KR20190079530A - 투석 여과 방법 - Google Patents
투석 여과 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20190079530A KR20190079530A KR1020180165984A KR20180165984A KR20190079530A KR 20190079530 A KR20190079530 A KR 20190079530A KR 1020180165984 A KR1020180165984 A KR 1020180165984A KR 20180165984 A KR20180165984 A KR 20180165984A KR 20190079530 A KR20190079530 A KR 20190079530A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- buffer
- concentration
- protein
- dialysis filtration
- sodium
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 50
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 title abstract 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 146
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 94
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 94
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 39
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 68
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 67
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 41
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 41
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 41
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid group Chemical group C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 26
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 26
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 26
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 claims description 21
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 19
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 17
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 17
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 claims description 7
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 235000011167 hydrochloric acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 6
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 claims description 6
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M sodium fluoride Chemical compound [F-].[Na+] PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 5
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 5
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 4
- 229910004261 CaF 2 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims 2
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 72
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 abstract description 3
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 31
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 21
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 16
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 12
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 10
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 10
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 10
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 8
- 229940085991 phosphate ion Drugs 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 3
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 2
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 2
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- PZTWBYCZTVLVPV-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCCC1CNCCN1CCS(O)(=O)=O PZTWBYCZTVLVPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910052789 astatine Inorganic materials 0.000 description 1
- RYXHOMYVWAEKHL-UHFFFAOYSA-N astatine atom Chemical compound [At] RYXHOMYVWAEKHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052790 beryllium Inorganic materials 0.000 description 1
- ATBAMAFKBVZNFJ-UHFFFAOYSA-N beryllium atom Chemical compound [Be] ATBAMAFKBVZNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229910052729 chemical element Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001139 pH measurement Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 229910052705 radium Inorganic materials 0.000 description 1
- HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N radium atom Chemical compound [Ra] HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 description 1
- 229910052701 rubidium Inorganic materials 0.000 description 1
- IGLNJRXAVVLDKE-UHFFFAOYSA-N rubidium atom Chemical compound [Rb] IGLNJRXAVVLDKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052712 strontium Inorganic materials 0.000 description 1
- CIOAGBVUUVVLOB-UHFFFAOYSA-N strontium atom Chemical compound [Sr] CIOAGBVUUVVLOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Immunology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
본 발명은 2 단계의 투석 여과를 통한 버퍼 변환 방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 단백질을 포함하는 용액의 투석 여과 방법, 이를 이용한 단백질 제제의 제조 방법 및 이를 이용한 단백질 제제에 관한 것이다. 본 발명은 단백질을 함유하고 있는 시료의 버퍼 변환 및 농축 공정을 설립하는데 빠르고 효과적으로 진행 할 수 있으며, 단백질 의약품 제형을 원하는 버퍼와 원하는 농도로 효율적으로 생산할 수 있다. 또한, 각 단계별로 pH 변동성이 적어 단백질 안정성을 유지하는데 효과적이다.
Description
본 발명은 2 단계의 투석 여과를 통한 버퍼 변환 방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 단백질을 포함하는 용액의 투석 여과 방법, 이를 이용한 단백질 제제의 제조 방법 및 이를 이용한 단백질 제제에 관한 것이다.
시중에 판매되고 있는 단백질 의약품은 비경구 투여용 제품이 대부분이며, 그 중에서도 정맥 투여용 제품이 가장 많다. 하지만, 주기적으로 투여 해야 하는 단백질 의약품 특성상 정맥 투여 방법 보다는 피하 투여 방법이 사용 편리성 측면에서 환자들에게 우호적이다. 이에 따라, 여러 제약회사에서 기존 정맥 투여용 제품을 피하 투여용 제품으로 전환하여 개발하고 있는 추세이다.
피하 투여용 제품은 정맥 투여용 제품보다 개발하기 까다롭다. 그 이유는 다량의 단백질 의약품을 피하에 주입할 경우, 피하 주위 조직에 압력을 주어 통증을 유발시킨다. 따라서, 이 통증을 경감시키기 위해 단백질 농도를 기존 정맥 투여용 제품 보다 적게는 2배에서 많게는 5배까지 증가시켜야 한다.
단백질 의약품의 단백질 농도를 높이고 원하는 제형의 버퍼로 변환하기 위해 가장 빈번하게 사용되는 방법은 접선유동여과(TFF, Tangential Flow Filtration) 방법이다. 접선유동여과 방식은 비교적 간단한 기계 장치와 멤브레인(Membrane)만을 사용하여 단백질을 원하는 제형의 버퍼로 변환하고 농축시킬 수 있기 때문에 많이 사용한다.
기존 단백질 농도가 상대적으로 낮은 혈관 투여용 제품의 버퍼를 변경하고자 할 때에는, 변환하고자 하는 버퍼로 기존 버퍼를 변환하고 목표 농도까지 단백질을 농축시키면 원하는 버퍼와 목표 단백질 농도로 단백질 의약품을 손 쉽게 생산할 수 있었다. 하지만, 피하 투여용 제품과 같이, 단백질 농도가 높아지게 되면 상대적으로 전하를 띄는 단백질과 버퍼 내에 포함되어 있는 화학 물질이 정전기적으로 상호 작용하여 원하는 버퍼로 완전히 버퍼 변환을 하는 것이 어려워진다. 또한, 단백질과 정전기적으로 상호 작용하고 있던 잔류 화학 물질들이 단백질이 농축됨에 따라 함께 농축되는 현상이 발생하게 된다. 이에 따라, 목표 농도로 단백질을 농축할 때, 버퍼 변환 시 사용하였던 버퍼에 있는 몰 수의 화학 물질 보다 더 높은 몰 수의 화학 물질이 포함되어 있는 현상이 발생하게 된다.
