Opis patentowy opublikowano: 15*04;1983 117 618 Int. Cl.3 A«1K 39/39 //C12N 7/08 Twórca wynalazku: Stojkovic Ljubinko Uprawniony z patentu: Solco Basel AG., Bazylea (Szwajcaria) Sposób wytwarzania szczepionki nieswoistej przeciw rzesistkowicy Przedmdotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowej, nieswoistej szczepionki przeciw rzesi¬ stkowicy.Gatunek Trichomonas vaginalis nalezy do Pro- tozoa i zgodnie z systematyka iProtozoa, majacych znaczenie w medycynie ludzkiej, do klasy Masti- gophora albo Flagellata. Jest to glówny pasozyt patogenny, którego obecnosc stwierdzono w zen-, skich i meskich drogach moczowoplciowych. Prze^ noszenie zachodzi glówTnie przez kontakt plciowy, ale wykazano równiez zakazenia za posrednictwem przedmiotów.Chociaz równiez u mezczyzn zakazenie wystepuje czesto, tak jak i u kobiet, jednakze objawy kli¬ niczne wykazywane sa znacznie rzadziej, a u wiek¬ szosci nosicieli rzesistka nie wystepuja objawy, albo tez wcale nie zwracaja oni uwagi na nie¬ znaczna wydzieline — objaw zapalenia cewki moczowej.Praktyczne znaczenie zakazenia u kobiety polega przede wszystkim na zaburzeniach w narzadach plciowych spowodowanych przez silne zapalenie pochwy z nastepstwami czesto wplywajacymi na prawidlowosc pozycia malzenskiego. Ogólnie, za¬ kazenie nie ogranicza sie do pochwy, gdyz mie¬ szana flora patogenna, najczesciej towarzyszaca rzesistkowi dostaje sie do górnych czesci dróg rodnych, co prowadzi do zapalenia przydatków (A<$nexitis), z niebezpieczenstwem ciazy jajowodo¬ wej, albo zamkniecia swiatla jajowodu (bezplod- 10 13 20 29 30 nosc). Przewlekle zakazenia, jak równiez powtarza¬ jace sie nawracajace zaostrzenia, prowadiza do silnych zapalen czesci pochwowej macicy i szyjki, a z kolei miejscowych uszkodzen tkanki, które moga wyrazac sie zdolnoscia do wstecznego i wa¬ dliwego rozwoju tkanek, az do raka szyjki ma¬ cicy. Ten róznorodny obraz kliniczny okresla sie lacznie jako rzesistkowice.Aczkolwiek Metronidazol [M2-hydroksye|tyio)-2- -metylo-5-niitroimidazol], jako preparat rzesistko- bójczy calkowicie naidaje sie do niszczenia Tricho¬ monas vaginalis i z tego powodu wprowadizony jest do lecznictwa^ ilosc zachorowan nie wykazuje spadku, ale raczej tendencje wzrastajaca. W zalez¬ nosci od kraju, zakazenie wystejpuje u 3,,5—8ft% mieszkanców, tak wiec rzesistkowice mozna okreslic jako chorobe spoleczna.Wzrost promiskuityzmu znacznie wzmaga roz¬ powszechnianie sie zakazen i ciagle powtarzanie sie zakazen wtórnych. Dochodzi do tego uporczy¬ wosc zakazenia i pejwna opoirnosc na leczenie przy stale rozpowszechniajacym sie dlugotrwalym po¬ bieraniu steroidów hamujacych owulaeje, gdy jak wiadomo, wszelkie stany hipoowarialne (to znaczy stany wzglednego niedoboru wytwairzanych w orga¬ nizmie hormonów janifcowych) hamuja proliferacje nablonka pochwy.Stwierdzono, ze sposród ogromnej ilosci wyste¬ pujacych w -naturze szczepów (jak dotychczas zna¬ nych jest okolo 4000 róznych szczepów) Lacto- 117 618117 618 baclterium acidophiliuim, takze Lacfcoibacdakis acido- philus, zwanych paleczkami kwasu mlekowego lub paleczkami Doederleina, mozna wyróznic