PL195110B1 - Biologicznie czyste kultury bakterii kwasu mlekowego Lactobacillus rhamnosus, kompozycje do immunostymulacji i zastosowanie biologicznie czystych kultur - Google Patents
Biologicznie czyste kultury bakterii kwasu mlekowego Lactobacillus rhamnosus, kompozycje do immunostymulacji i zastosowanie biologicznie czystych kulturInfo
- Publication number
- PL195110B1 PL195110B1 PL98338775A PL33877598A PL195110B1 PL 195110 B1 PL195110 B1 PL 195110B1 PL 98338775 A PL98338775 A PL 98338775A PL 33877598 A PL33877598 A PL 33877598A PL 195110 B1 PL195110 B1 PL 195110B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- rhamnosus
- agal
- mice
- lactis
- composition
- Prior art date
Links
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title abstract description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title description 17
- 230000036039 immunity Effects 0.000 title description 17
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 12
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 title description 6
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 title description 6
- 241000254697 Lactobacillus rhamnosus HN001 Species 0.000 claims abstract description 88
- 241000901050 Bifidobacterium animalis subsp. lactis Species 0.000 claims abstract description 47
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 claims abstract description 33
- 229940009289 bifidobacterium lactis Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 claims description 37
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 21
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 12
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 10
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 9
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 6
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims 1
- 239000002362 mulch Substances 0.000 claims 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 abstract description 2
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 abstract description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 111
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 33
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 33
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 32
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 25
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 23
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 21
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 16
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 16
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 16
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 16
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 14
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 13
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 13
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 11
- 230000004044 response Effects 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 10
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 9
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 7
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 7
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 7
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 5
- 229960002766 tetanus vaccines Drugs 0.000 description 5
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 description 5
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 4
- 230000004719 natural immunity Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 4
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 4
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 210000002011 intestinal secretion Anatomy 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 235000020940 control diet Nutrition 0.000 description 2
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 2
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 235000020124 milk-based beverage Nutrition 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 206010070545 Bacterial translocation Diseases 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- GSXOAOHZAIYLCY-UHFFFAOYSA-N D-F6P Natural products OCC(=O)C(O)C(O)C(O)COP(O)(O)=O GSXOAOHZAIYLCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000006154 MacConkey agar Substances 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000008955 bacterial trafficking Effects 0.000 description 1
- 230000007375 bacterial translocation Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- BGWGXPAPYGQALX-ARQDHWQXSA-N beta-D-fructofuranose 6-phosphate Chemical compound OC[C@@]1(O)O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O BGWGXPAPYGQALX-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 244000000021 enteric pathogen Species 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 244000000036 gastrointestinal pathogen Species 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000005745 host immune response Effects 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 210000002570 interstitial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- QVLTXCYWHPZMCA-UHFFFAOYSA-N po4-po4 Chemical compound OP(O)(O)=O.OP(O)(O)=O QVLTXCYWHPZMCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000019254 respiratory burst Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/065—Microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/23—Lactobacillus acidophilus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/853—Lactobacillus
- Y10S435/854—Lactobacillus acidophilus
Abstract
1. Biologicznie czysta kultura Lactobacillus rhamnosus HN001 numer depozytu AGAL NM97/09514. 2. Biologicznie czysta kultura Lactobacillus rhamnosus HN067 numer depozytu AGAL NM98/01925. PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku są biologicznie czyste kultury bakterii kwasu mlekowego L. rhamnosus, kompozycje do immunostymulacji i zastosowanie biologicznie czystych kultur.
Spożyciu produktów zawierających bakterie kwasu mlekowego (LAB) towarzyszy szereg korzyści dla zdrowia, w tym wzmaganie odporności. Istnieją tysiące szczepów bakterii kwasu mlekowego, ale tylko niektóre szczepy wykazują właściwości korzystne dla zdrowia. Zdolność tych bakterii do tolerancji kwasów i soli żółciowych, przylegania do komórek nabłonka śluzówki i do przeżywania przejścia przez przewód pokarmowy jest uważana za ważne kryterium wyboru szczepów korzystnych dla zdrowia. Dotychczas zidentyfikowano tylko kilka szczepów bakterii kwasu mlekowego o udowodnionych korzyściach dla zdrowia.
Szczepy LAB wykazujące dobre przyleganie do komórek nabłonka śluzówki jelita cienkiego, tym samym nadające się do zastosowań terapeutycznych, są znane z patentu Nowej Zelandii 248057. Mikroorganizmy opisane w tym patencie wzmagają zarówno naturalną odporność (działanie fagocytów) jak i nabytą odporność (odpowiedzi przeciwciał i odpowiedzi proliferacyjne limfocytów).
Korzystne jest pozyskanie innych bakterii LAB, które wzmagają szerokie spektrum odpowiedzi odpornościowych w tym czynności fagocytarne.
Celem niniejszego wynalazku jest w pewnym stopniu spełnienie tych postulatów lub przynajmniej zaoferowanie społeczeństwu pożytecznego wyboru wzmagających odporność bakterii kwasu mlekowego.
Wynalazek dotyczy biologicznie czystej kultury Lactobacillus rhamnosus HN001 numer depozytu AGAL NM97/09514 z dnia 18 sierpnia 1997.
W zakres wynalazku wchodzi również biologicznie czysta kultura Lactobacillus rhamnosus HN067 numer depozytu AGAL NM98/01925 z 11 lutego 1998.
Ponadto wynalazek dotyczy kompozycji do immunostymulacji, obejmującej czynnik aktywny, fizjologicznie dopuszczalną zaróbkę i rozcieńczalnik, w której czynnikiem aktywnym jest biologicznie czysta kultura L. rhamnosus HN001 numer depozytu AGAL NM97/09514, lub Bifidobacterium lactis HN019 numer depozytu AGAL NM97/09513 z 18 sierpnia 1997 lub Lactobacillus acidophilus HN017 numer depozytu AGAL NM97/09515 z 18 sierpnia 1997.
Korzystnie kompozycja zawiera dwa lub więcej z wymienionych szczepów.
Korzystnie fizjologicznie akceptowalną zaróbką lub rozcieńczalnikiem jest pokarm.
Bardziej korzystnie pokarm jest wybrany z grupy obejmującej: mleko z kulturami bakterii, jogurt, ser, napój mleczny lub mleko w proszku.
Korzystnie kompozycja jest kompozycją farmaceutyczną, a zaróbka lub rozcieńczalnik jest farmakologicznie dopuszczalną zaróbką lub rozcieńczalnikiem.
Ponadto wynalazek dotyczy kompozycji do immunostymulacji obejmującej czynnik aktywny, fizjologicznie dopuszczalną zaróbkę i rozcieńczalnik, w której czynnikiem aktywnym jest biologicznie czysta kultura L. rhamnosus HN067.
Korzystnie dopuszczalną fizjologicznie zaróbką albo rozcieńczalnikiem jest pokarm wybrany z grupy obejmującej: mleko z kulturami bakterii, jogurt, ser, napój mleczny lub mleko w proszku.
Korzystnie kompozycja stanowi kompozycję farmaceutyczną, a zaróbka albo rozcieńczalnik jest dopuszczalną farmakologicznie zaróbką albo rozcieńczalnikiem.
Wynalazek dotyczy też zastosowania biologicznie czystej kultury lub szczepu L. rhamnosus HN001 numer depozytu AGAL NM97/09514 do wytwarzania kompozycji do wzmagania odporności naturalnej i nabytej.
Ponadto w zakres wynalazku wchodzi zastosowanie biologicznie czystej kultury lub szczepu L. rhamnosus HN067 numer depozytu AGAL NM98/01925 do wytwarzania kompozycji do wzmagania odporności naturalnej i nabytej.
Wynalazek dotyczy też zastosowania biologicznie czystej kultury L. rhamnosus HN001 AGAL numer depozytu NM97/09514, lub B. lactis HN019 AGAL numer depozytu NM97/09513 lub L. acidophilus HN017 AGAL numer depozytu NM97/09515 do wytwarzania kompozycji do wzmagania naturalnej i nabytej odporności.
Korzystnie kompozycja zawiera dwa lub więcej szczepów.
Wynalazek ponadto dotyczy zastosowania biologicznie czystej kultury L. rhamnosus HN067 AGAL numer depozytu NM98/01925 oraz biologicznie czystej kultury L. rhamnosus HN001 AGAL NM97/09514 lub B. lactis HN019 AGAL numer depozytu NM97/09513 lub L. acidophilus HN017 AGAL
PL 195 110 B1 numer depozytu NM97/095157 lub ich mieszaniny do wytwarzania kompozycji do wzmagania naturalnej i nabytej odporności.
