JPH08333389A - ヘキサペプチドの製造方法 - Google Patents
ヘキサペプチドの製造方法Info
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- JPH08333389A JPH08333389A JP14452695A JP14452695A JPH08333389A JP H08333389 A JPH08333389 A JP H08333389A JP 14452695 A JP14452695 A JP 14452695A JP 14452695 A JP14452695 A JP 14452695A JP H08333389 A JPH08333389 A JP H08333389A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 式(I)：Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol (I)
で表されるヘキサペプチドを液相中にて製造することを
特徴とするヘキサペプチドの製造方法であり、特に式
(I) のヘキサペプチド中の一部のアミノ酸を有するペプ
チドフラグメントを液相中で形成し、得られた各ペプチ
ドフラグメントを液相中でカップリングさせることを特
徴とするヘキサペプチドの製造方法、又は液相中にて、
式(I) のヘキサペプチドの末端アミノ酸に順次１個ずつ
アミノ酸を縮合させることを特徴とするヘキサペプチド
の製造方法である。 【効果】 式(I)：Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol (I)
で表されるヘキサペプチドを、液相合成によって多量
に製造することができる。
特徴とするヘキサペプチドの製造方法であり、特に式
(I) のヘキサペプチド中の一部のアミノ酸を有するペプ
チドフラグメントを液相中で形成し、得られた各ペプチ
ドフラグメントを液相中でカップリングさせることを特
徴とするヘキサペプチドの製造方法、又は液相中にて、
式(I) のヘキサペプチドの末端アミノ酸に順次１個ずつ
アミノ酸を縮合させることを特徴とするヘキサペプチド
の製造方法である。 【効果】 式(I)：Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol (I)
で表されるヘキサペプチドを、液相合成によって多量
に製造することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医薬として有用なペプ
チド、詳しくはヘキサペプチドを液相法による化学合成
手法を用い、効率的に製造する方法に関するものであ
る。
チド、詳しくはヘキサペプチドを液相法による化学合成
手法を用い、効率的に製造する方法に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】式(I)：Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol
(I) で表されるヘキサペプチドは、抗浮腫剤、抗ショ
ック剤、抗血栓剤、抗動脈硬化剤、降圧剤、抗アレルギ
ー剤、創傷治癒剤および抗炎症剤等の医薬に応用が期待
される。上記ヘキサペプチドの製造方法は特開平5-1945
90号公報に開示されているが、該方法は固相法を中心と
した製造方法であり、工業的に不経済であり、大量合成
するのには不向きである。
(I) で表されるヘキサペプチドは、抗浮腫剤、抗ショ
ック剤、抗血栓剤、抗動脈硬化剤、降圧剤、抗アレルギ
ー剤、創傷治癒剤および抗炎症剤等の医薬に応用が期待
される。上記ヘキサペプチドの製造方法は特開平5-1945
90号公報に開示されているが、該方法は固相法を中心と
した製造方法であり、工業的に不経済であり、大量合成
するのには不向きである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、式
(I) で表されるヘキサペプチドを安価に、大量に安定供
給するための製造方法を提供することである。
(I) で表されるヘキサペプチドを安価に、大量に安定供
給するための製造方法を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】上記課題に鑑み鋭意研究
の結果、本発明者らは、液相合成法により式(I)：Ac-Ar
g-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol (I) で表されるヘキサペプ
チドを大量に工業的に製造することができることを見出
し、本発明を完成した。即ち、本発明は、式(I)：Ac-Ar
g-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol (I)で表されるヘキサペプチ
ドを液相中にて製造することを特徴とするヘキサペプチ
ドの製造方法である。
の結果、本発明者らは、液相合成法により式(I)：Ac-Ar
g-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol (I) で表されるヘキサペプ
チドを大量に工業的に製造することができることを見出
し、本発明を完成した。即ち、本発明は、式(I)：Ac-Ar
g-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol (I)で表されるヘキサペプチ
ドを液相中にて製造することを特徴とするヘキサペプチ
ドの製造方法である。
【０００５】また、本発明は、式(I)：Ac-Arg-Arg-Pro-
Tyr-Ile-Leu-ol (I)で表されるヘキサペプチドの製造方
法であって、式(I) のヘキサペプチド中の一部のアミノ
酸を有するペプチドフラグメントを液相中で形成し、得
られた各ペプチドフラグメントを液相中でカップリング
させることを特徴とするヘキサペプチドの製造方法てあ
る。
Tyr-Ile-Leu-ol (I)で表されるヘキサペプチドの製造方
法であって、式(I) のヘキサペプチド中の一部のアミノ
酸を有するペプチドフラグメントを液相中で形成し、得
られた各ペプチドフラグメントを液相中でカップリング
させることを特徴とするヘキサペプチドの製造方法てあ
る。
【０００６】さらに、本発明は、式(I)：Ac-Arg-Arg-Pr
o-Tyr-Ile-Leu-ol (I)で表されるヘキサペプチドの製造
方法であって、液相中にて、式(I) のヘキサペプチドの
末端アミノ酸に順次１個ずつアミノ酸を縮合させること
を特徴とするヘキサペプチドの製造方法である。以下、
本発明を詳細に説明する。
o-Tyr-Ile-Leu-ol (I)で表されるヘキサペプチドの製造
方法であって、液相中にて、式(I) のヘキサペプチドの
末端アミノ酸に順次１個ずつアミノ酸を縮合させること
を特徴とするヘキサペプチドの製造方法である。以下、
本発明を詳細に説明する。
【０００７】本発明書において、アミノ酸、ペプチド、
保護基、溶媒、その他に関し略号で表示する場合、ＩＵ
ＰＡＣ，ＩＵＢの規定、あるいは当該分野における慣用
記号に従うものとする。以下にその例を挙げる。ただし
アミノ酸等に関し光学異性体がある場合は、特に明示し
なければＬ体を示すものとする。 Ｔyr チロシン残基 Ｐro プロリン残基 Ａrg アルギニン残基 Ｉle イソロイシン残基 Ｌeu-ol ロイシノール Ｂoc ｔ−ブトキシカルボニル Ｂz ベンジル Ｚ ベンジルオキシカルボニル Ｔos トシル ＯＢz ベンジルエステル ＴＦＡ トリフルオロ酢酸 ＴＨＦ テトラヒドロフラン ＤＭＦ ジメチルホルムアミド ＤＣＣ ジシクロヘキシルカルボジイミド ＨＯＢt １−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＭeＯＨ メタノール ＡcＯＨ 酢酸
保護基、溶媒、その他に関し略号で表示する場合、ＩＵ
ＰＡＣ，ＩＵＢの規定、あるいは当該分野における慣用
記号に従うものとする。以下にその例を挙げる。ただし
アミノ酸等に関し光学異性体がある場合は、特に明示し
なければＬ体を示すものとする。 Ｔyr チロシン残基 Ｐro プロリン残基 Ａrg アルギニン残基 Ｉle イソロイシン残基 Ｌeu-ol ロイシノール Ｂoc ｔ−ブトキシカルボニル Ｂz ベンジル Ｚ ベンジルオキシカルボニル Ｔos トシル ＯＢz ベンジルエステル ＴＦＡ トリフルオロ酢酸 ＴＨＦ テトラヒドロフラン ＤＭＦ ジメチルホルムアミド ＤＣＣ ジシクロヘキシルカルボジイミド ＨＯＢt １−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＭeＯＨ メタノール ＡcＯＨ 酢酸
【０００８】本発明のヘキサペプチドの製造方法では、
次式(I)： Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol (I) で表されるヘキサペプチドを液相中にて製造する。即
ち、本発明では上記ヘキサペプチドを液相合成法によっ
て製造するが、液相合成法を行うにあたり、例えば末端
アミノ酸に順次１個ずつアミノ酸を縮合させるいわゆる
ステップワイズ伸長法、または数個のフラグメントに分
けてカップリングさせていくフラグメント縮合法を適用
することができる。
次式(I)： Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol (I) で表されるヘキサペプチドを液相中にて製造する。即
ち、本発明では上記ヘキサペプチドを液相合成法によっ
て製造するが、液相合成法を行うにあたり、例えば末端
アミノ酸に順次１個ずつアミノ酸を縮合させるいわゆる
ステップワイズ伸長法、または数個のフラグメントに分
けてカップリングさせていくフラグメント縮合法を適用
することができる。
【０００９】それらの方法を行う際には、例えば「ザ．
ペプチド(The Peptides)」第１巻(1966年)[Schreder an
d Luhke著、Academic Press ,New York,U.S.A.]、ある
いは「ペプチド合成」［泉屋ら著、丸善株式会社(1975
年)］に記載されている、アジド法、酸クロライド法、
酸無水物法、混合酸無水物法、ＤＣＣ法、活性エステル
法（ｐ−ニトロフェニルエステル法、Ｎ−ヒドロキシコ
ハク酸イミドエステル法、シアノメチルエステル法
等）、ウッドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボイミダ
ゾール法、酸化還元法、ＤＣＣ−アディティブ（ＨＯＮ
Ｂ、ＨＯＢｔ、ＨＯＳｕ）法等の方法を利用することが
できる。
ペプチド(The Peptides)」第１巻(1966年)[Schreder an
d Luhke著、Academic Press ,New York,U.S.A.]、ある
いは「ペプチド合成」［泉屋ら著、丸善株式会社(1975
年)］に記載されている、アジド法、酸クロライド法、
酸無水物法、混合酸無水物法、ＤＣＣ法、活性エステル
法（ｐ−ニトロフェニルエステル法、Ｎ−ヒドロキシコ
ハク酸イミドエステル法、シアノメチルエステル法
等）、ウッドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボイミダ
ゾール法、酸化還元法、ＤＣＣ−アディティブ（ＨＯＮ
Ｂ、ＨＯＢｔ、ＨＯＳｕ）法等の方法を利用することが
できる。
【００１０】上記各種方法では、反応に関与すべきでは
ない官能基、例えば各アミノ酸（Ｔyr、Ａrg等）の側鎖
官能基は保護しておくのが望ましい。官能基の保護は通
常の保護基を用いて行うことができ、反応終了後、該保
護基は脱離される。その一方で、反応に関与する官能基
は通常活性化される。これら各反応は常法によって行え
ばよく、それに用いる試薬等も通常使用されるものから
適宜選択し得る。
ない官能基、例えば各アミノ酸（Ｔyr、Ａrg等）の側鎖
官能基は保護しておくのが望ましい。官能基の保護は通
常の保護基を用いて行うことができ、反応終了後、該保
護基は脱離される。その一方で、反応に関与する官能基
は通常活性化される。これら各反応は常法によって行え
ばよく、それに用いる試薬等も通常使用されるものから
適宜選択し得る。
【００１１】アミノ酸の保護基としては、例えばカルボ
ベンゾキシ（以下Ｚと略す）、Ｂoc、Ａoc、イソボニル
オキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボ
ニル、２−クロル−ベンジルオキシカルボニル、アダマ
ンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタ
リル、ホルミル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、ジ
フェニルホスフイノチオイルなどが挙げられる。
ベンゾキシ（以下Ｚと略す）、Ｂoc、Ａoc、イソボニル
オキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボ
ニル、２−クロル−ベンジルオキシカルボニル、アダマ
ンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタ
リル、ホルミル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、ジ
フェニルホスフイノチオイルなどが挙げられる。
【００１２】Ｔyrの水酸基の保護基としては、例えばＢ
zl、ＢｒＺ、Ｃｌ2−Ｂzl、Ｚ、アセチル、Ｔos基等が
挙げられる。Ａrgのグアニジノ基の保護基としては、例
えばＴos、ニトロ、Ｚ、Ａoc基等が挙げられる。カルボ
キシル基の活性化されたものとしては、例えば対応する
酸クロライド、酸無水物または混合酸無水物、アジド、
活性エステル（ペンタクロロフェノール、ｐ−ニトロフ
ェノール、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−ヒドロ
キシベンズトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボ
ルネン−２，３−ジカルボキシイミド等とのエステル）
等が挙げられる。
zl、ＢｒＺ、Ｃｌ2−Ｂzl、Ｚ、アセチル、Ｔos基等が
挙げられる。Ａrgのグアニジノ基の保護基としては、例
えばＴos、ニトロ、Ｚ、Ａoc基等が挙げられる。カルボ
キシル基の活性化されたものとしては、例えば対応する
酸クロライド、酸無水物または混合酸無水物、アジド、
活性エステル（ペンタクロロフェノール、ｐ−ニトロフ
ェノール、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−ヒドロ
キシベンズトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボ
ルネン−２，３−ジカルボキシイミド等とのエステル）
等が挙げられる。
【００１３】ペプチド結合形式反応は縮合剤、例えばＤ
ＣＣ、カルボジイミダゾール等のカルボジイミド試薬や
テトラエチルピロホスフェイト、ベンゾトリアゾール−
Ｎ−ヒドロキシトリスジメチルアミノホスホニウムヘキ
サフルオロリン化物塩（Ｂｏｐ試薬）等の存在下で行う
ことができる。液相合成法における反応性アミノ基と反
応性カルボキシル基との縮合反応（ペプチド結合形成反
応）は、溶媒の存在下で行う。そのような溶媒として
は、ペプチド結合形成に使用し得ることが知られている
各種のもの、例えば無水または含水のジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、
ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、ジクロロメタン
（ＤＣＭ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、酢酸エチ
ル、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチルリン酸トリア
ミド（ＨＭＰＡ）あるいはこれらの混合溶媒等を用いる
ことができる。
ＣＣ、カルボジイミダゾール等のカルボジイミド試薬や
テトラエチルピロホスフェイト、ベンゾトリアゾール−
Ｎ−ヒドロキシトリスジメチルアミノホスホニウムヘキ
サフルオロリン化物塩（Ｂｏｐ試薬）等の存在下で行う
ことができる。液相合成法における反応性アミノ基と反
応性カルボキシル基との縮合反応（ペプチド結合形成反
応）は、溶媒の存在下で行う。そのような溶媒として
は、ペプチド結合形成に使用し得ることが知られている
各種のもの、例えば無水または含水のジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、
ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、ジクロロメタン
（ＤＣＭ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、酢酸エチ
ル、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチルリン酸トリア
ミド（ＨＭＰＡ）あるいはこれらの混合溶媒等を用いる
ことができる。
【００１４】Ｂoc、Ｚなどのウレタン型保護基を有する
アミノ酸は、カルボキシル基活性の際にアズラクトン
（オキサゾロン）を形成しないためラセミ化しない。従
って、ステップワイズ伸長法によって製造する場合に
は、ラセミ化を考慮する必要がない。一方、フラグメン
ト縮合法の場合、フラグメントのＣ末端がＧly（不斉炭
素がない）及びＰro（オキサゾロン形成に必要な水素が
ない）以外は、カルボキシル基活性の際にオキサゾロン
を形成し、顕著にラセミ化を生じるが、一気に反応を終
了させることができるという利点を有する。
アミノ酸は、カルボキシル基活性の際にアズラクトン
（オキサゾロン）を形成しないためラセミ化しない。従
って、ステップワイズ伸長法によって製造する場合に
は、ラセミ化を考慮する必要がない。一方、フラグメン
ト縮合法の場合、フラグメントのＣ末端がＧly（不斉炭
素がない）及びＰro（オキサゾロン形成に必要な水素が
ない）以外は、カルボキシル基活性の際にオキサゾロン
を形成し、顕著にラセミ化を生じるが、一気に反応を終
了させることができるという利点を有する。
【００１５】ステップワイズ伸長法では、式(I) のヘキ
サペプチドのＣ末端、即ちＬeu-olに順次１個ずつアミ
ノ酸を縮合させることにより上記ヘキサペプチドを製造
するが、その製造方法の一例を以下説明する。本例で
は、アミノ酸の末端保護基としてＢoc、Ｔyrの水酸基の
保護基としてＣｌ2−Ｂzl、Ａrgのグアニジノ基の保護
基としてＴosを用いているが、本発明はこれに限定され
ることなく、前述した各種保護基を用いることができ、
またＴyr及びＡrgには必ずしも保護基は必要でない。
サペプチドのＣ末端、即ちＬeu-olに順次１個ずつアミ
ノ酸を縮合させることにより上記ヘキサペプチドを製造
するが、その製造方法の一例を以下説明する。本例で
は、アミノ酸の末端保護基としてＢoc、Ｔyrの水酸基の
保護基としてＣｌ2−Ｂzl、Ａrgのグアニジノ基の保護
基としてＴosを用いているが、本発明はこれに限定され
ることなく、前述した各種保護基を用いることができ、
またＴyr及びＡrgには必ずしも保護基は必要でない。
【００１６】(1) Boc-Ile-Leu-olの合成 Boc-Ile-Leu-olは、例えば液相中でBoc-Ile-OHおよびH-
Leu-olを反応させることにより合成することができる。
例えば、Boc-Ile-OHをＴＨＦに溶解させるとともに−20
℃程度に冷却し、これにＮ−メチルモルフォリン、次い
でイソブチルクロロフォルメイトを滴下・攪拌し、混合
酸無水物を調製する。この反応液を、H-Leu-olのＴＨＦ
−ＤＭＦ溶液と混合し、撹拌後、常法により精製する。
Leu-olを反応させることにより合成することができる。
例えば、Boc-Ile-OHをＴＨＦに溶解させるとともに−20
℃程度に冷却し、これにＮ−メチルモルフォリン、次い
でイソブチルクロロフォルメイトを滴下・攪拌し、混合
酸無水物を調製する。この反応液を、H-Leu-olのＴＨＦ
−ＤＭＦ溶液と混合し、撹拌後、常法により精製する。
【００１７】(2) Boc-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olの合成 Boc-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olは、例えば(1) で得られた
Boc-Ile-Leu-olからH-Ile-Leu-olを調製し、これとBoc-
Tyr(Cl2-Bz)-OHとを液相中で反応させることにより合成
することができる。例えば、Boc-Ile-Leu-olに氷冷下、
Ｂoc基除去のためのＴＦＡを加えて攪拌し、減圧濃縮す
ることによりH-Ile-Leu-ol・TFA を得る。一方、Boc-Tyr
(Cl2-Bz)-OHをＴＨＦに溶解させ、−20℃程度に冷却
し、これにＮ−メチルモルフォリン、次いでイソブチル
クロロフォルメイトを滴下・攪拌し、混合酸無水物を調
製する。この反応液と、上記H-Ile-Leu-ol・TFA をＮ−
メチルモルフォリンで中和したＴＨＦ溶液とを混合し、
攪拌後、常法により精製する。
Boc-Ile-Leu-olからH-Ile-Leu-olを調製し、これとBoc-
Tyr(Cl2-Bz)-OHとを液相中で反応させることにより合成
することができる。例えば、Boc-Ile-Leu-olに氷冷下、
Ｂoc基除去のためのＴＦＡを加えて攪拌し、減圧濃縮す
ることによりH-Ile-Leu-ol・TFA を得る。一方、Boc-Tyr
(Cl2-Bz)-OHをＴＨＦに溶解させ、−20℃程度に冷却
し、これにＮ−メチルモルフォリン、次いでイソブチル
クロロフォルメイトを滴下・攪拌し、混合酸無水物を調
製する。この反応液と、上記H-Ile-Leu-ol・TFA をＮ−
メチルモルフォリンで中和したＴＨＦ溶液とを混合し、
攪拌後、常法により精製する。
【００１８】(3) Boc-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olの合
成 Boc-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olは、例えば(2) で得ら
れたBoc-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olからH-Tyr(Cl2-Bz)-Il
e-Leu-olを調製し、これとBoc-Pro-OHとを液相中で反応
させることにより合成することができる。例えば、Boc-
Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olに氷冷下、ＴＦＡおよび副反応
を防止するためのアニソールを加えて撹拌し、減圧濃縮
することによりH-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFAを得る。
一方、Boc-Pro-OHをＴＨＦに溶解させ、−20℃程度に冷
却し、これにＮ−メチルモルフォリン、次いでイソブチ
ルクロロフォルメイトを滴下・攪拌し、混合酸無水物を
調製する。この反応液と、上記H-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-
ol・TFAをＮ−メチルモルフォリンで中和したＴＨＦ溶液
とを混合し、攪拌後、常法により精製する。
成 Boc-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olは、例えば(2) で得ら
れたBoc-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olからH-Tyr(Cl2-Bz)-Il
e-Leu-olを調製し、これとBoc-Pro-OHとを液相中で反応
させることにより合成することができる。例えば、Boc-
Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olに氷冷下、ＴＦＡおよび副反応
を防止するためのアニソールを加えて撹拌し、減圧濃縮
することによりH-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFAを得る。
一方、Boc-Pro-OHをＴＨＦに溶解させ、−20℃程度に冷
却し、これにＮ−メチルモルフォリン、次いでイソブチ
ルクロロフォルメイトを滴下・攪拌し、混合酸無水物を
調製する。この反応液と、上記H-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-
ol・TFAをＮ−メチルモルフォリンで中和したＴＨＦ溶液
とを混合し、攪拌後、常法により精製する。
【００１９】(4) Boc-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-L
eu-olの合成 Boc-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olの合成は、
例えば(3) で得られたBoc-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol
からH-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olを調製し、これとBo
c-Arg(Tos)-OH とを液相中で反応させることにより合成
することができる。
eu-olの合成 Boc-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olの合成は、
例えば(3) で得られたBoc-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol
からH-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olを調製し、これとBo
c-Arg(Tos)-OH とを液相中で反応させることにより合成
することができる。
【００２０】例えば、Boc-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol
に氷冷下、ＴＦＡおよびアニソールを加えて撹拌し、減
圧濃縮することによりH-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・T
FAを得る。一方、Boc-Arg(Tos)-OH をＴＨＦに溶解さ
せ、−20℃程度に冷却し、これにＮ−メチルモルフォリ
ン、次いでイソブチルクロロフォルメイトを滴下・攪拌
し、混合酸無水物を調製する。この反応液と、上記H-Pr
o-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFAをＮ−メチルモルフォリ
ンで中和したＴＨＦ溶液とを混合し、攪拌後、常法によ
り精製する。
に氷冷下、ＴＦＡおよびアニソールを加えて撹拌し、減
圧濃縮することによりH-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・T
FAを得る。一方、Boc-Arg(Tos)-OH をＴＨＦに溶解さ
せ、−20℃程度に冷却し、これにＮ−メチルモルフォリ
ン、次いでイソブチルクロロフォルメイトを滴下・攪拌
し、混合酸無水物を調製する。この反応液と、上記H-Pr
o-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFAをＮ−メチルモルフォリ
ンで中和したＴＨＦ溶液とを混合し、攪拌後、常法によ
り精製する。
【００２１】(5) Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-
Bz)-Ile-Leu-olの合成 Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olの
合成は、例えば(4) で得られたBoc-Arg(Tos)-Pro-Tyr(C
l2-Bz)-Ile-Leu-olからH-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl 2-Bz)-Il
e-Leu-olを調製し、これとBoc-Arg(Tos)-OH とを液相中
で反応させることにより合成することができる。
Bz)-Ile-Leu-olの合成 Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olの
合成は、例えば(4) で得られたBoc-Arg(Tos)-Pro-Tyr(C
l2-Bz)-Ile-Leu-olからH-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl 2-Bz)-Il
e-Leu-olを調製し、これとBoc-Arg(Tos)-OH とを液相中
で反応させることにより合成することができる。
【００２２】例えば、Boc-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-I
le-Leu-ol に氷冷下、ＴＦＡおよびアニソールを加えて
撹拌し、減圧濃縮することによりH-Arg(Tos)-Pro-Tyr(C
l2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFAを得る。一方、Boc-Arg(Tos)-OH
をＴＨＦに溶解させ、−20℃程度に冷却し、これにＮ
−メチルモルフォリン、次いでイソブチルクロロフォル
メイトを滴下・攪拌し、混合酸無水物を調製する。この
反応液と、上記H-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-o
l・TFAをＮ−メチルモルフォリンで中和したＴＨＦ溶液
とを混合し、攪拌後、常法により精製する。
le-Leu-ol に氷冷下、ＴＦＡおよびアニソールを加えて
撹拌し、減圧濃縮することによりH-Arg(Tos)-Pro-Tyr(C
l2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFAを得る。一方、Boc-Arg(Tos)-OH
をＴＨＦに溶解させ、−20℃程度に冷却し、これにＮ
−メチルモルフォリン、次いでイソブチルクロロフォル
メイトを滴下・攪拌し、混合酸無水物を調製する。この
反応液と、上記H-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-o
l・TFAをＮ−メチルモルフォリンで中和したＴＨＦ溶液
とを混合し、攪拌後、常法により精製する。
【００２３】(6) Ac-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-B
z)-Ile-Leu-olの合成 Ac-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol
は、例えば(5) で得られたBoc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-
Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olからH-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-
Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olを調製し、これと酢酸とを液相
中で反応させることにより合成することができる。
z)-Ile-Leu-olの合成 Ac-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol
は、例えば(5) で得られたBoc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-
Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olからH-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-
Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olを調製し、これと酢酸とを液相
中で反応させることにより合成することができる。
【００２４】例えば、Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr
(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olに氷冷下、ＴＦＡおよびアニソー
ルを加えて撹拌し、減圧濃縮することによりH-Arg(Tos)
-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFA を得る。
次いで、当該生成物をＴＨＦに溶解させ、Ｎ−メチルモ
ルフォリンで中和した後、ピリジンを加え、ピリジン／
ＴＨＦ溶液とする。これに無水酢酸を加え、撹拌後、常
法により精製する。
(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olに氷冷下、ＴＦＡおよびアニソー
ルを加えて撹拌し、減圧濃縮することによりH-Arg(Tos)
-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFA を得る。
次いで、当該生成物をＴＨＦに溶解させ、Ｎ−メチルモ
ルフォリンで中和した後、ピリジンを加え、ピリジン／
ＴＨＦ溶液とする。これに無水酢酸を加え、撹拌後、常
法により精製する。
【００２５】(7) Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-olの合
成 Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-olは、例えば(6) で得ら
れたAc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-o
lにおける保護基を液相中で脱離することにより得られ
る。例えば、Ac-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-I
le-Leu-ol にアニソールを加えた後、−70℃程度の冷却
下でＴＨＦを加え、撹拌した後、常法により精製する。
成 Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-olは、例えば(6) で得ら
れたAc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-o
lにおける保護基を液相中で脱離することにより得られ
る。例えば、Ac-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-I
le-Leu-ol にアニソールを加えた後、−70℃程度の冷却
下でＴＨＦを加え、撹拌した後、常法により精製する。
【００２６】上述した方法によって得られる式(I)：Ac-
Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol (I)で表されるヘキサペプ
チドは、通常の方法に従い脱塩、精製することができ
る。脱塩、精製は、例えばＣＭ−セルロース等のイオン
交換クロマトグラフィー、セファデックスＬＨ−２０、
セファデックスＧ−１０等の分配クロマトグラフィー、
シリカゲル等の順相クロマトグラフィー、ＯＤＳ−シリ
カゲル等の逆相クロマトグラフィー、高速液体クロマト
グラフィー等によって行うことができる。このようにし
て得られたヘキサペプチドは、必要に応じて医薬品に許
容され得る塩、例えば、酢酸塩、塩酸塩、リン酸塩等に
することができる。
Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol (I)で表されるヘキサペプ
チドは、通常の方法に従い脱塩、精製することができ
る。脱塩、精製は、例えばＣＭ−セルロース等のイオン
交換クロマトグラフィー、セファデックスＬＨ−２０、
セファデックスＧ−１０等の分配クロマトグラフィー、
シリカゲル等の順相クロマトグラフィー、ＯＤＳ−シリ
カゲル等の逆相クロマトグラフィー、高速液体クロマト
グラフィー等によって行うことができる。このようにし
て得られたヘキサペプチドは、必要に応じて医薬品に許
容され得る塩、例えば、酢酸塩、塩酸塩、リン酸塩等に
することができる。
【００２７】本発明では、液相法によってヘキサペプチ
ドの製造を行うため大量合成が可能であるが、特にステ
ップワイズ伸長法のメリットとして、 ラセミ化等の副反応が少ない。 混合酸無水物法を用いることができるため、反応時間
を短縮することができる。 汎用アミノ酸であるＢocアミノ酸を使用することがで
きるため、安価に製造することができる。等を挙げるこ
とができる。
ドの製造を行うため大量合成が可能であるが、特にステ
ップワイズ伸長法のメリットとして、 ラセミ化等の副反応が少ない。 混合酸無水物法を用いることができるため、反応時間
を短縮することができる。 汎用アミノ酸であるＢocアミノ酸を使用することがで
きるため、安価に製造することができる。等を挙げるこ
とができる。
【００２８】
【実施例】以下、実施例により本発明をより具体的に説
明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではな
い。 （実施例１） (1) Boc-Ile-Leu-olの合成 Boc-Ile-OH（ペプチド研究所製）10.29gをＴＨＦ100ml
に溶解し、ドライアイス−エタノールで−20℃に冷却し
た。これにＮ−メチルモルフォリン4.71ml、次いでイソ
ブチルクロロフォルメイト5.65mlを滴下した後、−20℃
で１分間撹拌して、上記化合物の混合酸無水物を調製し
た。この反応液と、H-Leu-ol（アルドリッチ社製） 5.0
2gのＴＨＦ−ＤＭＦ溶液（ＴＨＦ：50ml、ＤＭＦ：10m
l）とを混合し、０℃で５分間および室温で30分間撹拌
後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル400mlを加え、１
Ｎ塩酸200mlで２回、飽和重曹水200mlで２回、飽和食塩
水２回の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減
圧濃縮した。残渣をｎ−ヘキサンで処理して固化し、Bo
c-Ile-Leu-ol 10.27g （収率73.0％）を得た。このペプ
チドフラグメントの物性は以下の通りであった。
明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではな
い。 （実施例１） (1) Boc-Ile-Leu-olの合成 Boc-Ile-OH（ペプチド研究所製）10.29gをＴＨＦ100ml
に溶解し、ドライアイス−エタノールで−20℃に冷却し
た。これにＮ−メチルモルフォリン4.71ml、次いでイソ
ブチルクロロフォルメイト5.65mlを滴下した後、−20℃
で１分間撹拌して、上記化合物の混合酸無水物を調製し
た。この反応液と、H-Leu-ol（アルドリッチ社製） 5.0
2gのＴＨＦ−ＤＭＦ溶液（ＴＨＦ：50ml、ＤＭＦ：10m
l）とを混合し、０℃で５分間および室温で30分間撹拌
後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル400mlを加え、１
Ｎ塩酸200mlで２回、飽和重曹水200mlで２回、飽和食塩
水２回の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減
圧濃縮した。残渣をｎ−ヘキサンで処理して固化し、Bo
c-Ile-Leu-ol 10.27g （収率73.0％）を得た。このペプ
チドフラグメントの物性は以下の通りであった。
【００２９】m.p. 132.0 〜135.2 ℃ ［α］＝−8.6（MeOH, C=1.0） Rf 0.72 (BuOH/AcOH/H2O=4/1/5) 元素分析値 Ｃ17Ｈ32Ｎ2Ｏ4 理論値 Ｃ：62.17 ％ Ｈ： 9.82 ％ Ｎ： 8.53 ％ 測定値 Ｃ：62.17 ％ Ｈ：10.13 ％ Ｎ： 8.54 ％
【００３０】(2) Boc-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olの合成 (1) で得られたBoc-Ile-Leu-ol 9.65gに氷冷下、ＴＦＡ
10mlを加え、30分間室温で撹拌後、減圧濃縮し、H-Ile-
Leu-ol・TFA を得た。一方、Boc-Tyr(Cl2-Bz)-OH（ペプ
チド研究所製）12.86gをＴＨＦ150mlに溶解し、ドライ
アイス−エタノールで−20℃に冷却した。これにＮ−メ
チルモルフォリン3.21ml、次いでイソブチルクロロフォ
ルメイト3.85mlを滴下した後、−20℃で１分間撹拌し
て、上記化合物の混合酸無水物を調製した。この反応液
と、H-Ile-Leu-ol・TFA をＮ−メチルモルフォリンで中
和したＴＨＦ150ml溶液とを混合し、０℃で５分間およ
び室温で30分間撹拌後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチ
ル500mlを加え、１Ｎ塩酸200mlで２回、飽和重曹水200m
lで２回、飽和食塩水２回の順で洗浄し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンで処理
して固化し、Boc-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol 16.81g （収
率88.2％）を得た。このペプチドフラグメントの物性は
以下の通りであった。
10mlを加え、30分間室温で撹拌後、減圧濃縮し、H-Ile-
Leu-ol・TFA を得た。一方、Boc-Tyr(Cl2-Bz)-OH（ペプ
チド研究所製）12.86gをＴＨＦ150mlに溶解し、ドライ
アイス−エタノールで−20℃に冷却した。これにＮ−メ
チルモルフォリン3.21ml、次いでイソブチルクロロフォ
ルメイト3.85mlを滴下した後、−20℃で１分間撹拌し
て、上記化合物の混合酸無水物を調製した。この反応液
と、H-Ile-Leu-ol・TFA をＮ−メチルモルフォリンで中
和したＴＨＦ150ml溶液とを混合し、０℃で５分間およ
び室温で30分間撹拌後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチ
ル500mlを加え、１Ｎ塩酸200mlで２回、飽和重曹水200m
lで２回、飽和食塩水２回の順で洗浄し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンで処理
して固化し、Boc-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol 16.81g （収
率88.2％）を得た。このペプチドフラグメントの物性は
以下の通りであった。
【００３１】m.p. 166.5 〜169.5 ℃ ［α］＝−43.2（DMF, C=1.0） RfＩ(Partrige System) 0.98 RfII(AcOEt) 0.83 元素分析値 Ｃ33Ｈ45Ｎ3Ｏ6Ｃｌ2 理論値 Ｃ：60.92 ％ Ｈ： 6.97 ％ Ｎ： 6.46 ％ 測定値 Ｃ：60.92 ％ Ｈ： 7.12 ％ Ｎ： 6.64 ％
【００３２】(3) Boc-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-olの合
成 (2) で得られたBoc-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol 16.75g に
氷冷下、ＴＦＡ18mlおよびアニソール2.5mlを加え、30
分間室温で撹拌後、減圧濃縮し、H-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Le
u-ol・TFAを得た。一方、Boc-Pro-OH（ペプチド研究所
製）5.51gをＴＨＦ50mlに溶解し、ドライアイス−エタ
ノールで−20℃に冷却した。これにＮ−メチルモルフォ
リン2.82ml、次いでイソブチルクロロフォルメイト3.39
mlを滴下した後、−20℃で１分間撹拌して、上記化合物
の混合酸無水物を調製した。この反応液と、H-Tyr(Cl2-
Bz)-Ile-Leu-ol・TFAをＮ−メチルモルフォリンで中和し
たＴＨＦ200ml溶液とを混合し、０℃で５分間および室
温で30分間撹拌後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル50
0mlを加え、１Ｎ塩酸200mlで２回、飽和重曹水200mlで
２回、飽和食塩水２回の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をエーテルで処理して
固化し、母液をヘキサンで処理してBoc-Pro-Tyr(Cl2-B
z)-Ile-Leu-ol 18.29g （収率95.1％）を得た。このペ
プチドフラグメントの物性は以下の通りであった。
成 (2) で得られたBoc-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol 16.75g に
氷冷下、ＴＦＡ18mlおよびアニソール2.5mlを加え、30
分間室温で撹拌後、減圧濃縮し、H-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Le
u-ol・TFAを得た。一方、Boc-Pro-OH（ペプチド研究所
製）5.51gをＴＨＦ50mlに溶解し、ドライアイス−エタ
ノールで−20℃に冷却した。これにＮ−メチルモルフォ
リン2.82ml、次いでイソブチルクロロフォルメイト3.39
mlを滴下した後、−20℃で１分間撹拌して、上記化合物
の混合酸無水物を調製した。この反応液と、H-Tyr(Cl2-
Bz)-Ile-Leu-ol・TFAをＮ−メチルモルフォリンで中和し
たＴＨＦ200ml溶液とを混合し、０℃で５分間および室
温で30分間撹拌後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル50
0mlを加え、１Ｎ塩酸200mlで２回、飽和重曹水200mlで
２回、飽和食塩水２回の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をエーテルで処理して
固化し、母液をヘキサンで処理してBoc-Pro-Tyr(Cl2-B
z)-Ile-Leu-ol 18.29g （収率95.1％）を得た。このペ
プチドフラグメントの物性は以下の通りであった。
【００３３】m.p. 102.8 〜106.7 ℃ ［α］＝−56.2（MeOH, C=1.0） RfＩ(Partrige System) 0.96 RfII(AcOEt) 0.63 元素分析値 Ｃ38Ｈ52Ｎ4Ｏ7Ｃｌ2 理論値 Ｃ：61.04 ％ Ｈ： 7.01 ％ Ｎ： 7.49 ％ 測定値 Ｃ：61.04 ％ Ｈ： 7.20 ％ Ｎ： 7.52 ％
【００３４】(4) Boc-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-L
eu-olの合成 (3) で得られたBoc-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol 16.27
g に氷冷下、ＴＦＡ20mlおよびアニソール４mlを加え、
30分間室温で撹拌後、減圧濃縮し、H-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-
Ile-Leu-ol・TFAを得た。Boc-Arg(Tos)-OH（ペプチド研
究所製）8.83g をＴＨＦ50mlに溶解し、ドライアイス−
エタノールで−20℃に冷却した。Ｎ−メチルモルフォリ
ン2.27ml、次いでイソブチルクロロフォルメイト2.72ml
を滴下した後、−20℃で１分間撹拌して、上記化合物の
混合酸無水物を調製した。この反応液と、H-Pro-Tyr(Cl
2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFAをＮ−メチルモルフォリンで中和
したＴＨＦ100ml溶液とを混合し、０℃で５分間および
室温で30分間撹拌後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル
1000mlを加え、１Ｎ塩酸500mlで２回、蒸留水で２回洗
浄し、減圧濃縮した。残渣をエーテルで処理して固化
し、Boc-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol 21.01
g（収率91.0％）を得た。このペプチドフラグメントの
物性は以下の通りであった。
eu-olの合成 (3) で得られたBoc-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol 16.27
g に氷冷下、ＴＦＡ20mlおよびアニソール４mlを加え、
30分間室温で撹拌後、減圧濃縮し、H-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-
Ile-Leu-ol・TFAを得た。Boc-Arg(Tos)-OH（ペプチド研
究所製）8.83g をＴＨＦ50mlに溶解し、ドライアイス−
エタノールで−20℃に冷却した。Ｎ−メチルモルフォリ
ン2.27ml、次いでイソブチルクロロフォルメイト2.72ml
を滴下した後、−20℃で１分間撹拌して、上記化合物の
混合酸無水物を調製した。この反応液と、H-Pro-Tyr(Cl
2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFAをＮ−メチルモルフォリンで中和
したＴＨＦ100ml溶液とを混合し、０℃で５分間および
室温で30分間撹拌後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル
1000mlを加え、１Ｎ塩酸500mlで２回、蒸留水で２回洗
浄し、減圧濃縮した。残渣をエーテルで処理して固化
し、Boc-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol 21.01
g（収率91.0％）を得た。このペプチドフラグメントの
物性は以下の通りであった。
【００３５】m.p. 125.6 〜129.1 ℃ ［α］＝−27.6（DMF, C=1.0） RfＩ(Partrige System) 0.95 RfII(AcOEt) 0.29 元素分析値 Ｃ51Ｈ70Ｎ8Ｏ10ＳＣｌ2 理論値 Ｃ：57.89 ％ Ｈ： 6.67 ％ Ｎ：10.59 ％ 測定値 Ｃ：57.89 ％ Ｈ： 6.83 ％ Ｎ： 9.95 ％
【００３６】(5) Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-
Bz)-Ile-Leu-olの合成 (4) で得られたBoc-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu
-ol 19.46gに氷冷下、ＴＦＡ20mlおよびアニソール3.5m
lを加え、30分間室温で撹拌後、減圧濃縮した。残渣を
エーテルで処理し、生成（析出）した生成物を濾取し、
水酸化ナトリウム上で真空乾燥して、H-Arg(Tos)-Pro-T
yr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFAを得た。
Bz)-Ile-Leu-olの合成 (4) で得られたBoc-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu
-ol 19.46gに氷冷下、ＴＦＡ20mlおよびアニソール3.5m
lを加え、30分間室温で撹拌後、減圧濃縮した。残渣を
エーテルで処理し、生成（析出）した生成物を濾取し、
水酸化ナトリウム上で真空乾燥して、H-Arg(Tos)-Pro-T
yr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFAを得た。
【００３７】一方、Boc-Arg(Tos)-OH（ペプチド研究所
製）7.49g をＴＨＦ50mlに溶解し、ドライアイス−エタ
ノールで−20℃に冷却した。これにＮ−メチルモルフォ
リン1.92ml、次いでイソブチルクロロフォルメイト2.30
mlを滴下した後、−20℃で１分間撹拌して、上記化合物
の混合酸無水物を調製した。この反応液と、H-Arg(Tos)
-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFAをＮ−メチルモルフ
ォリンで中和したＴＨＦ100ml溶液とを混合し、０℃で
５分間および室温で30分間撹拌後、減圧濃縮した。残渣
に酢酸エチル500mlを加え、１Ｎ塩酸200mlで２回、飽和
重曹水200mlで２回、飽和食塩水２回の順で洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をエー
テルで処理して固化し、Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ty
r(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol 21.01g （収率88.0％）を得た。
このペプチドフラグメントの物性は以下の通りであっ
た。
製）7.49g をＴＨＦ50mlに溶解し、ドライアイス−エタ
ノールで−20℃に冷却した。これにＮ−メチルモルフォ
リン1.92ml、次いでイソブチルクロロフォルメイト2.30
mlを滴下した後、−20℃で１分間撹拌して、上記化合物
の混合酸無水物を調製した。この反応液と、H-Arg(Tos)
-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFAをＮ−メチルモルフ
ォリンで中和したＴＨＦ100ml溶液とを混合し、０℃で
５分間および室温で30分間撹拌後、減圧濃縮した。残渣
に酢酸エチル500mlを加え、１Ｎ塩酸200mlで２回、飽和
重曹水200mlで２回、飽和食塩水２回の順で洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をエー
テルで処理して固化し、Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ty
r(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol 21.01g （収率88.0％）を得た。
このペプチドフラグメントの物性は以下の通りであっ
た。
【００３８】m.p. 152.8 〜155.3 ℃ ［α］＝−24.4（DMF, C=1.0） RfＩ(Partrige System) 0.91 RfIII(AcOEt:MeOH=1:
1) 0.82 RfIV(MeOH) 0.94 元素分析値 Ｃ64Ｈ90Ｎ12Ｏ13Ｓ2Ｃｌ2 理論値 Ｃ：56.17 ％ Ｈ： 6.48 ％ Ｎ：12.28 ％ 測定値 Ｃ：56.17 ％ Ｈ： 6.66 ％ Ｎ：10.79 ％
1) 0.82 RfIV(MeOH) 0.94 元素分析値 Ｃ64Ｈ90Ｎ12Ｏ13Ｓ2Ｃｌ2 理論値 Ｃ：56.17 ％ Ｈ： 6.48 ％ Ｎ：12.28 ％ 測定値 Ｃ：56.17 ％ Ｈ： 6.66 ％ Ｎ：10.79 ％
【００３９】(6) Ac-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-B
z)-Ile-Leu-olの合成 (5) で得られたBoc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-B
z)-Ile-Leu-ol 20.90gに氷冷下、ＴＦＡ35mlおよびアニ
ソール５mlを加え、30分間室温で撹拌後、減圧濃縮し
た。残渣をエーテルで処理し、生成（析出）した生成物
を濾取し、水酸化ナトリウム上で一夜真空乾燥して、H-
Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFA
20.92gを得た。
z)-Ile-Leu-olの合成 (5) で得られたBoc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-B
z)-Ile-Leu-ol 20.90gに氷冷下、ＴＦＡ35mlおよびアニ
ソール５mlを加え、30分間室温で撹拌後、減圧濃縮し
た。残渣をエーテルで処理し、生成（析出）した生成物
を濾取し、水酸化ナトリウム上で一夜真空乾燥して、H-
Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFA
20.92gを得た。
【００４０】得られた生成物H-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-
Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFA をＴＨＦ540mlに溶解し、
Ｎ−メチルモルフォリンで中和した後、ピリジン60mlを
加え、10％ピリジン／ＴＨＦ溶液とした。これに無水酢
酸1.3mlを加えて室温で30分間撹拌した後、28％アンモ
ニア水0.6mlを加え、減圧濃縮した。残渣に１Ｎ塩酸100
0mlを加えて固化し、蒸留水で洗浄した後、乾燥させてB
oc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol 2
0.42g （収率100.0 ％）を得た。このペプチドフラグメ
ントの物性は以下の通りであった。
Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol・TFA をＴＨＦ540mlに溶解し、
Ｎ−メチルモルフォリンで中和した後、ピリジン60mlを
加え、10％ピリジン／ＴＨＦ溶液とした。これに無水酢
酸1.3mlを加えて室温で30分間撹拌した後、28％アンモ
ニア水0.6mlを加え、減圧濃縮した。残渣に１Ｎ塩酸100
0mlを加えて固化し、蒸留水で洗浄した後、乾燥させてB
oc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-ol 2
0.42g （収率100.0 ％）を得た。このペプチドフラグメ
ントの物性は以下の通りであった。
【００４１】m.p. 148.6 〜150.6 ℃ ［α］＝−23.4（DMF, C=1.0） RfＩ(Partrige System) 0.78 RfIII(AcOEt:MeOH=1:
1) 0.91 元素分析値 Ｃ61Ｈ84Ｎ12Ｏ12Ｓ2Ｃｌ2 理論値 Ｃ：55.91 ％ Ｈ： 6.33 ％ Ｎ：10.85 ％ 測定値 Ｃ：55.91 ％ Ｈ： 6.52 ％ Ｎ：11.18 ％
1) 0.91 元素分析値 Ｃ61Ｈ84Ｎ12Ｏ12Ｓ2Ｃｌ2 理論値 Ｃ：55.91 ％ Ｈ： 6.33 ％ Ｎ：10.85 ％ 測定値 Ｃ：55.91 ％ Ｈ： 6.52 ％ Ｎ：11.18 ％
【００４２】(7) Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-olの合
成 (6) で得られたAc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)
-Ile-Leu-ol 18.9gにアニソール31.1mlを加え、ドライ
アイス−エタノールによる−70℃冷却下、ＨＦ約200ml
を加えた後、０℃で１時間撹拌し、減圧濃縮した。残渣
をエーテルで処理し、生成（析出）した生成物を濾取
し、水酸化ナトリウム上で真空乾燥した。乾燥後、10％
ＡｃＯＨで抽出し、凍結乾燥してAc-Arg-Arg-Pro-Tyr-I
le-Leu-olの粗製物15.5g を得た。これをＨＰＬＣで分
取し、Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol 6.5gを得た。な
お、ＨＦ解裂は株式会社ペプチド研究所製 ＨＦ-React
ion Apparatus TypeIVを使用した。 ＨＰＬＣによる純度 99 ％ (RT 8.90min 25％MeCN-0.1
％TFA)
成 (6) で得られたAc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)
-Ile-Leu-ol 18.9gにアニソール31.1mlを加え、ドライ
アイス−エタノールによる−70℃冷却下、ＨＦ約200ml
を加えた後、０℃で１時間撹拌し、減圧濃縮した。残渣
をエーテルで処理し、生成（析出）した生成物を濾取
し、水酸化ナトリウム上で真空乾燥した。乾燥後、10％
ＡｃＯＨで抽出し、凍結乾燥してAc-Arg-Arg-Pro-Tyr-I
le-Leu-olの粗製物15.5g を得た。これをＨＰＬＣで分
取し、Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol 6.5gを得た。な
お、ＨＦ解裂は株式会社ペプチド研究所製 ＨＦ-React
ion Apparatus TypeIVを使用した。 ＨＰＬＣによる純度 99 ％ (RT 8.90min 25％MeCN-0.1
％TFA)
【００４３】
【発明の効果】本発明によれば、式(I)：Ac-Arg-Arg-Pr
o-Tyr-Ile-Leu-ol (I) で表されるヘキサペプチドを、
液相合成によって多量に製造することができる。
o-Tyr-Ile-Leu-ol (I) で表されるヘキサペプチドを、
液相合成によって多量に製造することができる。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成７年６月１５日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２５】(7) Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-olの合
成 Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-olは、例えば(6) で得ら
れたAc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-o
lにおける保護基を液相中で脱離することにより得られ
る。例えば、Ac-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-I
le-Leu-ol にアニソールを加えた後、−70℃程度の冷却
下でＨＦを加え、撹拌した後、常法により精製する。
成 Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-olは、例えば(6) で得ら
れたAc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-Ile-Leu-o
lにおける保護基を液相中で脱離することにより得られ
る。例えば、Ac-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Tyr(Cl2-Bz)-I
le-Leu-ol にアニソールを加えた後、−70℃程度の冷却
下でＨＦを加え、撹拌した後、常法により精製する。
Claims (3)
- 【請求項１】 式(I)：Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol
(I) で表されるヘキサペプチドを液相中にて製造することを
特徴とするヘキサペプチドの製造方法。 - 【請求項２】 式(I)：Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol
(I) で表されるヘキサペプチドの製造方法であって、式(I)
のヘキサペプチド中の一部のアミノ酸を有するペプチド
フラグメントを液相中で形成し、得られた各ペプチドフ
ラグメントを液相中でカップリングさせることを特徴と
するヘキサペプチドの製造方法。 - 【請求項３】 式(I)：Ac-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-ol
(I) で表されるヘキサペプチドの製造方法であって、液相中
にて、式(I) のヘキサペプチドの末端アミノ酸に順次１
個ずつアミノ酸を縮合させることを特徴とするヘキサペ
プチドの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14452695A JPH08333389A (ja) | 1995-06-12 | 1995-06-12 | ヘキサペプチドの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14452695A JPH08333389A (ja) | 1995-06-12 | 1995-06-12 | ヘキサペプチドの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08333389A true JPH08333389A (ja) | 1996-12-17 |
Family
ID=15364384
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14452695A Pending JPH08333389A (ja) | 1995-06-12 | 1995-06-12 | ヘキサペプチドの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08333389A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005139163A (ja) * | 2003-10-17 | 2005-06-02 | Shimadzu Corp | タンパク質又はペプチドのｃ末端を修飾する方法 |
| CN103613642A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-03-05 | 陕西东大生化科技有限责任公司 | 一种六胜肽的液相分段合成方法 |
-
1995
- 1995-06-12 JP JP14452695A patent/JPH08333389A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005139163A (ja) * | 2003-10-17 | 2005-06-02 | Shimadzu Corp | タンパク質又はペプチドのｃ末端を修飾する方法 |
| CN103613642A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-03-05 | 陕西东大生化科技有限责任公司 | 一种六胜肽的液相分段合成方法 |
| CN103613642B (zh) * | 2013-11-20 | 2015-05-13 | 陕西东大生化科技有限责任公司 | 一种六胜肽的液相分段合成方法 |
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