SK283008B6 - Biologicky čistá kultúra Lactobacillus rhamnosus, kompozícia s jej obsahom a jej použitie - Google Patents

Biologicky čistá kultúra Lactobacillus rhamnosus, kompozícia s jej obsahom a jej použitie Download PDF

Info

Publication number
SK283008B6
SK283008B6 SK219-2000A SK2192000A SK283008B6 SK 283008 B6 SK283008 B6 SK 283008B6 SK 2192000 A SK2192000 A SK 2192000A SK 283008 B6 SK283008 B6 SK 283008B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
rhamnosus
mice
lactis
agal
acidophilus
Prior art date
Application number
SK219-2000A
Other languages
English (en)
Other versions
SK2192000A3 (en
Inventor
Harsharnjit S. Gill
John B. Smart
Pramod K. Gopal
Original Assignee
New Zealand Dairy Board
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AUPO8699A external-priority patent/AUPO869997A0/en
Priority claimed from AUPP3225A external-priority patent/AUPP322598A0/en
Application filed by New Zealand Dairy Board filed Critical New Zealand Dairy Board
Publication of SK2192000A3 publication Critical patent/SK2192000A3/sk
Publication of SK283008B6 publication Critical patent/SK283008B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065—Microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/23—Lactobacillus acidophilus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/853—Lactobacillus
    • Y10S435/854—Lactobacillus acidophilus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Seasonings (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Je opísaná biologicky čistá kultúra L. rhamnosus HN001 AGAL depozitné číslo NM97/09514 alebo L. rhamnosus HN067 AGAL depozitné číslo NM97/01925 majúca schopnosť zvýšiť imunitu cicavca, alebo jej mutanty a varianty, ktoré si zachovávajú uvedenú schopnosť. Kompozícia tejto biologicky čistej kultúry obsahuje jednu alebo viac kultúr zvolených z L. rhamnosus HN001 alebo L. rhamnosus HN067, B. lactis HN019 AGAL s depozitným číslom NM97/09513 alebo L. acidophilus HN017 AGAL s depozitným číslom NM97/09515 v imunostimulačnej koncentrácii s fyziologicky prijateľným excipientom alebo rozpúšťadlom. Táto biologicky čistá kultúra alebo kompozícia s jej obsahom sa používa na prípravu liečiva na zvýšenie prirodzenej a získanej imunity.ŕ

