WO2008087365A2 - Derives de 1,3-diphenylpropane substitues, preparations et utilisations - Google Patents

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    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/67—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of saturated acids
    • C07C69/708—Ethers
    • C07C69/712—Ethers the hydroxy group of the ester being etherified with a hydroxy compound having the hydroxy group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring

Definitions

  • the invention relates to novel compounds derived from substituted 1,3-diphenylpropane, the pharmaceutical compositions comprising them and their therapeutic applications, particularly in the fields of human and animal health.
  • the inventors have surprisingly demonstrated that the compounds according to the invention intrinsically possess PPAR (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor) agonist properties.
  • PPAR Peroxisome Proliferator-Activated Receptor
  • the molecules described in the invention are therefore of particular interest for treating the complications associated with the metabolic syndrome, atherosclerosis, cerebral ischemia, autoimmune diseases, insulin resistance, obesity, hypertension, diabetes, dyslipidemias, cardiovascular diseases, inflammatory diseases (asthma, etc.), neurodegenerative pathologies (Alzheimer's disease, etc.), cancers, etc., as well as to reduce overall cardiovascular risk.
  • the compounds according to the invention can be used for the treatment of dyslipidemias.
  • Diabetes, obesity and dyslipidemia are some of the clearly identified cardiovascular risk factors that predispose an individual to develop cardiovascular disease (Mensah M, 2004 ). These risk factors add up to lifestyle risk factors such as smoking, physical inactivity and unbalanced diets. A synergistic effect exists between these different factors: the concomitant presence of several of them leads to a dramatic worsening of the cardiovascular risk and it is then appropriate to speak of global risk ("global risk”) for cardiovascular diseases.
  • the prevalence of dyslipidemia reached 43.6% of the population in 2004 in the main developed countries.
  • the prevalence of diabetes, currently rising sharply, is becoming increasingly significant in the epidemiology of diseases Cardiovascular: The prevalence of diabetes is estimated at 7.6% of the population for 2010 (Fox-Tucker J, 2005).
  • cardiovascular disease is the leading cause of death in industrialized countries and is becoming increasingly common in developing countries.
  • diseases include coronary heart disease, cerebral ischemia and peripheral arterial diseases.
  • the compounds according to the invention are of particular interest for the treatment of diseases related to disorders of lipid and / or carbohydrate metabolism, such as diabetes (type 2 diabetes), obesity, dyslipidemia or inflammation, as well as for the reduction of the overall cardiovascular risk.
  • diseases related to disorders of lipid and / or carbohydrate metabolism such as diabetes (type 2 diabetes), obesity, dyslipidemia or inflammation, as well as for the reduction of the overall cardiovascular risk.
  • PPARs ( ⁇ , ⁇ and ⁇ ) are indeed known to be involved in this type of pathology (Kota BP et al., 2005): ligands of these receptors are therefore marketed to treat such pathologies (Lefebvre P et al. , 2006) and many PPAR modulators, agonists or antagonists, selective or not, are currently in advanced pharmaceutical development.
  • a modulator
  • PPAR having beneficial effects on insulin resistance, obesity, dyslipidemia, hypertension and / or inflammation could be used in the treatment of metabolic syndrome (or syndrome X) (Liu Y and Miller A, 2005).
  • the family of PPARs comprises three isoforms, designated ⁇ , ⁇ and ⁇ (also called ⁇ ), each coded by a different gene. These receptors are part of the superfamily of nuclear receptors and transcription factors that are activated by the binding of certain fatty acids and / or their lipid metabolites. Activated PPARs form heterodimers with acid receptors retinoic 9-cis (RXR or Retinoid X Receptor) and bind to specific response elements (PPRE or Peroxisome Proliferator Response Element) at the promoter of their target genes, thus allowing control of transcription.
  • RXR or Retinoid X Receptor acid receptors retinoic 9-cis
  • PPRE Peroxisome Proliferator Response Element
  • PPAR ⁇ controls lipid metabolism (hepatic and muscular) and glucose homeostasis by direct control of transcription of genes encoding proteins involved in lipid homeostasis. It exerts anti-inflammatory and anti-proliferative effects and prevents the atherogenic effects of cholesterol accumulation in macrophages by stimulating cholesterol efflux (Lefebvre P, Chinetti G, Fruchart JC and Staels B, 2006).
  • the fibrates (fenofibrate, bezafibrate, ciprofibrate, gemfibrozil), via PPAR ⁇ , are thus used clinically in the treatment of certain dyslipidemias by lowering triglycerides and increasing the plasma levels of HDL cholesterol (High Density Lipoprotein).
  • PPAR ⁇ is a key regulator of adipogenesis, which is involved in the lipid metabolism of mature adipocytes, in glucose homeostasis, including insulin resistance, inflammation, cholesterol macrophages and in cell proliferation (Lehrke M and Lazar MA, 2005). PPAR ⁇ therefore plays a role in the pathogenesis of obesity, insulin resistance and diabetes.
  • Thiazolidinediones Roslitazone, Troglitazone, etc. are PPAR ⁇ receptor ligands used in the treatment of type 2 diabetes.
  • PPAR ⁇ ligands there are PPAR ⁇ ligands currently in clinical development (L-165041 (CAS Registry Number 79558-09-1), GW501516 (CAS Registry Number 317318-70-0)) but no PPAR ⁇ ligand is currently used as a drug.
  • This receptor is an attractive target for the development of drugs that can be used in the treatment of dyslipidemias, atherosclerosis, obesity and insulin resistance: PPAR ⁇ is indeed involved in the control of lipid and carbohydrate metabolism, in the energy balance, in neurodegeneration, in obesity, in the formation of foam cells and in inflammation (Gross B et al., 2005).
  • PPAR ligands Beyond the direct role played by PPAR ligands on the regulation of lipid and carbohydrate metabolism, these molecules have a spectrum of action pleiotropic due to the great diversity of PPAR target genes. These multiple properties make PPAR therapeutic targets of interest for the treatment of various pathologies, including cardio-metabolic pathologies (ie cardiovascular and metabolic pathologies) as well as to reduce the overall cardiovascular risk.
  • cardio-metabolic pathologies ie cardiovascular and metabolic pathologies
  • PPAR ligands have a neuroprotective role in Alzheimer's disease, multiple sclerosis, Parkinson's disease and more generally in any pathology involving death or neuronal degeneration, whether neurons of the central nervous system or peripheral, death or degeneration of oligodendrocytes, death or degeneration of glial cells, inflammation of glial cells (ie astrocytes, microglia or oligodendrocytes) or Schwann cells.
  • PPAR ⁇ agonists have recently been shown to preserve learning and memory in rats for which Alzheimer's disease has been induced (Monte SM et al., 2006). It has also been shown that oral administration of PPAR ⁇ agonists reduces the clinical symptoms and activation of astroglial and microglial inflammation in a multiple sclerosis model (Polak, 2005).
  • the compounds according to the invention by virtue of their PPAR agonist properties, therefore represent an advantageous therapeutic tool for the amelioration of pathologies related to disorders of lipid and / or carbohydrate metabolism, for the reduction of global cardiovascular risk as well as for neuroprotection.
  • the compounds according to the invention have PPAR ⁇ and PPAR ⁇ agonist properties and are therefore of interest in the treatment of metabolic pathologies such as the metabolic syndrome (whose characteristics are obesity, in particular abdominal obesity, abnormal concentration). blood lipids (high triglycerides and / or low HDL cholesterol (dyslipidemia)), high blood glucose and / or insulin resistance and hypertension) and in the treatment of dyslipidemias.
  • the subject of the present invention is compounds derived from 1,3-diphenylpropane of the following general formula (I):
  • X1 represents a halogen, a group R1, -SR1 or -OR1;
  • X2 is hydrogen, halogen, R2, -SR2 or -OR2;
  • X3 represents a halogen, a group R3, -SR3 or -OR3;
  • X4 represents hydrogen, a halogen, a group R4, -SR4 or -OR4;
  • X5 represents a halogen, a group R5, -SR5 or -OR5;
  • X6 represents a halogen, a group R6, -OH, -SH, -SR6 or -OR6
  • X7 represents a halogen, a group R7, -SR7 or -OR7
  • X8 represents a group R8, -SR8 or -OR8;
  • R1, R3, R5 and R7 which may be identical or different, representing a hydrogen or an alkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl or heteroaryl group;
  • R 2, R 4 and R 6, which may be identical or different, represent an alkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl or heteroaryl group;
  • R8 represents an alkyl group substituted with one or more substituents of group 1 or group 2;
  • A represents:
  • R9 and R10 identical or different, representing a hydrogen, a hydroxyl group, an alkyl group or a group -OR11, R11 being as defined below, (ii) a carbonyl group (CO),
  • oxime group NOH
  • R11 representing an alkyl group, optionally substituted with a cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl or heteroaryl group as defined below
  • B represents:
  • substituents of group 1 are chosen from -COOR12 and -CONR12R13;
  • substituents of group 2 are chosen from -SO3H and -SO 2 NRI 2R13;
  • R12 and R13 identical or different, representing a hydrogen or an alkyl radical optionally substituted with at least one substituent of group 1 or 2;
  • A represents a carbonyl group
  • alkyl denotes a linear, branched, halogenated or non-halogenated saturated hydrocarbon radical having more particularly from 1 to 24, preferably from 1 to 10, and more particularly having 1, 2, 3 , 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 carbon atoms. Mention may be made, for example, of methyl, trifluoromethyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, pentyl, neopentyl or n-hexyl radicals.
  • cycloalkyl refers to an alkyl group as defined above and forming at least one ring.
  • cycloalkyl groups having from 3 to 8 carbon atoms of the cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl and cyclooctyl groups.
  • heterocycloalkyl denotes a saturated or unsaturated alkyl group forming at least one ring interrupted by one or more heteroatoms chosen from among N, O, S or P.
  • aziridine, trifluoromethylbenzoyl may be mentioned as heterocycloalkyl groups.
  • aryl refers to aromatic groups preferably comprising 5 to 14 carbon atoms, preferably 6 to 14 carbon atoms (ie 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 carbon atoms ). They are usually mono- or bi-cyclic. Mention may be made, for example, of phenyl, benzyl, ⁇ -naphthyl, ⁇ -naphthyl, anthracenyl or fluorenyl. In the context of the present invention, the aryl groups may be substituted with one or more substituents, which may be identical or different.
  • substituents of the aryl groups there may be mentioned by way of example, halogens, alkyl groups (as defined above) and alkyloxy (defined as an alkyl chain, as defined above, linked to the molecule via an oxygen (ether linkage) such as methyl, trifluoromethyl, methoxy and trifluoromethoxy, amines, nitro groups, hydroxy groups, aryl, heteroaryl and heterocycle groups.
  • halogens alkyl groups (as defined above) and alkyloxy (defined as an alkyl chain, as defined above, linked to the molecule via an oxygen (ether linkage) such as methyl, trifluoromethyl, methoxy and trifluoromethoxy, amines, nitro groups, hydroxy groups, aryl, heteroaryl and heterocycle groups.
  • heteroaryl refers to aromatic groups preferably comprising 3 to 14 carbon atoms, preferably 3 to 8 carbon atoms (ie 3, 4, 6, 7 or 8 carbon atoms), interrupted by one or more heteroatoms chosen from N, O, S or P.
  • heteroaryl groups having from 3 to 8 carbon atoms pyrrole, imidazole and pyridine may be mentioned.
  • the halogen atoms are chosen from bromine, fluorine, iodine and chlorine atoms, preferably from bromine, fluorine and chlorine atoms.
  • a particular aspect of the invention relates to the compounds of general formula (I) wherein A represents a carbonyl group (CO).
  • R11 represents a methyl group.
  • A represents a group -CR9R10, R9 representing a hydrogen and R10 representing a hydroxyl group, an alkyl group or a group -OR11, R11 representing a grouping. alkyl, substituted or unsubstituted with a cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl or heteroaryl group.
  • R 11 represents an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group or a benzyl group; said alkyl, phenyl or benzyl groups being optionally halogenated (i.e. halogenated or non-halogenated).
  • R 11 may represent an alkyl group preferably comprising 1, 2, 3 or 4 carbon atoms, preferably 2 carbon atoms, advantageously R 11 represents the ethyl group.
  • the invention relates to compounds of general formula (I) in which A represents a group -CR9R10, R9 representing a hydrogen and R10 representing a hydroxyl group,
  • Another particular aspect of the invention relates to the compounds of general formula (I) in which X 8 represents a group R 8, -OR 8 or -SR 8, R 8 representing an alkyl group substituted with a substituent of group 1.
  • X 8 represents a group -OR 8 in which R 8 represents an alkyl group substituted with a substituent of group 1.
  • the alkyl group of R 8 has 1 to 8 carbon atoms, more preferably 1 to 5 carbon atoms.
  • R12 and R13 which are identical or different, preferably represent a hydrogen or an alkyl radical having 1 to 4 carbon atoms.
  • the substituent of group 1 is of the type -COOR12, R12 being as defined above and preferably representing a hydrogen or an alkyl group comprising 1, 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms, preferably comprising 1 , 2, 3 or 4 carbon atoms, in particular a tert-butyl group.
  • R 8 represents a methylene radical, said methylene radical being unbranched or branched by one or two alkyl or alkenyl groups having 1 to 4 carbon atoms, and bonded to a substituent of group 1, with
  • R12 and R13 identical or different, representing a hydrogen or an alkyl radical having 1 to 4 carbon atoms.
  • X8 represents a group -OC (CHs) 2 COOH or -OC (CHS) 2 COOC (CH 3 ) S, -OCH (CH 2 CH 3 ) COOC (CH 3) 3J
  • Another particular object of the invention relates to the compounds of general formula (I) in which X6 and X7, which are identical or different, represent a halogen, preferably chlorine or fluorine.
  • X6 and X7 are identical and represent a halogen, preferably a chlorine or fluorine atom, more preferably chlorine.
  • R1, R3, R5 and R7 which are identical or different, chosen from a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group and a benzyl group; said alkyl, phenyl or benzyl groups being optionally halogenated (that is to say halogenated or non-halogenated), and R 2, R 4 and R 6, which may be identical or different, chosen from an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group and a benzyl group; said alkyl, phenyl or benzyl groups being optionally halogenated (i.e. halogenated or non-halogenated).
  • R1, R3, R5 and R7 which are identical or different, chosen from a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group and a benzyl group; said alkyl, phenyl or benzyl groups being optionally halogenated (
  • Another particular object of the invention relates to the compounds of general formula (I) in which X 3 represents a halogen, a group R 3, -SR 3 or -OR 3, R 3 representing an alkyl, cycloalkyl, aryl or heteroaryl group.
  • R 3 represents an alkyl or aryl group.
  • R 3 represents an alkyl group comprising 1 to 4 carbon atoms, especially 1, 2 or 3 carbon atoms, more preferably halogen, or R 3 represents an aryl group comprising 5, 6, 7 or 8 carbon atoms, in particular a phenyl or benzyl group.
  • X 3 represents a group -O-phenyl, -CF 3 , -OCF 3 , -SCH 3 , -OCH 3 .
  • Another preferred aspect relates to the compounds of general formula (I) in which X 3 represents a halogen, preferably a bromine.
  • Another particular object of the invention relates to the compounds of general formula (I) characterized by combinations of these particular modes.
  • Another particular object of the invention relates to the compounds of general formula (I) in which X1, X2, X4 and X5 represent a hydrogen.
  • Another particular object of the invention relates to the compounds of general formula (I) in which X 3 represents a halogen, a group R 3, -SR 3 or -OR 3, wherein R 3 represents an alkyl, cycloalkyl, aryl or heteroaryl group and in which X 1, X 2 X4 and X5 represent hydrogen.
  • R 3 represents an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group and a benzyl group, optionally halogenated (that is to say halogenated or non-halogenated).
  • X 3 is advantageously chosen from: a bromine atom, a trifluoromethyl, trifluoromethoxy, methoxy, methylthio and phenyloxy group.
  • Another particular object of the invention relates to the compounds of general formula (I) in which:
  • X1, X3 and X5 are hydrogen atoms
  • X2 and X4 which may be identical or different, represent halogen atoms or corresponding groups R 1 , -SR 1 or -OR 1 , with R 1 , corresponding to R2 or R4, selected from an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group and a benzyl group, optionally halogen
  • X2 denotes a trifluoromethyl group and X4, a fluorine atom.
  • Another particular object of the invention relates to the compounds of general formula (I) in which: X1, X2 and X3 are hydrogen atoms,
  • X4 is a trifluoromethyl group
  • - X5 is a fluorine atom.
  • Another particular object of the invention relates to the compounds of general formula (I) in which X 2 and / or X 4 represents a halogen, preferably fluorine, or an alkyl group, preferably having 1 to 4 carbon atoms, preferentially halogenated. .
  • the X 2 or X 4 group represents a -CF 3 group.
  • the subject of the invention is the compounds of general formula (I) in which at least one of the following conditions, preferably all the conditions, is fulfilled:
  • X1, X2, X4 and X5, identical, represent a hydrogen
  • X 3 represents a halogen, a group R 3, -SR 3 or -OR 3, R 3 representing an alkyl, cycloalkyl, aryl or heteroaryl group, preferably an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group and a benzyl group; and or
  • X6 and X7 identical or different, represent a halogen
  • X8 represents a group R8, -OR8 or -SR8,
  • R8 represents an alkyl group, preferably having 1 to 8 or 1 to 5 carbon atoms, substituted with a group -COOR12, R12 representing a hydrogen or an alkyl radical optionally substituted with at least one substituent of group 1 or 2; and or
  • A represents a carbonyl group (CO);
  • the invention relates to compounds derived from 1,3-diphenylpropane of the following general formula (I):
  • X1 represents a halogen, a group R1, -SR1 or -OR1;
  • X 2 represents a hydrogen, a halogen, a group R2, -SR2 or -OR2
  • X3 represents a halogen, a group R3, -SR3 or -OR3;
  • X4 represents a hydrogen, a halogen, a group R4, -SR4 or
  • X5 represents a halogen, a group R5, -SR5 or -OR5;
  • X6 represents a halogen, a group R6, -OH, -SH, -SR6 or -OR6
  • X7 represents a halogen, a group R7, -SR7 or -OR7;
  • X8 represents a group R8, -SR8 or -OR8;
  • R1, R3, R5 and R7 identical or different, chosen from a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group and a benzyl group; said alkyl, phenyl or benzyl groups being optionally halogenated (i.e. halogenated or non-halogenated),
  • R2 R4 and R6, identical or different, selected from an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group and a benzyl group; said alkyl, phenyl or benzyl groups being optionally halogenated (i.e. halogenated or non-halogenated),
  • methylene radical being: unbranched or branched by one or two alkyl or alkenyl groups having 1 to 4 carbon atoms, and
  • A represents:
  • a group-CR9R10 wherein R9 represents a hydrogen atom and R10 represents a hydroxyl group or a group -OR11, wherein R11 represents an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group or a benzyl group; said alkyl, phenyl or benzyl groups being optionally halogenated (i.e., halogenated or non-halogenated), or
  • X6 and X7 represent chlorine atoms
  • the invention relates to compounds of general formula (I) in which
  • X8 represents a group -OR8, with R8 denoting a methylene radical, branched or unbranched, linked to a substituent -COOR12.
  • R8 denoting a methylene radical, branched or unbranched, linked to a substituent -COOR12.
  • the invention also relates to the corresponding bioisomers, X8 representing a group -SR8.
  • X 8 is chosen from the groups: -OC (CH 2 ) 2 COOH, -OC (CH 3 ) 2 COOC (CH 3 ) S, -OCH (CH 2 CHS) COOC (CH 3 ) S, -OCH (CH 2 CH S) ) COOH, -OCH (CH s) COOH, -OCH (CH 3) COOC (CH s) 3, -OCH ((CH 2) SCH 3) COOC (CH 3) s, and -OCH ((CH 2) 3 CH 3 ) COOH, preferably from the groups -OC (CH 3 ) 2 COOH, -OC (CH 3 ) 2 COOC (CH 3 ) 3 ,
  • the invention relates to compounds of general formula
  • X6 and X7 are identical and represent chlorine or fluorine atoms.
  • X1, X2, X4 and X5 are hydrogen atoms
  • X 3 represents a halogen atom (chlorine, fluorine, bromine or iodine) or a group R 3, -SR 3 or -OR 3, with R 3 chosen from an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group and a benzyl group , optionally halogenated.
  • X 3 is advantageously chosen from: a bromine atom, a trifluoromethyl, trifluoromethoxy, methoxy, methylthio and phenyloxy group.
  • X1, X3 and X5 are hydrogen atoms
  • X 2 and X 4 which are identical or different, represent halogen atoms or corresponding groups R 1 , -SR 1 or -OR 1 , with R 1 , corresponding to R 2 or R 4, chosen from an alkyl group having 1 to 4 atoms of carbon, a phenyl group and an optionally halogenated benzyl group,
  • X 2 denotes a trifluoromethyl group and X 4, a fluorine atom.
  • X1, X2 and X3 are hydrogen atoms
  • X4 is a trifluoromethyl group
  • - X5 is a fluorine atom.
  • the compounds in accordance with the invention are chosen from:
  • tert-butyl 2- [2,3-dichloro-4- [3- [2-fluoro-3-trifluoromethylphenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoate; tert-butyl 2- [2,3-dichloro-4- [3- [2-fluoro-3-trifluoromethylphenyl] -3-oxopropyl] phenoxy] -2-methylpropanoate;
  • the compounds according to the invention may contain one or more asymmetric centers.
  • the invention includes stereoisomers (diastereoisomers, enantiomers), pure or in mixture, as well as racemic mixtures and geometric isomers.
  • an enantiomerically pure (or enriched) mixture is desired, it may be obtained either by purification of the final product or chiral intermediates or by asymmetric synthesis according to methods known to those skilled in the art (using, for example, reagents and catalysts chiral).
  • the compounds according to the invention can have different stable tautomeric forms and all these forms as well as their mixtures are included in the invention.
  • the invention also relates to the "pharmaceutically acceptable" salts of the compounds of formula (I) according to the invention.
  • this term refers to the low or non-toxic salts obtained from bases or acids, organic or inorganic. These salts can be obtained during the final purification step of the compounds according to the invention or by incorporation of the salt on the already purified compounds.
  • Certain compounds according to the invention and their salts could be stable in several solid forms.
  • the present invention includes all solid forms of the compounds of the invention, including amorphous, polymorphic, mono- and polycrystalline forms.
  • the compounds according to the invention may exist in free form or in solvated form, for example with pharmaceutically acceptable solvents such as water (hydrates) or ethanol.
  • the compounds according to the invention may optionally be labeled with one or more isotopes (radioactive or not).
  • isotopes that can be included in the structure of compounds according to the invention may be selected from hydrogen, carbon, oxygen, sulfur such as 2 H, 3 H, 13 C, 14 C, 18 O , 17 O, 35 S respectively.
  • the 3 H and 14 C radioactive isotopes are particularly preferred because they are easy to prepare and detect in vivo in vivo bioavailability studies.
  • Heavy isotopes (such as 2 H) are particularly preferred; they are used in particular as internal standards in analytical studies.
  • the subject of the present invention is also a process for the synthesis of the compounds of general formula (I), which comprises:
  • X8 represents a group R8, -SR8, -OR8, hydroxy or thiol, R8 being as defined above;
  • step (1) in acidic or basic medium and step (2) are known to those skilled in the art and can vary to a large extent.
  • the synthesis protocols can be in particular those presented in the "examples" part of the present invention.
  • the bringing into contact of these two compounds is advantageously performed stoichiometrically. It is preferably carried out at a suitable temperature (between about 18 ° C. and 100 ° C.) and at atmospheric pressure.
  • the reaction is preferably carried out in the presence of a strong base, such as an alkali metal hydroxide, such as sodium hydroxide or an alkali metal alcoholate such as sodium ethoxide.
  • a strong base such as an alkali metal hydroxide, such as sodium hydroxide or an alkali metal alcoholate such as sodium ethoxide.
  • reaction is preferably carried out in the presence of a strong acid, such as hydrochloric acid.
  • the subject of the present invention is also the compounds as described above, as medicaments.
  • the present invention also relates to a compound as described above, for the treatment of complications associated with the metabolic syndrome, atherosclerosis, cerebral ischemia, autoimmune diseases, cardiovascular diseases, insulin secretion, resistance, obesity, hypertension, diabetes, dyslipidemia, inflammatory diseases (such as asthma), neurodegenerative diseases (especially multiple sclerosis, Parkinson's disease, Alzheimer's disease , tauopathies (frontotemporal dementia, Pick's disease, cortico-basal degeneration, progressive supranuclear palsy), cortical dementia, amyotrophy spinal, mild cognitive impairment (MCI), synucleopathies, Lewy body diseases, Huntington's disease, epilepsy, amyotrophic lateral sclerosis, prion diseases (Creutzfeld-Jakob Disease), Down syndrome, Friedreich Ataxia, Spino-cerebellar ataxias, Charcot-Marie-Tooth disease, AIDS-related neurological complications, chronic pain, cerebellar degeneration, cerebellar hypoxia, neuropathies associated with diabetes), cancers, etc
  • the subject of the invention is a compound as described above, for treating cardiovascular risk factors related to disorders of lipid and / or carbohydrate metabolism (in particular hyperlipidemias, type 2 diabetes, obesity, etc. .) and in particular allowing the reduction of the global cardiovascular risk.
  • cardiovascular risk factors related to disorders of lipid and / or carbohydrate metabolism in particular hyperlipidemias, type 2 diabetes, obesity, etc. .
  • cardiovascular risk factors related to disorders of lipid and / or carbohydrate metabolism in particular hyperlipidemias, type 2 diabetes, obesity, etc. .
  • the invention relates to a compound as described above for the treatment of diabetes or dyslipidemias.
  • the present invention also relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, in a pharmaceutically acceptable carrier, at least one compound as described above, optionally in combination with one or more other therapeutic and / or cosmetic active ingredients.
  • a pharmaceutical composition for the treatment of complications associated with the metabolic syndrome atherosclerosis, cerebral ischemia, autoimmune diseases, cardiovascular diseases, insulin resistance, obesity , hypertension, diabetes, dyslipidemias, inflammatory diseases (such as asthma), neurodegenerative diseases (especially multiple sclerosis, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, tauopathies (fronto dementia) -temporal, Pick's disease, cortico-basal degeneration, progressive supranuclear palsy), cortical dementia, spinal amyotrophies, mild cognitive impairment (MCI: MiId Cognitive Impairment), synucleopathies, Lewy body pathologies, chorea 'Huntington, the epilepsies, amyotrophic lateral sclerosis, prion diseases (Creutzfeld-Jakob disease), Down's syndrome, Friedreich's ataxia, spino-cerebellar ataxias, Charcot-Marie-Tooth disease, neurological complications associated with AIDS, chronic pain, cerebellar degeneration, cerebellar
  • cardiovascular risk factors related to disorders of lipid and / or carbohydrate metabolism in particular hyperlipidemias, type 2 diabetes, obesity, etc.
  • the pharmaceutical composition according to the invention is intended for the treatment of diabetes or dyslipidemias.
  • Another subject of the invention relates to a nutritional composition
  • a nutritional composition comprising at least one compound as described above.
  • the subject of the present invention is also the compounds as described above, as cosmetic products.
  • Another subject of the invention resides in the use of at least one compound as described above for the preparation of pharmaceutical compositions intended for the treatment of various pathologies as specified above, in particular related to metabolic disorders. lipid and / or carbohydrate among which may be mentioned dyslipidemias. More generally, the subject of the invention is the use of at least one compound as described above for the preparation of pharmaceutical compositions intended to treat the risk factors for cardiovascular diseases linked to disorders of lipid metabolism and / or or carbohydrates and in particular intended to reduce the overall cardiovascular risk.
  • the compounds according to the invention may advantageously be administered in combination with one or more other therapeutic and / or cosmetic agents, in particular commercialized or in development, such as: anti-diabetics: insulin secretors (sulfonylureas (glibenclamide, glimepiride, gliclazide, etc.) and glinides (repaglinide, nateglinide, etc.)), alpha-glucosidase inhibitors, PPAR ⁇ agonists (thiazolidinediones such as rosiglitazone, pioglitazone PPAR ⁇ / PPAR ⁇ mixed agonists (tesaglitazar, muraglitazar), pan-PPAR (compounds simultaneously activating the 3 PPAR isoforms), biguanides (metformin), Dipeptidyl Peptidase IV inhibitors (sitagliptin, vildagliptin), agonists of the Glu
  • anti-diabetics insulin secretor
  • hypolipidemic and / or hypocholesterolemic molecules fibrates (fenofibrate, gemfibrozil), HMG CoA reductase inhibitors or hydroxylmethylglutaryl Coenzyme A reductase inhibitors (statins such as atorvastatin, simvastatin, fluvastatin), cholesterol absorption inhibitors ( ezetimibe, phytosterols), inhibitors of CETP or Cholesteryl Ester Transfer Protein (torcetrapib), ACAT inhibitors or Acyl-Coenzyme A cholesterol acylTransferase (Avasimibe, Eflucimibe), MTP (Microsomal Triglyceride Transfer Protein) inhibitors, agents sequestrants of bile acids (cholestyramine), vitamin E, polyunsaturated fatty acids, omega 3 fatty acids, nicotinic acid derivatives (niacin), etc. antihypertensive agents and hypotensive agents: inhibitors
  • ACE Angiotensin-Converting Enzyme
  • anti-obesity agents Sibutramine, lipase inhibitors (orlistat), PPAR ⁇ agonists and antagonists, cannabinoid CB1 receptor antagonists (rimonabant), etc.
  • anti-inflammatory agents for example, corticosteroids (prednisone, betamethasone, dexamethasone, prednisolone, methylprednisolone, hydrocortisone, etc.), NSAIDs or non-steroidal anti-inflammatory drugs derived from indole (indomethacin, sulindac), NSAIDs from the arylcarboxylic group (tiaprofenic acid, diclofenac, etodolac, flurbiprofen, ibuprofen, ketoprofen, naproxen, nabumetone, alminoprofen), NSAIDs derived from oxicam (meloxicam, piroxicam, tenoxicam), NSAIDs from the fenamate group, selective inhibitors COX2 (celecoxib, rofecoxib), etc. anti-oxidizing agents: for example probucol, etc.
  • corticosteroids prednisone, betamet
  • thiazide or non-thiazide diuretics for example, thiazide or non-thiazide diuretics (furosemide, indapamide, hydrochlorothiazide, anti-aldosterone), ACE inhibitors (captopril, enalapril, ramipril or quinapril), digitalis ( digoxin, digitoxin), beta blockers (atenolol, metoprolol, labetalol, propranolol),
  • Phosphodiesterases (enoximone, milhnone), etc.
  • beta-blockers atenolol, metoprolol, labetalol, propranolol
  • calcium channel blockers nifedipine, felodipine or amlodipine, bepridil, diltiazem or verapamil
  • the donor agents NO trinitrin, isosorbide dinitrate, molsidomine
  • Amiodarone etc.
  • anticancer agents cytotoxic agents (agents interacting with DNA, alkylating agents, cisplatin and derivatives), cytostatic agents (GnRH analogues (Gonatropin-Releasing Hormone), somatostatin analogues, progestins, anti-estrogens , aromatase inhibitors, etc.), modulators of the immune response (interferons, IL2, etc.), etc. anti-asthmatics such as bronchodilators (beta2 receptor agonists), corticosteroids, cromoglycate, leukotriene receptor antagonists (montelukast), etc.
  • corticosteroids used in the treatment of skin pathologies such as psoriasis and dermatitis
  • vasodilators and / or anti-ischemic agents (buflomedil, Ginkgo Biloba extract, naftidrofuryl, pentoxifylline, piribedil), etc.
  • the invention also relates to a method for treating various pathologies as specified above, especially related to disorders of lipid metabolism and / or carbohydrates comprising the administration to a subject, including human, of an effective amount of a compound or a pharmaceutical composition as defined above.
  • an effective amount refers to an amount of the compound sufficient to produce the desired biological result.
  • subject refers to a mammal and more particularly a human.
  • treatment refers to curative, symptomatic and / or preventive treatment.
  • the compounds of the present invention can thus be used in subjects (such as mammals, in particular humans) with a declared disease.
  • the compounds of the present invention can also be used to delay or slow progression or prevent further progression of the disease, thereby improving the condition of the subjects.
  • the compounds of the present invention may finally be administered to non-diseased subjects who may develop the disease normally or who have a significant risk of developing the disease.
  • compositions according to the invention advantageously comprise one or more excipients or vehicles, which are pharmaceutically acceptable.
  • excipients or vehicles for example, saline, physiological, isotonic, buffered, etc., solutions compatible with a pharmaceutical use and known to those skilled in the art may be mentioned.
  • the compositions can contain one or more agents or vehicles selected from dispersants, solubilizers, stabilizers, preservatives, etc.
  • Agents or vehicles that can be used in formulations include methylcellulose, hydroxymethylcellulose, carboxymethylcellulose, polysorbate 80, mannitol, gelatin, lactose, vegetable oils, and the like. acacia, liposomes, etc.
  • compositions may be formulated as injectable suspensions, gels, oils, tablets, suppositories, powders, capsules, aerosols, etc., optionally using dosage forms or devices providing sustained and / or delayed release.
  • an agent such as cellulose, carbonates or starches is advantageously used.
  • the compounds or compositions according to the invention can be administered in different ways and in different forms. Thus, they may be, for example, administered systemically, orally, parenterally, by inhalation or by injection, for example intravenously, intramuscularly, subcutaneously, trans-dermally, intra-arterially, etc.
  • the compounds are generally packaged as liquid suspensions, which can be injected by means of syringes or infusions, for example.
  • the flow rate and / or the injected dose can be adapted by those skilled in the art depending on the patient, the pathology, the mode of administration, etc.
  • the compounds are administered at doses ranging between 1 ⁇ g and 2 g per administration, preferably from 0.01 mg to 1 g per administration. Administrations can be daily or repeated several times a day, if necessary.
  • the compositions according to the invention may comprise, in addition, other agents or active principles. LEGENDS OF FIGURES
  • - ABCA1 ATP-binding cassette, sub-family A, member 1.
  • ACOX1 acyl-Coenzyme A oxidase 1
  • palmitoyl - ApoCIII Apolipoprotein C-III
  • IL6 Interleukin 6
  • Figures 1-1 and 1-2 In vitro evaluation of the PPAR ⁇ activating properties of the compounds according to the invention by measuring the expression of PDK4 and CPTIb in mvocvtes
  • the stimulatory effects of the lipid and carbohydrate metabolism of the compounds according to the invention were evaluated by measuring the expression of Pyruvate Dehydrogenase Kinase 4 (PDK4) and Carnitine Palmitoyl Transferase Ib (CPT 1b) by treated human myocytes. for 24 hours with the compounds according to the invention. It is described that the regulation of the expression of these genes is directly controlled by PPAR ⁇ in this cell type. The more the expression of the PDK4 and CPTI b genes is increased, the more the test compound is activator of PPAR ⁇ and therefore stimulator of metabolism in the muscle cells. Expression levels are normalized to the level of expression of the 36B4 reference gene.
  • Figure 1-1 expression of PDK4 in human myocytes, treated for 24 hours with compounds 3 and 43 at 1 ⁇ M.
  • Figure 1-2 Expression of CPTI b in human myocytes, treated for 24 hours with compounds 3 and 43 at 1 ⁇ M.
  • Figures 2-1 to 2-3 and 3-1 to 3-7 In vivo evaluation of the lipid-lowering and activating properties of PPARs in the ApoE2 / E2 mouse of the compounds according to the invention.
  • the lipid-lowering effect of the compounds according to the invention was evaluated in vivo in the humanized mouse for the E2 isoform of apolipoprotein E by measuring the levels of cholesterol and plasma triglycerides after 7 days of oral treatment. These levels were compared with those obtained with control animals (not treated with the compounds according to the invention). The difference measured shows the lipid-lowering effect of the compounds according to the invention.
  • Figure 2-1 Plasma cholesterol level after 7 days of treatment with Compound 2, administered at 100 mpk.
  • Figure 2-2 Plasma triglyceride levels after 7 days of treatment with Compound 2, administered at 100 mpk.
  • Figure 2-3 Plasma cholesterol level after 7 days of treatment with compound 21, administered at 50 mpk.
  • Figure 3-2 Expression of ApoCIII in liver tissue, in E2 / E2 mice, after 7 days of treatment with compound 2 (100 mpk).
  • Figure 3-3 Expression of PDK4 in hepatic tissue, in E2 / E2 mice, after 7 days of treatment with compound 21 (50mpk).
  • Figure 3-4 expression of Acoxi in liver tissue, in E2 / E2 mice, after 7 days of treatment with compound 21 (50mpk).
  • Figure 3-5 Expression of ApoCIII in liver tissue, in E2 / E2 mice, after 7 days of treatment with compound 21 (50mpk).
  • Figure 3-6 Expression of UCP3 in skeletal muscle, in E2 / E2 mice, after 7 days of treatment with compound 2 (100 mpk).
  • Figure 3-7 Expression of PDK4 in skeletal muscle, in E2 / E2 mice, after 7 days of treatment with compound 2 (100 mpk).
  • FIGS. 4 and 5-1 to 5-9 In vivo evaluation of the hypolipidemic and activating properties of PPARs in C57BI6 mice of the compounds according to the invention.
  • the effect of the compounds according to the invention was evaluated in vivo in C57BI6 mice by measuring plasma triglyceride levels after 14 days of oral treatment; these levels were compared with those obtained with control animals (not treated with the compounds according to the invention). The difference measured shows the lipid-lowering effect of the compounds according to the invention.
  • Figure 4 Plasma triglyceride levels after 14 days of treatment with compounds 3 and 9, administered at 50 mpk.
  • Figure 5-2 CPTI b expression in skeletal muscle, in C57BI6 mice, after 14 days of treatment with compound 9 (50 mpk).
  • Figure 5-3 UCP2 expression in skeletal muscle, in C57BI6 mice, after 14 days of treatment with compound 9 (50 mpk).
  • Figure 5-4 UCP3 expression in skeletal muscle, in C57BI6 mice, after 14 days of treatment with compound 9 (50 mpk).
  • Figure 5-5 Expression of PDK4 in skeletal muscle, in C57BI6 mice, after 14 days of treatment with compound 9 (50 mpk).
  • Figure 5-6 CPTI b expression in skeletal muscle, in C57BI6 mice, after 14 days of treatment with compound 21 (50 mpk).
  • Figure 5-7 UCP2 expression in skeletal muscle, in C57BI6 mice, after 14 days of treatment with compound 21 (50 mpk).
  • Figure 5-8 UCP3 expression in skeletal muscle, in C57BI6 mice, after 14 days of treatment with compound 21 (50 mpk).
  • Figure 5-9 PDK4 expression in skeletal muscle, in C57BI6 mice, after 14 days of treatment with compound 21 (50 mpk).
  • Figures 6 and 7-1 to 7-6 In vivo evaluation, in db / db mice, antidiabetic properties and activators of PPAR compounds according to the invention.
  • the effect of the compounds according to the invention was evaluated in vivo in the db / db mouse by the measurement of plasma insulin after 14 days of treatment orally with the compounds according to the invention. These levels were compared with those obtained with control animals (not treated with the compounds according to the invention). The difference measured shows the effect on the insulin resistance of the compounds according to the invention.
  • Figure 6 insulinemia after 14 days of treatment of mice db / db with compound 3, administered at 100 mpL
  • the effectiveness of the compound according to the invention was also evaluated by measuring, in liver and muscle tissues, the expression of genes involved in carbohydrate, lipid metabolism and energy dissipation, after 28 days of treatment.
  • the expression levels of each gene were normalized by relationship to the expression level of 36B4 reference genes in liver tissue and 18S in muscle tissue.
  • the induction factor that is to say the ratio between the relative signal (induced by the compound according to the invention) and the average of the relative values of the control group, was then calculated. The higher this factor, the more the compound has an activating character of gene expression.
  • the final result is represented as the average of the induction values in each experimental group.
  • Figure 7-1 expression of PDK4 (Pyruvate Deshydrogenase Kinase, Isoform 4) in liver tissue, in db / db mice, after 28 days of treatment with compound 3, administered at 100 mpk.
  • PDK4 Pyruvate Deshydrogenase Kinase, Isoform 4
  • Figure 7-2 expression of ACOX1 (Acyl Co-enzymeA Oxidase 1) in liver tissue, in db / db mice, after 28 days of treatment with compound 3, administered at 100 mpk.
  • Figure 7-3 expression of ApoCIII (Apolipoprotein CIII) in liver tissue, in db / db mice, after 28 days of treatment with compound 3, administered at 100 mpk.
  • Figure 7-4 Expression of PDK4 (Pyruvate Deshydrogenase Kinase, Isoform 4) in muscle tissue, in db / db mice, after 28 days of treatment with compound 3, administered at 100 mpk.
  • Figure 7-5 expression of UCP2 (Uncoupling Protein 2) in muscle tissue, in db / db mice, after 28 days of treatment with compound 3, administered at 100 mpk.
  • Figure 7-6 expression of UCP3 (Uncoupling Protein 3) in muscle tissue, in db / db mice, after 28 days of treatment with compound 3, administered at 100 mpk.
  • UCP3 Uncoupling Protein 3
  • FIG. 8 In vitro evaluation of the metabolic properties of the compounds according to the invention by measuring the ⁇ -oxidation of fatty acids in myocles The stimulating effects of the compounds according to the invention were evaluated by measuring the ⁇ -oxidation of the fatty acids in murine myocytes pre-treated for 24 hours with the compounds according to the invention. The more the induction of the ⁇ -oxidation of fatty acids is increased, the more the compounds according to the invention are stimulators of the degradation of fatty acids in muscle cells.
  • Figure 8 ⁇ -oxidation of fatty acids in myocytes treated with compounds according to the invention.
  • FIGS. 9-1, 9-2 and 9-3 In vitro evaluation of the anti-inflammatory properties of the compounds according to the invention by measuring the secretion and the expression of MCP1 by monocvts treated with the compounds according to the invention and stimulated
  • MCP1 Monocyte Chemoattractant Protein-1
  • PMA phorbol 12-myhstate 13-acetate, which causes an inflammatory response of the cells. The more the amount of secreted MCP1 is decreased, the more the compound according to the invention inhibits the inflammatory response.
  • FIG. 9-1 secretion of MCP1 (Monocyte Chemoattractant Protein-1) in human monocytes, treated with compounds 21 and 43 at 1 ⁇ M.
  • Figure 9-2 Expression of MCP1 (normalized to 36B4) in human monocytes, treated with compounds 21 and 43 at 1 ⁇ M.
  • Figure 9-3 expression of MCP1 (normalized to 36B4) in human monocytes treated with compound 1 at 1 ⁇ M.
  • FIG. 10 In vitro evaluation of the anti-inflammatory properties of the compounds according to the invention by measuring the secretion of IL-6 by macrophages pretreated with the compounds according to the invention and stimulated with LPS
  • the anti-inflammatory effects of the compounds according to the invention were evaluated by measuring the secretion of interleukin-6 (IL-6) by human macrophages pre-treated for 24 hours with the compounds according to the invention and stimulated for 6 hours. hours with LPS (lipopolysaccharide, which provokes an answer inflammatory cells).
  • IL-6 interleukin-6
  • LPS lipopolysaccharide, which provokes an answer inflammatory cells
  • Figure 10 Secretion of IL6 (Interleukin 6) in human macrophages treated with compounds 2, 13 and 33 according to the invention at 1 and 10 ⁇ M.
  • IL6 Interleukin 6
  • the neuroprotective effects of the compounds according to the invention were evaluated by the analysis of brain sections of chronically treated animals, with compounds according to the invention and taken one hour after cerebral ischemia.
  • Figure 11 Volume of cerebral infarction in C57BI6 mice, treated with compound 2, administered at 200mpk.
  • the NMR (Nuclear Magnetic Resonance) spectra are recorded on a Bruker AC300P spectrometer at 300 MHz in a deuterated solvent which is specified for each analysis: DMSO-c / ⁇ or CDCl3.
  • the propenone is solubilized in methanol (0.15 to 1.5 g, 0.1 to 0.2 mol / l) and then a catalytic amount of palladium on charcoal is added.
  • the mixture is stirred under an atmosphere of hydrogen at atmospheric pressure and ambient temperature. After 10 to 15 minutes the catalyst is removed by filtration, the solvent is evaporated under reduced pressure and the evaporation residue is purified by flash chromatography.
  • the tert-butyl ester is solubilized in dichloromethane (0.2 to 15 g, 0.1 to 0.5 mol / l) and the trifluoroacetic acid is added (10 equivalents). The mixture is stirred at room temperature.
  • the diphenylpropan-3-one is solubilized in ethanol (0.8 g, 0.2 to 0.3 mol / l) and then sodium borohydride is added. The whole is kept stirring for 16 hours at room temperature, the medium is cooled and hydrolyzed. The solvents are removed by evaporation under reduced pressure. The residue is taken up in a dilute aqueous solution of hydrochloric acid and then extracted with methylene chloride.
  • the alcohol is solubilized in N, N-dimethylformamide (0.1 to 0.3 g, 0.05 to 0.1 mol / l), the solution placed under a nitrogen atmosphere is cooled to 0 ° C. and then sodium hydride is added (1.1 to 1.5 equivalents). After stirring for 15 minutes, the appropriate alkyl halide (1.1 to 1.5 equivalents) is added.
  • reaction medium After stirring for 16 hours at room temperature, the reaction medium is poured into a saturated solution of ammonium chloride and extracted with ethyl acetate. The organic phase is evaporated under reduced pressure. The evaporation residue is purified by flash chromatography.
  • the ester is solubilized in ethanol (0.2 to 0.4 g, 0.1 to 0.2 mol / l) and then a 2N sodium hydroxide solution is added.
  • 1- (4-Thfluoromethylphenyl) -3- (2,3-dichloro-4-hydroxyphenyl) propan-1-one is prepared from 1- (4-trifluoromethylphenyl) -3- (2,3-dichloro-4) hydroxyphenyl) - prop-2-en-1-one (intermediate compound 5) according to general procedure C. Elution: cyclohexane, ethyl acetate: 9/1. Silica: 40-63 ⁇ m.
  • Tertiobutyl 2- [2,3-dichloro-4- [3- [4-bromophenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoate is prepared from 1 - (4-bromophenyl) -3 - (2,3-dichloro-4-hydroxyphenyl) prop-2-en-1-one (intermediate compound 1) according to general procedure C using 1.5 equivalents of tert-butyl bromoisobutyrate and 3 equivalents of potassium carbonate in an acetone / acetonitrile mixture.
  • 2- [2,3-Dichloro-4- [3- [4-bromophenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoic acid is prepared from 2- [2,3-dichloro-4 Tert-butyl [3 - [3- (4-bromophenyl) -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoate (compound 1) according to General Procedure D. After stirring for 72 hours at room temperature, the reaction mixture is washed with water and then the dichloromethane is removed by evaporation under reduced pressure.
  • 2- [2,3-Dichloro-4- [3- [4-bromophenyl] -3-oxopropyl] phenoxy] -2-methylpropanoic acid is prepared from 2- [2,3-dichloroacid 4- [3- [4-bromophenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoic acid (Compound 2), solubilized in dichloromethane. Triethylsilane (1 equivalent) is added and then, dropwise, trifluoroacetic acid (7.5 equivalents). The mixture is stirred at 40 ° C. for 2 hours.
  • the medium is washed with water.
  • the solvent is removed by evaporation under reduced pressure.
  • the evaporation residue is purified by flash chromatography (elution: cyclohexane, ethyl acetate: 9/1, silica: 40-63 ⁇ m) and preparative HPLC (lichrospher (Merck) RP18 12 ⁇ m 100A, column: 25 * 250 mm; : water gradient, methanol + 0.1% trifluoroacetic acid: 26/74 to
  • Tertiobutyl 2- [2,3-dichloro-4- [3- [4- (methoxy) phenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methyl-propanoate is prepared from 1 - (4-methoxyphenyl) 3- (2,3-dichloro-4-hydroxyphenyl) prop-2-en-1-one (intermediate compound 2) according to general procedure C, using 6 equivalents of tert-butyl bromoisobutyrate and 3 equivalents of potassium, in an acetone / acetonitrile mixture. After stirring for 48 hours under reflux, the reaction medium is poured into water and extracted with ethyl acetate. The organic phase is evaporated under reduced pressure. The evaporation residue is used as is for carrying out the next step.
  • reaction medium After stirring for 24 hours at room temperature, the reaction medium is washed with water and then the dichloromethane is removed by evaporation under reduced pressure. The evaporation residue is purified by flash chromatography.
  • Tertiobutyl 2- [2,3-dichloro-4- [3- [4- (methylthio) phenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylnpropylate is prepared from 1 - (4-methylthiophenyl) 3- (2,3-dichloro-4-hydroxyphenyl) prop-2-en-1-one (intermediate compound 3) according to general procedure C, using 6 equivalents of tert-butyl bromoisobutyrate and 3 equivalents of potassium, in an acetone / acetonitrile mixture.
  • Tertiobutyl 2- [2,3-dichloro-4- [3- [4-trifluoromethylphenyl] -3-oxopropyl] phenoxy] -2-methylpropanoate is prepared from 1 - (4-trifluoromethylphenyl) -3- (2,3-dichloro-4-hydroxyphenyl) propan-1-one (intermediate compound 4) according to general procedure C, using 10 equivalents of tert-butyl bromoisobutyrate and 3 equivalents of potassium carbonate in acetonitrile.
  • 2- [2,3-Dichloro-4- [3- [4-trifluoromethylphenyl] -3-oxopropyl] phenoxy] -2-methylpropanoic acid is prepared from 2- [2,3-dichloro-4- [ Tert-butyl 3- (4-trifluoromethylphenyl] -3-oxopropyl] phenoxy] -2-methyl-propanoate (compound 8) according to general procedure D. After stirring for 24 hours at room temperature, the reaction medium is washed with water at room temperature. water and the dichloromethane is removed by evaporation under reduced pressure.
  • Tertiobutyl 2- [2,3-dichloro-4- [3- [4-trifluoromethylphenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoate is prepared from 1 - (4-trifluoromethylphenyl) -3- ( 2,3-dichloro-4-hydroxyphenyl) prop-2-en-1-one (intermediate compound 5) according to general procedure C using 3 equivalents of tert-butyl bromoisobutyrate and 3 equivalents of potassium carbonate in acetonitrile .
  • Tertiobutyl 2- [2,3-dichloro-4- [3- [4-trifluoromethoxyphenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoate is prepared from 1 - (4-trifluoromethoxyphenyl) -3- ( 2,3-dichloro-4-hydroxyphenyl) prop-2-en-1-one (intermediate compound 6) according to general procedure C using 3 equivalents of tert-butyl bromoisobutyrate and 3 equivalents of potassium carbonate in acetonitrile .
  • reaction medium After stirring for 24 hours at 70 ° C., the reaction medium is poured into 1N aqueous hydrochloric acid and extracted with ethyl acetate. The organic phase is evaporated under reduced pressure. The evaporation residue is purified by flash chromatography.
  • reaction medium After stirring for 24 hours at room temperature, the reaction medium is washed with water and then the dichloromethane is removed by evaporation under reduced pressure. The evaporation residue is purified by flash chromatography.
  • Tertiobutyl 2- [2,3-dichloro-4- [3- [3-fluoro-5-trifluoromethylphenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoate is prepared from 1- (3-thfluoromethyl) 5-fluorophenyl) -3- (2,3-dichloro-4-hydroxyphenyl) prop-2-en-1-one (Intermediate 8) according to General Procedure C using 3 equivalents of tert-butyl bromoisobutyrate and three equivalents of potassium carbonate in acetonitrile.
  • 2- [2,3-Dichloro-4- [3- [3-fluoro-5-trifluoromethylphenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoic acid is prepared from 2- [2,3- tert-butyl dichloro-4- [3- [3-fluoro-5-trifluoromethylphenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoate (compound 16) according to general procedure D. After stirring for 24 hours at room temperature, The reaction medium is washed with water and then the dichloromethane is removed by evaporation under reduced pressure.
  • Tertiobutyl 2- [2,3-difluoro-4- [3- [4-bromophenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoate is prepared from 1 - (4-bromophenyl) -3 - (2,3-difluoro-4-hydroxyphenyl) prop-2-en-1-one (intermediate compound 9) according to general procedure C, using 3 equivalents of tert-butyl bromoisobutyrate and 3 equivalents of potassium carbonate in dimethylformamide. After stirring for 24 hours at 70 ° C., the reaction medium is poured into water and extracted with dichloromethane. The organic phase is evaporated under reduced pressure. The evaporation residue is purified by flash chromatography.
  • 2- [2,3-Difluoro-4- [3- [4-bromophenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoic acid is prepared from 2- [2,3-difluoro-4 - tert-butyl [3 - [3- (4-bromophenyl) -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-methylpropanoate (compound 18) according to general procedure D. After stirring for 24 hours at room temperature, the reaction medium is washed with water. water and the dichloromethane is removed by evaporation under reduced pressure.
  • Tertiobutyl 2- [2,3-dichloro-4- [3- [4-trifluoronethylphenyl] -3-oxopropyl] phenoxy] butanoate is prepared from 1- (4-trifluoromethylphenyl) -3- (2,3 4-hydroxyphenyl) propan-1-one (intermediate compound 4) according to general procedure C, using 3 equivalents of tert-butyl 2-bromobutanoate and 3 equivalents of potassium carbonate in acetonitrile. After stirring for 24 hours at 70 ° C., the solvent is removed by evaporation under reduced pressure and the evaporation residue is then taken up in a water / dichloromethane mixture. The organic phase is evaporated under reduced pressure.
  • reaction medium After stirring for 24 hours at 70 ° C., the reaction medium is poured into water and extracted with dichloromethane. The organic phase is evaporated under reduced pressure. The evaporation residue is purified by recrystallization from acetonitrile.
  • the evaporation residue is purified by flash chromatography. Elution: cyclohexane then cyclohexane / ethyl acetate 95/5. Silica: 40-63 ⁇ m) and washing with methanol.
  • the evaporation residue is purified by flash chromatography.
  • the organic phase is washed with water, the methylene chloride is removed by evaporation under reduced pressure.
  • Tertiobutyl 2- (4- (3- (4-bromophenyl) -3-oxoprop-1-enyl) -2,3-dichlorophenoxypropanoate is prepared from 1- (4-bromophenyl) -3- , 3-dichloro-4-hydroxyphenyl) prop-2-en-1-one (intermediate compound 1) according to general procedure D, using 3 equivalents of tert-butyl 2-bromopropanoate and 3 equivalents of potassium carbonate in 1 acetonitrile. After stirring for 24 hours at 70 ° C., the solvent is removed by evaporation under reduced pressure and the evaporation residue is then taken up in a water / dichloromethane mixture.
  • 2- (4- (3- (4-bromophenyl) -3-oxoprop-1-enyl) -2,3-dichlorophenoxy) propanoic acid is prepared from 2- (4- (3- (4- bromophenyl) -3-oxoprop-1-enyl) -
  • the evaporation residue is purified by flash chromatography.
  • Tertiobutyl 2- (4- (3- (benzyloxy) -3- (4- (trifluoromethyl) phenyl) propyl) -2,3-dichlorophenoxy) butanoate is prepared from 2- [2,3-dichlorobenzene.
  • Tertiobutyl 2- (4- (3- (4-bromobenzyloxy) -3- (4- (trifluoromethyl) phenyl) propyl) -2,3-dichlorophenoxy) butanoate is prepared from 2- [2,3 tert-butyl dichloro-4- [3- [4-trifluoromethylphenyl] -3-hydroxypropyl] phenoxy] butanoate (compound 29) and 1.1 equivalents of 4-bromobenzyl bromide according to General Procedure G.
  • reaction medium After stirring for 18 hours at room temperature, the reaction medium is washed with water and then the dichloromethane is removed by evaporation under reduced pressure. The evaporation residue is purified by flash chromatography.
  • 2- (2,3-Difluoro-4- (3-oxo-3- (4- (trifluoromethoxy) phenyl) propyl) phenoxy) -2-methylpropanoic acid is prepared from 2- [2,3-difluoro -4- [3- [4- tert-butyl trifluoromethoxyphenyl] -3-oxopropenyl] phenoxy] -2-naphthylpropanoate (compound 22) solubilized in dichloromethane (3 g, 0.1 mo / L). Trifluoroacetic acid (7.5 equivalents and then triethylsilane (1 equivalent) are added dropwise and the mixture is stirred at ambient temperature for 2 hours.
  • the evaporation residue is purified by flash chromatography.
  • Tertiobutyl 2- (4- (3- (3,5-dibromobenzyloxy) -3- (4- (trifluoromethyl) phenyl) propyl) -2,3-dichlorophenoxy) butanoate is prepared from 2- [2,3 tert-butyl dichloro-4- [3- [4-trifluoromethylphenyl] -3-hydroxypropyl] phenoxy] butanoate (compound 29) and 1.1 equivalents of 3,5-dibromobenzyl bromide according to General Procedure G.
  • Methyl (R) -2- (2,3-dichloro-4- (3-oxo-3- (4- (trifluoromethoxy) phenyl) propyl) phenoxy) propanoate is prepared from 1- (4- (trifluoromethoxy) phenyl) -3- (2,3-dichloro-4-hydroxyphenyl) propan-1-one (intermediate 12) according to general procedure D using 3 equivalents of methyl (S) -2-chloropropanoate and of 3 equivalents of potassium carbonate in acetonitrile.
  • Methyl (S) -2- (2,3-dichloro-4- (3-oxo-3- (4- (thfluoromethoxy) phenyl) propyl) phenoxy) propanoate is prepared from 1 - (4- (thfluoromethoxy) phenyl) -3- (2,3-dichloro-4-hydroxyphenyl) propan-1-one (intermediate 12) according to general procedure D using 3 equivalents of methyl (R) -2-chloropropanoate and of 3 equivalents of potassium carbonate in acetonitrile.
  • Methyl (trifluoromethoxy) phenyl) propyl) phenoxy) propanoate (Compound 48) according to General Procedure H using 2 equivalents of a 2N sodium hydroxide solution.
  • reaction medium After stirring for 72 hours at room temperature, the reaction medium is acidified with a dilute hydrochloric acid solution and then concentrated by evaporation under reduced pressure. The precipitate formed is filtered and purified by preparative HPLC (lichrospher (Merck) RP18 12 ⁇ m 100, column: 25 * 250 mm).
  • PPARs The activation of PPARs was evaluated in vitro on a monkey kidney fibroblast (COS-7) line by measuring the transcriptional activity of chimeras consisting of the DNA binding domain of the Gal4 transcription factor of the yeast and the ligand binding domain of the different PPARs.
  • COS-7 monkey kidney fibroblast
  • the COS-7 cells are from ATCC and grown in DMEM supplemented with 10% (vol / vol) fetal calf serum, 100 U / ml penicillin (Gibco, Paisley, UK) and 2 mM L-Glutamine (Gibco, Paisley, UK). The cells were incubated at 37 ° C in a humid atmosphere containing 5% CO 2 .
  • the Gal4 (RE) _TkpGL3, pGal4-hPPAR ⁇ , pGal4-hPPAR ⁇ , pGal4-hPPAR ⁇ and pGal4- ⁇ plasmids have been described in the literature (Raspe E et al., 1999).
  • the pGal4-hPPAR ⁇ , pGal4-hPPAR ⁇ and pGal4-hPPAR ⁇ constructs were obtained by cloning into the pGal4- ⁇ vector of PCR-amplified DNA fragments corresponding to the DEF domains of the human PPAR ⁇ , PPAR ⁇ and PPAR ⁇ nuclear receptors.
  • COS-7 cells in suspension were transfected with 150 ng of DNA per well, with a pGal4-PPAR / Gal4 (RE) TkpGL3 ratio of 1/10, in the presence of 10% fetal calf serum.
  • the cells were then inoculated in 96-well plates (4x10 4 cells / well) and then incubated for 24 hours at 37 ° C.
  • Activation with the test compounds was carried out for 24h at 37 ° C in serum-free medium.
  • the cells were lysed and the luciferase activity was determined using Steady Glow Luciferase (Promega) according to the supplier's recommendations.
  • the measured activities differ according to the test compound and the compounds of the invention also exhibit more or less selectivity with respect to the PPAR isoforms:
  • the stimulatory effects of the lipid and carbohydrate metabolism of the compounds according to the invention were evaluated by measuring the expression of Pyruvate Dehydrogenase Kinase 4 (PDK4) and Carnitine Palmotoyl Transferase Ib by human myocytes treated for 24 hours with the compounds according to the invention. It is described that the regulation of the expression of these genes is directly controlled by PPAR ⁇ in this cell type. The more the expression of the PDK4 and CPTI b genes is increased, the more the compound according to the invention stimulates the metabolism in the muscle cells.
  • PDK4 and CPTI b genes The more the expression of the PDK4 and CPTI b genes is increased, the more the compound according to the invention stimulates the metabolism in the muscle cells.
  • SKMC human primary cells (Cambrex origin) are cultured in DMEM medium (Gibco; 21885-025) supplemented with 1% penicillin / streptomycin (VWR, BWSTL0022 / 100) and 10% decomplemented fetal calf serum (Gibco FC). 10270-106).
  • the cells are seeded on 12-well plates (Biocoat, BD Falcon) at the density of 75 ⁇ 10 3 cells / well in a differentiation medium (same composition as the culture medium but with 2% fetal calf serum and 2% of horse serum (Gibco 26050-088)) and incubated at 37 ° C and 5% CO 2 for 7 days to differentiate into myocytes.
  • a differentiation medium standard composition as the culture medium but with 2% fetal calf serum and 2% of horse serum (Gibco 26050-088)
  • the cells After 7 days of differentiation, the cells are placed in a culture medium without serum for deprivation for 6 hours, then treated with the compounds according to the invention in a culture medium supplemented with 0.5% fetal calf serum and 0 , 5% horse serum.
  • the compounds according to the invention were tested at doses of 1 ⁇ M.
  • the compounds according to the invention are dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma, D5879).
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the cells are treated for 24h at 37 ° C., 5% CO 2.
  • the effect of the compounds according to the invention is compared with the effect of DMSO alone.
  • RNA extraction RNA extraction, reverse transcription and quantitative PCR.
  • RNA is extracted from the cells using the NucleoSpin ® kit
  • RNA RNA was then retro-transcribed to complementary DNA by a 1 hour reaction at 37 ° C in a total volume of 30 microliters containing 1X buffer (Invitrogen), 1.5mM of DTT, 0.18mM of dNTPs (Promega), 200ng of pdN6 (Amersham), 3u of RNase inhibitor (Promega) and 1 ⁇ l of MMLV-RT (Invitrogen).
  • the quantitative PCR experiments were carried out using the MyiQ Single-Color Real-Time PCR Detection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) and were carried out using the SYBR Green Supermix iQ kit according to the supplier's recommendations. in 96-well plates, on 5 ⁇ l of diluted retro-transcription reactions with a hybridization temperature of 60 ° C. Primer pairs specific for the PDK4 and CPTI b genes studied were used:
  • HPDK4 sense primer: 5'-CCCGAGAGGTGGAGCATTTC-3 '(SEQ ID No. 15) and antisense primer 5'-TGTTGGCGAGTCTCACAGGC-3' (SEQ ID No. 16)
  • HCPTI b sense primer: ⁇ '-CTTCTTCTTCCGCCAAACCC-S '(SEQ ID No. 7) and antisense primer: ⁇ '-ACACATAGCCCAGATCCTGG-S' (SEQ ID No. 8)
  • the amount of fluorescence emitted is directly proportional to the amount of complementary DNA present at the beginning of the reaction and amplified during the PCR.
  • a range is achieved by successive dilutions of a pool consisting of a few microliters of different retro-transcription reactions. The relative expression levels of each target are thus determined using the efficiency curves obtained with the range points.
  • the expression levels of the genes of interest were then normalized with respect to the level of expression of the reference gene 36B4 (whose specific primers are: sense primer: ⁇ '-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-S '(SEQ ID No. 23) and antisense primer: ⁇ '-GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-S '(SEQ ID NO: 24)).
  • the induction factor that is to say the ratio between the relative signal (induced by the compound according to the invention) and the average of the relative values of the control group, was then calculated. The higher this factor, the more the compounds according to the invention have an activating character of the gene expression. The final result is represented as the average of the induction values in each experimental group.
  • the inventors have thus demonstrated, on human myocytes in vitro, that the compounds according to the invention have stimulatory effects on the expression of genes involved in carbohydrate and lipid metabolism.
  • the results presented in FIG. 1 -1 show that compounds 3 and 43, at 1 ⁇ M, induce a significant increase in the expression of PDK4 in the myocytes.
  • the results presented in FIG. 1 -2 show that compounds 3 and 43, at 1 ⁇ M, induce a significant increase in the expression of CPTI b in the myocytes.
  • the lipid-lowering properties of the compounds according to the invention were evaluated in vivo by the determination of plasma lipids and by analysis of the expression of target genes of the PPARs in the liver tissue and the muscle tissue after treatment for 7 days with the compounds according to the invention.
  • invention of the E2 / E2 dyslipidemic mouse.
  • the mouse model used is the ApoE2 / E2 mouse, a transgenic mouse for the E2 isoform of human apolipoprotein E (Sullivan PM et al., 1998).
  • this apolipoprotein constituting low and very low density lipoproteins (LDL-VLDL)
  • LDL-VLDL low and very low density lipoproteins
  • Form E2 has a mutation on an amino acid at position 158, which considerably weakens the affinity of this protein for the LDL receptor. The clearance of VLDL is therefore almost zero. Low-density lipoprotein accumulation and mixed type III hyperlipidemia (high cholesterol and triglycerides) occur.
  • PPAR ⁇ regulates the expression of genes involved in the transport of lipids (apolipoproteins such as Apo Al, Apo AII and Apo CIII, membrane transporters such as FAT) or lipid catabolism (ACO, CPT-I or CPT-II, enzymes of ⁇ -oxidation of fatty acids).
  • Treatment with activators of PPAR ⁇ therefore results, in humans and in rodents, in a decrease in the circulating levels of triglycerides.
  • the measurement of plasma lipids after treatment with the compounds according to the invention is therefore an indicator of the agonist nature of the PPARs and therefore of the lipid-lowering character of the compounds according to the invention.
  • the PPAR ⁇ agonist properties of the molecules according to the invention previously measured in vitro must be expressed in the liver by over-expression of the target genes directly under the control of the receptor.
  • PPAR ⁇ the genes that were studied in this experiment are the genes coding for:
  • Acoxi Acyl Co-enzymeA Oxidase, a key enzyme in the mechanism of ⁇ -oxidation of fatty acids
  • Apo CIII apolipoprotein involved in lipid metabolism
  • PDK4 Pyruvate Dehydrogenase Kinase, isoenzyme 4 involved in carbohydrate metabolism.
  • the PPAR ⁇ agonist properties of the molecules according to the invention previously measured in vitro must be expressed at the level of the skeletal muscle by over-expression of the target genes directly under the control of the PPAR ⁇ receptor: the genes which were studied in this experiment are the genes coding for:
  • UCP3 Uncoupling Protein 3, mitiochondhal transporter involved in thermoregulation, PDK-4: Pyruvate dehydrogenase kinase isoform 4, carbohydrate metabolism enzyme.
  • the measurement of the transcriptional activity of the PPAR target genes after treatment with the compounds according to the invention is therefore also an indicator of the lipid-lowering character of the compounds according to the invention.
  • Apo E2 / E2 transgenic mice were maintained under a light / dark cycle of 12/12 hours at a constant temperature of 20 ⁇ 3 ° C. After acclimatization for one week, the mice were weighed and collected in groups of 5 or 6 animals selected so that the distribution of their body weight and plasma lipid level determined a first time before the experiment was uniform. . The compounds tested were suspended in carboxymethylcellulose (Sigma C4888) and administered by intra-gastric gavage, once a day for 7 days at the chosen dose. The animals had free access to water and food (standard diet). At the end of the experiment, the animals were anesthetized after a 4-hour fast, a blood sample was taken on anticoagulant (EDTA) then the mice were weighed and euthanized. The plasma was separated by centrifugation at 3000 rpm for 20 minutes, the samples were stored at + 4 ° C.
  • EDTA anticoagulant
  • Plasma lipid concentrations (total cholesterol and triglycerides) were measured by enzymatic assays (bioMérieux-Lyon-France) according to the supplier's recommendations.
  • Hepatic Tissue Total RNA was extracted from liver fragments by using the kit NucleoSpin 96 RNA ® (Macherey Nagel, Hoerdt, France) according to manufacturer's instructions.
  • RNA 1 ⁇ g of total RNA (quantified by UV spectrophotometer reading) was then retro-transcribed into complementary DNA by a 1 hour reaction at 37 ° C. in a total volume of 30 ⁇ l containing 1X buffer (Invitrogen), 1, 5mM of DTT, 0.18mM of dNTPs (Promega), 200ng of pdN6 (Amersham), 3 OR of RNase inhibitor (Promega) and 1 ⁇ l of MMLV-RT (Invitrogen).
  • MACOXI sense primer: 5'-GAAGCCAGCGTTACGAGGTG-3 '(SEQ ID NO: 3) and antisense primer: 5'-TGGAGTTCTTGGGACGGGTG-3' (SEQ ID No. 4)
  • MApoCIII sense primer: ⁇ '-CTCTTGGCTCTCCTGGCATC-S '(SEQ ID No. 5) and antisense primer 5'-GCATCCTGGACCGTCTTGGA-3' (SEQ ID No. 6) • mUCP3: sense primer: 5'-GCACCGCCAGATGAGTTTTG-3 ' (SEQ ID NO: 21) and antisense primer: 5'-GACGCTGGAGTGGTCCGCTC-3 '(SEQ ID NO: 22)
  • the amount of fluorescence emitted is directly proportional to the amount of complementary DNA present at the beginning of the reaction and amplified during PCR.
  • a range is achieved by successive dilutions of a pool consisting of a few microliters of different retro-transcription reactions. The relative expression levels of each target are thus determined using the efficiency curves obtained with the range points.
  • the expression levels of the genes of interest were then normalized in liver tissue relative to the level of expression of the reference gene 36B4 (whose specific primers are: sense primer: 5'-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3 '(SEQ ID No. 23) and antisense primer: 5'-GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3 '(SEQ ID NO: 24)) and, in muscle tissue relative to the level of expression of the 18S reference gene (whose specific primers are: primer meaning: 5'-
  • the induction factor that is to say the ratio between the relative signal (induced by the compound according to the invention) and the average of the relative values of the control group, was then calculated for each sample. The higher this factor, the more the compound has an activating character of gene expression. The final result is represented as the average of the induction values in each experimental group.
  • Figures 2-1 and 2-2 compare the cholesterol and triglyceride levels after 7 days of treatment with compound 2 at 100 mpk at the levels obtained with the control animals. Unexpectedly, plasma cholesterol and triglyceride levels were very significantly decreased by the treatment.
  • Figure 3-3 compares cholesterol levels after 7 days of treatment with compound 21 to 50 mpk at levels obtained with the control animals. Unexpectedly, cholesterol levels were very significantly decreased by the treatment.
  • the experimental data presented show that the compounds according to the invention have a lipid-lowering effect (decrease in the plasma levels of cholesterol and triglycerides).
  • the experimental data presented show that the compounds according to the invention modulate the expression of ApoCIII, PDK4 and ACOX1 in hepatic tissue, as well as UCP3 and PDK4 in muscle tissue.
  • ApoCIII, PDK4 and ACOX1 encode proteins highly involved in the metabolism of lipids, carbohydrates and thermoregulation, and the fact that their expression is modulated by the compounds according to the invention reinforces the idea that these compounds are of major interest in the metabolic pathologies.
  • lipid-lowering properties of the compounds according to the invention were evaluated in vivo by plasma lipid assay and by measuring the expression of PPAR target genes in the liver and muscle tissues after an oral treatment for 14 days of C57BI6 mice.
  • PPAR ⁇ regulates the expression of genes involved in both the transport of lipids (apolipoproteins such as Apo Al, Apo AII and Apo CIII, membrane transporters such as FAT) and lipid catabolism (ACO, CPT-I or CPT-II enzymes of ⁇ -oxidation of fatty acids).
  • Treatment with activators of PPAR ⁇ therefore results, in humans and in rodents, in a decrease in the circulating levels of triglycerides.
  • the measurement of plasma lipids after treatment with the compounds according to the invention is therefore an indicator of the agonist nature of the PPARs and therefore of the lipid-lowering character of the compounds according to the invention.
  • the PPAR ⁇ agonist properties of the molecules according to the invention previously measured in vitro must be expressed at the hepatic level by a regulation of the expression of the target genes directly under the control of the PPAR ⁇ receptor: the gene which has been studied in this experiment is the gene encoding Apo CIII (apolipoprotein involved in lipid metabolism).
  • the PPAR ⁇ agonist properties of the molecules according to the invention previously measured in vitro must be expressed in the skeletal muscle by over-expression of the target genes directly under the control of the PPAR ⁇ receptor: the genes that were studied in this experiment are the genes encoding CPTI b (Carnitine Palmitoyl-transferase 1b, mitochondrial membrane protein involved in ⁇ -oxidation of fatty acids), UCP2 and UCP3 (Uncoupling Protein 2 and Uncoupling Protein 3, mitiochondrial transporters involved in thermoregulation) and PDK -4 (Pyruvate dehydrogenase kinase isoform 4, enzyme carbohydrate metabolism).
  • CPTI b Carnitine Palmitoyl-transferase 1b, mitochondrial membrane protein involved in ⁇ -oxidation of fatty acids
  • UCP2 and UCP3 Uncoupling Protein 2 and Uncoupling Protein 3, mitiochondrial transporters involved in thermoregulation
  • PDK -4 Pyruvate dehydrogen
  • mice Female C57BI6 mice were maintained under a light / dark cycle of 12/12 hours at a constant temperature of 20 ⁇ 3 ° C. After acclimation for one week, the mice were weighed and pooled in groups of 6 animals selected so that the distribution of their body weights and plasma lipid levels determined a first time before the experiment were uniform. The compounds tested were suspended in carboxymethylcellulose (Sigma C4888) and administered by intragastric gavage, once a day for 14 days at the chosen dose. The animals had free access to water and food (standard diet). At the end of the experiment, the animals were anesthetized after fasting for 4 hours, a blood sample was taken on anticoagulant (EDTA) and the mice were weighed and euthanized. The plasma was separated by centrifugation at 3000 rpm for 20 minutes, the samples were stored at + 4 ° C. Samples of liver tissue were removed and frozen immediately in liquid nitrogen and then stored at -80 ° C. for subsequent analyzes.
  • carboxymethylcellulose Sigma C4888
  • Plasma triglyceride concentrations were measured by enzymatic assays (BioMérieux-Lyon-France) according to the supplier's recommendations.
  • NucleoSpin 96 RNA ® (Macherey Nagel, Hoerdt, France) according to manufacturer's instructions.
  • RNA 1 ⁇ g of total RNA (quantified by UV spectrophotometry) was then retransferred to complementary DNA by a 1 hour reaction at 37 ° C. in a total volume of 30 ⁇ l containing 1X buffer (Invitrogen), 1.5 mM of DTT, 0.18 mM dNTPs (Promega), 200 ng of pdN6 (Amersham), 3 N of RNase inhibitor (Promega) and 1 ⁇ l of MMLV-RT (Invitrogen).
  • the quantitative PCR experiments were carried out using the MyiQ Single-Color Real-Time PCR Detection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) and were carried out using the SYBR Green Supermix iQ kit according to the supplier's recommendations. in 96-well plates, on 5 ⁇ l of diluted retro-transcription reaction with a hybridization temperature of 60 ° C.
  • mPDK4 sense primer: ⁇ '-TACTCCACTGCTCCAACACCTG-S (SEQ ID NO: 17) and antisense primer 5'-GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-3 '(SEQ ID NO: 18)
  • MApoCIII sense primer: 5'-CTCTTGGCTCTCCTGGCATC-3 '(SEQ ID NO: 5) and antisense primer 5'-GCATCCTGGACCGTCTTGGA-3' (SEQ ID No. 6)
  • MUCP2 sense primer: ⁇ '-GTCGGAGATACCAGAGCACTGTCG-S '(SEQ ID No. 19) and antisense primer: 5'-CACATCAACAGGGGAGGCGA-3'
  • mUCP3 sense primer: 5'-GCACCGCCAGATGAGTTTTG-3 '(SEQ ID NO: 21) and antisense primer: 5'-GACGCTGGAGTGGTCCGCTC-3' (SEQ ID NO: 22) • mCPTI b: sense primer: ⁇ '-GGACTGAGACTGTGCGTTCCTG- S '(SEQ ID NO: 21) and antisense primer: 5'-GACGCTGGAGTGGTCCGCTC-3' (SEQ ID NO: 22) • mCPTI b: sense primer: ⁇ '-GGACTGAGACTGTGCGTTCCTG- S '(SEQ
  • the amount of fluorescence emitted is directly proportional to the amount of complementary DNA present at the beginning of the reaction and amplified during the PCR.
  • a range is achieved by successive dilutions of a pool consisting of a few microliters of different retro-transcription reactions. The relative expression levels of each target are thus determined using the efficiency curves obtained with the range points.
  • the expression levels of the genes of interest were then normalized in liver tissue relative to the level of expression of the reference gene 36B4 (whose specific primers are: sense primer: 5'-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3 '(SEQ ID No. 23) and antisense primer: 5'-GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3 '(SEQ ID NO: 24)) and, in muscle tissue relative to the level of expression of the 18S reference gene (whose specific primers are: primer meaning: 5'-
  • FIG. 4 compares the plasma triglyceride levels after 14 days of treatment with compounds 3 and 9, at 50 mpk, at the levels obtained with the control animals. Unexpectedly, circulating levels of triglycerides and were significantly decreased by treatment.
  • the compounds according to the invention are, in vivo, regulators of the expression of PPAR ⁇ target genes in liver tissue.
  • the results presented in FIG. 5 show that compounds 3 and 9, administered at 50 mpk for 14 days to C57BI6 mice, induce a significant decrease in the hepatic expression of the gene encoding ApoCIII.
  • This gene codes for one of the main constituents of triglycerides and therefore participates in the metabolism of lipids and the fact that its expression is modulated by the compounds according to the invention reinforces the idea that these compounds have a major potential interest in the context of metabolic pathologies. .
  • the compounds according to the invention are, in vivo, regulators of the expression of PPAR ⁇ target genes in muscle tissue.
  • the results presented in FIGS. 5-2 to 5-9 show that compounds 9 and 21, administered at 50 mpk for 14 days to C57BI6 mice, induce a significant increase in the expression, in skeletal muscle, of the genes encoding for CPTI b, UCP2, UCP3 and PDK4. These genes encode enzymes involved in the metabolism of lipids, carbohydrates and energy expenditure.
  • the fact that their expression is modulated by the compounds according to the invention reinforces the idea that these compounds are of major interest in the context of metabolic pathologies.
  • the experimental data presented show that the compounds according to the invention have a lipid-lowering effect (decrease in the plasma triglycerides).
  • the experimental data presented show that the compounds according to the invention modulate the expression of ApoCIII in liver tissue, as well as CPTI b, UCP2, UCP3 and PDK4 in muscle tissue.
  • CPTI b, UCP2, UCP3 and PDK4 encode proteins that are highly involved in lipid metabolism and in thermoregulation, and the fact that their expression is modulated by the compounds according to the invention reinforces the idea that these compounds have a major potential interest in pathologies. metabolic.
  • the insulin resistance properties of the compounds according to the invention are evaluated in vivo by measurement of the plasma levels of insulin after oral treatment for 14 days, with the compounds according to the invention, of the db / db mouse. . Moreover, the activating action of the PPARs of the compounds according to the invention was demonstrated by analysis of the gene expression of PPAR target genes in the liver and muscle tissues in the db / db mouse treated for 28 days by the compounds according to the invention.
  • mice Female db / db mice were maintained under a light / dark cycle of 12/12 hours at a constant temperature of 20 ⁇ 3 ° C. After acclimation for one week, the mice were weighed and pooled in groups of 8 animals selected so that the distribution of their body weights and plasma lipid levels determined a first time before the experiment were uniform. The compounds tested were suspended in carboxymethylcellulose (Sigma C4888) and administered by intra-gastric gavage, once a day for 28 days at the chosen dose. The animals had free access to water and food (standard diet). Taking Food and weight gain are recorded throughout the experience.
  • carboxymethylcellulose Sigma C4888
  • mice were anesthetized after fasting for 4 hours, a blood sample was taken on anticoagulant (EDTA) and the mice were weighed and euthanized. The plasma was separated by centrifugation at 3000 rpm for 20 minutes, the samples were stored at + 4 ° C.
  • EDTA anticoagulant
  • liver tissue and muscle tissue were removed and immediately frozen in liquid nitrogen and stored at -80 ° C. for subsequent analyzes.
  • the dosage of murine insulin is carried out by the Elisa method (using the kit INSKR020 from the supplier Crystal chem).
  • Mouse anti-insulin antibody is coated on a microplate.
  • the serum to be assayed for insulin is then deposited on this plate.
  • a guinea pig anti-insulin antibody will recognize the insulin / mouse anti-insulin monoclonal antibody complex and bind to it.
  • a peroxidase-labeled anti-guinea pig antibody is added which binds to the guinea pig anti-insulin antibody.
  • the colorimetric reaction is carried out by adding the substrate of the OPD enzyme (Ortho Phenyl Diamine). The intensity of the staining is proportional to the amount of insulin present in the sample.
  • RNA 1 ⁇ g of total RNA (quantified by UV spectrophotometry) was then retro-transcribed to complementary DNA by a reaction of 1 hour at 37 ° C. in a total volume of 30 ⁇ l containing 1X buffer (Invitrogen), 1.5mM DTT, 0.18mM dNTPs (Promega), 200ng pdN6 (Amersham), 3 OR RNase inhibitor (Promega) and 1 ⁇ l MMLV-RT (Invitrogen).
  • 1X buffer Invitrogen
  • 1.5mM DTT 1.5mM DTT, 0.18mM dNTPs (Promega), 200ng pdN6 (Amersham)
  • 3 OR RNase inhibitor Promega
  • 1 MMLV-RT 1 ⁇ l MMLV-RT
  • the quantitative PCR experiments were carried out using the MyiQ Single-Color Real-Time PCR Detection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) and were carried out using the SYBR Green Supermix iQ kit according to the supplier's recommendations. in 96-well plates, on 5 ⁇ l of diluted retro-transcription reaction with a hybridization temperature of 60 ° C. Specific primer pairs of the studied were used.
  • mPDK4 sense primer: ⁇ '-TACTCCACTGCTCCAACACCTG-S '(SEQ ID No. 17) and antisense primer ⁇ '-GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-S' (SEQ ID No. 18)
  • MApoCIII sense primer: ⁇ '-CTCTTGGCTCTCCTGGCATC-S '(SEQ ID No. 5) and antisense primer 5'-GCATCCTGGACCGTCTTGGA-3' (SEQ ID No. 6)
  • MACOXI sense primer: 5'-GAAGCCAGCGTTACGAGGTG-3 '(SEQ ID NO: 3) and antisense primer: 5'-TGGAGTTCTTGGGACGGGTG-3' (SEQ ID NO: 4) • mUCP2: sense primer: 5'-GTCGGAGATACCAGAGCACTGTCG-3 '
  • MUCP3 sense primer: 5'-GCACCGCCAGATGAGTTTTG-3 '(SEQ ID NO: 21) and antisense primer: 5'-GACGCTGGAGTGGTCCGCTC-3' (SEQ ID No. 22)
  • the amount of fluorescence emitted is directly proportional to the amount of complementary DNA present at the beginning of the reaction and amplified during the PCR.
  • a range is achieved by successive dilutions of a pool consisting of a few microliters of different retro-transcription reactions.
  • the relative expression levels of each target are thus determined using the efficiency curves obtained with the range points.
  • the expression levels of the genes of interest were then normalized in liver tissue relative to the level of expression of the reference gene 36B4 (whose specific primers are: sense primer: 5'-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3 '(SEQ ID No.
  • Figure 6 compares plasma insulin levels after 14 days of treatment with compound 3 administered at 100mpk at levels obtained with control animals. Surprisingly, insulinemia is significantly decreased by the treatment of animals with the compound according to the invention.
  • the compounds according to the invention are, in vivo, regulators of the expression of target genes of the PPARs.
  • FIGS. 7-1 to 7-3 show that compound 3 administered at 100 mpk for 28 days in db / db mice induced in the liver tissue a significant increase in the expression of genes encoding PDK4 ( Figure 7-1) and ACOX1 ( Figure 7-2) as well as a significant decrease in the expression of the gene encoding ApoCIII ( Figure 7-3). All of these genes encode enzymes that are highly involved in lipid and carbohydrate metabolism, and are known as PPAR ⁇ target genes in the liver. The fact that their expression is modulated by the compound 3 according to the invention reinforces the idea that this compound according to the invention has a major potential interest in the context of metabolic pathologies.
  • the inventors have also demonstrated that the compound 3 according to the invention is, in vivo, a regulator of the expression of PPAR ⁇ target genes in skeletal muscle.
  • the results presented in FIGS. 7-4 to 7-6 show that compound 3 administered at 100 mpk for 28 days in db / db mice induces in skeletal muscle a significant increase in the expression of genes encoding PDK4 ( Figure 7-4), UCP2 ( Figure 7-5) and UCP3 ( Figure 7-6).
  • the experimental data presented show that the compounds according to the invention induce in vivo an improvement in insulin sensitivity.
  • the experimental data presented show that the compounds according to the invention modulate the expression of genes regulated by the activation of PPARs which encode proteins highly implicated in the metabolism of lipids, carbohydrates and thermoregulation.
  • the stimulating effects of the compounds according to the invention were evaluated by measuring the ⁇ -oxidation of the fatty acids by pre-treated myocytes for 24 hours with the compounds according to the invention. More induction of ⁇ -oxidation fatty acids is increased, the more the compound according to the invention is stimulator of metabolism in muscle cells.
  • the objective is to measure the amount of tritiated water formed during the mitochondrial oxidation of 3 H-labeled fatty acids.
  • the murine C2C12 cell line (from ECACC) is cultured in DMEM medium (Gibco, 41965-039) supplemented with 1% L-Glutamine (Gibco, 25030), 1% penicillin / streptomycin (VWR, BWSTL0022 / 100) and Decomplemented fetal calf serum (FC Gibco, 10270-106).
  • DMEM medium Gibco, 41965-039
  • L-Glutamine Gibco, 25030
  • penicillin / streptomycin VWR, BWSTL0022 / 100
  • FC Gibco Decomplemented fetal calf serum
  • the cells are treated with the compounds according to the invention in the differentiation culture medium.
  • the compounds according to the invention were tested at doses of 1 ⁇ M.
  • the compounds according to the invention are dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma, D5879).
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the cells are treated for 24h at 37 ° C., 5% CO 2.
  • the effect of the compounds according to the invention is compared with the effect of DMSO alone.
  • the culture medium is replaced by a medium
  • the tritium count is performed on 100 ⁇ l of precipitated culture supernatant.
  • 50 ⁇ l of precipitated supernatant is evaporated for 2 days then the residual tritium is measured in order to evaluate the amount of tritiated palmitate not converted into water.
  • a standard range is made by serial dilutions of the tritiated palmitate / BSA complex to determine the amount of palmitate transformed into water. For each time of the kinetics, 1 h, 2h and 3h, the amount in nanomoles of oxidized palmitate is calculated by linear regression. The areas under the curve are determined for each condition and the results are normalized at
  • the final result is represented as the average of the induction values in each experimental group.
  • the inventors have also demonstrated, on myocytes in vitro, that the compounds according to the invention have stimulating effects of the ⁇ -oxidation of fatty acids.
  • the results presented in FIG. 8 show that the compounds 3, 9, 21, 41, 43 and 47 according to the invention, at 1 ⁇ M, induce a significant increase in the ⁇ -oxidation of the fatty acids in the myocytes.
  • the human monocyte line THP1 (ATCC source) is cultured in RPMI1640 medium supplemented with 25mM Hepes (Gibco, 42401-018), 1% L-glutamine (Gibco, 25030-24), 1% penicillin / streptomycin (Biochrom AG; ATCC source).
  • the differentiation medium is aspirated and replaced with the treatment medium (same composition as the culture medium but without fetal calf serum and with 1% ultroser (PaII Life Science, P / N267051)).
  • the compounds according to the invention are dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO, Fluka, 41640).
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the compounds according to the invention were tested at 1 and 10 ⁇ M.
  • the cells are treated for 24h at 37 ° C., 5% CO 2.
  • the effect of the compounds according to the invention is compared with the effect of DMSO alone (0.1%).
  • RNA 1 ⁇ g of total RNA (quantified by UV spectrophotometer reading) was then retro-transcrted to complementary DNA by a 1 hour reaction at 37 ° C in a total volume of 30 microliters containing 1X buffer (Invitrogen), 1 5mM DTT, 0.18mM dNTPs (Promega), 200ng pdN6 (Amersham), 3 OR RNase inhibitor (Promega) and 1 ⁇ l MMLV-RT (Invitrogen).
  • the quantitative PCR experiments were carried out using the MyiQ Single-Color Real-Time PCR Detection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) and were carried out using the SYBR Green Supermix iQ kit according to the supplier's recommendations. in 96-well plates, on 5 ⁇ l of diluted retro-transcription reactions with a hybridization temperature of 60 ° C. A pair of primers specific for the studied gene was used:
  • HABCAl sense primer: ⁇ '-CTGAGGTTGCTGCTGTGGAAG-S '(SEQ ID No. 1) and antisense primer: 5'-CATCTGAGAACAGGCGAGCC-3' (SEQ ID No. 2)
  • the amount of fluorescence emitted is directly proportional to the amount of complementary DNA present at the beginning of the reaction and amplified during the PCR.
  • a range is achieved by successive dilutions of a pool consisting of a few microliters of different retro-transcription reactions. The relative expression levels of each target are thus determined using the efficiency curves obtained with the range points.
  • the expression levels of the genes of interest were then normalized in liver tissue relative to the level of expression of the reference gene 36B4 (whose specific primers are: sense primer: 5'-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3 '(SEQ ID No. 23) and antisense primer: 5'-GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3 '(SEQ ID NO: 24)).
  • the induction factor i.e. the ratio of the relative signal (induced by the compound according to the invention) and the average of the relative values of the control group, was then calculated. The higher this factor, the more the compound has an activating character of gene expression. The final result is represented as the average of the induction values in each experimental group.
  • the inventors have demonstrated that the compounds according to the invention are, in vitro in macrophages, stimulators of the reverse transport of cholesterol.
  • the results obtained are reported in Table 2 below. These results show that compounds 9 and 21, at 1 ⁇ M, as well as compounds 2, 3, 13, 21 and 33, at 10 ⁇ M, induce a significant increase in the expression of the gene coding for ABCA 1 in macrophages.
  • Example 11 In Vitro Evaluation of the Anti-Inflammatory Properties of the Compounds According to the Invention in a Monocup Model
  • the anti-inflammatory effects of the compounds according to the invention were evaluated by measuring the secretion and the expression of the macrophage Chemoattractant Protein (MCP1) by human monocytes treated for 24 hours with the compounds according to the invention and stimulated with PMA (phorbol 12-myhstate 13-acetate, which causes an inflammatory response of the cells).
  • MCP1 macrophage Chemoattractant Protein
  • PMA phorbol 12-myhstate 13-acetate
  • THP-1 Cells The human monocyte line THP1 (ATCC source) is cultured in RPMH medium 640 supplemented with 25mM Hepes (Gibco, 42401 -018), 1% glutamine (Gibco, 25030-24), 1% penicillin / streptomycin (Biochrom AG, A 2213) and 10% decomplemented fetal calf serum (Gibco FC, 10270-106).
  • the cells are seeded on 24-well plates (Primaria BD Falcon) at the density of 8.70 ⁇ 10 5 cells / well in treatment medium (same composition as the culture medium but with 0.2% decomplemented fetal calf serum). and in the presence of 5 ng / mL of phorbol 12-myhstate 13-acetate (PMA) to induce the inflammatory response.
  • treatment medium standard composition as the culture medium but with 0.2% decomplemented fetal calf serum.
  • PMA phorbol 12-myhstate 13-acetate
  • the compounds according to the invention were tested at doses of 1 ⁇ M.
  • the compounds according to the invention are dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO, Fluka, 41640).
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the cells are treated for 24h at 37 ° C., 5% CO 2.
  • the effect of the compounds according to the invention is compared with the effect of DMSO alone.
  • the treatment medium is recovered and the concentration of MCP1 is measured using the Elisa kit "Human MCP1 Elisa set" (BD OptEIA; 555179) according to the manufacturer's recommendations.
  • An anti-human MCP1 monoclonal antibody is fixed on a plate and then the culture supernatants are dispensed.
  • a biotinylated anti-MCP1 antibody will then bind to the complex.
  • a third conjugated antibody coupled to a Peroxidase enzyme allows in the presence of substrate to initiate an enzymatic reaction whose result is a staining proportional to the amount of fixed MCP1 and can be measured spectrophotometrically.
  • a range is made from a known concentration point and allows calculation of the MCP1 concentration of each sample.
  • the induction factor that is to say the ratio between the signal induced by the compound according to the invention and the signal of the control group, was then calculated. The lower this factor, the more the compound has an inhibitory character of the secretion of MCP1. The final result is represented as the average of the induction values of each experimental group.
  • RNA extraction RNA extraction, reverse transcription and quantitative PCR.
  • RNA is extracted from the cells using the NucleoSpin ® kit
  • RNA 1 ⁇ g of total RNA (quantified by UV spectrophotometer reading) was then retro-transcrted to complementary DNA by a 1 hour reaction at 37 ° C in a total volume of 30 microliters containing 1X buffer (Invitrogen), 1 5mM DTT, 0.18mM dNTPs (Promega), 200ng pdN6 (Amersham), 3 OR RNase inhibitor (Promega) and 1 ⁇ l MMLV-RT (Invitrogen).
  • the quantitative PCR experiments were carried out using the MyiQ Single-Color Real-Time PCR Detection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) and were carried out using the SYBR Green Supermix iQ kit according to the supplier's recommendations. in 96-well plates, on 5 ⁇ l of diluted retro-transcription reactions with a hybridization temperature of 60 ° C. A pair of primers specific for the studied gene was used:
  • HMCP1 sense primer: ⁇ '-AGGAAGATCTCAGTGCAGAGG-S '(SEQ ID No. 11) and antisense primer: ⁇ '-AGTCTTCGGAGTTTGGGTTTT-S' (SEQ ID No. 12)
  • the amount of fluorescence emitted is directly proportional to the amount of complementary DNA present at the beginning of the reaction and amplified during the course of the reaction. PCR. For each target studied, a range is achieved by successive dilutions of a pool consisting of a few microliters of different retro-transcription reactions. The relative expression levels of each target are thus determined using the efficiency curves obtained with the range points.
  • the expression levels of the genes of interest were then normalized in liver tissue relative to the level of expression of the reference gene 36B4 (whose specific primers are: sense primer: 5'-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3 '(SEQ ID No. 23) and antisense primer: 5'-GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3 '(SEQ ID NO: 24)).
  • the induction factor that is to say the ratio between the relative signal (induced by the compound according to the invention) and the average of the relative values of the control group, was then calculated. The lower this factor, the more the compound has an inhibitory character of gene expression. The final result is represented as the average of the induction values in each experimental group.
  • FIGS. 9-1 and 9-2 show that compounds 2, 21 and 43, at 1 ⁇ M, induce a significant decrease in the secretion and expression of MCP1 in monocytes.
  • FIG. 9-3 show that the compound 21 according to the invention, at 1 ⁇ M, induces a significant decrease in the expression of MCP1 in human monocytes.
  • the anti-inflammatory effects of the compounds according to the invention were evaluated by measuring the secretion of interleukin-6 (IL-6) by human macrophages pretreated for 24 hours with the compounds according to the invention and stimulated for 6 hours. with LPS (lipopolysaccharide, which causes an inflammatory response of the cells). The more the secreted amount of IL-6 is decreased, the more the compound according to the invention inhibits the inflammatory reaction.
  • IL-6 interleukin-6
  • the human monocyte line THP1 (ATCC source) is cultured in RPMH medium 640 supplemented with 25mM Hepes (Gibco; 42401 -018), 1% glutamine
  • the cells are seeded on 24-well plates (Primaria BD
  • the differentiation medium is aspirated and replaced with the treatment medium (same composition as the culture medium but without fetal calf serum and with 1% ultroser (PaII Life Science, P / N267051)).
  • the compounds according to the invention were tested at doses of 1 and 10 ⁇ M.
  • the compounds according to the invention are dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO,
  • the treatment medium is recovered and the IL-6 concentration is measured using the Elisa kit "Human IL-6 Elisa set" (BD OptEIA; 555220) according to the manufacturer's recommendations.
  • An anti-IL6 specific antibody is fixed on a plate and the culture supernatants are distributed.
  • the IL6 secreted by the cells then binds to the antibody which is in turn specifically recognized by a second antibody coupled to a peroxidase enzyme.
  • the coloring resulting from the enzymatic activity, after addition of the substrate, is proportional to the amount of IL-6 fixed and can be measured spectrophotometrically.
  • a range is made from a known concentration point and allows to calculate the IL-6 concentration of each sample.
  • the induction factor that is to say the ratio between the signal induced by the compound according to the invention and the signal of the control group. The lower this factor, the more the compound has an inhibitory character of IL-6 secretion. The final result is represented as the average of the induction values of each experimental group.
  • results The inventors have also demonstrated, on human macrophages in vitro, that the compounds according to the invention have anti-inflammatory effects.
  • the results presented in FIG. 10 show that the compounds 2, 13 and 33, at 1 or 10 ⁇ M, induce a significant decrease in the secretion of IL-6 in the macrophages.
  • the inflammatory response appears in many neurological disorders, such as multiple sclerosis, Alzheimer's and Parkinson's disease, cerebral ischemia and traumatic brain injury.
  • inflammation is one of the important factors of neurodegeneration.
  • cerebral accidents one of the first reactions of glia cells is to release cytokines and free radicals. The consequence of this release of cytokines and free radicals is an inflammatory response at the brain level that can lead to neuron death (Rothwell NJ, 1997).
  • the neuroprotective and / or anti-inflammatory properties of compound 2 were evaluated in vivo by measuring the volume of infarction induced at the cerebral level.
  • the murine model used is the model of cerebral ischemia induced by occlusion of the average artery for one hour (Deplanques D et al., 2003).
  • mice Male (wild) C57BL6 mice were used for this experiment.
  • the animals are kept under a 12-hour light / dark cycle at a temperature of 20 +/- 3 ° C.
  • the animals are fed a standard diet of 4% fatty acids and have free access to water and food. Food intake and weight gain are recorded.
  • the animals are treated by gavage with the compounds according to the invention (200 mg / kg / day) or the vehicle, one hour and then 24h and 48h after the induction of ischemia of the middle cerebral artery.
  • the animals were anesthetized with an intraperitoneal injection of 300 mg / kg of chloral hydrate.
  • a rectal probe is put in place and the body temperature is maintained at 37 +/- 0.5 0 C.
  • the blood pressure is measured during the entire experiment.
  • the right carotid artery is updated with a medial cervical incision.
  • the pterygopalatine artery was ligated at its origin and an artery is performed in the external carotid artery to slip a nylon monofilament.
  • This filament is then gently advanced in the common carotid artery and then in the internal carotid artery to close the origin of the middle cerebral artery. After one hour, the filament is removed to allow reperfusion.
  • the brains are quickly frozen and severed.
  • the sections are colored Cresyl violet.
  • the uncolored areas of the brain sections were considered to be injured by the infarction.
  • the inventors have demonstrated that the compounds according to the invention have lipid-lowering properties, by lowering the levels of cholesterol and plasma triglycerides.
  • the compounds according to the invention are regulators of the expression of genes encoding enzymes strongly involved in the metabolism of lipids, carbohydrates and thermoregulation. These results, obtained in vivo, testify to the therapeutic potential of the compounds according to the invention with respect to major pathologies such as dyslipidemias.
  • the inventors have demonstrated the activating nature of the PPARs in different cellular models resulting in particular in the regulation of the expression of genes coding for enzymes strongly involved in the metabolism of lipids, carbohydrates and thermoregulation as well as only by an anti-inflammatory action.
  • the compounds according to the invention have a neuroprotective action in the ischemia-reperfusion model.

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Abstract

La présente invention concerne des composés dérivés de 1,3-diphénylpropane substitués, les compositions pharmaceutiques les comprenant ainsi que leurs applications thérapeutiques, notamment dans les domaines de la santé humaine et animale.

Description

DERIVES DE 1 ,3-DIPHENYLPROPANE SUBSTITUES, PREPARATIONS ET
UTILISATIONS
L'invention concerne de nouveaux composés dérivés de 1 ,3- diphénylpropane substitués, les compositions pharmaceutiques les comprenant ainsi que leurs applications thérapeutiques, notamment dans les domaines de la santé humaine et animale.
Les inventeurs ont mis en évidence, de manière surprenante, que les composés selon l'invention possèdent de manière intrinsèque des propriétés agonistes PPAR (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor).
Les molécules décrites dans l'invention sont donc d'un intérêt particulier pour traiter les complications associées au syndrome métabolique, l'athérosclérose, l'ischémie cérébrale, les maladies autoimmunes, l'insulino- résistance, l'obésité, l'hypertension, le diabète, les dyslipidémies, les maladies cardiovasculaires, les maladies inflammatoires (asthme, etc.), les pathologies neurodégénératives (Alzheimer, etc.), les cancers, etc., ainsi que pour permettre la diminution du risque cardiovasculaire global. Préférentiellement, les composés selon l'invention sont utilisables pour le traitement des dyslipidémies.
Le diabète, l'obésité et les dyslipidémies (taux plasmatiques de cholestérol LDL et de triglycérides élevés, cholestérol HDL faible, etc.) font partie des facteurs de risque cardiovasculaire clairement identifiés qui prédisposent un individu à développer une pathologie cardiovasculaire (Mensah M, 2004). Ces facteurs de risque s'additionnent aux facteurs de risque liés au mode de vie tels que le tabagisme, l'inactivité physique et les régimes alimentaires déséquilibrés. Un effet synergique existe entre ces différents facteurs : la présence concomitante de plusieurs d'entre eux conduit à une aggravation dramatique du risque cardiovasculaire et il convient alors de parler de risque global (« global risk ») pour les maladies cardiovasculaires. La prévalence des dyslipidémies atteignait 43,6% de la population en 2004 dans les principaux pays développés. La prévalence du diabète, actuellement en nette augmentation, est en passe de devenir de plus en plus significative dans l'épidémiologie des maladies cardiovasculaires : la prévalence du diabète est en effet estimée à 7,6% de la population pour 2010 (Fox-Tucker J, 2005).
Selon l'International Atherosclerosis Society (International Atherosclerosis Society, 2003), les maladies cardiovasculaires représentent la première cause de mortalité dans les pays industrialisés et deviennent de plus en plus fréquentes dans les pays en voie de développement. Ces maladies sont notamment les maladies coronariennes, l'ischémie cérébrale et les maladies artérielles périphériques.
Ces données justifient donc l'adoption de mesures énergiques pour réduire significativement la morbidité et la mortalité dues aux pathologies cardiovasculaires et la nécessité de trouver des traitements efficaces, complémentaires d'une modification de l'hygiène de vie, agissant sur les facteurs de risque des maladies cardiovasculaires et sur leurs conséquences, devient une urgence mondiale.
Les composés selon l'invention, par leurs propriétés d'agonistes PPAR, présentent un intérêt particulier pour le traitement des pathologies liées aux dérèglements du métabolisme lipidique et/ou glucidique, telles que le diabète (diabète de type 2), l'obésité, les dyslipidémies ou l'inflammation, ainsi que pour la diminution du risque cardiovasculaire global.
Les PPAR (α, γ et δ) sont en effet connus comme étant impliqués dans ce type de pathologies (Kota BP et al., 2005) : des ligands de ces récepteurs sont donc commercialisés pour traiter de telles pathologies (Lefebvre P et al., 2006) et de nombreux modulateurs PPAR, agonistes ou antagonistes, sélectifs ou non, sont actuellement en développement pharmaceutique avancé. Un modulateur
PPAR ayant des effets bénéfiques sur la résistance à l'insuline, l'obésité, les dyslipidémies, l'hypertension et/ou l'inflammation pourrait être utilisé dans le traitement du syndrome métabolique (ou syndrome X) (Liu Y and Miller A, 2005).
La famille des PPAR comprend trois isoformes, désignés α, γ et δ (encore appelé β), chacun codé par un gène différent. Ces récepteurs font partie de la superfamille des récepteurs nucléaires et des facteurs de transcription qui sont activés par la liaison de certains acides gras et/ou de leurs métabolites lipidiques. Les PPAR activés forment des hétérodimères avec les récepteurs de l'acide rétinoïque 9-cis (RXR ou Retinoid X Receptor) et se fixent sur des éléments de réponse spécifiques (PPRE ou Peroxisome Proliferator Response Elément) au niveau du promoteur de leurs gènes cibles, permettant ainsi le contrôle de la transcription. PPARα contrôle le métabolisme lipidique (hépatique et musculaire) et l'homéostasie du glucose, par un contrôle direct de la transcription de gènes codant pour des protéines impliquées dans l'homéostasie lipidique. Il exerce des effets anti-inflammatoires et anti-prolifératifs et prévient les effets pro- athérogéniques de l'accumulation du cholestérol dans les macrophages en stimulant l'efflux du cholestérol (Lefebvre P, Chinetti G, Fruchart JC and Staels B, 2006). Les fibrates (fénofibrate, bézafibrate, ciprofibrate, gemfibrozil), par l'intermédiaire de PPARα, sont ainsi utilisés en clinique dans le traitement de certaines dyslipidémies en baissant les triglycérides et en augmentant les taux plasmatiques de cholestérol HDL(High Density Lipoprotein). PPARγ est un régulateur-clé de l'adipogenèse qui est impliqué dans le métabolisme lipidique des adipocytes matures, dans l'homéostasie du glucose, notamment dans la résistance à l'insuline, dans l'inflammation, dans l'accumulation de cholestérol au niveau des macrophages et dans la prolifération cellulaire (Lehrke M and Lazar MA, 2005). PPARγ joue par conséquent un rôle dans la pathogenèse de l'obésité, de l'insulino-résistance et du diabète. Les thiazolidinediones (Rosiglitazone, Troglitazone, etc.) sont des ligands du récepteur PPARγ utilisés dans le traitement du diabète de type 2.
Il existe des ligands de PPARδ actuellement en développement clinique (L-165041 (CAS Registry Number 79558-09-1 ), GW501516 (CAS Registry Number 317318-70-0)) mais aucun ligand PPARδ n'est actuellement utilisé comme médicament. Ce récepteur est une cible attractive pour le développement de médicaments utilisables dans le traitement des dyslipidémies, de l'athérosclérose, de l'obésité et de la résistance à l'insuline : PPARδ est en effet impliqué dans le contrôle du métabolisme lipidique et glucidique, dans la balance énergétique, dans la neurodégénérescence, dans l'obésité, dans la formation des cellules spumeuses et dans l'inflammation (Gross B et al., 2005).
Au-delà du rôle direct joué par les ligands PPAR sur la régulation du métabolisme des lipides et des glucides, ces molécules ont un spectre d'action pléiotropique dû à la grande diversité des gènes cibles des PPAR. Ces multiples propriétés font des PPAR des cibles thérapeutiques d'intérêt pour le traitement de diverses pathologies, notamment des pathologies cardio-métaboliques (c'est- à-dire des pathologies cardiovasculaires et métaboliques) ainsi que pour permettre la diminution du risque cardiovasculaire global.
Les ligands PPAR ont un rôle neuroprotecteur dans la maladie d'Alzheimer, la sclérose en plaque, la maladie de Parkinson et plus généralement dans toute pathologie impliquant une mort ou une dégénérescence neuronale, qu'il s'agisse des neurones du système nerveux central ou périphérique, une mort ou une dégénérescence des oligodendrocytes, une mort ou une dégénérescence de cellules gliales, une inflammation des cellules gliales (c'est- à-dire les astrocytes, la microglie ou les oligodendrocytes) ou des cellules de Schwann. Ainsi, il a été récemment montré que les agonistes PPARδ permettaient de préserver l'apprentissage et la mémoire chez des rats pour lesquels la maladie d'Alzheimer avait été induite (de la Monte SM et al., 2006). Il a également été montré que l'administration orale d'agonistes de PPARδ réduisait les symptômes cliniques et l'activation de l'inflammation astrogliale et microgliale dans un modèle de sclérose en plaques (Polak, 2005).
Les composés selon l'invention, par leurs propriétés agonistes PPAR, représentent donc un outil thérapeutique avantageux pour l'amélioration des pathologies liées aux dérèglements du métabolisme lipidique et/ou glucidique, pour la diminution du risque cardiovasculaire global ainsi que pour la neuroprotection. Notamment, les composés selon l'invention possèdent des propriétés agonistes PPARδ et PPARα et présentent donc un intérêt dans le traitement des pathologies métaboliques telles que le syndrome métabolique (dont les caractéristiques sont l'obésité, en particulier l'obésité abdominale, une concentration anormale de lipides sanguins (taux élevé de triglycérides et/ou faible taux de cholestérol HDL (dyslipidémie)), une glycémie élevée et/ou une résistance à l'insuline et une hypertension) et dans le traitement des dyslipidémies. La présente invention a pour objet des composés dérivés de 1 ,3- diphénylpropane de formule générale (I) suivante :
Figure imgf000006_0001
(I) dans laquelle :
X1 représente un halogène, un groupement R1 , -SR1 ou -OR1 ; X2 représente un hydrogène, un halogène, un groupement R2, -SR2 ou -OR2; X3 représente un halogène, un groupement R3, -SR3 ou -OR3; X4 représente un hydrogène, un halogène, un groupement R4, -SR4 ou -OR4; X5 représente un halogène, un groupement R5, -SR5 ou -OR5;
X6 représente un halogène, un groupement R6, -OH, -SH, -SR6 ou -OR6; X7 représente un halogène, un groupement R7, -SR7 ou -OR7; X8 représente un groupement R8, -SR8 ou -OR8 ;
R1 , R3, R5 et R7, identiques ou différents, représentant un hydrogène ou groupement alkyle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aryle ou hétéroaryle;
R2, R4 et R6, identiques ou différents, représentant un groupement alkyle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aryle ou hétéroaryle ;
R8 représentant un groupement alkyle substitué par un ou plusieurs substituant(s) du groupe 1 ou du groupe 2 ;
A représente :
(i) un groupement -CR9R10,
R9 et R10, identiques ou différents, représentant un hydrogène, un groupement hydroxy, un groupement alkyle ou un groupement -OR11 , R11 étant tel que défini ci-dessous, (ii) un groupement carbonyle (CO),
(iii) un groupement oxime (C=N-O-H) ou éther d'oxime (C=N-O-R11 ), R11 représentant un groupement alkyle, substitué ou non par un groupement cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aryle ou hétéroaryle tels que définis ci-dessous; B représente :
(i) un groupement alkyle non substitué, saturé et présentant deux atomes de carbone (CH2-CH2), (ii) un groupement alcène non substitué et présentant deux atomes de carbone (CH=CH), (iii) un groupement alcyne présentant deux atomes de carbone (C=C);
les substituants du groupe 1 sont choisis parmi -COOR12 et -CONR12R13 ;
les substituants du groupe 2 sont choisis parmi -SO3H et -SO2NRI 2R13 ;
R12 et R13, identiques ou différents, représentant un hydrogène ou un radical alkyle substitué ou non par au moins un substituant du groupe 1 ou 2 ;
à l'exclusion des composés de formule générale (I) dans laquelle simultanément :
• A représente un groupement carbonyle,
• B représente un alcène non substitué comprenant deux atomes de carbone (CH=CH), • X6 et X7 représentent des atomes de chlore,
• X8 correspond à -OCH2COOH ;
leurs stéréoisomères (diastéréoisomères, énantiomères), purs ou en mélange, mélanges racémiques, isomères géométriques, tautomères, sels, hydrates, solvates, formes solides ainsi que leurs mélanges.
Dans le cadre de la présente invention, le terme « alkyle » désigne un radical hydrocarboné saturé, linéaire, ramifié, halogène ou non, ayant plus particulièrement de 1 à 24, de préférence de 1 à 10 et ayant plus particulièrement 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 atomes de carbone. On peut citer, par exemple, les radicaux méthyle, trifluorométhyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, isobutyle, tertiobutyle, sec-butyle, pentyle, néopentyle ou n-hexyle. En particulier, un radical alkyle ou alcényle ayant 1 à 4 atomes de carbone sont de préférence choisis parmi les groupes méthyle, éthyle, n-propyle, n-butyle, isopropyle, sec-butyle, isobutyle tertiobutyle et leurs dérivés insaturés, présentant au moins une double liaison (telle que notamment: CH=CH). Le terme « cycloalkyle » désigne un groupe alkyle tel que défini ci-dessus et formant au moins un cycle. On peut citer notamment, à titre de groupes cycloalkyle ayant de 3 à 8 atomes de carbone, le groupe cyclopropyle, cyclobutyle, cyclopentyle, cyclohexyle, cycloheptyle et cyclooctyle.
Le terme « hétérocycloalkyle » désigne un groupe alkyle saturé ou non et formant au moins un cycle interrompu par un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S ou P. On peut citer notamment, à titre de groupes hétérocycloalkyle, l'aziridine, la pyrrolidine, le tetrahydrothiophene, l'imidazoline, la pipéridine, la pipérazine et la morpholine.
Le terme « aryle » fait référence à des groupes aromatiques comprenant de préférence 5 à 14 atomes de carbone, avantageusement 6 à 14 atomes de carbone (i.e. 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13 ou 14 atomes de carbone). Ils sont généralement mono- ou bi-cycliques. On peut citer par exemple le phényle, le benzyle, α-naphtyle, β-naphtyle, anthracényle ou fluorényle. Dans le cadre de la présente invention, les groupements aryles peuvent être substitués par un ou plusieurs substituants, identiques ou différents. Parmi les substituants des groupes aryles, on peut citer à titre d'exemple, les halogènes, les groupements alkyle (tel que défini ci-dessus) et alkyloxy (défini comme une chaîne alkyle, telle que définie ci-dessus, liée à la molécule par l'intermédiaire d'un oxygène (liaison éther)) tels que méthyle, trifluorométhyle, méthoxy et trifluorométhoxy, les aminés, les groupements nitro, les groupements hydroxy, les groupements aryle, hétéroaryle et hétérocycles.
Le terme « hétéroaryle » fait référence à des groupes aromatiques comprenant de préférence 3 à 14 atomes de carbone, avantageusement 3 à 8 atomes de carbone (i.e. 3, 4, 6, 7 ou 8 atomes de carbone), interrompus par un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S ou P. On peut citer notamment, à titre de groupes hétéroaryles ayant de 3 à 8 atomes de carbone, le pyrrole, l'imidazole et la pyridine. Les atomes d'halogène sont choisis parmi les atomes de brome, fluor, iode, chlore, préférentiellement parmi les atomes de brome, fluor et chlore.
Un aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle A représente un groupement carbonyle (CO).
Un autre aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle A représente un groupement oxime (C=N-O-H) ou éther d'oxime (C=N-O-RH ), R11 représentant un groupement alkyle, substitué ou non par un groupement cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aryle ou hétéroaryle. Préférentiellement, R11 représente un groupement méthyle.
Un autre aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle A représente un groupement -CR9R10, R9 représentant un hydrogène et R10 représentant un groupement hydroxy, un groupement alkyle ou un groupement -OR11 , R11 représentant un groupement alkyle, substitué ou non par un groupement cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aryle ou hétéroaryle. De préférence, R11 représente un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle ou un groupement benzyle ; lesdits groupements alkyle, phényle ou benzyle pouvant être éventuellement halogènes (c'est-à-dire halogènes ou non halogènes). Par exemple, R11 peut représenter un groupement alkyle comprenant préférentiellement 1 , 2, 3 ou 4 atomes de carbone, de préférence 2 atomes de carbone, avantageusement R11 représente le groupement éthyle. Préférentiellement, l'invention concerne les composés de formule générale
(I) dans laquelle A représente un groupement -CR9R10, R9 représentant un hydrogène et R10 représentant un groupement hydroxy.
Un aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle B représente un groupement alkyle non substitué, saturé comprenant deux atomes de carbone (CH2-CH2) ou un alcène non substitué, comprenant deux atomes de carbone (CH=CH). De manière préférentielle B représente un groupement alkyle non substitué, saturé comprenant deux atomes de carbone.
Un autre aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle X8 représente un groupement R8, -OR8 ou -SR8, R8 représentant un groupement alkyle substitué par un substituant du groupe 1.
Encore plus préférentiellement, X8 représente un groupement -OR8 dans lequel R8 représente un groupement alkyle substitué par un substituant du groupe 1. De préférence, le groupement alkyle de R8 présente 1 à 8 atomes de carbone, plus préférentiellement 1 à 5 atomes de carbone. Dans ce mode de réalisation, R12 et R13, identiques ou différents, représentent de préférence un hydrogène ou un radical alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone.
Préférentiellement, le substituant du groupe 1 est du type -COOR12, R12 étant tel que défini ci-avant et représentant préférentiellement un hydrogène ou un groupement alkyle comprenant 1 , 2, 3, 4, 5 ou 6 atomes de carbone, de préférence comprenant 1 , 2, 3, ou 4 atomes de carbone, en particulier un groupement tertiobutyle.
De préférence, R8 représentant un radical méthylène, ledit radical méthylène étant non ramifié ou ramifié par un ou deux groupements alkyle ou alcènyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, et lié à un substituant du groupe 1 , avec
R12 et R13, identiques ou différents, représentant un hydrogène ou un radical alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone.
Encore plus préférentiellement, X8 représente un groupement -OC(CHs)2COOH ou -OC(CHS)2COOC(CH3)S, -OCH(CH2CH3)COOC(CH3)3J
-OCH(CH2CH3)COOH, -OCH(CH3)COOH, -OCH(CH3)COOC(CH3)3,
-OCH((CH2)3CH3)COOC(CH3)s, et -OCH((CH2)3CH3)COOH, de préférence parmi les groupements -OC(CH3)2COOH, -OC(CH3)2COOC(CH3)3,
-OCH(CH2CH3)COOC(CH3)3 et -OCH(CH2CH3)COOH, de préférence un groupement -OC(CHs)2COOH ou -OC(CH3)2COOC(CH3)3,
-OCH(CH2CH3)COOC(CHS)S1 -OCH(CH2CH3)COOH. Un autre objet particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle X6 et X7, identiques ou différents, représentent un halogène, de préférence le chlore ou le fluor.
De préférence, X6 et X7 sont identiques et représentent un halogène, préférentiellement un atome de chlore ou de fluor, encore plus préférentiellement de chlore.
Un autre aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle R1 , R3, R5 et R7, identiques ou différents, choisis parmi un atome d'hydrogène, un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle ; lesdits groupements alkyle, phényle ou benzyle pouvant être éventuellement halogènes (c'est-à-dire halogènes ou non halogènes), et R2, R4 et R6, identiques ou différents, choisis parmi un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle ; lesdits groupements alkyle, phényle ou benzyle pouvant être éventuellement halogènes (c'est-à-dire halogènes ou non halogènes).
Un autre objet particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle X3 représente un halogène, un groupement R3, -SR3 ou -OR3, R3 représentant groupement alkyle, cycloalkyle, aryle ou hétéroaryle.
Un autre aspect préféré concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle X3 représente un groupement R3 ou -OR3, R3 représentant un groupement alkyle ou aryle. Préférentiellement, R3 représente un groupement alkyle comportant 1 à 4 atomes de carbone, notamment 1 , 2 ou 3 atomes de carbone, encore plus préférentiellement halogène, ou R3 représente un groupement aryle comportant 5, 6, 7 ou 8 atomes de carbone, en particulier un groupement phényle ou benzyle.
De manière préférée, X3 représente un groupement -O-phényle, -CF3, -OCF3, -SCH3, -OCH3.
Un autre aspect préféré concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle X3 représente un halogène, préférentiellement un brome. Un autre objet particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) caractéristés par des combinaisons de ces modes particuliers.
Un autre objet particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle X1 , X2, X4 et X5 représentent un hydrogène.
Un autre objet particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle X3 représente un halogène, un groupement R3, -SR3 ou -OR3, R3 représentant groupement alkyle, cycloalkyle, aryle ou hétéroaryle et dans laquelle X1 , X2, X4 et X5 représentent un hydrogène. De préférence, R3 représente un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle, éventuellement halogènes (c'est-à-dire halogènes ou non halogènes). X3 est avantageusement choisi parmi : un atome de brome, un groupement trifluorométhyle, trifluorométhoxy, méthoxy, méthylthio et phényloxy.
Un autre objet particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle:
- X1 , X3 et X5 sont des atomes d'hydrogène, et - X2 et X4, identiques ou différents, représentent des atomes d'halogène ou des groupement R1, -SR1 ou -OR1 correspondants, avec R1, correspondant à R2 ou R4, choisi parmi un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle, éventuellement halogène, Avantageusement, X2 désigne un groupement trifluorométhyle et X4, un atome de fluor.
Un autre objet particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle: - X1 , X2 et X3 sont des atomes d'hydrogène,
- X4 est un groupement trifluorométhyle, et
- X5 est un atome de fluor. Un autre objet particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle X2 et/ou X4 représente un halogène, de préférence le fluor, ou un groupement alkyle, de préférence ayant 1 à 4 atomes de carbone, préférentiellement halogène. De préférence, le groupement X2 ou X4 représente un groupement -CF3.
De manière encore plus préférentielle, l'invention a pour objet les composés de formule générale (I) dans laquelle au moins l'une des conditions suivantes, de préférence toutes les conditions, est remplie :
X1 , X2, X4 et X5, identiques, représentent un hydrogène ; et/ou
X3 représente un halogène, un groupement R3, -SR3 ou -OR3, R3 représentant groupement alkyle, cycloalkyle, aryle ou hétéroaryle, de préférence un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle; et/ou
X6 et X7, identiques ou différents, représentent un halogène; et/ou
X8 représente un groupement R8, -OR8 ou -SR8,
R8 représentant un groupement alkyle, de préférence ayant 1 à 8 ou 1 à 5 atomes de carbone, substitué par un groupement -COOR12, R12 représentant un hydrogène ou un radical alkyle substitué ou non par au moins un substituant du groupe 1 ou 2; et/ou
A représente un groupement carbonyle (CO) ; et/ou
B représente :
• un groupement alkyle non substitué, saturé comprenant deux atomes de carbone (CH2-CH2), ou un alcène non substitué, comprenant deux atomes de carbone (CH=CH). Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, linvention a pour objet des composés dérivés de 1 ,3-diphénylpropane de formule générale (I) suivante :
Figure imgf000014_0001
(I) dans laquelle :
X1 représente un halogène, un groupement R1 , -SR1 ou -OR1 ;
X2 représente un hydrogène, un halogène, un groupement R2, -SR2 ou -OR2
X3 représente un halogène, un groupement R3, -SR3 ou -OR3 ;
X4 représente un hydrogène, un halogène, un groupement R4, -SR4 ou
-OR4 ;
X5 représente un halogène, un groupement R5, -SR5 ou -OR5 ;
X6 représente un halogène, un groupement R6, -OH, -SH, -SR6 ou -OR6 ; X7 représente un halogène, un groupement R7, -SR7 ou -OR7 ;
X8 représente un groupement R8, -SR8 ou -OR8 ;
avec : - R1 , R3, R5 et R7, identiques ou différents, choisis parmi un atome d'hydrogène, un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle ; lesdits groupements alkyle, phényle ou benzyle pouvant être éventuellement halogènes (c'est-à-dire halogènes ou non halogènes),
- R2, R4 et R6, identiques ou différents, choisis parmi un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle ; lesdits groupements alkyle, phényle ou benzyle pouvant être éventuellement halogènes (c'est-à-dire halogènes ou non halogènes),
- R8 représentant un radical méthylène, ledit radical méthylène étant : - non ramifié ou ramifié par un ou deux groupements alkyle ou alcènyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, et
- lié à un substituant choisi parmi -COOR12 et -CONR12R13 ; R12 et R13, identiques ou différents, représentant un hydrogène ou un radical alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone,
A représente :
(i) un groupement-CR9R10, R9 représentant un atome d'hydrogène et R10 représentant un groupement hydroxy ou un groupement -OR11 , dans lequel R11 représente un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle ou un groupement benzyle ; lesdits groupements alkyle, phényle ou benzyle pouvant être éventuellement halogènes (c'est-à-dire halogènes ou non halogènes), ou
(ii) un groupement carbonyle (CO),
B représente :
(i) un groupement alkyle non substitué et saturé, à deux atomes de carbone (CH2-CH2), ou
(ii) un groupement alcène non substitué, à deux atomes de carbone (CH=CH) ;
à l'exclusion des composés de formule générale (I) dans laquelle simultanément : « A représente un groupement carbonyle,
• B représente un alcène non substitué comprenant deux atomes de carbone (CH=CH),
• X6 et X7 représentent des atomes de chlore,
• X8 correspond à -OCH2COOH ;
leurs stéréoisomères (diastéréoisomères, énantiomères), purs ou en mélange, mélanges racémiques, isomères géométriques, tautomères, sels, hydrates, solvates, formes solides ainsi que leurs mélanges. De manière préférentielle, dans le mode de réalisation particulièrement préféré, l'invention porte sur des composés de formule générale (I) dans laquelle
X8 représente un groupement -OR8, avec R8 désignant un radical méthylène, ramifié ou non, lié à un substituant -COOR12. Bien entendu, l'invention concerne aussi les bioisomères correspondants, X8 représentant un groupement -SR8.
Avantageusement, X8 est choisi parmi les groupements : -OC(CHs)2COOH, -OC(CHS)2COOC(CH3)S, -OCH(CH2CHS)COOC(CHS)S , -OCH(CH2CHS)COOH, -OCH(CHS)COOH, -OCH(CH3)COOC(CHS)3, -OCH((CH2)sCH3)COOC(CH3)s, et -OCH((CH2)3CH3)COOH, de préférence parmi les groupements -OC(CH3)2COOH, -OC(CH3)2COOC(CH3)3,
-OCH(CH2CH3)COOC(CHS)3 et -OCH(CH2CHS)COOH.
De manière également préférentielle, dans le mode de réalisation particulièrement préféré, l'invention porte sur des composés de formule générale
(I) dans laquelle X6 et X7 sont identiques et représentent des atomes d'halogène.
En particulier, X6 et X7 sont identiques et représentent des atomes de chlore ou de fluor.
Selon une variante du mode de réalisation particulièrement préféré de l'invention, :
- X1 , X2, X4 et X5 sont des atomes d'hydrogène, et
- X3 représente un atome d'halogène (chlore, fluor, brome ou iode) ou un groupement R3, -SR3 ou -OR3, avec R3 choisi parmi un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle, éventuellement halogène. Selon cette variante, X3 est avantageusement choisi parmi : un atome de brome, un groupement trifluorométhyle, trifluorométhoxy, méthoxy, méthylthio et phényloxy.
Selon une autre variante du mode de réalisation particulièrement préféré de l'invention:
- X1 , X3 et X5 sont des atomes d'hydrogène, et - X2 et X4, identiques ou différents, représentent des atomes d'halogène ou des groupement R1, -SR1 ou -OR1 correspondants, avec R1, correspondant à R2 ou R4, choisi parmi un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle, éventuellement halogène,
Selon cette variante, avantageusement, X2 désigne un groupement trifluorométhyle et X4, un atome de fluor.
Selon une variante supplémentaire du mode de réalisation particulièrement préféré de l'invention :
- X1 , X2 et X3 sont des atomes d'hydrogène,
- X4 est un groupement trifluorométhyle, et
- X5 est un atome de fluor.
De manière préférée, les composés conformes à l'invention sont choisis parmi :
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthyl- propanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoïque ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropyl]phénoxy]-2- méthyl-propanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthoxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthoxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthylthio)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthylthio)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]- 2-méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]- 2-méthyl-propanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluoronnéthylphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluoronnéthoxyphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]- 2-méthylpropanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(phényloxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(phényloxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]- 2-méthylpropanoïque ; - le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[3-fluoro-5-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[3-fluoro-5-trifluorométhylphényl]-3- oxopropényl-]phénoxy]-2-méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-nnéthy- propanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]- butanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]- butanoïque ;
- le 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]- 2-méthylpropanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- hexanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-hexanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2-fluoro-3-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle ; - le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2-fluoro-3-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]- phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2-fluoro-3-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]- phénoxy]-2-méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluoronnéthylphényl]-3-hydroxy-propyl]phénoxy]- butanoate de tertiobutyle ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-éthoxy-propyl]phénoxy]- butanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-éthoxy-propyl]- phénoxy]-butanoïque ; - le 2-(4-(3-(4-bromophényl)-3-oxoprop-1 -ènyl)-2,3-dichlorophénoxy)- propanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-(4-(3-(4-bromophényl)-3-oxoprop-1 -ènyl)-2,3-dichlorophénoxy)- propanoïque ;
- le 2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)prop-1 -ènyl)- phénoxy)butanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)prop-1 -ènyl)- phénoxy)butanoïque ;
- l'acide 2-(2,3-dichloro-4-(3-hydroxy-3-(4-(trifluoronnéthyl)phényl) propyl)- phénoxy)butanoïque ; - le 2-(4-(3-(benzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3-dichloro- phénoxy)butanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-(4-(3-(benzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3- dichloro-phénoxy)butanoïque ;
- le 2-(4-(3-(4-bromobenzyloxy)-3-(4-(trifluoronnéthyl)phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-(4-(3-(4-bromobenzyloxy)-3-(4-(trifluoronnéthyl)phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoïque ; - l'acide 2-(2,3-difluoro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)- phénoxy)-2-méthylpropanoïque ;
- le 2-(4-(3-(4-iodobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-(4-(3-(4-iodobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoïque ;
- le 2-(4-(3-(3,5-dibromobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-(4-(3-(3,5-dibromobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl) phényl)propyl)-2,3-dichlorophénoxy)butanoïque ;
- le (R)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)- phénoxy)propanoate de méthyle ;
- l'acide (R)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)- phénoxy)propanoïque ; - le (S)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)- phénoxy)propanoate de méthyle ;
- le (S)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)- phénoxy)propanoïque.
Les composés selon l'invention peuvent contenir un ou plusieurs centres asymétriques. L'invention inclut les stéréoisomères (diastéréoisomères, énantiomères), purs ou en mélange, ainsi que les mélanges racémiques et les isomères géométriques. Quand un mélange énantiomériquement pur (ou enrichi) est souhaité, il pourra être obtenu soit par purification du produit final ou d'intermédiaires chiraux, soit par synthèse asymétrique suivant des méthodes connues de l'homme de métier (utilisant par exemple des réactifs et catalyseurs chiraux). Les composés selon l'invention peuvent avoir différentes formes tautomères stables et toutes ces formes ainsi que leurs mélanges sont inclus dans l'invention.
L'invention concerne également les sels « pharmaceutiquement acceptables » des composés de formule (I) selon l'invention. D'une manière générale, ce terme désigne les sels peu ou non toxiques obtenus à partir de bases ou d'acides, organiques ou inorganiques. Ces sels peuvent être obtenus lors de l'étape de purification finale des composés selon l'invention ou par incorporation du sel sur les composés déjà purifiés.
Certains composés selon l'invention et leurs sels pourraient être stables sous plusieurs formes solides. La présente invention inclut toutes les formes solides des composés selon l'invention, ce qui inclut les formes amorphes, polymorphes, mono- et poly-cristallines.
Les composés selon l'invention peuvent exister sous forme libre ou sous forme solvatée, par exemple avec des solvants pharmaceutiquement acceptables tels que l'eau (hydrates) ou l'éthanol.
Les composés selon l'invention peuvent éventuellement être marqués par un ou des isotopes (radioactifs ou non). Des exemples d'isotopes pouvant être inclus dans la structure des composés selon l'invention peuvent être choisis parmi l'hydrogène, le carbone, l'oxygène, le soufre tels que 2H, 3H, 13C, 14C, 18O, 17O, 35S respectivement. Les isotopes radioactifs 3H et 14C sont particulièrement préférés car faciles à préparer et à détecter dans le cadre d'études de biodisponibilité in vivo des substances. Les isotopes lourds (tels que 2H) sont particulièrement préférés ; ils sont notamment utilisés comme standards internes dans des études analytiques.
La présente invention a également pour objet un procédé de synthèse des composés de formule générale (I), qui comprend:
1. une étape de mise en contact en milieu basique ou en milieu acide d'au moins un composé de formule (C) avec au moins un composé de formule (D) :
Figure imgf000021_0001
dans lesquelles X1 , X2, X3, X4, X5, X6, X7 sont tels que définis précédemment, X8 représente un groupement R8, -SR8, -OR8, hydroxy ou thiol, R8 étant tel que défini précédemment ; 2. une étape de réduction des composés obtenus à l'étape (1 ), 3. et éventuellement une étape d'insertion de groupements fonctionnels.
Les conditions de mise en œuvre de l'étape (1 ) en milieu acide ou basique et de l'étape (2) sont connues de l'homme du métier et peuvent varier dans une large mesure. Les protocoles de synthèse peuvent être en particulier ceux présentés dans la partie « exemples » de la présente invention.
La mise en contact de ces deux composés est avantageusement réalisée de manière stœchiométrique. Elle est réalisée de préférence à une température appropriée (entre environ 18°C et 1000C) et à pression atmosphérique.
En milieu basique, la réaction est de préférence réalisée en présence d'une base forte, tel qu'un hydroxyde de métal alcalin, comme l'hydroxyde de sodium ou un alcoolate de métal alcalin comme l'éthylate de sodium.
En milieu acide, la réaction est de préférence réalisée en présence d'un acide fort, tel que l'acide chlorhydrique.
Les composés ainsi obtenus peuvent être isolés par des méthodes classiques et connues de l'homme du métier.
La présente invention a aussi pour objet les composés tels que décrits ci- avant, à titre de médicaments.
La présente invention a également pour objet un composé tel que décrit ci- avant, pour le traitement des complications associées au syndrome métabolique, de l'athérosclérose, de l'ischémie cérébrale, des maladies autoimmunes, des maladies cardiovasculaires, de l'insulino-résistance, de l'obésité, de l'hypertension, du diabète, des dyslipidémies, des maladies inflammatoires (tel que l'asthme), des pathologies neurodégénératives (en particulier la sclérose en plaques, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, les tauopathies (démences fronto-temporales, maladie de Pick, dégénérescence cortico-basale, paralysie supranucléaire progressive), les démences corticales, les amyotrophies spinales, les troubles cognitifs légers (MCI : MiId Cognitive Impairment), les synucléopathies, les pathologies à corps de Lewy, la chorée d'Huntington, les épilepsies, la sclérose latérale amyotrophique, les maladies à prions (Maladie de Creutzfeld-Jakob), le syndrome de Down, l'Ataxie de Friedreich, les ataxies spino-cérébelleuses, la maladie de Charcot-Marie-Tooth, les complications neurologiques associées au SIDA, les douleurs chroniques, la dégénérescence cérébelleuse, l'hypoxie cérébelleuse, les neuropathies associées au diabète), des cancers, etc., ainsi que pour permettre la diminution du risque cardiovasculaire global. Préférentiellement, l'invention a pour objet un composé tel que décrit ci- avant, pour traiter les facteurs de risque cardiovasculaire liés aux dérèglements du métabolisme lipidique et/ou glucidique (notamment les hyperlipidémies, le diabète de type 2, l'obésité, etc.) et en particulier permettant la diminution du risque cardiovasculaire global.
Encore plus préférentiellement, l'invention concerne un composé tel que décrit ci-avant pour le traitement du diabète ou des dyslipidémies.
La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant, dans un support pharmaceutiquement acceptable, au moins un composé tel que décrit ci-dessus, éventuellement en association avec un ou plusieurs autres principes actifs thérapeutiques et/ou cosmétiques.
Il s'agit avantageusement d'une composition pharmaceutique pour le traitement des complications associées au syndrome métabolique, de l'athérosclérose, de l'ischémie cérébrale, des maladies autoimmunes, des maladies cardiovasculaires, de l'insulino-résistance, de l'obésité, de l'hypertension, du diabète, des dyslipidémies, des maladies inflammatoires (tel que l'asthme), des pathologies neurodégénératives (en particulier la sclérose en plaques, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, les tauopathies (démences fronto-temporales, maladie de Pick, dégénérescence cortico-basale, paralysie supranucléaire progressive), les démences corticales, les amyotrophies spinales, les troubles cognitifs légers (MCI : MiId Cognitive Impairment), les synucléopathies, les pathologies à corps de Lewy, la chorée d'Huntington, les épilepsies, la sclérose latérale amyotrophique, les maladies à prions (Maladie de Creutzfeld-Jakob), le syndrome de Down, l'Ataxie de Friedreich, les ataxies spino-cérébelleuses, la maladie de Charcot-Marie-Tooth, les complications neurologiques associées au SIDA, les douleurs chroniques, la dégénérescence cérébelleuse, l'hypoxie cérébelleuse, les neuropathies associées au diabète), des cancers, etc., ainsi que pour permettre la diminution du risque cardiovasculaire global.
Il s'agit préférentiellement d'une composition pharmaceutique pour traiter les facteurs de risque cardiovasculaire liés aux dérèglements du métabolisme lipidique et/ou glucidique (notamment les hyperlipidémies, le diabète de type 2, l'obésité, etc.) et en particulier permettant la diminution du risque cardiovasculaire global.
Encore plus préférentiellement, la composition pharmaceutique selon l'invention est destinée au traitement du diabète ou des dyslipidémies.
Un autre objet de l'invention concerne une composition nutritionnelle comprenant au moins un composé tel que décrit ci-dessus.
La présente invention a aussi pour objet les composés tels que décrits ci- avant, à titre de produits cosmétiques.
Un autre objet de l'invention réside dans l'utilisation d'au moins un composé tel que décrit ci-avant pour la préparation de compositions pharmaceutiques destinées au traitement de diverses pathologies telles que spécifiées ci-dessus, notamment liées à des troubles du métabolisme lipidique et/ou glucidique parmi lesquelles on peut citer les dyslipidémies. Plus généralement, l'invention a pour objet l'utilisation d'au moins un composé tel que décrit ci-avant pour la préparation de compositions pharmaceutiques destinées à traiter les facteurs de risques pour les maladies cardiovasculaires liés aux dérèglements du métabolisme des lipides et/ou des glucides et en particulier destinées à diminuer ainsi le risque cardiovasculaire global. A titre d'exemple (et de manière non limitative), les composés selon l'invention pourront de manière avantageuse être administrés en combinaison avec un ou plusieurs autres agents thérapeutiques et/ou cosmétiques, en particulier commercialisés ou en développement, tels que : - des anti-diabétiques : les insulinosécréteurs (sulfonylurées (glibenclamide, glimépiride, gliclazide, etc.) et glinides (répaglinide, natéglinide, etc.)), les inhibiteurs de l'alpha-glucosidase, les agonistes PPARγ (thiazolidinediones telles que rosiglitazone, pioglitazone), les agonistes mixtes PPARα/PPARγ (tesaglitazar, muraglitazar), les pan-PPAR (composés activant simultanément les 3 isoformes PPAR), des biguanides (metformine), les inhibiteurs de la Dipeptidyl Peptidase IV (sitagliptin, vildagliptin), les agonistes du Glucagon-Like Peptide-1 (GLP-1 ) (exenatide), etc.
- l'insuline
- des molécules hypolipémiantes et/ou hypocholestérolémiantes : les fibrates (fénofibrate, gemfibrozil), les inhibiteurs de la HMG CoA réductase ou hydroxylméthylglutaryl Coenzyme A réductase (les statines telles que atorvastatine, simvastatine, fluvastatine), les inhibiteurs de l'absorption du cholestérol (ezetimibe, phytostérols), les inhibiteurs de la CETP ou Cholesteryl Ester Transfer Protein (torcetrapib), les inhibiteurs de l'ACAT ou Acyl-Coenzyme A cholestérol acylTransferase (Avasimibe, Eflucimibe), les inhibiteurs MTP (Microsomal Triglycéride Transfer Protein), les agents séquestrants des acides biliaires (cholestyramine), la vitamine E, les acides gras poly-insaturés, les acides gras oméga 3, les dérivés de type acide nicotinique (niacine), etc. - des agents anti-hypertenseurs et les agents hypotenseurs : les inhibiteurs
ACE (Angiotensin-Converting Enzyme) (captopril, enalapril, ramipril ou quinapril), les antagonistes du récepteur de l'angiotensine II (losartan, valsartan, telmisartan, eposartan, irbesartan, etc.), les béta-bloquants (atenolol, metoprolol, labetalol, propranolol), les diurétiques thiazidiques et non thiazidiques (furosemide, indapamide, hydrochlorthiazide, anti- aldosterone), les vasodilatateurs, les bloquants des canaux calciques (nifedipine, felodipine ou amlodipine, diltiazem ou verapamil), etc. - des agents anti-plaquettaires : Aspirine, Ticlopidine, Dipyridamol, Clopidogrel, flurbiprofen, etc.
- des agents anti-obésité : Sibutramine, les inhibiteurs de lipases (orlistat), les agonistes et antagonistes PPARδ, les antagonistes du récepteur cannabinoïde CB1 (rimonabant), etc.
- des agents anti-inflammatoires : par exemple, les corticoïdes (prednisone, betamethasone, dexamethasone, prednisolone, méthylprednisolone, hydrocortisone, etc.), les AINS ou Anti-Inflammatoires Non Stéroidiens dérivés de l'indole (indomethacine, sulindac), les AINS du groupe des arylcarboxyliques (acide tiaprofenique, diclofenac, etodolac, flurbiprofen, ibuprofen, ketoprofen, naproxen, nabumetone, alminoprofen), les AINS dérivés de l'oxicam (meloxicam, piroxicam, tenoxicam), les AINS du groupe des fénamates, les inhibiteurs sélectifs de la COX2 (celecoxib, rofecoxib), etc. - des agents anti-oxydants : par exemple le probucol, etc.
- des agents utilisés dans le traitement de l'insuffisance cardiaque : les diurétiques thiazidiques ou non thiazidiques (furosemide, indapamide, hydrochlorthiazide, anti-aldosterone), les inhibiteurs de l'ACE (captopril, enalapril, ramipril ou quinapril), les digitaliques (digoxin, digitoxin), les béta bloquants (atenolol, metoprolol, labetalol, propranolol), les inhibiteurs de
Phosphodiesterases (enoximone, milhnone), etc.
- des agents utilisés pour le traitement de l'insuffisance coronaire : les béta- bloquants (atenolol, metoprolol, labetalol, propranolol), les bloquants des canaux calciques (nifedipine, felodipine ou amlodipine, bepridil, diltiazem ou verapamil), les agents donneurs de NO (trinitrine, isosorbide dinitrate, molsidomine), l'Amiodarone, etc.
- des anticancéreux : les agents cytotoxiques (agents intéragissants avec l'ADN, agents alkylants, cisplatine et dérivés), les agents cytostatiques (les analogues GnRH (Gonatropin-Releasing Hormone), les analogues de la somatostatine, les progestatifs, les anti-oestrogènes, les inhibiteurs de l'aromatase, etc.), les modulateurs de la réponse immunitaire (interférons, IL2, etc.), etc. - des anti-asthmatiques tels que des bronchodilatateurs (agonistes des récepteurs béta 2), des corticoïdes, le cromoglycate, les antagonistes du récepteur aux leucotriènes (montelukast), etc.
- des corticoïdes utilisés dans le traitement des pathologies de la peau telles que le psoriasis et les dermatites
- des vasodilatateurs et/ou des agents anti-ischémiques (buflomedil, extrait de Ginkgo Biloba, naftidrofuryl, pentoxifylline, piribédil), etc.
L'invention concerne également une méthode de traitement de diverses pathologies telles que spécifiées ci-dessus, notamment liées à des troubles du métabolisme des lipides et/ou des glucides comprenant l'administration à un sujet, notamment humain, d'une quantité efficace d'un composé ou d'une composition pharmaceutique tels que définis ci-avant.
Au sens de l'invention, le terme «une quantité efficace » se réfère à une quantité du composé suffisante pour produire le résultat biologique désiré.
Le terme « sujet » désigne un mammifère et plus particulièrement un humain.
Le terme « traitement » désigne le traitement curatif, symptomatique et/ou préventif. Les composés de la présente invention peuvent ainsi être utilisés chez des sujets (comme les mammifères, en particulier humains) atteints d'une maladie déclarée. Les composés de la présente invention peuvent aussi être utilisés pour retarder ou ralentir la progression ou prévenir une progression plus en avant de la maladie, améliorant ainsi la condition des sujets. Les composés de la présente invention peuvent enfin être administrés aux sujets non malades, mais qui pourraient développer normalement la maladie ou qui ont un risque important de développer la maladie.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention comprennent avantageusement un ou plusieurs excipients ou véhicules, acceptables sur le plan pharmaceutique. On peut citer par exemple des solutions salines, physiologiques, isotoniques, tamponnées, etc., compatibles avec un usage pharmaceutique et connues de l'homme du métier. Les compositions peuvent contenir un ou plusieurs agents ou véhicules choisis parmi les dispersants, solubilisants, stabilisants, conservateurs, etc. Des agents ou véhicules utilisables dans des formulations (liquides et/ou injectables et/ou solides) sont notamment la méthylcellulose, l'hydroxyméthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, le polysorbate 80, le mannitol, la gélatine, le lactose, des huiles végétales, l'acacia, les liposomes, etc. Les compositions peuvent être formulées sous forme de suspensions injectables, gels, huiles, comprimés, suppositoires, poudres, gélules, capsules, aérosols, etc., éventuellement au moyen de formes galéniques ou de dispositifs assurant une libération prolongée et/ou retardée. Pour ce type de formulation, on utilise avantageusement un agent tel que la cellulose, des carbonates ou des amidons.
Les composés ou compositions selon l'invention peuvent être administrés de différentes manières et sous différentes formes. Ainsi, ils peuvent être par exemple administrés de manière systémique, par voie orale, parentérale, par inhalation ou par injection, comme par exemple par voie intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, trans-dermique, intra-artérielle, etc. Pour les injections, les composés sont généralement conditionnés sous forme de suspensions liquides, qui peuvent être injectées au moyen de seringues ou de perfusions, par exemple.
Il est entendu que le débit et/ou la dose injectée peuvent être adaptés par l'homme du métier en fonction du patient, de la pathologie, du mode d'administration, etc. Typiquement, les composés sont administrés à des doses pouvant varier entre 1 μg et 2g par administration, préférentiellement de 0,01 mg à 1 g par administration. Les administrations peuvent être quotidiennes voire répétées plusieurs fois par jour, le cas échéant. D'autre part, les compositions selon l'invention peuvent comprendre, en outre, d'autres agents ou principes actifs. LEGENDES DES FIGURES
Abréviations employées sur les figures :
- Cpd = composés ; - Ctrl = contrôle,
- J = Jour ;
- mpk =mg/kg/jour.
- ABCA1 = ATP-binding cassette, sub-family A, member 1 .
- ACOX1 = acyl-Coenzyme A oxidase 1 , palmitoyl - ApoCIII = Apolipoprotein C-III
- CPT1 b = carnitine palmitoyl transferase 1 b
- MCP1 = monocyte chemoattractant protein-1
- IL6 = Interleukin 6
- PDK4 = pyruvate dehydrogenase kinase, isoenzyme 4 - UCP2 = Uncoupling protein 2
- UCP3 = Uncoupling protein 3.
Figures 1-1 et 1-2 : Evaluation in vitro des propriétés activatrices de PPARδ des composés selon l'invention par mesure de l'expression de PDK4 et CPTIb dans des mvocvtes
Les effets stimulateurs du métabolisme lipidique et glucidique des composés selon l'invention ont été évalués par la mesure de l'expression de la Pyruvate Dehydrogenase Kinase 4 (PDK4) et de la Carnitine Palmitoyl Transferase Ib (CPT 1 b) par des myocytes humains traités pendant 24 heures avec les composés selon l'invention. Il est décrit que la régulation de l'expression de ces gènes est directement contrôlée par PPARδ dans ce type cellulaire. Plus l'expression des gènes PDK4 et CPTI b est augmentée, plus le composé testé est activateur de PPARδ et donc stimulateur du métabolisme dans les cellules musculaires. Les niveaux d'expression sont normalisés par rapport au niveau d'expression du gène de référence 36B4.
Figure 1-1 : expression de PDK4 dans les myocytes humains, traités pendant 24 heures avec les composés 3 et 43 à 1 μM. Figure 1 -2 : expression de CPTI b dans les myocytes humains, traités pendant 24 heures avec les composés 3 et 43 à 1 μM.
Figures 2-1 à 2-3 et 3-1 à 3-7 : Evaluation in vivo des propriétés hypolipémiantes et activatrices des PPAR dans la souris ApoE2/E2 des composés selon l'invention.
L'effet hypolipémiant des composés selon l'invention a été évalué in vivo chez la souris humanisée pour l'isoforme E2 de l'apolipoproteine E par la mesure des taux de cholestérol et de triglycérides plasmatiques après 7 jours de traitement par voie orale. Ces taux ont été comparés à ceux obtenus avec des animaux contrôles (non traités par les composés selon l'invention). La différence mesurée témoigne de l'effet hypolipémiant des composés selon l'invention.
Figure 2-1 : taux de cholestérol plasmatique après 7 jours de traitement avec le composé 2, administré à 100 mpk. Figure 2-2 : taux de triglycérides plasmatiques après 7 jours de traitement avec le composé 2, administré à 100 mpk.
Figure 2-3 : taux de cholestérol plasmatique après 7 jours de traitement avec le composé 21 , administré à 50 mpk.
L'efficacité des composés selon l'invention a aussi été évaluée par la mesure, dans les tissus hépatiques et musculaires, de l'expression de gènes liés au métabolisme des lipides et des glucides, ainsi que de la thermorégulation. Les niveaux d'expression ont été normalisés par rapport au niveau d'expression du gène de référence 36B4 pour le tissu hépatique, et par rapport au niveau d'expression du gène de référence 18S pour le tissu musculaire. Le facteur d'induction, a ensuite été calculé. Plus ce facteur est élevé, plus le composé a un caractère activateur d'expression génique. Le résultat final est représenté comme moyenne des valeurs d'induction dans chaque groupe expérimental. Figure 3-1 : expression de l'Acoxi dans le tissu hépatique, chez la souris E2/E2, après 7 jours de traitement avec le composé 2 (100 mpk).
Figure 3-2 : expression de l'ApoCIII dans le tissu hépatique, chez la souris E2/E2, après 7 jours de traitement avec le composé 2 (100 mpk). Figure 3-3 : expression de PDK4 dans le tissu hépatique, chez la souris E2/E2, après 7 jours de traitement avec le composé 21 (50mpk). Figure 3-4 : expression de l'Acoxi dans le tissu hépatique, chez la souris E2/E2, après 7 jours de traitement avec le composé 21 (50mpk). Figure 3-5 : expression de l'ApoCIII dans le tissu hépatique, chez la souris E2/E2, après 7 jours de traitement avec le composé 21 (50mpk).
Figure 3-6 : expression de UCP3 dans le muscle squelettique, chez la souris E2/E2, après 7 jours de traitement avec le composé 2 (100 mpk). Figure 3-7 : expression de PDK4 dans le muscle squelettique, chez la souris E2/E2, après 7 jours de traitement avec le composé 2 (100 mpk).
Figures 4 et 5-1 à 5-9: Evaluation in vivo des propriétés hypolipémiantes et activatrices des PPAR chez la souris C57BI6 des composés selon l'invention. L'effet des composés selon l'invention a été évalué in vivo chez la souris C57BI6 par la mesure des taux de triglycérides plasmatiques après 14 jours de traitement par voie orale; ces taux ont été comparés à ceux obtenus avec des animaux contrôles (non traités par les composés selon l'invention). La différence mesurée témoigne de l'effet hypolipémiant des composés selon l'invention. Figure 4 : taux de triglycérides plasmatiques après 14 jours de traitement avec les composés 3 et 9, administrés à 50 mpk.
L'efficacité des composés selon l'invention a aussi été évaluée par la mesure, dans les tissus hépatiques et musculaires de l'expression de gènes liés au métabolisme des lipides et des glucides, ainsi que de la thermorégulation. Les niveaux d'expression ont été normalisés par rapport au niveau d'expression du gène de référence 36B4 pour le tissu hépatique, et par rapport au niveau d'expression du gène de référence 18S pour le tissu musculaire. Le facteur d'induction, a ensuite été calculé. Plus ce facteur est élevé, plus le composé a un caractère activateur d'expression génique. Le résultat final est représenté comme moyenne des valeurs d'induction dans chaque groupe expérimental. Figure 5-1 : expression de l'ApoCIII dans le tissu hépatique, chez la souris C57BI6, après 14 jours de traitement avec les composés 3 et 9 (50 mpk). Figure 5-2 : expression de CPTI b dans le muscle squelettique, chez la souris C57BI6, après 14 jours de traitement avec le composé 9 (50 mpk). Figure 5-3 : expression de UCP2 dans le muscle squelettique, chez la souris C57BI6, après 14 jours de traitement avec le composé 9 (50 mpk). Figure 5-4 : expression de UCP3 dans le muscle squelettique, chez la souris C57BI6, après 14 jours de traitement avec le composé 9 (50 mpk). Figure 5-5 : expression de PDK4 dans le muscle squelettique, chez la souris C57BI6, après 14 jours de traitement avec le composé 9 (50 mpk). Figure 5-6 : expression de CPTI b dans le muscle squelettique, chez la souris C57BI6, après 14 jours de traitement avec le composé 21 (50 mpk).
Figure 5-7 : expression de UCP2 dans le muscle squelettique, chez la souris C57BI6, après 14 jours de traitement avec le composé 21 (50 mpk). Figure 5-8 : expression de UCP3 dans le muscle squelettique, chez la souris C57BI6, après 14 jours de traitement avec le composé 21 (50 mpk). Figure 5-9 : expression de PDK4 dans le muscle squelettique, chez la souris C57BI6, après 14 jours de traitement avec le composé 21 (50 mpk).
Figures 6 et 7-1 à 7-6: Evaluation in vivo, chez la souris db/db, des propriétés antidiabétiques et activatrices des PPAR des composés selon l'invention.
L'effet des composés selon l'invention a été évalué in vivo chez la souris db/db par la mesure d'insuline plasmatique après 14 jours de traitement par voie orale avec les composés selon l'invention. Ces taux ont été comparés à ceux obtenus avec des animaux contrôles (non traités par les composés selon l'invention). La différence mesurée témoigne de l'effet sur l'insulino-résistance des composés selon l'invention.
Figure 6 : insulinémie après 14 jours de traitement des souris db/db par le composé 3, administré à 100 mpL
L'efficacité du composé selon l'invention a aussi été évaluée par la mesure, dans les tissus hépatiques et musculaires de l'expression de gènes impliqués dans le métabolisme glucidique, lipidique, et la dissipation d'énergie, après 28 jours de traitement. Les niveaux d'expression de chaque gène ont été normalisés par rapport au niveau d'expression des gènes de référence 36B4 dans le tissu hépatique et 18S dans le tissu musculaire. Le facteur d'induction, c'est-à-dire le rapport entre le signal relatif (induit par le composé selon l'invention) et la moyenne des valeurs relatives du groupe contrôle, a ensuite été calculé. Plus ce facteur est élevé, plus le composé a un caractère activateur d'expression génique. Le résultat final est représenté comme moyenne des valeurs d'induction dans chaque groupe expérimental.
Figure 7-1 : expression de PDK4 (Pyruvate Deshydrogenase Kinase, isoforme 4) dans le tissu hépatique, chez la souris db/db, après 28 jours de traitement avec le composé 3, administré à 100 mpk.
Figure 7-2 : expression de ACOX1 (Acyl Co-enzymeA Oxydase 1 ) dans le tissu hépatique, chez la souris db/db, après 28 jours de traitement avec le composé 3, administré à 100 mpk. Figure 7-3 : expression d'ApoCIII (Apolipoprotéine CIII) dans le tissu hépatique, chez la souris db/db, après 28 jours de traitement avec le composé 3, administré à 100 mpk.
Figure 7-4 : expression de PDK4 (Pyruvate Deshydrogenase Kinase, isoforme 4) dans le tissu musculaire, chez la souris db/db, après 28 jours de traitement avec le composé 3, administré à 100 mpk. Figure 7-5 : expression de UCP2 (Uncoupling Protein 2) dans le tissu musculaire, chez la souris db/db, après 28 jours de traitement avec le composé 3, administré à 100 mpk.
Figure 7-6 : expression de UCP3 (Uncoupling Protein 3) dans le tissu musculaire, chez la souris db/db, après 28 jours de traitement avec le composé 3, administré à 100 mpk.
Figure 8 : Evaluation in vitro des propriétés métaboliques des composés selon l'invention par la mesure de la β-oxydation des acides gras dans des myocvtes Les effets stimulateurs des composés selon l'invention ont été évalués par la mesure de la β-oxydation des acides gras dans des myocytes murins pré-traités pendant 24 heures avec les composés selon l'invention. Plus l'induction de la β- oxydation des acides gras est augmentée, plus les composés selon l'invention sont stimulateurs de la dégradation des acides gras dans les cellules musculaires.
Figure 8 : β-oxydation des acides gras dans des myocytes traités par des composés selon l'invention.
Figures 9-1, 9-2 et 9-3 : Evaluation in vitro des propriétés antiinflammatoires des composés selon l'invention par mesure de la sécrétion et de l'expression de MCP1 par des monocvtes traités avec les composés selon l'invention et stimulés avec du PMA Les effets anti-inflammatoires des composés selon l'invention ont été évalués par la mesure de la sécrétion et de l'expression de la Monocyte Chemoattractant Protein-1 (MCP1 ) par des monocytes humains traités pendant 24 heures avec les composés selon l'invention et stimulés avec du PMA (phorbol 12-myhstate 13- acétate, qui provoque une réponse inflammatoire des cellules). Plus la quantité de MCP1 sécrétée est diminuée, plus le composé selon l'invention inhibe la réponse inflammatoire. De la même manière, plus l'expression du gène MCP1 est inhibée, plus le composé selon l'invention est anti-inflammatoire. Figure 9-1 : sécrétion de MCP1 (Monocyte Chemoattractant Protein-1 ) dans les monocytes humains, traités avec les composés 21 et 43 à 1 μM. Figure 9-2 : expression de MCP1 (normalisée par rapport à 36B4) dans les monocytes humains, traités avec les composés 21 et 43 à 1 μM. Figure 9-3 : expression de MCP1 (normalisée par rapport à 36B4) dans les monocytes humains, traités avec le composé 2 à 1 μM.
Figure 10 : Evaluation in vitro des propriétés anti-inflammatoires des composés selon l'invention par mesure de la sécrétion d'IL-6 par des macrophages prétraités avec les composés selon l'invention et stimulés avec du LPS
Les effets anti-inflammatoires des composés selon l'invention ont été évalués par la mesure de la sécrétion d'interleukine 6 (IL-6) par des macrophages humains pré-traités pendant 24 heures avec les composés selon l'invention et stimulés pendant 6 heures avec du LPS (lipopolysaccharide, qui provoque une réponse inflammatoire des cellules). Plus la quantité d'IL-6 sécrétée est diminuée, plus le composé selon l'invention inhibe la réaction inflammatoire.
Figure 10 : Sécrétion d'IL6 (Interleukine 6) dans les macrophages humains, traités avec les composés 2, 13 et 33 selon l'invention à 1 et 10μM.
Figure 11 : Evaluation in vivo des propriétés neuroprotectices des composés selon l'invention par mesure du volume de l'infarctus induit par occlusion de l'artère moyenne cérébrale pendant une heure.
Les effets neuroprotecteurs des composés selon l'invention ont été évalués par l'analyse des coupes de cerveaux d'animaux traités de manière chronique, avec des composés selon l'invention et prélevés une heure après l'ischémie cérébrale.
Plus le volume de l'infarctus provoqué par l'ischémie est réduit, plus le composé selon l'invention a un effet neuroprotecteur.
Figure 11 : Volume de l'infarctus cérébral dans les souris C57BI6, traitées avec le composé 2, administré à 200mpk.
D'autres avantages et aspects de l'invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs.
ANALYSES STATISTIQUES
Les études statistiques réalisées consistent en un test T de Student et/ou une Analyse de la Variance univariée à un facteur (ANOVA), suivie d'un test de Tukey. Les résultats sont comparés par rapport au groupe contrôle selon la valeur du paramètre p : *: p<0,05 ; **: p<0,01 ; *** : p<0,001. EXEMPLES
Les réactifs et catalyseurs usuels sont disponibles commercialement (Aldrich,
Alfa Aesar, Acros, Fluka ou Lancaster selon les cas). Dans ces exemples, différentes analyses ont été réalisées pour l'identification des composés.
Les points de fusion (F) sont donnés en degrés Celsius.
La pureté des produits a été vérifiée par Chromatographie sur Couche Mince
(CCM) et/ou par HPLC (chromatographie liquide haute performance). Les spectres de masse sont réalisés par ESI-MS (Electrospray Ionisation - Mass
Spectroscopy) ou MALDI-TOF (Matrix Assisted Laser Desorption/lonization -
Time of Flight).
Les spectres RMN (Résonance Magnétique Nucléaire) sont enregistrés sur un spectromètre Bruker AC300P, à 300 MHz dans un solvant deutéré qui est précisé pour chaque analyse : DMSO-c/β ou CDCI3. Pour l'interprétation des spectres, sont utilisées les abréviations suivantes : s pour singulet, d pour doublet, dd pour doublet dédoublé, ddd pour doublet dédoublé dédoublé, t pour triplet, td pour triplet dédoublé, q pour quadruplet, quint pour quintuplet, sext pour sextuplet, m pour multiplet ou massif.
Exemple 1 : Description des protocoles généraux de synthèse selon l'invention
Procédure générale A : La cétone (1 équivalent) et l'aldéhyde (1 équivalent) sont solubilisés (0,5 g à 40 g, 0,3 à 1 mol/L) dans une solution d'éthanol saturée d'acide chlorhydrique gazeux.
Procédure générale B : La cétone (1 équivalent) et l'aldéhyde (1 équivalent) sont solubilisés (1 g, 0,3 à 0,4 mol/L) dans une solution hydroxyalcoolique (50/50) de soude (1 ,2 g / mL 2,2 équivalents). Procédure générale C :
La propénone est solubilisée dans du méthanol (0,15 à 1 ,5 g, 0,1 à 0,2 mol/L) puis, une quantité catalytique de palladium sur charbon est ajoutée. L'ensemble est agité sous atmosphère d'hydrogène à pression atmosphérique et température ambiante. Après 10 à 15 minutes le catalyseur est éliminé par filtration, le solvant est évaporé sous pression réduite et le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie.
Procédure générale D : Le phénol (1 équivalent) ou le thiophénol (1 équivalent) est solubilisé dans le solvant (0,3 à 78 g, 0,1 à 0,5 mol/L) approprié puis le dérivé halogène (1 à 10 équivalents) et le carbonate de potassium (5 équivalents) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est maintenu environ 10 heures sous vive agitation à la température adéquate.
Procédure générale E :
L'ester de tertiobutyle est solubilisé dans du dichlorométhane (0,2 à 15 g, 0,1 à 0,5 mol/L) puis l'acide trifluoroacétique est additionné (10 équivalents). Le mélange est maintenu sous agitation à température ambiante.
Procédure générale F :
La diphénylpropan-3-one est solubilisée dans de l'éthanol (0,8 g, 0,2 à 0,3 mol/L) puis le borohydrure de sodium est ajouté. L'ensemble est maintenu 16 heures sous agitation à température ambiante, le milieu est refroidi et hydrolyse. Les solvants sont éliminés par évaporation sous pression réduite. Le résidu est repris par une solution aqueuse diluée d'acide chlorhydrique puis extrait par du chlorure de méthylène.
La phase organique est lavée avec de l'eau, puis séchée sur sulfate de magnésium. Le chlorure de méthylène est éliminé par évaporation sous pression réduite et le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (HPLC préparative, lichrospher (Merck) RP18 12μm 100Â, colonne : 25*250 mm). Procédure générale G :
L'alcool est solubilisé dans du N,N-diméthylformamide (0,1 à 0,3 g, 0,05 à 0,1 mol/L), la solution placée sous atmosphère d'azote est refroidie à 00C puis l'hydrure de sodium est ajouté (1 ,1 à 1 ,5 équivalents). Après 15 minutes d'agitation, l'halogénure d'alkyle approprié (1 ,1 à 1 ,5 équivalents) est ajouté.
Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est versé dans une solution saturée de chlorure d'ammonium et extrait par de l'acétate d'éthyle. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie.
Procédure générale H :
L'ester est solubilisé dans de l'éthanol (0,2 à 0,4 g, 0,1 à 0,2 mol/L) puis une solution de soude 2N est additionnée.
Exemple 2 : Synthèse des composés intermédiaires
Composé intermédiaire 1 : 1-(4-bromophényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxy- phényl)prop-2-en-1 -one
Figure imgf000038_0001
La 1 -(4-bromophényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one est préparée à partir de 4'-bromoacétophénone et de 4-hydroxy-2,3- dichlorobenzaldéhyde selon la procédure générale A.
Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le précipité formé est essoré. Le produit brut est utilisé pour la réaction suivante.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 5,99 (s, 1 H), 7,05 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,38 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,66 (m, 3H), 7,89 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 8,16 (d, 1 H, J = 15,8 Hz). Composé intermédiaire 2 : 1-(4-méthoxyphényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxy- phényl)prop-2-en-1 -one
Figure imgf000039_0001
La 1 -(4-méthoxyphényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one est préparée à partir de 4'-méthoxyacétophénone et de 4-hydroxy-2,3- dichlorobenzaldéhyde selon la procédure générale B.
Après 16 heures d'agitation à 600C, l'eau et l'éthanol sont éliminés par évaporation sous pression réduite et le résidu d'évaporation est utilisé tel quel pour la réalisation de l'étape suivante.
Composé intermédiaire 3 : 1-(4-méthylthiophényl)-3-(2,3-dichloro-4- hydroxy-phényl)prop-2-en-1 -one
Figure imgf000039_0002
La 1 -(4-méthylthiophényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one est préparée à partir de 4'-méthylthioacétophénone et de 4-hydroxy-2,3- dichlorobenzaldéhyde selon la procédure générale B.
Après 16 heures d'agitation à 600C, l'eau et l'éthanol sont éliminés par évaporation sous pression réduite et le résidu d'évaporation est utilisé tel quel pour la réalisation de l'étape suivante.
Composé intermédiaire 4 : 1-(4-trifluorométhylphényl)-3-(2,3-dichloro-4- hydroxyphényl)propan-1 -one
Figure imgf000039_0003
La 1 -(4-thfluorométhylphényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)propan-1 -one est préparée à partir de 1 -(4-trifluorométhylphényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)- prop-2-èn-1 -one (composé intermédiaire 5) selon la procédure générale C. Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 3,17 (m, 2H), 3,33 (m, 2H), 5,63 (s, 1 H), 6,92 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,18 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,74 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,07 (d, 2H, J = 8,2 Hz).
Composé intermédiaire 5 : 1-(4-trifluorométhylphényl)-3-(2,3-dichloro-4- hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one
Figure imgf000040_0001
La 1 -(4-trifluorométhylphényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one est préparée à partir de 4'-thfluorométhylacétophénone et de 4-hydroxy-2,3- dichlorobenzaldéhyde selon la procédure générale A.
Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le solvant est évaporé sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par recristallisation dans l'acétonitrile.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 6,07 (s, 1 H), 7,06 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,39 (d, 1 H, J = 15,6 Hz), 7,68 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,79 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,11 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,18 (d, 1 H, J = 15,6 Hz).
Composé intermédiaire 6 : 1-(4-trifluorométhoxyphényl)-3-(2,3-dichloro-4- hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one
Figure imgf000040_0002
La 1 -(4-thfluorométhoxyphényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one est préparée à partir de 4'-trifluorométhoxyacétophénone et de 4-hydroxy-2,3- dichlorobenzaldéhyde selon la procédure générale A.
Après 16 heures sous agitation à température ambiante, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie : Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 7/3. Silice : 40- 63μm.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 5,98 (s, 1 H), 7,06 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,36 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 7,40 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 7,67 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 8,08 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 8,17 (d, 1 H, J = 15,5 Hz).
Composé intermédiaire 7 : 1-(4-phényloxyphényl)-3-(2,3-dichloro-4- hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one
Figure imgf000041_0001
La 1 -(4-phényloxyphényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one est préparée à partir de 4'-phényloxyacétophénone et de 4-hydroxy-2,3- dichlorobenzaldéhyde selon la procédure générale A.
Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par recristallisation dans l'acétonithle.
RMN 1H (300 MHz, DMSO-c/6) : 7,05 (d, 1 H, J = 9,1 Hz), 7,09 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 7,15 (m, 2H), 7,26 (m, 1 H), 7,47 (m, 2H), 7,85 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 8,00 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 8,06 (d, 1 H, J = 9,1 Hz), 8,19 (d, 2H, J = 8,8 Hz).
Composé intermédiaire 8 : 1-(3-trifluorométhyl-5-fluorophényl)-3-(2,3- dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1-one
Figure imgf000041_0002
La 1 -(3-thfluorométhyl-5-fluorophényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2- en-1 -one est préparée à partir de 3'-thfluorométhyl-5'-fluoroacétophénone et de 4-hydroxy-2,3-dichlorobenzaldéhyde selon la procédure générale A. Après 16 heures à 700C, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite, le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 8/2. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300 MHz, DMSO-c/6) : 7,06 (d, 1 H, J = 9,1 Hz), 7,94 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 8,07 (m, 2H), 8,16 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 8,31 (m, 2H), 11 ,44 (s, 1 H).
Composé intermédiaire 9 : 1-(4-bromophényl)-3-(2,3-difluoro-4-hydroxy- phényl)prop-2-en-1 -one
Figure imgf000042_0001
o La 1 -(4-bromophényl)-3-(2,3-difluoro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one est préparée à partir de 4'-bromoacétophénone et de 4-hydroxy-2,3- difluororobenzaldéhyde selon la procédure générale A.
Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est refroidi à 00C puis le précipité est essoré. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 5,82 (s, 1 H), 7,33 (m, 1 H), 7,53 (d, 1 H, J = 15,8 Hz),
7,67 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,83 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,90 (d, 2H, J = 8,6 Hz).
Composé intermédiaire 10 : 1-(4-trifluorométhoxyphényl)-3-(2,3-difluoro-4- hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one
Figure imgf000042_0002
La 1 -(4-trifluorométhoxyphényl)-3-(2,3-difluoro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one est préparée à partir de 4'-trifluorométhoxyacétophénone et de 4-hydroxy-2,3- difluorobenzaldéhyde selon la procédure générale A.
Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite, le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 7/3. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 6,08 (s, 1 H), 6,87 (m, 1 H), 7,33 (m, 3H), 7,56 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,84 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 8,09 (d, 2H, J = 8,8 Hz).
Composé intermédiaire 11 : 1-(3-trifluorométhyl-2-fluorophényl)-3-(2,3- dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1-one
Figure imgf000043_0001
La 1 -(3-trifluoronnéthyl-2-fluorophényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2- en-1 -one est préparée à partir de 3'-trifluorométhyl-2'-fluoroacétophénone et de 4-hydroxy-2,3-dichlorobenzaldéhyde selon la procédure générale A. Après 48 heures d'agitation à température ambiante, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite et le résidu d'évaporation est purifié par recristallisation dans l'acétonitrile.
RMN 1H (300 MHz, DMSO-c/6) : 7,05 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,41 (dd, 1 H, J = 2,1 Hz, J = 15,5 Hz), 7,58 (t, 1 H, J = 7,6 Hz), 7,90 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 7,94 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 8,05 (m, 1 H), 8,11 (m, 1 H), 11 ,48 (s, 1 H).
Composé intermédiaire 12 : 1-(4-(trifluorométhoxy)phényl)-3-(2,3-dichloro-4- hydroxyphényl)propan-1 -one
Figure imgf000043_0002
La 1 -(4-(thfluorométhoxy)phényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)propan-1 -one est préparée à partir de 1 -(4-thfluorométhoxyphényl)-3-(2,3-dichloro-4- hydroxyphényl)prop-2-èn-1 -one (composé intermédiaire 6) selon la procédure générale C.
Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 3,18 (m, 2H), 3,29 (m, 2H), 5,62 (s, 1 H), 6,91 (d, 1 H,
J = 8,2 Hz), 7,16 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,28 (d, 2H), 8,01 (d, 2H, J = 8,8 Hz). Exemple 3 : Synthèse des composés selon l'invention
Composé 1 : 2-[2,3-Dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]- 2-méthylpropanoate de tertiobutyle
Figure imgf000044_0001
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthyl- propanoate de tertiobutyle est préparé à partir de la 1 -(4-bromophényl)-3-(2,3- dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one (composé intermédiaire 1 ) selon la procédure générale C au moyen de 1 ,5 équivalents de bromoisobutyrate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans une mélange acétone/acétonitrile.
Après 48 heures d'agitation à reflux, le milieu réactionnel est versé dans l'eau et extrait par de l'acétate d'éthyle. La phase organique est évaporée sous pression réduite. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,47 (s, 9H), 1 ,67 (s, 6H), 6,85 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,35 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,58 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,66 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 7,89 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 8,16 (d, 1 H, J = 15,8 Hz).
Composé 2 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl] phénoxy]-2-méthylpropanoïque
Figure imgf000044_0002
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthyl- propanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle (composé 1 ) selon la procédure générale D. Après 72 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,73 (s, 6H), 7,00 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,36 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,61 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,66 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,88 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 8,13 (d, 1 H, J = 15,8 Hz). Masse (M+1 , ES) : 457 / 459 / 461. F = 187-189°C.
Composé 3 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropyl] phénoxy]-2-méthylpropanoïque
Figure imgf000045_0001
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropyl]phénoxy]-2-méthyl propanoïque est préparé à partir de l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]- 3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoïque (composé 2), solubilisé dans du dichlorométhane. Le triéthylsilane (1 équivalent) est ajouté puis, goutte à goutte, l'acide trifluoroacétique (7,5 équivalents). L'ensemble est agité à 400C pendant 2 heures.
Le milieu est lavé avec de l'eau. Le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie (Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm) puis HPLC préparative (lichrospher (Merck) RP18 12μm 100A, colonne : 25*250 mm ; Elution : gradient eau, méthanol + 0,1 % acide trifluoroacétique : 26/74 à
10/90). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,65 (s, 6H), 3,18 (m, 2H), 3,29 (m, 2H), 6,95 (d, 1 H,
J = 8,5 Hz), 7,19 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,61 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,83 (d, 2H, J = 8,5
Hz).
Masse (M-1 , ES) : 457 / 459 / 461.
F = 98-99°C. Composé 4 : 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthoxy)phényl]-3-oxopropényl] phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle
Figure imgf000046_0001
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(nnéthoxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-nnéthyl propanoate de tertiobutyle est préparé à partir de la 1 -(4-méthoxyphényl)-3-(2,3- dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one (composé intermédiaire 2) selon la procédure générale C, au moyen de 6 équivalents de bromoisobutyrate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium, dans un mélange acétone/acétonitrile. Après 48 heures d'agitation à reflux, le milieu réactionnel est versé dans l'eau et extrait par de l'acétate d'éthyle. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est utilisé tel quel pour la réalisation de l'étape suivante.
Composé 5 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthoxy)phényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoïque
Figure imgf000046_0002
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthoxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthyl propanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthoxy)phényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle (composé 4) selon la procédure générale D.
Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie.
Elution : dichlorométhane/méthanol : 95/5. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,73 (s, 6H), 3,92 (s, 3H), 7,01 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,02 (d, 2H, J = 9,1 Hz), 7,43 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,61 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 8,04 (d, 2H, J = 9,1 Hz), 8,11 (d, 1 H, J = 15,8 Hz). Masse (M-1 , ES): 407. F = 202-2030C.
Composé 6 : 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthylthio)phényl]-3-oxopropényl] phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle
Figure imgf000047_0001
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthylthio)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-nnéthyl propanoate de tertiobutyle est préparé à partir de la 1 -(4-méthylthiophényl)-3- (2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one (composé intermédiaire 3) selon la procédure générale C, au moyen de 6 équivalents de bromoisobutyrate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium, dans un mélange acétone/acétonitrile.
Après 24 heures d'agitation à reflux, le milieu réactionnel est versé dans l'eau et extrait par de l'acétate d'éthyle. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm. Purification par flash chromatographie. Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm.
Composé 7 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthylthio)phényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoïque
Figure imgf000047_0002
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthylthio)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4- (méthylthio)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-nnéthylpropanoate de tertiobutyle (composé 6) selon la procédure générale D.
Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : dichlorométhane/méthanol : 95/5. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,73 (s, 6H), 2,63 (s, 3H), 7,02 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,33 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 7,41 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,62 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,96 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 8,13 (d, 1 H, J = 15,8 Hz). Masse (M-1 , ES) : 423 / 425. F = 178-179°C.
Composé 8 : 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl] phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle
Figure imgf000048_0001
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]-2-méthyl propanoate de tertiobutyle est préparé à partir de la 1 -(4-trifluorométhylphényl)-3- (2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)propan-1 -one (composé intermédiaire 4) selon la procédure générale C, au moyen de 10 équivalents de bromoisobutyrate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans l'acétonitrile.
Après 24 heures d'agitation à 700C, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite, le résidu d'évaporation est repris par un mélange eau/dichlorométhane. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm.
Purification par flash chromatographie. Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,45 (s, 9H), 1 ,59 (s, 6H), 3,17 (m, 2H), 3,32 (m, 2H), 6,80 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,09 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,71 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,04 (d, 2H, J = 8,2 Hz). Composé 9 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3- oxopropyl]phénoxy]-2-méthylpropanoïque
Figure imgf000049_0001
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]-2- méthylpropanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4- trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]-2-méthyl-propanoate de tertiobutyle (composé 8) selon la procédure générale D. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,65 (s, 6H), 3,21 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 6,95 (d, 1 H,
J = 8,4 Hz), 7,19 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 7,73 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 8,06 (d, 2H, J = 8,8
Hz).
Masse (M-1 , ES) : 447 / 449. F = 116°C.
Composé 10 : 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl] phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle
Figure imgf000049_0002
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle est préparé à partir de la 1 -(4- trifluorométhylphényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one (composé intermédiaire 5) selon la procédure générale C au moyen de 3 équivalents de bromoisobutyrate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans l'acétonitrile.
Après 48 heures d'agitation à 700C, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite, le résidu d'évaporation est repris par un mélange eau/dichlorométhane. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,47 (s, 9H), 1 ,67 (s, 6H), 6,86 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,36 (d, 1 H, J = 15,6 Hz), 7,60 (d, 1 H, J = 8,8 Hz) 7,78 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 8,10 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 8,18 (d, 1 H, J = 15,6 Hz).
Composé 11 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoïque
Figure imgf000050_0001
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4- trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle (composé 10) selon la procédure générale D. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par HPLC préparative (lichrospher
(Merck) RP18 12μm 100A, colonne : 25*250 mm).
Elution : gradient eau, méthanol + 0,1 % acide trifluoroacétique : 30/70 à 10/90. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,74 (s, 6H), 7,03 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,39 (d, 1 H, J
= 15,6 Hz), 7,64 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,80 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,11 (d, 2H, J = 8,2
Hz), 8,17 (d, 1 H, J = 15,6 Hz).
Masse (M-1 , ES): 445 / 447.
F = 175-176°C. Composé 12 : 2-[2,3-Dichloro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3- oxopropényl] phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle
Figure imgf000051_0001
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle est préparé à partir de la 1 -(4- trifluorométhoxyphényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one (composé intermédiaire 6) selon la procédure générale C au moyen de 3 équivalents de bromoisobutyrate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans l'acétonitrile.
Après 48 heures d'agitation à 700C, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite et le résidu d'évaporation est repris par un mélange eau/dichlorométhane. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,47 (s, 9H), 1 ,67 (s, 6H), 6,86 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,35 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,37 (d, 1 H, J = 15,6 Hz), 7,58 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 8,07 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 8,18 (d, 1 H, J = 15,6 Hz).
Composé 13 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoïque
Figure imgf000051_0002
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4- trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle (composé 12) selon la procédure générale D. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : dichlorométhane, méthanol : 9/1. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,74 (s, 6H), 7,02 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,36 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,39 (d, 1 H, J = 15,6 Hz), 7,61 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 8,07 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 8,15 (d, 1 H, J = 15,6 Hz). Masse (M-1 , ES) : 461 / 463. F = 156-157°C.
Composé 14 : 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(phényloxy)phényl]-3-oxopropényl] phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle
Figure imgf000052_0001
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(phényloxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthyl propanoate de tertiobutyle est préparé à partir de la 1-(4-phényloxyphényl)-3-
(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one (composé intermédiaire 7) selon la procédure générale C, au moyen de 3 équivalents de bromoisobutyrate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans l'acétonitrile.
Après 24 heures d'agitation à 700C, le milieu réactionnel est versé dans de l'acide chlorhydrique aqueux 1 N et extrait par acétate d'éthyle. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie.
Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 95/5. Colonne : 400*50 mm. Silice : 40-
63μm. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,47 (s, 9H), 1 ,66 (s, 6H), 6,86 (d, 1 H, J = 8,8 Hz),
7,06 (d, 2H, J = 9,1 Hz), 7,11 (m, 2H), 7,23 (m, 1 H), 7,41 (d, 1 H, J = 15,6 Hz),
7,43 (m, 2H), 7,58 (d, 1 H, J = 9,1 Hz), 8,03 (d, 2H, J = 9,1 Hz), 8,15 (d, 1 H, J =
15,6 Hz). Composé 15 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(phényloxy)phényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoïque
Figure imgf000053_0001
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(phényloxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-
(phényloxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle
(composé 14) selon la procédure générale D.
Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie.
Elution : dichlorométhane, méthanol : 9/1. Silice : 40-63μm.
RMN 1H (300 MHz, DMSO-c/6) : 1 ,61 (s, 6H), 6,93 (d, 1 H, J = 9,1 Hz), 7,09 (d,
2H, J = 8,8 Hz), 7,17 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,26 (m, 1 H), 7,48 (m, 2H), 7,88 (d, 1 H,
J = 15,6 Hz), 7,98 (d, 1 H, J = 15,6 Hz), 8,12 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 8,19 (d, 2H, J = 8,8 Hz).
Masse (M-1 , ES) : 469 / 470 / 471.
F = 191 -193°C.
Composé 16 : 2-[2,3-dichloro-4-[3-[3-fluoro-5-trifluorométhylphényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle
Figure imgf000053_0002
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[3-fluoro-5-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]- 2-méthylpropanoate de tertiobutyle est préparé à partir de la 1-(3-thfluorométhyl- 5-fluorophényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one (composé intermédiaire 8) selon la procédure générale C au moyen de 3 équivalents de bromoisobutyrate de tertiobutyle et trois équivalents de carbonate de potassium dans l'acétonitrile. Après 16 heures d'agitation à 700C, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite et le résidu d'évaporation est repris par un mélange eau/dichlorométhane. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300 MHz, DMSO-c/6) : 1 ,48 (s, 9H), 1 ,68 (s, 6H), 6,87 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,33 (d, 1 H, J = 15,6 Hz), 7,57 (m, 1 H), 7,62 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,89 (m, 1 H), 8,05 (m, 1 H), 8,24 (d, 1 H, J = 15,6 Hz).
Composé 17 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[3-fluoro-5-trifluorométhylphényl]- 3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoïque
Figure imgf000054_0001
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[3-fluoro-5-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-méthylpropanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[3- fluoro-5-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle (composé 16) selon la procédure générale D. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie (Elution : méthanol, dichlorométhane : 1/9. Silice : 40-63μm) et lavé avec du méthanol. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,74 (s, 6H), 7,01 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,34 (d, 1 H, J = 15,6 Hz), 7,58 (m, 1 H), 7,64 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,89 (m, 1 H), 8,04 (m, 1 H), 8,21 (d, 1 H, J = 15,6 Hz). Masse (M-1 , ES) : 463. F = 199°C. Composé 18 : 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-bromophényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle
Figure imgf000055_0001
Le 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthyl- propanoate de tertiobutyle est préparé à partir de la 1 -(4-bromophényl)-3-(2,3- difluoro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one (composé intermédiaire 9) selon la procédure générale C, au moyen de 3 équivalents de bromoisobutyrate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans le diméthylformamide. Après 24 heures d'agitation à 700C, le milieu réactionnel est versé dans l'eau et extrait par du dichlorométhane. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie.
Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 7/3. Silice : 40-63μm.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,41 (s, 9H), 1 ,59 (s, 6H), 6,79, (m, 1 H), 7,74 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,80 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,89 (m, 1 H), 7,92 (d, 1 H, J = 15,8 Hz),
8,08 (d, 2H, J = 8,6 Hz).
Composé 19 : Acide 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl] phénoxy]-2-méthylpropanoïque
Figure imgf000055_0002
L'acide 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthyl- propanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-bromophényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle (composé 18) selon la procédure générale D. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,71 (s, 6H), 6,88, (m, 1 H), 7,29, (m, 1 H), 7,57 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,67 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,81 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,90 (d, 2H, J = 8,6 Hz).
Masse (M+1 , ES) : 423 / 424 / 425. F = 151 -153°C.
Composé 20 : 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]- phénoxy]-butanoate de tertiobutyle
Figure imgf000056_0001
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluoronnéthylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]-butanoate de tertiobutyle est préparé à partir de 1-(4-trifluorométhylphényl)-3-(2,3-dichloro- 4-hydroxyphényl)propan-1-one (composé intermédiaire 4) selon la procédure générale C, au moyen de 3 équivalents de 2-bromobutanoate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans l'acétonitrile. Après 24 heures d'agitation à 700C, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite puis le résidu d'évaporation est repris par un mélange eau/dichlorométhane. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : cyclohexane, acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm) RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,12 (t, 3H, J = 7,6 Hz), 1 ,44 (s, 9H), 2,03 (m, 2H), 3,17 (m, 2H), 3,32 (m, 2H), 4,46 (t, 1 H, J = 6,2 Hz), 6,67 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,14 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,73 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,06 (d, 2H, J = 8,2 Hz).
Composé 21 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3- oxopropyl]phénoxy]-butanoïque
Figure imgf000056_0002
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]- butanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3- oxopropyl]phénoxy]-butanoate de tertiobutyle (composé 20) selon la procédure générale D. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par HPLC préparative (lichrospher (Merck) RP18 12μm 100A, colonne : 25*250 mm). Elution : gradient eau, méthanol + 0,1 % acide trifluoroacétique : 30/70 à 10/90. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,15 (t, 3H, J = 7,6 Hz), 2,11 (m, 2H), 3,19 (m, 2H), 3,34 (m, 2H), 4,67 (t, 1 H, J = 5,8 Hz), 6,74 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,19 (d, 1 H, J =
8.6 Hz), 7,74 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,07 (d, 2H, J = 8,2 Hz). Masse (M-1 , ES): 447 / 449.
F = 118°C.
Composé 22 : 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3- oxopropényl] phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle
Figure imgf000057_0001
Le 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle est préparé à partir de 1 -(4- trifluorométhoxyphényl)-3-(2,3-difluoro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one
(composé intermédiaire 10) selon la procédure générale C, dans le diméthylformamide.
Après 24 heures d'agitation à 700C, le milieu réactionnel est versé dans l'eau et extrait par du dichlorométhane. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par recristallisation dans l'acétonitrile.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,48 (s, 9H), 1 ,65 (s, 6H), 6,73 (m, 1 H), 7,27 (m,
1 H), 7,35 (d, 2H, J = 8,9 Hz), 7,57 (d, 1 H, J = 15,6 Hz), 7,82 (d, 1 H, J = 15,6 Hz),
8.07 (d, 2H, J = 8,9 Hz). Composé 23 : Acide 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoïque
Figure imgf000058_0001
L'acide 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4- trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle (composé 22) selon la procédure générale D. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,71 (s, 6H), 6,89 (m, 1 H), 7,30 (m, 1 H), 7,36 (d, 2H,
J = 8,8 Hz), 7,60 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,32 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 8,09 (d, 2H, J =
8,8 Hz).
Masse (MALDI-TOF) : 431.
F = 144-146°C.
Composé 24 : 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl] phénoxy]-2-hexanoate de tertiobutyle
Figure imgf000058_0002
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- hexanoate de tertiobutyle est préparé à partir de la 1 -(4-trifluorométhylphényl)-3-
(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one (composé intermédiaire 5) selon la procédure générale C, au moyen de 3 équivalents de 2-bromohexanoate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans l'acétonithle.
Après 16 heures d'agitation à 700C, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite, le résidu d'évaporation est repris par un mélange eau/dichlorométhane. La phase organique est évaporée sous pression réduite.
Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : cyclohexane puis cyclohexane/acétate d'éthyle : 95/5. Silice : 40-63μm) et lavage avec du méthanol.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 0,96 (t, 3H, J = 7,3 Hz), 1 ,46 (m, 11 H), 1 ,57 (m, 2H), 2,06 (m, 2H), 4,60 (m, 1 H), 6,77 (d, 1 H, J = 8,9 Hz), 7,36 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,64 (d, 1 H, J = 8,9 Hz), 7,78 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,10 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,17 (d, 1 H, J = 15,8 Hz).
Composé 25 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-hexanoïque
Figure imgf000059_0001
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- hexanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-
3-oxopropényl]phénoxy]-2-hexanoate de tertiobutyle (composé 24) selon la procédure générale D. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite.
Le résidu d'évaporation est purifié par par HPLC préparative (lichrospher (Merck)
RP18 12μm 100A, colonne : 25*250 mm). Elution : gradient eau, méthanol + 0,1 % acide trifluoroacétique : 22/78 à 10/90.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 0,97 (t, 3H, J = 7,3 Hz), 1 ,44 (m, 2H), 1 ,59 (m, 2H),
2,12 (m, 2H), 4,80 (m, 1 H), 6,83 (d, 1 H, J = 8,9 Hz), 7,36 (d, 1 H, J = 15,8 Hz),
7,64 (d, 1 H, J = 8,9 Hz), 7,79 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 8,09 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 8,17 (d,
1 H, J = 15,8 Hz). Masse (M-1 , ES) : 473 / 475.
F = 139°C. Composé 26 : 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2-fluoro-3-trifluorométhylphényl]-3- oxopropényl]phénoxy]-2-méthyl-propanoate de tertiobutyle
Figure imgf000060_0001
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2-fluoro-3-trifluoronnéthylphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]- 2-méthyl-propanoate de tertiobutyle est préparé à partir du 1 -(3-trifluorométhyl-2- fluorophényl)-3-(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)propen-1-one (composé intermédiaire 11 ) selon la procédure générale D au moyen de 3 équivalents de bromoisobutyrate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans le diméthylformamide. Après 24 heures d'agitation à 700C, le milieu réactionnel est versé dans une solution saturée de chlorure d'ammonium et extrait par de l'acétate d'éthyle. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie.
Elution : cyclohexane/acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,47 (s, 9H), 1 ,67 (s, 6H), 6,85 (d, 1 H, J = 8,8 Hz),
7,26 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 7,40 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 7,60 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,82
(m, 1 H), 8,02 (m, 1 H), 8,16 (d, 1 H, J = 15,5 Hz).
Composé 27 : 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2-fluoro-3-trifluorométhylphényl]-3- oxopropyl]phénoxy]-2-méthyl-propanoate de tertiobutyle
Figure imgf000060_0002
Le 2-[2,3-Dichloro-4-[3-[2-fluoro-3-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]-2- méthyl-propanoate de tertiobutyle est préparé à partir de 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2- fluoro-3-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthyl-propanoate de tertiobutyle (composé 26), solubilisé dans de l'éthanol absolu selon la procédure générale C. Purification par HPLC préparative (lichrospher (Merck) RP18 12μm 100Â, colonne : 25*250 mm).
Elution : gradient eau, méthanol + 0,1 % acide trifluoroacétique : 30/70 à 0/100. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,47 (s, 9H), 1 ,60 (s, 6H), 3,17 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 6,82 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,10 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,37 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 7,81 (m, 1 H), 8,08 (m, 1 H).
Composé 28 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2-fluoro-3-trifluorométhylphényl]- 3-oxopropyl]phénoxy]-2-méthyl-propanoïque
Figure imgf000061_0001
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2-fluoro-3-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]- phénoxy]-2-méthyl-propanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2- fluoro-3-thfluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]-2-méthyl-propanoate de tertiobutyle (composé 27) selon la procédure générale E. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite.
Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie.
Elution : méthanol/dichlorométhane : 1/9. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,66 (s, 6H), 3,20 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 3,37 (m, 2H),
6,97 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,20 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,37 (t, 1 H, J = 7,9 Hz), 7,82
(m, 1 H), 8,10 (m, 1 H).
Masse (M-1 , ES) : 465 /467.
F = 108-1100C. Composé 29 : 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-hydroxy- propyl]phénoxy]-butanoate de tertiobutyle
Figure imgf000062_0001
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluoronnéthylphényl]-3-hydroxy-propyl]phénoxy]- butanoate de tertiobutyle est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4- trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]-butanoate de tertiobutyle (composé
20) selon la procédure générale F, au moyen de 1 ,1 équivalents de borohydrure de sodium.
Après 30 minutes d'agitation à température ambiante, les solvants sont éliminés par évaporation sous pression réduite. Le résidu est repris par une solution aqueuse diluée d'acide chlorhydrique et extrait par du chlorure de méthylène.
La phase organique est lavée avec de l'eau, le chlorure de méthylène est éliminé par évaporation sous pression réduite.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,12 (t, 3H, J = 7,3 Hz), 1 ,44 (s, 9H), 2,05 (m, 4H), 2,82 (m, 2H), 4,46 (t, 1 H, J = 5,9 Hz), 4,79 (t, 1 H, J = 6,3 Hz), 6,66 (d, 1 H, J = 8,6
Hz), 7,04 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,49 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,62 (d, 2H, J = 8,2 Hz).
Composé 30 : 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-éthoxy- propyl]phénoxy]-butanoate de tertiobutyle
Figure imgf000062_0002
Le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-éthoxy-propyl]phénoxy]- butanoate de tertiobutyle est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4- trifluorométhylphényl]-3-hydroxy-propyl]phénoxy]-butanoate de tertiobutyle (composé 29) et de 1 ,1 équivalents de iodoéthane selon la procédure générale G.
Elution : cyclohexane/acétate d'éthyle : 95/5. Silice : 40-63μm.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,13 (t, 3H, J = 7,3 Hz), 1 ,22 (t, 3H, J = 7,0 Hz), 1 ,44 (s, 9H), 1 ,57 (s, 3H), 1 ,99 (m, 4H), 2,84 (m, 2H), 3,36 (m, 2H), 4,25 (m, 1 H), 4,46 (t, 1 H, J = 6,2 Hz), 6,66 (d, 1 H, J = 8,2Hz), 7,02 (d, 1 H, J = 8,2 Hz), 7,42 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,61 (d, 2H, J = 8,0 Hz).
Composé 31 : Acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-éthoxy- propyl]phénoxy]-butanoïque
Figure imgf000063_0001
L'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-éthoxy-propyl]phénoxy]- butanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3- éthoxy-propyl]phénoxy]- butanoate de tertiobutyle (composé 30) selon la procédure générale E.
Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : méthanol/dichlorométhane : 1/9. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,14 (t, 3H, J = 6,7 Hz), 1 ,22 (t, 3H, J = 7,0 Hz), 2,00 (m, 4H), 2,81 (m, 2H), 3,34 (m, 2H), 4,37 (m, 1 H), 4,63 (m, 1 H), 6,71 (d, 1 H, J = 8,2 Hz), 7,04 (d, 1 H, J = 8,2 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 7,7 Hz), 7,61 (d, 2H, J = 7,7 Hz).
Aspect : huile jaune visqueuse. Masse (M-1 , ES) : 477 / 478.
Composé 32 : 2-(4-(3-(4-bromophényl)-3-oxoprop-1 -ènyl)-2,3-dichloro- phénoxy)propanoate de tertiobutyle
Figure imgf000063_0002
Le 2-(4-(3-(4-bromophényl)-3-oxoprop-1 -ènyl)-2,3-dichlorophénoxy)propanoate de tertiobutyle est préparé à partir de 1-(4-bromophényl)-3-(2,3-dichloro-4- hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one (composé intermédiaire 1 ) selon la procédure générale D, au moyen de 3 équivalents de 2-bromopropanoate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans l'acétonitrile. Après 24 heures d'agitation à 700C, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite puis le résidu d'évaporation est repris par un mélange eau/dichlorométhane. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est cristallisé dans de l'acétonitrile. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,39 (s, 9H), 1 ,57 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 6,85 (q, 1 H, J = 6,7 Hz), 7,12 (d, 1 H, J = 9,1 Hz), 7,79 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,94 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 8,03 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 8,12 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 8,22 (d, 1 H, J = 9,1 Hz).
Composé 33 : Acide 2-(4-(3-(4-bromophényl)-3-oxoprop-1-ènyl)-2,3- dichlorophénoxy)propanoïque
Figure imgf000064_0001
L'acide 2-(4-(3-(4-bromophényl)-3-oxoprop-1 -ènyl)-2,3-dichlorophénoxy)- propanoïque est préparé à partir du 2-(4-(3-(4-bromophényl)-3-oxoprop-1 -ènyl)-
2,3-dichlorophénoxy)propanoate de tertiobutyle (composé 32) selon la procédure générale E.
Après 24 heures d'agitation à température ambiante, les solvants sont éliminés par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par cristallisation dans l'acétonitrile.
RMN 1H (300 MHz, DMSO-c/6) : 1 ,59 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 5,21 (q, 1 H, J = 6,7 Hz), 7,13 (d, 1 H, J = 8,9 Hz), 7,80 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,92 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 8,02
(d, 1 H, J = 15,5 Hz), 8,10 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 8,19 (d, 1 H, J = 8,9 Hz).
Masse (M-1 , ES) : 440 / 442 / 444.
F = 218-2200C. Composé 34 : 2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)prop-1 - ènyl)phénoxy)butanoate de tertiobutyle
Figure imgf000065_0001
Le 2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)prop-1 -ènyl)phénoxy)- butanoate de tertiobutyle est préparé à partir de 1 -(4-trifluorométhylphényl)-3-
(2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)prop-2-en-1 -one (composé intermédiaire 5) selon la procédure générale D, au moyen de 3 équivalents de 2-bromobutanoate de tertiobutyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans l'acétonitrile.
Après 72 heures d'agitation à 600C, le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite puis le résidu d'évaporation est repris par un mélange eau/dichlorométhane. La phase organique est évaporée sous pression réduite.
Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie.
Elution : cyclohexane/acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm.
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 1 ,02 (m, 3H), 1 ,47 (s, 9H), 2,07 (m, 2H), 4,58 (t, 1 H, J = 6,1 Hz), 6,73 (d, 1 H, J = 8,7 Hz), 7,33 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,62 (d, 1 H, J =
8,7 Hz), 7,76 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,08 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,15 (d, 1 H, J = 15,8
Hz).
Composé 35 : Acide 2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)- prop-1 -ènyl)phénoxy)butanoïque
Figure imgf000065_0002
L'acide 2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(thfluorométhyl)phényl)prop-1 - ènyl)phénoxy)-butanoïque est préparé à partir du 2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4- (thfluorométhyl)phényl)prop-1-ènyl)phénoxy)butanoate de tertiobutyle (composé 34) selon la procédure générale E au moyen de 39 équivalents d'acide trifluoroacétique. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite.
Le résidu d'évaporation est purifié par HPLC préparative (lichrospher (Merck) RP18 12μm 100A, colonne : 25*250 mm). Elution : gradient eau, méthanol + 0,1 % acide trifluoroacétique : 22/78 à 10/90. RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,19 (t, 3H, J = 7,6 Hz), 2,17 (m, 3H), 4,79 (t, 1 H, J = 5,9 Hz), 6,83 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,34 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 7,64 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,78 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,09 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,15 (d, 1 H, J = 15,8 Hz). Masse (M-1 , ES) : 445 / 447. F = 167°C.
Composé 36 : Acide 2-(2,3-dichloro-4-(3-hydroxy-3-(4-(trifluorométhyl)- phényl)propyl)phénoxy)butanoïque
Figure imgf000066_0001
L'acide 2-(2,3-dichloro-4-(3-hydroxy-3-(4-(thfluorométhyl)phényl) propyl)phénoxy)-butanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4- trifluorométhylphényl]-3-hydroxy-propyl]phénoxy]-butanoate de tertiobutyle
(composé 29) selon la procédure générale E.
Après 72 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite.
Le résidu d'évaporation est purifié par HPLC préparative (lichrospher (Merck)
RP18 12μm 100A, colonne : 25*250 mm).
Elution : gradient eau, acétonitrile + 0,1 % acide trifluoroacétique : 40/60 à 0/100. RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,14 (t, 3H, J = 7,3 Hz), 1 ,97-2,13 (m, 4H), 2,70-2,88
(m, 2H), 4,62 (t, 1 H, J = 5,7 Hz), 4,78 (t, 1 H, J = 6,3 Hz), 6,68 (d, 1 H, J = 8,5 Hz),
7,01 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,46 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,61 (d, 2H, J = 8,2 Hz).
Masse (M-1 , ES) : 449 / 441.
F = 40-430C. Composé 37 : 2-(4-(3-(benzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle
Figure imgf000067_0001
Le 2-(4-(3-(benzyloxy)-3-(4-(trifluoronnéthyl)phényl)propyl)-2,3-dichlorophénoxy)- butanoate de tertiobutyle est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4- trifluorométhylphényl]-3-hydroxy-propyl]phénoxy]-butanoate de tertiobutyle
(composé 29) et de 1 ,5 équivalents de bromure de benzyle selon la procédure générale G.
Elution : cyclohexane/acétate d'éthyle : 95/5. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,13 (t, 3H, J = 7,3 Hz), 1 ,47 (s, 9H), 1 ,93-2,14 (m,
4H), 2,65-2,83 (m, 1 H), 2,84-2,99 (m, 1 H), 4,32 (d, 1 H, J = 11 ,7 Hz), 4,42 (dd,
1 H, J = 8,3 Hz, J = 4,2 Hz), 4,52 (d, 1 H, J = 11 ,7 Hz), 4,63 (t, 1 H, J = 5,9 Hz),
6,59 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,89 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,30-7,45 (m, 5H), 7,51 (d, 2H,
J= 7,9 Hz), 7,67 (d, 2H, J = 7,9 Hz).
Composé 38 : Acide 2-(4-(3-(benzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-
2,3-dichlorophénoxy)butanoïque
Figure imgf000067_0002
L'acide 2-(4-(3-(benzyloxy)-3-(4-(thfluorométhyl)phényl)propyl)-2,3-dichloro- phénoxy)butanoïque est préparé à partir du 2-(4-(3-(benzyloxy)-3-(4- (thfluorométhyl)phényl)propyl)-2,3-dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle (composé 37) selon la procédure générale E.
Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : dichlorométhane/méthanol : 95/5. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,13 (t, 3H, J = 6,9 Hz), 1 ,90-2,12 (m, 4H), 2,70-2,85 (m, 1 H), 2,87-3,02 (m, 1 H), 4,29 (d, 1 H, J = 11 ,5 Hz), 4,39 (dd, 1 H, J = 8,3 Hz, J = 4,5 Hz), 4,49 (d, 1 H, J = 11 ,5 Hz), 4,65 (t, 1 H, J = 5,6 Hz), 6,68 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,96 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,32-7,36 (m, 5H), 7,47 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,64 (d, 2H, J = 8,0 Hz). Masse (M-1 , ES) : 539 / 541. Aspect : huile visqueuse.
Composé 39 : 2-(4-(3-(4-bromobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl) propyl)-2,3-dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle
Figure imgf000068_0001
Le 2-(4-(3-(4-bromobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl) propyl)-2,3-dichloro- phénoxy)butanoate de tertiobutyle est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4- trifluorométhylphényl]-3-hydroxy-propyl]phénoxy]-butanoate de tertiobutyle (composé 29) et de 1 ,1 équivalents de bromure de 4-bromobenzyle selon la procédure générale G.
Elution : cyclohexane/acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,12 (t, 3H, J = 7,0 Hz), 1 ,44 (s, 9H), 1 ,85-2,18 (m, 4H), 2,68-2,80 (m, 1 H), 2,85-2,94 (m, 1 H), 4,24 (d, 1 H, J = 11 ,8 Hz), 4,35-4,52 (m, 3H), 6,62 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,93 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,45 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,49 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,64 (d, 2H, J = 8,2 Hz). Composé 40 : Acide 2-(4-(3-(4-bromobenzyloxy)-3-(4-
(trifluorométhyl)phényl) propyl)-2,3-dichlorophénoxy)butanoïque
Figure imgf000069_0001
L'acide 2-(4-(3-(4-bromobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl) propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoïque est préparé à partir du 2-(4-(3-(4-bromobenzyloxy)-
3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3-dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle
(composé 39) selon la procédure générale E au moyen de 59 équivalents d'acide trifluoroacétique.
Après 18 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie.
Elution : dichlorométhane/méthanol : 95/5. Silice : 40-63μm.
RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,14 (t, 3H, J = 6,9 Hz), 1 ,91 -2,19 (m, 4H), 2,68-2,81
(m, 1 H), 2,82-2,98 (m, 1 H), 4,23 (d, 1 H, J = 11 ,7 Hz), 4,32-4,44 (m, 2H), 4,59- 4,71 (m, 1 H), 6,68 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,94 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,20 (d, 2H, J =
8,2 Hz), 7,46 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 7,47 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,66 (d, 2H, J = 7,9
Hz).
Masse (M-1 , ES) : 617 / 619 / 621.
Aspect : huile visqueuse
Composé 41 : Acide 2-(2,3-difluoro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl) propyl)phénoxy)-2-méthylpropanoïque
Figure imgf000069_0002
L'acide 2-(2,3-difluoro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)phénoxy)-2- méthylpropanoïque est préparé à partir du 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4- trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-nnéthylpropanoate de tertiobutyle (composé 22), solubilisé dans du dichlorométhane (3 g, 0,1 mo/L). L'acide trifluoroacétique (7,5 équivalents puis le triéthylsilane (1 équivalent) sont additionnés goutte à goutte. L'ensemble est agité à température ambiante pendant 2 heures.
Le milieu est lavé avec de l'eau. Le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : dichlorométhane/méthanol : 95/5. Silice : 40-63μm. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) : 1 ,55 (s, 6H), 3,05 (t, 2H, J = 3,2 Hz), 3,30 (t, 2H, J = 3,2 Hz), 6,80 (t, 1 H, J = 6,82 Hz), 6,9 (t, 1 H, J = 6,93 Hz), 7,30 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 8,0 (d, 2H, J = 8,01 Hz). Masse (M-1 , ES) : 431. Aspect : huile visqueuse.
Composé 42 : 2-(4-(3-(4-iodobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)- 2,3-dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle
Figure imgf000070_0001
Le 2-(4-(3-(4-iodobenzyloxy)-3-(4-(thfluorométhyl)phényl) propyl)-2,3-dichloro- phénoxy)butanoate de tertiobutyle est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4- trifluorométhylphényl]-3-hydroxy-propyl]phénoxy]-butanoate de tertiobutyle
(composé 29) et de 1 ,1 équivalents de bromure de 4-iodobenzyle selon la procédure générale G.
Elution : cyclohexane/acétate d'éthyle : 95/5 à 8/2. Silice : 40-63μm.
RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,12 (t, J = 6,9 Hz), 1 ,44 (s, 9H), 1 ,86-2,15 (m, 4H), 2,65-2,80 (m, 1 H), 2,82-2,96 (m, 1 H), 4,22 (d, 1 H, J = 11 ,9 Hz), 4,33-4,43 (m,
2H), 4,53-4,62 (m, 1 H), 6,62 (d, 1 H, J = 8,5Hz), 6,93 (d, 1 H, J = 8,5Hz), 7,20 (d,
2H, J = 8,2Hz), 7,45 (d, 2H, J = 8,2Hz), 7,49 (d, 2H, J = 8,2Hz), 7,64 (d, 2H, J =
8,2Hz). Composé 43 : Acide 2-(4-(3-(4-iodobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl) propyl)-2,3-dichlorophénoxy)butanoïque
Figure imgf000071_0001
L'acide 2-(4-(3-(4-iodobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3- dichloro-phénoxy)butanoïque est préparé à partir du 2-(4-(3-(4-iodobenzyloxy)-3-
(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3-dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle
(composé 42) selon la procédure générale E au moyen de 17 équivalents d'acide trifluoroacétique. Après 2 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite.
Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie.
Elution : dichlorométhane/méthanol : 95/5. Silice : 40-63μm.
RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,11 (t, J = 7,3 Hz), 1 ,87-2,16 (m, 4H), 2,66-2,79 (m, 1 H), 2,81 -2,97 (m, 1 H), 4,22 (d, 1 H, J = 11 ,7 Hz), 4,33-4,43 (m, 2H), 4,54-4,65
(m, 1 H), 6,65 (d, 1 H, J = 8,7 Hz), 6,90 (d, 1 H, J = 8,7 Hz), 7,07 (d, 2H, J = 8,1
Hz), 7,44 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 7,63 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 7,69 (d, 2H, J = 8,1 Hz).
Masse (M-1 , ES) : 665 / 667.
Aspect : huile visqueuse.
Composé 44 : 2-(4-(3-(3,5-dibromobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)- propyl)-2,3-dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle
Figure imgf000071_0002
Le 2-(4-(3-(3,5-dibromobenzyloxy)-3-(4-(trifluoronnéthyl) phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle est préparé à partir du 2-[2,3-dichloro- 4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-hydroxy-propyl]phénoxy]-butanoate de tertiobutyle (composé 29) et de 1 ,1 équivalents de bromure de 3,5- dibromobenzyle selon la procédure générale G.
Elution : cyclohexane/acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,13 (t, 3H, J = 7,5 Hz), 1 ,44 (s, 9H), 1 ,92-2,21 (m, 4H), 2,71 -2,85 (m, 1 H), 2,86-2,97 (m, 1 H), 4,25 (d, 1 H, J = 12,3 Hz), 4,34-4,42 (m, 2H), 4,47 (t, 1 H, J = 5,85 Hz), 6,65 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 6,96 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 7,41 (s, 2H), 7,45 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 7,61 (s, 1 H), 7,66 (d, 2H, J = 7,3 Hz).
Composé 45 : Acide 2-(4-(3-(3,5-dibromobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)- phényl)propyl)-2,3-dichlorophénoxy)butanoïque.
Figure imgf000072_0001
L'acide 2-(4-(3-(3,5-dibromobenzyloxy)-3-(4-(thfluorométhyl) phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoïque est préparé à partir du 2-(4-(3-(3,5-dibromo- benzyloxy)-3-(4-(thfluorométhyl)phényl)propyl)-2,3-dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle (composé 44) selon la procédure générale E au moyen de 17 équivalents d'acide trifluoroacétique. Après 18 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est lavé à l'eau puis le dichlorométhane est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : dichlorométhane/méthanol : 95/5. Silice : 40-63μm. RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,13 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 1 ,91 -2,19 (m, 4H), 2,69-2,83 (m, 1 H), 2,86-2,99 (m, 1 H), 4,24 (d, 1 H, J = 12,3 Hz), 4,35-4,42 (m, 2H), 4,61 (t, 1 H, J = 5,6 Hz), 6,68 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,98 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,30 (s, 2H), 7,43 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,60 (s, 1 H), 7,65 (d, 2H, J = 8,2 Hz). Masse (M-1 , ES) : 695 / 697 / 699. Aspect : huile visqueuse.
Composé 46 : (R)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)- propyl)phénoxy)propanoate de méthyle
Figure imgf000073_0001
Le (R)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)phénoxy)- propanoate de méthyle est préparé à partir de la 1 -(4-(trifluorométhoxy)phényl)-3- (2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)propan-1 -one (composé intermédiaire 12) selon la procédure générale D au moyen de 3 équivalents de (S)-2-chloropropanoate de méthyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans l'acétonitrile.
Après 72 heures d'agitation à 600C, les solvants sont éliminés par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est repris par du dichlorométhane et lavé à l'eau. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : cyclohexane/acétate d'éthyle : 9/1. Silice : 40-63μm.
RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,67 (d, 3H, J = 7,3 Hz), 3,17 (m, 2H), 3,30 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 4,77 (m, 1 H), 6,70 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,13 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,26 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,99 (d, 2H, J = 8,5 Hz).
Composé 47 : Acide (R)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)- phényl)propyl)phénoxy)propanoïque
Figure imgf000073_0002
L'acide (R)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(thfluorométhoxy)phényl)propyl)- phénoxy)propanoïque est préparé à partir du (R)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4- (thfluorométhoxy)phényl)propyl)phénoxy)propanoate de méthyle (composé 46) selon la procédure générale H au moyen de 3 équivalents d'une solution de soude 2N. Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est concentré par évaporation sous pression réduite, acidifié par une solution diluée d'acide chlorhydrique et extrait au dichlorométhane. La phase organique est évaporée sous pression réduite et le résidu d'évaporation est purifié par HPLC préparative (lichrospher (Merck) RP18 12μm 100Â, colonne : 25*250 mm). Elution : gradient eau, méthanol + 0,1 % acide trifluoroacétique : 30/70 à 10/90. RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,72 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 3,18 (m, 2H), 3,32 (m, 2H), 4,80 (q, 1 H, J = 6,7 Hz), 6,79 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,19 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,31 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 8,04 (d, 2H, J = 8,7 Hz). Masse (M-1 , ES) : 449 / 451. F=133°C.
Composé 48 : (S)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)- propyl)phénoxy)propanoate de méthyle
Figure imgf000074_0001
Le (S)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(thfluorométhoxy)phényl)propyl)phénoxy)- propanoate de méthyle est préparé à partir de la 1 -(4-(thfluorométhoxy)phényl)-3- (2,3-dichloro-4-hydroxyphényl)propan-1 -one (composé intermédiaire 12) selon la procédure générale D au moyen de 3 équivalents de (R)-2-chloropropanoate de méthyle et de 3 équivalents de carbonate de potassium dans l'acétonitrile.
Après 72 heures d'agitation à 700C, les solvants sont éliminés par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est repris par du dichlorométhane et lavé à l'eau. La phase organique est évaporée sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est purifié par flash chromatographie. Elution : cyclohexane/acétate d'éthyle : 95/5. Silice : 40-63μm.
RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,68 (d, 3H, J = 7,3 Hz), 3,16 (m, 2H), 3,31 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 4,75 (m, 1 H), 6,71 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,14 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 7,28 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 8,00 (d, 2H, J = 8,6 Hz). Composé 49 : Acide (S)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)- phényl)propyl)phénoxy)propanoïque
Figure imgf000075_0001
L'acide (S)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)- phénoxy)propanoïque est préparé à partir du (S)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-
(trifluorométhoxy)phényl)propyl)phénoxy)propanoate de méthyle (composé 48) selon la procédure générale H au moyen de 2 équivalents d'une solution de soude 2N.
Après 72 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est acidifié par une solution diluée d'acide chlorhydrique puis, concentré par évaporation sous pression réduite. Le précipité formé est filtré et purifié par HPLC préparative (lichrospher (Merck) RP18 12μm 100Â, colonne : 25*250 mm).
Elution : gradient eau, méthanol + 0,1 % acide trifluoroacétique : 30/70 à 10/90.
RMN 1H (300MHz, CDCI3) : 1 ,72 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 3,18 (m, 2H), 3,32 (m, 2H), 4,80 (q, 1 H, J = 6,7 Hz), 6,78 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,19 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,31
(d, 2H, J = 8,7 Hz), 8,04 (d, 2H, J = 8,7 Hz).
Masse (M-1 , ES) : 449 / 451.
F=133°C.
Exemple 4 : Evaluation in vitro des propriétés activatrices PPAR des composés selon l'invention
Principe
L'activation des PPARs a été évaluée in vitro sur une lignée de fibroblastes de rein de singe (COS-7) par la mesure de l'activité transcriptionnelle de chimères constituées du domaine de liaison à l'ADN du facteur de transcription Gal4 de la levure et du domaine de liaison au ligand des différents PPAR. Les composés ont été testés à des doses comprises entre 10~3 et 30μM sur les chimères Gal4- PPARα, γ ou δ. Protocole
Culture des cellules
Les cellules COS-7 proviennent de l'ATCC et ont été cultivées dans du milieu DMEM supplémenté de 10% (vol/vol) de sérum de veau fœtal, 100 U/ml de pénicilline (Gibco, Paisley, UK) et 2 mM de L-Glutamine (Gibco, Paisley, UK). Les cellules ont été incubées à 37°C dans une atmosphère humide contenant 5% de CO2.
Description des plasmides utilisés en transfection
Les plasmides Gal4(RE)_TkpGL3, pGal4-hPPARα, pGal4-hPPARγ, pGal4- hPPARδ et pGal4-φ ont été décrits dans la littérature (Raspe E et al., 1999). Les constructions pGal4-hPPARα, pGal4-hPPARγ et pGal4-hPPARδ ont été obtenues par clonage dans le vecteur pGal4-φ de fragments d'ADN amplifiés par PCR correspondants aux domaines DEF des récepteurs nucléaires PPARα, PPARγ et PPARδ humains.
Transfection
Les cellules COS-7 en suspension ont été transfectées avec 150 ng d'ADN par puits, avec un ratio pGal4-PPAR / Gal4(RE)_TkpGL3 de 1/10, en présence de 10% sérum de veau fœtal. Les cellules ont ensuite été ensemencées dans des plaques de 96 puits (4x104 cellules/puits) puis incubées pendant 24 heures à 37°C. L'activation avec les composés à tester a été effectuée pendant 24h à 37°C dans du milieu sans sérum. A l'issue de l'expérience, les cellules ont été lysées et l'activité luciférase a été déterminée à l'aide du Steady Glow Luciferase (Promega) selon les recommandations du fournisseur.
Résultats
De manière inattendue, les inventeurs ont mis en évidence une augmentation significative et dose-dépendante de l'activité luciférase dans les cellules transfectées avec les plasmides pGal4-hPPAR et traitées avec les composés selon l'invention. Les données expérimentales sont résumées dans le tableau 1 ci-après, qui indique les EC50 mesurées pour chaque isoforme PPAR, ainsi que le pourcentage de réponse maximale atteint par chaque composé au regard de la référence (Acide fénofibhque pour PPARα, Rosiglitazone pour PPARγ et GW501516 pour PPARδ).
Les activités mesurées diffèrent selon le composé testé et on observe aussi parmi les composés de l'invention plus ou moins de sélectivité vis-à-vis des isoformes PPAR :
- certains composés selon l'invention sont sélectifs par rapport à un sous- type PPAR,
- d'autres composés selon l'invention sont simultanément activateurs de deux ou trois sous-types.
Figure imgf000077_0001
Tableau 1 Conclusion :
Ces résultats montrent que les composés selon l'invention lient et activent les récepteurs hPPARα, hPPARγ, et/ou hPPARδ de manière significative. L'activité des composés selon l'invention est variable en fonction de la structure chimique du composé testé et selon le sous-type PPAR étudié.
Exemple 5 : Evaluation in vitro des propriétés activatrices de PPARδ des composés selon l'invention par mesure de l'expression de PDK4 et CPTIb dans des mvocvtes
Principe
Les effets stimulateurs du métabolisme lipidique et glucidique des composés selon l'invention ont été évalués par la mesure de l'expression de la Pyruvate Dehydrogenase Kinase 4 (PDK4) et de la Carnitine Palmotoyl Transferase Ib par des myocytes humains traités pendant 24 heures avec les composés selon l'invention. Il est décrit que la régulation de l'expression de ces gènes est directement contrôlée par PPARδ dans ce type cellulaire. Plus l'expression des gènes PDK4 et CPTI b est augmentée, plus le composé selon l'invention est stimulateur du métabolisme dans les cellules musculaires.
Protocole
Différenciation des cellules SKMC en mvocvtes
Les cellules primaires humaines SKMC (provenance Cambrex) sont cultivées dans du milieu DMEM (Gibco ; 21885-025) additionné de 1 % de pénicilline/streptomycine (VWR ; BWSTL0022/100) et 10% de sérum de veau fœtal décomplémenté (SVF. Gibco ; 10270-106).
Les cellules sont ensemencées sur des plaques de 12 puits (Biocoat, BD Falcon) à la densité de 75.103 cellules/puits dans un milieu de différenciation (même composition que le milieu de culture mais avec 2% de sérum de veau fœtal et 2% de sérum de cheval (Gibco ; 26050-088)) puis incubées à 37°C et 5% de CO2 pendant 7 jours afin de les différencier en myocytes. Traitement
Après 7 jours de différenciation, les cellules sont placées dans un milieu de culture sans sérum pour déprivation pendant 6 heures, puis traitées avec les composés selon l'invention dans un milieu de culture additionné de 0,5% de sérum de veau fœtal et 0,5% de sérum de cheval.
Les composés selon l'invention ont été testés à des doses de 1 μM. Les composés selon l'invention sont dissous dans du diméthyl sulfoxide (DMSO, Sigma ; D5879). Les cellules sont traitées pendant 24h à 37°C, 5% CO2. L'effet des composés selon l'invention est comparé à l'effet du DMSO seul.
Extraction des ARN, transcription inverse et PCR quantitative.
Après traitement, l'ARN total est extrait des cellules en utilisant le kit NucleoSpin®
96 RNA (Macherey Nagel, Hoerdt, France) selon les instructions du fabricant.
0,5μg d'ARN total (quantifié par lecture au spectrophotomètre UV) a ensuite été retro-transcrit en ADN complémentaire par une réaction d'1 heure à 37°C dans un volume total de 30 microlitres contenant du tampon 1X (Invitrogen), 1 ,5mM de DTT, 0,18mM de dNTPs (Promega), 200ng de pdN6 (Amersham), 3OU d'inhibiteur de RNase (Promega) et 1 μl de MMLV-RT (Invitrogen).
Les expériences de PCR quantitative ont été effectuées en utilisant le MyiQ Single-Color Real-Time PCR Détection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) et ont été réalisées en utilisant le kit iQ SYBR Green Supermix selon les recommandations du fournisseur, en plaques 96 puits, sur 5μl de réactions de retro-transcription diluées avec une température d'hybridation de 600C. Des paires d'amorces spécifiques des gènes PDK4 et CPTI b étudiés ont été utilisées :
• hPDK4 : amorce sens : 5'-CCCGAGAGGTGGAGCATTTC-3' (SEQ ID n°15) et amorce antisens 5'-TGTTGGCGAGTCTCACAGGC-3' (SEQ ID n°16)
• hCPTI b : amorce sens : δ'-CTTCTTCTTCCGCCAAACCC-S' (SEQ ID n°7) et amorce antisens : δ'-ACACATAGCCCAGATCCTGG-S' (SEQ ID n°8) La quantité de fluorescence émise est directement proportionnelle à la quantité d'ADN complémentaire présent au début de la réaction et amplifié au cours de la PCR. Pour chaque cible étudiée, une gamme est réalisée par des dilutions successives d'un pool constitué de quelques microlitres de différentes réactions de rétro-transcription. Les niveaux d'expression relatifs de chaque cible sont ainsi déterminés en utilisant les courbes d'efficacité obtenues avec les points de gamme. Les niveaux d'expression des gènes d'intérêt ont ensuite été normalisés par rapport au niveau d'expression du gène de référence 36B4 (dont les amorces spécifiques sont : amorce sens : δ'-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-S' (SEQ ID n°23) et amorce antisens : δ'-GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-S' (SEQ ID n°24)). Le facteur d'induction, c'est-à-dire le rapport entre le signal relatif (induit par le composé selon l'invention) et la moyenne des valeurs relatives du groupe contrôle, a ensuite été calculé. Plus ce facteur est élevé, plus les composés selon l'invention ont un caractère activateur de l'expression génique. Le résultat final est représenté comme moyenne des valeurs d'induction dans chaque groupe expérimental.
Résultats
Les inventeurs ont ainsi mis en évidence, sur des myocytes humains in vitro, que les composés selon l'invention ont des effets stimulateurs de l'expression de gènes impliqués dans le métabolisme glucidique et lipidique. Les résultats présentés sur la figure 1 -1 montrent que les composés 3 et 43, à 1 μM, induisent une augmentation significative de l'expression de PDK4 dans les myocytes. Les résultats présentés sur la figure 1 -2 montrent que les composés 3 et 43, à 1 μM, induisent une augmentation significative de l'expression de CPTI b dans les myocytes.
Conclusion
De manière inattendue, les données expérimentales présentées montrent que les composés selon l'invention ont une action métabolique dans les myocytes humains par activation de PPARδ. Exemple 6 : Evaluation in vivo des propriétés hypolipémiantes et activatrices des PPARs des composés selon l'invention dans la souris E2/E2
Principe
Les propriétés hypolipémiantes des composés selon l'invention ont été évaluées in vivo par le dosage des lipides plasmatiques et par analyse de l'expression des gènes cibles des PPARs dans le tissu hépatique et le tissu musculaire après traitement pendant 7 jours avec les composés selon l'invention, de la souris E2/E2 dyslipidémique.
Le modèle murin utilisé est la souris de type ApoE2/E2, souris transgénique pour l'isoforme E2 de l'apolipoprotéine E humaine (Sullivan PM et al., 1998). Chez l'homme, cette apolipoprotéine, constituant des lipoprotéines de faible et très faible densité (LDL-VLDL), est présente sous trois isoformes E2, E3 et E4. La forme E2 présente une mutation sur un acide aminé en position 158, ce qui affaiblit considérablement l'affinité de cette protéine pour le récepteur aux LDL. La clairance des VLDL est de ce fait quasi nulle. Il se produit alors une accumulation des lipoprotéines de faible densité et une hyperlipidémie mixte dite de type III (cholestérol et triglycérides élevés).
PPARα régule l'expression de gènes impliqués dans le transport des lipides (apolipoprotéines telles que Apo Al, Apo AII et Apo CIII, transporteurs membranaires tels que FAT) ou le catabolisme des lipides (ACO, CPT-I ou CPT- II, enzymes de la β-oxydation des acides gras). Un traitement par les activateurs de PPARα se traduit donc, chez l'homme comme chez le rongeur, par une diminution des taux circulants de triglycérides. La mesure des lipides plasmatiques après traitement par les composés selon l'invention est donc un indicateur du caractère agoniste des PPARs et donc du caractère hypolipémiant des composés selon l'invention. Les propriétés agonistes sur PPARα des molécules selon l'invention préalablement mesurées in vitro doivent se traduire au niveau hépatique par une sur-expression des gènes cibles directement sous le contrôle du récepteur PPARα : les gènes qui ont été étudiés dans cette expérience sont les gènes codant pour :
Acoxi : Acyl Co-enzymeA Oxydase, une enzyme clé dans le mécanisme de la β-oxydation des acides gras, Apo CIII : apolipoprotéine impliquée dans le métabolisme lipidique,
PDK4 : Pyruvate Dehydrogenase Kinase, isoenzyme 4 impliquée dans le métabolisme glucidique.
Les propriétés agonistes sur PPARδ des molécules selon l'invention préalablement mesurées in vitro doivent se traduire au niveau du muscle squelettique par une sur-expression des gènes cibles directement sous le contrôle du récepteur PPARδ : les gènes qui ont été étudiés dans cette expérience sont les gènes codant pour :
UCP3 : Uncoupling Protein 3, transporteur mitiochondhal impliqué dans la thermorégulation, PDK-4 : Pyruvate Deshydrogénase Kinase isoforme 4, enzyme du métabolisme glucidique.
La mesure de l'activité transcriptionnelle des gènes cibles des PPAR après traitement par les composés selon l'invention est donc aussi un indicateur du caractère hypolipémiant des composés selon l'invention.
Protocole
Traitement des animaux
Des souris transgéniques Apo E2/E2 ont été maintenues sous un cycle lumière/obscurité de 12/12 heures à une température constante de 20 ± 3°C. Après une acclimatation d'une semaine, les souris ont été pesées et rassemblées par groupes de 5 ou 6 animaux sélectionnés de telle sorte que la distribution de leur poids corporel et de leur taux de lipides plasmatiques déterminés une première fois avant l'expérience soit uniforme. Les composés testés ont été suspendus dans la carboxyméthylcellulose (Sigma C4888) et administrés par gavage intra-gastrique, à raison d'une fois par jour pendant 7 jours à la dose choisie. Les animaux ont eu un accès libre à l'eau et à la nourriture (régime standard). A l'issue de l'expérience, les animaux ont été anesthésiés après un jeûne de 4 heures, un prélèvement sanguin a été effectué sur anticoagulant (EDTA) puis les souris ont été pesées et euthanasiées. Le plasma a été séparé par centrifugation à 3000 tours/minutes pendant 20 minutes, les échantillons ont été conservés à + 4°C.
Des échantillons de foie et de tissu musculaire squelettique ont été prélevés et congelés immédiatement dans de l'azote liquide puis conservés à -800C pour les analyses ultérieures.
Mesure des lipides plasmatiques
Les concentrations plasmatiques de lipides (cholestérol total et triglycérides) ont été mesurées par dosages enzymatiques (bioMérieux-Lyon-France) selon les recommandations du fournisseur.
Analyse d'expression génique par RT-PCR quantitative
Tissu hépatique L'ARN total a été extrait à partir de fragments de foie en utilisant le kit NucleoSpin® 96 RNA (Macherey Nagel, Hoerdt, France) selon les instructions du fabricant.
Tissu squelettique
L'ARN total a été extrait à partir de fragments de muscle en utilisant le kit RNeasy® Fibrous Tissue kit (Qiagen) selon les instructions du fabricant.
1 μg d'ARN total (quantifié par lecture au spectrophotomètre UV) a ensuite été retro-transcht en ADN complémentaire par une réaction d'1 heure à 37°C dans un volume total de 30μl contenant du tampon 1X (Invitrogen), 1 ,5mM de DTT, 0,18mM de dNTPs (Promega), 200ng de pdN6 (Amersham), 3OU d'inhibiteur de RNase (Promega) et 1 μl de MMLV-RT (Invitrogen).
Les expériences de PCR quantitative ont été effectuées en utilisant le MyiQ Single-Color Real-Time PCR Détection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) et ont été réalisées en utilisant le kit iQ SYBR Green Supermix selon les recommandations du fournisseur, en plaques 96 puits, sur 5μl de réaction de retro-transcription diluée avec une température d'hybridation de 600C. Des paires d'amorces spécifiques des gènes étudiés ont été utilisées : • mPDK4 : amorce sens : δ'-TACTCCACTGCTCCAACACCTG-S' (SEQ ID n°17) et amorce antisens δ'-GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-S' (SEQ ID n°18)
• mACOXI : amorce sens : 5'- GAAGCCAGCGTTACGAGGTG-3' (SEQ ID n°3) et amorce antisens : 5'- TGGAGTTCTTGGGACGGGTG-3' (SEQ ID n°4)
• mApoCIII: amorce sens: δ'-CTCTTGGCTCTCCTGGCATC-S' (SEQ ID n°5) et amorce antisens 5'-GCATCCTGGACCGTCTTGGA-3' (SEQ ID n°6) • mUCP3 : amorce sens : 5'-GCACCGCCAGATGAGTTTTG-3' (SEQ ID n°21 ) et amorce antisens : 5'-GACGCTGGAGTGGTCCGCTC-3' (SEQ ID n°22)
Dans les deux cas (tissu hépatique et tissu musculaire squelettique), la quantité de fluorescence émise est directement proportionnelle à la quantité d'ADN complémentaire présent au début de la réaction et amplifié au cours de la PCR. Pour chaque cible étudiée, une gamme est réalisée par des dilutions successives d'un pool constitué de quelques microlitres de différentes réactions de retro- transcription. Les niveaux d'expression relatifs de chaque cible sont ainsi déterminés en utilisant les courbes d'efficacité obtenues avec les points de gamme.
Les niveaux d'expression des gènes d'intérêt ont ensuite été normalisés, dans le tissu hépatique par rapport au niveau d'expression du gène de référence 36B4 (dont les amorces spécifiques sont : amorce sens : 5'- CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3' (SEQ ID n°23) et amorce antisens : 5'- GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3' (SEQ ID n°24)) et, dans le tissu musculaire par rapport au niveau d'expression du gène de référence 18S (dont les amorces spécifiques sont : amorce sens : 5'-
CGGACACGGACAGGATTGACAG-3' (SEQ ID n°25) et l'amorce antisens : 5'- AATCTCGGGTGGCTGAACGC-3' (SEQ ID n°26)
Le facteur d'induction, c'est-à-dire le rapport entre le signal relatif (induit par le composé selon l'invention) et la moyenne des valeurs relatives du groupe contrôle, a ensuite été calculé pour chaque échantillon. Plus ce facteur est élevé, plus le composé a un caractère activateur d'expression génique. Le résultat final est représenté comme moyenne des valeurs d'induction dans chaque groupe expérimental.
Résultats
Mesure des lipides plasmatiques
Les figures 2-1 et 2-2 comparent les taux de cholestérol et de triglycérides après 7 jours de traitement avec le composé 2 à 100 mpk aux taux obtenus avec les animaux contrôles. De manière inattendue, les taux de cholestérol et de triglycérides plasmatiques ont été très significativement diminués par le traitement.
La figure 3-3 compare les taux de cholestérol après 7 jours de traitement avec le composé 21 à 50 mpk aux taux obtenus avec les animaux contrôles. De manière inattendue, les taux de cholestérol ont été très significativement diminués par le traitement.
Analyse de l'expression génique par RT-PCR quantitative Les inventeurs ont aussi mis en évidence que les composés selon l'invention sont, in vivo, des régulateurs de l'expression de gènes cibles des PPARs. Les résultats présentés sur les figures 3-1 , 3-2, 3-6 et 3-7 montrent que le composé
2, administré à 100 mpk pendant 7 jours, induit une augmentation significative de l'expression hépatique des gènes codant pour IΑCOX1 (figure 3-1 ) et une diminution de l'expression du gène codant pour ApoCIII (figure 3-2) ainsi qu'une augmentation significative des gènes codant pour UCP3 (figure 3-6) et PDK4 (figure 3-7) dans le muscle squelettique. Les résultats présentés sur les figures 3-
3, 3-4 et 3-5 montrent que le composé 21 , administré à 50 mpk pendant 7 jours, induit une augmentation significative de l'expression hépatique des gènes codant pour PDK4 (figure 3-3) et ACOX1 (figure 3-4), ainsi qu'une diminution de l'expression du gène codant pour ApoCIII (figure 3-5). Ces gènes codent pour des enzymes fortement impliquées dans le métabolisme des lipides, des glucides et de la thermorégulation, et le fait que leur expression soit modulée par les composés selon l'invention renforce l'idée que ces composés présentent un intérêt potentiel majeur dans le cadre des pathologies métaboliques.
Conclusion De manière inattendue, les données expérimentales présentées montrent que les composés selon l'invention possèdent un effet hypolipémiant (diminution des taux plasmatiques de cholestérol et de triglycérides). De plus, les données expérimentales présentées montrent que les composés selon l'invention modulent l'expression de l'ApoCIII, PDK4 et ACOX1 dans le tissu hépatique, ainsi que UCP3 et PDK4 dans le tissu musculaire. Ces gènes codent pour des protéines fortement impliquées dans le métabolisme des lipides, des glucides et de la thermorégulation, et le fait que leur expression soit modulée par les composés selon l'invention renforce l'idée que ces composés présentent un intérêt majeur dans le cadre des pathologies métaboliques.
Exemple 7 : Evaluation in vivo, chez la souris C57BI6, des propriétés hypolipémiantes et activatrices des PPARs, des composés selon l'invention
Principe
Les propriétés hypolipémiantes des composés selon l'invention ont été évaluées in vivo par dosage des lipides plasmatiques et par mesure de l'expression de gènes cibles des PPARs dans les tissus hépatique et musculaire après un traitement par voie orale pendant 14 jours de souris C57BI6. PPARα régule l'expression de gènes impliqués à la fois dans le transport des lipides (apolipoprotéines telles que Apo Al, Apo AII et Apo CIII, transporteurs membranaires tels que FAT) et le catabolisme des lipides (ACO, CPT-I ou CPT- II, enzymes de la β-oxydation des acides gras). Un traitement par les activateurs de PPARα se traduit donc, chez l'homme comme chez le rongeur, par une diminution des taux circulants de triglycérides. La mesure des lipides plasmatiques après traitement par les composés selon l'invention est donc un indicateur du caractère agoniste des PPARs et donc du caractère hypolipémiant des composés selon l'invention. Les propriétés agonistes sur PPARα des molécules selon l'invention préalablement mesurées in vitro doivent se traduire au niveau hépatique par une régulation de l'expression des gènes cibles directement sous le contrôle du récepteur PPARα : le gène qui a été étudié dans cette expérience est le gène codant pour Apo CIII (apolipoprotéine impliquée dans le métabolisme lipidique). Les propriétés agonistes de PPARδ des molécules selon l'invention préalablement mesurées in vitro doivent se traduire au niveau du muscle squelettique par une sur-expression des gènes cibles directement sous le contrôle du récepteur PPARδ : les gènes qui ont été étudiés dans cette expérience sont les gènes codant pour CPTI b (Carnitine Palmitoyl-transferase 1 b, protéine membranaire de la mitochondire impliquée dans la β-oxydation des acides gras), UCP2 et UCP3 (Uncoupling Protein 2 et Uncoupling Protein 3, transporteurs mitiochondriaux impliqué dans la thermorégulation) et PDK-4 (Pyruvate Deshydrogénase Kinase isoforme 4, enzyme du métabolisme glucidique).
Protocole
Traitement des animaux
Des souris C57BI6 femelles ont été maintenues sous un cycle lumière/obscurité de 12/12 heures à une température constante de 20 ± 3°C. Après une acclimatation d'une semaine, les souris ont été pesées et rassemblées par groupes de 6 animaux sélectionnés de telle sorte que la distribution de leurs poids corporel et de leurs taux de lipides plasmatiques déterminés une première fois avant l'expérience soient uniformes. Les composés testés ont été suspendus dans la carboxyméthylcellulose (Sigma C4888) et administrés par gavage intra- gastrique, à raison d'une fois par jour pendant 14 jours à la dose choisie. Les animaux ont eu un accès libre à l'eau et à la nourriture (régime standard). A l'issue de l'expérience, les animaux ont été anesthésiés après un jeûne de 4 heures, un prélèvement sanguin a été effectué sur anticoagulant (EDTA) puis les souris ont été pesées et euthanasiées. Le plasma a été séparé par centrifugation à 3000 tours/minutes pendant 20 minutes, les échantillons ont été conservés à + 4°C. Des échantillons de tissu hépatique ont été prélevés et congelés immédiatement dans de l'azote liquide puis conservés à -800C pour les analyses ultérieures.
Mesure des triglycérides plasmatiques Les concentrations plasmatiques de triglycérides ont été mesurées par dosages enzymatiques (BioMérieux-Lyon-France) selon les recommandations du fournisseur.
Analyse d'expression génique par RT-PCR quantitative Tissu hépatique
L'ARN total a été extrait à partir de fragments de foie en utilisant le kit
NucleoSpin® 96 RNA (Macherey Nagel, Hoerdt, France) selon les instructions du fabricant.
Tissu squelettique L'ARN total a été extrait à partir de fragments de muscle en utilisant le kit
RNeasy® Fibrous Tissue kit (Qiagen) selon les instructions du fabricant.
1 μg d'ARN total (quantifié par spectrophotométrie UV) a ensuite été retro- transcht en ADN complémentaire par une réaction d'1 heure à 37°C dans un volume total de 30μl contenant du tampon 1X (Invitrogen), 1 ,5mM de DTT, 0,18mM de dNTPs (Promega), 200ng de pdN6 (Amersham), 3OU d'inhibiteur de RNase (Promega) et 1 μl de MMLV-RT (Invitrogen).
Les expériences de PCR quantitative ont été effectuées en utilisant le MyiQ Single-Color Real-Time PCR Détection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) et ont été réalisées en utilisant le kit iQ SYBR Green Supermix selon les recommandations du fournisseur, en plaques 96 puits, sur 5μl de réaction de retro-transcription diluée avec une température d'hybridation de 600C. Des paires d'amorces spécifiques des gènes étudiés ont été utilisées : • mPDK4 : amorce sens : δ'-TACTCCACTGCTCCAACACCTG-S' (SEQ ID n°17) et amorce antisens 5'-GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-3' (SEQ ID n°18) • mApoCIII: amorce sens: 5'-CTCTTGGCTCTCCTGGCATC-3' (SEQ ID n°5) et amorce antisens 5'-GCATCCTGGACCGTCTTGGA-3' (SEQ ID n°6)
• mUCP2 : amorce sens : δ'-GTCGGAGATACCAGAGCACTGTCG-S' (SEQ ID n°19) et amorce antisens : 5'-CACATCAACAGGGGAGGCGA-3'
(SEQ ID n°20)
• mUCP3 : amorce sens : 5'-GCACCGCCAGATGAGTTTTG-3' (SEQ ID n°21 ) et amorce antisens : 5'-GACGCTGGAGTGGTCCGCTC-3' (SEQ ID n°22) • mCPTI b : amorce sens : δ'-GGACTGAGACTGTGCGTTCCTG-S' (SEQ
ID n°9) et amorce antisens : δ'-AGTGCTTGGCGGATGTGGTT-S' (SEQ ID n°10)
La quantité de fluorescence émise est directement proportionnelle à la quantité d'ADN complémentaire présent au début de la réaction et amplifié au cours de la PCR. Pour chaque cible étudiée, une gamme est réalisée par des dilutions successives d'un pool constitué de quelques microlitres de différentes réactions de retro-transcription. Les niveaux d'expression relatifs de chaque cible sont ainsi déterminés en utilisant les courbes d'efficacité obtenues avec les points de gamme.
Les niveaux d'expression des gènes d'intérêt ont ensuite été normalisés, dans le tissu hépatique par rapport au niveau d'expression du gène de référence 36B4 (dont les amorces spécifiques sont : amorce sens : 5'- CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3' (SEQ ID n°23) et amorce antisens : 5'- GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3' (SEQ ID n°24)) et, dans le tissu musculaire par rapport au niveau d'expression du gène de référence 18S (dont les amorces spécifiques sont : amorce sens : 5'-
CGGACACGGACAGGATTGACAG-3' (SEQ ID n°25) et l'amorce antisens : 5'- AATCTCGGGTGGCTGAACGC-3' (SEQ ID n°26)). Le facteur d'induction, a ensuite été calculé pour chaque échantillon. Plus ce facteur est élevé, plus le composé a un caractère activateur d'expression génique. Le résultat final est représenté comme moyenne des valeurs d'induction dans chaque groupe expérimental. Résultats
Mesure des lipides plasmatiques
La figure 4 compare les taux plasmatiques de triglycérides après 14 jours de traitement avec les composés 3 et 9, à 50 mpk, aux taux obtenus avec les animaux contrôles. De manière inattendue, les taux circulants de triglycérides et ont été significativement diminués par le traitement.
Analyse de l'expression génique par RT-PCR quantitative Les inventeurs ont aussi mis en évidence que les composés selon l'invention sont, in vivo, des régulateurs de l'expression de gènes cibles de PPARα dans le tissu hépatique. Les résultats présentés sur la figure 5-1 montrent que les composés 3 et 9, administré à 50 mpk pendant 14 jours à des souris C57BI6, induisent une diminution significative de l'expression hépatique du gène codant pour l'ApoCIII. Ce gène code pour un des constituants principal des triglycérides et participe donc au métabolisme des lipides et le fait que son expression soit modulée par les composés selon l'invention renforce l'idée que ces composés présentent un intérêt potentiel majeur dans le cadre des pathologies métaboliques. Les inventeurs ont aussi mis en évidence que les composés selon l'invention sont, in vivo, des régulateurs de l'expression de gènes cibles de PPARδ dans le tissu musculaire. Les résultats présentés sur les figure 5-2 à 5-9 montrent que les composés 9 et 21 , administrés à 50 mpk pendant 14 jours à des souris C57BI6, induisent une augmentation significative de l'expression, dans le muscle squelettique, des gènes codant pour CPTI b, UCP2, UCP3 et PDK4. Ces gènes codent pour des enzymes impliquées dans le métabolisme des lipides, des glucides et de la dépense énergétique. Le fait que leur expression soit modulée par les composés selon l'invention renforce l'idée que ces composés présentent un intérêt majeur dans le cadre des pathologies métaboliques.
Conclusion
De manière inattendue, les données expérimentales présentées montrent que les composés selon l'invention possèdent un effet hypolipémiant (diminution des taux plasmatiques de triglycérides). De plus, les données expérimentales présentées montrent que les composés selon l'invention modulent l'expression de l'ApoCIII dans le tissu hépatique, ainsi que CPTI b, UCP2, UCP3 et PDK4 dans le tissu musculaire. Ces gènes codent pour des protéines fortement impliquées dans le métabolisme des lipides et dans la thermorégulation, et le fait que leur expression soit modulée par les composés selon l'invention renforce l'idée que ces composés présentent un intérêt potentiel majeur dans le cadre des pathologies métaboliques.
Exemple 8 : Evaluation in vivo, chez la souris db/db, des propriétés antidiabétique et activatrices des PPAR des composés selon l'invention.
Principe Les propriétés sur l'insulino-resistance des composés selon l'invention sont évaluées in vivo par mesure des taux plasmatiques d'insuline après traitement par voie orale pendant 14 jours, par les composés selon l'invention, de la souris db/db. Par ailleurs, l'action activatrice des PPAR des composés selon l'invention a été mise en évidence par analyse de l'expression génique de gènes cibles des PPAR dans les tissus hépatique et musculaire chez la souris db/db traitée pendant 28 jours par les composés selon l'invention.
Protocole
Traitement des animaux Des souris db/db femelles ont été maintenues sous un cycle lumière/obscurité de 12/12 heures à une température constante de 20 ± 3°C. Après une acclimatation d'une semaine, les souris ont été pesées et rassemblées par groupes de 8 animaux sélectionnés de telle sorte que la distribution de leurs poids corporel et de leurs taux de lipides plasmatiques déterminés une première fois avant l'expérience soient uniformes. Les composés testés ont été suspendus dans la carboxyméthylcellulose (Sigma C4888) et administrés par gavage intra-gastrique, à raison d'une fois par jour pendant 28 jours à la dose choisie. Les animaux ont eu un accès libre à l'eau et à la nourriture (régime standard). La prise de nourriture et la prise de poids sont enregistrées tout au long de l'expérience. A l'issue de l'expérience, les animaux ont été anesthésiés après un jeûne de 4 heures, un prélèvement sanguin a été effectué sur anticoagulant (EDTA) puis les souris ont été pesées et euthanasiées. Le plasma a été séparé par centrifugation à 3000 tours/minutes pendant 20 minutes, les échantillons ont été conservés à + 4°C.
Des échantillons de tissu hépatique et de tissu musculaire ont été prélevés et congelés immédiatement dans de l'azote liquide puis conservés à -800C pour les analyses ultérieures.
Mesure de l'insulinémie plasmatique
Le dosage de l'insuline murine est effectué par la méthode Elisa (en utilisant le kit INSKR020 du fournisseur Crystal chem). Un anticorps anti-insuline de souris est coaté sur une microplaque. Le sérum à doser pour l'insuline est ensuite déposé sur cette plaque. Un anticorps anti-insuline de cobaye va reconnaître le complexe insuline/anticorps monoclonal anti-insuline de souris et s'y fixer. Enfin un anticorps anti-cobaye marqué à la péroxydase est ajouté se fixant à l'anticorps anti-insuline de cobaye. La réaction colorimétrique est réalisée par addition du substrat de l'enzyme OPD (Ortho Phényl Diamine). L'intensité de la coloration est proportionnelle à la quantité d'insuline présente dans l'échantillon.
Analyse d'expression génique par RT-PCR quantitative Tissu hépatique
L'ARN total a été extrait à partir de fragments de foie en utilisant le kit NucleoSpin® 96 RNA (Macherey Nagel, Hoerdt, France) selon les instructions du fabricant.
Tissu musculaire
L'ARN total a été extrait à partir de fragments de muscle en utilisant le kit RNeasy® Fibrous Tissue kit (Qiagen) selon les instructions du fabricant.
1 μg d'ARN total (quantifié par spectrophotométrie UV) a ensuite été retro- transcrit en ADN complémentaire par une réaction d'1 heure à 37°C dans un volume total de 30μl contenant du tampon 1X (Invitrogen), 1 ,5mM de DTT, 0,18mM de dNTPs (Promega), 200ng de pdN6 (Amersham), 3OU d'inhibiteur de RNase (Promega) et 1 μl de MMLV-RT (Invitrogen).
Les expériences de PCR quantitative ont été effectuées en utilisant le MyiQ Single-Color Real-Time PCR Détection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) et ont été réalisées en utilisant le kit iQ SYBR Green Supermix selon les recommandations du fournisseur, en plaques 96 puits, sur 5μL de réaction de retro-transcription diluée avec une température d'hybridation de 600C. Des paires d'amorces spécifiques des étudiés ont été utilisées.
• mPDK4 : amorce sens : δ'-TACTCCACTGCTCCAACACCTG-S' (SEQ ID n°17) et amorce antisens δ'-GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-S' (SEQ ID n°18)
• mApoCIII: amorce sens: δ'-CTCTTGGCTCTCCTGGCATC-S' (SEQ ID n°5) et amorce antisens 5'-GCATCCTGGACCGTCTTGGA-3' (SEQ ID n°6)
• mACOXI : amorce sens : 5'- GAAGCCAGCGTTACGAGGTG-3' (SEQ ID n°3) et amorce antisens : 5'- TGGAGTTCTTGGGACGGGTG-3' (SEQ ID n°4) • mUCP2 : amorce sens : 5'- GTCGGAGATACCAGAGCACTGTCG-3'
(SEQ ID n°19) et amorce antisens : 5'- CACATCAACAGGGGAGGCGA- 3' (SEQ ID n°20)
• mUCP3 : amorce sens : 5'- GCACCGCCAGATGAGTTTTG-3' (SEQ ID n°21 ) et amorce antisens : 5'- GACGCTGGAGTGGTCCGCTC-3' (SEQ ID n°22)
La quantité de fluorescence émise est directement proportionnelle à la quantité d'ADN complémentaire présent au début de la réaction et amplifié au cours de la PCR. Pour chaque cible étudiée, une gamme est réalisée par des dilutions successives d'un pool constitué de quelques microlitres de différentes réactions de retro-transcription. Les niveaux d'expression relatifs de chaque cible sont ainsi déterminés en utilisant les courbes d'efficacité obtenues avec les points de gamme. Les niveaux d'expression des gènes d'intérêt ont ensuite été normalisés, dans le tissu hépatique par rapport au niveau d'expression du gène de référence 36B4 (dont les amorces spécifiques sont : amorce sens : 5'- CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3' (SEQ ID n°23) et amorce antisens : 5'- GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3' (SEQ ID n°24)) et, dans le tissu musculaire par rapport au niveau d'expression du gène de référence 18S (dont les amorces spécifiques sont : amorce sens : 5'-
CGGACACGGACAGGATTGACAG-3' (SEQ ID n°25) et l'amorce antisens : 5'- AATCTCGGGTGGCTGAACGC-S1 (SEQ ID n°26)). Le facteur d'induction, a ensuite été calculé pour chaque échantillon. Plus ce facteur est élevé, plus le composé a un caractère activateur d'expression génique. Le résultat final est représenté comme moyenne des valeurs d'induction dans chaque groupe expérimental.
Résultats
Mesure de l'insulinémie
La figure 6 compare les taux plasmatiques d'insuline après 14 jours de traitement avec le composé 3 administré à 100mpk aux taux obtenus avec les animaux du groupe contrôle. De manière inattendue, l'insulinémie est significativement diminuée par le traitement des animaux avec le composé selon l'invention.
Analyse de l'expression génique par RT-PCR quantitative
Les inventeurs ont aussi mis en évidence que les composés selon l'invention sont, in vivo, des régulateurs de l'expression de gènes cibles des PPARs. Les résultats présentés sur les figures 7-1 à 7-3 montrent que le composé 3 administré à 100 mpk pendant 28 jours chez des souris db/db, induit dans le tissu hépatique une augmentation significative de l'expression des gènes codant pour PDK4 (figure 7-1 ) et ACOX1 (figure 7-2) ainsi qu'une diminution significative de l'expression du gène codant pour l'ApoCIII (figure 7-3). L'ensemble de ces gènes codent pour des enzymes fortement impliquées dans le métabolisme des lipides et des glucides, et sont connus comme étant des gènes cibles de PPARα dans le Foie. Le fait que leur expression soit modulée par le composé 3 selon l'invention renforce l'idée que ce composé selon l'invention présente un intérêt potentiel majeur dans le cadre des pathologies métaboliques.
D'autre part, les inventeurs ont aussi mis en évidence que le composé 3 selon l'invention est, in vivo, un régulateur de l'expression de gènes cibles de PPARδ dans le muscle squelettique. Les résultats présentés sur les figures 7-4 à 7-6 montrent que le composé 3 administré à 100 mpk pendant 28 jours chez des souris db/db, induit dans le muscle squelettique une augmentation significative de l'expression des gènes codant pour PDK4 (figure 7-4), UCP2 (figure 7-5) et UCP3 (figure 7-6).
L'ensemble de ces gènes codent pour des protéines fortement impliquées dans le métabolisme des glucides et de la thermorégulation, et sont connus comme étant des gènes cibles de PPARδ dans le muscle. Le fait que leur expression soit modulée par le composé 3 renforce l'idée que ce composé présente un intérêt potentiel majeur dans le cadre des pathologies métaboliques.
Conclusion
De manière inattendue, les données expérimentales présentées montrent que les composés selon l'invention induisent in vivo une amélioration de la sensibilité à l'insuline. De plus, les données expérimentales présentées montrent que les composés selon l'invention modulent l'expression de gènes régulés par l'activation des PPAR qui codent pour des protéines fortement impliquées dans le métabolisme des lipides, des glucides et la thermorégulation.
Exemple 9 : Evaluation in vitro des propriétés métaboliques des composés selon l'invention dans un modèle de mvocvtes
Principe Les effets stimulateurs des composés selon l'invention ont été évalués par la mesure de la β-oxydation des acides gras par des myocytes pré-traités pendant 24 heures avec les composés selon l'invention. Plus l'induction de la β-oxydation des acides gras est augmentée, plus le composé selon l'invention est stimulateur du métabolisme dans les cellules musculaires.
L'objectif est de mesurer la quantité d'eau tritiée formée durant l'oxydation mitochondriale des acides gras marqués au 3H.
Protocole
Différenciation des cellules C2C12 en mvocvtes
La lignée cellulaire murine C2C12 (provenance ECACC) est cultivée dans du milieu DMEM (Gibco ; 41965-039) additionné de 1 % L-Glutamine (Gibco ; 25030), de 1 % pénicilline/streptomycine (VWR ; BWSTL0022/100) et 10% sérum de veau fœtal décomplémenté (SVF. Gibco ; 10270-106). Les cellules sont ensemencées sur des plaques de 48 puits à la densité de 25.103 cellules/puits, puis à confluence, le milieu est remplacé par un milieu de différenciation (même composition que le milieu de culture mais avec 2% de sérum de cheval (Gibco ; 26050-088)) puis incubées à 37°C et 5% de CO2 pendant 4 jours afin de les différencier en myocytes.
Traitement
Après 4 jours de différenciation, les cellules sont traitées avec les composés selon l'invention dans le milieu de culture de différenciation. Les composés selon l'invention ont été testés aux doses de 1 μM. Les composés selon l'invention sont dissous dans du diméthyl sulfoxide (DMSO, Sigma ; D5879). Les cellules sont traitées pendant 24h à 37°C, 5% CO2. L'effet des composés selon l'invention est comparé à l'effet du DMSO seul.
Mesure de la β-oxydation
Après 24 heures de traitement, le milieu de culture est remplacé par un milieu
DMEM 1g/L glucose (Gibco ; 21885-025) additionné de 1 % L-Glutamine (Gibco ;
25030), 1 % pénicilline/streptomycine (VWR ; BWSTL0022/100) et 1 mM L- carnitine (Alfa Aesar ; A 17618). Les cellules sont ensuite incubées avec le complexe de palmitate tritié / BSA (0.1 mM) à 37°C en présence de 5% CO2. La réaction est stoppée après 1 , 2 et 3 heures et les protéines sont précipitées avec distribution de TCA 10%.
Dans un premier temps, le comptage du tritium est réalisé sur 100μl_ de surnageant de culture précipité. Dans un second temps, 50μl_ de surnageant précipité est mis en évaporation pendant 2 jours puis le tritium résiduel est mesuré afin d'évaluer la quantité de palmitate tritié non convertie en eau.
Une gamme étalon est réalisée par dilutions successives du complexe palmitate tritié / BSA afin de déterminer la quantité de palmitate transformée en eau. Pour chaque temps de la cinétique, 1 h, 2h et 3h, la quantité en nanomoles de palmitate oxydé est calculée par régression linéaire. Les aires sous la courbe sont déterminées pour chaque condition et les résultats sont normalisés au
DMSO.
Le résultat final est représenté comme moyenne des valeurs d'induction dans chaque groupe expérimental.
Résultats
Les inventeurs ont aussi mis en évidence, sur des myocytes in vitro, que les composés selon l'invention ont des effets stimulateurs de la β-oxydation des acides gras. Les résultats présentés sur la figure 8 montrent que les composés 3, 9, 21 , 41 , 43 et 47 selon l'invention, à 1 μM, induisent une augmentation significative de la β-oxydation des acides gras dans les myocytes.
Conclusion De manière inattendue, les données expérimentales présentées montrent que les composés selon l'invention ont une action métabolique dans les myocytes murins en induisant le catabolisme des acides gras. Exemple 10 : Evaluation in vitro des propriétés activatrices des composés selon l'invention sur le transport inverse du cholestérol
Principe L'effet des composés selon l'invention sur le transport inverse de cholestérol a été évalué par la mesure de l'expression du gène ABCA1 (ATP-binding cassette, sub-family A, member 1 ; transporteur membranaire impliqué dans l'efflux de cholestérol) dans des macrophages humains. Plus l'expression d'ABCAl est augmentée, plus le composé selon l'invention stimule le transport inverse du cholestérol.
Protocole
Différenciation des cellules THP- 1 en macrophages.
La lignée de monocytes humains THP1 (provenance ATCC) est cultivée dans du milieu RPMI1640 additionné de 25mM Hepes (Gibco ; 42401 -018), 1 % L- glutamine (Gibco ; 25030-24), 1 % pénicilline/streptomycine (Biochrom AG ; A
2213) et 10% de sérum de veau fœtal décomplémenté (SVF. Gibco ; 10270-106).
Les cellules sont ensemencées sur des plaques de 24 puits (Primaha BD
Falcon) à la densité de 3.105 cellules/puits puis incubées à 37°C et 5% de CO2 pendant 72h en présence de 30 ng/ml de phorbol 12-myhstate 13-acétate (PMA) afin de les différencier en macrophages.
Traitement
Le milieu de différenciation est aspiré et remplacé par le milieu de traitement (même composition que le milieu de culture mais sans sérum de veau fœtal et avec 1 % d'ultroser (PaII Life Science ; P/N267051 )).
Les composés selon l'invention sont dissous dans du diméthyl sulfoxide (DMSO, Fluka ; 41640). Les composés selon l'invention ont été testés à 1 et 10μM. Les cellules sont traitées pendant 24h à 37°C, 5% CO2. L'effet des composés selon l'invention est comparé à l'effet du DMSO seul (0.1 %). Extraction des ARN, transcription inverse et PCR quantitative.
Après traitement, l'ARN total est extrait des cellules en utilisant le kit NucleoSpin® 96 RNA (Macherey Nagel, Hoerdt, France) selon les instructions du fabricant.
1 μg d'ARN total (quantifié par lecture au spectrophotomètre UV) a ensuite été retro-transcht en ADN complémentaire par une réaction d'1 heure à 37°C dans un volume total de 30 microlitres contenant du tampon 1X (Invitrogen), 1 ,5mM de DTT, 0,18mM de dNTPs (Promega), 200ng de pdN6 (Amersham), 3OU d'inhibiteur de RNase (Promega) et 1 μl de MMLV-RT (Invitrogen).
Les expériences de PCR quantitative ont été effectuées en utilisant le MyiQ Single-Color Real-Time PCR Détection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) et ont été réalisées en utilisant le kit iQ SYBR Green Supermix selon les recommandations du fournisseur, en plaques 96 puits, sur 5μl de réactions de retro-transcription diluées avec une température d'hybridation de 600C. Une paires d'amorces spécifiques du gène étudié a été utilisée :
• hABCAl : amorce sens : δ'-CTGAGGTTGCTGCTGTGGAAG-S' (SEQ ID n°1 ) et amorce antisens : 5'-CATCTGAGAACAGGCGAGCC-3' (SEQ ID n°2)
La quantité de fluorescence émise est directement proportionnelle à la quantité d'ADN complémentaire présent au début de la réaction et amplifié au cours de la PCR. Pour chaque cible étudiée, une gamme est réalisée par des dilutions successives d'un pool constitué de quelques microlitres de différentes réactions de retro-transcription. Les niveaux d'expression relatifs de chaque cible sont ainsi déterminés en utilisant les courbes d'efficacité obtenues avec les points de gamme.
Les niveaux d'expression des gènes d'intérêt ont ensuite été normalisés, dans le tissu hépatique par rapport au niveau d'expression du gène de référence 36B4 (dont les amorces spécifiques sont : amorce sens : 5'- CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3' (SEQ ID n°23) et amorce antisens : 5'- GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3' (SEQ ID n°24)). Le facteur d'induction, c'est-à-dire le rapport entre le signal relatif (induit par le composé selon l'invention) et la moyenne des valeurs relatives du groupe contrôle, a ensuite été calculé. Plus ce facteur est élevé, plus le composé a un caractère activateur d'expression génique. Le résultat final est représenté comme moyenne des valeurs d'induction dans chaque groupe expérimental.
Résultats
Les inventeurs ont mis en évidence que les composés selon l'invention sont, in vitro dans les macrophages, des stimulateurs du transport inverse du cholestérol. Les résultats obtenus sont reportés dans le tableau 2 ci-après. Ces résultats montrent que les composés 9 et 21 , à 1 μM, ainsi que les composés 2, 3, 13, 21 et 33, à 10μM, induisent une augmentation significative de l'expression du gène codant pour ABCA 1 dans les macrophages.
Figure imgf000100_0001
Tableau 2
Conclusion
De manière inattendue, les données expérimentales présentées montrent que les composés selon l'invention stimulent le transport inverse du cholestérol dans les macrophages humains.
Exemple 11 : Evaluation in vitro des propriétés anti-inflammatoires des composés selon l'invention dans un modèle de monocvtes
Principe
Les effets anti-inflammatoires des composés selon l'invention ont été évalués par la mesure de la sécrétion et de l'expression de la Macrophages Chemoattractant Protein (MCP1 ) par des monocytes humains traités pendant 24 heures avec les composés selon l'invention et stimulés avec du PMA (phorbol 12-myhstate 13- acétate, qui provoque une réponse inflammatoire des cellules). Plus la quantité de MCP1 sécrétée est diminuée, plus le composé selon l'invention inhibe la réaction inflammatoire. De la même manière, plus l'expression du gène MCP1 est inhibée, plus le composé selon l'invention est anti-inflammatoire.
Protocole
Culture des cellules THP- 1 La lignée de monocytes humains THP1 (provenance ATCC) est cultivée dans du milieu RPMH 640 additionné de 25mM Hepes (Gibco ; 42401 -018), 1 % glutamine (Gibco ; 25030-24) 1 % pénicilline/streptomycine (Biochrom AG ; A 2213) et 10% sérum de veau fœtal décomplémenté (SVF. Gibco ; 10270-106).
Traitement
Les cellules sont ensemencées sur des plaques de 24 puits (Primaria BD Falcon) à la densité de 8,70.105 cellules/puits dans du milieu de traitement (même composition que le milieu de culture mais avec 0.2% de sérum de veau fœtal décomplémenté) et en présence de 5 ng/mL de phorbol 12-myhstate 13- acétate (PMA) pour induire la réponse inflammatoire.
Les composés selon l'invention ont été testés aux doses de 1 μM. Les composés selon l'invention sont dissous dans du diméthyl sulfoxide (DMSO, Fluka ; 41640). Les cellules sont traitées pendant 24h à 37°C, 5% CO2. L'effet des composés selon l'invention est comparé à l'effet du DMSO seul.
Mesure de la sécrétion de MCP1
Le milieu de traitement est récupéré et la concentration de MCP1 est mesurée en utilisant la trousse Elisa « Human MCP1 Elisa set » (BD OptEIA ; 555179) selon les recommandations du fabricant. Un anticorps monoclonal anti-MCP1 humain est fixé sur une plaque, puis les surnageants de culture sont distribués. Un anticorps anti-MCP1 biotinylé va ensuite se fixer au complexe. Un troisième anticorps conjugué et couplé à une enzyme peroxydase permet en présence de substrat d'initier une réaction enzymatique dont le résultat est une coloration proportionnelle à la quantité de MCP1 fixée et peut être mesurée par spectrophotométhe. Une gamme est réalisée à partir d'un point de concentration connue et permet de calculer la concentration en MCP1 de chaque échantillon.
Le facteur d'induction, c'est-à-dire le rapport entre le signal induit par le composé selon l'invention et le signal du groupe contrôle, a ensuite été calculé. Plus ce facteur est faible, plus le composé a un caractère inhibiteur de la sécrétion de MCP1. Le résultat final est représenté comme moyenne des valeurs d'induction de chaque groupe expérimental .
Extraction des ARN, transcription inverse et PCR quantitative.
Après traitement, l'ARN total est extrait des cellules en utilisant le kit NucleoSpin®
96 RNA (Macherey Nagel, Hoerdt, France) selon les instructions du fabricant.
1 μg d'ARN total (quantifié par lecture au spectrophotomètre UV) a ensuite été retro-transcht en ADN complémentaire par une réaction d'1 heure à 37°C dans un volume total de 30 microlitres contenant du tampon 1X (Invitrogen), 1 ,5mM de DTT, 0,18mM de dNTPs (Promega), 200ng de pdN6 (Amersham), 3OU d'inhibiteur de RNase (Promega) et 1 μl de MMLV-RT (Invitrogen).
Les expériences de PCR quantitative ont été effectuées en utilisant le MyiQ Single-Color Real-Time PCR Détection System (Biorad, Marnes-la-Coquette, France) et ont été réalisées en utilisant le kit iQ SYBR Green Supermix selon les recommandations du fournisseur, en plaques 96 puits, sur 5μl de réactions de retro-transcription diluées avec une température d'hybridation de 600C. Une paire d'amorces spécifique du gène étudié a été utilisée :
• hMCP1 : amorce sens : δ'-AGGAAGATCTCAGTGCAGAGG-S' (SEQ ID n°11 ) et amorce antisens : δ'-AGTCTTCGGAGTTTGGGTTTG-S' (SEQ ID n°12)
La quantité de fluorescence émise est directement proportionnelle à la quantité d'ADN complémentaire présent au début de la réaction et amplifié au cours de la PCR. Pour chaque cible étudiée, une gamme est réalisée par des dilutions successives d'un pool constitué de quelques microlitres de différentes réactions de retro-transcription. Les niveaux d'expression relatifs de chaque cible sont ainsi déterminés en utilisant les courbes d'efficacité obtenues avec les points de gamme.
Les niveaux d'expression des gènes d'intérêt ont ensuite été normalisés, dans le tissu hépatique par rapport au niveau d'expression du gène de référence 36B4 (dont les amorces spécifiques sont : amorce sens : 5'- CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3' (SEQ ID n°23) et amorce antisens : 5'- GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3' (SEQ ID n°24)). Le facteur d'induction, c'est-à-dire le rapport entre le signal relatif (induit par le composé selon l'invention) et la moyenne des valeurs relatives du groupe contrôle, a ensuite été calculé. Plus ce facteur est faible, plus le composé a un caractère inhibiteur de l'expression génique. Le résultat final est représenté comme moyenne des valeurs d'induction dans chaque groupe expérimental.
Résultats
Les inventeurs ont aussi mis en évidence, sur des monocytes in vitro, que les composés selon l'invention ont des effets anti-inflammatoires. Les résultats présentés sur les figures 9-1 et 9-2 montrent que les composés 2, 21 et 43, à 1 μM, induisent une diminution significative de la sécrétion et de l'expression de MCP1 dans les monocytes. Les résultats présentés sur la figure 9-3 montrent que le composés 21 selon l'invention, à 1 μM, induit une diminution significative de l'expression de MCP1 dans les monocytes humains.
Conclusion
De manière inattendue, les données expérimentales présentées montrent que les composés selon l'invention ont une action anti-inflammatoire dans les monocytes humains stimulés avec du PMA. Exemple 12 : Evaluation in vitro des propriétés anti-inflammatoires des composés selon l'invention dans un modèle de macrophages
Principe Les effets anti-inflammatoires des composés selon l'invention ont été évalués par la mesure de la sécrétion d'interleukine 6 (IL-6) par des macrophages humains prétraités pendant 24 heures avec les composés selon l'invention et stimulés pendant 6 heures avec du LPS (lipopolysaccharide, qui provoque une réponse inflammatoire des cellules). Plus la quantité d'IL-6 sécrétée est diminuée, plus le composé selon l'invention inhibe la réaction inflammatoire.
Protocole
Différenciation des cellules THP- 1 en macrophages.
La lignée de monocytes humains THP1 (provenance ATCC) est cultivée dans du milieu RPMH 640 additionné de 25mM Hepes (Gibco ; 42401 -018), 1 % glutamine
(Gibco ; 25030-24) 1 % pénicilline/streptomycine (Biochrom AG ; A 2213) et 10% sérum de veau fœtal décomplémenté (SVF. Gibco ; 10270-106).
Les cellules sont ensemencées sur des plaques de 24 puits (Primaria BD
Falcon) à la densité de 3,75.105 cellules/puits puis incubées à 37°C et 5% de CO2 pendant 72h en présence de 30 ng/ml de phorbol 12-myhstate 13-acetate
(PMA) afin de les différencier en macrophages.
Traitement
Le milieu de différenciation est aspiré et remplacé par le milieu de traitement (même composition que le milieu de culture mais sans sérum de veau fœtal et avec 1 % d'ultroser (PaII Life Science ; P/N267051 )).
Les composés selon l'invention ont été testés aux doses de 1 et 10μM. Les composés selon l'invention sont dissous dans du diméthyl sulfoxide (DMSO,
Fluka ; 41640). Les cellules sont traitées pendant 24h à 37°C, 5% CO2. Après 24h d'incubation, la réponse inflammatoire est induite par l'ajout de 0.1 μg/ml de lipopolysaccharide (LPS, Sigma ; L4005) pendant 6 heures. L'effet des composés selon l'invention est comparé à l'effet du DMSO seul. Mesure de la sécrétion d'IL-6
Le milieu de traitement est récupéré et la concentration d'IL-6 est mesurée en utilisant la trousse Elisa « Human IL-6 Elisa set » (BD OptEIA ; 555220) selon les recommandations du fabricant. Un anticorps spécifique anti-IL6 est fixé sur une plaque et les surnageants de culture sont distribués. L'IL6 sécrétée par les cellules se fixe alors à l'anticorps qui est à son tour, spécifiquement reconnu par un deuxième d'anticorps couplé à une enzyme peroxydase. La coloration résultant de l'activité enzymatique, après ajout du substrat, est proportionnelle à la quantité d'IL-6 fixée et peut être mesurée par spectrophotométhe. Une gamme est réalisée à partir d'un point de concentration connue et permet de calculer la concentration en IL-6 de chaque échantillon.
Le facteur d'induction, c'est-à-dire le rapport entre le signal induit par le composé selon l'invention et le signal du groupe contrôle, a ensuite été calculé. Plus ce facteur est faible, plus le composé a un caractère inhibiteur de la sécrétion d'IL-6. Le résultat final est représenté comme moyenne des valeurs d'induction de chaque groupe expérimental.
Résultats Les inventeurs ont aussi mis en évidence, sur des macrophages humains in vitro, que les composés selon l'invention ont des effets anti-inflammatoires. Les résultats présentés sur la figure 10 montrent que les composés 2, 13 et 33, à 1 ou 10μM, induisent une diminution significative de la sécrétion d'IL-6 dans les macrophages.
Conclusion
De manière inattendue, les données expérimentales présentées montrent que les composés selon l'invention ont une action anti-inflammatoire dans les macrophages humains stimulés avec du LPS. Exemple 13 : Evaluation in vivo des propriétés neuroprotectices des composés selon l'invention
Principe La réponse inflammatoire apparaît dans de nombreux désordres neurologiques, comme les scléroses multiples, la maladie d'Alzheimer et de Parkinson, les ischémies cérébrales et les accidents traumatiques du cerveau. De plus l'inflammation est l'un des facteurs importants de la neurodégénérescence. Lors d'accidents cérébraux, une des premières réactions des cellules de la glie est de libérer des cytokines et des radicaux libres. La conséquence de cette libération de cytokines et de radicaux libres est une réponse inflammatoire au niveau cérébral qui peut mener à la mort des neurones (Rothwell NJ, 1997). Les propriétés neuroprotectices et/ou anti-inflammatoires du composé 2 ont été évaluées in vivo par mesure du volume de l'infarctus induit au niveau cérébral.
Protocole
Le modèle murin utilisé est le modèle d'ischémie cérébrale induite par occlusion de l'artère moyenne pendant une heure (Deplanques D et al., 2003).
1. Traitements des animaux : 1.1 Animaux et administration des composés
Des souris C57BL6 mâles (sauvages) ont été utilisées pour cette expérience.
Les animaux sont maintenus sous un cycle lumière/obscurité de 12 heures à une température de 20 +/- 3°C. Les animaux sont nourris selon un régime standard comprenant 4% d'acides gras et ont un accès libre à l'eau et à la nourriture. La prise de nourriture et la prise de poids sont enregistrées.
Les animaux sont traités par gavage avec les composés selon l'invention (200 mg/kg/jour) ou le véhicule, une heure puis 24h et 48h après l'induction de l'ischémie de l'artère moyenne cérébrale. 1.2 Induction d'une ischémie-reperfusion par occlusion intraluminale de l'artère moyenne cérébrale :
Les animaux ont été anesthésiés à l'aide d'une injection intra-péritonéale de 300 mg/kg d'hydrate de chloral. Une sonde rectale est mise en place et la température du corps est maintenue à 37 +/- 0,50C. La pression artérielle est mesurée au cours de toute l'expérience.
Sous un microscope chirurgical, la carotide droite est mise à jour à l'aide d'une incision cervicale médiale. L'artère ptérygopalatine a été ligaturée à son origine et une artèriotomie est réalisée dans l'artère carotide externe afin d'y glisser un mono-filament de nylon. Ce filament est alors doucement avancé dans l'artère carotide commune puis dans l'artère carotide interne afin d'obturer l'origine de l'artère cérébrale moyenne. Après une heure, le filament est retiré pour permettre la reperfusion.
2. Mesure du volume de l'infarctus cérébral : 72 heures après la reperfusion, les animaux traités ou non traités avec le composé sont euthanasiés par une overdose de pentobarbital.
Les cerveaux sont rapidement congelés et sectionnés. Les sections sont colorées au violet Cresyl. Les zones non colorées des sections cérébrales ont été considérées comme lésées par l'infarctus. Les aires ont été mesurées et le volume de l'infarctus et des deux hémisphères ont été calculés par la formule suivante (Volume de l'infarctus corrigé = Volume de l'infarctus - (volume de l'hémisphère droit - volume de l'hémisphère gauche)) pour compenser l'œdème cérébral.
Résultats
L'analyse des coupes de cerveaux d'animaux traités révèle une diminution significative du volume de l'infarctus par rapport aux animaux non traités. Lorsque le composé 2 est administré aux animaux une heure après l'ischémie, il est capable de réduire le volume de l'infarctus provoqué par l'ischémie. Les résultats, présentés sur la figure 11 , montrent que le composé 2 possède des propriétés neuroprotectrices et anti-inflammatoires. Conclusion
De manière inattendue, les expériences menées par les inventeurs montrent que les composés selon l'invention ont une action neuroprotectrice dans le modèle d'ischémie-reperfusion.
Conclusion générale
Les inventeurs ont mis en évidence que les composés selon l'invention ont des propriétés hypolipémiantes, en baissant les taux de cholestérol et de triglycérides plasmatiques. De plus, les inventeurs ont mis en évidence que les composés selon l'invention sont des régulateurs de l'expression de gènes codant pour des enzymes fortement impliquées dans le métabolisme des lipides, glucides et de la thermorégulation. Ces résultats, obtenus in vivo, témoignent du potentiel thérapeutique des composés selon l'invention vis-à-vis de pathologies majeures telles que les dyslipidémies. D'autre part, les inventeurs ont mis en évidence le caractère activateur des PPAR dans différents modèles cellulaires se traduisant notamment par des régulations de l'expression de gènes codant pour des enzymes fortement impliquées dans le métabolisme des lipides, glucides et de la thermorégulation ainsi que par une action anti-inflammatoire. Enfin, les inventeurs ont mis en évidence que les composés selon l'invention ont une action neuroprotectrice dans le modèle d'ischémie-reperfusion.
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Claims

REVENDICATIONS
1 - Composés dérivés du 1 ,3-diphénylpropane substitués de formule générale (I) :
Figure imgf000111_0001
(I) dans laquelle :
X1 représente un halogène, un groupement R1 , -SR1 ou -OR1 ;
X2 représente un hydrogène, un halogène, un groupement R2, -SR2 ou -OR2;
X3 représente un halogène, un groupement R3, -SR3 ou -OR3;
X4 représente un hydrogène, un halogène, un groupement R4, -SR4 ou
-OR4;
X5 représente un halogène, un groupement R5, -SR5 ou -OR5; X6 représente un halogène, un groupement R6, -OH, -SH, -SR6 ou -OR6;
X7 représente un halogène, un groupement R7, -SR7 ou -OR7;
X8 représente un groupement R8, -SR8 ou -OR8;
avec : - R1 , R3, R5 et R7, identiques ou différents, choisis parmi un hydrogène, un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle ; lesdits groupements alkyle, phényle et benzyle étant éventuellement halogènes,
- R2, R4 et R6, identiques ou différents, choisis parmi un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle ; lesdits groupements alkyle, phényle et benzyle étant éventuellement halogènes,
- R8 représentant un radical méthylène, ledit radical méthylène étant : - non ramifié ou ramifié par un ou deux groupements alkyle ou alcényle ayant 1 à 4 atomes de carbone, et
- lié à un substituant choisi parmi -COOR12 et -CONR12R13 ; R12 et R13, identiques ou différents, représentant un hydrogène ou un radical alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone,
A représente :
(i) un groupement -CR9R10, R9 représentant un atome d'hydrogène et R10 représentant un groupement hydroxy ou un groupement -OR11 , dans lequel R11 représente un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle ou un groupement benzyle ; lesdits groupements alkyle, phényle ou benzyle étant éventuellement halogènes, ou (ii) un groupement carbonyle (CO),
B représente : (i) un groupement alkyle non substitué et saturé, à deux atomes de carbone (CH2-CH2), ou (ii) un groupement alcène non substitué, à deux atomes de carbone
(CH=CH),
à l'exclusion des composés pour lesquels :
- A représente un groupement carbonyle (C=O), - B représente un alcène non substitué comprenant deux atomes de carbone (CH=CH),
- X6 et X7 représentent des atomes de chlore, et
- X8 correspond à -OCH2COOH ;
leurs stéréoisomères (diastéréoisomères, énantiomères), purs ou en mélange, mélanges racémiques, isomères géométriques, tautomères, sels, hydrates, solvates, formes solides ainsi que leurs mélanges. 2- Composés selon la revendication 1 , caractérisés en ce que X8 représente un groupement -OR8, avec R8 désignant un radical méthylène, ramifié ou non, lié à un substituant -COOR12.
3- Composés selon la revendication 1 ou 2, caractérisés en ce que X8 est choisi parmi les groupements : -OC(CH3)2COOH, -OC(CHS)2COOC(CH3)S, -OCH(CH2CHS)COOC(CHS)S , -OCH(CH2CH3)COOH, -OCH(CHS)COOH, -OCH(CH3)COOC(CHS)3, -OCH((CH2)3CH3)COOC(CH3)3J et
-OCH((CH2)3CH3)COOH.
4- Composés selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisés en ce que X6 et X7 sont identiques et représentent des atomes d'halogène.
5- Composés selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que X6 et X7 sont des atomes de chlore.
6- Composés selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que X6 et X7 sont des atomes de fluor.
7- Composés selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisés en ce que X1 , X2, X4 et X5 sont des atomes d'hydrogène et X3 représente un atome d'halogène ou un groupement R3, -SR3 ou -OR3, avec R3 choisi parmi un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle, éventuellement halogène.
8- Composés selon la revendication 7, caractérisés en ce que X3 est choisi parmi : un atome de brome, un groupement trifluorométhyle, trifluorométhoxy, méthoxy, méthylthio et phényloxy.
9- Composés selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisés en ce que X1 , X3 et X5 sont des atomes d'hydrogène, X2 et X4, identiques ou différents, représentent des atomes d'halogène ou des groupements R1, -SR1 ou -OR1 correspondants, avec R1 choisi parmi un groupement alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle et un groupement benzyle.
10- Composés selon la revendication 9, caractérisés en ce que X2 désigne un groupement trifluorométhyle et X4, un atome de fluor.
11 - Composés selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisés en ce que X1 , X2 et X3 sont des atomes d'hydrogène, X4 est un groupement trifluorométhyle et X5, un atome de fluor.
12- Composés selon l'une des revendications 1 à 11 , caractérisés en ce qu'ils sont choisis parmi :
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthyl- propanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoïque ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropyl]phénoxy]-2- méthyl-propanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthoxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthoxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthylthio)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(méthylthio)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-
2-méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]- 2-méthyl-propanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]- 2-méthylpropanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(phényloxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-(phényloxy)phényl]-3-oxopropényl]phénoxy]- 2-méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[3-fluoro-5-trifluoronnéthylphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[3-fluoro-5-trifluorométhylphényl]-3- oxopropényl-]phénoxy]-2-méthylpropanoïque ; - le 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2-méthy- propanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-bromophényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]- butanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]phénoxy]- butanoïque ;
- le 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]- 2-méthylpropanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-[2,3-difluoro-4-[3-[4-trifluorométhoxyphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-méthylpropanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]phénoxy]-2- hexanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-hexanoïque ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2-fluoro-3-trifluorométhylphényl]-3-oxopropényl]- phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle ; - le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2-fluoro-3-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]- phénoxy]-2-méthylpropanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[2-fluoro-3-trifluorométhylphényl]-3-oxopropyl]- phénoxy]-2-méthylpropanoïque ; - le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluoronnéthylphényl]-3-hydroxy-propyl]phénoxy]- butanoate de tertiobutyle ;
- le 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluoronnéthylphényl]-3-éthoxy-propyl]phénoxy]- butanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-[2,3-dichloro-4-[3-[4-trifluorométhylphényl]-3-éthoxy-propyl]- phénoxy]-butanoïque ;
- le 2-(4-(3-(4-bromophényl)-3-oxoprop-1 -ènyl)-2,3-dichlorophénoxy)- propanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-(4-(3-(4-bromophényl)-3-oxoprop-1 -ènyl)-2,3-dichlorophénoxy)- propanoïque ; - le 2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)prop-1 -ènyl)- phénoxy)butanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluoronnéthyl)phényl)prop-1 -ènyl)- phénoxy)butanoïque ;
- l'acide 2-(2,3-dichloro-4-(3-hydroxy-3-(4-(trifluoronnéthyl)phényl) propyl)- phénoxy)butanoïque ;
- le 2-(4-(3-(benzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3-dichloro- phénoxy)butanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-(4-(3-(benzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3- dichloro-phénoxy)butanoïque ; - le 2-(4-(3-(4-bromobenzyloxy)-3-(4-(trifluoronnéthyl)phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle ;
- l'acide 2-(4-(3-(4-bromobenzyloxy)-3-(4-(trifluoronnéthyl)phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoïque ;
- l'acide 2-(2,3-difluoro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)- phénoxy)-2-méthylpropanoïque ;
- le 2-(4-(3-(4-iodobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-(4-(3-(4-iodobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoïque ;
- le 2-(4-(3-(3,5-dibromobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl)phényl)propyl)-2,3- dichlorophénoxy)butanoate de tertiobutyle ; - l'acide 2-(4-(3-(3,5-dibromobenzyloxy)-3-(4-(trifluorométhyl) phényl)propyl)-2,3-dichlorophénoxy)butanoïque ;
- le (R)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)- phénoxy)propanoate de méthyle ;
- l'acide (R)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)- phénoxy)propanoïque ;
- le (S)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)- phénoxy)propanoate de méthyle ;
- le (S)-2-(2,3-dichloro-4-(3-oxo-3-(4-(trifluorométhoxy)phényl)propyl)- phénoxy)propanoïque.
13- Composés selon l'une des revendications 1 à 12, à titre de médicaments.
14- Composition pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique, au moins un composé tel que défini dans les revendications 1 à 12, éventuellement en association avec un ou plusieurs autres principes actifs thérapeutiques et/ou cosmétiques.
15- Composition pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique, au moins un composé tel que défini dans l'une des revendications 1 à 12 en association avec un ou plusieurs composés sélectionnés dans la liste ci-dessous :
- un anti-diabétique
- l'insuline - une molécule hypolipémiante et/ou hypocholestérolémiante
- un agent anti-hypertenseur ou hypotenseur
- un agent anti-plaquettaire
- un agent anti-obésité - un agent anti-inflammatoire
- un agent anti-oxydant
- un agent utilisé dans le traitement de l'insuffisance cardiaque
- un agent utilisé pour le traitement de l'insuffisance coronaire - un agent anticancéreux
- un anti-asthmatique
- un corticoïde utilisé dans le traitement des pathologies de la peau
- un vasodilatateur et/ou un agent anti-ischémique.
16- Composition pharmaceutique selon la revendication 14 ou 15, pour le traitement des complications associées au syndrome métabolique, de l'insulino- résistance, du diabète, des dyslipidémies, de l'athérosclérose, des maladies cardiovasculaires, de l'ischémie cérébrale, des maladies autoimmunes, de l'obésité, de l'hypertension, des maladies inflammatoires, des pathologies neurodégénératives ou des cancers.
17- Composition pharmaceutique selon la revendication 14 ou 15 pour le traitement des dyslipidémies.
18- Composition pharmaceutique selon la revendication 14 ou 15, pour le traitement du diabète.
19- Composition pharmaceutique selon la revendication 14 ou 15, pour traiter les facteurs de risque cardiovasculaire liés aux dérèglements du métabolisme lipidique et/ou glucidique.
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