즉, 고농도 단백질 의약품의 버퍼를 원하는 버퍼로 완전히 변환하는 것이 매우 어렵고 까다롭기 때문에, 최근, 보다 빠르고 쉽게 원하는 버퍼로 변환할 수 있는 공정 개발이 절실히 필요하였다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 단백질을 포함하는 용액의 버퍼 변환을 위한 투석 여과 방법을 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 상기 방법을 이용하여 단백질 제제의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 상기 방법을 이용하여 제조된 단백질 제제를 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하고자, 본 발명의 일 구현예에서 a) 단백질 함유 시료에 염(salt)을 포함하는 제형화 하고자 하는 목적 버퍼로 1차 투석 여과를 실시하는 단계; 및 b) 물 또는 200 mM 이하의 희석 용액으로 2차 투석 여과를 실시하는 단계를 포함하는 투석 여과 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 투석 여과 방법은 접선유동여과(Tangential Flow Filtration) 방식일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단백질은 특별히 한정되지 않으나, 등전점(pI)이 8 이상인 단백질일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단계 a) 이후의 pH는 항체 등전점(pI) 보다 1.0 이상 낮은 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단백질 함유 시료는 전기전도도가 0.1 내지 100 ms/cm일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단계 a)의 염은 할로겐 원소와 1족 또는 2족의 금속 원소를 포함하는 화합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 염(salt)은 NaCl, NaF, NaBr, KF, KCl, KBr, MgF2, MgCl2, MgBr2, CaF2, CaCl2 및 CaBr2로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 염은 10 내지 200 mM의 농도로 처리할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 목적 버퍼는 시트르산, 시트르산 나트륨, 아세트산, 아세트산나트륨, 인산, 인산나트륨, 황산, 황산나트륨, 염산, 염화칼륨, 황산칼륨, 인산칼륨, 수산화 나트륨, 트리스(Tris), MES(2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid), HEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid) 및 CHAPS(3-[(3-cholamidopropyl)-dimethylammonio]-1-propane sulfonate)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 버퍼 용액일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단계 b)에서 물은 전기전도도 1 ms/cm 이하의 정제된 물일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단계 b)의 200 mM 이하의 희석 용액은 시트르산, 시트르산 나트륨, 아세트산, 아세트산나트륨, 인산, 인산나트륨, 황산, 황산나트륨, 염산, 염화칼륨, 황산칼륨, 인산칼륨, 수산화 나트륨, 트리스(Tris), MES(2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid), HEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid) 및 CHAPS(3-[(3-cholamidopropyl)-dimethylammonio]-1-propane sulfonate) 로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 a) 또는 단계 b)는 필요에 따라 1회 이상 수행될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단계 b) 이후에, 단백질 함유 시료의 단백질 농도를 50mg/ml 이상으로 농축 시키는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 일 구현예에서 상기 방법을 이용한 단백질 제제의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 일 구현예에서 상기 방법을 이용하여 제조된 단백질 제제를 제공한다.
본 발명은 단백질을 함유하고 있는 시료의 버퍼 변환 및 농축 공정을 설립하는데 빠르고 효과적으로 진행 할 수 있다. 또한, 단백질 의약품 제형을 원하는 버퍼와 원하는 농도로 효율적으로 생산할 수 있으며, 각 단계별로 pH 변동성이 적어 단백질의 안정성을 유지하는데 효과적이다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 접선 유동 여과방식을 이용한 단백질을 함유하고 있는 시료의 버퍼변환 단계 및 농축 단계를 도시한 것이다.
도 2는 실시예 1 내지 3 및 비교예 3의 2차 버퍼변환 시 pH 변동을 나타낸 그래프이다.
도 2는 실시예 1 내지 3 및 비교예 3의 2차 버퍼변환 시 pH 변동을 나타낸 그래프이다.
고농도 단백질 의약품의 버퍼를 원하는 버퍼로 완전히 변환하는 것이 매우 어렵고 까다롭기 때문에, 최근, 보다 빠르고 쉽게 원하는 버퍼로 변환할 수 있는 공정 개발이 절실히 필요하였다 이에, 본 발명은 2 단계의 투석 여과를 통한 버퍼 변환 방법을 완성하였다.
본 발명은 단백질을 함유하고 있는 시료의 버퍼 변환 및 농축 공정을 설립하는데 빠르고 효과적으로 진행 할 수 있다. 또한, 단백질 의약품 제형을 원하는 버퍼와 원하는 농도로 효율적으로 생산할 수 있으며, 각 단계별로 pH 변동성이 적어 단백질의 안정성을 유지하는데 효과적이다.
본 발명을 보다 용이하게 이해하기 위하여, 본 발명에서 사용된 용어가 하기에 정의된다.
“목적 버퍼”는 최종적으로 제형화 하고자 하는 버퍼를 말한다. 예를 들어, 최종 제형의 버퍼가 아세트산나트륨이라면, 이것이 목적 버퍼가 된다.
“희석 용액”은 버퍼로서 사용 가능한 200mM 이하의 용액을 의미한다. 본 발명에서 희석 용액은 목적 버퍼를 희석하는 용도로 사용된다.
“투석 여과”는 보통의 여과법으로 분리하기 어려운 콜로이드 입자나 분자를 멤브레인, 황산지, 방광 막, 콜로디온 따위를 이용하여 투석을 써서 압력을 주어 거르는 방법을 의미한다.
“접선유동여과(Tangential Flow Filtration) 방식”은“접선 유동 여과” 와“멤브레인”을 사용하는 버퍼 변환 및 농축 방법을 의미한다. “접선 유동 여과”는 여러 가지 필터 방법 중 하나로 유체 흐름 방향과 멤브레인에 걸리는 압력이 접선을 이루게 만드는 방법이다. “멤브레인”은 접선 유동 여과 방식을 사용하여 여과하기 위해 필요한 물질이다. 크기배제의 원리에 따라 멤브레인 공극의 크기보다 큰 물질은 여과되지 않고 멤브레인 공극의 크기보다 작은 물질은 여과시키는 능력을 갖는다. “멤브레인”은 다음과 같은 다수의 회사로부터 다양한 명칭 하에 시판된다: Delta Regenerated cellulose, Omega PES, Cadence Single use membrane (Pall corporation 에서 시판, 미국 뉴욕 주 포트워싱턴), Biomax PB, Ultracel PLC Ultracel PL membrane, Pellicon (Merck 에서 시판, 독일 다름슈타트), Polyethersulfone Ultrafilter, Sartocon, Hydrosart(Sartorius 에서 시판, 독일 괴팅겐).
본 발명의 접선 유동 여과 방식에 사용 가능한 멤브레인 물질은 상기 시판되는 멤브레인 물질을 모두 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 일 실시예에서는 접선 유동 여과 방식 멤브레인으로 Pellicon 을 사용하였다.
