NO161374B - Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive mitomycinanaloger. - Google Patents
Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive mitomycinanaloger. Download PDFInfo
- Publication number
- NO161374B NO161374B NO840433A NO840433A NO161374B NO 161374 B NO161374 B NO 161374B NO 840433 A NO840433 A NO 840433A NO 840433 A NO840433 A NO 840433A NO 161374 B NO161374 B NO 161374B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- ammonium acetate
- peptides
- tert
- liters
- butyl
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical class C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 29
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 27
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 27
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 27
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 16
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 11
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 11
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 11
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 claims description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 102400000739 Corticotropin Human genes 0.000 description 9
- 101800000414 Corticotropin Proteins 0.000 description 9
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 9
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 8
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 3
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- ALSPKRWQCLSJLV-UHFFFAOYSA-N azanium;acetic acid;acetate Chemical compound [NH4+].CC(O)=O.CC([O-])=O ALSPKRWQCLSJLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 2
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobutanoic acid Natural products CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N D-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000006253 t-butylcarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(C(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains three hetero rings
- C07D487/14—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Fremgangsmåte til rensning av syntetisk fremstilte peptider.
Oppfinnelsens gjenstand er en fremgangsmåte til rensning av syntetisk fremstilte peptider med sekvensen 1—18 til 1—25 av corticotropin (ACTH), hvori enkelte aminosyrebyggestener kan avvike fra denne sekvens, idet fremgangsmåten er karakterisert ved at man fraksjonert utfeller de ved syntesen dannede, med tert-butyl- og tert.-butyl-oksykarbonyl-rester beskyttede peptider ved hjelp av vandig ammoniumacetatholdig eddiksyre fra en vandig alifatisk alkohol med 1—3 C-atomer, befrir de anrikede peptider for beskyttelsesgruppene ved behandling med trifluoreddiksyre, oppløser de dannede peptider i fortynnet vandig ammonium-acetatoppløsning og kromatograferer den heri oppløselige del på karboksymetylcellulose.
Rensningen av corticotropt virk-somme syntetisk fremstilte peptider ved hjelp av kromatografi på karboksymetylcellulose er ofte beskrevet, imidlertid egner denne metode seg ikke for teknisk formål på grunn av de nødvendige store mengder karboksymetylcellulose og eluat. Således krever man ifølge J. Amer. Chem. Soc. 86, side 2715 (1964) for rensning av 164 mg rått a<1>—<19->corticotropin den 100-dobbelte mengde karboksymetylcellulose og 1,2 liter pufferoppløsning, hvorav ca. 200 cm<3> inneholder det ønskede peptid og må lyofiliseres.
Ifølge en annen forskrift (Heiv. Chim. Acta 1^ 6, side 1570 (1963)) renses det ennå
med beskyttelsesgrupper utstyrte /31_24-
corticotropin ved motstrømsfordeling over 400 trinn. Også en slik rensning er bare å gjennomføre med omstendelig arbeide og store oppløsningsmiddelmengder.
Rensningsfremgangsmåten ifølge oppfinnelsen beror nå på kombinasjonen av to enkle trinn som er gjennomførbare med små tekniske komplikasjoner, og som fore-går på ideell måte. Ved den fraksjonerte utfelling kan man fjerne nettopp de biprodukter og de ved siste reaksjon ikke omsatte utgangsprodukter som forstyrrer ved den etterfølgende kromatografi på karboksymetylcellulose og ville betinge en betraktelig større mengde elueringsmiddel. Kromatograferingen er derfor uvanlig en-kel, den krever bare den fire- til fem-dobbelte vektmengde karboksymetylcellulose, beregnet på anvendt peptid, og følge-lig et i forhold til de kjente fremgangs-måter meget mindre volum eluat. Fremgangsmåten er også fordelaktig fordi den kan anvendes når det ikke anvendes noe høyrenset utgangsprodukt ved de siste reaksjonstrinn til fremstilling av de beskyttede peptidsekvenser.
For rensningen egner seg peptider av aminosyrekvens 1—18 til 1—25 av corticotropin, f. eks. de som fremstilles ifølge Chem. Ber 97 1207 (1964), spesielt ifølge den i Z. Naturforschg. 19 b, 858 (1964) nevnte variant, eller ifølge Heiv. Chim. Acta 46 1550 (1963). Disse peptider adskiller seg lite fra hverandre med hensyn til basisitet og oppløselighet i de ifølge oppfinnelsen anvendte oppløsningsblandinger, således at de alle kan renses etter samme skjema. Også analoger lar seg rense etter denne fremgangsmåte. I slike analoge er enkelte aminosyrer utvekslet mot andre tilsvarende byggede, såvidt ACTH-aktiviteten bibeholdes. For eksempel lar serin seg ut-veksle mot glycin eller alanin, tyrosin mot fenylalanin, metionin mot a-aminosmør-syre, leucin eller norleucin, tryptofan mot fenylalanin eller tyrosin, glutaminsyre mot asparaginsyre, lysin mot ornitin, arginin eller homoarginin.
Ved rensningen går man eksempelvis frem på følgende måte: Man oppløser 1 del av den ennå med tert.-butyl- og tert.butyl-oksykarbonyl-beskyttelsesgrupper utstyrte rå peptidblan-ding ved oppvarmning i 15—20 deler av en vandig alkohol med 1—3 C-atomer, fortrinnsvis metanol, som fortrinnsvis inneholder 10—20 % vann og ca. 1 % ammoniumacetat.
Ved avkjøling kan det opptre en utfelling som består av ikke-omsatte utgangsprodukter og biprodukter. I dette til-felle frafiltrerer man utfellingen og be-handler den med omtrent halvparten av det foran nevnte oppløsningsmiddel på samme måte.
Den dannede oppløsning resp. de forenede filtrater av adskilt utfelling blandes kaldt med flere ganger, fortrinnsvis 2—4 ganger, mengden vann som omtrent inneholder 2 % eddiksyre og ammoniumacetat. Derved utfelles et fnokket bunnfall som praktisk talt inneholder det samlede bio-logisk aktive peptid i beskyttet form. Ytterligere biprodukter forblir i oppløsning. For å unngå tap av denne utfelling som har en liten, men merkbar oppløselighet i den etter utfellingen tilstedeværende opp-løsningsmiddelblanding, er det fordelaktig å inndampe de forenede filtrater før blan-dingen med den vandige eddiksyre-ammo-niumacetatoppløsning til halvparten til -2/3 av det opprinnelige volum. Det trenges da mindre av den til utfelling anvendte vandige eddiksyre-ammoniumacetat-oppløs-ning, fortrinnsvis 2—3 ganger mengden, referert til den inndampede alkoholiske oppløsning.
Utfellingen samles, vaskes med den til utfelling anvendte oppløsningsmiddel-blanding og tørkes i vakuum ved 40°C. Innholdet av eddiksyre og ammoniumacetat i den til utfellingen anvendte opp-løsningsmiddelblanding kan varieres innen vide grenser. Den vandige oppløsning kan inneholde inntil 10 % ammoniumacetat, fortrinnsvis 1—3 %. Hertil setter man så meget eddiksyre at pH ligger innen gren-sene 3—7, fortrinnsvis 4—6,5.
Den tørkede utfelling, som inneholder det ønskede peptid, blir for avspaltning av beskyttelsesgruppen behandlet med eksempelvis den 10-dobbelte mengde trifluoreddiksyre som inneholder 0,1—0,3 % tioglykolsyre, i 1 time ved værelsestempera-tur. Deretter utfeller man med det 10-dobbelte volum eter (beregnet på trifluoreddiksyre) det for beskyttelsesgrupper be-fridde peptid som trifluoracetat.
Dette stoff oppløses eksempelvis i 50 —100 ganger mengden 0,1 molar ammoniumacetat. Man filtrerer fra et lite resi-duum og bringer oppløsningen på den omtrent 4-dobbelte vektmengde karboksymetylcellulose (beregnet på trifluoracetatet) som befinner seg i en kromatograferings-søyle. Deretter eluerer man peptidene med ammoniumacetatpuffer av økende puffer-konsentrasjon mellom 0,1 og 0,3 m og en fra 8 til 9 stigende pH. Konsentrasjonen av det peptid som trer ut av søylen be-stemmes ved måling av dets UV-absorp-sjon ved 254 eller 275. m^. Etter noen biprodukter fremkommer til slutt peptidet med ACTH-aktivitet. Ved lyofilisering får man de ønskede peptider i ren form som acetater.
I en ytterligere forenklet variant av fremgangsmåten oppløser man det rå ennå med beskyttelsesgrupper utstyrte peptid, som beskrevet, i 80—90 %-ig alkohol, blander imidlertid nå med en gang med 2—3 ganger mengden vann med det angitte innhold av eddiksyre og ammoniumacetat. Man får således det søkte peptid forurenset med de peptider som ville ha falt ut ved avkjøling av den alkoholiske oppløsning. Etter avspaltning av beskyttelsesgruppene og opp-tagelse i 0,1 molar ammoniumacetat forblir disse utgangs- og biprodukter uopp-løst og frafiltreres. Den videre rensning ved hjelp av kromatografi på karboksymetylcellulose foretas på den beskrevne måte.
Eksempel 1.
30 g rått, ennå med tert.-butyl og tert.-butyloksykarbonyl-beskyttelsesgrupper utstyrte, /?'—<23->corticotropin-23-amid, som ble fremstilt ifølge Chem. Ber. 97 1207
(1964) med den i Z. Naturforsch., 19 b,
858 (1964) beskrevne variant, oppløses varmt i 4,5 liter 90 %-ig metanol som inneholder 35 g ammoniumacetat. Ved avkjø-ling utfelles geleaktig bunnfall som suges fra og vaskes med 250 cm<3> 90 %-ig metanol. Utfellingen behandles igjen på samme måte med 2 liter varm 90%-ig metanol og suges fra etter avkjøling. Man får, alt
etter råproduktets renhetsgrad, inntil 50 g utgangs- og biprodukter. De forenede filtrater inndampes i vakuum til 4 liter og blandes med 8 liter vann, som pr. liter inneholder 20 cm3 eddiksyre og 20 cm» ammoniumacetat. Herved utfelles et fnokket bunnfall, som etter noen tids henstand kaldt suges fra og vaskes med en blanding av 30 % metanol og 70 % av den til utfelling anvendte ammoniumacetatpuffer. Utbytte: 180 g — 230 g beskyttet forrenset /3<1-23.>corticotropin-23-amid. Fra filtratet kan det etter inndampning og avsublimering av ammoniumacetatet fremstilles ytterligere 65 g utgangs- og biprodukter.
Til avspaltning av beskyttelsesgrupper oppløser man 180 g av det beskyttede, forrensede /^-^-corticotropin-23-amid i 1,8 liter trifluoreddiksyre som inneholder 3 cm<3> tioglykolsyre, og lar det henstå i 1 time ved værelsetemperatur. Deretter utfelles peptid-trifluoracetatet med 18 liter peroksydfri eter, vaskes med eter og tørkes i vakuum. Utbytte 174 g.
100 g av dette forrensede peptid-trifluoracetat omrøres med 10 liter 0,1 molar ammoniumacetatpuffer i 10 min. ved værelsetemperatur, og den fra uoppløst frafiltrerte oppløsning filtreres ved en passeringshastighet på 5 liter/time over en med samme puffer ekvilibrert søyle av 400 g karboksymetylcellulose (søylevolum 2,5—3 liter, tilsvarende en søylediameter på ca. 8 cm og en fyllhøyde på 50—60 cm). Ved samme passeringshastighet eluerer man deretter under mellomkopling av et blandekar med 10 liter 0,1 molar ammoniumacetatpuffer med følgende oppløs-ninger (pH innstilt med ammoniakk):
a) 10 liter 0,2 molar ammoniumacetat, . pH 8,0; b) 10 liter 0,25 molar ammoniumacetat, pH .8,5 og ... c) ca. 20 liter 0,3 molar ammoniumacetat, pH 9,0. UV-absorpsjonskurven viser først fire svakere topper som tilsvarer biproduktene. Like etter tilsetningen av 0,3 molar ammoniumacetat øker absorpsjonen igjen. Øk-ningen tilsvarer de rene ACTH-aktive peptider. Den til denne langstrakte topp tilsvarende del av eluatet (ca. 15 liter) lyofiliseres deretter to ganger. Det volumi-nøse produkt utdriver man med 500 cm» vannfritt aceton, suger fra med en gang, vasker med aceton og peroksydfri eter og tørker i vakuum. Utbytte 62 g, kromato
grafisk rent fi<1>—<23->corticotropin-23-amid, som acetat med ca. 100 I.E./mg ACTH-aktivitet. i Eksempel 2. 300 g rått, ennå med tert.-butyl-og tert.-butyloksykarbonyl-beskyttelsesgrupper utstyrte, i81-23-corticotropin-23-amid, som ble fremstilt ifølge Chem. Ber. 97 1207 (1964) med den i Z. Naturforsch. 19 b, 858 (1964) beskrevne variant, opp-løses varmt i 4 liter 90 %-ig metanol som inneholder 30 g ammoniumacetat. Deretter blander man under kraftig omrøring med 8 liter vann, som pr. liter inneholder 20 cm<3> eddiksyre og 20 g ammoniumacetat. Derved utfelles et fnokket bunnfall, som etter noen tids henstand kaldt suges fra og vaskes med en blanding av 30 % metanol og 70 % av den til utfelling anvendte ammoniumacetatpuffer. Utbytte: 228 g beskyttet forrenset /^-^-corticotropin-23- amid. Fra filtratet kan det etter inndampning og avsublimering av ammoniumacetat utvinnes ytterligere 67 g utgangs- og biprodukter.
Beskyttelsesgruppenes avspaltning
gjennomføres som beskrevet i eksempel 1.
Til kromatografering på karboksymetylcellulose blir 130 g av peptid-trifluoracetatet omrørt med 10 liter 0,1 molar ammoniumacetatpuffer i 10 minutter ved værelsetemperatur, og den fra uoppløst (inntil 35 g) frafiltrerte oppløsning videre-behandlet som i eksempel 1. Man får 60 g kromatografisk rent /?'-<23->corticotropin-23-amid som acetat med ca. 100 I.E./mg ACTH-aktivitet.
Claims (1)
- Fremgangsmåte til rensning av syntetisk fremstilte peptider av ACTH-sekvens 1—18 til 1—25, hvori enkelte aminosyrebyggestener kan avvike fra ACTH-sekvensen, karakterisert ved at man fraksjonert utfeller de ved syntesen dannede, med tert.-butyl- og tert.-butyl-oksykarbo-nylrester beskyttede peptider ved hjelp av vandig ammoniumacetatholdig eddiksyre fra en vandig alifatisk alkohol med 1 — 3 C-atomer, befrir de anrikede peptider for beskyttelsesgruppene ved behandling med trifluoreddiksyre, oppløser de dannede peptider i fortynnet vandig ammonium-acetatoppløsning og kromatograferer den heri oppløselige del på karboksymetylcellulose.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US46461283A | 1983-02-07 | 1983-02-07 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO840433L NO840433L (no) | 1984-08-08 |
| NO161374B true NO161374B (no) | 1989-05-02 |
| NO161374C NO161374C (no) | 1989-08-09 |
Family
ID=23844605
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO840433A NO161374C (no) | 1983-02-07 | 1984-02-06 | Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive mitomycinanaloger. |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59152384A (no) |
| KR (1) | KR900006854B1 (no) |
| AT (1) | AT385509B (no) |
| AU (1) | AU571193B2 (no) |
| BE (1) | BE898856A (no) |
| CA (1) | CA1252789A (no) |
| CH (1) | CH658658A5 (no) |
| DD (1) | DD233844A5 (no) |
| DE (1) | DE3403922A1 (no) |
| DK (1) | DK161890C (no) |
| ES (1) | ES8607305A1 (no) |
| FI (1) | FI80698C (no) |
| FR (1) | FR2540500B1 (no) |
| GB (1) | GB2134514B (no) |
| GR (1) | GR81455B (no) |
| HU (1) | HU190236B (no) |
| IE (1) | IE56814B1 (no) |
| IL (1) | IL70897A (no) |
| IT (1) | IT1178855B (no) |
| LU (1) | LU85199A1 (no) |
| NL (1) | NL8400338A (no) |
| NO (1) | NO161374C (no) |
| NZ (1) | NZ206932A (no) |
| OA (1) | OA07654A (no) |
| PH (1) | PH20249A (no) |
| PT (1) | PT78067B (no) |
| SE (1) | SE461982B (no) |
| YU (1) | YU44984B (no) |
| ZA (1) | ZA84788B (no) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4487769A (en) * | 1982-06-04 | 1984-12-11 | Bristol-Myers Company | Amidines |
| CA1282069C (en) * | 1985-09-12 | 1991-03-26 | Damon L. Meyer | Antibody complexes of hapten-modified diagnostic or therapeutic agents |
| JPS63150282A (ja) * | 1986-12-13 | 1988-06-22 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | マイトマイシン誘導体 |
| JPS63246379A (ja) * | 1987-03-31 | 1988-10-13 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | ７−ｎ，８−ｎ−エチレンマイトマイシン８−イミン類 |
| EP0485904B1 (en) * | 1990-11-13 | 1997-08-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Mitomycin derivatives |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3332944A (en) * | 1964-11-02 | 1967-07-25 | American Cyanamid Co | Antibiotic derivatives of mitomycins a, b, c and porfiromycin |
| JPS5439098A (en) * | 1977-08-31 | 1979-03-24 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Mitomycin c derivatives |
| US4268676A (en) * | 1979-12-05 | 1981-05-19 | University Patents, Inc. | Mitomycin analogs |
| JPS5686184A (en) * | 1979-12-17 | 1981-07-13 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Novel mitomycin c derivative |
| NZ199617A (en) * | 1981-05-15 | 1985-08-30 | University Patents Inc | Azirino(2',3',:3,4)pyrrolo(1,2-a)indole-4,7-dione derivatives and pharmaceutical compositions |
| US4487769A (en) * | 1982-06-04 | 1984-12-11 | Bristol-Myers Company | Amidines |
| US4642352A (en) * | 1983-12-23 | 1987-02-10 | Bristol-Myers Company | Acylamino mitosanes |
-
1984
- 1984-01-25 NZ NZ206932A patent/NZ206932A/en unknown
- 1984-01-27 GB GB08402233A patent/GB2134514B/en not_active Expired
- 1984-02-02 ZA ZA84788A patent/ZA84788B/xx unknown
- 1984-02-03 NL NL8400338A patent/NL8400338A/nl not_active Application Discontinuation
- 1984-02-03 AU AU24073/84A patent/AU571193B2/en not_active Ceased
- 1984-02-04 DE DE19843403922 patent/DE3403922A1/de not_active Withdrawn
- 1984-02-06 NO NO840433A patent/NO161374C/no unknown
- 1984-02-06 IE IE272/84A patent/IE56814B1/en not_active IP Right Cessation
- 1984-02-06 AT AT0037684A patent/AT385509B/de not_active IP Right Cessation