Description

Oblasť techniky
Tento vynález sa týka biologicky čistých kultúr Lactobacillus rhamnosus (ďalej L. rhamnosus), teda kmeňov baktérii mliečneho kvasenia, kompozície s jej obsahom a ich použitia na zvyšovanie imunity.
Doterajší stav techniky
Konzumácia produktov s obsahom baktérií mliečneho kvasenia (BMK) je spojená s radom pozitívnych účinkov na zdravie, ktoré zahŕňajú zvýšenie imunity. Existujú tisícky kmeňov baktérií mliečneho kvasenia, ale iba niektoré kmene majú vlastnosti podporujúce zdravie. Schopnosť týchto baktérií tolerovať kyseliny a žlčové soli, prichytiť sa k mukozálnym epitelovým bunkám a prežiť prechod cez gastrointestinálny trakt sa považuje za významné kritérium na výber kmeňov podporujúcich zdravie. Doteraz sa identifikovalo iba niekoľko kmeňov baktérií mliečneho kvasenia s dokázaným zdravotným úžitkom.
Kmene BMK ukazujúce dobrú adhéziu k bunkám mukozálneho epitelu tenkého čreva, čím sa prepožičiavajú na terapetické použitie a sú známe z novozélandského patentu 248057. Mikrooraganizmy opísané v tomto patente zvyšujú prirodzenú imunitu (fagocytová funkcia) a získanú imunitu (odpovede na protilátky a odpovede lymfocytovej proliferácie).
Je želateľné mať ďalšie BMK, ktoré zvyšujú široké spektrum imunitných odpovedí vrátane fagocytovej funkcie.
Predmetom tohto vynálezu je nájsť cestu smerom k dosiahnutiu týchto želaní alebo aspoň navrhnúť verejnosti užitočný výber imunitu zvyšujúcich baktérií mliečneho kvasenia.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je biologicky čistá kultúra L. rhamnosus HN001 AGAL depozitné číslo NM97/09514 alebo L. rhamnosus HN067 AGAL depozitné číslo NM97/01925 majúca schopnosť zvýšiť imunitu cicavca, alebo jej mutanty a varianty zachovávajúce si uvedenú schopnosť.
Kompozícia biologicky čistej kultúry podľa vynálezu obsahuje jednu alebo viac kultúr zvolených z L. rhamnosus HN001 alebo L. rhamnosus HN067 podľa nároku 1, B. lactis HN019 AGAL s depozitným číslom NM97/09513 alebo L. acidophilus ITN017 AGAL s depozitným číslom NM97/09515 v imunostimulačncj koncentrácii s fyziologicky prijateľným excipientom alebo rozpúšťadlom.
Ďalším znakom vynálezu je, že kompozícia obsahuje minimálne dva z uvedených kmeňov.
Fyziologicky prijateľným excipientom alebo rozpúšťadlom podľa vynálezu je potravina, pričom potravinou je hocijaké kultivované mlieko, jogurt, syr, mliečny nápoj alebo mliečny prášok.
Výhodne je fyziologicky prijateľným excipientom podľa vynálezu farmakologicky prijateľný excipient alebo rozpúšťadlo.
Táto biologicky čistá kultúra alebo kompozícia s jej obsahom sa používa na prípravu liečiva na zvýšenie prirodzenej a získanej imunity.
Biologicky čistá kultúra Lactobacillus rhamnosus HN001, AGAL má depozitné číslo NM97/09514 s dátumom 18. august 1997, biologicky čistá kultúra Lactobacillus rhamnosus HN067, AGAL má depozitné číslo
NM97/01925 s dátumom 17. február 1998, Lactobacillus acidophilus HN017, AGAL má depozitné číslo NM97/09515 s dátumom 18. august 1997 a Bifidobacterium lactis HN019, AGAL má depozitné číslo NM97/09513 s dátumom 18. august 1997.
Imunitu zvyšujúce fyziologicky prijateľné biologicky čisté kmene homológov alebo mutantov hocijakého kmeňa predstavujú:
Lactobacillus acidophilus HN0017,
Lactopbacillus rhamnosus HN001, Bifidobacterium lactis HN019 alebo Lactobacillus acidophilus HN067.
Zvýšenie prirodzenej a získanej imunity záleží od spôsobu podávania cicavcovi hocijakej z uvedenej biologicky čistej kultúry v imunostimulačnom dávkovom pomere.
Podľa príkladov uskutočnenia vynálezu sú prítomné dve alebo tri v podstate biologicky čisté kultúry definovaných kmeňov.
Výhodne sa kultúra podáva vo forme kompozície s fyziologicky prijateľným excipientom alebo rozpúšťadlom.
Výhodne fyziologicky prijateľným excipientom alebo rozpúšťadlom je potravina.
Výhodne je potravinou kulturované mlieko, jogurt, syr, mliečny nápoj alebo práškové mlieko.
Tento vynález tiež spočíva v častiach, prvkoch a znakoch vzťahovaných na opis alebo indikovaných v opise prihlášky, jednotlivo alebo kolektívne, a v niektorej alebo vo všetkých kombináciách dvoch alebo viacerých častí, prvkov alebo znakov, pričom špecifické celé čísla tu uvedené, ktoré majú známe ekvivalenty v stave techniky, na ktoré sa vzťahuje vynález, sa považujú za tu zavedené akoby jednotlivo vopred dané.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obrázok 1 ukazuje účinok kŕmenia myší s produktom fermentovaným s L. rhamnosus HN001 alebo nefermentovaným produktom s obsahom L. rhamnosus HN001 na fagocytovú aktivitu pcriferálnych krvných leukocytov, ako je opísané v príklade 5. BALB/c myšiam sa dodával do mliečnej diéty s obsahom 109 cfu (za deň) L. rhamnosus HN001 buď vo fermentovanom alebo nefermentovanom produkte počas 14 dní. Fagocytová aktivita periferálnych krvných leukocytov sa stanovila použitím prietokovej cytometrie a fluoresceínizotiokyanátom značenej Escherichia coli. Hodnoty sú priemerné +/- štandardná chyba. Významné rozdiely (ANOVA, SAS program) z kontroly: ’*P<0,0001.
Obrázok 2 ukazuje účinok kŕmenia myší so živými L. rhamnosus HN001 alebo teplom usmrtenými L. rhamnosus HN001 na fagocytovú aktivitu periferálnych krvných leukocytov, ako je opísané v príklade 7. BALB/c myšiam sa dodávalo do mliečnej diéty a orálne podávalo 109cfu (za deň) živých alebo teplom usmrtených L. rhamnosus HN001 počas 14 dní. Fagocytová aktivita periferálnych krvných leukocytov a peritoneálnych makrofágov sa stanovila použitím prietokovej cytomctric a fluoresceínizotiokyanátom značenej Escherichia coli. Hodnoty sú priemerné +/- štandardná chyba. Významné rozdiely (ANOVA, SAS program) z kontroly: ’*P<0,0001.
Obr. 3 ukazuje účinok podávania myšiam L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 na translokáciu baktérií u myší vyvolanú s S. typhimurium, ako je opísané v príklade 8. Nekŕmené a s B. lactis HN019 alebo s L. rhamnosus HN001 kŕmené BALB/c myši sa orálne vystavili 5. typhi murium, potom nasledovalo nepretržité denné kŕmenie. Šesť dní po vystavení sa myši humánne usmrtili a ich pečene a sleziny sa zhromaždili na monitorovanie bakteriálnej translokácie. Tkanivové suspenzie zo zhromaždených orgánov sa potom kultúrovali na MacConkey agarových platniach počas 24 až 48 hodín pred výpočtami. Hodnoty sú priemerné +/- štandardná chyba. Významné rozdiely (ANOVA, SAS program) z kontroly: *P<0,05.
Obrázok 4 ukazuje účinok kŕmenia myší s L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 na fagocytovú aktivitu periferálnych krvných leukocytov z myší vystavených
S. typhimurium, ako je opísané v príklade 8. Nekŕmené a s B. lactis HN019 alebo s L. rhamnosus HN001 kŕmené BALB/c myši sa orálne vystavili 5. typhimurium, potom nasledovalo nepretržité denné kŕmenie. Fagocytová aktivita periferálnych krvných leukocytov sa stanovila šesť dní po vystavení s použitím prietokovej cytometrie a fluoresccínizotiokyanátom značenej Escherichia coli. Hodnoty sú priemerné +/- štandardná chyba. Hodnoty (priemer +/štandardná chyba) s rozdielnym písmom sú výrazne odlišné (ANOVA, SAS program): *P<0,01.
Obrázok 5 ukazuje účinok kŕmenia myší s L. rhamnosus HN001 alebo s B. lactis HN019 na proliferačné odpovede slezinových lymfocytov z myší vystavených S. typhimurium, ako je opísané v príklade 8. Nekŕmené a s B. lactis HN019 alebo s L. rhamnosus HN001 kŕmené BALB/c myši sa orálne vystavili S. typhimurium, potom nasledovalo nepretržité denné kŕmenie. Šesť dní po vystavení sa merali proliferačné odpovede slezinových lymfocytov kolorimetricky a potom sa zaviedol 5-bróm-2'-dcoxyuridín na záverečnú inkubáciu trvajúcu 16 hodín z 96 hodín. Hodnoty sú priemerné +/- štandardná chyba. Hodnoty (priemer +/štandardná chyba) s rozdielnym písmom sú výrazne odlišné (ANOVA, SAS program): *P<0,01.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Zmrazené sušené kultúry štyroch bakteriálnych kmeňov uložené v Australian Govemment Analytical Laboratories (AGAL) The New South Wales Regional Laboratory, 1 Suakin Street, Pymble, NSW 2073, Austrália. Detaily uloženia sú:
Kmeň Číslo
L. acidophilus HN017 NM97/09515
L. rhamnosus HN001 NM97/09514
B. lactis HNO19 NM97/09513
L. rhamnosus HN067 NM97/01925
Dátum
18. august 1997
18. august 1997
18. august 1997
11. február 1998
Pri týchto štyroch identifikovaných kmeňoch sa zistilo, že zvyšujú široké spektrum imunitných odpovedí vrátane prirodzených a získaných imunitných odpovedí.
Príklad 1
Morfológia a všeobecné vlastnosti
Na potvrdenie taxonomickej charakterizácie kmeňov sa použila RAPD analýza, 16S rRNA sekvencovanie a SDS-PAGE analýzy. Zistilo sa tiež, že L. acidophilus HNO 17 sa geneticky líši od L. acidophilus (LC1) z novozélandského patentu č. 248057.
Na potvrdenie taxonomickej charakterizácie L. rhamnosus HN067 sa použila RAPD analýza, 16S rRNA sekvencovanie a SDS-PAGE analýzy; druhovo špecifické priméry použité na charakterizáciu L. rhamnosus HN067 na molekulovej úrovni zahŕňali Pr I (predný) 5-CAGACTGAAAGTCTGACGG-3 a Pha II (reverzný) 5-GCGATGCGAATTTCTATTATT-3.
Morfológia a vlastnosti pri fermentácii cukrov týchto kmeňov sú detailne uvedené v tabuľkách 1 a 2.
Tabuľka 1 - Morfológia a ostatné charakteristiky
L. acidophilus HN017 L. rhamnosus UN001 0, lactis HN019 L.rhamnosus HN067
Krátke až stredné tyčinky s okrúhlymi koncami, vo všeobecnosti sú jednotlivé alebo v pároch alebo v krátkych reťazcoch pri raste v MRS kultúre. Gram pozitívne, netvoria spóry, katalázovo negatívne fakultatívne anaerobické tyčinky s optimálnym rastom pri 374/-1 *C a optime pH 6,06,5. Sú obligátne homofermentatívne baktérie a z glukózy neprodukujú plyn. Krátke až stredné tyčinky so Štvorcovými koncami v reťazcoch, vo všeobecnosti 0, 7x1,1 x2, 04,0 mikrom pri raste v MRS kultúre. Gram pozitívne, nepohyblivé, netvoria spóry, katalázovo negatívne fakultatívne anaerobické tyčinky s optimálnym rastom pri 37+/-1 *C a optime pH 6,06,5. Sú obligátne heterormentatlv ne baktérie a z glukózy neprodukujú plyn. Mikroaerofilné až anaeróbne tyčinky s charakteristickým tvarom ako v strede predĺžené bunky,V alebo stupňovité usporiadanie buniek pri raste na TPY agarových doskách. V MR5 kultúre s 0,05 8 cysteín hydrochlori dom tvoria v strede predĺžené bunky a spoločne usporiadané (vyčnie- vajúce končatiny) bunky. Gram pozitívne, nepohyblivé a netvoria spóry, tatalázovo negatívne tyčinky s optimálnym rastom pri teplote 37+/-1 c a optimálnom pH Krátke až stredné tyčinky so štvorcovými koncami v reťazcoch, vo všeobecnosti 0,7x1,1 x2, 04,0 mikrom pri raste v MRS kultúre. Gram pozitívne, netvoria spóry, katalázovo negatívne fakultatívne anaerobické tyčinky s optimálnym rastom pri 37+/-1 ‘c a optime pH 6,06,5. Sú obligátne heterormentatlv ne baktérie a 2 glukózy neprodukujú plyn.
6,0-7,0. Truktóza-6-fosforečnar. fosfoketolázovo pozitívne.
Tabuľka 2 - Glycidový fermentačný model vybraných kmeňov Lactobacillus a Bifidobacterium
SI. č. Meno baktérie Bodové ohodnotenie’
1 i. acidophilus knoi? 5755546
2 I. rhamnosus HN001 5757177
3 B. lactis HN0L9 1051622
4 L.rhamnosus HN067 5757175
Použil sa prístroj na fermentáciu cukrov API 50 CH na stanovenie glycidového fermentačného modelu.
Bodové ohodnotenia sú založené na bodových ohodnoteniach 22 významných cukrov (Bergeyho príručka).
Príklad 2
Adhézia k črevným bunkám
Schopnosť probiotických kmeňov priľnúť k ľudským črevným epitelovým bunkám (HT-29 a CaCo-2) sa určila in vitro s použitím diferencovaných bunkových línií. Monovrstvy HT-29 a CaCo-2 buniek rástli na krycích sklíčkach a boli umiestnené vo viacjamkových nádobách. K vrstvám buniek sa dodalo 108 cfu/ml BMK v 1 ml použitého kultúrového supernatantu spolu s 1 ml DMEM média a inkubovalo sa počas 1 hodiny pri 37 °C v 10 % CO2 - 90 % vzduchu. Monovrstvy sa premyli štyrikrát s PBS, fixovali sa v metanole, filtrovali sa Gramovým spôsobom a množstvo baktérií, ktoré priľnulo k epitelovým bunkám, sa stanovilo mikroskopicky. V priemere sa spočítalo 20 polí a výsledky sú zosumarizované v tabuľke 3.
Tabuľka 3 - Priľnavosť k HT-29 a CaCo-2 bunkovým líniám
HN017, L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 bola tiež vyššia ako u kontrolných myší (tabuľka 5).
Tabuľka 5 - Účinok diéty L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 a B. lactis HN019 na sérové a mukozálne protilátkové odpovede
Kmeň HT-29 CaCc-2
L. acidophilus HN017 98 ± 17 171 i 16
L. rhamnosus HN001 161 ± 18 218 ± 35
B. lactis HN019 188 ± 27 194 ± 25
‘Množstvo (priemer +/- SEM) baktrérií/100 epitelových buniek
Príklad 3
Zvýšenie prirodzenej a získanej imunity
Účinky zvyšujúce imunitu troch kmeňov L. rhamnosus HN001, L. acidophilus HN017 a B. lactis HN019 sa skúšali stanovením fagocytovej (krvné leukocyty a peritoneálne makrofágy) funkcie a kvantifikovaním koncentrácií špecifických protilátok na proteínové antigény s použitím simulovaných odpovedí na vakcíny u myší.
Použil sa nasledujúci experimentálny protokol:
1. Použili sa šesť až sedem týždňov staré myši BALB/c s hmotnosťou 20 - 30 g.
2. Myši boli náhodne rozmiestnené do rôzne ošetrovaných skupín (tabuľka 4).
3. Myšiam sa podával L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 (109cfu/deň) v 50 μΐ odstredeného mlieka počas 10 dni. Kontrolné myši prijímali iba 50 μΐ práškového odstredeného mlieka.
4. Všetky myši prijímali počas experimentu diétu založenú na práškovom odstredenom mlieku.
Krvné leukocyty a makrofágy z myší prijímajúcich L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 ukázali výrazne vyššiu fagocytovú kapacitu v porovnaní s bunkami z kontrolných myší (tabuľka 4). Tvorba kyslíkových radikálov (oxidačný impulz) leukocytmi z probioticky kŕmených myši bola tiež vyššia ako u kontrolných myší (údaje nie sú uvedené).
Tabuľka 4 - Účinok diéty L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 a B. lactis HN019 na fagocytovú funkciu u myší
Ošetrenie % Krvných leukocytov s fagocytovou aktivitou % Peritoneálnych makrofágov s fagocytovou aktivitou
Kontrola 14,33 ± 0,87 66,1 t 3,5
i, acidophilus HN017 22,1 i 1,21** 79,0 ± 1,0**
L, rhamnosus HN001 24,84 t 0,93“ 80,5 ± 1,8**
B. lactis HN019 23,19 t 0,95“ 77,4 1 2,6»
BALB/c myšiam sa orálne podávalo 109 cfu (za deň) L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 počas 10 dní. Fagocytová aktivita krvných leukocytov a peritoneálnych makrofágov sa stanovila s použitím prietokovej cytometrie a fluoresceínizotiokyanátom značených Escherichia coli. Hodnoty boli priemerné +/- štandardná chyba. Významné rozdiely (Študentov t test) z kontroly: *P< 0,05, *’P< 0,01.
Koncentrácia špecifických IgG protilátok v sére a v črevných zvyškoch myší prijímajúcich L. acidophilus
ošetrenie Sérová protilátkové odpoveď {jednotky/ml) Mukozálna protilátková odpoveď (jednôtky/ml)
Kontrola 80,2 i 6,0 1350 ± 96,0
L. acidophilus HN017 134,6 ± 25,2* 1548 ± 270,0
i. rhamnosus Hnooi 118,5 1 12,5*· 1512 ± 198,0
B. lactis EN019 158,1 + 51,6*** 1546 ± 234,0
MALB/c myšiam sa orálne podávalo 109 cfu (za deň) L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 počas 10 dní. Myši sa imunizovali s toxínom cholery (antigén používaný na simulovanú enterickú infekciu) v dňoch 0 a 7. Koncentrácia špecifických protilátok v sére a črevných sekrétoch sa merala s použitím ELISA na desiaty deň. Hodnoty boli priemerné +/- štandardná chyba. Významné rozdiely (Študentov t test) z kontroly: *P< 0,08, **P< 0,05, *”P<0,01.
Príklad 4
Imunostimulačné účinky, ktoré nasledovali po kŕmení s BMK počas štyroch týždňov
Imunostimulačné účinky L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 a B. lactis HN019 sa stanovili u myší s použitím nasledujúceho experimentálneho protokolu:
1. Použili sa šesť až sedem týždňov staré myši BALB/c s hmotnosťou 20 - 30 g.
2. Myši boli náhodne rozmiestnené (18/skupina) do rôzne ošetrovaných skupín.
3. Po aklimatizácii (počas 7 dní) sa myšiam podával L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 (109 cfu/deň) v 50 μΐ odstredeného mlieka počas 28 dní (odo dňa 0 do dňa 28). Kontrolné myši prijímali iba 50 μΐ odstredeného mlieka (bez mikroorganizmov).
4. Myšiam sa ponúkla počas experimentu diéta založená na práškovom odstredenom mlieku a voda ad libitum.
5. Imunostimulačné účinky sa stanovili monitorovaním fagocytovej aktivity krvných leukocytov a peritoneálnych makrofágov, NK-bunkovej aktivity slezinových lymfocytov, odpovedí lymfocytovej proliferácie (bunky sleziny) na T-bunkový mitogén, ConA (indikátor bunkovo sprostredkovanej imunity) a protilátkové odpovede na tetanovú vakcínu.
Ako vidieť z tabuľky 6, leukocyty (neutrofily, monocyty a makrofágy) z myší prijímajúcich Ĺ. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 vykázali výrazne vyššiu fagocytovú aktivitu (indikátor prirodzenej a získanej imunity) ako leukocyty kontrolných myší.
Tabuľka 6 - Účinok diéty L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 a B. lactis HN019 u myší
Ošetrenie i Krvných leukocytov s fagocytovou aktivitou í Peritoneálnych makrofágov s fagocytovou aktivitou
Kontrola 15,5 72, 67
L. acidophilus HN017 29,4*· 82,2*
L. rhamnosus hnooi 24,2*’ 82,8*·
ä. lactis ΗΧΌ19 31,1“ 83,0**
Myši (18/skupina) dostávali 109 cfu (za deň) L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 v 50 μΐ odstredeného mlieka počas 28 dní. Fagocytová aktivita krvných leukocytov/peritoneálnych makrofágov sa stanovila na 28 deň s použitím prietokovej cytometrie a fluoresceínizotiokynátom značených E. coli. Hodnoty sú priemerom najmenších štvorcov. Významné rozdiely (SAS analýza): *P<0,002, **P< 0,0005.
Konzumácia L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 počas 28 dní tiež viedla k nárastu NK-bunkovej aktivity, odpovedí lymfocytovej proliferácie na ConA a protilátkové odpovede na tetanovú vakcínu. Pri všetkých týchto indikátoch imunoschopnosti, myši prijímajúce L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 mali vyššie odpovede ako kontrolné myši (tabuľka 7).
Spolu tieto výsledky ukázali, že podávanie počas predĺženého času L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 je schopné indukovať trvalé zvýšenie niektorých aspektov prirodzenej a získanej imunity.
Tabuľka 7 - Účinok diéty L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 a B. lactis HN019 na NK-bunkovú aktivitu a odpovedí lymfocytovej proliferácie na ConA a protilátkové odpovede na tetanovú vakcínu.
conA Ošetrenie NK-bunková aktivita (%) LyiuCocytová proliferácia ConAíabsorbancia) Protilátkové odpovede na . tetanovú vakcínu Ijednotky/ml)
Kontrola 8, B 1,4 t 0,125 402,5 + 41,4
L. acídophiltjs HN017 9,9 1,6 ± 0,44 923,9 t 116,0*
L. rhamnosus HN001 11, 5 1,8 i 0,1* 711,5 i 127,2*
3. iactis HN019 10,5 1,7 4 0,5* 844,6 4 134,7*
Myši (18/skupina) dostávali 109 cfu (za deň) L. acidophilus HN017, L. rhamnosus HN001 alebo B. lactis HN019 v 50 μΐ odstredeného mlieka počas 28 dní (t. j. odo dňa 0 do 28 dňa). NK-bunková aktivita slezinových lymfocytov sa stanovila na 28. deň s použitím prietokovej cytometrie a s D275 značených Yac-1 buniek. Odpovede lymfocytovej proliferácie slezinových lymfocytov na ConA sa merali na 28. deň s použitím komerčného zariadenia na bunkovú proliferáciu (Boehringer Mannheim, Nemecko). Na protilátkové odpovede sa myši imunizovali s tetanovou vakcínou (50 μΐ/dávka, CSL, Austrália) na 7. a 21. deň. Koncentrácia špecifických protilátok sa stanovila s použitím ELISA; antigén dodaný výrobcom vakcín (CSL, Austrália) sa použil na pokrytie platní. Hodnoty boli priemermi najmenších štvorcov 18 myši. Významné rozdiely (SAS analýza): *P<0,05.
Príklad 5
Zvýšenie prirodzenej a získanej imunity s použitím fermentovaných produktov oproti použitiu nefermcntovaných produktov
Cieľom bolo stanoviť imunitu zvyšujúcu účinnosť jogurtu (fermentovaného) s probiotickým kmeňom L. rhamnosus HN001 v porovnaní s nefermentovaným produktom obsahujúcim L. rhamnosus HN001. Imunitu zvyšujúce účinky sa skúšali stanovením fagocytovej funkcie (periferálnych krvných leukocytov a peritoneálnych makrofágov) a odpovedí lymfocytovej proliferácie na B-bunkový mitogén (LPS).
Použil sa nasledujúci experimentálny protokol:
L Použili sa šesť až sedem týždňov staré myši BALB/c s hmotnosťou 20 - 30 g.
2. Myši boli náhodne rozmiestnené do rôzne ošetrovaných skupín.
3. Kontrolné myši počas experimentu prijímali diétu založenú na práškovom plnotučnom mlieku.
4. Testované myši prijímali 2,5 g jogurtu pripraveného s použitím L. rhamnosus HN001 (109 cfu/deň) alebo 2,5 g plnotučného mlieka s obsahom L. rhamnosus HN001 (109 cfu/deň), ako aj diétu založenú na práškovom plnotučnom mlieku počas 14 dní.
Výsledky
Myši prijímajúce jogurt pripravený s L. rhamnosus HN001 alebo plnotučné mlieko L. rhamnosus HN001 vykázali výrazne vyššiu hladinu fagocytovej aktivity periferálnych krvných leukocytov ako bolo pozorované u myší prijímajúcich kontrolnú diétu (obr. 1). Vzrast bol pozorovaný či bol L. rhamnosus HN001 dodávaný v jogurte (fermentovanom s L. rhamnosus HN001) alebo v nefermentovanom produkte obsahujúcom L. rhamnosus HN001. Nebol rozdiel v hladine fagocytovej aktivity medzi myšami prijímajúcimi fermentovaný jogurt vyrobený s použitím L. rhamnosus HN001 v porovnaní s nefermentovaným produktom plnotučného práškového mlieka (PPM) s obsahom L. rhamnosus W1001.
Nefermentovaný produkt a s L. rhamnosus HN001 fermentovaný produkt dodávaný myšiam ukázal vyššie lymfocytové proliferačné odpovede na LPS ako kontrolné myši (tabuľka 8). Nebol výrazný rozdiel pri odpovediach medzi myšami prijímajúcimi nefermentovaný produkt obsahujúci L. rhamnosus HN001 a myšami prijímajúcimi produkt fermentovaný s L. rhamnosus HN001.
Tabuľka 8 - Účinok fermentovaného alebo nefermentovaného L. rhamnosus HN001 na odpovede lymfocytovej proliferácie u myší
Ošetrenie úymfocytová proliferácia na 1PS (absorbancia)
Kontrola (PPM) 0,4699 ± 0,028
PPM ferr.er.tované s L. rhamnosus KN001 0,5361 i 0,028
PPM nefermentované s í. rhôfflnosus HN001 0,5518 i 0,020*
BALB/c myšiam sa podávala mliečna diéta obsahujúca 109 cfu (za deň) Ĺ. rhamnosus HN001 buď v nefermentovanom produkte alebo v jogurte vyrobenom s L. rhamnosus HN001 (fermentovaný produkt) počas 14 dní. Kontrolné myši prijímali mliečnu diétu bez BMK. Proliferatívne odpovede sa merali kolorimetricky po zavedení 5-bróm-2'-deoxyuridínu počas posledných 16 hodín z 96 hodín inkubácie. Hodnoty boli priemerné +/- štandardná chyba. Významné rozdiely (Študentov t test) z kontroly: *P = 0,05.
Tiež z týchto výsledkov vyplýva, že kŕmenie s L. rhamnosus HN001 zvyšuje rozsah imunitných funkcií zahŕňajúcich fagocytovú aktivitu a lymfocytovú bunkovú proliferáciu. L. rhamnosus HN001 prítomný buď vo fermentovanom alebo nefermentovanom produkte je účinný pri vyvolaní zvýšenia imunitných funkcií; s fermentovaným produktom dáva väčšiu odpoveď na niektoré funkcie a v nefermentovanom produkte býva významný u iných.
Príklad 6
Zvýšenie prirodzenej a získanej imunity pomocou L. rhamnosus HN067
Experiment 1
Imunitu zvyšujúce účinky L. rhamnosus HN067 sa stanovili monitorovaním fagocytovcj kapacity periferálnych krvných leukocytov a peritoneálnych makrofágov (indikátor nešpecifickej imunity) a kvantifikovaním koncentrácií špecifických protilátok na imunizačný antigén, cholerový toxín (použitý na simulovanie odpovedí na enterické vakcíny) u myší.
Použil sa nasledujúci experimentálny protokol:
1. Použili sa BALB/c myši staré šesť až sedem týždňov s hmotnosťou 20 - 30 g. Počas experimentu prijímali diétu založenú na odstredenom mlieku.
2. Myšiam v testovanej skupine (n = 6) sa orálne podával L. rhamnosus HN067 (109 cfu/deň) v 50 μΐ odstredeného mlieka počas 10 dní. Kontrolné myši (n = 6) prijímali iba 50 μΐ práškového odstredeného mlieka (bez BMK).
Výsledky
Krvné leukocyty a peritoneálne makrofágy z myší prijímajúcich L. rhamnosus HN067 ukázali výrazne vyššiu fagocytovú aktivitu (zvýšená fagocytová funkcia) v porovnaní s bunkami z kontrolných myší. Výsledky sú dané v tabuľke 9 ďalej.
Tabuľka 9 - Účinok diéty L. rhamnosus HN067 na fagocytovú ftmkciu deň. Hodnofy predstavujú priemer najmenších štvorcov +/štandardná chyba metódy najmenších štvorcov. Významné rozdiely (SAS program) z kontroly: *P=0,02, **P=0,0039.
Experiment 2
Imunostimulačné účinky L. rhamnosus HN067 sa testovali u myší s použitím nasledujúceho protokolu:
1. Použili sa BALB/c myši staré šesť až sedem týždňov s hmotnosťou 20 - 30 g. Počas experimentu sa im predkladala diéta založená na práškovom odstredenom mlieku a voda ad libitum.
2. Po aklimatizácii počas 7 dní sa myšiam v skupine 1 (n = 20) orálne podávalo 109 cfu (za deň) L. rhamnosus HN067 v 50 μΐ odstredeného mlieka počas 14 dní. Kontrolné myši (skupina 2, n = 20) prijímali odstredené mlieko bez mikroorganizmov.
3. Imunostimulačné účinky sa testovali monitorovaním fagocytovej aktivity krvných leukocytov a peritoneálnych makrofágov a odpoveďami proliferácie slezinových lymfocytov na fytohemaglutinín (PHA) a lipopolysacharid (LPS) (T- a B-bunkové mitogény).
Výsledky
Krvné leukocty a peritoneálne makrofágy z myší prijímajúcich L. rhamnosus HN067 vykazovali výrazne vyššiu fagocytovú aktivitu (indikátor prirodzenej imunity) ako leukocyty a makrofágy z kontrolných myší (tabuľka 11).
Tabuľka 11 - Účinok diéty L. rhamnosus HN067 na fagocytovú funkciu u myší
Ošetrenie i Krvných leukocytov s fagocytovou aktivitou % Peritoneálnych makrofágov s fagocytovou aktivitou
Kontrola 13, 1 ± 1,5 76,4 í 1,9
Ľ, rhamnosus HN067 23, 7 + 1,5** 07,2 + 1,9*
Ošetrenie % Krvných leukocytov s fagocytovou aktivitou k Peritoneálnych makrofágov s fagocytovou aktivitou
Kontrola 13,7 + 0,07 64,6 i 2,1
L. rhamnosus KN067 22,5 + 0,07** 75,8 i 1,7*
BALB/c myši boli kŕmené s diétou založenou na mlieku s orálnym podávaním alebo bez orálneho podávania L. rhamnosus HN067 (109 cfu/deň) počas 10 dní. Fagocytová aktivita krvných leukocytov a peritoneálnych makrofágov sa stanovila s použitím prietokovej cytometrie a fluoresceínizotiokyanátom značených E. coli. Hodnoty predstavujú priemer najmenších štvorcov +/- štandardná chyba metódy najmenších štvorcov. Významné rozdiely (SAS program) z kontroly: *P=0,0005, ”P=0,0001.