takie, z których wytworzyc mozna szczepionke nieswoista wartosciowa w leczeniu rzesistkowicy.Poszczególne szczepy wyizolowane' zostaly w szpdttailju w roku 11976 z pochwy kobiet cierpia¬ cych na te chorobe. Szczepy te zdeponowano w dniu 17 pazdziernika 1977 w stanie zliofilizowa- nych w „Centraaiibtureaai voor SchtamelciuLtures" w Baarn (Holandia) pod numerami rejestracyjnymi CBS 485.77 do OBS 472,77 (osiem osobnych szcze¬ pów).Pod wzgledem morfologii poszczegóilne szczepy róznia sie od siebie miedlzy innymi wielkoscia Utworzonych kolonii: niektóre kolonie sa bardzo male, przeswituja i okragle, inne sa wieksze i maja ksztalt roizeltki, o pomarszczonej górnej powierzch¬ ni. Pod wzgledem mikroskopowym wszystkie oisiem szczepów bakterii nalezy do Gram — dodatnich poltaorficznych Bacillae, wystepujacych w postaci lancuszków lub palisad.(Wlasnosci taiocihemiczne tych szczepów mozna scharakteryzowac poprzez ich wzrost na róznych zródlach wegla. 15 20 25 nizmy wywodzace sie z co najmniej trzech szcze¬ pów- (Sposób wedlug wynalazku wytwarzania szcze¬ pionki nieswoistej polega na tym, ze prowadzi sie hodowle wyzej wymienionych, niektórych lub wszystkich-, a w tym przypadku kazdego z men osobno, (szczepów Lactobaclterkiimi aciidophillnjum w odpowiednim podlozu plynnym w warunkach aerobowych i po zakonczeniu hodowli oddziela sie wytworzona biomase i w znany sposób imaktywiuje, a nastepnie zimaktywiowane drobnoustroje nalezace do poszczególnych szczepów miesza sie w fizjolo¬ gicznymi roztworze soli ze soba w ilosciach od¬ wrotnie proporcjonalnych do gestosci hodowli (ilosc drobnoustrojów/ml brzeczki) # ustalonej po zakonczeniu hodowli lub po inaktywacji.Wispomniainje szczepy dobiera sie w ten sposób, aby po przeprowadzeniu doswiadczen z zastosowa¬ niem wszystkich osmiu szczepów otrzymac szcze¬ pionke powszechnie skuteczna. Terrctfin ten oznacza szczepionke, która z praktycznego punktu widze¬ nia dziala skutecznie na; kazda w ogóle pacjentke, czyli taka szczepionke, za pomoca której, bez wzgle¬ du na tlo zakazenia, leczy sa«e z [powodzeniem rze- sistkowice. Dlatego tez wynalazek obejmuje swym Tablica I Zródlo wegla Araibinoza Calobioza Lakitoza Maltoza Mannit Meloibioza Rafioza Raimnoza ' Salicyina Sacharoza Trehaioiza Kisyloza Ryboza Skrobia 485.77 —i +1 +i + -i rh ;+: :+l .+.¦+,. •+( ± +, ± Lactobacterium acidopliilum, szczep CBS — 48.8.7:7 rh -¦ +i + + + +,; + . + + +; -: +, —' 4)97,77 +1 -J +; -H .+, w +i t+! :+! ¦+' +• - +' —i 488.77 ;+ -'- -+! M + — -! H-; +: +. + -! +i —i 499.77 + -i ¦+, +. +: ¦¦+; +. +' +; +; +i - ¦+. — 4710.77 —¦ - — ± + -.- .+. ¦+. !+ .+. ± + ;± Nr: 471.77 — -' - + — +.i. +; -1 - <+: -: - - — 472.77 th - + +. -• — -. . -h. + ¦ +: ¦• - ) -h — Szczepy CBS 466.77tt 467.77 i 469.77 wykazuja takie same wlasciwosci biochemiczne wzglednie fermentacyjne.Szczepionka nieswoista wytwarzana spoeofcem wedlug wynalazku sklada sie ze zinakfcywowanych drobnoustrojów nalezacych do szczepów Lactobac- terium acidophilbum wyzej zdefiniowanych w fizjo¬ logicznym roztworze soli, przy czym dirobnoustroje pOiCHojdzace z czesci tych szczepów Lub ze wszyst¬ kich tjnch szczepów, wprowadzone sa w ilosciach w przyblizeniu równych jesli chodzi o poszczególne szczepy, z tym, ze szczepionka zawiera mikroorga- 55 65 zakresem szczepionke, w której sklad wchodza zinaktywowane drobnoustroje nalezace do osmiu wyzej wymienionych szczepów. Wynalazek obej¬ muje takze sposób wytwarzania tej szczepionki z udzialem wyzej wymienionych szczepów.Do hodowli szczepów mozna uzyc rozmaitych zwyjklyth plynnych podlozy makrobiologiczinyoh.Szczególnie korzystnym podlozem jest podane w przykladzie podloze o nastepujacym sklaldzie: Pi r z y k l a d.Tryptoseipepton — 5 g Hydrolizat kazeiny — % $tllf«18 6 Wyciag;:2BaQM&!: JDializaft ^drozdzowy K2H0PO4 Cytryinian amonowy Octan sodowy Mieszanina soli Tween 80R Glukoza Laktoza iWioda destylowana do — 10 g — • IfOG im! — 2 g — 2 g — 5 g — 5 ml — 1 ml — liO g — 10 g — 1000 mi iWyzej wspomniana mieszanina soli ma nastepu¬ jacy sklad: MgS04-7H20 — 11,5 g MnS04'2H^0 — 0*4 g P^eS04-7HjO^ — A68 g ,Woda destylowana do — IiOiO ml pH plynnego podloza koryguje sie do 6,1^6,8, korzystnie do 6,5, po czyim podloze wyjalawia, sie w autoklawie w temperaturze ld5°C w ciag;u 20 minut. Podloze rozlewa sie do wyjalowionych naczyn, takich jak koliby Erienmeyera. i zawartosc kazdej kolby posiewa sie drobnoustrojami dianego szczepu. Hoidiowile dogodnie prowadzi sie w tem¬ peraturze 3|2^4i50C, korzystanie w temperaturze okolo 37°C, np. w ciagu 43 godzin. Po uplywie tego czasu, albo po wytworzeniu przewidywanej ilosci biomasy, wystarczajacej dla otrzymania szcze¬ pionki, biomase wyodrebnia sie w warunkach ja¬ lowych i wyidziele ze srodowiska podloza za po- pomoca odwirowania, np. w ciagu 1 godziny przy 3000 obr7imin.Bioimase, stanowiaca material biologiczny, za¬ wiesza sie ponownie, korzystnie w fizjologiezmym roztworze soli, po czym inaktywuje w znany spo¬ sób. Do inaktywacji szczególnie nadaje sie dziala¬ nie formaldehydem i fenolem. Korzystnie stezenie formaldehydu w zawiesinie wynosi Ó,3°7o, a fenolu X),5*/c^ a korzystny czas inaktywacji 3—15 dni. Po iinaktywaeji ponownie odwirowuje sie zawiesine, np. w ciagu 1" godziny przy 3000 Oibr./miln., w celu Jusuttiiecia ze zinaktywowanego materialu srodka uzytego do inaktywacji, czyli nadmianu formalde¬ hydu i fenolu.' Matetrial uzyskany z kazdego szczepu ponownie zamiesza sie, korzystnie w fizjologicznym roz¬ tworze soli i poddaje badamiu na jalowosc oraz obecnosc jeszcze zywych komórek L.acidophiliuim metodami opisanymi w pooizszej czesci opisu. yl przypadku, gdy oba te oznaczenia dadza wynik negatywny, to znaczy wtedy, gdy otrzymany ma¬ terial: nadaje sie do wytworzenia szczepionki, okresla sie osobno dla kazdego saczepu gestosc hodowli czyli ilosc drobnoustrojów na ml brzeczki.W przypadku^ gdy z jakichkolwiek przyczyn nie jest mozliwe dokonanie zmierzania poszczególnych materialów biologicznych bezposrednio po inakty¬ wacji, nalezy odnosne zawiesmy przechowywac w temperaturze 4°C Mozna takze zliofiiizowac drotinoiustiroje' z danego szczepu i w tym stanie przechowywac w temperaturze okolo 4°C. Zliofi- lizowane szczepy mozna w stanie niezmienionym przechowywac w tej temperaturze przez okres czasu wynoszacy co najmniej 3 latac Korzystnymi koloidem, ochronnym do liofilizacji jest zwiaszcza mieszaniina zlo&yna z 5$V# zelatyny, 37,5ty© sacharozy i 0,5*/» laMsaatefm wapinitrorego.Korzystnie liofilizacja tirwa -24 godziny.Materialy biologiczne uzyskane l poszczególnych szczepów i ztoafetywowame, miesza sie ze soba 5 w takich ilosciach, aby otrzymac- sECzeftictnlke w przyjblizeffiifu rówTrwwfcOTtesciowa jesli chlodzi o ilosc drofbnoustrojów kazdego szczepu/ml. Wy¬ tworzona szczepionke rozciencza sie, korzystnie fizjologicznym roztworem soli, tak, atoy ilosc !0 droibnoustirojóiw wynoste 14X[lWlml.W otrzymanej szczepioince zawartosc azotu calko¬ witego wynosi 3,68 mg % w przeliczeniu na sucha mase (oznaczenie wg KjeldaMa). Okazalo sie ce¬ lowe dodawanie do szczepionki srodka kanseirjwu- 15 jacego, takiego jak formaldehyd lub fenol, w ste¬ zeniu np. 0,25% lub etylorteciotiosalicylanu sodo¬ wego (Tiomersal), a nai&fcejpmie:, przed napelnie¬ niem ampulek, kondycjonowanie szczepionki w ciagu 30 dni w temperaturze okolo 4°C. Korzy- 10 stnie jedna ampulka, zawiera 0,5 ml opisywanej szczepionki JeM oczywiste, ze te ostatnie czynnosci powinny byc wykonywane w wamunkach jalowych z uzyciem naczyn szklanych woihych od piroge- nów. 28 Zawartosc ampulki mozna takze zliofHizowac i az do momentu uzycia przechowywac w posfaci suchej, zwlaszcza w temperaturze oko*o 4°C.Tirwalosc szczepionki, czy to w postaci zwyklej czy suchej wynosi co najmniej 3 lata od wytwo- 30 rzenia przy przechowywaniu w temperaturze 2—8°C, a wiec normalnej temperaturze lodówki.W warunkach przechowywania w temperaturze okolo 20°C szczepionka zachowuje ttrwalosc przez okolo 6 miesiecy. Nalezy takze wspomniec, ze tt 3-letni okres czasu stanowi maksymalny okres trwalosci dopuszczony dla inakftywowanych szcze¬ pionek przez Swiatowa Organizacje Zdrowia.Szczepionki przed zwolnieniem do uzytku w lecznictwie powinny byc poddane nastepujacym 40 badaniom: 1) Badanie jalowosci (pierwsze badanie jalowosci), 2) Badanie toksycznosci, 3) Badanie dzialania szczepionki jako antygenu, 4) Badanie na obecnosc zywych komórek Lacto- 45 bacterium acidophilum. fW szczególnosci badania te przeprowadza sie wedlug przepisów Swiatowej Organizacji ZdTowia (Erfordenisse fuer biologische Siufostanzen, Tech- nische Berichte der WGO Nr 3i23, 1966) oraz W Farmakopei Europejskiej II, 1971.W celu badania na jalowosc, do próbóiwek zia- wieirajacych podloze z tioglikolariem, oraz do pro- bówejk z bulionem Safooiarau^a dodano po 1 ml szczepionki, a nastepnie Lnfoubowano je w tempe- 55 raturze 37°C przez 10 dni. W tym samym czasie inkubowano w temparaiturze) 25°C analogiczna serie probówek tak samo przygotowanych. W ten sposób wykazano, ze zawartosc probówek obu serii pozostala jalowa^ 50 Do badania toksycznosci uzywano swinek mor¬ skich i bialych myszy. Pieciu swinkom morskim o przecietnej wadze ciala 300 g podano dójriiieiSnik wo po 5 ml szczepionki, to znaczy 10 razy wiecej niz wynosi pojedyncza dawka przeiwijdziana dla w ludzi, po 2*5 ml w kazda tylna nózfce. Po okresie117*18 8 obserwacji trwajacym 14 dni stan zdrowia wszy- stkiicih 5 zwierzat pozostal bez zmiany. Nie sitwier- dzcno tez zadnych reakcji w miejscach wprowa¬ dzenia, szczepionki na nogach zwierzajt. Równolegle 10 bialym myszom o przecietnej wadze ciala 20 g podano domiesniowo w jedna tylna nózke po 0,5 ml szczepionki. Po okresie obserwacji trwa¬ jacym 14 dni stan zdrowia wszystkich 10 myszy pozostal beiz anton.Badanie dzialania szczepionki jako antygenu przeprowadzono wpierw in vivo na swinkach mor¬ skich. Trzem ze zwierzat wspomnianych w po¬ przednim .ustepie, po uplywie 14 dni, podano do- sercowo po 1 ml szczepionki. Mimo stosunkowo wysokiej dawki nie zaobserwowano zadnej reakcji anafiiaktycznej. Nastepnie sizczepionke poddano ba- danioim in vi)fcro metoda tamiunodyfuzji Ciuchter- lonylego wobec próbek normalnej surowicy Ludz¬ kiej. Nie sfbwiierdizono zadinej reakcji dodatniej.IW celu badania na obecnosc zywych komórek Lac!tiOibaqteriuim acidoph^uim zaszczepiono próbkami szclzepioflUkd podloza' stala, przeznaczone do izolowa¬ nia i identyfiiko|w«tnija tych mikroorganizmów. Do badan tych nadaje sie podloze o nastepujacym skladzie: Woda Tripcasein Hotzjtwór lf Roz;tw6r 2i Rozitwóir 3 Roztwór 4 Swieze drozdze [Witt — Pepiton Skrobia rozpuszczalna, 0,5P/a i(w sttainie rozpusz; ¦Woda do :zonym) — — — — — — — — — —. 800 ml ilS g 50 ml 10 ml 10 ml 1I01 ml iUW g 10 g 5 g iiooo mi fWyzej wymienione, w danym przypadku wiodne, roztwory posiadla nastepujacy sklad: roztwór l:10°/o roztwór N.aiCl, rozitwór |2):|2%, roztwór KC1 i 5% roztwór Na^CDp roat(wór 3:2i%t roztwór CaCl2 i 1% roztwór MgCl2, roztwór 4:%5% rotzitwór KgiHlPO^ Po otrzymanych rozitworów koncowych diaidlano 26 g agaru, pH skorygowano do wartosci 5,5—6,7, korzystnie do 6,0 i otrzymane podloze wyjalawiano w autoklawie w ciagu 20 minuit w temperaturze lli50C.. Nastepnie dodano rozitwór 3 g maltozy, 10 g glukozy i 10 g lakjtozy w LOO ml wody, po czym dodano 30 ml l°/a roztworu chlorowociairku cyisteiiny. Kazdy z tych roztworów zostal uprzednio wyjalowiony przez przesaczenie, np. przez fidtr szklany G 5. Oistateczniie dodano odwlókniona krew ludzka do zawartosci 10%. Tak przygotowane podloze agarowe z krwia zaszczepiono szczepionka i inkjuibowano w temperaturze 37°C. Dla -kontroli w taki sam sposób zaszczejpiono i inkiu/bowano próby zawierajace Lactobacterium acidophilum.W otrzymanej szczepionce nie stwierdzono zad¬ nych zywych drobnoiulsbrojów. Potwierdza to pelna inakttywacje przeprowadziona korzystna metoda z uzypiem formaldehytdu i fenolu. Tak wiec szcze- pioi|ika wytworzona sposobem wedlug wynalazku staiyGgwi szczepionke z. zabitych drobnoustrojów.Pwiiawaz, z drugiej strony, wybiera ona dziala¬ lo 15 20 25 30 35 43 45 00 55 60 05 nie przeciw zakazeniu, i jego nasteip&twoim, spowo¬ dowanemu przez odmienny drobnoustrój, a miano¬ wicie Trichomonias vagioalis, nalezy ona do szcze¬ pionek nieiswoistych.Szczepionka wywoluje miedzy innymi tworzenie sie swoistych przeciwcial Lacoibacjterium acido¬ philum, szczególnie przeciw nienormalnym i poli- morfiicznym formom tego drobnqustrojiu, które sa wspólodpowiedzialne za patologiczna zmiane war¬ tosci pH pochwy w rzeisi&tkawicy. Immuniz-ujace dzialanie tego rodzaju tak w badaniach na zwie¬ rzetach, jak i w próbach klinicznych, mozna udo¬ wodnic w naistepujacy sposób.W badaniach na zwierzetach uzywano 2 króli¬ ków o wadze ciala 2,950 wzglednie 3200 g. Dwu¬ krotnie, w odstepach tygodniowych, podano do¬ zylnie po 0,i5 ml szczepionki; Po -uplywie miesiaca od ostatniego podania od zwierzat tych pobrano krew i otrzymano z niej siurowice. Przy badaniu na obecnosc przeciwcial surowica w rozcienczeniu co najmniej 1:50,, powinna swoiscie agluitynowac komórki L.acidophilium kazdego ze szczepów, z któ¬ rych otrzymana zostala szczepionka. Naistejpnde poszujkijwano rozcienczenia surowicy dajacego do¬ datnie miano agluitynin. Tek w przypadku pierw¬ szego, jak i drugiego królika, miano agiutyniny bylo przed' pierwszym; szczepieniem ujemne w przypadku rozcienczenia 1:10. Po uplywie mie¬ siaca od drugiego szczepienia stwierdzono, ze miano jeisit dodatnie przy rozcienczeniu 1:j1^0„ wzglednie l:fl0.Nowa szczepionka umozliwia leczenie rzesistko- wicy i zapobieganie jej przy ostrym, przewleklym lub bezobjawowym zakazeniu rzeisisitkiem. Tak w leczeniu, jak i przy zapobieganiu, stosuje sie nastepujace dawkowanie-. Pacjentkom podaje sie domiesniiowo jedna dawke 0,5 'ml (to znaczy okolo 7X109 mikroorganizmów) powtarzajac to trzykrot¬ ni z odstepami wynosizacymi w tym przypadku 2 tygodnia a naistepnie, po uplywie roku od rozpoczecia laczenia taka sama (0,5 ml) dawke przypominajaca.Stosownie do przyjetego sposobu dawkowania przeprowadzono próby kliniczne i badania serolo¬ giczne u 97 pacjentek. Od pacjentek, zgiodnie z ustalonym planem, pobrano krew i w otrzyma¬ nej z niej surowicy przeprowadzono próby na obecnosc przeciwcial przeciwko Lacftobaoterium acidophilium. W tym celu surowice uzyta w roz- cienczeniach geometrycznych (o|d 1:10 do 1 M&&0) poddawano dzialaniu ainitygenu odipowiadajacego szczepionce lub aglujtynogenu i prowadzono obser¬ wacje ewejrutualriie zachodzacej aglutynacji. Jako aglujtynogenu uzywania swiezo otrzymanej, to znaczy nie dawniej niz przed 3 miesiacami, za¬ wiesiny zinaktywoiwanych drobnoustrojów Lacto- bacterijum aicidophiilum, tych samych sizczepów i w tym samym wzajemnym stosunku ilosciowym i stezeniu ,(14X|109 drobnoiuistrojów/ml) jak w szcze¬ pionce. Do iinakitywaciji zawiesiny stosowano fenol w stezeniu 0„2)5r%. Wystejpowanie i czas pojawiiania sie agluttyniiny w surowicy jako skutikiu szczepie¬ nia, przejawi sie wyraznie w wartosciach miana, jak to przedstawiono w ponizszej tablicy U.117 618 9 Tablica II Rozklad wartosci miana agfliUityininy przed i po szczepieniu 10 Tablica m - /WizufOBit wantlosci miana aglutynacji Miano 1 1:10 1:10 1:20 1:40 1:80 lMttD 1:3,20 l:'.340 1:12130 Ogólem* Srednia geome* tryozma miana Przed sizcze- pienieim fl 16 0 3 13 2(9 118 (13 0 0 97 1:5(6,4 2. tygodnie 3 mie¬ siace 6 miesiecy po 3 wstrzy¬ knieciu 3 ii 10 2 0 3 13 49 2)5 4 97 1:3i5i6 4 1 0 a i j5 lii 48 3 m 1:203 5 1 0 3 3 6 16 40 GIO 3 02 1:257^ 'li2 mie¬ siecy po szcze¬ pieniu 6 . 1 3 8. 17 16 as a 0 64 1:120 * Mniejsza liczebnosc w rubryce „Ogólem" wy¬ nika z niezgloszenia sie czesci pacjentek do dalszej konitjroli. iNa podstawie srednich geoimetirycznych wartosci miana) zamieszczonych w powyzszej tablicy 2 stwierdza sie9 ze np. w ciagu 3 miesiecy od zakon¬ czenia szczepien wspólczynnik wzrostu mdalna wy¬ niósl (przecietnie) 6,3. W ciagu roku od rozpoczecia szczepien, to znaczy w czasie podawania dawki przypominajacej, miano aglutyniny jest jeszcze 2,i raza wieksze niiz przed szczepieniem, czym czescio¬ wo mozna wytlumaczyc dlugotrwaly skutek lecze¬ nia.Przy uwzglednieniu wzrostu wartosci miana za¬ chodzacego w okresie nastepujacym bezposrednio po szczepieniu, to znaczy w czasie mdedzy pierw¬ szym a drugim pobraniem krwi, wzrost ten dla poszczególnych pacjentek przedstawia sde naste¬ pujaco.Obraz skutków leczenia moze uzmyslowic do¬ laczone nastepujace sprawozdanie kliniczne. 200 ko¬ biet z rzesistkowica w wieku od 15 do 59 lat leczono ambulatoryjnie szczepionka wytworzona z 8 wymienionych szczepów. Dla czesci grupy: pacjentek kontrola rozciagala sie na ponad dwu¬ letni okres czasu (2 pacjentki nie zglosily sie wiecej do kontroli). 138 pacjentek, to znaczy 69?/o calosci leczylo sie przed tym kilkakrotnie prepara¬ tami doustnymi lufo dopochwowymi, a zwlaszcza metronizazolem, jednakze z powodu odnowienia sie zakazenia z krótkotrwalym skutkiem.Przed rozpoczeciem leczenia, przeprowadzono, obok badania moczu i krwi, badanie ginekologiczne wlacznie z kolposkopia i rozmazem wedlug Papa- nicolaou. Jednoczesnie pobierano rozmazy ze sro- 10 ii 25 30 35 45 50 | wrtó-l- 1 cizymrjjk wzirioistfu Ilosc . pacjen¬ tek Udzial pacjen¬ tek w sto¬ sunku do calosci 2X 13 13,4?/o 4X ia 13,4|Vo 3X 21 21,6P/o - 16X 10 10,31% 32X 6 6,2Vo mx i wie¬ cej 7 7^/o mu, pochwy, szyjki i cewki moczowej. Sporzadzano preparaty: bezposredni, jak równiez barwione me¬ toda Grama i Giemsy, a takze zakladano hodowle Trichomonas vaginalis. Wszystkie te badania po¬ wtarzano po uplywie 6 tygodni, 4 miesiecy i 12 miesiecy od poczatku leczenia.Przed rozpoczeciem leczenia u 145 na 200 pacjen¬ tek (72,5IB/») stwierdzono wyrazne objawy rzesistko- wicy z silnym zapaleniem pochwy, swiadem, obfita zielono-zóltawa wydzielina o przykrym zapachu, boiesnoscia przy stosunku plciowym i zaburzeniami w oddawaniu moczu itd. Za pomoca kodposkopii wykazywano obrzek i zaczerwienienia nablonka pochwy i czesci pochwowej macicy. Oprócz tego u 61 pacjentek stwierdzono punkcikawate zaczer¬ wienienia na czesci pochwowej macicy, a u 113 in¬ nych przewlekle zapalenie szyjki macicy. U 55 po¬ zostalych pacjentek (27,5!°/*) objawy byly dyskret¬ ne — stwierdzono jedynie lekkie zapalenie pochwy.Leczenie prowadzono stosujac wyzej podane dawkowanie. W przypadkach lekkiego zapalenia pochwy nie stosowano zadnego dodatkowego le¬ czenia, natomiast w celu zlagodzenia ostrych obja¬ wów podawano miejscowo antybiotyki, a w sta¬ nach ciezkich dodatkowo miejscowo preparty wy¬ tworzone ze szczepów Lactofoacterium aeidophilum, skuteczne przeciw moniliozie. Jednakze w zadnym przypadku nie stosowano Metronidazolu lub po¬ dobnych pochodnych nitroimidazolu.Po zakwalifikowaniu zgodnie z Jirovecem (W. Ritzerfeld, Der Gynaekologe, 2, 1 (1969), strony 2—6) wydzielin z pochwy do nastepujacych klas, skutek leczenia da sie wyraznie odczytac z ta¬ blicy IV.Klasa I — obraz jak u zdrowej kobiety Klasa II — wydzielina bez bakterii ropnycli Klasa III — wydzielina z bakteriami ropnymi Klasa IV — rzezaczka — przypadków tych nie wlaczono do. badan.Klasa V — zakazenie rzesistkiem (dodatni pre¬ parat bezposredni) Klasa VI —* grzybica pochwy (Candida albicans) 9 pacjentek, u których przy drugiej kontroli, po uplywie 3 miesiecy , od zakonczenia! szczepien, stwierdzono jeszcze- mikjnoskopowp Trichomonas vaginalis, pozostawalo dalej opornymi na leczenie.11 IW618 Tajibilica IV 12 Czas badania Przed szczepieniem 2 tygodnie 2 tygodnie po trzecim wstrzy¬ knieciu 3 miesiace po trzecim wstrzy¬ knieciu 12 miesiecy po rozpoczeciu szczepien Liczebnosc 200 200 198 198 Klasa II - 1391 69,51% 164 157 79,3P7o • -—i 1. — Klasa III — 47 23,'9?/o 27 13^Vo 32 16,2P/o Klasa V 194 97!% 14 9 4,5"/o 9 4,5«Vo Klasa VI 6 3P/t — ' *~~* Równiez*, doustne leczenie Tfrdchomonazfidieni nie zmdeinLbo tego staJruu. Oprócz tego poaositaly takze po 12 miesiacach zmiany na szyjce macficy w po- sitacri p^zeiwlaktego zapalenia saytfki, altoci imfeen- sywtiych p^utokieiko^a^ih: za#z«rw4eaue& Ndepowo- dtfenia te moma wyttonaezyc w; tern sposób, ze kobiiety te rjotóimo p^awu^owego swaae^i^ria nie byiy w stanie wyttwotffeyc przeciwcial w wystarcza¬ jacej ilpsci.U 189' ze 198 (^5^M leczonych pacjajn/tek wyka¬ pano po 12 rttesdacachwystaielfine z pochwy klasy II i Hk co. dsnaca^ ze aootaly wytoczone z zakaze¬ nia iseatetictepi. Wylecnenie u 5(5 pacjentek z lek¬ kim zafralfcnietn pochwy zoetato ossagirtielte bez jakiegoitoiliwaete dodaflkfciwego leczenia. Pacjentki poddano dalfitóf otoeetmyacji, cBeisci«(WO w okresie ponad dwMtatftim. W czasie tym wie nastapily na- wiPOity i zaka^nia wjtdtttn» do jes£ ajawistoi-em nowyirrw tej dziedsirarte loedycymy i, motie wskazy¬ wac na odltwarzenie s&fo£bigg& milieti w ptói/wde, nietoomsystnego dla ne#fet(fca. fto«sr tym a^e-ptonka wykazuje dodatni wplywa na- zmiasffy szyjki i uszko- dzeffida czesci poelu^Mwetj macicy. Og6kiy rettuMaft okaze sie jes&cze bardziej nziucajsjcy sde w oczy po usw&aidofn£etniiu sobie, ze w wliekBtfflosci pirayipadków pacjeffiilkli leofcomo juz rozdy^rra zwiac&aimi chemiciz- nymo, rnifejsoowo i ogóOtoie, . jedlnafcie tylklo z przejsL ciowyim skwjtfciean, Oprócz pirizegsciBpiwejgio zacaertw^tueinia Luib lek¬ kiego obramienia w ofcrreibdie miejsca wlsterteykiniecia, u zadnej z pacjejtttek nie wys)tajpily, ani* w trakcie kuracji, ani bezposrednio po nAej, zadine nkpaza- dawe statki ufcccme. Nie sfcw^dzoaio takze zad¬ nych 0texyto&& aiefgicznycli lub toksycznych.W putóypadteu ostrych zakazen gwaazfafjiwych, schorzen tfela&t tar^itoftiwdrczsgo i odezkiei niewy- dolnosci nerek, szczeptieniia sa niewskazane.Aczkolwiek pozadane jest jednoczesne leczenie paffrtmfiGa patijeattfei leczonej sz&repmnkA, z pamkftu w kowp tootoJCtfiana pemielwaz w wynitou szcaepien pacjentka staje sie adgtann*. 25 35 40 45 50 ¦S5 PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL