NO341866B1 - Substituerte 1,3-difenylpropanderivater, sammensetninger og anvendelser derav - Google Patents

Substituerte 1,3-difenylpropanderivater, sammensetninger og anvendelser derav Download PDF

Info

Publication number
NO341866B1
NO341866B1 NO20085338A NO20085338A NO341866B1 NO 341866 B1 NO341866 B1 NO 341866B1 NO 20085338 A NO20085338 A NO 20085338A NO 20085338 A NO20085338 A NO 20085338A NO 341866 B1 NO341866 B1 NO 341866B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
phenyl
propyl
compound
phenoxy
dimethyl
Prior art date
Application number
NO20085338A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
NO20085338L (no
Inventor
Bertrand Karine Caumont
Jean Francois Delhomel
Remy Hanf
Original Assignee
Genfit
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genfit filed Critical Genfit
Publication of NO20085338L publication Critical patent/NO20085338L/no
Publication of NO341866B1 publication Critical patent/NO341866B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/76—Unsaturated compounds containing keto groups
    • C07C59/84—Unsaturated compounds containing keto groups containing six membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/52—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C251/00—Compounds containing nitrogen atoms doubly-bound to a carbon skeleton
    • C07C251/32—Oximes
    • C07C251/34—Oximes with oxygen atoms of oxyimino groups bound to hydrogen atoms or to carbon atoms of unsubstituted hydrocarbon radicals
    • C07C251/48—Oximes with oxygen atoms of oxyimino groups bound to hydrogen atoms or to carbon atoms of unsubstituted hydrocarbon radicals with the carbon atom of at least one of the oxyimino groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/10—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/18—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/22—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/23—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/45—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms doubly-bound to the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/62—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/58—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups
    • C07C59/64—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups containing six-membered aromatic rings
    • C07C59/66—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups containing six-membered aromatic rings the non-carboxylic part of the ether containing six-membered aromatic rings
    • C07C59/68—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups containing six-membered aromatic rings the non-carboxylic part of the ether containing six-membered aromatic rings the oxygen atom of the ether group being bound to a non-condensed six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/76—Unsaturated compounds containing keto groups
    • C07C59/86—Unsaturated compounds containing keto groups containing six-membered aromatic rings and other rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/76—Unsaturated compounds containing keto groups
    • C07C59/88—Unsaturated compounds containing keto groups containing halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/76—Unsaturated compounds containing keto groups
    • C07C59/90—Unsaturated compounds containing keto groups containing singly bound oxygen-containing groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/734—Ethers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/734—Ethers
    • C07C69/736—Ethers the hydroxy group of the ester being etherified with a hydroxy compound having the hydroxy group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/28—Radicals substituted by singly-bound oxygen or sulphur atoms
    • C07D213/30—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D335/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D335/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D335/06—Benzothiopyrans; Hydrogenated benzothiopyrans

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Det beskrives substituerte 1,3-difenylpropan derivater, farmasøytiske sammensetninger omfattende slike og terapeutiske anvendelser derav, fortrinnsvis innen feltet helse for mennesker og dyr.

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører substituerte 1,3-difenylpropan derivater, farmasøytiske sammensetninger omfattende slike og terapeutiske anvendelser derav, fortrinnsvis innen området helse for mennesker og dyr.
Oppfinnerne har vist, overraskende, at forbindelsen i samsvar med foreliggende oppfinnelse har reelle PPAR agonistegenskaper.
Molekylene som er beskrives med denne oppfinnelse er derfor av spesiell interesse i behandling av metabolske syndromkomplikasjoner, insulinresistens, diabetes, dyslipidemia, aterosklerose, kardiovaskulær sykdom, obesitet, hypertensjon, inflammatoriske sykdommer (astma, etc.), neurodegenerative sykdommer (Alzheimers sykdom, etc.), cancer, etc., og likeledes redusere den globale risiko. Forbindelsen i samsvar med foreliggende oppfinnelse anvendes fortrinnsvis for å behandle dyslipidemia.
Diabetes, obesitet og dyslipidemia (høy plasma LDL-kolesterol og triglyseridnivåer, lav HDL-kolesterol nivåer, etc.) er noen av de klart identifiserte kardiovaskulære risikofaktorer som kan predisponere en person til å utvikle kardiovaskulære sykdommer (Mensah M, 2004). Videre må livstilsrisiko vurderes, det vil si faktorer så som anvendelse av tobakk, en for stillesittende livsstil, og en ubalansert diett. Disse faktorer har en synergistisk effekt: det samtidige nærvær av flere av disse faktorer kan dramatisk øke den kardiovaskulære risiko.
Derfor, en global risiko for kardiovaskulær sykdom fortjener å bli undersøkt. I 2004 var hyppighetsraten av dyslipidemia nådd 43,6 % av populasjonen i industrialiserte land. Den skarpe økning i diabetes gjør diabetes til en enda mer viktig faktor i epidemiologi av kardiovaskulære sykdommer: det er estimert at, i 2010, vil 7,6 % av populasjonen være diabetiske (Fox-Tucker J, 2005).
I samsvar med International Atherosclerosis Society (International Atherosclerosis Society, 2003) er kardiovaskulær sykdom den primære årsak til død i industrialiserte land og er enda mer dominerende i utviklingsland. De viktigste kardiovaskulære sykdommer er hjertesykdom, cerebral ischemi og perifere arterielle sykdommer.
Disse data er derfor grunnlaget for at man har betydelige midler for å signifikant redusere kardiovaskulær mobilitet og mortalitetsgrad og nødvendigheten av å finne effektive behandlinger, sammen med livstilsmodifiseringer. Ved at man i tillegg vurderer risikofaktorer for kardiovaskulære sykdommer og deres konsekvenser så er dette en verdensomspennende oppgave.
Forbindelsene i samsvar med foreliggende oppfinnelse, på grunn av deres PPAR-agonist egenskaper, er av spesiell interesse for behandling av patologier relatert til dereguleringer av lipid- og/eller glysidmetabolisme, så som diabetes, obesitet og dyslipidemiaer eller inflammasjon, og likeledes for å redusere den globale kardiovaskulære risiko.
PPARer ( α, γ, og δ) er kjent å være involvert i denne type patologier (Kota BP et al., 2005): ligander og reseptorer er derfor markedsført for behandling av disse patologier (Lefebvre P et al., 2006) og forskjellige PPAR-modulatorer, argonister eller antagonister, selektive eller ikke-selektive er for tiden under utvikling. En PPAR-modulator som har fordelaktige effekter på insulinresistens, obesitet, dyslipidemia, hypertensjon og/eller inflammasjon kan anvendes i behandling av metabolsk syndrom (eller syndrom X) (Liu Y and Miller A, 2005).
Familien av PPARer inkluderer tre isoformer, kjent som α, γ og δ (også kjent som β), som hver kodes for av et forskjellig gen. Disse reseptorer tilhører superfamilien av nukleær reseptor og transkripsjonsfaktor som aktiveres ved kontakt med visse fettsyrer og/eller deres lipidmetabolitter. Aktiverte PPARer danner heterodimerer med 9-cis retinoisk syrereseptorer (RXR eller Retinoid X reseptor) og binder til spesifikke responselementer (PPRE eller Peroxisom Proliferator Respons Element) av promotor i målgenet, og muliggjør således en regulering av transkripsjon.
PPAR α regulerer lipidmetabolisme (hepatisk og muskulær) og hemeostase av glukose, påvirker intracellulær metabolisme av lipider og glysider ved å regulere direkte transkripsjon av gener som koder for proteiner som er involvert i lipidhemeostase, antiinflammatoriske og antiproliferative effekter, og hindrer proaterogene effekter av akkumulering av kolesterol i makrofager ved å stimulere kolesterolutgang (Lefebvre P, Chinetti G, Fruchart JC and Staels B, 2006). Fibrater (fenofibrat, bezafibrat, ciprofibrat, gemfibrozil), via PPAR α anvendes innen klinisk medisin for å behandle visse dyslipidemiaer ved å senke triglyserider og øke HDL (Høy tetthet Lipoprotein) nivåer.
PPAR γ er en nøkkelregulator for adipogenese. Videre, den er involvert i lipidmetabolisme av modne adipocytter, glukosehemeostase, og spesielt insulinresistens, inflammasjon, makrofag kolesterolakkumulering og cellulær proliferasjon (Lehrke M and Lazar MA, 2005). Derfor spiller PPAR γ en viktig rolle i patogenese av obesitet, insulinresistens og diabetes. Tiazolidinedioner (Rosiglitazon, Troglitazon, etc.) er PPAR γ -ligander anvendt i behandling av type 2 diabetes.
Der finnes PPAR δ ligander (L-165041, GW501516 under klinisk utvikling), men ingen PPAR δ -ligand anvendes for tiden som et medikament. Denne reseptor er imidlertid et attraktivt mål for utvikling av brukbare medikamenter for behandling av dyslipidemia, arteriosklerose, obesitet og insulinresistens: PPAR δ en faktisk involvert i lipid- og karbohydratmetabolismeregulering, energibalanse, neurodegenerering, obesitet, dannelse av makrofagskumceller, og inflammasjon (Gross B et al., 2005).
I tillegg til den direkte funksjon som PPAR-ligander kan ha i regulering av lipid- og glysidmetabolisme, kan disse molekyler ha en pleiotrof virkning spektrum på grunn av den store diversitet av PPAR målgenet. Disse multiple egenskaper gjør PPARer som interessante terapeutiske mål med hensyn til behandling av sykdommer så som arteriosklerose, serebralt ischemi, hypertensjon, sykdommer forbundet med neovaskularisering (retinopati, diabetes), etc, inflammatoriske og autoimmune sykdommer (Crohns sykdom, psoriasis, multippel sklerose, astma, etc.), neoplastiske sykdommer (carcinogenese, etc.), neurodegenerative sykdommer, komplikasjoner assosiert med metabolsk syndrom, insulinresistens, diabetes, dyslipidemia, kardiovaskulær sykdom, obesitet, etc, og likeledes for å redusere den globale risiko.
Forbindelsene i samsvar med foreliggende oppfinnelse, på grunn av deres PPAR agonistegenskaper, er et fordelaktiv terapeutisk redskap for å forbedre behandling av patologier relatert til deregulering av lipid og/eller glysidmetabolisme, spesielt dyslipidemia og likeledes for å redusere den globale kardiovaskulære risiko.
Mer generelt, ved å virke samtidig på flere reguleringsprosesser, er forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen fordelaktige terapeutiske midler for behandling av komplikasjoner assosiert med metabolsk syndrom (hvor trekkene er obesitet, fortrinnsvis abdominal obesitet, en avvikende konsentrasjon av blodlipider (høye triglyseridnivåer og/eller lave HDL kolesterolnivåer (dyslipidemia)), hyperglysemia og/eller insulinresistens, og hypertensjon), aterosklerose, kardiovaskulær sykdom, insulin resistens, obesitet, hypertensjon, diabetes, dyslipidemia, kardiovaskulær sykdom, inflammatorisk sykdom (astma, etc.), neurodegenerative patologier (Alzheimer’s sykdom, etc.), cancer, etc., og likeledes for å redusere den globale risiko.
Morishita S et al., Synthesis and hypolipidaemic activity of 2-substitued isobutyric acid derivates, Journal of medicinal chemistry, American Chemical Societ, Washington, US, vol 31, nr.6, sider 1205-1209, beskriver sammensetninger for hypolipidemiske, forskjellig fra foreliggende oppfinnelse. DE4121849 og Labaudiniere R et al., Omega-[(omega-arylalkyl)aryl]alkanoic acids: a new class of spicific lta4 hydrolase inhibitors, Journal of Medicinal Chemistry, Amercan Chemical Society. Washington, US (1992), vol.35, nr.17, sider 3156-3169 beskriver inhibering av hydrolyse av leukotriener A4 blant annet for behandling av inflammasjon.
DE4327365 beskriver fenoler med fibrinogenreduserende virkning.
Foreliggende oppfinnelse vedrører forbindelser, kjennetegnet ved at de er avledet fra substituert 1,3-difenylpropan med den generelle formel (I):
hvor:
X1 representerer et halogenatom, en R1- eller G1-R1-gruppe;
X2 representerer et hydrogenatom;
X3 representerer en R3-gruppe;
X4 representerer en G4-R4-gruppe, hvor R4 representerer et oksygenatom;
X5 representerer en R5-gruppe;
R1 representerer en halogenert alkylgruppe;
R3 og R5, identiske eller forskjellige, representerer en ikke-substituert alkylgruppe; G1 representerer et atom av oksygen eller svovel;
R4 representerer en alkylgruppe substituert med en COOR9-gruppe;
A representerer:
(i) en -CR6R7 gruppe, hvor:
R6 representerer et hydrogenatom,
R7 representerer en hydroksygruppe eller en -OR8-gruppe, hvor R8 representerer en alkylgruppe, substituerte eller ikke med en aryl, heteroaryl eller sykloalkylgruppe, eller
(ii) en karbonylgruppe (CO),
D representerer et karbonatom koplet til to hydrogenatomer (CH2),
R9 representerer et atom av hydrogen eller et ikke-subsidiert alkylradikal;
deres stereoisomerer, diastereoisomerer, enantiomerer, rene eller blandete, rasemiske blandinger, geometriske isomerer, tautomerer, salter, hydrater, solvater, faststofformer og likeledes blandinger av disse.
Foretrukne utførelser er angitt i underkravene 2-7.
I konteksten av denne oppfinnelse angir termen ”alkyl” et hydrokarbonradikal som er mettet, lineært, forgrenet eller cyklisk, halogenert eller ikke, som har fortrinnsvis fra 1 til 24, og fortrinnsvis 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, eller 10, karbonatomer så som metyl, trifluormetyl, etyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tertiobutyl, sec-butyl, pentyl, neopentyl, n-heksyl, eller sykloheksyl.
Termen “sykloalkyl” angir en alkylgruppe som definert over og som danner minst en ring (for eksempel sykloalkyl grupper har 3 til 8 karbonatomer: syklopropyl, syklobutyl, syklopentyl, sykloheksyl, sykloheptyl og syklooktyl).
Termen “alkyloksy” refererer til en alkylkjede koplet til molekylet ved hjelp av et oksygenatom (en eterbinding). Alkylkjeden korresponderer til den tidligere uttrykte definisjon. Metoksy, trifluormetoksy, etoksy, n-propyloksy, isopropyloksy, n-butoksy, iso-butoksy, tertio-butoksy, sec-butoksy, eller heksyloksy kan gis som eksempler.
Termen “aryl” refererer til aromatiske grupper som omfatter fortrinnsvis fra 5 til 14 karbonatomer, hensiktsmessig 6 til 14 karbonatomer, mulig avbrutt av en eller flere heteroatomer valgt blant N, O, S eller P (nærmere bestemt benevnt ”heteroaryl”). Disse er generelt mono- eller bicykliske og omfatter fortrinnvis fra 6 til 14 karbonatomer, så som fenyl, α-naftyl, β-naftyl, antracenyl eller fluorenyl.
Termen“oksygenert eller sulfurert heteroring” angir en sykloalkylgruppe som definert over avbrutt av en eller flere heteroatomer valgt blant O og S. Tiopyran eller pyran kan angis som eksempler.
Med halogenatom skal det forstås et atom av brom, klor, fluor eller jod.
Et halogenert alkylradikal er et alkylradikal som definert over som omfatter minst et halogenatom eller totalt halogenert (perhalogenert).
Et foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en forbindelse av generell formel (I) hvor A representerer en karbonylgruppe (CO).
Et ytterligere aspekt vedrører en forbindelse av generell formel (I) hvor A representerer en–CR6R7-gruppe, R6 representerer et hydrogenatom og R7 representerer en hydroksylgruppe.
Et ytterligere foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en forbindelse av generell formel (I) hvor A representerer en -CR6R7 – gruppe, R6 representerer et hydrogenatom og R7 representerer en -OR8 – gruppe, hvor R8 er som definert over. Nærmere bestemt, R8 kan representere en arylgruppe omfattende fortrinnsvis 1, 2, 3 eller 4 karbonatomer. Enda mer foretrukket, R8 kan representere en alkylgruppe substituert med en aryl- eller sykloalkylgruppe, hvor nevnte aryl- eller sykloalkylgruppe omfatter fortrinnsvis 6 karbonatomer.
Et ytterligere foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en forbindelse av generell formel (I) hvor X3 og X5, identiske eller forskjellige, respektivt representerer en R3- og R5-gruppe, hvor R3 og R5, identiske eller forskjellige, representerer en alkylgruppe som ikke er substituert..
Fortrinnsvis, X3 og X5, identiske eller forskjellige, representerer respektivt en R3- og R5-gruppe, R3 og R5, identiske eller forskjellige, representerer en ikke-substituert alkylgruppe, omfattende fortrinnsvis 1, 2, 3 eller 4 karbonatomer. Enda mer foretrukket, X3 og X5, identiske eller forskjellige, representerer en metylgruppe.
Et ytterligere foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører forbindelser med generell formel (I) hvor
X4 representerer en G4-R4-gruppe, hvor G4 er som tidligere definert, og R4 representerer en alkylgruppe substituert med COOR9, fortrinnsvis COOH. Enda mer foretrukket, X4 representerer -OC(CH3)2COOH eller -OCH2COOH..
Et foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører forbindelse av generell formel (I) hvor R9 representerer fortrinnsvis et hydrogenatom eller en alkylgruppe omfattende 1, 2, 3, 4, 5 eller 6 karbonatomer.
Et foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører forbindelse med generell formel (I) hvor X4- gruppen korresponderer til formelen -OC(CH3)2COOR9, hvor R9 er som tidligere definert og representerer fortrinnsvis et hydrogenatom eller en alkylgruppe omfattende 1, 2, 3, 4, 5 eller 6 karbonatomer.
Et foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører forbindelse av generell formel (I) hvor X1 representerer en R2- eller G1R1-karbonylgruppe,
hvor G1 er som tidligere definert, og
R1 representerer en halogenert alkylgruppe.
Fortrinnsvis, R1 representerer en halogenert alkylgruppe omfattende 1, 2 eller 3 karbonatomer.
Enda mer foretrukket, X1 representerer en -CF3, -OCF3, -SCF3, -ORCF3-gruppe, hvor R representerer en alkylgruppe som definert over.
Et foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører forbindelse av generell formel (I) hvor X1 representerer et halogenatom (brom, klor, fluor, jod). Fortrinnsvis, X1 representerer et atom av klor eller brom.
Den foreliggende oppfinnelse vedrører også en farmasøytisk sammensetning omfattende, i et farmasøytisk akseptabelt støttemedium, minst én av forbindelsene som ble definert i krav 1 til 7, valgfritt i forbindelse med én eller flere andre terapeutiske og/eller kosmetiske aktive bestanddeler.
Fortrinnsvis er den farmasøytiske sammensetning for behandling av komplikasjoner assosiert med metabolsk syndrom, insulinresistens, diabetes, dyslipidemia, arteriosklerose, kardiovaskulære sykdommer, obesitet, hypertensjon, inflammatoriske sykdommer, nevrodegenerative patologier eller cancere.
Ytterligere utførelser er angitt i kravene 10-11.
Det beskrives forbindelser som angitt nedenfor:
Forbindelse 1: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetyloksy)fenyl]-3-okso-propyl]fenoksy]-2-metyl-propanoisk syre
Forbindelse 2: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetyltio)fenyl]-3-okso-propyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 3: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-bromfenyl]-3-okso-propyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 4: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetyl)fenyl]-3-okso-propyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 5: 2-[4-[3-[4-klor-2-hydroksyfenyl]-3-okso-propyl]fenyltio]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 6: 2-[2-metyl-4-[3-[4-(3,3,3-trifluorpropyloksy)fenyl]-3-oksopropyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 7: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-hydroksy-3-[4-(trifluormetyltio)fenyl]propyl]-fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 8: 2-[2,6-dimetyl-4-(3-(pyridin-3-ylmetoksy)-3-[4-(trifluormetoksy)-fenyl]propyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 9: 2-[4-(3-(4-jodbenzyloksy)-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)-2,6-dimetylfenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 10: 2-[4-(3-metoksy-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)-2,6-dimetylfenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 11: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(3,3,3-trifluorpropyloksy)fenyl]-3-okso-propyl]-fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 12: 2-(2,6-dimetyl-4-(3-okso-3-(4-(2,2,2-trifluoretoksy)fenyl)propyl)-fenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 13: 2-(2,6-dimetyl-4-(3-okso-3-(4-(2,2,2-trifluoretyltio)fenyl)propyl)-fenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 14: 2-(4-(3-(4-klor-2-(metyltio)fenyl)-3-okso-propyl)-2,6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 15: 2-(4-(3-(2,4-bis(trifluormetyl)fenyl)-3-okso-propyl)-2,6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 16: 2-(4-(3-(2-fluor-4-(trifluormetyl)fenyl)-3-okso-propyl)-2,6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 17: 2-(4-(3-(2-fluor-4-(2,2,2-trifluoretoksy)fenyl)-3-okso-propyl)-2,6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 18: 2-(2,6-dimetyl-4-(3-(2-metyl-4-(2,2,2-trifluoretoksy)fenyl)-3-oksopropyl)fenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 19: 2-(4-(3-(2-metoksy-4-(2,2,2-trifluoretoksy)fenyl)-3-okso-propyl)-2,6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 20: 2-(4-(3-(2-hydroksy-4-(trifluormetyl)fenyl)-3-okso-propyl)-2,6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 21: 2-(4-(3-(2-metoksy-4-(trifluormetyl)fenyl)-3-okso-propyl)-2,6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 22: 2-(2,6-dimetyl-4-(3-(2-isopropyloksy-4-(trifluormetyl)fenyl)-3-oksopropyl)fenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 23: 2-(2,6-dimetoksy-4-(3-okso-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)-fenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 24: 2-(4-(3-(2-fluor-4-(trifluormetyl)fenyl)-3-okso-propyl)-2,6-dimetoksyfenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 25: 2-metyl-2-(2-metyl-4-(3-okso-3-(4-(trifluormetyltio)fenyl)-propyl)fenoksy)propanoisk syre
Forbindelse 26: 2-metyl-2-(2-metyl-4-(3-okso-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)-fenoksy)propanoisk syre
Forbindelse 27: 2-(4-(3-(2-fluor-4-(trifluormetyl)fenyl)-3-okso-propyl)fenyltio)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 28: 2-metyl-2-(3-(3-okso-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)fenoksy)-propanoisk syre
Forbindelse 29: 2-(2,6-dimetyl-4-(3-okso-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)fenoksy)-propanoisk syre
Forbindelse 30: 2-[4-(3-hydroksy-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)-2,6-dimetylfenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 31: 2-(2,6-dimetyl-4-(3-okso-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)fenoksy)-2-metylpropanamid
Forbindelse 32: 2-(4-(3-hydroksyimino-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)-2,6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 33: 2-(4-(3-metoksyimino-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)-2,6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 34: 4-(2,6-dimetyl-4-(3-okso-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)fenoksy)-2,2-dimetylbutanoisk syre
Forbindelse 35: 2-(2,6-dimetyl-4-(3-okso-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)fenoksy)-2-metylpropanoisk syre tertiobutyl ester
Forbindelse 36: 2-(2,6-dimetyl-4-(3-okso-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)fenoksy)-2-metylpropanoisk isopropyl ester
Forbindelse 37: 2,2-difluor-2-(2,6-dimetyl-4-(3-okso-3-(4-(trifluormetoksy)-fenyl)propyl)fenoksy)eddiksyre
Forbindelse 38: 2-(2-metoksy-4-(3-okso-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)fenyltio)-2-metylpropanoisk syre
Foreliggende oppfinnelse vedrører fortrinnsvis følgende forbindelser:
Forbindelse 1: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetoksy)fenyl]-3-oksopropyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre;
Forbindelse 2: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetyltio)fenyl]-3-oksopropyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre;
Forbindelse 3: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-bromfenyl]-3-okso-propyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre;
Forbindelse 4: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetyl)fenyl]-3-okso-propyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 11: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(3,3,3-trifluorpropyloksy)fenyl]-3-oksopropyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Forbindelse 36: 2-(2,6-dimetyl-4-(3-okso-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)-fenoksy)-2-metylpropanoisk syre isopropyl ester
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse inkluderer deres stereoisomerer (diastereoisomerer, enantiomerer), rene eller blandete, rasemiske former, deres geometriske isomerer, deres tautomerer, deres salter, deres hydrater, deres solvater, deres faststofformer og blandinger derav.
Forbindelsen i samsvar med foreliggende oppfinnelse kan omfatte ett eller flere asymmetriske sentre. Foreliggende oppfinnelse inkluderer stereoisomerer (diastereoisomerer, enantiomerer), rene eller blandete, og likeledes rasemiske former og geometriske isomerer. Dersom en enantiomerisk ren (eller anriket blanding) er ønsket, kan denne oppnås enten ved rensing av det finale produkt eller kirale mellomprodukt, eller med asymmetrisk syntese ved å følge fremgangsmåter kjent for den fagkyndige innen feltet (for eksempel ved anvendelse av reagenser og kirale katalysatorer).
Noen forbindelser i samsvar med oppfinnelsen kan ha forskjellige stabile tautomeriske former og alle disse former og deres blandinger er inkludert av oppfinnelsen.
Oppfinnelsen vedrører også ”farmasøytisk akseptable” salter av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen. Generelt angir denne term lite eller ikke-toksiske salter oppnådd fra organiske eller uorganiske baser eller syrer. Disse salter kan oppnås under det finale rensetrinn av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen eller ved å inkorporere saltet i den rensete forbindelse.
Noen forbindelser i samsvar med oppfinnelsen og deres salter kan være stabile i flere faststofformer. Foreliggende oppfinnelse inkluderer alle faststofformene av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen som inkluderer amorfe, polymorfe, monoog polykrystalinske former.
Forbindelsene i samsvar med foreliggende oppfinnelse kan eksistere i ikkesolvatiserte eller solvatisert form, for eksempel med farmasøytisk akseptable solventer så som vann (hydrater) eller etanol.
Forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen merket med en eller flere isotoper er også inkludert i oppfinnelsen: disse forbindelser er strukturelt identiske men er forskjellige med det faktum at minst et atom i strukturen er erstattet av en isotop (radiokative eller ikke). Eksempler på isotoper som kan inkluderes i strukturen av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen kan velges blant hydrogen, karbon oksygen og svovel, så som<2>H,<3>H,<13>C,<14>C,<18>O,<17>O,<35>S respektivt. Radioaktive isotoper er spesielt foretrukket siden disse er enkle å fremstille og detektere innen rammen av in vivo biotilgjengelighet studier av substansene. Tunge isotoper (så som<2>H) er spesielt foretrukket på grunn av deres anvendelse som indre standarder i analytiske studier.
Det beskrives også en fremgangsmåte for syntese av forbindelsene av generell formel (I) som tidligere definert.
Fremgangsmåten omfatter:
et trinn av blanding (i) i et basisk eller surt medium av minst en forbindelse av formel (A) med minst en forbindelse av formel (B):
hvor X1, X2, X3, X4, og X5 har definisjonene som tidligere gitt,
- deretter (ii) et reduksjonstrinn av de resulterende forbindelser,
- og til slutt (iii) et trinn som muliggjør kopling av de funksjonelle grupper.
Eksperimentbetingelsene for trinn (i) i et surt eller basisk medium og for trinn (ii) er enkle å implementere for den fagkyndige innen feltet og kan i stor grad variere. Prosedyrene for syntesene kan spesielt være de som er beskrevet under ”eksempler” i denne beskrivelse.
Blandingen av de to forbindelser utføres fortrinnsvis støkiometrisk. Den utføres fortrinnsvis ved romtemperatur (mellom ca 18 °C og 25 °C) og ved normalt atmosfærisk trykk.
I et basisk medium foregår reaksjonen fortrinnsvis i nærvær av en sterk base, så som et alkalimetallhydroksid, så som natriumhydroksid eller et alkalimetallalkolat så som natriumetylat.
I et surt medium foregår reaksjonen fortrinnsvis i nærvær av en sterk syre, så som saltsyre.
De resulterende forbindelser kan isoleres med klassiske metoder av en fagkyndig innen feltet. Forbindelsene kan deretter anvendes for eksempel innen medisin eller kosmetiske produkter.
Foreliggende oppfinnelse vedrører også forbindelser så som de som er beskrevet over som medisiner.
Ytterligere aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en farmasøytisk sammensetning omfattende, i en farmasøytisk akseptabel støtte, minst en forbindelse som beskrevet over, muligens i assosiasjon med en eller flere andre terapeutiske og/eller kosmetiske aktive bestanddeler.
Oppfinnelsen vedrører fortrinnsvis en farmasøytisk sammensetning for behandling av komplikasjoner assosiert med metabolsk syndrom, insulinresistens, diabetes, dyslipidemia, aterosklerose, kardiovaskulære sykdommer, obesitet, hypertensjon, inflammatoriske sykdommer (astma etc), neurodegenerative patologier (Alzheimer’s sykdom, etc.), eller cancer, etc. Den farmasøytiske sammensetning i samsvar med oppfinnelsen anvendes fortrinnsvis for å behandle dyslipidemia.
Oppfinnelsen er fortrinnsvis en farmasøytisk sammensetning for å behandle kardiovaskulære risikofaktorer relatert til deregulering av lipid- og/eller glusidmetabolisme forstyrrelser (hyperlipidemia, type II diabetes, obesitet, etc) ved å redusere den globale risiko.
Et ytterligere aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en ernæringssammensetning inkluderende minst en forbindelse som ovenfor beskrevet.
Et ytterligere aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører anvendelse av minst en forbindelse som tidligere beskrevet for fremstilling av en farmasøytisk sammensetning tiltenkt for å behandle multiple patologier, fortrinnsvis de som er relatert til metabolismeforstyrrelser (for eksempel dyslipidemia). Mer generelt, dette aspekt av oppfinnelsen vedrører anvendelse av minst en forbindelse tidligere beskrevet for fremstilling av farmasøytiske sammensetninger tiltenkt for å behandle kardiovaskulære sykdomsrisikofaktorer relatert til lipid og/eller glusidmetabolismeforstyrrelser, for å redusere den globale risiko.
For eksempel (men ikke begrensende), forbindelsene i samsvar med foreliggende oppfinnelse kan hensiktsmessig administreres i kombinasjon med andre terapeutiske og/eller kosmetiske midler, som for tiden er tilgjengelig på markedet eller under utvikling, så som:
- anti-diabetiske midler: secretagoguer (sulfonylurea (glibenclamid, glimepirid, gliclazid, etc.) og glinider (repaglinid, nateglinid, etc.)), alfa-glukosidase inhibitorer, PPAR γ -agonister (tiazolidindioner så som rosiglitazon, pioglitazon), blandet PPAR α/ γ -agonister (tesaglitazar, muraglitazar), pan-PPARs (forbindelser som samtidig aktiverer 3 PPAR isoformene), biguanider (metformin), Dipeptidyl Peptidase IV inhibitorer (MK-431, vildagliptin), Glukagon-lignende peptid-1 (GLP-1) agonister (eksenatid), etc.
- Insulin
- Lipidsenkende og/eller kolesterolsenkende molekyler: fibrater (fenofibrat, gemfibrozil), HMG CoA reduktase inhibitorer eller hydroksylmetylglutaryl koenzym A reduktase (statiner så som atorvastatin, simvastatin, fluvastatin), kolesterol absorpsjons inhibitorer (ezetimibe, fytosteroler), CETP eller kolesterol ester overføringsprotein inhibitorer (torcetrapib), ACAT eller acyl-koenzym a kolesterol acyltransferase (avasimib, eflucimibe), MTP (Microsomal Triglycerid Overførings Protein) inhibitorer, gallesyre sekvenserende midler (kolestyramin), vitamin E, polyumettete fettsyrer, omega-3 fettsyrer, nikotinisk syre type derivativer (niacin), etc.
- Anti-hypertensive midler og hypotensive midler: ACE (Angiotensin-Omdannende Enzym) inhibitorer (captopril, enalapril, ramipril eller quinapril), angiotensin II reseptor antagonister (losartan, valsartan, telmisartan, eposartan, irbesartan, etc.), beta blokkere (atenolol, metoprolol, labetalol, propranolol), tiazid- og ikke-tiazid diuretiske midler (furosemid, indapamid, hydroklortiazid, anti-aldosteron), vasodilatorer, kalsiumkanal blokker (nifedipin, felodipin eller amlodipin, diltiazem eller verapamil), etc.
- Anti-platemidler: Aspirin, Ticlopidin, Dipyridamol, Clopidogrel, Flurbiprofen, etc. - Anti-obesitetsmidler: Sibutramin, lipase inhibitorer (orlistat), PPAR δ, cannabinoid CB1 reseptor antagonister (rimonabant), etc.
- Anti-inflammatoriske midler: for eksempel, corticoider (prednison, betametason, deksametason, prednisolon, metylprednisolon, hydrokortison, etc.), NSAIDer eller ikke-stereoidale antiinflammatoriske midler avledet fra indol (indometacin, sulindac), NSAIDer av arylkarboksylisk gruppe (tiaprofenisk syre, diclofenac, etodolac, flurbiprofen, ibuprofen, ketoprofen, naproksen, nabumeton, alminoprofen), NSAIDer avledet fra oksicam (meloksicam, piroksicam, tenoksicam), NSAIDer fra fenamat gruppen, COX2 selektive inhibitorer (celecoksib, rofecoksib), etc.
- Antioksidantmidler: for eksempel probucol, etc.
Midler anvendt i behandling av hjerterelatert utilstrekkelighet: tiazidiske og ikketiazidiske diuretiske midler (furosemid, indapamid, hydroklortiazid, antialdosteron), ACE inhibitorer (captopril, enalapril, ramipril eller quinapril), digitalis medikamenter (digoksin, digitoksin), beta blokkere (atenolol, metoprolol, labetalol, propranolol), fosfodiesterase inhibitorer (enoksimon, milrinon), etc.
- idler som anvendes i behandling av koronar utilstrekkelighet: betablokkere (atenolol, metoprolol, labetalol, propranolol), kalsium kanalblokkere (nifedipin, felodipin eller amlodipin, bepridil, diltiazem eller verapamil), NO (nitrogenoksid) donorer (trinitrin, isosorbid dinitrat, molsidomin), amiodaron, etc.
- Anti-cancer midler: cytotoksiske midler (midler som interagerer med DNA (Deoxyribonukleinsyre), alkylerende midler, cisplatin, og derivater), cytostatiske midler (GnRH (Gonatropin-Frigjørende Hormon) analoger, somatostatin analoger, progestin, anti-østrogene medikamenter, aromatase inhibitorer, etc.), immun respons modulatorer (interferoner, IL2, etc.), etc.
- Antiastmatiske medikamenter så som bronkodilatorer (beta 2 reseptor agonister), corticoider, kromoglykat, leucotrien reseptor antagonister (montelukast), etc.
- Corticoider anvendt i behandling av hudpatologier så som psoriasis og dermatitt - Vasodilatorer og/eller antiischemiske midler
(buflomedil, ginkgo biloba ekstrakt, naftidrofuryl, pentoksifyllin, piribedil), etc.
Oppfinnelsen vedrører også fremgangsmåter for å behandle patologier relatert til lipid- og/eller glusidmetabolisme omfattende administrering til et individ, fortrinnsvis et menneske, av en effektiv mengde av en forbindelse eller en farmasøytisk sammensetning som definert over. Innen konteksten av oppfinnelsen, termen ”en effektiv mengde” refererer til en mengde av forbindelsen som er tilstrekkelig til å produsere det ønskete biologiske resultat. Innen konteksten av oppfinnelsen, termen ”individ” angir et pattedyr, og mer fortrinnsvis et menneske.
Termen ”behandling” angir lindrende, symptomatisk eller hindrende behandling. Forbindelsen ifølge oppfinnelsen kan således anvendes til individet, så som pattedyr, fortrinnsvis mennesker som har en deklarert sykdom. Forbindelsen ifølge oppfinnelsen kan også anvendes for å forsinke eller redusere utviklingen eller hindre ytterligere utvikling av sykdom, og således forbedre individets tilstand. Forbindelsen ifølge oppfinnelsen kan til slutt administreres til friske individer som kan normalt utvikle sykdommen eller ha en risiko for å utvikle sykdommen.
Farmasøytiske sammensetninger i samsvar med oppfinnelsen omfatter fortrinnsvis en eller flere eksipienter eller vehikler, som er akseptable innen en farmasøytisk kontekst (for eksempel saltløsninger, fysiologiske løsninger, isotone løsninger, etc, som er kompertible med farmasøytisk bruk og som er godt kjent for den fagkyndige innen feltet). Sammensetningene kan omfatte ett eller flere midler eller vehikler valgt blant dispergerende midler, sulibiliserende midler, stabiliserende midler, konserverende midler, etc. Midler eller vehikler som er nyttige for disse formuleringer (væske- og/eller injiserbare) og/eller faststoff er fortrinnsvis metylcellulose, hydroksymetylcellulose, karboksymetylcellulose, polysorbat 80, mannitol, gelatin, laktose, vegetabilsk olje, acacia, liposomer, etc. Sammensetningene kan formuleres i form av injiserbare suspensjoner, geler, oljer, piller, stikkpiller, pulvere, gellokk, kapsler, aerosoler, etc, eventuelt ved hjelp av galeniske former eller anordninger som sikrer en forlenget og/eller forsinket frigivelse. For denne type formuleringer kan midler så som cellulose, karbonater eller stivelser hensiktsmessig anvendes.
Forbindelsene eller sammensetningene i samsvar med oppfinnelsen kan administreres på forskjellige måter og i forskjellige former. Således, for eksempel, de kan administreres i en systematisk måte, per os, parenteralt, ved inhalering eller ved injeksjon, så som for eksempel intravenøst, ved intramuskulær rute, ved subkutanøs rute, ved transdermal rute, ved intraarteriell rute, etc. For injeksjoner kan forbindelsene generelt kondisjoneres i form av væskesuspensjoner som kan injiseres ved anvendelse av sprøyter eller perfusjoner, for eksempel.
Det skal forstås at hastigheten og/eller doseringen relativ til injeksjonen kan tilpasses av den fagkyndige innen feltet, i funksjon av pasienten, patologien, administrasjonsform, etc. Typisk, forbindelsene administreres i doseringer varierende fra mellom 1 µg til 2 g per administrering, fortrinnsvis fra 0,1 mg til 1 g per administrering. Administreringen kan være daglig eller også flere ganger per dag, dersom nødvendig.
Videre, sammensetningene i samsvar med oppfinnelsen kan inkludere andre midler eller aktive bestanddeler.
FIGURER
Forkortelser anvendt i figurene:
Cpd = forbindelse
Ctrl = kontroll
mpk = mg/kg/dag
LDL-kolesterol = Lav tetthet lipoprotein kolesterol
HDL-kolesterol = Høy tetthet lipoprotein kolesterol
VLDL-kolesterol = Svært lav tetthet lipoprotein kolesterol
Figurer 1-1 til 1-18: In vitro evaluering av PPAR – aktiverende egenskaper av forbindelsen ifølge oppfinnelsen i forhold til dosering.
Aktiveringen av PPARer evalueres in vitro ved anvendelse av fibroblastlinje fra apenyre (COS-7), ved å måle transkripsjonsaktivitet av chimeraer fremstilt av DNA-bindende domene av Gal4 transkripsjonsfaktor av gjær og bindingsdomene til liganden av forskjellige PPARer.
Forbindelsene testes i doseringer på mellom 10<-7>og 100 µM på Gal4-PPAR α, γ, og δ chimeraer. Induksjonsfaktoren, det vil si forholdet mellom luminisens indusert av forbindelsen og luminisens indusert av kontrollen, måles for hver betingelse. Jo høyre induksjonsfaktoren er jo mer har forbindelsen PPAR aktiverende egenskaper.
Figurer 1-1, 1-2, 1-3: In vitro evaluering av PPAR α, γ, δ aktiverende egenskaper av forbindelse 1
Figurer 1-4, 1-5, 1-6: In vitro evaluering av PPAR α, γ, δ aktiverende egenskaper av forbindelse 2
Figurer 1-7, 1-8, 1-9: In vitro evaluering av PPAR α, γ, δ aktiverende egenskaper av forbindelse 3
Figurer 1-10, 1-11, 1-12: In vitro evaluering av PPAR α, γ, δ aktiverende egenskaper av forbindelse 4
Figurer 1-13, 1-14, 1-15: In vitro evaluering av PPAR α, γ, δ aktiverende egenskaper av forbindelse 5
Figurer 1-16, 1-17, 1-18: In vitro evaluering av PPAR α, γ, δ aktiverende egenskaper av forbindelse 7.
Figurer 2-1 til 2-7: In vivo evaluering, på ApoE2/E2 mus, på kroppsvekt egenskaper, på hypolipidemiske egenskaper, og egenskaper som stimulerer til syntese av HDL kolesterol av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Effekten av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen evalueres in vivo på mus som er humanisert med E2 isoformen av apolipoprotein E (E2/E2).
Dyslipidemiske E2/E2 – mus kroppsvekt, nivåer av total kolesterol, triglyserider og plasmafrie fettsyrer måles etter 8 dager av en per os behandling med forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen. Disse parametere sammenlignes til de som oppnås fra kontrolldyr (dyr som ikke blir behandlet med forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen). Den målte forskjell viser effekten på kroppsvekt og hypolipidemisk effekt av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen.
Figur 2-1: Kroppsvektøkning etter 8 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 5, 10, og 50 mpk
Figur 2-2: Plasma kolesterolnivåer etter 8 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 5, 10, og 50 mpk;
Figur 2-3: Plasma HDL kolesterolnivåer etter 8 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 5, 10, og 50 mpk
Figur 2-4: Plasma triglyseridnivåer etter 8 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 5, 10, og 50 mpk.
Figur 2-5: Plasmafrie fettsyrenivåer etter 8 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 5, 10, og 50 mpk.
Effektiviteten av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen evalueres også ved å måle, i hepatisk vev, uttrykking av gener involvert i lipid- og/eller glucidmetabolisme og i energiomsetning. Hvert nivå av genuttrykking normaliseres ved hensyn til ekspresjonsnivået av referansegenet 36B4.
Induksjonsfaktoren, det vil si forholdet mellom det relative signal (indusert av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen) og gjennomsnittet av de relative verdier oppnådd med kontrollgruppen, beregnes. Jo høyere induksjonsfaktoren er jo mer fremmer forbindelsen hepatisk genuttrykking. Det finale resultat representeres som gjennomsnitt av induksjonsverdiene oppnådd med hver eksperimentgruppe.
Figur 2-6: Ekspresjon av PDK4 (Pyruvat Dehydrogenase Kinase, isoform 4) i hepatisk vev på E2/E2 mus etter 8 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 5, 10 og 50 mpk
Figur 2-7: Ekspresjon av ApoCIII (Apolipoprotein C3) i hepatisk vev på E2/E2 – mus etter 8 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 5, 10 og 50 mpk.
Figur 3-1 til 3-5: In vivo evaluering, i C57BI6 – mus, på kroppsvektegenskaper, hypolipidemiske egenskaper, og egenskaper som stimulerer syntese av HDL kolesterol av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Effekten av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen evalueres in vivo i C57BI6 – mus ved å måle kroppsvektevaluering, plasma HDL kolesterol og triglyseridnivåer, etter 14 dager av en per os behandling med forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen. Disse parametere sammenlignes med de som oppnås med kontrolldyr (de som ikke ble behandlet med forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen): og den målte forskjell viser effekten av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen har på kroppsvekt, og viser deres hypolipidemiske effekt.
Figur 3-1: Kroppsvektøkning etter 14 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 3, 10 og 30 mpk.
Figur 3-2: Plasma HDL kolesterolnivåer etter 14 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 3, 10 og 30 mpk.
Figur 3-3: Plasma triglyseridnivåer etter 14 dagers behandling med forbindelse 1, administrert til 3, 10 og 30 mpk.
Effektiviteten av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen vurderes også ved å måle, i hepatisk vev, uttrykking av genene involvert i lipidmetabolismen. Hvert nivå av genuttrykkingen normaliseres med hensyn til ekspresjonsnivåer av referansegenet 36B4. Induksjonsfaktoren beregnes deretter. Jo høyere induksjonsfaktoren er jo mer fremmer forbindelsen hepatisk genuttrykking. Det finale resultat representeres som gjennomsnitt av induksjonsverdiene oppnådd med hver eksperimentgruppe.
Figur 3-4: Ekspresjon av PDK4 i hepatisk vev av C57BI6-mus, etter 14 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 3, 10 og 30 mpk.
Figur 3-5: Ekspresjon av ApoCIII i hepatisk vev i C57BI6-mus, etter 14 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 3, 10 og 30 mpk.
Figurer 4-1 til 4-9: In vivo evaluering, i db/db-mus, av kroppsvektegenskaper, av antidiabetiske egenskaper, hypolipidemiske egenskaper og egenskaper som stimulerer syntese av HDL kolesterol av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Effekten av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen evalueres in vivo på db/dbmus ved kroppsvektevaluering, glukosenivå, insulinnivå, plasma totalkolesterol- og triglyseridnivåer, og ved å analysere fordeling av kolesterol i forskjellige plasma lipoproteinfraksjoner, etter 28 dager av en per os behandling med forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen. Disse parametere sammenlignes til de som oppnås ved kontrolldyrene (dyr som ikke ble behandlet med forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen): og den målte forskjell viser effekten av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen har for kroppsvekt, insulinresistens, og viser deres hypolipidemiske effekt.
Figur 4-1: kroppsvektøkning etter 28 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 50 mpk;
Figur 4-2: Glycemia etter 28 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 50 mpk.
Figur 4-3: Insulemia etter 28 dagers behandling med forbindelse 1, administrert ved 50 mpk.
Figur 4-4: Plasma kolesterolnivåer etter 14 dagers behandling med forbindelse 1 og forbindelse 3, administrert ved 50 mpk.
Figur 4-5: Fordeling av kolesterol blant forskjellige plasma lipoproteinfraksjoner etter 28 dagers behandling med forbindelse 1 og forbindelse 3, administrert ved 50 mpk. Figur 4-6: Plasma triglyseridnivåer etter 28 dagers behandling med forbindelse 1 og forbindelse 3, administrert ved 50 mpk.
Figur 4-7: Nivåer av frie fettsyrer i plasma etter 28 dagers behandling med forbindelse 1 og forbindelse 3, administrert ved 50 mpk.
Effektiviteten av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen evalueres også ved å måle, i hepatisk og muskulært (skjelettvev), uttrykkingen av genene involvert i lipid og/eller glucidmetabolismen og i energiomsetning. Hvert nivå av genekspressjon mobiliseres med hensyn til ekspresjonsnivåer av referansegenet 36B4 i hepatisk vev, eller med hensyn til ekspresjonsnivået av referansegenet 18S i gastronemius skjellettmuskel. Induksjonsfaktoren, det vil si forholdet mellom det relative signal (indusert av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen) og gjennomsnittet av de relative verdier oppnådd med kontrollgruppen, beregnes deretter. Jo høyere induksjonfaktoren er i større grad hemmer forbindelsen genuttrykking. Det finale resultat representeres som gjennomsnitt av induksjonsverdiene oppnådd med hver eksperimentgruppe.
Figur 4-8: Ekspresjon av PDK4 i hepatisk vev i db/db-mus, etter 28 dagers behandling med forbindelse 1 og forbindelse 3, administrert ved 50 mpk.
Figur 4-9: Ekspresjon av UCP2 (avkopling av protein 2) i skjellettmuskelvev i db/dbmus, etter 28 dagers behandling med forbindelse 1 og forbindelse 3, administrert ved 50 mpk.
Figur 5: In vitro evaluering av anti-inflammatoriske egenskaper av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen ved å måle sekresjon av MCP1 av monocytter, behandlet med forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen og stimulert med PMA.
De anti-inflammatoriske effekter av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen evalueres ved å måle sekresjon av MCP1 (monocytt kjemotaktisk protein 1) av THP1-monocytter behandlet i 24 timer med forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen og samtidig stimulert med PMA (Forbol 12-myristat 13-acetat, som fremmer en inflammatorisk respons i celler og deres differensiering til makrofager). Jo mindre MCP-1 som utskilles jo mer inhiberer forbindelsen ifølge oppfinnelsen den inflammatoriske reaksjon.
STATISTISKE ANALYSER
De statistiske studier består av en Student’s t-test (°/°°/°°°) og/eller en univariat ANOVA analyse av varians, etterfulgt av en Tukey-test (*/**/***). Resultatene sammenlignes til en kontrollgruppe i samsvar med verdien av parameter p: °/* : p<0,05; °°/**: p<0,01; °°°/***: p<0,001.
EKSEMPLER.
Klassiske reagenser og katalysatorer er kommersielt tilgjengelige (Aldrich, AlfaAesar, Acros, Fluka or Lancaster).
Kjernemagnetiske resonans spekter av proton (NMR<1>H) ble målt på en Bruker AC300P spektrometer. Kjemiske sjikt ble uttrykt i ppm (deler per million) og splitting av NMR-signalene ble beskrevet med de vanlige forkortelser.
Eksempel 1: Generell prosedyre for syntese av forbindelser
De fleste av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen ble oppnådd spesifikt ved reduksjon, ved å følge en av prosedyrene nevnt nedenfor, ved anvendelse av forbindelsene gjort krav på og beskrevet i US2005176808 patent.
De andre forbindelsene ble enkelt oppnådd ved å følge tilsvarende godt kjente fremstillingsmetoder som er tilgjengelig for den fagkyndige innen feltet.
Generell prosedyre A: reduksjon av difenylpropen-2-oner med trietylsilan.
Til en løsning av difenylpropan-2-on i diklormetan ble det tilsatt trietylsilan og deretter trifluoreddiksyre dråpe for dråpe (7,5 ekvivalenter). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur, og reaksjonsoppfølging ble utført med tynnsjikt kromatografi. Reaksjonsblandingen ble vasket med vann, det vandige sjikt ble ekstrahert med diklormetan. De kombinerte organiske sjikt ble tørket over magnesiumsulfat, og konsentrert in vacuo. Resten ble kolonnekromatografert (preparativ HPLC, lichrospher (Merck) RP1812µm 100Å, kolonne: 25*250 mm).
Generell prosedyre B: Reduksjon av difenylpropen-2-oner med tetraklorsilan.
Til en løsning av difenylpropan-2-on i acetonitril ble det tilsatt natriumjodid og deretter tetraklorsilan dråpe for dråpe. Reaksjonsblandingen omrøres ved romtemperatur, og reaksjonsopparbeiding ble utført med tynnsjikt kromatografi. Etter 30 minutter til 2 timer ble blandingen partisjonert mellom kloroform og vann. Det vandige sjikt ble ekstrahert med kloroform. De kombinerte organiske sjikt ble tørket over natriumsulfitt, deretter tørket over magnesiumsulfat og konsentrert in vacuo. Resten ble kolonnekromatografert (preparativ HPLC, lichrospher (Merck) RP1812µm 100Å, kolonne: 25*250 mm).
Generell prosedyre C: Reduksjon av difenylpropen-2-oner med palladium på karbon.
Til en løsning av difenylpropen-2-on i etanol ble det tilsatt en katalytisk mengde av palladium på karbon (10 %). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur under nitrogen ved normalt trykk. Katalysatoren ble filtrert, filtratet ble konsentrert in vacuo. Resten ble kolonnekromatografert.
Generell prosedyre D: Alkoholsyntese.
Til en løsning av difenylpropan-3-on i etanol ble det tilsatt natriumborhydrid, reaksjonsblandingen ble omrørt i 16 timer ved 50 °C (122 °F). Etter nedkjøling ble reaksjonsblandingen hydrolysert og konsentrert in vacuo. Resten ble partisjonert mellom diklormetan og fortynnet saltsyreløsning. Det organiske sjikt ble vasket med vann, tørket over magnesiumsulfat, og konsentrert in vacuo. Resten ble kolonnekromatografert (Preparativ HPLC, lichrospher (Merck) RP1812µm 100Å, kolonne: 25*250 mm).
Generell prosedyre E: Syntese av eter.
En løsning av ifenylpropan-3-ol i en 1/3:2/3 vann/alkohol-blanding i nærvær av en katalytisk mengde av trifluoreddiksyre ble omrørt i 16 timer ved 60 °C. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert in vacuo. Resten ble kolonnekromatografert (Preparative HPLC, lichrospher (Merck) RP1812µm 100Å, kolonne: 25*250 mm).
Generell prosedyre F: Syntese ved anvendelse av oksimer og oksimetere. Til en løsning av difenylpropan-3-on i pyridin ble det tilsatt O-alkylhydroksylamin hydroklorid. Etter 16 timers refluks ble reaksjonsblandingen konsentrert in vacuo. Resten ble kolonnekromatografert.
Eksempel 2: Syntese av forbindelser
Forbindelse 1 ifølge oppfinnelsen: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetoksy)fenyl]-3-okso-propyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Denne forbindelse ble fremstilt ved å følge generell prosedyre B, ved anvendelse av 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetoksy)fenyl]-3-okso-prop-2-enyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre, 15 ekvivalentmengder av natriumjodid og 15 ekvivalentmengder tetraklorsilan;
Utseende: hvitt faststoff; F= 64-66 °C.
NMR<1>H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,52 (s, 6H), 2,22 (s, 6H), 2,96 (t, 2H, J=7,51 Hz), 3,26 (t, 2H, J=7,51Hz), 6,87 (s, 2H), 7,28 (d, 2H, J=8,61Hz), 8,01 (d, 2H, J=8,61Hz).
MS(ES-MS): 423,3 (M-1).
Forbindelse 2 ifølge oppfinnelsen: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetyltio)fenyl]-3-okso-propyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Denne forbindelse ble fremstilt ved å følge generell prosedyre A ved anvendelse av 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetyltio)fenyl]-3-okso-prop-2-enyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre og en ekvivalent mengde trietylsilan;
Utseende: hvitt faststoff; F=83-85 °C.
NMR<1>H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,52 (s, 6H), 2,23 (s, 6H), 2,97 (t, 2H, J=7,59Hz), 3,29 (t, 2H, J=7,59Hz), 6,88 (s, 2H), 7,74 (d, 2H, J=8,46Hz), 7,99 (d, 2H, J=8,46Hz). MS(ES-MS): 439,2 (M-1).
Forbindelse 3 ifølge oppfinnelsen: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-bromfenyl]-3-oksopropyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Denne forbindelse ble fremstilt ved å følge generell prosedyre A, ved anvendelse av 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-bromfenyl]-3-okso-prop-2-enyl]fenoksy]-2-metyl-propanoisk syre og en ekvivalent mengde trietylsilan;
Utseende: hvit viskøs olje.
NMR<1>H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,52 (s, 6H), 2,23 (s, 6H), 2,96 (t, 2H, J=7,60Hz), 3,24 (t, 2H, J=7,02Hz), 6,89 (s, 2H), 7,61 (d, 2H, J=8,46 Hz), 7,83 (d, 2H, J=8,46Hz). MS(ES-MS): 417,2 (M-1)<79>Br og 419,2(M-1)<81>Br.
Forbindelse 4 ifølge oppfinnelsen: 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetyl)fenyl]-3-oksopropyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Denne forbindelse ble fremstilt ved å følge generell prosedyre A, ved anvendelse av 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetyl)fenyl]-3-okso-prop-2-enyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre og en ekvivalent mengde trietylsilan;
Utseende: gulaktig viskøs olje.
NMR<1>H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,52 (s, 6H), 2,23 (s, 6H), 2,98 (t, 2H, J=7,29Hz), 3,30 (t, 2H, J=7,29Hz), 6,88 (s, 2H), 7,72 (d, 2H, J=8,17Hz), 8,06 (d, 2H, J=8,17Hz). MS(ES-MS): 407,4 (M-1).
Forbindelse 5: 2-[4-[3-[4-klor-2-hydroksyfenyl]-3-okso-propyl]fenyltio]-2-metylpropanoisk syre
Denne forbindelse ble fremstilt ved å følge generell prosedyre B, ved anvendelse av 2-[4-[3-[4-klor-2-hydroksyfenyl]-3-okso-prop-2-enyl]fenyltio]-2-metylpropanoisk syre, og 5 ekvivalent mengder av natriumjodid og 5 ekvivalent mengder av tetraklorsilan; Utseende: hvitt faststoff; F=136-137 °C.
NMR<1>H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,52 (s, 6H), 3,08 (t, 2H, J=7,59Hz), 3,30 (t, 2H, J=7,59Hz), 6,87 (dd, 1H, J=1,89 Hz, J=8,79Hz), 7,02 (d, 1H, J=1,89Hz), 7,22 (d, 2H, J=7,89Hz), 7,47 (d, 2H, J=8,19Hz), 7,66 (d, 1H, J=8,46Hz), 12,38 ( s, 1H).
MS(ES-MS): 377,01 (M-1).
Forbindelse 6: 2-[2-metyl-4-[3-[4-(3,3,3-trifluorpropyloksy)fenyl]-3-oksopropyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Denne forbindelse ble fremstilt ved reduksjon ved å følge den generelle prosedyre C, ved anvendelse av 2-(4-(3-(4-hydroksyfenyl)-3-okso-prop-1-enyl)-2-metylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre tertiobutyl ester etterfulgt av O-alkylering av fenolen og syrelysering av tertiobutyl esteren i samsvar med prosedyren beskrevet i US2005/176808.
Utseende: fargeløs viskøs olje.
NMR<1>H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,60 (s, 6H); 2,23 (s, 3H); 2,61-2,70 (m, 2H); 2,95-2,99 (m, 2H); 3,19-3,24 (m, 2H); 4,26 (t, 2H, J=6,5Hz); 6,77 (d, 1H, J=8,5Hz); 6,93 (d, 2H, J=8,9Hz); 6,93-6,98 (m, 1H); 7,06 (d, 1H, J=2,1Hz); 7,95 (d, 2H, J=8,9Hz).
MS(ES-MS): 437,3 (M-1).
Forbindelse 10 ifølge oppfinnelsen: 2-[4-(3-metoksy-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)-2,6-dimetylfenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Denne forbindelse ble fremstilt ved å følge generell prosedyre E, ved anvendelse av en løsning av 2-(4-(3-hydroksy-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)-2,6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre i en 1/3:2/3 blanding av vann/metanol.
Utseende: fargeløs viskøs olje.
NMR<1>H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,46 (s, 6H); 1,91-2,21 (m, 2H); 2,15 (s, 6H); 2,49-2,69 (m, 2H), 3,83 (s, 3H); 4,69 (dd, 1H, J=7,7Hz, J=5,1Hz); 6,78 (s, 2H); 7,19 (d, 2H, J=8,5Hz); 7,36 (d, 2H, J=8,5Hz).
MS(ES-MS): 458,3 (M+NH4<+>), 463,2 (M+Na<+>), 479,2 (M+K<+>).
Forbindelse 12 ifølge oppfinnelsen: 2-(2,6-dimetyl-4-(3-okso-3-(4-(2,2,2-trifluoretoksy)fenyl)propyl)fenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Denne forbindelse ble fremstilt ved reduksjon ved å følge generell prosedyre C, ved anvendelse av 2-(4-(3-(4-hydroksyfenyl)-3-okso-prop-1-enyl)-2.6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre tertiobutyl ester, ved å følge O-alkyleringen av fenolen og syrelyse av tertiobutyl esteren i samsvar med prosedyren beskrevet i US2005176808.
Utseende: hvitt faststoff; F=98-99 °C.
NMR<1>H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,45 (s, 6H); 2,17 (s, 6H); 2,89 (m, 2H); 3,18 (m, 2H); 4,40 (q, 2H, J=8,1Hz); 6,82 (s, 2H); 6,95 (d, 2H, J=9,1Hz); 7,93 (d, 2H, J=9,1Hz).
MS(ES-MS): 437,4 (M-1).
Forbindelse 17: 2-(4-(3-(2-fluor-4-(2,2,2-trifluoretoksy)fenyl)-3-okso-propyl)-2,6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Denne forbindelse ble fremstilt ved reduksjon ved å følge generell prosedyre C, ved anvendelse av 2-(4-(3-(2-fluor-4-hydroksyfenyl)-3-okso-prop-1-enyl)-2.6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre tertiobutyl ester, ved å følge O-alkyleringen av fenolen og syrolyse av tertiobutyl esteren i samsvar med patent US2005176808. Utseende: fargeløs viskøs olje.
NMR<1>H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,51 (s, 6H); 2,21 (s, 6H); 2,92 (t, 2H, J=7,6Hz); 3,23 (td, 2H, J=7,6Hz J=3,1Hz); 6,70 (dd, J=8,7Hz J=2,3Hz); 6,81 (dd, J=12,6Hz J=2,3Hz); 6,86 (s); 7,91 (t, 1H, J=8,7Hz).
MS(MALDI-TOF): 479 (M+Na<+>).
Forbindelse 30 ifølge oppfinnelsen: 2-[4-(3-hydroksy-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)-2,6-dimetylfenoksy]-2-metylpropanoisk syre
Denne forbindelse ble fremstilt ved å følge generell prosedyre D, ved anvendelse av 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetyloksy)fenyl]-3-okso-propyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre, og 4 ekvivalentmengder av natriumborhydrid.
Utseende: fargeløs viskøs olje.
NMR<1>H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,46 (s, 6H); 1,94-2,10 (m, 2H); 2,17 (s, 6H); 2,46-2,66 (m, 2H); 4,69 (dd, 1H, J=7,6Hz J=5,5Hz); 6,78 (s, 2H); 7,17 (d, 2H, J=8,3Hz); 7,34 (d, 2H, J=8,3Hz).
MS(ES-MS): 425,3 (M-1).
Forbindelse 33: 2-(4-(3-(metoksyimino)-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)-2,6-dimetylfenoksy)-2-metylpropanoisk syre
Denne forbindelse ble fremstilt ved å følge generell prosedyre F, ved anvendelse av 2-[2,6-dimetyl-4-[3-[4-(trifluormetoksy)fenyl]-3-okso-propyl]fenoksy]-2-metylpropanoisk syre.
Utseende: gulaktig viskøs olje.
NMR<1>H (300 MHz, CDCl3, δ i ppm): 1,49 (s, 6H), 2,21 (s, 6H), 2,71-2,77 (m, 2H), 2,95-3,01 (m, 2H), 4,01 (s, 3H), 6,82 (s, 2H), 7,17 (d, 2H, J=8,7Hz), 7,59 (d, 2H, J=8,7Hz).
MS(ES-QTOF): 476 (M+Na<+>).
Forbindelse 35 ifølge oppfinnelsen: 2-(2,6-dimetyl-4-(3-okso-3-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propyl)fenoksy)-2-metylpropanoisk syre tertiobutyl ester
Denne forbindelse ble fremstilt ved reduksjon ved å følge generell prosedyre C, ved anvendelse av 3-(4-hydroksy-3,5-dimetylfenyl)-1-(4-(trifluormetoksy)fenyl)propan-1-one, ved å følge O-alkyleringen av fenolen og syrolyse av tertiobutyl esteren i samsvar med US2005176808.
Utseende: fargeløs viskøs olje.
NMR<1>H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,42 (s, 6H); 1,51 (s, 9H); 2,21 (s, 6H); 2,94 (t, 2H, J=7,9Hz); 3,25 (t, 2H, J=7,9Hz); 6,82 (s, 2H); 7,28 (d, 2H, J=9,1Hz); 8,01 (d, 2H, J=9,1Hz).
De andre forbindelsene ble oppnådd ved å følge prosedyrer tilsvarende til prosedyrer A til F, og er enkle å implementere for den fagkyndige innen feltet.
Eksempel 3: In vitro evaluering av PPAR aktiverende egenskaper av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
PPAR-aktiverende egenskaper av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen evalueres in vitro.
Prinsipp.
Aktiveringen av PPARer evalueres in vitro ved anvendelse av nyrefibroblastingen fra ape (COS-7), ved å måle transkripsjonsaktivitet av chimeraer fremstilt av DNA-bindende domene av Gal4 transkripsjons faktor av gjær og bindingsdomenet til liganden på forskjellige PPARer. Forbindelsen testes i doseringer på mellom 10<-7>og 100 µM på Gal4-PPAR α, γ og δ chimeraer.
Protokoll.
Dyrkning av celler.
COS-7-cellene var fra ATCC (American type culture collection) og ble dyrket i DMEM (Dulbecco's modified eagle's medium) medium tilsatt 10 % (vol/vol) føtalt kalveserum, 100U/ml penicillin (Gibco, Paisley, UK) og 2mM L-Glutamin (Gibco, Paisley, UK). Cellene inkuberes ved 37 °C i en fuktig atmosfære inneholdende 5 % CO2.
Beskrivelse av plasmidene anvendt i transfeksjon.
Plasmidene Gal4(RE)_TkpGL3, pGal4-hPPAR α, pGal4-hPPAR γ, pGal4-hPPAR δ og pGal4- Φ har blitt beskrevet i litteraturen (Raspe E et al., 1999). Konstruktene pGal4-hPPAR α, pGal4-hPPAR γ og pGal4-hPPAR δ ble oppnådd med kloning, i pGal4- Φ vektoren, av DNA-fragmenter mangfoldiggjort med PCR og korresponderende til DEF-domenene av humane PPAR α, PPAR γ og PPAR δ nukleære reseptorer.
Transfeksjon.
COS-7-cellene i suspensjon transfekteres med 150 ng DNA per brønn, med en pGal4-PPAR / Gal4(RE)_TkpGL3 – forhold på 1/10, i nærvær av 10 % føtalt kalveserum. Cellene utsåes i 96-brønns plater (4 x 10<4>celler/brønn), og inkuberes deretter i 24 timer ved 37 °C. Aktivering med testforbindelsene utføres i 24 timer ved 37 °C i et medium uten serum. Ved slutten av eksperimentet lyseres cellene og lusiferaseaktivitet bestemmes ved anvendelse av Steady-Lite<TM>HTS (Perkin Elmer) eller Steady Glow Luciferase (Promega) i samsvar med leverandørens anbefalinger.
Resultater.
Forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen ble testet på 3 PPAR isoformer. Resultatene som ble oppnådd med forbindelsene 1, 2, 3, 4, 5 og 7 er angitt i detaljer i figurene (1-1) til (1-18).
Oppfinnerne har vist signifikant og doseavhengig stigning av lusiferaseaktivitet i celler transfektert med plasmidene pGal4-hPPAR og behandlet med forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen.
Uventet, de presenterte eksperimentelle data viser at, in vitro, så binder forbindelsen ifølge oppfinnelsen til PPARer in vitro og induserer en aktivering av transkripsjonsaktiviteten.
Eksempel 4: In vivo evaluering, i ApoE2/E2 – mus, av kroppsvektegenskaper, av hypolipidemiske egenskaper, og egenskaper som stimulerer syntese av HDL kolesterol av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Prinsipp.
Egenskapene som påvirker kroppsvekt og hypolipidemiske egenskaper av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen evalueres in vivo ved å måle kroppsvekt og plasmalipider, og ved å analysere genuttrykking av målgenet av PPAer, etter en behandling av dyslipidemisk E2/E2 – mus med forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Den murine modell anvendt er ApoE2/E2 – mus, en transgen mus, som har den humane apolipoprotein E isoform E2 (Sullivan PM et al., 1998). I mennesker foreligger dette apolipoprotein, en bestanddel av lav og svært lav tetthet lipoproteiner (LDL-VLDL), i tre isoformer E2, E3 og E4. E2 – formen presenterer en mutasjon som påvirker aminosyren ved posisjon 158, som betydelig svekker affiniteten av dett protein for reseptorene til LDL-reseptorer. Således, VLDL-klarning er omtrent ikkeeksisterende. En akkumulering av lav tetthet lipoprotein foregår dermed samtidig med en blandet hyperlipidemia kjent som type III (høy kolesterol og triglyseridnivåer).
PPAR α regulerer uttrykking av gener involvert i transport av lipider (apolipoproteiner så som Apo AI, Apo AII og Apo CIII, membrantransportere så som FAT) og katabolismen av lipider (ACO, CPT-I eller CPT-II, fettsyre β-oksideringsenzymer).
Således, en behandling med PPAR α -aktivatorer, i mennesker og likeledes i gnagere, fører til en reduksjon i nivåer av sirkulerende triglyserider. Måling av plasmalipidgrad, etter en behandling med forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen, muliggjør evaluering av PPAR-agonist egenskapene og den hypolipidemiske effekt av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Behandling med PPAR-aktivatorer, i mennesker og likeledes i gnagere, fører også noen ganger til en forhøyning av plasma HDL-kolesterolnivået. Måling av plasma HDL-kolesterolgrad, muliggjør derfor for å vise den stimulerende effekt av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen i forhold til HDL-kolesterol syntese.
Agonistegenskapene av PPAR α som tidligere er målt in vitro bør, i leveren føre til en overuttrykking av målgenene som er direkte under kontroll av PPAR α. Genene vi har studert i dette eksperiment er Apo CIII (et apolipoprotein involvert i lipid metabolisme), og PDK-4 (et enzym involvert i glucid metabolisme). Måling av transkripsjonsaktivitet i PPAR α målgenene, etter behandling med forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen, muliggjør derfor for evaluering av hypolipidemiske egenskaper av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Protokoll.
Behandling av dyrene.
ApoE2/E2 – transgene mus ble holdt i en 12 timers/12 timer lys/mørke syklus med konstant temperatur på 20 ± 3 °C. Etter en en ukers akklimatiseringsperiode ble musene veiet og delt i grupper på 6 dyr valgt slik at man skulle få en uniform fordeling av kroppsvekt og plasmalipidrater, som er bestemt før eksperimentet. De testete forbindelser ble suspendert i karboksymetylcellulose (Sigma C4888) og administrert intragastrisk ved rørmating, en gang per dag i 8 dager for en utvalgt dosering. Dyrene hadde fri tilgang til ernæring og vann (standard diett). Prøver av ernæring og vektøkning registreres i løpet av eksperimentet. Ved slutten av eksperimentene ble dyrene anestetisert etter en 4 timers faste, og en blodprøve ble tatt ved anvendelse av (EDTA) antikoagulant, og deretter ble musene veiet og eutanisert. Plasma ble fremstilt ved sentrifugering ved 3000 roteringer/minutt i 20 minutter. Prøvene ble holdt ved 4 °C.
Leverprøver ble fjernet, frosset i væskeformig nitrogen, og deretter holdt ved -80 °C for påfølgende analyser.
Måling av plasmalipider.
Plasmalipidkonsentrasjoner (total kolesterol og triglyserider) måles med enzymatisk dosering (bioMérieux-Lyon-France) i samsvar med leverandørens anbefalinger.
Plasmakolesterol og triglyseridnivåer måles etter 8 dager av en per os behandling med forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen. Disse nivåer sammenlignes med de som er oppnådd med kontrolldyr (ingen behandling med forbindelser i samsvar med oppfinnelsen). Den målte forskjell viser den hypolipidemiske effekt av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Måling av HDL-kolesterol
Lavtetthet lipoproteiner (VLDL og LDL) presipiteres av Phosphotungstat. Presipitatet elimineres ved sentrifugering. HDL-kolesterol foreliggende i supernatanten måles med enzymatiske doseringer (bioMérieux-Lyon-France) i samsvar med leverandørens anbefalinger.
Genuttrykkingsanalyser med kvantitativ RT-PCR Total RNA ekstraheres fra leverfragmenter ved anvendelse av NucleoSpin<®>96 RNA kit (Macherey Nagel, Hoerdt, France) i samsvar med leverandørens instruksjoner.
1 µg total RNA (kvantifisert ved anvendelse av Ribogreen RNA kvantifiserings kit (Molecular Probes)) blir deretter revers transkribert til komplementært DNA ved hjelp av en 1 timers reaksjon ved 37 °C i et totalt volum på 20 µl inneholdende en 1X buffer (Sigma), 1,5mM DTT, 0,18mM dNTPs (Promega), 200 ng pdN6 (Amersham), 30U RNase inhibitor (Sigma), og 1µl MMLV-RT (Sigma).
De PCR kvantitative eksperimenter ble utført ved anvendelse av MyiQ Single-Color Real-Time PCR Detection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) og ble utført ved anvendelse av iQ SYBR Green Supermix kit i samsvar med leverandørens anbefalinger, i 96-brønns plate i 5 µl fortynnet revers transkripsjonsløsning ved en hybridiseringstemperatur på 55 °C. De spesifikke primerpar av genene som ble studert var som følger:
PDK4: sense primer: 5’-TACTCCACTGCTCCAACACCTG-3’ (SEQ ID NO : 1) og antisense primer 5’-GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-3’ (SEQ ID NO : 2))
ApoCIII: sense primer: 5’-CTCTTGGCTCTCCTGGCATC-3’ (SEQ ID NO: 3) og antisense primer 5’-GCATCCTGGACCGTCTTGGA-3’ (SEQ ID NO: 4).
Mengden fluoressens emittert er direkte proporsjonal til mengden cDNA som foreligger ved starten av reaksjonen og mangfoldiggjort under PCR. For hvert mål som ble studert ble en rekke løsninger utført med suksessive fortynninger av blandingen fremstilt av noen få µl av forskjellige revers transkripsjonsløsninger. De relative ekspresjonsnivåer for hvert mål bestemmes således ved anvendelse av effektivitetskurver oppnådd med punktene relativt til område av PCR-løsningen.
Ekspresjonsnivåene av de aktuelle gener normaliseres deretter med hensyn til et av referansegenene 26B4 (hvis spesifikke primere er: sense primer:
5’-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3’ (SEQ ID NO: 7) og antisense primer: 5’-GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3’ (SEQ ID NO: 8)).
Induksjonsfaktoren, det vil si forholdet mellom det relative signal (indusert av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen) og gjennomsnittet av relative verdier oppnådd med kontrollgruppen, beregnes deretter for hver prøve. Jo høyere induksjonsfaktoren er, jo mer fremmer forbindelsen genuttrykking. Det finale resultat representeres som gjennomsnitt av induksjonsverdier oppnådd med hver eksperimentgruppe.
Resultater
Kroppsvekt
Figur 2-1 sammenligner dyrenes vektøkning etter 8 dagers behandling med forbindelse 1 administrert ved 5, 10 og 50 mpk i forhold til kontrolldyr vektsøkning. Uventet, et vekttap ble målt i dyrene behandlet med forbindelse 1.
Måling av plasmalipider.
Figurer 2-2 og 2-3 sammenligner plasma totalkolesterol og HDL-kolesterolnivåer etter 8 dagers behandling med forbindelse 1 ved 5, 10 og 50 mpk med tilsvarende oppnådd for kontrolldyr. Uventet, sirkulerende nivå av totalkolesterol ble signifikant redusert og HDL-kolesterolnivåer ble signifikant øket med behandlingen.
Figurer 2-4 og 2-5 sammenligner plasmatriglyserid og frie fettsyrenivåer etter 8 dagers behandling med forbindelse 1 administrert ved 5, 10 og 50 mpk med de som ble oppnådd for kontrolldyr. Uventet, nivåene av sirkulerende triglyserider og frie fettsyrer har blitt redusert signifikant med behandlingen.
Genuttrykkingsanalyse med kvantitativ RT-PCR
Oppfinnerne har også vist at forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen er, in vivo, regulatorer av PPARer målgenuttrykking. Resultatene presentert i figurer 2-6 og 2-7 viser at forbindelse 1 administrert ved 5, 10 og 50 mpk i 8 dager til E2/E2-mus, induserer en signifikant økning i hepatisk uttrykking av genet som koder for PDK4 (figur 2-6) og en reduksjon i hepatisk uttrykking av genet som koder for ApoCIII (figur 2-7). Alle kodegenene for enzymer spesifikt involvert i lipid- og glysidmetabolismen og det faktum at deres ekspresjon er modulert av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen forsterker ideen om at disse forbindelser presenterer et stort potensiale for behandling av metabolske patologier.
Konklusjon.
Uventet, de presenterte eksperimentelle data viser at forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen, in vivo, induserer kroppsvekttap og stimulerer HDL-kolesterolsyntese, og likeledes har hypolipidemisk effekt (reduksjon av plasmanivåer av triglyserider og frie fettsyrer). Videre, de presenterte eksperimentelle data viser at forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen modulerer ekspresjon av gener regulert av aktiveringen av PPARer som koder for enzymer spesifikt involvert i lipid- og glysidmetabolismen.
Eksempel 5: In vivo evaluering, i C57BI6-mus, av kroppsvektegenskaper, av hypolipidemiske egenskaper, og egenskaper som stimulerer syntese av HDL-kolesterol av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Prinsipp.
Effektene av forbindelsene i samsvar mede oppfinnelsen på kroppsvekt og deres hypolipidemiske egenskaper evalueres in vivo ved å måle kroppsvekt og plasmatiske lipider, og ved å analysere genuttrykking av PPARene målgener, etter en behandling av dyslipidemisk C57B16-mus med forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Protokoll.
Behandling av dyrene.
Hunnkjønn C57BI6-mus ble holdt på en 12 timer/12 timers lys/mørke syklus ved kontakt temperatur av 20 ± 3 °C. Etter en en ukers klimatiseringsperiode ble musene veiet og delt i grupper på 6 dyr utvalgt slik at fordelingen av kroppsvekt og plasmalipidnivå, bestemt før eksperimentet, var uniform. Testforbindelsene ble suspendert i karboksymetylcellulose (Sigma C4888), og administrert til dyrene med gastrisk gavage, en gang per dag i 14 dager i de valgte doseringer. Dyrene hadde fri aksess til ernæring og vann (standard diett). Inntak av ernæring og vekstøkning registreres i løpet av eksperimentet. Ved slutten av eksperimentet, etter en 4 timers faste, ble dyrene anestetisert og en blodprøve ble tatt på antikoagulant (EDTA). Deretter ble musene veiet og eutanisert. Plasma ble separert ved sentrifugering ved 3000 rotasjoner/minutt i 20 minutter. Prøvene ble holdt ved 4 °C. Hepatiske vevsprøver ble fjernet, frosset i væskeformig nitrogen, og deretter holdt ved -80 °C for senere analyser.
Måling av HDL-kolesterol.
Lavtetthet lipoproteiner (VLDL og LDL) presipiteres med Phosphotungstate.
Presipitatet elimineres ved sentrifugering. HDL-kolesterol foreliggende i supernatanten måles med enzymatiske analyser (bioMérieux-Lyon-France) i samsvar med leverandørens anbefalinger.
Måling av plasma triglyserider.
Konsentrasjon av plasma triglyserid ble målt ved enzymatisk analyse (bioMérieux-Lyon-France) i samsvar med leverandørens anbefalinger.
Genuttrykkingsanalyser med kvantitativ RT-PCR
Total RNA ble ekstrahert fra leverfragmenter ved anvendelse av NucleoSpin<®>96 RNA kit (Macherey Nagel, Hoerdt, France) i samsvar med leverandørens instruksjoner.
1 µg total RNA (kvantifisert med spektrofotometri) ble deretter revers transkribert til cDNA ved hjelp av 1 times reaksjon ved 37 °C i et totalt volum av 20 µl inneholdende 1X buffer (Sigma), 1,5mM DTT, 0,18mM dNTPer (Promega), 200 ng pdN6 (Amersham), 30U RNase inhibitor (Sigma), og 1µl MMLV-RT (Sigma).
PCR kvantitative eksperimenter ble utført ved anvendelse av MyiQ Single-Color Real-Time PCR Detection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) og ble utført ved anvendelse av iQ SYBR Green Supermix kit i samsvar med leverandørens anbefalinger, i 96-brønns plater i 5 µl av en fortynnet revers transkripsjonsløsning og ved en hybridiseringstemperatur av 55 °C. De spesifikke primerpar av genene som ble studert som ble anvendt var:
PDK4: sense primer: 5’-TACTCCACTGCTCCAACACCTG-3’ (SEQ ID NO: 1) og antisense primer 5’-GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-3’ (SEQ ID NO: 2))
ApoCIII: sense primer: 5’-CTCTTGGCTCTCCTGGCATC-3’ (SEQ ID NO: 3) og antisense primer 5’-GCATCCTGGACCGTCTTGGA-3’ (SEQ ID NO: 4).
Mengden av fluoressens emittert av direkte proporsjonal til mengden av cDNA som er tilstede ved starten av reaksjonen og mangfoldiggjort under PCRer. Fro hvert mål som studeres utføres en rekke løsninger med suksessive fortynninger av en blanding fremstilt av noen få µl av forskjellige revers transkripsjonsløsninger. De relative ekspresjonsnivåer av hvert mål bestemmes således ved anvendelse av effektivitetskurver oppnådd med punktene relativt til området.
Ekspresjonsnivåene av de aktuelle gener ble deretter normalisert med hensyn til ekspresjonsnivået av referansegenet 36B4 (hvis spesifikke primere er: sense primer: 5’-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3’ (SEQ ID NO: 7) og antisense primer: 5’-GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3’ (SEQ ID NO: 8)).
Induksjonsfaktor relativ for hver prøve ble deretter beregnet. Jo høyere induksjonsfaktoren er jo mer fremmer forbindelsen i en ekspresjon.
Det finale resultat representeres i gjennomsnitt av induksjonsverdiene oppnådd for hver eksperimentgruppe.
Resultater.
Kroppsvekt
Figur 3-1 sammenligner dyrenes vektøkning etter 14 dagers behandling med forbindelse 1 administrert ved 3, 10 og 30 mpk i forhold til kontrolldyrenes vektøkning. Uventet, et vekttap ble målt i dyrene som ble behandlet med forbindelse 1.
Måling av plasmalipider.
Figur 3-2 sammenligner nivåene av plasma HDL-kolesterol etter 14 dagers behandling med forbindelse 1 administrert ved 3, 10 og 30 mpk ved nivåene oppnådd med kontrollen. Uventet, nivåene av sirkulerende HDL-kolesterol var svært signifikant øket på grunn av behandlingen.
Figur 3-3 sammenligner plasma triglyseridnivåer etter 14 dagers behandling med forbindelse 1 administrert ved 3, 10 og 30 mpk ved nivåene oppnådd med kontrollen. Uventet, nivåene av sirkulerende triglyserider var svært signifikant redusert på grunn av behandlingen.
Genetisk ekspresjonsanalyse med kvantitativ RT-PCR
Oppfinnerne har også vist at forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen er, in vivo, regulatorer av PPARer målgenekspresjon. Resultatene presentert i figurer 3-4 og 3-5 viser at forbindelse 1, administrert ved 3, 10 og 30 mpk i 14 dager til C57BI6-mus, induserer en signifikant økning i hepatisk ekspresjon av genene som koder for PDK4 (figur 3-4) og en reduksjon i hepatisk ekspresjon av genet som koder for ApoCIII (figur 3-5). Alle genene som koder for enzymene spesifikt involvert i lipid- og glysidmetabolisme, og det faktum at deres ekspresjon moduleres av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen, forsterker ideen om at forbindelsene har et stort potensiale for behandling av metabolske patologier.
Konklusjon.
Uventet, de eksperimentelle data som presenteres viser at forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen, in vivo, induserer et kroppsvekttap, stimulerer HDL-kolesterol syntese og har en hypolipidemisk effekt (reduksjon av plasmanivåer av triglyserider). Videre, de eksperimentelle data presentert viser at forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen modulerer ekspresjon av gener som er regulert av aktivering av PPARer som koder for enzymer som spesifikt er involvert i lipid- og karbohydratmetabolisme.
Eksempel 6: In vivo evaluering, i db/db-mus, på kroppsvektegenskaper, antidiabetiske egenskaper, hypolipidemiske egenskaper, og egenskaper som stimulerer syntese av HDL-kolesterol av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Prinsipp.
Effektene av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen på kroppsvekt, insulinresistens og hypolipidemiske egenskaper av disse forbindelser evalueres in vivo ved å måle kroppsvekt og nivåene av plasma glukose og insulin, av plasmalipider, og ved å analysere fordeling av kolesterol i forskjellige plasmalipoproteinfraksjoner, og genuttrykking av PPARer målgen etter en per os behandling av db/db-mus med forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Protokoll.
Behandling av dyrene.
Hunnkjønn db/db-mus ble holdt i en 12 timer/12 timer lys/mørke syklus ved en konstant temperatur på 20 ± 3 °C. Etter en ukes akklimatiseringsperiode ble musene veiet og delt i grupper på 8 dyr valgt slik at de får en uniform fordeling med hensyn til deres kroppsvekt og deres plasmalipidnivåer, bestemt før eksperimentet. De testete forbindelser ble suspendert i karboksymetylcellulose (Sigma C4888) og administrert intragastrisk rørmating en gang per dag i 28 dager i den utvalgte dosering. Dyrene hadde fri aksess til ernæring og vann (standard diett). Måling av ernæring og vektøkning registreres i løpet av eksperimentet. Ved slutten av eksperimentet ble dyrene anestetisert etter en 4 timers faste, og en blodprøve ble tatt ved anvendelse av (EDTA) antikoagulant, og deretter ble musene veid og eutanisert. Plasma ble separert ved sentrifugering ved 3000 rotasjoner/minutt i 20 minutter. Prøvene ble holdt ved 4 °C. Det hepatiske vev og skjellettmuskelvevsprøver ble frosset umiddelbart i væskeforming nitrogen, og deretter konservert ved -80 °C for senere analyser.
Måling av plasmaglysemia og insulinemia.
Murin plasmaglukose måles i samsvar med en enzym-kalorimetrisk metode ved anvendelse av Glukose RTU kit (Biomérieux). Glukose overføres til glukonisk syre under virkning av glukoseoksidase, og reaksjonen frigjør hydrogenperoksid.
Hydrogenperoksid måles i samsvar med Trinder reaksjonen, som under virkning av en peroksidase og i nærvær av femol og amino-4-antipyrin, produserer vann og farget produkt, quinoneimin. Fargeintensitet, på grunn av quinoneimin, er proporsjonal til mengden av glukose som er tilstede i prøven.
Murin insulin måles ved anvendelse av ELISA metoden (ved anvendelse av INSKR020 kitt fra Crystal chem.) En mikroplate belegges med et mus antiinsulin antistoff. Deretter ble det serum som skal analyses for insulin plassert på platen. Et hamster antiinsulin antistoff anvendes for å gjenkjenne komplekset dannet av musinsulin og antiinsulin monoklonalt antistoff. Til slutt blir et anti-marsvin antistoff merket med peroksidase tilsatt og binder til marsvin antiinsulin antistoff. Den kollerimetriske reaksjon utføres ved tilsetting av OPD (orto fenyl diamin) enzym substrat. Intensiteten av fargen er proporsjonal til mengden av insulin som er tilstede i prøven.
Måling av plasmalipider.
Plasmalipid konsentrasjoner (total kolesterol og triglyserider) måles ved enzymatiske analyser (bioMérieux-Lyon-France) i samsvar med leverandørens anbefalinger.
Analyser av fordeling av kolesterol til plasma lipoproteinfraksjoner. De forskjellige lipidfraksjoner (VLDL, LDL, HDL) i plasma ble separert ved anvendelse av gelfiltrerings kromatografi. Kolesterolkonsentrasjoner ble deretter målt for hver fraksjon med enzymatisk analyse (bioMérieux-Lyon-France) i samsvar med leverandørens anbefalinger.
Genetisk ekpresjonsanalyser med kvantitativ RT-PCR
Hepatisk vev.
Total RNA ble ekstrahert fra leverfragmenter ved anvendelse av NucleoSpin<®>96 RNA kit (Macherey Nagel, Hoerdt, France) i samsvar med leverandørens instruksjoner.
Skjelettvev.
Total RNA ble ekstrahert fra gastronemius skjelettmuskel fragmenter ved anvendelse av RNeasy<®>Fibrous Tissue kit (Qiagen) i samsvar med leverandørens instruksjoner.
1 µg total RNA (kvantifisert med spektrofotometri) ble deretter revers transkribert til komplementær DNA ved hjelp av en 1 timers reaksjon ved 37 °C i et totalt volum av 20 µl inneholdende 1X buffer (Sigma), 1,5 mM DTT, 0,18 mM dNTPer (Promega), 200 ng pdN6 (Amersham), 30U RNase inhibitor (Sigma) og 1µl MMLV-RT (Sigma).
PCR kvantitative eksperimenter ble utført ved anvendelse av MyiQ Single-Color Real-Time PCR Deteksjons System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) og ble utført ved anvendelse av iQ SYBR Green Supermix kit i samsvar med leverandørens anbefalinger, i 96-brønns plater i 5 µl fortynnet revers transkripsjonsløsning ved en hybridiseringstemperatur på 55 °C. Di spesifikke primerpar av genene som ble studiet som ble anvendt var som følger:
PDK4: sense primer: 5’-TACTCCACTGCTCCAACACCTG-3’ (SEQ ID NO: 1) og antisense primer 5’-GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-3’ (SEQ ID NO: 2))
UCP2: sense primer: 5’-GTCGGAGATACCAGAGCACTGTCG-3’ (SEQ ID NO: 5) og antisense primer 5’-CACATCAACAGGGGAGGCGA-3’ (SEQ ID NO: 6)
Mengden av fluoressens som ble emittert er direkte proporsjonal til mengden av komplementært DNA som foreligger ved starten av reaksjonen og som ble mangfoldiggjort under PCRen. For hvert mål som ble studert ble en rekke løsninger utført med suksessive fortynninger av blandinger av noen få mikroliter av forskjellige revers transkripsjonsløsninger. De relative nivåer av ekspresjon av hvert mål bestemmes således ved anvendelse av effektivitetskurver oppnådd med punktene relativt til området for PCR-løsningen.
Ekspresjonsnivåene av de aktuelle gener normaliseres deretter, i det hepatiske vev, med hensyn til nivå av ekspresjon av referansegenet 36B4 (hvis spesifikke primere er):
sense primer: 5’-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3’ (SEQ ID NO: 7) og antisense primer: 5’-GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3’ (SEQ ID NO: 8)) og, i skjelettmuskelvev, med hensyn til ekspresjonsnivået av referansegenet 36B4 (hvis spesifikke primerer er): 5’-CGGACACGGACAGGATTGACAG-3' (SEQ ID NO: 9) og antisense primer: 5’-AATCTCGGGTGGCTGAACGC-3' (SEQ ID NO: 10)).
Induksjonsfaktoren relativ til hver prøve ble deretter beregnet. Jo høyere induksjonsfaktoren er jo mer fremmer forbindelsen genuttrykking. Det finale resultat representeres som gjennomsnitt av induksjonsverdiene ved hver eksperimentgruppe.
Resultater.
Kroppsvekt
Figur 4-1 sammenligner dyrenes vektøkning etter 28 dagers behandling med forbindelse 1 administrert ved 50 mpk i forhold til kontrolldyrenes vektøkning.
Uventet, et vekttap ble notert i dyrene som ble behandlet med forbindelse 1.
Måling av glysemia og insulinemia.
Figurer 4-2 og 4-3 sammenligner plasmaglukose og insulinnivåer etter 28 dagers behandling med forbindelse 1 administrert ved 50 mpk. Uventet, glysemia og insulinemia er signifikant redusert ved behandlingen.
Måling av plasmalipider.
Figur 4-4 sammenligner totale plasmakolesterolnivåer etter 28 dagers behandling med forbindelse 1 og 3, administrert ved 50 mpk, med nivåene oppnådd fra kontrolldyrene. Uventet, nivåer av totalkolesterol var signifikant øket. Figurer 4-5 viser at denne økning i total plasmakolesterol korresponderer til en signifikant økning i HDL kolesterolfraksjonen indusert av behandlingen av dyrene i forbindelse 1 og 3 ved 50 mpk.
Figurer 4-6 og 4-7 sammenligner plasma triglyserid og frie fettsyrenivåer etter 28 dagers behandling med forbindelse 1 og 3 administrert ved 50 mpk med de som ble oppnådd fra kontrolldyrene. Uventet, nivåene av sirkulerende triglyserider og frie fettsyrer var signifikant redusert med behandlingen.
Genekspresjonsanalyse med kvantitativ RT-PCR
Oppfinnerne har også vist at forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen er, in vivo, regulatorer av PPARer målgenekspresjon. Resultatene presentert i figurer 4-8 og 4-9 viser at forbindelse 1 og 3 administrert ved 50 mpk i 28 dager til db/db-mus, induserer en signifikant økning i hepatisk ekspresjon av genet som koder for PDK4 (figur 4-8) og en reduksjon i ekspresjon i genet som koder for UCP2 (figur 4-9), i skjelettmuskel. Alle genene som koder for enzymer spesifikt involvert i lipid- og glysidmetabolismen og i energiomsetning, og det faktum at deres ekspresjon moduleres av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen, forsterker ideen om at disse forbindelser har et stort potensiale for behandling av metabolske patologier.
Konklusjon.
Uventet, de presenterte eksperimentelle data viser at forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen, in vivo, induserer et kroppsvekttap og en forbedring i insulinsensibilitet, stimulerer HDL-kolesterolsyntese, og har en hypolipidemisk effekt (fører til en reduksjon av nivåer av plasma triglyserider). Videre, i beskrevne eksperimentelle data viser at forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen modulerer ekspresjon av gener, regulert av aktivering av PPARer og koder for enzymer spesifikt involvert i lipid- og glysidmetabolismen og i energiomsetning.
Eksempel 7: In vitro evaluering av antiinflammatoriske egenskaper av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen.
Prinsipp.
De antiinflammatoriske effekter av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen ble evaluert ved å måle sekresjon av MCP1 (Monocytt kjemotaktisk protein-1) av monocytter behandlet i 24 timer med forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen og samtidig stimulert med PMA (Forbol 12-myristat 13-acetat, som fremmer en immunrespons i celler og deres differensiering til makrofager). Jo mindre MCP1-1 som utskilles, jo mer inhiberer forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen den inflammatoriske reaksjon.
Protokoll
Dyrkning og behandling av THP-1 celler.
THP-1 humane monocyttlinje (ATCC kilde) dyrkes i et RPMI1640-medium med 25mM Hepes (Gibco; 42401-018), 1 % glutamin (Gibco; 25030-24) 1 % penicillin/streptomycin (Biochrom AG; A 2213), og 10 % dekomplementert føtalt kalveserum (SVF. Gibco; 26050-088).
Cellene ble utsådd i 24-brønns plater (Primaria BD Falcon) med en tetthet på 870,000 celler/brønn ble deretter inkubert ved 37 °C og 5 % CO2i 24 timer i dyrkningsmedium inneholdende 0,2 % føtalt kalveserum i nærvær av 5 ng/ml forbol 12-myristat 13-acetat (PMA) og 1µM av forbindelse 3 i samsvar med oppfinnelsen. Forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen oppløses i dimetylsulfoksid (DMSO, Fluka; 41640). Effekten av forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen sammenlignes med effekten av DMSO alene.
Måling av sekresjon av MCP1
Behandlingsmedium gjenvinnes og MCP1-konsentrasjonen måles ved anvendelse av ELISA-kit «Human MCP-1 ELISA Set» (BD OptEIA; 555179) i samsvar med leverandørens anbefalinger.
MCP-1 plasseres på en plate og gjenkjennes av et anti-MCP1 spesifikt antistoff. Dette spesifikke antistoff i seg selv gjenkjennes spesifikt av et andre antistoff koplet med et peroksidaseenzym. Fargereaksjonen fra enzymatisk aktivitet er proporsjonal til mengden av fiksert MCP-1 og kan måles med en spektrofotometisk metode. Et område utføres fra et punkt representativt for en kjent konsentrasjon og fra hvilke MCP-1-konsentrasjonen av hver prøve beregnes.
Induksjonsfaktoren, det vil si forholdet mellom signal indusert av forbindelsen i samsvar med oppfinnelsen og signal indusert av kontrollgruppen, ble deretter beregnet. Jo svakere denne faktor er, jo mer inhiberer forbindelsen sekresjon av MCP-1. Det finale resultat representeres som gjennomsnitt av induksjonsverdiene oppnådd med hver eksperimentgruppe.
Resultater
Oppfinnerne har vist at, i in vivo monocytter, så har forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen en antiinflammatorisk effekt. Resultatene presentert i figur 5 viser at forbindelsen 3 i samsvar med oppfinnelsen, ved 1µM, induserer signifikant reduksjon i MCP-1 utskilt av monocytter.
Konklusjoner.
Uventet, de beskrevne eksperimentelle data viser at forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen har en antiinflammatorisk effekt på monocytter stimulert med PMA.
Generell konklusjon.
Oppfinnerne har vist at forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen fører til tap av kroppsvekt, har hypolipidemiske egenskaper, reduserer nivåene av kolesterol og plasmatiske triglyserider, stimulerer HDL-kolesterol syntese, og har antidiabetiske egenskaper. Videre, oppfinneren har vist at forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen muliggjør en regulering av ekspresjon av gener som koder for enzymer som er spesifikt involvert i lipid- og glysidmetabolisme og i energiomsetning.
Oppfinnerne har også vist at forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen har antiinflammatoriske egenskaper.
Disse resultater, oppnådd in vivo og in vitro, viser det terapeutiske potensiale for forbindelsene i samsvar med oppfinnelsen for behandling av hovedpatologier så som dyslipidemia, type 2 diabetes og obesitet.
BIBLIOGRAPHY
Fox-Tucker J, The Cardiovascular Market Outlook to 2010, BUSINESS INSIGHTS REPORTS, 2005, 1-174
Gross B, et al., Peroxisome Proliferator-Activated Receptor b/d: A novel target for the reduction of atherosclerosis, DRUG DISCOVERY TODAY: THERAPEUTIC STRATEGIES, 2005, 2 (3), 237-243
International Atherosclerosis Society, Harmonised Clinical. Guidelines on Prevention of Atherosclerotic Vascular Disease, 2003,
Kota BP, et al., An overview on biological mechanisms of PPAR, Pharmacol Res, 2005, 51 (2), 85-94
Lefebvre P, et al., Sorting out the roles of PPARalpha in energy metabolism and vascular homeostasis, J Clin Invest, 2006, 116 (3), 571-580
Lehrke M and Lazar MA, The many faces of PPARgamma, Cell, 2005, 123 (6), 993-9
Liu Y and Miller A, Ligands to peroxisome proliferator-activated receptors as therapeutic options for metabolic syndrome, DRUG DISCOVERY TODAY:
THERAPEUTIC STRATEGIES, 2005, 2 (3), 165-169
Mensah M, The Atlas of Heart Disease and Stroke, 2004,
Raspe E, et al., Modulation of rat liver apolipoprotein gene expression and serum lipid levels by tetradecylthioacetic acid (TTA) via PPAR{alpha} activation, J. Lipid Res., 1999, 40 (11), 2099-2110
Sullivan PM, et al., Type III hyperlipoproteinemia and spontaneous atherosclerosis in mice resulting from gene replacement of mouse Apoe with human Apoe*2, J Clin Invest, 1998, 102 (1), 130-5
NO20085338A 2006-06-21 2008-12-19 Substituerte 1,3-difenylpropanderivater, sammensetninger og anvendelser derav NO341866B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0605540A FR2902789A1 (fr) 2006-06-21 2006-06-21 Derives de 1,3-diphenylpropane substitues, preparations et utilisations
PCT/EP2007/056225 WO2007147880A1 (fr) 2006-06-21 2007-06-21 Derives de 1,3-diphenylpropane substitues, preparations et utilisations

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20085338L NO20085338L (no) 2009-03-23
NO341866B1 true NO341866B1 (no) 2018-02-12

Family

ID=37845179

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20085338A NO341866B1 (no) 2006-06-21 2008-12-19 Substituerte 1,3-difenylpropanderivater, sammensetninger og anvendelser derav

Country Status (22)

Country Link
US (2) US8258182B2 (no)
EP (2) EP2046716B1 (no)
JP (2) JP5350230B2 (no)
KR (2) KR101416257B1 (no)
CN (3) CN104193660B (no)
AU (2) AU2007262938B2 (no)
BR (1) BRPI0713600B1 (no)
CA (2) CA2655744C (no)
CY (2) CY1115082T1 (no)
DK (2) DK2046715T5 (no)
EA (1) EA018437B1 (no)
ES (2) ES2466268T3 (no)
FR (1) FR2902789A1 (no)
IL (2) IL196071A0 (no)
MX (1) MX2008016239A (no)
NO (1) NO341866B1 (no)
NZ (1) NZ573674A (no)
PL (2) PL2046715T3 (no)
PT (2) PT2046715E (no)
SI (2) SI2046715T1 (no)
WO (2) WO2007147880A1 (no)
ZA (1) ZA200810709B (no)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2902789A1 (fr) * 2006-06-21 2007-12-28 Genfit Sa Derives de 1,3-diphenylpropane substitues, preparations et utilisations
FR2917084B1 (fr) * 2007-06-05 2009-07-17 Galderma Res & Dev Nouveaux derives d'acide 3-phenyl propanoique activateurs des recpteurs de type ppar, leur methode de preparation et leur utilisation dans des compositions cosmetiques ou pharmaceutiques.
EP2504005B1 (en) * 2009-11-26 2013-11-06 Genfit Use of 1,3-diphenylprop-2-en-1-one derivatives for treating liver disorders
US9221751B2 (en) 2009-11-26 2015-12-29 Genfit Use of 1,3-diphenylprop-2-en-1-one derivatives for treating liver disorders
US10722575B2 (en) 2009-11-26 2020-07-28 Genfit Use of 1,3-diphenylprop-2-en-1-one derivatives for treating liver disorders
WO2011080276A1 (en) 2009-12-29 2011-07-07 Genfit Pharmaceutical combinations comprising a dpp-4 inhibitor and a 1,3-diphenylprop-2-en-1-one derivative
NO2571843T3 (no) 2010-05-17 2018-05-26
MX2013000391A (es) * 2010-07-12 2013-03-08 Hoffmann La Roche 1-hidroxiimino-3-fenil-propanos.
ES2563157T3 (es) 2011-11-14 2016-03-11 F. Hoffmann-La Roche Ag 1-Piridazinil-hidroxiimino-3-fenil-propanos como agonistas de GPBAR1
BR112014016129B1 (pt) 2011-12-28 2022-04-05 Genfit Composto, derivado de 1,3-difenilpropano e composição farmacêutica
EP3416629A4 (en) 2016-02-16 2019-08-07 CoNCERT Pharmaceuticals, Inc. DEUTERATED GFT-505
IT201600098338A1 (it) * 2016-09-30 2018-03-30 Univ Degli Studi Padova Composti 1-fenilpropanone e loro impiego
RU186145U1 (ru) * 2018-08-08 2019-01-11 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное объединение "Центротех" (ООО "НПО "Центротех") Каркас виброрамы вибросита
US11634387B2 (en) 2019-09-26 2023-04-25 Abionyx Pharma Sa Compounds useful for treating liver diseases
KR20220140762A (ko) 2020-02-10 2022-10-18 장피트 엘라피브라노에 의한 원발 담즙성 담관염의 치료
CN114901641A (zh) * 2020-02-28 2022-08-12 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 芳香族化合物及其药物组合物和用途
AU2021275381A1 (en) 2020-05-18 2022-11-24 Genfit Elafibranor for the treatment of primary sclerosing cholangitis
AU2021334117A1 (en) 2020-08-26 2023-04-06 Genfit Compositions and methods for the treatment of primary biliary cholangitis
CA3214214A1 (en) 2021-05-11 2022-11-17 Genfit Ppar-agonists for use in the treatment of liver failure
WO2022238448A1 (en) 2021-05-11 2022-11-17 Genfit Elafibranor derivatives agonists of ppar for use in the treatment of sepsis

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4121849A1 (de) * 1991-07-02 1993-01-14 Rhone Poulenc Rorer Gmbh (4-((omega)-arylalkyl)-phenyl)alkansaeuren, ihre salze und/oder ihre derivate
DE4327365A1 (de) * 1993-08-14 1995-02-16 Boehringer Mannheim Gmbh Verwendung von Phenolen und Phenolderivaten als Arzneimittel mit fibrinogensenkender Wirkung

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2149070C3 (de) 1971-10-01 1978-03-23 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Phenoxyalkylcarbonsäurederivate und deren Salze, Verfahren zu deren Herstellung und Arzneimittel
HU200591B (en) * 1986-07-11 1990-07-28 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing new diphenyl propylamine derivatives and pharmaceutical compositions comprising such compounds
JP4598278B2 (ja) * 1999-04-28 2010-12-15 サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング Ｐｐａｒ受容体リガンドとしてのジアリール酸誘導体
DE19933421A1 (de) * 1999-07-16 2001-01-25 Gruenenthal Gmbh 2-Benzyl-3-dimethylamino-1-phenyl-propanderi- vate
FR2841900B1 (fr) 2002-07-08 2007-03-02 Genfit S A Nouveaux derives de 1,3-diphenylprop-2-en-1-one substitues, preparation et utilisations
BRPI0414554A (pt) * 2003-10-28 2006-11-07 Reddys Lab Ltd Dr compostos e seus usos em medicina: processo para preparação destes e composições farmacêuticas que os contenham
MY147518A (en) * 2004-09-15 2012-12-31 Janssen Pharmaceutica Nv 4-((phenoxyalkyl)thio)-phenoxyacetic acids and analogs
FR2902789A1 (fr) 2006-06-21 2007-12-28 Genfit Sa Derives de 1,3-diphenylpropane substitues, preparations et utilisations

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4121849A1 (de) * 1991-07-02 1993-01-14 Rhone Poulenc Rorer Gmbh (4-((omega)-arylalkyl)-phenyl)alkansaeuren, ihre salze und/oder ihre derivate
DE4327365A1 (de) * 1993-08-14 1995-02-16 Boehringer Mannheim Gmbh Verwendung von Phenolen und Phenolderivaten als Arzneimittel mit fibrinogensenkender Wirkung

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LABAUDINIERE R ET AL, "Omega-[(omega-arylalkyl)aryl]alkanoic acids: a new class of specific lta4 hydrolase inhibitors", journal of medicinal chemistry, american chemical society. WASHINGTON, US, (1992), vol. 35, no. 17, pages 3156 - 3169. , Dated: 01.01.0001 *
MORISHITA S ET AL, "synthesis and hypolilidaemic activity of 2-substituted isobutyric acid derivatives", journal of medicinal chemistry, american chemical society. Washington, US, (198806), vol. 31, no. 6, ISSN 0022-2623, pages 1205 – 1209, Dated: 01.01.0001 *

Also Published As

Publication number Publication date
US8258182B2 (en) 2012-09-04
US20100286276A1 (en) 2010-11-11
JP5350231B2 (ja) 2013-11-27
BRPI0713600A2 (pt) 2012-11-06
WO2007147880A1 (fr) 2007-12-27
SI2046716T1 (sl) 2014-02-28
ES2434071T3 (es) 2013-12-13
EA018437B1 (ru) 2013-08-30
DK2046716T3 (da) 2013-11-04
CN101506138A (zh) 2009-08-12
CA2655643A1 (fr) 2007-12-27
WO2007147879A1 (fr) 2007-12-27
CA2655643C (fr) 2016-03-22
IL196057A (en) 2012-07-31
KR20090035535A (ko) 2009-04-09
IL196057A0 (en) 2009-09-01
KR20090059105A (ko) 2009-06-10
KR101416262B1 (ko) 2014-07-16
US8188148B2 (en) 2012-05-29
US20110136888A1 (en) 2011-06-09
DK2046715T3 (da) 2014-06-02
CN104193660A (zh) 2014-12-10
FR2902789A1 (fr) 2007-12-28
DK2046715T5 (da) 2014-07-28
CY1115082T1 (el) 2016-12-14
CA2655744C (fr) 2016-03-22
PT2046715E (pt) 2014-05-26
BRPI0713600B1 (pt) 2021-07-13
AU2007262938B2 (en) 2012-04-05
CN101506139A (zh) 2009-08-12
EP2046715B1 (fr) 2014-04-16
EA200900044A1 (ru) 2009-06-30
CN101506139B (zh) 2012-10-10
NZ573674A (en) 2012-02-24
SI2046715T1 (sl) 2014-08-29
AU2007262938A1 (en) 2007-12-27
PL2046716T3 (pl) 2014-03-31
JP5350230B2 (ja) 2013-11-27
ZA200810709B (en) 2009-12-30
EP2046715A1 (fr) 2009-04-15
EP2046716A1 (fr) 2009-04-15
CN101506138B (zh) 2014-02-19
CY1115414T1 (el) 2017-01-04
AU2007262939B2 (en) 2012-04-05
ES2466268T3 (es) 2014-06-09
EP2046716B1 (fr) 2013-08-14
NO20085338L (no) 2009-03-23
PT2046716E (pt) 2013-11-11
MX2008016239A (es) 2009-02-25
IL196071A0 (en) 2009-09-01
AU2007262939A1 (en) 2007-12-27
CA2655744A1 (fr) 2007-12-27
JP2009541270A (ja) 2009-11-26
PL2046715T3 (pl) 2014-07-31
CN104193660B (zh) 2018-10-19
JP2009541269A (ja) 2009-11-26
KR101416257B1 (ko) 2014-07-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO341866B1 (no) Substituerte 1,3-difenylpropanderivater, sammensetninger og anvendelser derav
US8088819B2 (en) Derivatives of substituted 3-phenyl-1-(phenylthienyl)propan-1-ones and of 3-phenyl-1-(phenylfuranyl) propan-1-ones, preparation and use
FR2910893A1 (fr) Derives de (phenylthiazolyl)-phenyl-propan-1-one et de (phenyloxazolyl)-phenyl-propan-1-one substitues, preparations et utilisations.
FR2910892A1 (fr) Derives de 1,3-diphenylpropane substitues, preparations et utilisations.

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees