BRPI0713600B1 - Compostos derivados de 1,3-difenilpropano substituídos, e, composição farmacêutica - Google Patents

Compostos derivados de 1,3-difenilpropano substituídos, e, composição farmacêutica Download PDF

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Jean-François Delhomel
Rémy Hanf
Karine Caumont-Bertrand
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Abstract

compostos derivados de 1,3-difenilpropano substituídos, e, composição farmacêutica. a presente invenção refere-se aos compostos derivados de 1,3-difenilpropano substituídos, possuindo propriedades de agonistas ppar, as composições farmacêuticas comportando os mesmo, assim como suas aplicações terapêuticas, notadamente nos domínios da saúde humana e animal.

Description

[0001] A presente invenção refere-se a compostos derivados de 1,3- difenilpropano substituídos, as composições farmacêuticas comportando os mesmos, assim como suas aplicações terapêuticas, notadamente nos domínios da saúde humana e animal.
[0002] Os inventores verificaram, de modo surpreendente, que os compostos de acordo com a invenção possuem, de modo intrínseco, propriedades agonistas PPAR (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor).
[0003] As moléculas descritas na invenção são portanto de um interesse particular para tratar as complicações associadas com a síndrome metabólica, a insulino- resistência, o diabete, as dislipidemias, a aterosclerose, as doenças cardiovasculares, a obesidade, a hipertensão, as doenças inflamatórias (asma, etc), as patologias neurodegenerativas (Alzheimer, etc), os cânceres, etc, assim como para permitir a diminuição do risco global. Preferivelmente, os compostos de acordo com a invenção são utilizáveis para o tratamento de dislipidemias.
[0004] O diabete, a obesidade e as dislipidemias (taxas plasmáticas de colesterol LDL e de triglicerídeos elevados, colesterol HDL baixo, etc), fazem parte de fatores de risco cardiovascular claramente identificados que predispõem um indivíduo a desenvolver uma patologia cardiovascular (Mensah M, 2004). Estes fatores de risco são adicionados aos fatores de risco ligados ao modo de vida como o tabagismo, a inatividade física, e os regimes alimentares desequilibrados. Um efeito sinergístico existe entre estes diferentes fatores: a presença concomitante de vários dentre os mesmos conduz a um agravamento dramático do risco cardiovascular e convém então falar de risco global ("global risk") para as doenças cardiovasculares. A prevalência de dislipidemias atingia 43,6% da população em 2004 nos principais países desenvolvidos. A prevalência da diabete, atualmente em nítido aumento, está em vias de se tornar cada vez mais significativa na epidemiologia das doenças cardiovasculares: a prevalência da diabete é, com efeito, estimada a 7,6% da população para 2010 (Fox-Tucker J, 2005).
[0005] De acordo com a International Atherosclerosis Society (International Atherosclerosis Society, 2003), as doenças cardiovasculares representam a primeira causa de mortalidade nos países industrializados e se tornam cada vez mais frequentes nos países em via de desenvolvimento. Estas doenças são notadamente as doenças coronárias, a isquemia cerebral, e as doenças arteriais periféricas.
[0006] Estes dados justificam portanto a adoção de medidas enérgicas para reduzir significantemente a morbidez e a mortalidade cardiovasculares e a necessidade de encontrar tratamentos eficazes, complementares de uma modificação da higiene de vida, atuando sobre os fatores de risco das doenças cardiovasculares e suas conseqüências se tornam uma urgência mundial.
[0007] Os compostos de acordo com a invenção, por suas propriedades agonistas PPAR, apresentam um interesse particular para o tratamento de patologias ligadas às distúrbios do metabolismo lipídico e/ou glucídico, tais como o diabete, a obesidade, as dislipidemias ou a inflamação, assim como para a diminuição do risco cardiovascular global.
[0008] Os PPARs (α, Y, e δ) são conhecidos como estando envolvidos neste tipo de patologias (Kota BP et al., 2005): ligandos e receptores são assim comercializados para o tratamento de tais patologias (Lefebvre P et al., 2006) e vários moduladores de PPAR, agonistas ou antagonistas, seletivos ou não, estão atualmente em desenvolvimento avançado. Um modulador PPAR tendo os efeitos benéficos sobre a resistência à insulina, a obesidade, as dislipidemias, a hipertensão e/ou inflamação poderia ser usado no tratamento da síndrome metabólica (ou síndrome X) (Liu Y e Miller A, 2005).
[0009] A família de PPARs inclui três isoformas, conhecidas como α, y e δ (também conhecidas como β) cada uma codificada por um gene diferente. Estes receptores fazem parte da superfamília dos receptores nucleares e fatores de transcrição que são ativados pela ligação de alguns ácidos graxos e/ou de seus metabólitos lipídicos. Os PPAR ativados formam heterodímeros com os receptores do ácido retinóico 9-cis (RXR ou Retinoid X Receptor) e se fixam a elementos de resposta específicos (PPRE ou Peroxisome Proliferator Response Element) ao nível do promotor de seus genes alvos, permitindo assim o controle da transcrição.
[0010] PPARα controla o metabolismo lipídico (hepático e muscular) e a homeostasia da glicose, influencia o metabolismo intracelular dos lipídeos e dos açúcares por um controle direto da transcrição dos genes codificando para as proteínas implicadas na homeostasia lipídeica, exerce efeitos anti- inflamatórios e anti- proliferativos e provém os efeitos pro-aterogênicos de acúmulo do colesterol nos macrófagos estimulando o efluxo do colesterol (Lefebvre P, Chinetti G, Fruchart JC e Staels B, 2006). Fibratos (fenofibrato, bezafibrato, ciprofibrato, gemfibrozil), por intermediário de PPARα, são usados em medicina clínica no tratamento de algumas dislipidemias abaixando os triglicerídeos e aumentando as taxas de HDL (High Density Lipoprotein).
[0011] PPARY é um regulador chave de adipogenese. Ademais, ele está implicado no metabolismo lipídico de adipócitos maduros, na homeostasia da glucose, notadamente na resistência à insulina, na inflamação, no acúmulo de colesterol, ao nível dos macrófagos e na proliferação celular (Lehrke M e Lazar MA, 2005). Assim, PPARY desempenha um papel na patogenese de obesidade, de insulino- resistência e diabetes. Tiazolidinedionas (Rosiglitazona, Troglitazona, etc.) são ligados do receptor PPARy usados no tratamento de diabete tipo 2.
[0012] Existem ligandos de PPARδ (L-165041, GW501516 atualmente em desenvolvimento clínico) mas nenhum ligando de PPARδ está sendo atualmente usado como um medicamento. Este receptor é, no entanto, um alvo atraente para o desenvolvimento de medicamentos utilizável no tratamento de dislipidemias, da aterosclerose, da obesidade, e da resistência à insulina. PPARδ está de fato envolvido em controle do metabolismo lipídico e glucídico, no equilíbrio energético, na neurodegeneração, obesidade, na forma de células espumosas, e na inflamação (Gross B et al., 2005).
[0013] Além do papel direto desempenhado pelos ligandos PPAR sobre a regulação do metabolismo dos lipídeos e dos glucídeos, estas moléculas tem um espetro de ação pleiotrópica devido à grande diversidade dos genes alvos dos PPAR. Estas múltiplas propriedades tornam os PPAR alvos terapêuticos de interesse para o tratamento de doenças como a aterosclerose, isquemia cerebral, hipertensão, doenças ligadas a uma neo-vascularização (retinopatias diabéticas, etc), as doenças inflamatórias e auto-imunes (doença de Crohn, psoríase, esclerose de placas, asma, etc), as doenças neoplásicas (carcinogenese, etc), as doenças neurodegenerativas, complicações associadas com síndrome metabólica, resistência a insulina, diabetes, dislipidemias, doença cardiovascular, obesidade, etc., assim como para permitir adiminuição do risco global.
[0014] Os compostos de acordo com a invenção e suas propriedades agonistas PPAR, representam portanto uma ferramenta terapêutica vantajosa para a melhora das patologias ligadas às distúrbios do metabolismo lipídico e/ou glucídico, notadamente dislipidemias, assim como para a diminuição do risco cardiovascular global.
[0015] Mais geralmente, atuando de modo simultâneo sobre diversos processos de regulação, os compostos de acordo com a invenção representam um meio terapêutico vantajoso para tratar as complicações associadas à síndrome metabólica (cujas características são a obesidade, em particular a obesidade abdominal, uma concentração anormal de lipídeos no sangue (taxa elevada de triglicerídeos e/ou fraca taxa de colesterol HDL (dislipidemia), uma glicemia elevada e/ou uma resistência à insulina e uma hipertensão), a aterosclerose, as doenças cardiovasculares, a insulino- resistência, a obesidade, a hipertensão, a diabete, as dislipidemias, as doenças cardiovasculares, as doenças inflamatórias (amas), as patologia neurodegenerativas (Alzheimer, etc), os cânceres, etc, assim como para permitir a diminuição do riscoglobal.
[0016] A presente invenção tem por objeto compostos, derivados de 1,3-difenilpropano substituídos tendo a fórmula geral (I seguinte) :
Figure img0001
[0017] em que:
[0018] X1 representa um átomo de halogênio, um grupamento R1 ou G1-R1;
[0019] X2 representa um átomo de halogênio, um grupamento R2 ou G2-R2;
[0020] X3 representa um grupamento R3 ou grupamento G3-R3;
[0021] X4 representa um átomo de halogênio, a R4 ou grupamento G4-R4;
[0022] X5 representa um grupamento R5 ou grupamento G5-R5;
[0023] R1 representando um grupamento alquila halogenada;
[0024] R2 representando um átomo de hidrogênio ou um grupamento não alquila halogenada;
[0025] R3, R4, e R5, idênticos ou diferentes, representando um átomo dehidrogênio ou um grupamento alquila substituído ou não por um ou vários substituintes de grupo 1 ou grupo2;
[0026] G1, G2, G3, G4, e G5, idênticos ou diferentes, representando um átomo deoxigênio ou enxofre;
[0027] com pelo menos um dos grupamentos X3, X4 ou X5 respondendo à fórmula R3, G3R3, R4, G4R4, R5 ou G5R5, em que:
[0028] G3, G4, e G5 sendo tal como definidos acima, e
[0029] R3, R4, e R5, idênticos ou diferentes, representando um grupamentoalquila substituído por um ou vários substituintes de grupo 1 ou grupo2;
[0030] A representa:(i) um grupamento -CR6R7, em que:
[0031] R6 representa um átomo de hidrogênio, um grupamento alquila , ou um grupamento -OR8
[0032] e R7 representa um grupamento alquila , um grupamento hidróxi, ou um - grupamento OR8, R8 sendo tal como definido abaixo,(ii) um grupamento carbonila (CO),(iii) um grupamento oxima (C=N-O-H) ou éter oxima (C=N-O-R8),
[0033] R8, idêntico ou diferente, representando um grupamento alquila ,substituído ou não por um grupamento arila ou cicloalquila;
[0034] D representa: (i) um átomo de carbono ligado a dois átomos de hidrogênio (CH2),(ii) um átomo de carbono ligado a um átomo de hidrogênio e a G2 de modo a formar um heterociclo oxigenado ou sulfurado;
[0035] os substituintes de grupamento 1 são escolhidos dentre -COOR9 e -CONR9R10;
[0036] os substituintes de grupamento 2 são escolhidos dentre -SO3H e - SO2NR9R10;
[0037] R9 e R10, idênticos ou diferentes, representando um átomo de hidrogênio ou um radical alquila substituído ou não por pelo menos um substituinte de grupo 1 ou 2;
[0038] seus estereoisômeros (diastereoisômeros, enantiômeros), puros ou em mistura, misturas racêmicas, isômeros geométricos, tautômeros, sais, hidratos, solvatos, formas sólidas assim como suas misturas.
[0039] No quadro da presente invenção, o termo "alquila" designa um radical hidrocarboneto saturado, linear, ramificado ou cíclico, halogenado ou não, tendo mais em particular de 1 a 24, e preferivelmente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, átomos de carbono. Pode-se citar, por exemplo, os radicais metila, trifluorometila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, tertiobutila, sec-butila, pentila, neopentila, n-hexila, ou ciclohexila.
[0040] O termo “cicloalquila” designa um grupamento alquila como definido acima e forma pelo menos um ciclo. Pode-se citar a título de grupos ciclo alquilas tendo 3 a 8 átomos de carbono: ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila, e ciclooctila.
[0041] O termo “alquiloxi” refere-se a uma cadeia alquila ligada à molécula por intermediário de um átomo de oxigênio (uma ligação éter).A cadeia alquila responde à definição previamente enunciada.A título de exemplo, pode-se citar os radicais metóxi, trifluorometóxi, etóxi, n-propilóxi, isopropilóxi, n-butóxi, iso-butóxi, tertio-butóxi, sec-butóxi, ou hexiloxi.
[0042] O termo “arila” faz referência a grupos aromáticos comportando preferivelmente de 5 a 14 átomos de carbono, com vantagem 6 a 14 átomos de carbono, eventualmente interrompidos por um ou vários heteroátomos selecionados dentre N, O, S ou P (mais especificamente "heteroarila”). Eles são geralmente mono-ou bi-cíclicos e compreendem com vantagem 6 a 14 átomos de carbono, como fenila, α-naftila, β-naftila, antracenila ou fluorenila.
[0043] O termo “heterociclo oxigenado ou sulfurado” designa um grupo cicloalquila, como definido acima interrompido por um ou vários heteroátomos selecionados dentre O e S. Pode-se citar a título de exemplo o tiopirano ou pirano.
[0044] Por átomo de halogênio, entende-se um átomo de bromo, cloro, flúor ou iodo.
[0045] Um radical alquila halogenado é um radical alquila como definido acima apresentando pelo menos um átomo de halogênio, até totalmente halogenado (perhalogenado).
[0046] Os compostos de fórmula (I) apresentam pelo menos um dos grupamentos X3, X4 ou X5 respondendo à formula R3, G3R3, R4, G4R4, R5 ou G5R5, em que:
[0047] G3, G4, e G5 são como definidos acima, e
[0048] R3, R4, e R5, idênticos ou diferentes, representa um grupamento alquilasubstituído por um ou vários substituinte(s) de grupo 1 ou grupo 2,
[0049] Tem portanto pelo menos um dos grupamentos R3, R4 e R5 de X3, X4 ou X5 respectivamente representando um grupamento alquila substituído por um ou vários substituintes de grupo 1 ou grupo 2.
[0050] Um aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que A representa um grupamento carbonila (CO).
[0051] Um outro aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que A representa um grupamento oxima(C=N-O-H) ou éter oxima (C=N-O-R8), R8 representando um grupamento alquila substituído ou não por um grupamento arila ou cicloalquila. Preferivelmente, R8 representa um grupamento metila.
[0052] Um outro aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que A representa um grupamento -CR6R7, R6 representando um átomo de hidrogênio e R7 representando um grupamento hidróxi, grupamento alquila, ou um grupamento -OR8, R8 representando um grupamento alquila , substituído ou não por um grupamento arila ou cicloalquila.
[0053] Preferivelmente, a invenção refere-se a compostos de fórmula geral (I) em que A representa um grupamento -CR6R7, R6 representando um átomo de hidrogênio e R7 representa um grupamento hidróxi.
[0054] Um outro aspecto preferido da invenção refere-se a compostos de fórmula geral (I) em que A representa um grupamento - CR6R7, R6 representando um átomo de hidrogênio e R7 representa um grupamento - OR8, R8 sendo tal como definido acima. Em particular, R8 representa um grupamento alquila comportando preferivelmente 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono.Ainda mais preferivelmente, R8 representa um grupamento alquila substituído por um grupamento arila ou cicloalquila, referido grupamento arila ou cicloalquila comportando em particular 6 átomos de carbono.
[0055] Um outro aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que A representa um grupamento -CR6R7, em que R6 representa um grupamento alquila , ou um grupamento -OR8 e R7 representa um grupamento hidróxi, um grupamento alquila , ou um grupamento - OR8, R8 representa um grupamento alquila substituído ou não por um grupamento arila ou cicloalquila.
[0056] Um outro objeto particular da invenção refere-se a compostos de fórmula geral (I) em que X3 e X5, idênticos ou diferentes, representam respectivamente um grupamento R3 e R5, com em particular R3 e R5 representando um átomo de hidrogênio.
[0057] Um outro objeto particular da invenção refere-se a compostos de fórmula geral (I) em que X3 e X5, idênticos ou diferentes, representam respectivamente um grupamento R3 e R5, R3 e R5, idênticos ou diferentes, representando um grupamento alquila substituído ou não por um ou vários substituinte(s) de grupamento 1 ou grupamento 2, como acima definido.
[0058] Preferivelmente, X3 e X5, idênticos ou diferentes, representam respectivamente um grupamento R3 e R5, R3 e R5, idênticos ou diferentes, representando um grupamento alquila não substituído, comportando preferivelmente 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono.Ainda mais preferivelmente, X3 e X5, idênticos ou diferentes, representam um grupamento metila.
[0059] Um outro aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que X3 e X5, idênticos ou diferentes, representam respectivamente um grupamento G3R3 ou G5R5,
[0060] G3 e G5 sendo tal como definidos acima, e
[0061] R3 e R5 representando um átomo de hidrogênio.
[0062] Um outro aspecto particular da invenção refere-se aos compostos defórmula geral (I) em que X3 e X5, idênticos ou diferentes, representam respectivamente um grupamento G3R3 ou G5R5,
[0063] G3 e G5 sendo tal como definidos acima, e
[0064] R3 e R5, idênticos ou diferentes, representando um grupamento alquila substituído ou não por um ou vários substituintes de grupamento 1 ou grupamento 2, como acima definido.
[0065] Um outro aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que X3 e X5, idênticos ou diferentes, representam respectivamente um grupamento G3R3 ou G5R5,
[0066] G3 e G5 sendo tal como definidos acima, e
[0067] R3 e R5, idênticos ou diferentes, representando um grupamento alquila substituído por um ou vários substituintes de grupo 1 ou grupo2, como acima definido.
[0068] Um outro aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que X4 representa um átomo de halogênio (bromo, cloro, flúor, iodo).
[0069] Um outro aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que X4 representa um grupamento R4 ou G4-R4,
[0070] G4 sendo tal como acima definido, e
[0071] R4 representando um átomo de hidrogênio.
[0072] Um outro aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que X4 representa um grupamento R4 ou G4-R4,
[0073] G4 sendo tal como acima definido, e
[0074] R4 representando um grupamento alquila substituído ou não por um ou vários substituinte(s) de grupo 1 ou grupo 2, como acima definido.
[0075] Um outro aspecto particular da invenção refere-se aos compostos general fórmula (I) em que X4 representa um grupamento R4 ou G4-R4,
[0076] G4 sendo tal como acima definido, e
[0077] R4 representando um grupamento alquila substituído por um ou vários substituinte(s) de grupo 1 ou grupo 2.Preferivelmente, G4 representa um átomo de oxigênio e/ou R4 representa um grupamento alquila substituído por um substituinte de grupo 1, in particular COOH. Ainda mais preferivelmente, X4 representa um grupamento -OC(CH3)2COOH, -OCH2COOH ou -SC(CH3)2COOH.
[0078] Um outro objeto particular da invenção refere-se a compostos de fórmula geral (I) em que somente um dos X3, X4 e X5 grupamentos representa um grupamento R3, R4, R5, G3R3, G4R4 ou G5R5,
[0079] G3, G4, e G5 sendo tal como definido acima, e
[0080] R3, R4, e R5, idênticos ou diferentes, representando um grupamentoalquila substituído por um ou vários substituinte(s) de grupo 1 ou grupo 2, como acima definido.
[0081] Um outro objeto particular da invenção refere-se a compostos de fórmula geral (I) em que um somente X4 dos grupamentos X3, X4, e X5 representa um grupamento R4 ou G4R4,
[0082] G4 sendo tal como acima definido, e
[0083] R4 representando um grupamento alquila substituído por um ou vários substituintes de grupo 1 ou grupo 2, como acima definido.
[0084] Um outro objeto particular da invenção refere-se a compostos de fórmula geral (I) em que dois ou três dos grupamentos X3, X4 e X5 representam um grupamento R3, R4, R5, G3R3, G4R4 ou G5R5,
[0085] G3, G4, e G5 sendo tal como definido acima, e
[0086] R3, R4, e R5, idênticos ou diferentes, representando um grupamentoalquila substituído por um ou vários substituinte(s) de grupo 1 ou grupo 2, como acima definido.
[0087] Um outro aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que G3, G4 e/ou G5 representam um átomo de oxigênio.
[0088] Preferivelmente, a invenção refere-se a compostos de fórmula geral (I) em que somente um dos grupamentos X3, X4, ou X5 corresponde a uma fórmula G3R3, G4R4 ou G5R5,
[0089] G3, G4, e G5 representando um átomo de oxigênio, e
[0090] R3, R4 ou R5, idênticos ou diferentes, representando um grupamento alquila substituído por um ou vários substituinte(s) de grupo 1 ou grupo 2, como acima definido.
[0091] Ainda mais preferivelmente , a invenção refere-se a compostos de fórmula geral (I) em que somente X4, dentre X3, X4, e X5, corresponde à fórmula G4R4,
[0092] G4 representando um átomo de hidrogênio, e
[0093] R4 representando um grupamento alquila substituído por um ou vários substituintes de grupo 1 ou grupo 2, como acima definido.
[0094] Um outro aspeto preferencial da invenção refere-se a compostos de fórmula geral (I) em que dois ou três dos grupamentos X3, X4, ou X5 corresponde à fórmula G3R3, G4R4 ou G5R5,
[0095] G3, G4, e G5 representando um átomo de oxigênio, e
[0096] R3, R4, e R5 representando um grupamento alquila substituído por um ouvários substituinte(s) de grupo 1 ou grupo 2, como acima definido.
[0097] Um aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que o substituinte é escolhido dentre substituintes de grupo 1. Preferivelmente, o substituinte de grupo 1 é um tipo -COOR9, R9 sendo tal como acima definido e representando preferivelmente um átomo de hidrogênio ou um grupamento alquila comportando 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono.
[0098] Um aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula (I) em que somente um dos grupamentos X3, X4 ou X5 corresponde à fórmula -OC(CH3)2COOR9, R9 sendo tal como acima definido e representando preferivelmente um átomo de hidrogênio ou um grupamento alquila comportando 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono.
[0099] Ainda mais preferivelmente, X4 representa um grupamento -OC(CH3)2COOR9, R9 como acima definido e representando preferivelmente um átomo de hidrogênio ou um grupamento alquila comportando 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono.
[0100] Um objeto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que X1 representa um grupamento R1 ou G1R1,
[0101] G1 sendo tal como acima definido, e
[0102] R1 representando um grupamento alquila halogenada.
[0103] Preferivelmente, R1 representa a grupamento alquila halogenada comportando 1, 2 ou 3 átomos de carbono.
[0104] Ainda mais preferivelmente, X1 representa um grupamento -CF3, -OCF3, - SCF3, -ORCF3, R representando um grupamento alquila como definido acima.
[0105] Um aspecto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que X1 representa um átomo de halogênio (bromo, cloro, flúor, iodo).Preferivelmente, X1 representa um átomo de cloro ou bromo.
[0106] Um objeto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que X2 representa um átomo de hidrogênio.
[0107] Um objeto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que X2 representa um átomo de halogênio (bromo, cloro, flúor, iodo).
[0108] Um objeto particular da invenção refere-se a compostos de fórmula geral (I) em que X2 representa um grupamento R2 ou G2R2, R2 e G2 sendo tal como definido acima. Preferivelmente, R2 representa um átomo de hidrogênio, um grupamento -CF3ou um grupamento alquila comportando 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 átomos de carbono. Ainda mais preferivelmente, X2 representa um grupamento -OR’, R’ representando um grupamento alquila , -CF3, -OCF3, -OH.
[0109] Um objeto particular da invenção refere-se aos compostos de fórmula geral (I) em que D representa um grupamento CH2.
[0110] Um outro objeto particular da invenção refere-se a compostos de fórmula geral (I) em que G2 e D formam um heterociclo oxigenado ou sulfurado de modo a formar compostos de fórmula (II) seguinte:
Figure img0002
[0111] Preferivelmente, G2 representa um átomo de enxofre na fórmula geral (II).
[0112] de acordo com uma forma particular da invenção, os compostos preferidossão indicados abaixo.
[0113] Composto 1: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometiloxi)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2-metil-propanóico
Figure img0003
[0114] Composto 2: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometiltio)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2-metilpropanóico
Figure img0004
[0115] Composto 3: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-bromofenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2-metilpropanóico
Figure img0005
[0116] Composto 4: ácido propil]fenoxi]-2-metilpropanóico
Figure img0006
[0117] Composto 5: ácido 2-[4-[3-[4-cloro-2-hidroxifenil]-3-oxo-propil]feniltio]-2-metilpropanóico
Figure img0007
[0118] Composto 6: ácido 2-[2-metil-4-[3-[4-(3,3,3-trifluoropropiloxi)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2-metilpropanóico
Figure img0008
[0119] Composto 7: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-hidroxi-3-[4-(trifluorometiltio)fenil]propil]fenoxi]-2-metilpropanóico
Figure img0009
[0120] Composto 8: ácido 2-[2,6-dimetil-4-(3-(piridin-3-ilmetoxi)-3-[4- (trifluorometoxi)fenil]propil]fenoxi]-2-metilpropanóico
Figure img0010
[0121] Composto 9: ácido 2-[4-(3-(4-iodobenziloxi)-3-(4-(trifluorometoxi)fenil)propil)-2,6-dimetilfenoxi]-2-metilpropanóico
Figure img0011
[0122] Composto 10: ácido 2-[4-(3-metoxi-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)-2,6- dimetilfenoxi]-2-metilpropanóico
Figure img0012
[0123] Composto 11: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(3,3,3-trifluoropropiloxi)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2-metilpropanóico
Figure img0013
[0124] Composto 12: ácido 2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(2,2,2-trifluoroetoxi)fenil)propil)fenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0014
[0125] Composto 13: ácido 2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(2,2,2-trifluoroetiltio)fenil)propil)fenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0015
[0126] Composto 14: ácido 2-(4-(3-(4-cloro-2-(metiltio)fenil)-3-oxo-propil)-2,6- dimetilfenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0016
[0127] Composto 15: ácido 2-(4-(3-(2,4-bis(trifluorometil)fenil)-3-oxo-propil)-2,6- dimetilfenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0017
[0128] Composto 16: ácido 2-(4-(3-(2-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-3-oxo-propil)-2,6-dimetilfenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0018
[0129] Composto 17: ácido 2-(4-(3-(2-fluoro-4-(2,2,2-trifluoroetoxi)fenil)-3-oxo-propil)-2,6-dimetilfenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0019
[0130] Composto 18: ácido 2-(2,6-dimetil-4-(3-(2-metil-4-(2,2,2-trifluoroetoxi)fenil)-3-oxo-propil)fenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0020
[0131] Composto 19: ácido 2-(4-(3-(2-metoxi-4-(2,2,2-trifluoroetoxi)fenil)-3-oxo-propil)-2,6-dimetilfenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0021
[0132] Composto 20: ácido 2-(4-(3-(2-hidroxi-4-(trifluorometil)fenil)-3-oxo-propil)-2,6-dimetilfenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0022
[0133] Composto 21: ácido 2-(4-(3-(2-metoxi-4-(trifluorometil)fenil)-3-oxo-propil)-2,6-dimetilfenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0023
[0134] Composto 22: ácido 2-(2,6-dimetil-4-(3-(2-isopropiloxi-4-(trifluorometil)fenil)-3-oxo-propil)fenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0024
[0135] Composto 23: ácido 2-(2,6-dimetoxi-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil)propil)fenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0025
[0136] Composto 24: ácido 2-(4-(3-(2-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-3-oxo-propil)-2,6-dimetoxifenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0026
[0137] Composto 25: ácido 2-metil-2-(2-metil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometiltio)fenil) propil)fenoxi) propanóico
Figure img0027
[0138] Composto 26: ácido 2-metil-2-(2-metil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi) propanóico
Figure img0028
[0139] Composto 27: ácido 2-(4-(3-(2-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-3-oxo- propil)feniltio)-2-metilpropanóico
Figure img0029
[0140] Composto 28: ácido 2-metil-2-(3-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi) propanóico
Figure img0030
[0141] Composto 29: ácido 2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi) propanóico
Figure img0031
[0142] Composto 30: ácido 2-[4-(3-hidroxi-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)-2,6- dimetilfenoxi]-2-metilpropanóico
Figure img0032
[0143] Composto 31: 2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi)-2-metilpropanamida
Figure img0033
[0144] Composto 32: ácido 2-(4-(3-hidroxiimino-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)-2,6-dimetilfenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0034
[0145] Composto 33: ácido 2-(4-(3-metoxiimino-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)-2,6-dimetilfenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0035
[0146] Composto 34: ácido 4-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi)-2,2-dimetilbutanóico
Figure img0036
[0147] Composto 35: éster terciobutílico de ácido 2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0037
[0148] Composto 36: éster isopropílico de ácido 2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0038
[0149] Composto 37: ácido 2,2-difluoro-2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4- (trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi)acético
Figure img0039
[0150] Composto 38: ácido 2-(2-metoxi-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)feniltio)-2-metilpropanóico
Figure img0040
[0151] A invenção refere-s ainda mais preferivelmente aos seguintes compostos:
[0152] Composto 1: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometoxi)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2-metilpropanóico;
[0153] Composto 2: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometiltio)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2-metilpropanóico;
[0154] Composto 3: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-bromofenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2-metilpropanóico;
[0155] Composto 4: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometil)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2-metilpropanóico
[0156] Composto 6: ácido 2-[2-metil-4-[3-[4-(3,3,3-trifluoropropiloxi)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2-metilpropanóico
[0157] Composto 11: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(3,3,3-trifluoropropiloxi)fenil]-3- oxo-propil]fenoxi]-2-metilpropanóico
[0158] Composto 26: ácido 2-metil-2-(2-metil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi) propanóico
[0159] Composto 36: éster isopropílico de ácido 2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4- (trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi)-2-metilpropanóico
[0160] Os compostos da presente invenção compreendem seus estereoisômeros (diastereoisômeros, enantiômeros), puros ou em mistura, suas misturas racêmicas, seus isômeros geométricos, seus tautômeros, seus sais, seus hidratos, seus solvatos, suas formas sólidas assim como suas misturas.
[0161] Os compostos de acordo com a invenção podem conter um ou vários centros assimétricos. A presente invenção inclui estereoisômeros (diastereoisômeros, enantiômeros), puros ou em mistura, assim como as misturas racêmicas e os isômeros geométricos. Quando uma mistura enantiomericamente pura (ou enriquecida) é desejada, ela poderá ser obtido seja por purificação do produto final ou de intermediários quirais, seja por síntese assimétrica seguindo métodos conhecidos do versado (usando, por exemplo, reativos e catalisadores quirais). Alguns compostos de acordo com a invenção podem ter diferentes formas tautômeras estáveis e todas estas formas assim como suas misturas estão incluídas na invenção.
[0162] A presente invenção refere-se igualmente aos sais 'farmaceuticamente aceitáveis" dos compostos de acordo com a invenção. De modo geral, este termo designa os sais pouco ou não tóxicos obtidos a partir de bases ou ácidos, orgânicos ou inorgânicos. Estes sais podem ser obtidos quando da etapa de purificação final do composto de acordo com a invenção ou por incorporação do sal sobre o composto já purificado.
[0163] Alguns compostos de acordo com a invenção e seus sais poderão ser estáveis sob várias formas sólidas. A presente invenção inclui todas as formas sólidas dos compostos de acordo com a invenção o que inclui formas amorfas, polimorfos, mono- e poli-cristalinos.
[0164] Os compostos de acordo com a invenção podem existir sob forma livre ou sob forma solvatada, por exemplo com solventes farmaceuticamente aceitáveis como água (hidratos) ou etanol.
[0165] Compostos de acordo com a invenção marcados por um ou por isótopos são igualmente incluídos na invenção, estes compostos são estruturalmente idênticos mas diferentes pelo fato de que pelo menos um átomo da estrutura é substituído por um isótopo (radioativo ou não). Os exemplos de isótopos podem ser incluídos na estrutura dos compostos de acordo com a invenção podendo ser selecionados dentre o hidrogênio, carbono, oxigênio, o enxofre, como 2H, 3H, 13C, 14C, 18O, 17O, 35S respectivamente. Os isótopos radioativos 3H e 14C são particularmente preferidos porque fáceis de preparar e detectar no quadro de estudos de biodisponibilidade in vivo das substâncias. Os isótopos pesadas (como 2H) são particularmente preferidos porque eles são usados como padrões internos nos estudos analíticos.
[0166] A presente invenção também tem por objeto um processo de síntese dos compostos de fórmula geral (I) como definidos acima.
[0167] O processo da presente invenção compreende- uma etapa de colocação em contato (I) em meio básico ou em meio ácido de pelo menos um composto de fórmula (A) com pelo menos um composto de fórmula (B):
Figure img0041
[0168] em que X1, X2, X3, X4, e X5 tem as definições dadas previamente,- depois (ii) uma etapa de redução dos compostos assim obtidos,- e eventualmente (iii) uma etapa de inserção de grupamentos funcionais.
[0169] As condições de realização da etapa (i) em meio ácido ou básico e da etapa (ii) são conhecidas do versado e podem variar em uma larga medida. Os protocolos de síntese podem ser particularmente os apresentados na parte "exemplos" da presente invenção.
[0170] A colocação em contato destes dois compostos é com vantagem realizada de modo estequiométrico. Ela é realizada preferivelmente a uma temperatura ambiente (entre cerca de 18 oC e 25 oC) e em pressão atmosférica.
[0171] Em meio básico, a reação é preferivelmente realizada em presença de uma base forte, como um hidróxido de metal alcalino, como hidróxido de sódio ou alcoolato de metal alcalino como etilato de sódio.
[0172] Em meio ácido, a reação é preferivelmente realizada em presença de um ácido forte, com ácido clorídrico.
[0173] Os compostos assim obtidos podem ser isolados por métodos clássicos e conhecidos do versado. Eles podem ser em seguida usados notadamente a título de medicamentos ou de produtos cosméticos.
[0174] A presente invenção também tem por objeto compostos como descritos acima a título de medicamentos.
[0175] A presente invenção tem igualmente por objeto uma composição farmacêutica compreendendo em um suporte aceitável no plano farmacêutico, pelo menos um composto como descrito acima, eventualmente em associação com um ou vários outros princípios ativos terapêuticos e/ou cosméticos.
[0176] Trata-se com vantagem de uma composição farmacêutica para o tratamento de complicações associadas com síndrome metabólica, insulino- resistência, diabete, dislipidemias, aterosclerose, doenças cardiovasculares, obesidade, hipertensão, doenças inflamatórias(asma), patologias neurodegenerativas, ou cânceres, etc. A composição farmacêutica de acordo com a invenção é preferivelmente usada para tratar dislipidemias.
[0177] Trata-se preferivelmente de uma composição farmacêutica para tratar fatores de risco cardiovascular ligados às distúrbios do metabolismo lipídico e/ou glucídico (hiperlipidemia, diabete de tipo II, obesidade, etc) permitindo a diminuição do risco global.
[0178] Um outro objeto da invenção refere-se a uma composição nutricional compreendendo pelo menos um composto como descrito acima.
[0179] Um outro objeto da invenção consiste na utilização de pelo menos um composto como descrito acima para a preparação de composições farmacêuticas destinadas ao tratamento de diversas patologias notadamente ligadas a males de metabolismo dentre os quais pode-se citar as dislipidemias. Mais geralmente, a invenção tem por objeto a utilização de pelo menos um composto como descrito acima para a preparação de composições farmacêuticas destinadas a tratar os fatores de riscos para as doenças cardiovasculares ligadas aos distúrbios do metabolismo dos lipídeos e/ou glucídios e destinados a diminuir assim o risco global.
[0180] A título de exemplo (e de modo não limitativo), os compostos de acordo com a invenção poderão de modo vantajoso ser administrados em combinação com outros agentes terapêuticos e/ou cosméticos, comercializados ou em desenvolvimento, como que:- anti-diabéticos: insulino-secretores (sulfoniluréias (glibenclamida, glimepirida, gliclazida, etc.) e glinidas (repaglinida, nateglinida, etc.)), inibidores de alfa-glucosidase, agonistas de PPARY (tiazolidinedionas como rosiglitazona, pioglitazona), agonistas de PPARα/ Y mistos (tesaglitazar, muraglitazar), pan-PPARs (compostos que simultaneamente ativam as 3 isoformas de PPAR ), biguanidas (metformina), inibidores de Dipeptidil Peptidase IV (MK-431, vildagliptina), agonistas do peptídeo de tipo glucagona -1 (GLP-1) (exenatida), etc.- insulina- moléculas hipolipemiantes e/ou hipocolesterolemiantes: fibratos (fenofibrato, gemfibrozil), inibidores de HMG CoA reductase ou hidroxilmetilglutaril coenzima A reductase (estatinas como atorvastatina, simvastatina, fluvastatina), inibidores de absorção de colesterol (ezetimiba, fitoesteróis), inibidores de CETP ou proteína de transferência de colesteril éster ((torcetrapib), inibidores de ACAT ou acil-coenzima A colesterol acil transferase (avasimiba eflucimiba, inibidores de MTP (proteína de transferência de triglicerídeos microssomais), agentes de sequestro de ácidos biliares (colestiramina), vitamina E, ácidos graxos poliinsaturados, ácidos graxos omega-3, derivados de tipo de ácido nicotínico (niacina), etc.- agentes anti-hipertensivos e agentes hipotensivos: os inibidores de ACE (enzima de conversão de angiotensina ) (captopril, enalapril, ramipril, ou quinapril), antagonistas de receptor de angiotensina II (losartan, valsartan, telmisartan, eposartan, irbesartan, etc.), beta bloqueadores (atenolol, metoprolol, labetalol, propranolol), os diuréticos de tiazida e não tiazida (furosemida, indapamida, hidroclortiazida, anti-aldosterona), vasodilatores, bloqueadores de canal de cálcio (nifedipina, felodipina, ou amlodipina, diltiazem ou verapamil), etc.- agentes anti-plaquetas: Aspirina, Ticlopidina, Dipiridamol, Clopidogrel, Flurbiprofen, etc.- agentes anti-obesidade: Sibutramina, inibidores de lipase (orlistat), PPARδ, antagonistas do receptor de canabinóide CB1 (rimonabant), etc.- agentes anti-inflamatórios: por exemplo, corticóides (prednisona, betametasona, dexametasona, prednisolona, metilprednisolona, hidrocortisona, etc.), as AINS ou derivados não esteroidais anti- inflamatórios (indometacina, sulindac), AINS do grupo dos aril carboxílicos (ácido tiaprofenico, diclofenac, etodolac, flurbiprofen, ibuprofen, cetoprofen, naproxen, nabumetona, alminoprofeno), AINS derivados de oxicam (meloxicam, piroxicam, tenoxicam), AINS do grupo dos fenamatos, inibidores seletivos de COX2 (celecoxib, rofecoxib), etc.- agentes antioxidantes: por exemplo probucol, etc.- agentes utilizados no tratamento de insuficiência cardíaca, os diurétidos tiazídicos e não tiazídicos (furosemida, indapamida, hidroclortiazida, antialdosterona), inibidores de ACE (captopril, enalapril, ramipril ou quinapril), drogas digitalis (digoxina, digitoxina), beta bloqueadores (atenolol, metoprolol, labetalol, propranolol), os inibidores de fosfodiesterase (enoximona, milrinona), etc.- agentes utilizados no tratamento de insuficiência coronária beta bloqueadores (atenolol, metoprolol, labetalol, propranolol), bloqueadores do canal de cálcio (nifedipina felodipina, ou amlodipina, bepridila, diltiazem ou verapamil), agentes doadores de NO (óxido nitrico) (trinitrina, dinitrato de isosorbida, molsidomina), amiodarono, etc.- os anti-cancerosos agentes citotóxicos (agentes interagindo com DNA, agentes alquilantes, cisplatina e derivados), os agentes citostáticos (os análogos de GnRH (hormônio liberando gonatropina), análogos da somatostatina, progestina, os anti-estrogênios, inibidores de aromatase, etc.), moduladores de resposta imune (interferons, IL2, etc.), etc.- os anti-asmáticos, como broncodilatadores (agonistas de receptores beta 2), corticóides, cromoglicato, os antagonistas do receptor de leucotrieno (montelukast), etc.- corticóides usados no tratamento de patologias da pele como a psoríase e a dermatite- vasodilatadores e/ou agentes anti-isquêmicos (buflomedila, extrato de ginkgo biloba, naftidrofurila, pentoxifillina, piribedil), etc.
[0181] A invenção refere-se igualmente a um método de tratamento de patologias ligadas ao metabolismo de lipídeos e/ou glucídeos compreendendo a administração a um indivíduo, notadamente um humano, de uma quantidade eficaz de um composto ou de uma composição farmacêutica como definidos acima. No sentido da invenção, o termo "uma quantidade eficaz" refere-se a uma quantidade do composto suficiente para produzir o resultado biológico desejado. No sentido da presente invenção, o termo "indivíduo" significa um mamífero e mais particularmente um humano.
[0182] O termo "tratamento" designa um tratamento curativo, sintomático ou preventivo. Os compostos da presente invenção podem ser assim utilizados em indivíduos (como mamíferos, particularmente humanos) atingidos por uma doença declarada. Os compostos da presente invenção podem ser também usados para retardar ou diminuir a progressão ou prevenir uma progressão adiante da doença, melhorando assim a condição dos indivíduos. Os compostos da presente invenção podem por fim ser administrados aos indivíduos não doentes, mas que poderiam desenvolver normalmente a doença ou que estão em risco importante de desenvolver a doença.
[0183] As composições farmacêuticas da invenção compreendem com vantagem um ou vários excipientes ou veículos, aceitáveis no plano farmacêutico. Pode-se citar por exemplo soluções salinas, fisiológicas, isotônicas, tamponadas, etc., compatíveis com um uso farmacêutico e conhecidas do versado. As composições podem conter um ou vários agentes ou veículos selecionados dentre os dispersantes, solubilizantes, estabilizantes, conservadores, etc. Os agentes ou veículos utilizáveis nas formulações (líquidos e/ou injetáveis e/ou sólidos) são notadamente a metilcelulose, hidroximetilcelulose, carboximetilcelulose, polysorbate 80, mannitol, gelatina, lactose, óleos vegetais, acacia, lipossomas. As composições podem ser formuladas sob forma de suspensões injetáveis, géis, óleos, comprimidos, supositórios, pós, cápsulas de gelatina, cápsulas, aerossóis, etc, eventualmente por meio de formas galênicas ou dispositivos assegurando uma liberação prolongada e/ou retardada. Para este tipo de formulação, usa-se com vantagem um agente como a celulose, carbonatos ou amidos.
[0184] Os compostos ou composições de acordo com a invenção podem ser administrados de diferentes modos e sob diferentes formas. Assim, eles podem ser por exemplo administrados de modo sistêmico, por via oral, parenteral, por inalação ou por injeção, como por exemplo via intravenosa, intra-muscular, sub-cutânea, transdérmica, intra-arterial, etc. Para as injeções, os compostos são geralmente condicionados sob forma de suspensões líquidas, que podem ser injetadas por meio de seringas ou perfusões, por exemplo.
[0185] É entendido que a vazão e/ou a dose injetada podem ser adaptadas pelo versado em função do paciente, da patologia, do modo de administração, etc. tipicamente, os compostos são administrados em doses podendo variar entre 1 μg e 2 g por administração, preferivelmente de 0,1 mg a 1 g por administração. As administrações podem ser diárias até repetidas várias vezes por dia, conforme o caso. Por outro lado, as composições de acordo com a invenção podem compreender, por outro lado, outros agentes ou princípios ativos.LEGENDAS DAS FIGURAS
[0186] Abreviaturas usadas nas figuras:- Cpd = composto- Ctrl = controle- mpk = mg/kg/dia- LDL-colesterol = colesterol de lipoproteína de baixa densidade- HDL-colesterol = colesterol de lipoproteína de alta densidade- VLDL-colesterol = colesterol de lipoproteína de densidade muita baixa
[0187] Figuras 1-1 a 1-18: Avaliação in vitro das -propriedades ativadoras de PPAR dos compostos da invenção em função da dose
[0188] A ativação de PPARs é avaliada in vitro sobre a linhagem de fibroblastos de rim de macaco (COS-7), por medida da atividade transcripcional de quimeras constituídas pelo domínio de ligação ao DNA do fator de transcrição GaI4 da levedura e do domínio de ligação do ligando dos diferentes PPAR.
[0189] Os compostos são testados em doses de entre 10-7 e 100 μM em quimeras Gal4-PPARα, y, e δ. O fator de indução, isto é, a relação entre a luminescência induzida pelo composto e a luminescência induzida pelo controle, é medido para cada condição. Mais o fator de indução é elevado, mas o composto tem um caráter ativado de PPAR.- Figuras 1-1, 1-2, 1-3: Avaliação in vitro das propriedades ativadoras de PPARα, Y, δ de composto 1- Figuras 1-4, 1-5, 1-6: Avaliação in vitro das propriedades ativadoras de PPARα, Y, δ do composto 2- Figuras 1-7, 1-8, 1-9: Avaliação in vitro das propriedades ativadoras de PPARα, Y, δ do composto 3- Figuras 1-10, 1-11, 1-12: Avaliação in vitro das propriedades ativadoras de PPARα, Y, δ do composto 4- Figuras 1-13, 1-14, 1-15: Avaliação in vitro das propriedades ativadoras de PPARα, y, δ do composto 5- Figuras 1-16, 1-17, 1-18: Avaliação in vitro das propriedades ativadoras de PPARα, y, δ do composto 7
[0190] Figuras 2-1 a 2-7: Avaliação In vivo, em camundongo ApoE2/E2, das propriedades sobre o peso corporal, das propriedades hipolipemiantes e propriedades estimuladoras da síntese de HDL-colesterol dos compostos de acordo com a invenção
[0191] O efeito dos compostos de acordo com a invenção é avaliado in vivo junto a camundongo humanizado pela isoforma E2 da apolipoproteína E (E2/E2).
[0192] O peso corporal, a taxa de colesterol total, de HDL- colesterol, de triglicerídeos e de ácidos graxos livres plasmáticos são medidos em camundongo dislipidêmico E2/E2 após 8 dias de tratamento por via oral com os compostos de acordo com a invenção. Estes parâmetros são comparados com os obtidos com os animais de controle (não tratados pelos compostos de acordo com a invenção): a diferença medida testemunha do efeito sobre o peso corporal e do efeito hipolipemiante dos compostos de acordo com a invenção.- Figura 2-1: Ganho de peso corporal após 8 dias de tratamento com o composto 1, administrado a 5, 10, e 50 mpk- Figura 2-2: Taxa de colesterol plasmático após 8 dias de tratamento com o composto 1, administrado a 5, 10, e 50 mpk;- Figura 2-3: Taxa de HDL-colesterol plasmático após 8 dias de tratamento com o composto 1, administrado a 5, 10, e 50 mpk- Figura 2-4: Taxa de triglicerídeos plasmáticos após 8 dias de tratamento com o composto 1, administrado a 5, 10, e 50 mpk.- Figura 2-5: Taxa de ácidos graxos livres plasmáticos após 8 dias de tratamento com o composto 1, administrado a 5, 10, e 50 mpk.
[0193] A eficácia dos compostos de acordo com a invenção é também avaliada por medida, no tecido hepático, da expressão de genes implicados no metabolismo lipídico e/ou glucídico e a dissipação de energia. Os níveis de expressão de cada gene são normalizados em relação ao nível de expressão do gene de referência 36B4. O fator de indução, isto é, a relação entre o sinal relativo (induzido por composto de acordo com a invenção) e a média dos valores relativos do grupo de controle, é em seguida calculado. Mais este fator é elevado, mais o composto tem um caráter ativador da expressão gênica. O resultado final é representado como média dos valores de indução em cada grupo experimental.- Figura 2-6: Expressão de PDK4 (Piruvate Desidrogenase quinase, isoforma 4) no tecido hepático do camundongo E2/E2 mouse, após 8 dias de tratamento com o composto 1, administrado a 5, 10, e 50 mpk- Figura 2-7: Expressão de ApoCIII (Apolipoproteína C3) no tecido hepático do camundongo E2/E2, após 8 dias de tratamento com o composto 1, administrado a 5, 10, e 50 mpk
[0194] Figuras 3-1 a 3-5: Avaliação in vivo, no camundongo C57BI6, de propriedades de peso corporal, de propriedades hipolipemiantes, e estimuladoras da síntese de HDL-colesterol dos compostos de acordo com a invenção
[0195] O efeito dos compostos de acordo com a invenção é avaliado in vivo no camundongo C57BI6 por medida da evolução do peso corporal, a medida da taxa de HDL colesterol e triglicerídeos plasmáticos, após 14 dias de tratamento por via oral com compostos de acordo com a invenção. Estes parâmetros são comparados com os obtidos com os animais de controle (não tratados com os compostos de acordo com a invenção): a diferença medida mostra o efeito sobre o peso corporal e o efeito hipolipemiante dos compostos de acordo com a invenção.- Figura 3-1: Ganho de peso corporal após 14 dias de tratamento com o composto 1, administrado a 3, 10, e 30 mpk- Figura 3-2: Taxa de HDL-colesterol plasmático após 14 dias de tratamento com o composto 1, administrado a 3, 10, e 30 mpk- Figura 3-3: Taxa de triglicerídeos plasmáticos após 14 dias de tratamento com o composto 1, administrado a 3, 10, e 30 mpk
[0196] A eficácia dos compostos de acordo com a invenção é também avaliada por medida no tecido hepático, da expressão dos genes implicados no metabolismo lipídico. Os níveis de expressão de cada gene são normalizados por relação ao nível de expressão do gene de referência 36B4. O fator de indução é em seguida calculado. Mais este fator é elevado, mais o composto tem um caráter ativador de expressão gênica. O resultado final é representado como média dos valores de indução em cada grupo experimental.- Figura 3-4: Expressão de PDK4 ( piruvato desidrogenase quinase, isoforma 4) no tecido hepático de camundongo C57BI6, após 14 dias de tratamento com o composto 1, administrado a 3, 10, e 30 mpk- Figura 3-5: Expressão de ApoCIII no tecido hepático de camundongo C57BI6, após 14 dias de tratamento com o composto 1, administrado a 3, 10, e 30 mpk
[0197] Figuras 4-1 a 4-9: Avaliação in vivo, em camundongo db/db, de propriedades de peso corporal, propriedades antidiabéticas, hipolipemiantes, e estimuladoras da síntese de HDL-colesterol dos compostos de acordo com a invenção
[0198] O efeito dos compostos de acordo com a invenção é avaliado in vivo em camundongo db/db por medida da evolução do peso corporal, a medida da taxa de glicose, insulina, colesterol total e triglicerídeos plasmáticos, assim por análise da distribuição do colesterol em diferentes frações lipoprotéicas plasmáticas após 28 dias de um tratamento por via oral com os compostos de acordo com a invenção. Estes parâmetros são comparados aos obtidos com os animais de controle (animais não tratados com os compostos de acordo com a invenção): a diferença medida testemunha o efeito sobre o peso corporal, sobre a insulino- resistência , o efeito hipolipemiante dos compostos de acordo com a invenção.- Figura 4-1: Ganho de peso corporal após 28 dias de tratamento com o composto 1, administrados a 50 mpk;- Figura 4-2: Glicemia após 28 dias de tratamento com o composto 1, administrados a 50 mpk- Figura 4-3: Insulemia após 28 dias de tratamento com o composto 1, administrados a 50 mpk- Figura 4-4: Taxa de colesterol plasmático após 14 dias de tratamento com o composto 1 e composto 3, administrados a 50 mpk- Figura 4-5: Distribuição de colesterol dentre as diferentes frações lipoprotéicas plasmáticas após 28 dias de tratamento com o composto 1 e composto 3, administrados a 50 mpk- Figura 4-6: Taxa de triglicerídeos plasmáticos após 28 dias de tratamento com o composto 1 e composto 3, administrados a 50 mpk- Figura 4-7: Taxa de ácidos graxos livres após 28 dias de tratamento com o composto 1 e composto 3, administrados a 50 mpk.
[0199] A eficácia dos compostos de acordo com a invenção é também avaliada por medida, nos tecidos hepáticos e musculares (esqueléticos) da expressão de genes implicados no metabolismo glucídico e da dissipação de energia. Os níveis de expressão de cada gene são normalizados em relação ao nível de expressão de genes de referência 36B4 no tecido hepático ou 18S no músculo esquelético gastrocnemiano. O fator de indução, isto é, a relação entre o sinal relativo (induzido pelo composto de acordo com a invenção ) e a média dos valores relativos do grupo de controle, é em seguida calculado. Mais este fator é elevado, mais o composto tem um caráter ativador da expressão gênica. O resultado final é representado como média dos valores de indução em cada grupo experimental.- Figura 4-8: Expressão de PDK4 no tecido hepático do camundongo db/db, após 28 dias de tratamento com o composto 1 e composto 3, administrados a 50 mpk- Figura 4-9: Expressão de UCP2 (proteína não copulação 2) no músculo esquelético do camundongo db/db mouse, após 28 dias de tratamento com o composto 1 e composto 3, administrados a 50 mpk
[0200] Figura 5: Avaliação in vitro das propriedades anti-inflamatórias dos compostos de acordo com a invenção por medida da secreção de MCP1 por monócitos, tratados com compostos de acordo com a invenção e estimulados com PMA
[0201] Os efeitos anti-inflamatórios dos composto de acordo com a invenção são avaliados por medida da secreção de MCP1 (Monocyte chemotactic protein-1) por monócitos THP1 tratados durante 24 horas com os compostos de acordo com a invenção e estimulados simultaneamente com PMA (Phorbol 12-myristate 13-acetate, provoca uma resposta inflamatória em células e sua diferenciação em macrófagos) Mais a quantidade de MCP-1 secretada é diminuída, mais o composto de acordo com a invenção inibe a reação inflamatória.
ANÁLISES ESTATÍSTICAS
[0202] Os estudos estatísticos realizados consistem em um teste T de Student (°/°°/°°°) e/ou uma análise da variância univariada a um fator (ANOVA) seguido por um teste de Tukey (*/**/***). Os resultados são comparados em relação ao grupo de controle de acordo com o valor do parâmetro p:
Figure img0042
EXEMPLOS
[0203] Os reativos e catalisadores comuns são comercialmente disponíveis (Aldrich, Alfa Aesar, Acros, Fluka ou Lancaster).
[0204] Os espectros de ressonância magnética nuclear do proton (RMN 1H) foram medidos em um espectrômetro Bruker AC300P.Os deslocamentos químicos foram expressados em ppm (parte em milhão) e as multiplicidades pelas abreviaturas comuns.
Exemplo 1: Procedimento geral para a síntese dos compostos de acordo com a invenção
[0205] A maior parte dos compostos de acordo com a invenção foram obtidos especificamente por redução, seguindo um dos protocolos mencionados abaixo, a partir de compostos reivindicados e/ou descritos em patente US2005176808.
[0206] Os outros compostos podem ser facilmente obtidos de acordo com os modos de preparação similares bem conhecidos dos versados na arte.Procedimento geral A: redução de difenilpropen-2-onas com trietilsilano
[0207] A difenilpropan-2-ona é solubilizada em diclorometano. O trietilsilano é adicionado depois, gota a gota, com ácido trifluoroacético (7.5 equivalentes). A mistura de reação é colocada sob agitação em temperatura ambiente e o avanço da reação é seguido por cromatografia sobre camada fina. Uma vez o produto de partida consumido, o meio é lavado com água. A fase aquosa é extraída com diclorometano, as fases orgânicas são reunidas, secadas sobre sulfato de magnésio depois o solvente é eliminado por evaporação sob pressão reduzida. O resíduo de evaporação é purificado por cromatografia sobre gel de sílica (HPLC preparativo, lichrosfer (Merck) RP18 12μm 100A, coluna: 25*250 mm).Procedimento geral B: redução de difenilpropen-2-onas com tetraclorossilano
[0208] A difenilpropan-2-ona é solubilizada em acetonitrila. O iodeto de sódio é adicionado depois o tetraclorossilano gota a gota. A mistura de reação é agitada em temperatura ambiente e o avanço da reação é seguido por cromatografia em camada fina.Uma vez o produto de partida consumido (30 min a 2 h), o meio é diluído com clorofórmio depois lavado com água.A fase aquosa é extraída por clorofórmio, as fases orgânicas são reunidas e lavadas com uma solução saturada de sulfito de sódio depois secadas em sulfato de magnésio. O solvente é eliminado por evaporação sob pressão reduzida. O resíduo de evaporação é purificado por cromatografia sobre gel de sílica (HPLC preparativo, lichrosfer (Merck) RP18 12μm 100A, coluna: 25*250 mm). Procedimento geral C: redução de difenilpropen-2-onas com paládio sobre carbono
[0209] A difenilpropen-2-ona é solubilizada em etanol depois paládio sobre carbono (10%) em quantidade catalítica é adicionado. A mistura de reação é colocada sob agitação em atmosfera de hidrogênio em pressão atmosférica e temperatura ambiente. Uma vez o produto de partida é consumido, o catalisador é eliminado por filtração. O solvente é evaporado sob pressão reduzida e o resíduo de evaporação é purificado por cromatografia flash.Procedimento geral D: síntese de álcool
[0210] A difenilpropan-3-ona é solubilizada em etanol. O boroidreto de sódio é adicionado. A mistura de reação é mantida 16 h sob agitação a 50 oC, o meio é resfriado e hidrolisado. Os solventes são eliminados por evaporação sob pressão reduzida, o resíduo é retomado por uma solução aquosa diluída de ácido clorídrico e extraído por cloreto de metileno. A fase orgânica é lavada com água, secada sobre sulfato de magnésio, o cloreto de metileno é eliminado por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia sobre gel de sílica (HPLC preparativo, lichrosfer (Merck) RP18 12μm 100A, coluna: 25*250 mm).Procedimento geral E: síntese de éteres
[0211] O ifenilpropan-3-ol é solubilizado em uma mistura água / álcool 1/3:2/3 em presença de uma quantidade catalítica de ácido trifluoracético. Após 16 h de agitação a 60 oC, o meio é evaporado sob pressão reduzida e o resíduo de evaporação é purificado por cromatografia sobre gel de sílica (HPLC Preparativo, lichrosfer (Merck) RP18 12μm 100A, coluna: 25*250 mm).Procedimento geral F: síntese usando oximas e éteres de oxima
[0212] A difenilpropan-3-ona é solubilizada em piridina. O cloridrato de O- alquilhidroxilamina é adicionado. Após 16 h de refluxo, o meio é evaporado sob pressão reduzida e o resíduo de evaporação é purificado por cromatografia flash sobre gel de sílica.
Exemplo 2: Síntese dos compostos de acordo com a invençãoComposto 1: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometoxi)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2- metilpropanóico
Figure img0043
[0213] Este composto foi preparado de acordo com o procedimento geral B, a partir de ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometoxi)fenil]-3-oxo-prop-2-enil]fenoxi]-2- metilpropanóico, por meio de 15 equivalentes de iodeto de sódio e 15 equivalentes de tetraclorossilano;
[0214] Aspecto: sólido branco; F= 64-66 oC
[0215] RMN 1H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,52 (s, 6H), 2,22 (s, 6H), 2,96 (t, 2H, J=7,51 Hz), 3,26 (t, 2H, J=7,51Hz), 6,87 (s, 2H), 7,28 (d, 2H, J=8,61Hz), 8,01 (d, 2H, J=8,61Hz),
[0216] MS(ES-MS): 423,3 (M-1).Composto 2: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometiltio)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2- metilpropanóico
Figure img0044
[0217] Este composto foi preparado de acordo com o procedimento geral A a partir de ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometiltio)fenil]-3-oxo-prop-2-enil]fenoxi]-2- metilpropanóico e por meio de 1 equivalente de trietilsilano;
[0218] Aspecto: sólido branco; F=83-85 oC.
[0219] RMN 1H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,52 (s, 6H), 2,23 (s, 6H), 2,97 (t, 2H,J=7,59Hz), 3,29 (t, 2H, J=7,59Hz), 6,88 (s, 2H), 7,74 (d, 2H, J=8,46Hz), 7,99 (d, 2H, J=8,46Hz),
[0220] MS(ES-MS): 439,2 (M-1).Composto 3: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-bromofenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2- metilpropanóico
Figure img0045
[0221] Este composto foi preparado de acordo com o procedimento geral A, a partir de ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-bromofenil]-3-oxo-prop-2-enil]fenoxi]-2-metil- propanóico e por meio de 1 equivalente de trietilsilano;
[0222] Aspecto: óleo viscoso branco.
[0223] RMN 1H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,52 (s, 6H), 2,23 (s, 6H), 2,96 (t, 2H, J=7,60Hz), 3,24 (t, 2H, J=7,02Hz), 6,89 (s, 2H), 7,61 (d, 2H, J=8,46 Hz), 7,83 (d, 2H, J=8,46Hz),
[0224] MS(ES-MS): 417,2 (M-1) 79Br e 419,2(M-1) 81Br,Composto 4: ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometil)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2- metilpropanóico
Figure img0046
[0225] Este composto foi preparado de acordo com o procedimento geral A, a partir de ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometil)fenil]-3-oxo-prop-2-enil]fenoxi]-2- metil-propanóico e por meio de 1 equivalente de trietilsilano;
[0226] Aspecto: óleo viscoso amarelado
[0227] RMN 1H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,52 (s, 6H), 2,23 (s, 6H), 2,98 (t, 2H, J=7,29Hz), 3,30 (t, 2H, J=7,29Hz), 6,88 (s, 2H), 7,72 (d, 2H, J=8,17Hz), 8,06 (d, 2H, J=8,17Hz),
[0228] MS(ES-MS): 407,4 (M-1).Composto 5: ácido 2-[4-[3-[4-cloro-2-hidroxifenil]-3-oxo-propil]feniltio]-2-metilpropanóico
Figure img0047
[0229] Este composto foi preparado de acordo com o procedimento geral B, a partir de ácido 2-[4-[3-[4-cloro-2-hidroxifenil]-3-oxo-prop-2-enil]feniltio]-2- metilpropanóico, por meio de 5 equivalentes de iodeto de sódio e 5 equivalentes de tetraclorossilano;
[0230] Aspecto: sólido branco; F=136-137 oC
[0231] RMN 1H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,52 (s, 6H), 3,08 (t, 2H, J=7,59Hz), 3,30 (t, 2H, J=7,59Hz), 6,87 (dd, 1H, J=1,89 Hz, J=8,79Hz), 7,02 (d, 1H, J=1,89Hz), 7,22 (d, 2H, J=7,89Hz), 7,47 (d, 2H, J=8,19Hz), 7,66 (d, 1H, J=8,46Hz), 12,38 ( s, 1H),
[0232] MS(ES-MS): 377,01 (M-1).Composto 6: ácido 2-[2-metil-4-[3-[4-(3,3,3-trifluoropropiloxi)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]- 2-metilpropanóico
Figure img0048
[0233] Este composto foi preparado por redução de acordo com o procedimento geral C, a partir de éster terciobutílico de ácido 2-(4-(3-(4-hidroxifenil)-3-oxo-prop-1- enil)-2-metilfenoxi)-2- metilpropanóico seguido por O- alquilação de fenol / acidólise de éster de terciobutílico de acordo com a patente US 2005/176808.
[0234] Aspecto: óleo viscoso incolor
[0235] RMN 1H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,60 (s, 6H); 2,23 (s, 3H); 2,61-2,70 (m, 2H); 2,95-2,99 (m, 2H); 3,19-3,24 (m, 2H); 4,26 (t, 2H, J=6,5Hz); 6,77 (d, 1H, J=8,5Hz); 6,93 (d, 2H, J=8,9Hz); 6,93-6,98 (m, 1H); 7,06 (d, 1H, J=2,1Hz); 7,95 (d, 2H, J=8,9Hz),
[0236] MS(ES-MS): 437,3 (M-1).Composto 10: ácido 2-[4-(3-metoxi-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)-2,6- dimetilfenoxi]-2-metilpropanóico
Figure img0049
[0237] Este composto foi preparado de acordo com o procedimento geral E, a partir de uma solução de ácido 2-(4-(3-hidroxi-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)-2,6- dimetilfenoxi)-2-metilpropanóico em uma mistura 1/3:2/3 de água / metanol.
[0238] Aspecto: óleo viscoso incolor.
[0239] RMN 1H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,46 (s, 6H); 1,91-2,21 (m, 2H); 2,15 (s, 6H); 2,49-2,69 (m, 2H), 3,83 (s, 3H); 4,69 (dd, 1H, J=7,7Hz, J=5,1Hz); 6,78 (s, 2H); 7,19 (d, 2H, J=8,5Hz); 7,36 (d, 2H, J=8,5Hz),
[0240] MS(ES-MS): 458,3 (M+NH4+), 463,2 (M+Na+), 479,2 (M+K+).Composto 12: ácido 2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(2,2,2-trifluoroetoxi)fenil)propil)fenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0050
[0241] Este composto foi preparado por redução de acordo com o procedimento geral C, a partir de 2-(4-(3-(4-hidroxifenil)-3-oxo-prop-1-enil)-2,6-dimetilfenoxi)-2- metilpropanoato de terciobutila, seguido por O- alquilação de fenol e a acidólise de éster de terciobutílico de acordo com a patente US 2005/176808
[0242] Aspecto: sólido branco; F=98-99 oC .
[0243] RMN 1H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,45 (s, 6H); 2,17 (s, 6H); 2,89 (m, 2H); 3,18 (m, 2H); 4,40 (q, 2H, J=8,1Hz); 6,82 (s, 2H); 6,95 (d, 2H, J=9,1Hz); 7,93 (d, 2H, J=9,1Hz),
[0244] MS(ES-MS): 437,4 (M-1).Composto 17: ácido 2-(4-(3-(2-fluoro-4-(2,2,2-trifluoroetoxi)fenil)-3-oxo-propil)-2,6- dimetilfenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0051
[0245] Este composto foi preparado por redução de acordo com o procedimento geral C, a partir de 2-(4-(3-(2-fluoro-4-hidroxifenil)-3-oxo-prop-1-enil)-2.6- dimetilfenoxi)-2-metilpropanoato de terciobutila, seguido por uma sequência de O- alquilação de fenol e acidólise de éster de terciobutílico de acordo com a patente US 2005/176808
[0246] Aspecto: óleo viscoso incolor.
[0247] RMN 1H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,51 (s, 6H); 2,21 (s, 6H); 2,92 (t, 2H, J=7,6Hz); 3,23 (td, 2H, J=7,6Hz J=3,1Hz); 6,70 (dd, J=8,7Hz J=2,3Hz); 6,81 (dd, J=12,6Hz J=2,3Hz); 6,86 (s); 7,91 (t, 1H, J=8,7Hz),
[0248] MS(MALDI-TOF) : 479 (M+Na+), Composto 30: ácido 2-[4-(3-hidroxi-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)-2,6- dimetilfenoxi]-2-metilpropanóico
Figure img0052
[0249] Este composto foi preparado de acordo com o procedimento geral D, a partir de ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometiloxi)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2- metilpropanóico, por meio de 4 equivalentes de boroidreto de sódio.
[0250] Aspecto: óleo viscoso incolor.
[0251] RMN 1H (300 MHz, CDCl3, δ ppm): 1,46 (s, 6H); 1,94-2,10 (m, 2H); 2,17 (s, 6H); 2,46-2,66 (m, 2H); 4,69 (dd, 1H, J=7,6Hz J=5,5Hz); 6,78 (s, 2H); 7,17 (d, 2H, J=8,3Hz); 7,34 (d, 2H, J=8,3Hz),
[0252] MS(ES-MS): 425,3 (M-1).Composto 33: ácido 2-(4-(3-(metoxiimino)-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)-2,6- dimetilfenoxi)-2-metilpropanóico
Figure img0053
[0253] Este composto foi preparado de acordo com o procedimento geral F, a partir de ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometoxi)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2- metilpropanóico.
[0254] Aspecto: óleo viscoso amarelado
[0255] RMN 1H (300 MHz, CDCl3, δ in ppm): 1,49 (s, 6H), 2,21 (s, 6H), 2,71-2,77 (m, 2H), 2,95-3,01 (m, 2H), 4,01 (s, 3H), 6,82 (s, 2H), 7,17 (d, 2H, J=8,7Hz), 7,59 (d, 2H, J=8,7Hz),
[0256] MS(ES-QTOF): 476 (M+Na+), Composto 35: 2(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi)-2- metilpropanoato de terciobutila
Figure img0054
[0257] Este composto foi preparado por redução de acordo com o procedimento geral C, a partir de 3-(4-hidroxi-3,5-dimetilfenil)-1-(4-(trifluorometoxi)fenil) propan-1- ona, seguido por uma sequência de O- alquilação de fenol e acidólise de éster de terciobutílico de acordo com a patente US 2005/176808
[0258]
[0259] 2,94 (t, 2H, J=7,9Hz); 3,25 (t, 2H, J=7,9Hz); 6,82 (s, 2H); 7,28 (d, 2H, J=9,1Hz); 8,01 (d, 2H, J=9,1Hz),
[0260] Os outros compostos podem ser obtidos de acordo com os modos de preparação similares aos procedimentos gerais A a F e de acordo com o conhecimento do versado na arte.
Exemplo 3: Avaliação in vitro de propriedades de PPAR ativadoras dos compostos de acordo com a invenção
[0261] As propriedades ativadoras dos PPARs dos compostos de acordo com a invenção são avaliadas in vitro.
Princípio
[0262] A ativação dos PPAR é avaliada in vitro sobre uma linhagem de fibroblastos de rim de macaco (COS-7) pela medida da atividade transcripcional de quimeras constituídas do domínio de ligação de DNA do fator de transcrição Gal4 da levedura e do domínio de ligação a ligando de diferentes PPAR. Os compostos são testados em doses compreendidas entre
[0263] 10-7 e100 μM em quimeras Gal4-PPARα, Y, e δ.
Protocolo Cultura das células
[0264] As células COS-7 provém do ATCC e cultivadas em meio DMEM suplementado em 10% (vol/vol) de soro de bezerro fetal, 100 U/ml de penicilina (Gibco, Paisley, UK) e 2mM de L-Glutamina (Gibco, Paisley, UK). As células são incubadas a 37°C em uma atmosfera úmida contendo 5% CO2.
Descrição dos plasmídeos usados na transfecção
[0265] Os plasmídeos Gal4(RE)_TkpGL3, pGal4-hPPARα, pGal4-hPPARY, pGal4-hPPARδ e pGal4—Φ foram descritos na literatura (Raspe E et al., 1999). As construções pGal4-hPPARα, pGal4-hPPARY, e pGal4-hPPARδ foram obtidas por clonagem, no vetor pGal4-Φ, de fragmentos de DNA amplificados por PCR e respondendo aos domínios DEF de receptores nucleares PPARα, PPARY, e PPARδ humanos.Transfecção
[0266] As células COS-7 em suspensão são transfectadas com 150 ng de DNA por cavidade, com uma relação pGal4-PPAR / Gal4(RE)_TkpGL3 de 1/10, na presença de 10% soro de bezerro fetal. As células são colocadas em placas de 96 cavidades (4x104 células / cavidade), então são incubadas durante 24 h a 37°C. Ativação como os compostos de teste é realizada durante 24 horas a 37°C em um meio sem soro. No final da experiência, as células são lisadas e a atividade luciferase é determinada usando Steady-LiteTM HTS (Perkin Elmer) ou Steady Glow Luciferase (Promega) de acordo com instruções dos fabricantes.
Resultados
[0267] Os compostos de acordo com a invenção foram testados em 3 isoformas PPAR. Os resultados obtidos com os compostos 1, 2, 3, 4, 5, e 7 são detalhados nas figuras (1-1) a (1-18).
[0268] Os requerentes evidenciaram um aumento significante e dependente de dose da atividade de luciferase nas células transfectadas com os plasmídeos
[0269] pGal4-hPPAR e tratadas com os compostos de acordo com a invenção.
[0270] De modo inesperado, os dados experimentais apresentam mostram que os compostos de acordo com a invenção ligam os PPARs in vitro e induzem uma ativação da atividade transcripcional.
Exemplo 4: Avaliação in vivo, em camundongo ApoE 2/E2, de propriedades de peso corporal, de propriedades hipolipemiantes, e estimuladoras da síntese de HDL- colesterol dos compostos de acordo com a invençãoPrincípio
[0271] As propriedades afetando o peso corporal e as propriedades hipolipemiantes dos compostos de acordo com a invenção são avaliadas in vivo por medida do peso corporal por dosagem dos lipídeos plasmáticos e por análise da expressão gênica de genes alvos dos PPARs, após um tratamento do camundongo E2/E2 dislipidêmico pelos compostos de acordo com a invenção.
[0272] O modelo murino usado é o camundongo de tipo ApoE2/E2, camundongo transgênico para a isoforma E2 de apolipoproteína humana (Sullivan PM et al., 1998). Em humanos, esta apolipoproteína, um constituinte de lipoproteínas de baixa e muito baixa densidade (LDL-VLDL), está presente sob três isoformas E2, E3, e E4. A forma E2 apresenta uma mutação sobre um aminoácido em posição 158, o que enfraquece consideravelmente a afinidade desta proteína para o receptor em LDL. A depuração de VLDL é deste fato quase nula.Se produz, então, um acúmulo das lipoproteínas de baixa densidade e uma hiperlipidemia mista denominada de tipo III (colesterol e triglicerídeos elevados).
[0273] PPARα regula a expressão dos genes envolvidos no transporte de lipídeos (apolipoproteínas como Apo AI, Apo AII, e Apo CIII, transportadores de membrana como FAT) e o catabolismo de lipídeos (ACO, CPT-I, ou CPT-II, enzimas de β- oxidação dos ácidos graxos). Um tratamento pelos ativadores de PPARα se traduz portanto, junto ao homem como nos roedores, por uma diminuição das taxas circulantes de triglicerídeos. A medida dos lipídeos plasmáticos após tratamento com os compostos de acordo com a invenção será portanto um indicador do caráter agonista de PPAR e portanto um caráter hipolipemiante dos compostos de acordo com a invenção.
[0274] O tratamento com os ativadores de PPAR se traduz também às vezes junto ao homem como roedor, por um aumento da taxa de HDL-colesterol plasmático. A medida da taxa de HDL-colesterol plasmático permite, portanto, colocar em evidência o caráter estimulador da síntese do HDL-colesterol dos compostos de acordo com a invenção.
[0275] As propriedades agonistas de PPARα previamente medidas in vitro devem se traduzir ao nível hepático por uma sobre-expressão dos genes alvos diretamente sob o controle do receptor de PPARα : os genes que os requerentes estudaram nesta experiência são Apo CIII (apolipoproteína envolvida no metabolismo lipídico) e PDK- 4 (piruvato desidrogenase quinase isoforma 4, enzima do metabolismo glucídico). A medida da atividade transcripcional dos genes alvos de PPARα após tratamento pelos compostos de acordo com a invenção será portanto também um indicador do caráter hipolipemiante dos compostos de acordo com a invenção.
ProtocoloTratamento dos animais
[0276] Os camundongos transgênicos ApoE2/E2 foram mantidos sob um ciclo luz/escuro de 12/12 h a uma temperatura constante de 20 ± 3°C. Após uma aclimatização de uma semana, os camundongos foram pesados e reunidos por grupos de 6 animais selecionados de tal modo que a distribuição de seus pesos corporais e de suas taxas de lipídeos plasmáticos determinadas uma primeira vez antes da experiência sejam uniformes. Os compostos testados foram colocados em suspensão em carboximetilcelulose (Sigma C4888) e administrados por sonda intra- gástrica, à razão de uma vez por dia durante 8 dias em dose selecionada. Os animais tiveram acesso livre à água e ao alimento (padrão).A ingestão de alimentos e o ganho de peso são registrados ao longo da experiência. Proveniente da experiência, os animais foram anestesiados após um jejum de 4 h, uma amostra sanguínea foi efetuada em anticoagulante (EDTA) depois os camundongos foram pesados e submetidos a eutanásia. O plasma foi separado por centrifugação a 3000 rpm durante 20 min, as amostras conservadas a + 4 oC.
[0277] Amostras de fígado foram retiradas e congeladas imediatamente no nitrogênio líquido depois conservadas a -80 oC para análises posteriores.
Medida dos lipídeos plasmáticos
[0278] As concentrações plasmáticas de lipídeos (colesterol total e triglicerídeos) são medidas por dosagens enzimáticas (bioMérieux-Lyon-França) de acordo com instruções dos fabricantes.
[0279] A taxa de colesterol e de triglicerídeos plasmática são medidos após 8 dias de tratamento por via oral com os compostos da invenção ; estas taxas são comparadas à obtidas com animais de controle (não tratados por compostos de acordo com a invenção: a diferença medida testemunha o efeito hipolipemiante dos compostos de acordo com a invenção.
Medida do HDL- colesterol
[0280] As lipoproteínas de baixa densidade (VLDL e LDL) são precipitadas por fosfotungstato. O precipitado é eliminado por centrifugação. O HDL- colesterol presente no sobrenadante é quantificado por dosagens enzimáticas (bioMérieux- Lyon-França) de acordo com instruções dos fabricantes.
Análise de expressão gênica por RT-PCR quantitativo
[0281] RNA total é extraído a partir de fragmentos de fígado usando o kit NucleoSpin® 96 RNA (Macherey Nagel, Hoerdt, França) de acordo com instruções dos fabricantes.
[0282] 1 μg de RNA total (quantificado usando o kit de quantificação RibogreenRNA (Molecular Probes)) é então transcrito de modo reverso em DNA complementar por uma reação de 1 hora a 37°C em volume total de 20 μl contendo tampão 1X (Sigma), 1.5mM de DTT, 0.18mM de dNTPs (Promega), 200ng de pdN6 (Amersham), 30U de inibidor de RNase (Sigma), e 1μl de MMLV-RT (Sigma).
[0283] As experiências de PCR quantitativo foram realizadas usando o sistema de detecção de PCR em tempo real MyiQ Single-Color (Biorad, Marnes-la-Coquette, França) e foram realizadas usando o kit iQ SYBR Green Supermix de acordo com instruções dos fabricantes, em placas de 96 cavidades em 5 μl de reações de transcrição reversa diluídas com uma temperatura de hibridação de 55 oC. Os pares de iniciadores específicos dos genes estudados foram usados:• PDK4: iniciador sentido: 5’- TACTCCACTGCTCCAACACCTG-3’ (SEQ ID NO : 1) e iniciador anti-sentido 5’- GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-3’ (SEQ ID NO : 2))• ApoCIII: iniciador sentido: 5’- CTCTTGGCTCTCCTGGCATC-3’ (SEQ ID NO: 3) e iniciador anti-sentido 5’- GCATCCTGGACCGTCTTGGA-3’ (SEQ ID NO: 4).
[0284] A quantidade de fluorescência emitida é diretamente proporcional à quantidade de DNA complementar presente no início da reação e amplificada durante o PCR. Para cada alvo estudado, uma gama é realizada por diluições sucessivas de um conjunto constituído de alguns μl de diferentes reações de transcrição reversa. Os níveis de expressão relativos de cada alvo são assim determinados usando curvas de eficácia obtidas com pontos de gama.
[0285] Os níveis de expressão de genes de interesse são em seguida normalizados em relação ao nível de expressão do gene de referência 36B4 (cujos iniciadores específicos são: iniciador sentido: 5’-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3’ (SEQ ID NO: 7) e iniciador anti-sentido: 5’- GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3’ (SEQ ID NO: 8)).
[0286] O fator de indução, isto é, a relação entre o sinal relativo (induzido pelo composto de acordo com a invenção) e a média dos valores relativos do grupo de controle é, em seguida, calculado para cada amostra. Mais este fator é elevado, mas o composto tem um caráter ativador de expressão gênica. O resultado final é representado como média dos valores de indução em cada grupo de experiência.
ResultadosPeso corporal
[0287] Figuras 2-1 compara o ganho de peso dos animais após 8 dias de tratamento com o composto 1 administrado a 5, 10, e 50 mpk para o ganho de peso dos animais de controle. Inesperadamente, mede-se uma perda de peso corporal junto aos animais tratados com composto 1.
Medida dos lipídeos plasmáticos
[0288] Figuras 2-2 e 2-3 comparam as taxas plasmáticas de colesterol total e de HDL-colesterol após 8 dias de tratamento com o composto 1 a 5, 10, e 50 mpk com as obtidas com os animais de controle. Inesperadamente, as taxas circulantes de colesterol total foram significantemente diminuídas e as taxas de HDL- colesterol foram aumentadas de modo muito significante pelo tratamento.
[0289] Figuras 2-4 e 2-5 comparam taxas plasmáticas de triglicerídeos e de ácidos graxos livres após 8 dias de tratamento com o composto 1 administrado a 5, 10, e 50 mpk com as obtidas dos animais de controle. Inesperadamente , as taxas circulantes de triglicerídeos e de ácidos graxos livres foram diminuídas de modo muito significante pelo tratamento.
Análise de expressão gênica por RT-PCR quantitativo
[0290] Os inventores também evidenciaram que os compostos de acordo com a invenção são, in vivo, reguladores da expressão de genes alvos dos PPARs. Os resultados das figuras 2-6 e 2-7 mostram que o composto 1 administrado a 5, 10, e 50 mpk durante 8 dias para camundongos E2/E2, induz um aumento significante em expressão hepática do gene codificando para PDK4 (figura 2-6) e uma redução na expressão hepática do gene codificando para ApoCIII (figura 2-7). O conjunto deste genes codifica para enzimas fortemente implicadas no metabolismo de lipídeos e de glucídeos e o fato de que sua expressão seja modulada pelos compostos de acordo com a invenção reforça a idéia de que os compostos apresentam um interesse potencial principal no quadro das patologias metabólicas.
Conclusão
[0291] De modo inesperado, os dados experimentais apresentados mostram que os compostos de acordo com a invenção induzem in vivo uma perda de peso corporal, estimulam a síntese de HDL-colesterol em paralelo ao efeito hipolipemiante (diminuição das taxas plasmáticas de colesterol total, triglicerídeos e ácidos graxos livres). Além disso, os dados das experiências mostram que os compostos de acordo com a invenção modulam a expressão de genes regulados pela ativação dos PPARs que codificam para as enzimas fortemente implicadas no metabolismo de lipídeos e glucídeos.
Exemplo 5: Avaliação in vivo, no camundongo C57BI6, de propriedades de peso corporal, de propriedades hipolipemiantes, e estimuladoras da síntese de HDL- colesterol dos compostos de acordo com a invenção. Princípios
[0292] As propriedades sobre o peso corporal e as propriedades hipolipemiantes dos compostos de acordo com a invenção são avaliadas in vivo por medida do peso corporal e por dosagem dos lipídeos plasmáticos, e por análise da expressão de genes dos genes alvos PPARs , após tratamento por via oral pelos compostos de acordo com a invenção do camundongo C57BI6.
ProtocoloTratamento dos animais
[0293] Os camundongos fêmeas C57BI6 foram mantidos sob um ciclo luz/escuro de 12/12 h a uma temperatura constante de 20 ± 3°C. Após uma aclimatização de uma semana, os camundongos foram pesados e reunidos por grupos de 6 animais selecionados de tal modo que a distribuição de seus pesos corporais e de suas taxas de lipídeos plasmáticos determinadas uma primeira vez antes da experiência sejam uniformes. Os compostos testados foram colocados em suspensão em carboximetilcelulose (Sigma C4888) e administrados por sonda intra-gástrica, à razão de uma vez por dia durante 14 dias em dose selecionada. Os animais tiveram acesso livre à água e ao alimento (padrão).A ingestão de alimentos e o ganho de peso são registrados ao longo da experiência. Proveniente da experiência, os animais foram anestesiados após um jejum de 4 h, uma amostra sanguínea foi efetuada em anticoagulante (EDTA) depois os camundongos foram pesados e submetidos a eutanásia. O plasma foi separado por centrifugação a 3000 rpm durante 20 min, as amostras conservadas a + 4 oC.
[0294] Amostras de tecido hepático foram retiradas e congeladas imediatamente no nitrogênio líquido depois conservadas a -80 oC para análises posteriores.
Medidas do HDL colesterol
[0295] As lipoproteínas de baixa densidade (VLDL e LDL) são precipitadas por fosfotungstato. O precipitado é eliminado por centrifugação. O HDL- colesterol presente no sobrenadante é quantificado por dosagens enzimáticas (bioMérieux- Lyon-França) de acordo com instruções dos fabricantes.
Medida de triglicerídeos plasmáticos
[0296] As concentrações plasmáticas de triglicerídeos foram medidas por dosagens enzimáticas (bioMérieux-Lyon-França) de acordo com instruções dos fabricantes
Análise de expressão gênica por RT-PCR quantitativo
[0297] RNA total é extraído a partir de fragmentos de fígado usando o kit NucleoSpin® 96 RNA (Macherey Nagel, Hoerdt, França) de acordo com instruções dos fabricantes.
[0298] 1 μg de RNA total (quantificado por espectrofotometria) é então transcritode modo reverso em DNA complementar por uma reação de 1 hora a 37°C em volume total de 20 μl contendo tampão 1X (Sigma), 1.5mM de DTT, 0,18mM de dNTPs (Promega), 200ng de pdN6 (Amersham), 30U de inibidor de RNase (Sigma), e 1μl de MMLV-RT (Sigma).
[0299] As experiências de PCR quantitativo foram realizadas usando o sistema de detecção de PCR em tempo real MyiQ Single-Color (Biorad, Marnes-la-Coquette, França) e foram realizadas usando o kit iQ SYBR Green Supermix de acordo com instruções dos fabricantes, em placas de 96 cavidades em 5 μl de reações de transcrição reversa diluída com uma temperatura de hibridação de 55 oC. Os pares de iniciadores específicos dos genes estudados foram usados:• PDK4: iniciador sentido: 5’-TACTCCACTGCTCCAACACCTG-3’ (SEQ ID NO : 1) e iniciador anti-sentido 5’- GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-3’ (SEQ ID NO: 2))• ApoCIII: iniciador sentido: 5’-CTCTTGGCTCTCCTGGCATC-3’ (SEQ ID NO: 3) e iniciador anti-sentido 5’- GCATCCTGGACCGTCTTGGA-3’ (SEQ ID NO: 4).
[0300] A quantidade de fluorescência emitida é diretamente proporcional à quantidade de DNA complementar presente no início da reação e amplificada durante o PCR. Para cada alvo estudado, uma gama é realizada por diluições sucessivas de um conjunto constituído de alguns microlitros de diferentes reações de transcrição reversa. Os níveis de expressão relativos de cada alvo são assim determinados usando curvas de eficácia obtidas com pontos de gama.
[0301] Os níveis de expressão de genes de interesse são em seguida normalizados em relação ao nível de expressão do gene de referência 36B4 (cujos iniciadores específicos são: iniciador sentido: 5’-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3’ (SEQ ID NO: 7) e iniciador anti-sentido: 5’- GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3’ (SEQ ID NO: 8)).
[0302] O fator de indução foi em seguida calculado para cada amostra. Mais este fator é elevado, mas o composto tem um caráter ativador de expressão gênica. O resultado final é representado como média dos valores de indução em cada grupo de experiência.
ResultadosPeso corporal
[0303] Figura 3-1 compara o ganho de peso dos animais após 14 dias de tratamento com o composto 1 administrado a 3, 10, e 30 mpk para o ganho de peso dos animais de controle. Inesperadamente, uma perda de peso foi medida junto aos animais tratados com o composto 1.
Medida de lipídeos plasmáticos
[0304] Figura 3-2 compara nas taxas plasmáticas de HDL-colesterol após 14 dias de tratamento com o composto 1 administrado a 3, 10, e 30 mpk com as taxas obtidas com os animais de controle. . Inesperadamente, as taxas circulantes de HDL- colesterol foram aumentadas de modo muito significante pelo tratamento.
[0305] Figura 3-3 compara as taxas plasmáticas de triglicerídeos após 14 dias de tratamento com o composto 1 administrado a 3, 10, e 30 mpk com as taxas obtidas com os animais de controle. Inesperadamente, as taxas circulantes de triglicerídeos foram diminuídas de modo muito significante pelo tratamento.
Análise de expressão gênica por RT-PCR quantitativo
[0306] Os inventores também evidenciaram que os compostos de acordo com a invenção são, in vivo, reguladores da expressão de genes alvos dos PPARs. Os resultados das figuras 3-4 e 3-5 mostram que o composto 1 administrado a 3, 10, e 30 mpk durante 14 dias para camundongos C57BI6, induz um aumento significante em expressão hepática do gene codificando para PDK4 (figura 3-4) e uma redução na expressão hepática do gene codificando para ApoCIII (figura 3-5). O conjunto deste genes codifica para enzimas fortemente implicadas no metabolismo de lipídeos e de glucídeos e o fato de que sua expressão seja modulada pelos compostos de acordo com a invenção reforça a idéia de que os compostos apresentam um interesse potencial principal no quadro das patologias metabólicas.
Conclusão
[0307] De modo inesperado, os dados experimentais apresentados mostram que os compostos de acordo com a invenção induzem in vivo uma perda de peso corporal, estimulam a síntese de HDL-colesterol em paralelo ao efeito hipolipemiante (diminuição das taxas plasmáticas triglicerídeos). Além disso, os dados das experiências mostram que os compostos de acordo com a invenção modulam a expressão de genes regulados pela ativação dos PPARs que codificam para as enzimas fortemente implicadas no metabolismo de lipídeos e glucídeos.Exemplo 6: Avaliação in vivo, no camundongo db/db, de propriedades de peso corporal, de propriedades antidiabéticas, hipolipemiantes, e estimuladoras da síntese de HDL-colesterol dos compostos de acordo com a invenção.Princípio
[0308] As propriedades sobre o peso corporal , de insulino-resistência e as propriedades hipolipemiantes dos compostos de acordo com a invenção são avaliadas in vivo por medida do peso corporal, por medida das taxas plasmáticas de glicose e de insulina, por dosagem dos lipídeos plasmáticos, por análise da divisão do colesterol nas diferentes frações lipoprotéicas e por análise da expressão de genes dos genes alvos PPARs , após tratamento por via oral pelos compostos de acordo com a invenção do camundongo db/db.
ProtocoloTratamento dos animais
[0309] Os camundongos fêmeas db/db foram mantidos sob um ciclo luz/escuro de 12/12 h a uma temperatura constante de 20 ± 3°C. Após uma aclimatização de uma semana, os camundongos foram pesados e reunidos por grupos de 8 animais selecionados de tal modo que a distribuição de seus pesos corporais e de suas taxas de lipídeos plasmáticos determinadas uma primeira vez antes da experiência sejam uniformes. Os compostos testados foram colocados em suspensão em carboximetilcelulose (Sigma C4888) e administrados por sonda intra-gástrica, à razão de uma vez por dia durante 28 dias em dose selecionada. Os animais tiveram acesso livre à água e ao alimento (padrão).A ingestão de alimentos e o ganho de peso são registrados ao longo da experiência. Proveniente da experiência, os animais foram anestesiados após um jejum de 4 h, uma amostra sanguínea foi efetuada em anticoagulante (EDTA) depois os camundongos foram pesados e eutanasiados. O plasma foi separado por centrifugação a 3000 rpm durante 20 min, as amostras conservadas a + 4 oC.
[0310] Amostras de tecido hepático e de tecido muscular esquelético foram retiradas e congeladas imediatamente no nitrogênio líquido depois conservadas a -80 oC para análises posteriores.
Medida da glicemia e da insulenemia plasmática
[0311] A glicose plasmática de murinos foi dosada de acordo com um método enzimo-colorimétrico usando o kit Glucose RTU kit (Biomérieux). Glicose é transformada em ácido glucônico pela ação da glicose oxidase; e esta reação libera peróxido de hidrogênio. O peróxido de hidrogênio é dosado de acordo com a reação de Trinder que, por ação de uma peroxidase em presença de fenol e de amino-4- antipirina, produz água e um produto colorido, a quinoneimina. A intensidade da coloração devido à quinoneimina é proporcional à quantidade de glicose presente na amostra.
[0312] A dosagem de insulina de murinos é efetuada pelo método ELISA (usando o kit INSKR020 de Crystal chem.).Um anticorpo anti-insulina de camundongo é revestido em uma microplaca. O soro a dosar para a insulina é em seguida depositado na placa. Um anticorpo anti-insulina de cobaia irá reconhecer o complexo insulina/ anticorpo monoclonal anti-insulina de camundongo e fixar ai.Por fim, um anticorpo anti-cobaia marcado em peroxidase adicionado se fixando ao anticorpo anti-insulina de cobaia.A reação colorimétrica é realizada por adição do substrato de enzima OPD (orto fenil diamina). A intensidade da coloração é proporcional à quantidade de insulina presente na amostra.
Medida dos lipídeos plasmáticos
[0313] As concentrações de lipídeos plasmáticas (colesterol total e triglicerídeos) são medidas por testes enzimáticos (bioMérieux-Lyon-França) de acordo com as instruções do fabricante .
Análise da distribuição de colesterol nas frações lipoprotéicas plasmáticas.
[0314] As diferentes frações de lipídeos (VLDL, LDL, HDL) no plasma foram separadas usando cromatografia de filtração de gel. As concentrações de colesterol foram em seguida medidas em cada fração por dosagens enzimáticas (bioMérieux- Lyon-França) de acordo com as instruções do fabricante.
Análise de expressão gênica por RT-PCR quantitativo Tecido hepático
[0315] RNA total foi extraído de fragmentos do fígado usando um kit NucleoSpin® 96 RNA (Macherey Nagel, Hoerdt, França) de acordo com instruções dos fabricantes. Tecido esqueletal
[0316] RNA total foi extraído de fragmentos de músculo esquelético gastrocnemiano usando o kit RNeasy® Fibrous Tissue (Qiagen) de acordo com instruções dos fabricantes.
[0317] 1 μg de RNA total (quantificado por espectrofotometria) é então transcritode modo reverso em DNA complementar por uma reação de 1 hora a 37°C em volume total de 20 μl contendo tampão 1X (Sigma), 1.5mM de DTT, 0,18mM de dNTPs (Promega), 200ng de pdN6 (Amersham), 30U de inibidor de RNase (Sigma), e 1μl de MMLV-RT (Sigma).
[0318] As experiências de PCR quantitativo foram realizadas usando o sistema de detecção de PCR em tempo real MyiQ Single-Color (Biorad, Marnes-la-Coquette, França) e foram realizadas usando o kit iQ SYBR Green Supermix de acordo com instruções dos fabricantes, em placas de 96 cavidades em 5 μl de reações de transcrição reversa diluídas com uma temperatura de hibridação de 55 oC. Os pares de iniciadores específicos dos genes estudados foram usados:• PDK4: iniciador sentido: 5’-TACTCCACTGCTCCAACACCTG-3’ (SEQ ID NO : 1) e iniciador anti-sentido 5’- GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-3’ (SEQ ID NO: 2))• UCP2: iniciador sentido: 5’-GTCGGAGATACCAGAGCACTGTCG-3’ (SEQ ID NO: 5) e iniciador anti-sentido 5’- CACATCAACAGGGGAGGCGA-3’ (SEQ ID NO: 6)
[0319] A quantidade de fluorescência emitida é diretamente proporcional à quantidade de DNA complementar presente no início da reação e amplificada durante o PCR. Para cada alvo estudado, uma gama é realizada por diluições sucessivas de um conjunto constituído de alguns μl de diferentes reações de transcrição reversa. Os níveis de expressão relativos de cada alvo são assim determinados usando curvas de eficácia obtidas com pontos de gama.
[0320] Os níveis de expressão de genes de interesse são em seguida normalizados em relação ao nível de expressão do gene de referência 36B4 (cujos iniciadores específicos são: iniciador sentido: 5’-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3’ (SEQ ID NO: 7) e iniciador anti-sentido: 5’- GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3’ (SEQ ID NO: 8)) e no tecido muscular esquelético em relação ao nível de expressão do gene de referência 18S (do qual os iniciadores específicos são: iniciador sentido: 5’-CGGACACGGACAGGATTGACAG- 3' (SEQ ID NO: 9) e iniciador anti-sentido: 5’-AATCTCGGGTGGCTGAACGC-3' (SEQ ID NO: 10)). O fator de indução, é, em seguida, calculado para cada amostra. Mais este fator é elevado, mas o composto tem um caráter ativador de expressão gênica. O resultado final é representado como média dos valores de indução em cada grupo de experiência.ResultadosPeso corporal
[0321] Figura 4-1 compara o ganho de peso dos animais após 28 dias de tratamento com o composto 1 administrado a 50 mpk para o ganho de peso dos animais de controle. Inesperadamente, mede-se uma perda de peso corporal junto aos animais tratados com composto 1.
Medida da glicemia e da insulemia
[0322] Figuras 4-2 e 4-3 comparam as taxas plasmáticas de glicose e de insulina após 28 dias de tratamento com o composto 1 administrado a 50 mpk. Inesperadamente, a glicemia e a insulenemia foram significantemente diminuídas pelo tratamento.
Medida dos lipídeos plasmáticos
[0323] Figuras 4-4 compara taxas plasmáticas de colesterol após 28 dias de tratamento com os compostos 1 e 3 administrados a 50 mpk com as taxas obtidas dos animais de controle. Inesperadamente , a taxa de colesterol total foi significantemente aumentada. A figura 4-5 mostra que este aumento do colesterol total plasmático corresponde a um aumento significante da fração HDL- colesterol induzida pelo tratamento dos animais com os compostos 1 e 3 a 50 mpk.
[0324] As figuras 4-6 e 4-7 comparam as taxas plasmáticas de triglicerídeos e de ácidos graxos livres após 28 dias de tratamento com os compostos 1 e 3 administrados a 50 mpk nas taxas obtidas dos animais de controle. Inesperadamente, as taxas circulantes de triglicerídeos e de ácidos graxos livres foram diminuídas de modo muito significante pelos tratamentos.
Análise de expressão gênica por RT-PCR quantitativo
[0325] Os inventores também evidenciaram que os compostos de acordo com a invenção são, in vivo, reguladores da expressão de genes alvos dos PPARs. Os resultados das figuras 4-8 e 4-9 mostram que os compostos 1 e 3 administrados a 50 mpk durante 28 dias para camundongos db/db, induzem um aumento significante em expressão hepática do gene codificando para PDK4 (figura 4-8) e uma redução na expressão do músculo esquelético do gene codificando para UCP2 (figura 4-9). O conjunto deste genes codifica para enzimas fortemente implicadas no metabolismo de lipídeos e de glucídeos e a dissipação de energia e o fato de que sua expressão seja modulada pelos compostos de acordo com a invenção reforça a idéia de que os compostos apresentam um interesse potencial principal no quadro das patologias metabólicas.Conclusão
[0326] De modo inesperado, os dados experimentais apresentados mostram que os compostos de acordo com a invenção induzem in vivo uma perda de peso corporal, uma melhora da sensibilidade a insulina, estimulam a síntese de HDL-colesterol em paralelo ao efeito hipolipemiante (diminuição d as taxas plasmáticas de triglicerídeos). Além disso, os dados das experiências mostram que os compostos de acordo com a invenção modulam a expressão de genes regulados pela ativação dos PPARs que codificam para as enzimas fortemente implicadas no metabolismo de lipídeos, dos glucídeos e a dissipação de energia.Exemplo 7: Avaliação in vitro das propriedades anti-inflamatórias dos compostos de acordo com a invençãoPrincipio
[0327] Os efeitos anti-inflamatórios dos compostos de acordo com a invenção foram avaliados por medida da secreção de MCP1 (Monocyte chemotactic protein-1) por monócitos tratados durante 24 horas com compostos de acordo com a invenção e estimulados simultaneamente com PMA (Phorbol 12-myristate 13-acetate, que provoca uma resposta inflamatória em células e sua diferenciação em macrófagos). Mais a quantidade de MCP-1 secretado é diminuída, mais o composto de acordo com a invenção inibe a reação inflamatória. ProtocoloCultura e tratamento de células THP-1
[0328] A linhagem de monócitos humanos THP-1 ( proveniente de ATCC) é cultivada em um meio - RPMI1640 com 25mM Hepes (Gibco; 42401-018), 1% glutamina (Gibco; 25030-24) 1% penicilina/ estreptomicina (Biochrom AG; A 2213), e 10% soro de bezerro fetal descomplementado (SVF. Gibco; 26050-088).
[0329] As células foram semeadas em placas de 24 cavidades (Primaria BD Falcon) a uma densidade de 870.000 células /cavidade então foram incubadas a 37°C e 5% CO2 durante 24 horas em um meio de cultura contendo 0,2% de soro de bezerro fetal na presença de 5 ng/ml de forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) e 1μM do composto 3 de acordo com a invenção. O composto de acordo com a invenção é dissolvido em sulfóxido de dimetila (DMSO, Fluka; 41640). O efeito dos compostos de acordo com a invenção é comparado com o efeito de DMSO sozinho.
Medida da secreção de MCP1
[0330] O meio de tratamento é recuperado e a concentração de MCP1 é medida usando um kit ELISA « Human MCP-1 ELISA Set » (BD OptEIA; 555179) de acordo com as instruções do fabricante.
[0331] MCP1 é fixado em uma placa e reconhecido por um anticorpo específico anti-MCP1. O anticorpo é, por sua vez, especificamente reconhecido por um segundo tipo de anticorpo copulado a uma enzima peroxidase. A coloração resultante da atividade enzimática é proporcional à quantidade de MCP1 fixado e pode ser medida por espectrofotometria. Uma gama é realizada a partir de um ponto de complemento conhecido e permite calcular a concentração em MCP1 de cada amostra.
[0332] O fator de indução, isto é, a relação entre o sinal induzido pelo composto de acordo com a invenção e o sinal do grupo de controle, foi em seguida calculado. Mais este fator é fraco, mais o composto tem um caráter inibidor da secreção de MCP1. O resultado final é representado como media dos valores de indução de cada grupo experimental.
Resultados
[0333] Os inventores evidenciaram, sobre monócitos in vitro, que os compostos de acordo com a invenção tem efeitos anti-inflamatórios. Os resultados apresentados para a figura 5 mostram que o composto 3 de acordo com a invenção, a 1 μM, induz uma diminuição significante da secreção de MCP1 pelos monócitos.
Conclusão
[0334] De modo inesperado, os dados experimentais apresentados mostram que os compostos de acordo com a invenção tem uma ação anti-inflamatória nos monócitos estimulados com PMA.
Conclusão geral
[0335] Os inventores evidenciaram que os compostos de acordo com a invenção acarretam uma perda de peso corporal, tem propriedades hipolipemiantes, ao diminuírem a taxa de colesterol e de triglicerídeos plasmáticos, propriedades estimuladoras da síntese de HDL- colesterol assim como propriedades antidiabéticas. Além disso, os inventores evidenciaram que os compostos de acordo com a invenção são reguladores da expressão de genes codificando para as enzimas fortemente implicadas no metabolismo de lipídeos, glucídeos e a dissipação de energia.
[0336] Os inventores evidenciaram igualmente que os compostos de acordo com a invenção apresentavam propriedades anti-inflamatórias.
[0337] Estes resultados, obtidos in vivo e in vitro, testemunham um potencial terapêutico dos compostos de acordo com a invenção frente a patologias principais, como as dislipidemias, a diabete de tipo 2 e a obesidade.
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Claims (11)

1. Compostos derivados de 1,3-difenilpropano substituídos, caracterizados pelo fato de terem a fórmula geral (I):
Figure img0055
em que:X1 representa um átomo de halogênio, um grupamento R1 ou G1-R1;X2 representa um átomo de hidrogênio;X3 representa um grupamento R3;X4 representa um grupamento G4-R4, em que R4 representa um átomo de oxigênio;X5 representa um grupamento R5;R1 representando um grupamento alquila halogenada;R3 e R5, idênticos ou diferentes, representando um grupamento alquila não substituído;G1 representando um átomo de oxigênio ou enxofre;R4 representa um grupamento alquila substituído por um grupamento COOR9;A representa:(i) um grupamento -CR6R7, em que:R6 representa um átomo de hidrogênio,R7 representa um grupamento hidróxi, ou um grupamento -OR8, R8 representando um grupamento alquila, substituído ou não por um grupamento arila, heteroarila ou cicloalquila, ou(ii) grupamento carbonila (CO),D representa um átomo de carbono ligado a dois átomos de hidrogênio (CH2),R9 representando um átomo de hidrogênio ou um radical alquila não substituído;seus estereoisômeros, diastereoisômeros, enantiômeros, puros ou em mistura, misturas racêmicas, isômeros geometricos, tautômeros, sais, hidratos, solvatos, formas sólidas assim como suas misturas.
2. Compostos de acordo com a reivindicação 1, caracterizados em que A representa um grupamento carbonila (CO).
3. Compostos de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizados em que X4 representa G4R4, em que G4 representa um átomo de oxigênio e R4 representa um grupamento alquila compreendendo 1 a 10 átomos de carbono e substituído por um grupamento COOR9, R9 sendo como definido na reivindicação 1.
4. Compostos de acordo com a reivindicação 3, caracterizados em que X4 corresponde à fórmula -OC(CH3)2COOR9, R9 sendo como definidos na reivindicação 1.
5. Compostos de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizados em que R3 e R5, representam um grupamento alquila não substituído compreendendo 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono.
6. Compostos de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizados em que X1 representa um átomo de halogênio ou grupamento G1R1, G1 sendo como definido na reivindicação 1 e R1 representando um grupamento alquila halogenada compreendendo 1, 2 ou 3 átomos de carbono.
7. Compostos de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizados em que são escolhidos dentre:ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometoxi)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]- 2-metilpropanóico,ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometiltio)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]- 2-metilpropanóico,ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-bromofenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2- metilpropanóico, ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(trifluorometil)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2- metilpropanóico,ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-hidroxi-3-[4-(trifluorometiltio)fenil]propil]fenoxi]-2-metilpropanóico,acido 2-[2,6-dimetil-4-(3-(piridin-3-ilmetoxi)-3-[4-(trifluorometoxi)fenil]propil]fenoxi]-2-metilpropanóico,ácido 2-[4-(3-(4-iodobenziloxi)-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)-2,6- dimetilfenóxi]-2-metilpropanóico,ácido 2-[4-(3-(4-metoxi)-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)-2,6- dimetilfenoxi]-2-metilpropanóico,ácido 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(3,3,3-trifluoropropiloxi)fenil]-3-oxo-propil]fenoxi]-2-metilpropanóico,ácido 2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(2,2,2-trifluoroetoxi)fenil)propil)fenoxi)-2-metilpropanóico,ácido 2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(2,2,2-trifluoroetiltio)fenil)propil)fenoxi)-2-metilpropanóico,ácido 2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil)propil)fenoxi)propanóico,ácido 2-[4-(3-hidroxi-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)-2,6- dimetilfenoxi]-2-metilpropanóico,ácido 4-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi)- 2,2-dimetilbutanóico,2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi)-2-tertiobutil metilpropanoato,2-(2,6-dimetil-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorometoxi)fenil) propil)fenoxi)-2-isopropil metilpropanoato.
8. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender, em um suporte aceitável no plano farmacêutico, pelo menos um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, eventualmente em associação com um ou vários outros princípios ativos terapêuticos e/ou cosméticos.
9. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de ser para o tratamento de complicações associadas com sindrome metabólica, insulino-resistência, diabete, dislipidemias, aterosclerose, doenças cardiovasculares, obesidade, hipertensão, doenças inflamatórias, patologias neurodegenerativas, ou cânceres.
10. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8 caracterizada pelo fato de ser para o tratamento de dislipidemias.
11. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8 caracterizada pelo fato de ser para o tratamento de fatores de risco cardiovascular ligados aos distúrbios do metabolismo lipídico e/ou glucídico.
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