RU2567009C2 - ШТАММ Lactococcus lactis ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ РАССТРОЙСТВА ПИЩЕВАРЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ - Google Patents

ШТАММ Lactococcus lactis ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ РАССТРОЙСТВА ПИЩЕВАРЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ Download PDF

Info

Publication number
RU2567009C2
RU2567009C2 RU2013132931/10A RU2013132931A RU2567009C2 RU 2567009 C2 RU2567009 C2 RU 2567009C2 RU 2013132931/10 A RU2013132931/10 A RU 2013132931/10A RU 2013132931 A RU2013132931 A RU 2013132931A RU 2567009 C2 RU2567009 C2 RU 2567009C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
lactococcus lactis
ibs
strains
treatment
Prior art date
Application number
RU2013132931/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2013132931A (ru
Inventor
Бильяна Лезик
Изабелль Шамбо
Original Assignee
Компани Жервэ Данон
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Компани Жервэ Данон filed Critical Компани Жервэ Данон
Publication of RU2013132931A publication Critical patent/RU2013132931A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2567009C2 publication Critical patent/RU2567009C2/ru

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • A61K35/742Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/10Laxatives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12Antidiarrhoeals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к штамму Lactococcus lactis CNCM I-2807, предназначенному для лечения или профилактики расстройства пищеварения, и его применению. Для лечения или профилактики расстройства пищеварения может применяться также и штамм Lactococcus lactis CNCM I-1631. Группа изобретений обеспечивает ингибирование роста патогенных микроорганизмов, улучшение целостности эпителиального барьера кишечника. Диаметры зон ингибирования патогенных микроорганизмов E. coli, L. monocytogenes и S. enteritidis при инкубировании со штаммом Lactococcus lactis CNCM I-1631 составляют больше 6 мм. После 4 ч инкубации с апикальной частью монослоя клеток Т84 значение трансэпителиального электрического сопротивления составляет для штамма Lactococcus lactis CNCM I-2807 108,54%, а для штамма Lactococcus lactis CNCM I-1631 - 110,90%. 3 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

Description

Настоящее изобретение относится к композициям, содержащим молочнокислые бактерии для применения при улучшении состояния пищеварения. В частности, такие композиции содержат штамм Lactococcus lactis, подходящий для лечения и/или профилактики расстройств желудочно-кишечного тракта.
Желудочно-кишечные инфекции чрезвычайно распространены во всем мире. У подавляющего большинства пострадавших полное восстановление происходит быстро. Однако у существенной доли пациентов, страдающих от гастроэнтерита, развиваются продолжительные желудочно-кишечные симптомы, такие как синдром раздраженного кишечника (IBS). Действительно, предполагается, что после бактериального или вирусного гастроэнтерита у 3,7-36% индивидуумов развивается IBS (Spiller and Garsed, 2009).
Желудочно-кишечные инфекции также относятся к числу наиболее частых причин диареи. В тяжелых случаях вызывающая понос инфекция может в дальнейшем привести к воспалению желудка.
Желудочно-кишечные инфекции также включают болезнь Крона (CD) и неспецифический язвенный колит (UC), совместно именуемые как воспалительные заболевания кишечника (IBD).
Синдром раздраженного кишечника (IBS)
IBS представляет собой хронические функциональные расстройства кишечника, которые характеризуются диареей или запором, болью в животе, вздутием живота и проходом слизи в стул.
Считается, что воспаление и инфекция играют роль в возникновении IBS (Ohman and Simren, 2010). Семейство Enterobacteriaceae, как было замечено, чаще встречается у субъектов с IBS по сравнению со здоровыми субъектами (Si et al., 2004). Однако это наблюдение не повторялось в других исследованиях (Malinen et al., 2005), демонстрирующих, что в случае, когда бактерии семейства Enterobacteriaceae играют роль в патогенезе IBS, это не является единственным фактором. Кроме того, было показано, что субъекты с IBS несут более энтероагрегативные Escherichia coli (т.е. патогенные штаммы Escherichia coli), чем здоровые субъекты (Sobieszczanska et al., 2006).
Принимая во внимание, что существует исключительная связь между количеством бактерий семейства Enterobacteriaceae и подгруппой IBS, появляется все больше доказательств того, что представители семейства Enterobacteriaceae могут вызывать IBS в случае послеинфекционных IBS (PI-IBS) (Ji et al., 2005; Marshall et al., 2010 и Thabane et al., 2010). В этих исследованиях было показано, что пациенты, страдающие от гастроэнтерита, вызванного бактериями семейства Enterobacteriaceae (Escherichia coli, Campylobacter, Shigella), представляют больший риск получить IBS.
Поскольку активация иммунной системы рассматривается, как предполагают с недавнего времени, в качестве предполагаемой патофизиологической причины IBS, исследователи начали оценивать применение противовоспалительных препаратов в качестве терапии IBS (Camilleri, 2010). Например, противовоспалительное средство Mesalamine продемонстрировало весьма обнадеживающие результаты у субъектов IBS (Corinaldesi et al., 2009). В этом исследовании было показано, что Mesalamine смягчает симптомы IBS, улучшая общее самочувствие.
Далее пробиотики, в частности штаммы молочнокислых бактерий, как сообщалось, являются полезными для лечения и/или профилактики IBS. Примеры таких штаммов раскрыты в Международных заявках WO 2007/036230, WO 03/010297 и WO 2009/080800.
Послеинфекционный синдром раздраженного кишечника (PI-IBS)
PI-IBS является подгруппой синдрома раздраженного кишечника, который развивается после желудочно-кишечной инфекции.
О PI-IBS сообщалось в основном в Европе, особенно в Великобритании. Тем не менее, в двух недавних исследованиях, одно из Китая и одно из Кореи, сообщалось, что PI-IBS также происходит и в восточных странах с преобладанием, сходным с тем, что обнаружено на западе.
Патогенные бактерии были выявлены в большинстве исследований в качестве этиологических факторов, участвующих в развитии PI-IBS. Бактерии семейства Enterobacteriaceae, такие как Salmonella, Shigella и Campylobacter, встречались среди наиболее часто выделяемых бактерий. Потенциально могут быть вовлечены другие бактерии, вызывающие гастроэнтерит, такие как Listeria или патогенные E. coli. Недавние исследования показывают, что также могут быть вовлечены другие инфекционные агенты, включая вирусы (например, ротавирус, аденовирус, кальцивирус) и паразиты (Giardia lamblia, Blastocystis hominis). Гипотеза заключается в том, что снижение заболеваемости кишечными инфекциями в целом может снизить заболеваемость PI-IBS и, возможно, степень тяжести симптомов PI-IBS.
Механизм, лежащий в основе PI-IBS, не был четко идентифицирован. Особое внимание было уделено роли постоянного умеренного воспаления. Spiller и Garsed (2009) обнаружили увеличение числа внутриэпителиальных лимфоцитов, Т-лимфоцитов собственной пластинки слизистой оболочки, тучных клеток и кальпротектин-положительных макрофагов, которое не снижалось у пациентов, у которых развивается PI-IBS. Несколько пробиотических штаммов, как было показано, обладают противовоспалительными свойствами.
Эпителиальная выстилка кишечника, состоящая из эпителиальных клеток и плотных соединений, является полупроницаемой, позволяет прохождению мелких частиц, а также участвует в поддержании барьерной функции слизистой. Исследования in vitro и in vivo свидетельствуют о том, что активированная иммунная система кишечника при PI-IBS является результатом усиления местного воздействия антигена, связанного с повышенной проницаемостью эпителиального слоя кишечника. Пациенты с PI-IBS обладают повышенной проницаемостью по сравнению со здоровыми субъектами. Снижение кишечной проницаемости может непосредственно привести к улучшению симптомов PI-IBS. Несмотря на то что в некоторых исследованиях было показано, что несколько штаммов видов Lactobacilli способны увеличить целостность эпителиального барьера, нет прямых доказательств того, что штаммы L. lactis обладают сходными свойствами. В противоположность этому существуют доказательства того, что генетически модифицированные штаммы L. lactis могут быть пагубны для эпителия (Shao and Kaushal, 2004).
Воспалительные заболевания кишечника (IBD)
IBD представляет собой любое из двух воспалительных заболеваний кишечника: болезнь Крона или неспецифический язвенный колит.
Болезнь Крона и неспецифический язвенный колит представляют собой хронические идиопатические расстройства, обусловленные иммунитетом, с генетическими и экологическими воздействиями (факторами), в особенности микробными воздействиями. Болезнь Крона часто ассоциируется с диареей, судорогами, потерей аппетита и веса с местными абсцессами и образованием рубцов. Язвенный колит также связан с диареей, но с выделением слизи и крови, схваткообразной болью в животе и воспалением и отеком мембраны слизистой с пятнами язвы. Болезнь Крона и неспецифический язвенный колит имеют место главным образом в районах с наибольшей концентрацией преимущественно анаэробных бактерий в дистальном отделе подвздошной кишки и толстой кишке. Серологические реакции на микробные антигены присутствуют у 80% пациентов с болезнью Крона, и высокие титры антибактериальных серологий связаны с тяжелым заболеванием (Mow et al., 2004).
Продолжающаяся полемика, связанная с болезнью Крона, состоит в том, ответствен ли патогенный микроорганизм за хронический рецидивирующий характер воспалительного ответа. Полученные недавно значительные данные непосредственно связывают функционально аномальные штаммы E. coli (принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae) с патогенезом болезни Крона (Sartor, 2008). Приросшие/инвазивные E. coli (AIEC) прилипают и поражают эпителиальные клетки и удерживаются внутри клеток кишечного эпителия и макрофагов (Darfeuille-Michaud et al., 1998). В ходе исследований in vitro были разработаны факторы вирулентности и молекулярные механизмы, которые способствуют эпителиальной адгезии, инвазии и персистированию (Darfeuille-Michaud et al., 1998 и Baumgart et al., 2007).
Активная область исследования IBD оценивает возможность дисбактериоза, представляющего собой ненормальную микробную композицию или функцию, в качестве причины хронического воспалительного процесса в кишечнике. Дисбактериоз может вызывать воспаление кишечника при помощи нескольких механизмов (Sartor, 2009). Нарушение продуцирования бутирата и других короткоцепочечных жирных кислот может коренным образом повлиять на эпителиальные функции кишечника и барьерные характеристики слизистой. Относительный баланс полезных и вредных бактерий может оказаться решающим фактором в индукции воспаления в противоположность гомеостазу слизистой оболочки. Способность энтеральной микробиоты продуцировать токсичные метаболиты может иметь отношение к патогенезу язвенного колита. Кишечные бактерии также могут продуцировать реактивные формы кислорода, которые могут вызывать повреждение тканей, особенно у хозяев с нарушенной деградацией метаболитов кислорода.
Некоторые исследования документально подтверждают отмеченные изменения микробиоты кишечника у пациентов с IBD (Peterson et al., 2008). С использованием молекулярных технологий было показано уменьшение определенных бактериальных популяций при IBD, особенно подмножеств клостридий, и увеличение других, в том числе Enterobacteriaceae (Sartor, 2009). Swidsinski с соавт. (2009) отметили высокий уровень Enterobacteriaceae в микробиоте пациентов с CD и UC.
При этом определение микробных функций, которые связаны с или инициируют IBD, осложняется генетикой организма-хозяина, состоянием воспаления и диетой (Peterson et al., 2008). Разработка перспективных исследований IBD человека для определения микробных сообществ, которые провоцируют воспаление, не была возможной даже у генетически чувствительных групп населения.
Как следствие, за последние несколько лет были разработаны различные модели на мышах хронического воспалительного процесса в кишечнике, напоминающие IBD, и была предоставлена информация о IBD и разбалансировании микробиоты. Различные модели IBD на мышах, в том числе генетически модифицированных животных с дефектами иммунной системы или гликанов слизистой, которых выращивали обычным способом с микробиотой и затем подвергали лечению антибиотиками или которых выращивали стерильными, а затем колонизировали кишечной микробиотой от здоровых доноров, показывают, что наличие микробиоты играет важную роль в выявлении патологии (Garrett et al., 2007; Kang et al., 2008 года и Sartor, 2008). Важно подчеркнуть, что, хотя модели колита на грызунах, как правило, зависят от присутствия кишечной микробиоты, не все микробы вызывают заболевание (Kim et al., 2007). Исследования на животных моделях показывают, что некоторые бактериальные штаммы являются вредными, в то время как другие обладают защитным действием, а многие из них не являются ни агрессивными, ни полезными (Sartor, 2009).
Группа Л. Глимчер разработала устойчивую модель язвенного колита на мышах, чьи патологические особенности и ответ на лечение анти-TNF напоминают это заболевание у человека. Они обнаружили, что отсутствие определенных регуляторных генов природной иммунной системы (полученное в результате двойного нокаута генов T-bet и RAG2; названа TRUC для язвенного колита T-bet RAG2) приводило в результате к агрессивному, спонтанному и передающемуся контактным путем UC и повышенной восприимчивостью к колитам у иммунологически интактных хозяев (Garrett et al., 2007).
Эти результаты in vivo находятся в соответствии с клиническими наблюдениями: виды Klebsiella и Proteus чаще наблюдаются в стуле больных с UC, чем здоровых субъектов (Dorofeyev et al., 2009). Существуют также многочисленные сообщения о повышенных титрах антител против бактерий семейства Enterobacteriaceae у пациентов с IBD (Cooper et al., 1988; Ibbotson et al, 1987 и Tiwana et al, 1998).
В заключение баланс полезных и вредных видов бактерий определяет гомеостаз в противоположность воспалению. Была продемонстрирована вовлеченность бактерий семейства Enterobacteriaceae в эти механизмы. Для лечения и профилактики рецидивов IBD этим балансом можно манипулировать, в частности, при помощи пробиотиков.
Кроме того, было показано, что во время активных периодов IBD воспаление желудочно-кишечного тракта вызывает повышенную проницаемость эпителия, что приводит к повреждению барьерной функции эпителия (Madsen et al, 2001).
Использование противовоспалительных веществ (также называемых биологиками) для лечения воспалительных заболеваний кишечника наконец увеличилось, и в настоящее время они применяются гастроэнтерологами и врачами при уходе за пациентами с IBD (в качестве обзора: Bosani et al., 2009). Альтернативно для облегчения IBD были использованы пробиотики, и противовоспалительные механизмы были предложены в качестве механизма действия (Vanderpool et al., 2008).
Далее появляется все больше свидетельств того, что некоторые пробиотические и симбиотические бактерии улучшают ослабление кишечного барьера (снижение проницаемости) in vitro (Resta-Lenert and Barratt, 2006 и Miyauchi et al., 2008) и in vivo и способствуют облегчению симптомов IBS и IBD.
Из вышеизложенного следует, что патогенные микроорганизмы могут вызывать желудочно-кишечные инфекции (включая IBS, PI-IBS и IBD) и что соединения или пробиотики, обладающие противопатогенной активностью, могут предотвращать и/или излечивать эти нарушения. Далее целостность эпителиального барьера, связанная с противопатогенной активностью, может в дальнейшем предотвратить воспаление.
Бактерии Lactococcus lactis представляют собой молочнокислые бактерии, обычно встречающиеся в молочных продуктах, таких как сыр или ферментированные молочные продукты (в том числе йогурты). Некоторые бактерии Lactococcus lactis были описаны как обладающие активностью в отношении патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae, таких как Salmonella enteritidis и Escherichia coli (Olasupo et al., 2003; Ganzle et al., 1999).
Авторы настоящего изобретения показали in vitro, что два штамма Lactococcus lactis subsp. lactis, а именно штаммы DN 030 066 и DN 030 087, улучшают целостность эпителиального барьера по сравнению со штаммами бактерий, известными своими противовоспалительными свойствами, и далее, что штамм DN 030 066 обладает превосходной антимикробной активностью по сравнению со штаммами, известными своей антимикробной активностью.
Штамм DN 030 066 был передан на хранение, в соответствии с Будапештским договором, в CNCM (Национальная коллекция культур микроорганизмов, 25 Rue du Docteur Roux, Париж) 24 октября 1995 года, под номером 1-1631. Этот штамм раскрыт в Международной заявке WO 97/16529.
В CNCM штамм 1-1631 имеет следующие характеристики:
- Морфология: Грамположительный микроорганизм, в основном диплококки небольшого размера;
- Ферментация следующих сахаров (результаты, полученные на среде API 50 CH strip - API MRS при 30°C в течение 48 часов): рибозы, галактозы, глюкозы, маннозы, маннитола, N-ацетилглюкозамина, амигдалина, арбутина, эскулина, салицина, целлобиозы, мальтозы, лактозы, трегалозы, амидона, бета-гентибиозы.
Штамм DN 030 087 был передан на хранение, в соответствии с Будапештским договором, в CNCM (Национальная коллекция культур микроорганизмов, 25 Rue du Docteur Roux, Париж) 19 февраля 2002 года под номером 1-2807.
В CNCM штамм 1-2807 имеет следующие характеристики:
- Морфология: Грамположительный микроорганизм, в основном диплококки небольшого размера;
- Ферментация следующих сахаров (результаты, полученные на среде API 50 CH strip - API MRS при 37°C в течение 72 часов): рибозы, галактозы, глюкозы, маннозы, маннитола, N-ацетилглюкозамина, амигдалина, арбутина, эскулина, салицина, целлобиозы, мальтозы, лактозы, трегалозы, амидона, бета-гентибиозы.
Соответственно, настоящее изобретение предоставляет штамм Lactococcus lactis, выбранный из группы, состоящей из штаммов DN 030 066 (CNCM 1-1631) и DN 030 087 (CNCM 1-2807), для применения при лечении или профилактике нарушения пищеварения.
В варианте осуществления указанное применение используется для ингибирования роста патогенных микроорганизмов, предпочтительно патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae, и/или улучшения целостности эпителиального барьера кишечника.
Указанный патогенный микроорганизм предпочтительно выбирают из группы, включающей роды Escherichia, Salmonella, Listeria, Campylobacter, Shigella, Proteus (например, P. mirabilis) и Klebsiella, предпочтительно из группы, состоящей из видов E. coli, L. monocytogenes и S. enteritidis.
Указанное расстройство пищеварительного тракта может представлять собой, в частности, желудочный или кишечный дискомфорт; желудочную или кишечную инфекцию; диарею, запоры; IBS; PI-IBS или IBD (т.е. болезнь Крона и/или неспецифический язвенный колит).
Настоящее изобретение также предоставляет мутантный штамм Lactococcus lactis, полученный из штамма DN 030 066 или штамма DN 030 087 путем мутагенеза или генетической трансформации этого для ингибирования роста патогенных микроорганизмов, предпочтительно патогенных Enterobacteriaceae, и/или улучшения целостности эпителиального барьера кишечника, при лечении или профилактике нарушения пищеварения, как определено выше.
Указанный мутантный штамм Lactococcus lactis можно получить путем мутирования одного или нескольких эндогенных(ого) генов(а) штамма DN 030 066 или штамма DN 030 087, например для того, чтобы изменить некоторые его свойства (например, его способность ферментировать сахара, его устойчивость к кислотности, его выживание при транспорте в желудочно-кишечном тракте или его выживание после ацидификации). Это также может быть мутантный штамм, полученный в результате генетической трансформации штамма DN 030 066 или штамма DN 030 087 одним или несколькими представляющими интерес генами(ом), например для того, чтобы предоставить указанному штамму дополнительные физиологические особенности.
Указанные штаммы могут быть использованы в виде целых бактерий, которые могут быть мертвыми или живыми, предпочтительно живыми.
Настоящее изобретение также предоставляет фракцию клеток или метаболит, полученные из штамма DN 030 066 или штамма DN 030 087, для ингибирования роста патогенного микроорганизма, предпочтительно патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae, и/или улучшения целостности эпителиального барьера кишечника, при лечении или профилактике нарушения пищеварения, как определено выше.
Указанная фракция клеток может представлять собой, например, фракцию клеточной стенки, цитоплазматическую фракцию или культуральный супернатант или фракцию этого.
Указанный метаболит может представлять собой, например, короткоцепочечные жирные кислоты, пептиды (например, бактериоцины) и/или соединения, образующиеся в процессе ферментации штаммов DN 030 066 или DN 030 087.
Настоящее изобретение также предоставляет композицию, содержащую
- штамм Lactococcus lactis, выбранный из группы, состоящей из штаммов DN 030 066 (CNCM 1-1631) и DN 030 087 (CNCM 1-2807), как определено выше, или
- мутантный штамм Lactococcus lactis, как определено выше, или
- клеточную фракцию или метаболит, полученные из штамма DN 030 066 или штамма DN 030 087, как определено выше,
для ингибирования роста патогенного микроорганизма, предпочтительно патогенной бактерии семейства Enterobacteriaceae, и/или улучшения целостности эпителиального барьера кишечника, при лечении или профилактике нарушения пищеварения, как определено выше.
Указанная композиция может включать, по меньшей мере, один другой штамм Lactococcus lactis, отличный от штаммов, которые определены выше, и/или, по меньшей мере, одни молочнокислые бактерии видов, отличных от Lactococcus lactis, таких как молочнокислые бактерии рода Lactobacillus или Bifidobacterium.
Указанная композиция может быть в любой форме, пригодной для введения, в частности перорального введения. Она включает в себя, например, твердые вещества, полутвердые вещества, жидкости и порошки. Жидкая композиция, как правило, является предпочтительной для облегченного введения, например, в виде напитков.
Указанная композиция может включать от 105 до 1013 колониеобразующих единиц (cfu), по меньшей мере, одного штамма L. lactis или мутантного штамма L. lactis, как определено выше, предпочтительно, по меньшей мере, 106 cfu, более предпочтительно, по меньшей мере, 107 cfu, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 108 cfu и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 109 cfu на грамм сухой массы состава. В случае жидкой композиции это соответствует, как правило, 107-1012 колониеобразующих единиц (cfu), предпочтительно, по меньшей мере, 105 cfu, более предпочтительно, по меньшей мере, 106 cfu, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 107 cfu и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 109 cfu/мл.
Указанная композиция может представлять собой пищевой продукт или фармацевтический продукт.
Указанная композиция также может представлять собой молочный продукт или ферментированный продукт, предпочтительно ферментированный молочный продукт, такой как кисломолочный продукт, или ферментированный продукт из молочной сыворотки.
Ферментированный продукт может быть представлен в виде жидкости или представлен в виде сухого порошка, полученного путем высушивания ферментационной жидкости.
Введение в виде ферментированного молочного продукта имеет дополнительное преимущество - низкий уровень лактозы, что является дополнительным преимуществом для исправления расстройства пищеварения, как определено выше.
Указанный ферментированный продукт может представлять собой свежий продукт. Свежий продукт, который не подвергался стадии глубокой термообработки, имеет преимущество в том, что присутствующие штаммы бактерий находятся в живом виде.
Указанный кисломолочный продукт может представлять собой йогурт или кислое молоко в установленной, перемешанной или питьевой форме или сыр.
Указанный кисломолочный продукт также может представлять собой ферментированный овощной продукт, такой как ферментированные соевые, крупы и/или фрукты в установленной, перемешанной или питьевой форме.
В другом варианте осуществления указанная композиция представляет собой продукт детского питания, детскую молочную смесь или детскую последующую смесь.
В другом варианте осуществления указанная композиция представляет собой нутрицевтик или питательную добавку.
Питательные композиции по изобретению также включают пищевые добавки и функциональные продукты питания.
Как используется в настоящем документе, «пищевая добавка» относится к продукту, полученному из соединений, обычно используемых в пищевых продуктах, но которые находятся в форме таблеток, порошка, капсул, порций или в любой другой форме, как правило, не связанной с продуктами питания, и которые оказывают благотворное влияние на здоровье.
Как используется в настоящем документе, «функциональные продукты питания» представляют собой продукты питания, которые также благотворно влияют на здоровье. В частности, пищевые добавки и функциональные продукты питания могут оказывать физиологический эффект - защитный или лечебный - в отношении болезни, например в отношении хронического заболевания.
Указанная композиция предназначена предпочтительно для применения людьми, включая, в частности, младенцев, лиц пожилого возраста и субъектов, страдающих разбалансировкой метаболизма, например субъектов, страдающих ожирением.
Настоящее изобретение также предоставляет способ получения мутантного штамма Lactococcus lactis, способного ингибировать рост патогенного микроорганизма, предпочтительно патогенных Enterobacteriaceae, и/или улучшать целостность эпителиального барьера кишечника, включающий стадию мутагенеза или генетической трансформации штамма Lactococcus lactis, выбранного из группы, состоящей из штаммов DN 030 066 (CNCM 1-1631) и DN 030 087 (CNCM 1-2807).
Способы мутагенеза или генетической трансформации штамма Lactococcus lactis хорошо известны любому специалисту в рассматриваемой области.
Настоящее изобретение также предоставляет штамм Lactococcus lactis, отличающийся тем, что он является штаммом, депонированным в CNCM под номером 1-2807.
Указанный штамм способен ингибировать рост патогенного микроорганизма, предпочтительно патогенной Enterobacteriaceae, как определено выше, и/или улучшать целостность эпителиального барьера кишечника.
Настоящее изобретение также предоставляет композицию, включающую штамм Lactococcus lactis CNCM 1-2807.
Настоящее изобретение также предоставляет штамм Lactococcus lactis CNCM 1-2807 или композицию, содержащую указанный штамм, для применения в качестве лекарственного средства.
Настоящее изобретение также предоставляет способ лечения или предупреждения нарушения пищеварения, как определено выше, у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение штамма L. lactis или композиции, как определено выше, указанному субъекту.
Помимо вышеперечисленных особенностей изобретение включает другие особенности, которые будут выявлены из последующего описания, которое относится к примерам, иллюстрирующим противопатогенную активность и активность по трансэпителиальному электрическому сопротивлению (TEER) штаммов DN 030 066 и DN 030 087.
ПРИМЕР 1: ОЦЕНКА ПРОТИВОПАТОГЕННЫХ АКТИВНОСТЕЙ ШТАММА L. LACTIS DN 030 066
Противомикробную активность в отношении Salmonella enteritidis B1241, Listeria и патогенной E. coli определяли в перекрывающихся тестах. Три штамма Lactococcus lactis оценивались в этом тесте: штамм в соответствии с настоящим изобретением DN 030 066, Lactococcus lactis subsp. lactis DSMZ 20729 и Lactococcus lactis subsp. cremoris DSMZ 4645, описанные ранее в качестве штаммов-продуцентов бактериоцина (соответственно низина и лактицина) (Bartoloni et al., 2004 и Park et al, 2003).
Штаммы L. lactis высевали из замороженных стоков на свежие чашки с агаризованной средой при помощи репликатора. Чашки выращивали в течение ночи, пока не появлялись видимые колонии. Затем верхний агар, содержащий питательную среду с экстрактом из мозга-сердца, и разведение выделенных патогенных микроорганизмов выливали на чашки с агаризованной средой. Чашки инкубировали при 37°C. На следующий день измеряли диаметры зон ингибирования патогенных микроорганизмов.
Балльная оценка 1 соответствует диаметру от 1 до 3 мм, балльная оценка 2 - диаметру от 4 до 6 мм, и балльная оценка 3 - диаметру более 6 мм. Эксперименты проводились на трех различных средах: MRS (De Man Rogosa and Sharpe), Elliker и TGV (Триптон-глюкоза-мясной экстракт). Каждый эксперимент проводили независимо в трех повторностях. Балльные оценки, полученные для каждой среды, суммировали выявления конкретной балльной оценки для каждого штамма и каждого патогенного микроорганизма. Затем суммировали балльные оценки, полученные для каждого патогенного микроорганизма, чтобы получить для каждого штамма общую оценку противомикробной активности. Результаты показаны в таблице 1 ниже.
Таблица 1
Антимикробная активность выбранных штаммов Lactococcus lactis
Виды Ссылка E. coli L.
monocytogenes
S.
enteritidis
Общая противомик-робная балльная оценка
L.lactis subsp. lactis
DN 030 066
PCT
заявка
WO 97/16529
3 8 4 15
L.lactis subsp. lactis
DSMZ 20729
Harris et al.,
1992
3 7 2 2
L.lactis subsp. cremoris DSMZ 4645 Ryan et al.,
1996
1 1 2 14
Приведенные выше результаты показывают, что штамм в соответствии с изобретением DN 030 066 обладает противомикробной активностью, превосходящей активности двух штаммов Lactococcus lactis, известных тем, что они обладают противопатогенной активностью.
ПРИМЕР 2: TEER-ОЦЕНКИ ШТАММОВ L. LACTIS DN 030 066 И DN 030087
Целостность кишечного барьера можно оценивать путем измерения разности потенциалов, наблюдаемой между апикальной и базальной сторонами монослоя клеток T84. Эта экспериментальная модель называется трансэпителиальное электрическое сопротивление (TEER) (Hirotani et al., 2008).
Суспензии культур различных штаммов бактерий промывали PBS. Затем бактерии (100 cfu/клетку) добавляли к апикальной части монослоя клеток T84. В анализе были протестированы 96 штаммов, в том числе 64 Bifidobacteria, 32 Lactobacilli и 2 Lactococcus lactis (DN 030 0664 и DN 030 087). Через 4 ч и 6 ч инкубации с различными бактериями определяли значение TEER, чтобы оценить эпителиальную барьерную функцию. Все эксперименты проводили три раза независимо и в трех повторностях. Значение клеток T84 при t=0 было принято за 100%. Результаты для 7 штаммов, имеющих высшее значение TEER, приведены в таблице 2 ниже.
Таблица 2
Оценка TEER выбранных штаммов бактерий
Штаммы Ссылка TEER (%) при t=4 ч TEER (%) при t=4 ч
L.lactis
DN 030 066
PCT заявка
WO 97/16529
110,90 113,94
L.lactis
DN 030 087
Настоящее изобретение 108,54 102,79
L.rhamnosus
LGG ATCC 53103
Патент
US 4839281
96,94 101,43
L.acidophilus LA1 Link-Amster et al., 1994 93,29 100,78
T84 клетки (контроль) 100 100,49
Bifidobacterium
longum NCC2705
PCT заявка
WO 2002/074798
99,83 94,87
Bifidobacterium
Longum W11
Патент
EP 1609852
100,81 87,68
Bifidobacterium
Longum BB536
Патентная заявка
JP 2006081429
87,50 77,89
Вышеприведенные результаты показывают, что штаммы в соответствии с изобретением DN 030 0664 и DN 030 087 улучшают целостность эпителиального барьера по сравнению с известными штаммами (включающими штаммы, обладающие противовоспалительной активностью).
ССЫЛКИ
Figure 00000001
Figure 00000002
Figure 00000003

Claims (6)

1. Применение штамма Lactococcus lactis, выбранного из группы, состоящей из штаммов DN 030066 CNCM I-1631 и DN 030087 CNCM I-2807, для лечения или профилактики расстройства пищеварения.
2. Применение штамма Lactococcus lactis, выбранного из группы, состоящей из штаммов DN 030066 CNCM I-1631 и DN 030087 CNCM I-2807, для получения лекарственного средства для лечения или профилактики расстройства пищеварения.
3. Применение по п. 1 или 2, отличающееся тем, что указанное применение представляет собой применение для ингибирования роста патогенного микроорганизма и/или улучшения целостности эпителиального барьера кишечника.
4. Применение по п. 3, отличающееся тем, что указанный патогенный микроорганизм представляет собой патогенную бактерию семейства Enterobacteriaceae.
5. Применение по любому из пп. 1, 2 или 4, отличающееся тем, что указанное расстройство пищеварения выбрано из группы, включающей кишечное расстройство, диарею, констипацию, IBS, PI-IBS и IBD.
6. Штамм Lactococcus lactis для лечения или профилактики расстройства пищеварения, отличающийся тем, что он представляет собой штамм, депонированный в CNCM под номером I-2807.
RU2013132931/10A 2010-12-17 2010-12-17 ШТАММ Lactococcus lactis ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ РАССТРОЙСТВА ПИЩЕВАРЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ RU2567009C2 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/IB2010/055913 WO2012080789A1 (en) 2010-12-17 2010-12-17 Lactococcus lactis strains for use in improving digestive condition

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015141645A Division RU2708146C2 (ru) 2015-09-30 2015-09-30 Средство для улучшения состояния пищеварения

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2013132931A RU2013132931A (ru) 2015-01-27
RU2567009C2 true RU2567009C2 (ru) 2015-10-27

Family

ID=44502202

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013132931/10A RU2567009C2 (ru) 2010-12-17 2010-12-17 ШТАММ Lactococcus lactis ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ РАССТРОЙСТВА ПИЩЕВАРЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ

Country Status (9)

Country Link
US (1) US9408878B2 (ru)
EP (1) EP2651423B1 (ru)
JP (1) JP5989661B2 (ru)
CN (1) CN103370073B (ru)
BR (1) BR112013015255A2 (ru)
ES (1) ES2557578T3 (ru)
PL (1) PL2651423T3 (ru)
RU (1) RU2567009C2 (ru)
WO (1) WO2012080789A1 (ru)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4360656A2 (en) * 2013-03-08 2024-05-01 The Regents of The University of California Polyphosphate-functionalized inorganic nanoparticles as hemostatic compositions and methods of use
WO2015023268A1 (en) * 2013-08-13 2015-02-19 President And Fellows Of Harvard College Leveraging oxidative stress pathways in lactic acid bacteria to promote gut homeostasis
US10383921B2 (en) 2013-08-13 2019-08-20 President And Fellows Of Harvard College Leveraging oxidative stress pathways in lactic acid bacteria to promote gut homeostasis
US11135181B2 (en) 2014-10-28 2021-10-05 Medlab Ip Pty Ltd Treatment for depression and depressive disorders
CN104382948A (zh) * 2014-11-21 2015-03-04 江南大学 乳酸乳球菌在治疗肠道疾病中的一种应用方法
JP6152231B1 (ja) * 2017-01-06 2017-06-21 株式会社日本バリアフリー 腸内フローラ改善剤
CN110891583B (zh) * 2017-07-18 2023-06-06 学校法人庆应义塾 针对Th1细胞诱导性细菌的抗菌组合物
EP4295902A2 (en) 2018-05-03 2023-12-27 Crigasseni AG Probiotic bacterial strains producing antimicrobial proteins and compositions comprising these for use in the treatment of clostridium difficile infection
JP2022523701A (ja) * 2019-02-01 2022-04-26 アンスティテュ・ナシオナル・ドゥ・ルシェルシュ・プール・ラグリキュルテュール,ラリマンタシオン・エ・ランヴィロンヌマン 内臓痛の予防および/または処置のためのラクトコッカス・ラクティス株
AU2020232066A1 (en) 2019-03-07 2021-07-22 Keio University Antibacterial composition against drug-resistant bacteria or pro-inflammatory bacteria
JP7469332B2 (ja) * 2019-05-13 2024-04-16 サミ-サビンサ グループ リミテッド フルクトフィリック乳酸産生細菌
WO2021002449A1 (ja) * 2019-07-03 2021-01-07 国立大学法人弘前大学 白神山地に生息するキハダ由来の新規乳酸菌
EP4009797A1 (en) * 2019-08-09 2022-06-15 Compagnie Gervais Danone Fermented compositions and processes of preparing the same
CN116121110A (zh) * 2022-10-28 2023-05-16 益加生物科技成都有限公司 一种抑菌和抗炎作用较强的乳酸乳球菌yj0801及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997016529A1 (fr) * 1995-10-31 1997-05-09 Compagnie Gervais Danone Ferments lactiques, et leur utilisation pour l'obtention de produits hypocholesterolemiants

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PE20030284A1 (es) 2001-07-26 2003-05-01 Alimentary Health Ltd Cepas de bifidobacterium
WO2004029082A1 (ja) * 2002-09-25 2004-04-08 Fukuoka Prefectural Government 乳酸菌が産生する抗菌性物質
FR2855182B1 (fr) * 2003-05-19 2005-08-05 Gervais Danone Sa Nouveaux procede et inoculum pour fermentation lactique acidifiante
JP4589618B2 (ja) * 2003-11-28 2010-12-01 独立行政法人農業生物資源研究所 免疫調節性機能を誘導する乳酸菌類とその成分
AU2005228768C1 (en) * 2004-03-31 2010-11-18 Meiji Dairies Corporation Antibacterial compositions
ES2561629T3 (es) 2005-09-28 2016-02-29 Nordisk Rebalance A/S Tratamiento del SII usando como efectores de tratamiento tanto bacterias probióticas como cereales fermentados
JP5527690B2 (ja) * 2007-11-19 2014-06-18 株式会社明治 免疫調節性機能誘導剤及び食品組成物
ES2395838T3 (es) 2007-12-21 2013-02-15 Compagnie Gervais Danone Método para disminuir el contorno abdominal administrando una bacteria del tipo Bifidobacterium

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997016529A1 (fr) * 1995-10-31 1997-05-09 Compagnie Gervais Danone Ferments lactiques, et leur utilisation pour l'obtention de produits hypocholesterolemiants

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
VEIGA P. ET AL. Bifidobacterium animalis subsp. lactis fermented milk product reduces inflammation by altering a niche for colitogenic microbes // PNAS, October 19, 2010, vol. 107, no. 42, pp. 18132-18137. Найдено онлайн: http://www.pnas.org/content/107/42/18132.full.pdf+html?with-ds=yes. *
ШЕНДЕРОВ Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том III: Пробиотики и функциональное питание. - М.: Издательство ГРАНТЪ, 1998, с. 104-105 *

Also Published As

Publication number Publication date
BR112013015255A2 (pt) 2016-09-13
JP2014501100A (ja) 2014-01-20
US20130336944A1 (en) 2013-12-19
EP2651423A1 (en) 2013-10-23
EP2651423B1 (en) 2015-09-30
PL2651423T3 (pl) 2016-05-31
JP5989661B2 (ja) 2016-09-07
CN103370073A (zh) 2013-10-23
ES2557578T3 (es) 2016-01-27
US9408878B2 (en) 2016-08-09
RU2013132931A (ru) 2015-01-27
CN103370073B (zh) 2017-12-05
WO2012080789A1 (en) 2012-06-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2567009C2 (ru) ШТАММ Lactococcus lactis ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ РАССТРОЙСТВА ПИЩЕВАРЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
RU2551315C2 (ru) Выделение, идентификация и характеристика штаммов с пробиотической активностью, выделенных из фекалий детей, вскармливаемых исключительно материнским молоком
DK2162143T3 (en) MAMMALS MILK-MICRO-FORMATIONS incorp-border THEM AND THEIR USE FOR THE TREATMENT OF MASTITIS
RU2208632C2 (ru) ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИЙ ШТАММ Lactobacillus rhamnosus (ВАРИАНТЫ), КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ УСИЛЕНИЯ ИММУНИТЕТА (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ УСИЛЕНИЯ ИММУНИТЕТА (ВАРИАНТЫ)
Ostad et al. Live and heat-inactivated lactobacilli from feces inhibit Salmonella typhi and Escherichia coli adherence to Caco-2 cells
JP5816273B2 (ja) 経上皮抵抗の改善に用いるためのプロバイオティクス株
EP2785878B1 (en) Reuterin-producing lactobacillus brevis
US20150284675A1 (en) Streptococcus thermophilus strains for treating helicobacter pylori infection
EP2742125B1 (en) New strain of l. bulgaricus capable of inhibiting the adhesion of h. pylori strains to epithelial cells
RU2708146C2 (ru) Средство для улучшения состояния пищеварения
WO2013027087A1 (en) A non-reuterin-producing lactobacillus reuteri strain for treating helicobacter pylori infection
JP2016178929A (ja) 消化器の病的状態の改善に使用するためのラクトコッカス ラクティス株
Ghaderian et al. Probiotic therapy, what is the most effective method for host protection against enteric pathogen
Botes Survival of probiotic lactic acid bacteria in the intestinal tract, their adhesion to epithelial cells and their ability to compete with pathogenic microorganisms