“항체”는 2개의 중쇄(Heavy Chain) 및 2개의 경쇄(Light Chain)가 디설파이드 결합에 의해 서로 연결되어 있는 4개의 폴리펩타이드쇄로 이루어진 면역글로불린 분자를 가리킨다. 기타 변화된 구조를 갖는 자연 발생 항체, 예를 들어 카멜리드 항체도 이 정의에 포함된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인(CH1, CH2 및 CH3)으로 이루어진다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인(CL)으로 이루어진다. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은, 골격 영역(FR)으로 불리는 보다 보존된 영역과 함께 배치된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 더욱 세분될 수 있다. 각각의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 이루어지고, 이들은 아미노 말단에서 카복시 말단까지 하기의 순서로 배열되어 있다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 안형국
“표피성장인자 (EGF; Epidermal growth factor)”는 수용체 EGFR (Epidermal growth factor receptor)에 결합하여 세포성장, 증식, 분화를 촉진하며, 인간 EGF는 53개의 아미노산으로 이루어진다 (Exp Cell Res., 284(1):2-13, 2003). 또한 이와 같은 EGF는 피부 및 헤어의 재생에 중요한 역할을 한다고 보고되고 있다 (J Dermatol Sci., 72(2):81-86, 2013). EGF의 등전점은 pI 4.0 - pI 4.55의 여러 종류가 있다 (The Journal of Biological Chemistry, 259(5):3047-3052, 1984).
“할로겐 원소”는 주기율표 제 17족 원소 가운데 F(플루오르), Cl(염소), Br(브롬), I(아이오딘), At(아스타틴)의 다섯을 통틀어 이르는 말이다.
“1족 금속원소”는 주기율표의 첫 번째 족에 속하는 화학 원소, H(수소), Li(리튬), Na(나트륨), K(칼륨), Rb(루비듐), Cs(세슘) 및 Fr(프랑슘)을 통틀어 이르는 말이다.
“2족 금속원소”는 주기율표의 제2족 원소 Be(베릴륨), Mg(마그네슘), Ca(칼슘), Sr(스트론튬), Ba(바륨) 및 Ra(라듐)을 통틀어 이르는 말이다.
본 발명의 다양한 측면은 본원에 추가로 상세히 기술한다.
본 발명의 일 구현예에서 a) 단백질 함유 시료에 염(salt)을 포함하는 제형화 하고자 하는 목적 버퍼로 1차 투석 여과를 실시하는 단계; 및 b) 물 또는 200mM 이하의 희석 용액으로 2차 투석 여과를 실시하는 단계를 포함하는 투석 여과 방법을 제공한다.
상기 물은 순수한 물로 오염 물질을 제거하기 위해 역삼투압 또는 증류 방법을 이용하여 정제된 물로 전기전도도 1ms/cm 이하의 용액을 의미한다.
상기 희석 용액은 버퍼로 사용 가능한 용액의 희석 용액을 의미하며, 보다 바람직하게는 희석된 목적 버퍼일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 버퍼 변환 방법은 투석일 수 있고, 그 중에서도 접선유동여과(Tangential Flow Filtration) 방식일 수 있다. 상기 접선 유동 여과 방식은 멤브레인을 이용할 수 있으며, 시판되는 멤브레인 물질을 모두 사용 가능하다. 본 발명의 일 구현예에서는, 멤브레인으로 pellicon 멤브레인을 사용한다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단백질은 EGF 등 제한 없이 사용될 수 있다. 보다 바람직하게는 등전점(pI)이 8 이상인 단백질일 수 있는데, 등전점이 6 미만인 단백질의 경우, pH 5~6 사이의 버퍼에서 단백질이 음성 전하를 띄기 때문에 본 발명의 투석 여과 방법에 적합하지 않을 수 있다. 보다 바람직하게 상기 단백질은 항체일 수 있으며, 구체적으로는 트라스트주맙 또는 인플릭시맙일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단계 a) 이후의 pH는 항체 등전점(pI) 보다 1.0 이상 낮은 것을 특징으로 할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 단계 a) 이후의 pH는 항체 등전점(pI) 보다 1.0 이상, 1.5 이상, 2.0 이상, 2.5 이상, 3.0 이상, 3.5 이상, 4.0 이상, 4.5 이상 낮을 수 있다.
본 발명의 실시예 1에 따르면, 단계 a) 이전의 pH는 6.0이었으나, 단계 a) 이후의 pH는 4.5 로 확인되어(실험예 1 참고), 단계 a) 이후 pH는 항체 등전점(pI 8.4)보다 1.0 이상 낮게 확인되었다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단백질 함유 시료는 전기전도도가 0.1 내지 100 ms/cm일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단계 a)의 염은 할로겐 원소, 1족 금속 원소 및 2족의 금속 원소로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나를 포함하는 화합물일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 염(salt)은 NaCl, NaF, NaBr, KF, KCl, KBr, MgF2, MgCl2, MgBr2, CaF2, CaCl2 및 CaBr2로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 보다 바람직하게 염은 NaCl, KCl, MgCl2 또는 CaCl2 일 수 있고, 더욱 바람직하게는 MgCl2 또는 CaCl2 일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 염은 10 내지 200 mM 의 농도, 20 내지 180 mM 의 농도, 30 내지 160 mM의 농도, 40 내지 140 mM의 농도, 50 내지 120 mM의 농도, 60 내지 110 mM의 농도, 70 내지 110 mM의 농도, 80 내지 110 mM의 농도로 처리될 수 있다. 상기 염을 10 mM 미만으로 처리할 경우, 버퍼 변환이 제대로 되지 않는 부작용이 있을 수 있으며, 200 mM 농도 초과로 처리할 경우, 잔류 염의 농도가 높아져 삼투압이 높아지는 부작용이 있을 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 목적 버퍼는 시트르산, 시트르산 나트륨, 아세트산, 아세트산나트륨, 인산, 인산나트륨, 황산, 황산나트륨, 염산, 염화칼륨, 황산칼륨, 인산칼륨, 수산화 나트륨, 트리스(Tris), MES(2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid), HEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid) 및 CHAPS(3-[(3-cholamidopropyl)-dimethylammonio]-1-propane sulfonate)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 버퍼 용액일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 단백질 제제를 생산하는데 사용 가능한 목적 버퍼로는 시트르산, 시트르산나트륨, 아세트산, 아세트산나트륨, 인산 및 인산나트륨 중에서 선택되는 어느 하나 이상 일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서는 목적 버퍼를 아세트산나트륨으로 설정하여, 인산 나트륨 버퍼에서 아세트산나트륨 버퍼로 버퍼 변환을 시도하였다.
본 발명의 또 다른 일 구현예에서는 목적 버퍼를 시트르산나트륨으로 설정하여, 인산나트륨 버퍼에서 시트르산나트륨 버퍼로 버퍼 변환을 시도하였다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단계 b)에서 물은 전기전도도 1ms/cm 이하의 정제된 물일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단계 b)의 200mM 이하의 희석 용액은 시트르산, 시트르산나트륨, 아세트산, 아세트산나트륨, 인산, 인산나트륨, 황산, 황산나트륨, 염산, 염화칼륨, 황산칼륨, 인산칼륨, 수산화나트륨, 트리스(Tris), MES(2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid), HEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid) 및 CHAPS(3-[(3-cholamidopropyl)-dimethylammonio]-1-propane sulfonate) 로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 보다 바람직하게 상기 단계 b)의 희석 용액은 상기 단계 a)에 사용된 목적 버퍼와 같은 버퍼이고, 이의 희석된 용액일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 단백질 제제를 생산하는데 사용 가능한 희석 용액으로는 시트르산, 시트르산나트륨, 아세트산, 아세트산나트륨, 인산 및 인산나트륨 중에서 선택되는 어느 하나 이상 일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 a) 또는 단계 b)는 필요에 따라 1회 이상 수행될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 단계 b) 이후에, 단백질 함유 시료의 단백질 농도를 50mg/ml 이상으로 농축 시키는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다. 대부분, 단백질 함유 시료의 농축 과정에서 원치 않는 화학 물질이 농축되어, 목표하는 버퍼 조성으로의 변환이 어렵다. 하지만, 본 발명의 염 처리 과정을 포함하는 2단계 투석 여과 방법을 이용하면, 목표하는 버퍼 조성으로 손쉽게 변환이 가능하다.
본 발명의 다른 일 구현예에서 상기 방법을 이용한 단백질 제제의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 일 구현예에서 상기 방법을 이용하여 제조된 단백질 제제를 제공한다.
이하, 실시 예에 의해 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오직 본 발명을 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 국한되는 것은 아니다.
실시예 1: 트라스트주맙 제제의 2단계 버퍼 변환(인산나트륨 → 아세트산나트륨)
트라스트주맙(pI 8.4, 150kDa)을 포함하는 제제에 대하여 Pellicon 멤브레인을 사용하고, 접선 유동 여과방식을 이용하여 버퍼 변환 및 단백질 농축을 진행하였다. 버퍼 변환은 인산나트륨 버퍼(50mM, pH 6.0)에서 아세트산나트륨 버퍼(25mM)로 교체하고자 하였다.
실험은 도 1에 표시된 순서에 따라 진행 되었다. 20mM 아세트산나트륨 및 100mM 염화나트륨을 포함하는 버퍼(pH 4.5)로 8배의 버퍼 변환 볼륨만큼 1차 투석 여과를 진행 하였고, 뒤이어, 1mM 아세트산나트륨을 포함하는 버퍼(pH 4.0)로 8배의 버퍼 변환 볼륨만큼 2차 투석 여과를 진행하였다.
그 후, 버퍼 변환된 트라스트주맙을 목표 단백질 농도 222g/L로 농축하였고, 아세트산나트륨의 농도가 25mM가 될 때까지 첨가해 주었다. 최종적으로 버퍼 변환 및 농축이 완료된 제제의 조성은 아래와 같다.
| 단계 | 아세트산 이온 농도 | 인산 이온 농도 | 항체 농도 |
| 투석 여과 전 | 0 mM | 54.7 mM | 50 mg/ml |
| 1차 투석 여과 후 | 3.5 mM | 미검출 | 50 mg/ml |
| 2차 투석 여과 후 | 1.1 mM | 미검출 | 50 mg/ml |
| 농축 후 | 1.5 mM | 미검출 | 222 mg/ml |
| 버퍼 첨가 후 | 25 mM | 미검출 | 200 mg/ml |
| 목표치 | 25 mM | 미검출 | 200 mg/ml |
표 1 의 결과에서 볼 수 있듯, 20mM 아세트산 및 100mM 염화나트륨을 포함하는 버퍼로 1차 투석 여과를 실시했을 때, 아세트산나트륨의 농도는 3.5mM로 측정되었다. 그 후, 1mM 아세트산 버퍼로 2차 투석 여과를 실시했을 때, 아세트산나트륨 농도는 1.1mM로 측정되었다. 또, 농축 후의 아세트산나트륨의 농도는 1.5mM로 아세트산나트륨 버퍼의 농도 1mM와 크게 다르지 않았다.
기존 트라스트주맙 제제가 가지고 있었던 인산나트륨은 모든 샘플에서 검출 되지 않은 것으로 미루어 보아, 버퍼가 인산나트륨에서 아세트산나트륨으로 완전히 변환된 것을 확인하였다.
실시예 2: 인플릭시맙 제제의 2단계 버퍼 변환(인산나트륨 → 아세트산나트륨)
인플릭시맙(pI 8.2, 150kDa)을 포함하는 제제에 대하여 Pellicon 멤브레인을 사용하고, 접선 유동 여과방식을 이용하여 버퍼 변환 및 단백질 농축을 진행하였다. 버퍼 변환은 인산나트륨 버퍼(50mM, pH 6.0)에서 아세트산나트륨 버퍼(10mM)로 교체하고자 하였다.
실험은 도 1에 표시된 순서에 따라 진행 되었다. 20mM 아세트산나트륨 및 100mM 염화나트륨을 포함하는 버퍼(pH 4.5)로 8배의 버퍼 변환 볼륨만큼 1차 투석 여과를 진행 하였고, 뒤이어, 1mM 아세트산나트륨을 포함하는 버퍼(pH 4.0)로 8배의 버퍼 변환 볼륨만큼 2차 투석 여과를 진행하였다.
그 후, 버퍼 변환된 인플릭시맙을 목표 단백질 농도 222g/L로 농축하였고, 아세트산나트륨의 농도가 10mM이 될 때까지 첨가해 주었다. 최종적으로 버퍼 변환 및 농축이 완료된 제제의 조성은 아래와 같다.
| 단계 | 아세트산 이온 농도 | 인산 이온 농도 | 항체 농도 |
| 투석 여과 전 | 0 mM | 54.7 mM | 50 mg/ml |
| 1차 투석 여과 후 | 3.3 mM | 미검출 | 50 mg/ml |
| 2차 투석 여과 후 | 1.1 mM | 미검출 | 50 mg/ml |
| 농축 후 | 1.4 mM | 미검출 | 222 mg/ml |
| 버퍼 첨가 후 | 8.9 mM | 미검출 | 200 mg/ml |
| 목표치 | 10 mM | 미검출 | 200 mg/ml |
표 2 의 결과에서 볼 수 있듯, 20mM 아세트산 및 100mM 염화나트륨을 포함하는 버퍼로 1차 투석 여과를 실시했을 때, 아세트산나트륨의 농도는 3.3mM로 측정되었다. 그 후, 1mM 아세트산 버퍼로 2차 투석 여과를 실시했을 때, 아세트산나트륨 농도는 1.1mM로 측정되었다. 또, 농축 후의 아세트산나트륨의 농도는 1.4mM로 아세트산나트륨 버퍼의 농도 1mM와 크게 다르지 않았다.
기존 인플릭시맙을 포함하는 제제가 가지고 있었던 인산나트륨은 모든 샘플에서 검출 되지 않은 것으로 미루어 볼 때, 버퍼가 인산나트륨에서 아세트산나트륨으로 완전히 변환된 것을 확인하였다.
실시예 3: 트라스트주맙 제제의 2단계 버퍼 변환(인산나트륨 → 시트르산나트륨)
트라스트주맙(pI 8.4, 150kDa)을 포함하는 제제에 대하여 Pellicon 멤브레인을 사용하고, 접선 유동 여과방식을 이용하여 버퍼 변환 및 단백질 농축을 진행하였다. 버퍼 변환은 인산나트륨 버퍼(50mM, pH 6.0)에서 시트르산나트륨 버퍼(25mM)로 교체하고자 하였다.
20mM 시트르산나트륨 및 100mM 염화나트륨을 포함하는 버퍼(pH 4.5)로 8배의 버퍼 변환 볼륨만큼 1차 투석 여과를 진행 하였고, 뒤이어, 1mM 시트르산나트륨을 포함하는 버퍼(pH 3.2)로 8배의 버퍼 변환 볼륨만큼 2차 투석 여과를 진행하였다.
그 후, 버퍼 변환된 트라스트주맙을 목표 단백질 농도 142 g/L로 농축하였고, 시트르산나트륨의 농도가 25mM가 될 때까지 첨가해 주었다. 최종적으로 버퍼 변환 및 농축이 완료된 제제의 조성은 아래와 같다.
| 단계 | 시트르산 이온 농도 | 인산 이온 농도 | 항체 농도 |
| 투석 여과 전 | 0 mM | 54.7 mM | 50 mg/ml |
| 1차 투석 여과 후 | 22.1 mM | 미검출 | 48 mg/ml |
| 2차 투석 여과 후 | 6.5 mM | 미검출 | 47 mg/ml |
| 농축 후 | 17.9 mM | 미검출 | 142 mg/ml |
| 버퍼첨가 후 | 42.2 mM | 미검출 | 136 mg/ml |
| 목표치 | 25 mM | 미검출 | 136 mg/ml |
표 3 의 결과에서 볼 수 있듯, 20mM 시트르산 및 100mM 염화나트륨을 포함하는 버퍼로 1차 투석 여과를 실시했을 때, 시트르산 농도는 22.1 mM로 측정되었다. 그 후, 1mM 시트르산 버퍼로 8 배 2차 투석 여과를 실시했을 때, 시트르산 농도는 6.5 mM로 측정되었다. 또, 농축 후의 시트르산의 농도는 17.9 mM로 단백질이 농축됨에 따라서 시트르산 농도가 높아짐을 확인하였다.
기존 트라스트주맙을 포함하는 제제가 가지고 있었던 인산나트륨은 모든 샘플에서 검출 되지 않은 것으로 미루어 보아, 버퍼가 인산나트륨에서 시트르산나트륨으로 완전히 변환된 것을 확인하였다.
실시예 4: 트라스트주맙 제제의 염화 마그네슘을 이용한 2단계 버퍼 변환(인산나트륨 → 아세트산나트륨)
트라스트주맙(pI 8.4, 150kDa)을 포함하는 제제에 대하여 Pellicon 멤브레인을 사용하고, 접선 유동 여과방식을 이용하여 버퍼 변환 및 단백질 농축을 진행하였다. 버퍼 변환은 인산나트륨 버퍼(50mM, pH 6.0)에서 아세트산나트륨 버퍼(25mM)로 교체하고자 하였다.
20mM 아세트산나트륨 및 50mM 염화 마그네슘을 포함하는 버퍼(pH 4.4)로 8배의 버퍼 변환 볼륨만큼 1차 투석 여과를 진행 하였고, 뒤이어, 1mM 아세트산나트륨을 포함하는 버퍼(pH 3.9)로 8배의 버퍼 변환 볼륨만큼 2차 투석 여과를 진행하였다.
그 후, 버퍼 변환된 트라스트주맙을 목표 단백질 농도 67 g/L로 농축하였고, 아세트산나트륨의 농도가 25mM가 될 때까지 첨가해 주었다. 최종적으로 버퍼 변환 및 농축이 완료된 제제의 조성은 아래와 같다.
| 단계 | 아세트산 이온 농도 | 인산 이온 농도 | 항체 농도 |
| 투석 여과 전 | 0 mM | 57.8 mM | 50 mg/ml |
| 1차 투석 여과 후 | 21.9 mM | 미검출 | 37 mg/ml |
| 2차 투석 여과 후 | 1.6 mM | 미검출 | 34 mg/ml |
| 농축 후 | 2.2 mM | 미검출 | 67 mg/ml |
| 버퍼 첨가 후 | 28.2 mM | 미검출 | 58 mg/ml |
| 목표치 | 25 mM | 미검출 | 58 mg/ml |
표 4 의 결과에서 볼 수 있듯, 20mM 아세트산 및 50mM 염화 마그네슘을 포함하는 버퍼로 1차 투석 여과를 실시했을 때, 아세트산 농도는 21.9mM로 측정되었다. 그 후, 1mM 아세트산 버퍼로 8 배 2차 투석 여과를 실시했을 때, 아세트산 농도는 1.6mM로 측정되었다. 또, 농축 후의 아세트산나트륨의 농도는 2.2mM로 아세트산 이온 농도 1mM와 크게 다르지 않았다.
기존 트라스트주맙을 포함하는 제제가 가지고 있었던 인산 이온은 모든 샘플에서 검출 되지 않은 것으로 미루어 보아, 버퍼가 인산나트륨에서 시트르산나트륨으로 완전히 변환된 것을 확인하였다.
비교예 1: 트라스트주맙 제제의 1단계 버퍼 변환(인산나트륨 → 아세트산나트륨)
트라스트주맙(pI 8.4, 150kDa)을 포함하는 제제에 대하여 Pellicon 멤브레인을 사용하고, 접선 유동 여과방식을 이용하여 버퍼 변환 및 단백질 농축을 진행하였다. 버퍼 변환은 인산나트륨 버퍼(50mM, pH 6.0)에서 아세트산나트륨 버퍼(25mM)로 교체하고자 하였다.
트라스트주맙을 50 mg/ml 포함하는 제제(50mM 인산나트륨 버퍼, pH 6.0)에 25mM 아세트산나트륨(pH 4.55)을 포함하는 버퍼로 10배의 버퍼 변환 볼륨만큼 투석 여과를 진행하였다.
그 후, 버퍼 변환된 트라스트주맙을 목표 단백질 농도 200g/L로 농축하였고, 최종적으로 버퍼 변환 및 농축이 완료된 제제의 조성은 아래와 같다.
| 단계 | 세트산 이온 농도 | 인산 이온 농도 | 항체 농도 |
| 투석 여과 전 | 0 mM | 54.7 mM | 50 mg/ml |
| 투석 여과 후 | 23.9 mM | 3 mM | 50 mg/ml |
| 농축 후 | 51 mM | 9 mM | 200 mg/ml |
| 목표치 | 25 mM | 미검출 | 200 mg/ml |
표 5의 결과에서 볼 수 있듯, 투석 여과 후 아세트산나트륨 농도가 23.9mM로 목표하는 버퍼인 25mM 아세트산나트륨에 근접하였으나, 농축 과정을 거친 후 아세트산나트륨 농도가 51mM로 급격히 증가함을 확인할 수 있었다. 또한, 인산나트륨도 온전히 제거가 되지 않아서, 농축 후에 9mM의 인산나트륨이 잔존함을 확인할 수 있었다.
따라서, 1단계의 투석 여과를 거치는 버퍼 변환 방법의 경우, 버퍼가 완전히 변환된 고농도 단백질 제제를 생성하는데 있어서 효과적이지 않음을 확인하였다.
비교예 2: 증류수를 이용한 트라스트주맙의 1단계 버퍼 변환(인산나트륨 → 아세트산나트륨)
트라스트주맙(pI 8.4, 150kDa)을 포함하는 제제에 대하여 Pellicon 멤브레인을 사용하고, 접선 유동 여과방식을 이용하여 버퍼 변환 및 단백질 농축을 진행하였다. 버퍼 변환은 인산나트륨 버퍼(50mM, pH 6.0)에서 아세트산나트륨 버퍼(25mM)로 교체하고자 하였다.
트라스트주맙을 50 mg/ml 포함하는 제제(50mM 인산나트륨 버퍼, pH 6.0)에 증류수로 10배 버퍼 변환 볼륨만큼 투석 여과를 진행하였다. 그 후, 버퍼 변환된 트라스트주맙을 목표 단백질 농도 222g/L로 농축하였고, 아세트산나트륨 버퍼를 농도가 25mM가 될 때까지 첨가해 주었다. 최종적으로 버퍼 변환 및 농축이 완료된 제제의 조성은 아래와 같다.
| 단계 | 아세트산 이온 농도 | 인산 이온 농도 | 항체 농도 |
| 투석 여과 전 | 0 mM | 54.7 mM | 50 mg/ml |
| 투석 여과 후 | 0.27 mM | 10.2 mM | 50 mg/ml |
| 농축 후 | 0.69 mM | 32.8 mM | 222 mg/ml |
| 버퍼 첨가 후 | 25 mM | 32.8 mM | 200 mg/ml |
| 목표치 | 25 mM | 미검출 | 200 mg/ml |
표 6의 결과에서 볼 수 있듯, 버퍼 첨가 후, 아세트산나트륨 농도는 25mM로 목표하는 버퍼 농도가 되었다. 하지만, 인산나트륨 버퍼가 32.8mM 검출되어, 인산나트륨 버퍼가 완전히 제거되지 않았음을 확인할 수 있었다.
따라서, 정제수를 이용한 1단계 버퍼 변환 방법의 경우, 버퍼가 완전히 변환된 고농도 단백질 제제를 생성하는데 있어서 효과적이지 않음을 확인하였다.
비교예 3: 아세트산을 이용한 트라스트주맙 제제의 2단계 버퍼 변환(인산나트륨 → 아세트산나트륨)
트라스트주맙(pI 8.4, 150kDa)을 포함하는 제제에 대하여 Pellicon 멤브레인을 사용하고, 접선 유동 여과방식을 이용하여 버퍼 변환 및 단백질 농축을 진행하였다. 버퍼 변환은 인산나트륨 버퍼(50mM, pH 6.0)에서 아세트산나트륨 버퍼(25mM)로 교체하고자 하였다.
트라스트주맙을 50 mg/ml 포함하는 제제(50mM 인산나트륨 버퍼, pH 6.0)에 아세트산나트륨 40mM로 10배 버퍼 변환 볼륨만큼 1차 투석 여과를 진행하였다. 그 후, 아세트산 5mM로 10배 버퍼 변환 볼륨만큼 2차 투석 여과를 진행하였다. 다음으로 버퍼 변환된 트라스트주맙을 목표 단백질 농도 200g/L로 농축하였다. 최종적으로 버퍼 변환 및 농축이 완료된 제제의 조성은 아래와 같다.
| 단계 | 아세트산 이온 농도 | 인산 이온 농도 | 항체 농도 |
| 투석 여과 전 | 0 mM | 54.7 mM | 50 mg/ml |
| 1차 투석 여과 후 | 40 mM | 1.2 mM | 50 mg/ml |
| 2차 투석 여과 후 | 10.2 mM | 1.2 mM | 50 mg/ml |
| 농축 후 | 34.6 mM | 3.8 mM | 200 mg/ml |
| 목표치 | 25 mM | 미검출 | 200 mg/ml |
그 결과, 표 7에 나타난 바와 같이, 농축 후 인산나트륨이 3.8mM 검출되어, 인산나트륨 버퍼가 완전히 제거되지 않았음을 확인할 수 있었다. 또한, 아세트산나트륨 농도도 농축 후 34.6mM로 목표치인 25mM을 크게 웃도는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 아세트산을 이용한 1단계 버퍼 변환 방법의 경우, 버퍼가 완전히 변환된 고농도 단백질 제제를 생성하는데 있어서 효과적이지 않음을 확인하였다.
비교예 4: 인산나트륨을 이용한 표피성장인자 (EGF)의 농축
표피성장인자(EGF, 6.2kDa)를 포함하는 제제에 대하여 Vivaspin 20 (MWCO 3,000) 멤브레인을 사용하고, 초고속 원심분리기(3500g)를 이용하여 단백질 농축을 진행하였다. 버퍼 조성은 20mM 인산나트륨 버퍼(pH 7.5)에서 단백질 농축을 진행하였다.
표피성장인자의 초기 농도는 4.6 mg/ml 이었으며, 1차 농축 후 19.54 mg/ml 이었으며, 2차 농축 후 46.63 mg/ml로 농축하였다. 농축이 진행되면서 표피성장인자의 음전하와 나트륨이온의 양전하 사이의 친화력으로 인하여, 나트륨 이온 농도가 높아짐을 확인할 수 있으며, 그 조성은 아래와 같다.
| 단계 | 나트륨 이온 농도 | 단백질 농도 |
| 농축 전 | 22 mM | 4.6 mg/ml |
| 1차 농축 후 | 37 mM | 19.54 mg/ml |
| 2차 농축 후 | 50 mM | 46.63 mg/ml |
그 결과, 표 8에 나타난 바와 같이, 표피성장인자 단백질 농도가 높아짐에 따라서 나트륨 이온 농도가 초기 (농축 전) 22 mM에서 1차 농축 후 37 mM, 2차 농축 후 50 mM로 점점 높아짐을 확인할 수 있었다. 표피성장인자의 등전점은 pI 4.0 내지 4.55인데 반하여, 농축 진행은 pH 7.5에서 진행되어 표피성장인자의 음전하와 나트륨이온의 양이온의 양전하 사이의 친화력으로 나트륨이온 농도가 높아짐을 확인할 수 있었다.
따라서, 고농도 단백질 제형 제조 시, 단백질의 등전점보다 높은 pH에서 단백질 농축을 진행하는 경우, 버퍼의 이온 농도가 변동되는 것을 확인하였다. 이에, 본 발명의 실시예 1 내지 4에 제시된 2단계 투석 여과 방법을 이용하여, 항체 외 단백질 또한 버퍼 변환 대상으로 사용 될 수 있음을 예상할 수 있다.
실험예 1: 각 버퍼 변환 방법에 따른 pH 변동성 측정 실험
실시예 1 내지 3 및 비교예 3의 2차 투석 여과 단계별 pH 변동성 측정 실험을 진행하였다. pH는 pH 측정 기기를 이용하여 각 버퍼변환 볼륨 마다 측정하였고, 그 결과는 도 2 및 표 9에 표시하였다.
| DF Volume | 실시예1 2차 버퍼변환시 pH 값 | 실시예2 2차 버퍼변환시 pH 값 | 실시예3 2차 버퍼변환시 pH 값 | 비교예3 2차 버퍼변환시 pH 값 |
| 0 | 3.91 | 3.97 | 4.21 | 4.24 |
| 1 | 3.83 | 3.86 | 4.18 | 4.46 |
| 2 | 3.79 | 3.76 | 4.05 | 4.59 |
| 3 | 3.70 | 3.73 | 3.93 | 4.72 |
| 4 | 3.76 | 3.79 | 3.92 | 4.80 |
| 5 | 3.84 | 3.89 | 3.92 | 4.83 |
| 6 | 3.98 | 3.98 | 3.92 | 4.86 |
| 7 | 4.05 | 4.09 | 3.92 | 4.87 |
| 8 | 4.05 | 4.13 | 3.92 | 4.87 |
표 9에 보이는 바와 같이, 실시예 1의 경우, pH 3.7 ~ 4.05의 pH 변동 폭을 보였고, 실시예 2의 경우, pH 3.73 ~ 4.13의 pH 변동 폭을 보였으며, 실시예 3의 경우, pH 3.92 ~ 4.21의 pH 변동 폭을 보였다(도 2 참조). 즉, 실시예 1 내지 3은 0.4 이하의 적은 pH 변동폭을 보였다.
반면, 비교예 3의 경우, pH 변동폭이 0.63으로 측정되어, 실시예 1 내지 3에 비하여 pH 변동폭이 큰 것을 확인하였다(도 2 참조). pH 변동성이 큰 경우, 단백질 제제의 안정성을 크게 저해할 수 있어, 버퍼 변환 공정으로 사용하기에 부적절하다.
따라서, 본 발명의 실시예에 의한 버퍼 변환 방법은 pH 변동성이 매우 적으므로, 안정한 고농도 단백질 제제를 생산하기 위한 버퍼 변환 방법으로 효과적임을 확인하였다.
Claims (15)
- a) 단백질 함유 시료에 염(salt)을 포함하는 제형화 하고자 하는 목적 버퍼로 1차 투석 여과를 실시하는 단계; 및
b) 물 또는 200 mM 이하의 희석 용액으로 2차 투석 여과를 실시하는 단계를 포함하는 투석 여과 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 투석 여과 방법은 접선유동여과(Tangential Flow Filtration) 방식을 이용하는 것을 특징으로 하는 투석 여과 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 단백질은 항체인 것을 특징으로 하는 투석 여과 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 단계 a) 이후 목적 버퍼의 pH는 항체 등전점(pI) 보다 1.0 이상 낮은 것을 특징으로 하는 투석 여과 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 단백질 함유 시료는 전기전도도가 0.1 내지 100 ms/cm인 것을 특징으로 하는 투석 여과 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 단계 a)의 염은 할로겐 원소와 1족 또는 2족의 금속 원소를 포함하는 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 투석 여과 방법.
- 제6항에 있어서, 상기 염은 NaCl, NaF, NaBr, KF, KCl, KBr, MgF2, MgCl2, MgBr2, CaF2, CaCl2 및 CaBr2로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 투석 여과 방법.
- 제1항, 제6항 및 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 염은 10 내지 200 mM의 농도로 처리하는 것을 특징으로 하는 투석 여과 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 목적 버퍼는 시트르산, 시트르산나트륨, 아세트산, 아세트산나트륨, 인산, 인산나트륨, 황산, 황산나트륨, 염산, 염화칼륨, 황산칼륨, 인산칼륨, 수산화 나트륨, 트리스(Tris), MES(2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid), HEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid) 및 CHAPS(3-[(3-cholamidopropyl)-dimethylammonio]-1-propane sulfonate)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 버퍼 용액인 것을 특징으로 하는 투석 여과 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 단계 b)에서 물은 전기전도도 1 ms/cm 이하의 정제된 물인 것을 특징으로 하는 투석 여과 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 단계 b)의 200 mM 이하의 희석 용액은 시트르산, 시트르산나트륨, 아세트산, 아세트산나트륨, 인산, 인산나트륨, 황산, 황산나트륨, 염산, 염화칼륨, 황산칼륨, 인산칼륨, 수산화 나트륨, 트리스(Tris), MES(2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid), HEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid) 및 CHAPS(3-[(3-cholamidopropyl)-dimethylammonio]-1-propane sulfonate)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 투석 여과 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 단계 a) 또는 단계 b)는 필요에 따라 1회 이상 수행되는 것을 특징으로 하는 투석 여과 방법.
- 제1항에 있어서, 단계 b) 이후에, 단백질 함유 시료의 단백질 농도를 50 mg/ml 이상으로 농축 시키는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 투석 여과 방법.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 방법을 이용한 단백질 제제의 제조 방법.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 방법을 이용하여 제조된 단백질 제제.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020170180426 | 2017-12-27 | ||
| KR20170180426 | 2017-12-27 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20190079530A true KR20190079530A (ko) | 2019-07-05 |
Family
ID=67063974
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020180165984A KR20190079530A (ko) | 2017-12-27 | 2018-12-20 | 투석 여과 방법 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20190079530A (ko) |
| WO (1) | WO2019132418A1 (ko) |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1991008749A1 (en) * | 1989-12-20 | 1991-06-27 | N.V. Innogenetics S.A. | Novel procedure for obtaining proteins starting from an extract of non-collagenous proteins from bony material and its use for the preparation of a novel protein inhibiting the proliferation of osteoblasts |
| KR100370502B1 (ko) * | 1996-12-04 | 2003-03-15 | 주식회사 엘지생명과학 | 대장균에서 발현된 세포외 신호조절 단백질 카이네이즈-1의 정제방법 |
| US20060051347A1 (en) * | 2004-09-09 | 2006-03-09 | Winter Charles M | Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof |
| KR100900013B1 (ko) * | 2007-12-04 | 2009-05-29 | 씨제이제일제당 (주) | 유체로부터 재조합 인간 에리스로포이에틴을 정제하는 방법 |
| US10329323B2 (en) * | 2014-07-25 | 2019-06-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Method for purifying antibodies using PBS |
-
2018
- 2018-12-20 KR KR1020180165984A patent/KR20190079530A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-12-20 WO PCT/KR2018/016343 patent/WO2019132418A1/ko active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2019132418A1 (ko) | 2019-07-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AT514675B1 (de) | Herstellung von faktor h (fh) und fh-derivaten aus plasma | |
| TW201141879A (en) | A method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield | |
| TW201321402A (zh) | 抗體純化方法 | |
| KR20000015935A (ko) | 농축 항체 제제 | |
| US20110236391A1 (en) | Method for obtaining an excipient-free antibody solution | |
| WO2002098445A1 (en) | Protein preparation | |
| TWI734233B (zh) | 抗體調配物 | |
| AU2017313268B2 (en) | Process for the preparation of highly concentrated liquid formulations containing biomolecules | |
| JP6117252B2 (ja) | Ｉｌ−１７抗体製剤 | |
| EP3991745A1 (en) | Formulations containing anti-cd47/pd-l1 bispecific antibody and preparation method therefor and use thereof | |
| KR20030084908A (ko) | 단백질로부터 시트레이트 및 알루미늄을 제거하는 방법 | |
| JP2018507250A5 (ko) | ||
| KR20220156534A (ko) | 고농도 항-Aβ 프로토피브릴 항체 제형물 및 이의 사용 방법 | |
| JPS6160817B2 (ko) | ||
| DE69631229T2 (de) | Herstellung von virusinaktivierten intravenös injektierbaren Globulin aus Immunserum | |
| KR20190079530A (ko) | 투석 여과 방법 | |
| CA3168716A1 (en) | Methods of preparing oligonucleotide compositions using ultrafiltration / diafiltration | |
| HUE029232T2 (en) | A method for preparing injectable formulations of protein derived from blood, and materials obtained using said method | |
| FR2701263A1 (fr) | Procédé d'obtention d'une composition aqueuse protéinique, composition correspondante, glycoprotéine contenue et son utilisation pour la stabilisation de l'albumine et la détection ou le dosage d'anticorps. | |
| CN116348486A (zh) | 在蛋白质纯化过程中降低宿主细胞蛋白质含量的方法 | |
| HUE029197T2 (en) | Adjustment of dissolved buffer by pre-filtration to a high concentration immunoglobulin formulation | |
| CN110198952B9 (zh) | 制备含有生物分子的高度浓缩的液体制剂的方法 | |
| CN118085011A (zh) | 制备含有生物分子的高度浓缩的液体制剂的方法 | |
| EP4069292A1 (en) | Stable compositions of fc multimers | |
| Faustino | Extração e Purificação de Imunoglobina G Com Sistemas Aquosos Bifásicos |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal |