PL206709B1 - Sposób wytwarzania i sposób obniżania aktywności IgE głównego hipoalergicznego alergenu pyłku brzozy rBet v 1, główny hipoalergiczny alergen pyłku brzozy rBet v 1uzyskiwany takim sposobem i jego zastosowanie jako leku oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca taki główny alergen - Google Patents
Sposób wytwarzania i sposób obniżania aktywności IgE głównego hipoalergicznego alergenu pyłku brzozy rBet v 1, główny hipoalergiczny alergen pyłku brzozy rBet v 1uzyskiwany takim sposobem i jego zastosowanie jako leku oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca taki główny alergenInfo
- Publication number
- PL206709B1 PL206709B1 PL373526A PL37352603A PL206709B1 PL 206709 B1 PL206709 B1 PL 206709B1 PL 373526 A PL373526 A PL 373526A PL 37352603 A PL37352603 A PL 37352603A PL 206709 B1 PL206709 B1 PL 206709B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- rbet
- birch pollen
- major
- eluent
- pollen allergen
- Prior art date
Links
- 239000013575 birch pollen allergen Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 230000000774 hypoallergenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims abstract description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 44
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical group [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 18
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 14
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 13
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 9
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 8
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 7
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 5
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 4
- 102000006392 myotrophin Human genes 0.000 claims description 4
- 108010058605 myotrophin Proteins 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 claims description 4
- 238000005185 salting out Methods 0.000 claims description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 2
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 claims 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 13
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 8
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 abstract 1
- 229960004784 allergens Drugs 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- PORMUFZNYQJOEI-UHFFFAOYSA-N sumatriptan succinate Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O.CNS(=O)(=O)CC1=CC=C2NC=C(CCN(C)C)C2=C1 PORMUFZNYQJOEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 206010010744 Conjunctivitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010048908 Seasonal allergy Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 241000256856 Vespidae Species 0.000 description 1
- 239000013567 aeroallergen Substances 0.000 description 1
- 239000013572 airborne allergen Substances 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000002205 allergic conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000024998 atopic conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 239000002655 kraft paper Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229940046536 tree pollen allergenic extract Drugs 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
- A61P27/14—Decongestants or antiallergics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Botany (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Otolaryngology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
(13) B1 (51) Int.Cl.
A61K 39/35 (2006.01) C07K 14/415 (2006.01) C07K 1/16 (2006.01)
A61P 37/08 (2006.01)
Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 373526 (22) Data zgłoszenia: 07.02.2003 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
07.02.2003, PCT/EP03/001246 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
04.09.2003,WO03/072601
| Sposób wytwarzania i sposób obniżania aktywności IgE głównego hipoalergicznego (54) alergenu pyłku brzozy rBet v 1, główny hipoalergiczny alergen pyłku brzozy rBet v 1 (54) uzyskiwany takim sposobem i jego zastosowanie jako leku oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca taki główny alergen | |
| (73) Uprawniony z patentu: | |
| (30) Pierwszeństwo: | MERCK PATENT GMBH, Darmstadt, DE |
| 27.02.2002, EP, 02004567.0 | (72) Twórca(y) wynalazku: |
| (43) Zgłoszenie ogłoszono: 05.09.2005 BUP 18/05 | ROLAND SUCK, Hamburg, DE HELMUT FIEBIG, Schwarzenbek, DE OLIVER CROMWELL, Wentorf, DE |
| (45) O udzieleniu patentu ogłoszono: 30.09.2010 WUP 09/10 | (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Łukaszyk Szymon Kancelaria Patentowa Łukaszyk |
PL 206 709 B1
Opis wynalazku
Dziedzina wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania alergenów pyłku brzozy, które wyróżniają się brakiem lub przynajmniej redukcją wiązania immunoglobiny E, to jest hipoalergicznością. Alergeny te całkowicie zachowują przy tym stosowną terapeutyczną stymulację limfocytów T. Mogą być zatem stosowane w specyficznej immunoterapii jako środki terapeutyczne o niewielkich skutkach ubocznych. Przedmiotem wynalazku jest ponadto sposób obniżania aktywności IgE głównego hipoalergicznego alergenu pyłku brzozy rBet v 1, główny hipoalergiczny alergen pyłku brzozy rBet v 1 uzyskiwany takim sposobem i jego zastosowanie jako leku oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca taki główny alergen.
Stan techniki
Zasięg alergii typu 1 rozszerzył się znacznie na całym świecie w ostatnich dziesięcioleciach. Aż do 20% ludności w krajach uprzemysłowionych cierpi z powodu takich dolegliwości jak alergiczny nieżyt nosa, zapalenie spojówek lub dychawica oskrzelowa, wywoływanych przez alergeny obecne w powietrzu (aeroalergeny), które uwalniane są z różnorodnych źródeł takich jak pyłki roślin, roztocza, ssaki (psy, koty, konie), czy pleśniaki. Poważne alergie mogą być także powodowane przez owady żądlące lub kąsające, takie jak pszczoły czy osy.
Substancjami wywołującymi alergie typu 1 są proteiny, glikoproteiny lub polipeptydy. Alergeny te reagują poprzez błonę śluzową po strawieniu lub za pomocą przeciwciał IgE wiążą się z powierzchnią komórek tucznych uczulonych osób po użądleniu lub ukąszeniu. Jeżeli dwie lub większa liczba cząsteczek IgE jest usieciowanych razem przez alergen, skutkuje to uwolnieniem mediatorów (np. histaminy, prostaglandyn) i cytokin przez komórki efektora, a tym samym wywołanie objawów alergicznych.
Pyłki brzozy są najczęstszymi inicjatorami reakcji alergicznych wśród pyłków drzew (Jarolim
E. et al., 1989, Allergy 44:385-95). Ponad 90% cierpiących na alergie pyłku brzozy posiada przeciwciała IgE przeciwko głównemu alergenowi Bet v 1 (Elfman, L. et al., 1997, Int. Arch. Allergy Immunol., 113: 249-51).
Za pomocą sekwencji cDNA, możliwe jest wytworzenie alergenów rekombinowanych, które mogą mieć zastosowanie w diagnostyce i terapii alergii (Scheiner and Kraft, 1995, Allergy 50, 384-391). Wytwarzanie rekombinowanych alergenów Bet v 1 (rBet v 1) i ich oczyszczenie dla celów farmaceutycznych opisali na przykład Hoffmann-Sommergruber et al. (Protein Exp. Purif. 9 (1), 1997: 33-39).
Ponadto możliwa jest specyficzna modyfikacja genetyczna alergenów rekombinowanych, pozwalająca na osiągnięcie obniżonego potencjału alergicznego (Schramm et al., 1999, J. Immunol. 162 (4): 2406-2414; Valenta et al., 1999, Biol. Chem. 380: 815-24; Singh et al., 1999, Int. Arch. Allergy Immunol. 119: 75-85). Odmiany alergenów tego typu są obiecujące dla specyficznej immunoterapii alergii typu 1.
Potencjalną niedogodnością odmiany alergenów rekombinowanych jest fakt, że modyfikacja ich struktury pierwotnej prowadzi do zablokowania lub obniżenia reaktywności epitopów limfocytów T, które są konieczne dla uzyskania skuteczności terapeutycznej. Możliwość ta może być wykluczona jedynie wtedy, kiedy pierwotna struktura odpowiadająca alergenom naturalnym, służy jako podstawa dla wytworzenia rekombinowanego białka.
W przypadku głównego alergenu pyłku brzozy Bet v 1, preparat wytwarza się metodami rekombinacji w dwóch połowach (Vrtala, S., et al., 1997, J. Clin. Invest. 99: 1673-81) lub jako trimer (Vrtala, S., et al., 1999, Int. Arch. Allergy Immunol. 118:218-9) celem jego optymalizacji dla celów terapeutycznych, to znaczy obniżenia jego możliwości wiązania IgE. Potencjalna strata epitopów limfocytów T i nierozpuszczalność białek jest także niekorzystnym efektem tych rozwiązań. Kolejną niedogodność można dostrzec w złożonym sposobie wytwarzania takich odmian rBet v 1.
Odpowiednim punktem wyjściowym dla wytwarzania głównego rekombinowanego alergenu, jaki może być wykorzystany do zastosowań terapeutycznych będzie odpowiednia cząsteczka, której struktura pierwotna odpowiada typowi dzikiemu, która charakteryzuje się nieograniczoną stymulacją limfocytów T, ale posiada obniżoną aktywność IgE, czyli jest hipoalergiczna.
Cel ten osiągnięto według wynalazku poprzez przeprowadzenie serii etapów biochemicznego oczyszczania znanych per se, z wykorzystaniem rozpuszczalnego rekombinowanego głównego alergenu rBet v 1 jako materiału wyjściowego. Nieoczekiwanie w białkach oczyszczonych w ten sposób zaobserwowano obniżoną aktywność IgE przy zachowanej jednocześnie stymulacji limfocytów T. OdPL 206 709 B1 powiednio sposób według wynalazku dostarcza ulepszonej efektywności terapeutycznej, przy znacząco zredukowanych lub przy braku efektów ubocznych.
Forma sposobu wytwarzania alergenów rekombinowanych jest tu szczególnie istotna, ponieważ białka są w trakcie poszczególnych etapów sposobu przekształcane są do konformacji, która nie ma lub ma zasadniczo obniżone powinowactwo do IgE przy stałej stymulacji limfocytów T.
Opis figur rysunku
Fig. 1A: SDS-PAGE dla charakteryzacji hipoalergicznego rBet v 1,
Ścieżka 1: Standardowe białko dla oszacowania ciężaru cząsteczkowego,
Ścieżka 2: Naturalne nBet v 1,
Ścieżka 3: rBet v 1 oczyszczone sposobem według wynalazku,
Ścieżka 4: rBet v 1 oczyszczone zgodnie ze stanem techniki.
Fig. 1B: Pasmo nitrocelulozy SDS-PAGE z rysunku Fig. 1A.
Fig. 2A: Pasmo nitrocelulozy dla określenia aktywności IgE w serum 20 poszczególnych pacjentów,
Pozycja 3: Naturalne nBet v 1,
Pozycja 4: rBet v 1 oczyszczone sposobem według wynalazku,
Pozycja 5: rBet v 1 oczyszczone zgodnie ze stanem techniki.
Fig. 2B: Pasmo nitrocelulozy dla określenia rodzaju próbek Bet v 1,
Pasma 21-26: Różne poliklonalne przeciwciała królika przeciw-Bet v 1,
Pasmo 27: Monoklonalne przeciwciało mysie 6B6 przeciw-Bet v 1,
Fig. 3: Test EAST Ilościowej oceny wiązań IgE.
Stężenie inhibitora wiązania IgE-Bet v 1 w μg/ml naniesiono na osi pionowej, a stopień inhibicji w [%] na osi poziomej.
Fig. 4: Wyznaczenie stymulacji limfocytów T poprzez odmiany Bet v 1.
Porównano stężenie naturalnego nBet v 1, konwencjonalnie oczyszczonego rekombinowanego rBet v 1 oraz rekombinowanego rBet v 1 oczyszczonego sposobem według wynalazku oraz odpowiednie wskaźniki stymulacji (SI) uzyskane dla różnych linii limfocytów T (ang. T-cell lines - TCL) oraz klonów limfocytów T (ang. T-cell clones - TCC).
Szczegółowy opis wynalazku
Wynalazek dotyczy sposobu biochemicznego oczyszczania, w rezultacie którego wytwarzane są białka mające właściwości zmodyfikowane według wynalazku za pomocą efektywnego oczyszczania z zastosowaniem specyficznych eluentów, na przykład, do wytwarzania alergenów otrzymanych metodami rekombinacji. Właściwości te obejmują brak, a przynajmniej zasadnicze obniżenie aktywności IgE, przy jednoczesnym zachowaniu stymulacji limfocytów T.
Istotą wynalazku jest zatem sposób obniżania aktywności IgE głównego alergenu pyłku brzozy rBet v 1, który obejmuje zastosowanie rozpuszczalnego rekombinowanego głównego alergenu pyłku brzozy rBet v 1 i przeprowadzenie przedstawionych poniżej etapów chromatografii dla jego oczyszczenia oraz następującego po tym etapu zobojętniania.
Istotą wynalazku jest ponadto sposób wytwarzania głównego hipoalergicznego alergenu pyłku brzozy rBet v 1 za pomocą wieloetapowego oczyszczania chromatograficznego z zastosowaniem jako eluentu zasadniczo niebuforowanych zasad wodnych oraz następującego po tym etapu zobojętniania, gdzie zastosowanym materiałem wyjściowym jest rozpuszczalne surowe białko rBet v 1 otrzymane metodami rekombinacji.
W korzystnym przykładzie realizacji sposobu takiego sposobu według wynalazku rozpuszczalne surowe białko rBet v 1 otrzymane sposobami rekombinacji jest wytworzone w komórkach E. coli.
Etapy oczyszczania chromatograficznego korzystnie obejmują chromatografię anionowymienną (ang. anion exchange chromatography), chromatografię oddziaływań hydrofobowych (ang. hydrophobic interaction chromatography) oraz filtrację żelową i mogą być przeprowadzane raz, kilka razy jeden po drugim lub kilka razy zamiennie. Jednak etapy oczyszczania chromatograficznego korzystnie przeprowadzane są w następującej sekwencji: pierwsza filtracja żelowa, chromatografia anionowymienna, chromatografia oddziaływań hydrofobowych, druga filtracja żelowa.
Oczyszczanie chromatograficzne jest zwykle przeprowadzane przy stężeniu zasady od 5 do 100 mM, ale korzystnie od 5 do 40 mM a szczególnie korzystnie od 10 do 30 mM, gdzie podstawową substancją jest korzystnie NaOH. W miejsce układu czysto wodnego możliwe jest także zastosowanie układu mieszanego zawierającego, na przykład wodę i metanol. Można także rozważyć układ bezwodny, na przykład układ metanolowy. Korzystne jest jednak zastosowanie układu wodnego.
PL 206 709 B1
W zależności od odpowiedniego etapu chromatografii, do eluentu mogą zostać dodane różne stężenia soli obojętnej - korzystnie NaCI - aż do około 5 M.
Obniżenie wartości pH do wartości tolerowanej przez względnie czułe białka, jakie może okazać się tu konieczne, może zostać osiągnięte poprzez dodanie wodorowęglanu sodu.
Ustalenie warunków fizjologicznych na końcu procesu oczyszczania może być także powodem dodania wodorowęglanu sodu podczas etapów chromatografii. Zasadniczo możliwe są stężenia do 100 mM. Przeprowadza się to jednak korzystnie w fizjologicznym zakresie poniżej 20 mM, a szczególnie korzystnie przy 11 mM.
W przypadku rBet v 1, obniż enie wartości pH nie jest niezbędne. Pomimo tego wodorowęglan sodu jest ogólnie dodawany w zastosowaniu sposobu według wynalazku względem rBet v 1 celem możliwości ustalenia stężeń fizjologicznych w prosty sposób na końcu oczyszczania.
Istotą wynalazku jest więc sposób wytwarzania głównego hipoalergicznego alergenu pyłku brzozy rBet v 1, w którym zasadniczo niebuforowane eluenty podstawowe pozwalają na oczyszczenie białek w roztworze w warunkach łagodnych a tym samym w stanie nadającym się do chromatografii.
W korzystnej realizacji sposobu, surowe białko rBet v 1 jest wstępnie oczyszczane przed przeprowadzeniem właściwego oczyszczania za pomocą chromatografii, na przykład chromatografii oddziaływań hydrofobowych lub chromatografii jonowymiennej, i/lub wysalania, gdzie, w przeciwieństwie do następującego oczyszczania właściwego, stosuje się eluent lub roztwór buforowany.
Wyjściowymi materiałami dla tego sposobu są rozpuszczalne, rekombinowane alergeny wytwarzane w bakteriach lub innych odpowiednich komórkach gospodarza (na przykład drożdżach). Ponieważ sposób według wynalazku jest możliwy do ogólnego zastosowania dla tych produktów ekspresji, rozpuszczalne alergeny różnego pochodzenia, mogą nim być oczyszczone, poddane ponownemu procesowi formowania i poddane formulacji. W szczególności, w przypadku odpowiedniego podobieństwa tych alergenów różnego pochodzenia do głównego alergenu pyłku brzozy rBet v 1, można oczekiwać, że uzyskane zostaną odpowiednie właściwości według wynalazku. Jednak sposób ten jest szczególnie odpowiedni do wytwarzania głównego alergenu pyłku brzozy rBet v 1 otrzymanego metodami rekombinacji. Naturalny główny alergen pyłku brzozy nBet v 1 jest także zasadniczo odpowiedni jako materiał wyjściowy.
Ostateczne zobojętnianie rekombinowanych składników aktywnych poprzez modyfikacje wartości pH umożliwia - przy założeniu odpowiedniego doboru stężeń składników eluentu - bezpośrednie uzyskanie gotowego do użycia roztworu fizjologicznego.
Farmaceutycznie aktywne składniki mogą być stosowane bezpośrednio po zobojętnieniu jako preparaty pozajelitowe. Dodatkowo można przeprowadzić powtarzalny i standaryzowany proces w warunkach Dobrej Praktyki Wytwarzania (ang. Good Manufacturing Practice - GMP), który będzie konieczny w przypadku farmaceutyków.
Wynalazek służy zatem do wytwarzania ulepszonych preparatów dla specyficznej immunoterapii alergii, które uzyskuje się sposobem według wynalazku. Znacznie obniżona lub brak aktywności IgE dostarcza korzystnych parametrów dla specyficznej immunoterapii.
Rekombinowane hipoalergiczne alergeny otrzymane tym sposobem mogą zatem wpływać na polepszenie terapii chorób alergicznych.
Istotą wynalazku jest więc główny hipoalergiczny alergen pyłku brzozy rBet v 1 otrzymywany sposobem według wynalazku, a w szczególności jego zastosowanie jako leku.
Możliwe jest oczywiście, celem dalszego wpływania na właściwości głównego alergenu pyłku brzozy rBet v 1 - na przykład celem osiągnięcia dalszego obniżenia aktywności IgE lub dalszego zwiększenia stymulacji limfocytów T - przeprowadzenie farmaceutycznie dopuszczalnych modyfikacji białka, a tym samym wytworzenie jego pochodnych. Modyfikacje te mogą być z jednej strony modyfikacjami genetycznymi na poziomie DNA, gdzie odpowiednie są na przykład, aminokwasowe insercje, delecje i substytucje, podział białka na fragmenty i fuzja białka lub jego fragmentów z innymi białkami lub peptydami. Jednak modyfikacje te mogą mieć też charakter czysto chemiczny, mając miejsce na poziomie cząsteczkowym.
Istotą wynalazku jest zatem zastosowanie głównego hipoalergicznego alergenu pyłku brzozy rBet v 1 według wynalazku dla otrzymania leku do specyficznej immunoterapii alergii, w inicjacji której uczestniczy główny alergen pyłku brzozy rBet v 1.
W końcu istotą wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna zawierająca gł ówny hipoalergiczny alergen pyłku brzozy rBet v 1 według wynalazku. Składniki aktywne według wynalazku, oraz opcjonalnie zaróbki i/lub środki wspomagające mogą być przekształcone do odpowiedniej formy dozowania
PL 206 709 B1 wraz z przynajmniej jedną stałą, ciekłą i/lub półciekłą zaróbką i/lub środkiem wspomagającym i opcjonalnie w kombinacji z jednym lub większą liczbą dalszych składników aktywnych.
Kompozycje te mogą być stosowane jako środki terapeutyczne w medycynie lub weterynarii. Odpowiednimi zaróbkami są organiczne lub nieorganiczne substancje, jakie nadają się do podawania pozajelitowego i nie reagują z hipoalergicznym głównym alergenem pyłku brzozy rBet v 1. Odpowiednie do podawania pozajelitowego są, w szczególności, roztwory, korzystnie na bazie oleju lub wody, ponadto zawiesiny, emulsje bądź implanty. Hipoalergiczny główny alergen pyłku brzozy rBet v 1 według wynalazku może być także liofilizowany a otrzymany liofilizat wykorzystywany na przykład do wytwarzania zastrzyków. Wskazane kompozycje mogą być sterylizowane i/lub mogą zawierać środki wspomagające, takie jak środki zwilżające, konserwanty, stabilizatory i/lub środki nawilżające, emulgatory, sole dla modyfikacji ciśnienia osmotycznego, substancje buforowe i/lub wiele dalszych składników aktywnych.
Ponadto odpowiedni preparat głównego hipoalergicznego alergenu pyłku brzozy rBet v 1 według wynalazku umożliwia wytwarzanie preparatów bazowych, na przykład poprzez adsorpcję na wodorotlenku aluminium.
Sposób wytwarzania według wynalazku opisano ogólnie poniżej. W opisie tym wszystkie materiały chromatograficzne wymienione na zasadzie przykładu pochodzą od firmy Amersham Biosciences (Freiburg, Niemcy). Pierwszy etap wstępnego oczyszczania dla usunięcia kwasów nukleinowych może obejmować chromatografię oddziaływań hydrofobowych przeprowadzaną w warunkach fizjologicznych (przy pH od 6 do 8, nie powodującym denaturacji), gdzie następuje zatężanie białka docelowego. Alternatywnie można przeprowadzić wysalanie lub chromatografię jonowymienną. Przeprowadzenie wspomnianego pierwszego etapu oczyszczania wstępnego nie jest jednak absolutnie konieczne dla uzyskania efektu według wynalazku.
Następny etap oczyszczania służy do przekształcenia białek w słaby eluent solny o stężeniu w zakresie od 10 do 100 mM, na przykład 20 mM NaCI, przykładowo za pomocą filtracji żelowej na kolumnie Sephadex G-25. Tworzą się dzięki temu warunki, które zwiększają wydajność chromatografii jonowymiennej z zastosowaniem eluentów alkalicznych. Roztwór białkowy przygotowany w ten sposób jest następnie wykorzystywany do chromatografii anionowymiennej, na przykład z zastosowaniem kolumny Source Q. Większość alergenów wiąże się tu z nośnikiem. Eluent alkaliczny powoduje, że nawet poprzednio słabo rozpuszczalne lub nierozpuszczalne białka pozostają w roztworze. Wymywanie gradientem NaCI skutkuje częściowym usunięciem zanieczyszczeń bakteryjnych i fragmentów składników aktywnych.
W dwóch dalszych etapach oczyszczania za pomocą chromatografii oddziaływań hydrofobowych oraz filtracji żelowej, wstępnie oczyszczone i zrównoważone alergeny są zasadniczo odseparowywane od dalej obecnych zanieczyszczeń bakteryjnych. W tym celu stosuje się zasadniczo te same eluenty zawierające niskocząsteczkową zasadę i zmienny stosunek nieorganicznej soli obojętnej. Do eluentu można korzystnie dodawać nieorganiczną sól obojętną oraz opcjonalnie NaHCO3. Dzięki temu alergeny mogą się wiązać do kolumny w chromatografii oddziaływań hydrofobowych z zastosowaniem, na przykład, do 5 M NaCI, 20 mM NaOH i 11 mM NaHCO3 i mogą być następnie wymywane z zastosowaniem roztworu alkalicznego o niskiej zawartości lub nie zawierającego soli, na przykład 20 mM NaOH.
Stężenia związków NaOH, NaCI i NaHCO3 obecnych w eluencie dobiera się korzystnie tak, aby typowe stężenia dla fizjologicznego roztworu solnego mogły być określone w etapie zobojętniania następującym po etapie oczyszczania.
Claims (15)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania głównego hipoalergicznego alergenu pyłku brzozy rBet v 1 za pomocą jednego lub większej liczby etapów oczyszczania chromatograficznego, z zastosowaniem zasadniczo niebuforowanych zasad wodnych jako eluentu, oraz następującego po tym etapu zobojętniania, znamienny tym, że zastosowanym materiałem wyjściowym jest rozpuszczalne surowe białko rBet v 1 otrzymane metodami rekombinacji.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że rozpuszczalne surowe białko rBet v 1 otrzymane sposobami rekombinacji zostało wytworzone w komórkach E. coli.PL 206 709 B1
- 3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, ż e etapy oczyszczania chromatograficznego obejmują chromatografię anionowymienną (ang. anion exchange chromatography), chromatografię oddziaływań hydrofobowych (ang. hydrophobic interaction chromatography) i filtrację żelową.
- 4. Sposób według dowolnego z zastrz. 1-3, znamienny tym, że etapy oczyszczania chromatograficznego są przeprowadzane w następującej sekwencji: pierwsza filtracja żelowa, chromatografia anionowymienną, chromatografia oddziaływań hydrofobowych, druga filtracja żelowa.
- 5. Sposób według dowolnego z zastrz. 1-4, znamienny tym, że zasada zastosowana jako eluent ma stężenie w zakresie od 5 mM do 100 mM, korzystnie od 5 mM do 40 mM.
- 6. Sposób według dowolnego z zastrz. 1-5, znamienny tym, że zasadą zastosowaną jako eluent jest NaOH.
- 7. Sposób według dowolnego z zastrz. 1-6, znamienny tym, że do eluentu dodaje się nieorganiczną sól obojętną oraz opcjonalnie NaHCO3.
- 8. Sposób według dowolnego z zastrz. 1-7, znamienny tym, że nieorganiczną solą obojętną dodawaną do eluentu jest NaCI.
- 9. Sposób według dowolnego z zastrz. 6-8, znamienny tym, że stężenia związków NaOH, NaCI i NaHCO3 obecnych w eluencie dobiera się tak, aby typowe stężenia dla fizjologicznego roztworu solnego mogły być określone w etapie zobojętniania następującym po etapie oczyszczania.
- 10. Sposób według dowolnego z zastrz. 1-9, znamienny tym, że surowe białko rBet v 1 jest wstępnie oczyszczane w roztworze buforowym za pomocą chromatografii i/lub wysalania.
- 11. Sposób obniżania aktywności IgE głównego hipoalergicznego alergenu pyłku brzozy rBet v 1, znamienny tym, że rozpuszczalny główny alergen pyłku brzozy rBet v 1 otrzymany metodami rekombinacji jest podawany sposobowi zdefiniowanemu w dowolnym z zastrz. 1-10.
- 12. Główny hipoalergiczny alergen pyłku brzozy rBet v 1 uzyskiwany sposobem zdefiniowanym w dowolnym z zastrz. 1-10.
- 13. Główny hipoalergiczny alergen pyłku brzozy rBet v 1 zdefiniowany w zastrz. 12 jako lek.
- 14. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca główny hipoalergiczny alergen pyłku brzozy rBet v 1 zdefiniowany w zastrz. 12 oraz opcjonalnie zaróbki i/lub środki wspomagające.
- 15. Zastosowanie głównego hipoalergicznego alergenu pyłku brzozy rBet v 1 zdefiniowanego w zastrz. 12 dla otrzymywania leku do specyficznej immunoterapii alergii, w rozpoczę ciu której uczestniczy główny alergen pyłku brzozy rBet v 1.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP02004567 | 2002-02-27 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL373526A1 PL373526A1 (pl) | 2005-09-05 |
| PL206709B1 true PL206709B1 (pl) | 2010-09-30 |
Family
ID=27763342
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL373526A PL206709B1 (pl) | 2002-02-27 | 2003-02-07 | Sposób wytwarzania i sposób obniżania aktywności IgE głównego hipoalergicznego alergenu pyłku brzozy rBet v 1, główny hipoalergiczny alergen pyłku brzozy rBet v 1uzyskiwany takim sposobem i jego zastosowanie jako leku oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca taki główny alergen |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20050123568A1 (pl) |
| EP (1) | EP1478662B2 (pl) |
| JP (1) | JP4343702B2 (pl) |
| AT (1) | ATE443716T1 (pl) |
| AU (1) | AU2003208817A1 (pl) |
| CA (1) | CA2477409C (pl) |
| DE (1) | DE50311945D1 (pl) |
| ES (1) | ES2333951T5 (pl) |
| PL (1) | PL206709B1 (pl) |
| PT (1) | PT1478662E (pl) |
| RU (1) | RU2311424C2 (pl) |
| WO (1) | WO2003072601A1 (pl) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT503690A1 (de) | 2006-06-09 | 2007-12-15 | Biomay Ag | Hypoallergene moleküle |
| JP5279238B2 (ja) * | 2006-11-16 | 2013-09-04 | 森川健康堂株式会社 | 血圧降下作用を有する花粉の製造方法 |
| RU2658767C1 (ru) * | 2010-01-14 | 2018-06-22 | Мерк Патент Гмбх | Варианты группы 5 аллергенов злаковых со сниженной аллергенностью вследствие мутагенеза остатков пролина |
| EP2974741A1 (en) * | 2014-07-16 | 2016-01-20 | Stallergenes | Composition of allergen extracts having reduced toxicity and method of production thereof |
| BR102017026619A2 (pt) | 2017-02-15 | 2018-10-30 | Euroimmun Medizinische Labordiagnostika Ag | ensaio melhorado para a diagnose de alergia a amendoim |
| RU2761431C9 (ru) | 2020-10-26 | 2022-04-18 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научный центр "Институт иммунологии" Федерального медико-биологического агентства России (ФГБУ "ГНЦ Институт иммунологии" ФМБА России) | Рекомбинантный полипептид на основе аллергена пыльцы березы и аллергена яблока в качестве вакцины от аллергии |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10044360A1 (de) * | 2000-09-08 | 2002-03-21 | Merck Patent Gmbh | Verfahren zur Aufreinigung von rekombinanten als unlösliche Aggregate exprimierte Proteinen |
-
2003
- 2003-02-07 WO PCT/EP2003/001246 patent/WO2003072601A1/de active Application Filing
- 2003-02-07 PT PT03706458T patent/PT1478662E/pt unknown
- 2003-02-07 AU AU2003208817A patent/AU2003208817A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-07 CA CA2477409A patent/CA2477409C/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-02-07 DE DE50311945T patent/DE50311945D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-07 RU RU2004129282/13A patent/RU2311424C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2003-02-07 JP JP2003571307A patent/JP4343702B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-02-07 US US10/505,897 patent/US20050123568A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-07 PL PL373526A patent/PL206709B1/pl unknown
- 2003-02-07 ES ES03706458.1T patent/ES2333951T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-07 AT AT03706458T patent/ATE443716T1/de active
- 2003-02-07 EP EP03706458.1A patent/EP1478662B2/de not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-07-03 US US12/167,712 patent/US9441021B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2477409C (en) | 2015-01-27 |
| PL373526A1 (pl) | 2005-09-05 |
| WO2003072601A8 (de) | 2005-08-18 |
| DE50311945D1 (de) | 2009-11-05 |
| WO2003072601A1 (de) | 2003-09-04 |
| RU2311424C2 (ru) | 2007-11-27 |
| EP1478662B2 (de) | 2017-07-05 |
| EP1478662B1 (de) | 2009-09-23 |
| JP2005536454A (ja) | 2005-12-02 |
| CA2477409A1 (en) | 2003-09-04 |
| AU2003208817A1 (en) | 2003-09-09 |
| ATE443716T1 (de) | 2009-10-15 |
| US20090069236A1 (en) | 2009-03-12 |
| PT1478662E (pt) | 2009-12-29 |
| JP4343702B2 (ja) | 2009-10-14 |
| US9441021B2 (en) | 2016-09-13 |
| RU2004129282A (ru) | 2005-06-10 |
| EP1478662A1 (de) | 2004-11-24 |
| ES2333951T3 (es) | 2010-03-03 |
| US20050123568A1 (en) | 2005-06-09 |
| ES2333951T5 (es) | 2017-11-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2594123B2 (ja) | 減感作剤 | |
| JPH0393730A (ja) | 減感作剤 | |
| IE60581B1 (en) | New polypeptides with an anticoagulant action, a process to prepare or obtain them, their use and agents containing them | |
| WO1990000397A1 (en) | A pharmaceutical composition for interleukin-2 containing physiologically compatible stabilizers | |
| US9441021B2 (en) | Process for the preparation of hypoallergenic major birch pollen allergen rBet v 1 | |
| DK2046345T3 (en) | Use of escin | |
| CA2010177C (en) | Purified mite allergen | |
| JP2003526315A (ja) | アミノ末端修飾を有するケモカイン | |
| KR100837898B1 (ko) | 다발성 경화증의 치료에서 사용되는 케모킨 변이체 | |
| JP3512452B2 (ja) | ポリペプチドとその製造方法並びに用途 | |
| JP4942892B2 (ja) | 草花粉アレルゲンの単離精製方法 | |
| KR101025352B1 (ko) | 생리활성 복합체 | |
| CA2495825C (en) | Variants of the major allergen phl p 1 from timothy grass | |
| CA2421438C (en) | Method for purifying recombinant proteins expressed as insoluble aggregates | |
| JP2002534996A (ja) | アルファ−コノトキシン・ペプチド | |
| CA2054190A1 (en) | Proteins suitable for combating disease and for protecting grazing cattle from ticks | |
| Kay | Eosinophils in immunological reactions. | |
| EA008743B1 (ru) | Полимерные конъюгаты мутантного неубластина | |
| JP2006508901A (ja) | Ｔ細胞非結合性ペプチド及びその用途 | |
| JP3445593B2 (ja) | ペプチドとその用途 | |
| DE102004035337A1 (de) | Varianten der Gruppe 1-Allergene aus Poaceae mit reduzierter Allergenität und erhaltener T-Zellreaktivität | |
| DE10311106B4 (de) | Peptide gegen Kälteunverträglichkeit hervorrufende Autoantikörper, dafür kodierende Nukleinsäuren, ihre Verwendung und diese umfassende pharmazeutische Zusammensetzungen | |
| TW202245823A (zh) | 無穩定劑或實質上無穩定劑之含有天凡諾賽普特（ｔａｎｆａｎｅｒｃｅｐｔ）的穩定眼用組成物 | |
| WO2024107709A2 (en) | Compositions and methods of using nitration resistant ccl2 chemokines | |
| JPH06192299A (ja) | 精製ダニアレルゲン |