W szerokim rozumieniu wynalazek może obejmować części, elementy lub cechy opisane lub wskazane w opisie zgłoszenia pojedynczo lub łącznie, zaś wszystkie kombinacje takich części, elementów lub cech, o których wiadomo, że mają odpowiedniki w pokrewnym stanie techniki objęto niniejszym wynalazkiem wraz z odpowiednikami.
Krótki opis figur
Na figurze 1 przedstawiono wpływ podawania myszom produktu fermentowanego z L. rhamnosus HN001 lub nie fermentowanego produktu zawierającego L. rhamnosus HN001 na aktywność leukocytów krwi obwodowej, jak opisano w przykładzie 5. Myszy BALB/c karmiono przez 14 dni dietami opartymi na mleku zawierającymi 109 cfu (na dzień) L. rhamnosus HN001 w fermentowanym albo nie fermentowanym produkcie. Aktywność fagocytarną leukocytów krwi obwodowej określano stosując cytometrię przepływową i Escherichia coli znakowaną izotiocyjanianem fluoresceiny. Wartości są średnią ± odchylenie standardowe. Znaczące różnice (ANOVA, program SAS) z kontrolą **P<0001.
Na figurze 2 przedstawiono wpływ podawania myszom żywego L. rhamnosus HN001 lub zabitego termicznie L. rhamnosus HN001 na aktywność fagocytarną leukocytów krwi obwodowej, jak opisano w przykładzie 7. Myszy BALB/c karmiono dietami opartymi na mleku przez 14 dni i podawano im doustnie 109 cfu (na dzień) żywego albo zabitego termicznie L. rhamnosus HN001. Aktywność fagocytarną obwodowych leukocytów krwi określano stosując cytometrię przepływową i Escherichia coli znakowaną izotiocyjanianem fluoresceiny. Wartości są średnią ± odchylenie standardowe. Znaczące różnice (ANOVA, program SAS) z kontrolą **P<0001.
Na figurze 3 przedstawiono wpływ podawania myszom L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 na przemieszczanie bakterii u myszy prowokowanych S. typhimurium, jak opisano w przykładzie 8. Myszy BALB/c, którym nie podawano lub podawano B. lactis HN019 lub L. rhamnosus HN001 prowokowano doustnie S. typhimurium po ciągłym codziennym podawaniu bakterii mlekowych. Sześć dni po teście prowokacji myszy zabito w sposób humanitarny, a ich wątroby i śledziony zebrano w celu śledzenia przemieszczania bakterii. Zawiesiny tkanek z pobranych narządów następnie hodowano na płytkach z agarem MacConkey przez 24-48 godz. przed liczeniem. Wartości są średnią ± odchylenie standardowe. Znaczące różnice (ANOVA, program SAS) z kontrolą *P<0,05.
Na figurze 4 przedstawiono wpływ podawania myszom L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 na aktywność leukocytów krwi obwodowej myszy prowokowanych S. typhimurium, jak opisano w przykładzie 8. Myszy BALB/c, którym podawano lub nie podawano B. lactis HN019, lub L. rhamnosus HN001 prowokowano S. typhimurium po ciągłym codziennym podawaniu bakterii mlekowych. Aktywność fagocytarną leukocytów krwi obwodowej określano w sześć dni po prowokacji stosując cytometrię przepływową i Escherichia coli znakowaną izotiocyjanianem fluoresceiny. Wartości (średnia ± odchylenie standardowe) z różnymi wskaźnikami górnymi różnią się znacząco (ANOVA, program SAS): P<0,01.
Na figurze 5 przedstawiono wpływ podawania myszom L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 na odpowiedzi proliferacyjne limfocytów śledziony myszy prowokowanych S. typhimurium jak opisano w przykładzie 8. Myszy BALB/c, które otrzymywały lub nie otrzymywały B. lactis HN019, lub L. rhamnosus HN001 doustnie prowokowano S. typhimurium po ciągłym codziennym podawaniu bakterii mlekowych. Sześć dni po prowokacji odpowiedzi proliferacyjne limfocytów śledziony mierzono kolorymetrycznie śledząc inkorporację 5-bromo-2'-deoksyurydyny przez ostatnie 16 godzin 96-godzinnej inkubacji. Wartości (średnia ± odchylenie standardowe) z różnymi wskaźnikami górnymi różnią się znacząco (ANOVA, program SAS): P<0,01.
Sposoby przeprowadzania wynalazku
Liofilizowane kultury czterech szczepów bakterii zdeponowano w Australian Government Analytical Laboratories (AGAL), The New South Wales Regional Laboratory, 1 Suakin Street, Pymble, NSW 2073 Australia. Szczegóły depozytu są następujące
Szczep
L. acidophilus HN017 L. rhamnosus HN001 B. lactis HN019
L. rhamnosus HN067
Numer
NM97/09515
NM97/09514
NM97/09513
NM98/01925
Data sierpnia 1997 18 sierpnia 1997 18 sierpnia 1997 11 luty 1998
PL 195 110 B1
Stwierdzono także, że cztery szczepy zidentyfikowane powyżej zwiększają szeroki zakres odpowiedzi odpornościowych obejmujący zarówno naturalne jak i nabyte reakcje odpornościowe.
P r z y k ł a d 1. Morfologia i ogólne właściwości
W celu potwierdzenia taksonomicznej charakterystyki szczepów zastosowano analizę RAPD, sekwencjonowanie 16S rRNA i analizy SDS-PAGE. Stwierdzono także, że L. acidophilus HN017 różni się genetycznie od L. acidophilus (LC1) według patentu z Nowej Zelandii Nr 248057.
W celu potwierdzenia taksonomicznej charakterystyki szczepu L. rhamnosus HN067 zastosowano analizę RAPD, sekwencjonowanie 16S rRNA i analizy SDS-PAGE; specyficzne gatunkowo startery stosowane do charakterystyki L. rhamnosus HN067 na poziomie molekulernym obejmowały Pr I (5') 5-CAGACTGAAAGTCTGACGG-3 i Pha II (3') 5-GCGATGCGAATTTCTATTATT-3.
Morfologia i zdolności tego szczepu do fermentacji cukrów są przedstawione w tabelach 1 i 2.
Tabel a 1 Morfologia i inne cechy
| L. acidophilus HN017 | L. rhamnosus HN001 | B. lactis HN019 | L. rhamnosus HN067 |
| Krótkie do średnich pałeczki z zaokrąglonymi końcami, na ogół występujące pojedynczo lub w parach lub krótkich łańcuchach, gdy są hodowane w bulionie MRS. Gram-dodatnie, nie tworzą spor, katalazo-ujemne względnie beztlenowe pałeczki z optymalną temperaturą wzrostu 37±1°C i optymalnym pH 6,0-6,5. Te bakterie są bezwzględnie homofermentujące i nie produkują gazu z glukozy | Krótkie do średnich pałeczki z kwadratowymi końcami w łańcuchach, na ogół 0,7 x 1,1 x 2,04,0 pm gdy są hodowane w bulionie mRs. Gramdodatnie, nieruchliwe, nie tworzą spor, katalazo-ujemne względnie beztlenowe pałeczki z optymalną temperaturą wzrostu 37±1°C i optymalnym pH 6,0-6,5. Te bakterie są względnie heterofermentujące i nie produkują gazu z glukozy | Pałeczki mikroaerofilowe do beztlenowych z charakterystycznymi kształtami takimi jak powiększenie środka komórk,, ułożenie w „V” lub palisadę gdy są hodowane na bloczkach z agaru TPY. W bulionie MRS z 0,05% chlorowodorkiem cysteiny tworzą komórki powiększone w środku i komórki o kształcie maczugi (maczugowate końce). Gram-dodatnie, nieruchliwe, nie tworzą spor, katalazo-ujemne pałeczki z optymalną temperaturą wzrostu 37±1°C i optymalnym pH 6,0-7,0. Dodatnie dla fosfoketolazy fruktozo-6-fosforanu | Krótkie do średnich pałeczki z kwadratowymi końcami w łańcuchach, na ogół 0,7 x 1,1 x 2,04,0 pm gdy są hodowane w bulionie MRS.Gramdodatnie, katalazo-ujemne, nieruchliwe, nie tworzące spor względnie beztlenowe pałeczki z optymalną temperaturą wzrostu 37±1°C i optymalnym pH 6,0-6,5. Te bakterie są względnie heterofermentujące i nie produkują gazu z glukozy |
Tabel a 2
Wzór fermentacji węglowodanów dla wybranych szczepów Lactobacillus i Bifidobacterium
| Szczep nr | Nazwa bakterii | Wartość* |
| 1 | L. acidophilus HN017 | 5755546 |
| 2 | L. rhamnosus HN001 | 5757177 |
| 3 | B. lactis HN019 | 1051622 |
| 4 | L. rhamnosus HN067 | 5757175 |
*Wartości są oparte na wartościach dla 22 ważnych cukrów (podręcznik Bergeya).
Do określenia wzorów fermentacji cukrów zastosowano zestaw do fermentacji cukrów API 50 CH.
P r z y k ł a d 2. Przyleganie do komórek śródmiąższowych
Zdolność szczepów probiotycznych do przylegania do ludzkich komórek nabłonka jelita (HT-29 i CaCo-2) oceniano in vitro stosując zróżnicowane linie komórkowe. Monowarstwy komórek HT-29 i CaCo-2 hodowano na szkiełkach przykrywkowych i umieszczano w płytkach z wieloma studzienkami. Następnie dodawano 108 cfu/ml LAB w 1 ml zużytego supernatantu hodowli do warstw komórek wraz
PL 195 110 B1 z 1 ml pożywki DMEM i inkubowano przez 1 godz. w 37°C w 10% CO2-90% powietrze. Monowarstwy płukano 4 razy PBS, utrwalano w metanolu, barwiono metodą Grama i określano pod mikroskopem liczbę bakterii przylegających do komórek nabłonka. Przeciętnie liczono 20 pól i wyniki podsumowano w tabeli 3.
T ab ela 3
Przyleganie do linii komórkowych HT-29 i CaCo-2*
| SZCZEP | HT-29 | CaCo-2 |
| L. acidophilus HN017 | 98 ± 17 | 171 ± 16 |
| L. rhamnosus HN001 | 161 ± 18 | 218 ± 35 |
| B. lactis HN019 | 188 ± 27 | 194 ± 25 |
*Liczba (średnia ± SEM) bakterii/100 komórek nabłonka
P r z y k ł a d 3. Zwiększanie odporności naturalnej i nabytej
Badano wpływ trzech szczepów L. rhamnosus HN001, L. acidophilus HN017 i B. lactis HN019 na wzmaganie odporności przez określenie funkcji fagocytarnej (leukocytów krwi i makrofagów otrzewnowych) i określenie ilościowe stężeń swoistych przeciwciał na antygeny białkowe stosowane do imitowania odpowiedzi na szczepionki u myszy.
Stosowano następujący protokół doświadczalny:
1. Wykorzystano myszy BALB/c sześcio-siedmiotygodniowe, ważące 20-30 g.
2. Myszy losowo przypisywano do różnych grup doświadczalnych (tabela 4).
3. Myszy karmono L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 bb B. tectis HN019 (W9 cfu/dziennie) w 50 μΙ odtłuszczonego mleka przez 10 dni. Myszy kontrolne otrzymywały tylko 50 μΙ odtłuszczonego mleka w proszku.
4. W czasie ekkperymentu wszystkie myszy otrzymywały dietę opartą na odtłuszczonym mleku w proszku.
Leukocyty krwi i makrofagi myszy otrzymujących L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 wykazały znacząco większą zdolność do fagocsrozy w porównaniu z komórkami od myszy kontrolnych (tabela 4). Produkcja rodników tlenowych (wybuch oksydacyjny) przez leukocyty myszy karmionych probiotykami była też wyższa niż u myszy kontrolnych (dane nie przedstawione).
T ab ela 4
Wpływ podawanych z dietą L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 i B. lactis HN019 na działanie fagocytów u myszy
| Procedura | % leukocytów krwi z aktywnością fagocytarną | % makrofagów otrzewnowych z aktywnością fagocytarną |
| Kontrola | 14,33 ± 0,87 | 66,1 ± 3,5 |
| L. acidophilus HN017 | 22,7 ± 1,21** | 79,0 ± 1,0** |
| L. rhamnosus HN001 | 24,84 ± 0,93** | 80,5 ± 1,8** |
| B. lactis HN019 | 23,19 ± 0,95** | 77,4 ± 2,6* |
Myszom BALB/c podawano doustnie 109 cfu (na dzień) L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 przez 10 dni. Aktywność fagocytarną leukocytów krwi i makrofagów otrzewnowych oceniano stosując csłometrię przepływową i Escherichia coli znakowaną izotiocyjanianem fluoresceiny. Wartości są średnią ± odchylenie standartowe. Istotne różnice (test t Studenta) z kontrolą *P<0,05, **P<0,01.
Stężenie swoistych przeciwciał IgG w surowicach i popłuczynach jelit myszy otrzymujących L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 było też większe niż u myszy kontrolnych (tabela 5).
PL 195 110 B1
Tabel a 5
Wpływ podawanych w diecie L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 i B. lactis HN019 na odpowiedzi przeciwciał w surowicy i śluzówce
| Procedura | Odpowiedź przeciwciał w surowicy (jednostki/ml) | Odpowiedź przeciwciał w śluzówce (jednostki/ml) |
| Kontrola | 80,2 ± 6,0 | 1350 ± 96,0 |
| L. acidophilus HN017 | 134,6 ± 25,2* | 1548 ± 270,0** |
| L. rhamnosus HN001 | 118,5 ± 12,5** | 1512 ± 198,0 |
| B. lactis HN019 | 158,1 ± 51,6*** | 1548 ± 234,0 |
Myszom BALB/c podawano doustnie 109 cfu (na dzień) L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 przez 10 dni. Myszy immunizowano toksyną cholery (antygenem stosowanym do naśladowania zakażenia jelitowego) w dniach 0 i 7. W dniu 10 zmierzono stężenie swoistych przeciwciał w surowicy i wydzielinach jelitowych stosując ELISA. Wartości reprezentują średnią ± odchylenie standartowe. Istotne różnice (test t Studenta) z kontrolą *P = 0,08, **P<0,05; ***P<0,01.
P r z y k ł a d 4. Efekty immunostymulacji następujące po podawaniu LAB przez cztery tygodnie
Badano efekty immunostymulujące L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 i B. lactis HN019 u myszy stosując następujący protokół doświadczalny:
1. Wykorzystano myszy BALB/c sześcio-siedmiotygodniowe, ważące 20-30 g.
2. Myszy losowo przypisywano (18/grupę) do różnych grup doświadczalnych.
3. Po aklimatyzacji (przez 7 dni) myszy karmiono 109 cfu (na dzień) L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 w 50 μΙ odtłuszczonego mleka przez 28 dni (od dnia 0 do dnia 28). Myszy kontrolne otrzymywały tylko 50 μl odtłuszczonego mleka w proszku (bez mikroorganizmów).
4. W czasie eksperymentu wszystkie myszy otrzymywały dietę opartą na odtłuszczonym mleku w proszku i wodę ad libitum.
5. Efekty immunostymulujące oceniano przez śledzenie aktywności fagocytarnej leukocytów krwi i makrofagów otrzewnowych, aktywności komórek NK limfocytów śledziony, proliferację limfocytów (komórki śledziony), odpowiedzi na mitogen limfocytów T, Con-A (wskaźnik odporności komórkowej) i odpowiedzi przeciwciał na szczepionkę przeciw tężcowi.
Jak widać w tabeli 6, leukocyty (obojętnochłonne, monocyty i makrofagi) od myszy otrzymujących L acidophilus HN017, L rhamnosus HN001 i B. lactis HN019 wykazywały znacząco większą aktywność fagocytarną (wskaźnik naturalnej odporności) niż leukocyty od myszy kontrolnych.
Tabel a 6
Wpływ podawanych w diecie L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 i B. lactis HN019 u myszy
| Procedura | % leukocytów krwi z aktywnością fagocytarną | % makrofagów otrzewnowych z aktywnością fagocytarną |
| Kontrola | 15,5 | 72,67 |
| L. acidophilus HN017 | 29,4** | 82,2* |
| L. rhamnosus HN001 | 24 2** | 82,8** |
| B. lactis HN019 | 31,1** | 83,0** |
Myszom (18/grupę) podawano 109 cfu (na dzień) L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 przez HN019 w 50 μl odtłuszczonego mleka przez 28 dni. Aktywność fagocytarną leukocytów krwi/makrofagów otrzewnowych oceniono w dniu 28 stosując cytometrię przepływową i E. coli znakowaną izotiocyjanianem fluoresceiny. Wartości są średnimi najmniejszych kwadratów. Istotne różnice (analiza SAS) *P<0,002; **P<0,0005.
Spożycie L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 przez 28 dni też powodowało wzrost aktywności komórek NK, proliferację limfocytów w odpowiedzi na ConA i odpowiedzi przeciwciał na szczepionkę przeciw tężcowi. Dla tych wszystkich wskaźników immunokompetencji, myszy otrzymujące L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 miały wyższe odpowiedzi niż myszy kontrolne (tabela 7).
PL 195 110 B1
Zebrane razem wyniki te pokazują, że podawanie przez dłuższy czas L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 jest zdolne do indukowania utrzymującego się podwyższenia kilku aspektów odporności naturalnej i nabytej.
Tabel a 7
Wpływ podawanych w diecie L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 i B. lactis HN019 na aktywność komórek NK i proliferację limfocytów w odpowiedzi na ConA i odpowiedź przeciwciał na szczepionkę przeciw tężcowi
| Działanie ConA | Aktywność komórek NK (%) | Proliferacja limfocytów po ConA (absorbancja) | Reakcje przeciwciał na szczepionkę przeciw tężcowi (jednostki/ml) |
| Kontrola | 8,8 | 1,4 ± 0,125 | 402,5 ± 41,4 |
| L. acidophilus HN017 | 9,9 | 1,6 ± 0,44 | 923,9 ± 116,0* |
| L. rhamnosus HN001 | 11,5 | 1,8 ± 0,1* | 711,5 ± 127,2* |
| B. lactis HN019 | 10,5 | 1,7 ± 0,5* | 844,6 ± 134,7* |
Myszom (18/grupę) podawano doustnie 109 cfu (na dzień) L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 lub B. lactis HN019 w 50 μΙ odtłuszczonego mleka przez 28 dni (tzn. od dnia 0 do dnia 28). Aktywność komórek NK limfocytów śledziony określano w 28 dniu stosując cytometrię przepływową i komórki Yac-1 znakowane D275. Odpowiedzi proliferacyjne limfocytów śledziony na ConA oceniano w dniu 28 stosując handlowy zestaw do proliferacji (Boehringer Mannheim, Niemcy). Dla określenia odpowiedzi przeciwciał myszy immunizowano szczepionką przeciwko tężcowi (50 μΙ/dawkę, CSL, Australia) w dniach 7 i 21. Stężenie swoistych przeciwciał określano stosując ELISA; do powlekania płytek stosowano antygen dostarczony przez producenta szczepionki (CSL, Australia). Wartości są średnią najmniejszych kwadratów wyników dla 18 myszy. Istotne różnice (analiza SAS) *P<0,05.
Przykła d 5. Zwiększenie odporności naturalnej i nabytej przy użyciu produktów fermentowanych w porównaniu z niefermentowanymi
Celem była ocena wzmagania odporności przez jogurt robiony (fermentowany) z zastosowaniem szczepu probiotycznego L. rhamnosus HN001 w porównaniu z niefermentowanym produktem zawierającym L. rhamnosus HN001. Wpływ na odporność badano przez określenie działania fagocytów (leukocyty krwi obwodowej i makrofagi otrzewnowe) i odpowiedzi proliferacyjne limfocytów na mitogen limfocytów B (LPS).
Stosowano następujący protokół doświadczalny:
1. Wykorzystano myszy BALB/c sześcio-siedmiotygodniowe, ważące 20-30 g.
2. Myszy losowo przypisywano do różnych grup doświadczalnych.
3. Myszy kontrolne w czasie całego eksperymentu otrzymywały dietę opartą na mleku pełnym w proszku.
4. Myszy doświadczalne otrzymywały 2,5 g jogurtu przyrządzonego stosując L. rhamnosus HN001 (109 cfu/dzień) lub 2,5 pełnego mleka zawierającego L. rhamnosus HN001 (109cfu/dzień) jak i dietę opartą na mleku pełnym w proszku przez 14 dni.
Wyniki
Myszy otrzymujące jogurt z L. rhamnosus HN001 lub pełne mleko zawierające L. rhamnosus HN001 wykazywały znacząco wyższy poziom aktywności fagocytarnej leukocytów we krwi obwodowej, niż obserwowano u myszy otrzymujących dietę kontrolną (fig. 1). Ten wzrost zaobserwowano niezależnie od tego czy L. rhamnosus HN001 był podawany w jogurcie (fermentowanym z L. rhamnosus HN001) lub niefermentowanym produkcie zawierającym L. rhamnosus HN001. Nie było różnicy w poziomie aktywności fagocytarnej między myszami otrzymującymi fermentowany jogurt zrobiony z zastosowaniem L. rhamnosus (HN001) w porównaniu z niefermentowanym produktem WMP (produkt z pełnego mleka) zawierającym L. rhamnosus HN001.
Myszy karmione zarówno niefermentowanym produktem jak i produktem fermentowanym z L. rhamnosus HN001 wykazywały wyższą odpowiedź proliferacyjną limfocytów na LPS niż myszy kontrolne (tabela 8). Nie stwierdzono istotnej różnicy w odpowiedzi między myszami otrzymującymi niefermentowany produkt zawierający L. rhamnosus HN001 w porównaniu z fermentowanym jogurtem wytworzonym z zastosowaniem L. rhamnosus HN001.
PL 195 110 B1
Tabel a 8
Wpływ fermentowanego i niefermentowanego L. rhamnosus HN001 na odpowiedzi proliferacyjne limfocytów u myszy
| Procedura | Proliferacja limfocytów po LPS (absorbancja) |
| Kontrola (WMP) | 0,4699 ± 0,028 |
| WMP fermentowany z L. rhamnosus HN001 | 0,5361 ± 0,028 |
| niefermentowany WNP z L. rhamnosus HN001 | 0,5518 ± 0,028* |
Myszy BALB/c karmiono dietami opartymi na mleku zawierającymi 109 cfu (na dzień) L. rhamnosus HN001 zarówno w produkcie niefermentowanym jak i jogurcie sporządzonym z L. rhamnosus HN001 (produkt fermentowany) przez 14 dni. Myszy kontrolne otrzymywały dietę opartą na mleku bez LAB. Przez ostatnie 16 godzin 96 godzinnego okresu inkubacji kolorymetrycznie mierzono odpowiedzi proliferacyjne po włączeniu 5-bromo-2'-deoksyurydyny. Wartości są średnimi ± odchylenie standardowe. Istotne różnice (test t Studenta) z kontrolą *P=0,05.
Razem te wyniki sugerują, że podawanie L. rhamnosus HN001 wzmaga zakres funkcji odpornościowych, w tym aktywność fagocytarną i proliferację limfocytów. L. rhamnosus HN001 podawany w fermentowanym lub niefermentowanym produkcie jest skuteczny w wywoływaniu wzmożenia funkcji odpornościowej, przy czym produkt fermentowany daje większą odpowiedź w pewnych funkcjach, a niefermentowany jest lepszy w innych.
P r z y k ł a d 6. Wzmożenie naturalnej i nabytej odporności przez L. rhamnosus HN067
Eksperyment 1
Efekty wzmagania odporności przez L. rhamnosus HN067 badano monitorując zdolność do fagocytozy leukocytów krwi obwodowej i makrofagów otrzewnowych (wskaźnika niespecyficznej odporności), i określenie ilościowe stężeń swoistych przeciwciał na antygen immunizacyjny, toksynę cholery (stosowana do naśladowania odpowiedzi na szczepionki jelitowe) u myszy.
Stosowano następujący protokół doświadczalny:
1. Wykorzystano myszy BALB/c sześcio-siedmiotygodniowe, ważące 20-30 g. W czasie całego eksperymentu myszy otrzymywały dietę opartą na odtłuszczonym mleku.
2. Myszom z grupy doświadczalnej (n=6) podawano doustnie L. rhamnosus HN067 (109 cfu/dzień) w 50 μΙ odtłuszczonego mleka przez 10 dni. Myszy kontrolne (n=6) otrzymywały tylko 50 μΙ odtłuszczonego mleka (bez LAB).
Wyniki
Leukocyty krwi i makrofagi otrzewnowe z myszy otrzymujących L. rhamnosus HN067 wykazywały znacząco większą aktywność fagocytarną (wzmożone działanie fagocytarne) w porównaniu z komórkami od myszy kontrolnych. Wyniki przedstawiono w tabeli 9 poniżej.
Tabel a 9
Wpływ L. rhamnosus HN067 podawanego w diecie na działanie fagocstów
| Procedura | % leukocytów krwi z aktywnością fagocytarną | % makrofagów otrzewnej z aktywnością fagocytarną |
| Kontrola | 13,1 ± 1,5 | 76,4 ± 1,9 |
| L. rhamnosus HN067 | 23,7 ± 1,5** | 87,2 ± 1,9* |
Myszy BALB/c (6/grupę) karmiono dietą opartą na mleku z lub bez podawania doustnego L. rhamnosus HN067 (109 cfu/dzień) przez 10 dni. Aktywność fagocstamą leukocytów krwi i makrofagów otrzewnowych oceniano stosując cytometrię przepływową i E. coli znakowaną izotiocyjanianem fluoresceiny. Wartości są średnimi najmniejszych kwadratów ± błąd standardowy LSM. Istotne różnice (program SAS) z kontrolą: *P=0,0005; **P= 0,0001.
Stężenie swoistych przeciwciał w stosunku do toksyny cholery, antygenu stosowanego do doustnej immunizacji w surowicy i popłuczynach jelita myszy otrzymujących L. rhamnosus HN067 było też istotnie wyższe niż u myszy kontrolnych (tabela 10).
PL 195 110 B1
Tabel a 10
Wpływ L. rhamnosus HN067 podawanego w diecie na odpowiedzi przeciwciał surowiczych i śluzówkowych na toksynę cholery
| Procedura | Odpowiedź przeciwciał surowiczych (jednostki/ml) | Odpowiedź przeciwciał śluzówkowych (jednostki/ml) |
| Kontrola | 63,1 ± 43,2 | 1969,7 ± 279,5 |
| L. rhamnosus HN067 | 246,5 ± 43,2** | 2995,5 ± 465,2* |
Myszy BALB/c karmiono dietą opartą na mleku z lub bez podawania doustnego L. rhamnosus HN067 (109 cfu/dzień) przez 10 dni. Myszy immunizowano doustnie toksyną cholery (10 pg/dawkę), antygenem stosowanym do naśladowania infekcji jelitowej. W dniu 10 mierzono poziom przeciwciał w surowicy i wydzielinach jelitowych. Wartości są średnimi najmniejszych kwadratów ± standardowy błąd LSM. Istotne różnice (program SAS) z kontrolą: *P=0,02; **P=0,0039.
Eksperyment 2
Badano efekty immunostymulacj i L. rhamnosus HN067 u myszy z zastosowaniem następującego protokołu doświadczalnego:
1. Wykorzystano myszy BALB/c sześcio-siedmiotygodniowe, ważące 20-30 g. W czasie eksperymentu wszystkie myszyotrzymywały dietę opartą na odtłuszczonym mleku w proszku i w«^^ ad libitum.
2. Po aklimatyzacji (przez 7 dni) myszom w grupie 1 (n=20) podawano doustnie 109 f (na dzień) L. rhamnosus (HN067) w 50 μΙ odtłuszczonego mleka (grupa 1 n=20) przez 14 dni. Myszy kontrolne (grupa 2, n = 20) otrzymywały tylko 50 μΙ mleka odtłuszczonego (bez żadnych mikroorganizmów).
3. Efekty immunostymulujące oceniano przez śledzenie aktywności fagocytarnej leukocytów krwi i makrofagów otrzewnowych, i proliferację limfocytów śledziony w odpowiedzi na fitohemaglutyninę (PHA) i lipopolisacharyd (LPS) (odpowiednio mitogeny limfocytów T i B).
Wyniki
Leukocyty krwi i makrofagi otrzewnowe myszy otrzymujących L. rhamnosus HN067 wykazywały znacząco większą aktywność fagocytarną (wskaźnik naturalnej odporności) niż leukocyty i makrofagi od myszy kontrolnych (tabela 11).
Tabel a 11
Wpływ L. rhamnosus HN067 podawanego w diecie na działanie fagocytów u myszy
| Procedura | % leukocytów krwi z aktywnością fagocytarną | % makrofagów otrzewnowych z aktywnością fagocytarną |
| Kontrola | 13,7 ± 0,07 | 64,6 ± 2,1 |
| L. rhamnosus HN067 | 22,5 ± 0,07** | 75,8 ± 1,7* |
Myszy BALB/c karmiono dietą opartą na mleku z lub bez podawania doustnego L. rhamnosus HN067 (109 cfu/dzień) przez 14 dni. Aktywność fagocytarną leukocytów krwi/makrofagów otrzewnowych oceniano w dniu 14 stosując cytometrię przepływową i E. coli znakowaną izotiocyjanianem fluoresceiny. Wartości są średnimi najmniejszych kwadratów ± standardowy błąd LSM. Istotne różnice (program SAS) z kontrolą *P=0,002, **P=0,0001.
Myszy otrzymujące L. rhamnosus przez 14 dni także wykazywały wyższe odpowiedzi proliferacyjne na PHA i LPS w porównaniu z myszami kontrolnymi (tabela 12).
Tabel a 12
Wpływ podawania L. rhamnosus HN067 na odpowiedzi proliferacyjne limfocytów na PHA i LPS
| Procedura z ConA | proliferacja limfocytów krwi po PHA | proliferacja limfocytów krwi po LPS |
| Kontrola | 1,18 ± 0,08 | 0,99 ± 0,07 |
| L. rhamnosus HN067 | 1,37 ± 0,07** | 1,24 ± 0,06** |
PL 195 110 B1
Myszy BALB/c karmiono dietą opartą na mleku z lub bez podawania doustnego L. rhamnosus HN067 (109 cfu/dzień) przez 14 dni. Odpowiedzi proliferacyjne limfocytów komórek śledziony w stosunku do PHA i LPS oceniano w 14 dniu stosując handlowy zestaw do badania proliferacji (Boehringer Mannheim, Niemcy). Wartości są średnimi najmniejszych kwadratów ± standardowy błąd LSM. Istotne różnice (program SAS) *P<0,08; **P<0,01.
Podsumowując, myszy otrzymujące L. rhamnosus HN067 wykazywały znaczące zwiększenie zakresu odpowiedzi odpornościowych gospodarza, w tym funkcji fagocytarnej leukocytów, odpowiedzi przeciwciał na immunizację doustną i odpowiedzi proliferacyjnej limfocytów na mitogeny limfocytów T i B. Leukocyty krwi (obojętnochłonne i monocyty) i makrofagi są istotnymi efektorami odporności naturalnej i odgrywają ważną rolę w ochronie przed zakażeniami mikroorganizmami. Korelacja między odpowiedzią proliferacyjną na mitogeny (mitogeny limfocytów T i B) i immunokompetencją osobnika była też dobrze udokumentowana. Zatem, wyniki te sugerują, że podawanie L. rhamnosus HN067 jest w stanie wzmóc kilka aspektów odporności naturalnej i nabytej.
P r z y k ł a d 7. Wzmaganie odporności naturalnej i nabytej z zastosowaniem żywych i zabitych termicznie L. rhamnosus HN001
Celem obecnego badania była analiza wzmagającego odporność wpływu szczepu probiotycznego L. rhamnosus HN001 obecnego zarówno w postaci żywej jak i zabitej termicznie. Wpływ na działanie odpornościowe oceniano przez określenie aktywności fagocytarnej leukocytów krwi obwodowej. Wpływ żywych i zabitych termicznie L. rhamnosus HN001 na odporność humoralną badano przez immunizację myszy toksyną cholery i pomiar stężeń wytworzonych swoistych przeciwciał.
Stosowano następujący protokół doświadczalny:
1. Wykorzystano myszy BALB/c sześcio-siedmiotygodniowe, ważące 20-30 g.
2. Myszy losowo przypisywano do różnych grup doświadczalnych.
3. Myszykontrolne otrzymywały dietę opartą na odtłuszczonym mleku w proszku w czasie całego eksperymentu.
4. Myszydoświadczalne otιrzymywały 109cfu/dzień L HN001 I ub 109 cfu/dzieńzabitego przez inaktywację termiczną L. rhamnosus HN001 jak i dietę opartą na odtłuszczonym mleku w proszku przez 14 dni.
5. Myszy doustnie immunizowano toksyną cholery w dniu 0 i dniu 7 karmienia.
Wyniki
Karmienie L. rhamnosus HN001 znacząco zwiększyło poziom aktywności fagocytarnej leukocytów krwi obwodowej w porównaniu z myszami karmionymi dietą kontrolną (fig. 2). Wzrost ten stwierdzono niezależnie od tego czy L. rhamnosus HN001 był podawany w postaci żywej czy zabitej termicznie. Nie było różnicy w poziomie aktywności fagocytarnej między myszami otrzymującymi żywy L. rhamnosus HN001 w porównaniu z zabitym termicznie L. rhamnosus HN001.
Karmienie zarówno żywym jak i martwym L. rhamnosus HN001 indukowało wzrost zarówno odpowiedzi przeciwciał w surowicy i śluzówce w porównaniu z myszami kontrolnymi. Jednak poziom odpowiedzi był znacząco wyższy u myszy karmionych żywym L. rhamnosus HN001 (tabela 13).
Ta bel a 13
Wpływ żywego i zabitego termicznie L. rhamnosus HN001 na odpowiedzi przeciwciał surowiczych i śluzówkowych na toksynę cholery u myszy
| Procedura | Odpowiedź przeciwciał surowiczych (jednostki/ml) | Odpowiedź przeciwciał śluzówkowych (jednostki/ml) |
| Kontrola | 88,69 ± 18,52 | 708,6 ± 146,9 |
| Żywy L. rhamnosus HN001 | 214,89 ± 62,33** | 2054,5 ± 285,8*** |
| Zabity termicznie L. rhamnosus HN001 | 174,89 ± 44,78 | 1533,6 ± 319,3 |
Myszy BALB/c karmiono dietą opartą na mleku i podawano im przez 14 dni doustnie 109 l. rhamnosus HN067 w postaci żywej albo zabitej termicznie. Myszy immunizowano doustnie toksyną cholery w dniach 0 i 7. W dniu 14 mierzono poziom przeciwciał (w surowicy i wydzielinach jelitowych) stosując test ELISA. Wartości są średnią ± standardowy błąd. Istotne różnice (test t Studenta) z kontrolą *P=0,05; ***P=0,0005.
PL 195 110 B1
Wyniki te sugerują, że zarówno żywy jak i inaktywowany termicznie L. rhamnosus HN001 są zdolne do wzmagania aspektów naturalnej i nabytej odporności u myszy.
P r z y k ł a d 8. Właściwości przeciwinfekcyjne B. lactis HN019 i L. rhamnosus HN001
Celem niniejszych badań było:
1. Zbadanie skuteczności ochrony przez B. lactis HN019 i L. rhamnosus HN001 przed patogenem żołądkowo-jelitowym Salmonella typhimurium.
2. Ocena roli immunostymulacji indukowanej przez B. lactis HN019 i L. rhamnosus HN001 w ochronie przed infekcją Salmonella typhimurium u myszy.
Właściwości przeciwzakaźne oceniano przez pomiar przemieszczania bakterii do wątroby i śledziony. Efekty immunostymulujące oceniano przez określenie funkcji fagocytów (leukocyty krwi obwodowej i makrofagi otrzewnej) i odpowiedzi proliferacyjnej limfocytów na mitogen limfocytów T.
Stosowano następujący protokół doświadczalny:
1. Wykorzystano myszy BALB/c sześcio-siedmiotygodniowych, ważące 20-30 g.
2. Myszy losowo przypisywano do 4 różnych grup doświadczalnych. Myszy były umieszczone w oddzielnych klatkach.
3. Wszzstkie myszzotrzzmywatydietęooprtąnaootłuszzcznym mleku w proszkuw cczsieccłego eksperymentu.
4. MyszzddSwiaadczlna otrzzmywaSł1 O9 cfu/dziek B. laatis HH001I uu B. rhhmnnouu HH0017 dni przed prowokacją, i podawanie kontynuowano przez cały okres trwania badań.
5. Myszz, którym ρ^Ιε—^™ B. laatis IdNCH I uu L. rr^ć^r^r^c^s^L^s IdNCH i gri-iup (bbe
LAB) otrzymywały doustna dawkę prowokującą Salmonella typhimurium (ATCC 1772) 8 x 10 cfu/dzień przez 5 dni zaczynając od dnia 7.
6. Niezakażona grupa kontrolna nie otrzymała testu prowokacji S. typhimurium.
7. W dniu6pptekcieprowaSuaji myszzstoszwasad d ppmiaruprzzmiekzzczsiabbSteki ddwwtroby i śledziony i do oceny funkcji odpornościowych.
Wyniki
Myszy otrzymujące zarówno B. lactis HN019 i L. rhamnosus HN001 wykazywały znacząco niższe poziomy przemieszczania bakterii do wątroby i śledziony niż myszy karmione wyłącznie Salmonella typhimurium (fig. 3).
Infekcja prowokująca powodowała znaczącą supresję funkcjonowania fagocytów (fig. 4), aktywność fagocytarna u myszy kontrolnych prowokowanych S. typhimurium była znacząco niższa niż u myszy niezakażonych. Jednak infekcja S. typhimurium nie miała wpływu na aktywność fagocytarną leukocytów krwi obwodowej myszy otrzymujących B. lactis HN019 lub L. rhamnosus HN001. Wykazano to przez podobne poziomy aktywności fagocy^ u myszy otrzymujących B. lactis HN019 lub L. rhamnosus HN001 i poddanych prowokacji S. typhimurium i u normalnych niezakażonych myszy kontrolnych.
Myszy otrzymujące zarówno B. lactis HN019 jak i L. rhamnosus HN001 wykazywały wyższe odpowiedzi proliferacyjne limfocytów na PHA niż kontrola poddana testowi prowokacji S. typhimurium (fig. 5). Nie było istotnej różnicy w odpowiedzi między myszami otrzymującymi B. lactis HN019 lub L. rhamnosus HN001 i niezakażonymi myszami kontrolnymi.
Razem wyniki te sugerują, że podawanie B. lactis HN019 lub L. rhamnosus HN001 jest w stanie dać ochronę przed patogenami jelitowymi takimi jak Salmonella typhimurium. Wzmożonej odporności na zakażenie towarzyszy podwyższenie funkcji odpornościowych.
Claims (16)
1. Biologicznie czysta kultura Lactobacillus rhamnosus HN001 numer depozytu AGAL NM97/09514.
2. Biologicznie czysta kultura Lactobacillus rhamnosus HN067 numer depozytu AGAL NM98/01925.
3. Kompozycja do immunostymulacji obejmująca czynnik aktywny, fizjologicznie dopuszczalną zaróbkę i rozcieńczalnik, znamienna tym, że jako czynnik aktywny zawiera biologicznie czystą kulturę Lactobacillus rhamnosus HN001 numer depozytu AGAL NM97/09514, lub Bifidobacterium lactis HN019 numer depozytu AGAL NM97/09513 lub Lactobacillus acidophilus HN017 numer depozytu AGAL NM97/09515.
4. Kompipozcja ww^etłu Bzstry. B, (znmieenn tym, Be izwieer Bww I uu więęej b wamiekionayh szczepów.
PL 195 110 B1
5. Kompozycja według zastrz. 3 lut) 4, z namienna tym, że fizjologicznie akceptowalną zaróbką lub zzazidńzasląiCidm jest ozCszm.
6. Kompozycja według zastrz. 3, znamienna tym, że zoZcrm jaet weC-zsą z zrzgo oZbjmujazej: mldkz a kulturami bskrezii, jogurt, ser, ąsobj mlezanc lub mleko w ozosakt.
7. Kompozacja wedłu zastró. 3 I ub 4, znamienna tym, że j jdt kk^z^F}C^^^c^^^ 4armpszpjyczną, s asrbbks lub rzazieńzasląik jett fsrmskzlzgizaąie dzousazasląą asrbbką lub rzazieńzasląikiem.
8. Kompozacja Zo i mmunągtymulasji żZbjmujoąz zzacnik zMywan, fi^^^k:)gIczaie żoguutazalną asrbbkę i rzazidńzaslnik, naaminaaa tym, że jskz zacnnik sktywnc aswiers bizlzgizanie zacttą kulturę L. rhamnosus HN067 zkreślzną w astrra. 2.
9. Kompoga^jaweeługzaktrz. 8,znamienaa tym, zedoguutazylnąfIzjalogiczrjiezyrZbkcalbb rzazidńzaslnikiem jett ozksrm.
10. Κοπρ^.^ wedłu żaktrz. Z, znamienaa tym, ze żogcrm j jst weC-zką z zrr^u^o ogejmpjOzej: mlekz a kultursmi bskterii, jzgurt, ter, nsobj mlezanc lub mlekz w orztaku.
11. Kompozyceo według zastrz. 8, znam ienna tym, że stanowi kompozycja farmaceiUyczną. s asrbbks slbz rzazieńzaslnik jett Ogousazaslną fsrmskzlzgizanie asrbbką slbz rzazieńzyslnikiem.
12. Za^^twenie biologicznie cza^ kkltury Z ub stazapu ogrzPlogąeo w zastrz. 1. do wetwerasnis kzmozaczji Oz wamsgsnis zOozrnzśzi nsturslnej i nsbctej.
13. Z^^ttj^cjz^^nii^ biologicznie czactuj kultury Zub stezago okredloneeo w zastrz. 2 do wecwerasnis kzmozaczji Oz wamsgsnis zOozrnzśzi nsrurslnej i nsbcrej.
14. Zastosowanie biologicznie czystej kułuizc L. rhamnosus HN001 AGAL numer depoz^u NM97/09514, lub B. lactis HN019 AGAL numer Oeozacru NM097/09513 lub L. acidophilus HN017 AGAL numer Odozacru NM97/09515 Oz wcrwsrysnis kzmozaczji Oz wamsgsnis nsrurslnej i nsbcrej zOozrnzśzi.
15. Z^^trj^cjz^^nii^ wedłu zastrz. 14, znamienna ty^ri, że kompogycjo zawiirz dwe Z ub więced tazadobw.
16. Zastosowanie biologicznie czystej kułuizc L. rhamnosus HN067 AGAL numer depozyto NM97/01925 zrsa bizlzgizanie zacnej kulrury L. rhamnosus HN001 AGAL NM97/09514 lub B. lactis HN019 AGAL numer Oeozacru NM97/09513 lub L. acidophilus HN017 AGAL numer Oeozacru NM97/095157 lub izh mietasninc Oz wcrwsrysnis kzmozaczji Oz wamsgsnis nsrurslnej i nsbcrej zOozrnzśzi.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AUPO8699A AUPO869997A0 (en) | 1997-08-21 | 1997-08-21 | Immuno-enhancing composition |
| AUPP3225A AUPP322598A0 (en) | 1998-04-28 | 1998-04-28 | Immunity-enhancing lactic acid bacteria |
| PCT/NZ1998/000122 WO1999010476A1 (en) | 1997-08-21 | 1998-08-18 | Immunity enhancing lactic acid bacteria |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL338775A1 PL338775A1 (en) | 2000-11-20 |
| PL195110B1 true PL195110B1 (pl) | 2007-08-31 |
Family
ID=25645584
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL98338775A PL195110B1 (pl) | 1997-08-21 | 1998-08-18 | Biologicznie czyste kultury bakterii kwasu mlekowego Lactobacillus rhamnosus, kompozycje do immunostymulacji i zastosowanie biologicznie czystych kultur |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6379663B1 (pl) |
| EP (2) | EP1007625B1 (pl) |
| JP (1) | JP3694236B2 (pl) |
| KR (1) | KR100406344B1 (pl) |
| CN (1) | CN1150314C (pl) |
| AU (1) | AU727940B2 (pl) |
| BR (1) | BR9811332A (pl) |
| DE (1) | DE69841826D1 (pl) |
| DK (2) | DK1007625T3 (pl) |
| ES (2) | ES2399324T3 (pl) |
| GB (1) | GB2338245B (pl) |
| HK (1) | HK1024719A1 (pl) |
| HU (1) | HU228046B1 (pl) |
| ID (1) | ID24734A (pl) |
| MY (1) | MY116272A (pl) |
| NZ (1) | NZ337520A (pl) |
| PL (1) | PL195110B1 (pl) |
| RU (1) | RU2208632C2 (pl) |
| SK (1) | SK283008B6 (pl) |
| TR (1) | TR200000451T2 (pl) |
| TW (1) | TW587098B (pl) |
| WO (1) | WO1999010476A1 (pl) |
Families Citing this family (42)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL195110B1 (pl) * | 1997-08-21 | 2007-08-31 | New Zealand Dairy Board | Biologicznie czyste kultury bakterii kwasu mlekowego Lactobacillus rhamnosus, kompozycje do immunostymulacji i zastosowanie biologicznie czystych kultur |
| EP1034788A1 (en) * | 1999-03-11 | 2000-09-13 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhea |
| ES2155782B1 (es) * | 1999-05-07 | 2002-05-16 | Danone Sa | Utilizacion de bacterias acidolacticas pra preparar leches fermentadas para el tratamiento de niveles de actividad inmunitaria transitoriamente reducidos. |
| ES2155783B1 (es) * | 1999-05-07 | 2002-05-16 | Danone Sa | Nueva utilizacion de lactobacillus casei para la preparacion de leches fermentadas para el tratamiento de niveles inmunitarios deprimidos. |
| AU5069500A (en) * | 1999-05-07 | 2000-11-21 | Compagnie Gervais Danone | Use of lactic acid bacteria in the preparation of fermented milks for the treatment of depressed immunity levels |
| US7125698B2 (en) * | 1999-08-09 | 2006-10-24 | Matthew Glenn | Polynucleotides, materials incorporating them, and methods for using them |
| HU227086B1 (en) | 1999-11-25 | 2010-06-28 | Vakcina Kft | Lactobacillus vaccine for treating prostata inflammatory and benign prostata hyperplasia |
| FR2809312B1 (fr) * | 2000-05-25 | 2002-07-12 | Gervais Danone Sa | Utilisation de l. casei dans des compositions immunostimulantes |
| TW588109B (en) * | 2000-07-29 | 2004-05-21 | Tcell Biotechnology Food Co Lt | Lactobacillus rhamnosus strain and uses thereof |
| EP1311684A4 (en) * | 2000-08-08 | 2005-10-19 | Genesis Res & Dev Corp Ltd | LACTOBACILLUS RHAMNOSUS POLYNUCLEOTIDES AND POLYPEPTIDES AND METHODS OF USE |
| SG97174A1 (en) * | 2000-12-19 | 2003-07-18 | Cell Biotechnology Food Co Ltd | Lactobacillus rhamnosus strain and uses thereof |
| FI109602B (fi) | 2001-01-25 | 2002-09-13 | Valio Oy | Probioottiyhdistelmä |
| US20030017192A1 (en) * | 2001-06-19 | 2003-01-23 | Hanny Kanafani | Process for producing extended shelf-life ready-to-use milk compositions containing probiotics |
| KR100442205B1 (ko) * | 2002-02-28 | 2004-07-30 | 주식회사 비피도 | β- 글루코시다제를 생산하는 비피도박테리움 락티스 및이를 이용하여 이소플라본을 이소플라본 비배당체로전환하는 방법 |
| US20040047849A1 (en) * | 2002-09-11 | 2004-03-11 | Genmont Biotech Inc. | Use of some lactobacillus strains in treating allergy |
| NZ521836A (en) * | 2002-10-08 | 2005-07-29 | New Zealand Dairy Board | High pressure treatment to reduce microbial spoilage in cultured dairy foods, cooked meats, vegetables and the like |
| US20070148147A1 (en) * | 2002-12-05 | 2007-06-28 | Veronique Dennin | Bacterial composition and its use |
| US7001756B1 (en) * | 2004-02-19 | 2006-02-21 | Genmont Biotech Inc. | Microorganism strain of GM-020 of Lactobacillus rhamnosus and its use for treating obesity |
| US6994848B2 (en) * | 2004-03-25 | 2006-02-07 | Genmont Biotech Inc. | Lactobacillus paracasei strain GM-080 for treating allergy related diseases |
| ITMI20042189A1 (it) * | 2004-11-16 | 2005-02-16 | Anidral Srl | Composizione a base di batteri probiotici e suo uso nella prevenzione e-o nel trattamento di patologie e-o infezioni respiratorie e nel miglioramento della funzionalita' intestinale |
| RU2270248C1 (ru) * | 2004-12-31 | 2006-02-20 | Открытое акционерное общество "Лианозовский молочный комбинат" | Штамм бифидобактерий bifidobacterium lactis 668, используемый для приготовления кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок, бактериальных препаратов и косметических средств |
| EP1724340B1 (en) * | 2005-05-11 | 2009-02-18 | Chr. Hansen A/S | Antibiotic-sensitive lactic acid bacteria strains |
| EP2194125A3 (en) * | 2005-05-11 | 2012-07-18 | Chr. Hansen A/S | New antibiotic-sensitive lactic acid bacteria strains |
| JP2007028920A (ja) * | 2005-07-22 | 2007-02-08 | Japan Research & Development Association For New Functional Foods | 発酵乳およびその製造方法 |
| JPWO2007043563A1 (ja) | 2005-10-13 | 2009-04-16 | 明治製菓株式会社 | 腸内フローラ改善用組成物 |
| US8226936B2 (en) * | 2006-11-15 | 2012-07-24 | Chr-Hansen A/S | Tetracycline-sensitive bifidobacteria strains |
| TWI356680B (en) | 2007-01-05 | 2012-01-21 | Promd Biotech Co Ltd | Anti-allergy lactic acid bacteria |
| FR2928935B1 (fr) | 2008-03-19 | 2011-05-20 | Gervais Danone Sa | Souche de lactobacillus rhamnosus. |
| RU2011115192A (ru) * | 2008-09-19 | 2012-10-27 | Нестек С.А. (Ch) | Диетологическая поддержка иммунной системы во время противораковой терапии |
| CA2744778C (en) * | 2008-11-28 | 2019-01-15 | University Of Otago | Use of lactic acid bacteria to treat or prevent eczema |
| WO2010103132A1 (es) * | 2009-03-10 | 2010-09-16 | Hero España, S.A. | Aislamiento, identificación y caracterización de cepas con actividad probiótica a partir de heces de lactantes alimentados exclusivamente con leche materna |
| BR112012017978A2 (pt) | 2010-01-19 | 2016-05-03 | Abbott Lab | fórmulas nutricionais contendo simbióticos |
| WO2011141762A1 (en) | 2010-05-12 | 2011-11-17 | Compagnie Gervais Danone | Synergistic fermentation of lactobacillus rhamnosus and lactobacillus paracasei subsp paracasei |
| WO2012063345A1 (ja) * | 2010-11-11 | 2012-05-18 | 株式会社カザミ | 免疫賦活剤及びそれを配合した免疫賦活組成物、並びに免疫賦活方法 |
| RU2453591C1 (ru) * | 2011-04-21 | 2012-06-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Бифилюкс" | Штамм lactobacillus rhamnosus, используемый для получения продукции, содержащей лактобактерии |
| WO2013101516A1 (en) | 2011-12-29 | 2013-07-04 | Abbott Laboratories | Methods for decreasing the incidence of necrotizing enterocolitis in infants, toddlers, or children using extracted genomic dna |
| ITRM20130174A1 (it) * | 2013-03-22 | 2014-09-23 | Eurospital S P A | Ceppo di lactobacillus e suo uso come probiotico |
| NZ750365A (en) * | 2016-07-28 | 2022-07-01 | Fonterra Cooperative Group Ltd | Dairy product and process |
| EP4136985A1 (en) | 2016-12-22 | 2023-02-22 | University of Otago | Use of lactic acid bacteria to treat or prevent gestational diabetes mellitus |
| KR102513639B1 (ko) * | 2016-12-22 | 2023-03-23 | 유니버시티 오브 오타고 | 임신성 진성 당뇨병의 처치 또는 예방을 위한 락트산 박테리아의 용도 |
| WO2018220429A1 (en) * | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Edwin Arthur Mitchell | Use of lactic acid bacteria to treat or prevent at least one of postnatal depression and postnatal anxiety |
| KR20230085712A (ko) | 2021-12-07 | 2023-06-14 | 주식회사 에이스브이 | 버터플라이 밸브용 디스크 락킹 장치 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0614862B2 (ja) | 1987-05-22 | 1994-03-02 | 東京田辺製薬株式会社 | ビフィドバクテリウム菌の増殖促進剤 |
| JP2617758B2 (ja) * | 1988-03-25 | 1997-06-04 | 株式会社ヤクルト本社 | 抗体産生増強型免疫賦活剤 |
| JPH0551321A (ja) * | 1991-08-23 | 1993-03-02 | Yotsuba Nyugyo Kk | 免疫賦活剤 |
| ATE172245T1 (de) | 1992-07-06 | 1998-10-15 | Nestle Sa | Milchbakterien |
| EP0686039B1 (en) | 1993-02-24 | 2000-08-23 | Valio Ltd. | Method of enhancing immune response to oral vaccines |
| WO1994026114A1 (en) * | 1993-05-11 | 1994-11-24 | Immunom Technologies, Inc. | Method of stimulating and modulating the immune system of animals with microbial compositions |
| JP4112021B2 (ja) * | 1994-02-16 | 2008-07-02 | 明治乳業株式会社 | 乳酸菌を用いた免疫賦活剤 |
| JPH092959A (ja) * | 1995-06-16 | 1997-01-07 | Yakult Honsha Co Ltd | ＩｇＥ抗体産生抑制剤および抗アレルギー剤 |
| FI102298B (fi) * | 1995-09-07 | 1998-11-13 | Oulutech Oy | Menetelmä maitohappobakteerilajien määrittämiseksi ja menetelmään sove ltuvia oligonukleotideja |
| WO1998023727A1 (en) | 1996-11-29 | 1998-06-04 | Bio K + International Inc. | Lactic ferment comprising a particular strain of lactobacillus acidophilus and use thereof |
| PL195110B1 (pl) * | 1997-08-21 | 2007-08-31 | New Zealand Dairy Board | Biologicznie czyste kultury bakterii kwasu mlekowego Lactobacillus rhamnosus, kompozycje do immunostymulacji i zastosowanie biologicznie czystych kultur |
-
1998
- 1998-08-18 PL PL98338775A patent/PL195110B1/pl unknown
- 1998-08-18 US US09/485,875 patent/US6379663B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-18 KR KR10-2000-7001739A patent/KR100406344B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-08-18 SK SK219-2000A patent/SK283008B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-08-18 NZ NZ337520A patent/NZ337520A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-08-18 EP EP98941942A patent/EP1007625B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-18 GB GB9920043A patent/GB2338245B/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-18 ES ES10163944T patent/ES2399324T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-18 DK DK98941942.9T patent/DK1007625T3/da active
- 1998-08-18 TR TR2000/00451T patent/TR200000451T2/xx unknown
- 1998-08-18 CN CNB988051710A patent/CN1150314C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-18 AU AU90095/98A patent/AU727940B2/en not_active Expired
- 1998-08-18 JP JP2000507784A patent/JP3694236B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-18 WO PCT/NZ1998/000122 patent/WO1999010476A1/en active IP Right Grant
- 1998-08-18 ID IDW20000097A patent/ID24734A/id unknown
- 1998-08-18 HU HU0002949A patent/HU228046B1/hu unknown
- 1998-08-18 RU RU2000106746/13A patent/RU2208632C2/ru active
- 1998-08-18 EP EP10163944A patent/EP2241616B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-18 BR BR9811332-1A patent/BR9811332A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-08-18 ES ES98941942T patent/ES2349669T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-18 DK DK10163944.1T patent/DK2241616T3/da active
- 1998-08-18 DE DE69841826T patent/DE69841826D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-20 MY MYPI98003814A patent/MY116272A/en unknown
- 1998-10-15 TW TW087117136A patent/TW587098B/zh not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-06-13 HK HK00103534A patent/HK1024719A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL195110B1 (pl) | Biologicznie czyste kultury bakterii kwasu mlekowego Lactobacillus rhamnosus, kompozycje do immunostymulacji i zastosowanie biologicznie czystych kultur | |
| JP4176715B2 (ja) | プロバイオティクス菌株、その選択方法、その組成物、およびその使用 | |
| Fooks et al. | Probiotics as modulators of the gut flora | |
| RU2308483C2 (ru) | Штамм bifidobacterium longum infantis для приготовления пробиотика, антимикробный агент и препарат на основе штамма bifidobacterium longum infantis с иммуномодулирующими свойствами | |
| AU2008257455B2 (en) | Mammalian milk microorganisms, compositions containing them and their use for the treatment of mastitis | |
| JP4247458B2 (ja) | ラクトバシラス属の菌株、および前記菌株を含む製品 | |
| EP2318513B1 (en) | New probiotic bifidobacterium longum | |
| JP3944076B2 (ja) | 乳酸菌含有プロバイオティクス製品 | |
| EP1112692B1 (en) | Drinks and foods capable of eliminating helicobacter pylori | |
| RU2567009C2 (ru) | ШТАММ Lactococcus lactis ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ РАССТРОЙСТВА ПИЩЕВАРЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | |
| JP2002534113A5 (pl) | ||
| PL198626B1 (pl) | Szczep Lactobacillus paracasei, zastosowanie tego szczepu i żywnościowa lub farmaceutyczna kompozycja zawierająca bakterie należące do rodzaju Lactobacillus | |
| US6887465B1 (en) | Lactobacillus strains capable of preventing diarrhoea caused by pathogenic bacteria and rotaviruses | |
| KR100742900B1 (ko) | 면역조절기능이 있는 락토바실루스 람노서스 아이디씨씨3201의 이용 | |
| EP2742125B1 (en) | New strain of l. bulgaricus capable of inhibiting the adhesion of h. pylori strains to epithelial cells | |
| RU2708146C2 (ru) | Средство для улучшения состояния пищеварения | |
| MXPA99009596A (en) | Immunity enhancing lactic acid bacteria |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RECP | Rectifications of patent specification |