- 1984-02-06 ES ES529478A patent/ES8607305A1/es not_active Expired
- 1984-02-06 PH PH30204A patent/PH20249A/en unknown
- 1984-02-06 CA CA000446811A patent/CA1252789A/en not_active Expired
- 1984-02-06 DK DK052484A patent/DK161890C/da active
- 1984-02-06 CH CH550/84A patent/CH658658A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-02-06 DD DD84259885A patent/DD233844A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-02-06 GR GR73720A patent/GR81455B/el unknown
- 1984-02-06 HU HU84483A patent/HU190236B/hu not_active IP Right Cessation
- 1984-02-06 PT PT78067A patent/PT78067B/pt not_active IP Right Cessation
- 1984-02-07 FR FR8401845A patent/FR2540500B1/fr not_active Expired
- 1984-02-07 FI FI840502A patent/FI80698C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-02-07 BE BE0/212351A patent/BE898856A/fr not_active IP Right Cessation
- 1984-02-07 JP JP59021505A patent/JPS59152384A/ja active Pending
- 1984-02-07 SE SE8400628A patent/SE461982B/sv not_active IP Right Cessation
- 1984-02-07 IT IT67113/84A patent/IT1178855B/it active
- 1984-02-07 KR KR1019840000574A patent/KR900006854B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1984-02-07 YU YU217/84A patent/YU44984B/xx unknown
- 1984-02-07 IL IL70897A patent/IL70897A/xx unknown
- 1984-02-07 LU LU85199A patent/LU85199A1/fr unknown
- 1984-02-07 OA OA58227A patent/OA07654A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3853837A (en) | Novel nonapeptide amide analogs of luteinizing hormone releasing factor | |
| Bodanszky et al. | Synthesis of secretin. I. The protected tetradecapeptide corresponding to sequence 14-27 | |
| US3846399A (en) | Process for controlled stepwise synthesis of polypeptides | |
| HU189757B (en) | Process for producing peptides of psichopharmaceutical activity | |
| JPS5973574A (ja) | 環状ジペプチド類 | |
| JPS62277397A (ja) | 新規なペプチド | |
| US3917578A (en) | Process for producing somatostatin and intermediates | |
| Abdel-Magid et al. | Hydrolysis of polypeptide esters with tetrabutylammonium hydroxide | |
| CN107936090B (zh) | 一种低成本合成ARK-Cu的方法 | |
| NO161374B (no) | Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive mitomycinanaloger. | |
| Li et al. | The synthesis of L-histidyl-L-phenylalanyl-L-ornithyl-L-tryptophyl-glycine and L-histidyl-D-phenylalanyl-L-ornithyl-L-tryptophyl-glycine and their melanocyte-stimulating activity | |
| SU1396970A3 (ru) | Способ получени производных гонадолиберина | |
| US3870694A (en) | Peptide synthesis with n-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide | |
| CN110922453A (zh) | 一种戈舍瑞林的合成方法 | |
| US4098779A (en) | Process for the purification and manufacture of secretin | |
| JPS58140024A (ja) | セクレチンの精製方法 | |
| JP3577756B2 (ja) | Ｎ−保護グルタミン酸γ−誘導体の選択的製造法 | |
| CA1178950A (en) | Preparation of (d-trp.sup.6)-lh-rh via the heptapeptide h-ser-tyr-d-trp-leu-arg-pro-gly- nh.sub.2 | |
| JPH0631314B2 (ja) | 新規なゴナドリベリン誘導体 | |
| JP2563284B2 (ja) | 過塩素酸塩使用によるペプチドの製造方法 | |
| HU192206B (en) | Process for preparing novel peptides | |
| Fujii et al. | The Solid-phase Synthesis of Ile 5-Angiotensin II to Demonstrate the Use of N im-Tosyl-histidine | |
| CN111560061A (zh) | 一种Gelpaglutide的制备方法 | |
| WO1999007874A1 (fr) | Procede de production de derives de lh-rh | |
| Walter et al. | 8-Alanine-oxytocin, 8-alanine-oxypressin, and their deamino analogs. Their synthesis and some of their pharmacological properties |