NO851535L - Nye polypeptider med blodkoaguleringshemmende virkning, fremgangsmaate til deres fremstilling resp. utvinnelse, deres anvendelse og midler inneholdende disse - Google Patents
Nye polypeptider med blodkoaguleringshemmende virkning, fremgangsmaate til deres fremstilling resp. utvinnelse, deres anvendelse og midler inneholdende disseInfo
- Publication number
- NO851535L NO851535L NO851535A NO851535A NO851535L NO 851535 L NO851535 L NO 851535L NO 851535 A NO851535 A NO 851535A NO 851535 A NO851535 A NO 851535A NO 851535 L NO851535 L NO 851535L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- polypeptide
- val
- formula
- peptide
- acid
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 45
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims description 33
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 title description 2
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 title 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 12
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 11
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 10
- 241000545744 Hirudinea Species 0.000 claims description 9
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 9
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 9
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 7
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 claims description 6
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 claims description 6
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 claims description 6
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 claims description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 241000237903 Hirudo Species 0.000 claims description 4
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 claims description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 4
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 4
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N urethane group Chemical group NC(=O)OCC JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 3
- WRFPVMFCRNYQNR-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyphenylalanine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1O WRFPVMFCRNYQNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 claims description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 2
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000004459 forage Substances 0.000 claims 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- -1 Cit Chemical compound 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 7
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 3
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000237902 Hirudo medicinalis Species 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N N-bromosuccinimide Chemical compound BrN1C(=O)CCC1=O PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical group [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 2
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000001601 blood-air barrier Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N phenyl isothiocyanate Chemical compound S=C=NC1=CC=CC=C1 QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000009424 thromboembolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyisoindole-1,3-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)C(=O)C2=C1 CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHEZEFWRBPPAGP-UHFFFAOYSA-N 3,3a-dihydro-2h-indene-1,4-dione Chemical compound O=C1CCC2C1=CC=CC2=O AHEZEFWRBPPAGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIQIXEFWDLTDED-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-1-piperidin-4-ylpyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CC(O)CN1C1CCNCC1 HIQIXEFWDLTDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXIXUWQIVKSKSA-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxycoumarin Chemical class C1=CC=CC2=C1OC(=O)C=C2O VXIXUWQIVKSKSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDZFORWVONADMI-UHFFFAOYSA-N 4-phenyl-5h-1,3-thiazol-2-one Chemical compound O=C1SCC(C=2C=CC=CC=2)=N1 NDZFORWVONADMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SJVGFKBLUYAEOK-SFHVURJKSA-N 6-[4-[(3S)-3-(3,5-difluorophenyl)-3,4-dihydropyrazole-2-carbonyl]piperidin-1-yl]pyrimidine-4-carbonitrile Chemical compound FC=1C=C(C=C(C=1)F)[C@@H]1CC=NN1C(=O)C1CCN(CC1)C1=CC(=NC=N1)C#N SJVGFKBLUYAEOK-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- 241000243818 Annelida Species 0.000 description 1
- 241000244186 Ascaris Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014522 Embolism venous Diseases 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical class ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000003827 Plasma Kallikrein Human genes 0.000 description 1
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000003130 blood coagulation factor inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000000746 body region Anatomy 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N dibenzyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1COCC1=CC=CC=C1 MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 150000002976 peresters Chemical class 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940117953 phenylisothiocyanate Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N propane-1,1-diol Chemical compound CCC(O)O ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 208000004043 venous thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/815—Protease inhibitors from leeches, e.g. hirudin, eglin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/26—Containing cys-cys disulfide bridge between nonadjacent cysteine residues
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Antikoagulenter tjener profylakse og terapi-, av trombo-emboliske prosesser, deres hovedanvendelsesområdet ligger derved fremfor alt ved venøse tromboembolier. Antikoagulenter kreves videre ved fremstilling av blodkonserver. Derivater av 4-hydroksycumarin eller 1,4-indandion, som eksempelvis anvendes for dette formål, har på tross av sterk optimering en rekke ulemper (sammenlign f.eks. Mutschler, Arzneimittelwirknungen, 4. opplag, Stuttgart 1981,
side 375 ff.).
Det er derfor ønskelig, spesielt i humanmedisin, å ha blod-koaguleringshemmere til disposisjon, og som har liten toksi-sitet og lite bivirkninger, og som ved deres metabolisme ikke betyr noen belastning av den syke organisme.
Foruten de kroppsegne plasmatiske hemmestoffer som anti-brombin III har også mange andre proteiner blodkoagulerings-hemmende virkning, som f.eks. Kunitz-inhibitoren, som utvinnes av soyabønner. Dette hemmestoff blokkerer blodkoa-guleringskaskaden ved inhibering av den aktiverte faktoren Xa, men inhibitorens spesifitet er så liten at mange bivirkninger oppstår: Hemming av plasmakallikrein, plasmin,
av trypsin, således at de terapeutiske anvendelser er ute-lukket. Også andre virksomme stoffer, som ascaris- eller Kazals-inhibitoren kunne på grunn av manglende spesifitet ikke få noen betydning.
Hiudin (The Merck Indez, 9. opplag, Rahway 1976, side 618, Pharmazie 36 (1981) hefte 10), et fra Hirudo medicinalis utvunnet polypeptid, viser derimot en spesifikk antitrombin-aktivitet (sammenlign f.eks. Markwardt, Blutgerinnungs-hemmende Wirkstoffe ausblutsaugenden Tieren, Jena 1963).
Den omstendelige fremgangsmåte til dens isoleringsrensing har hittil virket uheldig på dens praktiske anvendelse.
Det er nå overraskende funnet at det fra blodigler lar seg isolere et høyaktivt polypeptid med formel II, hvori R betyr hydrogen eller SO^H. Oppfinnelsen vedrører følgelig polypeptider med formel I
hvori
m = 0 - 50,
n = 1 - 100 og
R betyr det fenoliske hydrogen eller en fenolestergruppe,
X betyr lik eller forskjellig rest av naturlig forekommende
a-aminosyrer,
Y betyr Val, Ile, Thr. Leu eller Phe, og
Z betyr like eller forskjellige rester av naturlig forekommende a-aminosyrer, og
hvori resp. 2 av 6 Cys-rester er tilknyttet i stillingene 5, 13, 15, 21, 27 og 38 over disulfid-broer,
samt deres fysiologisk tålbare salter,
idet polypeptidet med formel I, hvori H-(X)m~Y betyr H-Val-Val og n = 0, er unntatt.
Naturlig forekommende a-aminosyrer er spesielt Gly, Ala, Ser, Thr, Val, Leu, Ile, Asp, Asn, Glu, Gin, Cys, Met, Arg, Lys, Hyl, Orn, Cit, Tyr, Phe, Trp, His, Pro og Hyp.
R betyr fortrinnsvis hydrogen, SO^H eller P0^H2, Y betyr fortrinnsvis Thr og m samt n resp. fortrinnsvis 0.
Foretrukkede betydninger av X og Z er resp. Ala, Ile, Val, Tyr eller Phe.
Som salter kommer det spesielt på tale alkali- og jord-, alkalisalter, salter med fysiologisk tålbare aminer samt salter med fysiologisk tålbare syrer, som HC1, E^ SO^, malein-syre eller eddiksyre.
Oppfinnelsen vedrører også biologisk aktive peptidiske spalteprodukter som er oppnådd ved kjemisk eller enzymatisk spalting av disse polypeptider.
Oppfinnelsen vedrører videre en fremgangsmåte til utvinning av et renset polypeptid av ovennevnte formel, idet fremgangsmåten erkarakterisert vedat man isolerer polypeptidet fra ormer av stammen Annelida ved hjelp av en kombinasjon av ekstraheringsmetoder, fellingsmetoder, membranfiltrering og/eller kromatografiske fremgangsmåter og overføre det dannede peptid eventuelt i dets fysiologisk tålbare salter. Polypeptidet utvinnes fortrinnsvis av halskjertlene av ormer av klassen Hirudinea, spesielt av slike fra orden Gnathobdellida. Foretrukket er slektene Hirudo og Haemo-dipsa. Spesielt foretrukket er slekten Hirudo, herav spesielt Hirudo mecicinalis. Ved siden av halskjertlene av blodigler kan det også finne anvendelse deres forreste kroppsregion eller hele blodiglen.
En fremgangsmåte til utvinning av råekstrakt fra blodigler er omtalt i Enzymoly, bind 5 "Hirudin as an Inhibitor of Thrombin". En rensefremgangsmåte for Hirudin er kjent
fra Bull. Soc. Chim. Biol. 45 (1963) 55.
Ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen har det vist seg
som nyttig spesielt en kombinasjon av utfellingsmetoder og av gelpermeasjons-kromatografi eller ultrafiltrering og av høyt oppløsende fordelings-kromatografi på over "Reverse-Phase"-material og kromatografi på kiselgel eller aluminium-oksyd. Alt etter ekstraktets beskaffenhet kan også kromatografi-fremgangsmåter ansettes fordelaktig (eventuelt også i kombinasjon med den ovennevnte fremgangsmåte) som f.eks. kation- eller anionutvekslings-kromatografi, kromatografi på uspesifikke absorbenter, spesielt hydroksylapatitt.
For eksempelvis å utvinne et for kromatografi egnet råekstrakt kan blodiglens hodedeler knuses i frossen tilstand og ekstraheres ved hjelp av en vandig pufferoppløsning (f.eks. fosfatpuffer). Det uoppløselige material adskilles f.eks. ved kort sentrifugering eller ved filtrering over gass og polypeptidet adskilles og isoleres fra det således dannede ekstrakt. Det er fordelaktig å oppvarme dette ekstrakt hurtig til 70-90°C, fordi derved denatureres og utfelles hovedmengden av de proteolytiske enzymer hvis adskillelse deretter kan foregå f.eks. ved sentrifugering. Man isolerer fra ekstraktet proteinfraksjonen som inneholder peptidet ifølge oppfinnelsen, f.eks. ved felling, således at man har ekstraktet i en vannblandbart organisk oppløsningsmiddel. F.eks. kan aceton anvendes i en flere ganger mengde av eks-
traktvolumet, fortrinnsvis den ca. 10-ganger mengden,
idet utfellingen foretass i kulde, vanligvis ved 0 til -40°C, fortrinnsvis ved ca. -20°C.
Av dette råekstrakt kan det adskilles proteiner med høyere molekylvekt, f.eks. ved ultrafiltrering eller ved gelperme-abilitets-kromatografil. Ved større blandinger kan ultrafiltreringen f.eks. foregå i to trinn: I første trinn arbeider man med en kapillarmembran med en utelukkelsesgrense på 500.000 Dalton og deretter i annet trinn med en flatmembran med en utelukkelsesgrense på 10.000 Dalton.
Ved hjelp av kapillarmembran oppnår man en hurtig adskillelse av høyeremolekylært materiale, som ville forhindre gjennomstrømmingen av den selektivt arbeidende flatmembran. Ved mindre mengder kan man også se bort fra første trinn av ultrafiltreringen.
En annen mulighet til å gjennomføre utfellingen ved tilsetning av salter som f.eks. ammoniumsulfat. Ved pH-styring oppnår fellingen en viss selektivitet. Peptidet ifølge oppfinnelsen som har et isoelektrisk punkt på 3,9, kan utfelles i pH-området mellom 3 og 5, fortrinnsvis ca. 4, ved tilsetning av ammoniumsulfat inntil en konsentrasjon på
ca. 50%, idet et flertall av følgeproteiner derved forblir i oppløsning. Også denne felling gjennomføres under av-kjøling ved ca. -5 til +15°C, fortrinnsvis mellom 0 og 4°C.
Det således dannede material består på grunn av de hittil anvendte metoder dessuten alltid av en blanding av polypeptider. En foretrukket fremgangsmåte til utvinning av inhibitoren med formel II med R = H resp. S03H består i at råekstraktet fraksjoneres ved hjelp av eller flere høyopp-løselige kromatografi-systemer. Denne fraksjon kan igjen oppløses ved et annet høyoppløsende kromatografisk system i enkelte komponenter, for således å isolere inhibitoren med formel II.
Som første kromatografiske trinn ved utvinning av disse inhibitorer har det vist seg fordelaktig fremgangsmåter som de f.eks. er kjent fra EP-A-82359. Derved skiller man pro-teinblandingene på vanlig kiselgel med egnet kornstørrelse eller på med kiselgel-ferdigsøyler (f.eks. "Lobar"-søylen) ved hjelp av et puffersystem.
Anbringelsen av prøven på søylen kan gjennomføres på en forekvilibrert søyle. Uten ulempene kan man imidlertid an-bringe stoffblandingen også på den tørre søyle.
Et forhold mellom proteinblandingen og absorbenter mellom 1:50 til 1:200 har vist seg som fordelaktig.
Elueringen kan foregå med en puffer av kloroform, metanol, iseddik, vann og trietylamin. Man kan også dertil anvende andre puf f eroppløsninger, ■■ som f.eks. 70% etanol, 30% tris-puffer (0,05 M, pH 8,0).
Det siste rensetrinn består av en kromatografisk adskillelse på "Reverse-Phase"-material. På grunn av den høye oppløs-ningsevne av HPLC-teknologien, sammenlign f.eks. "High Per-formance Liquid Chromatography, Advances and Perspectives", bind 3, Csaba Horvåth, Academic Press, 1983, side 50-83 eller i "Methods of Enzymology", bind 91, side 137-190 og 352-359, 1983, er det mulig å adskille og renfreinstille inhibitorene med formel II fra følgeproteiner.
For den stasjonære fase har det vist seg fordelaktig deriva-tisert kiselgel med egnet kornstørrelse (f.eks. mellom 3 og 20 um). For derivatiseringen av kiselgelen egner det seg ved siden av de utbredte oktadecylsilanrester også et flertall andre silanrester eller deres blandinger, som silanrester med lavere alkyl, fenylalkyl- eller aminosubstituert alkyl, idet sistnevnte byr en viss kombinasjon av ioneut-vekslings- og "Reverse-Phase"-kromatografi. Det kan eksempelvis anvendes skillesøyler av 5-25 cm lengde og en dia-meter fra 3-10 mm. Som pufret elueringsmiddel kommer det på tale alle sekundære eller tertiære blandinger mellom vann, organiske oppløsningsmidler, egnede lipofiler, som f.eks. lavere alkoholer, ketoner, nitriler, etere, syrer, aminer, glykoletere, amider og deres derivater. Som pufferstoff kan det anvendes organiske og uorganiske salter eller andre tilsetninger. Elueringen foregår fortrinnsvis ved en pH-verdi mellom 2 og 8.
Anvendelsen av flyktige pufferstoffer som ammoniumacetat eller ammoniumbikarbonat, muliggjør utvinningen av inhibitorene fra eluatet ved enkel frysetørking.
Polypeptidet ifølge oppfinnelsen med formel II er fargeløst, oppløselig i vann og i vandige puffere, viser seg homogent 1 polyacrylamild-eletroforese og har et isoelektrisk punkt på 3,9 (bestemt ved isoelektrisk fokusering). Bestemmer man aminosyresammensetningen etter metoden av Moore og Stein (Methods of Enzymology Band VI, 819-831, utgitt av Rolovick og Kaplan, Academic Press, New York, London,
1963), finner man følgende verdier:
9 asparaginsyre, 5 treonin, 4 serin, 13 glutaminsyre, 3 prolin, 9 glycin, 2 valin, 6 cystein, 2 isoleucin, 4 leucin, 2 tyrosin, 1 fenylalanin, 3 lysin og 1 histidin. Oppfinnelsen vedrører videre en fremgangsmåte til fremstilling av et polypeptid med ovennevnte formel I, idet fremgangsmåten erkarakterisert vedat a) det fremstilles på i og for seg kjent måte ved hjelp av fastfasesyntese eller
b) for fremstilling av et polypeptid, hvori n = 0,
I. Hirudin underkastes en dobbel Edman-avbygning,
II. det således dannede peptid omsettes med en aktivester av en aminosyre eller et r peptid med formel U-(X) m-Y-OH, hvori m, X og Y har ovennevnte betydning, og U betyr en syre- eller baselabil uretanbeskyttelsesgruppe, III. Fenyltiokarbamoylgruppen ved e-aminofunksjonen av Lys avspaltes ved hjelp av hydrazin, IV. og uretanbeskyttelsesgruppen U avspaltes ved hjelp av en syre eller base og det a) eller b) dannede polypeptid overføres eventuelt i dets fysiologiske tålbare salt.
Ved fastfasesyntesen (sammenlign her Atherton, Sheppard, Perspectives in Peptide Chemistry, Karger Basel 1981, side 101-117) kan det vanligvis sees bort fra en OH-beskyttelses-gruppe for Thr.
Syntesen av polypeptidet med formel I foregår f.eks. trinn-vis på hydroksymetylert polystyrenharpiks. Polystyrenet er eksempelvis tverrkryssbundet med eksempelvis 1% divinyl-benzen. Det foreligger vanligvis i form av små kuler.
Aminosyrene anvendes N-terminalt beskyttet. Den første N-beskyttede aminosyre anbringes per esterdannelse på bæreren. Etter fjerning av aminobeskyttelsesgruppen tilknyttes neste N-beskyttede aminosyre under anvendelse av et koblingsrea-gens som dicykloheksylkarbodiimid. Avbeskytting og tilføy-ing av ytterligere aminosyrer fortsettes inntil det er oppnådd den ønskede sekvens.
Valg av beskyttelsesgrupper retter seg etter aminosyren og koblingsmetodene.
Som aminobeskyttelsesgrupper kommer det f.eks. på tale de kjente uretaniske beskyttelsesgrupper som benzoyloksykarbo-nyl(z), p-metoksykarbobenzoksy, p-nitrokarbobenzoksy, t-butyloksykarbonyl(Boe), Fmoc og lignende.
Boc-gruppen foretrekkes, da den er avspaltbar ved hjelp av relativt milde syrer (f.eks. trifluoreddiksyre eller HC1 i organiske oppløsningsmidler).
Treonin kan blokkeres som benzyleter og e-aminofunksjonen av lysin som Z-derivat. Disse to beskyttelsesgrupper er sterkt resistente mot avspaltingsreagenser for Boc-gruppen og kan fjernes hydrogenolytisk med en hydrogeneringskataly-sator (Pd/aktivkull) eller f.eks. med natrium i flytende ammoniakk.
Det beskyttede peptid kan f.eks. med hydrazin tas fra har-piksen. Derved oppstår hydrazidet som f.eks. med N-brom-succinimid ifølge Int. J. Pept. Prot. Research 17 (1981) 6-11, kan overføres til den frie karboksylsyre. Hvis nød-må disulfidbroene lukkes oksydativt (sammenlign Konig, Geiger, Perspectives in Peptide Chemistry, Karger Basel side 31-44).
Ved fremgangsmåtevariant b) underkaster man hirudin i en dobbel Edman-avbygning, idet man omsetter dette polypeptid i en egnet pufferoppløsning, som pyridin/vann eller dioksan/ vann eventuelt under tilsetning av en base som NaOH eller trietylamin, fortrinnsvis ved ca. 40°C og en pH-verdi på 8-9 med et isotiocyanat, fortrinnsvis fenylisotiocyanat. Ved behandlingmed en syre (f.eks. 3N HC1 ved værelsestempe-ratur og etterfølgende oppvarming til 40°C) avspaltes det N-terminale valin som fenyltiazolinon. Man gjentar denne reaksjonsfølge til spalting av det annet valin ved N-termi-nusen.
Det på denne måte dannede Des-(Val)2-hirudin-derivat omsettes med en aktivester av en aminosyre eller et peptid med formel U-(X) -Y-OH. Egnet er f.eks. p-nitrofenyl-, cyanometyl-, N-hydroksyftalimid- eller spesielt N-hydroksy-succinimidester. Egnede uretanbeskyttelsesgrupper U er slike,som er avspaltbare surt eller alkalisk, som f.eks. Boe eller Msc. Hvis nødvendig, så kan også eventuelt tilstedeværende funksjoner i sidekjedene av X og Y forbi-gående beskyttes av X og Y.
De på denne måte dannede beskyttede fortrinn av polypeptidet med formel I (n = 0) behandles til avspalting av fenyltiokarbamoylgruppen på lysin i et egnet oppløsningsmiddel, som en lavere alkohol eller dets blanding med vann med hydrazin-hydrat.
Man avspalter fra dette polypeptid dessuten nå på egnet måte den eller de resterende beskyttelsesgrupper (Boe f.eks. med trifluoreddiksyre, MSC med en base) og får således polypeptidet ifølge oppfinnelsen med formel I.
Polypeptidene ifølge oppfinnelsen er spesifikke støkiome-triske hemmere av trombin. Den kvantitative måling av trombin-hemmingen ved inhibitoren ifølge oppfinnelsen viste at komplekse inhibitor-trombin praktisk talt ikke dissosierte. Ved hjelp av denne målemetode kan under opparbeidelse og rensing aktiviteten og dermed renhetsgraden av polypeptidet ifølge oppfinnelsen bestemmes. Det således rensede polypeptid med ovennevnte formel II kan derved ha en trombin-hemming på over 10.000 ATU/mg og dermed overtreffe denne ved vanlig hirudin.
Oppfinnelsen vedrører også anvendelsen av polypeptider med formel I, hvori m, n, R, X, Y og Z har ovennevnte betydning og Y dessuten også kan bety en kjemisk binding som blodkoa-guleringshemming til anvendelse ved terapi av trombo-emboliske prosesser samt deres anvendelse som diagnostika og reagenser.
Oppfinnelsen vedrører videre midler som inneholder et polypeptid med formel I i en farmasøytisk tålbar bærer og fremgangsmåte til dets fremstilling,karakterisert vedat man bringer disse i en egnet administreringsform.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan administreres paren-teralt eller topisk i tilsvarende farmasøytiske tilbered-ninger.
Til subkutan eller intravenøs applikasjon bringes de aktive forbindelser eller deres fysiologisk tålbare salter, hvis ønsket, med de dertil vanlige stoffer som oppløsningsfor-midlere, emulgatorer, isotonimidler, konserveringsmidler eller ytterligere hjelpestoffer i oppløsning, suspensjon eller emulsjon. Som oppløsningsmiddel for de nye aktive forbindelser og de tilsvarende fysiologisk tålbare salter, kommer det f.eks. på tale: vann, fysiologiske koksaltopp-løsninger eller alkoholer, f.eks. etanol,propandiol eller glycerol, dertil også sukkeroppløsninger som glukose-eller mannitoppløsninger eller også en blanding av de forskjellige nevnte oppløsningsmidler.
De topiske bærerstoffer kan være organiske eller uorganiske forbindelser. Typiske farmasøytisk vanlige bærerstoffer er vandige oppløsniner, som f.eks. puffersystemer eller iso-toniske blandinger av vann og vannblandbare oppløsningsmid-ler, som f.eks. alkoholer eller arylalkoholer, olje, poly-alkylenglykoler, etylcellulose, karboksymetylcellulose, polyvinylpyrrolidon eller isopropylmyristat. Egnde pufferstoffer er f.eks. natriumborat, natriumfosfat, natriumacetat eller også glukonatpuffer. Den topiske anvendelsesform kan også inneholde ikke toksiske hjelpestoffer som f.eks. emul-gerende konserveringsstoffer, kryssbindere som f.eks. poly-etylenglykoler og antibakterielle forbindelser.
Eksempe<l>_<l>
Bestemmelse av inhibitorkonsentrasjonen ved trombin-titrering 10-100 ul av inhibitoroppløsningen med et på forhånd bestemt proteininnhold blandes med 200 ul natriumhydrogen-karbonatoppløsning (pH = 7,0, 05M). Man adderer 0,1 ml fibrogenoppløsning (0,5-1%) eller fortynnet citratplasma i regelmessige avstander under omrøring ved værelsestempe-ratur, tilsettes en aliquot del (50-100 ul) av trombin-oppløsningen (ca. 100 NIH enheter pr. ml). Som omslags-punkt kan det ved halvkvantitative arbeider tjene koagu- lering av væsken innen den valgte tidsavstand eller for kvantitative bestemmelser, turbimetrimåling ved 546 nm.
Eksem£el_2
Det anvendes frittlevende blogigler (ikke oppdrettdyr)
av typen Hirudo medicinalis, som er blitt samlet i Tyskland.
Ca. 150-200 g frosne blodiglefordeler homogeniseres i en mixer med 2 1 iskald 0,09% natriumkloridoppløsning og 10 ml oktanol i løpet av 3 minutter. Etter 30 minutter sentrifugering ved 0°C og 10.000 opm videreklares det ovenstående ved hjelp av filtrering over 2 lag gas og oppvarmes deretter under omrøring i løpet av 15 minutter ved 80°C. Fellingen adskilles ved filtrering over 4 lag gas. Fil-tratet nedkjøles ved røring i et isbad hurtig til 4°C og tilsettes 7,5 1 på forhånd avkjølt aceton (-20°C). Det oppstår igjen en felling som etter 5 minutter frafiltreres på en glassfilternutsch og ettervaskes med 1 liter kald aceton.(-20°C). Etter tørking i vakuum oppstår 520 mg svakt gulaktig pulver med et proteininnhold på 62%
(bestemt etter metode av Lowry). Antitrombinaktiviteten utgjør ca. 400 enheter pr. mg.
Eksemp_el_3
520 g pulver ifølge eksempel 1 oppløses i 75 ml vann, innstilles deretter med 5 N ammoniakk på pH 8,0 og omrøres 1 time ved 0-4°C. Den uoppløselig del avslynges i løpet av 30 minutter med en begersentrifuge ved 5000 opm. Etter innstilling av proteininnholdet ved vanntilsetning til 25 mg/ml (Lowry) blandes oppløsningen med 35 ml mettet ammoniumsulfatoppløsning og omrøers 1 time ved 4°C. Den første utfelling adskilles hurtig ved sentrifugering (5000 opm/30 minutter). Man oppløser dessuten ca. 26 g ammoniumsulfat dertil og innstiller pH-verdien med iseddik til pH 4. Etter 5 timers henstand sentrifugeres den samlede suspensjon og den dannede fuktige utfelling videreforarbeides som følger.
Ekse<mg>e<l>_<4>
Den ifølge eksempel 3 dannede fuktige utfelling oppløses i 200 ml 0,1 molar ammoniumhydrogenkarbonat-oppløsning av pH 8 ultrafiltreres i en 250 ml "Amicon"-celle med en 5PM 10-flatmembran (utelukkelsesgrense 10.000 Dalton). Derved inndampes oppløsningen til ca. 40 ml, idet mot avslutningen etterfylles to ganger 150 ml 0,1 ammoniumhydrogenkarbonat-oppløsning av pH 8,0. Frysetørking av residuet gir ca. 350 .mg material med et proteininnhold på 89%.
Man fyller under risting (vibroblander) en C-søyle (Merck) med kiselgel 50 um 100 Å (Grace). 500 mg ekstrakt fra eksempel 4 oppløses i 5 ml av en blanding av kloroform, metanol, iseddik, vann og trietylamin i volumforhold 1200: 1200:4:12 påføres med 0,2% ammoniumacetat på søylen. Man eluerer søylen med samme blanding i en hastighet på ca. 4 ml/min. og fraksjonerer i 5-10 ml porsjoner. Etter elu-atets tørking oppløses de inhibitorholdige fraksjoner i natriumhydrogenkarbonat (pH 7,0, 0,5 M) og samles. Utbyttet utgjør ca. 50 mg aktiviteten 4000 ATU/mg.
Eksempel_6
20 mg inhibitor ifølge eksempel 3 oppløses i 200 ul vann av pH 2,16 (innstilt med trifluoreddiksyre + 5% acetonitril) og innsprøytes ("Shandon" ODS) på en med oktadecylsilan-kiselgel (5 um) fylt stålsøyle. Søylen elueres ved hjelp av en gradient på maksimalt 2% pr. minutt mellom start-pufferen (vann-pH=2,16 + 5% acetonitril) og sluttpufferen (acetonitril/vann-pH=2,1680/20). Fraksjonene samles enkeltvis. Etter tørking har inhibitoren ifølge oppfinnelsen med formel II (R = H resp. SO^H) en spesifikk aktivitet, som tilsvarer støkiometrien av et l:l-kompleks med trombin.
Claims (7)
1. Polypeptid med formel I
hvori
m = 0-50,
n = OtIOO, og
R betyr det fenoliske hydrogen eller en fenolestergruppe,
X betyr like eller forskjellige rester av naturlig fore
kommende a-aminosyrer,
Y betyr Val, Ile, Thr, Leu eller Phe, og
Z betyr like eller forskjellige rester av naturlig fore
kommende a-aminosyrer, og
hvori resp. 2 av de 6 Cys-rester i stillingene 5, 13, 15, 21,
27 og 38 er sammenknyttet over disulfidbroer,
samt deres fysiologisk tålbare salter,
idet det er unntatt polypeptidet med formel I, hvori H-(X)m -Y betyr H-Val-Val og n betyr 0.
2. Forbindelse ifølge krav 1, hvori R betyr hydrogen,
SO^ H eller PO^H,,, og/eller hvori X betyr Ala, Ile, Val, Tyr eller Phe, og/eller hvori Z betyr Ala, Ile, Val, Tyr eller Phe,.og/eller hvori m = 0 og n = 0.
3. Forbindelse ifølge krav 2, hvori Y betyr Thr.
4. Fra blodigler utvunnede polypeptid med aminosyresammensetningen (metode av Moore og Stein), 9 asparaginsyre,
5 treonin, 4 serin, 13 glutaminsyre, 3 prolin, 9 glycin,
2 valin, 6 cystein, 2 isoleucin, 4 leucin, 2 tyrosin, 1 fenylalanin, 3 lysin, 1 histidin, hvori OH-gruppen av en av tyrosinrestene kan være forestret med svovelsyre.
5. Bilogisk aktivt spaltprodukt av et polypeptid ifølge et av kravene 1-4.
6. Fremgangsmåte til utvinning av et renset polypeptid ifølge krav 3 eller 6, karakterisert ved at polypeptidet fra ormer av ordenen Gnathobdellida, fortrinnsvis fra ormer av slekten.Hirudo, isoleres ved hjelp av kombinasjon av ekstraheringsmetoder, fellingsmetoder, membranfiltrering og/eller kromatografiske fremgangsmåter og det dannede peptid overføres eventuelt i et av dets fysiologisk tålbare salter.
7. Fremgangsmåte til fremstilling av et polypeptid ifølge krav 1, karakterisert ved at
a) det fremstilles på i og for seg kjent måte ved hjelp av fastfasesyntese eller
b) for fremstilling av et polypeptid, hvori n = 0,
I. Hirudin underkastes en dobbelt Edman-avbygning,
II. det således dannede peptid omsettes med en aktivester av en aminosyre eller et peptid med formel U-(X)m~ Y-OH, hvori m, X og Y har ovennevnte betydning, og U betyr en uretanbeskyttelsesgruppe,
III. f enyltiokarbamoylgruppen ved ije-aminofunks jonen av Lys avspaltes ved hjelp av hydrazin,
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3414593 | 1984-04-18 | ||
| DE19843438296 DE3438296A1 (de) | 1984-04-18 | 1984-10-19 | Neue polypeptide mit blutgerinnungshemmender wirkung, verfahren zu deren herstellung bzw. gewinnung, deren verwendung und diese enthaltende mittel |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO851535L true NO851535L (no) | 1985-10-21 |
Family
ID=25820510
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO851535A NO851535L (no) | 1984-04-18 | 1985-04-17 | Nye polypeptider med blodkoaguleringshemmende virkning, fremgangsmaate til deres fremstilling resp. utvinnelse, deres anvendelse og midler inneholdende disse |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4668662A (no) |
| EP (1) | EP0158986B1 (no) |
| JP (1) | JP2552263B2 (no) |
| KR (1) | KR930000054B1 (no) |
| AR (1) | AR242800A1 (no) |
| AU (1) | AU580295B2 (no) |
| CA (1) | CA1271298A (no) |
| DE (2) | DE3438296A1 (no) |
| DK (1) | DK171824B1 (no) |
| ES (3) | ES542311A0 (no) |
| FI (1) | FI851521L (no) |
| GR (1) | GR850942B (no) |
| HU (1) | HU198085B (no) |
| IE (1) | IE60581B1 (no) |
| IL (1) | IL74948A (no) |
| NO (1) | NO851535L (no) |
| PT (1) | PT80301B (no) |
| ZA (1) | ZA852854B (no) |
Families Citing this family (56)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3342139A1 (de) * | 1983-11-22 | 1985-05-30 | Ciba-Geigy Ag, Basel | Desulfatohirudine, verfahren zu ihrer herstellung und pharmazeutische mittel |
| EP0168342B1 (de) * | 1984-06-14 | 1991-07-03 | Ciba-Geigy Ag | Verfahren zur Herstellung von Thrombin-Inhibitoren |
| DE3506992A1 (de) * | 1985-02-27 | 1986-08-28 | Plantorgan Werk Heinrich G.E. Christensen, KG, 2903 Bad Zwischenahn | Modifizierte hirudine, verfahren zu deren herstellung und pharmazeutische mittel, die diese wirkstoffe enthalten |
| ES2055149T3 (es) * | 1985-04-11 | 1994-08-16 | Hoechst Ag | Derivado de hirudina. |
| DE3738541A1 (de) * | 1987-11-13 | 1989-05-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur isolierung und reinigung von hirudin |
| EP0209061B1 (de) * | 1985-07-17 | 1994-01-12 | Hoechst Aktiengesellschaft | Neue Polypeptide mit blutgerinnungshemmender Wirkung, Verfahren zu deren Herstellung bzw. Gewinnung, deren Verwendung und diese enthaltende Mittel |
| GB8530631D0 (en) | 1985-12-12 | 1986-01-22 | Ciba Geigy Ag | Thrombin inhibitors |
| US5789540A (en) * | 1987-01-23 | 1998-08-04 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Anticoagulant peptides |
| US6005071A (en) * | 1987-01-23 | 1999-12-21 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Anticoagulant peptides |
| PT87083B (pt) * | 1987-03-28 | 1992-07-31 | Boehringer Ingelheim Int | Processo para a preparacao de uma proteina anticoagulante vascular, de adn que codifica para esta proteina e de composicoes farmaceuticas que a contem |
| US5236898A (en) * | 1987-05-21 | 1993-08-17 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Cyclic anticoagulant peptides |
| US5192745A (en) * | 1987-05-21 | 1993-03-09 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Cyclic anticoagulant peptides |
| US5256559A (en) * | 1988-03-04 | 1993-10-26 | Biogen, Inc. | Methods and compositions for inhibiting platelet aggregation |
| US4971953A (en) * | 1988-05-10 | 1990-11-20 | Merrell Dow Pharmaceuticals | Anticoagulant peptide alcohols |
| NZ228995A (en) * | 1988-05-10 | 1992-03-26 | Merrell Dow Pharma | Hirudin peptide derivatives and pharmaceutical compositions |
| WO1989011290A1 (en) * | 1988-05-27 | 1989-11-30 | Magainin Sciences, Inc. | Amphiphilic peptides and use thereof |
| US5114921A (en) * | 1988-05-27 | 1992-05-19 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Amphiphilic peptides and use thereof |
| DE3819078A1 (de) * | 1988-06-04 | 1989-12-07 | Hoechst Ag | Amblyommin, ein neuer wirkstoff fuer die antikoagulationstherapie |
| DE3819079A1 (de) * | 1988-06-04 | 1989-12-07 | Hoechst Ag | Hirudin-derivate mit verzoegerter wirkung |
| ES2052062T3 (es) * | 1988-06-11 | 1994-07-01 | Ciba Geigy Ag | Nuevos polipeptidos con actividad anticoagulante. |
| US5268296A (en) * | 1988-06-11 | 1993-12-07 | Ciba-Geigy Corporation | DNA vector and recombinant host cell for production of hirullin P6 and P18 |
| US5167960A (en) * | 1988-08-03 | 1992-12-01 | New England Deaconess Hospital Corporation | Hirudin-coated biocompatible substance |
| US5112615A (en) * | 1988-08-03 | 1992-05-12 | New England Deaconess Hospital Corporation | Soluble hirudin conjugates |
| DE3835815A1 (de) * | 1988-10-21 | 1990-04-26 | Hoechst Ag | Neue isohirudine |
| US4861865A (en) * | 1989-01-23 | 1989-08-29 | Washington University | Novel antithrombin peptide |
| US5254535A (en) * | 1989-04-17 | 1993-10-19 | The Children's Hospital Of Pennsylvania | Composition and treatment with biologically active peptides and antibiotic |
| US5179196A (en) * | 1989-05-04 | 1993-01-12 | Sri International | Purification of proteins employing ctap-iii fusions |
| US5192747A (en) * | 1989-10-03 | 1993-03-09 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Anticoagulant peptides |
| DE3939801A1 (de) * | 1989-12-01 | 1991-06-06 | Basf Ag | Neue proteine und ihre herstellung |
| US5792831A (en) * | 1990-02-08 | 1998-08-11 | Magainin Pharmaceuticals Inc. | Analogues of magainin peptides containing D-amino acids |
| JPH07504152A (ja) * | 1990-02-08 | 1995-05-11 | マゲイニン ファーマスーティカルズ， インコーポレーテッド | 生物活性ペプチドおよび標的細胞、ウイルス、あるいはウイルス感染細胞の成長を抑制する方法 |
| US5459237A (en) * | 1990-02-08 | 1995-10-17 | Magainin Pharmaceuticals Inc. | Peptide compositions and uses therefor |
| AU641215B2 (en) * | 1990-02-13 | 1993-09-16 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Stabilized sulfonate, sulfate, phosphonate and phosphate derivatives of hirudin |
| DE4009268A1 (de) * | 1990-03-22 | 1991-09-26 | Consortium Elektrochem Ind | Sekretion von hirudinderivaten |
| WO1991017760A1 (en) * | 1990-05-14 | 1991-11-28 | Magainin Sciences Inc. | Composition of and treatment with biologically active peptides having d-amino acid residues |
| JPH05507718A (ja) * | 1990-06-27 | 1993-11-04 | マゲイニン サイエンセズ インコーポレーテッド | 生物活性ペプチドおよびｄｎａギラーゼを阻害する抗生物質よりなる組成物と治療法 |
| US5208220A (en) * | 1990-06-27 | 1993-05-04 | Magainin Pharmaceuticals, Inc. | Composition and treatment with biologically active peptides and antibiotics which inhibit DNA gyrase |
| US5574012A (en) * | 1990-07-24 | 1996-11-12 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Analogs of hirudin having anti-platelet activity |
| US5118790A (en) * | 1990-07-24 | 1992-06-02 | Sri International | Analogs of hirudin |
| AU648096B2 (en) * | 1990-07-24 | 1994-04-14 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Anticoagulant peptides |
| US6514730B1 (en) * | 1991-03-21 | 2003-02-04 | Consortium für elektrochemische Industrie GmbH | Secretion of hirudin derivatives |
| AU2901692A (en) * | 1991-10-16 | 1993-05-21 | Children's Hospital Of Philadelphia, The | Composition and treatment with biologically active peptides and antibiotic |
| DE4140381A1 (de) * | 1991-12-07 | 1993-06-09 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt, De | Neue synthetische isohirudine mit verbesserter stabilitaet |
| KR100330465B1 (ko) * | 1993-06-11 | 2002-11-23 | 메렐 파마슈티칼스 인크. | 삼관능성항트롬빈및항혈소판펩티드 |
| NZ270194A (en) * | 1994-01-07 | 1996-05-28 | Ciba Geigy Ag | Hirustasin, a serine protease inhibitor from hirudo medicinalis |
| GB9401447D0 (en) | 1994-01-26 | 1994-03-23 | Ciba Geigy Ag | Pharmaceutical compositions |
| DE4404168A1 (de) * | 1994-02-10 | 1995-08-17 | Hoechst Ag | Hirudinderivate und Verfahren zu deren Herstellung |
| DE19529997C1 (de) * | 1995-08-16 | 1997-04-10 | Hoechst Ag | Verfahren zur Inaktivierung von Carboxypeptidase Y in hirudinhaltigen Kulturbrühen |
| DE19543737A1 (de) * | 1995-11-24 | 1997-05-28 | Hoechst Ag | Verfahren zur Ultrafiltration von Peptide oder Proteine enthaltender biologischer Matrices |
| DE19544233A1 (de) | 1995-11-28 | 1997-06-05 | Hoechst Ag | Verfahren zur Nutzung des Hefe-ADH II-Promotorsystems zur biotechnologischen Produktion heterologer Proteine in hohen Ausbeuten |
| EP0787569B1 (en) | 1996-01-31 | 2002-10-02 | Sumitomo Bakelite Company Limited | Method of producing epoxy resin-encapsulated semiconductor device |
| DE19607239A1 (de) | 1996-02-27 | 1997-08-28 | Behringwerke Ag | Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend Hirudin und Verfahren zu deren Herstellung |
| US7795205B2 (en) | 2004-04-12 | 2010-09-14 | Canyon Pharmaceuticals, Inc. | Methods for effecting regression of tumor mass and size in a metastasized pancreatic tumor |
| CN101095697A (zh) * | 2006-06-28 | 2008-01-02 | 李振国 | 水蛭和/或地龙分子量5800道尔顿以下的提取物 |
| US9056118B2 (en) * | 2007-06-26 | 2015-06-16 | Mudanjiang Youbo Pharmaceutical Co., Ltd. | Extract for preventing of treating thrombotic diseases |
| CN102215953A (zh) * | 2008-11-19 | 2011-10-12 | 安万托特性材料股份有限公司 | 基于苯氧基烷基和烷氧基-或苯氧基-苯基烷基配体的新色谱介质 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3342139A1 (de) * | 1983-11-22 | 1985-05-30 | Ciba-Geigy Ag, Basel | Desulfatohirudine, verfahren zu ihrer herstellung und pharmazeutische mittel |
| EP0158564B1 (fr) * | 1984-03-27 | 1992-07-15 | Transgene S.A. | Vecteurs d'expression de l'hirudine, cellules transformées et procédé de préparation de l'hirudine |
| DE3429430A1 (de) * | 1984-08-10 | 1986-02-20 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von hirudin und mittel zur durchfuehrung dieses verfahrens |
-
1984
- 1984-10-19 DE DE19843438296 patent/DE3438296A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-04-11 HU HU851341A patent/HU198085B/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-04-12 DE DE85104445T patent/DE3587576D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-12 EP EP85104445A patent/EP0158986B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-16 ES ES542311A patent/ES542311A0/es active Granted
- 1985-04-16 ES ES542310A patent/ES542310A0/es active Granted
- 1985-04-16 ES ES542309A patent/ES8605770A1/es not_active Expired
- 1985-04-16 AR AR85300094A patent/AR242800A1/es active
- 1985-04-16 FI FI851521A patent/FI851521L/fi not_active Application Discontinuation
- 1985-04-17 CA CA000479344A patent/CA1271298A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-17 ZA ZA852854A patent/ZA852854B/xx unknown
- 1985-04-17 IE IE98385A patent/IE60581B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-04-17 IL IL74948A patent/IL74948A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-04-17 DK DK173985A patent/DK171824B1/da not_active IP Right Cessation
- 1985-04-17 GR GR850942A patent/GR850942B/el unknown
- 1985-04-17 KR KR1019850002581A patent/KR930000054B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1985-04-17 PT PT80301A patent/PT80301B/pt not_active IP Right Cessation
- 1985-04-17 JP JP60080430A patent/JP2552263B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-17 NO NO851535A patent/NO851535L/no unknown
- 1985-04-17 AU AU41364/85A patent/AU580295B2/en not_active Expired
- 1985-04-17 US US06/724,332 patent/US4668662A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3587576D1 (de) | 1993-10-21 |
| ES8605771A1 (es) | 1985-12-16 |
| ES542309A0 (es) | 1985-12-16 |
| ES8605772A1 (es) | 1985-12-16 |
| PT80301A (de) | 1985-05-01 |
| JPS60233098A (ja) | 1985-11-19 |
| ES8605770A1 (es) | 1985-12-16 |
| HU198085B (en) | 1989-07-28 |
| DK171824B1 (da) | 1997-06-23 |
| FI851521L (fi) | 1985-10-19 |
| AU580295B2 (en) | 1989-01-12 |
| AU4136485A (en) | 1985-10-24 |
| KR930000054B1 (ko) | 1993-01-06 |
| IL74948A0 (en) | 1985-08-30 |
| IE60581B1 (en) | 1994-07-27 |
| ES542310A0 (es) | 1985-12-16 |
| FI851521A0 (fi) | 1985-04-16 |
| DK173985D0 (da) | 1985-04-17 |
| HUT37806A (en) | 1986-02-28 |
| IL74948A (en) | 1989-09-10 |
| EP0158986B1 (de) | 1993-09-15 |
| KR850007801A (ko) | 1985-12-09 |
| US4668662A (en) | 1987-05-26 |
| EP0158986A3 (en) | 1988-09-21 |
| DK173985A (da) | 1985-10-19 |
| PT80301B (de) | 1987-02-10 |
| CA1271298A (en) | 1990-07-03 |
| AR242800A1 (es) | 1993-05-31 |
| JP2552263B2 (ja) | 1996-11-06 |
| ES542311A0 (es) | 1985-12-16 |
| ZA852854B (en) | 1985-11-27 |
| EP0158986A2 (de) | 1985-10-23 |
| GR850942B (no) | 1985-11-25 |
| DE3438296A1 (de) | 1985-11-07 |
| IE850983L (en) | 1985-10-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO851535L (no) | Nye polypeptider med blodkoaguleringshemmende virkning, fremgangsmaate til deres fremstilling resp. utvinnelse, deres anvendelse og midler inneholdende disse | |
| DK173509B1 (da) | Polypeptider med blodkoaguleringshæmmende virkning, deres fremstilling eller udvinding samt midler med indhold deraf | |
| CA1239606A (en) | Desulfatohirudins, the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them | |
| Charles et al. | The primary structure of porcine colipase II. I. The amino acid sequence | |
| EP0147193B1 (en) | Peptide production and use thereof | |
| US4003884A (en) | Peptides having LH-RH/FSH-RH activity | |
| US4656158A (en) | Peptide, and production and use thereof | |
| RU2050160C1 (ru) | Полипептид, полученный из ткани или секрета пиявок hirudinaria manillensis, специфически ингибирующий тромбин | |
| CA1137467A (en) | Process for the preparation of somatostatin | |
| IE59400B1 (en) | Peptide amino-alcohol derivatives containing a tetra-substituted carbon atom, inhibitors of renin and of acid preteases, preparation process and pharmaceutical compositions. | |
| LU85710A1 (fr) | Nouveaux derives de la gonadoliberine et procede pour leur preparation | |
| US4758552A (en) | Gonadoliberin derivatives containing an aromatic aminocarboxylic acid in the 6-position, pharmaceutical and veterinary compositions containing them and process for preparing same | |
| Akaji et al. | Efficient synthesis of peptaibol using a chloroimidazolidium coupling reagent, CIP | |
| Bernard et al. | Synthesis of conjugates between luteinizing hormone releasing hormone (LH‐RH) and N‐acetyl‐muramyl‐L‐alanyl‐D‐isoglutamine (MDP) models of totally synthetic vaccines | |
| US4784988A (en) | Peptides correlated to lysozyme | |
| RU2086561C1 (ru) | Способ получения нонапептидэтиламида | |
| Bentley et al. | 1176. Polypeptides. Part I. The synthesis of peptides related to eledoisin | |
| UEDA et al. | Synthesis of the hexadecapeptide corresponding to positions 1 through 16 of porcine motilin, a gastric motor activity stimulating polypeptide | |
| Katsoyannis et al. | Insulin peptides. XVIII. Synthesis of a partially protected heneicosapeptide containing the C-terminal sequence of the B chain of insulin | |
| Beddell et al. | Pseudosymmetry in the structure of luteinizing hormone-releasing hormone. Series of novel analogs | |
| JPH05331190A (ja) | 新規ペプチド及びその製造方法 | |
| TSUBOI et al. | Amino Acids and Peptide. XXX. Synthesis of Eglin c (41-49) and Eglin c (60-63) and Examination of Their Inhibitory Activity towards Human Leukocyte Elastase, Cathepsin G, Porcine Pancreatic Elastase and α-Chymotrypsin | |
| JPH08333389A (ja) | ヘキサペプチドの製造方法 | |
| JPH0959296A (ja) | 新規なテトラペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素 阻害剤 | |
| Abiko et al. | Synthesis of [Phe (4F) 3] thymopoietin II and examination of its immunological effect on the impaired blastogenic response of T-lymphocytes of uremic patients |