Koncentrácia špecifických protilátok na cholerový toxín, antigén, ktorý sa použil na orálnu imunizáciu, v sére a v črevných zvyškoch myší prijímajúcich L. rhamnosus HN067 bola tiež výrazne vyššia ako u kontrolných myší (tabuľka 10).
Tabuľka 10 - Účinok podávania diéty L. rhamnosus HN067 na sérum a mukozálne protilátkové odpovede na cholerový toxín
Ošetrenie Protilátková odpoveď v sére fjednotky/ral) Mukozálna protilátková odpoveď | (jednotky/ml·)
Kontrola 63,1 43,2 1969,7 i 279,5
L. rhamnosus HNQ67 246, 5 t 43,2‘* 2995,5 í 465,2*
BALB/c myši sa kŕmili s diétou založenou na mlieku s alebo bez L. rhamnosus HN067 (109cfu/deň) počas 10 dní. Myši sa orálne imunizovali s cholerovým toxínom (10 pg/dávka), antigénom používaným na simulovanú enterickú infekciu, v deň 0 a 7. Hladiny protilátok v sére a črevných sekrétoch sa merali s použitím ELISA na desiaty
BALB/c myšiam sa podávala mliečna diéta s orálnym podávaním alebo bez orálneho podávania L. rhamnosus HN067 (109 cfu/deň) počas 14 dní. Fagocytová aktivita krvných leukocytov/pe-ritoneálnych makrofágov sa stanovila na 14. deň s použitím prietokovej cytometrie a fluoresceínizotiokyanátom značených E. coli. Hodnoty predstavujú priemer najmenších štvorcov +/- štandardná chyba metódy najmenších štvorcov. Významné rozdiely (SAS program) z kontroly: *P=0,002, P=0,0001.
Myši prijímajúce L. rhamnosus HN067 počas 14 dní tiež ukázali vyššie odpovede lymfocytovej proliferácie na PHA a LPS v porovnaní s kontrolnými myšami (tabuľka 12).
Tabuľka 12 - Účinok podávania L. rhamnosus HN067 na odpovede lymfocytovej proliferácie na PHA a LPS
ConA Lymfocytová Lymfocytová
ošetrenie proliferácia na PHA proliferácia na LPS
Kontrola T,1B 0,09 0,99 í O, 07
L. rhamnosus HN067 1,37 + 0,07« 1,24 i 0,06*«
BALB/c myšiam sa podávala mliečna diéta s orálnym podávaním alebo bez orálneho podávania L. rhamnosus HN067 (109 cfu/deň) počas 14 dní. Odpovede lymfocytovej proliferácie slezinových buniek na PHA a LPS sa stanovili na 14. deň s použitím komerčného zariadenia na bunkovú proliferáciu (Boehringer Mannheim, Germany). Hodnoty predstavujú priemer najmenších štvorcov +/- štandardná chyba metódy najmenších štvorcov. Významné rozdiely (SAS program) z kontroly: *P<0,08, **P<0,01.
Súhrnne myši prijímajúce L. rhamnosus HN067 ukázali výrazné rozšírenie rozsahu hostiteľských imunitných odpovedí zahŕňajúcich leukocytovú fagocytovú funkciu, protilátkové odpovede na orálnu imunizáciu a odpovede na lymfocytovú proliferáciu na T- a B-bunkové mitogény. Krvné leukocyty (neutrofily a monocyty) a makrofágy sú hlavnými efektormi prirodzenej imunity a hrajú hlavnú úlohu v ochrane pred bakteriálnymi infekciami. Korelácie medzi in vitro odpoveďami lymfocytovej proliferácie na mitogény (T- a B-bunkové mitogény) a imunospôsobilosťou jednotlivca sa tiež zdokumentovali. Preto tieto výsledky predpokladajú, že podávanie L. rhamnosus HN067 je schopné zvýšiť niektoré aspekty prirodzenej a získanej imunity.
Príklad 7
Zvýšenie prirodzenej a získanej imunity s použitím živých a teplom usmrtených L. rhamnosus HN001
Cieľom tejto štúdie bolo vyšetriť imunitu zvyšujúce účinky probiotického kmeňa L. rhamnosus HN001, keď je prítomný v živej alebo teplom usmrtenej forme. Účinok na imunitnú funkciu sa testoval určením fagocytovej aktivity periferálnych krvných leukocytov. Účinok živých a teplom usmrtených L. rhamnosus HN001 na humorálnu imunitu sa študoval imunizáciou myší s cholerovým toxínom a meraním koncentrácií produkovaných špecifických protilátok.
Použil sa nasledujúci experimentálny protokol:
1. Použili sa BALB/c myši staré šesť až sedem týždňov s hmotnosťou 20 - 30 g.
2. Myši sa náhodne roztriedili do rôzne ošetrovaných skupín.
3. Počas experimentu kontrolné myši prijímali diétu založenú na práškovom odstredenom mlieku.
4. Testované myši prijímali 109cfu/deň živých L. rhamnosus HN001 alebo 109 cfú/deň teplom usmrtených L. rhamnosus HN001 za deň ako aj diétu založenú na práškovom odstredenom mlieku počas 14 dní.
5. Myši sa orálne imunizovali s cholerovým toxínom v dňoch kŕmenia 0 a 7.
Výsledky
Podávanie L. rhamnosus HN001 výrazne zvýšilo hladinu fagocytovej aktivity periferálnych krvných leukocytov v porovnaní s myšami prijímajúcimi kontrolnú diétu (obr. 2). Tento nárast sa pozoroval či už bol L. rhamnosus HN001 dodávaný v živej alebo v teplom usmrtenej forme. Neboli zistené rozdiely v úrovniach fagocytovej aktivity medzi myšami prijímajúcimi živé L. rhamnosus HN001 a teplom usmrtené L. rhamnosus HN001.
Podávanie živých a mŕtvych L. rhamnosus HN001 indukovalo nárast sérových aj mukozálnych protilátkových odpovedí v porovnaní s kontrolnými myšami. Ale hladina odpovede bola výrazne vyššia u myší kŕmených živým L. rhamnosus HNOOl (tabuľka 13).
Tabuľka 13 - Účinok živých a teplom usmrtených L. rhamnosus HN001 na sérové a mukozálne protilátkové odpovede na cholerový toxín u myší
Oéetrenie Sérová protilátkové odpoveď (jednotky/ml) Mukozálna protilátková odpoveď (íednotky/inl)
Kontrola 86,69 + 18, 52 708,6 ± 146,Ô
Živý L, rh&mposus HNOOl 214,89 62,33* 2C54,5 í 285,8*·»
Teplom usmrtený L. rhamnosus HNOOl 174,89 ± 44,78 1533,6 i 319,3
BALB/c myši sa kŕmili mliečnou diétou a orálne sa im podávalo 109cíú (za deň) L. rhamnosus HN001 buď v živej alebo teplom usmrtenej forme počas 14 dní. Kontrolné myši neprijímali BMK. Myši sa orálne imunizovali s cholerovým toxínom v deň 0 a 7. Protilátkové odpovede (sérum a črevné sekréty) sa merali s použitím ELISA na 14. deň. Hodnoty boli priemer +/-štandardná chyba. Výrazné rozdiely (Študentov t test) z kontroly: *P=0,05, ***P=0,0005.
Tieto výsledky predpokladajú, že živé aj teplom usmrtené L. rhamnosus HN001 sú schopné zvýšiť aspekty prirodzenej aj získanej imunity u myši.
Príklad 8
Antiinfekčné vlastnosti B. lactis HN019 a L. rhamnosus HN001
Cieľom tejto štúdie bolo:
1. Stanoviť ochrannú účinnosť B. lactis HN019 a L. rhamnosus HN001 proti gastrointestinálnemu patogénu Salmonella typhimurium.
2. Určiť úlohu imunostimulácie indukovanej B. lactis HN019 a L. rhamnosus HN001 v ochrane proti infekcii spôsobenej S. typhimurium u myší.
Antiinfekčné vlastnosti sa stanovili meraním bakteriálnej translokácie v pečeni a slezine. Účinky zvýšenej imunity' sa skúšali určením fagocytovej funkcie (periferálne krvné leukocyty a peritoneálne makrofágy) a odpoveďami lymfocytovej proliferácie na T-bunkový mitogén (PHA). Použil sa nasledujúci experimentálny protokol:
L Použili sa BALB/c myši staré šesť až sedem týždňov s hmotnosťou 20 - 30 g.
2. Myši sa náhodne rozmiestnili do 4 rôzne ošetrovaných skupín a boli individuálne ubytované.
3. Všetky myši prijímali počas experimentu diétu založenú na práškovom plnotučnom mlieku.
4. Testované myši začali denne prijímať B. lactis HN019 a L. rhamnosus HN001 (109 cfu/deň) 7 dní pred nákazou a pokračovali počas trvania pokusu.
5. Myši prijímajúce B. lactis HN019 a L. rhamnosus HN001 a kontrolná skupina (bez BMK) sa orálne nakazili so Salmonella typhimurium (ATCC 1772) 8 x 105 cfu/deň počas piatich dní so začiatkom v siedmom dni.
6. Neinfikovaná kontrolná skupina neprijímala S. typhimurium.
7. Na šiesty deň po nákaze sa myši použili na meranie bakteriálnej translokácie v pečeni a slezine a stanovenie imunitných funkcií.
Výsledky
Myši prijímajúce B. lactis HN019 a L. rhamnosus HN001 ukázali výrazne nižšie hladiny bakteriálnej translokácie v pečeni a slezine ako myši kŕmené samotným S. typhimurium (obr. 3).
Vyvolanie infekcie malo za následok výrazné potlačenie fagocytovej funkcie (obr. 4); fagocytová aktivita kontrolných myší nakazených s 5. typhimurium bola výrazne nižšia ako u neinfikovaných myší. Ale infikovanie s S. typhimurium nemalo žiaden účinok na fagocytovú schopnosť periferálnych krvných leukocytov myší kŕmených s B. lactis HN019 alebo L. rhamnosus HN001. Toto sa ukázalo podobné hladinám fagocytovej aktivity u myší kŕmených B. lactis HN019 alebo L. rhamnosus HN001 a nakazených S. typhimurium a normálnych neinfikovaných kontrolných myši.
Myši kŕmené s B. lactis HN019 alebo L. rhamnosus HN001 ukázali vyššie odpovede lymfocytovej proliferácie na PHA ako kontrolná skupina nakazená S. typhimurium (obr. 5). Nebol výrazný rozdiel v odpovedi medzi myšami prijímajúcimi B. lactis HN019 alebo L. rhamnosus HN001 a neinfikovanou kontrolnou skupinou myší.
Spoločne tieto výsledky predpovedajú, že kŕmenie s B. lactis HN019 alebo L. rhamnosus HN001 je schopné zabezpečiť ochranu proti enterickým patogénom, akým je Salmonella typhimurium. Zvýšená odolnosť proti infekciám je sprevádzaná zvýšením imunitnej činnosti.

Claims (8)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Biologicky čistá kultúra L. rhamnosus HN001 AGAL depozitné číslo NM97/09514 alebo L. rhamnosus HN067 AGAL depozitné číslo NM97/01925 majúca schopnosť zvýšiť imunitu cicavca, alebo jej mutanty a varianty zachovávajúce si uvedenú schopnosť.
  2. 2. Kompozícia biologicky čistej kultúry, vyznačujúca sa tým, že obsahuje jednu alebo viac kultúr zvolených z L. rhamnosus HN001 alebo L. rhamnosus HN067 podľa nároku 1, B. lactis HN019 AGAL s depozitným číslom NM97/09513 alebo L. acidophilus HN017 AGAL s depozitným číslom NM97/09515 v imunostimulačnej koncentrácii s fyziologicky prijateľným excipientom alebo rozpúšťadlom.
  3. 3. Kompozícia podľa nároku 2, vyznačujúca sa t ý m , že obsahuje minimálne dva z uvedených kmeňov.
  4. 4. Kompozícia podľa nároku 2 alebo 3, vyznačujúca sa tým, že fyziologicky prijateľným excipientom alebo rozpúšťadlom je potravina.
  5. 5. Kompozícia podľa nároku 4, vyznačujúca sa t ý m , že potravinou je hocijaké kultivované mlieko, jogurt, syr, mliečny nápoj alebo mliečny prášok.
  6. 6. Kompozícia podľa nároku 2 alebo 3, vyznačujúca sa tým, že fyziologicky prijateľným excipientom je farmakologicky prijateľný excipient alebo rozpúšťadlo.
  7. 7. Použitie biologicky čistej kultúry podľa nároku 1 na prípravu liečiva na zvýšenie prirodzenej a získanej imunity.
  8. 8. Použitie kompozície podľa hociktorého z nárokov 2 až 6 na prípravu liečiva na zvýšenie prirodzenej a získanej imunity.
SK219-2000A 1997-08-21 1998-08-18 Biologicky čistá kultúra Lactobacillus rhamnosus, kompozícia s jej obsahom a jej použitie SK283008B6 (sk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AUPO8699A AUPO869997A0 (en) 1997-08-21 1997-08-21 Immuno-enhancing composition
AUPP3225A AUPP322598A0 (en) 1998-04-28 1998-04-28 Immunity-enhancing lactic acid bacteria
PCT/NZ1998/000122 WO1999010476A1 (en) 1997-08-21 1998-08-18 Immunity enhancing lactic acid bacteria

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK2192000A3 SK2192000A3 (en) 2000-09-12
SK283008B6 true SK283008B6 (sk) 2003-01-09

Family

ID=25645584

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK219-2000A SK283008B6 (sk) 1997-08-21 1998-08-18 Biologicky čistá kultúra Lactobacillus rhamnosus, kompozícia s jej obsahom a jej použitie

Country Status (22)

Country Link
US (1) US6379663B1 (sk)
EP (2) EP1007625B1 (sk)
JP (1) JP3694236B2 (sk)
KR (1) KR100406344B1 (sk)
CN (1) CN1150314C (sk)
AU (1) AU727940B2 (sk)
BR (1) BR9811332A (sk)
DE (1) DE69841826D1 (sk)
DK (2) DK1007625T3 (sk)
ES (2) ES2399324T3 (sk)
GB (1) GB2338245B (sk)
HK (1) HK1024719A1 (sk)
HU (1) HU228046B1 (sk)
ID (1) ID24734A (sk)
MY (1) MY116272A (sk)
NZ (1) NZ337520A (sk)
PL (1) PL195110B1 (sk)
RU (1) RU2208632C2 (sk)
SK (1) SK283008B6 (sk)
TR (1) TR200000451T2 (sk)
TW (1) TW587098B (sk)
WO (1) WO1999010476A1 (sk)

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SK283008B6 (sk) * 1997-08-21 2003-01-09 New Zealand Dairy Board Biologicky čistá kultúra Lactobacillus rhamnosus, kompozícia s jej obsahom a jej použitie
EP1034788A1 (en) * 1999-03-11 2000-09-13 Société des Produits Nestlé S.A. Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhea
ES2155783B1 (es) * 1999-05-07 2002-05-16 Danone Sa Nueva utilizacion de lactobacillus casei para la preparacion de leches fermentadas para el tratamiento de niveles inmunitarios deprimidos.
DE60018919T2 (de) * 1999-05-07 2006-05-18 Compagnie Gervais Danone Verwendung von milchsaürebakterien bei der herstellung von fermentierten milchprodukten zur behandlung von verringerten immunitätsebenen
ES2155782B1 (es) * 1999-05-07 2002-05-16 Danone Sa Utilizacion de bacterias acidolacticas pra preparar leches fermentadas para el tratamiento de niveles de actividad inmunitaria transitoriamente reducidos.
US7125698B2 (en) * 1999-08-09 2006-10-24 Matthew Glenn Polynucleotides, materials incorporating them, and methods for using them
HU227086B1 (en) 1999-11-25 2010-06-28 Vakcina Kft Lactobacillus vaccine for treating prostata inflammatory and benign prostata hyperplasia
FR2809312B1 (fr) * 2000-05-25 2002-07-12 Gervais Danone Sa Utilisation de l. casei dans des compositions immunostimulantes
TW588109B (en) * 2000-07-29 2004-05-21 Tcell Biotechnology Food Co Lt Lactobacillus rhamnosus strain and uses thereof
AU8455801A (en) * 2000-08-08 2002-02-18 Genesis Res & Dev Corp Ltd Lactobacillus rhamnosus polynucleotides, polypeptides and methods for using them
SG97174A1 (en) * 2000-12-19 2003-07-18 Cell Biotechnology Food Co Ltd Lactobacillus rhamnosus strain and uses thereof
FI109602B (fi) 2001-01-25 2002-09-13 Valio Oy Probioottiyhdistelmä
US20030017192A1 (en) * 2001-06-19 2003-01-23 Hanny Kanafani Process for producing extended shelf-life ready-to-use milk compositions containing probiotics
KR100442205B1 (ko) * 2002-02-28 2004-07-30 주식회사 비피도 β- 글루코시다제를 생산하는 비피도박테리움 락티스 및이를 이용하여 이소플라본을 이소플라본 비배당체로전환하는 방법
US20040047849A1 (en) * 2002-09-11 2004-03-11 Genmont Biotech Inc. Use of some lactobacillus strains in treating allergy
NZ521836A (en) * 2002-10-08 2005-07-29 New Zealand Dairy Board High pressure treatment to reduce microbial spoilage in cultured dairy foods, cooked meats, vegetables and the like
US20070148147A1 (en) * 2002-12-05 2007-06-28 Veronique Dennin Bacterial composition and its use
US7001756B1 (en) * 2004-02-19 2006-02-21 Genmont Biotech Inc. Microorganism strain of GM-020 of Lactobacillus rhamnosus and its use for treating obesity
US6994848B2 (en) * 2004-03-25 2006-02-07 Genmont Biotech Inc. Lactobacillus paracasei strain GM-080 for treating allergy related diseases
ITMI20042189A1 (it) * 2004-11-16 2005-02-16 Anidral Srl Composizione a base di batteri probiotici e suo uso nella prevenzione e-o nel trattamento di patologie e-o infezioni respiratorie e nel miglioramento della funzionalita' intestinale
RU2270248C1 (ru) * 2004-12-31 2006-02-20 Открытое акционерное общество "Лианозовский молочный комбинат" Штамм бифидобактерий bifidobacterium lactis 668, используемый для приготовления кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок, бактериальных препаратов и косметических средств
PL1724340T3 (pl) * 2005-05-11 2009-08-31 Chr Hansen As Szczepy bakterii kwasu mlekowego wrażliwe na antybiotyk
US8021883B2 (en) 2005-05-11 2011-09-20 Chr. Hansen A/S Antibiotic-sensitive lactic acid bacteria strains
JP2007028920A (ja) * 2005-07-22 2007-02-08 Japan Research & Development Association For New Functional Foods 発酵乳およびその製造方法
US20090142304A1 (en) 2005-10-13 2009-06-04 Koichiro Murashima Composition for Improving Intestinal Flora
US8226936B2 (en) * 2006-11-15 2012-07-24 Chr-Hansen A/S Tetracycline-sensitive bifidobacteria strains
TWI356680B (en) 2007-01-05 2012-01-21 Promd Biotech Co Ltd Anti-allergy lactic acid bacteria
FR2928935B1 (fr) * 2008-03-19 2011-05-20 Gervais Danone Sa Souche de lactobacillus rhamnosus.
BRPI0919847A2 (pt) * 2008-09-19 2015-12-15 Nestec Sa suporte nutricional do sistema imunológico durante o tratamento anticâncer
MX2011005527A (es) * 2008-11-28 2011-09-28 Univ Otago Uso de la bacteria de acido lactico para tratar o prevenir el eczema.
WO2010103132A1 (es) * 2009-03-10 2010-09-16 Hero España, S.A. Aislamiento, identificación y caracterización de cepas con actividad probiótica a partir de heces de lactantes alimentados exclusivamente con leche materna
NZ601141A (en) 2010-01-19 2014-07-25 Abbott Lab Nutritional formulas containing synbiotics
WO2011141762A1 (en) 2010-05-12 2011-11-17 Compagnie Gervais Danone Synergistic fermentation of lactobacillus rhamnosus and lactobacillus paracasei subsp paracasei
WO2012063345A1 (ja) * 2010-11-11 2012-05-18 株式会社カザミ 免疫賦活剤及びそれを配合した免疫賦活組成物、並びに免疫賦活方法
RU2453591C1 (ru) * 2011-04-21 2012-06-20 Общество с ограниченной ответственностью "Бифилюкс" Штамм lactobacillus rhamnosus, используемый для получения продукции, содержащей лактобактерии
WO2013101516A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 Abbott Laboratories Methods for decreasing the incidence of necrotizing enterocolitis in infants, toddlers, or children using extracted genomic dna
ITRM20130174A1 (it) * 2013-03-22 2014-09-23 Eurospital S P A Ceppo di lactobacillus e suo uso come probiotico
MX2019000881A (es) * 2016-07-28 2019-07-01 Fonterra Cooperative Group Ltd Producto lacteo y proceso.
NZ754706A (en) * 2016-12-22 2022-09-30 Univ Of Otago Use of lactic acid bacteria to treat or prevent gestational diabetes mellitus
EP4136985A1 (en) 2016-12-22 2023-02-22 University of Otago Use of lactic acid bacteria to treat or prevent gestational diabetes mellitus
CA3065903C (en) * 2017-06-02 2023-01-24 University Of Otago Use of lactic acid bacteria to treat or prevent at least one of postnatal depression and postnatal anxiety
KR20230085712A (ko) 2021-12-07 2023-06-14 주식회사 에이스브이 버터플라이 밸브용 디스크 락킹 장치

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0614862B2 (ja) 1987-05-22 1994-03-02 東京田辺製薬株式会社 ビフィドバクテリウム菌の増殖促進剤
JP2617758B2 (ja) * 1988-03-25 1997-06-04 株式会社ヤクルト本社 抗体産生増強型免疫賦活剤
JPH0551321A (ja) * 1991-08-23 1993-03-02 Yotsuba Nyugyo Kk 免疫賦活剤
EP0577904B1 (fr) 1992-07-06 1997-05-14 Societe Des Produits Nestle S.A. Bactérie lactique
CA2156859A1 (en) 1993-02-24 1994-09-01 Sherwood L. Gorbach Method of enhancing immune response to oral vaccines
WO1994026114A1 (en) * 1993-05-11 1994-11-24 Immunom Technologies, Inc. Method of stimulating and modulating the immune system of animals with microbial compositions
JP4112021B2 (ja) * 1994-02-16 2008-07-02 明治乳業株式会社 乳酸菌を用いた免疫賦活剤
JPH092959A (ja) * 1995-06-16 1997-01-07 Yakult Honsha Co Ltd ＩｇＥ抗体産生抑制剤および抗アレルギー剤
FI102298B1 (fi) * 1995-09-07 1998-11-13 Oulutech Oy Menetelmä maitohappobakteerilajien määrittämiseksi ja menetelmään soveltuvia oligonukleotideja
ATE355360T1 (de) * 1996-11-29 2006-03-15 Bio K & Internat Inc Milchsaüreferment das ein spezieller stamm von lactobacillus acidophilus enthältund verwendung
SK283008B6 (sk) * 1997-08-21 2003-01-09 New Zealand Dairy Board Biologicky čistá kultúra Lactobacillus rhamnosus, kompozícia s jej obsahom a jej použitie

Also Published As

Publication number Publication date
US6379663B1 (en) 2002-04-30
HK1024719A1 (en) 2000-10-20
SK2192000A3 (en) 2000-09-12
ES2399324T3 (es) 2013-03-27
JP2001513990A (ja) 2001-09-11
JP3694236B2 (ja) 2005-09-14
GB2338245B (en) 2001-11-21
EP1007625A1 (en) 2000-06-14
EP1007625B1 (en) 2010-08-11
DE69841826D1 (de) 2010-09-23
HU228046B1 (en) 2013-03-28
EP2241616A1 (en) 2010-10-20
DK1007625T3 (da) 2010-11-01
EP1007625A4 (en) 2004-12-01
TW587098B (en) 2004-05-11
PL338775A1 (en) 2000-11-20
EP2241616B1 (en) 2012-11-28
HUP0002949A3 (en) 2003-03-28
TR200000451T2 (tr) 2000-06-21
HUP0002949A2 (hu) 2000-12-28
KR100406344B1 (ko) 2003-11-19
KR20010023117A (ko) 2001-03-26
WO1999010476A1 (en) 1999-03-04
GB2338245A (en) 1999-12-15
GB9920043D0 (en) 1999-10-27
AU727940B2 (en) 2001-01-04
NZ337520A (en) 2000-01-28
BR9811332A (pt) 2000-09-19
CN1264422A (zh) 2000-08-23
ID24734A (id) 2000-08-03
PL195110B1 (pl) 2007-08-31
AU9009598A (en) 1999-03-16
CN1150314C (zh) 2004-05-19
MY116272A (en) 2003-12-31
ES2349669T3 (es) 2011-01-10
US20020031503A1 (en) 2002-03-14
RU2208632C2 (ru) 2003-07-20
DK2241616T3 (da) 2013-02-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK283008B6 (sk) Biologicky čistá kultúra Lactobacillus rhamnosus, kompozícia s jej obsahom a jej použitie
US11759486B2 (en) Lactobacillus plantarum and composition comprising same
JP4176715B2 (ja) プロバイオティクス菌株、その選択方法、その組成物、およびその使用
US7901926B2 (en) Lactobacillus isolates having anti-inflammatory activities and uses of the same
KR101452234B1 (ko) 장수마을 성인으로부터 분리한 배변활동에 도움을 주는 신규한 유산균 락토바실러스 퍼멘텀
RU2567009C2 (ru) ШТАММ Lactococcus lactis ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ РАССТРОЙСТВА ПИЩЕВАРЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
US20080166331A1 (en) Anti-allergy lactic acid bacteria
US11274275B2 (en) Lactobacillus paracasei ET-22 and use thereof
US6887465B1 (en) Lactobacillus strains capable of preventing diarrhoea caused by pathogenic bacteria and rotaviruses
CN114480229A (zh) 一种动物双歧杆菌乳亚种菌株wkb148及其产品与应用
EP2707476B1 (en) Lactobacillus fermentum cect 7472 strain with probiotic properties
KR100742900B1 (ko) 면역조절기능이 있는 락토바실루스 람노서스 아이디씨씨3201의 이용
MXPA99009596A (en) Immunity enhancing lactic acid bacteria
RU2708146C2 (ru) Средство для улучшения состояния пищеварения

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Expiry of patent

Expiry date: 20180818