PL169927B1 - Sposób wytwarzania nowych zwiazków benzochinazolinowych PL PL PL PL - Google Patents

Abstract

1. Sposób wytwarzania nowych zwiazków benzochinazolinowych o wzorze (LU) lub ich soli, w którym linia przerywana oznacza wiazanie pojedyncze lub podwójne, R1 oznacza grupe metylowa lub aminowa, R6 i R7 oznaczaja atomy wodoru, R32 do R3 5 sa takie same lub rózne i jeden oznacza grupe-X-NR1 7 -R24, a pozostale sa niezaleznie wybrane z atomu wodoru lub bromu, X oznacza SO2 lub CH2, R1 7 oznacza atom wodoru lub grupe C1-4alifatyczna, a R2 4 oznacza grupe w których R1 8 oznacza grupe nitrowa, atom chlorowca lub grupe COR19, gdzie R1 9 oznacza grupe C1-4 alkilowa, aminowa lub reszte kwasu glutaminowego o wzorze lub jej ester C1-4alkilowy, R2 2 atom wodoru lub fluoru, R 1 9 a oznacza rodnik o wzorze lub jego ester C 1-4alkilowy, Z oznacza CH2 lub S, znamienny tym, ze zwiazek o wzorze (A), w którym jedna z grup R3 2 do R3 5 oznacza grupe chlorowcometylowa lub chlorowcosulfonylowa, a pozostale sa niezaleznie wybrane z atomu wodoru lub bromu, R1 , R6, R7 i linia przerywana maja wyzej podane znaczenie, poddaje sie reakcji sprzegania ze zwiazkiem o wzorze HNR17R24, w którym R 1 7 i R24 maja wyzej podane znaczenie, przy czym gdy R we wzorze (III) oznacza pierwszorzedowa grupe aminowa, to reakcji poddaje sie zwiazek o wzorze (A), w którym R oznacza chroniona pierwszorzedowa grupe aminowa, a nastepnie usuwa sie grupe zabezpieczajaca grupe aminowa. PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowych związków benzochinazolinowych inhibitorów syntazy tymidylanowej.

Opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4814335 ujawnia między innymi, że

w którym R oznacza atom wodoru, fluoru, grupę nitrową, ewentualnie podstawioną grupę aminową, grupę karboksylową, azydową, alkoksylową, trimetylosulfonylową, trifluorometylosulfonylową lub alkoksykarbonylową, mają działanie modyfikujące odpowiedź biologiczną, to znaczy działanie przeciwwirusowe, przeciwbakteryjne i przeciwrakowe. Jednakże nie podane są żadne szczególne przykłady związków o wzorze (0).

169 927

Syntaza tymidylanowa jest enzymem katalizującym końcowy etap w de novo syntezie tymidylanu potrzebnego do syntezy DNA. Zakłada się, że można oczekiwać, że inhibitory tego enzymu mają działanie przeciwnowotworowe i donosi się (Jones i in., J. Med. Chem. 1986, 29 468), że działanie przeciwnowotworowe in vivo kwasu N-propargilo-5,8-dideazofoliowego pochodzi wyłącznie z jego hamującego działania na ten enzym.

Stwierdzono teraz, że grupa związków benzochinazolinowych stanowi inhibitory enzymu syntazy tymidylanowej i ma działanie przeciwnowotworowe.

Do związków takich należą związki o wzorze (I)

(I) lub ich sole, w którym linia kreskowana oznacza wiązanie pojedyncze lub podwójne, R¹ oznacza grupę C1-4alkilową lub aminowa ewentualnie podstawioną grupą Ci-4alkilową, Ci-5alkanoilową lub benzylową; R², R,r4 i r5 są takie same lub różne i każdy jest wybrany z atomu wodoru, grupy fenylowej, atomu chlorowca, grupy nitrowej, grupy S(O)nR°, w której n jest liczbą całkowitą 0, 1 lub 2 i R⁸ oznacza atom chlorowca lub grupę Cl-4 alkilową lub grupę NR⁹RI⁰, w której R9 i R¹⁰ oba oznaczają atomy wodoru, grupy NR^R¹², w której Ri i R^ są takie same lub różne i każdy oznacza atom wodoru lub grupę C1-4 alkilową; grupy OR, w której R1³ oznacza atom wodoru lub grupę C i -4alkilową ewentualnie podstawiona atomem chlorowca· grupy Ci-4alifatycznej ewentualnie podstawionej grupą OR 14 lub NR^MR, _w której R14 i RI⁵ są takie same lub różne i każdy oznacza atom wodoru lub grupę Ci-4alkilową; lub dwa podstawniki z R² do R· są związane razem do postaci grupy benzo, lub jeden z podstawników R² do r5 oznacza grupę -X-Y-R1°, w której X oznacza grupę CH2, NR, CO lub S(O)m, a m ma wartość, 0,1 lub 2 i R

CH2, NR 1⁷’ oznacza atom wodoru lub grupę Ci-4alifatyczną i Y oznacza grupę O lub S(O)m’, gdzie m' ma wartość 0, 1 lub 2 , a R¹⁷ onnacaa atom wodoru lub grupę Ci-4alifatyczną, pod warunkiem, że X i Y są takie same tylko, gdy każdy oznacza grupę CH2 lub -X-Y- oznacza grupę -O-, -Nr1⁷-, -CH=CH- lub -N=N-, gdzie R17 ma wyżej podane znaczenie, R¹⁰ oznacza grupę Ci^alifatyczną lub 5- lub ó-członowy pierścień aromatyczny ewentualnie podstawiony grupą R^ w pozycji co najmniej jednego atomu węgla usuwanego z niego, związanego z Y, S lub ó-członowy pierścień przy tym jest ewentualnie dalej podstawiony atomem chlorowca; i R^ oznacza atom chlorowca, grupę Ci^alkoksylową, nitrową, nitrylowa, Ci-4alkilową ewentualnie podstawioną atomem chlorowca, atom chlorowca lub grupę COR , gdzie R19 oznacza grupę hydroksylową, Ci-4alkoksylową lub Ci-óalkilową ewentualnie podstawiona jedną lub dwiema grupami karboksylowymi lub ich Ci-i2estrami lub R^iy oznacza grupę NR20r2i, gdzie R^⁰ i Ri są takie same lub różne,i każdy oznacza atom wodoru lub grupę Ci-4alkilową ewentualnie podstawioną grupę hydroksylową lub R19 oznacza grupę aminokwasu lub jego estru, w którym pierwszy atom azotu grupy aminokwasu może być przyłączony do 5lub ó-członowego pierścienia aromatycznego, tworząc dalszy 5- lub ó-członowy pierścień heterocykliczny lub R^ oznacza grupę C2-3alkilenową przyłączoną do 5- lubaó-członowego pierścienia aromatycznego, tworząc dalszy 5- lub ó-członowy pierścień; Rb i R 'są takie same lub różne i każdy oznacza grupę Ci-4alkilową ewentualnie podstawioną grupą hydroksylową

169 927 lub Ci-4alkoksylowa lub razem tworzą grupę benzo; z tym ograniczeniem,że co najmniej jeden z podstawników R² do R⁷ oznacza grupę inną niż atom wodoru i r4 nie oznacza grupy metoksylowej, gdy Ri oznacza grupę hydroksylową lub metylową.

Korzystną grupę związków stanowią związki o wzorze (III). Sposób wytwarzania tych korzystnych związków jest przedmiotem niniejszego wynalazku.

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowych związków benzochinazolinowych o wzorze (III)

(III) lub ich soli, w którym linia przerywana oznacza wiązanie pojedyncze lub podwójne, Ri oznacza grupę metylową lub aminową, R° i R oznaczają atomy wodoru, R³² do R³³ są takie same lub różne i jeden oznacza grupę -X-NRi R⁴, a pozostałe są niezależnie wybrane z atomu wodoru lub bromu, X oznacza SO 2 lub CH2, Ri⁷ oznacza atom wodoru lub grupę Ci-4alifatyczną a r4⁴ oznacza grupę

oznacza grupę Ci-4alkilową, aminową lub resztę kwasu glutaminowego o wzorze

co₂h

COjH lub jej ester Ci-4alkilowy, R o wzorze oznacza atom wodoru lub fluoru, R

19a oznacza rodnik

CO,H

CO,H lub jego ester Ci-4alkilowy, Z oznacza CH2 lub S polegający na tym, że związek o wzorze (A)

(A)

169 927

35 w którym jeden z grup R do R oznacza grupę chlorowcometylową lub chlogowcosulfonylową, a pozostałe są niezależnie wybrane z atomu wodoru lub bromu, R¹, R, R' i linia przerywana mają wyżej podane znaczenie, poddaje się reakcji sprzęgania ze związkiem o wzorze HNRi⁷R²⁴, w którym Rl' i R²⁴ mają wyżej podane znaczenie, przy czym gdy Rl we wzorze (III) oznacza pierwszorzędową grupę aminową, to reakcji poddaje się związek o wzorze (A), w którym Rl oznacza chronioną pierwszorzędową grupę aminową, a następnie usuwa się grupę zabezpieczającą grupę aminową.

W przypadku gdy reakcji poddaje się związek o wzorze (A), w którym jedna z grup R³² do R³⁵ oznacza grupę chlorowcometylową, to najpierw ewentualnie związek o wzorze (A), w którym jedna z grup R³² do R3³ oznacza grupę metylową, poddaje się chlorowcowaniu.

Grupa chlorowcometylową korzystnie jest grupą bromometylową.

Korzystne związki o wzorze (Πΐ) obejmują:

kwas N-(4-((3-amino-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo-sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy, kwas N-(4-((1,2,5,6-tetrahydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)-sulfonamido)benzoilo-L-glutaminowy, kwas N-(4-(( 1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)-sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy, kwas N-(4-(((1,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino-2-fluorobenzoilo)-L-glutaminowy, kwas N-(4-((( 1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo [f]chinazolin-9-ylo)metylo)£miino)benzoilo)-L-glutaminowy, kwas(S)-2-(5-((( 1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino-1 okso^-izoindolinylo^lutarowy,

9-((4-acety]oanilino)mety]o-3-metylobenzo[f]chinazolin-1 (2H)-on,

3-metylo]((4-mtroanilino)mety]o)benzo[f]chinazolin-1(2H)-on, kwas N-(4-(((3-amino-1,2-dihydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)-metylo)amino)benzoilo)-L-glutaminowy,

3-amino-9-((4-nitroanilino)metylo)benzo [fjchinazolin-1 (2H)-on,

9-((4-acetyloanilino)metylo)-3-aminobenzo[f]chinazolin-1 (2H)-on.

W przypadku wytwarzania kwasu (S)-2-(5-((( 1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino-1-okso-2-izoindo]iny]o)g]utarowego, związek o wzorze

CH₃ w którym R³⁶ oznacza grupę C ^alkilową, poddaje się reakcji ze związkiem o wzorze NH X h₃c nh₂ po czy otrzymaną benzochinazolinę poddaje się dehydrogenacji, otrzymany związek o wzorze

169 927 chlorowcuje się w grupie 9-metylowej, po czym otrzymaną 9-chlorowcometylobenzochinazolinę poddaje się reakcji ze związkiem o wzorze CO₂Et

lub jego solą, po czym przeprowadza hydrolizę do wolnego kwasu.

Niektóre związki o wzorze (III) zawierają asymetryczne atomy węgla i są tym samym zdolne do istnienia jako izomery optyczne. Pojedyncze izomery i ich mieszaniny wchodzą w zakres niniejszego wynalazku.

Sole związków wytwarzanych sposobem według wynalazku mogą obejmować sole addycyjne z kwasem pochodzące z grupy aminowej lub postaci anionowych pochodzących ze związku o wzorze (III), na przykład, gdy jest podstawiony grupą karboksylową oraz kationu. W obu typach soli, działanie terapeutyczne jest związane z częścią pochodzącą ze związku według wynalazku zdefiniowanego w opisie i tożsamość innych składników jest mniej ważna, chociaż dla celów terapeutycznych i profilaktycznych korzystne jest, aby były farmaceutycznie dopuszczalne dla pacjenta. Przykłady farmaceutycznie dopuszczalnych soli addycyjnych z kwasem obejmują sole pochodzące z kwasów mineralnych takich jak kwas solny, bromowodorowy, fosforowy, metafosforowy, azotowy i siarkowy i z kwasów organicznych takich jak kwas winowy, octowy, trifluorooctowy, cytrynowy, jabłkowy, mlekowy, fumarowy, benzoesowy, glikolowy, glukonowy, bursztynowy i metanosulfonowy i kwasy arylosulfonowe, na przykład kwas p-toluenosulfonowy. Przykładami soli obejmujących części anionowe pochodzące ze związku o wzorze (III) i kation, są sole amonowe, sole metalu alkalicznego takie jak sole sodowe i potasowe, sole metali ziem alkalicznych takie jak sole magnezowe i wapniowe i sole utworzone z zasadami organicznymi, na przykład sole aminowe pochodzące z mono-, di lub tri -(niższych alkilo)- lub (niższych alkanolo)amin takichjak trietanoloamina i dietyloamino-etylo-amina i sole z aminami heterocyklicznymi takimi jak piperydyna, pirydyna, piperazyna i morfolina. Farmaceutycznie dopuszczalne sole razem z solami, które nie są w ten sposób dopuszczalne, są wykorzystywane w wyodrębnianiu i/lub oczyszczaniu związków według wynalazku i niedopuszczalne farmaceutycznie sole są również użyteczne, przekształcając się w farmaceutycznie dopuszczalne sole za pomocą technik znanych w stanie techniki.

Estry związków o wzorze (III), utworzone ze związków o wzorze (III), które zawierają grupę karboksylową, są często użytecznymi związkami pośrednimi w wytwarzaniu kwasu macierzystego.

Sposoby wytwarzania związków o wzorze (A), stanowiących związki wyjściowe w sposobie według wynalazku, obejmują przykładowo następujące reakcje:

(i) gdy żągayżjest w ytw^ania związku o wkorze (ΑΪ w którym linia przeay wzna ozaaaza pojedyncze wiązanie, reakcję związku o wzorze (V)

HO

(V)

169 927

5 32 35 36 w którym R^z do R° mają wyżej podane znaczenie dla R do R , a R oznacza grupę

Ci-4alkilową, ze związkiem,

NH

R¹

C - NH₂ w którym Rl ma wyżej podane znaczenie. Reakcję dogodnie prowadzi się w polarnym rozpuszczalniku, na przykład w Ci-4alkanolu lub glikolu, dogodnie w metanolu lub etanolu, zwykle w obecności zasady, na przykład alkoholanu metalu dogodnie utworzonego z metalu i rozpuszczalnika, to znaczy metanolanu lub etanolami sodu, w podwyższonej temperaturze, na przykład 50° do 150°C i dogodnie 60°C do 90°C.

Związek o wzorze _Nu

II c - NH₂ jest dogodnie uwalniany in situ z soli, na przykład z chlorowodorku lub węglanu za pomocą zasady, która korzystnie jest obecna w mieszaninie reakcyjnej.

(ii) hydrolizę związku o wzorze (VI)

(VI)

7 w którym R do R mają wyżej podane znaczenie. Hydrolizę dogodnie prowadzi się za pomocą kwasu, na przykład kwasu mineralnego takiego jak kwas solny, w temperaturze od 20°C do 120°C, dogodnie od 60°C do 100°C.

(iii) konwersję jednego związku o wzorze (A) w inny związek o wzorze (A), na przykład:

(a) dehydrogenację związku o wzorze (VII):

R (VII) ro

169 927

7 37 · w którym R do R mają wyżej podane znaczenie a R oznacza grupę C1-4alkilową lub pierwszorzędową, drugorzędową lub trzeciorzędową grupę aminową w definicji podstawnika R1 lub, gdy jest pożądane do wytwarzania związku o wzorze (A), w którym R¹ oznacza pierwszorzędową grupę aminową lub grupę hydroksylową, a R³⁷ oznacza zabezpieczoną grupę aminową lub hydroksylową; i następnie w razie potrzeby, usuwanie grupy zabezpieczającej. Dehydrogenację dogodnie prowadzi się przez (i) bromowanie pozycji 5- lub 6 - związku o wzorze (VII) reagentem takim jak N-bromosukcynimid, a następnie dehydrobromowanie, (ii) katalityczną dehydrogenację w obojętnym rozpuszczalniku (np. w diglimie), (iii) dehydrogenację za pomocą ODQ. Reakcję (i) dogodnie prowadzi się w obecności zasady takiej jak pirydyna, w obojętnym rozpuszczalniku, na przykład w benzenie, w nieekstremalnej temperaturze, na przykład od 0 do 80°C. Grupa piwaloilowa jest korzystną grupą zabezpieczającą, gdy R1 oznacza grupę NH 2.

Związki o wzorze (VII) dogodnie wytwarza się z odpowiednich związków o wzorze (V), jak opisano powyżej w metodzie (i).

Związki o wzorze (V) można wytwarzać przez reakcję węglanu dialkilowego ze związkiem o wzorze (VIII)

(VIII)

5 w którym R do R mają wyżej podane znaczenie, w obecności zasady, korzystnie wodorku sodu. Reakcja jest analogiczna do opisanej przez J.Vebrel i R. Carrie (Bull. Soc. Chim. Fr.,1982, 161).

Związki o wzorze (VI), w którym R 1=NH2, można wytwarzać przez reakcję dicyjanodiamidu ze związkiem o wzorze (VIII). Reakcja jest opisana przez Rosowsky i in. (J. Heterocyclic Chem. 9, 263 (1972)).

Związki o wzorze (VIII) można wytwarzać metodami dobrze znanymi dla fachowców w tej dziedzinie, na przykład metodami analogicznymi do opisanych przez J. Vebrel i R. Carrie (Bull. Soc. Chim. Fr., 1982, 161) i J.H. Burkhalter i J.R. Campbell (J. Org. Chem., 26, 4332 (1961)) i przedstawionych na schemacie 1, 2 i 3, które są załączone do opisu.

169 927

OH

O no₂

Schemat i

MeOH

H⁺

(coci)₂

O

R

169 927

Schemat 2 (R=Me, di-Me)

R NaBH,

169 927

Chociaż związki lub sole wytwarzane sposobem według wynalazku można podawać w postaci surowej substancji chemicznej, korzystne jest stosowanie ich w postaci preparatu farmaceutycznego. Odpowiednio, preparat farmaceutyczny do stosowania w medycynie, zawiera związek wytworzony sposobem według wynalazku lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól, jak zdefiniowano powyżej oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik.

Preparat farmaceutyczny może ewentualnie zawierać inne środki terapeutyczne, które mogą być stosowane w połączeniu ze związkiem lub solą według wynalazku, na przykład pirymidynowy inhibitor transportu nukleozydu, który jest zdolny do wzmacniania działania antyneoplastycznego związków i soli wytworzonych sposobem według wynalazku. Wyrażenie farmaceutycznie dopuszczalny stosowane w opisie w odniesieniu do nośnika, jest stosowane w sensiejego kompatybilności ze związkiem lub solą według wynalazku stosowaną w preparacie i z innym środkiem terapeutycznym, który może być obecny oraz nie przynoszenia szkód jego biorcy. Sam nośnik może stanowić jedna lub więcej zarobek konwencjonalnie stosowanych w dziedzinie farmacji, które umożliwiają sporządzenie preparatu farmaceutycznego ze związku lub soli według wynalazku i każdego innego środka terapeutycznego, który może być obecny.

Preparaty farmaceutyczne obejmują preparaty odpowiednie do podawania doustnego, pozajelitowego (włącznie z podskórnym, śródskórnym, domięśniowym i dożylnym) i doodbytniczego, chociaż najbardziej dogodna droga będzie prawdopodobnie zależna, na przykład od stanu i tożsamości biorcy. Preparaty mogą być dogodnie przedstawione w postaci dawki jednostkowej i mogą być wytwarzane dowolnymi metodami znanymi w dziedzinie farmacji. Wszystkie metody obejmują etap doprowadzania do połączenia składnika aktywnego, to jest związku lub soli wytworzonych sposobem według wynalazku, z nośnikiem. Na ogół, preparaty wytwarza się przez jednolite i dokładne doprowadzanie do połączenia składnika aktywnego z ciekłym nośnikiem lub subtelnie rozdrobnionym nośnikiem lub obydwoma nośnikami i następnie, gdy to jest konieczne, uformowanie związanej mieszaniny w żądany preparat.

Preparaty farmaceutyczne dogodne do podawania doustnego mogą być przedstawione jako jednostki takie jak kapsułki, opłatki, tabletki lub pastylki do ssania, z których każda zawiera wstępnie ustaloną ilość składnika aktywnego; jako proszek lub granulki; jako roztwory lub zawiesiny w wodnej lub niewodnej cieczy takie jak syropy, eliksiry lub wywary lub jako ciekłe emulsje typu olej w wodzie lub ciekłe emulsje typu woda w oleju. Preparat może również być w postaci dużej pigułki, powidełka lub pasty.

Zazwyczaj tabletka jest najbardziej dogodnym preparatem farmaceutycznym odpowiednim do podawania doustnego. Tabletki mogą być sporządzane przez prasowanie lub kształtowanie składnika aktywnego z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem. Sprasowane tabletki mogą być wytwarzane przez prasowanie w odpowiednim urządzeniu składnika aktywnego w postaci swobodnie płynącej takiej jak proszek lub granulki, w mieszaninie na przykład ze środkiem wiążącym, obojętnym rozcieńczalnikiem, środkiem smarującym, środkiem ułatwiającym rozpadanie i/lub środkiem powierzchniowo czynnym. Ukształtowane tabletki można wytwarzać przez formowanie w odpowiednim urządzeniu, mieszaniny sproszkowanego składnika aktywnego zwilżonego obojętnym ciekłym rozcieńczalnikiem. Tabletki mogą być ewentualnie powlekane lub punktowane i mogą być zestawione tak, aby dostarczać powolne lub regulowane uwalnianie składnika aktywnego.

Preparaty farmaceutyczne odpowiednie do podawania pozajelitowego, obejmują wodne i niewodne sterylne roztwory do iniekcji, które mogą zawierać na przykład antyutleniacz, bufor, środek bakteriostatyczny i roztwór, który czyni kompozycję izotoniczną z krwią biorcy oraz wodne i niewodne sterylne zawiesiny, które mogą zawierać na przykład środek utrzymujący zawiesinę i środek zagęszczający. Preparaty mogą być obecne w pojemnikach z dawką jednokrotną lub z dawką wielokrotną, na przykład w zamkniętych ampułkach i fiolkach i mogą być przechowywane w stanie liofilizowanym wymagającym tylko dodania sterylnego ciekłego nośnika, na przykład wody do iniekcji, bezpośrednio przed użyciem. Roztwory i zawiesiny do iniekcji przygotowane bezpośrednio przed użyciem, można wytwarzać ze sterylnych proszków, granulek i tabletek, opisanego powyżej rodzaju.

169 927

Preparaty farmaceutyczne odpowiednie do podawania doodbytniczego mogą być sporzą dzone jako czopki zawierające na przykład masło kakaowe i glikol polietylenowy.

Następujące przykłady ilustrują preparaty farmaceutyczne.

Roztwór do iniekcji

Roztwór do iniekcji domięśniowych można wytwarzać przez zmieszanie:

9.5 części wagowych 19,0 części wagowych

4.5 części wagowych 67,0 c^^^^i wagowych

100,0

Związek o wzorze (III) dimetylosulfotlenku monooleinianu sorbitanu oleju kukurydzianego

Roztwór do , iniekcji Związek o wzorze (IB) N-metylopirolidon Tween 80 Span 80

Miglyol 8i2

Tabletki

Związek o wzorze (BI)

Laktoza BP

Mikrokrystaliczna celuloza BP (“Ayicel pH i0i) nisko-podstawiona hydroksyprwpylwceluloza BP (LHPC LH-i i) sól sodowa glikolanu skrobii BP (^xplotab)

Poyidon BP (IGO)

Stearynian magnezu BP

Zawiesina doustna związek o wzorze (BI)

Ayicel RC 59i syrop sacharozy metclohydrokscbenzoesan barwnik aromat wiśniowy

Tween 80 woda

Zawiesina do iniekcji związek o wzorze (BI) poliwinylopirolidon (PVP)

Tween 80 metylohydroksybenzoesan woda do iniekcji Kapsułki związek o wzorze (III)

Skrobia 500 stearynian magnezu napełnione twarde kapsułki żelatynowe Zawiesina do rozpylania związek o wzorze (III), sterylny woda do iniekcji ccęści waggwych 48,3 czewci wagowych części wagwwe 4,7 części wagowych 40 ch^ści wagowych i00,0

22,0 mg 44,5 mg 10,0 mg 10,0 mg

3,0 mg 3,0 mg

100,0 mg mg 77 nm 3,5 md 5 nm

0,01 wag./obj.

0, 1% wag./obj. 0,2% wag./obj.

do 5 ml

100 nm 170 nm

0,0% 2^./0^. 0,1% 2^./0^.

do 3 ml lOOmm 150 nm

2,5 mg

1,0 mg do 10,0 ml

169 927

Zdyspergować związek o wzorze (III) w wodzie do iniekcji, uprzednio sterylizowanej w sterylnym pojemniku. Napełnić sterylne szklane ampułki, 10 ml/ampułkę w warunkach aseptycznych i zamknąć każdą ampułkę przez zatopienie szkła.

Preparat aerozolowy związek o wzorze (III) mikronikowaay 1,0 mg propelent do preparatu aerozolowego do o ,0 ml

Zawiesić mikronizowany związek o wzorze (III) w propelencie do preparatu aerozolowego. Napełnić zawiesiną uformowane zbiorniki do aerozolu, 5 ml/zbiornik pod ciśnieniem, przez otwór zaworu.

Inhalacje proszkowe związek o wzorze (III), mikronikowany 1,10 mg laktoza 29,0 mg

Rozetrzeć i zmieszać mikronizowany związek o wzorze (III) z laktozą. Napełnić uzyskaną mieszankę proszkową skorupy twardych żelatynowych kapsułek, po 30 mg na kapsułkę.

Krople do nosa związek o wzorze (III) 100,0 mg metylohydroksybnazoesaa 10,0 mg woda do iniekcji do 10,0 ml

Zdyspergować związek o wzorze (III) i metylohydroksybenzoesaa w wodzie do iniekcji.

Napełnić zawiesiną odpowiednie butelki z zak^plac^m, 10 ml/butelkę i zamknąć przez zabezpieczenie dyszy zakraplacza i kapsla butelki.

Jak wskazano powyżej, związki i sole o wzorze (III) mają działanie prknciwaowotworowe, jak przedstawiono dalej, w testach cytotoksyczności hodowli komórek raka gruczołowego SW480 okrężnicy ludzkiej, w których reprezentatywne związki wytworzone sposobem według wynalazku okazują się być aktywne. Związki i sole o wzorze (III) mają również działanie prkeciwnowotworowe, jak oznaczono dalej, w testach cytotoksyczności hodowli komórek raka gruczołowego MCF7 sutka u ludzi. W ten sposób ustalono, że związki wytworzone sposobem według wynalazku są zdolne do hamowania rozwoju nowotworu. Dlatego związki te i sole są stosowane w medycynie, a w szczególności w leczeniu rozwoju nowotworu obejmującego guzy lite takie jak czerniak, guzy sutka i okrężnicy u ssaków.

Sposób leczenia wrażliwych guzów złośliwych i białaczki u zwierząt, np. u ssaków, polega na podawaniu zwierzętom terapeutycznie skutecznej ilości związku lub soli wytworzonych sposobem według wynalazku.

Zwierzęciem potrzebującym leczenia związkiem lub solą wytworzoną sposobem według wynalazku jest zwykle ssak, taki jak człowiek.

Szczególne przykłady rozwoju nowotworu wymagającego leczenia obejmują guzy złośliwe.

Związki i sole o wzorze (III) także hamują enzym, syntazę tymidylanową z E.coli i Candida Albicans. Tym samym związki i sole według wynalazku mogą być stosowane w leczeniu infekcji bakteryjnych i grzybiczych u ssaków.

Związek lub sól wytworzoną sposobem według wynalazku można podawać zwierzętom doustnie, miejscowo, pozajelitowo (podskórnie, śródskómie, domięśniowo, dożylnie lub doodbytniczo). Jeżeli związek lub sól jest w postaci preparatu farmaceutycznego, jak wymieniono powyżej, wówczas wybór stosowanego preparatu będzie oczywiście zależny od sposobu podawania zaleconego przez lekarza lub weterynarza. Na przykład, jeżeli korzystne jest podawanie doustne, wówczas jako preparat farmaceutyczny stosuje się korzystnie jeden z preparatów nadających się do takiego podawania.

Terapeutycznie skuteczna ilość związku lub soli wytworzonych sposobem według wynalazku będzie zależna od szeregu czynników, na przykład od wieku i wagi zwierzęcia, ściśle określonego stanu wymagającego leczenia i jego surowości, charakteru preparatu i sposobu podawania i będzie ostatecznie zależna od obsługującego lekarza lub weterynarza. Jednakże skuteczna ilość związku do leczenia wzrostu nowotworowego, na przykład raka gruczołowego okrężnicy lub sutka będzie zwykle w zakresie od 0,1 do 100 mg/kg wagi

169 927 biorcy (ssaka) na dzień, zwłaszcza w zakresie od 1 do 10 mg/kg wagi ciała na dzień. I tak, dla dorosłego ssaka o wadze 70 kg, rzeczywista dawka dzienna zwykle powinna wynosić od 70 do 700 mg i ta ilość może być podana w jednej dawce dziennie lub zazwyczaj w szeregu (takim jak dwie, trzy, cztery, pięć lub sześć) sub-dawek dziennie tak, aby całkowita dawka dzienna była taka sama. Skuteczna ilość soli może być oznaczana jako proporcjonalna ilość skutecznej ilości związku jako takiego.

Skuteczna ilość związku dla leczenia zaburzeń układu odpornościowego (np. reumatoidalnego zapalenia stawów i odrzucenia tkanki) i chorób pokrewnych takich jak łuszczyca, zwykle będzie w zakresie 0,07-10 mg/kg wagi ciała biorcy (ssaka) na dzień. I tak dla dorosłego człowieka o wadze 70 kg, rzeczywista ilość na dzień powinna zwykle wynosić od około 5-700 mg na dzień i ta ilość może być podana w jednej dawce dziennie lub w szczególności dawkowanie można przerwać, na przykład w przedziałach czasowych dwunastogodzinnych lub tygodniowych. Skuteczną ilość soli można oznaczyć jako proporcjonalną ilość skutecznej ilości związku jako takiego.

Leczenie wzrostu nowotworowego związkiem wytworzonym sposobem według wynalazku może czasami wymagać podawania zwierzętom antidotum lub środka ratującego, np. tymidyny.

Następujące przykłady ilustrują wytwarzanie związków sposobem według wynalazku i ich farmakologiczne własności.

Przykład A ilustruje otrzymywanie związków przejściowych, służących do wytwarzania substratów o wzorze (A).

Przykład A

3,4-Dihydro-2-hydroksy-1-naftoesany alkilowe wytwarzano przez reakcję enolanów sodu wyjściowych 2-tetralonów z węglanem dimetylu lub dietylu, w obecności lub w nieobecności ko-rozpuszczalnika takiegojak toluen. Naprzykład,7-bromo-3,4-dihydro-2-hydroksy-1-naftoesan metylu.

Do ogrzewanej w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną zawiesiny wodorku sodu (5,6 g, 80% w oleju, 187 mmoli) w suchym węglanie dimetylu (120 ml) w atmosferze azotu, dodano roztwór 7-bromo-2-tetralonu (14 g, 61 mmoli) w suchym węglanie dimetylu (60 ml) po kropli przez 40 minut. Ogrzewanie w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną kontynuowano przez dalsze 45 minut i następnie ochłodzono do temperatury pokojowej. Reakcję ostrożnie przerwano lodowatym kwasem octowym, rozcieńczono jedną objętością wody i ekstrahowano octanem etylu (150 ml). Fazę organiczną wysuszono nad siarczanem magnezu, przesączono i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując pozostałość, którą oczyszczano stosując chromatografię kolumnową z żelem krzemionkowym i eluując kolumnę octanem etylu: heksanem (39:7). Otrzymano 7-bromo-3,4-dihydro-2-hydroksy-1-naftoesan-metylu w postaci białej stałej substancji (15,2 g, 86%).

Stosując procedurę opisaną powyżej bez znaczących modyfikacji otrzymano następujące 3,4-dihydro-2-hydroksy-1-naftoesany: metyl, etyl 4-metyl, metyl 5-fluoro, etyl 5-chloro, metyl

5-bromo, etyl 5-jodo, etyl -5-metyl-, etyl 5-fenyl-, etyl 6-fluoro-, etyl 6-chloro, etyl 6-bromo-, etyl 7-fluoro, etyl 7-chloro, etyl 7-bromo-, etyl 7-jodo-, etyl -7-metyl, etyl 7-fenyl-, metyl 7-etoksy-, metyl 7-metylotio-, metyl 7-etylotio-, etyl 8-chloro-, etyl -4,4-dimetyl-, etyl -5,7-dimetyl-, etyl 6,7-dichloro-, etyl 6,7-dimetoksy-, etyl 6-chloro-4-metyl- i 7-chloro-3,4-dihydro-2hydroksy-4-metylo-1 -naftoesan etylu.

Następujące 2-tetralony otrzymano od handlowych dostawców 2-tetralonu: 5-metoksy-2-tetralon, 6-metoksy-2-tetralon, 7-metoksy-2-tetralon i 6,7-dimetoksy-2-tetralon.

Inne 2-tetralony otrzymano jedną z dwóch metod: A) z odpowiednich 1-tetralonów w czterostopniowej sekwencji przenoszenia karbonyluy lub B) z odpowiednio podstawionych kwasów fenylooctowych przez cyklizację odpowiednich chlorków kwasowych z etylenem lub propylenem w warunkach Friedla-Craftsa². Na przykład:

Metoda A: 4,4-Dimetylo-2-tetralon

Do mieszanej zawiesiny borowodorku sodu (3,5 g, 93 mmole), w suchym metanolu (50 ml) w temperaturze 0°C, w atmosferze azotu wkraplano roztwór 4,4-dimetylo-1-tetralonu

169 927 (i0 g, 57,4 mmola) w suchym metanolu: toluenie (i:3) przez okres 45 minut. Po upływie tego czasu, mieszaninę pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej i następnie dodano dwie objętości wody. Po mieszaniu przez godzinę oddzielono warstwę organiczną, wysuszono nad siarczanem magnezu, przesączono i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem pozostawiając jasnożółty olej. Olej oczyszczano przez chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną octanu etylu: heksanu (i:9) i otrzymano i,2,3,4-tetoahydrd-4,4-dimetylo-inaftol w postaci bezbarwnego oleju (9,89 g, 98%).

Mieszaninę kl^d-tetrahydro^^dimetylo-i-naftolu (9,6 g, 54,5 mmoli) w 20% wodnym roztworze kwasu szczawiowego mieszano i ogrzewano do temperatury wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 5 godzin. Po ochłodzeniu, mieszaninę reakcyjną rozcieńczono jedną objętością wody i następnie ekstrahowano jedną objętością eteru. Warstwę wodną ekstrahowano ponownie jedną objętością octanu etylu i połączone fazy organiczne wysuszono nad siarczanem magnezu, przesączono i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem pozostawiając olej, który oczyszczano stosując chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym i eluując mieszaninę octanu etylu: heksanu (0,i :49,9) i otrzymano i ,2-dihyOio4,i -dimetylonafialen w postaci bezbarwnego oleju (4,76 g, 55%).

Do mieszanej mieszaniny 30% nadtlenku wodoru (5 ml) i 97% kwasu mrówkowego (20 ml) w okrągłodennej kolbie wyposażonej w dodatkowy lejek, termometr i łaźnię lodowo-woOną, wkraplano 1,2-Oihyd0d-1,1-dimeaylonaftalen (4,5 g 28 mmole) w temperaturze 5°C, w atmosferze azotu. Po zakończeniu dodawania, naczynie reakcyjne wyjęto z łaźni chłodzącej i pozostawiono, aby temperatura reakcji wzrosła Oo nieco poniżej 35°C i wówczas kolbę ponownie zanurzono w łaźni. W ten sposób utrzymywano temperaturę reakcji między 30 i 35°C przez 45 minut. Po tym czasie egzotermiczna faza reakcji zakończyła się mieszaninę pozostawiono do ochłodzenia Oo temperatury pokojowej. Dodano i0% wodny roztwór siarczanu żelazowego porcjami po kilka milimetrów każda, aż Oo utrzymywania się zmętnienia w mieszanej mieszaninie i następnie cały rozpuszczalnik usunięto poO zmniejszonym ciśnieniem. Lepką brązową pozostałość ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną z 20% H2SO4 (20 ml) przez 4 godziny i następnie ochłodzono, ekstrahowano trzy razy eterem (75 ml każdorazowo), wysuszono naO siarczanem magnezu, przesączono i odparowano pozostawiając brązowy olej. Olej oczyszczano stosując chromatografię na żelu krzemionkowym i eluując mieszaniną octanu etylu: heksanu (7:93) i otrzymano 4,4-Oimetylo-2-tetralon (3,4 g, 74%). Całkowita wydajność wynosiła 40%.

Stosując metodę A otrzymano również 4-metylo-2-tetoalon i 5,7-dimetylo-2-tetralon.

Metoda B: 6-Bromo-2-tetraldn

Mieszaninę chlorku oksalilowego (i00 g) i kwasu 4-bodmofenylooatowegd³ (25 g, ii,6 mmoli) mieszano w atmosferze azotu w temperaturze pokojowej przez 2 godziny i następnie ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną 4 godziny dłużej. Po ochłodzeniu, nadmiar chlorku oksalilu usunięto przez odparowanie pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymując chlorek 4-boomofenyloacetylowy w postaci jasnożółtego oleju, którego Oalej nie oczyszczano.

Do dwulitrowej kolby okrągłoOennej wyposażonej w przewód doprowadzający gaz połączony z zewnętrznym zbiornikiem etylenu, dodatkowy lejek zawierający roztwór surowego chlorku 4-Uromofenyloaaetylu opisanego powyżej w chlorku metylenu (75 ml), termometr, króciec wlotowy gazu przyłączony Oo bełkotki i wymuszonym przepływem azotu oraz mieszadło magnetyczne wysokowyOajne, dodano chlorek metylenu (i000 ml) i chlorek (56 g, 0,42 mola). Mieszaną zawiesinę ochłodzono do -i0°C stosując łaźnię lodowo/solną i wprowadzano etylen przez przewód doprowadzający gaz, który był umieszczony nieco powyżej wiru. Wkraplanie roztworu chlorku fenyloacetylu rozpoczęto z umiarkowaną szybkością i regulowano okresowo tak, aby utrzymywać temperaturę reakcji poniżej 0°C. Przepływ etylenu kontynuowano przez 30 minut po dodaniu zakończonym roztworu chlorku kwasowego i następnie mieszaninę reakcyjną wylano na 2000 ml lodu, mieszano energicznie przez kilka minut i pozostawiono Oo osiadania, aż lód stopił się. Warstwę chlorku metylenu oddzielono i warstwę wodną ekstrahowano trzy razy chlorkiem metylenu (i00 ml każdorazowo). Połączone warstwy chlorku metylenu przesączono przez krótką wkładkę z żelu krzemionkowego i następnie odparowano poO zmniejszonym ciśnieniem pozostawiając bursztynowo zabarwiony olej, który oczyszczano stosując

169 927 chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym i eluując mieszaniną octanu etylu: heksanu (35:65) i otrzymano 6-bromo-2-tetralon w postaci bursztynowej, krystalicznej stałej substancji (25 g, 95%).

Stosując metodę B otrzymano również następujące 2-tetralony: 5-fluoro, 5-chloro,

5- bromo-, 5-jodo, 5-metylo-, 5-fenylo-, 6-fluoro-, 6-chloro-, 7-fluoro-, 7-chloro-, 7-bromo-, 7-jodo-, 7-metylo-, 7-fenylo-, 7-etoksy-, 7-metylotio, 7-etylotio, 8-chloro, 6,7-dihydro-,

6- chloro-4-metylo-i 7-chloro-4-metylo-2-tetralon.

1. J. Vebrel i R. Carrie, Bull. Soc. Chim. Fr.,

2. J.H. Burkhalter i J.R. Campbell, J. Org. Chem., 26,4932, 1961.

3. 3-Podstawione kwasy fenylooctowe wprowadzono do mieszanin 5- i 7-podstawionych 2-tetralonów, które dawały się rozdzielić przez chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym lub przez krystalizację z mieszanin rozpuszczalników eter: heksan lub octan etylu: heksan.

Kwasy fenylooctowe potrzebne do syntezy 2-tetralonów były zwykle dostępne w handlu. Następujące wyjątki (kwasy 3-etoksy-, 3-etylotio-, 3-metylotio- i 3-fenylofenylooctowe) wytwarzano, jak wskazano poniżej.

Kwas 3-etoksyfenylooctowy

A. 3-Etoksyfenylooctan metylu

3-Hydroksyfenylooctan metylu (132,5 g, 0,80 mola) wkraplano do zawiesiny 50% NaH (43,2 g, 0,90 mola) (ie) w temperaturze 0°C w atmosferze N2. Roztwór mieszano przez godzinę w temperaturze pokojowej, ochłodzono w łaźni lodowej i dodano bromek etylu (120 ml, 1,6 mola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej, przesączono i zatężono pod próżnią. Roztwór pozostałości w eterze etylowym przemyto rozcieńczonym roztworem NaOH i nasyconym NaCl, wysuszono (Na2SO4) i zatężono pod próżnią. Pozostałość oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną octanu etylu: heksanu (1:39—>1:9) i otrzymano 3-etoksyfenylooctan metylu (94,9 g).

1H NMR (DMSO-dó, 200 MHz) δ: 1,30 (t, J=7 Hz, 3H, etyl CH 3), 3,59 (s, 3H, ester CH 3), 3,61 (s, 2H, ArCH2), 3,98 (q, J=7 Hz, 2H, etyl CH2), 6,78 - 6,81 (m, 3H), 7,16 - 7,24 (m, 1H).

B. Kwas 3-etoksyfenylooctowy

Roztwór 3-etoksyfenylooctanu metylu (92,6 g, 0,4 mola) w metanolu (600 ml) i 6,25 N NaOH (400 ml) mieszano przez noc w temperaturze pokojowej i następnie przesączono i zatężono pod próżnią w celu usunięcia metanolu. Roztwór doprowadzono do pH 1 za pomocą stężonego HCl i wytrącony osad przesączono, przemyto wodą z lodem i wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując kwas 3-etoksy-fenylooctowy (74,5 g). Temperatura topnienia = 89-90°C.

NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 1,30 (6, J=7 Hz, 3H, CH3), 3,50 (s, 2H, ArCH2), 3,98 (q, J=7 Hz, 2H, etyl CH2), 6,75-6,80 (m, 3H, Ar), 7,14-7,23 (m, 1H, Ar). (Odnośnik literaturowy: J. Med. Chem., 1980,23(4), 437-444).

Kwas 2-(3-bifenylilo)octowy

A. 2-(3-Bifenylilo)etanol

Do roztworu 3-bromobifenylu (18 g, 77 mmoli) w eterze etylowym (150 ml) w atmosferze azotu ochłodzonego do -78°C, dodawano 1,6 M t-butylolit w pentanie (100 ml, 0,16 mola) przez rurkę przez 15 minut. Roztwór mieszano 30 minut w temperaturze -78°C, dodano tlenek etylenu (9 g, 0,2 mola) i mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej przez godzinę. Roztwór ogrzano krótko do wrzenia, aby usunąć nadmiar tlenku etylenu, przeniesiono do rozdzielacza, dodano małą objętość wody i zobojętniono stężonym kwasem solnym. Roztwór organiczny wysuszono (MgS04), zatężono pod próżnią i pozostałość oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną octanu etylu: heksanu (1:4) i otrzymano 2-(3-bifenylilo)etanol (10,5 g).

NMR (CDCI3, 60 MHz) δ: 2,81 (t, J=7 Hz, 2H, CH2), 3,76 (t, J=7 Hz, 2H, CH2), 6,95-7,70 (m, 9H, Ar).

B. Kwas 2-(3-bifenylilo)octowy

Do mieszanego roztworu 2-(3’-bifenylo)etanolu (10,5 g, 53,0 mmole) w acetonie (100 ml) w temperaturze 0°C, dodawano 3N trójtlenek chromu w rozcieńczonym kwasie siarkowym (~20 ml) porcjami przez 30 minut, aż do utrzymywania się pomarańczowego koloru. Mieszaninę miesza169 927 no przez 20 minut, dodano etanol w celu zniszczenia nadmiaru utleniacza i roztwór zatężono pod próżnią. Pozostałość umieszczono w mieszaninie octanu etylu-eteru etylowego (250 ml), przemyto wodą i nasyconą solanką, wysuszono (MgSO2) i zatężono pod próżnią. Pozostałość oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną octanu etylu: heksanu (2:3) i otrzymano kwas 2-(3-bifenylilo)octowy (3,35 g)

Ή NMR (CDCI3, 60 MHz) δ: 3,61 (s, 2H, CH2), 7,00-7,65 (m, 9H, Ar). Kwas 3-etylotiofenylooctowy

Do roztworu 3-aminofenylooctanu metylu (102 g, 0,62 mola) w 1N HCl (1600 ml) chłodzonego w łaźni lodowej dodawano NaN02 (22,7 g, 0,62 mola) porcjami i roztwór mieszano przez 20 minut. Roztwór etanotiolanu potasu otrzymano przez wkraplanie etanotiolu (202 ml, 2,73 mole) przez 10 minut do roztworu 87,5% KOH (159 g, 2,28 mole) w wodzie (1,2 l) w temperaturze 0°C. Następnie dodano roztwór soli diazoniowej przez rurkę do roztworu etanotiolanu potasu i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 30 minut w łaźni lodowej. Dodano eter etylowy (~ 1,51) i mieszaninę mieszano 1,5 godziny w temperaturze pokojowej. W arstwę eterową oddzielono, fazę wodną dalej ekstrahowano eterem etylowym (3x700 ml) i połączone roztwory eterowe zatężono. Pozostałość eluowano z żelu krzemionkowego mieszaniną octanu etylu: heksanu (1:19) otrzymując mieszaninę 3-etylotiofenylooctanu metylu.

1h NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 1,21 (t, J=7 Hz, 3H, etyl CH3), 2,95 (CH2), 3,60 (s, 3H, OCH3), 3,65 (s, 2H, ArCH2), 7,02-7,22 (m, Ar) i fenylooctanu metylu (85,9 g). Estry (82 g) hydrolizowano w roztworze metanolu (500 ml) i 6,25 N NaOH (100 ml) i mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Roztwór zatężono pod próżnią w celu usunięcia metanolu, pozostały roztwór zakwaszono stężonym HCl i uzyskaną stałą substancję ekstrahowano do eteru etylowego. Roztwór eterowy przemyto solanką (3x100 ml), wysuszono (Na2SO2) i zatężono. Destylacja pod próżnią (0,5 mm Hg) dała destylat (100-115°C) kwasu fenylooctowego i resztę kwasu 3-etylotiofenylooctowego. Pozostałość w kolbie zestalona po ochłodzeniu dała kwas 3-etylotiofenylooctowy (29,8 g). Temperatura topnienia = 29-51°C.

Ή NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 1,21 (t, J=7 Hz, 3H, CH3), 2,95 (q, J=7 Hz, 2H, SCH2), 3,52 (s, 2H, AtCh), 7,01-7,28 (m, 2H, Ar), 12,33 (br, s, 1H, CO2H). Widmo masowe (CI-CH4 : 197 (M+1, 100<%).

Kwas 3-metylotiofenylooctowy

Zasadniczo w podobny sposób z 3-aminofenylooctanu metylu (111 g, 0,67 mola) i metanotiolanu potasu (2,68 mole), otrzymano kwas 3-metylotiofenylooctowy (21,0 g). Temperatura topnienia = 76-77°C.

¹H NMR (DMSO-D6, 200 MHz) δ: 2,22 (s, 3H, SCH3), 3,53 (s, 2H, ArCH2), 7,02-7,28 (m, 2H, Ar), 12,30 (br s, 1H, CO2H).

Widmo masowe (CI-CH4): 183 (M+1, 100%). (Odnośnik literaturowy: Plant Physiol. 22(11)2596-1600(1967)).

7-etynylo-2-tetralon stanowiący związek pośredni do syntezy 3-amino-5,6-dihydro-9-etynylobenzo[f]chinazolin-1(2H)-onu wytwarzano w sposób opisany poniżej.

7-Etynylo-2-tetralon

A. 7’-Bromo-3’,2’-dihydrospiro/1,3-dioksolano-2,2’(1’H)-naftalen/

Roztwór 7-bromo-2-tetralonu (1,1 g, 2,9 mmola), glikolu etylenowego (0,62 g, 10 mmoli) i kwasu p-toluenosulfonowego (80 mg, 0,22 mmola) w benzenie (20 ml) mieszano w atmosferze azotu, w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną, wykorzystując łapacz Dean-Starka przez 25 minut. Ochłodzony roztwór rozcieńczono eterem etylowym (60 ml), przemyto nasyconym roztworem NaHCO3 (2x10 ml), wysuszono (MgSO2) i zatężono pod próżnią, otrzymując 7’-bromo-3’,2’-dihydrospiro/1,3-dioksolano-2,2’(rH)-naftalen/ w postaci oleju (1,2 g).

*H NMR (CDC13, 200 MHz) δ: 1,95 (t, J=7 Hz, 2H, CH2), 2,91 (t, J=7 Hz, 2H, CH2), 2,95 (s, 2H, CH2), 2,01 (s, 2H, OCH2CH2O), 6,97 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,15-7,27 (m, 2H, Ar).

B. 3 ’, 2’ -dihydro-7 ’ -/2-trimetylosililo)etynylo/spiro/1,3-dioksolano-2,2’ (1’ H)-naftalen/.

Roztwór 7’-bromo-3’,2’-dihydrospiro/1,3-dioksolano-2,2’(1H)-naftalenu/ (3,20 g, 12,6 mmoli), trimetylosililoacetylenu (7,0 ml, 50 mmoli) (Aldrich), trifenylofosfiny (0,66 g, 2,50 mmole) i octanu

169 927 palladu (0,28 g, 1,25 mmola) w trietyloaminie (18 ml), mieszano w temperaturze 70°C przez 18 godzin i następnie zatężono pod próżnią. Pozostałość absorbowano na żelu krzemionkowym z roztworu eteru etylowego i częściowo oczyszczano przez eluowanie poprzez żel krzemionkowy (15 g) mieszaniną eteru etylowego: heksanu (1:9). Dalsze oczyszczanie przez chromatografię na żelu krzemionkowym z eluowaniem mieszaniną octanu etylu: heksanu (1:19) dało 3’,4’-dihydro-7’-(2-trimetylosililo)etynylo/spiro/1,3-dioksolano-2,2’(rH)-naftalen/ (1,45 g).

1H NMR (CDCI3, 200 MHz) δ: 0,23 (s, 9H, SiMe3), 1,93 (t, J=7 Hz, 2CH2), 2,95 (t, J=7 Hz, 2H, CH2), 4,02 (s, 4H, OCH2CH2O), 7,03 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,17 (s, 1H, Ar), 7,21 (d, J=8 Hz, 1H, Ar).

C. 7’-Etynylo-3 ’,4’-dihydrospiro/1,3-dioksolano-2,2’(1’H)-naftalen/

Roztwór 3’, 4’-dihydro-7’/2-(trimetylosililo)etynylo/spiro/1,3dioksolano -2,2’(1’H)-naftalenu/ (1,45 g, 5,02 mmoli) i zawieszonego K2CO 3 (0,50 g) w metanolu (20 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Następnie roztwór przesączono i zatężono pod próżnią. Pozostałość absorbowano na żelu krzemionkowym (2 g) i oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym (11 g) eluując mieszaniną eteru etylowego: heksanu (1:9) i otrzymano 7’-etynylo-3’4’-dihydrospiro/1,3-dioksolano-2,2’(1’H)-naftalen/ w postaci stałej substancji (0,85 g).

1H NMR (CDCI3,200 MHz) δ: 1,94 (t, J=7 Hz, 2H, CH2), 2,95 (s, 2H, CH2), 2,98 (t, J=7 Hz, 2H, CH2), 3,01 (s, 1H, etynyl H), 4,02 (s 4H, OCH2CH2O), 7,07 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,19 (s, 1H, Ar) 7,24 (d, J=8 Hz, 1H, Ar).

D. 7-Etynylo-2-tetralon

Roztwór 7’-etynylo-3’,4’-dihydrospiro/l,3-dioksolano-2,2’(rH)-naftalenu/ (0,85 g, 3,9 mmola) w THF (15 ml) i 1N HCl (5 ml) mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Następnie dodano stężony HCl (2 x 0,5 ml) w dwóch porcjach w odstępie 2 godzin. Po mieszaniu przez dalsze 2 godziny, roztwór rozcieńczono eterem etylowym, fazę wodną oddzielono i roztwór wysuszono (MgSOą) i zatężono pod próżnią. Pozostałość oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym (15 g), eluując mieszaniną eteru etylowego: heksanu (1:9—> 1:4) i otrzymano 7-etynylo-2-tetralon w postaci stałej substancji (0,31 g).

1H NMR (CDCI3,200 MHZ) δ: 2,54 (t, J=7 Hz, 2H, CH2), 3,05 (s, 1H, etynyl H), 3,06 (t, J=7 Hz, 2H, CH2), 3,56 (s, 2H, CH2), 7,18 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,26 (s, 1H, Ar), 7,34 (d, J=8 Hz, 1H, Ar).

Przykład. I. 3-Amino-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobenzo[f]chinazolino-8-sulfonamid

A. Chlorek 3-amino-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-o-8-sulfonylu

Kwas chlorosulfonowy (25 ml, Aldrich), ochłodzony do 5°C w lodzie, mieszano podczas jego dodawania do 3-amino-1,2,5, 6-tetrahydro-1-okso-benzo[f]chinazoliny (5g, 0,025 mola) znajdującej się w zlewce zanurzonej w łaźni lodowej. Roztwór usunięto z łaźni lodowej, mieszano przez dalsze 20 minut,· następnie wylano na lód (1000 g). Stały produkt usunięto przez filtrację, przemyto wodą i wysuszono w wysokiej próżni w temperaturze pokojowej. Chlorek sulfonylu stosowano bez dalszego oczyszczania.

B. 3-amino-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobenzo[f]chinazolino-8-sulfonamid

Chlorek 3-amino-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobenzo[f]chinazolino-8-sulfonylu (1g) ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną ze stężonym (s.g. = 0,9) wodnym roztworem amoniaku (10 ml) przez 10 minut. Roztwór pozostawiono do ochłodzenia do temperatury pokojowej, dodano wodę (10 ml), złotawą stałą substancję usunięto przez filtrację, przemyto dobrze wodą, niewielką ilością etanolu, następnie wysuszono w temperaturze 60^C)C pod próżnią, otrzymując sulfonamid (0,703 g, 76%).

*HNMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 2,55-2,62 (m, 2H, ArCH^), 2,80-2,87 (m, 2H, ArCH2), 6,80 (br s, 2H, NH2), 7,16 (s, 2H, NH2), 7,54-7,59 (m, 2H, Ar), 8,56 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 11,02 (br s, 1H, NH). Widmo masowe (CI): (M+1, 100%).

Przykład II. Kwas N-(4-((3-amino-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-8ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy

A. N-(4-((3-amino-l ,2,5,6-t2tra6ydro-l-oksobekzo[f|chiI[fzolIn-8-yIn)s-llfonamido)benzoilo)-L-glutaminian dietylu

169 927

Ester dietylowy kwasu N-^-aminobenzoiloj-L-gIutaminowego (3,2 g, 0,0i mola) (Aldrich) i chlorek 3-amino-1,2,5,6-tetraWydro-1-wkso0enzo[f]hhinazolino-8-sulfonylu (0,62 g, 0,002 mola) stopiono w temperaturze i50°C, aż do otrzymania przezroczystego stopu (~i0 minut). Roztwór surowego produktu w chlorku metylenu poddano chromatografii na krzemionce, eluując metanolem: chlorkiem metylenu (i:4). Frakcje zawierające produkt odparowano, pozostałość krystalizowano z etanolu i suszono w wysokiej próżni, otrzymując ester dietylowy (0,48 g, 40,2% w stosunku do chlorku sulfonylu.

iH NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: i,00-i,2 (pokrywający się t, 6H, CH 2CH 3), i ,88-2,i5 (m, 2H, glu CH2), 2,32-2,45 (m, 2H, glu CH2), 2,45-2,60 (m, 2H, ArCH2), 2,72-2,86 (m, 2H, A1CH2), 3,92-4,i2 (pokrywający się q, 4H, CH2CH3), 4,26-4,ii (m, iH, glu, CH), 6,66-7,00 (br s, 2H, NH2), 7,i6 (d, J=8,6 Hz, 2H, Ar), 7,52-7,63 (m, 2H, Ar), 7,7i (d, J=8,6 Hz, iH, Ar), 8,54 (d, J=7,2 Hz, iH, gluNH), 8,54 (d, J=9 Hz, iH, Ar), i0,55 (br s, iH, SO2NH), ii,03 (br s, iH, NH2).

Analiza dla C28H31N5O8S:

obliczono: C 56,27, H5.23, Nii,72, S 5,36;

znaleziono: C 56,i9, H 5,24, NI 1,63, S 5,4L

B. Kwas N-(4-((3-amino-i,2,n,6-tetraWcdro-i-oksobenzo[f]chinazolin-8-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy.

N-(4-((3-amino-i,2,5,6-tetrahydro-i-oksobenzo[f|chin:azolin-8-ylo)sulfonamido)benzo ilo)-L-glutaminian dietylu (0,i5 g, 7,6 mmola) rozpuszczono w mieszaninie 2N NaOH (3 ml) i etanolu (6 ml) i roztwór przetrzymywano w temperaturze pokojowej przez i4 godzin. Etanol odparowano i pH roztworu doprowadzono do wartości 2 za pomocą iN HCl. Stałą substancję zebrano przez filtrację, przemyto wodą i wysuszono w temperaturze 60°C pod próżnią. Produkt krystalizowano raz z etanolu otrzymując białą stałą substancję (0,i2 g, 85%).

Ή NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: i,75-2,i8 (m, 2H, glu CH2), 2,20-2,40 (m, 2H, glu CH2), 2,54-2,64 (m, 2H, ArCH2), 2,70-2,89 (m, 2H, ArCH2), 4,23-4,40 (m, iH, glu CH), 6,70-7,08 (br s, 2H, NH), 7,i6 (d, J=8,64 Hz, 2H, Ar), 7,56-7,6i (m, 2H, Ar), 7,72 (d, J=8,63 Hz, 2H, Ar), 8,42 (d, J=7,8i Hz, iH, gluNH), 8,54 (d, J=8,99 Hz, iH, Ar), ^0,55 (s, iH, SO 2NH), i0,9i-ii,24 (br s, iH, NH2), ii 98-i2,63 (y br s, 2H, CO2H), wykazuje obecność wody i EtOH.

Analiza dla C24H23NnO^S.3/5H2O.-i/5EtOH: obliczono: C 52,i9, H4,56, N i2,47, S5,7i; znaleziono: C52,24, H4,61 , N12 51 , S 5,76.

Podobna reakcja N-(4-(prwp-2-ynyloamino0enzoilo)-L-alutaminianu dietylu (T.R. Jones i in., patent Stanów Zjednoczonych Ameryki 45646i6, i986) z chlorkiem 3-amino-i,2,5,6-tetraWydro-i-okso0enzo[f]chinazolino-8-sulfonylu i następnie hydroliza diestrowego związku pośredniego dała kwas N-(4-(((3-amino-1,2,5,6-tetrαhcdro-1-wkso0enzo[f]chmαzolin-8-ylo)sulfonylo(prop-2-cnylo)amino)benzoilo)-L-alutaminowy (8,3% z chlorku sulfonylu) iH NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: i,82-2,20 (m, 2H, glu CH2), 2,30-2,38 (m, 2H, glu CH2), 2,n6-2,6n (m, 2H, ArCH2), 2,83-2,87 (m, 2H, ArCH2), 3,23 (t, J=2 Hz, iH, propynyl CH), 4,34-4,40 (m, iH, glu CH), 4,53 (d, J=2 Hz, 2H, propynyl CH22 H (br s, 2H, NH2), 7,29 (d, J=8,6 Hz, 2H, Ar), 7,37 (dd, J=2,5 Hz, 8,6 Hz, iH, Ar), 7,45 (d, J=2,5 Hz, 1H, Ar) , 7,83 (d, J=8,6 Hz, 2H, Ar), 8,56 (d, J=8,6 Hz, iH, Ar), 8,64 (d, J=7,8 Hz, iH, gluNH), i0,94-ii,56 (y br s, iH, NH2), ii,80-i2,90 (y br s, iH, CO2H), wykazuje obecność H2O.

Analiza dla C27H 25N 5O 8S.23/i0H 2O: obliczono: C 52,22, H4,80, N Ii,28; znaleziono: C 52,30, H4,6i, NIiii4.

Przykład III. Kwas N-(4-((3-amino-9-bromo-i,2-dihydro-i-oksobenzo[f]chinazolin-8-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-alutaminowy otrzymano z 3-amino-9-bromo-i,2-dihydroi-oksobenzochinazoliny (6 g), zasadniczo jak opisano powyżej. Wydajności i dane analityczne produktu i związków pośrednich są podane poniżej.

A. Chlorek 3-agmw-9-bromo-1,2-dihcdro-1-oksobenzo[f]chinazolinw-8-sulfonylu (3g, 36%). iH NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 7,59 (d, J=9 Hz, iH, Ar), 8,44 (d, J=8 Hz, iH, Ar),

8,54 (s, iH, Ar), 9,75 (s, iH, Ar), ii,30 (y br s, H2O + wymienny H).

169 927

B. N-(4-((amino-9-bromo-1,2-<di^ydr<^^ 1 -oksobenzo[f]chinazolin-8-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminian dietylu (0,91 g, 17%, temperatura topnienia >240°C.

^fH NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 1,08 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3) 1,11 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,72-2,12 (m, 2H, glu-CH2), 2,34 (t, J=7 Hz, glu-CH2), 3,97 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,02 (q, 3=1 Hz, 2H, ester CH2), 4,24-4,36 (m, 1H, glu-CH), 6,84 (br s, 2H, NH2), 7,17 (d, 3=9 Hz, 2H, Ar), 7,39 (d, 3=9 Hz, 1H, Ar), 7,66 (d, J=8 Hz, 2H, Ar), 8,26 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 8,47 (d, J= 7 Hz, 1H, NH), 8,76 (s, 1H, Ar), 9,95 (s, 1H, Ar), 11,01 (s, 1H, NH), 11,39 (s,

IH, NH).

Analiza C28H28BrN5O8S.1/2 H 2O:

obliczono: C 49,20, H4,28, Br 11,69, N 10,25, S 4,69;

znaleziono: C49,19, H4,23, Br 11,66, N 10,30, S4,71.

C. Kwas N-(4-((3-amino-9-bromo-1,2-dihydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-8-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy (0,68 g, 79%). Temperatura topnienia 238-242°C.

Ή NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 1,72-2,07 (m, 2H, glu-CH2), 2,25 (t, J= 7 Hz, glu-CH2, 4,24-4,29 (m, 1H, glu-CH), 6,65 (br s, 2H, NH2) 7,17 (d, 3=9 Hz, 2H, Ar), 7,39 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,67 (d, 3=9 Hz, 2H, Ar), 8,26 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 8,36 (d, J=8 Hz, 1H, NH), 8,78 (s, 1H, Ar), 9,95 (s, 1H, Ar), 11,00 (s, 1H, NH), 11,41 (v br s, 1H, NH), 12,30 (v br s, 2H, OH).

Analiza dla C24H20BrN5OsS.7/5 H2O: obliczono: C 44,79, H 3,37, N 10,88; znaleziono: C 44,88, HH354, N 10,75.

Przykład IV. KwasN-(4-((3-amino-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-9ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy

A. N-(4-(((3-amino-8-bromo-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)sulfonylo)amino)benzoilo)-L-glutaminian dietylu

Chlorek 3-anuno-8-bromo-5,6-dihydrobenzo[f]chmazolin-1(2H)-ono-9-sulfonylu (2,00 g, 4,50 mmola) i ester dietylowy kwasu N-(4-aminobenzoilo)-l-glutaminowego (7,26 g, 22,5 mmoli) (Aldrich) umieszczono razem w rurce do badania i stopiono w temperaturze 175°C. Mieszaninę ogrzewano przez godzinę 20 minut, ochłodzoną pozostałość zawieszono w chlorku metylenu i przesączono w celu usunięcia nierozpuszczonej stałej substancji. Przesącz odparowano do sucha i pozostałość poddano chromatografii na aparacie Waters Prep 500 (kolumna z krzemionką, eluowanie metanolem/chlorkiem metylenu (1:24)). Połączone frakcje zawierające produkt odparowano i pozostałość wysuszono w wysokiej próżni. Stałą substancję zawieszono we wrzącym etanolu (900 ml), zawiesinę ochłodzono do temperatury pokojowej i przesączono, otrzymując N-(4-(((3-amino-8-bromo-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)sulfonylo)amino)benzoi.lo)-L-glutaminian dietylu (0,794 g, 26%). Temperatura topnienia >250°C.

Ή NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 1,12 (t, J= 7 Hz, 3H, ester-CH3), 1,14 (t, 3=7 Hz, 3H, ester-CH3), 1,89-2,09 (m, 2H, glu-CH2), 2,37 (t, J= 7 Hz, 2H, glu-CH2), 2,48-2,59 (m, 2H, Ar CH 2) 2,77-2,85 (m, 2H, Ar CH 2), 3,99 (q, 3=1 Hz, 2H, ester CH 2), 4,05 (q, 3=1 Hz, 2H, ester CH2), 4,29-4,40 (m, 1H, glu-CH), 6,84 (br s, 2H, NH2), 7,14 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,54 (s, 1H, Ar), 7,69 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 8,48 (d, J=8 Hz, 1H, NH), 9,37 (s, 1H, Ar), 10,87 (br s, 1H, NH),

II, 04 (br s, 1H, NH).

Analiza C28H30BrN5O8S: 1/4H2O:

obliczono: C49,38, H4,51, Br 11,73, N 10,20, S4,71; znaleziono: C 49,33, H4,40, Br 11,79, N 10,20, S 4,74.

B. N-(4-(((3-amino~1,2,5,6-tetrahydro-1 -oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)sulfonylo)amino)benzoilo)-L-glutaminian dietylu

N-(4-(((3-amino-8-bromo-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)sulfonylo )amino)benzoilo)-L-glutaminian dietylu (0,3 g, 0,44 mmola) rozpuszczono we wrzącym etanolu (250 ml), roztwór ochłodzono do temperatury pokojowej i dodano 10% palladu na węglu (0,20 g). Mieszaninę wytrząsano w atmosferze wodoru przez 35 godzin. Do mieszaniny reakcyjnej dodano dalsze 10% palladu na węglu (0,20 g) i następnie mieszaninę reakcyjną wytrząsano w atmosferze wodoru przez dalsze 15 godzin. Dodano etanol (750 ml), mieszaninę reakcyjną ogrzano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną i przesączono na gorąco przez celit. Dodano wodę

169 927 (33 ml) i roztwór zobojętniono wodorotlenkiem amonu. Rozpuszczalnik usunięto pod próżnią, stałą substancję zawieszono w wodzie i mieszaninę zobojętniono rozcieńczonym wodorotlenkiem amonu i rozcieńczonym kwasem octowym. Uzyskaną stałą substancję zebrano przez filtrację i wysuszono na powietrzu. Surowy produkt przepuszczano przez żel krzemionkowy, eluując metanolem: chlorkiem metylenu. Połączone frakcje zawierające produkt odparowano i stałą pozostałość zawieszono w małej ilości metanolu, przesączono i wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując diester (0,095 g).

iH NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 1,12 (t, J=7 Hz, 3H, CH3), 1,14 (t, J=7 Hz, 3H, CH3), 1,85-2,15 (m, 2H, glu-CH2), 2,38 (t, J=7 Hz, 2H, glu-CHż), 2,48-2,61 (m, 2H, Ar CH 2), 2,75-2,87 (m, 2H, Ar CH2), 4,00 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,06 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,28-4,42 (n, 1H, glu-CH), 6,78 (br s, 2H, NH2), 7,16 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,27 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,46 (dd, J=8, 2 Hz, 1H, Ar), 7,70 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 8,52 (d, J=7 Hz, 1H, glu-NH), 9,06 (d, J=2 Hz, 1H, Ar), 10,66 (br s, 1H, SO2NH), 11,03 (br s, 1H, NH2).

Analiza C 28H 31N 5O 8S:

obliczono: C 56,27, H5,23, N 11,72;

znaleziono: C 56,35, H 5,27, N 11,62.

C. Kwas N-(4-((3-amino-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobenko[f]chinakolia-9-ylo)sulfonamido)beakoilo)-L-glutamiaowy (0,043 g, 52%) otrzymano przez hydrolizę wspomnianego wyżej diestru (0,088 g, 0,15 mmola) w wodorotlenku sodu, jak opisano powyżej.

Ή NMR (DMSO-dó, 200 MHz) δ: 1,74-2,16 (m, 2H, glu CH2), 2,29 (t, J=7 Hz, 2H, glu CH2), 2,48-2,60 (m, 2H, ArCH2), 2,72-2,86 (m, 2H, ArCH2), 4,23-4,38 (m, 1H, glu CH), 6,78 (br s, 2H, NH2), 7,16 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,26(d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,45 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar) 7,70 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 8,42 (br d, J= 8 Hz, 1H, glu NH), 9,06 (d, J= 2 Hz, 1H, Ar), 10,65 (br s, 1H, SO2NH), 11,05 (br s, 1H, NH2), 12,33 (br s, 2H, CO 2H).

Analiza C 24H23N 5O 8S.H2O: obliczono: C 51,52, H4,50, N 12,52; znaleziono: C 51,47, H4,51, N 12,52.

Przykład V. Kwas N-(4-(((3-amiao-1,2-aihyaro-1-oksobeazo[f]chinakolia-9ylo)amiao)sulfonylo)benkoilo)-L-glutαmiaowy

A. 4-(((3-Amino-1,2-aihydro-1-oksobenzo[ffchinazolin-9-ylo)amino)sulfoaylo)benkoesaa metylu.

Do roztworu N-(9-amino-1,2-dihydro-1-oksobenzo[f]chinakolin-3-ylo)piwalinamiau (1,38 g, 4,5 mmoli) w suchej pirydynie (10 ml) dodano kwas 4-(chlorosulfonylo)benzoesowy (5,0 g, 22,6 mmoli) w temperaturze pokojowej w atmosferze azotu. Po mieszaniu przez 3 dni, pirydynę usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostawiając gumowatą brązową pozostałość, którą zawieszono w wodzie (30 ml), przesączono, przemyto wodą i wysuszono otrzymując kwas 4-((N-(1,2-aihydro-1-oksobenko[f]chiaakolia-3-ylo)piwaliaamid)-9-ylo)amiao)sulfonylo)beakoesowy (1,65 g).

Wskazany powyżej' materiał rozpuszczono w bezwodnym 5% HCl/metanolu (30 ml) i ogrzewano do 50°C z mieszaniem w atmosferze azotu przez 27 godzin. Po ochłodzeniu, utworzył się drobny osad, który następnie odsączono, przemyto metanolem i wysuszono otrzymując 4-(((3-amino-1,2-dihydro- 1 -oksobenko[f]chiaakolia-9-ylo)-amiao)sulfonylo)benkoesaametylu w postaci białawej stałej substancji (0,41 g, 27%).

1h NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 3,82 (s, 3H, OCH3), 7,36 (dd, J=8,8, 2 Hz, 1H, Ar), 7,39 (d, J=8,8 Hz, 1H, Ar), 7,90 (d, J=8,8 Hz, 1H, Ar), 7,98-8,11 (m, 6H, Ar), 8,17 (d, J=9,1 Hz, 1H, Ar), 9,33 (d, J=2 Hz, 1H, Ar) 11,00 (br s, 1H, NH).

Analiza C 20H 16N4O5S.3/5 CH3OH:

obliczono: C 51,53, H4,07, Cl 7,38, N 11,67, S 6,68; znaleziono: C 51,28 H 3,80 Cl 7,65 N 11,90, S 6,75.

B. Kwas 4-(((3-amino-1,2-dihydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)-amiao)solfoaylo)beazoesowy

Roztwór 4-(((3-amino-1,2-dihydro-1 -oksobeazo[f]chinazolia-9-ylo)amino)sulfoaylo)beazoesanu metylu (0,54 g, 1,2 mmola) w 0,1 N NaOH (30 ml) mieszano w temperaturze pokojowej w

169 927 atmosferze azotu przez i9 godzin. Po upływie tego czasu roztwór zakwaszono (pH 4) za pomocą i N HCl, aby spowodować wytrącenie produktu, który odsączono otrzymując kwas 4-(((3amino-1,2-di hydro-1 -oksdUencd[f]chinacolin-9-ylo)amino)sulfonylo)-Uencoesowy w postaci jasnobrązowej stałej substancji (0,46 g, 86%).

iH NMR (DMSO-O6, 200 MHz) δ: 7,28 (d, J=8,9 Hz, 1H, Ar), 7,30 (dd, J=8,3,2 Hz, 1H, Ar), 7,37 (br s, 2H, NH2), 7,82 (O, J=8,6 Hz, 1H, Ar), 7,95-8,06 (m, 5H, Ar), 9,38 (O, J=2 Hz, 1H, Ar), 10,85 (s, 1H, NH).

Analiza dla C19H14N4 O5.4/5-HC1.11/10H2 O: obliczono: C 49,68, H3,73, N 12,20; znaleziono: C 49,61, H 3,78, N 12,30

C. N-(4-(((3-amino-1,2-Oihydoo-1-oksobenzo[f]ahinazolin-9-ylo)-amino)sulfonyld)benzoilo)-L-glutaminian dietylu

Do roztworu estru Oietylowego kwasu L-glutaminowego (0,81 g, 4,0 mmole) i kwasu 4-(((3-amind-1,2-OihyOod-1-dksdbencd[f]ahmacdlin-9-ylo)amino)sulfonylo)benzoesowegd (0,43 g, 0,9 mmola) w suchym dimetyloformamidzie (20 ml) OoOano monohydrat 1-hyOroksyUencdtriacdlu (0,43 g, 3,2 mmola) i diaykldheksylokaoUddiimiO (0,66 g, 3,2 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej w atmosferze azotu przez 20 godzin, po czym rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość krystalizowano kolejno z mieszaniny chlorku metylenu: metanolu (9:1 i metanolu, otrzymując N-(4-(((3-amino-1,2-OihyOrd-1-oksobenzo[f]chinazd>lin-9-ylo)amino)sulfonylo)Uencoilo)-L-glutaminian Oietylu w postaci białej stałej substancji (0,215 g, 36%).

iH NMR (DMSO-O6, 300 MHz) δ: 1,2 (t, J= 7 Hz, 3H, ester-CH3), 1,15 (t, J=7 Hz, 3H, ester-CH3), 1,89-2,13 (m, 2H, glu-CH2), 2,40 (t, J= 7,6 Hz, 2H, glu-CH2), 4,00 (q, J=7 Hz, 2H, ester-CH2), 4,08 (q, J=6 Hz, 2H, ester-CH2), 6,55 (br s, 2H, NH2), 7,16 (d, J= 8,9 Hz, 1H, Ar), 7,23 Odd, J=8,7,2 Η,, 1H , Ar) , 7,73 Od, J=8,7 Η, , 1H , Ar) , 7,89 (d, J=8,9 Hz, IH, Ar), 7,96 (m, 4H, Ar), 8,89 (d J=7,4 Hz, 1H, glu-NH), 9,48 (d, J=2 Hz, 1H, Ζογ,ι W,67 , SilH, HH)i1ł,0 8 , s, 1H, NH).

Analiza dla C28H29N 5 O sS:

obliczono: C 56,46, H4,91, N 11,76, S a,33;

znaleziono: C 56,45, H4,94, N 11,75, S 5,43.

D. Kwas N-(4-(((3-amino-1,2-Oihydro-1 -oksobenco[f]chinacolin-9-ylor-amind)sulfonylo)bencoilo)-L-glutaminowy.

Roztwór N-(4-(((3-amino-1,2-dihydro-1-oksdbenzo[f]chinazolin-9-ylo)-amino)sulfonylo)Uenzoild)-L-glutaminianu dietylu (0,165 g, 0,3 mmola) w 1 N NaOH (12 ml) mieszano i ogrzewano do 50°C w atmosferze azotu przez 24 godziny. Po ochłodzeniu, roztwór zakwaszono (pH 3) stężonym HCl, aby spowodować wytrącenie produktu, który przesączono, przemyto wodą i wysuszono, otrzymując kwas N-(4-(((3-amino-1,2-dihyOoo-1-oksobencd[f]chinacolin-9-yld)-aminorsulfdnyld)-L-glutaminowy jako białawą stałą substancję (0,18 g, 99%).

1H NMR (DMSO-06,300 MHz) δ: 1,81-2,13 (m, 2H, glu-CH2), 2,32 (t, J=6,6 Hz, 2H, glu-CH2), 4,34 (m, 1H, glu-CH), 6,58 (br s 2H, NH2), 6,16 (O, J=8,9 Hz, 1H, Ar), 6,22 (OO, J=8,6, 2Hz, 1H, Ar), 7,74 (d, J= 8,6 Hz, 1H, Ar), 7,89 (d, J=9,0 Hz, 1H, Ar), 7,96 (m, 4H, Ar-), 8,^8 (d, J=6,6 Hz, 1H, glu-NH), 9,49 (d, J=2 Hz, 1H, Ar), 10,68 (s, 1H, NH), 11,1 (br s , 1H, NH, , 12,, (br s, 2H, (CO2H2).

Analiza Ola C24H21N 5O sS.3 H2O:

obliczono: C 48,56, H4,58, N 11,80, S 5,40;

znaleziono C 48,38, H4,30, NH,69, S 5,34.

Przykład VI.,Kwas N-4-((1,2,5,6-tetrαhlyOrd-3-mety]o- 1-oksobenzo[f]chiΓ>;czolϋn-9ylo)sulfdnamido)Uenzoilo)-L-glutaminowy

A. N-(4-((l,2,5,6-t2tr26lycaΌ-3-mdtylo-layktobdnzoU']uhina7Όlm-9-yln)sulfonsmi0n)benzoL· lo)-L-glutaminian Oietylu

Ester dietylowy kwasu N-(4-aminobencoilo)-L-glutaminowy (6,06 g, 0,0188 mola) (Aldrich) i chlorek 1,2,5,6-tetrahyOrd-3-metylo-1-oksobencd[f]chinazolino-9-sulfonylu (5,84 g, 0,0188) rozpuszczono w pirydynie (55 ml) i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 3,5 ggddinn.Pi^Γoydyn usunńęto ppoł próżnią, podottałotć ρ^ι^ϊο wwolo i różową stałą s uubtta^nję

169 927 zebrano przez filtrację. Surowy produkt wysuszono pod wysoką próżnią, następnie poddano chromatografii na aparacie Waters Prep 500 (wsad krzemionkowy, eluowanie metanolem: chlorkiem metylenu (1:4)). Produkt krystalizowano z etanolu i suszono pod wysoką próżnią, otrzymując ester dietylowy (5,68 g, 51%).

1]H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,14 (t, J=7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,16 (t, J=7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,88-2,13 (m, 2H, glu CH2), 2,32 (s, 3H, CH3), 2,40 (t, J=8 Hz, 2H, glu CH2), 2,71 (m, 2H, Ar CH2), 2,89 (m, 2H, Ar-CHO. 4,02 (q, J=7 Hz, 2H, CH2CH3), 4,08 (q, J=7 Hz, 2H, CH2.CH3), 4,33-4,41 (m, 1H, CH), 7,20 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,39 (d, 1H, J=8 Hz, Ar), 7,62(dd, J=8, 2 Hz, Ar), 7,73 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 8,55 (d, J=8 Hz, 1H, gluNH), 9,21 (d, 2 Ife, )H,Aj)) 10,74 (s, 1H, NH), 12,72 (s, 1H, NH).

Analiza dla C29H32N4OgS. 1/10EtOH: 3/4 H2O: obliczono: C 57,05, H5,59, N9,11, S5,22; znaleziono: C 57,08, H5,58, N9,15, S 5,17.

B. Kwas N-(4)((-,2,5,1-tetr6iydro-3-me-y-o-l-oksobenzo[f]chinazolm-9-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy

N-54-551,2,5,6-tetrahy(r:Ό-3-metylo-1-okzobeczo[f]chinoholm-9-ylo)sulfecomido)beczoilo^L-glutaminian dietylu (4,53 g, 7,6 mmoli) rozpuszczono w N-NaOH (64 ml) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Wartość pH roztworu doprowadzono do 3,00 za pomocą 1 N HCl, stałą substancję zebrano przez filtrację, przemyto wodą i wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując produkt w postaci białawej stałej substancji (3,94 g, 96%).

^rHNMR (DMSO-de, 300 MHz) δ: 1,84-1,96 (m, 1H, glu CH), 2,00-2,10 (m, 1H, glu CH), 2,32 (s, 3H, CH3, nałożony na t, 2H, glu CH2), 2,71 (m, 2H , Ar CH2) , 2,89 (m, 2H, Ar 4,28-4,36 (m, 1H, glu CH), 7,20 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,39 (d, J=8 HZz 1H, Ar), 7,62 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 7,74 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 8,44 (d, J=8 Hz, 1H, gluNH), 9,21 (d, J=2 Hz, 1H, Ar), 10,73 (s, 1H, SO2NH), 12,36 (br s, 2H, CO2H), 12,72 (br s, 1H, NH).

Analiza dla C6tH64N4O8S.3/2H6O: obliczono: C 52,91, H4,79, N 9,87, S 5,65;

9calezioco: C 52,98, H 4,78, N 9,87, S 5,58.

Zasadniczo podobna sekwencja πο^ϊ z 9oztosowociem 4-5metyloamico)ben9oiloglutamini(nu dietylu (T.R. Jones i in., brytyjskie zgłoszenie patentowe GB 2175 903A, 1986), (2,0 g, 6,0 mmoli) z chlorkiem sulfonylu (2,0 g, 6,4 mmoli) dda odpowiedni produkt zawierający podstawnik metylowy przy atomie azotu grupy sulfonamidowej. Dane produktu i związku pośredniego są podane poniżej.

N-(4-metylo((1,2,5,6-tetrahydro-3-mety]o-1-onzoben9o[f]chinazolic-9-ylo)sulfocylo) amine)benzoilo)-L-glutamiciac dietylu (1,47 g, 40%), temperatura topnienia 168-170,5°C.

Ή NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 1,14 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,16 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,85-2,20 (m, 2H, glu CH2), 2,30 (s, 3H, c3-CH3), 2,42 (t, J=7 Hz, 2H, glu CH2), 2,67-2,80 (m, 2H, ArCH2), 2,85-2,99 (m, 2H, ArCH2), 3,17 (s, 3H, NCH3), 4,02 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,08 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,32-4,48 (m, 1H, glu CH), 7,22 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 7,28 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,38 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,82 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 8,73 (d, J=7 Hz, 1H, gluNH), 9,00 (d, J=2 Hz, 1H, Ar), 12,68 (br s, 1H, NH2).

Analiza- dlaC30H34N4O8S.1/3H2O: oblic9oco.· C 58,44, H5,67, N 9,09, S 5 ,20; znaleziono: C 58,46, H 5,65, N 9,09 , SS ,59.

Kwas N-54-((1,2,5,6-tetrahydro-3-metylo-1-oksoben9o[f|chinazolin-9-yio)su[eony]e)amino)beczoilo)-L-glutomicewy (0,89 g, 99% z diestru (1,0 g, 1,6 mmola;

1H NMR (DMSO-dó, 200 MHz) δ: 1,80-2,20 (m, 2H, glu CH2), 2,31 (s, 3H, c3-CH3), 2,34 (t, J=7 Hz, 2H, glu CH2), 2,67-2,80 (m, 2H, ArCH2), 2,85-2,98 (m, 2H, ArCH2), 3,17 (s, 3H, NCH3), 4,30-4,43 (m, 1H, glu CH), 7,22 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 7,28 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,38 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,83 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 8,62 (d, J=8 Hz, 1H, glu NH), 9,00 (d, J=2 Hz, 1H, Ar) 12,39 (br s, 1H, NH2), 12,69 (br s, 1H, NH2).

Analiza dla C66H66N4O8S.3/6H6O:

obliczono: C 56,04, H4,76, N 10,05, S 5,^7^;

znaleziono: C 56,04, H4,66, N 10,0,, S 5,68.

169 927

Przykład VII. 1,2,5,6-Tetrahydro-3-metylo-4’-nitro-1-oksobenzo[f]chinazolino-9sulfoanilid

Chlorek 1,2,5,6-tetrahydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolino-9-sulfonylu (0,53 g, 1,7 mmola) i p-nitroanilinę (0,25 g, 1,8 ramola) (Eastman) rozpuszczono w pirydynie (5 ml) i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Pirydynę usunięto pod próżnią i pozostałość przemyto wodą. Wysuszoną stałą substancję poddano chromatografii na krzemionce (80 g), eluując metanolem-chlorkiem metylenu (1:19). Frakcje zawierające produkt odparowano do sucha, pozostałość poddano działaniu ultradźwięków z eterem (75 ml) i przesączono. Beżową stałą substancję przemyto eterem i wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując 1,2,5,6-tetrahydro-3-metylo-4’-nitro-1-oksobenzo[f]chinazolino-9-sulfoanilid (0,18 g, 26%), temperatura topnienia >240°C.

*H NMR (DMSO-dó, 300 MHz) δ: 2,32 (s, 3H, CH), 2,72 (m, 2H, Ar CH 2), 2,91 (m, 2H, ArCH2), 7,33 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,43 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,69 (dd, J=2,8 Hz, TA), 8,13 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 9,23 (d, J=2 Hz, 1H, Ar), 11,13 (s, 1H, NH), 12,73 (s, 1H, CHi).

Analiza dla C19H16N4O5S. 13/25 H2O: obliczono: C 54,10, H4,07, N 13,28, S 7,60; znaleziono: C 54,07, H3,98, N 13,19, S 7,66.

Podobnie wytwarzano następujące związki przez reakcję odpowiedniej aromatycznej aminy ze wspomnianym wyżej chlorkiem benzochinazolino-9-sulfonylu:

4’-Acetylo-1,2,5,6-tetrahydroon-metylo-1-ok(obenzo[f]chinazolino-9-sulfoanilid (0,172 g, 25%), temperatura topnienia > 240°C, *H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 2,32 (s, 3H, CH3), 2,46 (s, 3H, CH3), 2,71 (t, J=8 Hz, 2H, Ar CH2), 2,90 (t, J=8 Hz, 2H, Ar CH2), 7,24 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,41 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,65 (dd, J=8 Hz, 2Hz, Ar), 7,83 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 9,21 (d, 3=2 Hz, 1H, Ar), 10,93 (s, 1H, NH), 12,73 (s, 1H, NH).

Analiza dla C21H19N 3O4S.8/25: EtOH 3/20 H 2O: obliczono: C 60,88, H5,01, N9,84, S 7,^^; znaleziono: C 60,96, H 4,85 , N 9,69 , S 7,45.

4’-Fluoro-1,2,5,0-tet)ahydro-3-metylo-1-ok(obenzo[f]chinazolino-9-sulfoanilId (0,07 g, 11%), temperatura topnienia >260°C.

1h NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 2,30 (s, 3H, CH3), 2,65-2,73 (m, 2H, Ar CH2), 2,83-2,92 (m, 2H, Ar CH2), 7,00-7,15 (m, 4H, Ar), 7,34 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,49 (dd, J=2,8 Hz, 1H, Ar), 9,08 (d, J=2 Hz, 1H, Ar), 10,25 (s, 1H, NH), 12,68 (br s, 1H, NH).

Analiza dla C19H16FN 3O3S.H2O:

obliczono: 0 56,,7, H4.50, N 10,42, F4,71, S 7,95; znaleziono: C 56,17, HI , N 10,26, F 5,00, S 8,13.

a-((1,2,5,6-Tet)ahyd)o-n-metylo-1-oksobenzo[f]chInazolin-9-ylo)sulfonamido)benzamid (0,084 g, 6%), temperatura topnienia 190°C spieczony.

1h NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 2,32 (s, 3H, CH3), 2,71 (t, J=8 Hz, Ar CH2), 2,89 (t, J=8 Hz, 2H, Ar CH2), 7,16 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,22 (br s, 1H, NH), 7,39 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,62 (dd, J=8, 2 Hz, 1H, Ar), 7,72 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,80 (br s, 1H, NH), 9,19 (d, 3=2 Hz, 1H, Ar), 10,70 (s, 1H, NH), 12,72, (br s, 1H, NH);

Analiza dla C2oH;8NaOaS.H2O:

obliczono: C 55,07, H4/7O, N 13,08, S 7,48;

znaleziono: C 56,11, N 12,99 , S 7,43.

Przykład VIII. Kwas N-(ao((;,2,-dIhydro-n-metylo-;-ok(obenzo[f]chinazolIn-9ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy

A. N-(4-(( 1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]chin-zolin-9-ylo)sulfonamido)benzoilo)L-glutaminian dietylu.

Roztwór N-(4-((1,2,5,0-tetrahydro-3-metylo-1-ok(obenzo[f]chinazolIn-9-ylo)(ulfonamIdo)benzoilo)-L-glutaminianu dietylu (0,50 g, 0,84 mmola) w diglimie (10 ml) mieszano z 10% palladu na węglu (0,25 g) (Aldrich) w atmosferze azotu, w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 3 godziny. Roztwór rozcieńczono diglimem (20 ml), przesączono na gorąco

169 927 przez celit i zatężono pod wysoką próżnią. Uzyskaną stałą substancję zawieszono w gorącym metanolu (50 ml), mieszano przez noc w temperaturze pokojowej, przesączono i wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując N-(2-((1,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminian dietylu w postaci białej stałej substancji (0,25 g).

!h NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 1,10 (t, 3=1 Hz, 3H, ester CH3), 1,12 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,78-2,15 (m, 2H, glu CH2), 2,35 (t, J=7 Hz, 2H, glu CH2), 2,23 (s, 3H, C-CH3), 3.98 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 2,02 (q, 3=1 Hz, 2H, ester CH2), 2,35-4,39 (m, 1H, glu CH), 7,21 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,69 (d, 3=9 Hz, 1H, Ar), 7,76 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,91 (dd, J=9,2 Hz, 1H, Ar), 8,19 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 8,29 (d, 3=9 Hz, 1H, Ar), 8,51 (d, 3=1 Hz, 1H, glu NH), 10,22 (d, 3=2 Hz, 1H, Ar), 10,88 (brs, 1H,SO2NH), 12,75 (brs, 1H,NH2). Widmo masowe (CI-CH4): 595 (M+1, 22,1%).

Analiza dla C29H 30N 4O 8S:

obliczono: C 58,58, H 5,08, N 9,22, S 5,39;

znaleziono: C 58,26, H5,10, N 9,32, S 5,21.

B. Kwas Wa(4-((l,2,-dihydro-3-me3ylo-t-o0sobenzo[f]c0inazolin-0lylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy

Roztwór N-(2-((1,2,-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminianu dietylu (0,22 g, 0,37 mmola) w etanolu (3 ml) i 0,25 N NaOH (12 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 godziny. Roztwór powoli zakwaszono do pH 3 za pomocą 1N HCl i wytrącony osad odsączono, przemyto wodą i wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując kwas N-(2-(( 1,2,-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)sulfonam.ido)benzoilo)-L-glutaminowy w postaci białej stałej substancji (0,20 g).

Ή NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 1,73-2,15 (m, 2H, glu CH2), 2,27 (t, 3=1 Hz, 2H, glu CH2), 2,23 (s, 3H, CH 3), 2,22-2,36 (m, 1H, glu CH), 7,20 (d, 3=9 Hz, 2H, Ar), 7,69 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,76 (d, 3=9 Hz, 1H, Ar), 7,90 (dd, J=9,2 Hz, 1H, Ar), 8,18 (d, 3=9 Hz, 1H, Ar), 8,28 (d, 3=9 Hz, 1H, Ar), 8,39 (d, J=8 Hz, 1H, glu NH), 10,22 (d, 3=2 Hz, 1H, Ar), 10,86 (br s, 1H, SO2NH), 12,32 (br s, 2H, COH’s), 12,75 (br s, 1H, NH2);

Analiza C 25H22N4O 8S.4/5H2O:

obliczono: C 52,30, H4,30, N, 10,13, S 5,80;

znaleziono: C 52,29, H4,25, M 10,13, S 5,72.

Przykład IX. Kwas N-(2-((1,2,-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-7ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy.

A. N-(4-((l,2,-dihydro-3-metylo-etoksobenzo[fechmazolin-7-ylo)sulfonllm-do)benzoilo)-L-glutaminian dietylu

Kwas chlorosulfonowy (15 ml) poddano reakcji z 3-metylobenzo[f]chinazolin-1(2H)-onem (2,6 g, 12,2 mmoli) w taki sam sposób, jak opisano dla analogicznego związku 3-amino-1,2,5,6-tetrahydro (przykład I), otrzymując mieszaninę chlorków 1,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolino-7-, 8- i 9-sulfonylu (2,91 g).

Powyższą mieszaninę chlorków sulfonylu dodano do roztworu estru dietylowego kwasu N-(2-aminobenzoilo)-L-glutaminowego (3,85 g, 11,9 mmoli) w suchej pirydynie (30 ml) i mieszano w atmosferze azotu w temperaturze pokojowej przez 19 godzin. Po upływie tego czasu, rozpuszczalnik odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem pozostawiając gumowatą pozostałość, którą zawieszono w wodzie (100 ml) energicznie mieszając i działając ultradźwiękami, przesączono i wysuszono. Surową mieszaninę produktów poddano sześciu kolejnym operacjom rozdzielania na kolumnie chromatograficznej z żelem krzemionkowym, stosując metanol: chlorek metylenu (1:22 do 3:27) i otrzymano N-(2-((1,2,-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinaz.olin-7ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminian dietylu w postaci białawej stałej substancji (0,22 g, 3%).

n NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 1,10 (t, 3=1 Hz, 3H, ester CH3), 1,12 (t, 3=1 Hz, 3H, ester CH 3), 1,80-2,15 (m, 2H, glu-CH2), 2,35 (t, 3=1,6 Hz, 2H, glu-CH2), 2,23 (s, 3H, pir-CH3), 3.98 (q, 3=1 Hz, 2H, ester-CH2), 2,03 (q, 3=1 Hz, 2H, ester-CH2), 2,32 (m, łH, glu-CH), 7,08 (d, J=8,6 Hz, 2H, Ar), 7,62 (d, J=8,2 Hz, 2H, Ar), 7,83 (t, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 7,86 (d, J=8,6 Hz, 1H, Ar), 8,33 (d, 3=1,5 Hz, 1H, glu-NH), 8,28 (d, J=7,3 Hz, 1H, Ar), 9,06 (d, J=9,3 Hz, 1H, Ar), 10,18 (d, 3=8,6 Hz, 1H, Ar), 11,15 (br s, 1H, NH), 12,73 (br s, 1H, NH).

169 927

Analiza dla C29H 30N 4O 8S.1/4H 2O: obliczono: C 58,14, H5,13, N 9,35, S 5,35; znaleziono: C 58,12, H5,16, N 9,27, S 5,42.

B. Kwas N-(4-((1,2,-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-7-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy.

Roztwór N-(4-((1,2,-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-7-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminianu dietylu (0,16 g, 0,3 mmola) w 0,1 N NaOH (10 ml) mieszano w temperaturze pokojowej w atmosferze azotu przez 48 godzin, po czym roztwór zakwaszono (pH 3,5) kwasem octowym. Wytrącony osad zebrano, przemyto wodą i wysuszono otrzymując kwas N-(4-((1,2,-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-7-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy w postaci białawej stałej substancji (0,12 g, 86%).

¹H NMR (DMSO-dó, 2^ MHz) δ: 1,72-2,08 (m, 2H, glu-CHfe), 2,26 (t, J=2 Hz, 2H,, glu-CH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 4,18-4,35 (m, 1H, glu-CH), 7,07 (d, J=8,4 Hz, 2H, Ar), 7,63(d, J=8,3 Hz, 2H, Ar), 7,82 (t, J=7,3 Hz, 1H, Ar), 7,84 (d, J=8,9 Hz, 1H, Ar), 8,32 (m, 2H, glu-NH+Ar), 9,07 (d, J=9,3 Hz, 1H, Ar), 10,16 (d, J=8,8 Hz, 1H, Ar), 12,71 (br s, 1H, NH).

Analiza dla C 25H22N 4O 8S.7 /4H2O: obliczono: C 52,67, H4,51, N9,83; znaleziono: C 52,52, H 4,36, N 9,70.

Przykład X. Kwas N-(4-(((1,2,-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9ylo)metylo)amino -2-fluorobenzoilo)-L-glutaminowy.

A. Kwas N-(4-(((1,2,-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino)2-fluorobenzoilo)-L-glutaminian dietylu.

Do gorącego roztworu 3,9-dimetylobenzo[f]chinazolin-1(2H)-onu (2,0 g, 8,9 mmoli) w benzenie (1000 ml) w atmosferze azotu dodano N-bromosukcynoimid (NBS) (2,0 g, 11 mmoli). Roztwór mieszano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez godzinę i następnie zatężono pod próżnią, otrzymując surowy 9-bromo-metylo-3-metylobenzo[f]chinazolin-1(2H)on. Stałą substancję zawieszono w N-(4-amino-2-fluorobenzoilo)-L-glutaminianie dietylu (T.R. Jones i in., brytyjski opis patentowy GB 2175903A, 1986) (6,0 g 18 mmoli) w DMF (20 ml) i mieszano w atmosferze azotu w temperaturze 100°C przez 30 minut. Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ochłodzenia, dodano N-metylomorfolinę (1,0 ml, 9,1 mmola) (Aldrich) i roztwór zatężono pod wysoką próżnią. Pozostałość oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym, eluując chlorkiem metylenu: THF (5:1). Frakcje zawierające produkt zatężono pod próżnią do gęstej pasty, stałą substancję zawieszono w małej objętości eteru etylowego, przesączono w atmosferze azotu i wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując N-(4-(((1,2,-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino)-2-fluorobenzoilo)-L-gluta minian dietylu w postaci białej stałej substancji (2,3 g).

¹H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,15 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,18 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,87-2,13 (m, 2H, glu CH2), 2,38 (t, J=7 Hz, 2H, ester CH 2), 2,43 (s, 3H, C³-CH3), 4,02 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,09 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,34-4,44 (m, 1H, glu CH), 4,57 (d, J=6Hz, 2H, C⁹-CH2), 6,39 (dd, J=15,2 Hz, 1H, Ar), 6,53 (dd, J=9,2 Hz, 1H, Ar), 7,30 (t, J=6 Hz, 1H, ArNH), 7,44 (dd, 9,9 Hz, 1H, Ar), 7,60 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,61 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 7,88 (dd, J=7,5 Hz, 1H, glu NH), 8,01 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 8,22 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,85 (s, 1H, Ar), 12,53 (s, 1H, NH2). Widmo masowe (CI-CH4): 563 (M+1, 100%).

Analiza dla C30H31FN4O6: obliczono: C 64,05, H 5,55, N 9,96; znaleziono: C 64,14, H5,59, N 9,94.

Kwas N-(4-(((1,2,-dihydro-3-metylo- 1-oksoten7_Jc^[f]c^h^ir^^oli^r^-^ę^-^ylo)m^^tyllo)£^Tiir^c^-^2^-^:^i^c^ir^benzoilo)-L-glutaminowy.

Roztwór N-(4-(((1,2,-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino-2fluorobenzoilo)-L-glutaminian dietylu (2,3 g, 4,1 mmola) w etanolu (25 ml) i 0,2 N NaOH (100 ml) mieszano w atmosferze azotu w temperaturze pokojowej przez 3 godziny. Roztwór doprowadzono do pH 7 za pomocą 1N HCl i zmniejszono objętość pod próżnią, usuwając etanol. Produkt wytrącił się po zakwaszeniu roztworu 1N HCl do pH 3, mieszając w atmosferze azotu. Zawiesinę

169 927 mieszano przez i5 minut, przesączono w atmosferze azotu, przemyto wodą, przyciskano arkuszem lateksu w celu usunięcia nadmiaru wody i suszono pod wysoką próżnią, otrzymując kwas N-(4-(((i,2,-dihcdro-3-metylo-i-okso0enzo[f]hhinazol1n-9-ylo)metclo)amino-2-fluoroOenzoi]o)-L-alutaminowy w postaci białej stałej substancji (2,i g).

Ή NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: i,82-2,i2 (m, 2H, glu CH2), 2,29 (t, J=7 Hz, glu CH2), 2,43 (s, 3H, C³-CH3), 4,32-4,42 (m, 1H, glu CH), 4,57 (d, J=6 Hz, 2H, C-CH2), 6,39 (dd, J=i5,2 Hz, iH, Ar), 6,53 (dd, J=9,2 Hz, iH, Ar), 7,30 (t, J=6 Hz, iH, ArNH), 7,47 (dd, J=9,9 Hz, iH, Ar), 7,59 (d, J=9 Hz, iH, Ar), 7,6i (dd, J=8, 2 Hz, iH, Ar), 7,73 (t, J=7 Hz, iH, glu NH), 8,0i (d, J=8 Hz, iH, Ar), 8,22 (d, J=9 Hz, iH, Ar), 9,85 (s, iH, Ar), i2,42 (br s, 2H, CO2H’s), i2,53 (s, iH, NH2).

Analiza dla C26H23FN4Oó.3/2H2O.-I.3NaCl:

obliczono: C 56,49, H4,74, N I0,I4, CI 2,i2, Na i,37;

znaleziono: C 56,48, H4,64, N i0,20, Cl 2,0i, Na i,30.

Zasadniczo podobna sekwencja reakcji z 4-aminobenzoilo-L-alutaminianem dietylu (2,8 g, 8,7 mmola) i 4-metyloamino (Oenzoilo)-L-alutaminianem dietylu (i,4 g, 4,2 mmola) dała, po sprzęganiu każdego z 3,9-dimetylo0enzo[f]hhinazolin-i(2H)-onem (0,5 g, 2,2 mmola) poprzez pochodną bromometylową:

i) kwas N-(4-(((i ,2,-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]hhinazwlin-9-ylo)metylo)amino)0enzwilo)-L-glutαminowc i ii) kwas N-(4-((( i ,2,-dihydro-3-metylo-1 -okso0enzo[f]chmαzolin-4-ylo)metylo)metyloamino)benzoilo)-L-alutaminowy; dane tych związków i ich diestrowych związków pośrednich są podane poniżej.

i) A. N-(4-(((1,2,-dihydro-3-metclo-1-oksobenzo[f]hhinazolin-9-ylo)metylo)amino)benzoilo)-L-alutaminiαn dietylu (0,57 g, 47%);

iH NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: i,i5 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), i,i7 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH 3), i,87-2,i3 (m, 2H, glu CH2), 2,39 (t, J=7 Hz, 2H, glu CH 2), 2,43 (s, 3H, C-CH3), 4,03 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,07 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,3i-4,4i (m, iH, glu CH), 4,57 (d, J=6Hz, 2H, C⁹-CH2), 6,64 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,02 (t, J=6 Hz, iH, ArNH), 7,57-7,67 (m, 4H, Ar), 8,00 (d, J=8 Hz, iH, Ar), 8,2i (nakładający się d, J=8 Hz, 2H, Ar, glu NH), 9,85 (s, iH, Ar), i2,53 (s, iH, NH2). Widmo masowe (CI-CH4): 545 (M+i, 94,8%), 342 (i00%).

Analiza dla C 30H 32N 4O 6.1/I0H 2O: obliczono: C 65,95, H 5,94, N W,22; znaleziono: C 65,99, H 5,94, N W,22.

i) B. Kwas N-(4-(((1,2,-dihydro-3-metclo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)αmino)benzoilo)-L-glutaminian (0,48 g, 83% z diestru (0,65 g, i,02 mmola).

iH NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: i,82-2,i2 (m, 2H, glu CH2), 2,31 (t, J=7 Hz, 2H, glu CH 2), 2,43 (s, 3H, CH3), 4,28-4,38 (m, iH, glu CH), 4,57 (d, J=6 Hz, 2H, c9-CH2), 6,64 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,00 (t, J=6 Hz, iH, ArNH), 7,59 (d, J=9 Hz, iH, Ar), 7,63 (dd, J=8 Hz, 2 Hz, iH, Ar), 7,63 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 8,00 (d, J=8 Hz, iH, Ar), 8,09 (d, J=8 Hz, iH, glu NH), 8,2i (d, J=9 Hz, iH, Ar), 9,85 ( s, iH, Ar), i2,33 (br s, 2H, CO2H’s) i2,53 (s, iH, NH2).

Analiza dla C26H24N 4O6.H2O: obliczono: C 6i,65, H5,17, NI i,00, znaleziono; C 61,51, H5,0i, N Ii,05.

ii) N-(4-(((i,2,-dihydrw-3-metclo-1-okso0enzo[f]hhmazolin-4-ylo)metclo)metyloamino)0enzoilo)-L-alutaminian dietylu (0,66 g, 53%).

iH NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: i,i5 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), i,i7 (t, J=7 Hz, ester CH3), i,88-2,i3 (m, 2H, glu CH2), 2,40 (t, J=8 Hz, 2H, glu CH2), 2,42 (s, 3H, C -CH3), 3,i9 (s, 3H, NCH 3), 4,03 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,08 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,33-4,43 (m, iH, glu CH), 4,9i (s, 2H, C-CH2), 6,8i (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,44 (dd, J=8,2 Hz, iH, Ar), 7,58 (d, J=9 Hz, iH, Ar), 7,72 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,98 (d, J=8 Hz, iH, Ar), 8,20 (d, J=9 Hz, iH, Ar), 8,29 (d, J=7 Hz, iH, glu NH), 9,76 (s, iH, Ar), i2,48 (s, iH, NH2). Widmo masowe (CI-CH4): 559 (M+i, I00%). Analiza - obliczono dla C 31H34N4O6: C 66,65, H 6,i3, N I0,03; znaleziono: C 66,46 H 6,i8, N 9,98.

169 927 ii) Kwas K-(4- (((l,2,-dih2deo-3-me-3lo-t-yksobenso[f]aWinfZolin-W-yla-metolo)metyloaminolbenzoilolL-glutaminowy (0,58 g, 94% z dieslu (0,65 g, 1,2 mmola).

*H NMR (DMSO-dó, 300 MHz) δ: 1,82-2,14 (m, 2H, glu CH2), 2,32 (t, J=7 HH, 221 glu CH2), 2,42 (s, 3H, C -CH3), 3,18 (s, 3H, NCH3), 4,30-4,42 (m, 1H, glu CH), 4,91 (s, 2H, C⁹-CH2), 6,81 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,44 (t, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 7,58 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,73 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,98 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 8,18 (d, J=8 Hz, 1H, gluNH), 8,19 (d,J=9 Kz, 1H, Ar), 9,76 (s, 1H, Ar), 12,32 (br s, 2H,CO;2H’s), 12,50 (br s, 2 H, NH2).

Analiza dla C27H26N 4O6.7/5 H2O: obliczono: C 61,45, H 5,50, N 10,62, znaleziono: C 61,46, H5,45, N 10,59.

Przykład XI. Kwas (S)-2-(5-(((1,2,-aihydro-3-metylo-1-oksobeazo[f]chinazolia-9ylo)metylo)amino)-1 -okso-2-izo1naol1nylo)glutarowy

A. (S)-2-(4-aitroftalimiao)glutaryaiaa diety^

Diizopropyloetyloaminę 824 ml, 0,138 mola (Aldrich) dodano do zawiesiny bezwodnika 4-aitroftαlowego (25 g, 0,13 mola) (Tokyo Kasei) i chlorowodorku estru aietylowego kwasu L-glutaminowego (35 g, 0,146 mola) (Aldrich) w toluenie (130 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną stosując łapacz Dean-Starka, przez 2,5 godzmy. Po ochłodzeniu, roztwór rozcieńczono eterem etylowym (300 ml), przemyto wodą (75 ml), nasyconym roztworem NaHCO3 (50 ml), wysuszono (MgSO4) i zatężono pod próżnią w temperaturze70°C, otrzymując (S)-2-(4-aitroftalimiao)glutaryniaa dietylu w postaci oleju, który zestalił się do białej stałej substancji po odstaniu (35,8 g). Temperatura topnienia 65,5-66,5°C.

Ή NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,12 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,14 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 2,2-2,5 (m, 4H, glu CH2CH2), 3,96 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,08-4,19 (m, 2H, ester CH2), 4,97-5,04(m, 1H, glu CH), 8,19 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar). Widmo masowe (CI-CH4): 379 (M+1, 28,8%), 333 (71,6%), 305 (100%).

Analiza dla C17H18N 2O 8:

obliczono: C53,97, H4,80, N7,40;

znaleziono: C 53,89, H4,82, N 7,42.

B. (S)-2-(4-aminoftalimiao)glutaryaiaa dietylu

Zawiesinę (S)-2-(4-aminoftalimido)glutarynian diety^ (35,6 g 94,1 mmoli) i 10% palladu na węglu (0,5 g) (Aldrich) w etanolu (200 ml) wytrząsano w atmosferze wodoru (40-50 psi) przez 26 godzm. Roztwór przesączono przez celit i zatężono pod próżnią. Pozostałość oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym (250 g), eluując eterem etylowym: heksanem (4:1), otrzymując (S)-2-(4-amiaoftalimido)glotaryaiaa dietylu w postaci lepkiego żółtego oleju (29,1 g).

Έ. NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,10 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,12 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 2,17-2,39 (m, 4H, glu CH2CH2), 3,87-3,98 (m, 2H, ester CH2), 4,05-4,18 (m, 2H, ester CH2), 4,75-4,82 (m, 1H, glu CH), 6,57 (br s, 2H, NH2), 6,82 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 6,93 (d, J=2 Hz, 1H, Ar), 7,51 (d, J=8 Hz, 1H, Ar). Widmo masowe (CI-CH4): 349 (M+1, 40,8%) 303 (60,1%), 275 (100%).

Analiza dla C17H 20N 2O6:

obliczono: C 58,62, H 5,79, N 8,04;

znaleziono: C 58, 62, H 5,80, N 8,00.

C. (S)-2-(5-amino-1-okso-2-izoindolinylo)glotarynian diety^

Roztwór (S)-2-(4-amiaoftalimiao)glutaryaiaau dietylu (10,5 g, 30,2 mmoli) w etanolu (150 ml) ochłodzono w łaźni acetonitryl/CO2. Dodano stężony HCl (25 ml), następnie granulowany cynk 30 mesh (10,5 g, 0,161 mola) (Fisher), gdy temperatura wewnątrz osiągnęła -40°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano 1,5 godzmy w tej temperaturze i dalszą godzinę w temperaturze -10°C. Nadmiar cynku odsączono z roztworu, dodano 10% palladu na węglu (1,0 g) i roztwór wytrząsano z wodorem przy (30-50 psi) przez noc. Katalizator usunięto przez filtrację przez celit i przesącz zatężono pod próżnią. Pozostałość zalkalizowano przez dodanie nasyconego roztworu NaHCO3 (~300 ml), ekstrahowano eterem etylowym (3 x 100 ml) i ekstrakty eterowe wysuszono (K2CO 3) i zatężono pod próżnią. Pozostałość absorbowano na żelu krze169 927 mionkowym (15 g) i oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym (400 g), eluuj ąc octanem etylu: chlorkiem metylenu (1:4), i otrzymano (S)-2-(5-amino-l-okuo-2-icoin0olinylo)glutaoynian dietylu w postaci lepkiego oleju (4,i4 g).

iH NMR (DMSO-O6, 300 MHz) δ: 1,12 (t, J=6 Hz, 3H, ester CH3), 1,16 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,98-2,33 (m, 4H, glu CH2CH2), 3,92-4,03 (m, 2H, ester CH2), 4,11 (q, J=6 Hz, 2H, ester CH2), 4,26 (bardzo silnie sprzężona para AB, 2H, AoCH 2N), 4,66-4,84 (m, 1H, glu CH), 5,83 (br s, 2H, NH2), 6,58-6,65 (m, 2H, Ar), 6,32 (d, J=8 Hz, 1H, Ar). Widmo masowe (CI-CH4): 335 (M+1, 100%).

Analiza Ola C17H22N2O5:

obliczono: C 61,06, H 6,63, N 8,38;

znaleziono: C 60,93, H6,61, N 8,30.

D. 9-Bromomet:ylo-3-metyloUenzo[f]chinacolin-1 (2H)-on

Do gorącego roztworu 3,9-0imetyloUenzo[f]chinacolin-1(2H)-onu (4,00 g, 16, 9 mmoli) w benzenie (2000 ml) w atmosferze azotu dodano N-bromosukcynoimiO (4,00 g, 22,5 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano nieco poniżej wrzenia poO chłodnicą zwrotną przez 30 minut, następnie przy łagodnym wrzeniu pod chłodnicą zwrotną przez 30 minut. Uzyskaną zawiesinę pozostawiono Oo ochłodzenia na 2 godziny, stałą substancję odsączono i wysuszono w temperaturze 60°C pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymując 9-Uromometylo-3-metyloUenzo[f]ahinacolin-1(2Hr-on (4,32 g, 83% czystości stwierdzonej przez NMR).

iH NMR (DMSO-O6, 300 MHz) δ 2,45 (s, 3H, CH3), 4,96 (s, 2H, CH2) 7,65 (O, J=9 Hz, 1H, Ao), 6,60 (OO, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 8,05 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 8,16 (O, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,89 (s, 1H, Ar), 12,6 (Uo s, 1H, NH).

E. (S)-2-(5-((( 1,2,-DihyOΓd-3-metylo-1 -oksoUencd[f]ahinazolin-9-ylormetylo)amino)-1 -okso-2icoin0olinylo)glutaryman dietylu.

Roztwór surowego 9-Uoomometylo-3-metylo-UenHd[f]chinacolinl(2H)-dnu(4,32g), 2-(5-amino-1-okso-2-icoindolinylorglntaoynianu (S)-dietylu (4,0 g, 12 mmoli) i NaHCO3 (2,0 g, 24 mmole) w DMF (30 ml) mieszano w atmosferze azotu w temperaturze 105°C przez 1,5 godziny. Po ochłodzeniu, OoOano kwas octowy (1 ml, 17 mmoli), mieszaninę reakcyjną przeniesiono do większej okoągło-Oennej kolby z etanolem i następnie zatężono poO poóżmą na żelu krzemionkowym (30 g). Absorbowany materiał oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym eluując metanolem :chlorkiem metylenu (1:24) i wytrącenie stałej substancji z chlorku metylenu (~20 ml) za pomocą octanu etylu (~45 ml) i metanolu (~ ml). Białą stałą substancję odsączono w atmosferze azotu i wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując (S)-2-(5-(((1,2-0ihy0oo-3-metyld-1-oksoUenco[f]ah1nacolm~9-ylo)metylo)amino-1-okso-2-icoindolinylo)glutarynian dietylu (3,26 g).

iH NMR (DMSO-O6, 300 MHz) δ: 1,10 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,15 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH 3), 1,93-2,33 (m, 4H, glu CH 2CH2), 2,43 (s, 3H, C³-CH3), 3,87-4,03 (m, 2H, ester CH2), 4,09 (q, J=7 Hz, 2H ester CH2), 4,25 (bardzo silnie sprzężona paoa AB, 2H, glu NCH2Ar), 4,58 (O, J=6 Hz, 2H, C-O^), 4,74-4,83 (m, 1H, glu CH), 6,61 (br O, J=2 Hz, 1H, Ao), 6,64 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 7,20 (t, J=6 Hz, ArNH), 6,36 (d, J=8 Hz, IH , Ar) , 7^9 0<l· ==, Hz, IH , Ar) , 7,63 (dd, J=8,2 Hz, IH, Ar), 8,00 (d, 0=8 Hz, UH, ^) , 8,21 (d, J=9 Hz, UH, Ar,, A^^ (H, ArX 12,54 (s, , H, NNH. Widmo πμ^ eCI-CHH 557 (M+1, , 000%

Analiza Ola C 31H 32N 4O ó:

oUliczono: C 66,89, H 5,69, N 10,06;

znaleziono: C 66,80, H 5,82, N 10,10.

F. Kwas (S)-2-(5-(((1,2,-0ihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]ahinacolin-9-ylo)metyld)amino)-1 -okso-2-izoindolinylo)glutaoowy

Roztwór (S)-2-(5-((( 1,2,-0ihy0ro-3-metyld-1 -okso-Uenco[f]chinacolin-9-ylo)metylo)amęnd)l-okso-2-izoindolinylo)glutarynianu dietylu 3,20 g, 5,75 mmola) w 0,2 N NaOH (1,40 ml) mieszano w atmosferze azotu przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Roztwór następnie powoli doprowadzono Oo pH 3 za pomocą 1N HCl i uzyskaną zawiesinę pozostawiono Oo mieszania na krótko. Białą stałą substancję odsączono w atmosferze azotu, przemyto wodą i wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując kwas (S)-2-(5-(((1,2,-0ihy0ro-3-metylo-1-oksoUencd[f]chinacolin-9-ylo)metyld)amino)-1-okso-2-icdindolinylo)glutaoowy (2,85 g).

169 927

1h NMR (DMSO-d^^O, 300 MHz) δ: 1,86-2,34 (m, 4H, glu CH2CH2), 2,44 (s, 3H, CH 3), 4,25 (bardzo silnie sprzężona para AB, 2H, glu NCH 2Ar), 4,58 (s, 2H, C -CH2), 4,67-4,75 (m, 1H, glu CH), 6,69-6,77 (m, 2H, Ar), 7,37 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,59 (d, J=9lH, A,), 7,44 (dd, J 8,2 Hz, 1H, Ar), 8,01 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 8,22 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,85 ^£,1 lii A.).

Analiza dla C27H2aNaO6.1,6H2O: obliczono: C 61,27, H5,18, N 10,58; znaleziono: C6129, H5,18, N 10,57.

W podobnej sekwencji reakcji, N-metylowe pochodne powyższego związku wytwarzano przez kondensację bromometylo-benzochinazoliny z (S)-2-(5-metyloamino)-1-okso-2-izoindol linylo)glutarynianem dietylu. Wytwarzanie tego ostatniego i fizyczne dane liczbowe końcowego produktu benzochinazolinowego i diestrowego związku pośredniego są podane poniżej.

(S)-2-(5-(metyloamino)-1-ok(o-2-izoindolinylo)glutarynianu dietylu

Do roztworu (S)-2-(5-amIno-1-ok(o-2-izoindolinylo)glutarynianu dietylu (3,1 g, 9,3 mmola), 37% wodnego roztworu formaldehydu (0,81 g, 10 mmoli) i kwasu octowego (0,5 ml) w etanolu (30 ml) dodano cyjanoborowodorek sodu (0,63 g, 10 mmoli). Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej przez 45 minut dodano dodatkowy kwas octowy (0,5 ml) i borowodorek sodu (0,32 g, 5 mmoli) i po dalszych 15 minutach dodano dodatkowy 37% wodny roztwór formaldehydu (0,30 g 3,7 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez godzinę, dodano wodę (1 ml), następnie mieszaninę zatężono pod próżnią.

Oczyszczanie przez chromatografię na żelu krzemionkowym z eluowaniem octanem etylu: chlorkiem metylenu (1:6), dało (S)-2-(5-(metyloamino)-1-okso-2-izoindolinylo)glutarynian dietylu (1,8 g).

1h NMR ^MSO-d^ 300 MHz) δ: 1,12 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,17 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,95-2,35 (m, 4H, glu CH2’s), 2,74 (d, J=5 Hz, 3H, NCH3), 3,90-4,03 (m, 2H, ester CH 2), 4,11 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,30 (bardzo silnie sprzężona para AB, 2h, ArCH2), 4,77-4,84 (m, 1H, glu CH), 6,43 (6,43 (br q, J=5 Hz, 1H, NH), 6,58-6,04 (m, 2H, Ar), 7,38 (d, J=9 Hz, 1H, Ar).

Analiza dla C18H24N 2O5.3/10/ H2O: obliczono: C 61,11, H7,01, N7,92; znaleziono: C 61,09, H7,03, N 7,94.

(S)-2-(5-((- 1,2,-Dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)metyloamino)-1 -okso-2-izoindolinylo)glutarynian dietylu.

1h NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,10 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,15 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,97-2,35 (m, 4H, glu CH2’s), (m, 4H, glu CH2’s), 2,42 (s, 3H, C3-CH3), 3,23 (s, 3H, NCH3), 3,89-4,02 (m, 2H, ester CH2), 4,10 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,30 (bardzo silnie sprzężona para AB, 2H, glu NCH2 Ar), 4,77-4,84 (m, 1H glu CH), 4,94 (s, 2H, C-CH2), 6,84-6,12 (m, 2H, Ar), 7,45 (d, J=8,5 Hz, 2H, Ar), 7,58 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,99 (d, J=8,5 Hz, 1H, Ar), 8,20 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,77 (s, 1H, Ar), 12,49 (s, 1H, NH2).

Analiza dla C32H3aNaO6.1/4 H2O: obliczono: C 66,83, H6,05, N9,74; znaleziono: C 66,81, H5,97, N 9,74.

Kwas (S)-2-(5-((( 1,2,-dihydro-3-metylo-1-ok(obenzo[f]chinazolIn-9-ylo)metylo)metyloamino)-1 -okso-2-izoindolinylo)glutarowy

Ή NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,88-2,35 (m, 4H, glu CH2’s), 2,43 (s, 3H, C3-CH3), 3,22 (s, 3H, NCH3), 4,31 (s, 2H, glu NCH2 Ar), 4,67-4,76 (m, 1H, gluCH), 4,93 (s, 2H, C⁹-CH2), 6,87 (dd, J=8,5,2 Hz, 1H, Ar), 6,91 (s, 1H, Ar), 7,44 (d, J=8,5 Hz, 1H, Ar), 7,46 (dd, J= 8,5,1,5 Hz, 1H, Ar), 7,58 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,99 (d, J=8,5 Hz, 1H, Ar), 8,20 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,76 (s, 1H, Ar), 11,8-13,0 (br s, 2H, COżffs), 12,52 (br s, 1H, NH2).

Analiza dla C28H26N 4O6.2H 2O: obliczono: C 61,08, H5,49, N 10,18; znaleziono: C 61,14, H5,22, N 10,18.

Przykład XII. Kwas (S)-2-(2,3-dihydro-(0-(((1,2-dihydro-3-metylo-1-ok(obenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino)-1-okso-2-benzoizotiazol)-2-ilo)glutarowy

169 927

A. Kwas 2,2’-ditiobis(4-nitrobec9eesowy) (przystosowany z Organie Syntheses Coll. Vol. 2, str. 580)

Zawiesinę kwasu 4-nitroantranilowego (32,7 g, 180 mmoli) (Aldrich) w wodzie (100 ml) i stężonego HCl (35 ml) mieszano przez 30 minut w temperaturze pokojowej i następnie oziębiono w łaźni lodowej. Roztwór azotynu sodu (12,4 g, 180 mmoli) w wodzie (25 ml) dodawano w małych porcjach pod powierzchnię zawiesmy za pomocą pipety. Pokruszony lód dodano podczas dodowocio, aby utrzymać temperaturę wewnętrzną poniżej 5°C. Następnie mieszaninę reakcyjną mieszano przez godzinę w temperaturze 0°C.

W 1 litrowej kolbie, rozpuszczono siarkę (6,4 g, 0,20 mola) i Na6S.9H6O (48 g, 0,20 mola) w gorącej wodzie (100 ml). Dodano roztwór NaOH (7,2 g, 0,18 mola) w wodzie (40 ml) i uzyskany roztwór ochłodzono w łaźni lodowej. Następnie dodano roztwór soli diαhoniowej w porcjach (15-25 ml) razem z pokruszonym lodem, aby utrzymać temperaturę wewnątrz poniżej 5°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano 2 godziny w temperaturze pokojowej, przesączono i przesącz doprowadzono do obojętnego pH za pomocą kwasu octowego. Roztwór traktowano aktywnym węglem drzewnym (5 g), przesączono, doprowadzono do pH 2,5-3,0 stężonym HCl uzyskany osad odsączono i przemyto wodą stałą. Stałą substancję prawie rozpuszczono w gorącym etanolu (200 ml), traktowano aktywnym węglem drzewnym (5 g), przesączono, zatężeco pod próżnią, następnie ponownie zawieszono w metanolu (~ 80 ml), przesączono i wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem w temperaturze 110°C, otrzymując surowy 2,2’-ditiobiz54-nitrobenzoesowy) (9,9 g). Próbkę analityczną otrzymano przez krystalizację z metanolu i wysuszono ją pod zmniejszonym ciśnieniem w temperaturze 120°C.

1H NMR (DMSO-dó, 300 MHz) δ: 8,15 (dd, J80,2 Hz, 1H, Ar), 8,27 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 8,39 (d, J=2 Hz, 1H, Ar).

Analiza dla C14H 8N 2O 8S:

obliczono: C 42,43, H 2,03, N7,07, S 16,18;

znaleziono: C 42,48, H2,04, N7,12, S 16,25.

B. (S)-2-(2,y-dihydro-6-nitro-y-okzo-1,2-beczoi90tio9ol-2-ilo)- glutarynian dietylu

Roztwór surowego kwasu 2,6’-ditiobiz(4-nitrobenzoesowego) 8,35 g, ~21 mmoli) w

SOCI2 (50 ml) mieszano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 1,5 godziny i następnie zatężono pod próżnią. Pozostałą stałą substancję zawieszono w chlorku metylenu (50 ml) i gazowy CI2 (3,3 g, 47 mmoli) barbotowaco do niego i roztwór mieszano 1,5 godziny w temperaturze pokojowej. Następnie gazowy azot barbetowano do roztworu, aż wilgotny papier skrobiowo-jodowy wykazał nieobecność Cl2. Następnie dodano chlorowodorek estru dietylowego kwasu L-glutaminowego ( 6,5 g, 27 mmoli) (Aldrich), po czym wkroplono diizopropyl loetyloaminę 10 ml, ~ 57 mmoli) i mieszaninę reakcyjną mieszano w atmosferze azotu przez 45 minut. Dodatkową diizopropy]oety]eammę wkraplano, aż do zaprzestania tworzenia się białych oparów chlorowodorku am1ny nad roztworem. Po 30 minutach mieszania, mieszaninę reakcyjną zatężono pod próżnią na żel krzemionkowy (40 g). Chromatografia na żelu krzemionkowym (200 g) z eluowaniem octanem etyluTeksanem (1:2) dała 5S)-2-(2,y-dihydro-6-nitro-3ekzo-1,2-ben9oizotia9ol-2-ilo)glutaryciac dietylu (4,0 g) w postaci oleju.

H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,14 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,18 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 2,12-2,46 (m, 4H, glu CH2CH2), 4,01 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,17 (q, J=7 Hz, 2H,ester CH2), 5,22-5,20 (m,1H, glu CH), 8,11 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 8,21 (dd, J=9,2 Hz, 1H, Ar), 9,03 (d, J=2 Hz, 1H, Ar).

Analiza dla C16H18N 2O 7S:

obliczono: C 50,26, H 4,74, N 7,33, S 8,38;

znaleziono: C 50,35, H 4,76, N 7,33, S 8,28.

C. (5)-2-(6-Amino-2,3-dihydro-y-okzo-1,6-bec9oizotiozol-2-i]o)-glutaryniac dietylu.

Roztwór 5S)-2-52,y-dihydro-6-citro-y-ekse-1,2-benzoizotiazo]-2-ilo)g]utarycianu dietylu (4,0 g, 10 mmoli) i zawieszonego żelaza (1,0 g, 18 mmoli) w kwasie octowym (100 ml) mieszano w atmosferze azotu przez godzinę w temperaturze 50°C. Dodatkowe żelazo (3 x 0,25 g, 13 mmoli) dodano w odstępach 1, 1,25 i 1,75 godziny. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 30 minut po ostatnim dodaniu, przesączono, zatężoce pod próżnią i pozostałość absorbowano na żelu krze34

169 927 mionkowym (20 g) z roztworu chlorku metylenu. Oczyszczanie przez chromatografię na żelu krzemionkowym (150 g) z eluowaniem octanem etylu: heksanem (1:1—>2:1) dało (S)-2-(6-amino-2,3-dihydro-3-okso-1,2-benzoizotiazol-2-oli) glutarynian etylu (3,3 g) w postaci oleju.

HMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,15 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,17 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,95-2,38 (m, 2H, glu CH2CH2), 2,02 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 2,13(q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 5,08-5,15 (m, 1H, glu CH), 6,09 (br s, 2H, ΝΗ2), 6,62 (dd, J=9,2 Hz, 1H, Ar), 6,82 (d, J=2 Hz, 1H, Ar), 7,50 (d, J=9 Hz, 1H, Ar) Widmo masowe (CI-C H4): 353 (M+1, 1(00%).

Analiza dla C ióH 20N 2O 5S:

obliczono: C 54,53, H5,72, N7,95, S 9,10;

znaleziono: C 54,32, H5,73, N7,87, S 9,00.

D. (S)-2-(2,3-Dihydro-6-(((ł,2-dihydro-3-metylo-ł-okso-benzo[f]-chinazolin-9-ylo)metylo)amino)-3-okso-1,2-benzoizotiazol-2-ilo)-glutarynian dietylu (0,32 g) otrzymano przez kondensację powyższego estru (3,2 g, 9,1 mmola) z 9-bromometylo-3-metylobenzo[f]chinazolin-1(2H)-onem (2,3 g). zasadniczo w sposób opisany w poprzednim przykładzie.

Ή NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,12 (t, J=7 Hz, 31 ester CH3), 1,12 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,93-2,32 (m, 2H, glu CH2CH2), 2,22 (s, 3H, C-CH 3), 2,00 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 2,11 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 2,59 (d, J=6 Hz, 2HC⁹-CH2), 5,06-5,12 (m, 1H, glu CH), 6,79 (dd, J=9,2 Hz, 1H, Ar), 6,92 (d, J=2 Hz, 1H, Ar), 7,22 (t, J=6 Hz, 1H, ArNH), 7,53 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,59 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,63 (dd, J=8,2 Hł 1H Ar), 8,01 (d, J=8 Hz , 1H , Ar). 8,21 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,86 (s, 1H, Ar), 2,52 (s, 1H, N^ZH). Widmo masowe (CI-CH4) 575 (M+1, 36,5%).

Analiza dla C30H30N2O6S:

obliczono: C 66,70, H 5,,2, N9,75, S 5,58;

znaleziono: C 62,62, H 6,,8, Ν 9,73 , S 5,28.

E. Kwas (S)-2-(2,3-dihydro-6-((( 1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f|chinazolin-9-ylo)amino)-3-okso-1,2-benzoizotiazol-2-ilo)glutarowy otrzymano przez hydrolizę powyższego diestru, zasadniczo jak opisano w poprzednim przykładzie.

1h NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,88-2,38 (m, 2H, glu CH2CH2), 2,23 (s, 3H, CH3), 2,60 (br d, J=5 Hz, 2H, C-CH2), 2,98-5,08 (m, 1H, glu CH), 6,78 (dd, J=9,2 Hz, 1H, Ar), 6,92 (d, J=2 Hz, 1H, Ar), 7,21 (br t, J=6 Hz, 1H, ArNH), 7,53 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,59 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,63 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 8,02 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 8,22 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,86 (s, 1H, Ar), 11,8-13,3 (3H, CO2H’s i ΝΗ2).

Analiza dla C2óH 22Ν 4O 6S.2 H 2O: obliczono: C 56,31, H4,73, Ν 10,10; znaleziono: C 56,28, H4,65, 23 10J3.

Analogi kwasu Ν-(2-((( 1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino)benzoilo)-L-glutaminowego (przykład X) często otrzymywano przez sprzęganie odpowiednio zabezpieczonego analogu p-aminobenzoiloglutaminianu z 9-bromometylo-3-metylobenzo[f]chinazolin -1(2H)-onem, a następnie hydrolizę diestrów glutaminianowych.

KwasΝ-(2-(2-(ł,2-dihydro-3-metylo-ł-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)etylo)benzoilo)-Lglutaminowy.

A. N-(4-(2-( 1,2-Ι)ϋγ<:ΐΓθ-3-π^1ο- 1 -ok-obenzo[lech-nf]£olin-9-ylo)-ety-o)benzoilo)zL-g-utLminian dietylu.

Zawiesinę 2-(2((2-( 1,2-dihydro(3-metylo-1 (oksobenzo[f]c3inazolin-9-ylo)wi2ylo)ben( zoilo)-l-glutaminianu dietylu (0,16 g, 0,29 mmola) i 10% palladu na węglu (0,10 g) w etanolu (100 ml) wytrząsano z wodorem (20 psi) przez noc. Dodano etanol (80 ml) i kwas octowy (20 ml) i mieszaninę uwodorniono (20 psi) przez jeden dzień. Roztwór przesączono, zatężono pod próżnią a pozostałość i katalizator ponownie połączono w kwasie octowym (20 ml) i uwodorniono przez 28 godz. Roztwór przesączono, zatężono pod próżnią i produkt dwa razy przesączono z małej objętości metanolu, otrzymując N-^-^-O^idihydroilimei tylo(1-oksobenzo[f]c3inazolin(9-ylo)etylo)benzoilo)(L(glutaminian dietylu (0,10 g).

1h NMR (DMSO-dó, 300 MHz) δ: 1,16 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,19 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,90-2,18 (m, 2H, gluCH2), 2,23 (s, 3H, C3-CH3), 2,22 (t, J=7,5 Hz, 2H, glu CH2),

169 927

3,03-3,22 (m, 4H, ArCH2s), 4,04 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,10 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,37-4,47 (m, iH, gluCH), 7,40 (d, J=8 Hz, 2H, Ar), 7,54 (dd, J=8, i,5 Hz, 1H, Ar), 7,57 (d, J=8,5 Hz, iH, Ar), 7,80 (d, J=8 Hz, 2H, Ar), 7,95 (d, J=8 Hz, iH, Ar), 8,20 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 8,65 (d, J=7,5 Hz, iH, glu NH), 9,72 (s, iH, Ar), 12,51 (br s, iH, NH2). Widmo masowe (CI-CH4): 544 (M+i, 4,2%).

Analiza dla C 31H 33N 3O 6.I/I0 H2O: obliczono: C 627 27, H 6,14, ₍ N 7,70; znaleziono: C 68,34, H6,i0, N 7,68.

B. Kwas K^-(4-N-( 1,2-dih2d(O-C-mety-g-e-oksobenzoje]chinahoiin-9-ylo)-etylo)bcrwΌje lo)-L-alutaminowy.

^rH NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,86-2,16 (m, 2H, gluCH2), 2,35 (t, J=7,5 Hz, 2H, gluCH2), 2,43 (s, 3H, C-CH3), 3,03-3,22 (m, 4H, ArCH2’s), 4,34-4,44 (m, iH, gluCH), 7,40 (d, J=8 Hz, 2H, Ar), 7,54 (dd, J=8, i,5 Hz, iH, Ar), 7,57 (d, J=8,5 Hz, iH, Ar), 7,8i (d, J=8 Hz, 2H, Ar), 7,95 (d, J=8,5 Hz, iH, Ar), 8,20 (d, J=9 Hz, iH, Ar), 8,53 (d, J=7,5 Hz, iH, gluNH), 9,72 (s, 1H, Ar), 12,15-12,6 (br s, 2H, CO2H’s), 12,51 (s, iH, NH2).

Analiza dla C27H25N 3O6.1/3 H2O: obliczono: C 65,72, H 5,24, N 8,52; znaleziono: C 65,74, H5,22, N8,5i.

N-(( i ,2-Dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f|chinazolin-9-ylo)metylo)-amino)-N-(2-hydro ksyetylo)Oenzamid

A. 4-Aglino-N-(2-hydroksyetclo)0enzamid

Roztwór kwasu 4-amino0enzoe4oweao (2,7 g, 20 mmoli), etanoloaminy 1,4 g, 23 mmole) o chlorowodorku 1-(3-diIgetyloαjmtnopropylo)-3-etylo-karbodimidu (4,1 g, 21 mmoli) w dimetyloformamidzie (60 ml) mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Dodano więcej karbodiimidu (0,3 g, 2 mmole) i po mieszaniu przez godzinę, mieszaninę reakcyjną zatężono pod próżnią do żelu krzemionkowego (15 g). Oczyszczanie przez chromatografię na żelu krzemionkowym (125 g) z eluowaniem metanolem: chlorkiem metylenu (3:97 do 1:19) i krystalizacja z metanolu: octanu etylu dała, po wysuszeniu pod wysoką próżnią 4-amino-N-(2-hydroksyetylo)benzamid (1,65 g) w postaci białej stałej substancji.

iH NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 3,26 (q, J=6 Hz, 2H, NCH2), 3,46 (q, J=6 Hz, 2H, OCH2), 4,68 (t, 1=5,5,1H, OH), 5,85 (br s, 2H, NH2), 6,51 (d, J=8,5 Hz, 2H, Ar), 7,56 (d, J=8,5 Hz, 2H, Ar), 7,94 (br t, J=5,4 Hz, 1H, CONH). Widmo masowe (CI-CH4): 181 (M+i, 100%).

Analiza dla C4Hl2N2O2:

obliczono: C 59,99, H6,71, N 15,55;

znaleziono: C 60,05, H 6,72, N 15,55.

B. N-((( 1,2-Dihydro-3-metylo-1 -oksobenz.o[f]hhmazoliw-9-ylo)metylo)aIgino)-N-(2-hydIΌ-d6, 300 MHz) δ: 2,43 (s 3H, C3-CH3), 3,21-3,30 (m, 2H, NCH2),

3,41-3,49 (m, 2H, OCH2), 4,55 (d, J=6 Hz, 2H, C-CH2), 4,68 (t, JJ5,5 Hz, 1H, OH), 6,62 (d, J=8,5 Hz, 2H, Ar), 6,94 (t, J=6 Hz, 1H, Ar NH), 7,55-7,64 (m, 4H, Ar), 7,96 (t, J=5,5 Hz, 1H, CONH), 7,99 (d, J=8,5 Hz, 1H, Ar), 8,21 (d, 1=9 Hz, 1H, Ar), 9,84 (s, 1H, Ar), 12,53 (s 1H, NH2). Widmo masowe (CI-CH4): 403 (M+1, 71,6%), 342 (100%).

Analiza dla C23H22N4O3.4/3 H2O: obliczono: C 64,79, H5,83, N 13,14; znaleziono: C 64,82, H5,7O, N 13,12.

Kwas N-(4-(((i,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-8-ylo)etylo)metylo)amino)benzoilo)-L-glutaminowy, analog, w którym łańcuch boczny jest przyłączony do pozycji 8 pierścienia benzochinazoliny, otrzymano przez sekwencję reakcji zasadniczo podobną do opisanej powyżej.

A. 5,6-Dihydro-3,8r0-m8tylogenzojf]chir[azhlin-l(2H)-on 2tI-/ymanog kwasu 4’-metylofenylooctowego, jak opisano w przykładzie A (Metoda B).

Ή NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 2,26 (s, 3H, CH3), 2,27 (s, 3H, CH3), 2,60-2,84 (m, 4H, Ar CH2’s), 6,95-7,05 (m, 2H, Ar), 8,43 (d, J=8,4 Hz, 1H, Ar), 12,49 (br s, 1H, NH2).

k4cetyJo)0enzamld iH NMR (DMSO

169 927

Analiza dla C14H14N 2O:

obliczono: C 74,31, H 6,24, N 12, 38;

znaleziono: C 74,25, H6,27, N 12,31.

B. 3,8-Dimetylobenzo[f]chinazolin-1(2H)-on wytwarzano z powyższej pochodnej dihydro, jak opisano w przykładzie V.

Ή NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 2,40 (s, 3H, CH3), 2,49 (s, 3H, CH3), 7,54 (dd, J=8,7, 1,8 Ife, 1H, /A)) 7,57 (d, J=8,8 Hz, 1H, TA)) 7,79 (s, 1H, TA)) 8,13 (d, J=8,7 Hz, 1H, /Ar) 9,68 (d, J=8,8 Hz, 1H, Ar), 12,49 (br s, 1H, 2-NH).

Analiza dla C14H12N 2O:

obliczono: C 74,98, H5,39, N 12,49;

znaleziono: C 74,85, H5,44, N 12,41.

C. Kwas N-(4-(((1,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-8-ylo)metylo)amino)benzoilo)-L-glutaminowy wytwarzano z powyższej dimetylobenzochinoliny, zasadniczo jak opisano powyżej dla izomeru 9. Fizyczne i analityczne dane liczbowe produktu i diestru glutaminowego stanowiącego związek pośredni są podane poniżej.

N-(4-(((1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]chinazolin-8-ylo)metylo)amino)benzoilo)-L-głutaminian dietylu

1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,15 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,17 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,86-2,14 (m, 2H, glu CH2), 2,39 (t, J=7 Hz, 2H, glu CH 2), 2,43 (s, 3H, C-CH 3), 4,03 (q, ^=77 Hz, 2H, ester 0^2,, 4,07 (m, ^H,, glu CH2, , 4,314,40( (m, 1H , glu CH,, 4,55 (d, J=6 Hz, 1H, C⁸CH2), 6,64 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 6,99 (t, J=6 Hz, 1H, Ar, NH), 7,60 (d, J=8,7 Hz, 1H, Ar), 7,63 (d, J=8,5 Hz, 2H, Ar), 7,73 (dd, J=8,8, 2 Hz, 1H, Ar), 7,97 (s, 1H, Ar), 8,19 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 8,21 (d, J=7,5 Hz, 1H, glu NH), 9,77 (d, J=8,8 Hz, 1H, Ar), 12,53 (br s 1H, NH2).

Analiza dla C 30H 32N4O6.17/20 H2O: obliczono: C 64,35, H 6,07, N10,01; znaleziono: C 64,38, H 6,08, N 10,04.

Kwas N-(4-(((1,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-8-ylo)metylo)amino)benzoilo)-L-glutaminowy.

Ή NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,82-2,10 (m, 2H, glu CH2), 2,31 (t, J=7,3 Hz, 2H, glu CH2), 2,44 (m, 3H, C-CH3), 4,28-4,38 (m, 1H, glu CH), 4,55 (br s, 2H, C-CH2), 6,65 (d, J=8,7 Hz, 2H, Ar), 6,98 (br s, 1H, Ar NH), 7,61 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,64 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,74 (dd, J=8,8, 2 Hz, 1H, Ar), 7,97 (d, J=1 Hz, 1H, Ar), 8,10 (d, J=7,6 Hz, 1H, glu NH), 8,21 (d, J=8,9 Hz, 1H, Ar), 9,77 (d, J=8,8 Hz, 1H, Ar), 12,30 (br s, 2H, CO2H’s), 12,55 (br s, 1H, NH2).

Analiza dla C 26H24N 4O 6.H2O: obliczono: C61,65, H5,17, N 11,06; znaleziono: C 61,65, H5,19, N 11,00.

Przykład XIII. 9-((4-Acetyloanilino)metylo-3-metylobenzo[f]chinazolin-1(2H)-on

9-Bromometylo-3-metylobenzo[f]chinazolin-1(2H)-on (1 g, 3,3 mmola) i 4-aminoacetofenon (0,89 g, 6,6 mmola) (Aldrich) rozpuszczono w dimetyloformamidzie (15 ml). Roztwór mieszano w atmosferze azotu w temperaturze 100°C przez 30 minut, dodano wodorowęglan sodu (0,55 g, 6,6 mmola) i mieszanie przez dUs:&s 3(0 minut. DimetyloformMmd usunięto pod próżnią, pozostałość roztarto z wodą i stałą substancję zebrano przez filtrację. Wysuszoną stałą substancję poddano chromatografii na żelu krzemionkowym /metanol/chlorek metylenu (1:19). Frakcje zawierające produkt zatężono, aż substancja stała zaczęła się wytrącać. Roztwór oziębiono w temperaturze 5°C przez 12 godzin, następnie stałą substancję odsączono i wysuszono pod wysoką próżnia, otrzymując tytułowy związek (0,48 g, 41%). Temperatura topnienia >235°C.

1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 2,37 (s, 3H, CH3), 2,43 (s, 3H, CH3), 4,59 (d, J=6 Hz, 2H, CH2), 6,65 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,37 (t, J=6 Hz, 1H, ArNH) , dd , J=9 Hz^H, Ar), 7,61 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 7,69 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 8,00 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 8,21 1991Hz, 1H,

Ar), 9,85 (s, 1H, Ar), 12,52 (s, 1H, NH).

Analiza dla C 22H 19N3O2.1/2 H2O: obliczono: C 72,11, H5,50, N 11,47; znaleziono: C 72,26, H5,46, N 11,35.

169 927 n-Metylo-9--(4-nitroanilino)metylo)benzo[f]chInazolin-;(2H)-on wytwarzano podobnie z a-nItroanilIny.

1h NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 2,43 (s, 3H, CH3), 4,66 (d, J=6 Hz, 2H, ArCN2), 6,72 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,60 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,58-7,61 (m, 1H, Ar), 7,97-8,03 (m, 1H, Ar), 7,98 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 8,22 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,84 (s, 1H, Ar), 12,53 (s, 1H, NH). Widmo masowe (CI-CH4): 361^+1,100%).

Analiza dla C20H16N 4O 3.1/4 H2O: obliczono: C 00,21, H4,74, N 15,07; znaleziono: C 66,24,3 H 4,63, N 14,95.

a-(((1,2-Dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino)benzonitryl wytwarzano podobnie z a-aminobenzonitrylu.

1h NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 2,43 (s, 3H, CN3), 4,57 (d, J=6 Hz, 2H, ArCN2), 6,70 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,43 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,42-7,46 (m, 1H, Ar), 7,59 (m, 1H, Ar), 8,00 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 8,21 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,84 (s, 1H, Ar), 12,53 (s, 1H, NH). Widmo masowe (CI-CH4): 341 (M+1, 29,84%), 74 (100%).

Analiza dla C21H16N 4O:

obliczono: C 74,10, H4,74, N 16,40;

znaleziono: C 74,03, H4,77, N 16,40.

3-Metylo-9-(anilinometylo)benzo[f]chinazolin-1(2H)-on wytwarza z p-anizydyny.

*HNMR (OMSO-d,, 300 MHz) δ: 2,43 (s, 3H, CN3), 4,49 (d, J=5,9 Hz, 2H, ArCH2), 6,39 (t, J=5,9 Hz, 1H, NH), 6,50 (t, J=7,3 Hz, 1N, Ar), 6,61 (dd, J1=1 Hz, J2=8,6 Hz, 2H, Ar), 7,03 (dd, J1=8,5 Hz, J2=7,3 Hz, 2H, Ar), 7,58 (d, J=8,7 Hz, 1H, Ar), 7,64 (dd, J1=1,6 Hz, J2=8,3 Hz, 1H, Ar), 7,99 (d, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 8,20 (d, J=8,7 Hz, 1H, Ar), 9,85 (s, 1H, Ar), 12,52 (br s, J=8,2 Hz, 1H, NH). Widmo Masowe (CI-CH4): 316 (M+1, 52,80%), 223 (100%).

Analiza dla C20H17N 3O:

obliczono: C 76,17, H 5,43, N 13,22;

znaleziono: C 76,15, H5,48, N 13,24.

9-((4-Metoksyanilino)metylo)-3-metylobenzo[f]chinazolIn-1(2H)oon wytwarzano podobnie z p-anizydyny.

^!H NMR (DMSO-d,, 300 MHz) δ: 2,43 (s, 3H, CH3), 3,60 (s, 3H, CH3), 4,43 (d, J=6 Hz, 2H, ArCH2), 5,97 (t, J=6 Hz, 1H, NH), 6,57 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 6,68 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,58 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,64 (dd, J1=1 Hz, J2=8 Hz, 1H, Ar), 7,99 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 8,20 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,84 (s, 1H, Ar), 12,52 (br s, J=8,2 Hz, 1H, NH). Widmo masowe (CI-CH4) 346 (M+1, 100%).

Analiza dla C21H19N 3O2.3/10 H2O: obliczono: C71,90, H 5,63, N 11,98; znaleziono: C 71,92, H5,55, N 11,97.

9-((3-Chloroanilino)metylo-3-metylobenzo[f]chinazolin-1 (2H)-on wytwarzano podobnie z 3-chloroaniliny.

1h NMR (DMSO-d,, 200 MHz) δ: 2,40 (s, 3H, CH3), 4,47 (d, J=5,7 Hz, 2H, ArCH2), 6,46-6,60 (m, 3H, Ar), 6,74 (t, J=5,7 Hz, 1H, NH), 7,01 (t, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,54-5,62 (m, 2H, Ar), 7,98 (d, J=8,4 Hz, 1H, Ar), 8,19 (d, J=8,9 Hz, 1^, ja), 9,^S2 1H, Ar), 13,40 ^ί,1 lH, NH).

Widmo masowe (CI-CH4): 350 (M+1, 17,93%), 223 (100%).

Analiza dla C 20N16C1N3O:

obliczono: C 68,67, H4,61, N 12,01 Cl 10,,3, znaleziono: C 68,51, H4,65, N 11,93, Cl 10,01.

9-((n,a-DifluoΓoanilino)metylo)-3-metylobenzo[f]chInazolin-;(2H)- on wytwarzano podobnie z 3,a-dIfluoroanIlIny.

1h NMR (DMSO-d,, 200 MHz) δ: 2,40 (s, 3N, CN3), 4,44 (d, J=6 Hz, 2N, ArCN2), 6,32-6,40 (m, 1N, NH), 6,48-6,6; (m, 2N, Ar), 7,05 (ddd, J;=;9,2 Hz, J2=9,9 Hz, J3=1,4 Hz, 1H, Ar), 7,58 (d, J=8,7 Hz, 1N, Ar), 7,59 (dd, J^^ Nz, J2=;,6 Hz, 1H, Ar), 7,98 (d, J=8,3 Hz, 1N, Ar), 8,18 (d, J=8,6 Hz, 1H, Ar), 9,81 (s, 1N, Ar), 12,48 (br s, 1N, NH). Widmo masowe (CI-CN4): 352 (M+1, 28,42%), 223 (100%).

169 927

Analiza dla C20H15F2.N3O.C2H4O2:

obliczono: C 68,37, H4,30, N 11,96;

znaleziono: C 68,26, H4,35, N 11,90.

4-(((1,2-dihyaro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinawolia-9-ylo)metylo)amiao)beazoesaa etylu otrzymano podobnie z 4 -amiaobenzoesaau etylu.

Ή NMR (DMSO-d6,300 MHz) δ: 1,25 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 2,43 (s, 3H, C-CH3), 4,19 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,58 (br d, J=6 Hz, 2H, C⁹-CH2), 6,66 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,28 (br, t, J=6 Hz, 1H, Ar NH), 7,59 (d, J=8,5 Hz, 1H, Ar), 7,61 (dd, J=8,1,5 Hz, 1H, Ar), 7,66 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 8,00 (d, J=8,5 Hz, 1H, Ar), 8,21 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,84 (s, 1H, Ar), 12,53 (s, 1H, NH2). Widmo masowe (CI-CH4): 388 (M+1, 44,2%), 387 (M, 24,2%), 342 (100%).

Analiza dla C23H21N 3O 3.1/5 H2O: obliczono: C 70,65, H5.52, N 10,75; znaleziono: C 70,65, H 5,49, N 10,77.

Przykład XIV. Kwas N-(4-((1,2-dihydro-3-metylo-1-oksobeazo[f]chiaawolia-9ylo)mntoksy)beawoilo)-L-glutaminowy.

A. 3,9-dimetylo-2-metoksymetylobeawo[f]chiaawolin-1 (2H)-on

Do zawiesiny 3,9-aimetylobenwo[f]chinawolia-0(2H)-oau (1,0 g, 4,5 mmola) w DMF (25 ml) dodano 80% NaH (0,15 g, 5,0 mmoli) (Aldrich) porcjami i mieszaninę mieszano przez 35 minut. W jednej porcji dodano eter bromometylo-metylowy (0,39 ml, 4,8 mmola) (Aldrich) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Następnie roztwór rozcieńczono wodą (100 ml) i ekstrahowano dwa razy chlorkiem metylenu (100, 40 ml). Połączone ekstrakty chlorku metylenu przemyto małą objętością wody, wysuszono (K2CO3)i zatężono pod próżnią. Pozostałość oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym (40 g) eluując octanem etylu: chlorkiem metylenu (0 do 1:19), otrzymując 3,9-dimetylo-2-metoksy-metylobenzo[f]chiaawolin-1(2H)-on i odpowiedni związek O-alkilowany w stosunku 4:1, jak oznaczono za pomocą NMR (0,79 g).

1h NMR (DMSO-d6, 300 MHz) dla głównego izomeru 8: 2,57 (s, 3H, C⁹-CH3), 2,68 (s, 3H, C3-CH3), 3,38 (s, 3H, OCH3), 5,62 (s, 2H, NCH2O), 7,51 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 7,56 (d, J=9 Hz, 1H, Ar) 7,96 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 8,24 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,63 (s, 1H, Ar).

Analiza dla C16H16N 2O2:

obliczono: C 71,62, H6,01, N 10,44;

znaleziono: C 71,55, H6,03, N 10,43.

B. N-(4-((( 1,2-dihydro-2-metoksymetylo-3-metylo-1 -oksobenzo [f]chiaawolia-9-ylo)metoksy)bnnwoesaa etylu

N-bromosukcynoimid (0,50 g, 2,8 mmola) (Kodak) dodano do gorącego roztworu zabezpieczonej 3,9-dimetylobenzo[f]chiaawoliny (0,75 g, 2,8 mmola) w benzenie (100 ml) w atmosferze azotu. Roztwór mieszano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 45 minut i następnie zatężono pod próżnią otrzymując 9-bromometylo-2-metoksymetylo-3-metylobnazo[f]chiaazolia-1(2H)-oa jako główny produkt. Dodano porcjami NaH (80%, 0,25 g, 8,3 mmola) do roztworu p-hydroksybeazoesaau etylu (1,4 g, 8,4 mmola) (Eastman w DMF) (10 ml) i mieszano przez 30 minut. Surowy 9-bromometylo-2-metoksymetylo-3-metylobnazo[f]chinazoiiin-12H2-oa dodano z DMF (10 ml) i mieszaninę reakcyjną mieszano 2,5 godziny w temperaturze 35 °C i krótko ogrzewano do 90°C. Po ochłodzeniu, roztwór rozcieńczono wodą (100 ml) i ekstrahowano chlorkiem metylenu: octanem etylu (2:1, 2x150 ml). Ekstrakty przemyto wodą (100 ml), wysuszono (K 2CO 3) i zatężono pod próżnią. Pozostałość oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym (100 g), eluując octanem etylu: chlorkiem metylenu (0 do 3:17). Stałą substancję krystalizowano z małej objętości etanolu i wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując 4-(( 1,2-dihydro-2-metoksymetylo-3-metylo-1 -oksobeazo[f]chiaawoIia-9-ylo)mntoksybeazoesaa etylu (0,235 g).

1H NMR (DMSO-,6, 300 MHz) δ: 1,31 (t, J=1 Hz, 3H, ester CH3k2,70 (s, 3H, C3-CH3), 3,39 (s, 3H, OCH3), 4,28 (q, J= 7 Hz, 2H, ester CH2), 5,45 (s, 2H, C-CH2O), 5,63 (s, 2H, NCH2O), 7,20 (d, J=9 Hz, 2H Ar), 7,66 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,76 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 7,94 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 8,11 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 8,32 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,92 (s, 1H, Ar).

169 927

Analiza Ola C 25H24N 2O5: obliczono: C 69,43, H 5,59, N 6,48; znaleziono: C 69,32, H5,61, N 6,41.

C. Kwas 4-((1,2-0ihy0ro-3-metylo-1-oksoUenco[f]ahinacolin-9-ylo)metoksy)Uencdesowy

Roztwór 4-((1,2-0ihy0ro-2-metoksymetylo-3-metylo-1-oksoUenco[f]chinacolin-9-ylo)Uencoesanu etylu w tHF: 1N HCl: stężonym HCl (15:10:1,26 ml) mieszano w temperaturze 60°C przez noc. Uzyskaną zawiesinę rozcieńczono wodą, zatężono pod próżnią w celu usunięcia THF i oziębiono w łaźni lodowej. Stałą substancję odsączono, przemyto wodą i wysuszono pod próżnią w temperaturze 100°^ Uzyskany ester rozpuszczono w 1N NaOH (10 ml) i etanolu (~3 ml) i mieszano w temperaturze 60°C przez 4 godziny. Roztwór zakwaszono stężonym HCl Oo pH 1,5 i wytrącony osad odsączono i wysuszono poO próżnią w temperaturze 110°C, otrzymując kwas 4-((1,2-0ihydro-3-metylo-1-oksoUenzo[f]chtnacdlin-9-ylo)metoksy)Uencoesowy (0,195 g).

iH NMR (DMSO-O6, 300 MHz) δ: 2,59 (s, 3H, CH3), 5,46 (s, 2H, HHsO), 6,16 (0, J=9 Hz, 2H, Ao), 6,80 (zachodzący na siebie d, 1= 9 Hz, 2H, Ao), 7,91 (d, J=9 Hz, 2H, Ao), 8,16 (d, J=8 Hz, 1H, Ao), 9,85 (s, 1H, Ao).

D. N-(4-((1,2-Dihy0oo-3-metylo-1-oksoUenzo[f]ahinacolin-9-ylor-metoksyrUenzoilor-Lglutaminian dietylu

Do mieszanej zawiesiny kwasu 4-((1,2-0ihy0ro-3-meaylo-1-oksoUenzo[f]chinacolin-9ylormetoksy)benzoesowego (0,19 g, 0,53 mmola) i chlorowodorku estru Oietylowego kwasu L-glutaminowego (0,14 g, 0,58 mmola) (Aldrich) w DMF (3 ml) OoOano cyjanofosfonian Oietylu (0,09 ml, 0,6 mmola) (AlOrich) i toietyloaminę (0,15 ml, 1,1 mmola). Dodano dodatkowy DMF (6 ml) lecz nie otrzymano homogenicznego roztworu. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 45 minut w temperaturze pokojowej i analiza TLC wykazała pozostający kwas benzoesowy. Dodano cyjanofosfonian dietylu (2 krople), mieszaninę mieszano pozez 45 minut i następnie catęndno pod próżnią. Pozostałość oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym (50g) eluując etanolem: chlorkiem metylenu (1:9). Stałą substancję odsączono z małej objętości etanolu i wysuszono poO zmniejszonym ciśnieniem, otrzymując N-(4-((1,2-dihy0ro-3-metylo1-oksdUenzo[f]chinacolin-9-ylo)metoksy)Uencdilo)-L-glntaminian dietylu (0,187 g).

Ή NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 1,16 (t, J=7 Hz, 3H, ester CH3), 1,18 (t, J=6 Hz, 3H, ester C^), 1,90-2,18 (m, 2H, glu CH2), 2,43 (t, J=6 Hz, 2H, glu HHs), 2,44 (s, 3H, H³-CH3), 4,05 (q, J=6 Hz, 2H, ester HHs), 4,10 (q, J=6 Hz, 2H, esteo HHs), 4,36-4,46 (m, 1H, glu CH), 5,43 (s, 2H, CH2O), 7,17 (0, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,65 (0, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,74 (00, J=8,2 Hz, Ar), (0, J=9 Hz, 2H, Ao), 8,08 (d, J=8 Hz, 1H, Ao), 8,26 (0, J=9 Hz, 1H, Ao), 8,58 (d, 1=1 Hz,

1H, glu NH), 9,94 (s, 1H, Ao), 12,59 (s,1H, NH2).

Analiza Ola C 30H 31N 3O 7.1/4 H2O; obliczono: C 65,50, H 5,77, N 7,64; znaleziono: C 65,54, H 5,77 N7,61.

E. Kwas N-(4-((1,2-dihydro-3-metyło-1-dksoUenzo[f]chinacolin-9-ylo)metoksy)Uencoilo)-L-głutaminowy

N-(4-((1,2-Dihy0oo-3-metzlo-1-okudbenzo[f]chtnazollo-9-ylotrmotodsu)benzoilo)-L-glutamiNan dietylu (0,18 g, 0,33 mmola) zawieszono w etanolu (2 ml) i 0,25 N NaOH (8 ml) i mieszano 1,5 godziny w temperaturze pokojowej ze sporadyczynymi okresami Oziałania ultradźwięków. Do otrzymania homogenicznego roztworu był potrzebny dodatkowy etanol (4 ml) i ogrzewanie. Roztwór mieszano przez 3 godziny w temperaturze pokojowej' i następnie doprowadzono do pH 3 za pomocą 1 N HCL Uzssanąą aąwiusinę oczssccdnoo i ia^ą taaąą substancję przemyto wodą i wysuszono poO wysoką próżnią otrzymując kwas N-(4-((1,2-0ihy0ro-3-₁metylo-1-oksoUenzo[f]chmazdlm-9-ylo)metoksy)benzoilo)-l-glutammowy (0,158 g).

Ή NMR (DMSO-O6, 300 MHz) δ: 1,86-2,16 (m, 2H, glu CH2), 2,35 (t, 1=1 Hz, 2H, glu CH2), 2,44 (s, 3H, CH3), 4,33-4,43 (m, 1H, glu CH), 5,43 (s, 2H, CH2O), 7,16 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,64 (d, 1=9 Hz, 1H, Ao), 6,74 (dO, J=8,2 Hz, 1H, Ao), 7,88 (d, 1=9 Hz, 2H, Ao), 8,08 (d, J=8 Hz, 1H, Ao), 8,26 (0, J=9 Hz, 1H, Ao), 8,47 (0, J=8 Hz, 1H, glu NH), 9,94 (s, 1H, Ar), 12,36 (Uo s, 2H, H%sH’s), 12,59 (s, 1H, NH2).

169 927

Analiza dla C 26N23N 3O 7.1/4 H2O: obliczono: C 63,22, N4,79, N8,51; znaleziono: C 63,23, H4,80, N 8,48.

Przykład XV. Kwas N-(4-((3-amino-1,2-dihydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-9ylo)metylo)benzoilo)-L-glutaminowy.

A. N-(4-(((1,2-dihydro-1-okso-n-piwalamidobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amIno)benzoilo)-L-glutaminian dietylu.

Do gorącego roztworu N-(1,2-dihydro-9-metylo-1-ok(obenzo[f]-chinazolin-3-ylo)piwaloamidu (0,94 g, 3,0 mmole) w benzenie (250 ml) w atmosferze azotu dodano N-bromosukcynoimid (0,57 g, 3,2 mmola) (Kodak) i 2,2’-azobi(izobutyronitryl (AIBN) 35 mg, 0,21 mmola) Kodak. Roztwór mieszano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 1,5 godziny i następnie zatężono pod próżnią otrzymując surowy N-(9-bromometylo)-3,2-dihydro-3-oksobenzo[f]chinazolin-3-ylo)piwaloamid. Piwaloamid i ester dietylowy kwasu N-(a-aminobenzoIlo)-l-glutaminowego (2,5 g, 7,8 mmola) (Aldrich) w DMF (10ml) mieszano w atmosferze azotu w temperaturze 105-110°C przez 5 minut i następnie pozostawiono do ochłodzenia. Dodano trietyloaminę (0,5 ml, 3,6 mmola) i roztwór zatężono pod wysoką próżnią. Pozostałość oczyszczano przez chromatografię na żelu krzemionkowym (130 g) eluując octanem etylu: chlorkiem metylenu (1:19—2:3), następnie przez krystalizację stałej substancji z etanolu/eteru etylowego. Przesączono ją i wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując Ho(a-(((3,2-dihydro-1-okso-3-piwaloamido-benzo[f]chinazolin-9-ylo)metyloamnino)benzoilo)-l-glutaminian dietylu (0,32, g) w postaci białej, stałej substancji. Przesącz zatężono i pozostałość oczyszczano przez chromatografię i krystalizację otrzymując dodatkowe 0,243 g.

Ή NMR (DMSO-d,, 300 MHz) δ: 1,15 (t, J=7 Nz, 3H, ester CH3), 1,16 (t, J=7 Nz, 3H, ester CN 3), 1,28 (s, 9H, t-butyl), 1,87-2,13 (m, 2H, glu CH2), 2,39 (t, J=7 Hz, glu, CN2), 4,03 (q, J=7 Hz, 2H, ester CH2), 4,07 (q, J=7 Nz, 2N, ester CH2), 4,30-4,40 (m, 1H, glu CN), 4,57 (d, J=6 Nz, 2N, C-CN), 6,63 (d, J=9 Nz, 2H, Ar), 7,04 (t, J=6 Nz, 1H, ArNH), 7,53 (d, 3=9 Nz, 1H, Ar), 7,61 (dd, J=8,2 Hz, 1H, Ar), 7,62 (d, 3=^^ Nz, 2N, Ar), 7,99 (d, J=8 Hz, 1H Ar), 8,21 (d, J=8 Hz, 1H, glu NH), 8,22 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 9,75 (s, 1H, Ar), 11,25 (s, 1H, N²H), 12,30 (br s, 1H, NH). Widmo masowe (CI-CH4): 630 (M+1, 6,5%), 243 (100%).

Analiza dla C34N 39N 5O 7:

obliczono: C 64,85, H 6,24, N 11,12;

, znaleziono: C 64,74, H6,25, N 33,30.

B. KwasN-(a-(((n-amino-;,2-dihydro-;-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)benzoilo)L-glutarninowy.

Roztwór N-(a-((( 1,2-dihydro-1 -okso-3-piwaloamiidobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino^enzoiloH-glutaminian dietylu (0,31 g, 0,49 mmola) w metanolu (15 ml) i 1N NaO, (5 ml) mieszano w atmosferze azotu w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 1,5 godziny i następnie pozostawiono do ochłodzenia. Roztwór doprowadzono do pN 3 za pomocą 1N HCl, w atmosferze azotu i wytrącony osad odsączono w atmosferze azotu, przemyto wodą i wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując kwas N-(4-(((3-aminoo 1,2-dihydro-1 -oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino)benzoilo)-L-glutaminowy (0,22 g) w postaci białej stałej substancji.

1h NMR (DMSO-d,, 300 MHz) δ: 1,82-2,12 (m, 2H, glu CH2), 2,31 (t, 3=1 Nz, 2H, glu CH2), 4,27-4,38 (m, 1N, glu CN), 4,50 (d, 3=6 Nz, 2N, C⁹-CN2), 6,55 (br s, 2H, NN2), 6,62 (d, 3=9 Hz, 2H, Ar), 6,96 (t, 1=6 Nz, 1H, ArNN), 7,26 (d, 1=9 Nz, 1H, Ar), 7,44 (dd, J=8,2 Hz, 1N, Ar), 7,63 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,84 (d, J=8 Nz, 1H, Ar,, 7,99 dd, J=9 Hz, 1H, /,)) 8,09 Jd, 3=8 Hz, 1H, glu NH), 9,67 (s, 1H, Ar), 11,14 (br s, 1H, NH2), (br s, 2H , CO2H’s).

Analiza dla C25N23N 5O 6.N 2O: obliczono: C 59,17, N4,97, N 13,80; znaleziono: C 59,31 N4,90, N 13,72.

Przykład XVI. 3-amino-9-((4-fluoroanIlIno)metylo)benzo[f]chinazolin-1(2Hr-on

A. N-(9-BΓomometylo(-l,y-dihy2odil-okso0enzo[b|chm[f]o]m-3-ylo)piwal))amid.

N-(9-Metylo-1,2-dihydro-;-ok(obenzo[f]chinazolin-3-ylo)piwaloamid (6,58 g, 0,02 mola) rozpuszczono we wrzącym pod chłodnicą zwrotną benzenie (1650 ml). Mieszaninę reakcyjną

169 927 usunięto od źródła ciepła i dodano N-0roma4ukhcwoimid (4,54 g, 0,026 mola, Kodak). Roztwór ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 1,5 godziny. Benzen usunięto pod próżnią i pozostałość wysuszono pod wysoką próżnią otrzymując pochodną Oromometylową.

^fH NMR (DMSO-d6, 200 MHz) δ: 1,29 (s, 9H, t-butyl), 4,94 (s, 2H, CH 2Br), 7,58 (d, J=9 Hz, Ar), 7,67 (dd, J=8 Hz, 2H, Ar), 8,03 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 8,24 (d, ,=9 Hz, 1H, Ar), 9,80 (s, 1H, Ar).

B. N-(9-((4-Fluoroawilino)metylo-1,2-dihydro-1 -okso0ewzo[f]chinazoliw-3-ylo)piwαloαmid

N-((9-Bromometylo)-1,2-dihydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-3-ylo)piwaloamid (0,97 g,

2,5 mmoK) 14-fΊuo/r/a(^iiir^ςi ,0,56 g, 5 mmoh) ZAldrich) roapus4czo/lo w dir^^tt/lc^foI-Igc^Igii^z^ie (15 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 30 minut w temperaturze ł00°C, dodano wodorowęglan sodu (0,42 g, 5 mmoli) i zawiesinę mieszano przez dalsze 30 minut. Dimetyloformamid usunięto pod próżnią, pozostałość przemyto chlorkiem metylenu i przesączono. Przesącz odparowano i pozostałość poddano chromatografii na aparacie Waters Prep 500 (wsad krzemionkowy, eluowanie octanem etylu/chlorkiem metylenu (1:19)). Frakcje zawierające produkt zatężono pod próżnią, pozostałość rozpuszczono w minimalnej ilości octanu etylu i roztwór rozcieńczono heksanem, aż do utworzenia osadu. Substancję stałą zebrano przez filtrację wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując związek tytułowy w postaci beżowej, stałej substancji (0,305 g, 29%).

0h NMR (DMSO-d,, 200 MHz) δ: 1,25 (s,9H, t-butyl), 4,42 (d, J=6 Hz, 2H, CH2), 6,33 (t, J=6 Hz, 1H, NH), 6,53-6,60 (m, 2H, Ar), 6,85 (t, J=8 Hz, 2H, Ar), 7,50 (d, J=i0 Hz, 1H, Ar), 7,60 (dd, d=8,2Hz, lH,Hr), 7,96 (d, J=8 Hz, 1H, Hr), 8, 19.9 , d=8 Hz, lH.HzA 5),72 (2, IH, Ar), 11,23 (s, łH, NH), 12,28 (s, 1H, NH).

C. 3-Aglino-9-(4-fluoroaniliwo)metclo)0enlo[f]chinαzolin-1 (2H)-on.

Mieszaninę metanolu (8,75 ml) i 0,5 N wodorotlenku sodu (5,8 ml) ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną w atmosferze azotu przez 15 minut. Dodano N-(4-((4-fluoroanilino)-metylo-1,2-dihydro-1 -oksobenzo [f]chinazoliw-3-ylo)piwaloamid (0,305 g, 0,73 mola) i roztwór ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez godziny. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do temperatury pokojowej i doprowadzono do pH 7 za pomocą kwasu N-chlorowodorowego. Białą stałą substancję zebrano i przemyto wodą, następnie zawieszono w 100 ml wrzącego etanolu. Ochłodzony roztwór przesączono i zebraną stałą substancję, wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując 3-amiwo-4-((4-fluoraanilina)metylo)benzo[f]chinazolin-1(2H)-on (0,161 g, 66%). Temperatura topnienia >230°C.

iHNMR (DMSO-d,, 200 MHz) δ: 4,38 (s, 2H, CH2), 6,25 (br s, łH, NH), 6,52-d,n4 (m, 2H, Ar), 6,68 (br s, 2H, NH2), 6,85 (t, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,25 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,45 (d, J=9 Hz, łH, Ar), 7,83 (d, J=8 Hz, łH, Ar), 8,00 (d, 1=9 Hz, 1H, Ar), 9,62 (s, łH, Ar), 11,35 (br s, 1H, NH).

Analiza dla C19H15FN40.17/50 H2O: obliczono: C CZ,03, H 4,64, N 11,44; znaleziono: C C6,64, H4,51, N 16,44

Następujące związki wytwarzano podobnie przez reakcję odpowiedniej aromatycznej aminy 1 powyższym (0enzochinazoliw-3-ylo)piwaloamidem.

3-Amiwo-9-(4-witroawiliwo)metyla)0ewzo[flchinazoliw-ł(2H)-ow g, 95%). Temperatura topnienia >230°C.

1H NMR (DMSO-d,, 200 MHz) δ: 4,58 (d, J=6 Hz, 2H, CH2), 6,54 (s, 2H, NH2), 6,69 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,26 (d, J=9 Hz, 1H, Ar), 7,41 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,84 (d, J=8 Hz, 1H, Ar), 7,94-8,01 (m, 4H, Ar i NH), 9,63 (s, 1H, Ar), 11,12 (s, łH, NH).

Analiza dla C19H15N 5O 3.1/4 H2O: obliczono: CC2,28, A4,20, Ν ΙΟ^Ο; znaleziono: C C2,44, H 4,28, N 10,06.

3-Amiwo-9-(4-ahetyloαwiliwo)metcla)0ewlo[f]hhiwαzoliw-1 (2H)-on(0,245 g, 98%).

0h NMR (DMSO-d,, 300 MHz) δ: 2,37 (s, 3H, CH3), 4,53 (d, J=6 Hz, CH2), 6,56 (br s, 2H, NH2), 6,64 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,27 (d, J=9 Hz, 2H, Ar), 7,34 (t, J=6 Hz, łH, NH), 7,43

169 927 (dd, J=8 Hz, 2Hz, 1H, Ao), 7,68 (0, J=9 Hz, 2H, Ao), 7,84 (d, J=8 Hz, 1H, Ao), 8,00 (d, J=9 Hz, 1H, Ao), 9,66 (s, 1H, Ao), 11,14 (br s, 1H, NH).

Analiza dla C21H17N 4O2.H2O: obliczono: C 66,19, H5,10, N 14,92; znaleziono: C 66,16, H5,18, N 14,90.

Dane liczbowe testu biologicznego

Poniżej opisane są szczegółowo procedury stosowane do oceny związków wytworzonych sposobem według wynalazku jako środków poceciwnowotwooowych. Hamowanie syntazy tym^^owej.

Ludzką syntazę tymiOylanową (TS) z SV40-przekształconej ludzkiej komórki fibooblauau klonowano w Escherichia coli )I.Dev i W.Dallas, iNformacja osobista) i białko oczyszczano do jednorodności przez chromatografię powmowactwa (W. RoOe, K.J. Scanlon, J.B. Hynes, J.R. Beotino, J. Biol. Chem., 254,1969,11538).

Oceniano enzymy i oznaczano stopień hamowania enzymu przez różne związki w próbie uwalniania trytu Robeotsa (Bioahemisaoy, 5, 1966, 3546) zmodyfikowanej przez Dev i im, (J. Biol. Chem., 264. 1989, 19132). Hamowanie wzrostu komórek guza oznaczano, jak opisano uprzednio (S.D. Patii, C. Jones, M.G. Nair, J. Galivan, F. Maley, R.L.Kisliuk, Y. Gaumont, D, Duch i R. Ferone, J. MeO. Chem., 22, 1989, 1284) i modyfikowano, jak wskazano poniżej.

Komórki i medium.

Rak gruczołowy okrężnicy SW480 i WiDr, rak gruczołowy sutka MCF-7, rak płuc A426 i białaczkę z komórkami T MOLT-4 stosowano Oo początkowego osłaniania związków. Komórki WiDr i MOLT-4 wzrastały w medium RPMI 1640 uzupełnianym 10 nM solą wapniową lenkowoozny zamiast kwasem foliowym jako źoóOłem folianu, 10% Oializowaną płodową surowicą cielęcą, penicylnią i streptomycyną. MCF-6, A426 i SW480 wzrastały w powyższym medium Oalej uzupełnianym pioogronianem soOu (110 g/ml).

Próba cytotoksyccnośct

Komórki posiano Oo 96-dołkowzch płytek stosując Perkin-Elmer Pro/pette. SW480 i A427 posiano w ilości 8000 komórek na Oołek, MCF-7 w ilości 10000, WiDr w ilości 6500 i MOLT-4 w ilości 12500 komórek na dołek, wszystkie w 150l medium. Przed dodaniem leku kultury mkubowano przez 24 godziny w temperaturze 36°C. Związki dodano przy dwukrotnym stężeniu w i50 l medium i każde stężenie oceniano potrójnie. Jeżeli Oo solubtlocowanta związków stosowano DMSO lub etanol, odpowiednie regulacje prowadzono, jeżeli stężenie przekraczało 0,01%. Kultury mkubowano przez 62 godziny (96 godzin dla SW480 i MCF-6) w tempeoatuoze 36°C w nawilżanym iNkubatorze pozy 5% CO2. Hamowanie wzrostu komórek mierzono stosując próbę redukcji barwnika MTT.

Próba redukcji barwnika MTT.

Rozcieńczenia komórek dla standardowej krzywej otozymano z 62 godzinnej fazy wykładniczej hodowli. Rozcieńczenia seryjne posiano potrójnie w 96-dołkowyah płytkach i innuUuwąan w temoeeałunzc 37(C przze ggooinn- MTT (bromok 3--4,5-dimotylotięazt-2ilor-2,5-difenylotetrazoliowz) rozpuszczono w PBS w ilości 5 mg/ml i poddano działaniu ultradźwięków pozez 30 sekund. Stosując Peokin-Elmer Poo/pette, usunięto 200 gl medium i dodano 100 gl MTT do Oołków standardowej krzywej i badanych płytek. zawiesiny kultur wirowano pozez 5 minut z szybkością 1000 obrotów na minutę przed usunięciem medium z dołków. Płytki mkubowano przez godzinę w temperaturze 36 °C na wytrząsarce platfozmowej. Następnie po inkuUowantu, 100 gl medium usunięto z dołków i 100 gl DMSO dodano do każdego dołka. Płytki poOOano działaniu ultradźwięków przez około 10 sekund, aby solubilizować wytrącony barwnik formazanowy. Absorbanaję każdego dołka mierzono stosując czytnik płytki mikromiana MC Titertek Multiscan przy 570 nm długości fali odniesienia. Dane liczbowe zebrano stosując Mariachi Seed-2 i gromadzono i analizowano stosując oprogramowanie IBM-ATi Lotus 1-2-3.

169 927

Tabela A

Dane liczbowe hamowania enzymu tymidylanowej syntazy u ssaków dla związków wytwarzanych sposobem według wynalazku. Następujące związki miały 150 między 1 i 300 gM vs. enzymów ssaków:

kwas N-54-5metylo(( 1,2,5,6-tetrahydro-3-metylo-1-okzobenzo[f]chica9olic-9-ylo)sulfenylo)amico)beczoilo)-L-glutamicowy*, kwas N-54-553-amico-1,2,5,6-tetrahydrobenzo[f]chica9olic-7-ylo)-amico)ben9oilo)-L-glutammowy*, kwas N-(4-(553-amico-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobeczo[f]china9olin-8-ylo)sulfocyle)(2-prop1nylo)amine)bec9ei]o)-L-glutaminowy*, kwas N-(4-(53-amino-0-bromo-1,6-dihydro-1-okzobeczo[f]chicaholic-8-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutomicowy*, kwas N-54-(51,2-dihydro-3-metylo-1-oksobec9o[f]china9olin-7-ylo)-sulfocamido)bec9oilo)-0-glutαminowy *,

3- metylo-9-(54-citroanilino)metylo)benzo[f]chica9olin-152H)-oc*,

4- 5(51,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]china9olin-0-ylo)metylo)amico)benzonitryl*,

9-(5y,4-difluoroonilino)metylo)-y-metylobecho[f]china9olin-152H)-on*, kwas N-(4-55(1,2-dihydro-y-metylo-1-oksobeczo[f]china9olm-9-ylo)karbocylo)amino)bec9oilo)-L-glutaminowy*, kwas N-(4-55( 1,2-dihydre-y-metylo-1 -oksobec9o[f]chicoholm-8-ylo)metylo)amino)bec9oi]o)-L-g]utominowy*.

Następujące związki mają wartości I50 mniejsze niż 1 gM.

3- amino-9-(54-acetyloacilico)metylo)benzo[f]chinazolin-1(2H)-on*,

4’ -fluoro-1,2,5,6-tetrahydro-3-metylo-1 -okzobenzo[f]china9olino-9-sulfonoanilid*,

1,2,5,6-tetrohydro-3-metylo-4’-nitro-1-oksoben9o[fichina9olino-9-sulfocamlid*,

4- ((1,2,5,6-tetrahydro-y-metylo-1-oksobenzo[f]chma9olm-9-ylo)-sulfonoamido) benzamid*,

4’-acetylo-1,2,5,6-tetrahydro-y-mety]o-1-oksobec9o[f]chinαholico-9-sulfonoanilid*, kwas N-(4-((3-amino-1,2,5,6-tetrahydro-1-ekzobenzo[f]china9olic-9-ylo)su]fon(mido)ben9oilo)-L-glutamicowy*, kwas N-(4-(((3-amino-8-bromo-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobec9o[f]chicazolin-9-ylo)zulfocylo)amico)beczoi]o)-L-glutaminowy*, kwas N-4-(((3-amino-1,2,5,6-lera-lydro-1-okzebec9o[f]chica9olin-8-ylo)zulfony]e)(mino)bec9eilo)-L-g]utαmicowy*, kwas N-(4-((1,2,5,6-tetrαhydro-y-metylo-1-okzobec9o[f]chicα9o]in-0-ylo)su]foc(mido)ben 9eilo)-L-glutaminowy*, kwas N-(4-(5(3-amino-1,2-dihydro-1-okzoben9o[f]chica9olin-0-ylo)-metylo)amico)beczei]e)-L-glutaminowy *, kwas N-54-5551,2-dihydro-ymetylo-1-oksoben9o[f]chica9o]ic-9-y]o)-metylo)amico)bec9oilo)-L-g]utaminowy *, kwas (S)-2-(5-(((1,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]china9olin-0-ylo)-mety]o)amice)1 -okso-2-izoindolmy]o)g]utarowy*, kwas N-(4-((3-amino-1,2-dihydro-1-oksoben9o[f]china9olin-7-y]o)amino)ben9oi]o)L-glutaminowy*, kwas N-(4-((1,2-dihydro-y-metylo-1-okzoben9e[f]chic(zelin-9-ylo)-metylo)metyloamico)bec9ei]o)-L-glutaminowy*, kwas N-(4-(( 1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksoben9o[[]china9olin-9-ylo)-metoksy)beczoile)L-glutaminowy*, kwas N-(4-(((3-amino-1,2-dihydro-1 -ekzebenze[f]chic(9o]ic-0-y]o)amico)sulfocyle)beczeitafL-glutaminowy*, kwas N-54-551,2-dihydro-3-mety]o-1-okzobec9o[f]chica9olic-0-y]o)-sulfocamide)bec9eilo)-L-glutaminowy*,

169 927

N-(4-((( 1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f|chinawolia-9-ylo)-metylo)amiao)-2-fluoIΌbenzoi^-L-glutaminowy*,

3-metyIo-9-(anilinometylo)benzo[f]chinawolin-1 (2H)-on*, kwas (S)-2-(5-(((l ,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinawolin-9-ylo)-metylo)metyloamino)-1 -okso-2-izoindolinylo)glutarowy*, kwas(RS)-2-(2-(4-(((1,2-dihydro-3-metylo-1-oksobeazo[f]chinawolin-9-ylo)metylo)amiao)fenylo)-2-oksoetylo)glutαrowy *, kwas (E)-N-(4-(2-( 1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksobeazo[f]chinawolia-9-ylo)winylo)benzoilo)-L-glutaminowy*, kwas N-(4-(2-( 1,2-dihydro-3-metyIo-1 -oksobenzo [f|chiaawolin-9-ylo)etyło)beazoilo)-Lglutaminowy*, a Oznaczano przez uwalnianie 3h2O z 5-3H-dUMP. Mieszania reakcyjna 20 gM w dUMP (Km -10 gM) i 40 gM w 5,10-metylenotetrahydrofoliaaie (Km~20-40 gM).

° wartości odnoszące się do ssaków oznaczane dla ludzi (*) lub enzymu grasicy cielęcej. Tabela B

Dane liczbowe cytotoksyczności hodowli komórek raka dla w pełni aromatycznych bnazochiaazolia (pochodnych 3-amiaowych)

Struktura R	Cytotoksycznośó hodowli komórek raka IC50(gM)
SW480a	Inneb
9-CH2NH-4’-C6H4COCH3	0,045	0,03 (MCF-7)

a SW480 stanowi ludzki rak gruczołowy okrężnicy; MCF-7 stanowi ludzki rak sutka;

A-427 stanowi rak płuc;

D98 stanowi l1Nę komórkową ludzkiego szpiku kostnego; L stanowi linię komórkową fibroblastu myszy

Tabela C

Dane liczbowe cytotoksyczności hodowli komórek raka dla 5,6-aihyarobnazochiaazolia (pochodnych S-metylowych)

169 927

Struktura R	Cytotoksyczność hodowli komórek raka IC50(gM)
SW480-	Inneb
9-SO2NH-4’-C6H4NO2	30
9-SO2NH-4’ -C6H4COCH3	8
9-SO2NH-4’-C6H4F	25
9-SO2NH-4’-C6H4CONH2	80

-SW480 stanowi rak gruczołowy okrężnicy ludzkiej ^b D98 stanowi l1mę komórkową ludzkiego szpiku kostnego; L stanowi lrnię komórkową fibroblastu myszy

Tabela D

Dane liczbowe cytotoksyczności hodowli komórek raka dla w pełni aromatycznych benzochinazolin (pochodnych 3-metylowych)

Struktura R	Cytotoksyczność hodowli komórek raka IC50 (gM)
SWa893	Inneb
9-CH2NH-4'-C6H4NO2	0,4
9-CH2NH-3 ’,4’ -C6H 3F2	n.a.
9-CH2NN-5-(1-ok(oindanyl)	9,9;5	0,25 (D98); 0,058 (L)
9-CH2HH-a’ -C6H4CO2H	2,2
9-CH2NH-4’-C6H4CO-(CH2)2CO2H	0,7	13,5 (D98); 8,8 (L)
9-CH2NH-4'-C6H4CO-CH2CH(CO2H)(CH2)2CO2H	0,03
9-CH2NH-4’-C6H4CO2-n-C12H25	0,4
9-CH2NH-4'-C6H4CO-NH(CH2)2OH	n.a.
9-CN2NH-2’ ,5 ’ -tienylooCO-HHCH(CO2H)(CH2) CO2H	0,1

a SW480 stanowi ludzki rak gruczołowy okrężnicy ^b MCF-7 stanowi ludzki rak gruczołowy sutka;

D98 stanowi lrnię komórkową ludzkiego szpiku kostnego; L stanowi lóiię komórkową fibroblastu myszy.

169 927

Tabela E

Dane liczbowe aztotdkszacnośai hodowli komórek (CCCT)

Ola w pełni aromatycznych r-aminoUkncdildglutaminianżw Ukncoahtnacoliny

R	X	ime	CCCT (gM)
SW-4O0	MCF-7
NH2	0-CH2NH		0,60	0,025
NH2	7-pABAglua		n.a.b	8
NH2	9 -NHSO2		>100	n.a.
NH2	8-SO2NH	9-Br	>50	>50
CH3	7-SO2NH		100	50
^3	9-SO2NH		2,4	0,07
CU	9-CU2nH		0,35	0,0075
CH;,	9-CU2nMk		1,5	0,018
^3	9-Ctom	2'-F	0,02	0,0007
Cu	9-CH2NH	2'-CH Ngluc	0,0008	0,0002
CH3	9-CH2nH	2'-SNgluO	2,0	n.a.
CU	9-HU2O		70	7
CH3	O-CmNMe	2'-CUsNglua	0,5	n.a.
CU	8-CU2NU		>100

apABAglu = reszta r-amindUencdildglntaminiann przyłączona Oo wskazanej pozycji b nie oznaczano c mostek metylenowy między pozycją 2' pierścienia aromatycznego i azotem aminokwasu. 0 mostek siaoackdwz między pozycją 2' pierścienia aromatycznego i azotu aminokwasu.

169 927

Tabela F

Dane liczbowe cytctcksyczncści hodowli komórek (CCCT) dla p-aminobenzoiloglutaminianów dihydrcbtπzochinazoIiny

R	X	Irne	CCCT (pM)
SW-480	MCF-7
NH2	9-SO2NH		7,9	0,650
NH2	8-SO2NH		25	n.a.a
NH2	8-SO2N-propargil		>50	n.a.
NH2	9-SO2NH	8-Br	>50	n.a.
NH2	7pABAglub		>50	n.a.
CH3	9-SO2NH		4,0	0,650
CH3	9-SO2NMe		50	n.a.

^a nie oznaczano ^bpABAglu = reszta p-amincbtnzcilcglutaminianu przyłączona bezpośrednio do wskazanej pozycji.

169 927

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz. Cena 6,00 zł

Claims (5)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. Sposób wytwarzania nowych związków benzochinazolinowych o wzorze (III) (III) lub ich soli, w którym linia przerywana oznacza wiązanie pojedyncze lub podwójne, R? oznacza grupę metylową lub aminową, R⁶ i R oznaczają atomy wodoru, R³² do R³⁵ są takie same lub różne i jeden oznacza grupę -X-NR ¹⁷-R, a pozostałe są niezależnie wybrane z atomu wodoru lub bromu, X oznacza SO2 lub CH2, Rⁿ oznacza atom wodoru lub grupę Ci-4alifatyczną, a r4⁴ oznacza grupę

   R łub

   R

   18 19 19 w których R oznacza grupę nitrową, atom chlorowca lub grupę COR , gdzie R oznacza grupę C1-4 alkilową, aminową lub resztę kwasu glutaminowego o wzorze

   COjH

   CO,H

   22 19a lub jej ester Ci-4alkilowy, R atom wodoru lub fluoru, R oznacza rodnik o wzorze COjH co₂h lub jego ester Ci-4alkilowy, Z oznacza CH2 lub S, znamienny tym, że związek o wzorze (A) (A)

   169 927 w którym jedna z grup Rdo R oznacza grupę chlorowcometylową lub chlo£ow<cosulfonylową, a pozostałe są niezależnie wybrane z atomu wodoru lub bromu, R¹, R , R i linia przerywana mają wyżej podane znaczenie, poddaje się reakcji sprzęgania ze związkiem o wzorze HNR⁷⁷r22, w którym R¹⁷ i R²⁴ mają wyżej podane znaczenie, przy czym gdy R¹ we wzorze (III) oznacza pierwszorzędową grupę aminową, to reakcji poddaje się związek o wzorze (A), w którym R¹ oznacza chronioną pierwszorzędową grupę aminową, a następnie usuwa się grupę zabezpieczającą grupę aminową.
2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w przypadku gdy reakcji poddaje się związek o wzorze (A), w którym jedna z grup R³² do R³⁵ oznacza grupę chlorowcometylową, to najpierw ewentualnie związek o wzorze (A), w którymjedna z grup R³² do R3* oznacza grupę metylową, poddaje się chlorowcowaniu.
3. 3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że stosuje się związek wyjściowy o wzorze (A), w którym jedna z grup R³² do R³⁵ oznacza grupę bromometylową, a pozostałe mają znaczenie podane w zastrz. 1.

   2. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że w przypadku wytwarzania:

   - kwasu N-(2-((3-amino-1,2,5,6-tetrahydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowego, jako związek o wzorze (A) stosuje się 3-amino-8-bromo-5,6dihydrobenzo[f]chinazolin-1 (2H)-on-9-sulfonyl;

   -kwasu N-(2-((1,2,5,6-tetrahydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)-sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowego, jako związek o wzorze (A) stosuje się kwas (((1,2,5,6-tetrahydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chmazolin-9-ylo)-sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowy;

   - kwasu N-(2-((1,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)sulfonamido)benzoilo)-L-glutaminowego, jako związek o wzorze (A) stosuje się N-(2-(1,2,5,6-tetrahydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]-chinazolin-9-ylo)sulfonamido)-L-glutaminian dietylu;

   -kwasu N-(2-((1,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo-metylo)amino)-2-fluorobenzoilo)-L-glutaminowego, jako związek o wzorze (A) stosuje się 9-bromometylo-3-metylobenzo[f]chinazolin-(2H)-on;

   - kwasu N-(2-((( 1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino)benzoilo)-L-glutaminowego, jako związek o wzorze (A) stosuje się 9-bromometylo-3-metylobenzo[f]chinazolin-1 (2H)-on;

   -kwasu (S)-2-(5-((1,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo-[f]chinazolin-9-ylo)-metylo)-amino-1-okso-izoindolinylo)glutarowego, jako związek o wzorze (A) stosuje się 9-bromometylo-3metylo-benzo[f]chinazolin-1 (2H)-on;

   -9-((2-acetyloanilino)metylo)-3-metylobenzo[f]chinazolin-1-(2H)-onu, jako związek o wzorze (A) stosuje się 9-bromometylo-3-metylobenzo[f]chinazolin-1(2H)-on;

   -3-metylo-9-((2-nitroanilino)metyl)obenzo[f]chinazolin-1-(2H)-onu,jako związek o wzorze (A) stosuje się 9-bromometylo-3-metylobenzo[f]chinazolin-1(2H)-on;

   - kwasu N-(2(((3-amino-1,2-dihydro-1 -oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino)benzoilo)-L-glutaminowego, jako związek o wzorze (A) stosuje się N-(1,2-dihydro-9-metylo-1oksobenzo[f|chinazolin-3-ylo)piwaloamid;

   -3-amino-9-((2-nitroanilino)metylo)benzo[f]chinazolin-1-(2H)-onu, jako związek o wzorze (A) stosuje się N-(9-bromometylo-1,2-dihydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-3-ylo)piwaloamid;

   -9-((2-acetyloanilino)metylo)-3-aminobenzo[f]chinazolin-1(2H)-onu, jako związek o wzorze (A) stosuje się N-(9-bromometylo-1,2-dihydro-1-oksobenzo[f]chinazolin-3-ylo)piwaloamid.
4. 5. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że w przypadku wytwarzania kwasu (S)-2-(5-((( 1,2-dihydro-3-metylo-1 -oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)-metylo)amino)-1 -okso-2-iD indolinylo)glutarowego, jako związek o wzorze (A) stosuje się 9-bromometylo-3-metylobenzo[f]chinazolin-1 (2H)-on.
5. 6. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że w przypadku wytwarzania kwasu (S)-2-(5-((( 1,2-dihydro-3-metylo-1-oksobenzo[f]chinazolin-9-ylo)metylo)amino-1 -okso-2-izon dolinylo)glutarowego, związek o wzorze

   169 927 w którym R

   CH oznacza grupę Ci-6alkilową, poddaje się reakcji ze związkiem o wzorze NH

   X.

   h₃c'

   NH, po czym otrzymaną benzochinazolinę poddaje się dehydrogenacji, otrzymany związek o wzorze chlorowcuje się w grupie 9-metylowej, po czym otrzymaną 9-chlorowcometylobenzochinazolinę lub jego solą, po czym przeprowadza hydrolizę do wolnego kwasu.