 782-792, Její syntéza byla publikována před jejím objevením (1): Org. Lett., 2000, vol 0, No. 0, A-D Technika: Berjeron et al., Biochem a Biof Res. Comm., 1984, 121,3, 848-854
388 = myší lymfom.
A549 = lidský karcinom plic.
HT-29 = lidský karcinom tlustého střeva.
MEL-28 = lidský melanom.
DUI45 = lidský karcinom prostaty
Seznam zkratek
| Obecné: | |
| AA | aminokyselina |
| Ist | isostatin |
| Hip | hydroxyisovalerylpropionová kyselina |
| Hiv | hydroxyisovalerová kyselina |
| Aip | aminoisovalerylpropionová kyselina |
| Lac | kyselina mléčná |
| LC | kapalinová chromatografie |
| HPLC | vysokotlaká kapalinová chromatografie |
| TLC | chromatografie v tenké vrstvě |
| M.P. | teplota tání |
| Rt | retenční čas |
| Kvant. | kvantitativní výnos |
| ES1-MS | hmotnostní spektrometrie |
| Chránící skupiny: | |
| Bn | benzyl |
| Boc | tert-butyloxykarbonyl |
| TBDMS tert-butyldimethylsilyl | |
| Z | benzyloxykarbonyl |
| Pac | kyselina fenolová |
| Rozpouštědla: | |
| THF | tetrahydrofuran |
| Hex | hexan |
| ACN | acetonitril |
| DCM | dichlormethan |
-51 CZ 304204 B6
EtOAc kyselina octová DMF dimethylformamid MTBE methyl-tertbutyl-ether Et2O diethylether t-BuOH tert-butanol TFA kyselina trifluoroctová
MeOH methanol EtOH ethanol IPA isopropanol
Reagens:
CDI
HOBt
1,1 '-karbonyldiimidazol 1 -hydroxybenzotriazol
HBTU N—[(1 H-benzotriazoI-l-yl)(dimethylamino)methylene]-Nmethanaminiumhexafluorfosfát N-oxid
BOPU-C1 bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)fosfochlorid
HATU N-[(dimethylamino)-lH-l,2,3-triazolo[4,5]pyridin-l-ylmethylen]-N-methylmethanarniniumhexafluorfosfát N-oxid
HOAt l-hydroxy-7-aza-benzotriazol
DCC dicyclohexylcarbodiimid
D1PCDI N,N'-diisopropylkarbodiimid
TBAF tetrabutylammonium fluorid
AcOH kyselina octová p-TsOH p-toluensulfonová kyselina
DMAP 4-dimethylaminopyridin
NMM N-methylmorfolin
DIPEA diisopropylethylamin
TEA triethylamin
TFA kyselina trifluoroctová
Příklady provedení vynálezu
Všechny následující postupy byly prováděny v inertní argonové atmosféře. Všechna rozpouštědla měla laboratorní čistotu (pro reakce) nebo HPLC čistotu (pro reakční směs nebo jako přečišťovací rozpouštědlo). Bezvodá rozpouštědla byla použita přímo od výrobce. Tetrahydrofuran byl těsně před použitím předestilován aby byl odstraněn stabilizátor. Všechny ostatní látky byly komerčně dostupné chemikálie s maximální možnou čistotou. Analytická chromatografie v tenké vrstvě (TLC) byla prováděna na hliníkových deskách potažených silikagelem Merck (60, F254) předem potažených fluorescenčním indikátorem. Vizualizace byla provedena pomocí ultrafialového světla (254 nm), fosfomolybdenové kyseliny (5% w/v) v 95% ethanolu, nebo vanilinu. Vodíková a uhlíková magnetická rezonanční spektra ('H, l3C-NMR) byla naměřena pomocí Varian-300 (300 MHz) spektrometru s Fourierovou transformací a chemické posuny byly vyjádřeny jako díly milionu („parts per million“ = ppm) vzhledem k CHC13 jako vnitřnímu standardu (7,26 ppm pro 'H a 77,0 pro l3C). Násobky jsou označeny jako singlet (s), dvojice (d), dvojice dvojic (dd), dvojice trojic (dt), trojice (t), čtveřice (q) mnohonásobek (m), a broad singlet (bs), a vazebné konstanty (J) jsou vyjádřeny v Hz. Optická rotace (ve stupních) byla měřena pomocí polarimetru Jasco P1020. Hmotnostní spektra po ionizaci elektrosprejem byla stanovena na
-52CZ 304204 B6 přístroji Hewlett Packard série 1100 MSD. Základní chromatografie na koloně byla prováděna pomocí silikagelu firmy Merck 60 (240 až 400 mesh) nebo RP Cl8 (40-63 Dm) pomocí systému rozpouštědel uvedených individuálně pro každý jednotlivý experiment. Následující postupy popisují syntézu meziproduktů vedoucích k přípravě aplidinu (SAPL), [Aiv]3-aplidin (SNPL), [Hiv]3—aplidin (SHPL), [Val]3-aplidin (SVPL), a [MeValf-aplidin (SMPL).
Příklad 1: Syntéza benzyl (4R, 5S)-4-(tert-butoxykarbon_\lamino)-5-meth\l-3-oxoheptanoátu (C4)
1) CDl/THF
ΌΗ
NHBoc
OBn
ŇHBoc
OLi
Boc-D-allo-ileu-OH
C4
K roztoku Boc-D-allole-OH (15,26 g, 65,9 mmol) v suchém THF (200 ml) při 0 °C v atmosféře argonu, bylo přidáno CD1 (16,04 g, 98,96 mmol). Po 15 min, byla směs zahřáta na pokojovou teplotu, a míchána 16 hodin. Vzniklý roztok byl ochlazen na -78 °C a pomocí kanyly přidán do míchaného lithium enolátu 3-fenylpropionové kyseliny ochlazené na -78 °C (625 ml, 0,37 M), (připravena přikapáváním roztoku kyseliny benzoové (33,34 ml), v THF (165 ml) k roztoku diisopropylamidu lithného (0,36M) v THF/hex 3:1 (642 ml) při -78 °C], Teplota by měla být udržována pod -75 °C. Reakční směs byla míchána při -78 °C po dobu 60 min. Poté byla ohřátá na -10 °C (30 min), znovu ochlazena na -78 °C a uhašena nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (200 ml), a poté extrahována pomocí DCM (3x500 ml) při pokojové teplotě. Smíchané extrakty byly promyty postupně nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (500 ml) a roztokem soli (200 ml). Vysušení (Na2SO4) následované odstraněním rozpouštědla dalo vzniknout olejovité kapalině, která byla převedena na Cl8 silikagel a nanesena na vrchol kolony LCPRC 18 [Lichroprep RPC-18 (40 až 60 mikronů)]. Vymývání probíhalo pomocí gradientu ACNH2O (60 až 100% ACN)] a dalo vzniknout produktu C4 ve formě bezbarvé olejovité látky (16,7 g, 70%). [a]20D-2O,O (c 1, CHC13), TLC: Rf= 0,32 (Merck, RP-C18, ACN-H2O 7:3).
'HNMR (300 MHz, CDC13) 8 0,77 (d, 3H), 0,94 (t, 3H), 1,25 (s, 9H), 1,60 (m, 1H), 1,90 (m, 2H), 3,58 (s, 2H), 4,47 (dd, 1H), 5,00 (d, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,35 (bs, 5H).
Příklad 2: Syntéza (3S, 4R, 5S)-N-(tert-butoxykarbonyl)izostatinylbenzyl esteru (C3)
NHBoc
OBn
NHBoc
OBn
C4
C3
C4 (16,7 g, 45,9 mmol) byl rozpuštěn v methanolu (690 ml) při 0 °C. Borohydrid draselný (7,43 g, 137,8 mmol) byl přidáván k míchanému roztoku a po 30 min byla reakce zastavena vodným roztokem HCI (0,1 N) na f 4, a extrahován pomocí DCM (300 ml). Extrakt byl promyt postupně vodným roztokem NaHCO3 (100 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (100 ml). Po vysušení (Na2SO4) a odstranění použitého rozpouštědla byl získán požadovaný alkohol C3 (15,7 g, 93%) jako bezbarvý olejovitý roztok. Rf = 0,45 (hex-EtOAc 2:1); [a]D = -9,5 (c 0,76, CHC13); Rf= 0,45 (EtOAc-Hex 1:2).
-53 CZ 304204 B6 'HNMR (300 MHz, CDC13) 8 0,81 (d, 3H), 0,90 (t. 3H), 1,20 (m, 1H), 1,36 (m, 1H), 1,40 (s, 9H), 1,90 (m, 1H), 2,55 (dd, 1H), 2,70 (dd, 1H), 3,20 (d, 1 H), 3,61 (m, 1 H), 3,90 (m, 1 H), 4,40 (d, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,40 (bs, 5H).
Příklad 3: Syntéza Boc-(3S. 4R, SS)-Ist(TBDMS)-OBn (C2)
K roztoku C3 (15,7 g, 42,9 mmol) v suchém DMF (65 ml) při 0 °C, byl postupně přidán imidazol (8,77 g, 128,8 mmol), DMAP (1,57 g, 12,81 mmol), a TBDMSC1 (19,42 g, 128,8 mmol). Reakční směs byla vytemperována na pokojovou teplotu přes noc, poté byla rozdělena mezi Et2O (200 ml) a postupně promyta vodným roztokem HCl (100 ml, 0,1 N), vodným roztokem NaHCCft (100 ml) a roztokem soli (50 ml). Po vysušení (Na2SO4) a odstranění rozpouštědla, byl zbytek přečištěn bleskovou LC (silikagel, hex) tak, aby vznikl C2 (19,96 g, 97%).
[a]D = 10,6 (c 1,01, CHC13); Rf = 0,73 (EtOAc-Hex 1:2).
‘HNMR (300 MHz, CDC13) δ 0,15 (s, 6H), 0,82 (s, 9H), 0,85 (d, 3H), 0,89 (t, 3H), 1,18 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,41 (s, 9H), 1,77 (m, 1H), 2,45 (dd, 1H), 2,60 (dd, 1H), 3,62 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,40 (d, 1H), 5,05 (d, 1H), 5,15 (d, 1H), 7,40 (bs, 5H).
Příklad 4: Syntéza Boc-(3S, 4R, SS)-Ist(TBDMS)-OH (Cl)
K. roztoku C2 (10,48 g, 21,8 mmol) v THF (110 ml), po odstranění plynu a převrstvení argonem, bylo přidáno Pd/C 10% (2,096 g, 20 % hmotnosti). Směs byla míchána pod H2 (1 atm) po dobu 16 h, a poté přefdtrována přes 0,45mm teflonový filtr a zakoncertována snížením tlaku tak, aby vzniklo 7,8 g bezbarvé olejovité látky. Bezbarvé krystaly (6 g, 70 %) byly získány po krystalizaci v ACN při -20 °C. [α]2θο 1,8 (c 0,594, DCM) [Lit. [ct |D = 1,74° (c 2,64, CHC13) Synthesis, 1991, 294]; Rf= 0,45 (Merck HPTLC, RP-C18, ACN-H2O 8:2) 'HNMR (300 MHz, CDCl·,) δ 0,18 (s, 6H), 0,82 (s, 9H), 0,85 (d, 3H), 0,89 (t, 3H), 1,10- 1,20 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,80 (m, 1H), 2,50 (m, 2H), 3,58 (m, 1H), 4,11 (m, 1H).
-54CZ 304204 B6
Příklad 5: Syntéza (2S)-2-tert-Butyl(dimethyl)silyloxy-3-methylbutyrové kyseliny (SAPLB4)
ΌΗ
OH
γ OH OTBDMS (S)-2-hydroxy-3 methylbutyrová kyselina
SAPI-B4
K míchanému roztoku (S)-2-hydroxy-3-methylbutyrové kyseliny (22,12 g, 181,9 mmol) v DMF (91 ml) při 0 °C v atmosféře argonu byl přidán imidazol (27,24 g, 400,11 mmol) a DMAP (6,94 g, 54,56 mmol). Po 5 min byl přidán, tert-butyldimethylchlorosilan (60,31 g,
400,11 mmol). Reakční směs byla ohřátá na 23 °C a míchána přes noc. Surová reakční směs byla rozdělena mezi Et2O (250 ml) a vodný roztok HC1 (250 ml, 0.1 N). Organická fáze byla promyta postupně vodným roztokem NaHCO3 (250 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (250 ml), vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak aby vznikl bis-silylovaný produkt jako nažloutlá olejovitá kapalina. Roztok tohoto produktu tak, aby byl v THF (100 ml) byl přidán po kapkách (10 min) k vychlazenému (0 °C) roztoku KOH (30,478, 543 mmol) v THF/H2O (543 ml: 181 ml). Po 40 min byla reakční směs rozdělena mezi H2O (300 ml) a Et2O (500 ml). Vodná fáze byla rozdělena mezi ledový (0 °C) vodný roztok HC1 (200 ml, 3N) a EtOAc (5 x 250 ml). Kombinované organické extrakty byly vysušeny (Na2SO4) filtrovány a zakoncentrovány za sníženého tlaku, aby vznikl požadovaný SAPLB4 jako nažloutlá olejovitá kapalina (38,38 g, 91%).
'HNMR (300 MHz, CDC13)δ 0,02 (m, 6H), 0,90 (m, 15H), 2,08 (m, IH), 4,06 (d, IH).
Příklad 6: Syntéza benzyl (4S)-4-tert-butyl(dimethyl)silyloxy-S-methyl-3-oxohexanoátu (SAPLB3)
1) CDI/THF y oh
OTBDMS
OBn
OTBDMS
SAPLB4
OLi
SAPLB3
K roztoku (S)-2-(tert-butyldimethylsilyloxy)-3-methylbutyrová kyselina (15,31 g, 65,9 mmol) v suchém THF (200 ml) při 0 °C v atmosféře argonu, byl přidán CDI (16,04 g, 98,96 mmol). Po 15 min, byla reakční směs temperována na pokojovou teplotu, a míchána po 16 h. Vzniklý roztok byl ochlazen na -78 °C, a přidán pomocí kanyly k dobře míchanému roztoku lithium enolátu kyseliny 3-fenylpropionové (625 ml, 0,37 M) ochlazenému na-78 °C, [připraven přikapáváním roztoku kyseliny 3-fenylpropionové (33,34 ml), v THF (165 ml) k roztoku diisopropylamidu lithného (0,36M) v THF/hex 3:1 (642 ml) při -78 °C]. Teplota by měla být udržována pod < -75 °C. Reakční směs byla míchána při -78 °C po dobu 60 min. Poté byla ponechána ohřát na -10 °C (30 min), znovu ochlazena na -78 °C a reakce byla zastavena vodným roztokem chloridu amonného (200 ml, nasycený roztok), poté extrahována pomocí DCM (3x500 ml) při pokojové teplotě. Smíchané extrakty byly promyty postupně vodným roztokem NaHCO3 (500 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (200 ml). Vysušení (Na2SO4) následované odstraněním rozpouštědla dalo vzniknout olejovité látce, která byla převedena na Cl 8 silikagel a nanesena na vrchol kolony FC-RPC 18 [Lichroprep RPC-18 (40 až 60 mikronů)]. Vymývání probíhalo pomocí gradientu ACN—H2O (60 až 100% ACN)] a dalo vzniknout produktu SAPLB3 ve formě bezbarvé olejovité látky (16,1 g, 70%).
-55 CZ 304204 B6 [a]D = -25 (c 0,5, MeOH); Rf = 0,32 (Merck, RP-C18, ACN-H2O 7:3).
'HNMR (300 MHz, CDC13) δ 0,02 (m, 6H), 0,92 (m, 15H), 1,92 (m, 1H), 3,63 (s, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,38 (d, 1H), 5,17 (d, 1H), 5,20 (d, 1H), 7,35 (bs, 5H).
Příklad 7: Syntéza benzyl(4S)-4-tert-butoxykarbonyIamino-S-methyI-3-oxohexanoátu (SNPLB3)
ΌΗ
NHBoc
OBn
Boc-Val-OH
OLi
NHBoc
SNPLB3
Postup je stejný jako v případě syntézy SAPLB3 z Boc-Val-OH (10 g, 46,0 mmol), popsaná látkaje získána po přečištění pomocí bleskové LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 10:1 až 5:1) ve formě olejovité kapaliny (6,9 g, 43%).
Ή NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,77 (d, J = 7 3H), 0,98 (d, J = 7, 3H), 1,44 (s, 9H), 2,22 (m, 1H). 3,58 (s, 2H), 4,31 (m, 1H), 5,03 (m, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,34 (bs, 5H).
ESI-MS vypočteno pro Ci9H27NO3: 349,19, stanoveno (m/z): 372,1 (M+Na)‘ .
Příklad 8: Syntéza benzyl(2RS,4S)-4-tent-butyl(dimethyl)silyloxy-2,5dimethyl-3-oxohexanoátu (SAPLB2) θ θ 1) LDA/THF,-78’C
OTBDMS
TBDMSO
OBn
SAPLB3
SAPLB2
Ester SAPLB3 (15,12 g, 41,49 mmol) v suchém THF (43 ml) byl přidán po kapkách k roztoku diisopropylaminu lithného při —78 °C [připraven přidáním butyllithia (1,6M roztok v hex;
31,12 ml, 49,79 mmol) po kapkách k diisopropylaminu (7,26 ml, 51,86 mmol) v suchém THF (83 ml) v atmosféře Ar při -78 °C po dobu 30 min], Reakční směs byla míchána 0,5 h, poté byl přidán jodomethan (52,11 ml, 829,8 mmol). Reakční směs byla temperována na 23 °C a poté, míchání pokračovalo 24 h. Byl přidán další jodomethan (2,67 ml, 42 mmol) a reakční směs byla míchána dalších 24 h nebo dokud nezmizel výchozí materiál. Reakční směs byla poté rozdělena mezi vodný roztok NH4C1 (50 ml, nasycený roztok) a EtOAc (2x 200 ml). Organická fáze byla promyta postupně vodným roztokem NaHCO3 (100 ml, nasycený roztok), a roztokem soli (100 ml), vysušena (Na2SO4), fdtrována a zakoncentrována tak, aby vznikla žlutá olejovitá kapalina (12 g). Čistý produkt (SAPLB2) byl získán po přečištění na LC-silikagelovém gradientu hex-Et2O 100:0 až 100:2 jako diastereomerická směs epimerů C2 (10 g, 63%).
'HNMR (300 MHz, CDC13) δ 0,01 (s, 3H), 0,02 (s, 3H), 0,91 (m, 15H), 1,30 (d, 3H), 2,01 (m, H), 4,01 (m, 1 H), 5,10 (d, 1H), 5,15 (d, 1 H), 7,34 (bs, 5H).
-56CZ 304204 B6
Příklad 9: Syntéza benzyl (2RS,4S)=4-tert-butoxykarbonylamino-2,5-dimethyI-3-oxohexanoátu (SNPLB2)
Postup je stejný jako v případě syntézy SAPLB2, výchozí látkou je SNPLB3 (10 g, 46,0 mmol), požadovaná látka je získána po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 10:1 až 5:1) jako diastereomerická směs (1:1) epimerů C2 (4,4 g, 62%). Rf = 0,4 a 0,37 (silikagel, Hex/EtOAc 3:1).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,72 (m, 3H), 0,86 (m, 3H), 1,37 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 2,22 (m, 1H), 3,79 (m, 1H), 4,43 (m, 1H), 5,02 (m, 1H), 5,16 (m, 2H), 7,34 (m, 5H).
ESI-MS vypočteno pro C20H29NO5: 363,20, stanoveno (m/z): 364,1 (M+H)+.
Příklad 10: Syntéza Leu-Pro-OBn ve formě hydrochloridu (A5)
A5
Do nádoby obsahující Boc-Leu-Pro-OBn (113,8 g, 272 miriol) byl přidán za stálého míchání roztok chlorovodíku v dioxanu (209 ml, 5,3 N) a míchání pokračovalo po následujících 5 h nebo do dokončení reakce TLC (vymizení výchozího materiálu. Rf = 0,47 (hex—EtOAc 2:1, silikagel. Roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku a vzniklá olejovitá kapalina byla promyta CHCI3 (3x50 ml), CHC13-MTBE (30 až 50 ml), MTBE (50 ml) a hex (50 ml). Vzniklý roztok byl vysušen ve vakuu (16 h) tak aby byly odstraněny zbytky HC1, tak aby vznikla požadovaná látka jako bílý prášek. A5 (96,4 g, 100%) byla použita přímo, bez dalšího přečišťování v následujících krocích. [ot]D 22 -85,210 (c = 1, CHC13).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 5 0,92 (d, J = 7,1, 3H), 0,96 (d, J = 7,1, 3H), 1,55 (m, 1H), 1,82 2,14 (m, 5H), 2,26 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 4,32 (bs, 1H), 4,64 (m, 1H), 5,01 (d, J = 11,5, 1H), 5,16 (d, J= 11,5, 1H), 7,34 (m, 5H), 8,40 (bs,3H).
ESI-MS vypočteno pro Ci8H26N2O3: 318,19, stanoveno (m/z): 319,2 (M+H)+. 35
-57CZ 304204 B6
Příklad 11: Syntéza TBDMS-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA4)
H2/Pó-C(10%)
THF/rt
SAPLB2
Do nádoby obsahující odplyněný roztok SAPLB2 (20g, 52,88 mmol) v THF anh. (158 ml), vybavené přívodními a odvodními trubicemi pro plyn, byl přidán 10% Pd/c (6,0 g, 30 % hmotnosti) v atmosféře Ar. Poté, je systémem proháněn proud vodíku po dobu 8 h, nebo dokud konverze TLC není kompletní (vymizení výchozího materiálu). Vzniklá směs je probublána Ar, aby byl odstraněn vodík, a filtrována v atmosféře Ar v trychtýři ze šinutého skla skrz sítko z celitu, do vychlazené nádoby (-5 °C) obsahující HOBt (7,17 g, 52,88 mmol) a HBTU (21,0 g, 55,53 mmol). Poté byl přidán další THF (158 ml) aby byl promyt celit. K reakční směsi (-5 °C) byl přidán NMM (5,8 ml, 52,88 mmol) a po 5 min vychlazená (-5 °C) směs obsahující: A5 (31,96 g, 89,81 mmol), NMM (16 ml, 145 mmol) a DMF (120 ml), který byl čerstvě připraven. Reakční směs byla temperována pokojovou teplotu a míchána po dobu 14 h. Surová reakční směs byla filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. K reziduálnímu roztoku DMF, byl přidán EtOAc (300 m) a byl postupně promyt vodným roztokem HC1 (200 ml, 0,1 N), vodným roztokem NaHCO3 (200 ml, nasycený roztok) a promyt roztokem soli (300 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4) filtrována a zakoncentrována. Vzniklý produkt byl nanesen na silikagel (EtOAc byl rozpouštědlem), a chromatograficky rozdělen promýváním gradientem EtOAc:hex 1:5 až 1:1 tak, aby vznikl SAPLA4 (26,8 g, 78%) jako hustá bezbarvá olejovitá kapalina. Tento produkt je 1:1 směs diastereomerů. Rf = 0,5 (silikagel, Hex/EtOAc 1:1, tmavě modrá/vanilin).
IR (film, DCM) 3295, 3060 a 3040, 2957, 2934, 2880, 2858, 1736, 1634, 1528, 1454, 1387, 1252, 1171, 1070 cm1.
Ή NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,01 (s, 3H), 0,03 (s, 3H), 0,85 - 0,97 (m, 12H), 0,92 (s, 9H), 0,93 (s, 9H), 1,33 (d, J = 7,0, 3H), 1,37 (d, J = 7,0, 3H), 2,40-2,65 (m, 3H), 1,92 - 2,28 (m, 4H), 3,64 - 3,76 m, 1H), 4,69 - 4,82 (m, 1H), 5,05 (d, J = 11,8, 1H), 5,20 (d, J = 11,8, 2H), 6,73 (d, J = 8,9, 1H), 6,98 (d, J = 9,0, 1H), 7,34 (bs, 5H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) δ -5,24, -4,81, 15,70, 17,43, 17,57, 18,84, 21,48, 21,61, 18,05, 23,28, 24,43, 24,55, 24,76, 25,68, 28,87, 31,36, 31,77, 41,27, 41,67, 48,68, 48,55, 48,89, 58,71,
66,84, 83,84, 83,29, 211,62.
128,09, 128,47, 135,40, 169,24, 170,67, 170,89, 171,16, 171,20, 209,11, m/z (FAB) 611,5 [(M + Na)+, 15], 589,5 [(M+H) , 100]; m/z (FABHRMS) 589,369 045, C32H52N2O6Si vyžaduje (M+H)+, 589,367 291
-58CZ 304204 B6
Příklad 12: Syntéza Boc-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA4)
SNPLB2
K odplyněnému roztoku SNPLB2 (2,3 g, 6,32 mmol) v suchém THF (30 ml) byl přidán 10%
Pd/C (0,74 g, 16 hmotn. %) a poté byla směs hydrogenována za atmosférického tlaku po dobu 5 h min nebo dokud konverze TLC není kompletní (vymizení výchozího materiálu). Vzniklá směs byla filtrována skrz celitový filtr a bylo přidáno další THF (20 ml), aby byl celit dobře promyt.K io filtrovanému roztoku (při -5 °C) byl přidán BOP-C1 (1,77 g, 6,96 mmol) a NMM (765 μΐ,
6,91 mmol) a po 30 min ochlazený (-5 °C) roztok obsahující: A5 (3,15 g, 8,85 mmol), NMM (1,88 ml, 8,84 mmol) a DMF (14 ml) připravený před 10 min. Reakční směs byla temperována na pokojovou teplotu a míchána po dobu 17 h. Surová reakční směs byla temperována na pokojovou teplotu a míchána po dobu 17 h. Surová reakční směs byla filtrována a pevná fáze byla promyta pomocí EtOAc (100 ml). Smíchané organické fáze byly postupně promyty vodným roztokem
K.HSO4 (50 ml, 10%), vodným roztokem NaHCO3 (50 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (50 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4) filtrována a zakoncentrována ve vakuu, vzniklý materiál byl poté chromatograficky rozdělen na silikagelu a promýván gradientem EtOAc:hex 1:4 až 1:1 tak, aby byl získán SNPLA4 (750 mg, 20 %) jako bílá pevná látka. Tento produkt je a směs diastereomerů. Rf = 0,26 a 0,17 (silikagel, Hex/EtOAc 1:1).
'HNMR (300 MHz, CDC13) δ 0,74 - 1,04 (m, 12H), 1,31-1,70 (m, 6H), 1,43 (s, 9H), 2,01 (m,
3H), 2,22 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 3,77 (m, 1H), 4,40 (m, 1 H), 4,58 (m, 1 H), 4,69 (m, 1 H), 5,14 (m, 2H), 6,75 (d, J = 8,7, 1H), 7,04 (d, J = 7,8, 1H), 7,34 (bs, 5H).
,3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 16,91, 20,22, 21,94, 23,53, 24,80, 25,06, 28,48, 48,29, 14,41,
41,29, 41,41, 46,98, 49,45, 49,64, 51,26, 59,06, 63,70, 64,27, 67,08, 79,86, 80,10, 128,32,
128,48, 128,74, 135,74, 156,28, 169,15, 169,32, 171,18, 171,91.
ESI-MS vypočteno pro C3iH47N3O7: 573,34, stanoveno (m/z): 574,4 [(M+H)] .
Příklad 13: Syntéza Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPLA4)
A5
DCC/NMM
Hydroxyisovalerová kyselina
-59CZ 304204 B6
Do nádoby obsahující A5 (2,06 g, 4,78 mmol) v DCM (5 ml) při 0 °C, byl přidán za stálého míchání NMM (506 mg, 5,01 mmol). Po 15 min byla přidána po částech(2S)-2-hydroxy-3methylbutanová kyselina (hydroxyisovalerová kyselina) (487 mg, 4,78 mmol) a DCC (986 mg, 4,78 mmol). Reakční směs byla temperována na 23 °C a míchána po dobu 14 h. Suspenze byla naředěna CHC13 (25 ml) a rozdělena mezi vodný roztok HC1 (10 ml, 1 N), vodný roztok NaHCO3 (10 ml, nasycený roztok) a roztok soli (10 ml) vysušena (Na2SO4) a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Získaný roztok byl přečištěn bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 1:1 až 1:3) tak, aby vznikl SHPLA4 (1,13 g, 80%) jako bílá pevná látka. Rf = 0,46 (hex-EtOAc 1:2).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,81 (d, J = 7,0, 3H), 0,92 (m, 6H), 0,97 (d, J = 7,0, 3H), 1,42 (m, 1H), 1,63 (m, 2H), 2,00 (m, 3H), 2,19 (m, 2H), 3,60 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,88 (d, J = 4,8, 1H),
4,46 (m, 1H), 4,80 (m, 1H), 5,06 (d, J = 12,3, 1H), 5,14 (d, J = 12,3, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,41 (d, J = 8,4 Hz, 1H).
Příklad 14: Syntéza Boc-Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA4)
NHBoc
A5
BocHN
OH
OBn
DCC/HOBVNMM
Boc-Val-OH
SVPLA4
Do nádoby obsahující Boe-Valin-OH (652 mg, 3 mmol) v DCM (6 ml) při 0 °C byl přidán NMM (0,35 ml, 3,15 mmol). Směs byla míchána 15 min a postupně byl přidán, A5 (1,065 g, 3 mmol), HOBt (405 mg, 3,0 mmol) a DCC (650 mg, 3,15 mmol). Reakční směs byla temperována na 23 °C a míchána 14 h. Suspenze byla naředěna DCM (25 m) a promyta postupně vodným roztokem KHSO4 (2x10 ml, 10%), vodným roztokem NaHCO3 (2x10 ml, nasycený roztok), a roztokem soli (10 ml), vysušena nad Na2SO4 filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku. Získaná směs byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 2:1 až 1:1) tak, aby vznikl SVPLA4 (1,48 g, 93%) jako bílá pevná látka. Rf = 0,57 (hex-EtOAc 1:2).
'HNMR (300 MHz, CDC13) δ 0,83 - 0,95 (m, 12H), 1,2-1,4 (m, 1H), 1,42 (s, 9H), i-40-1,51 (m, 1 Η), 1,60 - 1,75 (m, 1 Η), 1,82 - 2,20 (m, 5H), 3,50 - 3,60 (m, 1H), 3,74 - 3,78 (m, 1 H),
3,91 3,96 (m, 1 H), 4,52 - 4,57 (s, 1 H), 4,75 - 4,77 (m, 1 H), 5,04 (bs, 1 H), 5,05 (d, J = 12,3, 1 H), 5,17 (d,J= 12,3, 1 H), 6,60 (d, J = 8,4, 1 H), 7,26 - 7,35 (m, 5H).
ESI-MS vypočteno pro 028Η43Ν306: 517,32, stanoveno (m/z): 518,2 [(M+H)]+.
-60CZ 304204 B6
Příklad 15: Syntéza Boc-Me-Val-Leu-Pro-OBn (SMPLA4) ^NBoc
Boc-(Me)Val-OH
A5
DCC/HOBt/NMM
DCM
Postup je stejný jako pro syntézu SVPLA4, vychází z A5 (1,07 mg, 3,00 mmol) a Boc(Me)ValOH (694 mg, 3,00 mmol), požadovaná látka je získána jako bílá pevná látka (1,39 g, 87%) po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 2:1 až 1:1), Rf = 0,51 (Hex-EtOAc 1:2).
ίο 'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,83-0,91 (m, 12H), 1,45 (s,9H), 1,932,03 (m, 4H), 2,18 - 2,22 (m, 2H), 2,76 (s, 3H), 3,40 - 3,50 (m, 2H), 3,55 - 3,62 (m, 1H), 3,75 - 3,85 (m, 1 H), 4,00 - 4,10 (m, 1 H), 4,50 - 4,60 (m, 1 H), 4,704,82 (m, 1H), 5,07 (d, J = 11,2, 1H), 5,24 (d, J = 11,2, 1H), 6,20 (m, 0,5H), 6,50 (m, 0,5 H), 7,26 - 7,35 (m, 5H).
,3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 18,43, 19,77, 21,53, 23,23, 24,47, 24,77, 25,89, 25,30, 28,85,
41,25,46,67, 48,51,58,75,64,05,66,79, 128,06, 128,18, 128,44, 135,49, 170,12, 170,80, 171,66
ESI-MS vypočteno pro C29H45N3O6: 531,33, stanoveno (m/z): 532,3 (M+H)+.
Příklad 16: Syntéza Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA3)
Do nádoby obsahující SAPLA4 (15,86 g, 26,97 mmol) byl přidán čirý bezbarvý roztok IM tetrabutylammonium fluoridu v THF (80,9 ml, 80,9 mmol) a reakční směs byla prudce míchána při pokojové teplotě po dobu 15 min (nebo úplné konverze TLC). Reakce byla zastavena přidáním H2O (4 ml) a silikagelu (50 g). Surový materiál byl zakoncentrován a přečištěn bleskovou LC (silikagel, gradient hex:EtOAc 2:1 až 1:1) tak, aby byl získán SAPLA3 (12,2 g, 95%) jako bílá pevná látka (směs diastereomerů). Rf= 0,36 a 0,29 (silikagel, hex:CHCl3:IPA; 1:5:1).
IR (film, DCM) v 3450-3293, 3060 a 3040, 2961, 2946, 2883, 2852, 1746, 1632, 1533, 1454, 1357, 1387, 1265, 1173, 1095, 1045, 1018 cm’1.
Ή NMR (500 MHz, CDC13) δ 0,71 (d, J = 6,8, 3H), 0,81 (d, .1 = 6,6, 3H), 0,88 (d, J = 6,5, 3H), 0,91 (d, J = 6,5, 3H), 0,94 (d, J = 6,5, 3H), 0,99 (d, J= 7,1, 3H), 1,07 (d, J = 6,5, 3H), 1,36 (d, 6,5, 3H), 1,43 - 1,52 (m, 2H), 1,60 - 1,66 (m, IH), 1,93 - 2,10 (m, 3H), 2,12 - 2,23 (m, 2H), 3,53 - 3,58 (m, IH), 3,65 (q, J = 7,1, IH), 3,67 - 3,73 (m, IH), 3,89 (q, J = 7,1, IH), 3,96 (d,
-61 CZ 304204 B6
J = 4,2, 1H), 4,22 (d, J = 4,1, 1H), 4,54 - 4,56 (m, 1H), 4,58 - 4,62 (m, 1H), 4,69 - 4,73 (m, 1H), 5,1 (d, J= 12,1, IH), 5,18 (d, J = 12,1, IH), 6,57 (d, J - 8,5, IH), 6,63 (d, J = 8,5, IH), 7,28-,38 (m, 5H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 14,26, 15,85, 16,48, 20,07, 20,53, 22,02, 22,25, 25,37, 25,46, 29,45? 29,53, 31,59, 32,09, 41,13, 42,29, 49,93, 50,91, 51,02, 59,52, 67,60, 81,02, 128,78, 1,29,2, 169,48, 171,58, 172,17, 209,76.
m/z (FAB) 497,4 [(M + Na), 12], 475,5 [(M+H)*, 100], m/z (FABHRMS) 497,263 162, C26H38N2O6 vyžaduje (M+Na)+ 497,262 757, analýzou vypočteno pro C26H38N2O6: C, 65,82; H, 8,02; N, 5,91, stanoveno: C, 65,97; H, 8,18; N, 5,76.
Příklad 17: Syntéza Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA3)
HCI/dioxan
K roztoku SNPLA4 (750 mg, 1,30 mmol) v dioxanu (15 ml, anhydrid), byl přidán roztok chlorovodíku v dioxanu (39 ml, 5,3 N) a reakční směs byla míchána 5 h nebo dokud nebyla konverze TLC kompletní (vymizení výchozího materiálu). Roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku a vzniklá olejovitá kapalina byla promyta CHC13 (15 ml), MTBE (15 ml) a hex (15 ml). Získaná směs byla vysušena ve vakuu, aby byly odstraněny zbytky HCI, tak aby vznikla požadovaná látka. SNPLA3 (660 mg, quart.) byl použit v dalším kroku bez dalšího přečišťování.
ESI-MS vypočteno pro C26H39N3O5: 473,29, stanoveno 474,2 (M+H)+
Příklad 18: Syntéza Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA3)
HCI/Dioxan
SVPLA3
Do nádoby obsahující SAPLA4 (215 mg, 0,41 mmol) byl přidán roztok chlorovodíku v dioxanu (1,5 ml, 5,3 N) a reakční směs byla míchána po dobu 5 h nebo dokud konverze TLC nebyla kompletní, The roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku a vzniklá olejovitá kapalina byla promyta CHC13 (5 ml), MTBE (5 ml) a hex (15 ml). Získaná směs byla vysušena ve vakuu, aby byl odstraněn zbytek HCI, tak aby vznikla pěnovitá pevná látka SVPLA3 (185 mg, Kvant.), která je použita v následujících krocích bez dalšího přečišťování.
-62 CZ 304204 B6 'HNMR (300 MHz, CDC13) δ 0,86 - 0,90 (m, 6H), 1,04 (d, J = 6,3, 3H), 1,12 (d, J = 6,3, 3H), 1,45 - 1,55 (m, 1H), 1,60- 1,80 (m, 2H), 1,82-2,11 (m, 2H), 2,11 -2,25 (m, 1H), 2,25-2,40 (m, 1H), 3,50 - 3,70 (m, 1H), 3,80 - 3,95 (m, 2H), 4,52 - 4,5 7 (s, 1H), 4,70 - 4,85 (m, 1H), 5,05 (d,J= 12, 1H), 5,20 (d,J= 12,3, 1H), 7,27 - 7,37 (m, 5H), 7,91 (m, 1H), 8,62 (bs, 2H).
13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 18,79, 21,83, 23,11, 2č,50, 24,67, 24,90, 25,34, 28,92, 30,23, 33,25, 40,40, 47,04, 49,46, 49,94, 59,26, 60,02, 66,88, 128,16, 128,27, 128,51, 135,48, 167,54, 170,80, 171,94.
Příklad 19: Syntéza (Me)Val-Leu-Pro-OBn (SMPLA3)
HCI/Dioxan
SMPLA3
Postup je stejný jako pro syntézu SVPLA3, vychází z SMPLA4 (940 mg, 1,94 mmol) požadovaná látka (828 mg, kvant.) byla získána jako bílá pevná látka. Tato látka byla použita v následujících krocích bez dalšího přečišťování.
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,93 (d, J = 6,3, 6H), 1,07 (d, J = 6,3, 3H), 1,21 (d, J = 6,3, 3H), 1,47 (m, 1H), 1,73 (m, 2H), 2,00 (m, 3H), 2,23 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 2,83 (bs, 3H), 3,56-3,65 (m, 2H), 3,77 (m, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,66 (m, 1H), 5,07 (d, J = 12,3, 1H), 5,19 (d, J = 12,3, 1H), 7,27 - 7,38 (m,5H), 7,90 (m, 1H), 9,11 (m, 0,5H), 9,61 (m, 0,5H).
l3C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 13,98, 18,37, 19,57, 21,33, 22,52, 23,163, 24,74, 28,77, 29,78, 31,54, 32,54, 39,87, 46,75, 50,09, 58,91, 66,85, 122,12, 128,06, 128,24, 128,47, 135,43, 166,22, 170,73, 171,54.
ESI-MS vypočteno pro C24H38CIN3O4: 431,2, stanoveno (m/z): 432,2 (M+H)f.
Příklad 20: Syntéza Boc-Ist(TBDMS)-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA2)
DCC/DMAP/DCM
-63 CZ 304204 B6
K roztoku SAPLA3 (12,2 g, 25,44 mmol) v anhydridu DCM (75 ml) při -5 °C v atmosféře Ar, byl přidán postupně DMAP (0,932 g, 7,6 mmol), Cl (11,89 g, 30,53 mmol) a DCC (6,613 g, 32,05 mmol), a teplota byla udržována na < -5 °C (lázeň sůl-led). Reakční směs byla míchána po dobu 14 h při -5 °C a poté, filtrována a zakoncentrována. Surový materiál byl naředěn ACN, ochlazen (-10 °C), opět filtrován a zakoncentrován. Vzniklý materiál byl rozpuštěn v EtOAc (400 m) a postupně promyt vodným roztokem KHSO4 (2x200 ml, 10%), roztokem soli (200 ml), vodným roztokem. NallCXY (200 ml, nasycený roztok) a propláchnut roztokem soli (200 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak aby vznikl požadovaný produkt, jako bezbarvá olejovitá kapalina která byla chromatograficky rozdělena na silikagelu promyta gradientem Elex-EtOAc 3:1 až 2:1, tak aby byl získán SAPLA2 (19,35 g, 90%) jako bílá pěnovitá látka (směs diastereomerů).
IR (film, DCM) v 3365-3200, 3069, 3038, 2959, 2930, 2882, 2857, 1746, 1688, 1640, 1533, 1456, 1389, 1258, 1171, 1086 cm '.
'HNMR (500 MHz, CDClj) δ 0,01 (s, 3H), 0,03 (s, 3H), 0,05 (s, 3H), 0,07 (s, 3H), 0,77 - 1,03 (m, 18H), 0,84 (s, 9H), 0,85 (s, 9H), 1,33 (d, J = 7,4, 3H), 1,32 - 1,36 (m, 2H), 1,49 (d, J = 7,5, 3), 1,38- 1,62 (m, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,44 (s, 9H), 1,51-1,77 (m, 1H), 1,88 - 2,37 (m, 3H), 2,17 - 2,33 (m, 2H), 2,47 - 2,74 (m, 2H), 3,34 - 3,72 (m, 1H), 3,72 - 3,82 (m, 1H), 3,99 - 4,40 (m, 1H), 4,03, 4,16 (m, 1H), 4,49 (d, J = 10,3, 1H), 4,54 - 4,59 (m, 1H), 4,63 - 4,70 (m, 2H), 4,75 (d, J = 4,5, 1H), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,95 - 5,19 (m, 2H), 5,22 (d, J = 5,2, 1H), 5,32 (d, J = 10,5, 1H), 6,38 (d, J = 10,9, 1H), 6,71 (d, J = 7,4, 1 H), 6,76 (d, J = 8,4, 1H), 8,60 (d, J = 9,5, 1H).
nCNMR (75 MHz, CDCb) δ -5,05, -4,49, 11,83, 12,03, 13,01, 13,51, 13,83, 14,08,
17,10, 17,85, 19,14, 19,65, 21,57, 22,09, 22,96, 23,28, 24,36, 24,60, 24,85, 25,73, 26,97,
28,35, 28,46, 28,93, 29,09, 29,65, 34,12, 34,16, 40,45, 40,85, 41,18, 42,20, 46,74, 46,16,
48,34, 48,90, 49,42, 57,62, 58,81, 58,96, 60,46, 66,62, 66,88, 68,18, 69,69, 78,98, 79,24,
82,95, 128,08-128,49, 135,48, 135,61, 155,85, 158,27, 157,44, 168,40, 169,07, 170,65, 171,42, 171,79, 203,09, 205,97.
16,92,
27,33,
47,99,
79,84,
70,86, m/z (FAB) 846,6 [(M+H)+, 15], 746,6 (100); m/z (FABHRMS) 868,516 630, C45H25N3O10Si vyžaduje (M+Na)+ 868,511 930.
Příklad 21: Syntéza Boc-Ist(TBDMS)-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA2)
DCC/HOBt/NMM
Do nádoby obsahující SNPLA3 (chlorhydrát) (660 mg, 1,12 mmol) v DCM (15 ml, anh) při 0 °C, byl přidán NMM (0,19 ml). Po 15 min byl přidán postupně, Cl (632 mg, 1,62 mmol), HOBt (266 mg, 1,73 mmol), a DCC (331 mg, 1,60 mmol). Nádoba byla temperována na pokojovou teplotu a míchání probíhalo přes noc. Syrová reakční směs byla rozdělena mezi DCM (50 ml)
-64CZ 304204 B6 a vodným roztokem K.HSO4 (2x20 ml, 10%). Organická fáze byla promyta postupně vodným roztokem NaHCO3 (2x20 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (20 ml), vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Vzniklá bílá pevná látka byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 4:1 až 1:1) aby vznikla požadovaná látka jako bílá pevná látka (700 mg, 73%, směs diastereomerů).
'H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,05 (s, 3H), 0,08 (s, 3H), 0,09 (s, 3H), 0,68 - 1,05 (18H, m), 0,87 (9H, s), 1,05 - 1,85 (12H, m), 1,42 (9H, s), 1,852,10 (3H, m), 2,11 - 2,31 (2H, m), 2,32 - 2,46 (2H, m), 2,47 - 2,60 (m, 2H), 3,34 - 3,90 (2H, m), 3,93 - 4,30 (2H, m), 4,50 - 4,89 (6H, m), 4,90 - 5,12 (2H, m), 5,07 (d, J = 12,2, 2H), 5,18 (d, J = 12,2, 2H), 5,60 (1H, d, J = 9,7), 5,67 (1H, d, J = 10,2), 5,89 (1H, d, J = 11,2), 6,56 (1H, d, J = 7,3), 6,70 (1H, d, J = S. 3), 6,76 (1 H, d, J = 6,8), 6,94 (d, J = 6,8, 1 H), 7,01-7,19 (m, 1 H), 7,32 (bs, 5H), 8,17 (1H, d, J = 7,8), 8,28 (d, J = 7,8, 1H).
ESI-MS vypočteno pro C^HvgAOgSi: 844,54, stanoveno (m/z): 845,5 (M+H)+.
Příklad 22: Syntéza Boc-Ist(TBDMS)-Hi-Leu-Pro-OBn (SHPLA2)
SHPLA2
Postup je stejný jako pro syntézu SAPLA2, vychází z SHPLA4 (850 mg, 2,0 mmol) a Cl (935 mg, 2,4 mmol) požadovaná látka byla získána (1,53 g, 97%) po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 3:1 až 2:1). Rf= 0,63 (hex-EtOAc 2:1).
'HNMR (300 MHz, CDC13) směs BocNH rotamerů: δ 0,04 (s, 3H), 0,06 (s, 3H), 0,88 (s, 9H), 0,78 - 1,04 (m, 18H), 1,10 - 2,80 (m, 11H), 1,44 (s, 9H), 1,46 (s, 9H), 3,57 (m, 2H), 3,74 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,23 (d, J = 4,8, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,90 (d, J = 10, 1H), 5,05 (m, 1H), 5,20 (d, J = 10, 1H), 5,23 (d, J = 10. 1H), 6,64 (d, J = 6,4, 1H), 6,88 (d,
J = 8,6, 1H), 7,32 (m, 5H), 8,54 (d, J = 8,3, 1H).
l3C NMR (75 MHz, CDC13) δ -5,14, -4.58, 11,84, 12,97, 17,78, 17,92, 18,98, 21,05, 23,11, 23,49, 25,61, 26,92, 28,36, 28,70, 30,12, 33,68, 38,72, 42,86, 46,51, 48,18, 58,67, 60,24, 66,52, 71,14, 79,40, 82,66, 127,96, 128,01, 128,33, 135,36, 157,30, 169,92, 171,10, 171,69, 171,97. ESI-MS: vypočteno pro C42H71N3O9: 789,50, stanoveno 790,5 (M+H)+.
-65CZ 304204 B6
Příklad 23: Syntéza Boc-lst(TBDMS)-Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA2)
C1
DCC/HOBVNMM
Postup je stejný jako pro syntézu SNPLA2, vychází z SVPLA3 (hydrochlorid) (l,2 g, 2,64 mmol), C l (l ,23 g, 3,17 mmol), DCC (654 mg, 3,17 mmol), HOBt (464 mg, 3,43 mmol), NMM (0,35 ml) a DCM (6 ml). Požadovaná látka byla získána jako bílá pevná látka (1,87 g, 89%) po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 3:1 až 2:1).
'HNMR (500 MHz, C13C13) δ 0,07 (bs, 6 H), 0,81 -0,96 (m, 27H), 1,11 - 1,38 (m,3H), 1,391,47 (bs, 7H), 1,51 (bs, 3H), 1,58-1,70 (m, 3H), 1,7C 1,84 (m, 1H), 1,86-2,60 (m, 4H), 2,282,58 (m, 2H), 3,58 - 3,662 (m, 1H), 3,62 - 3,73 (m, 1H), 3,73 - 3,90 (m, 1H), 4,05 - 4,12 (m, 1H), 4,13-4,19 (m, M), 4,19 - 4,23 (m, 1 H), 4,49 - 4,54 (m, M), 4,77 - 5,06 (m, 2H), 5,18 (d,J= 12,3, 1H), 5,55 (bs, 1H), 6,44-6,61 (m, 2 H), 7,30 - 7,35 (m, 5 H), 7,947,98 (m, 1H).
EST-MS vypočteno pro C42H72N4O8SÍ: 788,51, stanoveno (m/z): 789,5 (M+H)+.
Příklad 24: Syntéza Boc-Ist(TBDMS)-(Me)Val-Leu-Pro-OBn (SMPLA2)
DCC/NMM
DCM
Do nádoby obsahující SMPLA3 (hydrochlorid) (176 mg, 0,38 mmol), v DCM (2 ml, anhydrid) při 0 °C, byl přidán NMM (41 Ol, 0,38 mmol). Po 15 min byl přidán postupně Cl (176 mg, 0,46 mmol) a DCC (93 mg, 0,46 mmol). Nádoba byla temperována na pokojovou teplotu nepřetržitě míchána přes noc. Reakční směs byla rozdělena mezi DCM (10 ml) a vodným roztokem KHSO4 (2x5 ml, 10%). Organická fáze byla promyta postupně vodným roztokem NaHCO3 (2x5 ml, nasycený roztok), roztokem soli (5 ml), vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrová30 ny za sníženého tlaku. Vzniklá bílá pevná látka byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, gradient Hex-EtOAc 3:1 až 2:1) tak, aby vznikl SMPLA2 (127 mg, 42%) jako bílá pevná látka. Rf = 0,51 (Hex-EtOAc 1:1).
-66CZ 304204 B6 'H NMR (300 MHz, CDCl3)5-0,08 (s, 3 H), 0,05 (s, 3H), 0,75-0,86 (m, 27H), 1,00-1,43 (m, 11H), 1,52- 1,65 (m, 1 H), l,68-l,80(m, 1 H), 1,832,01 (m, 3H), 2,08 - 2,24 (m, 2H), 2,40 (m, 2 H), 2,87 (s, 3H), 3,50 - 3,57 (m, 3H), 3,71 - 3,76 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 4,47 - 4,63 (m, 4H), 5,01 (d, J= 12,9, 1H), S.ll (d, J = 12,9, 1H), 6,41 (d, J = 7,8, 0,5 H), 6,62 (d, J = 7,8, 1 H), 7,01 (d, J = 7,8, 0,5 H), 7,23 - 7,28 (m, 5 H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 11,56, 13,57, 13,98, 17,83, 18,87, 19,46, 21,77, 22,94, 23,11, 24,50, 24,71, 24,80, 25,64, 25,76, 25,97, 27,29, 28,18, 28,75, 30,40, 34,18, 39,28, 40,85, 46,58, 48,61, 57,03, 58,65, 62,26, 66,63, 69,21, 78,72, 127,92, 128,05, 128,11, 128,33, 135,42, 155,91, 169,76, 170,48, 171,56, 172,01.
ESI-MS vypočteno pro C43H74N4O8S1: 802,53, stanoveno (m/z): 825,5 (M+Na)+.
Příklad 25: Syntéza Ist-Hip-Leu-OBn (SAPLA1)
HCl/dioxan
K roztoku obsahujícím SAPLA2 (19,32 g, 22,8 mmol) v bezvodém dioxanu (78 ml), byl přidán roztok kyseliny chlorovodíkové v bezvodém dioxanu (4,2 N, 220 ml, 924 mmol). Vzniklý roztok byl míchá při 21 °C po dobu 4,30 h nebo dokud nevymizel zcela výchozí materiál (TLC). Poté byl roztok zakoncentrován za sníženého tlaku. Získaná směs byla rozpuštěna v DCM (25 ml) a zakoncentrována tak, aby byl odstraněn zbytek HCI. Vzniklý produkt byl vysušen ve vakuu, dokud nebylo zcela odstraněno zbývající HCI (3 h) tak, aby vzniklo 17,3 g SAPLAI (15,1 g, kvant.) jako bílá pěnovitá látka (směs diastereomerů).
Příklad 26: Syntéza Ist-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA1)
HCl/dioxan
Postup je stejný jako pro syntézu SAPLAI, vychází z SNPLA2 (700 mg, 0,82 mmol), požadovaná látka byla získána jako bílá pevná látka (545 mg, kvant.) po precipitaci Et2O (směs diastereomerů).
-67 CZ 304204 B6 'H NMR (300 MHz, CDCU) δ 0,86 - 1,04 (m, 18H), 1,02- 1,22 (m,3H), 1,23-1 > (m, 5H), 1,60 - 1,80 (m, 2H), 1,82 - 2,01 (m, 3H), 2,24 (m, 2H), 2,40 -2,5 (m, 2H), 3,24 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,60 (m, 1H), 3,70 - 4,05 (m, 2H), 4,46 (m, 2H), 4,47 - 4,75 (m, 2H), 5,10 (bs, 2H), 7,34 (bs, 5H), 7,98 (bs, 1H), 8,10 (bs, 1H).
ESI-MS vypočteno pro C34H54N4O7: 630,40, stanoveno (m/z): 631,4 (M+H)+.
Příklad 27: Syntéza Ist-Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPLA1)
HCl/Dioxari
SHPLA1
Postup je stejný jako pro syntézu SAPLA1, vychází z SHPLA2 (1,53 g, 1,94 mmol), požadovaná látka (1,12 g, kvant.) byla získána jako bílá pevná látka po precipitací Et2O, 'HNMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,86 - 1,04 (m, 18H), 1,10-1,22 (m, 3H), 1,42 (m, 2H), 1,70 (m, 2H), 1,97 (m, 3H), 2,24 (m, 2H), 2,83 (m, 1H), 2,97 (m, 1 H), 3,34 (m, 1 H), 3,61 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,90 (m, 1 H), 4,56 (m, 2H), 4,75 (m, 1H), 5,04 (d, J = 11, 1H), 5,18 (d, J = 11, 1H), 7,34 (bs, 5H), 8,21 (bs, 3H).
ESI-MS vypočteno pro C31H49N3O7: 575,36, stanoveno (m/z): 576,3 (M+H)+.
Příklad 28: Syntéza Ist-Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA1)
HCI/Dioxan
Postup je stejný jako pro syntézu SAPLAI, vychází z SVPLA2 (1,87 mg, 2,36 mmol), požadovaná látka (1,40 g, kvant.) byla získána jako bílá pevná látka po precipitací Et2O.
'HNMR (300 MHz, CDC13) δ 0,82 - 1,01 (m, 15H), 1,01 - 1,10 (m, 3H), 1,20 - 1,79 (m, 5H), 1,81 - 2,05 (m, 4H), 2,05 - 2,15 (m, 2H), 2,50 - 2,68 (m, 2H), 2,82 - 3,1 (m, 1H), 3,20 - 3,35 (m, 1H), 3,50-3,70 (m, 1H), 3,80 - 3,90 (m, 1H), 4,18-4,30 (m, 1H), 4,35 -4,45 (m, 1H), 4,45 -4,55 (m, 1H), 4,604,70 (m, 1H), 5,02 (d, J = 12,3, 1H), 5,15 (d,J= 12,3, 1H), 7,28 - 7,38 (m, 5H), 7,5 (bs, 1H), 7,9 (bs, 31 -1), 8,15 (bs, 1H).
-68CZ 304204 B6 l3C NMR (75 MHz, CDC1,) δ 14,67, 18,29, 19,32, 21,48, 23,14, 24,48, 24,76, 25,81, 30,29, 33,41, 40,31, 46,96, 49,35, 59,14, 59,94, 60,67, 66,94, 128,11, 128,32, 128,54, 135,32, 171,58, 171,74, 171,80, 172,57.
ESI-MS vypočteno pro C31H50N4O6: 574,35, stanoveno (m/z): 575,3 (M+H)*.
Příklad 29: Syntéza N-tert-butyloxykarbonylthreoninfenacylesteru (D3)
K míchané směsi Boc-Thr-OH (21,91 g, 0,1 mol) v EtOAc (200 ml) při 0 °C, byl přidán TEA (14 ml, 0,1 mol) a bromoacetofenon (19,0 g, 0,1 mol). Reakční směs byla temperována na 20 °C, míchána 2 dny a poté naředěna EtOAc (500 ml). Po postupném promytí vodným roztokem HCl (200 ml, 0,1 N), H2O (100 ml), vodným roztokem NaHCO3 (200 ml, 1 N) a roztokem soli (200 ml), vysušení (Na2SO4), byla reakční směs filtrována a zakoncentrována ve vakuu, získaná směs byla rozetřena na prášek s Et2O a filtrována. Vzniklá pevná látka byla vysušena ve tmě tak, aby byl získán D3 (28,6 g, 85%). Rf = 0,55 (hex-EtOAc 1:1, silikagel); M.p. = 114,2 °C; [ct]D 22 -29,4° (c 2, EtOAc).
'HNMR (300 MHz, CDCI3): δ = 1,31 (d, J = 6,6, 3H), 1,46 (s, 9H), 3,77 (br d, OH), 4,44 (dd, J =9,6, I H), 4,6 (q, 1 H), 5,34 (d, J = 16,5, 1 H), 5,37 (br d, OH), 5,68 (d, J = 16,8, 1H), 7,51 (t, 2H), 7,65 (t, IH), 7,92 (dd, 2H).
Příklad 30: SyntézaN-benzyloxykarbonyl-N,O-dimethyl-L-l.yrozinu (El)
K míchanému roztoku Z-Tyr-OH (63,24 g, 200 mmol) v THF (900 ml) při 0 °C byl postupně přidán jemně rozetřený KOH (112,72 g, 2 mol), a poté tetrabutylhydrogensulfátamonný (6,36 g, 10% hmotnosti). Poté byl přidán dimethylsulfát (127,2 ml, 1,33 mol) po kapkách v intervalu 30 min, zatímco teplota reakční směsi byla udržována pod 4 °C. Reakční směs byla míchána po dobu dalších 30 min a poté byla přidána H2O (950 ml). Po 5 h míchání při 0 °C, byla reakční směs naředěna etherem (1500 ml), vodná fáze byla oddělena a organická fáze byla extrahována vodným roztokem NaHCO3 (2 x 500 ml, nasycený roztok). Smíchané vodné fáze byly okyseleny na f 1 pomocí vodného roztoku 1M KHSO4, a extrahovány pomocí EtOAc (5x500 ml). Organic-69CZ 304204 B6 ké fáze byly smíchány, vysušeny (Na2SO4), filtrovány a zakoncentrovány. Získaná směs byla precipitována ethylétherem filtrována tak aby vznikl El jako bílá pevná látka (53,85 g, 78%). [oc]D 22 -57,16° (c 2,23 CHC13) (lit [a]D -48° (c = 2,23 CDC13) δ). JAGS, 112,21, 1990).
Příklad 31: Syntéza O-(benzyloxykarbonyl-N,O-dimethyl-L-tyrosyl)-N-tertbutyloxykarbonylL-threoninfenacylesteru (D2)
K roztoku D3 (33,72 g, 100 mmol) v DCM při 0 °C byl přidán DMAP (3,66 g, 30 mmol) a El (34,33 g, 100 mmol). Po 10 min míchání při 0 °C, byl přidán DCC (22,7 g, 110 mmol). Reakční směs byla vytemperována na pokojovou teplotu a míchána přes noc. Poté byla reakční směs filtrována a filtrát zakoncentrován dosucha. Získaná směs byla naředěna ACN (100 ml), opět filtrována a filtrát byl zakoncentrován. Získaná směs byla rozpuštěna v EtOAc (200 ml) a rozdělena postupně mezi vodný roztok KHSO4 (100 ml, 10%), vodný roztok NaHCO3 (100 ml, nasycený roztok) a roztok soli (100 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována. Získaná směs byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, grád. EtOAc-Hex 1:4 až 1:2) tak, aby byl získán D2 (65,5 g, 98%). [a]D 22 -39,56° (c 1,06 CHC13); Rf = 0,55 (EtOAc.Hex 1:1).
Příklad 32: Syntéza O-(benzyloxykarbonyl-N,O-dimethyl-L-tyrosyl)-N-tertbutyloxykarbonylL-threonin (Dl)
Zn/AcOH:H2O
D1
K homogennímu roztoku D2 (24,49 g, 38,4 mmol) ve vodném AcOH (211 ml, 90%) při 0 °C, byl přidán práškový Zn (18,658, 288,3 mmol). Vzniklá směs byla míchána při 0 °C po dobu 3 h, dokud byl patrný výchozí materiál (následoval TLC). Reakční směs byla filtrována přes celit a promyta EtOAc (200 ml). Filtrát byl zakoncentrován za sníženého tlaku a získaná směs byla naředěna Et2O (200 ml) a filtrována. Filtrát byl postupně rozdělen mezi vodný roztok KHSO4 (100 ml, 10%) a roztok soli (100 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4) a zakoncentrována
-70CZ 304204 B6 tak, aby vznikla olejovitá kapalina, která byla přečištěna bleskovou LC (Lichroprep RPC18, ACN:H2O 1:1 (800 ml, poté 7:3 (600 ml)] tak, aby byl získán Dl (15,538, 74%) jako bílá pevná látka. [a]D 24 -27,6° (c 2,187, DCM); lit [cc]D -20,5° (c 2, DCM). JOC, 62, 2, 1997, Rf=0,58 [ACN/H2O (7:3)].
IR (film, DCM) v 3400, 3050, 2900, 1715, 1613, 1514, 1456, 1402, 1368, 1248, 1165, 1061. 1036 cm '.
'HNMR (200 MHz, CDC13) δ 1,29 (d, J = 6,5, 3H), 1,45 (s, 9H), 2,74 (s, 3H), 2,75 (s, 3H), 2,76 -3,31 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 4,42-4,52 (m, 1 H), 4,66-4,83 (m, IH), 5,01 - 5,16 (m, 2H), 5,30 - 5,53 (m, 2H), 6,72 - 6,81 (m, 2H), 6,95 - 7,09 (m, 2H), 7,35 (bs, 5H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 16,82, 28,23, 31,71, 31,97, 33,82, 33,68, 55,14, 56,87, 56,75,
m/z (FAB) 567,1 [(M+Naf, 461, 545,1 [(M+H)+, 71,445,1 (100); m/z (FABHRMS) 567,233 280, C28H35N2O9 vyžaduje [(M+Na)+, 567,231 851.
Příklad 30: Syntéza Boc-Thr(Z-N(Mel-O(Me)-Tyr-Ist-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPL7).
SAPLA1
HBTU/HOBí/DIPEA +
O
OMe
DCM/DMF
OMe
D1
SAPL7
Do nádoby obsahující HBTU (9,079 g, 23,9 mmol), HOBt (3,490 g, 22,8 mmol), SAPLAl (15,258 g, 22,8 mmol) a Dl (12,417 g, 22,8 mmol), byl v atmosféře Ar při -5 °C přidán kanylou roztok anhydridu DCM (296 ml) a anhydridu DMF (148 ml). Po 5 min míchání, byl po kapkách stříkačkou přidán DIPEA (15,9 ml, 91,2 mmol), a teplota byla udržována na < -5 °C. Vzniklá reakční směs byla míchána po dobu 21 h při -5 °C. Poté byl přidán MTBE (300 ml) a KHSO4 (200 ml, 10%), a vzniklá směs byla filtrována a zakoncentrována na 300 ml. Byl přidán další MTBE (200 ml), fáze byly odděleny, a organická fáze byla postupně promyta vodným roztokem. KHSO4 (200 ml, 10%), roztokem soli (200 ml), vodným roztokem. NaHSO4 (200 ml, nasycený roztok) a propláchnuta roztokem soli (200 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4) a zakoncentrována za sníženého tlaku, aby vznikla požadovaná žlutá olejovitá kapalina (30 g). Olejovitá kapalina byla naředěna v MTBE a za stálého míchání promyta hex. Vzniklá pevná sraženina a byl přidán další hex. Pevná fáze byla filtrována tak, aby byl získán SAPL7 (18,33 g, 69%
-71 CZ 304204 B6 výtěžek) jako bílá pevná látka. Tento produkt je směs dvou diastereomerů. Rf = 0,80 a 0,59 (hex: EtOAc 1:2).
IR (film, DCM) v 3350, 2961, 2927, 2893, 1744, 1688, 1638, 1514, 1454, 1368, 1304, 1248, 1171, 1067, 1036 cm’1.
1H NMR (500 MHz, CDC13) δ 0,74 - 0,92 (m, 1811), 1,05 - 1,15 (m, 211), 1,18 - 1,20 (m, 2H),
1.23 (d, J = 6,8, 311), 1,25 (d, J = 6,8, 311), 1,29 (d, J = 6,9, 311), 1,42 (s, 9H), 1,45 (s, 9H), 1,50 - 1,66 (m, 311), 1,89 - 2,02 (m, 4H), 2,17-2,25 (m, 2H), 2,37 - 2,42 (m, 1H), 2,81 (s, 311), 2,88 (s, 311), 2,91 (s, 3H), 2,95 (s, 311), 2,84 - 2,93 (m, 2H), 3,17-3,25 (m, 1H), 3,53-3,59 (m, 1H), 3,75 (s, 311), 3,88 - 3,98 (m, 4H), 4,49 (d, J = 3,1, 111), 4,51 (d, J = 3,1, 1H), 4,534,57 (m, 1H), 4,68-4,72 (m, 111), 4,96 - 4,99 (m, 1H), 5,025,33 (m, 4H), 5,02 (d, J = 3,2, 1H),
5.23 (d, J = 3,1, 1H), 5,26 - 5,33 (m, 111), 5,47 (ld, J = 9,5, 111), 6,74 (d, J = 7,8, 211), 6,77 (d, J = 7,7, 2H), 7,08 (d, J= 7,7, 2H), 7,17 (d, J = 7,5, 1H), 7,21 (d, J = 9, 5, 1H), 7,23 - 7,36 (m, 1014), 7,75 (d, J = 7,9, 1H), 7,79 (d, J = 8,2, 1H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 11,95, 13,27, 15,16, 16,47, 17,33, 18,79, 21,28, 23,65, 24,65, 24,72, 27,09, 28,08, 28,93, 31,20, 31,32, 33,62, 33,98., 38,38, 41,01, 47,12, 49,38, 54,96, 55,17, 57,89, 58,83, 60,01, 60,16, 67,18, 71,05, 71,32, 80,34, 81,24, 113,89, 127,51, 128,59, 129,69, 129,77, 135,62, 136,77, 156,93, 158,27, 169,87, 170,62, 171,15, 171,85, 172,39,204,88, m/z (FAB) 1181,2 [(M+Na)+, 20], 1159,2 [(M+H)+, 80], 1059,2 (100). Vypočteno pro C62H87N5O|6: C, 64,30; H, 7,52; N, 6,05, stanoveno: C, 64,14; H, 7,66; N, 5,95
Příklad 34: Syntéza Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPL7).
Postup je stejný jako pro syntézu syntéza SAPL7, vychází z SNPLA1 (150 mg, 0,22 mmol) a Dl (122 mg, 0,22 mmol), požadovaná látka byla získána jako bílá pevná látka (130 mg, 51%) po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 2:1 až 1:3) (směs diastereomerů).
'HNMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,74 - 1,03 (m, 18H), 1,16- 1,37 (m, 10H), 1,45 (s, 9H), 1,68 (m, 3H), 1,99 (m, 4H), 2,22 (m, 2H), 2,48 (m, 1H), 2,82 (s, 3H), 2,84 - 3,10 (m, 2H), 3,19 (m, 1H), 3,51 - 3,69 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,72 - 4,02 (m, 3H), 4,18 (m, 1 H), 4,50 - 4,73 (m, 4H), 5,00 -72CZ 304204 B6 io
5,27 (m, 5H), 5,49 (m, 2H), 6,54 (d, J = 9,2, IH), 6,78 (d, J = 6,8, 2H), 7,02 (d, J = 6,8, 2H), 7,18 (m, 1 H), 7,23 - 7,36 (m, 1 OH), 7,52 (d, J = 6,8, 1 H).
ESI-MS vypočteno pro C62H88N6Oi5: 1156,63, stanoveno 1158,3 (M+H).
Příklad 35: Syntéza Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPL7).
N OBn
NH
O OH
O „sNH3 +CT
SHPLA1
DCM7DMP
SAPLD1
HBTU/HOBW3IPEA
SHPL7
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL7, vychází z SHPLAl (l,12 g, l,94 mmol) a SAPLDl (544,6 mg, 1,94 mmol), požadovaná látka (1,045 g, 61%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 1:1 až 1:2). Rf = 0,46 (hex-EtOAc 1:2).
'HNMR (300 MHz, CDC13) δ 0,74 - 1,02 (m, 18H), 1,20 (m, 5H), 1,40 (s, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,62 (m, 2H), 1,82 - 2,20 (m, 3H), 2,20 (m, 2H), 2,50 (m, 1H), 2,78 (s, 3H), 2,90 (m, IH), 3,20 (m, IH), 3,58 (m, IH), 3,67 (s, 3H), 3,79 (m, IH), 3,88 (m, 1H), 4,06 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 4,82 (m, 2H), 4,94 (m, IH), 4,98 (m, IH), 5,08 (m, IH), 5,28 (m, 3H), 5,56 (d, J = 6,2, IH), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 6,98 (d, J = 6,5, IH), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,34 (tn, 10H), 7,52 (d, J = 6,2, IH).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 13,77, 13,95, 16,75, 17,46, 18,31, 20,78, 20,96, 23,09, 24,35, 24,53, 26,74, 27,93, 28,63, 30,17, 33,76, 39,06, 40,01, 46,69, 48,17, 54,89, 57,04, 57,68, 58,65, 60,20, 60,60, 66,74, 67,08, 68,31, 70,30, 78,49, 79,90, 113,62, 127,36, 127,70, 128,14, 128,18, 128,31, 129,64, 135,19, 136,31, 155,86, 156,61, 158,09, 169,77, 170,70, 171,06, 171,17, 171,78.
ESI-MS vypočteno pro C59H83N5Oi5: 1101,59, stanoveno 1102,7 (M+H)+.
-73 CZ 304204 B6
Příklad 36: Syntéza Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Val-Leu-Pro-Bn (SVPL7).
SVPLA1
HBTU/HOBt/DIPEA +
SVPL7
D1
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL7, vychází z SVPLAl (1,44 g, 2,37 mmol) a Dl (1,29 g, 2,37 mmol), požadovaná látka (1,96 g, 75%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 2:1 až 1:3). Rf = 0,56 (EtOAc).
ίο 'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,83 - 0,95 (m, 15H), 1,0 - 1,22 (m, 4H), 1,23 - 1,44 (m, 9H), 1,60 - 1,65 (m, 1H), 1,87 - 2,01 (m, 4H), 2,09 - 2,20 (m, 3H), 2,77 (bs, 8H), 2,84 - 3,01 (m, 1H), 3,17 - 3,24 (m, 1H), 3,51 - 3,60 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,80 - 3,90 (m, 2H) 4,03 - 4,15 (m, 1H), 4,25 - 4,40 (m, 2H), 4,40 - 4,52 (m, 1H), 4,70 - 4,80 (m, 2H), 5,00 - 5,26 (m, 4H), 5,34 5,36 (m, 1H), 5,58 (m, 1H), 6,75 (d, 2H, J = 7,8), 6,96 - 7,09 (m, 1H), 7,04 (d, 2H, J = 8,1), 7,04
-7,12(m, 1H), 7,16-7,20(m, 1H), 7,18-7,30(m, 10H).
l3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 11,43, 13,63, 17,17, 18,35, 19,21, 21,40, 23,23, 24,49, 24,67, 26,87, 28,10, 28,79, 30,48, 32,11, 33,841, 38,47, 40,37, 41,22, 46,80, 48,61, 55,04, 56,88, 57,95, 58,75, 59,25, 60,82, 66,87, 67,33, 69,40, 70,50, 76,44, 80,45, 113,58, 127,51, 127,74, 127,88, 128,10, 128,25, 128,33, 128,46, 128,72, 129,64, 129,77, 135,35, 136,37, 156,77, 158,29, 169,83, 170,57, 171,3, 171,4, 172,81.
ESI-MS vypočteno pro C5qH84N6O|4: 1100,60, stanoveno (m/z): 1101,7 (M+H)+.
-74CZ 304204 B6
Příklad 37: Syntéza Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Hip-Leu-Pro-OH (SAPL6).
o
SAPL7
SAPL6
K roztoku SAPL7 (18,33 g, 15,8 mmol) v THF (bez stabilizátoru, 500 ml) odplyněný a pročištěnému v atmosféře argonu, byl přidán Pd(OH)2-C (20 % Pd, 7,33 g, 40 % hmotnosti). Reakční směs byla míchána v atmosféře H2 (1 atm) po dobu 20 h, poté fdtrována přes 0,45μ teflonový filtr a zakoncentrována za sníženého tlaku tak aby vznikl požadovaný produkt jako bílá pevná látka. Byl přidán toluen (30 ml), a zakoncentrován za sníženého tlaku ve vakuu tak, aby vznikl SAPL6 (14,78 g, kvant.) jako bílá pevná látka.
'H NMR (500 MHz, CDC13) δ 0,79 - 1,08 (m, 18H), 1,09 - 1,18 (m, 3H), 1,26 (bs, 3H), 1,29 (d, J = 7,1, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,50 - 1,66 (m, 3H), 1,841,94 (m, 1H), 1,90 - 2,28 (m, 4H), 2,35 2,50 (m, 4H), 2,30 - 2,35 (m, 1H), 2,44 - 3,18 (m, 4H), 2,60 (m, 3H), 3,53 - 3,61 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,884,07 (m, 4H), 4,12 - 4,72 (m, 4H) 5,18 - 5,24 (m, 1H), 5,24 (bs, 1H), 6,84 (d, J = 7,9, 2H), 7,08 (d, J = 8,0, 2H), 7,13 (d, J= 8,2, 1 H), 7,18 (d, J= 8,2, 1H), 7,62 - 7,68 (bs, 1H).
m/z (FAB) 972,7 [(M+K)+, 33], 934,9 (M)+, 100],
Příklad 38: Syntéza Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Aip-Leu-Pro-OH (SNPL6).
SNPL7
SNPL6
K roztoku SNPL7 (130 mg, 0,11 mmol) ve směsi IPA:H2O (2:1, 4 ml :2ml) odplyněnému a pročištěnému v atmosféře argonu, byl přidán Pd(OH)2-C (20% Pd, 45 mg, 35 % hmotnosti). Reakční směs byla míchána v atmosféře H2 (1 atm) po dobu 20 h, poté filtrována přes 0,45μ teflonový filtr a zakoncentrována za sníženého tlaku tak aby vznikla pevná bílá látka. Byl přidán IPA (10 ml), a roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku a ve vysokém vakuu tak, aby vznikl SNPL6 (100 mg, kvant.) jako bílá pevná látka.
ESI-MS vypočteno pro C47H76N6Oi3: 932,55, stanoveno 934,0 (M+H)+.
-75 CZ 304204 B6
Příklad 39: Syntéza Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Hiv-Leu-Pro-OH (SHPL6).
SHPL7 SHPL6
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL6, vychází z SHPL7 (1,045 g, 0,95 mmol).
Požadovaná látka (825 g, 99%) byla získána jako bílá pevná látka, ío ESI-MS vypočteno pro C44H71N5O13: 877,50, stanoveno 878,5 (M+H)\
Příklad 40: Syntéza Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist“Val-Leu-Pro-OH (SVPL6).
SVPL7 SVPL6
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL6, vychází z SVPL7 (250 mg, 0,23 mmol). Požadovaná látka (195 mg, 97%) byla získána jako bílá pevná látka.
ESI-MS vypočteno pro C44H72N6Oi2: 876,56, stanoveno (m/z): 877,5 (M+H).
Příklad 41: Syntéza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-Ist-Hip-Leu-Pro (SAPL6).
SAPL6 ' SAPLS
-76CZ 304204 B6
Do vychlazené 51 reakční nádoby (-5 °C) vybavené mechanickým míchadlem obsahující ACN (3,2 L) v atmosféře Ar, byl přidán HATU (14,436 g, 37,9 mmol) a HOAt (5,254 g, 38,6 mmol) za stálého míchání. Poté byl přidán SAPL6 (14,77 g, 15,8 mmol) rozpuštěný v ACN (500 ml). NMM (3,65 ml, 33,18 mmol) byl přidán po kapkách stříkačkou a teplota byla udržována pod -5 °C. Vzniklá reakční směs byla temperována na pokojovou teplotu a byla míchána po dobu 20 h. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Surový produkt byl naředěn EtOAc (500 ml) a roztok byl přefiltrován tak, aby byla odstraněna sraženina. Roztok byl promyt postupně vodným roztokem KHSO4 (2x500 ml), roztokem soli (500 ml), vodným roztokem. NaHCO3 (500 ml, nasycený roztok) a propláchnut roztokem soli (500 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4) a zakoncentrována za sníženého tlaku, aby vznikl požadovaný produkt jako žlutá pevná látka (17,52 g), která byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, grád hex:EtOAc 3:1 až 1:1) tak, aby vznikl SAPL5 (9,83 g, 68%) jako bílá pevná látka. Rf = 0,60 (Hex:EtOAc 1:3). [ot]D -209,4 (c 0,3, CHC13).
IR (film, DCM) v 3343, 2961, 2927, 2893, 1734, 1640, 1514, 1454, 1368, 1302, 1248, 1167, 1018 cm*'.
Ή NMR (500 MHz, CDC13) δ 0,78 (d, J = 7,1, 3H), 0,85 (d, J = 7,0, 3H), 0,87 (d, J = 7,0, 3H), 0,89 -0,93 (m, 9H), 1,10 - 1,20 (m, 1H), 1,20 (d, J = 6,4, 3H), 1,30 (d, J = 6,9, 3H), 1,36 (m, 2H), 1,40 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,48 - 1,72 (m, 2H), 1,72 - 1,78 (m, 1H), 1,83 - 1,88 (m, 1H), 2,01 -2,17(m, 3H), 2,27-2,29 (m, 1H), 2,47-2,53 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,93 (bs, 1H), 3,14 3,19 (m, 2H), 3,34-3,37 (dd, JI = 14,8, J2 = 4,1, 1H), 3,54 - 3,56 (dd, JI = 10,5, J2 = 4,1, 1H), 3,58 - 3,63 (m, 1H), 3,68 - 3,72 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,94 - 3,98 (m, 1H), 3,98 (q, J = 7,5 1H), 4,07-4,11 (3d, J = 3,8, 1H), 4,57-4,61 (m, 2H), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,97 -4,98 (q, J = 3,5, 1H), 5,02 (d, J = 10,5, 1H), 5,18 (d, J = 4,2, 1H), 6,81 (d, J = 8,5, 2H), 7,05 (d, J = 8,5, 2H), 7,19 (d, J= 10,2, 1H), 7,64 (d, J = 10, 1, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 14,68, 14,97, 15,27, 16,61, 18,457 20,64, 23,50, 24,71, 24,78,
m/z (FAB) 938,9 [(M+Na)T, 55), 916,9 [(M+H)+, 1001; m/z (FABHRMS) 916,532 120, C47H73N5OI3, vyžaduje (M+H)} = 916,528 300.
Příklad 42: Syntéza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-lst-Aip-Leu-Pro (SNPLS).
MM
OMe
O
SNPL5
HATU /HOA1/ NMM
ACN
SNPL5
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL5, vychází z SNPL6 (100 mg, 0,11 mmol), požadovaná látka (40 mg, 57%) byla získána jako bílá pevná látka po bleskové LC (silikagel, EtOAc:hex 4:1 čistý EtOAc). Rf = 0,4 (EtOAc).
-77CZ 304204 B6 'H NMR (300 MHz, CDCb) δ 0,76 (d, J = 6,8, 3H), 0,83 -0,96 (m, 15H), 1,10 - 1,20 (m, 1H), 1,25 (d, J = 6,4, 3H), 1,27 (d, J = 6,3 3H), 1,32 (d, J - 6,8, 3H), 1,41 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,50 1,70 (m, 2H), 1,99-2,31 (m, 5H), 2,61 (s, 3H), 2,91 -3,04 (m, 1H), 3,11 - 3,37 (m, 2H), 3,483,64 (m, 3H), 3,69 - 3,81 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 4,18 (m, 2H), 4,46 - 4,67 (m, 3H), 4,81 (t, J = 10,7, 1H), 5,01 (m, 1H), 6,85 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,33 (d, J = 8,7, 1H), 7,65 (d, J = 9,2, 1H), 7,86 (d, J = 10,7,1H).
ESI-MS vypočteno pro C47H74N6Oi2 914,54, stanoveno m/z 915,5 (M+H)r.
Příklad 43: Syntéza cyklo-N(Me)-O-(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-Ist-Hiv-Leu-Pro (SHPLS).
SHPL6
SHPL5
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL5, vychází z SHPL6 (2,45 g, 2,78 mmol), požadovaná látka (2,1 g, 88%) byla získána jako bílá pevná látka po krystalizaci DCM/n-heptane (1:3). Rf=0,33 (hex-EtOAc 1:3).
'HNMR (300 MHz, CDCb) δ 0,82 - 1,04 (m, 18H), 1,19 (m, 5H), 1,41 (s, 9H), 1,42 (m, 2H), 1,63 (m, 1H), 1,77 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 2,00-2,22 (m, 3H), 2,44 (m, 1H), 2,58 (s, 3H), 2, (m,lH), 3,14 (m, 1H), 3,26 (m, 1 H), 3,36 (m, 1 H), 3,58 (m, 1 H), 3,68 (m, 2H), 3,78 (s, 3H> 3,96 (m, 1 H). 4,12 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,94 (m, 1H), 5,03 (m. 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,54 (d, J = 7,3, 1H), 7,69 (d, J = 6,4 1 H) 13C NMR (75 MHz, CDCb) δ 14,57, 15,15, 18,11, 18,45, 20,67, 23,40, 24,70, 26,91, 27,89,
30,20, 33,57, 33,90, 38,51, 39,07, 46,62, 48,13, 55,16, 56,05, 56,23, 56,94, 65,67, 68,60, 71,13, 79,41, 80,01, 113,97, 129,69, 130,25, 155,75, 158,49, 168,51, 169,57, 170,24, 170,94, 171,06, 173,59.
ESI-MS vypočteno pro C44H69N5O|2 859,49, stanoveno m/z 86,4 (M+H)+.
Příklad 44: Syntéza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-Ist-Val-Leu-Pro(SVPLS).
SVPL6 SVPL5
-78 CZ 304204 B6
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL5, vychází z SVPL6 (90 mg, 0,1 mmol), 30 mg (35%) požadované látky bylo získáno jako bílá pevná látka po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc od 1:4 do 1:10). Rf = 0,35 (EtOAc).
'HNMR (300 MHz, CDC13) δ 0,85 - 1,00 (m, 18H), 1,14- 1,38 (m, 8H), 1,44 (s, 9H), 1,57 (m,
2H), 1,76 - 1,95 (m, 2H), 2,01 -2,21 (m, 2H), 2,33 (dd, Jl = 7,3, J2 = 14,7, 1H), 2,53 (m, 1H),
2,57 (s, 3H), 3,17 (dd,J 1 = 10,7, J2 = 14,7, 1H), 3,35 (dd, Jl = 4,4, J2 = 14,2, 1H), 3,56 (dd, Jl =
3,9, J2= 10,3, 1H), 3,59-3,77 (m, 4H), 3,78 (s, 3H), 4,06 (dt, Jl =3,9, J2 = 9,3, 1H), 4,33 (dd, io Jl =2,9, J2 = 9,3, 1H), 4,38 (dd, Jl = 6,8, J2 = 10,3, 1H), 4,58 (dd, Jl = 5,4, J2 = 7,3, 1H), 4,79 (t, J = 10,3, 1H), 4,98 (d, J = 9,3, 1H), 5,03 (dd, J1 = 2,4, J2 = 6,3, 1H), 6,81 (bs, 1H), 6,84 (d, J =
8,3, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,24 (d, J = 9,8, 1H), 7,54 (d, J = 9,8, 1H).
I3C NMR (500 MHz, CDC13) δ 11,48, 14,50, 15,20, 18,86, 19,44, 21,03, 23,64, 24,83, 24,96, 15 26,97, 28,01, 28,135, 30,21, 33,53, 33,96, 38,56, 38,61, 41,05, 41,66, 46,84, 48,53, 55,24, 55,51,
56,31,57,14, 59,75, 65,85, 70,60, 80,52, 114,11, 129,75, 130,33, 156,77, 158,67, 168,53, 170,21, 170,29, 170,73, 171,02, 174,34.
ESI-MS vypočteno pro C44H70N6O]i 858,51, stanoveno m/z 859,5 (M+H)+.
Příklad 45: Syntéza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-Ist-Hip-Leu-Pro (SAPL4).
SAPL4
Do nádoby obsahující SAPLS (8,79 g, 9,6 mmol) v bezvodém dioxanu (93 ml), byl přidán roztok kyseliny chlorovodíkové bezvodém dioxanu (5,3 N, 122 ml, 647 mmol). Vzniklý roztok byl míchán při pokojové teplotě po dobu 8 h, nebo dokud nezreagoval všechen výchozí materiál. Když byla reakce ukončena, roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku. Získaná směs byla naředěna CHC13 (100 ml) a opět zakoncentrována. Surový produkt ve formě bílé pěnovité látky byl odpařen s CDCl3/hex tak, aby vznikl SAPL4 (8,17 g, 100% výtěžek) jako bílá pevná látka.
m/z (FAB) 838,3 [(M+Na)+, 28], 816,3 [(M+H)+, 100].
-79CZ 304204 B6
Příklad 46: Syntéza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-Ist-Aip-Leu-Pro (SNPLS4).
HCI-Dioxan
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL4, vychází z SNPLS (40 mg, 43 pmol), požadovaná látka (36 mg, kvant.) byla získána jako bílá pevná látka po precipitací s Et2O.
ESI-MS: vypočteno pro C42H6N50n 815,47, stanoveno m/z 815,5 (M)+.
Příklad 47: Syntéza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-Ist-Hiv-Leu-Pro (SHPL4).
HCl fáioxan
SVPL5
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL4, vychází z SHPL5 (500 mg, 0,58 mmol). Požadovaný produkt (440 mg, kvant.) byl získán jako bílá pevná látka po precipitací s Et2O,
ESI-MS: vypočteno pro C39H61N5O10 759,44, stanoveno m/z 760,4 (M+H)*.
Příklad 48: Syntéza cyk!o-N(Me)-0(Me)-Tyr-0-(Thr)-Ist-Val-Leu-Pro (SVPL4).
HCl /dioxan
SVPL5
-80CZ 304204 B6
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL4, vychází z SVPL5 (25 mg, 29 μιηοΐ). Požadovaná látka (22 mg) byla získána jako bílá pevná látka po koevaporaci s MTBE.
ESI-MS: vypočteno pro C39H62N6O9: 758,5, stanoveno (m/z) 759,5 [(M+H)]4.
Příklad 49: Syntéza Z-N-methyl-D-leucinu (Hl)
Ref: Coggins, J. R.; Benoiton, N. L. Can. J. Chem 1971,49, 1968
Z-(D)-Leu-OH
K míchanému roztoku Z-D-Leu-OH (10,32 g, 38,9 mmol) v bezvodém THF (120 ml) při 0 °C v atmosféře Ar, byl přidán po kapkách stříkačkou jodomethan (8,55 ml, 136,1 mmol). Poté byl postupně přidán hydrid sodný (4,80 g, 120,6 mmol, 60% rozptýlený v minerálním oleji) a teplota byla udržována na 0 °C. Reakční směs byla míchána při pokojové teplotě po dobu 24 h. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a získaná směs byla rozpuštěna v EtOAc (120 ml) a extrahována vodným roztokem NaHCO3 (300 ml, nasycený roztok). Vodná fáze byla promyta EtOAc (2x100 ml). Vodná fáze byla ochlazena, byla přidána pevná kyselina citrónová až f 1-2, a roztok byl extrahován pomocí EtOAc (4x250 ml), vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována. Produkt byl krystalizován v EtOAc-heptan (1:3) tak aby byl získán Hl (7,84 g, 72%) jako bílá krystalická látka. Mp: 71 až 72 °C. [a]D 25 + 23° (c 1, EtOH).
Příklad 50: Syntéza Z-didemninu A (SAPL3)
Do nádoby obsahující HATU (8,76 g, 23,0 mmol), HOAt (3,17 g, 23,1 mmol) SAPL4 (7,09 g, 15,8 mmol) a Hl (3,486 g, 12,5 mmol), byl přidán bezvodý DCM (100 ml) a bezvodý DMF
-81 CZ 304204 B6 (50 ml) a roztok byl v atmosféře Ar míchán při -5 °C (ledová lázeň). Po kapkách stříkačkou byl přidán NMM (2,3 ml, 21,0 mmol), a teplota byla udržována na -5 °C. Vzniklá reakční směs byla míchána při -5 °C po dobu 2 h, poté temperována na pokojovou teplotu dalších 14 h. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Surový produkt byl promyt EtOAc (100 ml) a roztok byl filtrován tak, aby byl odstraněn precipitát. Roztok byl promyt postupně vodným roztokem KHSO4 (2x100 ml, 10%), roztokem soli (100 ml), vodným roztokem NaHCO3 (100 ml, nasycený roztok) a propláchnut roztokem soli (100 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4) a zakoncentrována za sníženého tlaku aby vznikl požadovaný produkt jako žlutá pevná látka, která byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, gradient hex:EtOAc 2:1 až 1:1) tak, aby vznikl SAPL3 (7,98 g, 89% výtěžek) jako bílá pevná látka. Rf = 0,18 (hex/EtOAc 1:1).
'H NMR (300 MHz, CDClj) δ 0,79 - 1,00 (m, 24H), 1,10 - 2,25 (m, 10H), 1,18 (d, J = 6,3, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,32 (d, J = 6,8, 3H), 2,28-2,34 (m, 1H), 2,49 (dd, JI = 10,7, J2 = 17,0, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,83 (s, 3H), 2,95 (m, 1H), 3,02 - 3,24 (m, 2H), 3,31 - 3,40 (dd, JI = 3,9, J2 = 14,1, 1H), 3,533,64 (m, 2H), 3,65 - 3,75 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,92 - 4,20 (m, 3H), 4,58 (t, J = 4,8, 1H), 4,75 -4,85 (m, 3H), 5,00 (m, 1H), 5,12-5,26 (m, 3H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 6,86 (bs, 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,21 - 7,44 (m, 6H), 7,92 (d, J = 8,3, 1H).
HC NMR (75 MHz, CDCI3) δ 14,05, 15,18, 16,73, 18,52, 20,83, 22,62, 22,96, 23,66, 24,55, 24,81, 25,03, 25,28,26,90, 27,86, 28,95, 31,28, 31,81, 33,91, 34,02, 38,51, 38,61, 47,03, 49,61,
55,21, 55,38, 55,50, 57,28, 66,10, 67,65, 67,93, 70,47, 81,44, 114,09, 127,83, 128,46, 129,74, 130,29, 158,60, 168,36, 169,59, 170,28, 171,20, 172,22,204,80.
ESI-MS vypočteno pro C57H84N6O|4 1076,60, stanoveno m/z 1077,6 (M+H) .
Příklad 51: Syntéza [Aip]3 Z-didemninu A (SNPL3).
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SNPL4 (35 mg, 41 μιηοΐ) a Hl (17 mg, 61 μιηοΐ), požadovaná látka (36 mg, 81%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 1:4 až čistý EtOAc). Rf = 0,30 (EtOAc).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,74 (d, J = 6,3, 3H), 0,80 - 1,00 (m, 21H), 1,10 - 2,25 (m, 10H), 1,21 (d, J = 5,8, 3H), 1,24 (s, 3H), 1,34 (d, J = 6,3, 3H), 2,61 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 3,12 - 3,25 (dd, JI = 1 1,2, J2 = 14,1, 1H), 3,27 - 3,36 (dd, JI = 4,3, J2 = 14,1, 1H), 3,52 - 3,63 (m, 3H), 3,69 - 3,81 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 4,09 (m, 3H), 4,47 - 4,63 (m, 3H), 4,76 - 4,92 (m, 2H), 5,00 (m, 1H), 5,08 (m, 1H), 5,18 (s, 2H), 6,85 (d, J = 8,3, 2H), 6,97 (d, J = 6,97), 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,35 (bs, 5H), 7,48 (d, J = 8,3, 1H), 7,67 (d, J = 8,3, 1H), 7,87 (d, J = 10,2, 1H).
ESI-MS vypočteno pro C57N85N7O13: 1075,62, stanoveno m/z: 1076,6 (M+H)+.
-82CZ 304204 B6
Příklad 52: Syntéza [Hiv]3 Z-didemninu A (SHPL3).
HATU/HOAt/NMM
DCM /DMF
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SHPL4 (116 mg, 0,15 mmol) a Hl (63 mg, 0,23 mmol), požadovaná látka (86 mg, 52%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 1:1 až 1:2). Rf == 0,27 (hex-EtOAc 1:2).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,80 - 1,08 (m, 24H), 1,18 (m, 3H), 1,21 (m, 4H), 1,58 (m, 2H), 1,74 (m, IH), 1,80-2,42 (m, 6H), 2,56 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 2,88 (m, 1 H), 3,15 (m, IH), 3,32 (m, IH), 3,60 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,83 (m, IH), 3,98 (m, IH), 4,42 (m, IH), 4,58 (m, IH), 4,75 (m, IH), 4,84 (m, IH), 4,92 (d, J = 3,8, IH), 5,00 (m, IH), 5,20 (m, 2H), 6,65 (d, J = 6,3, IH), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,34 (m, 5H), 7,50 (d, J = 6,7, IH), 7,75 (d, J = 7,2, IH).
C NMR (75 MHz, CDC13) δ 14,21, 15,39, 17,64, 18,63, 20,74, 21,88, 22,84, 23,48, 24,22, 24,75, 27,05, 27,84, 29,34, 29,99, 33,42, 33,865, 35,81, 38,52, 39,37, 46,63, 48,14, 55,13, 55,47, 55,53, 55,87, 56,92, 65,68, 67,72, 68,60, 70,61, 79,09, 113,95, 127,71, 127,86, 128,35, 129,63, 130,22, 158,48, 168,46, 169,36, 169,84, 170,29, 170,93, 171,00, 173,73.
ESI-MS: vypočteno pro C54H8oN6Oi3 1020,58, stanoveno m/z 1021,5 (M+H) .
Příklad 53: Syntéza [Val]3 Z-didemninu A (SVPL3).
-83 CZ 304204 B6
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SVPL4 (20 mg, 25 pmol) a SAPLH1 (11 mg, 37,5 pmol), požadovaná látka (19 mg, 72%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 1:1 až 1:5). Rf = 0,44 (EtOAc).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,85 - 1,06 (m, 21 H), 1,10 - 1,4 (m, 5H), 1,16 (d, J = 6,6, 3H), 1,50 - 1,63 (m, 6 H), 1,72 - 1,87 (m, 2 H), 1,88 - 2,40 (m, 6H), 2,58 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 3,17 (dd, JI = 10,5, J2 = 14,2, IH), 3,36 (dd, JI = 3,9, J2 = 14,2, IH), 3,43 (bs, IH), 3,51 -3,72 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 3,98 - 4,16 (m, IH), 4,40 - 4,47 (m, 2H), 4,58 (dd, JI = 5,7, J2 = 7,8, IH), 4,67-4,85 (m, 2H), 4,80-5,09 (m, IH), 5,16 (d, J = 12,4, IH), 5,24 (d, J = 12,4, 1 H), 6,84 (d, J = 8,4, 1H), 6,90 - 6,94 (bs, 1 H), 7,09 (d, J = 8,4, 1H), 7,28 (m, 6H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 14,37, 15,70, 18,55, 19,82, 21,40, 21,99, 22,81, 23,17, 23,98, 24,62, 25,00, 25,24, 27,28, 28,26, 29,93, 30,23, 33,58, 34,10, 36,16, 38,78, 41,98, 47,10, 48,79, 54,73, 55,45, 56,62, 57,40, 59,51, 66,02, 68,18, 70,37, 71,03, 114,30, 128,00, 128,27, 128,72, 129,86, 130,56, 136,49, 158,28, 158,85, 168,75, 169,27, 170,40, 170,75, 171,04, 173,91, 175,03,
ES1-MS vypočteno pro C54H8|N7O12: 1019,59, stanoveno (m/z): 1020,5 (M+H)+.
Příklad 54: Syntéza didemninu A (SAPL2)
Ha/PdíOHfe-C
THF
SAPL2
K roztoku SAPL3 (6,59 g, 6,1 mmol) v THF (bez stabilizátoru, 262 ml) odplyněnému a přečištěnému argonem, byl přidán Pd(OH)2-C (20%, 3,29 g, 50 % hmotnosti). Reakční směs byla míchána v atmosféře H2 (1 atm) po dobu 20 h, poté filtrována přes 0,45pm teflonový filtr a zakoncentrována za sníženého tlaku tak aby vznikl produkt ve formě bílé pevné látky. Byl přidán CHC13 (2x25 ml), a reakční směs byla opět zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby vznikl SAPL2 (5,51 g, 96%) jako bílá pevná látka. Rf = 0,22 (CHC13: tBuOH 90:10).
'H NMR (500 MHz, CDCI3) δ 0,82 - 0,92 (m, 24H), 1,1 1 - 1,19 (m, IH), 1,22 (d, J = 6,9, 3H), 1,32 (d, J = 6,8, 3H), 1,30 - 1,35 (m, IH), 1,35 - 1,63 (m, 6H), 1,71 - 1,81 (m, 2H), 1,93-2,07 (m, 1H), 2,07 - 2,18 (m, 2H), 2,282,34 (m, 1H), 2,49 - 2,52 (dd, J1 = 11, J2 = 10,5, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,72 (bs, 3H), 2,79 (bs, 3H), 2,86 - 2,94 (bs, IH), 2,72 - 2,79 (bd, J = 10,5, IH), 3,153,18 (dd, JI = 14,5), J2= 10,5, IH), 3,33 - 3,36 (dd, JI = 14,5, J2 = 4,5, IH), 3,54 - 3,57 (dd, JI = 10,5, J2 = 4,5 IH), 3,56-3,61 (m, IH), 3,78 (s, 3H), 3,96 - 4,00 (m, IH), 4,03 - 4,08 (m, IH), 4,11 -4,80 (bs, IH), 4,56-4,62 (m, IH), 4,68-4,81 (m, 3H), 4,99-5,01 (q, J = 3,5, IH), 5,16 (bs, IH), 6,83 (d, J = 8,5, 2H), 6,95 (bs, IH), 7,07 (d, J = 8,5, 2H), 7,21 - 7,25 (bs, IH), 7,95 (bs, IH).
L’C NMR (75 MHz, CDC13) δ 11,55, 14,95, 15,26, 16,82, 18,56, 20,89, 22,00, 23,08, 23,76, 2,58,
25,10, 27,12, 29,35, 29,35, 29,65, 29,69, 31,36, 33,96, 34,14, 38,51, 38,64, 40,14, 55,38, 55,56,
57,31, 66,17, 67,85, 79,58, 80,96, 80,98, 81,57, 114,12, 130,33, 158,63, 168,41, 169,33, 169,70,
170,38, 171,24, 172,28, 172,28, 172,93, 204,83.
-84CZ 304204 B6 m/z (FAB) 944,2 [(M + H)+, 100],
Příklad 55: Syntéza [Aip]3-didemninu A (SNPL2)
H2/Pd(OH)2-C
IPA/HjO
K roztoku SNPL3 (33 mg, 35 μηιοί) ve směsi IPA/H2O (2 ml: 1 ml) odplyněné a pročištěné argonem, byl přidán Pd(OH)2-C (20%, 20 mg, 60 % hmotnosti). Reakční směs byla míchána v atmo10 sféře H2 (1 atm) po dobu 20 h, poté filtrována přes 0,45μιη teflonový fdtr a zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby vznikl požadovaný produkt jako bílá pevná látka. Byl přidán IPA (2x5 ml), a roztok byl opět zakoncentrován za sníženého tlaku tak, aby vznikl SNPL2 (32 mg, 97%) jako bílá pevná látka.
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,78 (d, J = 6,8, 3H), 0,82 - 0,92 (m, 21H), 1,11 - 2,58 (m, 21H), 2,41 (s,3H), 2,62 (s, 3H), 2,75 - 3,00 (m, 4H), 3,15 - 3,18 (dd, JI = 10,7, J2 = 14,7, 1H), 3,33 3,36 (dd, JI = 14,5, J2 = 4,2, IH), 3,51 - 3,78 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,92 (m, IH), 4,01 - 4,20 (m, 2H), 4,50 (t, J = 4,8, IH), 4,59 (t, J = 6,3, 111), 4,75-4,91 (m, 2H), 5,05 (m, 1 H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,70 (d, J = 5,8, IH), 7,78 (d, J = 9,7, 1 H), 7,89 (d, J = 6,3,
IH), 8,14 (d,J = 7,8, IH).
ESI-MS vypočteno pro C49H79N7O11 941,58, stanoveno m/z 942,7 (M+H)+.
Příklad 56: Syntéza [HiV]3- didemninu A (SHPL2)
H2/Pd(OH)2-C
THF
SHPL2
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL2, vychází z SHPL3 (86 mg, 0,08 mmol), požadovaná 30 látka (73 mg, 97%) byla získána jako bílá pevná látka. Rf = 0,37 (CHCf/MeOH 95:5).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,82 - 1,02 (m, 24H), 1,12 - 2,42 (m, 16H), 2,54 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,95 (m, IH), 3,15 (m, lH),3,35(m, IH), 3,523,90 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 4,04 (m, IH), 4,38 (m, IH), 4,48 (m, IH), 4,57 (m, 1 H), 4,88 (m, IH), 4,91 (d, J = 5,3, IH), 5,22 (m, IH), 6,84 (d,
-85 CZ 304204 B6
J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,54 (d, J = 9,2, 1H), 7,60 (d, J = 9,4, 1H), 8,68 (d, J = 6,2, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDCR) δ 14,07, 16,13, 17,90, 18,56, 20,98, 21,74, 22,94, 23,60, 24,44, 24,78, 25,06, 27,17, 27,92, 30,09, 33,34, 33,89, 38,71, 40,30, 46,86, 48,22, 54,99, 55,23, 56,97,
57,21, 65,81, 68,53, 70,37, 79,47, 114,03, 129,76, 130,29, 158,57, 168,18, 169,40, 169,86, 170,20, 170,92, 174,16.
ESI-MS: vypočteno pro C46H74N60n 886,54, stanoveno m/z 887,2 (M+H)+.
Příklad 57: Syntéza [Val]3 Z-didemninu A (SVPL2)
H2/Pd(OH)2-C
THF
SVPL2
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL2, vychází z SVPL3 (19 mg, 18 gmol), požadovaná látka (16 mg, 97%) byla získána jako bílá pevná látka. Rf = 0,36 (CHCf/MeOH 95:5).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ -0,82 - 1,02 (m, 21H), 1,85 - 1,32 (m, 9H), 1,42 - 1,83 (m, 7H), 1,87-2,33 (m, 8H), 2,34 (bs, 3H), 2,60 (bs, 1 H), 2,85 (dd, Ji = 5,7, J2 = 7,8, 1H), 3,16 (dd, JI = 10,8, J2= 14,2, 1H), 3,37 (dd, JI =4,2, J2 = 14,2, 1H), 3,48 (bs, 1H), 3,57 - 3,68 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 3,95 - 4,15 (m, 2H), 4,45 - 4,52 (m, 2H), 4,61 (dd, JI = 4,8, J2 = 7,8, 1H), 4,77 (t, J = 9,9, 1H), 5,02 - 5,15 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,4, 1H), 7,09 (d, J = 8,4, 1H), 7,59 - 7,62 (m, 2H), 7,78-7,81 (m, 2H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 14,46, 16,14, 18,50, 19,83, 21,50 23,98, 27,33, 28,27, 28,33, 29,94, 33,71, 34,16, 38,94, 41,93, 42,1
55,03, 55,50, 56,72, 57,55, 59,22, 59,56, 66,16, 168,71; 169,74, 170,23, 171,18, 175,10.
22,55, 22,81, 22,95, 23,46, , 45,72, 47,18, 48,94, 53,64, 14,36, 118,53, 120,85, 130,02, 130,58,
70,71,
ESI-MS vypočteno pro C46H75N70|o: 885,56, stanoveno (m/z): 856,5 (M+H)+.
Příklad 58: Syntéza Pyr-Pro-OBn (F2)
-86CZ 304204 B6
K roztoku H-Pro-OBn-HCl (10,0 g, 41,3 mmol) v bezvodérri DMF (50 ml) při 0 °C v atmosféře Ar, byl přidán po kapkách stříkačkou NMM (4,55 ml, 43,8 mmol) zatímco teplota byla udržována na 0 °C. Poté byl postupně přidán HOBt (18,98 g, 124 mmol). Po 15 min byl přidán po kapkách stříkačkou pyruvát (8,61 g, 97,79 mmol) rozpuštěný v bezvodém DCM (10 ml) zatímco teplota byla udržována pod 3 °C. Nakonec byl přidán po kapkách připojeným trychtýřem DCC (22,17 g, 107,46 mmol) rozpuštěný v DCM (80 ml). Reakční směs byla temperována na pokojovou teplotu (2 h) a míchána dalších 12 h. Reakční směs byla filtrována, aby byla odstraněna sraženina a roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku. Získaná směs byla rozpuštěna v EtOAc (500 ml) a promyta postupně vodným roztokem KHSO4 (100 ml, 10%), vodným roztokem NaHCO3 (400 ml, nasycený roztok), roztokem soli (400 ml), vysušena (Na2SO4) a filtrována.
Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a získaná směs byla promyta ACN (100 ml), ochlazena při -30 °C po dobu 2 h a filtrována tak, aby byl odstraněn nadbytek N,N-dicyklohexylmočoviny. Vzniklá hnědá olejovitá kapalina (15,82 g) byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, grád. hex až hex:EtOAc 2:1), aby vznikl požadovaný F2 (9,06g, 66% výtěžek) jako bílá pevná látka. Rf = 0,25 (hex:EtOAc 2:1).
IR (film, DCM) v 3035, 2956, 2884, 1744, 1717, 1645, 1499, 1443, 1383, 1352, 1273, 1175, 1092 cm 'H NMR (200 MHz, CDC13) δ 1,75 - 2,40 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,44 (s, 3H), 3,45 - 3,82 (m, 2H), 4,52 - 4,61 (m, IH), 4,88 - 4,97 (m, IH), 5,14 - 5,15 (m, 2H), 5,17 - 5,20 (m, 2H), 7,34 (bs, 5H).
13C NMR (50 MHz, CDC13) S 22,11,25,22, 26,5, 27,10, 28,53, 31,48, 47,53, 44,81, 59,76, 67,02,
67,31, 128,11, 128,64, 135,24, 170,1, 170,2, 198,0.
m/z (Cl) 293 [(M+NH4)+, 100]. Anal. vypočteno pro C15HI7NO4: C, 65,44; H, 6,22; N, 5,08, stanoveno: C, 65,04; H, 6,01; N, 5,11.
Příklad 59: Syntéza Pyr-Pro-OH (Fl)
Roztok F2 (8,63 g, 31,34 mmol) a palladium na aktivním uhlí (10%, 86 mg, 10% w/w) v odplyněném MeOH (125 ml) bylo přeneseno do vysokotlakého Parrova reaktoru a pročištěno plynným dusíkem (2x30psi). Reakční směs byla převrstvena vodíkem (30 psi) a míchána při 23 °C po dobu 4,5 h. Poté byla reakční směs filtrována přes 0,45pm teflonový filtr a zakoncentrována za sníženého tlaku. Získaná směs (6,29 g) byla potažena SiO2, nanesena na vrchol kolony (LC 5,5 x 10,0 cm) a promývána hex:EtOAc 1:2 tak, aby byl získán Fl (4,64 g, 80%) jako bílá pevná látka. Rf = 0,22 (hex:EtOAc 1:1). [ct]D 20 92,4 (c 0, 12, CHC13). M.p. 67 až 69 °C.
IR (film, DCM) v 3450-3000, 2961-2870, 1719, 1643, 1615, 1452, 1354, 1205, 1175, 1094, 1018 cm“1.
-87CZ 304204 B6 'H NMR (200 MHz, CDCI3) δ 1,85 - 2,45 (m, 4H), 2,43 a 2,47 (s, 3H), 3,42 - 3,85 (m, 2H), 4,52
- 4,61 (m, 1H), 4,88 - 4,97 (m, 1H), 7,21 - 7,40 (bs, 1H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 22,03, 25,23, 26,48, 27,00, 28,23, 31,44, 47,57, 48,37, 59,61, 59,39, 162,47, 162,52, 175,04, 176,29, 197,18.
m/z (Cl) 220 [M+N2H7J+, 15], 203 [(M+NH4)+, 100], 186 [(M+H)+, 16], Anal. vypočteno pro CsHl 1NO4: C, 51,88; H, 5,99; N, 7,56, stanoveno: C, 52,13; H, 5,85; N, 7,65.
Příklad 60: Syntéza aplidinů (SAPL1)
SAPL2 SAPL1
K ledovému (3 °C) roztoku Fl (4,908 g, 26,5 mmol) v bezvodém DCM (40 ml) v atmosféře dusíku byl přidán, roztok DIPCDI (1,806 g, 14,3 mmol) v DCM (10 ml) a roztok byl míchán při 3 °C po dobu 60 min. Poté byl roztok SAPL2 (5,0 g, 5,3 mmol) v DCM (50 ml) přenesen pomocí kanyly k výše uvedenému roztoku v atmosféře dusíku. Po 90 h (4 dny) při této teplotě, byl přidán vodný roztok HCI (50 ml, 0,1 N), a reakční směs byla míchána po dobu 15 min. Poté byla organická fáze ponechána usadit a rozdělena mezi vodný roztok K.HSO4 (50 ml, 5%), vodný roztok NaHCO3 (50 ml, 5%) a roztok soli (25 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku. Vzniklá světle žlutá látka byla přečištěna bleskovou LC (Lichroprep RP-18, 40 až 63 μιη, gradient MeOH:H20:TFA od 70:30:01, do 90:10:0,1) tak, aby byl získán SAPL1 (5,4 g, 93%) (směs rotamerů). Rf = 0,40 a 0,28 (DCM:AcOEt, 2:3), 0,52 a 0,45 (CHCh-MeOH, 9,5:0,5); [a]D-95,9° (c 1,8, CHC13).
Ή NMR (200 MHz, CDCI3) δ 0,84 - 0,93 (m, 24H), 1,16 - 1,70 (m, 9H), 1,72 - 1,81 (m, 1H), 1,81-1,90 (m, 1H), 1,90-2,24 (m, 6H), 2,30-2,39 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,51 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,52-2,64 (m, 1H), 2,85 (bs, 1H), 2,94 (bs, 114), 3,09 (s, 3H), 3,13 (s, 3H), 3,15 -3,18 (m, 1H), 3,21 - 3,26 (dd, JI = 15,8, J2 = 6,1, 1H), 3,32 - 3,36 (dd, JI = 14,5, J2 = 4,1, 1H), 3,54 3,60 (m, 1H), 3,66 - 3,72 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,80 - 3,87 (m, 1H), 3,963,99 (m, 1H), 4,03 4,11 (m, 2H), 4,15-4,23 (2q, J = 7,5, 1H), 4,55 - 4,57 (2d, JI =5,5, J2 = 2,2, 1H), 4,59-4,62 (t, 1H), 4,56 - 4,64 (dd, JI = 6,5, J2 = 2,5, 1H), 4,68 - 4,71 (t, 1H), 4,76 - 4,81 (t, 1H), 5,10 5,18 (m, 1H), 5,17 (d, = 3,5, 1H), 5,18 (d, J = 3,5, 1H), 5,27 - 5,31 (m, 2H), 6,82 (d, J = 8,5, 2H), 6,83 (d, J = 8,5, 2H), 7,05 (d, J = 8,5, 2H), 7,06 (d, J = 8,5, 2H), 7,02 (d, i = 7,1, 1 H), 7,16 (d, J = 9,5, 1 H), 7,17 (d, J = 9,5, 1 H), 7,59 (d, i = 5,5, 1H), 7,77 (d, J = 9,5, 1H), 7,83 (d, J = 9,4, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDC!3) δ 11,63, 1 1,68, 14,11, 14,70, 15,26, 15,30, 16,00, 16,20, 16,88,
16,93, 18,62, 18,85, 20,89, 20,94, 21,62, 21,36, 23,44, 23,57, 23,84, 23,93, 24,662, 24,77, 24,85,
25,02, 26,22, 26,34, 27,09, 27,6, 27,06, 27,30, 27,95, 27,99, 29,33, 29,69, 31,3131,37, 33,97,
34,06, 36,02, 36,45, 38,68, 38,76, 41,01, 41,15, 47,00, 48,42, 48,48, 48,86, 49,20, 49,51, 54,65,
54,75, 55,26, 55,58, 55,61, 57,14, 57,27, 57,47, 57,79, 66,24, 67,80, 67,99, 70,34, 70,67, 81,0,
-88CZ 304204 B6
81,52, 114,10, 130,31, 156,02, 158,65, 161,12, 161,60, 168,20, 169,53, 169,59, 170,45, 171,25, 171,801, 171,95, 172,26, 172,33, 197,5,204,80, 204,85. m/z (FAB) 1132,6 [(M+Na)+, 42], 1110,8 [(M+H)+, 100],
Příklad 61: Syntéza [Aip]3-aplidinu (SNPL1)
SNPL1
Postup je stejný jako pro syntézu SAPLl, vychází z SNPL2 (10 mg, 10,6 μιηοΐ) a Fl (10 mg, 54 pmol). Požadovaná látka (8 mg, 68 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl8, isokratické ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 25x21 mm, při 270 nm, tR = 10,5 a 12,0 min).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,80 - 1,03 (m, 24H), 1,11 - 1,70 (m, 9H), 1,72 - 1,81 (m, 1H), 1,81 - 1,90 (m, 1 Η), 1,90 - 2,24 (m, 6H), 2,30 - 2,39 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,65 (s, 3H), 2,52 - 2,66 (m, 2H), 2,94 (m, 1H), 3,07 (s, 3H), 3,11 (s, 3H), 3,15 - 3,18 (m, 1H), 3,22 3,31 (dd, JI = 4,3, J2 = 15,1, 1H), 3,54 - 3,60 (m, 2H), 3,67 - 3,92 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,98 (m, 1H), 4,13 - 4,29 (m, 3H), 4,45 - 4,75 (m, 4H), 4,81 (t. J = 9,7, 1H), 5,09 (m, 1H), 5,18 (m, 1H), 5,26 - 5,44 (m, 3H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,30 (d, J = 8,3, 1H),
7,36 (d, J = 8,3, 1H), 7,68 (d, J = 9,7, 1H), 7,87 (d, J = 4,3, 1H), 8,09 (d, J = 9,7, 1H), 8,28 (d, J= 10,2, 1H).
ESI-MS vypočteno pro CsTHggNgOu: 1108,64, stanoveno (m/z): 1110,3 (M+H)+.
Příklad 62: Syntéza [Hiv]3-aplidinu (SHPL1)
SHPL1
Postup je stejný jako pro syntézu SAPLl, vychází z SHPL2 (72 mg, 0,081 mmol) a Fl (75 mg, 0,405 mmol). Požadovaná látka (68 mg, 79%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění
-89CZ 304204 B6 bleskovou LC (Lichroprep RPC18, gradient ACN/H2O/TFA 70:30:0,5 až 90:10:0,5). Rf-0,49 (ACN/H2O/TFA 90:10:1).
'HNMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,80 - 1,10 (m, 24H), 1,12- 1,50 (m, 18H), 1,50-2,30 (m, 6H), 2,42 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 2,96 - 3,40 (m, 3H), 3,05 (s, 3H), 3,10 (s, 3H), 3,63 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (m, 1 H), 4,01 (m, 1 H), 4,30 (m, 1 H), 4,63 (m, 1H), 4,69 (m, 1H), 4,86 (m, 1H), 5,02 (d, J = 4,8, 1H), 5,09 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 5,30 (m, 1 H), 6,83 (d, J = 8,3, 2H), 6,89 (d, J = 6,3, 1 H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (d, J = 9,7, 1H), 7,34 (m, 2H), 7,43 (d, J = 5,3, 1 H), 7,74 (d, J = 9,7, 1H), 7,80 (d, J = 10,2, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 14,22, 14,30, 16,49, 16,76, 17,84, 19,17, 21,08, 21,41, 21,54,
22,54, 23,79, 23,94, 24,05, 24,16, 24,82, 24,96, 25,05, 25,98, 26,45, 27,37, 27,57, 28,21, 28,59,
30.31, 30,83, 31,56, 31,62, 33,74, 34,24, 36,02, 36,25, 38,91, 38,96, 39,46, 39,86, 46,92, 48,44,
48,71, 49,06, 54,95, 55,49, 57,16, 57,68, 58,23, 59,13, 66,16, 66,28, 69,10, 70,83, 71,14, 79,12,
114.31, 129,96, 130,12, 130,59, 158,86, 168,69, 168,81, 169,75, 169,82, 170,18, 170,45, 170,52, 170,69, 170,84, 171,21, 171,28, 172,47, 173,17, 174,66, 174,82, 197,63,201,38.
ES-MS vypočteno pro C54H83N7OI4: 1053,60, stanoveno (m/z): 1054,9 (M+H).
Příklad 63: Syntéza [Val]3-aplidinu (SVPL1)
SVPL2
SVPL1
Postup je stejný jako pro syntézu SAPLl, vychází z SVPL2 (IO mg, ll pmol) a Fl (10,5 |mg, 57 pmol). Požadovaná látka (8 mg, 69%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 CIS, isokratická ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, tR = 10,9 a 12,3 min).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,82 - 1,02 (m, 24H), 1,13 - 1,38 (m, 9H), 1,55 (m, 2H), 1,67 1,81 (m, 4H), 1,95 - 2,02 (m, 3H), 2,10 - 2,17 (m, 2H), 2,26 - 2,39 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 2,58 (s, 3H), 2,74 - 2,92 (m, 1H), 3,10 (s, 3H), 3,15 (s, 3H), 3,20 (m, 1H), 3,36 (dd, Ji=4,4, J2 = 14,2, 1H), 3,49 - 3,72 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,97 - 4,13 (m, 2H), 4,38 (dd, Ji = 4,6, J2 = 14,2, 1H), 4,49 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,68 - 4,81 (m, 2H), 5,11 (m, 1H), 5,26 - 5,30 (m, 1H), 5,33 - 5,40 (m, 1H), 6,84 (d, J = 7,8, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,36 - 7,52 (m, 2H), 7,48 (d, J =
9,6, 1H), 7,61 (d, J = 6,8, 1H).
ESI-MS vypočteno pro C54H84NSO13 1052,62, stanoveno (miz): 1053,6 (M+H)+.
-90CZ 304204 B6
Příklad 64: Syntéza [Hiv]3-[isobutyryl]8-didemninu A (SISHPL1)
K roztoku SHPL2, (10 mg, 11,2 μπιοί) v DCM (200 01) při 0 °C v atmosféře Ar, byl přidán DIPEA (3 01, 16,8 pmol) a isobutyryl chloride (1,4 01, 13,4 μιτιοί). Po 3 h při 22 °C, DCM (3 ml) byl přidán a reakční směs byla promyta postupně s vodným roztokem. HU (2 ml, 0.1N), vodným roztokem. NaHCCf (2 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (2 ml), vysušena (Na2SO4) filtrována a zakoncentrována ve vakuu. Přečištění získané směsi proběhlo na HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl 8, isokratická ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 rim, tR = 19 min) požadovaná látka (10 mg, 94%) jako bílá pevná látka.
H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,82 - 1,10 (24H, m), 1,13 - 1,65 (18H, m), 1,72 - 2,58 (6H, m),
2,56 (s, 3H), 2,89 (s, 3H), 2,92 (m, 2H), 3,13 (m, 2H), 3,36 (dd, J1 = 4,6, J2 = 15,6, 1H), 3,54 3,73 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,40 (m, IH), 4,60 (m, IH), 4,89 (m, IH), 4,99 (d, J = 5,3, 1H), 5,03 (m, 1 H), 5,20 (m, 1 H), 6,73 (d, J = 9,3, 1 H), 6,84 (d, J = 9,6, 2H), 7,08 (d, J =
9,6, 2H), 7,55 (d, J = 8,6, 1H), 7,82 (d, J = 11, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDCE) δ 14,63, 15,69, 17,92, 19,03, 19,31, 19,66, 21,03, 22,29, 23,19, 23,85, 24,71, 25,14, 27,27, 28,22, 30,39, 30,51, 31,15, 33,80. 34,25, 35,61, 38,85, 39,63, 46,98, 48,51, 53,29, 53,65, 55,49, 56,01, 56,35, 57,26, 66,07, 69,07, 70,94, 79,33, 114,31, 130,08,
130,60, 158,84, 168,79, 169,75, 170,34, 170,68, 171,36, 171,73, 174,02, 179,84,
ESI-MS vypočteno pro C50H8oN60|2, 956,58, stanoveno (m/z): 957,5 (M+H)+.
Příklad 65: Syntéza [Val]3-[isobutyryl]8-didemninu A (8ISVPL1)
Postup je stejný jako pro syntézu 81SHPL1, vychází z SVPL2 (20 mg, 22,6 μηιοί). Požadovaná látka (19 mg, 88 %) byla získána po přečištění na HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl 82, isokratická ACN/H2O 85:15, průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, tK = 19 min).
-91 CZ 304204 B6 'H NMR (300 MHz, CDC13)5O,81 -1,02 (m, 24 H), 1,14- 1,38 (m, 5H), 1,15 (d, J = 6,6, 3H), 1,19 (d, J = 6,6, 3H), 1,38 - 1,80 (m, 7H), 1,802,40 (m, 6 H), 2,57 (s, 3H), 2,58 - 2,64 (m, 1H), 2,85 - 2,92 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 3,16 (dd, JI = 10,5, J2 = 14,4, 1 H), 3,36 (dd, JI = 4,5, J2 = 14,4, 1H»3,39 (bs, lH),3,56(dd, 1H, J = 4,5, 10,8),3,59-3,72 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,01 (td,
JI = 3,3, J2 = 10,2, 1H), 4,39 - 4,47 (m, 2H), 4,58 (dd, JI = 5,7, J2 = 7,5, 1H), 4,79 (t, J =
9,9 1 H), 5,03 - 5,14 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,4, 2H), 7,04 (d, J = 7,8, 1H), 7,08 (d, J = 8,4, 1H),
7,36 (d, J = 9,0, 1H), 7,45 (d, J = 10,2, 1H), 7,51 (d, J = 10,2, 1H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 175,10, 173,18, 171,14, 170,72, 170,42, 169,38, 168,73, 158,87,
130,60, 130,02, 114,33, 71,31, 70,50, 66,1, 59,47, 57,42, 56,56, 55,51, 54,93, 53,84, 48,83, 47,13, 41,94, 38,94, 35,67, 34,17, 33,63, 31,32, 31,10, 29,96, 28,32, 27,25, 25,30, 25,05, 24,82, 24,01,23,22,21,42, 19,88, 19,72, 11,25, 18,51, 15,60, 14,32, 11,96,
ESI-MS vypočteno pro C5oH8|N7On: 955,60, stanoveno 956,8 (M+H)*.
Příklad 66: Syntéza [Hiv]3-[Butyryl]8-didemninu A (8BSHPL1)
Postup je stejný jako pro syntézu 81SHPL1, vychází z SVPL2 (10 mg, 11,2 μιηοΐ). Požadovaná látka (9 mg, 84 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění by HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl8, isokratická ACN/H2O 85:15, průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, tR = 18,6 min).
H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,11 - 1,72 (m, 18H), 1,75-2,51 (m, 6H),
2,56 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,92 (m, 2H), 3,15 (m, 2H), 3,35 (dd, JI = 5,0, J2 = 15,6, 1H), 3,543,77 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,40 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,89 (m, 1H), 4,98 (d, JI = 6,0, 1H), 5,04 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 6,78 (d, JI = 9,6, 1H), 6,84 (d, JI = 9,6, 2H), 7,08 (d, JI = 9,6,2H), 7,54 (d, J1 = 9,6, 1H), 7,82 (d, J1 = 10,6, 1H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 14,15, 14,55, 15,72, 17,96, 18,67, 19,01, 21,05, 22,37, 23,13, 23,84, 24,71, 25,14, 27,30, 28,21, 29,92, 30,38, 30,63, 33,78, 34,25, 35,69, 35,97, 38,85, 39,61, 46,98, 48,52, 53,27, 55,49, 55,99, 56,25, 57,27, 66,07, 69,07, 70,96, 79,40, 114,31, 130,08, 130,59, 158,85, 168,78, 169,73, 170,42, 170,64, 171,36, 171,65, 174,07, 175,79.
ESI-MS vypočteno pro CsoH8oN6Oi2: 956,60, stanoveno (m/z): 957,8 (M+H)+.
-92CZ 304204 B6
Příklad 67: Syntéza [Hiv]3-[hexanoyl]8-didemninu A (8HSHPL1)
Postup je stejný jako pro syntézu S1SHPL1, vychází z SHPL2 (10 mg, 11,2 pmol), požadovaná látka (9 mg, 82 %) byla získána jako bílá pevná látka, po přečištění pomocí HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, isokratická ACN/H2O 85:15, průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, tR = 27,8 min).
Ή NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,11 - 1,72 (m, 22H), 1,80-2,51 (m, 6H),
2,56 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,93 (m, 2H), 3,14 (m, 2H), 3,35 (dd, Jl = 4,4, J2 = 14,1, IH), 3,54 3,76 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,41 (m, IH), 4,60 (m, IH), 4,88 (m, IH), 4,98 (d,Jl =
5,3, IH), 5,03 (m, IH), 5,19 (m, IH), 6,76 (d, Jl = 8,7, IH), 6,84 (d, Ji = 8,7, 2H), 4,98 (d, Jl =
5,3, IH), 5,03 (m, IH), 5,19 (m, IH), 6,76 (d, Jl = 8,7, IH), 6,84 (d, Ji = 8,7, 2H), 7,08 (d, Jl =
8,7, 2H), 7,51 (d, J1 = 8,8, 1H), 7,81 (d, J1 = 9,7, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 13,94, 14,34, 15,49, 17,73, 18,772 20,811 22,14, 22,46, 22,90,
23,60, 24,47, 24,69, 24,90, 27,08, 27,97, 30,14, 30,40, 31,54., 33,53, 33,76, 34,02, 35,47, 38,62, 39,40, 46,76, 48,28, 53,04, 55,26, 55,78, 55,902 57,04, 65,842, 68,82, 70,72, 79,17, 114,07, 129,84, 130,36, 158,61, 168,542, 169,51, 170,15, 170,41, 171,122, 171,42, 173,86, 175,75.
ESI-MS vypočteno pro C52H84N6O]2: 984,61, stanoveno (m/z): 985,8 (M+H) .
Příklad 68: Syntéza isobutyryl-Pro-OBn
H-Pro-OBn.HCI
NMM/DCM
K roztoku H-Pro-OBn.HCl (500 mg, 2,07 mmol) v DCM (10 ml) při 0 °C, byl přidán v atmosféře argonu NMM (680 μΐ, 6,21 mmol). Po 10 min, byl přidán isobutyrylchlorid (240 μιη, 2,27 mmol) a reakční směs byla temperována na 20 °C a míchána 5 h. Reakční směs byla filtrována a filtrát byl postupně promyt vodným roztokem. HCI (15 ml, IN), vodným roztokem NaHCO3 (10 ml, nasycený roztok), a roztokem soli (10 ml), poté vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby vznikla požadovaná látka 560 mg (98%). Rf = 0,42 (hex:EtOAc 1:1).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,20 - 1,40 (2d, 6H), 1,90 - 2,35 (m, 4H), 2,35 (q, IH), 3,40 3,80 (m, 2H), 4,30 (m, 1H), 5,20 (m, 2H), 7,40 (m, 5H).
-93 CZ 304204 B6
Příklad 69: Syntéza isobutyryl-Pro-OH
H2, Pd-C
MeOH
Isobutiryl-Pro-OH
K roztoku isobutyryl-Pro-OBn (430 mg, 1,56 mmol) v odplyněném MeOH byl přidán Pd/C (10%) (43 mg, 10% w/w) a poté postupně převrstven Ar a probublán vodíkem. Reakční směs byla míchána v atmosféře H2 14 h poté odplyněna a filtrována. Roztok byl zakoncentrován a získaná směs byla krystalizována v MTBE/hex tak, aby vzniklo 140 mg (48 %) požadovaného produktu jako bílá pevná látka.
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,20 (m, 6H), 1,90 - 2,10 (m, 3H), 2,50 (m, 1H), 2,70 (q, 1H),
3,40 - 3,70 (m, 2H), 4,60 (dd, 1H).
ESI-MS vypočteno pro C9Hi5NO3: 185,11, stanoveno (m/z): 186,1 (M+H)+.
Příklad 70: Syntéza [Hiv]3-[isobutyryl]9-aplidinu (9ISHPL1)
DIPCDl
DCM
K roztoku Isobutyryl-Pro-OH (10 mg, 54 μιηοΐ) v DCM (150 μΐ) při 0 °C, byl přidán DIPCDl (5 μΐ, 32 μητοΙ). Míchání pokračovalo 60 min a poté byla reakční směs přenesena do nádoby obsahující SHPL2 (10 mg, 11,2 μιηοΐ) v DCM (150 μΐ). Po 4 dnech při 2 až 4 °C byla reakční směs naředěna DCM (2 ml) a promyta postupně vodným roztokem HCI (1 ml, 0,1 N), vodným roztokem. NaHCO3 (1 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (1 ml), organická fáze byla vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována. Získaná směs byla přečištěna pomocí HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, isokratická RCN/H2O 85:15, průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, tR = 13 a 14 min) aby vznikl požadovaný 9ISHPL1 (9 mg, 72%) jako bílá pevná látka.
'HNMR (300 MHz, CDC13) δ 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,12- 1,50 (m, 18H), 1,52-2,70 (m, 10H),
2,56 (s, 3H), 3,00 - 3,44 (m, 4H), 3,08 (s, 3H), 3,55 - 3,72 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 4,00 (m, 3H), 4,26 (m, 1H), 4,62 (m, 2H), 4,86 (m, 1H), 5,02 (d, J = 5,3, 1H), 5,30 (m, 2H), 6,84 (d, J = 9,0, 2H), 7,07 (d, J = 9,0, 2H), 7,29 (d, J = 11 -0, 1H), 7,80 (d, J = 9,0, 1H); 7,88 (d, J = 11, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 14,44, 16,9 1, 17,94, 18,96, 19,03, 19,15, 21,07, 21,59, 23,87, 24,10, 24,89, 25,08, 26,04, 27,54, 28,21, 28,87, 30,33, 31,61, 32,64, 33,77, 34,24, 36,19, 39,07, 39,33, 39,81, 46,87, 47,52, 48,45, 54,74, 55,49, 56,20, 57,08, 58,50, 66,41, 69,13, 71,48, 79,16, 114,27, 130,30, 130,59, 158,80, 168,55, 169,88, 170,86, 171,06, 171,22, 173,63,174,92, 176,19.
-94CZ 304204 B6
ESI-MS vypočteno pro C55H87N7O|3: 1053,64, stanoveno (m/z): 1054,6 (M+H)+.
Příklad 71: Syntéza [Val]3-[isobutyryl]9-aplidinu (91SVPL1)
DIPCDI
DCM
Postup je stejný jako pro syntézu 9ISHPL1, vychází z SVPL2 (10 mg, 11,2 pmol), požadovaná látka (9 mg, 77%) byla získána jako bílá pevná látka pro přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl8, isokratická ACN/H2O 85:15, průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 rim, tR = 15,3 min).
Ή NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,82 - 1,01 (m, 24H), 1,14-1,37 (m, 12H), 1,148 - 2,35 (m, 8H), 2,55 (s, 3H), 2,57 - 2,68 (m, 1H), 2,77 - 2,83 (m, 1H), 3,12 (s, 3H), 3,19 - 3,23 (m, 1H), 3,35 3,41 (m, 2H), 3,52 - 3,56 (m, 1H), 3,58 - 3,70 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,03 - 4,13 (m, 1H), 4,33 4,35 (m, 1H), 4,44 - 4,48 (m, 1H), 4,55 - 4,66 (m, 2H), 4,70 - 4,83 (m, 1H), 5,35 - 5,39 (m, 2H),
6,82 (d, J = 8,4, 2H), 7,06 (d, J = 8,4, 2H), 7,25 (bs, 2H), 7,37 (d, 10, 5, 1 H), 7,46 (d. J = 8,7, 1 H), 7,60 (d, J = 9,3, 1 H), 8,07 (bs, 1 H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 12,10, 14,44, 16,84, 18,63, 18,95, 19,92, 21,31, 21,61, 23,91, 24,05, 24,86, 25,00, 25,30, 26,06, 27,41, 28,33, 28,93, 30,00, 31,76, 32,65, 33,59, 31,16, 36,21, 39,17, 41,71, 42,19, 47,08, 47,57, 48,88, 54,37, 54,65, 55,50, 56,15, 57,33, 58,70, 59,33, 66,45, 70,92, 71,54, 114,29, 130,28, 130,59, 158,82, 168,41, 170,08, 170,52, 170,69, 171,03, 172,65,
173,80, 175,68, 176,42.
ESI-MS vypočteno pro C55H88N8O]2: 1052,65, stanoveno (m/z): 1053,8 (M+H).
Příklad 72: Syntéza Z-NV a-Pro-OMe
ftH-Z
H-Pro-OMe.HCI Z-NVa-OH
DCC/HOBt/NMM
DCM / DMF
Postup je stejný jako pro syntézu F2 z ZNVa-OH (261 mg, 1,04 mmol), H-Pro-OMe.HCI (156,6 mg, 0,94 mmol), požadovaná látka (315 mg, 87%) byla získána jako bezbarvá olejovitá kapalina po přečištění na LC-silikagelu (hex-EtOAc, gradient 3:1 až 1:1). Rf= 0,42 (hexEtOAc 1:1).
Ή NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,97 (t, J = 6,9, 2H), 1,44 (six. J = 7,5, 2H), 1,53 - 1,65 (m, 1H), 1,68- 1,77 (m, 1H), 1,82-2,09 (m, 3H), 2,17-2,24 (m, 1H). 3,43 -3,80 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 4,45 - 4,55 (m, 2H), 5,07 (s, 2H), 5,51 (d, J = 8,4, 1H), 7,32 - 7.35 (m, 5H).
-95 CZ 304204 B6
| Příklad 73: SyntézaNVa-Pro-OH | ||
| 0 NH-Z | LiOH/THF | 0 NH-Z |
| MeOH-H2O | ||
| Z-NVa-Pro-OMe | Z-NVa-Pro-OH |
K roztoku Z-NVa-Pro-OMe (36 mg, 99 μιηοΐ) ve směsi THF a MeOH (130 μΐ: 130 μΐ) při 0 °C, by) přidán vodný roztok UOH (130 μΙ, 15 % hmotnosti). Po 6 h stálého míchání byla reakční směs rozdělena mezi H2O (3 ml) a diethyléther (3x2 ml). Organická fáze byla poté extrahována pomocí NaHCOj (3x 2 ml). Smíchané vodné fáze byly neutralizovány (f= 5) vodným roztokem HC1 (0,1 N) a rozděleny mezi Et2O (3x3 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována tak, aby vznikla požadovaná látka (36 mg) jako bezbarvá olejovitá kapalina.
'H NMR (300 MHz, CDClj) δ 0,96 (t, J = 6,9, 2H), 1,41 (six, J = 7,4, 2H), 1,53 - 1,65 - 1,77 (m, 2H), 1,82 - 2,10 (m, 3H), 2,17 - 2,24 (m, 1H), 3,523,81 (m, 2H), 4,45 - 4,58 (m, 2H), 5,07 (bs, 2H), 5,81 (d, J = 8,4, 1H), 7,307,35 (m, 5H), 7,41 (bs, 1H).
EST-MS vypočteno pro C|8H24N2O5: 347,17, stanoveno (m/z): 349,2 (M+H).
Příklad 74: Syntéza [ZNVa-Pro]9-aplidinu (9NVSAPL2)
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL1, vychází z SAPL2 (18 mg, 19 pmol) a Z-NVa-Pro-OH (34 mg, 97 pmol), požadovaná látka (16 mg, 66%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, isokratická ACN/H2O 85:15 průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, tR = 29 min).
’H NMR (300 MHz, CDClj) δ 0,84 - 0,96 (m, 27H), 1,12 - 1,85 (m, 19H), 2,00-2,25 (m, 7H), 2,30 - 2,40 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,62 (dd, JI = 10,5, J2 = 17,7, 1H), 2,93 (d, 4,2, 1H), 3,14 (s, 3H), 3,14 - 3,20 (m, 1H), 3,28 - 3,34 (m, 2H), 3,50 - 3,67 (m, 4H), 3,77 - 3,80 (m, 1H), 3,79 (s,3H), 3,82-3,91 (m, 1 H), 4,00-4,17 (m, 2H), 4,27 (dd, JI = 6,3, J2 = 13,2, 1 H), 4,43-4,51 (m, 2H), 4,58 - 4,63 (m, 1H), 4,69 - 4,75 (m, 1H), 4,77 - 4,82 (m, 1H), 5,07 (d, 1H, J = 12,9, 2H), 5,13 (d, J = 12,9, 1H), 5,32 - 5,41 (m, 2H), 6,07 (d, J = 8,7, 11-1), 6,83 (d, J = 8,4, 2H), 7,06 (d, J = 8,4, 2H), 7,17 (d, J = 9,9, 1 H), 7,32 (m, 5H), 7,83 (d, J = 9,0, 1 H).
L’C NMR (75 MHz, CDClj) δ 11,67, 13,74, 14,56, 15,24, 16,39, 16,85, 18,61, 20,94, 21,26, 23,34, 23,70, 24,76, 24,90, 25,02, 26,00, 27,17, 27,81, 28,54, 31,29, 31,40, 33,30, 33,85, 33,86,
-96CZ 304204 B6
36,19, 38,62, 38,84, 41,31, 46,91, 47,21, 49,38, 49,49, 52,50, 54,96, 55,24, 55,25, 56,50, 57,17, 57,96, 62,53, 66,40, 67,93, 70,64, 81,37114,04, 127,89, 127,77, 128,32, 129,97, 130,29, 136,84, 156,72, 158,55, 168,48, 169,36, 169,58, 170,52, 171,27, 171,71, 172,54, 173,22,205,08.
EST-MS vypočteno pro C67Hi00N8Oi6: 127,73, stanoveno (m/z): 1273,7 (M+H)\
Příklad 75: Syntéza [Hiv]3-[Z-NVa-Pro]9-aplidinu (9NVSHPL2)
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL1, vychází z SHPL2 (10 mg, 11,2 μιτιοί), a Z-NVa-ProOH (20 mg, 56 μηιοί), požadovaná látka (8 mg, 60%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, isokratická ACN/H2O 85:15 průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, tR = 26,7 min).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,12-1,80 (m, 22H), 1,82 -2,35 (m, 6H),
2,42 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,96 - 3,38 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,48 - 3,72 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 3,88 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 4,68 (m, 2H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, JI =
5,3, 1 H), 5,08 (m, 2H), 5,28 (m, 1H), 5,42 (m, 1H), 6,10 (d, J = 8,3, 1 H), 6,84 (d, J = 8,3, 2h), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,31 (m, 6H), 7,72 (d, J = 4,3, 1 H), 7,78 (d, J = 8,7, 1 H).
13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 12,06, 13,88, 14,22, 16,85, 17,76, 18,89, 19,18, 21,12, 21,47, 23,72, 23,98, 25,08, 26,25, 27,57, 28,15, 28,79, 30,32, 31,61, 33,45, 33,72, 34,07, 35,95, 38,92, 39,59, 39,90, 46,87, 47,44, 48,46, 52,76, 55,21, 55,49, 56,77, 57,17, 58,37, 66,41, 66,65, 69,22,
71,14, 79,07, 114,24, 127,87, 128,00, 128,56, 130,25, 130,55, 157,00, 158,79, 168,82, 169,86, 170,36, 170,58, 170,77, 171,30, 171,86, 173,28, 174,94.
ESI-MS vypočteno pro C64H96N8Oi5 1216,7, stanoveno m/z: 1217,5 (M+H)].
Příklad 76: Syntéza [NVa-Pro]9-aplidinu (9NVSAPL1)
9NVSAPL2
9NVSAPL1
Odplyněná směs z 9NVSAPL2 (10 mg, 7,8 μιηοΐ) a Pd/C (10%, 5 mg) a IPA:H2O (0,2 ml:0,l ml), byla nasycena (a udržována při l atm) v atmosféře vodíku za stálého míchání po
-97CZ 304204 B6 dobu 14 h. Poté byla reakční směs filtrována (teflon 0,45 pm) a zakoncentrována ve vakuu tak, aby byla získána požadovaná látka (8,8 mg) jako bílá pevná látka.
'HNMR (300 MHz, CDCfl) δ 0,85 - 0,95 (m, 27H), 1,18 ~ 1,51 (m, 18H), 1,50 -2,45 (m, 7H), 2,59 - 2,83 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,57 - 2,80 (m, 3H), 2,81 - 2,95 (m, 1H), 3,14 (s, 3H), 3,15 3,40 (m, 3H), 3,52-3,79 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 4,45 - 4,52 (m, 1 H), 4,61 -4,65 (m, 1H), 4,704,85 (m, 2H), 5,17 (d, J = 3,3, 1H), 5,36 - 5,39 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,1, 2H), 7,86 (d, J = 8,7, 2H), 7,19 (d, J = 10,2, 1H), 7,82 (d, J = 9,0 1H), 7,80 - 7,85 (m, 1 H).
ESI-MS vypočteno pro C5994oN8Oi4: 1 138,69, stanoveno (m/z): 1139,7 [(M+H)]*.
Příklad 77: Syntéza [HiV]3-[NVa-Pro]9-aplidinu (9NVSHPL1)
Postup je stejný jako pro syntézu 9NVSAPL1, vychází z 9NVSHPL2 (10 mg, 8,2 pmol), požadovaná látka (8 mg) byla získána jako bílá pevná látka.
'HNMR (300 MHz, CDC13) δ 0,82 - 1,10 (m, 30H), 1,12- 1,85 (m, 22H), 1,92 - 2,35 (m, 6H),
2,42 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,10 - 3,45 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,50 - 3,70 (m, 5H), 3,78 (s, 3H),
3,82 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 5,02 (d, J = 5,3, 1H), 5,32 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,38 (d, J = 8,7, 1H), 7,60 (d, J = 4,3, 1H), 7,80 (d, J = 9,3, 1H).
‘’C NMR (75 MHz, CDC13) δ 14,13, 14,30, 16,80, 17,81, 18,72, 19,15, 21,09, 21,55, 23,73, 23,96, 25,07, 26,16, 27,55, 28,17, 28,72, 29,91, 30,33, 31,52, 33,80, 34,17, 36,00, 38,94, 39,51, 39,84, 46,88, 47,51, 48,45, 55,01, 55,49, 56,91, 57,15, 58,10, 66,37, 69,17, 71,10, 79,12, 114,29, 130,21, 130,57, 158,82, 163,66, 169,91, 169,86, 170,38, 170,75, 170,82, 171,30, 173,22, 174,79.
ESI-MS vypočteno pro C56H9oN8013 1082,66, stanoveno m/z: 1083,7 (M+H)+.
Příklad 78: Syntéza [HivV]3-[L-Lac(OTBDMS)]9-aplidinu [9LSHPL2(L)].
9LSHPL2(L)
SHPL2
-98CZ 304204 B6
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL1, vychází z SHPL2 (10 mg, ll,2pmol) a (L)Lac(OTBDMS)-Pro-OH (17 mg, 56 μιηοΐ), požadovaná látka (9 mg, 68%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl8, gradient ACN/H?O 85:15 až 100:0 v 10 min. (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, tR = 30,1 min).
lH NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,08 (s, 3H), 0,10 (s, 3H), 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,11 - 1,72 (m, 18H), 1,75-2,51 (m, 6H), 2,41 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,00 - 3,40 (m, 5H), 3,11 (s,3H), 3,53 - 3,82 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,02 (m, 1H). 4,27 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,63 (m, 2H), 4,87 (m, 1H), 5,01 (d, J = 4,8, 1H), 5,27 (m, 2H), 6.84 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,7, 2H), 7,29 (d, J = 9,7, 1H), 7,63 (d, J = 5,8, 1H), 7,88 (d, J = 9.7, 1H).
I3C NMR (75 MHz CDC13) δ -4,26, -4.12. 12,04, 14,40, 16,91, 17,97, 19,14, 20,60, 21,11, 21,66, 23,82, 24,11, 24,96, 25,08, 26,11, 26,37, 27,53, 28,18, 28,37, 30,33, 31,69, 33,75, 34,19, 36,23, 39,00, 39,36, 39,81, 46,87, 47,64, 48,45, 54,91, 55,37, 55,48, 56,81, 57,08, 58,37, 66,38,
69,14, 69,89, 71,42, 79,19, 82,66, 114,23, 130,36, 130,59, 157,77, 168,43, 469,86, 170,72, 171,01, 171,21, 172,03, 173,62, 174,91.
ESI-MS vypočteno pro C6oH99N7Oi4Si: 1169,7, stanoveno m/z: 1170,9 (M+H) .
Příklad 79: Syntéza [Hiv]3-[D-Lac(OTBDMS)]9-aplidinu [9LSHPL2(D)]_
SHPL2
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL1, vychází z SHPL2 (10 mg, 11,2 pmol) a (D)Lac(OTBDMS)-Pro-OH (17 mg, 56 μιτιοί), požadovaná látka (9 mg, 68%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl8, gradient ACN/H2O 85:15 až 100:0 v 10 min (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, tR = 30,4 min).
Ή NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,03 (m, 3H), 0,06 (m, 3H), 0,87 (s, 9H), 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,11 - 1,72 (m, 18H), 1,75 -2,30 (m, 6H), 2,41 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,00 - 3,40 (m, 5H), 3,06 (s, 3H), 3,56 (m, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,39 (m, 1 H), 4,61 (m, 2H), 4,86 (m, 1 H), 5,00 (d, J = 4,8, 1H), 5,25 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (d, J = 9, 7, 1H), 7,74 (d, J = 5,3, 1H), 7,87 (d, J = 9,7, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) 8 -4,87, -4,84, 12,04, 14,38, 16,89, 17,94, 19,14, 20,24, 21,08, 21,60, 23,85, 24,12, 24,90, 25,06, 25,13, 26,01, 26,53, 27,53, 27,83, 28,20, 30,33, 31,51, 33,76, 34,20, 36,16, 38,99, 39,35, 39,82, 46,78, 47,02, 48,46, 54,79, 55,42, 55,48, 57,08, 57,18, 58,28, 66,39, 69,11, 71,43, 72,61, 79,18, 114,25, 130,29, 130,59. 158,79, 168,45, 169,86, 170,77,
170,81, 170,97, 171,20, 172,53, 173,67, 174,84.
ESI-MS vypočteno pro C6oH99N7Oi4Si: 1169,7, stanoveno m/z: 1170,8 (M+H)}.
-99CZ 304204 B6
Příklad 80: Syntéza [Val]3-[L-Lac(OTBDMS)]9-aplidinu (9LSVPL2(L)].
SVPL2
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL1, vychází z SVPL2 (10 mg, 11,2 pmol) a (L)Lac(OTBDMS)-Pro-OH (17 mg, 56 pmol), požadovaná látka (9 mg, 68%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl8, isokratická ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, tR = 17,8 min).
'HNMR (300 MHz, CDCl·,) δ 0,14 (s, 6H), 0,71 - 1,06 (m, 27H), 1,101,42 (m, 1 OH), 1,43-1,84 (m, 8H), 1,85 - 2,40 (m, 1 IH), 2,57 (s, 3H), 2,80 (d, J = 14,7, 1 H), 3,15 (s, 3H), 3,15 - 3,23 (m, 1 H), 3,33 - 3,42 (m, 2H), 3,54 (dd, JI = 4,2, J2 = 10,8, 1 H), 3,58 - 3,69 (m, 3 H), 3,79 (s,
3H), 3,88 - 3,90 (m, 1 H), 4,05 - 4,12 (bt, 1 H), 4,32 (bs, 1 H), 4,43 - 4,68 (m, 4H), 4,77 (t,
J = 10,5, IH), 5,31 - 5,35 (m, 2H), 6,83 (d, J = 8,4, 2H), 7,08 (d, J = 8,7, 2H), 7,39 (d, J = 9,9,
1H), 7,45 (d, J = 9,0, 1H), 7,60 (d, J = 10,5, 1H), 7,83 (d, J = 4,5, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDCE) δ -4,67, -4.49, 11,84, 14,13, 16,67, 18,19, 18,41, 19,68, 20,48,
21,15, 21,40, 23,61, 23,92, 24,72, 24,80, 25,06, 26,24, 27,17, 28,04, 28,13, 29,78, 31,57, 33,33,
33,81, 35,99, 38,84, 41,56, 41,95, 46,83, 47,52, 46,68, 54,09, 54,64, 55,26, 56,63, 57,13, 58,36, 59,12, 66,20, 70,10, 70,57, 71,27, 77,20, 114,01, 130,13, 130,36, 158,55, 168,09, 169,76, 170,07, 170,48, 170,77, 172,21, 172,33, 173,58, 175,45.
EST-MS vypočteno pro 05994οΝ8Οΐ4: 1 168,72, stanoveno (m/z): 1169,8 (M+H)+.
Příklad 81: Syntéza [Hiv]3-[L-Lac]9-aplidinu [9LSHPL1(L)]: Tamandarin A.
9LSHPL2(L) 9LSHPL1(L)
K roztoku 9LSHPL2(L) (16 mg, 14 pmol) v THF (500 pml, bezvodý) při 0 °C byla reakční směs zakoncentrována ve vakuu a surový produkt byl přečištěn bleskovou LC (silikagel, gradient DCM:MeOH 1 až 5 %), tak, aby byla získána požadovaná látka (813 mg, 88 %) jako bílá pevná látka.
Experimentální podmínky byly publikovány: Fenical, W. et al., J. Org. Chem. 2000, 65, 782792.
- 100CZ 304204 B6 'H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,82 - 0,96 (m, 18H), 1,02 (d, J = 3,4, 3H), 1,04 (d, J = 3,4, 3H), 1,14- 2,28 (m, 14H), 1,24 (s, 3H), 1,34 (d, J = 6,8, 3H), 1,43 (d, J = 6,8, 3H), 2,44 (dd, J1 =7,8, J2= 17,1, 1H), 2,58 (s,3H), 3,00 (bs, 1H), 3,10 (s, 3H), 3,14 - 3,31 (m, 2H), 3,37 - 3,43 (m, 2H), 3,56 - 3,72 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,90 (t, J = 7,8, 1H), 4,02 (dt, JI = 3,4, J2 = 9,8, 1H), 4,25 (d, J = 3,9, 1H), 4,30 (t, J = 6,8, 1H), 4,37 (dd, JI = 7,3, J2 = 8,3, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,71 (t, J = 7,4, 1H), 4,87 (t, J = 11,2, 1 H), 5,03 (d, J = 4,9, 1 H), 5,29 (dd, JI = 3,4, J2 = 11,7, 1 H), 5,42 (m, 1 H), 6,83 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,34 (d, J = 9,8, 1H), 7,48 (d, J = 5,4, 1H), 7,76 (d, J = 9,8, 1H).
ESI-MS vypočteno pro C54H85N7Oi4: 1055,6, stanoveno: 1056,7 (M+H)+.
Příklad 82: Syntéza [Hiv]3-[D-Lac]9-aplidinu [9LSHPL1(D)|.
9LDSHPL2 9LSHPL1(D)
Postup je stejný jako pro syntézu 9LSHPLl(L), vychází z 9LSHPL2(D) (20 mg, 17 pmol) a TBAF (50 pl, ÍM v THF), což dá vzniknout požadovanému produktu (14 mg, 78 %) jako bílá pevná látka, po přečištění bleskovou LC (silikagel, grád. DCM:MeOH l až 5 %).
'HNMR (300 MHz, CDCl3) δ 0,78 - l,08 (m, 18H), 1,02 (d. J = 3,9, 3H), 1,04 (d, J = 3,4, 3H), 1,10 - 2,36 (m, 14H), 1,20 (d, J = 6,3, 3H), 1,34 (d, J = 6,3, 3H), 1,37 (d, J = 6,3, 3H), 2,38 2,50 (dd, JI = 7,8, J2 = 17,5, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,10 (s, 3H), 3,13 - 3,20 (m, 1H), 3,22 - 3,28 (m, 1H), 3,37 - 3,42 (dd, JI =3,9, J2 = 4,3, 1H), 4,61 -4,68 (m, 3H), 3,69 - 3,76 (m, 3H), 3,77 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (t, J = 7,8, 1H), 3,97 - 4,07 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,41 (q, J = 6,3, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,71 (m, 1H), 4,86 (t, J= 10,7, 1H), 5,01 (d, J = 4,8, 1H), 5,21 -5,37(m,2H),
6,83 (d, J = 8,3, 2H), 7,06 (d, J = 8,3, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,77 (d, J = 9,2, 1H).
ESI-MS vypočteno pro C54H85N7Oi4: 10,55,62, stanoveno: 1056,6 (M+H)+.
Příklad 83: Syntéza [VaI]3-[L-Lac]9-aplidinu [9LSVPL1(L)].
9LSVPL2 9LSVPL1(L)
Postup je stejný jako pro syntézu 9LSHPL1, vychází z 9LSVPL2 (5 mg, 4,3 pmol), což dá vzniknout požadovanému produktu (4 mg, 88 %) jako bílá pevná látka, po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient DCM:MeOH l až 5 %).
- ΙΟΙ CZ 304204 B6 'HNMR (300 MHz, CDClfi δ 0,82 - 1,02 (m, 18H), 1,16 - 1,42 (m, 4H), 1,32 (d, J = 3,0, 3H), 1,40 (d, J = 6,6, 3H), 1,56 - 1,83 (m, 8H), 1,95 - 2,34 (m, 11H), 2,58 (s, 3H), 2,84 (d, J = 14,7, IH), 3,15 (s, 3H), 3,15 - 3,23 (m, M), 3,36 - 3,42 (m, IH), 3,55 (dd, Jl = 9,0, J2 = 10,5, 2H), 3,64-3,66 (m, 3 H), 3,95 (dd, Jl = 3,3, J2 = 9,9, 1H),4,O8 (td, Jl = 7,5, J2 = 17,1, IH), 4,32 (bs, M), 4,41 (dd, Jl = 6,6, J2 = 9,9, IH), 4,48 (dd, Jl = 5,1, J2 = 10,5, IH), 4,61 (dd, Jl = 6,0, J2 = 6,6, IH), 4,69 - 4,80 (m, 2H), 5,29 - 5,35 (m, IH), 5,57 (m, IH), 6,84 (d, J = 8,1,2H), 7,08 (d, J = 8,7, 2H), 7,37 (d, J = 3,9, IH), 7,40 (d, J = 5,4, M), 7,60 (d, J = 10,8, 1 H), 7,72 (d, J = 3,9, IH).
ESI-MS vypočteno pro C54H86N8O|3: 1054,63, stanoveno: 1055,8 (M+H)+.
Syntéza jednotky spiro[4,4]nonanu:
Příklad 84: Syntéza N-[(2R)-2-allyl-N-(tert-butoxykarbonyl)prolyl]D-leucinu (9)
i
Boc
D-Leu-OBn.HCi
HOAt/DCC/NMM
K vychlazenému (0 °C) roztoku č.8 (1,53 g, 6 mmol) v bezvodém DCM (33 ml) v atmosféře argonu, byl přidán: HOat (980 mg, 7,2 mmol), D-Leu-OBn.pTsOH (2,65 g, 12 mmol), NMM (1,21 g, 12 mmol) a DCC (1,48 g, 7,2 mmol). Reakční směs byla míchána 2 h při 0 °C a poté 12 h při pokojové teplotě, byl přidán další D-Leu-OBn.pTsOH (0,66 g, 3 mmol) a NMM (0,30 g, 3 mmol) a reakční směs byla míchána 3 h. Reakční směs byla filtrována a rozpouštědlo bylo zakoncentrováno ve vakuu. Získaná směs byla rozpuštěna v EtOAc (30 ml) a promyta postupně NaHCO3 (2x25 ml, nasycený roztok), kyselina citrónová (2x25 ml, 10 %) a roztokem soli (25 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4) a zakoncentrována za sníženého tlaku. Získaná směs byla přečištěna LC-silikagelem (hex-EtOAc, 6:1) tak, aby vznikl požadovaný produkt č. 9 (2,63 g, 96 %) jako bezbarvá olejovitá kapalina. [a]D 20 = 12,4° (c 1, MeOH). HPLC (kolona pBondapack Cl8 (Waters), 10 m, 3,9x300 mm, průtok: 1 ml/min, při 214 nm, promývací směs CAN/0,05% TFA (40:60)] tR = 9,08 min).
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) S 0,86 (m, 6H), 1,37 (s, 9H), 1,551,72 (m, 5H), 2,00 (m, 2H), 2,64 (m, IH), 2,86 (m, IH), 3,15 (m, IH), 3,55 (m, 1H), 4,41 (m, IH), 5,05 - 5,11 (m, 4H), 5,63 -5,72 (m, IH), 7,28 - 7,35 (m, 5H).
i3C-NMR (75 MHz, aceton-d6) δ 21,6, 22,8, 24,6, 28,3, 34,7, 38,2, 41,3, 49,38, 51,0, 66,9, 69,7, 80,1, 119,1, 128,3, 132,7, 153,9, 172,8.
Citace pro syntézu produktu č.8: a) Seebach, D. et al. J. Am. Chem. Soc. 1983, 105, 5390-5398, b) Genin, M. J. et al., J. Org. Chem. 1993, 58, 23342337.
- 102CZ 304204 B6
Příklad 85: Syntéza (5/<8/?5j-l-(Ztv7-butoxykarbonyl|-7-[(l R)-l-benzyloxykarbonyl-3methylbutyl]-8-hydroxy-6-oxo-l ,7diazospiro[4,4]nonan (10)
OsO4 / NalO4
MeOH/H2O (2/1)
CO2Bn
K roztoku č. 9 (l,56, 3,42 mmol) v MeOH/H2O (2:1, 108 ml) v atmosféře argonu, byl přidán roztok OsO4 (2,5% hmotnosti, 2,9 ml) v tert-butanolu. Míchání pokračovalo dalších 10 min a poté byl přidán NaIO4 (2,195 g, 10,3 mmol). Po 24 h míchání byla reakční směs naředěna H2O (100 ml) a extrahována pomocí EtOAc (3x50 ml). Smíchané organické fáze byly promyty roztokem soli (50 ml), vysušeny (Na2SO4) a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Získaná směs byla přečištěna LC silikagelem (hex-EtOAc, gradient 80:20 až 0:100 %) tak, aby vznikly požadované diastereomery s 10a a 10b (směs 1,17 g, 76%) jako bílá pevná látka.
10a: HPLC (kolona Novapack C,8 (Waters), 3,9 x 150 mm, 00 = 1 ml / min, 0 = 214 nm, promývací roztok: CH3CN / 0,05 % TFA, (40/60)) tR = 14,45 min. m.p.: 140 až 141 °C. [a]D 20-4° (c 1, MeOH).
1 H-NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 0,90 (m, 6H), 1,29 (s, 9H), 1,642,30 (m, 9H); 2,68 (dd, IH, JI = 6, J2 = 13, IH), 3,37 (m, 2H), 4,51 (dd, IH), 5,13 (d, J = 15, 2H), 5,79 (t, J = 5, 2H), 7,40 (m, 5H).
i3C-NMR (75 MHz, aceton-d6) δ 21,8, 23,8, 24,1, 24,9, 28,5, 39,6, 40,8, 41,5, 48,5, 66,8, 79,4,
79.8, 81,2, 129,1, 129,3, 128,6, 171,7, 172,0,
ESI-MS: vypočteno pro C25H36N2O6: 460,26, stanoveno m/z: 483,4 (M+Na).
10b: HPLC (kolona Novapack C|g (Waters), 3,9x150 mm, 00 = 1 ml / min, 0 = 124 nm, promývací roztok: CH3CN / 0,05 % TFA, (40/60)) tR = 18,75 min. M.p.: 134 až 135 °C. [cc]D 20 +26 (c 1,2, MeOH).
'H-NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 0,90 (6H, m), 1,40 (9H, s). 1,50 - 2,60 (9H, m), 3,40 (2H, m), 4,20 - 5,40 (5H, m), 7,40 (5H, m).
13C-NMR (75 MHz, aceton-d6) δ 021,3, 23,2, 24,1,24,9, 28,3, 38,9, 40,2, 42,5, 47,9, 53,2,
66.8, 77,5, 79,4, 80,6, 129,1, 171,2, 174,1.
ESI-MS vypočteno pro C^K^^CE: 460,26, stanoveno m/z: 483,5 (M+Na).
- 103 CZ 304204 B6
Příklad 86: Syntéza (5R,)-7-[(lR)-l-benzyloxykarbonyl-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7-diazospiro-[4,4]nonanu jako trifluoroctové soli (11)
K roztoku č. 10 (430 mg, 0,93 mmol) v TFA (10 ml), byl přidán NaBH4 (106 mg, 2,8 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 2 h a poté byla zakoncentrována za sníženého tlaku. Získaná směs byla rozdělena mezi H2O (5 ml) a DCM (20 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4) a zakoncentrována ve vakuu tak, aby vznikl požadovaný produkt č. 11 jako oranžová olejovitá kapalina (318 mg). [α]20ο +15 (c 1, MeOH).
'H-NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 0,91 (m, 6H), 1,50 (m, IH), 1,66 - 1,94 (m, 2H), 2,11 - 2,72 (m, 6H), 3,48 - 3,72 (m, 4H), 4,74 (dd, J1 = 6, J2 = 15, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,37 (m, 5H).
13C-NMR (75 MHz, aceton-d6) δ 21,2, 23,2, 23,9, 25,5, 30,2, 34,6, 38,0, 42,2, 46,62, 53,9, 67,6. 69,6, 129,3, 161,1, 161,6, 170,9, 172,6
ESI-MS vypočteno pro C20H28N2O3: 344,21, stanoveno m/z: 345,3 (M+H)+.
Příklad 87: Syntéza (SR)-l-(/e/V-butoxykarbon\l)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxol,7-diazospiro[4,4]nonanu (12)
K roztoku č. 11 (150 mg, 0,44 mmol) v ACN (5 ml), byl přidán za stálého míchání tetramethylammoniumhydroxylpentahydrát (158 mg, 0,87 mmol) a Boc2O (144 mg, 0,66 mmol). Po 6 h byl přidán další TMAH.5 H2O (158 mg) a Boc2O (192 mg). Reakční směs byla míchána po dobu 2 dní a poté byla rozdělena mezi H2O (10 ml) a DCM (25 ml). Vodné fáze byly lyofilyzovány a přečištěny na LC-silikagelu (DCM-MeOH, gradient 92:8 až 60:40) tak, aby byl získán produkt č. 12 (100 mg, 64%) jako bílá pevná látka.
Příklad 88: Syntéza (SR)-l-(isobutyryI)-7-[(l R)-l-benzyloxykarbonyl-3-methyIbutyl]-6oxo-1,7-diazospiro [4,4]nonanu (13)
TFA
CO2Bn (CH3)2CHCOCl tea/ch2ci2
- 104CZ 304204 B6
K roztoku č. 11 (169 mg, 0,49 mmol) v bezvodém DCM (10 ml) při 0 °C v atmosféře argonu, byl přidán TEA (199 mg, 1,96 mmol), DMAP (6 mg, 0,049 mmol) a po kapkách isobutyryl chloride (104 mg, 0,98 mmol). Reakční směs byla vytemperována na pokojovou teplotu a míchána 24 h. Surová směs byla rozdělena mezi H2O (10 ml) a DCM (10 ml). Organická fáze byla promyta roztokem soli (10 ml) vysušena (Na2SO4) a zakoncentrována ve vakuu. Čistý produkt č. 13 (150 mg, 74 %) byla získána jako bílá pevná látka, po přečištění pomocí LC-silikagelu (hexEtOAc, gradient 60:40 až 0:100).
HPLC [kolona Novapack C|8 (Waters), 3,9 x 150 mm, 00 = lml / min, 0=214 nm, promývací roztok: CH3CN / 0,05 % TFA, (50/50)] tR = 4,50 min. M.p.: 87 °C. [a]20D + 9,6 (c 1,4, MeOH).
'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,90 (2d, J = 7, 6H), 1,09-1,12 (2d, 6H), 1,37 (septuplet, J = 6, IH), 1,61-2,10 (m, 7H), 2,64 (m, 2H), 3,14 (dd, JI =9, J2 = 17, IH), 3,64 (m, 3H), 4,85 (dd, J1 = 5, J2 = 10, 1H), 5,14 (d, J = 6, 2H), 7,32 (m, 5H).
’3C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 18,6, 18,7, 021,2, 23,1, 24,0, 24,8, 29,5, 32,5, 35,7, 37,6, 40,5,
47,8, 52,7, 66,7, 76,3, 170,8, 174,3, 174,9.
ES1-MS vypočteno pro C24H34N2O4: 414,25, stanoveno m/z: 415,4 (M+H)+.
Příklad 89: Syntéza (5R)-l-(pyruvyl)-7-[(lR)-l-benzyloxykarbonyl-3-methylbutyl]-6-oxo1,7-diazospiro [4,4]nonanu (14)
Pyruvil chlorid byl připraven podle techniky popsané v literatuře, Pansare, S. V. Gnana R. R. „Asymmetric Allyation a reduction on an Efedrine-Derived Template: Stereoselective Synthedis of a-Hydroxy Acids a Derivatives“, J. Org. Chem. 1998, 63, 4120-4124. K pyruvátu (115 mg, 1,31 mmol) byl přidán α,α-d ich loromethy Imethy léter (188 mg, 1,57 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 20 min a vzniklý roztok byl zahřát na 50 až 55 °C a poté míchán dalších 30 min. Reakční směs byla ochlazena na pokojovou teplotu a byl přidán DCM (3 ml).
K roztoku č. 11 (150 mg, 0,33 mmol) v bezvodém DCM (4 ml) při 0 °C v atmosféře argonu, byl přidán TEA (200 mg, 1,98 mmol) a DMAP (4 mg, 0,033 mmol) a čerstvě připravený roztok pyruvil chloridu při 0 °C. Reakční směs byla vytemperována na pokojovou teplotu a míchána 6 hodin. Surová směs byla promyta postupně kyselinou citrónovou (5 ml, 10 %), vodným roztokem NaHCO3 (nasycený roztok, 5 ml) a roztokem soli (5 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4) a zakoncentrována. Čistý produkt č. 14 (77 mg, 56%) jako olejovitá kapalina byla získán po přečištění na LC-silikagelu (hex-EtOAc, 1:3).
HPLC (kolona Novapack 08 (Waters), 3,9 x 150 mm, 00=1 ml / min, 0=214 nm, promývací roztok: ACN / 0,05 % TFA, (50/50)) tR = 5,870 a 6,72 min.
'H-NMR (200 MHz, CDC13) δ 0,92 a 0,95 (2d, J = 6, 6H), 1,42 (m, IH), 1,61 - 2,39 (m, 7H), 2,44 (s, 3H), 2,77 (m, IH), 3,22 (m, IH), 3,563,78 (m, 2H), 3.92 (m, IH), 4,67 a 4,85 (dd, J, = 6, J2 = 10) 1H), 5,21 (s, 2H), 7,34 (m, 5H).
- 105 CZ 304204 B6
66,8, 68,6, 135,0, 166,0, 170,8, 173,0, 198,0.
ESI-MS vypočteno pro C23H30N2O5: 414,22, stanoveno m/z: 415,4 (M+H)+.
Příklad 90: Syntéza (5R)-l-(2-methylakryloyl)-7-[(lR)-l-benzyloxykarbonyl-3-methylbutyl]-6-oxo-l ,7-diazospiro[4,4]nonanu (15)
N^CO2Bn CH2=C(CH3)COCI
H < .TFA
TEA / DMAP /DCM °:
Postup je stejný jako pro syntézu č. 13, vychází z č.l l (200 mg, 0,43 mmol) a methyl akry loyl chloridu (89 mg, 0,86 mmol), požadovaná látka (70 mg, 50 %) byla získána jako bezbarvá olejovitá kapalina, po přečištění na LC (silikagel ge, hex-EtOAc, 2:l). HPLC (kolona Novapack C|8 (Waters), 3,9 x 150 mm, 00=1 ml / min, 0=214 nm, promývací roztok: ACN / 0,05 % TFA, (25/75)] R, = 6,38 min.
H-NMR (200 MHz, CDCI3) δ 0,91 (t, J = 6, 6H), 1,44 (m, 1H), 1,64 - 1,93 (m, 5H), 1,93 (s, 3H), 1,96 - 2,12 (m, 2H), 2,78 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,56 - 3,68 (m, 3H), 4,80 a 4,77 (2d, J = 10, 1H), 5,16 (s, 2H), 5,19 (d, J = 9, 2H), 7,32 (m, 5H).
ESI-MS vypočteno pro C24H32N2O4: 412,24, stanoveno: 413,3 (M+H)*.
Příklad 91: Syntéza (5R)-l-(isobutyryl)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7-diazospiro[4,4]nonanu (16)
Odplyněný roztok č. 13 (134 mg, 0,32 mmol) obsahující 10 % Pd/C (27 mg) byl hydrogenován v atmosféře 16 psi po dobu 24 hodin. Reakční směs byla fdtrována skrz celitové sítko a poté byl fdtrovaný roztok zakoncentrován za sníženého tlaku tak, aby vznikl požadovaný produkt č. 16 (100 mg, 95 %) jako bezbarvá olejovitá kapalina.
M.p. 68 až 69 °C. [a]20D-2° (c 1,1, MeOH).
H-NMR [300 MHz, aceton-d6) δ 0,87 - 0,91 (2d, J = 7, 6H), 1,091,12 (2d, 6H), 1,46 (m, 1H),
1,70 (m, 2H), 1,90-2,10 (m, 5H), 2,49 (m, 1H), 2,70 (m, 1 H), 3,30 (m, 1 H), 3,49 (dt, JI = 8, J2= 10, 1 H), 3,61 -3,75 (m, 2H), 4,71 (dd, J, = 5, 11, 1H).
- 106CZ 304204 B6 l3C-NMR (75 MHz, CDC13) δ 016,4, 16,60021,1, 23,0, 24,3, 25,0, 30,8, 32,6, 36,6, 36,9, 40,6, 48,0, 53,4, 67,5, 171,8, 174,2, 176,2.
ES-MS vypočteno pro C|7H28N2O4: 324,20, stanoveno: 323,3 (M-l)+.
Příklad 92: Syntéza (SR)-l-(pyruvyl)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7-diazospiro[4,4]nonanu (17)
Odplyněný roztok č. 13 (79 mg, 0,26 mmol) v methanolu (20 ml) obsahující Pd-C (10 %, 22 mg) byl hydrogenován za atmosférického tlaku po dobu 45 min. Filtrovaný roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku tak, aby vznikl požadovaný produkt č. 17 (79 mg, 95 %) jako bílá pevná látka. HPLC (kolona Novapack C|8 (Waters), 3,9 x 150 mm, D 0 = 1 ml/min, 0=214 nm, promývací roztok: ACN / 0,05 % TFA, (20/80)] Rt = 13,14 min.
'H-NMR (200 MHz, CDC13) δ 0,93 (m, 6H), 1,43 (m, 1H). 1,71 - 2,22 (m, 7H), 2,34 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 2,74 (m, 1 H), 3,31 (m, 1H), 3,74 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 4,80 (dd, Jl = 6, J2 = 10, 1H), 7,07 (bs, 1H).
I3C-MNR (200 MHz, CDC13) δ 21,3, 23,2, 24,7, 25,1, 27,1, 29,9, 36,0, 37,0, 41,0, 49,3, 53,6, 69,1, 162, 172,7, 173,7, 197,5.
ESI-MS vypočteno pro C23H30N2O5: 324,17, stanoveno m/z: 325,1 (M+H)+.
Příklad 93: Syntéza (5R)-l-(2-methylakryloyl)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxol,7-diazospiro[4,4]nonanu (18)
K roztoku č. 15 (65 mg, 0,16 mmol) v methanolu (2,5 ml) byl přidán vodný roztok NaOH (1,6 ml, 1 N) a H2O (1,6 ml) a reakční směs byla míchána při pokojové teplotě 1 h. Vzniklá směs byla zakoncentrována za sníženého tlaku a získaná směs byla rozdělena mezi H2O (20 ml) a DCM (20 ml). Vodná fáze byla okyselena až na f=2 vodným roztokem HCI (10 ml, 0,1 N) a extrahována pomocí DCM (3x20 ml). Smíchané organické fáze byly promyty roztokem soli (25 ml), vysušeny (Na2SO4) zakoncentrovány za sníženého tlaku tak, aby vznikl požadovaný produkt č. 18 (44 mg, 85%) jako bílá pevná látka. HPLC (kolona Novapack Cis (Waters), 3,9 x 150 mm, 00 = 1 ml/min, 0=214 nm, promývací roztok: ACN / 0,05 % TFA, (25/75)] Rt = 6,38 min.
- 107CZ 304204 B6 ’Η-NMR (300 MHz, CDCh) δ 0,86 (d, J = 5, 3H), 0,89 (d, J = 5, 3H), 1,42 (m, 1H), 1,55-2,25 (m, 8H), 2,56 (m, 1H), 3,19 - 3,44 (m, 2H), 3,57 - 3,67 (m, 2H), 4,78 (d, J = 11, 1H), 4,82 (d, J = 11, 1H), 5,18(d,J = 6, 2H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI.0 δ 19,5, 21,2, 23,1, 24,2, 25,1, 30,9, 36,51, 37,6, 40,9, 50,5, 53,7^ 67,5, 117,5, 140,6, 170,8, 174,2
ESI-MS vypočteno pro C17H26N2O4: 322,19, stanoveno: 323,2 (M+H) .
Příklad 94: Syntéza [(5R)-l-(tert-buthoxykarbonyl)-7-[(l R)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6oxo-1,7-diazo-spiro[4,4]7,9-aplidinu (9SBSAPL1)
HATU/HOA1
NMM/DCM
9SBSAPL1
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SAPL4 (lOmg, 13 pmol), č. 12 (5 mg, 14 pmol), vychází z č.l 1 (200 mg, 0,43 mmol) a methylakryloyl chloridu (89 mg, 0,86 mmol), HATU (12,4 mg), HOAt (4,5 mg), NMM (3,3 01), DCM (140 01) a DMF (70 01) požadovaná látka (11 mg, 73 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C]8, isokratická ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/miri, 250x21 mm, při 270 nm tR = 30 min).
'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,85 - 0,97 (m, 24 H), 1,19- 1,34 (m, 18 H), 1,48 (s, 9H), 1,502,20 (m, 6 H), 2,32 - 2,36 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,582,72 (m, 2H), 2,97 - 3,08 (m, 1H), 3,10 3,22 (m, 3H), 3,34 (dd, 1H, J = 3,9, 13,8), 3,46 - 3,79 (m, 6H), 3,79 (s, 3 H), 4,03 - 4,12 (m, 2H), 4,28 (dd, 1H, J = 6,6, 13,2), 4,57 - 4,63 (m, 2H), 4,79 - 4,88 (m, 2H), 5,15 (d, 1H, J = 3,3), 5,21 - 5,23 (m, 1H), 6,84 (d, 2 H, J = 8,4), 7,07 (d, 2H, J = 8,7), 7,28 (d, 1H, J = 10,8), 7,79 (d, 1H, J = 6,6), 7,82 (d, 1H, J = 9,9).
’3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 15,21, 15,43, 16,79, 17,23, 18,69, 18,77, 21,24, 23,67, 23,95, 24,10, 24,90, 25,10, 25,38, 27,04, 28,23, 28,75, 29,93, 31,61, 34,50, 33,88, 34,16, 36,20, 36,57, 38,76, 39,09, 39,78, 41,29, 47,27, 47,76, 49,60, 49,96, 52,66, 55,50, 56,26, 57,38, 58,18, 66,74, 66,86, 68,34, 70,53, 80,75, 81,93, 114,33, 130,23, 130,54, 168,08, 169,83, 170,18, 170,80, 171,43, 172,55, 175,04,205,04.
ESI-MS vypočteno pro C6oH93N70|5 1151,7, stanoveno m/z: 1152,4 (M+H) .
- 108CZ 304204 B6
Příklad 95: Syntéza [Hiv]3-[(SR)-l-(tert-butoxykarbonyI)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7-diazospiro[4,4]nonan]-7-9-aplidinu (9SBSHPL1)
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází zSHPL4 (10 mg, 13 mmol), č. 12 (5 mg, 14 mmol), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 01), DCM (150 01) a DMF (50 01), požadovaná látka (10 mg, 70 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C|g, isokratická ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm tR = 28,1 min).
'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,80 - 1,07 (m, 24H), 1,08 - 1,67 (m, 12H), 1,48 (s, 9H), 1,68 2,30 (m, 1 OH), 2,41 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,68 (m, 1 H), 2,94 (m, 1 H), 3,07 - 3,40 (m, 4H), 3,42 - 3,72 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,77 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J = 4,8, 1H), 5,25 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J 8,3, 2H), 7,31 (d, J = 9,7, 1H), 7,50 (d, J = 5,8, 1H), 7,85 (d, J = 9,7, 1H).
LC NMR (75 MHz, CDCI3) δ 12,07, 14,25, 17,12, 17,92, 19,15, 21,11, 21,18, 23,80, 24,00, 24,06, 24,86, 25,08, 25,15, 27,58, 28,21, 28,82, 30,33, 31,18, 33,78, 34,28, 35,77, 36,65, 39,07, 39,45, 39,86, 46,91, 48,14, 48,47, 52,62, 55,49, 57,13, 58,42, 66,36, 66,80, 69,14, 70,84, 79,19, 80,55, 114,27, 130,29, 130,59, 154,12, 158,81, 168,25, 169,84, 170,72, 170,80, 170,90, 171,25, 174,89.
ESI-MS vypočteno pro C57H89N7O14 1095,6, stanoveno m/z: 1096,9 (M+H)+.
Příklad 96: Syntéza [(SR)-l-(isobutyryl)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7diazo—spiro[4,4]nonan]79—aplidinu (9SISAPL1).
.^x,OMe
SAPL4 9S1SAPL1
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SAPL4 (l l mg, 12,9 pmol), č. 16 (5 mg, 15,4 μιηοΐ), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (3,6 Ol), DCM (155 Ol) a DMF (78 Ol), poža- 109 CZ 304204 B6 dováná látka (10 mg, 69 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep
PEP 100 C]g, isokratická ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm tR = min).
'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,86 - 1,00 (m, 24H), 1,12 (d, J = 6,9, 3H), 1,18 (d, J = 6,6, 3H), 1,34 (r, J = 6,6, 2H), 0,90 - 1,30 (m, 7H), 1,562,25 (m, 16 H), 2,30 - 2,80 (m, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,95 - 3,06 (m, 1H), 3,153,25 (m, 3 H), 3,65 (dd, 1H), 3,52 - 3,79 (m, 6H), 3,79 (s, 3H), 3,98 4,15 (m, 1H), 4,28 (dd, JI = 6,6, J2 = 10,3, 1H), 4,59 (m, 2H), 4,79 - 4,85 (m, 2H), 5,17 (d, J = 3,6, 1H), 5,40 - 5,44 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,4, 2H), 7,06 (d, J = 8,7, 2H), 7,24 (d, J = 11,1, 1H), 7,90 (d, J = 9,3, 1H), 8,56 (d, J = 5, 1, 1H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 11,50, 14,92, 15,22, 16,68, 16,95, 18,50, 18,59, 18,81, 20,94, 23,42, 23,80, 24,49, 24,68, 24,90, 25,11, 26,91, 27,98, 30,93, 31,30, 35,58, 33,88, 34,16, 35,84, 36,24, 38,64, 38,84, 39,71, 41,29, 47,01, 47,76, 49,42, 49,62, 52,66, 55,26, 55,73, 57,12, 58,21, 66,57, 67,40, 68,10, 70,79, 81,57, 114,07, 130,05, 130,31, 158,57, 168,12, 169,66, 170,08, 170,56, 171,13, 171,96, 172,37, 174,04, 175,41,205,04.
ESI-MS vypočteno pro C59H9iN7O|4 1121,66, stanoveno: 1122,8 (M+H)+.
Příklad 97: Syntéza [HiV]3-[(SR)-l-(tert-buthoxykarbonyl)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7-diazospiro[4,4]nonan]7’9-aplidinu (9S1SHPL1)
HATU/HOAt
NMW/DCM
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SHPL4 (10 mg, 13 μιηοΐ), č. 16 (4,5 mg, 14 μιηοΐ), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 μΙ), DCM (150 μΐ) a DMF (50 μΐ), požadovaná látka (10 mg, 72 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C)S, isokratická ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm tR = 16,9 min).
'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,80 - 1,07 (m, 24H), 1,08 - 1,47 (m, 12H), 1,48 - 2,30 (m, 16H), 2,36 (m, 2H), 2,65 (m, 1H), 2,96 (m, 1H), 3,18 (m, 2H), 3,36 (m, 2H), 3,65 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 1 H), 4,02 (m, 1H), 4,25 (m, 1 H), 4,63 (m, 1 H), 4,72 (m, 2H), 4,87 (m, 111), 5,02 (d, J = 4,8, 1H), 5,45 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,7, 2H), 7,27 (d, J = 4,8, 1H), 7,88 (d, J = 9,7, 1H), 8,32 (d, J = 4,8, 1H).
ESI-MS vypočteno pro C56H87N7O|3 1065,6, stanoveno m/z: 1066,7 (M+H)' .
-110CZ 304204 B6
Příklad 98: Syntéza [(5R)-l-(pyruvyl)-7-[(l R)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7-diazospiro[4,4]nonan]79-aplidinu (9SPSAPL1)
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SAPL4 (10 mg, 11,7 pmol), 17 (5 mg, 15,4 μηιοί), HATU (12 mg), HOAt (5 mg), NMM (5 μΐ), DCM (140 μΐ) a DMF (70 μΙ)„ požadovaná látka (9 mg, 63 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP
100 Cis, isokratická ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm tR = 14„4min).
'H-NMR (300 MHz, CDClj) δ 0,90 - 1,00 (m, 24 H), 1,05 - 1,40 (m, 12 H), 1,40 - 2,25 (m, 16H), 2,27 - 2,41 (m, 1H), 2,42 - 2,70 (m, 3H), 2,54 (s, 3H), 2,92 - 2,98 (m, 1 H), 3,12 - 3,38 (m, 4 H), 3,54 - 3,78 (m, 4 H), 3,79 (s, 3H), 4,01 - 4,12 (m, 2H), 4,20 - 4,26 (m, 2H), 4,57 4,62 (m, 2H), 4,77 - 4,82 (m, 2H), 535,18 (d, J = 3,0, 2H), 5.37 - 5,42 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,7, 2H), 7,20 (d, J = 9,6, 1H), 7,85 (d, J = 9,6, 1H), 98,04 (d, J = 5,4, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDClj) δ 11,86, 14,97, 15,47, 16,78, 17,12, 18,84, 21,20, 21,27, 23,62, 24,14, 15,03, 25,15, 25,30, 27,35, 27,51, 28,19, 30,46, 31,52., 34,27, 35,95, 39,01, 40,07, 41,59,
47,25, 49,72, 53,08, 55,51, 55,81, 57,38, 58,21, 66,66, 68,19, 69,23 , 70,74, 81,69, 85,15, 114,33,
130,13, 130,56, 158,85, 161,12, 168,49, 169,81, 169,91, 170,81, 171,38, 171,69, 172,60, 173,34, 197,64, 205,19.
ESI-MS vypočteno pro C58H87N7O|5: 1121,63, stanoveno 1122,3 (M+H). 25
Příklad 99: Syntéza [Hiv]3—[(SR)— 1—(pyruvyl)—7—[(1R)— 1— karboxy-3—methylbutyl]6-oxo— 1,7— diazospiro[4,4]nonan]79aplidinu (9SPSHPL1)
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SHPL4 (10 mg, 13 μιηοΐ), č. 17 (4,5 mg, 14 μιηοΐ), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 μΙ), DCM (150 μΐ) a DMF (50 μΐ), požadoCZ 304204 B6 váná látka (10 mg, 72 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP
100 C18, isokratická ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm tR = 13,6 min).
'HNMR (300 MHz, CDCl,) δ 0,80 - 1,10 (24H, m), 1,11 - 1,80 (12H, m), 1,81 - 2,30 (10H, m), 2,45 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 3,07 - 3,43 (m, 6H), 3,52 - 3,77 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,03 (d, J = 4,3, 1H), 5,45 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (d, J = 8,7, 1H), 7,81 (d, J = 9,2, 1H), 7,87 (d, J = 4,8, 1H).
ESI-MS vypočteno pro C55H83N7O14: 1065,6, stanoveno 1066,4 (M+H)+.
Příklad 100: Syntéza [Hiv]3-[(5R)-l-(akryloyl)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]6-oxo-l,7diazaspiro [4,4]nonan]7_9-aplidinu (9SASHPL1) .0 _
HATU/HOAt
NMM/DCM
Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SHPL4 (10 mg, 13 pmol), č. 18 (5,8 mg, 14 pmol), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 μΐ), DCM (150 μΐ) a DMF (50 μΐ), požadovaná látka (10 mg, 72 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C|8, isokratická ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm tR = 16,4 min).
Ή-NMR (300 MHz, CDC1Q δ 0,85 -0,96 (m, 18H), 1,02- 1,05 (m, 6H), 1,14- 1,45 (m, 12H), 1,49-1,64 (m,4H), 1,68-1,77 (m, 1H), 1,89-2,05 (m, 3H), 1,99 (s,3H), 2,10-2,28 (m, 4H), 2,43 (dd, JI = 7,8, J2 = 17,1, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,60 - 2,68 (m, 1H), 2,97 (bs, 1H), 3,13 - 3,40 (m, 4H), 3,54 - 3,77 (m, SH), 3,79 (s, 3H), 3,89 - 4,07 (m, 2H), 4,27 (m, IH), 4,64 (m, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 5,03 (d, J = 4,4, 1H), 5,30 (d, J = 20, 1H), 5,30 - 5,39 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (s, 1H), 7,88 (d, J = 9,8, 1H), 8,23 (d, J = 7,4, 1 H).
ESI-MS vypočteno pro C56H85N7O|3: 1063,6, stanoveno 1064,6 (M+H)+.
Příklad 101: Syntéza [Hiv]’-[Z-Ala]9-aplidinu (9ZASHPL2).
- 112
Do nádoby obsahující Z-Ala-Pro-OH (36 mg, 112 pmol) v DCM (0,4 ml) při 0 °C, v atmosféře argonu, byl přidán DIPCDI (10 pl, 64 pmol) a reakční směs byla míchána 60 min. Poté byl přidán roztok SHPL2 (20 mg, 22,5 pmol) v DCM (0,2 ml) a po 3 dnech byla reakce zastavena přidáním vodného roztoku HCl (3 ml, 0,1 N). Reakční směs byla míchána po dobu 5 min a poté naředěna DCM (4 ml) a promyta postupně vodným roztokem KHSO4 (4 ml, 10 %), vodným roztokem. NaHCO3 (4 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (4 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována. Přečištění získané směsi bylo provedeno pomocí HPLC (HyperPrep PEP 100 C)8, isokratická ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, tR = 18,2 min), čímž byl získán 9ZASHPL2 (30 mg, 67 %) jako bílá pevná látka.
Ή-NMR (300 MHz, CDC13) 5 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,12- 1,50 (m, 18H), 1,52 -2,70 (m, 6H), 2,45 (rn, IH), 2,56 (s, 3H), 2,96 - 3,38 (m, 4H), 3,10 (s, 3H). 3,52 - 3,72 (m, 5H), 3,85 (m, IH), 3,78 (s, 3H), 4,01 (m, IH), 4,18 (m, 1 H), 4,51 (m, 1 H), 4,64 (m, 1 H), 4,72 (m, 1 H), 4,87 (m, 1 H), 5,02 (d, Ji = 5,3, IH), 5,06 (m, 2H), 5,25 (m, IH), 5,42 (m, IH), 6,10 (d, J = 8,3, 1 H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,31 (m, 6H), 7,70 (d, J = 4,3, 1H), 7,77 (d, J = 9,7, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 13,97, 16,63, 17,02, 17,48, 18,93, 20,86, 21,15, 23,45, 23,76,
70,94, 78,78, 114,00, 127,75, 128,3é, 129,90, 130,26, 156,31, 158,53, 168,67, 169,57, 170,06, 170,25, 170,65, 171,97, 173,08, 174,67.
ESI-MS vypočteno pro C62H92N8Oi5 1 188,67, stanoveno m/z 1189,7 (M+H)+.
Příklad 102: Syntéza [Hiv]3-[Boc-Ala]9-aplidinu (9BASHPL2).
ŇHBoc
9BASHPL2
SHPL2
Postup je stejný jako pro syntézu 9ZASHPL2, z SHPL2 (10 mg, 11,2 pmol), Boc—Ala—Pro—OH (17 mg, 57 pmol), DIPCDI (5 pl) a DCM (300 pl), požadovaná látka (9 mg, 70 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C,8, gradient ACN/H2O 85:15 až 100:0 v 10 min (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm tR = 14,5 min).
Ή-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,12 - 1,50 (m, 15H), 1,40 (s, 9H), 1,52 2,70 (m, 9H), 2,45 (m, IH), 2,60 (s, 3H), 3,003,43 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,62 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,90 (m, IH), 4,02 (m, IH), 4,20 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,67 (m, 2H), 4,87 (m, IH), 5,02 (d, JI =4,3, IH), 5,26 (m, IH), 5,40 (m, IH), 5,76 (d, J = 7,8. IH), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,32 (d, J = 9,7, 1H), 7,73 (d, J = 4,8, 1H), 7,80 (d, J = 9,7, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 14,34, 16,88, 17,20, 17,77, 19,17, 21,10, 21,41, 23,72, 24,03,
- 113 CZ 304204 B6
114,29, 130,21, 130,54, 156,06, 158,83, 168,80, 169,87, 170,51, 170,64, 170,94, 171,31, 172,59, 173,45, 174,92.
ESI-MS vypočteno pro CsgE^NgO^ 1154,68, stanoveno m/z 1155,6 (M+H)+.
Příklad 103: Syntéza [Hiv]1 * 3 *-[Ala]9 aplidinu (9ASHPL1)
9ABSHPL2
9ASHPL1
Do nádoby obsahující 9BASHPL2 (8 mg, 6,92 μιτιοί), byl přidán roztok kyseliny chlorovodíkové v bezvodém dioxanu (l ,5 ml, 5,3 N, 7,9 mmol). Vzniklý roztok byl míchán při pokojové teplotě po dobu 5 h, nebo dokud zcela nevymizí výchozí materiál (TLC). Poté je roztok zakoncentrován za sníženého tlaku a získaná směs byla rozpuštěna v DCM a opět zakoncentrována. Produkt byl precipitován jako bílý prášek DCM /hex (2 ml/4 ml), tak, aby byl získán 9ASHPL1 (7,2 mg) jako bílá pevná látka.
ESI-MS vypočteno pro C54H86N8Oi3 1054,6, stanoveno m/z: 1055,6 (M+H)+.
Příklad 104: Syntéza [Hiv]3-[Boc-Pro]8-didemninu A (SPSHPL2)
Postup je stejný jako pro syntézu 9ZASHPL2, z SHPL2 (10 mg, 11,2 μιηοΐ), Boc-Ala-Pro-OH (13 mg, 57 μιηοΐ), DIPCDI (5 μΐ) a DCM (300 μΐ), požadovaná látka (9 mg, 74 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C)8, gradient ACN/H2O 85:15 až 100:0 v 10 min (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm tR = 18,7 min).
1 H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,82- 1,10 (m, 24H), 1,12-2,30 (m, 22H), 1,47 (s, 9H), 2,41 (m,
1H), 3,04 (s, 3H), 3,10 - 3,74 (m, 7H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,31 (m, 1H),
4,59 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J = 4,8, 1 H), 5,16 (m, 1 H), 5,36 (m, 1 H), 6,84 (d, J = 8,3,
2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,17 (d, J = 6,3, 1H), 7,35 (d, J = 9,7, 1H), 7,85 (d, J = 9,7, 1H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 14,41, 16,76, 17,97, 19,12, 21,03, 21,66, 23,92, 24,00, 24,77,
25,09, 25,20, 27,53, 28,21, 28,72, 29,67, 30,35, 31,23, 33,80, 34,30, 36,24, 39,05, 39,37, 39,80,
-114CZ 304204 B6
46,90, 47,33, 48,42, 54,48, 55,49, 55,58, 55,84, 57,12, 58,08, 66,31, 69,11, 71,05, 79,23, 80,23, 114,29, 130,23, 130,59, 154,91, 158,82, 168,37, 169,88, 170.,66, 170,86, 171,28, 171,40, 174,10, 174,79.
ESI-MS vypočteno pro C56H9|N7O|4: 1085,6, stanoveno m/z: 1086,7 (M+H)+.
Příklad 105: Syntéza [Hiv]3-[Pro]8-didemninu A (8PSHPL1)
Postup je stejný jako pro syntézu 9ASHPL1, vychází z 8PSHPL2 (7 mg, 6,4 μιηοΐ), požadovaná látka (6 mg) byla získána jako bílá pevná látka.
ESI-MS vypočteno pro C5|H8iN70i2: 983,59, stanoveno m/z: 984,6 (M+H)+.
Příklad 106: Syntéza [Hiv]3-[Boc-Val]8-didemninu A (8VSHPL2)
Postup je stejný jako pro syntézu 9ZASHPL2, vychází z SEIPL2 (10 mg, 11,2 pmol), Boc-ValOH (12 mg, 56 μιηοΐ), DIPCDI (5 μΐ) a DCM (300 μΐ), požadovaná látka (9 mg, 82 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C,8, gradient ACN/H2O 85:15 až 100:0 v 10 min (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 mm, tR = 22,1 min).
‘H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,82 - 1,10 (m, 30H), 1,12 - 1,82 (m, 12H), 1,45 (s, 9H), 1,84 2,40 (m, 6H), 2,56 (s, 3H), 3,85 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,24 (m, 1 H), 4,41 (m, 1H), 4,61 (m, 1 H), 4,88 (m, 1 H), 4,99 (d, JI = 5,3, 1 H), 5,07 (m, 1 H), 5,19 (m, 1 H), 5,60 (d, J = 8,3, 1 H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,03 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,46 (d, J = 10,2, 1H), 7,84 (d, J = 9,2, 1H).
ESI-MS vypočteno pro C5()H9|N7O|4.' 1085,6, stanoveno m/z: 1086,7 (M+H)+.
- 115 CZ 304204 B6
Příklad 107: Syntéza [Hiv]3-[Val]8-didemninu A (SVSHPL1)
NH3 +cr
8VSHPL2
8VSHPL1
Postup je stejný jako pro syntézu 9ASHPL1, vychází z 8VSHPL2 (8 mg, 7,4 pmol), požadovaná látka (7 mg) byla získána jako bílá pevná látka.
ESI-MS vypočteno pro íýil [χΑΥΑ: 985,61, stanoveno m/z: 986,6 (M+H)+.
Příklad 108: Syntéza [Hiv]3-[Val]8-[isobutyryl]9-didennninu A (8V91SHPL1)
8V9ISHPL1
8VSHPL1
K roztoku 8VSHPL1 (6 mg, 5,8 pmol) v DCM (200 pl) při 0 °C v atmosféře Ar, byl přidán NMM (3,3 pl, 30 pmol) a isobutyryl chlorid (2 pl, 19 pmol). Po 5 h míchání při pokojové teplotě byla reakční směs naředěna DCM (5 ml) a promyta postupně vodným roztokem KHSO4 (5 ml, IO %), vodným roztokem HCXENa (5 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (5 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby byl získán 8V91SHPL1 (6 mg, 97%) jako bílá pevná látka.
'H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0,82 - l,]0 (m, 36H), l,12 - l,85 (m, 10H), 1,90 - 2,45 (m, 6H), 2,56 (s,3H), 2,90 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 3,13 (m, 2H), 3,36 (dd, JI = 4,3, J2 = 14,1, 1H), 3,64 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,87 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,34 (m, 2H), 4,61 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,98 (d, J = 4,8, 1H), 5,17 (m, 2H), 6,24 (d, J = 6,3, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,32 (d, J = 6,3, 1H), 7,35 (d, J = 4,3, 1H), 7,81 (d, J = 9,7, 1H).
ESI-MS vypočteno pro CssHggNyOu: 1055,6, stanoveno m/z: 1056,7 (M+H)+.
-116CZ 304204 B6
Příklad 109: Syntéza [kumarin]8-didemninu A (SCSAPL1)
8CSAPL1
Postup je stejný jako pro syntézu 9ZASHPL2, vychází z SAPL2 (20 mg, 21 μιηοΙ) a kumarin-3karboxylové kyseliny (20 mg, 107 μιηοΙ), požadovaná látka (18 mg, 76 82 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C!S, gradient ACN/H2O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 mm, tR = 16,5 min).
'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,78 - 1,00 (m, 24H), 1,20 - 2,50 (m, 22H), 2,56 (s, 3H), 2,92 (s, 3H), 3,08 -3,25 (m, 2H), 3,90 (m, 1H), 3,60 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,92-4,25 (m, 3H), 4,60 (m, 1 H), 4,80 (m, 2H), 5,15 (m, 1H), 5,18 (d, J = 3,4, 1H), 5,28 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,20 (d, J = 6,3, 1H), 7,37 (m, 2H), 7,45 (d, J = 9,7, 1H), 7,58 (m, 2H), 7,96 (m, 1H), 8,23 (m, 1H).
ESI-MS vypočteno pro CsgHg^Ois: 1114,58, stanoveno m/z: 1116,8 (M+H)4.
Příklad 110: Syntéza methyl esteru kumarin-3-karbonylaminooctové kyseliny (8G9C2)
Do lahve s kulatým plochým dnem obsahující methylglycin (89 mg, 1,00 mmol), 3-karboxykumarin, bezvodý DCM (25 ml) v atmosféře Ar, byl přidán při pokojové teplotě N'-(3-dimethylaminopropyl)-N-ethyl-karbodiimid hydrochlorid (EDC) (479 mg, 2,50 mmol) a DMAP (489 mg, 4,00 mmol). Vzniklá směs byla míchána po dobu 1 h 30 min (celková konverze byla sledována jako změna TLC). Poté byl přidán DCM (20 ml) a roztok byl promyt postupně vodným roztokem. NaHCO3 (10 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (10 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována. Vzniklá oranžová pevná látka byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, grád. hex.EtOAc 1:1 až 2:1) tak, aby byla získána požadovaná látka (445 mg) jako bezbarvá olejovitá kapalina. Rf= 0,08 (Hex/EtOAc 1:1).
'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 3,79 (s, 3H), 4,25 (d, J = 5,4, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,74 (d, J = 7,3, 1H), 7,68 (m, 2H), 8,91 (s, 1H), 9,25 (s, 1H).
ESI-MS vypočteno pro Ci3HnNO5: 261,06, stanoveno: 283,1 (M+Na)+.
-117CZ 304204 B6
Příklad 111: Syntéza kyseliny kumarin-3-karbonylaminooctové kyseliny (8G9C1)
K roztoku methyl esteru kumarin-3-karbonylaminooctové kyseliny (312 mg, 1,19 mmol), v THF (12 ml) v atmosféře Ar při 0 °C (v ledové lázni), byl přidán po kapkách roztok LiOH v H2O (0,2 M). Reakční směs byla důkladně míchána při pokojové teplotě, dokud reakce nebyla kompletní TLC (2 h). Roztok byl částečně zakoncentrován a byl přidán Et2O (10 ml). Organická fáze byla promyta NaHCO3 (10 ml, nasycený roztok) směs vodných fází byla okyselena 10 % K.HSO4 (f = 3 až 4) a extrahována pomocí étheru (3x20 ml). Organická fáze byla zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby vznikl požadovaný 8G9C1 (280 mg, 95 %) jako bílá pevná látka.
'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 4,18 (d, J = 5,3, 2H), 7,41 (m, IH), 7,45 (d, J = 7,8, IH), 7,74 (d, J = 7,3, 1H), 7,78 (t, J = 8,3, 1H), 7,85 (d, J = 7,8, 1H), 8,89 (s, 1H), 9,41 (m, 1H).
ESI-MS vypočteno pro C|2H9NO5: 247,05, stanoveno: 248,0 (M+H)\
Příklad 112: Syntéza [Gly]8-[kumarin]9-didemninu A (SG9CSAPL1)
Postup je stejný jako pro syntézu 9ZASHPL2, vychází z SAPL2 (20 mg, 21 pmol) a kyseliny kumarin-3-karbonylaminooctové (26 mg, 105 pmol), požadovaná látka (18 mg, 72 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (Symetry PrepTM Cl 8, isokratická ACN/H2O 60:40 průtok: 3 ml/min, 150x7,5 mm, při 270 mm, tR = 17,5 min).
'H-NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,85 - 0,94 (m, 24H), 1,23 - 2,17 (m, 21H), 2,30-2,44 (m, IH), 2,56 (s, 3H), 3,01 (s, 3H), 3,10 - 3,24 (m, 2H), 3,40 (dd, Ji = 5,4, J2 = 14,2, IH), 3,59 - 3,74 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,99 - 4,21 (m, 4H), 4,37 - 4,44 (m, IH), 4,60 (m, IH), 4,68 (m, 1 H), 4,81 (t, J = 9,8, 1H), 5,18 (d, J = 3,4, 1 H), 5,25 (dd, J1 = 2,9, J2 = 5,9,1 H), 5,20 - 5,45 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,19 - 7,28 (m, 1H), 7,347,42 (m, 2H), 7,63 - 7,72 (m, 2H), 7,88 (d, J = 8,3, 2H), 9,00 (s, 1H), 9,57 (m, 1H).
ESI-MS vypočteno pro C6]H85N70i6: 1171,61, stanoveno m/z: 1172,5 (M+H)+.
-118CZ 304204 B6
Příklad 113: Syntéza N-methylsulfonyl-Pro-OBz (P2)
SO2Me
Pro-OBn (HC1)
P2
K roztoku Pro-OBn (HC1) (300 mg, 1,24 mmol) v DCM (25 ml, bezvodý při 0 °C v atmosféře Ar, po kapkách stříkačkou byl přidán DIPEA (0,7 μΐ) a methansulfonyl chlorid (116 μΐ). Reakční směs byla míchána při pokojové teplotě přes noc. Poté byl přidán DCM (10 ml) a roztok byl promyt postupně vodným roztokem KHSO4 (15 ml, 10 %), vodným roztokem NaHCO3 (15 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (15 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby byl získán čistý produkt P2 (350 mg, 1,24 mmol) jako bílá pevná látka. Rf= 0,55 (Hex/AcOEt 1:1).
H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,91 - 2,08 (m, 3H), 2,19-2,31 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 3,83 3,54 (m, 2H), 3,65 (s, 3H), 4,51 (dd, Ji = 3,4, J2 = 8,3, 1H), 5,15 (d, J = 12,2, 1 H), 5,18 (d, J = 12,2, 1H), 7,31 (m, 5H).
ESI-MS vypočteno pro C,3Hi7NO4S: 283,09, stanoveno m/z: 284,1 (M+H)+.
Příklad 114: Syntéza N-methylsulfonyl-Pro-OH (Pl)
P2
Odplyněná směs N-methylsulfonyl-Pro-OBz (P2) (250 mg, 0,88 mmol) a Pd(OH)2/C (20 % Pd, 100 mg, 40 % hmotnosti) v IPA:H2O (26 ml: 13 ml), byla nasycena H2 a udržována při 1 atmosféře vodíku za stálého míchání po dobu 3 h. Poté byla reakční směs filtrována přes teflonový filtr (0,45 μιη), a zakoncentrována ve vakuu tak, aby byla získána požadovaná látka (128 mg, 75 % výtěžek) jako bílá pevná látka bez dalšího přečištění.
Ή-NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,94 - 2,04 (m, 2H), 2,07 - 2,14 (m, 1H), 2,22 - 2,35 (m, 1H), 2,96 (s, 3H), 3,44 (m, 2H), 4,44 (dd, J1 = 3,9, J2 = 8,8, 2H), 9,10 (m, 1H).
,3C-MNR (75 MHz, CDC13) δ 24,96, 31,08, 38,46, 48,06, 60,66, 174,75.
ESI-MS vypočteno pro C6HnNO4S: 194,22, stanoveno: 194,0 (M+H)+.
-119CZ 304204 B6
Příklad 115: Syntéza [methylsulfonyl]9-aplidinu (9MSAPL1)
Postup je stejný jako pro syntézu 9ZASHPL2, vychází z SAPL2 (10 mg, 10,7 μηιοί) aN-methylsulfonyl-Pro-OH (10 mg, 53 μιηο1), požadovaná látka (9 mg, 74 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (Symetry PrepTM Cl 8, isokratická ACN/H2O 60:40 průtok: 3 ml/min, 150x7,8 mm, při 270 mm, tR = 9 min).
'H-NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,78 - 1,00 (m, 24H), 1,20 - 2,50 (m, 26H), 2,56 (s, 3H), 2,93 (m, 1H), 3,04 (s, 3H), 3,06 (s, 3H), 3,08 - 3,26 (m, 2H), 3,28 - 3,50 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 4,05 (m, 2H), 4,17 (m, 1H), 4,60 (m, 2H), 4,81 (m, 2H), 5,10 (m, 1H), 5,19 (d, J= 3,4, 1H), 5,33 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 6,86 (m, 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,09 (m, 1H), 7,82 (d, J = 9,2, 1H).
ESI-MS vypočteno pro CYHj^NúO^S: 1117,60, stanoveno: 1118,7 (M+H)+.
Příklad 116: Syntéza [methylsu)fonyl]8-didemninu A (SMSAPL1)
SAPL2
K roztoku SAMP2 (10 mg, 10,7 μιηοΐ) v DCM (200 μΐ, bezvodý) při 0 °C v atmosféře Ar, byl 25 přidán DIPEA (3 01) a methylsulfonylchlorid (0,85 μΐ). Reakční směs byla míchána při 5 °C přes noc. Poté byl přidán DCM (10 ml) a roztok byl promyt postupně vodným roztokem KHSO4 (5 ml, 10 %), vodným roztokem NaHCO3 (5 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (5 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4), fdtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby byl získán čistý 8MSAPL1 (11 mg) jako bílá pevná látka.
'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,83 - 0,97 (m, 24H), 1,10 - 1,45 (m, 10H), 1,50 - 1,65 (m, 5H), 1,76 - 1,82 (m, 2H), 2,00 - 2,20 (m, 3H), 2,27 - 2,36 (m, 1H), 2,45 - 2,55 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,02 (s, 3H), 3,08 (d, J = 16,6, 1 H), 3,17 (dd, Ji = 10,7, J2 = 14,1, 1 H), 3,37 (m, 1 H), 3,60 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,99 - 4,11 (m, 3H), 4,49 (m, 1 H), 4,59 (m, 1 H),
- 120CZ 304204 B6
4,78 (m, 2H), 5,06 (m, 1 H), 5,19 (d, J = 3,9, 1 H), 6,68 (d, J = 8,8, 1 H), 6,84 (d, J = 8.3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,33 (d, J = 9,8, IH), 7,61 (d, J = 8,8 1 H).
ESI-MS vypočteno pro C5oH80N6Oi4S: 1020,55, stanoveno: 1022,1 (M+H)+.
Příklad 117: Syntéza [biotin]s-didemninu A (8BISAPL1)
8BISAPL1
I0
K roztoku HATU (24 mg, 61 pmol), HOAt (8 mg, 63 pmol), SAPL2 (20 mg, 21,4 pmol) a dbiotinu (7,8 mg, 32 pmol), v bezvodém DCM (400 pl) byl při 0 °C v atmosféře Ar přidán po kapkách stříkačkou NMM. Vzniklá směs byla míchána po dobu 2 h při 0 °C a poté při pokojové teplotě dalších 14 h. Do směsi byl pak přidán DCM (10 ml) a roztok byl promyt postupně vodíš ným roztokem. KHSO4 (5 ml, 10 %), vodným roztokem NaHCO3 (5 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (5 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku. Požadovaná látka (18 mg, 72 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění
HPLC (Symetry Prep C,8, gradient ACN/H2O 60:40 až 100:0 v 10 min. (průtok: 3 ml/min, 150x7,8 mm, při 270 nm, tR = 6 min).
Ή-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,78 - 1,00 (m, 24H), 1,20 - 1,98 (m, 23H), 2,00 - 2,62 (m, 7H), 2,53 (s, 3H), 2,80 - 3,00 (m, 2H), 2,86 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 3,57 (m, 2H), 3,70 (m, IH), 3,79 (s, 3H), 4,01 (m, 2H), 4,10 (m, 1 H), 4,31 (m, 1 H), 4,46 (m, 1 H), 4,56 (m, 1 H), 4,82 (m, 2H), 5,00 (m, IH), 5,14 (m, 2H), 5,67 (s, IH), 6,23 (s, IH), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,28 (d, J = 8,5, 1H), 7,35 (d, J = 7,8, IH), 8,01 (d, J = 8,7, 1 H).
ESI-MS vypočteno pro C59H92N8Oi4S: 1168,65, stanoveno: 1169,6 (M+H)+.
Příklad 118: Syntéza [fenylmočovina]8-didemninu A (8PUSAPL1)
SAPL2
K roztoku SAPL2 (10 mg, 10,7 pmol) v bezvodém DCM (200 μΐ) byl přidán při 0 °C v atmosféře 35 Ar fenylisokyanát (1,3 μΐ, 12 pmol) a reakční směs byla míchána při pokojové teplotě 4 hodiny.
- 121 CZ 304204 B6
Poté byl přidán DCM (10 ml) a roztok byl promyt postupně vodným roztokem KHSO4 (5 ml, 10%), vodným roztokem NaHCOj (5 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (5 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO4), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby byl získán čistý produkt SPUSAPL1 (11 mg, 94 %) jako bílá pevná látka.
'H NMR (300 MHz, CDClj) δ 0,85 - 0,94 (m, 24H), 1,11 - 1,43 (m, 4H), 1,22 (d, J = 6,8, 3H), 1,35 (d, J = 6,8, 3H), 1,49-1,83 (m, 5H), 1,73 (s, 3H), 2,02 (m, 1H), 2,14 (m, 2H), 2,34 (dt, J1 = 3,4, J2 = 6,8, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,91 (s, 3H), 3,04 (d, J = 16,6, 1H), 3,17 (dd, JI = 11,2, J2 = 14,6, 1H), 3,36 (dd, JI = 3,9, J2 = 14,2, 1H), 3,57 (dd, JI = 4,4, J2 = 10,7, 1 H), 3,59 - 3,63 (m, 1H), 3,67 - 3,75 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,96 - 4,10 (m, 2H), 4,19 (q, J = 6,8, 1 H), 4,58 (m, 1 H), 4,74 (dd, JI = 3,9, J2 = 8,8, 1 H), 4,78 - 4,85 (m, 1 H), 5,05 (m, 2H), 5,17 (d, J = 3,4, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,03 - 7,09 (m, 3H), 7,22 - 7,32 (m, 4H), 7,39 (d, J = 8,3, 2H), 7,93 (d, J = 8,8, 1H).
HC NMR (75 MHz, CDClj) δ 15,51, 17,16, 18,74, 2 22,41, 23,29, 23,98, 24,94, 25,10, 25,32, 26,97, 28,18, 30,36, 31,57, 34,44, 36,51, 38,86, 41,64, 45,23, 47,30, 49,80, 50,08, 54,60, 55,50, 56,06, 57,51, 62,77, 66,45, 68,17, 70,72, 81,93, 114,36, 120,76, 123,86, 129,12, 130,04, 130,57, 138,78, 141,00, 157,78, 158,87, 169,92, 170,68, 171,49, 172,43, 173,44, 181,47, 192,38, 204,93, 206,66.
ESI-MS vypočteno pro CíóHsjNjOij: 1161,60, stanoveno: 1062,6 (M+H)+.
Příklad 119: Syntéza [fenylthiomočovina]8-didemninu A (8PTSAPL1)
DCM
Postup je stejný jako pro syntézu 8PUSAPL1, vychází z SAPL2 (10 mg, 10,7 μτηοΐ) a fenylthioisokyanátu (1,3 μΐ, 12 μηιοί), po 15 h míchání je požadovaná látka (11 mg, 93 %), byla získána bez nutnosti dalšího přečištění jako bílá pevná látka.
'H NMR (300 MHz, CDClj) δ 0,84 - 0,99 (m, 24H), 1,14 - 1,46 (m, 9H), 1,46 - 1,78 (m, 9H), 1,98-2,19 (m, 3H), 2,34 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,91 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 3,08 - 3,21 (m, 1H), 3,36 (dd, JI =4,4, J2 = 14,1, 1H), 3,55 - 3,64 (m, 2H), 3,66 - 3,74 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,964,12 (m, 2H), 4,21 (q, J = 6,8, 1H), 4,59 (t, J = 5,3, 1H), 4,75 (dd, Ji = 3,4, J2 = 8,3, 1H), 4,83 (t, J= 10,3, 1H), 5,05 - 5,12 (m, 2H), 5,16 (d, J = 3,4, IH), 6,30 (t, J = 7,3, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,21 - 7,37 (m, 6H), 7,93 (d, J = 8, 8, 1 H), 8,08 (d, J = 8,8, IH).
'-’C NMR (75 MHz, CDClj) δ 15,28, 15,85, 17,15, 18,73, 21,12, 22,73, 23,66, 24,01, 25,13, 25,33, 26,62, 28,16, 29,92, 31,53, 32,42, 32,90, 34,41, 36,77, 38,86, 41,69, 47,28, 50,12, 55,50, 56,48, 57,51, 59,87, 66,47, 70,75, 81,91, 114,37, 125,25, 125,95, 126,57, 127,54, 129,12, 129,77, 130,06, 130,57, 135,43, 158,88, 168,54, 169,90, 170,70, 171,49, 172,38, 190,41.
ESI-MS vypočteno pro C56H8jN7O|2S: 1077,58, stanoveno: 1078,5 (M+H)\
- 122 CZ 304204 B6
Příklad 120: Syntéza [butylmočovina]8-didemninu A (SBUSAPL1)
SAPL2
Postup je stejný jako pro syntézu 8PUSAPL1, vychází z SAPL2 (10 mg, 10,7 μιηοΐ) a butylthioisokyanátu (1,4 μΐ, 12 μιηοΐ), po 4 h stálého míchání byla požadovaná látka (9 mg, 78 %) získána bez dalšího přečištění jako bílá pevná látka.
'H NMR (300 MHz, CDCb) δ 0,85 - 0,94 (m, 24H), 1,10- 1,80 (m, 24H), 2,03 (m, 1 H»2,13 (m, 2H), 2,33š (m, IH), 2,55 (s, 3H), 2,72 (s, 3H), 3,02 (d, .1 = 16,1, IH), 3,17 (dd, Ji = 11,2, J2 = 14,2, IH), 3,23 - 3,40 (m, 3H), 3,62 - 3,78 (m, 3H), 3,79 (s, 3H),4,03 (m, 2H), 4,19 (q, J =6,8, IH), 4,58 (m, 2H), 4,71 (dd, Ji = 3,4, J2 = 8,3, IH), 4,82 (m, IH), 5,00 (m, 2H), 5,16 (d, J = 3,4, IH), 5,22 - 5,28 (m, 2 H), 6,85 (d, J = 8,8, 2H), 7,08 (d, J = -8,3, 2H), 7,21 - 7,29 (m, IH), 7,96 (d, J = 9,2, IH).
ESI-MS vypočteno pro C54H87N7O13: 1041,64, stanoveno: 1042,7 (M+H)+.
Příklad 121: Syntéza [butylthiomočovina]8-didemninu A (8BTSAPL1)
SAPL2
SCN
DCM
Postup je stejný jako pro syntézu 8PUSAPL1, vychází z SAPL2 (10 mg, 10,7 μιτιοί) a butylthioisokyanátu (1,5 μΐ, 12 pmol), po 15 h je požadovaná látka (10 mg, 86 %) získána jako bílá pevná látka bez nutnosti dalšího přečištění.
'H NMR (300 MHz, CDCb) δ 0,86 - 0,97 (m, 24H), 1,14 - 1,78 (m, 27H), 1,99 - 2,14 (m, 3H), 2,34 (m, IH), 2,55 (s, 3H), 2,88 (s, 3H), 3,01 (d, J = 16,6, 1 H), 3,16 (dd, JI = 11,2, J2 = 14,6, IH), 3,36 (dd, JI = 4,4, J2 = 14,2, IH), 3,49 - 3,74 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,02 (d, J = 6,8, 2H), 4,21 (q, J =6,8, IH), 4,58 (m, 1 H), 4,70 (dd, JI = 2,9, J2 = 8,3. 1 H), 4,82 (t, J = 10,3, IH), 5,075,12 (m, 2H), 5,09 (d, J = 3,9, IH), 5,60 (m, IH), 6,36 (dd, JI = 5,4, J2 = 8,3, IH), 6,84 (d, J = 8,8, 2H), 7,08 (d, J = 8,8, 2H), 7,84 (d, J = 8,3, 1 H), 7,91 (d, J = 9,3, IH).
- 123 CZ 304204 B6
LSI MS vypočteno pro C54H87N7Oi2S: 1057,61, stanoveno: 1080,7 (M+Na)f.
Claims (32)
1. Cyklický derivát depsipeptidu obecného vzorce kde:
X je nezávisle -C(R)2-, -O-, -S-, nebo -NR-, kde R je nezávisle H nebo organická skupina vybraná zC\-C{2 alkylové skupiny, C2-CI2 alkenylové skupiny, C6-C,8 arylové skupiny, aralkylové skupiny a jejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, které obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, Ci-C)2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;
Y , je CO nebo -COCHCH3CO-;
R4 je H nebo organická skupina vybraná z aminoskupiny RCONH-, acylové skupiny RCO-, Cj—C|2 alkylové skupiny, C2-Ci2 alkenylové skupiny, C6-C|8 arylové skupiny, aralkylové skupiny, a jejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, které obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, Cí— C|2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;
kde v každém případě
R je C|—C12 alkylová skupina, C2-C|2 alkenylová skupina, C6-C)8 arylová skupina, aralkylová skupina a jejich substituované deriváty, které jsou substituované heterocyklickou skupinou obsahující jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, Ci~C,2 alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, případně chráněnou amino skupinou, guanidinovou skupinou nebo halogenovou skupinou;
Xi je O nebo S; a když Y je CO, pak
- 124CZ 304204 B6
a) X2 je CR, O (a R2 chybí), S (a R2 chybí), nebo N, kde R je nezávisle H nebo organická skupina vybraná z C|-C|2 alkylové skupiny, C2-Ci2 alkenylové skupiny, C6-Ci8 arylové skupiny, aralkylové skupiny ajejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, které obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, C(-C|2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; a
Ri a R2 jsou každý nezávisle H nebo organická skupina vybraná z C|-C)2 alkylové skupiny, C2C12 alkenylové skupiny, C6-Ci8 arylové skupiny, aralkylové skupiny, amidové skupiny RCONHnebo acylové skupiny RCO-, kde R je a Cj—C]2 alkylová skupina, C2-Ci2 alkenylová skupina, C6-Ci8 arylová skupina, aralkylová skupina ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více C]—Cj2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; a
Ri nebo R2, když X2 je N, dále je -SO2R, kde R je jak definováno výše; nebo
b) aa8 je sloučenina vzorce kde R3 je organická skupina vybraná z C,-C,2 alkylové skupiny, C2-Ci2 alkenylové skupiny, C6C|g arylové skupiny, aralkylové skupiny, skupiny RSO2- nebo acylové skupiny RCO-, kde R je Ci—C|2 alkylová skupina, C2-C|2 alkenylová skupina, C6-C|8 arylová skupina, aralkylová skupina ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo
c) Ri a R2 s X2 tvoří případně substituovaný C3-C12 cykloalkyl, případně substituovaný C6-Cj8 aryl nebo případně substituovanou heterocyklickou skupinu vybranou z kumarinylu, quinolinylu, pyridylu, pirazinylu, pyrimidylu, furylu, pyrrolylu, thienylu, thiazolylu, oxazolylu, imidazolylu, indolylu, benzofuranylu, benzothiazolu, tetrahydrofuranylu. tetrahydropyranylu, piperidinylu a morfolinu; kde případné substituenty jsou vybrané z Cj-Ci2 alkylové skupiny, C2-Ci2 alkenylové skupiny, C6—Cis arylové skupiny, aralkylové skupiny, ajejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo
d) aa8 je nahrazen organickou skupinou vybranou z C6-C,8 arylové skupiny, aralkylové skupiny, skupiny RSO2- nebo acylové skupiny RCO, kde R je C|-Ci2 alkylová skupina, C6-C|8 arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, C|-C,2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;
když Y je -COCHCH3CO-, pak
c) X2 je N, a Ri a R2 jsou každý nezávisle H nebo organická skupina vybraná z C|-C)2 alkylové skupiny, C2-Ci2 alkenylové skupiny, C6-Ci8 arylové skupiny, aralkylové skupiny, amidové skupiny RCONH-, skupiny -SO2R nebo acylové skupiny RCO- kde R je a C|—Ci2 alkylová skupina, C2-Ci2 alkenylová skupina, C6-C|8 arylová skupina, aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami obsahujícími jeden, dva nebo tři heteroatomy vybranými z atomů N, O nebo S, C1-C!2 alkoxy skupina- 125CZ 304204 B6 mi, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo d) aa8 je sloučenina vzorce
O kde R; je skupina RSO2-, kde Rje C|-C)2 alkylová skupina nebo R3 je C2-C]2 alkenylová skupina, aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo
c) R| a R2 s X2 tvoří případně substituovanou C3-C12 cykloalkylovou skupinu, případně substituovanou Cs-Cis arylovou skupinu nebo případně substituovanou heterocyklickou skupinu vybranou z kumarinylu, quinolinylu, pyridylu, pirazinylu, pyrimidylu, furylu, pyrrolylu, thienylu, thiazolylu, oxazolylu, imidazolylu, indolylu, benzofuranylu, benzothiazolu, tetrahydrofuranylu, tetrahydropyranylu, piperidinylu a morfolinu; kde případné substituenty jsou vybrané zC]-Ci2 alkylové skupiny, C2-C,2 alkenylové skupiny, C6-C|g arylové skupiny, aralkylové skupiny, ajejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo
d) aa8 je nahrazen organickou skupinou vybranou z C6--Ci8 arylové skupiny, aralkylové skupiny nebo skupiny RSO2-, kde Rje C|-C]2 alkylová skupina, C6-Cig arylová skupina nebo aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více C|-C]2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;
kde aralkylové skupiny jsou tvořeny Ci-C,2 alkylovou skupinou substituovanou C6-C|8 arylovou skupinou;
ajeho farmaceuticky přijatelné soli.
2. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 1, kde X je -NR-, a kde Rje, jak bylo definováno v nároku 1.
3-[Aip]-aplidin.
3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[isobutyryl]-aplidin,
3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[pyr]-aplidin,
3-[Hiv]-9-[D-lac(OTBDMS)]-aplidin,
3-[Val]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidin,
- 128 CZ 304204 B6
3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidin,
3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[Boc]-aplidin,
3-[Hiv]-didemnin A,
3-[Val]-didemnin A,
3-[Hiv]-8-[hexanoyl]-didemnin A,
3-[Hiv]-8-[Val]-9-[isobutyryl]-didemnin A,
3-[Hiv]-8-[Boc-Val]-didemnin A,
3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]-aplidin,
3-[Hiv]-9-[Z-Nva]-aplidin,
3-[Hiv]_Z-didemnin A,
3-[Hiv]-9-[Z-Ala]-aplidin,
3-[Hiv]-8-[butyryl]-didemnin A,
3-[Hiv]-8-[Val]-didemnin A,
3-[Val]-Z-didemnin A,
3-[Hiv]-9-[Nva]-aplidin,
3-[Hiv]-9-[Ala]-aplidin,
3-[Hiv]-8-[isobutyryl]-didemnin A,
3-[Val]-9-[isobutyryl]-aplidin,
3—[Hiv]—9—[isobutyryl]—aplidin,
3-[Val]-8-[isobutyryl]-didemnin A,
3. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 2, kde X je -NH- nebo -NMe
4. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 3, kde X je -NH-.
5 3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[akryloyl]-aplidin,
5. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 1, kde X je -O-.
6. Cyklický derivát depsipeptidu podle některého z nároků 1 až 5, kde Y je -CO-.
7,8-[spiro]-9-[isobutyryl]-aplidin,
7.8- [spiro]-9-[Boc]-aplidin,
7.8— [spiro]—9—[pyr]—aplidin,
7. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 1, kde X je -NH- nebo -O- a Y je -COCHCH3CO nebo -CO-.
8-[Biotin]-didemnin A,
8-[Gly]-9-[kumarin]-didemnin A,
8- [methylsulfonyl]-didemnin A,
8-[butylthiomočovina]-didemnin A,
8-[kumarin]-didemnin A,
8-[fenylthiomočovina]-didemnin A,
8-[butylmočovina]-didemnin A,
8-[fenylmočovina]-didemnin A,
8. Cyklický derivát depsipeptidu podle kteréhokoliv z předcházejících nároků 1 až 7, kde R4 je methyl.
9-[Z-Nva]-aplidin,
9—[norvalin]-aplidin,
9- [methylsulfonyl]-aplidin.
9. Cyklický derivát depsipeptidu podle kteréhokoliv z předcházejících nároků 1 až 8, kde X] je O.
- 126CZ 304204 B6
10. Cyklický derivát depsipeptidu podle kteréhokoliv z předcházejících nároků 1 až 9, kde X2R, je případně substituovaná aralkyloxy skupina.
11. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 10, kde X2R| je benzyloxy skupina.
12. Cyklický derivát depsipeptidu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, kde X2R| je případně substituovaná amino skupina.
13. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 12, kde X2R| je skupina -NHR,, kde R] je případně substituovaná C,-C)2 alkylová skupina, C2-C,2 alkenylová skupina, C6-C,8 arylová skupina nebo aralkylová skupina.
14. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 13, kde R, je C|-C,2 alkylová skupina nebo C6C|g arylová skupina.
15. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 14, kde R| je fenylová skupina nebo butylová skupina.
16. Cyklický derivát depsipeptidu podle některého z nároků 1 až 9, kde X2Ri je případně substituovaná Ci—Ci2 alkylová skupina.
17. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 16, kde X2R| je propylová skupina, isopropylová skupina, pentylová skupina nebo biotinová skupina.
18. Cyklický derivát depsipeptidu podle některého z nároků 1 až 9, kde -C(=O)X2RiR2 tvoří případně substituovanou acylovou skupinu aminokyseliny.
19. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 18, kde případně substituovaná acylová skupina aminokyseliny je substituovaný prolin.
20. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 19, kde substituovaný prolin je případně substituovaný norvalin-prolin, případně substituovaný alanin-prolin, Boc-prolin, případně substituovaný alkylprolin.
21. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 19, kde substituovaný proline je norvalinprolin, Z-norvalin-prolin, alanin-prolin, Z-alanin-prolin, Boc-alanin-prolin, isobutyryl-prolin nebo případně chráněný D-laktyl-prolin.
22. Cyklický derivát depsipeptidu podle některého z nároků 1 až 8, kde X| je S a X2R| je skupina -NHRi, kde R| je případně substituovaná Cí-C|2 alkylová skupina, C2-Ci2 alkenylová skupina, C6-Ci8 arylová skupina nebo aralkylová skupina.
23. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 22, kde R, je C]-C|2 alkylová skupina nebo C6C|8 arylová skupina.
24. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 23, kde R, je fenylová skupina nebo butylová skupina.
25. Cyklický derivát depsipeptidu podle některého z nároků 1 až 9, kde R, a R2 s X2 tvoří případně substituovanou heterocyklickou skupinu.
26. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 25, kde heterocyklická skupina je kumarin.
- 127CZ 304204 B6
27. Cyklický derivát depsipeptidů podle některého z nároků 1 až 8, kde aa8 je nahrazeno organickou skupinou RSO2-, kde Rje, jak bylo definováno v nároku 1.
28. Cyklický derivát depsipeptidů podle nároku 27, kde Rje methyl.
29. Cyklický derivát depsipeptidů podle nároku 1, kterýje vybraný ze sloučeniny, kterou je:
30. Cyklický derivát depsipeptidů podle nároku 1, kterýje vybraný ze sloučeniny, kterou je
31. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 29, kterým je 8-[fenylmočovina]-didemnin A.
io
32. Cyklický derivát depsipeptidu podle některého z předcházejících nároků 1 až 31, který je ve formě farmaceuticky přijatelné soli.
Konec dokumentu
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0016148A GB0016148D0 (en) | 2000-06-30 | 2000-06-30 | Synthetic methods for aplidine and new antitiumoral derivatives |
| GB0103750A GB0103750D0 (en) | 2001-02-15 | 2001-02-15 | Synthetic methods for aplidine and new antitumoral derivatives methods of making and using them |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20024233A3 CZ20024233A3 (cs) | 2003-06-18 |
| CZ304204B6 true CZ304204B6 (cs) | 2014-01-02 |
Family
ID=26244577
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2002-4233A CZ304204B6 (cs) | 2000-06-30 | 2001-07-02 | Deriváty aplidinu |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7348310B2 (cs) |
| EP (1) | EP1294747B1 (cs) |
| JP (1) | JP5289662B2 (cs) |
| KR (1) | KR100866056B1 (cs) |
| CN (2) | CN1449408A (cs) |
| AT (1) | ATE393775T1 (cs) |
| AU (1) | AU6769801A (cs) |
| BR (1) | BRPI0112375B8 (cs) |
| CA (1) | CA2414609C (cs) |
| CY (1) | CY1108549T1 (cs) |
| CZ (1) | CZ304204B6 (cs) |
| DE (1) | DE60133817T2 (cs) |
| DK (1) | DK1294747T3 (cs) |
| ES (1) | ES2305083T3 (cs) |
| HK (1) | HK1052940B (cs) |
| HU (1) | HU228998B1 (cs) |
| IL (2) | IL153680A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA03000202A (cs) |
| NO (1) | NO334096B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ523367A (cs) |
| PL (1) | PL208651B1 (cs) |
| PT (1) | PT1294747E (cs) |
| SI (1) | SI1294747T1 (cs) |
| UA (1) | UA76718C2 (cs) |
| WO (1) | WO2002002596A2 (cs) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030148933A1 (en) | 1990-10-01 | 2003-08-07 | Pharma Mar S.A. | Derivatives of dehydrodidemnin B |
| GB9803448D0 (en) | 1998-02-18 | 1998-04-15 | Pharma Mar Sa | Pharmaceutical formulation |
| CN1423564A (zh) * | 1999-11-15 | 2003-06-11 | 法马马有限公司 | 癌症的aplidine治疗 |
| MXPA02009943A (es) | 2000-04-07 | 2003-04-25 | Univ Pennsylvania | Analogos de tamandarin y didemnin y metodos para hacerlos y usarlos. |
| US6509315B1 (en) | 2000-04-07 | 2003-01-21 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Didemnin analogs and fragments and methods of making and using them |
| UA76718C2 (uk) | 2000-06-30 | 2006-09-15 | Фарма Мар, С.А. | Протипухлинні похідні аплідину |
| NZ525196A (en) | 2000-10-12 | 2004-09-24 | Pharma Mar S | Treatment of cancers by aplidine in conjunction with a myoprotector |
| MXPA05009742A (es) | 2003-03-12 | 2006-05-25 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Aplidina para tratamiento de mieloma multiple. |
| WO2004080421A2 (en) | 2003-03-12 | 2004-09-23 | Pharma Mar, S.A. | Improved antitumoral treatments |
| CA2519234A1 (en) | 2003-03-21 | 2004-10-07 | Madeleine M. Joullie | Tamandarin analogs and fragments thereof and methods of making and using |
| EP1942944A2 (en) * | 2005-10-31 | 2008-07-16 | Genentech, Inc. | Macrocyclic depsipeptide antibody-drug conjugates and methods |
| CA2643238C (en) * | 2006-02-28 | 2016-05-03 | Pharma Mar, S.A. | Improved antitumoral treatments |
| US20100240595A1 (en) * | 2007-10-19 | 2010-09-23 | Pharma Mar ,S.A. | Improved Antitumoral Treatments |
| KR20100131474A (ko) * | 2008-03-07 | 2010-12-15 | 파르마 마르 에스.에이. | 개선된 항암치료 |
| WO2011020913A2 (en) | 2009-08-21 | 2011-02-24 | Pharma Mar, S.A. | Cyclodepsipeptide antiviral compounds |
| EP2614089A1 (fr) * | 2010-09-10 | 2013-07-17 | Sanofi-Aventis | Polysaccharides biotinyles a activite antithrombotique et presentant une stabilite metabolique amelioree |
| JOP20190254A1 (ar) | 2017-04-27 | 2019-10-27 | Pharma Mar Sa | مركبات مضادة للأورام |
| CA3169540A1 (en) | 2020-03-02 | 2021-09-10 | Pablo Aviles Marin | Compounds for use in viral infections |
| JP2023517194A (ja) | 2020-03-02 | 2023-04-24 | ファルマ、マール、ソシエダード、アノニマ | コロナウイルス感染の処置における組合せに使用するためのｐｌｄ |
| BR112022017008A2 (pt) | 2020-03-02 | 2022-10-11 | Pharma Mar Sa | Compostos para uso no tratamento de infecção por coronavírus |
| US20230158104A1 (en) | 2020-03-02 | 2023-05-25 | Pharma Mar, S.A. | Compounds for use in autoimmune conditions |
| CN115594739A (zh) * | 2021-06-28 | 2023-01-13 | 浙江珲达生物科技有限公司（Cn） | 一种dehydrodidemnin B类化合物的制备方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0393883A1 (en) * | 1989-04-10 | 1990-10-24 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Novel cytotoxic cyclic depsipeptides from the tunicate trididemnum solidum |
| WO1993000362A1 (de) * | 1991-06-20 | 1993-01-07 | Basf Aktiengesellschaft | Neue peptide (didemnine), ihre herstellung und verwendung |
| ES2102322A1 (es) * | 1995-07-13 | 1997-07-16 | Pharma Mar Sa | Procedimiento de preparacion de didemnina a. |
| WO1998017302A1 (en) * | 1996-10-24 | 1998-04-30 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Total synthesis of the amino hip analogue of didemnin a |
| WO1998017275A1 (en) * | 1996-10-24 | 1998-04-30 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Semi-synthetic studies toward didemnin analogues |
| US6034058A (en) * | 1997-04-15 | 2000-03-07 | Rinehart; Kenneth L. | Semi-synthetic alanyl dilemnin analogs |
| WO2001076616A1 (en) * | 2000-04-07 | 2001-10-18 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Tamandarin and didemnin analogs and methods of making and using them |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4493796A (en) * | 1980-09-12 | 1985-01-15 | Board Of Trustees, Univ. Of Ill. | Didemnins A, B, C, and derivatives thereof, as antiviral agents |
| DE3161556D1 (en) | 1980-09-12 | 1984-01-05 | Univ Illinois | Novel antibiotics, derivatives thereof, processes for their extraction, and compositions containing them |
| US4950649A (en) * | 1980-09-12 | 1990-08-21 | University Of Illinois | Didemnins and nordidemnins |
| IT1153974B (it) * | 1982-09-23 | 1987-01-21 | Erba Farmitalia | Composizioni farmacologiche a base di cisplatino e metodo per il loro ottenimento |
| GB8922026D0 (en) | 1989-09-29 | 1989-11-15 | Pharma Mar Sa | Novel anti-viral and cytotoxic agent |
| US5462726A (en) * | 1993-12-17 | 1995-10-31 | Bristol-Myers Squibb Company | Method of inhibiting side effects of solvents containing ricinoleic acid or castor oil or derivatives thereof employing a thromboxane A2 receptor antagonist and pharmaceutical compositions containing such solvents |
| US5861439A (en) * | 1994-11-14 | 1999-01-19 | Alza Corporation | Method for enhanced electrotransport agent delivery |
| US6509316B2 (en) * | 1995-03-07 | 2003-01-21 | George Washington University | Pharmaceutical compositions, methods, and kits for treatment and diagnosis of lung cancer |
| WO1997044026A1 (en) * | 1996-05-22 | 1997-11-27 | Neuromedica, Inc. | Compositions comprising conjugates of cis-docosahexaenoic acid and taxotere |
| US6156724A (en) * | 1996-06-07 | 2000-12-05 | Rinehart; Kenneth L. | Uses of didemnins as immunomodulating agents |
| EP0981352B8 (en) * | 1997-05-07 | 2009-06-17 | Pharma Mar, S.A. | Use of aplidine for the treatment of cardiovascular diseases |
| GB9803448D0 (en) | 1998-02-18 | 1998-04-15 | Pharma Mar Sa | Pharmaceutical formulation |
| WO2000006134A2 (en) * | 1998-07-30 | 2000-02-10 | Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. | Use of l-carnitine and its alkanoyl derivatives in the preparation of medicaments with anticancer activity |
| JP2003500360A (ja) | 1999-05-25 | 2003-01-07 | ポイント セラピューティクス， インコーポレイテッド | ボロプロリン化合物類を含む抗癌剤 |
| US6890904B1 (en) * | 1999-05-25 | 2005-05-10 | Point Therapeutics, Inc. | Anti-tumor agents |
| CN1423564A (zh) | 1999-11-15 | 2003-06-11 | 法马马有限公司 | 癌症的aplidine治疗 |
| US6509315B1 (en) * | 2000-04-07 | 2003-01-21 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Didemnin analogs and fragments and methods of making and using them |
| UA76718C2 (uk) * | 2000-06-30 | 2006-09-15 | Фарма Мар, С.А. | Протипухлинні похідні аплідину |
| WO2002030441A2 (en) | 2000-10-12 | 2002-04-18 | Pharma Mar, S.A. | Treatment of cancers by aplidine in conjunction with a myoprotector |
| DE60229414D1 (de) | 2001-10-19 | 2008-11-27 | Pharma Mar Sa | Verwendung von aplidine in der behandlung von pankreaskrebs |
| WO2004080421A2 (en) | 2003-03-12 | 2004-09-23 | Pharma Mar, S.A. | Improved antitumoral treatments |
-
2001
- 2001-02-07 UA UA2003010794A patent/UA76718C2/uk unknown
- 2001-07-02 SI SI200130843T patent/SI1294747T1/sl unknown
- 2001-07-02 CZ CZ2002-4233A patent/CZ304204B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-07-02 ES ES01945484T patent/ES2305083T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 CN CN01814701A patent/CN1449408A/zh active Pending
- 2001-07-02 KR KR1020027018030A patent/KR100866056B1/ko active IP Right Grant
- 2001-07-02 DK DK01945484T patent/DK1294747T3/da active
- 2001-07-02 CA CA2414609A patent/CA2414609C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 US US10/312,341 patent/US7348310B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 JP JP2002507848A patent/JP5289662B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 DE DE60133817T patent/DE60133817T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 HU HU0301387A patent/HU228998B1/hu unknown
- 2001-07-02 BR BR0112375A patent/BRPI0112375B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-07-02 PL PL360531A patent/PL208651B1/pl unknown
- 2001-07-02 MX MXPA03000202A patent/MXPA03000202A/es active IP Right Grant
- 2001-07-02 AU AU6769801A patent/AU6769801A/xx active Pending
- 2001-07-02 PT PT01945484T patent/PT1294747E/pt unknown
- 2001-07-02 EP EP01945484A patent/EP1294747B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 NZ NZ52336701A patent/NZ523367A/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-07-02 AT AT01945484T patent/ATE393775T1/de active
- 2001-07-02 WO PCT/GB2001/002901 patent/WO2002002596A2/en active IP Right Grant
- 2001-07-02 IL IL15368001A patent/IL153680A0/xx unknown
- 2001-07-02 CN CN201410805461.6A patent/CN104650177A/zh active Pending
-
2002
- 2002-12-26 IL IL153680A patent/IL153680A/en active IP Right Grant
- 2002-12-27 NO NO20026242A patent/NO334096B1/no not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-07-21 HK HK03105236.0A patent/HK1052940B/zh not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-04-20 US US11/788,866 patent/US7678765B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-07-30 CY CY20081100795T patent/CY1108549T1/el unknown
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0393883A1 (en) * | 1989-04-10 | 1990-10-24 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Novel cytotoxic cyclic depsipeptides from the tunicate trididemnum solidum |
| WO1993000362A1 (de) * | 1991-06-20 | 1993-01-07 | Basf Aktiengesellschaft | Neue peptide (didemnine), ihre herstellung und verwendung |
| ES2102322A1 (es) * | 1995-07-13 | 1997-07-16 | Pharma Mar Sa | Procedimiento de preparacion de didemnina a. |
| WO1998017302A1 (en) * | 1996-10-24 | 1998-04-30 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Total synthesis of the amino hip analogue of didemnin a |
| WO1998017275A1 (en) * | 1996-10-24 | 1998-04-30 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Semi-synthetic studies toward didemnin analogues |
| US6034058A (en) * | 1997-04-15 | 2000-03-07 | Rinehart; Kenneth L. | Semi-synthetic alanyl dilemnin analogs |
| WO2001076616A1 (en) * | 2000-04-07 | 2001-10-18 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Tamandarin and didemnin analogs and methods of making and using them |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| H. Vervoort and W. Fenical: "Tamandarins A abd B: New cytotoxic depsipeptides from a Brazilian ascidian of the family Didemnidae", J. Org. Chem., Vol. 65(3), 782-792, 2000 * |
| R. Sakai et al.: "Structure-activity relationship of didemnins", J. Med. Chem., Vol. 39(14), 2819-2834, 1996 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ304204B6 (cs) | Deriváty aplidinu | |
| AU2012338436B2 (en) | Cytotoxic peptides and antibody drug conjugates thereof | |
| AU2014373574B2 (en) | Sulfonamide-containing linkage systems for drug conjugates | |
| EP1276491B1 (en) | Tamandarin and didemnin analogs and methods of making and using them | |
| JP2015524394A (ja) | ペプチドエポキシケトンプロテアーゼ阻害剤のプロドラッグ | |
| US6509315B1 (en) | Didemnin analogs and fragments and methods of making and using them | |
| JP2006523214A (ja) | タマンダリン類似物およびこれらのフラグメントそして製造方法および使用方法 | |
| CN102356085A (zh) | 具有脯氨酸环结构的咪唑并噻唑衍生物 | |
| US10421778B2 (en) | Isoform-selective lysine deacetylase inhibitors | |
| EP3166933B1 (en) | Epoxyketone compounds for enzyme inhibition | |
| RU2299887C2 (ru) | Способы синтеза аплидина и новых противоопухолевых производных, способы их промышленного получения и применения | |
| AU2001267698B2 (en) | Synthetic methods for aplidine and new antitumoral derivatives, methods of making and using them | |
| AU2001267698A1 (en) | Synthetic methods for aplidine and new antitumoral derivatives, methods of making and using them | |
| CN101575363B (zh) | Aplidine及新抗肿瘤衍生物的合成方法、及其制备和使用方法 | |
| AU2015264844A1 (en) | Cytotoxic peptides and antibody drug conjugates thereof | |
| NZ624470B2 (en) | Cytotoxic peptides and antibody drug conjugates thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20210702 |