NO333660B1 - Fremgangsmate for fremstilling av et meget konsentrert proteinpreparat. - Google Patents
Fremgangsmate for fremstilling av et meget konsentrert proteinpreparat. Download PDFInfo
- Publication number
- NO333660B1 NO333660B1 NO20071432A NO20071432A NO333660B1 NO 333660 B1 NO333660 B1 NO 333660B1 NO 20071432 A NO20071432 A NO 20071432A NO 20071432 A NO20071432 A NO 20071432A NO 333660 B1 NO333660 B1 NO 333660B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- ultrafiltration
- protein preparation
- diafiltration
- antibody
- protein
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 130
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 129
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 108
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 198
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 165
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims abstract description 125
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 53
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 72
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 70
- 239000012465 retentate Substances 0.000 claims description 46
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 30
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 29
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 29
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 29
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000013060 ultrafiltration and diafiltration Methods 0.000 claims description 18
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 11
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 11
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 8
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 claims description 8
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LOFGQZYYARWABM-BYPYZUCNSA-N (2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl chloride Chemical compound ClC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N LOFGQZYYARWABM-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 5
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 claims description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 claims 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 95
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 71
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 37
- 239000000047 product Substances 0.000 description 34
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 33
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- 239000012538 diafiltration buffer Substances 0.000 description 22
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 16
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 15
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 15
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000013461 design Methods 0.000 description 13
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 12
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 12
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 11
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 238000011027 product recovery Methods 0.000 description 10
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 9
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 9
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 9
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 9
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 9
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 9
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 8
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 7
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 7
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 6
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 6
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 6
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 6
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 5
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 230000003134 recirculating effect Effects 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 4
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 4
- 238000011020 pilot scale process Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical group COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 3
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 238000001739 density measurement Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 3
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- RDZTWEVXRGYCFV-UHFFFAOYSA-M sodium 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonate Chemical compound [Na+].OCCN1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 RDZTWEVXRGYCFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000840258 Homo sapiens Immunoglobulin J chain Proteins 0.000 description 2
- 102100029571 Immunoglobulin J chain Human genes 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 2
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- KEUKAQNPUBYCIC-UHFFFAOYSA-N ethaneperoxoic acid;hydrogen peroxide Chemical compound OO.CC(=O)OO KEUKAQNPUBYCIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241001646398 Pseudomonas chlororaphis Species 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 208000024799 Thyroid disease Diseases 0.000 description 1
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- TTZLKXKJIMOHHG-UHFFFAOYSA-M benzyl-decyl-dimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 TTZLKXKJIMOHHG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000012512 bulk drug substance Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011035 continuous diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012527 feed solution Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000013529 heat transfer fluid Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 102000058223 human VEGFA Human genes 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000011016 integrity testing Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- 238000012806 monitoring device Methods 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000014399 negative regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- CMDGQTVYVAKDNA-UHFFFAOYSA-N propane-1,2,3-triol;hydrate Chemical compound O.OCC(O)CO CMDGQTVYVAKDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 238000012154 short term therapy Methods 0.000 description 1
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 208000021510 thyroid gland disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000012529 ultrafiltration/diafiltration (UF/DF) membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig
- C07K16/4291—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig against IgE
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D61/00—Processes of separation using semi-permeable membranes, e.g. dialysis, osmosis or ultrafiltration; Apparatus, accessories or auxiliary operations specially adapted therefor
- B01D61/14—Ultrafiltration; Microfiltration
- B01D61/145—Ultrafiltration
- B01D61/146—Ultrafiltration comprising multiple ultrafiltration steps
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D61/00—Processes of separation using semi-permeable membranes, e.g. dialysis, osmosis or ultrafiltration; Apparatus, accessories or auxiliary operations specially adapted therefor
- B01D61/14—Ultrafiltration; Microfiltration
- B01D61/16—Feed pretreatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D2311/00—Details relating to membrane separation process operations and control
- B01D2311/04—Specific process operations in the feed stream; Feed pretreatment
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D2311/00—Details relating to membrane separation process operations and control
- B01D2311/16—Flow or flux control
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
Abstract
Den foreliggende beskrivelsen tilveiebringer en fremgangsmåte for å konsentrere proteiner inkludert en ultrafiltrerings-, en diafiltrerings- og en andre ultrafiltreringssekvens, ved forhøyede temperaturer, så som over omtrent 30?C. Beskrivelsen inkluderer også en fremgangsmåte for å fremstille meget konsentrerte antistoffsammensetninger, og meget konsentrerte antistoffprodukter.
Description
Fremgangsmåter for å isolere, rense og konsentrere biologiske materialer er kjent og inkluderer for eksempel kromatografi, ultrafiltrering og lyofilisering, se generelt R. Hatti-Kaul et al., "Downstream Processing in Biotechnology," i Basic Technology, kapittel 9, sidene 187-211, 2. utgave, Cambridge University Press (2001). Fremgangsmåter for å lage konsentrerte monoklonale antistoffpreparater for administrering til mennesker er kjent, se for eksempel U.S. patent nr. 6,252,055 som anvender ultrafiltrering og som resirkulerer det resulterende filtratet.
Noen utfordringer assosiert med tilgjengelige antistoffkonsentrasjonsmetoder inkluderer for eksempel lave gjennomstrømninger, lange prosesstider, store membranarealer, mekanisk gjenvinningsutbytte og tap, operatørintensiv intervensjon eller behandling, lave masseoverføringshastigheter, energiineffektivitet og hydrauliske trykkgrenser på konsentrasjonsutstyr. Disse og andre utfordringer kan bidra til en høy total fremstillingskostnad og til slutt høyere kostnader for forbrukere av terapeutiske medikamenter.
WO2004/04204212 omhandler en prosess for konsentrering av makromolekyler ved først å utsette en løsning for ultrafiltreringstrinn og diafiltrering.
US2004/167320 omhandler en metode for å separere molekyler fra en blanding ved tangential gjennomstrømmingsfiltrering (TFF).
Det er et behov for forbedrede prosesser til å fremstille svært konsentrerte proteinformuleringer så som flytende antistoffpreparater og terapeutiske produkter derav. I
Generelt angår den foreliggende beskrivelsen fremgangsmåter for å konsentrere proteiner så som fremgangsmåter for å konsentrere et antistoffpreparat, farmasøytiske formuleringer som inneholder et slikt preparat og deres anvendelse i human terapi eller dyreterapi.
I utforminger i henhold til den foreliggende beskrivelsen tilveiebringes fremgangsmåter til å fremstille svært konsentrerte proteiner så som antistoffpreparater og terapeutiske produkter fremstilt ved fremgangsmåten, så som terapeutiske antistoffprodukter. Følgelig tilveiebringer den foreliggende beskrivelsen en fremgangsmåte for å konsentrere proteiner som omfatter: a) en første ultrafiltrering av et første proteinpreparat for å tilveiebringe et andre proteinpreparat omfattende retentatet fra den første
ultrafiltreringen;
b) en diafiltrering av det andre preparatet for å tilveiebringe et diafiltrert, intermediært proteinpreparat omfattende et retentat fra
diafiltreringen; og
c) en andre ultrafiltrering av det diafiltrerte, intermediære proteinpreparatet for å tilveiebringe et tredje proteinpreparat omfattende et
retentat fra den andre ultrafiltreringen,
der den første ultrafiltreringen, den andre ultrafiltreringen og diafiltreringen blir utført ved forhøyede temperaturer, for eksempel fra omtrent 35°C til omtrent 50°C.
Ytterligere utførelsesformer av den foreliggende oppfinnelse fremgår at patentkr avene.
Kort beskrivelse av tegningene
Figur 1 illustrerer et apparat for å utføre de preparerende prosessene i utforminger i henhold til den foreliggende beskrivelsen. Figurene 2 til og med 17 illustrerer forskjellige observerte eller målte prosessverdier over forskjellige faser eller måter av prosessen, i utforminger i henhold til den foreliggende beskrivelsen. Figurene 18 og 19 illustrerer virkningen av forhøyet temperatur på produktkvalitet, i utforminger i henhold til den foreliggende beskrivelsen. Figurene 20 og 21 illustrerer virkningen av forhøyet temperatur på biobyrdekontroll, i utforminger i henhold til den foreliggende beskrivelsen. Figur 22 illustrerer virkningen av forhøyet temperatur på prosessfluks og prosesstid, i utforminger i henhold til den foreliggende beskrivelsen. Figurene 23 til og med 25 illustrerer forskjellige observerte og målte prosessverdier over forskjellige faser eller måter av den oppskalerte prosessen, i utforminger i henhold til den foreliggende beskrivelsen.
Følgende er anvendt, med mindre noe annet er beskrevet:
"Ultrafiltrering", "ultrafiltrasjon", "ultrafiltrert", "UF" og lignende benevnelser refererer seg for eksempel til å bruke syntetiske semipermeable membraner med egnede fysikalske og kjemiske egenskaper for å diskriminere mellom molekyler i blandingen, primært på basis av molekylstørrelse og fasong og å utføre separasjon av forskjellige molekyler eller utføre konsentrasjon av like molekyler.
"Diafiltrering", "diafiltrasjon", "diafiltrert", "diafiltrerende", "DF" og lignende betegnelser refererer seg for eksempel til bruk av en ultrafiltreringsmembran for å fjerne, erstatte eller senke konsentrasjonen av salter eller oppløsningsmidler fra
oppløsninger eller blandinger som inneholder proteiner, peptider, nukleinsyrer eller andre biomolekyler.
"Transmembrantrykk" eller "TMP" refererer seg til gjennomsnittlig anvendt trykk fra innmating til filtratsiden av membranen beregnet som TMP [bar] = [(Pp + Pr)/2] - Pf hvor Pf er innmatingstrykket, Pr er retentattrykket og Pf er filtrattrykket.
"Tangentiell strømningsfiltrering", "krysstrømfiltrering", "TFF" og lignende betegnelser refererer seg til en filtrasjonsmåte hvori den oppløsning som inneholder det oppløste middelet passerer tangentielt over UF-membranen, salter eller oppløste stoffer med lavere molekylvekt passerer gjennom ved å bruke trykk.
"Antistoff er brukt i den bredeste form og dekker spesifikt intakte monoklonale antistoffer, polyklonale antistoffer, multi spesifikke antistoffer (for eksempel bispesifikke antistoffer) dannet fra minst to intakte antistoffer og antistoffragmenter, så lenge de utviser den ønskede biologiske aktivitet. Et antistoff er et protein dannet av immunsystemet som er i stand til å gjenkjenne og bindes til et spesifikt antigen. Beskrevet i form av sin struktur, er antistoffet et Y-formet protein som består av fire aminosyrekjeder, to tunge og to lette. I en forenklet modell som er tilstrekkelig for denne beskrivelsen, har hvert antistoff primært to regioner: En variabel region og en konstant region. Den variable regionen lokalisert i enden av armene av Y bindes til og interagerer med målantigenet. Denne variable regionen inkluderer en komplementært bestemmende region (CDR) som gjenkjenner og bindes til et spesifikt bindingssete på et spesifikt antigen. Den konstante regionen, lokalisert på halen av Y, er gjenkjent av og interagerer med immunsystemet (Janeway, C, Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5. utgave, Garland Publishing, New York). Et målantigen har generelt tallrike bindingsseter, også kalt epitoper, gjenkjent av CDR'er på et flertall av antistoffer. Hvert antistoff som spesifikt bindes til en forskjellig epitop har en forskjellig struktur. Således kan et antigen ha mer enn ett tilsvarende antistoff.
Den basale 4-kjede antistoffenheten er et heterotetramert glykoprotein sammensatt av to identiske lette (L) kjeder og to identiske tunge (H) kjeder (et IgM-antistoff består av 5 av de basiske heterotetramerenhetene sammen med et ytterligere polypeptid kalt J-kjede og inneholder derfor 10 antigenbindende seter, mens sekrerte IgA-antistoffer kan polymerisere til å danne polyvalente konstruksjoner som omfatter 2-5 av de basiske 4-kjedeenhetene sammen med J-kjeden). I tilfelle av IgG'er er 4-kjedeenheten generelt omtrent 150000 dalton. Hver L-kjede er koblet til en H-kjede ved en kovalent disulfidbinding, mens de to H-kjedene er koblet til hverandre med en eller flere disulfidbindinger avhengig av H-kjedeisotypen. Hver H- og L-kjede har også regelmessig innskudd intrakjededisulfidbroer. Hver H-kjede har ved N-terminus et variabelt domene (Vh) etterfulgt av tre konstante domener (Ch) på hver av a- og y-kjedene og fire Cn-domener for ju- og f-isotyper. Hver L- kjede har ved N-terminus et variabelt domene (Vl) etterfulgt av et konstant domene (Cl) i den andre enden. Vler opplinjert med Vh og Cler opplinjert med det første konstante domenet i den tunge kjeden (ChI). Spesielle aminosyrerester er ment å danne et grensesnitt mellom de variable domene i den lette kjeden og den tunge kjeden. Paring av en Vh og Vlsammen danner et enkelt antigenbindende sete. For struktur og egenskaper til de forskjellige klassene av antistoffer, se for eksempel Basic and Clinical Immunologv . 8. utgave, D. Stites, A. Terr og T. Parslow (red.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, side 71 og kapittel 6. L-kjeden fra enhver vertebratart kan plasseres til en eller to klart atskilte typer, kalt kappa og lambda, basert på aminosyresekvensene i deres konstante domener. Avhengig av aminosyresekvensen til det konstante domenet til deres tunge kjeder (Ch), kan immunglobuliner plasseres i forskjellige klasser eller isotyper. Det er fem klasser av immunglobuliner: IgA, IgD, IgE, IgG og IgM, som har tunge kjeder designert henholdsvis a, å, e, / og ju. y- og «-klassene er ytterligere oppdelt i underklasser på basis av relativt små forskjeller i Cn-sekvens og funksjon, for eksempel uttrykker mennesker de følgende underklassene: IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl og IgA2.
Betegnelsen "variabel" refererer seg til det faktum at visse segmenter av de variable domenene atskilles i stor grad med hensyn på sekvens blant antistoffene. V-domenet medierer antigenbinding og definerer spesifisitet hos et spesielt antistoff for dets spesielle antigen. Variabiliteten er imidlertid ikke likt fordelt over det tilnærmet 110 aminosyrespennet til de variable domenene. I stedet består V-regionene av relativt uvariable strekk som kalles rammeverkregioner (FR'er) på 15-30 aminosyrer atskilt av kortere regioner med ekstrem variabilitet kalt "hypervariable regioner" som er hver 9-12 aminosyrer lange. De variable domenene fra native tunge og lette kjeder omfatter hver fire FR'er som i stor grad har en P-arkkonfigurasjon, koblet med tre hypervariable regioner som danner løkker som sammenkobler, og i noen tilfeller danner del av, P-arkstrukturen. De hypervariable regionene i hver kjede blir holdt sammen i tett nærhet av FR'er og, med de hypervariable regionene fra den andre kjeden, bidrar til dannelse av det antigenbindende setet til antistoffer (se Kabat et al., i Sequences of Proteins of Immunolosical Interest , 5. utgave, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)). De konstante domenene er ikke direkte involvert i binding av et antistoff til et antigen, men utviser forskjellige effektorfunksjoner så som deltakelse av antistoffet i antistoffavhengig cellulær cytotoksitet (ADCC).
Betegnelsen "hypervariabel region" når den brukes heri, refererer seg til aminosyrerester i et antistoff som er ansvarlig for antigenbinding. Den hypervariable regionen omfatter generelt aminosyrerester fra en "komplementaritetsbestemmende region" eller "CDR" (for eksempel rundt Kabat-rester 24-34 (LI), 50-56 (L2) og 89-97 (L3) i VLog rundt Kabat-rester 31-35B
(Hl), 50-65 (H2) og 95-102 (H3) i VH (se Kabat et al, supra) og/eller de rester fra en "hypervariabel løkke" (for eksempel rundt Chothia-rester 26-32 (LI), 50-52 (L2) og 91-96 (L3) i VLog 26-32 (Hl), 52A-55 (H2) og 96-101 (H3) i VH (Chothia og Lesk. J . Mol . Biol . 196: 901-917 (1987)).
Betegnelsen "monoklonalt antistoff som brukt heri, refererer seg til et antistoff fra en populasjon av i alt vesentlig homogene antistoffer, det vil si de individuelle antistoffene som omfatter populasjonen er identiske og/eller bindes den eller de samme epitoper, med unntagelse av mulige varianter som kan oppstå under produksjonen av det monoklonale antistoffet, hvor slike varianter generelt er tilstede i små mengder. Et slikt monoklonalt antistoff inkluderer typisk et antistoff som omfatter en polypeptidsekvens som binder et mål, hvori den målbindende polypeptidsekvensen ble oppnådd ved en prosess som inkluderer seleksjon av en enkelt målbindende polypeptidsekvens fra et flertall av polypeptidsekvenser. For eksempel kan seleksjonsprosessen være seleksjon av en unik klon fra et flertall av kloner så som en samling av hybridomkloner, fagkloner eller rekombinante DNA-kloner. Det skal forstås at den selekterte målbindende sekvensen kan ytterligere forandres, for eksempel for å forbedre affiniteten til målet, for å humanisere den målbindende sekvensen, for å forbedre dens produksjon i cellekultur, for å redusere dens immunogenisitet in vivo, for å skape et multispesifikt antistoff, osv., og at antistoffet som omfatter den forandrede målbindende sekvensen også er et monoklonalt antistoff i henhold til den foreliggende oppfinnelsen. I kontrast til polyklonale antistoffpreparater som typisk inkluderer forskjellige antistoffer rettet mot forskjellige determinanter (epitoper), er hvert monoklonalt antistoff i et monoklonalt antistoffpreparat rettet mot en enkel determinant på et antigen. I tillegg til deres spesifisitet er de monoklonale antistoffpreparatene fordelaktige ved at de typisk er ukontaminert av andre immunglobuliner. Det modifiserende begrepet "monoklonalt" angir egenskapen til antistoffet idet det er blitt oppnådd fra en hovedsakelig homogen populasjon av antistoffer og skal ikke oppfattes som å kreve produksjon av antistoffet ved en spesiell metode. For eksempel kan de monoklonale antistoffene som skal anvendes i henhold til den foreliggende oppfinnelsen fremstilles ved et utvalg av teknikker, inkludert for eksempel hybridommetoden (for eksempel Kohler et al, Nature, 256: 495 (1975); Harlow et al, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2. utgave, 1988); Hammerling et al, i: Monoclonal Antibodies and T- Cell Hybridomas, 563-681,
(Elsevier, N.Y., 1981)), rekombinante DNA-metoder (se for4 eksempel U.S. patent nr. 4,8116,567), fagutstillingsteknologier (se for eksempel Clackson et al, Nature, 352: 624-628 (1991); Marks et al, J. Mol Biol, 222: 581-597 (1991); Sidhu et al, J. Mol. Biol 338(2): 299-310 (2004); Lee etal, J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093
(2004); Fellouse, Proe. Nat. Acad. Sei. USA 101(34): 12467-12472 (2004); og Lee et al, J. Immunol. Methods 284(1-2):119-132 (2004) og teknologier for å produsere humane eller humanlignende antistoffer i dyr som har deler av eller alle av de humane immunglobulinloci eller gener som koder humane immunglobulinsekvenser (se for eksempel WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits, et al, Proe. Nati. Acad. Sei. USA, 90: 2551 (1993); Jakobovits, et al, Nature, 362: 255-258 (1993); Bruggemann, et al, Year in Immuno., 7: 33 (1993); U.S. patent nr. 5,545,806; 5,569,825; 5,591,669 (alle til GenPharm); 5,545,807; WO 1997/17852; U.S. patent r. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; og 5,661,016; Marks, et al, Bio / Technoloev . 10: 779-783 (1992); Lonberg, et al. Nature . 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature . 368: 812-813 (1994); Fishwild, et al. Nature Biotechnolosv . 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology , 14: 826 (1996); og Lonberg og Huszar, Intern . Rev . Immunol . 13: 65-93 (1995).
"Kimære" antistoffer (immunglobuliner) har en del av den tunge og/eller lette kjeden som er identisk med eller homolog til korresponderende sekvenser i antistoffer avledet fra en spesiell art eller som hører til en spesiell antistoffklasse eller underklasse, mens resten av kjeden(e) er identisk med eller homolog til tilsvarende sekvenser i antistoffer avledet fra en annen art eller som hører til en annen antistoffklasse eller underklasse, så vel som fragmenter av slike antistoffer, så lenge de utviser den ønskede biologiske aktivitet (U.S. patent nr. 4,816,567; og Morrison, et al, Proe. Nati. Acad. Sei. USA 81: 6851-6855 (1984)). Humanisert antistoff som brukt heri er et undersett av kimære antistoffer.
"Humaniserte" former av ikke-humane (for eksempel murine) antistoffer, er kimære antistoffer som inneholder minimal sekvens avledet fra ikke-humant immunglobulin. For det meste er humaniserte antistoffer humane immunglobuliner (mottaker- eller akseptorantistoff) hvori hypervariable regionrester til mottakeren er erstattet med hypervariable regionrester fra en ikke-human art (donorantistoff) så som en mus, rotte, kanin eller ikke-human primat som har den ønskede spesifisitet, affinitet og kapasitet. I noen tilfeller er Fv-rammeverksregion (FR) -rester til det humane immunglobulinet erstattet med tilsvarende ikke-humane rester. Ytterligere kan humaniserte antistoffer omfatte rester som ikke er funnet i mottakerantistoffet eller i donorantistoffet. Disse modifikasjonene er gjort for ytterligere å raffinere antistoff/ytelsen slik som bindingsaffinitet. Generelt vil humanisert antistoff omfatte hovedsakelig alle av minst ett, og typisk to, variable domener, hvori alle eller i alt vesentlig alle av de hypervariable løkkene tilsvarer de hos et ikke-humant immunglobulin eller alle eller i alt vesentlig alle av FR-regionene er de til en human immunglobulinsekvens, skjønt FR-regionene kan inkludere en eller flere aminosyresubstitusjoner som forbedrer bindingsaffiniteten. Antallet av disse
aminosyresubstitusjonene i FR er typisk ikke mer enn 6 i H-kjeden og ikke mer enn 3 i L-kjeden. Det humaniserte antistoffet vil eventuelt også omfatte minst en del av en immunglobulinkonstant region (Fc), typisk den til et humant immunglobulin. For
ytterligere detaljer, se Jones, et al, Nature 321: 522-525 (1986); Reichmann, el al, Nature 332: 323-329 (1988); og Presta, Curr. Op. Struct. Biol 2: 593-596 (1992).
"Antistoffragmenter" omfatter den del av et intakt antistoff, fortrinnsvis den antigenbindende eller variable regionen av det intakte antistoffet. Eksempler på antistoffragmenter inkluderer Fab-, Fab'-, F(ab')2- og Fv-fragmenter; dialegemer; lineære antistoffer (se U.S. patent nr. 5,641,870, eksempel 2; Zapata, et al, Protein Ens .. 8(10): 1057-1062 (1995)); enkeltkjedede antistoffmolekyler; og multispesifikke antistoffer dannet fra antistoffragmenter.
Papainfordøyelse av antistoffer produserer to identiske antigenbindende fragmenter, kalt "Fab"-fragmenter og et rest "Fc"-fragment, en designering som reflekterer evnen til lett å krystalliseres. Fab-fragmentet består av hele L-kjeden sammen med det variable regiondomenet til H-kjeden (VH) og det første konstante domenet av en tung kjede (ChI). Hvert Fab-fragment er monovalent med hensyn på antigenbinding, det vil si at det har et enkelt antigenbindende sete. Pepsinbehandling av et antistoff gir et enkelt stort F(ab')2-fragment som grovt tilsvarer to disulfidkoblede Fab-fragmenter som har divalent antigenbindende aktivitet og som fremdeles er i stand til tverrbinding av antigen. Fab'-fragmenter atskiller seg fra Fab-fragmenter ved å ha ytterligere noen få rester på karboksyterminus til ChI-domenet som inkluderer ett eller flere cysteiner fra antistoffhengselsregionen. Fab'-SH er designeringen heri for Fab' hvori cysteinresten(e) i de konstante domenene bærer en fri tiolgruppe. F(ab')2-antistoffragmenter ble opprinnelig produsert som par av Fab'-fragmenter som har hengselscysteinene mellom seg. Andre kjemiske koblinger av antistoffragmenter er også kjent.
Fc-fragmentet omfatter de karboksyterminale delene av begge H-kjeder holdt sammen med disulfider. Effektorfunksjonene til antistoffet blir bestemt av sekvenser i Fc-regionen, hvilken region også er den delen som gjenkjennes av Fc-reseptorer (FcR) funnet på visse typer av cellene.
"Fv" er det minste antistoffragmentet som inneholder et fullstendig antigengjenkjennende og -bindende sete. Dette fragmentet består av en dimer av et tung- og lett kjede variabelt regiondomene i tett, ikke-kovalent assosiering. Fra foldingen av disse to domenene utgår seks hypervariable løkker (3 løkker fra hver av H- og L-kjeden) som bidrar til aminosyrerester for antigenbinding og gir antigenbindende spesifisitet til antistoffet. Imidlertid, til og med et enkelt variabelt domene (eller halvparten av en Fv som omfatter bare tre CDR'er spesifikke for et antigen) har evnen til å gjenkjenne og binde antigen, skjønt ved en lavere affinitet enn hele bindingssetet.
"Enkeltkjede Fv", også forkortet som "sFv" eller "scFv", er antistoffragmenter som omfatter Vh- og VL-antistoffdomenene koblet inn i en enkel polypeptidkjede.
Fortrinnsvis omfatter sFv-polypeptidet ytterligere en polypeptidlinker mellom Vh-og VL-domenene som gjør det mulig for sFv å danne den ønskede strukturen for antigenbinding. For en oversikt over sFv, se Pluckthun i The Pharmacolog<y>of Monoclonal Antibodies , bind 113, Rosenburg og Moore, red., Springer-Verlag, New York. sidene 269-315 (1994).
"Omkring" modifisering, for eksempel mengden av en ingrediens i sammensetningene, konsentrasjon av et aktivt stoff, buffervolumer, diavolumer, pore-størrelse, tilsynelatende molekylær, molekylvekt cut-off, fremgangsmåtetemperatur, fremgangsmåtetid, utbytter, gjennomstrømningshastigheter, trykk, biobyrde og lignende verdier og områder derav, anvendt i fremgangsmåtene i henhold til oppfinnelsen, refererer seg til variasjon i den numeriske mengde som kan opptre, for eksempel gjennom typisk måling og behandling av prosedyrer brukt for å lage konsentrater eller bruke oppløsninger; gjennom innebygde feil i disse prosedyrene; gjennom forskjeller i fremstillingen, kilde eller renhet til de anvendte ingredienser for å fremstille sammensetningene eller utføre metodene; og lignende vurderinger. Betegnelsen "rundt" omfatter også mengder som atskiller seg på grunn av aldring av en sammensetning med en spesiell initialkonsentrasjon eller blanding. Betegnelsen "rundt" eller "omtrent" omfatter også mengder som atskiller seg fra hverandre på grunn av blanding eller prosessering av en sammensetning med en spesiell initialkonsentrasjon eller blanding. Om eller ikke modifisert av betegnelsen "rundt" eller "omtrent" inkluderer kravene ekvivalenter til mengdene.
"Bestå i alt vesentlig av" refererer seg til en prosess for å oppnå en konsentrert proteinsammensetning eller antistoffsammensetning som inkluderer trinnene og ingrediensene opplistet i kravene, pluss andre trinn og ingredienser som ikke materielt påvirker de basale og nye egenskapene til sammensetningen, så som et flertall av trinn eller buffermedia. Ingredienser som materielt påvirker de basale egenskapene til sammensetningen og fremgangsmåten i henhold til den foreliggende oppfinnelsen, gir uønskede egenskaper inkludert for eksempel biobyrde, så som uønsket toksisitet eller irritabilitet assosiert med kontaminanter.
Den ubestemte artikkelen "en" eller "et" og dens korresponderende bestemte artikkel "den" eller "det" som brukt heri, skal bety i det minste én eller en eller flere, med mindre noe annet er angitt.
Den foreliggende beskrivelsen tilveiebringer, i utforminger, de ovenfor nevnte prosesser og konsentrerte antistoffprodukter derav.
I utforminger av den foreliggende beskrivelsen kan de preparative prosessene og produkter derav anvendes til å fremstille svært konsentrert antistoffpreparater og lignende preparater, så som rensing og konsentrering av proteiner eller lignende stoffer fra naturlige eller syntetiske kilder og hvis produkter kan være nyttige for å behandle patologiske tilstander så som astma, kreft, psoriasis, inhibering av angiogenese og lignende patologiske tilstander.
I utforminger av den ovennevnte prosessen for å fremstille svært konsentrerte antistoffsammensetninger i henhold til beskrivelsen, vil det følgende ytterligere eksemplifisere hvordan de skal fremstilles og anvendes i de preparative prosessene og produktene i henhold til beskrivelsen.
I utforminger av den foreliggende beskrivelsen er det tilveiebrakt en fremgangsmåte til å fremstille svært konsentrerte antistoffsammensetninger, for eksempel i henhold til å utføre følgende trinn i den siterte rekkefølge, som omfatter: en første ultrafiltrering av et første antistoffpreparat som har en konsentrasjon på for eksempel fra omtrent 0,1 til omtrent 10 gram pr liter (g/l) for å tilveiebringe et andre antistoffpreparat som retentatet, som har en større antistoffkonsentrasjon på, for eksempel fra omtrent 10 til omtrent 50 gram pr liter;
en diafiltrering av det resulterende andre antistoffpreparatet for å tilveiebringe et diafiltrert mellomproduktantistoffpreparat som retentatet, som har omtrent den samme konsentrasjonen som det resulterende antistoffpreparatretentatet, det vil si diafiltrering for å utføre en bufferutveksling ved konstant volum; og en andre ultrafiltrering av det diafiltrerte mellomproduktantistoffpreparatet for å tilveiebringe et tredje antistoffpreparat som retentatet, som har en større antistoffkonsentrasjon på, for eksempel fra omtrent 150 til omtrent 200 gram pr liter.
Tilvirkningsprosessen i henhold til beskrivelsen kan ytterligere omfatte et eventuelt produktgjenvinningstrinn eller flere trinn, for eksempel, og som beskrevet og illustrert heri.
I utforminger av ovenfor nevnte prosess i henhold til oppfinnelsen kan en eller flere av den første ultrafiltreringen, diafiltreringen og den andre ultrafiltreringen, utføres for eksempel fra omtrent 30°C til omtrent 70°C. I utforminger kan disse trinnene også bli utført ved for eksempel fra omtrent 30°C til omtrent 50°C. I utforminger kan disse trinnene også bli utført ved for eksempel fra omtrent 35°C til omtrent 50°C. I utforminger kan disse trinnene også bli utført ved for eksempel omtrent 45°C, så som fra omtrent 45°C pluss eller minus 5°C. Avhengig av typen av antistoffpreparater, kan for prosesser utført ved temperaturer over omtrent 70°C, preparatet vise tegn på nedbrytning så som denaturering, agglomerering og lignende fenomen. For prosesser utført ved temperaturer under fra omtrent 30 til omtrent 35°C, er gjennomstrømningshastighetene typisk uønsket lav og prosesstidene er uønsket lange og gjør prosessen ved lavere temperaturer mindre attraktiv for effektiv kommersiell produksjon.
I utforminger kan det første antistoffpreparatet ha en antistoffkonsentrasjon på for eksempel fra omtrent 0,1 til omtrent 100 gram pr liter (g/l).
Antistoffkonsentrasjonen er for eksempel en vanlig konsentrasjon som typisk er tilgjengelig fra andre preliminære protein- eller antistoffrensetrinn eller metoder så som sentrifugering, filtrering, kromatografi og lignende prosedyrer. Det resulterende andre antistoffpreparatet som oppnås fra den første ultrafiltreringen kan ha en antistoffkonsentrasjon på for eksempel fra omtrent 10 til omtrent 50 gram pr liter og for eksempel fra omtrent 20 til omtrent 40 gram pr liter, så som 30 gram pr liter. Et område for antistoffkonsentrasjonen av mellomproduktantistoffpreparatet kan for eksempel avhenge av en balanse av faktorer, så som prøvevolum og prøve-fluks som kan oppnås med en spesiell buffer som inneholder det andre antistoffpreparatet. Mellomproduktantistoffpreparatet kan ha en antistoffkonsentrasjon på for eksempel fra omtrent 25 til omtrent 35 gram pr liter og det tredje antistoffpreparatet kan ha en antistoffkonsentrasjon på for eksempel fra omtrent 170 til omtrent 200 gram pr liter. Det tredje antistoffpreparatet, i utforminger, kan ha en antistoffkonsentrasjon på for eksempel fra omtrent 50 til omtrent 250 gram pr liter, så som fra omtrent 100 til omtrent 230 gram pr liter og fra omtrent 170 til omtrent 200 gram pr liter, så som 185 gram pr liter.
Det vil være klart for en fagmann på området, ved å vurdere den foreliggende beskrivelsen, at mellomproduktantistoffpreparatet og det tredje antistoffpreparatet omfatter det samme ultrafiltrerte retentatet med unntagelse av for eksempel forskjeller i antistoffkonsentrasjonen som resulterer fra den første og andre ultrafiltreringskonsentrasjonen og forskjeller i suspensjonsbuffermedia som resulterer fra diafiltrering av bufferutveksling. Det er således liten, hvis noen, sammensetningsforandring så som degradering, av målproteinet eller antistoffproduktet, i utforminger i henhold til den foreliggende oppfinnelsen.
Konvensjonell ultrafiltreringskonsentrasjonsmetoder kan ha generelt større tids- og mindre gjennomkjøringsineffektiviteter idet de har betydelig lengre prosesstider så som fra flere dager til flere uker, prosesserer betydelig mindre volumer eller begge deler. 1 utforminger kan proteinkonsentrasjonsprosessen i henhold til beskrivelsen utføres i for eksempel fra omtrent 1 til 10 timer, fortrinnsvis i fra omtrent 2 til 5 timer og mer fortrinnsvis i omtrent 3 timer. Preferansene favoriserer høyere gjennomstrøm-ningsflyt og mindre membranarealer.
I utforminger kan den første ultrafiltreringen utføres for eksempel i omtrent 35 prosent av den totale prosesseringstiden. Således, for eksempel i en konsentrasjons-og renseprosess i henhold til beskrivelsen med omtrent 3 timers total prosesseringstid, kan den første ultrafiltreringen utføres på omtrent 45 minutter. I utforminger kan den andre ultrafiltreringen utføres for eksempel i omtrent 15 prosent av den totale prosesseringstiden. Således kan for eksempel i en fremgangsmåte i henhold til beskrivelsen med omtrent 3 timers total prosesseringstid den andre ultrafiltreringen utføres i omtrent 15 minutter. Diafiltreringen kan for eksempel utføres i omtrent 50 prosent av den totale prosesseringstiden. Således, for eksempel i en prosess i henhold til beskrivelsen med omtrent 3 timers total prosesseringstid, kan diafiltrering utføres i fra omtrent 90 til omtrent 120 minutter.
I utforminger kan den første ultrafiltreringen og den andre ultrafiltreringen utføres for eksempel med en ultrafiltermembran som har en nominell porestørrelse, eller molekylvekt "cut-off på fra omtrent 5 til omtrent 50 kiloDalton. En annen egnet nominell porestørrelse er for eksempel fra omtrent 10 til omtrent 40 kiloDalton. Enda en annen egnet nominell porestørrelse eller molekylvekt "cut-off er omtrent 30 kiloDalton.
I utforminger kan det første antistoffpreparatet for eksempel inneholde et antistoff som har en tilsynelatende molekylvekt på for eksempel fra omtrent 100 til omtrent 200 kiloDalton. I andre utforminger kan det første antistoffpreparatet inneholde et antistoff som har en tilsynelatende molekylvekt på for eksempel omtrent 150 kiloDalton, så som når antistoffpreparatet omfatter anti-IgE-antistoffer eller IgE, se for eksempel U.S. patent nr. 6,172,213 (Genentech, Inc.).
Andre antistoffer som er egnet for anvendelse i den foreliggende beskrivelsen inkluderer kreftbehandlende antistoffer, se generelt for eksempel PCT/US02/19592; PCT/US01/20118; PCT/US01/25464; PCT/US01/26626; PCT/US02/28859; PCT/US02/41798; PCT/US02/12206; PCT/US03/11148; PCT/US02/12619; og PCT/US02/33050. Enda andre antistoffer som er egnet for anvendelse i den foreliggende beskrivelsen inkluderer et anti-CD20-antistoff og lignende antistoffer inkludert humane, ikke-humane, murine, hybrid og kimære former. Se for eksempel U.S. patent nr. 6,582,959 (VEGF) og U.S. patentsøknad nr. 2002/0122797 Al (humant VEGF).
I utforminger inkluderer antistoffer som er innenfor området av beskrivelsen hybride og rekombinante antistoffer (for eksempel "humaniserte" og "humane" antistoffer) uten hensyn til opprinnelsesart eller immunglobulinklasse eller underklasse, så vel som antistoffragmenter (for eksempel Fab, F(ab')2og Fv). Se U.S. patent nr. 4,816,567; Mage og Lamoyi, i Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, 79-97, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987).
Monoklonale antistoffer kan også anvendes og kan isoleres fra fagantistoffbibliotek ved å bruke teknikkene beskrevet i for eksempel Clackson et al (1991) Nature, 352: 624-628 og Marks, et al. (1991) J. Mol. Biol, 222: 581-597. Monoklonale antistoffer inkluderer "kimære" antistoffer hvori en del av den tunge og/eller lette kjeden er identisk med eller homolog til tilsvarende sekvenser i antistoffer avledet fra en spesiell art eller som tilhører en spesiell antistoffklasse eller underklasse, mens den gjenværende delen av kjeden(e) er identisk med eller homolog til korresponderende sekvenser i antistoffer avledet fra andre arter eller som tilhører andre antistoffklasser eller underklasser, så vel som fragmenter av slike antistoffer, så lenge de utviser den ønskede biologiske aktivitet (U.S. patent nr. 4,816,567; og Morrison, et al. (1984) Proe. Nati. Acad. Sei. USA, 81: 6851-6855). Kimære antistoffer kan inkludere "primatiserte" antistoffer som omfatter variable domene antigenbindende sekvenser avledet fra en ikke-human primat (for eksempel ape fra den gamle verden, ape, osv.) og humane konstante regionsekvenser.
Monoklonale antistoffer er svært spesifikke, idet de er rettet mot et enkelt antigen-sete. Videre, i kontrast til polyklonale antistoffpreparater som inkluderer forskjellige antistoffer rettet mot forskjellige determinanter (epitoper), er hvert monoklonalt antistoff rettet mot en enkelt determinant på antigenet. I tillegg til deres spesifisitet, er de monoklonale antistoffene fordelaktige ved at de kan syntetiseres ukontaminert av andre antistoffer. Således indikerer det modifiserende begrepet "monoklonalt" egenskapen til antistoffet som å være oppnådd fra en slik i alt vesentlig homogen populasjon av antistoffer, det vil si at de individuelle antistoffene som omfatter populasjonen med unntak av mulig naturlig forekommende mutasjoner som kan være tilstede i små mengder og skal ikke forstås som å kreve produksjon av antistoffet ved noen spesiell metode. For eksempel kan de monoklonale antistoffene for anvendelse i beskrivelsen bli fremstilt ved å bruke hybridommetoden, først beskrevet av Kohler & Milstein, Nature, 256: 495 (1975) eller kan fremstilles ved rekombinante DNA-metoder. Andre kjente metoder for antistoffproduksjon er beskrevet, for eksempel i Goding, Monoclonal Antibodies: Principles andPractice, 59-103, Academic Press (1986); Kozbor, J. Immunol, 133: 3001 (1984), Brodeur et al., Monoclonal Antibodiy Production Techniques and Applications, 51-63, Marcel Dekker, Inc., New York (1987).
Forskjellige metoder er blitt anvendt til å produsere monoklonale antistoffer (MAb'er). Hybridomteknologi som refererer seg til en klonet cellelinje som produserer en enkelt type av antistoff, anvendelse av celler fra forskjellige arter inkludert mus (murin), hamstere, rotter og mennesker. En annen fremgangsmåte til å fremstille MAb'er bruker genetisk konstruksjon som inkluderer rekombinante DNA-teknikker. Monoklonale antistoffer fremstilt fra disse teknikkene inkluderer blant andre kimære antistoffer og humaniserte antistoffer. Et kimært antistoff kombinerer DNA-kodende regioner fra mer enn én artstype. For eksempel kan et kimært antistoff avlede den variable regionen fra en mus og den konstante regionen fra et menneske. Et humanisert antistoff kommer hovedsakelig fra et menneske, selv om det inneholder ikke-humane deler. Lik et kimært antistoff, kan et humanisert antistoff inneholde en fullstendig human konstant region. Men ulikt et kimært antistoff, kan den variable regionen delvis være avledet fra et menneske. De ikke-humane syntetiske delene av et humanisert antistoff kommer ofte fra CDR'er i murine antistoffer. I ethvert henseende er disse regionene avgjørende for å tillate antistoffet å gjenkjenne og bindes til et spesifikt antigen.
Som bemerket, spiller murine antistoffer en viktig rolle i antistoffteknologi. Mens de er nyttige for diagnostikk og korttidsterapier, kan ikke murine antistoffer administreres til folk over lang tid uten å øke risikoen for en ødeleggende immunogen respons. Denne responsen, kalt humant anti-mus-antistoff (HAMA), opptrer når et humant immunsystem gjenkjenner det murine antistoffet som fremmed og angriper det. En HAMA-respons kan forårsake toksisk sjokk og til og med død. Kimære og humaniserte antistoffer reduserer sannsynligheten for en HAMA-respons ved å minimalisere de ikke-humane delene av de administrerte antistoffene. Videre har kimære og humaniserte antistoffer den ytterligere fordelen at de aktiverer sekundære humane immunresponser så som antistoffavhengig cellulær cytotoksitet.
Et "intakt" antistoff er et som omfatter en antigenbindende variabel region så vel
som et lettkjede konstant domene (CL) og tungkjede konstante domener CHI, CH2 og CH3. De konstante domenene kan være konstante domener med native sekvenser (for eksempel humant konstant domene med nativ sekvens) eller aminosyresekvens-varianter derav. Det intakte antistoffet kan ha en eller flere "effektorfunksjoner" som refererer seg til de biologiske aktiviteter som kan tillegges Fc-regionen (en nativ sekvens Fc-region eller aminosyresekvensvariant Fc-region) til et antistoff. Eksempler på antistoffeffektorfunksjoner inkluderer Clq-binding; komplement-avhengig cytotoksitet; Fc-reseptorbinding; antistoffavhengig cellemediert cytotoksitet (ADCC); fagocytose; nedregulering av celleoverflatereseptorer (for eksempel B-cellereseptorer, BCR), osv.
Avhengig av aminosyresekvensen til det konstante domenet i deres tunge kjeder, kan intakte antistoffer plasseres i forskjellige "klasser". Det er fem hovedklasser av intakte antistoffer: IgA, IgD, IgE, IgG og IgM og flere av disse kan ytterligere oppdeles i "underklasser" (isotyper), for eksempel IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA og IgA2. De tungkjede konstante domenene som tilsvarer de forskjellige klassene av antistoffer blir kalt henholdsvis or, 8, e, yog / u. Underenhetsstrukturene og de tredimensjonale konfigurasjonene i forskjellige klasser av immunglobuliner er velkjente.
I utforminger konsentrerer den første ultrafiltreringen det første antistoffpreparatet for å tilveiebringe det andre antistoffpreparatet som har en antistoffkonsentrasjon på omtrent 30 gram pr liter og den andre ultrafiltreringen konsentrerer mellomproduktantistoffpreparatet (oppnådd fra diafiltrering) for å tilveiebringe det tredje antistoffpreparatet som har en antistoffkonsentrasjon på for eksempel fra omtrent 170 til
omtrent 200 gram pr liter. Den første ultrafiltreringen og den andre ultrafiltreringen kan utføres med samme ultrafiltermembran og, hvis ønsket, innenfor samme kar
eller prosessirkel, for eksempel for å minimalisere behandling, tap, lekkasje og lignende påvirkninger på utbytte, effektivitet og økonomi. Den første ultrafiltreringen og den andre ultrafiltreringen kan utføres med ethvert egnet ultrafiltreringsapparat eller ultrafiltreringsmembran. Mange egnede ultrafiltrerings-apparater og ultrafiltreringsmembraner som er i stand til tangentiell gjennomstrøm-ningsfiltrerings (TFF) -operasjon for å utføre ultrafiltrering og diafiltrering er kommersielt tilgjengelige, så som fra Millipore, Pall Corp., Sartorius og lignende forhandlere. I utforminger kan en egnet ultrafiltreringsmembran for eksempel være enhver regenerert cellulosekompositt, hvor kompositten har en relativt lav proteinadsorpsjonsprofil sammenlignet med andre tilgjengelige ultrafiltreringsmembraner så som polyetersulfon.
Dialfiltreringsoperasjonen utveksler en første buffersammensetning tilstede i de første og andre antistoffpreparatene for en andre buffer ønsket i det tredje antistoffpreparatet. I utforminger kan den første bufferen omfatte for eksempel en blanding av vandig natriumklorid og en TRIS-buffer og den andre bufferen kan omfatte for eksempel en blanding av vandig histidinklorid og argininklorid. Diafiltreringen kan utføre en bufferutveksling ved konstant volum, konstant konsentrasjon eller begge. I utforminger utfører diafiltreringen en bufferutveksling med konstant volum og konstant konsentrasjon. Diafiltreringen kan utføre en bufferutveksling på for eksempel fra omtrent 5 til omtrent 15 ganger volumene (det vil si diavolumer). Diafiltreringen kan også utføre en bufferutveksling, for eksempel på omtrent 8 ganger volumer (8 diavolumer), det vil si 8 ganger volumet av prøven som inneholder antistoffpreparatet som skal utveksles. For eksempel kan et 10 liters antistoffpreparat diafiltreres med et 5 gangers (diavolumer) eller 50 liters volum av utvekslingsbuffer. Utvekslingsvolumet og preferanser for utvekslingsvolumer består av en balanse av faktorer, for eksempel prosessgjennomkjøringseffektiviteter, produktrenhet, statlige og kunde-pasientaksepteringsstandarder og lignende standarder, og kan avhenge for eksempel av konsentrasjon og type buffer (for eksempel den første bufferen) i det første antistoffpreparatet og lignende vurderinger.
Den første ultrafiltreringen, den andre ultrafiltreringen og diafiltreringen blir fortrinnsvis utført med tangentiell gjennomstrømningsfiltrering (TFF-modus) på tvers av en ultrafiltreringsmembran og ultrafiltreringsmembranen er fortrinnsvis den samme membranen for hvert trinn. Produktutbyttet i den avsluttende oppsamlingen (det vil si det tredje antistoffpreparatet) kan for eksempel være større enn 70 vektprosent, så som fra omtrent 80 til omtrent 100 vektprosent basert på vekten av antistoffer i det første antistoffpreparatet. Utbyttet av det tredje antistoffpreparatet kan være i utforminger større enn 90 vekt%, i utføringer større enn 95 vekt% og i utforminger til og med større enn 98 vekt% basert på vekten av antistoffer i det første antistoffpreparatet.
Den første ultrafiltreringen kan ha en resirkulasjonshastighet på for eksempel fra omtrent 50 til 1000 ml/min og fortrinnsvis fra omtrent 100 til 1000 ml/min. Resirkulasjonshastigheten kan skaleres i henhold til det tilgjengelige membran-arealet, for eksempel membranareal på 5, 20, 200, 1000 kvadratfot og lignende arealer tillater økende høyere resirkulasjonshastigheter. Således kan en egnet skalert resirkulasjonshastighet i utforminger være for eksempel fra omtrent 0,5 l/min/fot<2>til omtrent 5 1/min/fot<2>. Ultrafiltreringen og diafiltreringen kan utføres for eksempel ved transmembrantrykk på fra omtrent 5 til omtrent 50 p.s.i. Ultrafiltreringen og diafiltreringen kan utføres for eksempel ved transmembrantrykk på fra omtrent 10 til omtrent 50 p.s.i. I utforminger i henhold til den foreliggende beskrivelsen er det tilveiebrakt en fremgangsmåte til å fremstille et antistoffkonsentrat for mer fortynnede antistofformuleringer hvor antistoffkonsentratet har en minimal biobyrde, for eksempel på mindre enn eller under en detekterbar grense så som mindre enn omtrent 100 CFU/ml.
Antistoffsammensetninger i henhold til beskrivelsen kan for eksempel være konsentrert monoklonalt antistoffpreparat for administrering til mennesker så som ved en konsentrasjon på større enn eller lik omtrent 100 g/l (mg/ml), så som fra omtrent 120 til omtrent 170 g/l.
Antistoffsammensetningene i henhold til beskrivelsen kan for eksempel være immunglobuliner så som fra gruppen IgA, IgD, IgE, IgG og IgM; underklasser derav; rekombinanter derav; fragmenter derav; og blandinger derav av enhver av de foregående. En foretrukket antistoffsammensetning i henhold til beskrivelsen inkluderer rekombinante humaniserte anti-IgE-antistoffer. Antistoffsammensetningene i henhold til beskrivelsen kan inkludere en buffer. En foretrukket buffer kan for eksempel være en blanding av vandig histidinklorid og argininklorid.
Tilvirkningsprosedyrene i henhold til beskrivelsen blir fortrinnsvis utført i det samme apparatet og uten intervensjon fra en operatør eller med minimal intervensjon fra en operatør, for eksempel som illustrert i figur 1.
Det første antistoffpreparatet kan tilveiebringes eller fremstilles ved å bruke et utvalg av kjemiske, fysikalske, mekaniske eller ikke-mekaniske, eller biokjemiske metoder så som maling, ultrasonikering, homogenisering, enzymatisk fordøyelse, oppløsningsmiddelekstraksjon, sentrifugering, kromatografi og lignende metoder og kombinasjoner derav, se for eksempel den ovennevnte R. Hatti-Kaul et al., "Downstream Processing in Biotechnology," i Basic Biotechnology, kapittel 9. Det tredje antistoffpreparatet kan ytterligere prosesseres, hvis ønskelig, ved for eksempel å bruke nanofiltrering (for å fjerne for eksempel divalente ioner), revers osmose (for å fjerne for eksempel monovalente ioner) og lignende væskerensemetoder. Det tredje antistoffpreparatet i henhold til den foreliggende beskrivelsen kan pakkes, lagres eller brukes direkte. Det tredje antistoffpreparatet kan ytterligere prosesseres, hvis ønskelig, ved å bruke for eksempel ytterligere konsentrasjonstrinn så som tørking, lyofilisering, lyofiliseringsrekonstituering og lignende metoder. Det resulterende konsentrerte tredje antistoff/produktet kan rekonstitueres på et senere tidspunkt hvis ønsket med en egnet væske.
Idet det refereres til figurene, illustrerer figur 1 et apparat i utforminger i henhold til den foreliggende beskrivelsen, for å utføre den tilvirkende prosessen inkludert et ultrafiltrerings-diafiltreringssystem (100) som har en TFF ultrafiltreringsdiafilt-rerings (UF-DF) -enhet (110) som har en UF-DF-membran (115) som er i kommunikasjon med resirkuleringstanken (120) hvor tanken tjener som et hoved-mate- og retentatreservoar. I utforminger kan tanken (120) ha et temperaturkontroll-system som omfatter for eksempel en isolerende kappe (125), et termostat- eller temperaturkontrollert varmeelement (126) slik som et reostatresistivt varmeelement eller et sirkulerende oppvarmet væskesystem som inkluderer en oppvarmings-anordning (ikke vist), en gjennomstrømningsregulator (127) så som en resirkulasjonspumpe og egnet varmeoverføringsfluid så som enten vann, glykoler eller blandinger derav. Alle komponentene i kretsen eller komponenten som bidrar til gjennom-strømningen i kretsen eller prosesseringen så som rør, ventiler, pumper, tanker og lignende komponenter, kan eventuelt isoleres eller eventuelt tilpasses ytre oppvarming for å opprettholde tett kontroll over temperaturspesifikasjoner og for å unngå temperaturvariasjoner i den resirkulerende fluidløkken innenfor og mellom filterkammeret (110) og resirkulasjonstanken (120). I utforminger hvor for eksempel systemet (100) utfører den første ultrafiltreringen eller første ultrafiltrering så som i en "mate-batch"-modus, kan systemet inkludere en eventuell matetank
(128) som er i fluid kommunikasjon med resirkulasjonsmatetanken (120) og kan anvendes til for eksempel å lagre opp, erstatte eller supplere den tømte flytende fasen fra resirkulasjonstanken (120).
En pumpe (130) pumper matevæske fra tanken (120) gjennom UF/DF-enheten (110) og resirkulerer deretter det resulterende retentatet (den ikke filtrerte eller membran-ekskluderte delen av matevæsken) til resirkulasjonstanken (120). En andre tank
(140) holder og eventuelt pumper (ikke vist) en buffer inn i hovedkretsen (110-120 løkke) gjennom konstant volum diafiltrering. For eksempel er tilsetningshastighet og volum av buffer innført i hovedkretsen fortrinnsvis i samme hastighet og volum som filtratet som forlater hovedkretsen gjennom membranen (115). Buffertanken
(140) kan eventuelt isoleres med en kappe (143) og kan inkludere ekvivalenten av det ovenfor nevnte oppvarmingselementet og en resirkulasjonspumpe (ikke vist). En eventuelt inert gasskilde (145) så som nitrogen eller andre komprimerte gasskilder kan anvendes, for eksempel for produktgjenvinning, for å trykksette retentattilbake-strømningen, ekskludere oksygen, for å skylle, for å rense, for membranintegritets-testing og lignende operasjoner. En tredje tank (160) blir brukt for å innsamle og gjenvinne filtratet som forlater enheten (110). Ventiler (150, 170) kan anvendes som egnet for å regulere retningen og eventuelt væskestrømnings-hastigheten i systemet. Alle ventiler og pumper kan aktiveres manuelt ved koordinert datamaskinkontroll, eller begge. En eventuell fremføringstank (190) og utløpsstrøm kan tilveiebringe en hjelpeavløpsskylling, produktgjenvinning eller overvåkningssystem, for eksempel når det utstyres med en eventuell overvåkningsanordning (180) så som et optisk tetthetsmåleinstrument, eventuelle filtre (185) så som et vaktfilter, produktfilter og lignende eventuelle undersystemer. I utforminger kan hovedfluidkretsen (110-120 løkke) eventuelt utstyres med et overvåkningssystem i linjen.
De konsentrerte antistoffpreparatene fremstilt ved fremgangsmåter i henhold til den foreliggende beskrivelsen kan anvendes for human terapeutisk administrering, inkludert immunglobulinprodukter, for enten intramuskulær (IMIG) eller intravenøs (IVIG) administrering. De konsentrerte antistoffpreparatene i henhold til beskrivelsen kan inkludere et stabiliserende middel, for eksempel bufret aminosyresaltoppløsning, enkle sukkere eller lignende stabiliseringsmidler, egnede ioniske gelatorer så som EDTA eller citrationion og kombinasjoner derav, se for eksempel Wang, Y.-C.J. et al., "Parenteral formulations of proteins an peptides: stability and stabilizers," J. Parenteral Sei. Technol, 42, suppl. S3-S26 (1988). Derwent sammendrag av JP01268646A (AN89-359879) rapporterer at søknaden beskriver et injeksjonspreparat av et IgG3monoklonalt antistoff som har en konsentrasjon på fra 0,1 mikrogram/ml til 100 mg/ml. Søknadsgjenstanden beskrevet i disse publikasjonene er ment å være utenfor området til den foreliggende beskrivelsen.
Preparater i henhold til beskrivelsen kan være i alt vesentlig fri for aggregater. Akseptable nivåer av aggregerte kontaminanter ville være mindre enn for eksempel omtrent 5 vekt% og ideelt mindre enn 2 vekt%. Nivåer så lave som 0,2 vekt% kan oppnås, skjønt aggregerte kontaminanter på omtrent 1 vekt% er mer typisk. Preparatutformingene kan også fortrinnsvis være fri for eksipienter som tradisjonelt blir brukt til å stabilisere polyklonale formuleringer, for eksempel glysin og/eller maltose.
Den foreliggende beskrivelsen kan tilveiebringe et monoklonalt antistoffpreparat for administrering til et menneske kjennetegnet ved at antistoffet i preparatet er et rekombinant antistoff og kan være i en konsentrasjon på 100 mg/ml eller større, fortrinnsvis større enn 150 mg/ml. Preparatet er fortrinnsvis i alt vesentlig fritt for ethvert proteinaggregat.
pH-verdien til de farmasøytiske formuleringene i beskrivelsen vil avhenge av administrasjonsruten. For å maksimalisere oppløseligheten av antistoffet i den konsentrerte oppløsningen, bør imidlertid pH i oppløsningen være forskjellig fra pH til det isoelektriske punktet (pl) til antistoffet.
I utforminger i henhold til beskrivelsen kan det monoklonale preparatet vurderes for anvendelse i human terapi. Forskjellige humane lidelser kan behandles så som kreft eller infeksjonssykdommer, for eksempel de nevnt ovenfor, en immundysfunksjon så som T-cellemediert lidelser inkludert alvorlig vaskulitt, revmatoid artritt, systemisk lupus, i tillegg til autoimmune lidelser så som multippel sklerose, transplantat versus vert-sykdom, psoriasis, juvenilt inntredende diabetes, Sjogrens sykdom, tyroid sykdom, myastenia gravis, transplantatavstøtning, inflammatorisk tarmsykdom, astma, IgE-medierte lidelser og lignende lidelser eller tilstander eller kombinasjoner derav.
Beskrivelsen tilveiebringer derfor i utforminger anvendelsen av et konsentrert monoklonalt antistoffpreparat som beskrevet heri til fremstillingen av et legemiddel for behandling av enhver av de ovennevnte lidelser og lignende lidelser. Det er også tilveiebrakt en fremgangsmåte til å behandle et menneske som har enhver slik lidelse, som omfatter å administrere til individet en terapeutisk effektiv mengde av et preparat i henhold til beskrivelsen. Doseringene til et slikt antistoffpreparat vil variere med tilstandene som blir behandlet og mottakeren av behandlingen, men kan for eksempel være i området fra omtrent 50 til omtrent 2000 mg for en voksen pasient, fortrinnsvis fra omtrent 100 til omtrent 1000 mg administrert daglig eller ukentlig over en periode på fra 1 til 30 dager og gjentatt om nødvendig. Dosene kan administreres som enkle eller flere doser.
Prosessbeskrivelse. Formuleringstrinnet utveksler typisk renset bulk legemiddelstoff, for eksempel som resulterer fra ionebyttekromatografi, til den avsluttende eksipientsammensetningen og konsentrasjonen. Det var typisk ingen rensing utført på dette trinnet med unntagelse av fjerning av små molekyler. Vekten ble lagt på høyt utbytte, bufferutveksling og robusthet ved formuleringstrinnet. Under formuleringen via TFF (tangentiell gjennomstrømningsfiltrering) ble den proteinholdige mateoppløsningen pumpet gjennom membransystemet og tilbake til resirkulasjonskaret. TFF-membranen holdt tilbake proteinet (som del av retentatet) mens filtratet (eller permeatet) ble drevet gjennom membranen ved trykk. Trykket kalles transmembrantrykk (TMP) og blir typisk kontrollert ved å bruke en retentattrykkontrollventil. Prosessen ble vanligvis utført i en sekvens av en første ultrafiltrering (konsentrering), diafiltrering (konstant volum bufferutveksling) og en andre ultrafiltrering (ytterligere konsentrering). Antallet diavolumer (volumetriske ekvivalenter) som er nødvendige for å fjerne prosessbufferkomponenter kan lett beregnes eller bestemmes eksperimentelt.
UF/DF-prosess generelt for anti-IgE. pH-verdien i en anionutvekslingsoppsamling fra kromatografi ble justert til en pH på omtrent 6 ved å bruke 0,5 M vandig fosforsyre. pH-justert anionutvekslingsoppsamling ble formulert ved ultrafiltrering/diafiltrering (UF/DF) -prosess i henhold til den foreliggende beskrivelsen ved å bruke en membran som har en nominell molekylær "cut-off på 10000-30000 dalton. Før prosessering ble UF-membranen ekvilibrert med diafiltreringsbuffer (0,02 M histidin, 0,2 M arginin-HCl, pH 6).
Produktet fra en anionisk utveksling (anionisk utvekslingsoppsamling) ble deretter lastet på systemet og ble konsentrert til en mellomproduktkonsentrasjon ved den
første ultrafiltreringen. Oppsamlingen ble deretter diafiltrert (8 X eller diavolumer) til dens formulering (0,02 M histidin, 0,2 M arginin-HCl, pH 6). Oppsamlingen ble deretter konsentrert ved en andre ultrafiltrering til en avsluttende bulkkonsentrasjon på > 170 g/l og gjenvunnet gjennom et 0,22 mikrometer sterilt filter. Hele UF/DF-prosessen ble utført ved et temperaturinnstillingspunkt på omtrent 45°C. Denne temperaturkontrollen ble oppnådd ved å bruke temperaturkontroll av den innkommende anionutvekslingsoppsamlingen, diafiltreringsbufferen og anvendelse av et innkapslet resirkuleringskar for UF/DF-prosessen som illustrert heri.
Etter UF/DF ble den gjenvunne oppsamlingen fortynnet (det vil si kondisjonert) til en bulkkonsentrasjon på omtrent 150 g/l i 0,02 M histidin, 0,2 M arginin-HCl, 0,04% polysorbat-20, pH 6 (avsluttende formulering). Under kondisjonerings-trinnene ble temperaturen til bulken tillatt å returnere til omgivelsestemperatur. Etter kondisjonering ble den formulerte bulken igjen gjenvunnet gjennom et 0,22 mikrometer sterilt filter.
UF/DF-systemet kan regenereres med 0,1 N natriumhydroksid og renses med 1,4% Minneåre<®>. Når systemet ikke er i bruk, kan det lagres i 0,1 N vandig natriumhydroksid. UF/DF-membranene kan lagres i for eksempel en 0,1% Roccal<®>/20% glyserol-vannoppløsning mellom prosedyrene.
Generell uItrafiltrerings-/diafiltreringsprosessprosedyrer
Operative parametere: Matingsgjennomstrømningshastighet på 0,6 l/min/m<2>. Et konstant retentattrykk (for eksempel 10 psig) kontroll ble brukt for rensing og ekvilibrering før anvendelse, mens Cwaii, konstant retentattrykk eller konstant TMP ble brukt for prosessering.
Ekvilibrering før anvendelse: De følgende prepareringer ble utført på rensede Pellicon-2 kassettmembraner før anvendelse for å sikre at membranene var korrekt ekvilibrert.
Prosessanvendelse: Det følgende ble utført på den resulterende initielle anionutvekslingsoppsamlingen (Q-oppsamling) oppnådd fra et foregående separasjonstrinn, for eksempel et Q-sefarosekromatografitrinn: en første ultrafiltrering eller første ultrafiltrering (UF1) til en konsentrasjon fra omtrent 5 g/l til en konsentrasjon for diafiltrering (Cdf);
diafiltrering eller diafiltrering (DF1) med fire (4) diafiltreringsvolumer (DV) med DF-bufferen;
fortsatt diafiltrering (DF2) med fire (4) diafiltreringsvolumer (DV) av DF-buffer;
en andre ultrafiltrering eller andre ultrafiltrering (UF2) til en sluttkonsentrasjon (CFjnai); og
eventuell produktgjenvinning.
De foregående trinnene ble typisk utført med lav dP resirkulering (blanding), for eksempel 15 minutter.
Etter anvendelse opprensking: Den følgende tabulerte sekvensen og betingelser ble brukt for rensing på Pellicon-2 kassettmembranene umiddelbart etter anvendelse.
Definisjoner for operasjonsmåler i TFF.
Enkel passering med åpent filtrat (SPFO). Retentatet og filtratet blir rettet mot drenasje. Filtratventilen åpen.
Total resirkulering med filtrat åpent (TRFO). Retentatet og filtratet er rettet mot resirkulasjonskaret. Filtratventilen åpen.
Mateporsjon ultrafiltrering (FB-UF). Retentatet er rettet mot resirkuleringstanken, filtratet er rettet mot drenering og den innkommende oppsamlingen overført til resirkulasjonstanken.
Porsjonsultrafiltrering (B-UF). Retentatet er rettet mot resirkulasjonstanken og filtratet er rettet mot drenering.
Diafiltrering (DF). Retentatet er rettet mot resirkulasjonstanken, filtratet er rettet mot drenering og diafiltreringsbufferen overføres til resirkulasjonstanken.
dP refererer seg til differensialtrykk.
Produktoverføring. Ultrafiltreringsmembranenheten og resirkulasjonstanken er åpne for oppsamlingstanken. Nitrogenovertrykket er kontrollert. Oppsamlingen blir overført først ved å bruke resirkulasjonspumpen og deretter ved å bruke en manuell peristaltisk pumpe.
Innmatingsoverføring. Den innkommende oppsamlingen blir pumpet inn i resirkulasjonstanken.
Total resirkulasjon med lukket filtrat (TRFC). Retentatet er rettet mot et resirkulasjonskar. Filtratventilen er lukket.
"Q-oppsamling" refererer seg til proteinoppsamlingen som resulterer fra for eksempel et foregående Q-sefarosekromatografitrinn som er blitt kondisjonert med buffer, også referert til som den "kondisjonerte oppsamlingen".
WFI refererer seg til vann for injeksjon.
EKSEMPLER
Eksempel 1
Høy konsentrasjonsformulering av rhuMAb E25. Et pilotskala UF-system ble brukt til å konsentrere/formulere rhuMAb E25 (et rekombinant humant monoklonalt antistoff som målretter IgE, U.S.P. 6,172,213). Et Millipore Pelicon ultrafiltrerings-/diafiltreringssystem ble satt sammen med en 5,7 fot , 10000 dalton regenerert cellulosekomposittmembran. Systemet besto av en membranholder, en Waukeskaw Modell 6 rotasjonssløyfematepumpe, 14" resirkulasjonsrør av 316L rustfritt stål og et resirkulasjonskar. Trykkindikatorer/transmittere (Anderson) ble lokalisert ved innløpet (FEED), utløpet (RETENTATE) og permeatet (FILTRATE) i membranholderen. Gjennomstrømningsmåleinstrumenter (Yokogaawa ADMAG) ble lokalisert i innløpet (FEED) og permeatet (FILTRATE) i membranholderen. En tilbaketrykksregulerende ventil (Mikroseal) var lokalisert ved utløpet av membranholderen for å kontrollere retentattrykket og påvirke det transmembrane trykket (TMP). En 40 liters kappeisolert tank på 316L av rustfritt stål ble brukt som resirkulasjonskar. Denne tanken var tilpasset med en nivåindikator, toppmontert omrører (Lightnin), virvelbryter og bunnventil (NovAseptic). Temperaturkontroll ble oppnådd gjennom anvendelse av temperaturmodulert glykol matet til kappen på tanken.
Under denne kjøringen ble mategjennomstrømningshastigheten satt til en konstant hastighet på 2,85 l/min ((0,046 l/min/m<2>(0,5 l/min/fot<2>)). Under alle preanvendelses- og postanvendelseoperasjoner ble retentattrykkontrollen satt til en konstant på 10 psig. Under ultrafiltrerings- og diafiltreringsoperasjoner brukte systemet et Cwaiikontrollskjema for å kontrollere gjennomstrømningen gjennom membranen, se for eksempel R. van Reis, et al., Constant CwaiiUltrafiltration Process Controll, J. ofMembrane Science, 130 (1997), 123-140.
Før prosessen ble systemlagringsoppløsningen (0,1 N NaOH) skylt inn i en enkelt passering som dreneringsmodus, først med 2 l/fot renset vann (PW) og deretter 1 l/fot2 diafiltreringsbuffer (50 mM histidin/pH 6,0). Etter skyllingene ble systemet ekvilibrert ved å resirkulere 0,046 l/m 9 (0,5 l/fot 9) diafiltreringsbuffer i 10 min. pH-verdien i resirkuleringsoppløsningen ble kontrollert for å bekrefte ekvilibreringen. Nivået i tanken ble deretter redusert til en minimal målbar verdi for å minimalisere fortynningen av den innkommende proteinoppsamlingen. Proteinoppsamlingen som var et resultat fra et foregående Q-sefarosekromatografitrinn ble målt til å være 3,2 g E25/1 og hadde et volum på 43,1 1. Proteinet var i en oppløsning av 25 mM TRIS-buffer og omtrent 200 mM NaCl og pH justert til 6,2. For å begynne kjøringen ble proteinoppsamlingen overført til resirkulasjonskaret. I karet ble oppsamlingen omrørt ved hjelp av en toppmontert rotor og temperaturen ble opprettholdt ved omgivelsestemperatur (20-25°C).
Under prosessen ble oppsamlingen konsentrert i UF1-modus til 50 g E25/1 (omtrent 2,8 1). Ved begynnelsen av diafiltreringen ble temperaturinnstillingspunktet til resirkulasjonskaret økt til 40°C. Økningen i temperatur og kontroll ble påvirket av flytende varm glykol gjennom tankens ytre kappe. Oppsamlingen ble deretter diafiltrert med 8 diavolumer av diafiltreringsbuffer. Diafiltreringen ble utført ved et konstant volum som ble oppnådd ved å tilpasse gjennomstrømningshastigheten til den bufrede oppløsningen som blir overført til resirkulasjonstanken til gjennomstrømningshastigheten til filtratet som blir fjernet fra systemet. Ved avslutning av diafiltreringen ble oppsamlingen ytterligere konsentrert i UF2-modus. Denne fasen ble også utført ved å bruke et forhøyet temperaturinnstillingspunkt på 40°C. Målet for denne avsluttende konsentrasjonen var 110 g/l. Dette ble oppnådd uten behov for å redusere mategjennomstrømningshastigheten. Dernest ble en lavtrykksfallblanding utført hvor matepumpen ble kontrollert for å opprettholde et 5-10 psig trykkfall over matekanalen. En prøve ble tatt fra resirkulasjonstanken og en avsluttende bulkkonsentrasjon på tilnærmet 120 g/l ble målt. Tabell 1 oppsummerer gjennomkjøringen og gjennomstrømningsresultatene i UF1, DF (DF1 + DF2) og UF2.
Figur 2 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for mategjennomstrømningshastigheten (210), tanktemperatur (220), mate dP (230), TMP (240) og filtratgjennomstrømningshastighets (250) -parametere under de forskjellige fasene eller modusene til prosessen inkludert UF1 (10), DF (20) og UF2 (30). Figur 3 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for E25-konsentrasjonen (310), gjennomstrømning (320) og TMP (240). Figur 4 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for trykkfall mot proteinkonsentrasjon observert for UF1 (410) og UF2 (420) ved 37°C.
Proteinoppsamlingen ble gjenvunnet ved hjelp av en serie trinn. Først ble oppsamlingen i resirkulasjonstanken pumpet fra tanken gjennom en Millipac 200, 0,22 mikron steriliseringsgradert filter ved å bruke rotasjonssløyfematepumpen. Dernest ble proteinoppløsningen overført fra rørsystemet og membranenheten med en 5 psig nitrogengassnedblåsning påført på det høyes punktet i retentatlinjen. Den avsluttende fasen var en nedblåsningen av tanken og matelinjen, også ved å bruke 5 psig nitrogengass.
Produktgjenvinningen var ment å være forbedret sammenlignet med eksempel 2 når den ble utført ved omgivelsestemperaturer fordi den forhøyede temperaturen brukt i en eller flere av ultrafiltrerings-, diafiltrerings- eller gjenvinningstrinnene reduserte viskøse virkninger. For eksempel når temperaturkontrollen ble skrudd av under produktgjenvinning, ble systemet langsomt avkjølt under denne operasjonen og forårsaket vanskeligheter for gjenvinning fra membranenheten. Alternativt kan gjenvinning utføres først fra membranholderen og deretter fra resirkulasjonskaret.
For å bestemme massen av tap under gjenvinning, ble 1,74 1 DF-buffer tilsatt systemet og resirkulert i omtrent 5 minutter og gjenvunnet ved å bruke den samme sekvensen som beskrevet ovenfor. Dette volumet ble deretter analysert for proteinkonsentrasjon med andre oppsamlinger. Tabell 2 oppsummerer resultatene. Etter bearbeiding ble membranen regenerert ved å bruke 0,1 N NaOH, 1 l/fot enkeltpasseringsskylling etterfulgt av 0,046 l/m 9 (0,5 l/fot<9>) total resirkulasjon i 30 min. Dette ble etterfulgt av skylling med 0,092 l/m<2>(l l/fot<2>) PW (rent vann). Dette ble fulgt av en total resirkuleri• ng av 300 ppm Minneåre ( Sb-oppløsning i 30 min. Systemet ble igjen skylt med 1 l/fot PW og avslutningsvis resirkulert i 15 min med 0,1 N NaOH og lagret. Den gjenvunne oppsamlingen ble fortynnet til 80 g E25/1 og kondisjonert til den endelige formuleringen av 50 mM histidin/150 mM trehalose/0,02% polysorbat 20/pH 6,0. Produktkvalitet ble vurdert ved størrelseseksklusjonskromatografi (SEC) for både den innkommende Q-oppsamlingen og den avsluttende gjenvunne massen. Disse data er oppsummert i tabell 3.
Komparativt eksempel 2
Høy konsentrasjonsformulering av rhuMAb E25 ved omgivelsestemperatur Eksempel 1 ble utført med følgende unntak. Før prosessen ble systemlagringsløsningen (0,1 N NaOH) skylt i en enkel passering til dreneringsmodus, først med 2 l/fot2 renset vann (PW) og deretter med 1 l/fot2 diafiltreringsbuffer (20 mM histidin/pH 6,0). Etter skyllingene ble systemet ekvilibert ved å resirkulere 0,046 l/m (0,5 l/fot ) diafiltreringsbuffer i 10 minutter. pH i den resirkulerte løsningen ble kontrollert for å bekrefte ekvilibreringen. Nivået i tanken ble deretter redusert til en minimum målbar verdi for å minimalisere fortynningen av den innkommende proteinoppsamlingen.
Proteinoppsamlingen som resulterer fra det foregående Q-sefarosekromatografitrinnet ble målt til å være 3,3 6 E25/1 og hadde et volum på 33,3 1. Proteinet var i en oppløsning av 25 mM TRIS-buffer og omtrent 200 mM NaCl og pH justert til 6,2. For å begynne kjøringen ble proteinoppsamlingen overført til resirkulasjonskaret. I karet ble oppsamlingen rørt via den toppmonterte rotoren og temperaturen ble opprettholdt ved omgivelsestemperatur (20-25°C). Under prosessen ble oppsamlingen konsentrert ned i UF1 -modus til 50 g E25/1 (omtrent 2,2 1). Oppsamlingen ble deretter diafiltrert med 8 diavolumer av diafiltreringsbuffer. Diafiltreringen ble utført ved et konstant volum, hvor volumet ble oppnådd ved å tilpasse strømningshastigheten av bufferen som blir overført til resirkulasjonstanken til gjennomstrømningshastigheten til filtratet som blir fjernet fra systemet. Diafiltreringen ble også utført ved omgivelsestemperatur. Ved avslutningen av diafiltreringen ble oppsamlingen ytterligere konsentrert i UF2-modus. Målet for denne endelige konsentrasjonen var 110 g/l. På grunn av et høyt trykkfall over matekanalen, ble imidlertid ikke denne konsentrasjonen oppnådd. I et forsøk på å oppnå denne konsentrasjonen ble matestrømningshastigheten redusert til 1,5 l/min ved en bulkkonsentrasjon på omtrent 80 g E25/1 fordi trykkfallet over matekanalen hadde nådd 50 psig. UF2 ble fortsatt inntil et høyt trykkfall på 50 psig igjen ble nådd og prosessen ble stoppet. Dernest ble en lav trykkfallblanding forsøkt hvor matepumpen ble brukt til å opprettholde et 5 psig trykkfall over matekanalen. Igjen gjorde den viskøse naturen til proteinløsningen dette vanskelig å oppnå siden rotasjonsløkkepumpen nådde overskuddstrykk. En prøve ble trukket fra resirkulasjonstanken og en avsluttende bulkkonsentrasjon på tilnærmet 104 g/l ble målt. Tabell 4 oppsummerer gjennomkjøringen og gjennomstrømningen målt under UF1-, DF- (DF1 + DF2) og UF-fasene.
Figur 5 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for mategjennomstrømningshastigheten (210), tanktemperatur (220), mate dP (230), TMP (240) og filtrasjonsstrømningshastighet (250) -parametere under de forskjellige fasene i prosessen inkludert UF1 (10), DF (20) og UF2 (30). Figur 6 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for E25-konsentrasjonen (310), strømning (320) og TMP (240). Figur 7 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for trykkfall mot proteinkonsentrasjonen observert for UF1 (410) og UF2 (420) ved 24°C.
Proteinoppsamlingen ble gjenvunnet i trinn. Først ble oppsamlingen i resirkulasjonstanken pumpet fra tanken gjennom et Millipac 200, 0,22 mikron steriliserende grad filter ved å bruke rotasjonsløkkematepumpen. Dernest ble proteinoppløsningen forskjøvet fra rørene og membranenheten med en 5 psig nitrogengassnedblåsing anvendt på det høyeste punktet på retentatlinjen. Produktgjenvinningen fra dette var svært dårlig på grunn av den viskøse naturen til løsningen. Den avsluttende fasen var en blåsing ned tanken og matelinjen, også ved å bruke 5 psig nitrogengass.
For å bestemme massetapet under gjenvinning ble 1,85 1 DF-buffer tilsatt systemet og resirkulert i omtrent 5 minutter og gjenvunnet ved å bruke sekvensen i eksempel 1. Dette volumet ble deretter analysert for proteinkonsentrasjon med de andre oppsamlingene. Tabell 5 oppsummerer resultatene.
Etter prosessen ble membranen regenerert ved å bruke 0,1 N NaOH, 1 l/fot enkel passeringsskylling etterfulgt av 0,046 l/m<2>(0,5 l/fot<2>) total resirkulering i 30 min. Dette ble etterfulgt av 1 l/for PW-skylling. Dette ble etterfulgt av en total resirkulering av 300 ppm Minncare<®->oppløsning i 30 min. Systemet ble igjen skylt med 0,092 l/m (1 l/fot) PW og avslutningsvis resirkulert i 15 min med 0,1 N NaOH og lagret. Den gjenvunne oppsamlingen ble fortynnet til 80 g E25/1 og kondisjonert inn i den avsluttende formuleringen med 20 mM histidin/250 mM sukrose/0,02% polysorbat 20/pH 6,09. Produktkvalitet ble vurdert ved størrelseseksklusjonskromatografi (SEC) for både den innkommende Q-oppsamlingen og den avsluttende gjenvunnede bulken. Disse data er oppsummert i tabell 6.
Eksempel 3
Høy konsentrasjonsformulering av rhuMAb E26 med initiell mateporsjonsmodus
Eksempel 1 ble gjentatt med følgende unntak. Konsentrat/formel var rhuMAb E26 (et rekombinant humant monoklonalt antistoff som målretter IgE). Produktene fra dette eksempelet ble brukt i toksikologivurderinger. Millipore Pelicon ultrafiltrerings-/diafiltreringssystemet ble montert med en 11,4 fot2 30000 dalton regenerert cellulosekomposittmembran. Matestrømningshastigheten ble satt til en konstant hastighet på 5,0 l/min (0,44 l/min/fot• y). Under ultrafiltreringen og diafiltreringsoperasjoner ble retentattrykket opprettholdt på mellom 6-8 psig. Proteinoppsamlingen som resulterte fra det foregående Q-sefarosekromatografitrmnet ble målt til å være 6,7 g E26/1 og hadde et volum på 59,3 1.
Fordi den innkommende oppsamlingen var større enn resirkulasjonskaret, begynte UFl-prosessen i mateporsjonsmodus. I denne modusen ble Q-oppsamlingen tilsatt til resirkulasjonskaret med tilnærmingsvis samme hastighet som filtratet som passerer gjennom TFF-membranen for å dreneres. Etter at den gjenværende Q-oppsamlingen var overført til resirkulasjonskaret, fortsatte UF1 -prosessen i porsjonsmodus. Under UF1 ble oppsamlingen konsentrert til 50 g E26/1 (omtrent 7,9 1). Ved begynnelsen av diafiltreringen ble temperaturinnstillingspunktet i resirkulasjonskaret økt til 40°C. Økningen i temperatur og kontroll ble påvirket ved å sende varm glykol gjennom tankens ytre kappe. Oppsamlingen ble deretter diafiltrert med 8 diavolumer av diafiltreringsbuffer. Diafiltreringen ble utført ved et konstant volum som ble oppnådd ved å tilpasse strømningshastigheten til bufferen som ble overført til resirkulasjonstanken til strømningshastigheten av filtratet som ble fjernet av systemet. Ved avslutning av diafiltreringen ble oppsamlingen ytterligere konsentrert i UF2-modus til en endelig konsentrasjon på 109 g E26/1 (3,6 1). Denne fasen ble også utført ved å bruke et forhøyet temperaturinnstillingspunkt på 40°C. Dernest ble en lavtrykks trykkfallblanding utført hvor matepumpen ble kontrollert for å opprettholde et 5-10 psig trykkfall over matekanalen.
Tabell 7 oppsummerer gjennomkjøringen og flytresultatene til UF1, DF (DF1 + DF2) og UF2.
Figur 8 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for innmatingsstrømningshastigheten (210), tanktemperaturen (220), mate dP (230), TMP (240) og filtratstrømningshastigheten (250). Figur 9 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for E26-konsentrasjonen (910), flyt (920) og TMP (940). Figur 10 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for trykkfall versus proteinkonsentrasjon observert for UF1 (1010) og UF2 (1020).
Rett før produktgjenvinning ble en 10 ml prøve analysert for påvisning og titrering av biobyrde. En typisk vrakingsgrense er 1000 kolonidannende enheter (CFU) pr ml. Resultatene av denne testen var 1,8 CFU/ml, en egnet verdi på dette trinnet og godt under vrakingsgrensen. For å bestemme massetapet under gjenvinning ble 908,1 ml DF-buffer tilsatt systemet og resirkulert i omtrent 5 minutter og gjenvunnet ved å bruke den samme sekvensen som beskrevet ovenfor. Dette volumet ble deretter analysert for proteinkonsentrasjon med de andre oppsamlingene. Tabell 8 oppsummerer resultatene.
Den gjenvunne oppsamlingen ble fortynnet til 80 g E26/1 og kondisjonert inn i den endelige formuleringen av 50 mM histidin/150 mM trehalose/0,02% polysorbat 20/pH 6,0. Produktkvalitet ble vurdert ved størrelseseksklusjonskromatografi (SEC) for den innkommende Q-oppsamlingen, retentatoppsamlingen etter UF1, retentatoppsamlingen etter DF og avsluttende gjenvunnet bulk. Disse data er oppsummert i tabell 9.
Eksempel 4
Høy konsentrasjonsformulering av rhuMAb E26 for toksikologievaluering - sammenligning av 10 kD og 30 kD
Eksempel 3 ble gjentatt med følgende unntak. To pilotskala UF-systemer ble brukt for å konsentrere/formulere rhuMAb E26. To Millipore Pelicon ultrafiltrerings-/diafiltreringssystemer ble montert med en l,059m2(l 1,4 ft<2>), regenerert cellulosekomposittmembran, én med 10000 dalton porestørrelse og den andre med en 30000 dalton porestørrelse. Retentattrykkene ble opprettholdt på omtrent 6-9 psig.
10 kD- prosess
Proteinoppsamlingen som resulterte fra de foregående Q-sefarosekromatografitrinnene ble målt til å være 5,85 g E26/1 og hadde et volum på 62,4 1. Under UF1 ble oppsamlingen konsentrert til 50 g E26/1 (omtrent 7,3 1). Etter avslutning av diafiltreringen ble oppsamlingen ytterligere konsentrert i UF2-modus til en avsluttende konsentrasjon på 107,5 g E26/1 (3,4 1). Tabell 10 oppsummerer
gjennomkjøringen og flytresultatene til UFl, DF og UF2.
For å bestemme massetapet under gjenvinning, ble 987 ml DF-buffer tilsatt systemet og resirkulert i omtrent 5 minutter og gjenvunnet ved å bruke den samme sekvensen som beskrevet ovenfor. Dette volumet ble deretter analysert for proteinkonsentrasjon med de andre oppsamlingene. Tabell 11 oppsummerer resultatene.
Figur 11 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for innmatingsstrømningshastigheten (210), tanktemperaturen (220), mate dP (230), TMP (240) og filtrasjonsstrømningshastigheten (250) over de forskjellige fasene eller modusene til prosessen inkludert UF1 (10), DF (20), UF2 (30) og lav dP (40) for 10 kD-prosessen. Figur 12 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for E26-konsentrasjonen (1210), flyt (1220) og TMP (1240) over de forskjellige fasene eller modusene til prosessen inkludert UF1 (10), DF (20), UF2 (30) og lav dP (40) for 10 kD-prosessen. Figur 13 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for trykktapet mot proteinkonsentrasjon observert for UF1 (1310) og UF2 (1320) for 10 kD-prosessen.
30 kD- prosess
Proteinoppsamlingen som resulterer fra det foregående Q-sefarosekromatografitrinnet ble målt til å være 5,85 g E26/1 og hadde et volum på 64,5 1. Under UF1 ble den initielle oppsamlingen konsentrert til 50 g E26/1 (omtrent 7,5 1). Ved avslutningen av diafiltreringen ble oppsamlingen ytterligere konsentrert i UF2-modus til en avsluttende konsentrasjon på 117,5 g E26/1 (3,2 1). Tabell 12 oppsummerer gjennomkjøringen og flytresultatene til UF1, DF og UF2.
For å bestemme massetapet under gjenvinning, ble 918 ml DF-buffer tilsatt systemet og resirkulert i omtrent 5 minutter og gjenvunnet ved å bruke den samme sekvensen som beskrevet ovenfor. Den gjenvunne oppsamlingen ble fortynnet til 80 g E26/1 og kondisjonert inn i den endelige formuleringen av 50 mM histidin/150 mM trehalose/0,02% polysorbat 20/pH 6,0. Tabell 13 oppsummerer resultatene.
Figur 14 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for matestrømningshastigheten (210), tanktemperaturen (220), mate dP (230), TMP
(240) og filtratstrømningshastigheten (250) over de forskjellige fasene eller modusene av prosessen inkludert UF1 (10), DF (20), UF2 (30) og lav dP (40) for 30 kD-prosessen.
Figur 15 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for E26-konsentrasjonen (1510), flyt (1520) og TMP (1540) over de forskjellige fasene eller modusene av prosessen inkludert UF1 (10), DF (20), UF2 (30) og lav dP (40) for 30 kD-prosessen.
Figur 16 viser de observerte eller målte prosessverdiene over tid for trykkfall mot proteinkonsentrasjon observert for UF1 (1610) og UF2 (1620) for 30 kD-prosessen.
Eksempel 5
Flytende rhuMAb E25-oppskalering
Eksempel 1 ble gjentatt med følgende unntak. En produksjonsskala UF-system ble brukt for å konsentrere/formulere en flytende rhuMAb E25 (et rekombinant humant monoklonalt antistoff som målretter IgE). Produktet kan anvendes i forsøk med terapeutiske applikasjoner og humane bioekvivalenter. Millipore Pelicon ultrafiltrerings-/diafiltreringssystemer ble montert med en 20,996 m 9 (226 ft<9>) regenerert cellulosekomposittmembran med en porestørrelse på 30000 dalton. Hvert system besto av en membranholder, en Viking S3S rotasjonsløkkematepumpe, VA" resirkulasjonsrørsystem av 316L rustfritt stål og et 250 1 resirkulasjonskar.
En 250 liters kappeinnhyllet tank av 316L rustfritt stål ble brukt som resirkulasjonskar. Temperaturkontroll for denne tanken ble oppnådd med en temperaturmodulert glykol matet til tankens kappe. Temperaturen til glykolmatingen til tankkappen ble hevet eller senket ved å bruke enten henholdsvis en dampmatet varmeutveksler eller en kald glykoltilførsel.
For denne kjøringen ble matestrømningshastigheten satt til en konstant hastighet på 114 l/min (0,046 l/min/m2 (0,5 1/min/ft<2>)). Diafiltreringsbufferen (20 mM histidin/200 mM argininklorid/pH 6,0) ble fremstilt i en atskilt tank. Temperaturen til denne bufferen ble satt til 45°C før prosessen. Dette gjorde det mulig med nøyaktig temperaturkontroll gjennom prosessen.
Før bearbeiding ble systemlagringsoppløsningen (0,1 N NaOH) skylt inn i en enkelt passering til dreneringsmodus først med 0,093 l/m 9 (1 1/ft9) vann for injeksjon (WFI) og deretter 0,093 l/m<2>(1 1/ft2) diafiltreringsbuffer. Etter skyllingene ble systemet ekvilibrert ved å resirkulere 0,046 l/m 9 (0,5 1/ft<9>) diafiltreringsbuffer i 10 min. pH i den resirkulerte oppløsningen ble kontrollert for å bekrefte ekvilibreringen.
Proteinoppsamlingen som resulterte fra det foregående Q-sefarosekromatografitrinnet ble målt til å være 5,2562 g E25/1 og hadde et volum på 1141 1. Proteinet var i en oppløsning av 25 mM TRIS-buffer og omtrent 200 mM NaCl og pH ble justert til 6,2. Rett før kjøringen ble temperaturinnstillingspunktet i denne oppsamlingen satt til 45°C. For å starte kjøringen, ble proteinoppsamlingen overført til resirkulasjonskaret gjennom et 0,22 mikron steriliseringsgradfilter til et nivå på omtrent 200 1 i tanken. I tanken ble oppsamlingen rørt via en toppmontert rotor og temperaturen ble opprettholdt på omtrent 40-50°C. Fordi den innkommende oppsamlingen var større enn resirkulasjonskaret, begynte UF1 -prosessen i mateporsjonsmodus. I denne modusen ble Q-oppsamlingen tilsatt ved resirkulasjonskaret ved omtrent den samme hastigheten som filtratet som passerer gjennom TFF-membranen til drenering. Etter at den gjenværende Q-oppsamlingen ble overført til resirkulasjonskaret, ble UF2-prosessen fortsatt i porsjonsmodus. Under UF1-modusen ble oppsamlingen konsentrert til omtrent 30 g E25/1 (omtrent 200 1). Oppsamlingen ble deretter diafiltrert med omtrent 8 diavolumer av diafiltreringsbuffer. Under diafiltreringen ble temperaturen opprettholdt mellom 40°C og 50°C. Diafiltreringen ble utført ved et konstant volum som ble oppnådd ved å tilpasse gjennomstrømningshastigheten til bufferen som er overført til resirkulasjonstanken til strømningshastigheten av filtratet som blir fjernet fra systemet. Ved avslutning av diafiltreringen ble oppsamlingen ytterligere konsentrert i UF2-modus til et endelig konsentrasjonsinnstillingspunkt på >170 g E25/1 (35 1). Denne UF2-modusfasen ble også utført ved et forhøyet temperaturinnstillingspunkt på 45°C +/- 5°C. Dernest ble en lavtrykksfallblanding utført hvor matepumpen ble kontrollert for å opprettholde et 5-10 psig trykkfall over matekanalen. En prøve ble trukket og et specskann ble utført for å bekrefte konsentrasjonen før gjenvinning. Konsentrasjonen av denne prøven var 219 g E25/1. Tabell 14 oppsummerer gjennomkjøringen og flyten målt under UF1-, DF- (DF1 + DF2) og UF2-fasene.
Rett før produktgjenvinning ble en 30 ml prøve trukket og underkastet deteksjon og titer for biobyrde. Resultatene var <0,13 CFU/ml. Proteinoppsamlingen ble gjenvunnet gjennom en serie med trinn. Først ble produktet forskjøvet fra membranen i en enkel passeringsmodus ved å bruke 5 1 DF-buffer tilsatt retentatlinjen. Produktet ble filtrert inn i en gjenvinningstank gjennom en 0,687 m (7,4 ft<2>), 0,22 mikron steriliseringsgrad vaktfilter etterfulgt av en 0,186 m<2>(2 ft<2>), 0,22 mikron steriliseringsgrad avsluttende filter. Oppsamlingen i resirkulasjonstanken ble deretter pumpet fra tanken ved å bruke rotasjonsløkkematepumpen. Dernest ble restproteinoppløsningen forskjøvet fra tank- og matelinje med en 5 psig nitrogengassnedblåsning. Den endelige fasen var en nedblåsning av membranenheten som nå inneholdt det meste av DF-bufferen fra den initielle produktforskyvningen. Denne fasen brukte også 5 psig nitrogengass anvendt på det høyeste punktet i retentatlinjen. Den gjenvunne oppsamlingen ble først fortynnet til omtrent 153 g E25/1 ved å bruke DF-buffer. Avslutningsvis ble oppsamlingen behandlet til den endelige formuleringen av 20 mM histidin/200 mM arginin-HCl/0,04% polysorbat 20/pH 6,0. Volumene til den gjenvunne oppsamlingen, fortynnede oppsamlingen og bearbeidede oppsamlingen (Q-oppsamlingen) ble deretter analysert for proteinkonsentrasjon. Tabell 15 oppsummerer resultatene.
Figur 17 viser strømningshastighet (210), tanktemperatur (220), mate dP (230), TMP (240) og filtratstrømningshastighet (250) -parametere under de forskjellige fasene eller modus av prosessen inkludert UF1 (10), DF1 (20), DF2 (25), UF2 (30) og lav dP (50).
Eksempel 6
Flytende rhuMAb E25-preparat
Eksempel 5 ble gjentatt med følgende unntak. Et produksjonsskala UF-system ble brukt til å konsentrere/formulere flytende rhuMAb E25 (E25, et rekombinant humant monoklonalt antistoff som målretter IgE). Millipore Pelicon ultrafiltrerings-/diafiltreringssystemer ble montert med en 20,996 m (226 ft ) regenerert cellulosekomposittmembran med en porestørrelse på 30000 dalton. Hvert system besto av en membranholder, en Viking S3S rotasjonsløkkematepumpe, I/2" resirkulasjonsrørsystem av 316L rustfritt stål og et 250 1 resirkulasjonskar. En 250 liters kappetank av 316L rustfritt stål ble brukt som resirkulasjonskar. Matestrømhastigheten ble satt til en konstant hastighet på 114 l/min (0,046 l/min/m (0,5 1/min/ft<2>)). Under alle forbruks- og etterbruksoperasjoner ble retentattrykkontrollen satt til en konstant på 10 psig. Under ultrafiltrerings- og diafiltreringsoperasjoner brukte systemet Cwaiikontrollskjemaet for å kontrollere flyten gjennom membranen. Diafiltreringsbuffer (20 mM histidin/200 mM argininklorid/pH 6,0) ble fremstilt i en separat tank. Temperaturen til denne bufferen ble satt til 45°C før prosessen. Dette gjorde nøyaktig temperaturkontroll mulig gjennom hele prosessen. Proteinoppsamlingen som resulterte fra det foregående Q-sefarosekromatografi-trinnet ble målt til å være 5,5438 g E25/1 og hadde et volum på 1082 1. Proteinet var i en oppløsning av 25 mM TRIS-buffer og omtrent 200 mM NaCl og pH justert til 6,2. Like før kjøringen ble temperaturinnstillingspunktet i denne oppsamlingen satt til 45°C. For å begynne kjøringen ble proteinoppsamlingen overført til resirkulasjonskaret gjennom et 0,22 mikron steriliseringsgradfilter til et nivå på omtrent 200 1 i tanken. I karet ble oppsamlingen rørt ved hjelp av en toppmontert rotor og temperaturen ble opprettholdt ved omgivelsestemperatur (40-50°C). Fordi den innkommende oppsamlingen var større enn resirkulasjonskaret, begynte UF1-prosessen i mate porsjonsmodus. I denne modusen ble Q-oppsamlingen tilsatt til resirkulasjonskaret med tilnærmet den samme hastigheten som filtratet som passerer gjennom TFF-membranen til drenering. Etter at den gjenværende Q-oppsamlingen var overført til resirkulasjonskaret, fortsatte UFl-prosessen i porsjonsmodus. Under UF1 ble oppsamlingen konsentrert til omtrent 30 g E25/1 (omtrent 200 1). Oppsamlingen ble deretter diafiltrert med 8 diavolumer av diafiltreringsbuffer. Under diafiltrering ble temperaturen opprettholdt på mellom 40 og 50°C. Diafiltreringen ble utført ved konstant volum som ble oppnådd ved å tilpasse strømningshastigheten til bufferen som ble overført inn i resirkulasjonstanken til strømningshastigheten til filtratet som ble fjernet fra systemet. Ved avslutning av diafiltreringen ble oppsamlingen ytterligere konsentrert i UF2-modus til et endelig konsentrasjonsinnstillingspunkt på større enn 170 g E25/1 (35 1). Denne fasen ble også utført et forhøyet temperaturinnstillingspunkt på 45°C +/- 5°C. Dernest ble en lavtrykksfallblanding utført hvor matepumpen ble kontrollert til å opprettholde et 5-10 psig trykkfall over matekanalen. En prøve ble trukket og en spekskann ble utført for å kontrollere konsentrasjonen før gjenvinning. Konsentrasjonen av denne prøven var 191 g E25/L og oppsamlingsvolumet var 31,9 1. En kurve med prosess-parameterne over tid var sammenlignbar med de observert og oppsummert for den ovennevnte figur 17.
Like før produktgjenvinning ble en 30 ml prøve trukket og analysert for titer på biobyrde. Resultatene av denne testen var under deteksjonsgrensen (<0,13 CFU/ml).
Proteinoppsamlingen ble gjenvunnet gjennom en serie med trinn. Først ble
produktet forskjøvet fra membranen i en enkel passeringsmodus ved å bruke 5 1 DF-buffer tilsatt retentatlinjen. Produktet ble filtrert inn i en gjenvinningstank gjennom en 0,687 m 9 (7,4 ft9 ), 0,22 mikron steriliserende grad filter etterfulgt av et 0,185 m<9>(2 ft<2>), 0,22 mikron steriliseringsgrad avsluttende filter. Oppsamlingen i resirkulasjonstanken ble deretter pumpet fra tanken ved å bruke rotasjonsløkkematepumpen. Dernest ble restproteinoppløsningen forskjøvet fra tanken og matelinjen og en 5 psig nitrogengassnedblåsning. Den avsluttende fasen var en nedblåsning av membranenheten som inneholdt for det meste DF-buffer fra den initiale produktforskyvningen. Denne fasen brukte også 5 psig nitrogengass påført på det høyeste punktet på retentatlinjen. Den gjenvunne oppsamlingen ble først fortynnet til omtrent 153 g E25/L ved å bruke DF-buffer. Endelig ble oppsamlingen bearbeidet til den avsluttende formuleringen av 20 mM histidin/200 mM arginin-HCl/0,04% polysorbat 20/pH 6,0. Volumene av den gjenvunne oppsamlingen, fortynnede oppsamlingen og bearbeidede oppsamlingen ble analysert for proteinkonsentrasjon. Tabell 15 oppsummerer resultatene. Etter prosessen ble membranen regenerert som beskrevet ovenfor.
Eksempel 7
Virkning av forhøyet temperatur på produktkvalitet
E25-prøver ved 30 g/l og 150 g/l i histidin og Q-buffere ble holdt ved forskjellige temperaturer i 24 timer. Prøver ble tatt for turbiditetsmålinger og SEC-assayer. Resultatene for turbiditet versus temperatur for E25 ved 30 g/l i Q-buffer er vist i figur 18. Figur 19 viser mengden av oppløselig aggregat av E25 (150 g/l i 50 mM histidinbuffer, pH 6,0) observert over tid og ved temperaturer på 23°C, 40°C, 50°C, 60°C og 70°C. De fire tidsintervallene (tiden 0 timer, 4 timer, 7,5 timer og 24 timer) for hver av disse temperaturene er vist som en klynge av fire stolper fra venstre til høyre som 1810 og 1910 i figurene 18 og 19. Oppløsningens turbiditet var i alt vesentlig uforandret etter 24 timer ved 60°C. Intet signifikant oppløselig aggregat av E25 ble observert under 70°C, noe som antyder at produktprøvene var hovedsakelig stabile opptil 60°C og i minst 24 timer.
Eksempel 8
Virkning av forhøyet temperatur på biobyrden
E25-prøver ved 30 g/l i både arginin- og histidinbuffere ble inokulert med 10 kolonidannende enheter pr ml for to utfordrerorganismer: En Gram positiv stamme ( Staphylococcus aureus) ; og en Gram negativ stamme ( Pseudomonas chlororaphis). Prøver ble tatt etter 1,5 timer og 6 timer. Resultatene vist i stolpediagrammet i figurene 20 og 21 angir at disse utfordrerorganismene begge ble redusert med økende temperatur. De tre temperaturintervallene (temperaturer på 25°C, 40°C og 50°C timer) for hvert observert tidsintervall er vist som klyngen på tre stolper fra venstre til høyre som 2010 og 2110 i figurene 20 og 21. Inokulasjonene vist ble utført i argininbuffer med proteinkonsentrasjoner på 30 g/l.
Eksempel 9
Virkning av forhøyet temperatur på prosessflyt
E25-prøver ved 10 g/l i 0,2 M arginin, 25 mM histidin, pH 6,0 buffer ble evaluert for sin innflytelse på flyt versus transmembrantrykk (TMP). Figur 22 viser at å heve systemtemperaturen også hevet prosessflyten gjennom UF/DF-operasjonene. Flytekskursjoner ved forskjellige bulkkonsentrasjoner og tre forskjellige temperaturer på 23°C (2210), 40°C (2220) og 46°C (2230) ble utført. Masseoverføringskoeffisienten og filtratflyten økte med fra omtrent 2 til omtrent 3 ganger og tilveiebrakte betydelig reduserte prosesstider.
Eksempel 10
Høy konsentrasjonsformulering av rhuMAb anti-CD20 ("2H7")
Et pilotskala UF-system ble brukt til å konsentrere og formulere rhuMAb anti-CD20 (2H7; et rekombinant humant monoklonalt antistoff). Eksempel 1 ble gjentatt med følgende unntak. Millipore Pelicon ultrafiltrerings-/diafiltreringssystemer ble montert med en 1,625 m (17,5 ft), regenerert cellulosekomposittmembran med en porestørrelse på 30000 dalton. Systemet besto av en membranholder, en Viking Sl L rotasjonsløkkematepumpe, et V2" resirkulasjonsrørsystem av 316L rustfritt stål og et 40 1 resirkulasjonskar. Tilbaketrykksregulerende ventiler var H.D. Baumann, Inc. Temperaturen i glykolen matet til tankkappen ble regulert høyere eller lavere ettersom nødvendig ved å bruke en elektrisk varmeutveksler, et kaldt glykolforråd eller begge.
Under denne kjøringen ble matestrømningshastigheten satt til en konstant hastighet på 8,5 l/min (tilnærmet 0,046 l/min/m<2>(0,5 1/min/ft<2>)). Figur 23 viser verditendensene over tid for matestrømningshastighet (210) skalert fra 0 til 20, pli
(212) skalert fra 2 til 12, filtratstrømningshastighet (250) skalert fra 0 til 5, resirkulasjonstanknivå (2320) skalert fra 0 til 45 og retentat dP (2350) skalert fra 0 til 100 under de forskjellige fasene eller modusene til prosessen inkludert UF1 (10), DF1 (20) og UF2 (30).
Under ultrafiltrerings- og diafiltreringsoperasjoner benytter systemet konstante retentattrykk etterfulgt av et konstant mate/retentat deltatrykkontrollskjema for å kontrollere flyten gjennom membranen. Diafiltreringsbuffer (30 mM natriumacetat/pH 4,9) ble fremstilt i en separat tank. Temperaturen til denne bufferen ble satt til 45°C før prosessen for nøyaktig temperaturkontroll gjennom hele prosessen. Før bearbeiding ble systemlagringsoppløsningen (0,1 N NaOFI) skylt i en enkelt passering til dreneringsmodus først med 0,092 l/m<2>(1 l/ft2)vann for injeksjon (WFI) og deretter 0,092 l/m<2>(1 1/ft2) diafiltreringsbuffer. Etter skyllingene ble systemet ekvilibrert ved å resirkulere 0,046 l/m<2>(0,5 1/ft<2>) diafiltreringsbuffer i 10 min. pH-verdien til den resirkulerte oppløsningen ble kontrollert for å bekrefte ekvilibreringen.
Proteinoppsamlingen som resulterer fra et foregående Q-sefarosekromatografitrinn ble målt til å være 2,31 g 2H7/L og hadde et volum på 356 1. Proteinet ble i en oppløsning av 6 mM HEPES-fri syre/19 mM HEPES natriumsalt og 25 mM natriumacetat som var blitt pH-justert til 5,3 med 0,5 M eddiksyre. Like før kjøringen ble temperaturinnstillingspunktet i denne oppsamlingen satt til 45°C. For å begynne kjøringen ble proteinoppsamlingen overført til resirkulasjonskaret gjennom et 0,22 mikron steriliseringsgradfilter til et nivå på omtrent 40 1 i tanken. I karet ble oppsamlingen rørt via en toppmontert rotor og temperaturen ble opprettholdt på 40-50°C.
På grunn av at den innkommende oppsamlingen var større enn resirkulasjonskaret, begynte UFl-prosessen i mateporsjonsmodus (se figur 23). I denne modusen ble Q-oppsamling tilsatt til resirkulasjonskaret ved tilnærmet den samme hastigheten som filtratet passerte gjennom TFF-membranen for drenering. Etter at den gjenværende Q-oppsamlingen var overført til resirkulasjonskaret, fortsatte UFl-prosessen i porsjonsmodus. Under UF1 ble oppsamlingen konsentrert til omtrent 50 g 2H7/L (omtrent 16 1). Oppsamlingen ble deretter diafiltrert med 10 diavolumer av diafiltreringsbuffer. Under diafiltreringen ble temperaturen opprettholdt mellom 40 og 50°C. Diafiltreringen ble utført ved et konstant volum som ble oppnådd ved å tilpasse strømningshastigheten av buffer som overføres til resirkulasjonstanken til strømningshastigheten av filtrat som blir fjernet fra systemet. Ved avslutning av diafiltreringen ble oppsamlingen ytterligere konsentrert i UF2-modus til et endelig konsentrasjonsmålinnstillingspunkt på 190 g 2H7/L (4,3 1). Se i figur 23 inkorporeringen av konstant dP-kontroll ved 50 psig ved avslutning av denne fasen. Denne fasen ble også utført ved et forhøyet temperaturinnstillingspunkt på 45°C +/-5°C. Dernest ble en lavtrykksfallblanding utført hvor matepumpen ble kontrollert for å opprettholde et 20 psig trykkfall over matekanalen. En prøve ble trukket og en tetthetsmåling ble utført for å bekrefte konsentrasjonen før gjenvinning. Konsentrasjonen på denne prøven var 189 g 2H7/L. Tabell 16 oppsummerer gjennomkjøringen og flytresultatene.
Proteinoppsamlingen ble gjenvunnet gjennom en serie av trinn. Først ble produktet forskjøvet fra membranen i en enkel passeringsmodus ved å bruke 0,2 1 DF-buffer tilsatt til retentatlinjen. Produktet blir filtrert inn i gjenvinningstanken gjennom et 0,22 mikron steriliseringsgrad avsluttende filter. Oppsamlingen i resirkulasjonstanken ble deretter pumpet fra tanken ved å bruke rotasjonsløkkematepumpen. Dernest ble restproteinoppløsningen forskjøvet fra tanken og matelinjen med en 5 psig nitrogengassnedblåsning. Den avsluttende fasen var en nedblåsning av membranenheten som nå inneholdt DF-buffer fra den initiale produktforskyvningen. Denne fasen brukte også 5 psig nitrogengass anvendt på det høyeste punktet på retentatlinjen.
Hvis nødvendig ble den gjenvunne oppsamlingen fortynnet først til omtrent 175 g 2H7/L ved å bruke fortynningsbuffer (30 mM natriumacetat, pH 5,3). Avslutningsvis ble oppsamlingen fortynnet ned til en målkonsentrasjonpå 150 g 2H7/L og bearbeidet til den avsluttende formuleringen på 30 mM natriumacetat, 7% trehalose, 0,03% polysorbat 20, pH 5 via en 7 X bearbeidingsbuffer (30 mM natriumacetat, 49% trehalose, 0,21% polysorbat 20, pH 5,3).
Volumene til den gjenvunne oppsamlingen, fortynnede oppsamlingen og bearbeidede oppsamlingen ble deretter analysert for proteinkonsentrasjon. Tabell 17 presenterer resultatene.
Merk: Utbytter inkluderer tap som skyldes prøvetaking. Gjenvunnet oppsamlingsvolum og konsentrasjon inkluderer tilsetning av bufferforskyvning.
Etter prosessen ble membranen regenerert ved å bruke 0,1 N NaOH, 0,092 l/m<2>(1 1/ft<2>) enkel passeringsskylling etterfulgt av 0,046 l/m<2>(0,5 1/ft<2>) total resirkulasjon i 30 min. Dette ble etterfulgt av 1 1/ft2 PW-skylling. Dette ble etterfulgt av en total resirkulering på 0,046 l/m<2>(0,5 1/ft<2>) 1,4% Minncare-oppløsning i 30 min. Systemet ble igjen skylt med 0,092 l/m (1 1/ft) PW og avslutningsvis resirkulert i 15 min med 0,1 N NaOH og lagret.
Eksempel 11
Høy konsentrasjonsformulering av rhuMAb anti-CD20
Et pilotskala-UF-system ble brukt til å konsentrere og formulere rhuMAb anti-CD20 (2H7) for anvendelse i et humant fase I klinisk forsøk i en GMP-fremstillings-fasilitet. Eksempel 10 ble gjentatt med følgende unntak.
Proteinoppsamlingen som resulterte fra et foregående Q-sefarosekromatografitrinn ble målt til å være 3,729 g 2H7/L og hadde et volum på 262 1. Proteinet var i en oppløsning av 6 mM HEPES-fri syre/19 mM HEPES natriumsalt og 25 mM natriumacetat som var blitt pH-justert til 5,3 med 0,5 M eddiksyre. Rett før kjøringen ble temperaturinnstillingspunktet for denne oppsamlingen satt til 45°C. For å begynne kjøringen ble proteinoppsamlingen overført til resirkulasjonskaret gjennom et 0,22 mikron steriliseringsgradfilter til et nivå på omtrent 40 1 i tanken. I karet ble oppsamlingen rørt ved hjelp av en toppmontert rotor og temperaturen ble opprettholdt ved 40-50°C.
Under UF1 ble oppsamlingen konsentrert til omtrent 50 g 2H7/L (omtrent 20 1).
Figur 24 viser verditendensen over tid for resirkulasjonstanknivået (210) skalert fra
-0,713963 til 295,989, retentat dP (2420) skalert fra -0,237899 til 98,6629, matestrømningshastigheten (250) skalert fra -0,356981 til 147,994 og filtratstrømningshastigheten (2450) skalert fra -0,118994 til 49,3315 under
prosessen. Oppsamlingen ble deretter diafiltrert med 10 diavolumer av diafiltreringsbuffer. Under diafiltreringen ble temperaturen opprettholdt ved mellom 40 og 50°C. Diafiltreringen ble utført ved konstant volum som ble oppnådd ved å tilpasse strømningshastigheten til buffer som blir overført til resirkulasjonstanken til strømningshastigheten til filtratet som blir fjernet fra systemet. Ved avslutning av diafiltreringen, ble oppsamlingen ytterligere konsentrert i UF2-modus til et endelig konsentrasjonsmålinnstillingspunkt på 190 g 2H7/L (5,25 1). Bemerk i figur 24 inkorporeringen av konstant dP til 40 psig kontroll ved avslutning av denne fasen. Denne fasen ble også utført ved et forhøyet temperaturinnstillingspunkt på 45°C +/-5°C. Dernest ble en lavtrykkfallblanding utført hvor matepumpen blir kontrollert for å opprettholde et 20 psig trykkfall over matekanalen. En prøve ble trukket og en tetthetsmåling ble utført for å bekrefte konsentrasjonen før gjenvinning. Konsentrasjonen til denne prøven var 194 g 2H7/L. Tabell 18 oppsummerer gjennomkjøringene og flytresultatene.
Rett før produktgjenvinning, ble en 30 ml prøve trukket og utsatt for deteksjon og titer for biobyrde. Resultatene var negative (det vil si <0,13 CFU/ml). Proteinoppsamlingen ble gjenvunnet ved hjelp av en serie trinn som i eksempel 10. Volumene til den gjenvunne oppsamlingen, fortynnede oppsamlingen og bearbeidede oppsamlingen ble deretter analysert for proteinkonsentrasjon. Tabell 19 presenterer resultatene. Membranen ble regenerert som i eksempel 10.
Eksempel 12
Høy konsentrasjonsformulering av rhuMAb anti-CD20 GMP
Eksempel 11 ble gjentatt med følgende unntak. Proteinoppsamlingen som resulterte fra et foregående Q-sefarosekromatografitrinn ble målt til å være 5,106 g 2H7/L og hadde et volum på 196 1. Proteinet var i en løsning på 6 mM HEPES-fri syre/19 mM HEPES natriumsalt og 25 mM natriumacetat som var blitt pH-justert til 5,3 med 0,5 M eddiksyre. Like før kjøringen ble temperaturinnstillingspunktet til denne oppsamlingen satt til 45°C. For å begynne kjøringen ble proteinoppsamlingen overført til resirkulasjonskaret gjennom et 0,22 mikron steriliseringsgradfilter til et nivå på omtrent 40 1 i tanken. I karet ble oppsamlingen rørt ved hjelp av en toppmontert rotor og temperaturen ble opprettholdt på 40-50°C.
Under UF1 ble oppsamlingen konsentrert til omtrent 50 g 2H7/L (omtrent 20 1).
Figur 25 viser verditendensene over tid for resirkulasjonstanknivået (210) skalert fra 0 til 300, retentat dP (2520) skalert fra 0 til 100, matestrømningshastigheten
(250) skalert fra 0 til 150 og filtratstrømningshastigheten (2550) skalert fra 0 til 50 gjennom prosessen. Oppsamlingen ble diafiltrert med 10 diavolumer (10 X) av diafiltreringsbuffer. Under diafiltreringen ble temperaturen opprettholdt mellom 40 og 50°C. Diafiltreringen ble utført ved et konstant volum som ble oppnådd ved å tilpasse gjennomstrømningshastigheten til bufferen som blir overført inn i resirkulasjonstanken til strømningshastigheten til filtratet som blir fjernet fra systemet. Ved avslutning av diafiltreringen ble oppsamlingen ytterligere konsentrert i UF2-modus til et avsluttende konsentrasjonsmålinnstillingspunkt på 190 g 2H7/L (5,26 1), igjen ved å benytte konstant dP-kontroll ved avslutningen av denne fasen (se figur 25). Denne fasen ble også utført ved et forhøyet temperaturinnstillingspunkt på 45°C +/- 5°C. Dernest ble en lavtrykksfallblanding utført hvor matepumpen ble kontrollert for å opprettholde 20 psig trykkfall over matekanalen. En prøve ble trukket og en tetthetsmåling ble utført for å bekrefte konsentrasjonen før gjenvinning. Konsentrasjonen av denne prøven var 191 g 2H7/L. Tabell 20 oppsummerer gjennomkjørings- og flytresultatene.
Like før produktgjenvinning, ble en 30 ml prøve trukket og utsatt for deteksjon og titer av biobyrden. Resultatene var negative (det vil si <0,13 CFU/ml). Proteinoppsamlingen ble gjenvunnet ved en serie av trinn som i eksempel 11. Volumene til den gjenvunne oppsamlingen, fortynnede oppsamlingen og bearbeidede oppsamlingen ble deretter analysert for proteinkonsentrasjon. Tabell 21 presenterer resultatene. Membranen ble regenerert som i eksempel 11.
Alle publikasjoner, patenter og patentdokumenter er inkorporert ved referanse heri i sin helhet, som om individuelt inkorporert ved referanse. Beskrivelsen er blitt beskrevet med referanse til forskjellige spesifikke og foretrukne utforminger og teknikker. Det skal imidlertid forstås at mange variasjoner og modifikasjoner kan foretas uten å avvike fra ånden og området til beskrivelsen.
Claims (56)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av et meget konsentrerte proteinpreparat,karakterisert vedat den omfatter: a) en første ultrafiltrering av et første proteinpreparat for å tilveiebringe et andre proteinpreparat omfattende retentatet fra den første ultrafiltreringen; b) en diafiltrering av det andre proteinpreparatet for å tilveiebringe et diafiltrert, intermediært proteinpreparat omfattende et retentat fra diafiltreringen; og c) en andre ultrafiltrering av det diafiltrerte, intermediære proteinpreparatet for å tilveiebringe et tredje proteinpreparat omfattende et retentat fra den andre ultrafiltreringen,
der den første ultrafiltreringen, den andre ultrafiltreringen og diafiltreringen blir gjennomført ved omtrent 35°C til omtrent 50°C.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert vedat proteinet som er konsentrert ved fremgangsmåten er et antistoff.
3. Fremgangsmåte i følge krav 2,
karakterisert vedat antistoffet er et monoklonalt antistoff.
4. Fremgangsmåte i følge krav 2 eller 3,
karakterisert vedat antistoffet er et kimært antistoff, et humanisert antistoff, eller et humant antistoff.
5. Fremgangsmåte i følge krav 2 eller 3,
karakterisert vedat antistoffet er et antigenbindende fragment valgt fra gruppen bestående av Fab, Fab', F(ab')2 og Fv-fragment.
6. Fremgangsmåte ifølge krav hvilket som helst av kravene 2 eller 5,karakterisert vedat antistoffet er et IgE-antistoff.
7. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-6,
karakterisert vedat én eller flere av den første ultrafiltreringen, den andre ultrafiltreringen og diafiltreringen blir gjennomført ved 45°C ± 5°C.
8. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-7,
karakterisert vedat én eller flere av den første ultrafiltreringen, den andre ultrafiltreringen og diafiltreringen blir gjennomført ved omtrent 45°C.
9. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-7,
karakterisert vedat trinnene a), b) og c) blir utført ved en temperatur på omtrent 40°C til omtrent 50°C.
10. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-9,
karakterisert vedat det første proteinpreparatet har en proteinkonsentrasjon på fra omtrent 0,1 til omtrent 10 gram per liter.
11. Fremgangsmåte ifølge krav 10,
karakterisert vedat det første proteinpreparatet har en proteinkonsentrasjon på omtrent 1 til omtrent 5 gram per liter.
12. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-11,
karakterisert vedat det andre proteinpreparatet har en proteinkonsentrasjon på fra omtrent 10 til omtrent 50 gram per liter.
13. Fremgangsmåte ifølge krav 12,
karakterisert vedat det andre proteinpreparatet har en proteinkonsentrasjon på omtrent 20 til omtrent 50 gram per liter.
14. Fremgangsmåte ifølge krav 13,
karakterisert vedat det andre proteinpreparatet har en proteinkonsentrasjon på omtrent 20 til omtrent 40 gram per liter.
15. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-14,
karakterisert vedat det tredje proteinpreparatet har en proteinkonsentrasjon på fra omtrent 50 til omtrent 250 gram per liter.
16. Fremgangsmåte ifølge krav 15,
karakterisert vedat det tredje proteinpreparatet har en proteinkonsentrasjon på fra omtrent 100 til omtrent 230 gram per liter.
17. Fremgangsmåte ifølge krav 16,
karakterisert vedat det tredje proteinpreparatet har en proteinkonsentrasjon på fra omtrent 170 til omtrent 200 gram per liter.
18. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-17,
karakterisert vedat det intermediære proteinpreparatet har en proteinkonsentrasjon på omtrent 25 til omtrent 35 gram per liter, og det tredje proteinpreparatet har en proteinkonsentrasjon på fra omtrent 170 til omtrent 200 gram per liter.
19. Fremgangsmåte ifølge krav 18,
karakterisert vedat den første ultrafiltreringen konsentrerer det første proteinpreparatet slik at det andre proteinpreparatet har en proteinkonsentrasjon på omtrent 30 gram per liter, og der den andre ultrafiltreringen konsentrerer det intermediære proteinpreparatet slik at det tredje proteinpreparatet har en proteinkonsentrasjon på omtrent 170 til omtrent 200 gram per liter.
20. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-19,
karakterisert vedat fremgangsmåten blir gjennomført i løpet av fra omtrent 1 til 10 timer.
21. Fremgangsmåte ifølge krav 20,
karakterisert vedat fremgangsmåten blir gjennomført i løpet av fra 2 til 5 timer.
22. Fremgangsmåte ifølge krav 21,
karakterisert vedat fremgangsmåten blir gjennomført i løpet av 3 timer.
23. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-22,
karakterisert vedat den første og den andre ultrafiltreringen blir gjennomført med en ultrafiltreringsmembran som har en normal porestørrelse på omtrent 5 til omtrent 50 kiloDalton.
24. Fremgangsmåte ifølge krav 23,
karakterisert vedat den første og den andre ultrafiltreringen blir gjennomført med en ultrafiltreringsmembran som har en normal porestørrelse på omtrent 10 til omtrent 30 kiloDalton.
25. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-24,
karakterisert vedat det første proteinpreparatet inneholder et protein som har en tilsynelatende molekylvekt på omtrent 100 til omtrent 200 kiloDalton.
26. Fremgangsmåte ifølge krav 25,
karakterisert vedat det første proteinpreparatet inneholder et protein som har en tilsynelatende molekylvekt på omtrent 150 kiloDalton.
27. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-26,
karakterisert vedat filtreringstrinn a), b) og c) benytter en ultrafiltreringsmembran.
28. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-26,
karakterisert vedat den første ultrafiltreringen og den andre ultrafiltreringen blir gjennomført med den samme ultrafiltreringsmembranen.
29. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-28,
karakterisert vedat en ultrafiltreringsmembran som blir benyttet i filtreringstrinn a) blir benyttet i trinn b) og c).
30. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-29,
karakterisert vedat den første ultrafiltreringen, den andre ultrafiltreringen og diafiltreringen blir gjennomført med tangentiell strømningsfiltrering over en ultrafiltreringsmembran.
31. Fremgangsmåte ifølge krav 30,
karakterisert vedat den første ultrafiltreringen, den andre ultrafiltreringen og diafiltreringen blir gjennomført med tangentiell strømningsfiltrering over den samme ultrafiltreringsmembranen.
32. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-31,
karakterisert vedat den første ultrafiltreringen og den andre ultrafiltreringen blir gjennomført med en regenerert cellulosekompositt ultrafiltreringsmembran.
33. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-32,
karakterisert vedat diafiltreringen oppnår en bufferutveksling ved et konstant volum, en konstant konsentrasjon, eller begge.
34. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-33,
karakterisert vedat diafiltreringen oppnår en bufferutveksling på fra omtrent 5 til omtrent 15 ganger volumer.
35. Fremgangsmåte ifølge krav 34,
karakterisert vedat diafiltreringen oppnår en bufferutveksling på omtrent 8 ganger volumer.
36. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-35,
karakterisert vedat trinn b) omfatter mer enn ett diafiltreringstrinn.
37. Fremgangsmåte ifølge krav 36,
karakterisert vedat et første diafiltreringstrinn oppnår en bufferutveksling på omtrent 4 ganger volumer og et andre diafiltreringstrinn oppnår en bufferutveksling på omtrent 4 ganger volumer.
38. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-37,
karakterisert vedat diafiltreringen bytter ut en første buffer med en andre buffer.
39. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-37,
karakterisert vedat diafiltrering bytter ut en buffer som har en sammensetning som er forskjellig fra bufferen i trinn a).
40. Fremgangsmåte ifølge krav 38,
karakterisert vedat den første bufferen omfatter en blanding av vandig natriumklorid og en TRIS-buffer.
41. Fremgangsmåte ifølge krav 38 eller 39,
karakterisert vedat den andre bufferen omfatter en blanding av vandig histidinklorid og argininklorid.
42. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-41,
karakterisert vedat utbyttet av det tredje proteinpreparatet er større enn 70 vekt% basert på vekten av proteiner i det første proteinpreparatet.
43. Fremgangsmåte ifølge krav 42,
karakterisert vedat utbyttet av det tredje proteinpreparatet er fra omtrent 80 til omtrent 100 vekt% basert på vekten av proteiner i det første proteinpreparatet.
44. Fremgangsmåte ifølge krav 43,
karakterisert vedat utbyttet av det tredje proteinpreparatet er større enn 98 vekt% basert på vekten av proteiner i det første proteinpreparatet.
45. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-44,
karakterisert vedat den første ultrafiltreringen har en resirkuleringshastighet på fra omtrent 0,046 L/min/m<2>(0,5 L/min/ft<2>) til omtrent 0,464 L/min/m<2>(5 L/min/ft<2>).
46. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-45,
karakterisert vedat ultrafiltreringen og diafiltreringen blir gjennomført ved et transmembrantrykk på fra omtrent 0,34 bar (5 p.s.i) til omtrent 3,45 bar (50 p.s.i).
47. Fremgangsmåte ifølge krav 46,
karakterisert vedat ultrafiltreringen og diafiltreringen blir gjennomført ved et transmembrantrykk på fra omtrent 0,69 bar (10 p.s.i) til omtrent 3,45 bar (50 p.s.i).
48. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-47,
karakterisert vedat gjennomstrømning for trinn c) er ved omtrent 861 g/m<2>/t (80 g/ft<2>/t), omtrent 1292 g/m<2>/t (120 g/ft<2>/t), omtrent 1453 g/m<2>/t (1453 g/ft<2>/t), omtrent 1561 g/m<2>/t (145 g/ft<2>/t), omtrent 1884 g/m<2>/t (175 g/<f>t<2>/t), omtrent 1938 g/m<2>/t (180 g/ft<2>/t), omtrent 2853 g/m<2>/t (265 g/ft<2>/t), omtrent 3068 g/m<2>/t ( g/ft<2>/t) eller omtrent 3122 g/m<2>/t (290 g/ft<2>/t).
49. Fremgangsmåte i følge hvilket som helst av kravene 1-48,karakterisert vedat nivåer av aggregatkontamineringer i den svært konsentrerte proteinpreparatet er mindre enn 5 vekt%.
50. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-49,
karakterisert vedat nivåer av aggregatkontamineringer i det svært . konsentrerte proteinpreparatet er på mindre enn 2 vekt%.
51. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-50,
karakterisert vedat det tredje proteinpreparatet har en påvisbar biobyrde på mindre enn omtrent 100 CFU/ml.
52. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-51,
karakterisert vedat det tredje proteinpreparatet har en påvisbar biobyrde på 1,8 CFU/ml.
53. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-51,
karakterisert vedat det tredje proteinpreparatet har en påvisbar biobyrde på mindre en 0,13 CFU/ml.
54. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-53,
karakterisert vedat det første proteinpreparatet har gjennomgått et rensetrinn før trinn a).
55. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 1-54,
karakterisert vedat proteinet som er inneholdt i det første proteinpreparatet er omtrent 99,8 % rent før trinn a).
56. Fremgangsmåte i følge ethvert av kravene 3-55, hvori antistoffet er anti-IgE antistoff rhuMAb E25.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US60909204P | 2004-09-09 | 2004-09-09 | |
| US11/220,362 US20060051347A1 (en) | 2004-09-09 | 2005-09-06 | Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof |
| PCT/US2005/031844 WO2006031560A2 (en) | 2004-09-09 | 2005-09-08 | Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20071432L NO20071432L (no) | 2007-03-16 |
| NO333660B1 true NO333660B1 (no) | 2013-08-05 |
Family
ID=35996499
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20071432A NO333660B1 (no) | 2004-09-09 | 2007-03-16 | Fremgangsmate for fremstilling av et meget konsentrert proteinpreparat. |
Country Status (33)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US20060051347A1 (no) |
| EP (5) | EP4108259B1 (no) |
| JP (2) | JP5210633B2 (no) |
| KR (2) | KR20070109975A (no) |
| CN (3) | CN104961797B (no) |
| AR (1) | AR050641A1 (no) |
| AU (1) | AU2005285243C1 (no) |
| BR (1) | BRPI0515649B8 (no) |
| CA (1) | CA2577317C (no) |
| DK (4) | DK2292636T3 (no) |
| EC (1) | ECSP077282A (no) |
| ES (3) | ES2968070T3 (no) |
| FI (2) | FI3805248T3 (no) |
| GT (1) | GT200500254A (no) |
| HK (2) | HK1101249A1 (no) |
| HU (2) | HUE061899T2 (no) |
| IL (2) | IL181372A (no) |
| LT (3) | LT2292636T (no) |
| MA (1) | MA28991B1 (no) |
| MX (2) | MX342788B (no) |
| MY (2) | MY150549A (no) |
| NO (1) | NO333660B1 (no) |
| NZ (1) | NZ553239A (no) |
| PE (1) | PE20060816A1 (no) |
| PL (4) | PL1786830T3 (no) |
| PT (4) | PT3805248T (no) |
| RU (1) | RU2390524C2 (no) |
| SG (1) | SG177161A1 (no) |
| SI (4) | SI2292636T1 (no) |
| TN (1) | TNSN07069A1 (no) |
| TW (1) | TWI372630B (no) |
| WO (1) | WO2006031560A2 (no) |
| ZA (1) | ZA200701626B (no) |
Families Citing this family (66)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8703126B2 (en) | 2000-10-12 | 2014-04-22 | Genentech, Inc. | Reduced-viscosity concentrated protein formulations |
| AU2002213441B2 (en) * | 2000-10-12 | 2006-10-26 | Genentech, Inc. | Reduced-viscosity concentrated protein formulations |
| PL2335725T3 (pl) * | 2003-04-04 | 2017-04-28 | Genentech, Inc. | Preparaty zawierające wysokoskoncentrowane przeciwciała i białka |
| AU2005209360B2 (en) | 2004-01-30 | 2009-06-25 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Production and purification of recombinant arylsulfatase A |
| ES2442115T3 (es) | 2004-05-12 | 2014-02-10 | Baxter International Inc. | Microesferas que contienen oligonucleótidos, su utilización para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la diabetes tipo 1 |
| ES2422757T3 (es) | 2004-05-12 | 2013-09-13 | Baxter Int | Uso terapéutico de microesferas de ácido nucleico |
| US20060051347A1 (en) * | 2004-09-09 | 2006-03-09 | Winter Charles M | Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof |
| AU2006259664A1 (en) | 2005-06-14 | 2006-12-28 | Amgen Inc. | Self-buffering protein formulations |
| DK2007506T3 (da) * | 2006-03-31 | 2014-06-16 | Danisco Us Inc | Tangentialstrømningsfiltreringsapparater, -systemer og -fremgangsmådertil separering af forbindelser |
| DK2628746T3 (en) | 2006-04-04 | 2019-04-01 | Chiesi Farm Spa | A method for the concentration of a polypeptide |
| CN101679507A (zh) * | 2007-03-29 | 2010-03-24 | 艾博特公司 | 结晶抗人类il-12抗体 |
| CN101754977B (zh) * | 2007-07-17 | 2013-07-17 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 可变切向流过滤 |
| US20100249384A1 (en) * | 2007-11-29 | 2010-09-30 | Stefan Hepbildikler | Immunoglobulin aggregates |
| KR20190045414A (ko) * | 2007-11-30 | 2019-05-02 | 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 | 단백질 제형 및 이의 제조방법 |
| US8883146B2 (en) | 2007-11-30 | 2014-11-11 | Abbvie Inc. | Protein formulations and methods of making same |
| US8772461B2 (en) * | 2008-04-15 | 2014-07-08 | Grifols Therapeutics Inc. | Two-stage ultrafiltration/diafiltration |
| RU2010151414A (ru) * | 2008-05-15 | 2012-06-20 | В.Хэлт Л.П. (Bs) | Способ получения фракций молока, обогащенных секреторными иммуноглобулинами |
| WO2010066634A1 (en) * | 2008-12-09 | 2010-06-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for obtaining an excipient-free antibody solution |
| EP2393579B1 (en) * | 2009-01-21 | 2017-03-08 | Smartflow Technologies, Inc. | Optimization of separation for viscous suspensions |
| AU2010221156A1 (en) * | 2009-03-06 | 2011-09-22 | Genentech, Inc. | Antibody formulation |
| WO2010111378A1 (en) * | 2009-03-24 | 2010-09-30 | Wyeth Llc | Membrane evaporation for generating highly concentrated protein therapeutics |
| MY157239A (en) * | 2009-05-27 | 2016-05-13 | Baxalta Inc | A method to produce a highly concentrated immunoglobulin preparation for subcutaneous use |
| CA2772846C (en) | 2009-09-29 | 2020-09-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Pre-filtration adjustment of buffer solutes |
| DK2483305T3 (en) | 2009-10-01 | 2016-10-24 | Hoffmann La Roche | MULTI-STEP-END FILTERING Immunoglobulin |
| AU2011212440B2 (en) | 2010-02-04 | 2015-01-22 | Csl Behring Ag | Immunoglobulin preparation |
| KR101903931B1 (ko) | 2010-03-01 | 2018-10-02 | 바이엘 헬스케어 엘엘씨 | 조직 인자 경로 억제제 (ｔｆｐｉ)에 대한 최적화된 모노클로날 항체 |
| ES2625511T3 (es) | 2011-07-08 | 2017-07-19 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Métodos para la purificación de arylsulfatasa A |
| BR112014004828B8 (pt) * | 2011-09-01 | 2022-03-29 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Métodos para preparação de composições compreendendo anticorpos ou proteínas concentradas por ultrafiltração |
| AR089434A1 (es) | 2011-12-23 | 2014-08-20 | Genentech Inc | Procedimiento para preparar formulaciones con alta concentracion de proteinas |
| US20130281355A1 (en) | 2012-04-24 | 2013-10-24 | Genentech, Inc. | Cell culture compositions and methods for polypeptide production |
| US8613919B1 (en) | 2012-08-31 | 2013-12-24 | Bayer Healthcare, Llc | High concentration antibody and protein formulations |
| US9592297B2 (en) | 2012-08-31 | 2017-03-14 | Bayer Healthcare Llc | Antibody and protein formulations |
| WO2014102370A1 (en) * | 2012-12-28 | 2014-07-03 | Novo Nordisk A/S | High temperature dead end antibody filtration |
| MX2015008875A (es) | 2013-01-09 | 2015-10-22 | Shire Human Genetic Therapies | Metodos para la purificacion de arilsulfatasa a. |
| DE102013001628A1 (de) | 2013-01-30 | 2014-07-31 | Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh | Verfahren zur Bereitstellung eines Konzentrats |
| EP3142775A2 (en) | 2014-05-13 | 2017-03-22 | Amgen Inc. | Process control systems and methods for use with filters and filtration processes |
| EP2957335B1 (en) * | 2014-06-16 | 2020-05-27 | EMD Millipore Corporation | Single-pass filtration systems and processes |
| EP4144434B1 (en) * | 2014-06-16 | 2024-04-17 | EMD Millipore Corporation | Single-pass filtration systems and processes |
| US10207225B2 (en) * | 2014-06-16 | 2019-02-19 | Emd Millipore Corporation | Single-pass filtration systems and processes |
| US10550148B2 (en) * | 2014-06-16 | 2020-02-04 | Emd Millipore Corporation | Methods for increasing the capacity of flow-through processes |
| EP2986361B1 (en) | 2014-06-25 | 2019-06-12 | EMD Millipore Corporation | Compact spiral-wound membrane filter elements |
| KR102061553B1 (ko) | 2014-08-29 | 2020-02-11 | 이엠디 밀리포어 코포레이션 | 잔류물의 재순환에 의한 싱글 패스 접선 유동 여과 시스템 및 접선 유동 여과 시스템을 사용하여 액체를 여과하는 공정 |
| CN105745009B (zh) | 2014-08-29 | 2018-09-28 | Emd 密理博公司 | 单程切向流过滤系统和具有渗余物的再循环的切向流过滤系统 |
| EA038462B1 (ru) | 2014-10-23 | 2021-08-31 | Эмджен Инк. | Снижение вязкости фармацевтических составов |
| GB201506870D0 (en) | 2015-04-22 | 2015-06-03 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
| MX2018003298A (es) * | 2015-09-22 | 2018-06-20 | Pfizer | Metodo para preparar una formulacion de proteinas terapeuticas y formulacion de anticuerpos producida por tal metodo. |
| TWI767930B (zh) * | 2016-08-16 | 2022-06-21 | 美商健臻公司 | 處理包括重組治療性蛋白之流體的方法及其用途 |
| EP3500588A1 (en) | 2016-08-17 | 2019-06-26 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Process for the preparation of highly concentrated liquid formulations containing biomolecules |
| SG11201903521XA (en) | 2016-10-21 | 2019-05-30 | Amgen Inc | Pharmaceutical formulations and methods of making the same |
| JP7377596B2 (ja) | 2017-02-22 | 2023-11-10 | アムジエン・インコーポレーテツド | 低粘度、高濃度エボロクマブ製剤及びそれらの製造方法 |
| CN107952280A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-04-24 | 安徽东方帝维生物制品股份有限公司 | 一种兽用疫苗无菌超滤浓缩装置及方法 |
| KR20190079530A (ko) * | 2017-12-27 | 2019-07-05 | (주)셀트리온 | 투석 여과 방법 |
| KR20210005053A (ko) * | 2018-04-12 | 2021-01-13 | 암젠 인크 | 안정한 단백질 조성물의 제조 방법 |
| TW202003832A (zh) * | 2018-05-04 | 2020-01-16 | 美商健臻公司 | 具有過濾系統的灌注式生物反應器 |
| US20210308265A1 (en) * | 2018-08-10 | 2021-10-07 | Amgen Inc. | Method of preparing an antibody pharmaceutical formulation |
| KR20210044821A (ko) | 2018-08-14 | 2021-04-23 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 개선된 단백질 회수 |
| TW202043253A (zh) * | 2019-01-28 | 2020-12-01 | 美商安進公司 | 藉由將藥物物質和藥物產品過程整體化的生物製劑製造之連續製造過程 |
| BR112021024720B1 (pt) * | 2019-07-31 | 2022-09-27 | Catalent U.K. Swindon Zydis Limited | Sistema e método para dosar uma formulação farmacêutica |
| CN111018968B (zh) * | 2019-12-16 | 2021-07-27 | 兴盟生物医药(苏州)有限公司 | 一种通过超滤浓缩制备高浓度抗体制剂的方法 |
| CN111944046B (zh) * | 2020-08-28 | 2021-04-09 | 江苏荃信生物医药有限公司 | 高浓度、低粘度抗人il-23单克隆抗体溶液的制备方法 |
| EP4225770A1 (en) * | 2020-10-05 | 2023-08-16 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for concentrating proteins |
| WO2022109371A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | Abec, Inc. | Filtration systems,components and methods |
| CN114014929B (zh) * | 2021-11-04 | 2022-07-19 | 江苏荃信生物医药股份有限公司 | 一种抗人白介素-33单克隆抗体浓缩溶液的制备方法 |
| WO2023164631A1 (en) | 2022-02-25 | 2023-08-31 | Amgen Inc. | Methods of preparing high concentration liquid drug substances |
| CN115261193A (zh) * | 2022-05-31 | 2022-11-01 | 利穗科技(苏州)有限公司 | 一种生物制品浓缩系统及其工艺 |
| WO2024012364A1 (en) * | 2022-07-12 | 2024-01-18 | Beigene Switzerland Gmbh | Preparation methods for a highly concentrated pd1 antibody solution by ultrafiltration/diafiltration (uf/df) |
Family Cites Families (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5625616B2 (no) | 1973-10-08 | 1981-06-13 | ||
| FR2459619B1 (fr) | 1979-06-26 | 1983-07-29 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede pour l'obtention a partir de lactoserum, d'un produit enrichi en alpha-lactalbumine et applications dudit procede |
| US4374763A (en) | 1979-09-17 | 1983-02-22 | Morishita Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for producing gamma-globulin for use in intravenous administration and method for producing a pharmaceutical preparation thereof |
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| IN161706B (no) * | 1983-10-05 | 1988-01-16 | Solco Basel Ag | |
| US4786501A (en) | 1985-07-15 | 1988-11-22 | International Minerals & Chemical Corp. | Cylindrical implants for the controlled release of growth hormones |
| US4756696A (en) | 1985-12-06 | 1988-07-12 | Amp Incorporated | Solder joint inspection feature for surface mount connectors |
| GB8628104D0 (en) * | 1986-11-25 | 1986-12-31 | Connaught Lab | Pasteurization of immunoglobin solutions |
| JPS6485829A (en) | 1987-09-29 | 1989-03-30 | Aisin Aw Co | Transmission for four-wheel drive vehicle |
| JPH01268646A (ja) | 1988-04-20 | 1989-10-26 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 抗腫瘍剤 |
| US4897465A (en) | 1988-10-12 | 1990-01-30 | Abbott Laboratories | Enrichment and concentration of proteins by ultrafiltration |
| GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
| US5175384A (en) | 1988-12-05 | 1992-12-29 | Genpharm International | Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice |
| DK0710719T3 (da) | 1990-01-12 | 2007-07-09 | Amgen Fremont Inc | Frembringelse af xenogene antistoffer |
| US5177194A (en) * | 1990-02-01 | 1993-01-05 | Baxter International, Inc. | Process for purifying immune serum globulins |
| NL9001650A (nl) | 1990-07-19 | 1992-02-17 | Ver Coop Melkind | Werkwijze voor de bereiding van een melkeiwit-isolaat. |
| US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| EP0814159B1 (en) | 1990-08-29 | 2005-07-27 | GenPharm International, Inc. | Transgenic mice capable of producing heterologous antibodies |
| US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
| US5256294A (en) | 1990-09-17 | 1993-10-26 | Genentech, Inc. | Tangential flow filtration process and apparatus |
| US6582959B2 (en) | 1991-03-29 | 2003-06-24 | Genentech, Inc. | Antibodies to vascular endothelial cell growth factor |
| JP2907603B2 (ja) * | 1991-09-09 | 1999-06-21 | 雪印乳業株式会社 | 新規生理活性ペプチド、該活性ペプチドを有効成分とする胃酸分泌抑制剤、抗潰瘍剤及び飲食品 |
| US6270757B1 (en) | 1994-04-21 | 2001-08-07 | Genetics Institute, Inc. | Formulations for IL-11 |
| US6372716B1 (en) | 1994-04-26 | 2002-04-16 | Genetics Institute, Inc. | Formulations for factor IX |
| US5641870A (en) | 1995-04-20 | 1997-06-24 | Genentech, Inc. | Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification |
| US5707678A (en) | 1995-04-12 | 1998-01-13 | Galagen Inc. | Method for microfiltration of milk or colostral whey |
| ATE390933T1 (de) | 1995-04-27 | 2008-04-15 | Amgen Fremont Inc | Aus immunisierten xenomäusen stammende menschliche antikörper gegen il-8 |
| EP0823941A4 (en) | 1995-04-28 | 2001-09-19 | Abgenix Inc | HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES |
| JPH11510170A (ja) * | 1995-07-27 | 1999-09-07 | ジェネンテック インコーポレーテッド | タンパク質の処方 |
| DE19544393A1 (de) | 1995-11-15 | 1997-05-22 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Synergistische herbizide Mischungen |
| DE19543737A1 (de) | 1995-11-24 | 1997-05-28 | Hoechst Ag | Verfahren zur Ultrafiltration von Peptide oder Proteine enthaltender biologischer Matrices |
| GB9610992D0 (en) * | 1996-05-24 | 1996-07-31 | Glaxo Group Ltd | Concentrated antibody preparation |
| EP0942968B1 (en) | 1996-12-03 | 2008-02-27 | Amgen Fremont Inc. | Fully human antibodies that bind EGFR |
| US5994511A (en) | 1997-07-02 | 1999-11-30 | Genentech, Inc. | Anti-IgE antibodies and methods of improving polypeptides |
| US6172213B1 (en) | 1997-07-02 | 2001-01-09 | Genentech, Inc. | Anti-IgE antibodies and method of improving polypeptides |
| EP1017286A4 (en) * | 1997-09-22 | 2004-06-09 | Sepragen Corp | Successive separation of whey protein and formulations |
| RU2140287C1 (ru) | 1998-08-25 | 1999-10-27 | Государственное унитарное предприятие "Иммунопрепарат" | Способ получения альбумина |
| WO2000024266A2 (en) | 1998-10-26 | 2000-05-04 | Galagen, Inc. | Soy and immunoglobulin compositions |
| UY26236A1 (es) | 1999-07-07 | 2000-10-31 | New Zeland Co Operative Dairy | Metodos para obtener aislados de proteina y concentrados de calostro |
| EP2311492B1 (en) * | 2000-08-11 | 2017-10-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody-containing stabilized preparations |
| AU2002213441B2 (en) | 2000-10-12 | 2006-10-26 | Genentech, Inc. | Reduced-viscosity concentrated protein formulations |
| ES2184594B1 (es) | 2001-01-17 | 2004-01-01 | Probitas Pharma Sa | Procedimiento para la produccion de gammaglobulina g humana inactivada de virus. |
| DE60237841D1 (de) * | 2001-11-13 | 2010-11-11 | Genentech Inc | Zusammensetzungen basierend auf APO2-Ligand/ TRAIL und ihre Verwendung |
| EP1551875A4 (en) * | 2002-06-21 | 2006-06-28 | Biogen Idec Inc | TAMPON PREPARATIONS FOR CONCENTRATING ANTIBODIES AND METHODS FOR USE THEREOF |
| CA2504134C (en) * | 2002-11-01 | 2012-03-06 | Bayer Healthcare Llc | Process for concentration of macromolecules |
| GB0229444D0 (en) | 2002-12-18 | 2003-01-22 | Royal Free Hampstead Nhs Trust | Diagnostic method and assay kit |
| JP2006515227A (ja) * | 2003-02-24 | 2006-05-25 | ジーティーシー バイオセラピューティックス インコーポレイテッド | 十字流濾過の方法およびそのための装置 |
| PL2335725T3 (pl) | 2003-04-04 | 2017-04-28 | Genentech, Inc. | Preparaty zawierające wysokoskoncentrowane przeciwciała i białka |
| MXPA06008435A (es) | 2004-01-30 | 2007-05-23 | Suomen Punainen Risti Veripalvelu | Proceso de manufactura de una inmunoglobulina libre de virus. |
| US20060051347A1 (en) | 2004-09-09 | 2006-03-09 | Winter Charles M | Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof |
| JP6044754B2 (ja) | 2012-01-19 | 2016-12-14 | 株式会社ジェイテクト | クラッチプレートおよびその製造方法 |
-
2005
- 2005-09-06 US US11/220,362 patent/US20060051347A1/en not_active Abandoned
- 2005-09-07 TW TW094130719A patent/TWI372630B/zh active
- 2005-09-07 MY MYPI20104600 patent/MY150549A/en unknown
- 2005-09-07 MY MYPI20054224A patent/MY162525A/en unknown
- 2005-09-08 ES ES10009914T patent/ES2968070T3/es active Active
- 2005-09-08 DK DK10009914.2T patent/DK2292636T3/da active
- 2005-09-08 LT LTEP10009914.2T patent/LT2292636T/lt unknown
- 2005-09-08 ZA ZA200701626A patent/ZA200701626B/xx unknown
- 2005-09-08 PL PL05806393T patent/PL1786830T3/pl unknown
- 2005-09-08 SI SI200532316T patent/SI2292636T1/sl unknown
- 2005-09-08 LT LTEP22178117.2T patent/LT4108259T/lt unknown
- 2005-09-08 MX MX2012011125A patent/MX342788B/es unknown
- 2005-09-08 SG SG2011088622A patent/SG177161A1/en unknown
- 2005-09-08 AU AU2005285243A patent/AU2005285243C1/en active Active
- 2005-09-08 ES ES20200642T patent/ES2942574T3/es active Active
- 2005-09-08 SI SI200532312T patent/SI3805248T1/sl unknown
- 2005-09-08 CN CN201510468312.XA patent/CN104961797B/zh active Active
- 2005-09-08 CA CA2577317A patent/CA2577317C/en active Active
- 2005-09-08 RU RU2007110534/13A patent/RU2390524C2/ru active
- 2005-09-08 DK DK22178117.2T patent/DK4108259T3/da active
- 2005-09-08 DK DK05806393.4T patent/DK1786830T3/en active
- 2005-09-08 PL PL22178117.2T patent/PL4108259T3/pl unknown
- 2005-09-08 PL PL20200642.5T patent/PL3805248T3/pl unknown
- 2005-09-08 EP EP22178117.2A patent/EP4108259B1/en active Active
- 2005-09-08 ES ES05806393.4T patent/ES2528541T3/es active Active
- 2005-09-08 PT PT202006425T patent/PT3805248T/pt unknown
- 2005-09-08 MX MX2007002812A patent/MX2007002812A/es not_active Application Discontinuation
- 2005-09-08 KR KR1020077007862A patent/KR20070109975A/ko not_active Application Discontinuation
- 2005-09-08 FI FIEP20200642.5T patent/FI3805248T3/fi active
- 2005-09-08 CN CN2012103764183A patent/CN102911268A/zh active Pending
- 2005-09-08 EP EP05806393.4A patent/EP1786830B1/en not_active Revoked
- 2005-09-08 PT PT58063934T patent/PT1786830E/pt unknown
- 2005-09-08 NZ NZ553239A patent/NZ553239A/en unknown
- 2005-09-08 JP JP2007531302A patent/JP5210633B2/ja active Active
- 2005-09-08 KR KR1020127030933A patent/KR101528970B1/ko active IP Right Review Request
- 2005-09-08 EP EP20200642.5A patent/EP3805248B1/en active Active
- 2005-09-08 PL PL10009914.2T patent/PL2292636T3/pl unknown
- 2005-09-08 FI FIEP10009914.2T patent/FI2292636T3/fi active
- 2005-09-08 BR BRPI0515649A patent/BRPI0515649B8/pt active IP Right Grant
- 2005-09-08 SI SI200531932T patent/SI1786830T1/sl unknown
- 2005-09-08 DK DK20200642.5T patent/DK3805248T5/da active
- 2005-09-08 EP EP10009914.2A patent/EP2292636B9/en active Active
- 2005-09-08 LT LTEP20200642.5T patent/LT3805248T/lt unknown
- 2005-09-08 PT PT221781172T patent/PT4108259T/pt unknown
- 2005-09-08 PT PT100099142T patent/PT2292636T/pt unknown
- 2005-09-08 CN CN200580038351.0A patent/CN101056885B/zh active Active
- 2005-09-08 HU HUE20200642A patent/HUE061899T2/hu unknown
- 2005-09-08 EP EP22178156.0A patent/EP4104859B1/en active Active
- 2005-09-08 SI SI200532317T patent/SI4108259T1/sl unknown
- 2005-09-08 WO PCT/US2005/031844 patent/WO2006031560A2/en active Application Filing
- 2005-09-08 HU HUE10009914A patent/HUE065025T2/hu unknown
- 2005-09-09 PE PE2005001049A patent/PE20060816A1/es active IP Right Grant
- 2005-09-09 AR ARP050103779A patent/AR050641A1/es active IP Right Grant
- 2005-09-09 GT GT200500254A patent/GT200500254A/es unknown
-
2006
- 2006-09-29 US US11/537,577 patent/US20070237762A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-02-15 IL IL181372A patent/IL181372A/en active IP Right Grant
- 2007-02-23 TN TNP2007000069A patent/TNSN07069A1/en unknown
- 2007-02-28 EC EC2007007282A patent/ECSP077282A/es unknown
- 2007-03-16 NO NO20071432A patent/NO333660B1/no unknown
- 2007-04-06 MA MA29809A patent/MA28991B1/fr unknown
- 2007-06-27 HK HK07106910.7A patent/HK1101249A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-02-19 US US12/389,140 patent/US20090214522A1/en not_active Abandoned
-
2011
- 2011-11-24 JP JP2011256451A patent/JP5426641B2/ja active Active
- 2011-12-08 IL IL216851A patent/IL216851A0/en unknown
-
2014
- 2014-04-21 US US14/257,907 patent/US10370456B2/en active Active
-
2016
- 2016-04-05 HK HK16103797.1A patent/HK1215869A1/zh unknown
-
2020
- 2020-09-10 US US17/017,465 patent/US20210095050A1/en active Pending
-
2022
- 2022-11-01 US US17/978,913 patent/US11767370B2/en active Active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11767370B2 (en) | Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof | |
| CN103889555A (zh) | 通过超滤制备包含高度浓缩的抗体的组合物的方法 | |
| US20130273607A1 (en) | Methods for processing inclusion bodies |