KR20220156534A

KR20220156534A - 고농도 항-Aβ 프로토피브릴 항체 제형물 및 이의 사용 방법

Info

Publication number: KR20220156534A
Application number: KR1020227030919A
Authority: KR
Inventors: 노부오 요시다; 나오미 사쿠라모토; 다카히사 사카구치; 히로카즈 기토; 다카히로 오자와; 안잘리 조시; 융 웨 쑤; 피에르 수이약
Original assignee: 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤
Priority date: 2020-03-20
Filing date: 2021-03-19
Publication date: 2022-11-25
Also published as: US20230183328A1; EP4252777A2; WO2021186245A1; IL295383A; EP4121007A1; AU2021238951A1; CL2022002517A1; BR112022018766A2; CO2022012916A2; CN115315251A; MX2022011101A; JP2023518066A; TW202200201A; EP4252777A9; CA3174778A1; EP4252777A3

Abstract

BAN2401과 같은 인간 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 고농도의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편, 아르기닌, 폴리소르베이트 80, 및 약학적으로 허용 가능한 완충액을 포함하는 수성 약학 제형물이 본원에서 제공된다.

Description

고농도 항-Aβ 프로토피브릴 항체 제형물 및 이의 사용 방법

본 출원은 2020년 3월 20일에 출원된 미국 가출원 제62/992,746호 및 2020년 5월 19일에 출원된 미국 가출원 제63/027,263호에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 둘 모두의 내용은 전체가 본원에 참조로 포함된다.

알츠하이머병(AD)은 병인이 알려지지 않은 진행성 신경퇴행성 장애이며 노인들 사이에서 가장 흔한 치매 형태이다. 2006년에는 전세계적으로 2,660만 건의 AD 발병 사례가 있었고(범위: 1,140만 건 내지 5,940만 건)(Brookmeyer, R., et al., Forecasting the global burden of Alzheimer's Disease. Alzheimer Dement. 2007; 3:186-91), 미국에는 5백만 명이 넘는 사람들이 AD를 앓고 있는 것으로 보고되었다(2010 Alzheimer's disease facts and figures. Alzheimer Dement. 2010;6:158-94). 2050년까지 AD의 전세계 유병률은 1억 680만 명(범위: 4,720만 명 내지 2억 2,120만 명)까지 증가할 것으로 예측되며, 미국에서만의 유병률은 1,100만 명 내지 1,600만 명으로 추산된다(Brookmeyer, 상기 문헌 및 2010 Alzheimer's disease facts and figures, 상기 문헌).

이 질병은 일반적으로 천천히 진행되고 말기 대상체를 누워 지내게 하는 인지 기능의 전반적인 감소를 동반한다. AD 대상체는 전형적으로 증상 발병 후 3년 내지 10년 동안만 생존하지만 극단적인 2년 및 20년 생존도 알려져 있다(Hebert, L.E., et al., Alzheimer disease in the U.S. population: prevalence estimates using the 2000 census. Arch Neurol. 2003; 60:1119-1122). 사망 증명서에 사망 원인을 AD로 기재하는 경우가 거의 없기 때문에 AD로 인한 사망률은 실제보다 매우 적게 추산됨에도 불구하고, 미국에서 모든 사망의 7번째 주요 원인이며 65세 이상 미국인에서 5번째 주요 사망 원인이다(2010 Alzheimer's disease facts and figures, 상기 문헌).

조직학적으로, 이 질병은 연합 피질, 변연계 및 기저핵에서 주로 확인되는 신경염 플라크를 특징으로 한다. 이들 플라크의 주요 구성분은 아밀로이드 베타 펩타이드(Aβ)이다. Aβ는 다양한 입체형태 상태 - 단량체, 올리고머, 프로토피브릴 및 불용성 피브릴로 존재한다. 알츠하이머병의 발병과 Aβ 생산 사이의 역학 관계에 대한 상세사항은 알려져 있지 않다. 그러나 일부 항-Aβ 항체는 현재 알츠하이머병의 잠재적 치료제로서 임상 연구를 진행 중이다.

항-Aβ 항체 및 기타 단백질은 정맥내, 피하, 근육내 및 기타 수단을 통해 대상체에 투여될 수 있다. 항체의 투여량 및/또는 투여형은 적합한 약학 제형물을 개발하는 데 많은 과제를 제시할 수 있다. 예를 들어, 높은 항체 농도에서는 단백질-단백질 응집체의 형성 또는 단편화로 인해 항체의 안정성이 문제가 될 수 있다. 일반적으로 응집은 항체 농도가 증가함에 따라 증가한다. 더욱이, 고농도 항체 제형물은 장기 단백질 안정성 및 보관 수명을 달성하기 위해 고농도의 안정화제 및 기타 부형제를 필요로 한다. 고농도 항체 제형물은 또한 종종 점성이 있어서, 약학 제형물의 제조 및 투여를 잠재적으로 복잡하게 만든다.

Aβ 프로토피브릴에 결합하는 치료 유효량의 적어도 하나의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약학 제형물이 본원에서 제공된다. Aβ 프로토피브릴에 결합하는 80 mg/ml 내지 300 mg/ml의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약학 제형물이 또한 본원에서 제공되며, 항체는 BAN2401(레카네맙으로도 알려짐)이다. 본원에 제공된 약학 제형물은 유리한 것으로 확인되었다. 예를 들어, 고농도의 항-Aβ 프로토피브릴 항체(예를 들어, 100 mg/mL 또는 200 mg/mL)에도 불구하고, 단백질-단백질 응집율은 예기치 않게 낮고 전형적으로 훨씬 더 낮은 항체 농도(예를 들어, 10 mg/mL)로 나타나는 응집율과 필적한다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 약학 제형물은 상당히 더 낮은 농도의 항-Aβ 프로토피브릴 항체를 갖는 제형물보다 더 낮은 초기 응집체 비율을 나타낸다(예를 들어, 100 mg/mL 항-Aβ 프로토피브릴 항체에 대한 약 0.3% 초기 응집체 수준 대비 10 mg/mL 항-Aβ 프로토피브릴 항체에 대해 약 0.8% 초기 응집체 수준). 일부 구현예에서, 본원에 개시된 약학 제형물은 유의미하게 더 낮은 농도의 항-Aβ 프로토피브릴 항체를 갖는 제형물보다 더 낮은 눈에 보이지 않는 입자의 생성 속도를 나타낸다(예를 들어, 100 mg/mL 항-Aβ 프로토피브릴 항체에 대한 10.6 입자/mL 대비 10 mg/mL 항-Aβ 프로토피브릴 항체에 대해 12.6 입자/mL). 일부 구현예에서, 본원에 개시된 약학 제형물은 상당히 더 낮은 농도의 항-Aβ 프로토피브릴 항체를 갖는 제형물과 비교하여 감소된 응집율, 감소된 초기 응집 수준, 감소된 단백질 단편화 속도, 및/또는 눈에 보이지 않는 입자 형성의 감소를 나타낸다. 낮은 응집율, 초기 응집 수준, 단백질 단편화 속도 및/또는 눈에 보이지 않는 입자 생성은 증가된 안정성 및/또는 더 긴 제품 보관 수명을 허용할 수 있다. 더욱이, 본원에 개시된 약학 제형물의 부형제는 현재 시판되는 정맥내 제품에서보다 더 적은 양으로 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 약학 제형물의 pH 및 삼투압 농도는 정맥내 유체에서 희석 후 정맥내 투여에 허용 가능하다.

일부 구현예에서, 적어도 하나의 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.

일부 구현예에서, 적어도 하나의 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 서열 번호 5(HCDR1), 서열 번호 6(HCDR2) 및 서열 번호 7(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열 번호 8(LCDR1), 서열 번호 9(LCDR2), 및 서열 번호 10(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다.

각 도메인에 대한 아미노산 할당은 일반적으로 문헌[SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST (Kabat et al., 5th ed., U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242, 1991, 이후 본원에서 "Kabat 보고서"로 나타냄)]의 정의에 따른다.

일부 구현예에서, 적어도 하나의 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 인간 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 항-Aβ 프로토피브릴 항체의 인간 불변 영역은 Kabat 보고서에 개시된 바와 같은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA, IgE 및 이의 임의의 대립유전자 변이로부터 선택되는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 이러한 서열 중 임의의 하나 이상이 본 개시에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 중쇄 불변 영역은 IgG1 및 이의 대립유전자 변이로부터 선택된다. 인간 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열은 당분야에 알려져 있으며 서열 번호 3에 제시되어 있다.

일부 구현예에서, 적어도 하나의 항-Aβ 항체의 인간 불변 영역은 Kabat 보고서에서 논의된 바와 같은 κ-λ-사슬 불변 영역 및 이의 임의의 대립유전자 변이로부터 선택되는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 이러한 서열 중 임의의 하나 이상이 본 개시에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 경쇄 불변 영역은 κ 및 이의 대립유전자 변이로부터 선택된다. 인간 κ 사슬 불변 영역의 아미노산 서열은 당분야에 알려져 있으며 서열 번호 4에 제시되어 있다.

일부 구현예에서, 적어도 하나의 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 프레임워크를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역, 및 인간 Ig 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역, 및 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.

일부 구현예에서, 적어도 하나의 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 레카네맙으로도 알려진 BAN2401이다. BAN2401은 mAb158의 인간화 IgG1 모노클로날 버전이며, 이는 프로토피브릴을 표적화하도록 생성된 뮤린 모노클로날 항체이고 문헌[WO 2007/108756 및 Journal of Alzheimer's Disease 43: 575-588 (2015)]에 개시되어 있다. BAN2401은 적어도 하나의 항-Aβ 프로토피브릴 항체로, 가용성 Aβ 응집체 종에 높은 선택성으로 결합하면서 Aβ 단량체에 대해 낮은 친화도를 실증한다. 예를 들어, BAN2401은 Aβ 단량체 또는 Aβ-불용성 피브릴 각각에 있어서 가용성 Aβ 프로토피브릴에 대해 대략 1000배 및 5배 내지 10배 더 높은 선택성을 실증하는 것으로 보고되었다.

BAN2401은 (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. BAN2401의 중쇄 및 경쇄의 전체 길이 서열은 서열 번호 11 및 12에 제시되어 있고 문헌[WO 2007/108756 및 Journal of Alzheimer's Disease 43:575-588 (2015)]에 기재되어 있다.

본 개시에서 적어도 하나의 항-Aβ 프로토피브릴 항체로서 사용하기에 적합한 항체의 다른 비제한적 예는 문헌[WO 2002/003911, WO 2005/123775, WO 2007/108756, WO 2011/001366, WO 2011/104696, 및 WO 2016/005466]에 개시된 것들을 포함한다.

일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 적어도 80 mg/mL의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 적어도 100 mg/mL의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 적어도 200 mg/mL의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 적어도 250 mg/mL의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 80 mg/mL 내지 300 mg/mL 범위의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 85 mg/mL 내지 275 mg/mL 범위의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 90 mg/mL 내지 250 mg/mL 범위의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 95 mg/mL 내지 225 mg/mL 범위의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체는 100 mg/mL 내지 200 mg/mL 범위의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 80 mg/mL, 90 mg/mL, 100 mg/mL, 110 mg/mL, 120 mg/mL, 130 mg/mL, 140 mg/mL, 150 mg/mL, 160 mg/mL, 170 mg/mL, 180 mg/mL, 190 mg/mL, 200 mg/mL, 210 mg/mL, 220 mg/mL, 230 mg/mL, 240 mg/mL, 250 mg/mL, 260 mg/mL, 270 mg/mL, 280 mg/mL, 290 mg/mL 또는 300 mg/mL의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 100 mg/mL의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 200 mg/mL의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 250 mg/mL의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 300 mg/mL의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 BAN2401이다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 5 (HCDR1), 서열 번호 6(HCDR2), 및 서열 번호 7(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열 번호 8(LCDR1), 서열 번호 9(LCDR2), 및 서열 번호 10(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다.

일부 구현예에서, Aβ 프로토피브릴에 결합하는 치료 유효량의 적어도 하나의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약학 제형물은 적어도 하나의 추가 구성요소를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 적어도 하나의 추가 구성요소는 완충액으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 완충액은 시트레이트 완충액이다. 일부 구현예에서, 완충액은 히스티딘 완충액이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 적어도 하나의 추가 구성요소는 유화제로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 적어도 하나의 추가 구성요소는 시트르산(또는 시트르산 1수화물), 염화나트륨, 히스티딘(및/또는 히스티딘 하이드로클로라이드), 아르기닌(및/또는 아르기닌 하이드로클로라이드), 및 폴리소르베이트 80으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 적어도 하나의 추가 구성요소는 시트르산(및/또는 시트르산 1수화물), 아르기닌(및/또는 아르기닌 하이드로클로라이드), 및 폴리소르베이트 80으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 적어도 하나의 추가 구성요소는 히스티딘(및/또는 히스티딘 하이드로클로라이드), 아르기닌(및/또는 아르기닌 하이드로클로라이드) 및 폴리소르베이트 80으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 약학 제형물은 아르기닌(및/또는 아르기닌 하이드로클로라이드)을 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 아르기닌(및/또는 아르기닌 하이드로클로라이드)의 농도는 약 100 mM 내지 약 400 mM의 범위이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 아르기닌(및/또는 아르기닌 하이드로클로라이드)의 농도는 약 110 mM 내지 약 380 mM의 범위이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 아르기닌(및/또는 아르기닌 하이드로클로라이드)의 농도는 약 120 mM 내지 약 360 mM의 범위이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 아르기닌(및/또는 아르기닌 하이드로클로라이드)의 농도는 약 125 mM 내지 약 350 mM의 범위이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 아르기닌(및/또는 아르기닌 하이드로클로라이드)의 농도는 125 mM이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 아르기닌(및/또는 아르기닌 하이드로클로라이드)의 농도는 200 mM이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 아르기닌(및/또는 아르기닌 하이드로클로라이드)의 농도는 350 mM이다.

일부 구현예에서, 약학 제형물은 히스티딘을 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 히스티딘의 농도는 약 10 mM 내지 약 100 mM의 범위이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 히스티딘의 농도는 10 mM 내지 100 mM, 12 mM 내지 80 mM, 14 mM 내지 60 mM, 15 mM 내지 55 mM, 15 mM 내지 35 mM, 또는 15 mM 내지 25 mM의 범위이다. 일부 구현예에서, 히스티딘의 농도는 25 mM이다. 일부 구현예에서, 히스티딘의 농도는 50 mM이다.

일부 구현예에서, 약학 제형물은 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 폴리소르베이트 80의 농도는 약 0.01% w/v 내지 0.1% w/v, 0.01% w/v 내지 0.08% w/v, 0.02% w/v 내지 0.08% w/v, 0.03% w/v 내지 0.07% w/v, 또는 0.04% w/v 내지 0.06% w/v의 범위이다. 일부 구현예에서, 폴리소르베이트 80은 0.01% w/v, 0.02% w/v, 0.03% w/v, 0.04% w/v, 0.05% w/v, 0.06% w/v, 0.07% w/v 또는 0.08% w/v의 농도로 약학 제형물에 존재한다. 일부 구현예에서, 폴리소르베이트 80은 0.02% w/v의 농도로 약학 제형물에 존재한다. 일부 구현예에서, 폴리소르베이트 80은 0.05% w/v의 농도로 약학 제형물에 존재한다.

일부 구현예에서, 약학 제형물은 시트르산 1수화물을 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 시트르산 1수화물의 농도는 약 10 mM 내지 100 mM의 범위이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 시트르산 1수화물의 농도는 10 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 90 mM, 15 mM 내지 85 mM, 20 mM 내지 80 mM, 25 mM 내지 75 mM, 30 mM 내지 70 mM, 30 mM 내지 60 mM, 또는 30 mM 내지 50 mM의 범위이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물 중 시트르산 1수화물의 농도는 50 mM이다.

일부 구현예에서, 본 개시는 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖는 약학 제형물을 제공한다. 일부 구현예에서, 약학 제형물의 pH는 4.0 내지 6.0, 4.2 내지 5.8, 4.3 내지 5.7, 4.4 내지 5.6, 또는 4.5 내지 5.5의 범위이다. 일부 구현예에서, pH는 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4 또는 5.5이다. 일부 구현예에서, pH는 5.0이다.

일부 구현예에서, 본원에 개시된 약학 제형물은 용액 및/또는 당업자에 의해 적절하다고 간주되는 임의의 다른 적합한 액체 제형물의 형태일 수 있다. 본 개시의 조성물의 투여 경로는 정맥내 또는 피하일 수 있다. 일부 구현예에서, 약학 제형물은 정맥내 투여를 위한 멸균, 비발열성 액체로서 제형화된다. 일부 구현예에서, 약학 제형물은 피하 투여를 위한 멸균, 비발열성 액체로서 제형화된다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 식염수 용액이다.

일부 구현예에서, 약학 제형물은 적어도 하나의, BAN2401과 같은 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 포함하고, 예를 들어 시트르산 1수화물, 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드 및 폴리소르베이트 80을 추가로 포함하는 액체 투여형이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물은 100 mg/mL의 적어도 하나의, BAN2401과 같은 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편, 50 mM 시트르산 1수화물, 110 mM 아르기닌, 240 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, 및 0.05%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하고, 5.0 ± 0.4의 pH를 갖는다.

일부 구현예에서, 약학 제형물은 적어도 하나의, BAN2401과 같은 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 포함하고, 예를 들어 히스티딘, 히스티딘 하이드로클로라이드, 아르기닌 하이드로클로라이드, 및 폴리소르베이트 80을 추가로 포함하는 액체 투여형이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물은 100 mg/mL 또는 200 mg/mL의 적어도 하나의, BAN2401과 같은 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편, 25 mM의 히스티딘 및 히스티딘 하이드로클로라이드, 200 mM 아르기닌 하이드로클로라이드 및 0.05%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하고 5.0 ± 0.4의 pH를 갖는다.

일부 구현예에서, 약학 제형물은 적어도 하나의, BAN2401과 같은 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 포함하고, 예를 들어 히스티딘, 히스티딘 하이드로클로라이드, 아르기닌 하이드로클로라이드, 및 폴리소르베이트 80을 추가로 포함하는 액체 투여형이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물은 200 mg/mL의 적어도 하나의, BAN2401과 같은 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편, 50 mM 히스티딘 및 히스티딘 하이드로클로라이드, 125 mM 아르기닌 하이드로클로라이드 및 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하고 5.0 ± 0.4의 pH를 갖는다.

일부 구현예에서, 약학 제형물은 적어도 하나의, BAN2401과 같은 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 포함하고, 예를 들어 히스티딘, 히스티딘 하이드로클로라이드, 아르기닌 하이드로클로라이드, 및 폴리소르베이트 80을 추가로 포함하는 액체 투여형이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물은 200 mg/mL의 적어도 하나의, BAN2401과 같은 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편, 50 mM 시트르산(및/또는 시트르산 1수화물), 125 mM 아르기닌(및/또는 아르기닌 하이드로클로라이드), 및 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하고 5.0 ± 0.4의 pH를 갖는다.

BAN2401 및 BAN2401의 사용을 포함하는 방법은 미국 가출원 제62/749,614호 및 PCT 국제 출원 제PCT/US2019/043067호에 개시되어 있으며, 둘 모두 전체가 본원에 참조로 포함된다.

도 1은 5℃에서 0개월, 1개월, 2개월 및 3개월 시점에 10 mg/mL, 100 mg/mL, 및 200 mg/mL의 BAN2401 제형물에서의 응집 백분율을 도시한다.
도 2는 5℃에서 0개월, 1개월, 2개월 및 3개월 시점에 10 mg/mL, 100 mg/mL 및 200 mg/mL의 BAN2401 제형물에서의 단편화 백분율을 도시한다.
도 3은 5℃에서 0개월, 1개월, 2개월 및 3개월 시점에 10 mg/mL, 100 mg/mL, 및 200 mg/mL의 BAN2401 제형물에서의 단량체 백분율을 도시한다.
도 4는 25℃에서 0개월, 1개월, 2개월 및 3개월 시점에 10 mg/mL, 100 mg/mL 및 200 mg/mL의 BAN2401 제형물에서의 응집 백분율을 도시한다.
도 5는 25℃에서 0개월, 1개월, 2개월 및 3개월 시점에 10 mg/mL, 100 mg/mL, 및 200 mg/mL의 BAN2401 제형물에서의 단편화 백분율을 도시한다.
도 6은 25℃에서 0개월, 1개월, 2개월 및 3개월 시점에 10 mg/mL, 100 mg/mL 및 200 mg/mL의 BAN2401 제형물에서의 단량체 백분율을 도시한다.
도 7은 5℃에서 0개월, 1개월, 2개월 및 3개월 시점에 4.5, 5.0, 5.5, 6.0 및 6.5의 pH 값에서 BAN2401 제형물에서의 응집 백분율을 도시한다.
도 8은 5℃에서 0개월, 1개월, 2개월 및 3개월 시점에 4.5, 5.0, 5.5, 6.0 및 6.5의 pH 값에서 BAN2401 제형물에서의 단편화 백분율을 도시한다.
도 9는 5℃에서 0개월, 1개월, 2개월 및 3개월 시점에 4.5, 5.0, 5.5, 6.0 및 6.5의 pH 값에서 BAN2401 제형물에서의 단량체 백분율을 도시한다.
도 10은 25℃에서 0개월, 1개월, 2개월 및 3개월 시점에 4.5, 5.0, 5.5, 6.0 및 6.5의 pH 값에서 BAN2401 제형물에서의 응집 백분율을 도시한다.
도 11은 25℃에서 0개월, 1개월, 2개월 및 3개월 시점에 4.5, 5.0, 5.5, 6.0 및 6.5의 pH 값에서 BAN2401 제형물에서의 단편화 백분율을 도시한다.
도 12는 25℃에서 0개월, 1개월, 2개월 및 3개월 시점에 4.5, 5.0, 5.5, 6.0 및 6.5의 pH 값에서 BAN2401 제형물에서의 단량체 백분율을 도시한다.
도 13은 25℃에서 0개월, 1개월 및 2개월 시점에 10 mg/mL, 100 mg/mL, 및 200 mg/mL에서 BAN2401 제형물에서의 응집 백분율을 도시한다.
도 14는 25℃에서 0개월, 1개월 및 2개월 시점에 10 mg/mL, 100 mg/mL, 및 200 mg/mL에서 BAN2401 제형물에서의 단편화 백분율을 도시한다.
도 15는 25℃에서 0개월, 1개월 및 2개월 시점에 10 mg/mL, 100 mg/mL, 및 200 mg/mL의 BAN2401 제형물에서의 단량체 백분율을 도시한다.
도 16은 아르기닌 농도의 함수로서 BAN2401 제형물에서의 단량체의 응집 백분율을 도시한다.
도 17은 BAN2401 10 mg/mL 주사제의 제조 공정에 대한 흐름도를 도시한다.
도 18은 BAN2401 100 mg/mL 주사제의 제조 공정에 대한 흐름도를 도시한다.
도 19는 5℃에서 0개월 및 12개월 시점의 pH 값에서 BAN2401 제형물의 pH 값을 도시한다.
도 20은 25℃에서 0개월, 1개월 및 3개월 시점의 pH 값에서 BAN2401 제형물의 pH 값을 도시한다.
도 21은 5℃에서 및 25℃에서 진탕하면서 1개월 후 pH 값에서 BAN2401 제형물의 pH 값을 도시한다.
도 22는 5℃에서 0개월, 1개월, 3개월, 6개월, 9개월 및 12개월 시점에 BAN2401 제형물의 405 nm에서의 흡광도를 도시한다.
도 23은 25℃에서 0개월, 1개월 및 3개월 시점에 BAN2401 제형물의 405 nm에서의 흡광도를 도시한다.
도 24는 5℃에서 및 25℃에서 진탕하면서 1개월째에 BAN2401 제형물의 405 nm에서의 흡광도를 도시한다.
도 25는 5℃에서 0개월, 1개월, 3개월, 6개월, 9개월 및 12개월 시점에 BAN2401 제형물에서의 응집 백분율을 도시한다.
도 26은 5℃에서 0개월, 1개월, 3개월, 6개월, 9개월 및 12개월 시점에 BAN2401 제형물에서의 단편화 백분율을 도시한다.
도 27은 5℃에서 0개월, 1개월, 3개월, 6개월, 9개월 및 12개월 시점에 BAN2401 제형물에서의 단량체 백분율을 도시한다.
도 28은 25℃에서 0개월, 1개월 및 3개월 시점에 BAN2401 제형물에서의 응집 백분율을 도시한다.
도 29는 25℃에서 0개월, 1개월 및 3개월 시점에 BAN2401 제형물에서의 단편화 백분율을 도시한다.
도 30은 25℃에서 0개월, 1개월 및 3개월 시점에 BAN2401 제형물에서의 단량체 백분율을 도시한다.
도 31은 5℃에서 및 진탕하면서 25℃에서 1개월째에 BAN2401 제형물에서의 응집 백분율을 도시한다.
도 32는 5℃에서 및 진탕하면서 25℃에서 1개월째에 BAN2401 제형물에서의 단편화 백분율을 도시한다.
도 33은 5℃에서 및 진탕하면서 25℃에서 1개월째에 BAN2401 제형물에서의 단량체 백분율을 도시한다.

정의

하기는 본 출원에서 사용되는 용어의 정의이다.

본원에서 사용된 단수 용어 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명확히 다르게 나타내지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다.

본원에서 사용된 문구 "및/또는"은 그렇게 결합된 요소, 즉 일부 경우에는 결합적으로 존재하고 다른 경우에는 분리되어 존재하는 요소의 "어느 하나 또는 둘 모두"를 의미한다. 따라서, 비제한적인 예로서, "포함하는"과 같은 개방형 언어와 함께 사용될 때 "A 및/또는 B"는 일부 구현예에서는 A만을(선택적으로 B 이외의 요소를 포함함); 다른 구현예에서는 B만을(선택적으로 A 이외의 요소를 포함함); 또 다른 구현예에서는 A 및 B 둘 다(선택적으로 다른 요소를 포함함) 등으로 나타낼 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같은, "적어도 하나"는 요소 목록의 하나 이상의 요소를 의미하지만, 요소 목록 내에 구체적으로 기재된 각각의 모든 요소 중 적어도 하나를 반드시 포함하는 것은 아니며, 요소 목록의 요소의 임의의 조합도 배제하지 않는다. 이 정의는 또한 "적어도 하나"라는 문구가 나타내는 요소 목록 내에서 구체적으로 식별된 요소와 관련이 있든 없든, 요소 목록 내에서 구체적으로 식별된 요소 이외의 요소가 선택적으로 존재할 수 있음을 허용한다. 따라서, 비제한적인 예로서 "A 및 B 중 적어도 하나"(또는 동등하게 "A 또는 B 중 적어도 하나" 또는 동등하게 "A 및/또는 B 중 적어도 하나")는 한 구현예에서, B가 존재하지 않고 (선택적으로 B 이외의 요소를 포함함) 하나 초과의 A를 선택적으로 포함하는 적어도 하나; 또 다른 구현예에서, A가 존재하지 않고(선택적으로 A 이외의 요소를 포함함) 하나 초과의 B를 선택적으로 포함하는 적어도 하나; 또 다른 구현예에서, 선택적으로 하나 초과를 포함하는 적어도 하나의, A, 및 선택적으로 하나 초과를 포함하는 적어도 하나의, B(및 선택적으로 다른 요소들을 포함함) 등을 나타낼 수 있다.

수치가 단독으로 또는 수치 범위의 일부로 열거되는 경우, 수치 값은 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 기재된 값에 대해 합리적인 편차에 의해 명시된 값의 위 및 아래로 달라질 수 있음이 이해되어야 한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 항체의 "단편"은 예를 들어 항원 결합 또는 이의 가변 영역을 포함하는 항체의 일부를 포함한다. 단편의 비제한적인 예는 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 디아바디, 선형 항체, 및 단일쇄 항체 분자를 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같은 "단편화" 또는 "단편 형성"은 제형물 내에 있거나 이에 첨가될 때 항체 또는 이의 단편의 분해를 나타낸다. 단편화 또는 단편 형성에 의해 생성된 단편은 항체 또는 이의 단편이 결합하는 항원에 결합할 수 있거나 결합하지 못할 수 있다.

본원에서 사용된 "히스티딘 완충액"은 히스티딘, 히스티딘 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합을 포함할 수 있으며, 히스티딘 하이드로클로라이드는 히스티딘 하이드로클로라이드 1수화물일 수 있다.

본원에서 사용된 "시트레이트 완충액"은 시트르산, 그 염, 또는 이의 조합을 포함할 수 있으며, 시트르산은 시트르산 1수화물 또는 무수 시트르산일 수 있다.

본 개시의 비제한적 구현예:

본 개시의 특정 구현예는 수성 약학 제형물에 관한 것이다.

일부 구현예에서, 다음을 포함하는 수성 약학 제형물이 제공된다:

(a) 80 mg/ml 내지 300 mg/ml 농도로, (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편; 및

(b) 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합인 100 mM 내지 400 mM 아르기닌으로서, 선택적으로 하기 중 임의의 하나 이상을 포함하는, 아르기닌:

a. 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80;

b. 약학적으로 허용 가능한 완충액으로서, 선택적으로 히스티딘 완충액 또는 시트레이트 완충액인, 완충액; 및

c. 4.5 내지 5.5의 pH.

(b) 약학적으로 허용 가능한 완충액으로서, 히스티딘 완충액이고, 선택적으로 히스티딘 완충액은 약 25 mM의 농도이고, 선택적으로 하기 중 임의의 하나 이상을 포함하는, 완충액:

a. 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80;

b. 100 mM 내지 400 mM 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합; 및

c. 4.5 내지 5.5의 pH.

일부 구현예는 수성 약학 제형물로서,

(a) 80 mg/mL 내지 300 mg/mL의 농도로, 인간 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

(b) 100 mM 내지 400 mM 아르기닌,

(c) 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 약학적으로 허용 가능한 완충액,

을 포함하며, 약학 제형물은 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖고,

항체 또는 이의 단편은 (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고,

아르기닌은 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합인, 약학 제형물에 관한 것이다

항체 농도

본원에서 기재된 임의의 수성 약학 제형물의 경우, 항체는 하기 농도로 존재할 수 있다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 100 mg/mL 이상의 농도로 존재한다. 약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 100 mg/mL의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 200 mg/mL 이상의 농도로 존재한다. 약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 200 mg/mL의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 80 mg/mL 내지 300 mg/mL 범위의 농도로 존재한다. 약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 80 mg/mL 내지 240 mg/mL 범위의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 100 mg/mL 내지 200 mg/mL 범위의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 80 mg/mL 내지 300 mg/mL, 85 mg/mL 내지 275 mg/mL, 90 mg/mL 내지 250 mg/mL, 95 mg/mL 내지 225 mg/mL, 100 mg/mL 내지 200 mg/mL 범위의 농도로 존재한다. 약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 90 mg/mL 내지 220 mg/mL, 100 mg/mL 내지 210 mg/mL, 또는 110 mg/mL 내지 200 mg/mL 범위의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 80 mg/mL, 90 mg/mL, 100 mg/mL, 110 mg/mL, 120 mg/mL, 180 mg/mL, 190 mg/mL, 200 mg/mL, 210 mg/mL, 220 mg/mL, 230 mg/mL, 240 mg/mL, 250 mg/mL, 260 mg/mL, 270 mg/mL, 280 mg/mL, 290 mg/mL 또는 300 mg/mL의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 100 mg/mL의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 200 mg/mL의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 BAN2401이다.

아르기닌

본원에서 기재된 임의의 수성 약학 제형물의 경우, 제형물은 하기와 같은 아르기닌을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 약학 제형물은 아르기닌을 포함한다. 일부 구현예에서, 아르기닌은 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 아르기닌의 농도는 약 100 mM 내지 약 400 mM의 범위이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 아르기닌의 농도는 100 mM 내지 400 mM, 110 mM 내지 380 mM, 120 mM 내지 360 mM, 125 mM 내지 350 mM, 100 mM 내지 200 mM, 125 mM 내지 200 mM 또는 150 mM 내지 200 mM의 범위이다. 약학 제형물의 일부 구현예에서, 아르기닌의 농도는 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합 150 mM 내지 250 mM, 160 mM 내지 240 mM, 170 mM 내지 230 mM, 180 mM 내지 220 mM, 190 mM 내지 210 mM의 범위이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 아르기닌의 농도는 125 mM이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 아르기닌의 농도는 200 mM이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 아르기닌의 농도는 200 mM 내지 400 mM, 210 mM 내지 390 mM, 220 mM 내지 380 mM, 230 mM 내지 370 mM, 240 mM 내지 360 mM, 240 mM 내지 350 mM 또는 250 mM 내지 350 mM의 범위이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 아르기닌의 농도는 350 mM이다.

폴리소르베이트 80(PS80)

본원에서 기재된 임의의 수성 약학 제형물의 경우, 제형물은 하기와 같은 폴리소르베이트 80을 포함할 수 있다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 폴리소르베이트 80의 농도는 약 0.01% w/v 내지 0.1% w/v, 0.01% w/v 내지 0.08% w/v, 0.02% w/v 내지 0.08% w/v, 0.03% w/v 내지 0.07% w/v, 또는 0.04% w/v 내지 0.06% w/v의 범위이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 폴리소르베이트 80은 0.01% w/v, 0.02% w/v, 0.03% w/v, 0.04% w/v, 0.05% w/v, 0.06% w/v, 0.07% w/v 또는 0.08% w/v의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 폴리소르베이트 80은 0.02% w/v의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 폴리소르베이트 80은 0.05% w/v의 농도로 존재한다.

완충액

본원에서 기재된 임의의 수성 약학 제형물의 경우, 제형물은 하기와 같은 약학적으로 허용 가능한 완충액을 포함할 수 있다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 약학적으로 허용 가능한 완충액은 시트레이트 완충액이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 시트레이트 완충액은 약 10 mM 내지 약 100 mM의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 시트레이트 완충액의 농도는 10 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 90 mM, 15 mM 내지 85 mM, 20 mM 내지 80 mM, 25 mM 내지 75 mM, 30 mM 내지 70 mM, 30 mM 내지 60 mM, 또는 30 mM 내지 50 mM의 범위이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 시트레이트 완충액은 50 mM의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 약학적으로 허용 가능한 완충액은 히스티딘 완충액이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 히스티딘 완충액은 약 10 mM 내지 약 100 mM의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 히스티딘 완충액의 농도는 10 mM 내지 100 mM, 12 mM 내지 80 mM, 14 mM 내지 60 mM, 또는 15 mM 내지 55 mM, 15 mM 내지 35 mM, 또는 15 mM 내지 25 mM의 범위이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 히스티딘 완충액은 25 mM의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 히스티딘 완충액은 50 mM의 농도로 존재한다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 히스티딘 완충액은 히스티딘 및 히스티딘 하이드로클로라이드 1수화물을 포함한다. 약학 제형물의 일부 구현예에서, 히스티딘 완충액은 히스티딘 및 히스티딘 하이드로클로라이드 1수화물을 포함하고, 히스티딘은 약 0.1 mg/mL 내지 0.3 mg/mL의 농도이고, 히스티딘 하이드로클로라이드 1수화물은 약 4 mg/mL 내지 6 mg/mL의 농도이다. 약학 제형물의 일부 구현예에서, 히스티딘 완충액은 히스티딘 및 히스티딘 하이드로클로라이드 1수화물을 포함하고, 히스티딘은 약 0.26 mg/mL의 농도이고, 히스티딘 하이드로클로라이드 1수화물은 약 4.89 mg/mL의 농도이다. 약학 제형물의 일부 구현예에서, 히스티딘 완충액은 히스티딘 및 히스티딘 하이드로클로라이드 1수화물을 포함하고, 히스티딘은 0.2 mg/mL 내지 0.3 mg/mL 히스티딘 및 4.4 mg/mL 내지 4.9 mg/mL 히스티딘 하이드로클로라이드를 포함하고, 선택적으로 히스티딘 하이드로클로라이드는 1수화물이다.

pH

본원에서 기재된 임의의 수성 약학 제형물의 경우, 제형물은 하기와 같은 pH를 포함할 수 있다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, pH는 4.0 내지 6.0, 4.2 내지 5.8, 4.3 내지 5.7, 4.4 내지 5.6 또는 4.5 내지 5.5의 범위이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, pH는 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4 또는 5.5이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, pH는 4.5 내지 5.5이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, pH는 5.0이다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 약학 제형물은 정맥내 주사에 적합하다.

약학 제형물의 일부 구현예에서, 약학 제형물은 피하 주사에 적합하다.

수성 약학 제형물의 일부 구현예에서, 약학 제형물은 메티오닌을 포함한다.

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) 80 mg/mL 내지 240 mg/mL BAN2401,

(b) 140 mM 내지 260 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

(c) 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 15 mM 내지 35 mM 히스티딘 완충액,

을 포함하며, 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖는 약학 제형물이 개시된다.

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 80 mg/mL 내지 240 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

(b) 140 mM 내지 260 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

(c) 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 15 mM 내지 35 mM 히스티딘 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) (i) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 (ii) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 80 mg/mL 내지 240 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편;

(b) 140 mM 내지 260 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

(c) 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 15 mM 내지 35 mM 히스티딘 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) 80 mg/mL 내지 120 mg/mL BAN2401,

(b) 240 mM 내지 360 mM 아르기닌,

(c) 0.03% w/v 내지 0.08% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 30 mM 내지 70 mM 시트레이트 완충액,

을 포함하며, 약학 제형물은 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖고, 아르기닌은 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합인, 약학 제형물이 본원에서 개시된다.

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 80 mg/mL 내지 120 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

(b) 240 mM 내지 360 mM 아르기닌,

(c) 0.03% w/v 내지 0.08% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 30 mM 내지 70 mM 시트레이트 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) (i) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 (ii) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 80 mg/mL 내지 120 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

(b) 240 mM 내지 360 mM 아르기닌,

(c) 0.03% w/v 내지 0.08% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 30 mM 내지 70 mM 시트레이트 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) 100 mg/mL BAN2401,

(b) 200 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

(c) 0.05% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 25 mM 히스티딘 완충액,

을 포함하고, 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖는 약학 제형물이 본원에서 개시된다.

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 100 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

(b) 200 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

(c) 0.05% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 25 mM 히스티딘 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) (i) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 (ii) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 100 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

(b) 200 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

(c) 0.05% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 25 mM 히스티딘 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) 200 mg/mL BAN2401,

(b) 200 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

(c) 0.05% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 25 mM 히스티딘 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 200 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

(b) 200 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

(c) 0.05% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 25 mM 히스티딘 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) (i) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 (ii) 서열 번호 12 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 200 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

(b) 200 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

(c) 0.05% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 25 mM 히스티딘 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) 100 mg/mL BAN2401,

(b) 350 mM 아르기닌,

(c) 0.05% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 50 mM 시트레이트 완충액,

을 포함하고, 약학 제형물은 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖고, 아르기닌은 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합인, 약학 제형물이 본원에서 개시된다.

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(b) 350 mM 아르기닌,

(c) 0.05% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 50 mM 시트레이트 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(b) 350 mM 아르기닌,

(c) 0.05% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 50 mM 시트레이트 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) 150 mg/mL 내지 250 mg/mL BAN2401,

(b) 100 mM 내지 150 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

(c) 0.01% w/v 내지 0.05% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 35 mM 내지 65 mM 히스티딘 완충액,

을 포함하고, 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖는 약학 제형물이 본원에서 개시된다. 일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 150 mg/mL 내지 250 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

(b) 100 mM 내지 150 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

(c) 0.01% w/v 내지 0.05% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 35 mM 내지 65 mM 히스티딘 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물로서,

(a) (i) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 (ii) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 150 mg/mL 내지 250 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

(b) 100 mM 내지 150 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

(c) 0.01% w/v 내지 0.05% w/v 폴리소르베이트 80, 및

(d) 35 mM 내지 65 mM 히스티딘 완충액,

일부 구현예에서, 수성 약학 제형물은 pH 5.0을 갖는다.

응집체 형성을 감소시키는 방법

일부 구현예에서, 다음 단계를 포함하는, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편의 응집체 형성을 감소시키는 방법이 본원에서 개시된다:

(a) 인간 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 50 mg/ml 이상의 농도로 포함하는 약학 제형물을 제공하는 단계로서, 선택적으로 농도는 80 mg/mL 내지 300 mg/mL이고, 선택적으로 농도는 100 mg/mL 내지 200 mg/mL인, 단계, 및

(b) 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합을 첨가하고, 선택적으로 약학적으로 허용 가능한 완충액을 제공하는 단계로서, 완충액은 선택적으로 히스티딘 완충액이고, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 단계.

응집체 형성을 감소시키는 방법의 일부 구현예에서, 약학 제형물의 pH는 4.5 내지 5.5의 범위이다. 방법의 일부 구현예에서, 약학 제형물의 pH는 5.0이다.

응집체 형성을 감소시키는 방법의 일부 구현예에서, 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합은 150 mM 내지 250 mM의 농도로 존재한다.

일부 구현예에서, 다음 단계를 포함하는, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편의 단편화를 감소시키는 방법이 본원에서 개시된다:

(b) 히스티딘 완충액을 첨가하고, 선택적으로 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드 또는 이의 조합을 추가로 제공하는 단계로서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 단계.

단편화를 감소시키는 방법의 일부 구현예에서, 약학 제형물의 pH는 4.5 내지 5.5의 범위이다. 방법의 일부 구현예에서, 약학 제형물의 pH는 5.0이다.

단편화를 감소시키는 방법의 일부 구현예에서, 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합은 100 mM 내지 400 mM의 농도로 존재한다.

단편화를 감소시키는 방법의 일부 구현예에서, 약학 제형물은 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80을 추가로 포함한다.

단편화를 감소시키는 방법의 일부 구현예에서, 약학 제형물은 약학적으로 허용 가능한 완충액을 추가로 포함하고, 완충액은 히스티딘 완충액이고, 선택적으로 히스티딘 완충액은 10 mM 내지 100 mM, 12 mM 내지 80 mM, 14 mM 내지 60 mM, 또는 15 mM 내지 55 mM, 15 mM 내지 35 mM, 또는 15 mM 내지 25 mM의 범위이다.

일부 구현예에서, 다음 단계를 포함하는, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편의 응집체 형성 및/또는 단편화를 감소시키는 방법이 본원에서 개시된다:

(a) 인간 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 50 mg/ml 이상의 농도로 포함하는 약학 제형물을 제공하는 단계로서, 선택적으로 농도는 80 mg/mL 내지 300 mg/mL이고, 선택적으로 농도는 100 mg/mL 내지 200 mg/mL인, 단계,

(b) 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드 또는 이의 조합을 첨가하는 단계, 및

(c) 약학적으로 허용 가능한 히스티딘 완충액을 제공하는 단계로서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 단계.

(b) 히스티딘 완충액을 제공하는 단계, 및

(c) 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드 또는 이의 조합을 제공하는 단계로서, 제형물은 pH가 4.5 내지 5.5이고, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 단계.

또한 하기 구현예가 본원에서 제공된다:

[구현예 01] 수성 약학 제형물로서,

a. 80 mg/mL 내지 300 mg/mL의 농도로, 인간 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

b. 100 mM 내지 400 mM 아르기닌,

c. 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80, 및

d. 약학적으로 허용 가능한 완충액,

을 포함하며, 약학 제형물은 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖고,

단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고,

아르기닌은 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합인, 약학 제형물.

[구현예 02] 제1항에 있어서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편이 100 mg/mL 내지 200 mg/mL의 농도로 존재하는, 약학 제형물.

[구현예 03] 제1항에 있어서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편이 100 mg/mL의 농도로 존재하는, 약학 제형물.

[구현예 04] 제1항에 있어서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편이 200 mg/mL의 농도로 존재하는, 약학 제형물.

[구현예 05] 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 메티오닌을 추가로 포함하는 약학 제형물.

[구현예 06] 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 완충액이 시트레이트 완충액 또는 히스티딘 완충액인, 약학 제형물.

[구현예 07] 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 10 mM 내지 100 mM 시트레이트 완충액 또는 10 mM 내지 100 mM 히스티딘 완충액을 포함하는 약학 제형물.

[구현예 08] 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 125 mM 내지 350 mM 아르기닌을 포함하는 약학 제형물.

[구현예 09] 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 200 mM 아르기닌을 포함하고, 아르기닌은 아르기닌 하이드로클로라이드인, 약학 제형물.

[구현예 10] 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 아르기닌 하이드로클로라이드인, 200 mM 아르기닌, 및 25 mM 히스티딘 완충액을 포함하는 약학 제형물.

[구현예 11] 수성 약학 제형물로서,

a. (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 80 mg/mL 내지 240 mg/mL 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

b. 140 mM 내지 260 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,

c. 0.02% w/v 내지 0.08% w/v 폴리소르베이트 80, 및

d. 15 mM 내지 35 mM 히스티딘 완충액,

을 포함하고, 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖는 약학 제형물.

[구현예 12] 수성 약학 제형물로서,

a. (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 80 mg/mL 내지 120 mg/mL 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,

b. 240 mM 내지 360 mM 아르기닌,

c. 0.02% w/v 내지 0.08% w/v 폴리소르베이트 80, 및

d. 30 mM 내지 50 mM 시트레이트 완충액,

을 포함하고, 약학 제형물은 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖고,

[구현예 13] 다음 단계를 포함하는, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편의 응집체 형성을 감소시키는 방법:

80 mg/ml 내지 300 mg/ml 농도로, (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 포함하는 수성 약학 제형물을 제공하는 단계, 및

상기 수성 약학 제형물에 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합을 첨가하는 단계로서, 약학 제형물의 pH는 4.5 내지 5.5의 범위인, 단계.

[구현예 14] 제13항에 있어서, 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합이 150 mM 내지 250 mM의 농도로 존재하는, 방법.

[구현예 15] 제14항에 있어서, 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합이 200 mM의 농도로 존재하는, 방법.

[구현예 16] 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 약학 제형물이 약학적으로 허용 가능한 완충액을 추가로 포함하는, 방법.

[구현예 17] 제16항에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 완충액이 히스티딘 완충액 또는 시트레이트 완충액인, 방법.

[구현예 18] 다음 단계를 포함하는, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편의 단편화를 감소시키는 방법:

상기 수성 약학 조성물에 히스티딘 완충액을 첨가하는 단계로서, 약학 제형물의 pH가 4.5 내지 5.5의 범위인, 단계.

[구현예 19] 제18항에 있어서, 15 mM 내지 35 mM 히스티딘 완충액을 포함하는 방법.

[구현예 20] 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 약학 제형물이 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80을 추가로 포함하는, 방법.

[구현예 21] 수성 약학 제형물로서,

a. (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 80 mg/mL 내지 240 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편;

b. 140 mM 내지 260 mM 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합;

c. 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80; 및

d. 15 mM 내지 35 mM 히스티딘 완충액 또는 30 mM 내지 50 mM 시트레이트 완충액,

을 포함하고, 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖는 약학 제형물.

[구현예 22] 구현예 21에 있어서, 100 mg/mL의 항체를 포함하는 약학 제형물.

[구현예 23] 구현예 21에 있어서, 200 mg/mL의 항체를 포함하는 약학 제형물.

[구현예 24] 구현예 21에 있어서, 90 mg/mL 내지 220 mg/mL, 100 mg/mL 내지 210 mg/mL, 또는 110 mg/mL 내지 200 mg/mL의 항체를 포함하는 약학 제형물.

[구현예 25] 구현예 21 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 히스티딘 완충액을 포함하고, 히스티딘 완충액은 15 mM 내지 30 mM, 15 mM 내지 25 mM, 또는 20 mM 내지 30 mM 히스티딘을 포함하는, 약학 제형물.

[구현예 26] 구현예 21 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 히스티딘 완충액을 포함하고, 히스티딘 완충액은 0.2 mg/mL 내지 0.3 mg/mL 히스티딘 및 4.4 mg/mL 내지 4.9 mg/mL 히스티딘 하이드로클로라이드를 포함하고, 선택적으로 히스티딘 하이드로클로라이드는 1수화물인, 약학 제형물.

[구현예 27] 구현예 21 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 150 mM 내지 250 mM, 160 mM 내지 240 mM, 170 mM 내지 230 mM, 180 mM 내지 220 mM, 190 mM 내지 210 mM 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합을 포함하는 약학 제형물.

[구현예 28] 구현예 21 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 0.02% w/v 내지 0.05%, 또는 0.04% w/v 내지 0.04% w/v 폴리소르베이트 80을 포함하는 약학 제형물.

[구현예 29] 구현예 21 내지 28 중 어느 하나에 있어서, 시트레이트 완충액을 포함하는 약학 제형물.

[구현예 30] 구현예 21 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 히스티딘 완충액을 포함하는 약학 제형물.

[구현예 31] 구현예 21 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 메티오닌을 추가로 포함하는 약학 제형물.

[구현예 32] 수성 약학 제형물로서,

a. (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 100 mg/ml 내지 200 mg/ml의 항체;

b. 200 mM 아르기닌 하이드로클로라이드;

c. 0.05% w/v 폴리소르베이트 80; 및

d. 25 mM 히스티딘 완충액,

을 포함하고, 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖는 약학 제형물.

[구현예 33] 구현예 32에 있어서, 100 mg/mL의 항체를 포함하는 약학 제형물.

[구현예 34] 구현예 32에 있어서, 200 mg/mL의 항체를 포함하는 약학 제형물.

[구현예 35] 다음 단계를 포함하는, 항체의 응집체 형성 및/또는 단편화를 감소시키는 방법:

a. 80 mg/ml 내지 300 mg/ml의 농도로, (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 포함하는 수성 약학 제형물을 제공하는 단계, 및

b. 상기 수성 약학 조성물에 1) 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합, 또는 2) 히스티딘 완충액을 첨가하는 단계.

[구현예 36] 구현예 35에 있어서, 약학 제형물의 pH가 4.5 내지 5.5의 범위인, 방법.

[구현예 37] 구현예 35에 있어서, 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합이 150 mM 내지 250 mM의 농도로 존재하는, 방법.

[구현예 38] 구현예 37에 있어서, 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합이 200 mM의 농도로 존재하는, 방법.

[구현예 39] 구현예 38에 있어서, 15 mM 내지 25 mM 히스티딘 완충액을 포함하는 방법.

[구현예 40] 구현예 35 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 약학 제형물이 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80을 추가로 포함하는, 방법.

[구현예 41] 구현예 35 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 약학 제형물이 약학적으로 허용 가능한 완충액을 추가로 포함하는, 방법.

[구현예 42] 구현예 41에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 완충액이 히스티딘 완충액 또는 시트레이트 완충액인, 방법.

실시예

실시예 1: 단백질 농도 연구

3개의 단백질 농도(10 mg/mL, 100 mg/mL, 200 mg/mL)를 갖는 샘플을 제조하고 농도 연구에서 조사했다. 10 mg/mL 물질은 BAN2401 정제 원료 의약품(PDS)이었고 100 mg/mL 및 200 mg/mL 물질은 Amicon Ultra-15 스핀 필터를 사용하여 BAN2401 PDS로부터 제조하였다. 샘플은 각각이 상이한 PS80 수준을 갖는 것을 제외하고는 모두 동일한 제형 완충액(25 mM 시트르산나트륨, 125 mM 염화나트륨, pH 5.7) 중에 있었다. 10 mg/mL, 100 mg/mL, 200 mg/mL 샘플의 PS80 백분율은 각각 0.02%, 0.16% 및 0.32%였다. 모든 샘플을 0.2 gm 여과하고 안정성 시험을 위한 멸균 폴리프로필렌(PP) 튜브 내로 분취했다(주: PS80 제거 공정은 농도 연구가 수행될 당시 이용 가능하지 않았음).

샘플 안정성을 기본 HPLC-SEC, pH 및 DLS를 사용하여 3개월 동안 2개의 온도(5℃ 및 25℃)에서 평가하였다. PS80 확인과 같은 추가 특징규명 검정을 T = 0 샘플에 대해 수행했다. 샘플 시험의 상세사항을 표 1에 나타낸다.

[표 1]

시험 일정(농도 연구)

pH는 마이크로탐침이 있는 pH 미터를 사용하여 측정하였다. 측정 전에 pH 4.0 및 7.0 표준을 사용하여 검정을 수행했다.

농축된 BAN2401의 응집 및 물리적 분해를 5℃ 및 25℃에서 보관된 안정성 샘플에 대해 기본 HPLC-SEC를 수행하여 평가하였다.

HPLC-SEC(기본) 분석은 1.0 mL/분의 유속에서 0.2 M 인산나트륨, pH 7.0 이동상으로 TSK G3000 SWXL 컬럼을 사용하여 수행하였다. 샘플 주입 부피는 각각 10 mg/mL, 100 mg/mL 또는 200 mg/mL의 단백질 농도에 대해 15 pi, 1.5 pi 또는 0.8 pi였다. 이렇게 하면 연구 전반에 걸쳐 약 150 pg의 단백질이 컬럼에 확실히 주입된다. 단량체, 응집체 및 단편에 대한 상대 피크 면적(%) 결과를 도 1 내지 6에 보고한다.

2개의 온도(5℃ 및 25℃) 모두에서, 단백질 농도가 증가함에 따라 더 높은 응집체 백분율 및 응집율이 나타났다. 100 mg/mL 및 200 mg/mL 샘플의 경우, 시작 응집체 백분율은 10 mg/mL 샘플의 시작 응집체의 백분율의 거의 두 배였다. 이것은 농축 과정만으로도 단백질 응집을 유도함을 시사하였다. 5℃ 및 25℃에서 보관하는 동안 추가 응집이 발생했다. 5℃에서 3개월 동안의 평균 응집율은 100 mg/mL의 경우 월 0.17%, 및 200 mg/mL의 경우 월 0.20%였다. 비교를 위해, 10 mg/mL 샘플은 동일한 조건 하에 월간 응집율이 0.07%에 불과했다. 요약하면, 100 mg/mL 이상의 BAN2401은 제형물에서 물리적으로 안정하지 않은 것으로 나타났다.

단백질 농도는 Beckman DU-800 분광광도계에서 280 mu 및 320 mu에서 흡광도를 측정하여 UV에 의해 평가하였다. 샘플을 500배 희석하고 2개씩 제조했다. 단백질 농도는 하기 공식을 사용하여 1.32의 흡광 계수 ε를 사용해서 계산하였다.

농도 = (A280 - A320)/ ε x 희석 계수

UV-Vis 분광광도계를 사용하여 단백질 농도를 측정하였다. 결과를 표 2에 기재한다. 전반적으로, 농도는 두 온도 모두에서 3개월 동안 변하지 않고 유지되었다.

[표 2]

단백질 농도 결과(농도 연구)

실시예 2: pH 스크리닝 연구

200 mg/mL에서 BAN2401의 안정성을 5개의 상이한 pH 값에서 평가하였다. 샘플을 제조하기 위해, PS80이 제거된 BAN2401 PDS를 농축하고 50 mM 시트르산나트륨, 100 mM 염화나트륨, pH 4.5를 포함하는 완충액으로 정용여과했다. 최종 농도 조정을 200 mg/mL 단백질 및 0.02% PS80의 농도를 달성하기 위해 희석을 통해 수행하였다. 생성된 물질을 5개의 분취물로 나누었다; 4개의 분취물은 10 N 수산화나트륨으로 적정하여 상이한 pH(즉, pH 5.0, 5.5, 6.0 및 6.5)의 샘플을 제조했다. 생성된 샘플을 0.2 μm 여과하고 안정성 평가를 위해 멸균 폴리프로필렌(PP) 튜브 내로 하위-분취했다.

샘플의 안정성을 3개월에 걸쳐 기본 HPLC-SEC, pH 및 DLS를 사용하여 2개의 온도(5℃ 및 25℃)에서 평가하였다. 또한, 진탕 연구를 1개월 시점에 수행하였으며, 여기서 5℃ 샘플의 하위세트를 25℃ 인큐베이터에서 3일 동안 250 RPM에서 수평 진탕하였다. 샘플 시험의 상세사항을 표 3에 나타낸다.

[표 3]

시험 일정(pH 연구)

SEC-HPLC 분석을 1.0 mL/분의 유속에서 0.2 M 인산나트륨, pH 7.0 이동상으로 TSK G3000 SWXL 컬럼을 사용하여 수행하였다. 샘플 주입 부피는 각각 10 mg/mL, 100 mg/mL 또는 200 mg/mL의 단백질 농도에 대해 15 μL, 1.5 μL 또는 0.8 μL였다. 이렇게 하면 연구 전반에 걸쳐 대략 150 μg의 단백질이 컬럼에 확실히 주입된다. 단량체, 응집체 및 단편에 대한 상대 피크 면적(%) 결과를 보고하였다.

농축된 BAN2401의 응집 및 물리적 분해를 5℃ 및 25℃에서 보관된 안정성 샘플에 대해 기본 HPLC-SEC를 수행하여 평가하였다. 결과를 도 7 내지 12에 나타낸다. BAN2401은 2개의 온도(5℃ 및 25℃)에서 더 낮은 pH에서 더 안정적인 것으로 나타났다. pH 4.5 및 5.0인 제형물은 낮은 응집체 백분율로 시작하여 5℃에서 월 약 0.07%의 비율로 응집체 형성의 더 느린 증가를 나타냈다. 응집 외에도 단백질의 단편화를 또한 분석하였다. 결과는 BAN2401의 단편화가 더 낮은 pH에서 BAN2401 제형물에서 더 뚜렷함을 제시하였다. 이러한 고려사항에 기초하여, pH 5.0에서 BAN2401의 제형물이 가장 안정한 것으로 간주되었다(즉, 상이한 pH 값에서의 다른 제형물에 비해 BAN2401의 응집 및/또는 물리적 분해를 덜 나타냄).

실시예 3: 부형제 스크리닝 연구

이 연구에서는 12개의 부형제를 스크리닝하였다. 200 mg/mL로 BAN2401을 포함하는 샘플을 제조하기 위해, PS80이 제거된 BAN2401을 TFF 단계를 통해 농축한 다음 기본 완충액(50 mM 시트레이트, 0.02% PS80, pH 6.0)으로 정용여과했다. 농축된 물질을 24개의 분획으로 분취하였다. 각 분획에 특정 부형제를 포함하는 스톡 용액을 첨가했다. 각각 3개 및 1개 농도 수준을 갖는 샘플을 제조한 염화나트륨과 아스코르브산을 제외하고, 대부분의 부형제에 대해 2개 농도를 조사했다. 사용된 부형제의 목록 및 이의 농도를 표 4에 나타낸다.

[표 4]

부형제 목록 및 해당 농도

대조군(즉, 부형제가 없는 기본 완충액 중 샘플)을 포함한 모든 샘플을 0.2gm 여과한 다음 수동 마개장착 도구를 사용하여 무균으로 BD 주사기에 충전하였다. 대조군 샘플도 유리 바이알에 충전하였다. 바이알과 BD 주사기를 5℃ 및 25℃에 두었다. 샘플 안정성을 기본 HPLC-SEC 및 pH를 사용하여 2개월 동안 평가하였다.

응집체 형성을 방지하는 부형제의 긍정적 효과를 증폭하기 위해 부형제 스크리닝 연구 샘플을 차선의 완충액(50 mM 시트레이트, 0.02% PS80, pH 6.0) 조건으로 제조하였다. 25℃에서 2개월에 걸쳐 각 제형물의 안정성 프로파일(응집)을 기본 HPLC-SEC를 수행하여 평가했다.

도 13 내지 15에 나타낸 바와 같이, 160 mM 아르기닌(F14)을 함유하는 제형물이 제형물 중에서 가장 낮은 응집율을 생성하였다. 비교로서, 160 mM 아르기닌 제형물은 2개월 후 25℃에서 1.4% 응집체만을 나타낸 반면 대조군(즉, 부형제가 없는 기본 완충액 중 제형물 - F0)은 동시에 동일한 조건 하에서 2.4% 응집체를 나타냈다.

또한, 아르기닌을 포함하는 제형물은 시작 응집체 백분율이 가장 낮아서, 아르기닌이 단백질 농축 단계 동안 응집체 형성을 억제할 수 있음을 시사하였다. 단편화는 대조군(F0)과 비교하여 아르기닌 제형물(F14)에서 약간 더 높았다. 그러나 그 차이는 검정 변동성이 원인이었을 수 있다.

이 연구에서 두 번째로 좋은 부형제는 400 mM 프롤린(F10)을 포함하는 제형물이었지만, 응집을 제어하는 효과는 아르기닌 제형물(F14)만큼 효과적이지는 않았다.

염화나트륨을 포함하는 제형물(F16 내지 F18)은 대조군 샘플과 비교하여 안정성에 영향을 미치지 않았다. PS80을 갖는 제형물(F19 및 F20)에 대해 동일한 관찰이 이루어졌다: PS80 함량을 변화시켜도 안정성 효과는 관찰되지 않았다. 아스코르브산을 포함하는 제형물(F15)은 연구 시작부터 응집체 및 단편 백분율이 증가하는 극적인 효과를 나타냈다.

2개의 아르기닌 제형물(F13 및 F14)의 pH를 측정하여 제형물 중 아르기닌의 존재가 경시적으로 pH 변동을 유도하지 않았음을 확인하였다. 표 4에 나타낸 바와 같이, pH의 변화는 관찰되지 않았다. 두 제형물의 삼투압 농도를 또한 측정했다. 샘플은 측정을 위해 동시에 해동되기 전까지 -20℃에서 보관하였다.

[표 5]

아르기닌 제형물(F13 및 F14)의 pH 및 삼투압 농도

실시예 4: 아르기닌 농도 연구

제형물 중 아르기닌 농도 및 응집체 간 관계를 Design Expert® 7.0으로 연구하였다. 연구를 위해 선택된 요인과 각 요인에 대해 탐색된 수준을 아래 표 6에 나타낸다.

[표 6]

실시예 4에서 조사된 요인

Design Expert® 7.0에서 D-최적 설계에 의해 샘플 무작위화를 일으켰다. 수득된 샘플 세트는 표 7에 나타낸 바와 같이, 4개의 복제물을 포함하는 25개의 데이터 포인트를 포함하였다. 각각의 제형물을 제조하고 평가하였다.

[표 7]

실시예 4를 위해 제조된 제형물

0.02% 폴리소르베이트 80을 함유하는 pH 5.0의 100 mg/mL BAN2401 제형물 중 아르기닌 농도 및 응집체 수준 간 관계를 Design Expert® 7.0으로 추정하였다. 추정 결과를 도 16에 나타내었다.

실시예 5: PS80 연구

스트레스 조건 하에 완제 의약품 품질의 변화를 평가하기 위해, 제형 완충액(pH 5.0, 350 mM 아르기닌, 50 mM 시트르산)을 사용하여 진탕 및 냉동-해동 연구를 수행했다. 이 실험에서, 다양한 폴리소르베이트 80 농도를 갖는 제형물을 조사하여 이러한 스트레스 조건 하에 눈에 보이지 않는 입자 생성에 대한 폴리소르베이트 80의 효과를 확인했다. 조사된 제형물 및 적용된 스트레스 조건을 표 8에 나타낸다.

[표 8]

진탕 및 냉동-해동 스트레스 연구를 위해 연구된 제형물

샘플을 실시예 4에 기재된 것과 동일한 방식으로 제조하였다. 제형물 중 표적 PS80 농도를 달성하기 위해 10% PS80 용액을 첨가하고 최종 단백질 농도 조정을 제형 완충액으로 희석을 통해 수행하였다. 제형물을 0.2 gm 필터에 통과시키고 1.3 mL 충전 부피로 2 mL 바이알에 충전하였다. 샘플을 궤도 진탕기에 수평 방향으로 놓고(바이알을 옆으로 눕힘) 냉장고 또는 실험실 벤치에 두었다. 샘플을 3일 동안 250 rpm에서 진탕하였다. 다른 샘플을 -20℃ 챔버에 2시간 동안 넣어 냉동한 다음, 꺼내어 실온에서 2시간 동안 방치하여 해동시켰다. 냉동-해동 주기를 3회 반복하였다. 진탕 및 냉동-해동 연구로부터의 샘플을 시각적 외관, SEC-HPLC에 의한 응집체 및 단편 수준, 그리고 마이크로 유동 조영(MFI)에 의한 눈에 보이지 않는 입자에 대해 평가하였다.

다양한 수준의 PS80을 갖는 BAN2401 제형물에 대한 진탕 및 냉동-해동 연구 결과를 아래에 요약한다.

SEC-HPLC 분석

SEC-HPLC 분석을 1.0 mL/분의 유속에서 0.2 M 인산나트륨, pH 7.0 이동상으로 TSK G3000 SWXL 컬럼을 이용하여 수행하였다. 샘플 주입 부피는 각각 50 또는 100 mg/mL의 단백질 농도에 대해 5.0 μL 또는 2.5 μL였다. 이렇게 하면 연구 전반에 걸쳐 대략 250 μg의 단백질이 컬럼에 확실히 주입된다. 단량체, 응집체 및 단편에 대한 상대 피크 면적(%) 결과를 보고하였다.

다양한 폴리소르베이트 80 농도를 사용하여 25℃에서 3개월 동안 보관된 pH 5 제형물의 응집체 수준에서, 제형물 pH 5.0에서 PS80 농도를 0%에서 0.06%로 증가시켰을 때 응집체 수준에는 유의미한 차이가 없었다. PS80은 BAN2401 제형물의 25℃에서의 보관 동안 SEC-HPLC에 의해 측정된 된 바와 같이 응집체, 즉 이량체 및 삼량체의 형성에 영향을 미치지 않는다고 결론지었다.

pH 5에서 제형물의 단편 수준에 대한 폴리소르베이트 80 농도의 영향에서, 폴리소르베이트 80 농도는 BAN2401에서의 단편 수준에 영향을 미치지 않는다.

상온에서 250 rpm으로 3일 동안 진탕 후 제형물의 외관에서, PS80이 없는 샘플은 침전된 단백질로 혼탁한 반면, 다른 샘플(0.02%, 0.05% 및 0.1% 폴리소르베이트 80)은 가시적으로 투명한, 입자가 없는 용액이었다. 5℃에서 3일 동안 250 rpm으로 진탕된 모든 샘플은 투명하고 침전물이 없었다. 냉동/해동 주기를 거친 모든 샘플도 투명하고 침전물이 없었다.

진탕 및 냉동-해동을 거친 BAN2401 제형물에서의 응집체 및 단편 수준을 표 9에 나타낸다. 가장 큰 불안정성을 유도한 스트레스 조건은 상온 하의 진탕이었다. 이러한 조건 하에서, PS80이 없는 샘플은 고분자량 종의 가장 큰 형성 및 단량체의 가장 큰 손실을 나타내었다. 이러한 효과는 PS80 농도가 증가함에 따라 무효화되었다.

[표 9]

진탕 및 냉동-해동 연구에 대한 응집체 및 단편 수준 결과

^(a) 고분자량 종; ^(b)저분자량 종; 및 ^(c)샘플이 혼탁함

눈에 보이지 않는 입자 분석

마이크로 유동 조영(DPA4100 유동 현미경 및 BP-4100-FC-400-UN 플로우 셀)을 사용하여 눈에 보이지 않는 입자 분석을 수행했다. 총 샘플 부피는 0.9 mL였고 2.25 μm 내지 100 μm, 5 μm 내지 100 μm, 10 μm 내지 100 μm 범위 및 25 μm 내지 100 μm 범위에 대해 결과를 보고하였다.

진탕 및 냉동-해동을 거친 PS80이 없는 샘플에서 눈에 보이지 않는 입자(2 pm 내지 10 pm)의 증가가 관찰되었다. 제형물 중 PS80 농도가 증가됨에 따라 눈에 보이지 않는 입자의 생성이 점점 억제되었다. 이 효과는 연구된 모든 크기 범위에서 관찰되었다. 0.05% 및 0.1% 폴리소르베이트 80을 함유하는 제형물에서 눈에 보이지 않는 입자에는 유의미한 변화가 없었다. 따라서, 0.05%의 PS80 농도를 제형물에 대해 최적으로 선택하였다.

데이터는 PS80이 SEC-HPLC로 측정된 바와 같이 BAN2401 응집체(이량체 및 삼량체) 및 단편의 형성에 영향을 미치지 않음을 제시할 것이다. 따라서, 진탕 및 냉동-해동 연구 결과에 기초하여 PS80 농도를 선택하였다. 운송 동안 잠재적인 침전을 방지하고 눈에 보이지 않는 입자의 형성을 최소화하기 위해 0.05%의 PS80 농도를 선택하였다.

실시예 6: BAN2401의 정맥내(IV) 제형물의 제조

A. BAN2401 10 mg/mL 제형물

정맥 주사용 BAN2401 10 mg/mL 제형물("10 mg/mL 주사제")을 멸균 수성 제형물의 제조를 위한 통상적인 cGMP 무균 공정에 의해 제조하였다. BAN2401 10 mg/mL 주사제를 임의의 부형제 첨가 및 희석 없이 아래의 해당 BAN2401 원료 의약품 제형물로부터 제조하였다. 10 mg/mL BAN2401을 함유하는 예시적인 IV 제형물을 표 10에 나타낸다.

[표 10]

BAN2401을 포함하는 비교 10 mg/mL IV 제형물.

여과된 BAN2401 원료 의약품 용액을 도 17에 예시된 바와 같이 바이알에 무균으로 충전하였다(도 17에서 "제형물 A"로 나타냄). 풀링된 원료 의약품을 0.2 pm 필터를 통해 바이오버든 감소 여과 단계를 거쳤다. 최종 멸균 여과를 2개의 직렬 0.2 pm 필터를 통해 수행하였으며, 여과-전 및 -후 필터 온전성 시험을 수행하였다. 멸균 벌크 완제 의약품을 바이알에 무균으로 충전하였다. 충전 작업 동안, 바이알 충전 중량을 측정하여 충전 정확도를 확인했다. 충전된 바이알에 마개를 장착한 다음 알루미늄 오버씰로 밀봉했다. 크림프 캡핑 후, 제품을 5±3℃에서 보관했다.

바이알을 USP 788에 따른 방법 1(광 엄폐)을 사용하여 분석하였다. 결과를 표 11 및 12에 나타낸다.

[표 11]

10 mg/mL 주사 바이알에 대한 입자 크기 분포(입자/용기)

[표 12]

10 mg/mL 주사 바이알에 대한 입자 크기 분포(입자/mL)

실시예 7: BAN2401의 정맥내(IV) 및 피하(SC) 제형물의 제조

A. BAN2401 100 mg/mL 제형물

BAN2401 100 mg/mL 제형물("100 mg/mL 주사제")을 멸균 수성 제형물의 제조를 위한 통상적인 cGMP 무균 공정에 의해 제조하였다. BAN2401 100 mg/mL을 임의의 부형제 첨가 및 희석 없이 해당 BAN2401 원료 의약품으로부터 제조하였다(표 13).

[표 13]

BAN2401을 포함하는 예시적인 100 mg/mL IV 제형물.

여과된 BAN2401 원료 의약품(100 mg/mL 주사제) 용액을 도 18에 예시된 바와 같이 바이알에 무균으로 충전하였다(도 18에서 "제형물 B"로 나타냄). 원료 의약품을 0.2 pm 필터를 통해 바이오버든 감소 여과 단계를 거쳤다. 최종 멸균 여과를 2개의 직렬 0.2 pm 필터를 통해 수행하였으며 여과-전 및 -후 필터 온전성 시험을 수행하였다. 멸균 벌크 완제 의약품을 바이알에 무균으로 충전하였다. 충전 작업 동안, 바이알 충전 중량을 측정하여 충전 정확도를 확인했다. 충전된 바이알에 마개를 장착한 다음 알루미늄 오버씰로 밀봉했다. 크림프 캡핑 후, 제품을 5±3℃에서 보관했다.

바이알을 USP 788에 따른 방법 1(광 엄폐)을 사용하여 분석하였다. 결과를 표 14 및 15에 나타낸다.

[표 14]

100 mg/mL 주사 바이알에 대한 입자 크기 분포(입자/바이알)

[표 15]

100 mg/mL 주사 바이알에 대한 입자 크기 분포(입자/mL)

또 다른 BAN2401 100 mg/mL 주사제를 제조하였다. 하기 물질은 표 16에 나타낸 바와 같이 100 mg/mL BAN2401을 함유하는 제2의 예시적인 제형물에서 사용할 수 있다.

[표 16]

BAN2401을 포함하는 또 다른 예시적인 100 mg/mL IV 제형물.

B. BAN2401 200 mg/mL 제형물

하기 물질은 표 17에 나타낸 바와 같이 200 mg/mL BAN2401을 함유하는 예시적인 SC 제형물에서 사용할 수 있다. 이들 제형물(FSC1, FSC2 및 FSC3)에서 BAN2401의 안정성을 3개의 용기 밀봉으로 물질 안정성의 평가와 함께 평가하였다:

i) Becton-Dickenson Hypak Biotech 유리 프리필드 시린지(PFS) 및 마개

ii) West Crystal Zenith 플라스틱 PFS 및 마개

iii) West 5 mL 유리 바이알 및 마개

[표 17]

BAN2401을 포함하는 예시적인 200 mg/mL SC 제형물.

¹히스티딘으로서의 총 농도

200 mg/mL의 표적 단백질 농도로 BAN2401을 아래 요약된 바와 같이 TFF를 통해 제조하였다. FSC1a 및 FSC1b를 제외하고, 각 제형 완충액 중 BAN2401 물질을 제조하기 위해 별도의 TFF 작업을 수행했다. 2개의 제형물에 대해서는, 한 번의 TFF 작업을 수행하고 생성된 농축 물질을 두 개의 절반-로트로 분할했다. 각각의 최종 제형 완충액 중 소량의 멸균 여과 물질은 시간 0에서 충전되지 않고, 주사기 시험을 위해 적절한 용기 밀봉 내에 충전하기 위해 -20℃에서 냉동 보관되었다.

(A) BAN2401 제조

TFF를 통한 단백질 농축/정용여과 공정은 3 단계로 세분할 수 있다.

1. 100 mg/mL 내지 150 mg/mL로 물질 농축

2. 제형 완충액에 대한 정용여과(5X)

3. 200 mg/mL 초과로의 농축

농축/정용여과 단계를 0.02 m²의 막 면적이 설치된 Pall Centramate LV 시스템을 사용하여 수행하였다. BAN2401 물질(PS80 첨가 전에 GMP 로트 제조에서 추출)을 TFF 시스템에 충전하고 10배 내지 15배 농축(단계 1)을 수행했다. 이어서, 물질을 최대 5 정용부피의 제형 완충액에 대해 정용여과하고(단계 2), 정용여과를 모니터링하기 위해 투과물의 pH 및 전도도 확인을 수행하였다. 정용여과 후, 물질을 210 mg/mL 내지 250 mg/mL의 표적 단백질 농도로 추가 농축하였다(단계 3). 잔류물을 수집하고 단백질 농도 측정을 위해 샘플을 채취했다.

이러한 제형물의 제조에서, TFF 시스템에서의 높은 압력으로 인해 210 mg/mL 내지 250 mg/mL의 표적 단백질 농도에 도달하지 못했다. 따라서 Millipore centrifi.1gal 필터 유닛(30,000 MWCO)을 사용하여 표적 단백질 농도를 달성했다. 이러한 농축 단계를 수행하기 위해, 필터 유닛을 BAN2401 제형 완충액으로 평형화한 다음, 잔류물의 단백질 농도가 200 mg/mL 초과로 예상될 때까지 20℃에서 30분 간격으로 3600 RPM(약 3000 x g)에서 BAN2401 물질을 원심분리했다. 잔류물을 필터 유닛으로부터 회수하여 풀링하였다. 철저히 혼합한 후, 풀링된 잔류물을 단백질 농도 측정을 위해 샘플링했다.

단백질을 농축한 후, 샘플을 풀로부터 채취하여 적절한 제형 완충액으로 500배 희석하였다. 280 nm 및 320 nm에서 희석된 샘플의 흡광도를 블랭크 완충액에 대해 측정했다. 최종 단백질 농도 조정을 적절한 제형 완충액을 사용한 희석을 통해 수행하였다. 마지막으로, 10% PS80 용액을 BAN2401에 첨가하여 최종 용액에서 0.02% PS80을 달성하고, 단백질 용액을 위아래로 흔드는 회전을 통해 철저히 혼합했다.

최종 BAN2401 제형화 물질을 0.2 μm 주사기 필터를 사용하여 여과한 후 바이알 또는 PFS에 충전하였다. 이러한 단계는 생물안전 캐비닛에서 무균으로 수행하였다. 생성된 바이알 또는 PFS를 -20℃의 냉동고에 넣었다. 최악의 조건을 시뮬레이션하기 위해 바이알을 거꾸로 보관하였고 PFS를 수평으로 보관했다.

C. BAN2401을 포함하는 예시적인 200 mg/mL SC 제형물에 대한 안정성 실험.

pH에 대한 검정(도 19 내지 21), 405 nm에서의 흡광도(도 22 내지 24)(황변 증가를 검출하기 위해), 크기 배제 크로마토그래피(SEC)(도 25 내지 33)를 사용하여 5℃(3M, 6M, 9M, 12M) 및 25℃(1M, 3M)에서 그리고 이후 5℃에서 샘플 안정성을 평가했다. 예시적인 제형물 FSC1 내지 FSC4에 대해서는 표 17을 참고한다; 도 19 내지 33에서 "F1a"는 FSC1a, "F1b"는 FSC1b, "F2"는 FSC2, "F3"은 FSC3을 나타냄을 주의한다. 단백질 농도, 시차 주사 열량측정(DSC), PS80 및 삼투압 농도를 포함하는 추가 특징규명 검정을 t=0 샘플에 대해 수행했다. T=0 및 t=6개월 샘플에 대해 눈에 보이지 않는 입자 시험을 수행했다. 5℃에서 1개월 동안 보관된 샘플에 대해 3일 진탕 연구를 수행했다. 진탕 연구를 위한 샘플을 5℃ 보관으로부터 1개월 후 250 rpm으로 3일 동안 진탕하면서 25℃로 옮겼다.

시험 결과는 모든 FSC1a 내지 FSC3 제형물 중 200 mg/ml BAN2401이 12개월 동안 2℃ 내지 8℃에서 보관 후 유사한 수준의 응집체 및 단편을 가짐을 나타내었다. 3개의 FSC1a 내지 FSC3 제형물 중 200 mg/mL의 BAN2401에 대한 안정성을 평가했다. 전반적으로, 시험된 각 제형물 중 BAN2401의 안정성은 유사하게 나타났으며, 시험된 용기 밀봉과 무관하게 12개월 동안 5℃에서 보관 후 98.2% 초과의 단량체를 유지했다. 또한, 12개월 동안 5℃에서 보관 후, pH는 안정하게 유지되었으며, A405에 의한 황변의 눈에 띄는 증가는 없었다.

(a) 단백질 농도(T=0 샘플)

UV-Vis 분광광도계를 사용하여 단백질 농도를 측정하였다. 결과를 표 18에 기재한다.

[표 18]

단백질 농도 결과

1 cm 석영 큐벳을 사용하여 Beckman DU-800 분광광도계에서 280 nm 및 320 nm에서의 흡광도를 측정하여 단백질 농도를 평가했다. 샘플을 500배 희석하고 3개씩 제조했다. 단백질 농도를 하기 공식을 사용하여 1.32의 흡광 계수 ε를 사용해서 계산하였다.

농도 = (A280 - A320) / ε x 희석 계수

(b) 폴리소르베이트 80(T=0 샘플)

샘플의 PS80 함량을 올레산의 정량을 통해 측정하였다. 결과를 표 19에 나타낸다.

[표 19]

폴리소르베이트 80 결과

PS80의 가수분해 산물인 올레산의 정량에 의해 측정을 수행하였다. 염기 가수분해를 사용하여, PS80은 올레산을 1:1 몰비로 방출한다. 올레산은 역상 HPLC를 사용하여 다른 PS80 가수분해 산물 및 매트릭스로부터 분리할 수 있다. 올레산을 195 nm에서의 흡광도를 사용하여 유도체화 없이 모니터링하였다[J. Chromatography B, 878 (2010) 1865-1870]. 실험적으로, 샘플을 수산화나트륨과 혼합하여 올레산을 방출하고, 이후 아세토니트릴로 추출하였다. 추출물을 인산칼륨 용액으로 희석하고 100 μL의 샘플 부피를 Waters Symmetry C18 컬럼에 주입하였다. 80% 유기상 A(아세토니트릴) 및 20% 수성상 B(20 mM 일염기성 인산칼륨, pH 2.8)를 함유하는 등용매 용리를 사용하여 분리를 수행했다. 샘플 중 PS80 농도를 표준 곡선을 사용하여 피크 면적으로부터 계산하였다.

(c) 삼투압 농도(T=0 샘플)

샘플의 삼투압 농도를 동결점 삼투압측정기를 사용하여 결정하였다. 결과를 표 20에 나타낸다.

[표 20]

삼투압 농도 결과

삼투압 농도를 Precision Systems Osmette III 동결점 삼투압측정기를 사용하여 측정하였다. 샘플을 WFI로 3배 희석하고 10 μL의 희석된 샘플 부피를 인출하고 삼투압측정기 피펫을 사용하여 기기에 로딩했다. 생성된 삼투압 농도 측정을 샘플 희석에 대해 보정하였다.

(d) 눈에 보이지 않는 입자

Fluid Technologies FlowCarn 기기를 사용하여 눈에 보이지 않는 입자 분석을 수행했다. T=O 결과를 표 21에 기재한다. 물질이 5℃에서 보관될 때 경시적으로 총 입자 농도 및 10 μm 초과의 입자 수가 증가하는 것으로 나타난다. 증가된 변화 정도는 FSC1a < FSC1b < FSC2 < FSC3 순으로 작았다.

[표 21]

눈에 보이지 않는 입자 결과

20X 대물렌즈와 50um 플로우 셀이 있는 Fluid Imaging Technologies FlowCam을 사용하여 눈에 보이지 않는 입자 분석을 수행했다. BAN2401 샘플을 걸기 전에, 플로우 셀을 dI H₂O로 세척하고 dI H₂O 상에서 측정을 수행하여 플로우 셀이 깨끗함을 확인하였다. 0.2 mL의 diH₂O 당 계수된 입자의 총 수가 2개 이하면 플로우 셀이 사용할 준비가 된 것으로 간주했다. 샘플을 실온으로 평형화한 다음 탈이온수로 20배 희석했다. 0.2 mL의 샘플 부피 및 0.02 mL/분의 샘플 유속을 사용하여 2개씩의 희석된 샘플을 분석했다. 자동 이미지 비율은 14로 19.6%의 효율 및 10분의 실행 시간을 제공했다. 생성 입자 농도를 샘플 희석에 대해 보정하였다.

(e) pH

각 제형물의 pH를 안정성 시험 전반에 걸쳐 모니터링하였다. 도 19 내지 21에 나타낸 바와 같이, 시험된 임의의 보관 조건에서 샘플에 대해 명백한 변화는 관찰되지 않았다.

(f) HPLC-SEC

고성능 액체 크로마토그래피 크기 배제 크로마토그래피(HPLC-SEC) 분석을 1.0 mL/분의 유속에서 0.2 M 인산나트륨, pH 7.0 이동상으로 TSK 03000 SWXL 컬럼을 이용하여 수행하였다. 샘플 주입 부피는 200 mg/mL의 단백질 농도에 대해 0.8 μL였다. 이렇게 하면 연구 전반에 걸쳐 대략 150 μg의 단백질이 컬럼에 확실히 주입된다. 도 25 내지 33에 나타낸 바와 같이, 단량체, 응집체 및 단편에 대한 상대 피크 면적(%) 결과를 보고하였다.

BAN2401의 물리적 분해를 5℃ 및 25℃에서 보관된 안정성 샘플에 대해 HPLC-SEC를 수행하여 평가했다. 12개월 동안 5℃에서 보관 후, 응집체 백분율은 대략 1.1%로 3개 제형물에서 유사했다. 모든 시험된 제형물에 대해 생성된 단편%는 0.4% 내지 0.5% 범위였다. 5℃에서 12개월 보관 후 단량체 함량은 모든 시험된 제형물 및 용기 밀봉에 대해 98.4% 내지 98.6% 범위였다. 현재 분해 속도에서, 시험된 모든 제형물 중 BAN2401은 5℃에서 최대 24개월 보관 후 97% 초과 단량체를 가질 수 있었다.

25℃에서 최대 3개월 보관 후, 3개월 후의 단편 생성은 0.4% 내지 0.8% 범위였다. 단량체 함량은 25℃에서 3개월 후 단량체가 98%보다 조금 적었던 FSC3을 제외하고, 모든 제형물에 대해 98%보다 약간 더 컸다.

실시예 8: 단백질, 아르기닌 및 폴리소르베이트 80 농도의 선택

A. 샘플 제조

각 후보 제형물(F1 내지 F12)을 하기와 같이 제조하였다. 원료 의약품(DS) 공정 중간체를 농축하고 원심 필터 유닛에 의해 해당 제형 완충액과 평형화하였다(표 22). 농축 및 평형화 후, 제형 완충액에 용해된 PS80을 첨가하여 사전 결정된 농도를 달성하고, 단백질 농도를 최종 농도로 조정하였다. 각 후보 제형물을 0.5 mL의 충전 부피로 바이알에 충전하였다. 후보 제형물(F1 내지 F12)을 표 22에 나타낸다. 제형물 F0을 대조군으로 평가하였다.

[표 22]

제형물(F0) 및 후보 제형물 F1 내지 F12

a: F2 및 F10은 상이한 연구를 위해 제조된 동일한 제형물이다.

b: 폴리소르베이트 80 농도의 선택에서, 약물 용액을 완제 의약품으로부터 인출하고 0.5 mL로 충전하여 충전 부피와 용기 밀봉 시스템을 정렬했다.

B. 안정성 프로토콜

안정성 프로토콜을 표 23, 표 24 및 표 25에 나타낸다. 일단 보관상태에서 꺼내면, 바이알을 시험 전까지 5℃에서 보관했다. 보관 조건은 하기와 같았다:

· 장기 조건: 5℃±3℃에서 바로 세워서 보관

· 가속 조건: 25℃±2℃, 60% RH±5% RH, 바로 세워서 보관

· 스트레스 조건(냉동-해동): -30℃에서 냉동 및 실온에서 해동, 바로 세워둠

· 스트레스 조건(진탕): 5℃, 수평으로 눕힘, 50 mm의 회전 진폭을 갖는 왕복 회전기에서 250 rpm으로

[표 23]

안정성 프로토콜(장기 및 가속 조건)

N/A: 해당 없음.

[표 24]

안정성 프로토콜(스트레스 조건: F0 내지 F7)

N/A: 해당 없음.

[표 25]

안정성 프로토콜(스트레스 조건: F0, F8 내지 F12)

N/A: 해당 없음.

용액의 점도는 고농축 단백질 용액에서 지수적으로 증가하는 것으로 알려져 있기 때문에, 분석을 위해 0.05(w/v)%의 PS80을 함유하는 제형 완충액으로 각 후보 제형물(F1 내지 F5)의 단백질 농도를 200 ± 10 mg/mL로 조정했다. 다른 제형물은 측정 전에 희석하지 않았다.

C. 결과 및 논의

(a) 아르기닌 농도의 선택

제형물 중 표적 아르기닌 농도를 선택하기 위해, 상이한 아르기닌 농도(150 mmol/L 내지 350 mmol/L, F1 내지 F5)를 갖는 후보 제형물에 대해 물성을 평가하고 냉동-해동, 장기 및 가속 안정성 연구를 수행하고 제형물 F0과 비교했다(표 22 참고). 물성 및 냉동-해동 연구 결과를 표 26에 나타내었다. 장기 및 가속 안정성 연구 결과를 표 27 및 표 28에 나타내었다.

[표 26]

완제 의약품(F0 내지 F5)에 대한 물성 및 냉동-해동 연구 결과

mM: mmol/L, CSYL: 투명한 연황색 액체, Arg: 아르기닌, NS: 일정 미정.

a: 점도 측정 전에 단백질 농도를 조정하였다(F1 내지 F5).

[표 27]

5±3℃에서 바로 세운 위치로 보관된 BAN2401 완제 의약품(F0 내지 F7)에 대한 안정성 연구 결과

CSYL: 투명한 연황색 액체.

[표 28]

25±2℃, 60%±5% RH에서 바로 세운 위치로 보관된 BAN2401 완제 의약품(F0 내지 F7)에 대한 안정성 연구 결과

CSYL: 투명한 연황색 액체., Ini: 초기, SEC: 크기 배제HPLC, IEX: 이온 교환 HPLC, PS80: 폴리소르베이트 80, NS: 일정 미정.

(b) 물성

표 26에 나타낸 바와 같이, 삼투압 농도값은 아르기닌 농도가 증가함에 따라 증가하였다. F1, F2 및 F3은 F4 및 F5와 비교하여 낮은 삼투압 농도값을 나타내었다. 따라서 아르기닌 농도는 250 mmol/L 이하로 제한하였다. F1 내지 F5의 점도값은 좁은 범위(7.3 cP 내지 8.1 cP) 내에 있었고 150 mmol/L 내지 350 mmol/L 내에서 아르기닌 농도와 상관관계가 없었다. 외관, pH 및 PS80 및 단백질의 농도 결과는 거의 표적에 도달했다.

(c) 냉동-해동 안정성 연구

표 26에 나타낸 바와 같이 3 주기의 냉동-해동 시험 후 모든 시험 항목에서 유의미한 변화가 관찰되지 않았다.

(d) 장기 안정성 연구

표 27에 나타낸 바와 같이, 3개월 보관 후 크기 배제 HPLC(SEC)를 제외한 모든 시험 항목에서 유의미한 변화가 관찰되지 않았다. SEC에 의한 응집체 및 단편의 양은 후보 제형물 F1 내지 F5에서 약간 증가했다. 각각의 증가율은 제형물 F0와 유사하였다.

(e) 가속 안정성 연구

표 28에 나타낸 바와 같이, SEC 및 이온 배제 HPLC(IEX)를 제외한 모든 시험 항목에서 유의미한 변화가 관찰되지 않았다. 모든 후보(F1 내지 F5, BAN2401 200 mg/mL)에서 SEC에 의해 응집체 양이 증가하였고, 예상된 바와 같이 제형물 F0보다 속도가 빨랐지만, 장기 조건에서의 결과 및 긴 보관 수명을 가지는 F0의 안정성을 고려할 때 모든 후보가 적합한 것으로 간주되었다. 더 높은 아르기닌 농도는 실시예 4에 기재된 결과와 일치하게, 약간 더 느린 응집체 형성을 초래했다. SEC에 의한 단편의 양도 모든 후보에서 증가했지만 속도는 제형물 F0에서의 속도와 유사했다. EX의 경우, 모든 후보에서 산성 피크의 양이 증가하였으나 속도는 F0에서의 속도와 유사하였다.

(f) 아르기닌 농도

표 26에 나타낸 바와 같이, F4 및 F5(300 mmol/L 및 350 mmol/L의 아르기닌 농도에서)는 삼투압 농도의 관점에서 적합한 것으로 간주되지 않았다. 적합한 후보 F1, F2 및 F3(아르기닌 농도 150 mmol/L, 200 mmol/L 및 250 mmol/L에서) 중에서 F1이 등장성에 가장 가깝다. 표 28에 나타낸 바와 같이, 더 높은 아르기닌 농도를 갖는 제형물은 가속 안정성 연구에서 더 낮은 응집체 형성 속도를 나타내었지만 속도의 차이는 평가된 아르기닌 농도 범위에서 유의미하지 않았다. 등장성 및 응집체 형성 속도를 모두 고려하여, F2 제형물에 기반하는 표적 아르기닌 농도로 200 mmol/L를 선택했다.

(g) 단백질 농도의 선택

제형물에서의 표적 단백질 농도를 선택하기 위해, 상이한 단백질 농도를 갖는 후보 제형물(200 mg/mL 내지 300 mg/mL, F2, F6, F7) 및 제형물 F0에 대해 물성을 평가하고 냉동-해동, 장기 및 가속 안정성 연구를 수행했다. 물성 및 냉동-해동 연구 결과를 표 29에 나타낸다. 장기 및 가속 안정성 연구 결과를 표 27 및 표 28에 나타내었다.

[표 29]

BAN2401 완제 의약품(F0, F6 및 F7)에 대한 물성 및 냉동-해동 안정성 연구 결과

CSYL: 투명한 연황색 액체, NS: 일정 미정.

a: 결과는 표 26에서와 동일하다.

(h) 물성

표 29에 나타낸 바와 같이, F2 및 F6은 F7과 비교하여 낮은 삼투압 농도값을 나타내었다. F2, F6 및 F7의 점도 값은 각각 7.8 cP, 21 cP 및 48 cP였다. 20 cP 초과의 고점도는 한외여과 및 정용여과 단계 동안 펌프의 배압을 증가시키고 막횡단 플럭스를 감소시켜 DS 제조에 어려움을 유도할 수 있다. 또한 용액의 농도가 높을수록 충전 바늘이 막혀 충전 중량 편차가 발생하여 DP 충전 공정을 더 어렵게 만든다. 요망되는 점도가 20 cP³이하로 보고되어 있으므로, F2가 적합했다. 외관, pH 및 PS80 및 단백질의 농도 결과는 거의 표적에 도달했다.

(i) 냉동-해동 연구

표 29에 나타낸 바와 같이 3 주기의 냉동-해동 시험 후 모든 시험된 항목에서 유의미한 변화가 관찰되지 않았다.

(j) 장기 안정성 연구

표 27에 나타낸 바와 같이, 3개월 보관 후 크기 배제 HPLC(SEC) 외에는 유의미한 변화가 관찰되지 않았다. SEC에 의한 응집체 양은 후보 제형물 F2, F6 및 F7에서 약간 증가하였지만 증가 속도는 F0에서와 유사하였다.

(k) 가속 안정성 연구

표 28에 나타낸 바와 같이, SEC 및 이온 배제 HPLC(IEX) 외의 유의미한 변화는 관찰되지 않았다. SEC에 의한 응집체 양은 3개월 시점(0.7% 내지 0.8% 증가)에 유사한 속도로 모든 후보(F2, F6 및 F7)에서 증가했다. 따라서 모든 후보가 적합한 것으로 간주되었다. SEC에 의한 단편의 양 역시 모든 후보에서 증가하였지만 속도는 F0에서의 속도와 유사하였다. IEX의 경우 모든 후보에서 IEX에 의한 산성 피크의 양이 증가하였으나 속도는 F0에서의 속도와 유사하였다.

(l) 단백질 농도

표 29에 나타낸 삼투압 농도 및 점도 결과, 그리고 표 27 및 표 28에 나타낸 전반적인 안정성 결과를 고려하여, 단백질 농도 200 mg/mL을 선택하였다.

(m) PS80 농도의 선택

제형물 중 표적 PS80 농도를 선택하기 위해, 상이한 PS80 농도[0(w/v)% 내지 0.10(w/v)%, F8 내지 F12]를 갖는 후보 제형물 및 제형물 F0에 대해 냉동-해동 및 진탕 연구를 수행하였다. 냉동-해동 및 진탕 연구 결과를 각각 표 30 및 표 31에 나타낸다.

[표 30]

BAN2401 완제 의약품(F0, F8 내지 F12)에 대한 냉동-해동 연구 결과

CSYL: 투명한 연황색 액체, FVP: 가시적 입자가 없음.

[표 31]

BAN2401 완제 의약품(F0, F8 내지 F12)에 대한 진탕 연구 결과

CSYL: 투명한 연황색 액체, OWL: 유백색 액체, FVP: 가시적 입자가 없음, NT: 시험되지 않음.

a: 불충분한 샘플 부피로 인한 거품 오염에 의해 입자를 정확히 측정할 수 없었으므로 결과를 보고하지 않음.

(n) 냉동-해동 연구

표 30에 나타낸 바와 같이, 3 주기의 냉동-해동 시험 후 시험된 모든 항목에서 유의미한 변화는 관찰되지 않았다. MFI에 의한 입자 수는 F8(PS80 비포함)에서 상대적으로 높았다.

(o) 진탕 연구

표 31에 나타낸 바와 같이, 0.02(w/v)% 내지 0.10(w/v)%의 PS80을 함유하는 제형물(F9 내지 F12)은 진탕 후 안정하였다. 진탕 후 SEC에 의한 외관, 단백질 농도 및 응집체 양에 대해 F8(PS80 비포함)에서 변화가 관찰되었다. 외관은 투명한 연황색 액체에서 유백색 액체로 변화하였다. 단백질 농도는 206 mg/mL에서 195 mg/mL로 약간 감소했다. 응집체 양은 1.1%에서 3.8%로 증가했다. 따라서 F8(PS80 비포함)은 적합한 것으로 간주되지 않았다.

(p) PS80 농도

표 30(냉동-해동 연구) 및 표 31(진탕 연구)에 나타낸 결과에 기초하여, 0.02(w/v)% 내지 0.10(w/v)%의 PS80을 함유하는 제형물은 3 주기의 냉동-해동 및 진탕 후 최대 3일 안정하였다. 따라서 0.05(w/v)%의 PS80 농도를 표적으로 선택했다.

(q) 결론

결론적으로, 후속 연구를 위해 BAN2401 제형물에 대해 하기 제형물을 선택하였다.

[표 32]

후속 연구를 위한 제형물

실시예 9: 상이한 pH를 갖는 200 mg/mL BAN2401 제형물에 대한 안정성 연구

상이한 pH를 갖는 200 mg/mL에서 BAN2401 제형물의 안정성을 시험하기 위해 안정성 연구를 수행하였다. 또한, 메티오닌 첨가가 완제 의약품(DP) 안정성에 미치는 영향을 시험했다.

A. 샘플 제조

각 후보 제형물(표 33)을 하기와 같이 제조하였다. 제형물을 원심 필터 유닛에 의해 해당 제형 완충액으로 평형화하였다. F20 조제물의 경우에만, 도난 효과(Donnan effect)로 알려진 반투막 근처의 농축된 하전 단백질에 의해 양성자가 반발되기 때문에, 여과된 용액의 pH가 4.0에 도달할 때까지 pH 3.5의 제형 완충액을 사용하였다. 농축 및 평형화 후, 제형 완충액에 용해된 PS80을 첨가하여 사전 결정된 농도를 달성한 다음, 단백질 농도를 최종 농도로 조정하였다. 각 후보 제형물을 0.5 mL의 충전 부피로 바이알에 충전하였다. 제형물 F0(표 33 참고)을 대조군으로 평가하였다.

[표 33]

원료 의약품 및 후보 SC 제형물의 조성

Arg: 아르기닌, Met: 메티오닌

a: pH를 조정하기 위해, 아르기닌 및 아르기닌 하이드로클로라이드를 F0에 대해 조합하고 F13 내지 F22에 대해 하이드로클로라이드를 첨가하였다.

b: F21은 F15와 동일한 제형물이다.

B. 보관 프로토콜

보관 프로토콜을 표 34, 표 35 및 표 36에 나타낸다. 일단 보관상태에서 꺼내면, 시험을 시작할 때까지 바이알을 5℃에서 보관했다. 보관 조건은 하기와 같다:

· 장기 조건: 5℃±3℃에서 바로 세워서 보관

· 가속 조건: 25℃±2℃, 60% RH±5% RH에서 바로 세워서 보관

1000 lx: 25℃±2℃, 60% RH±5% RH, 1000 lx의 빛 노출과 함께 눕혀둠

암소: 25℃±2℃, 60% RH±5% RH, 알루미늄 호일로 덮어서 빛 노출 없이 눕혀둠.

3개월 또는 더 장기 보관 후, 응집체 수준을 확인하기 위해 크기 배제 HPLC를 장기 연구를 위해 9개월 및 가속 안정성 연구를 위해 3개월째에 연장 보관 샘플로서 추가 평가했다. 후자의 샘플은 냉장고에서 6개월 동안 보관한 후 시험했다.

[표 34]

장기 안정성 연구를 위한 샘플수집 일정(5℃±3℃, 바로 세워둠)

X: 수행됨, NT: 시험되지 않음

색상: 액체의 변색 정도, 투명도: 투명도 및 유백도, 단백질 conc: 단백질 농도, ELISA: 항원 결합 ELISA, FcR: 결합 검정 (CD32a), cSDS: 모세관 SDS 겔 전기영동 R: 환원됨, NR: 환원되지 않음, SEC: 크기 배제 HPLC, IEX: 이온 교환 HPLC, PS80: 폴리소르베이트 80 함량, MFI: 마이크로-유동 조영, PMAP: 펩타이드 맵

a: 연장된 평가

[표 35]

가속 안정성 연구를 위한 샘플수집 일정(25℃±2℃, 60% RH±5% RH, 바로 세워둠)

Ex: 연장된 평가, 샘플을 꺼낸 후 25℃에서 3M 동안 그리고 5℃에서 6M 동안 보관됨

X: 수행됨, NT: 시험되지 않음

[표 36]

냉동-해동 및 광-안정성 연구를 위한 샘플수집 일정

FT: 냉동-해동(-30℃에서 냉동되고 실온에서 해동됨, 바로 세워둠), 암소: 25℃±2℃, 60% RH±5% RH, 알루미늄 호일로 덮어서 빛 노출 없이 눕혀둠, 1000 lx: 25℃±2℃, 60% RH±5% RH, 형광에 의한 1000 lx의 빛 노출을 포함하여 눕혀둠, X: 수행됨,

색상: 액체의 변색 정도, 투명도: 투명도 및 유백도, MFI: 마이크로-유동 조영, Pro conc: 단백질 농도, PS80: 폴리소르베이트 80 함량, ELISA: 항원 결합 ELISA, FcR: 결합 검정(CD32a), cSDS: 모세관 SDS 겔 전기영동, R: 환원됨, NR: 환원되지 않음, SEC: 크기 배제 HPLC, IEX: 이온 교환 HPLC, PMAP: 펩타이드 맵

C. 결과 및 논의

pH 변이(pH 4.0 내지 pH 6.0) 및 메티오닌 첨가를 포함하는 후보 제형물에 대해 물성을 평가하고 장기 및 가속 연구를 수행하였다. 메티오닌 첨가의 효율을 평가하기 위해 냉동-해동 및 광안정성 연구도 수행하였다.

D. pH 변이

표 37, 표 38a 및 38b, 표 39 및 표 40에 나타낸 바와 같이, 크기 배제 HPLC(SEC)를 제외한 모든 시험 항목에 대해 후보 제형물(F13, F15, F17 및 F20 내지 F22) 간에 유의미한 차이는 관찰되지 않았다. 제형물 F20(즉, 더 낮은 pH 4.0을 갖는 제형물)은 초기 시점에서 SEC에 의해 더 적은 양의 응집체를 나타내었다. 또한 가속 안정성 연구에서 응집체 형성 속도가 약간 더 낮고 단편 형성 속도가 더 높은 것이 관찰되었다. 4.5 내지 5.5의 pH를 갖는 제형물의 결과는 필적하는 것으로 확인되었다.

[표 37]

5℃±3℃, 바로 세운 위치로 보관된, pH 4.0 내지 6.0을 갖는 BAN2401 제형물에 대한 안정성 연구 결과

BY5: 참조 용액 BY5와 동일함. RS2: 참조 현탁액 II, RS3: 참조 현탁액 III, FVP: 가시적 입자가 없음, NT: 시험되지 않음.

[표 38a]

25℃±2℃, 60% RH±5% RH, 바로 세운 위치로 보관된, pH 4.0 내지 6.0을 갖는 BAN2401 제형물에 대한 안정성 연구 결과

BY5: 참조 용액 BY5와 동일함. RS2: 참조 현탁액 II, RS3: 참조 현탁액 III, FVP: 가시적 입자가 없음, NT: 시험되지 않음. 보고: 보고 결과

[표 38b]

NT: 시험되지 않음, 보고: 보고 결과

[표 39]

5℃±3℃, 바로 세운 위치로 보관된, pH 4.5 내지 5.5를 갖는 제형물에 대한 연장된 안정성 연구 결과

[표 40]

25℃±2℃, 60% RH±5% RH, 바로 세운 위치로 보관된, pH 4.5 내지 5.5를 갖는 현재 및 선도 제형물에 대한 연장된 안정성 연구 결과

E. 메티오닌 첨가

표 41a 및 41b, 및 표 42 내지 표 46에 나타낸 바와 같이, 메티오닌이 있거나 없는 제형물(F18 및 F15) 간에 유의미한 차이는 관찰되지 않았다. 메티오닌을 포함하는 제형물(F18)은 연장된 장기 안정성 연구, 가속 안정성 연구 및 광안정성 연구에서 약간 더 낮은 응집체 형성 속도를 나타냈다. F18은 또한 최대 7일 동안 1000 lux의 빛 노출에서 메티오닌 잔기(예를 들어 중쇄의 위치 259에서)의 약간 더 낮은 산화를 나타내었다. 냉동-해동 연구에서는 어떠한 차이도 나타내지 않았다. 안정화제로서 메티오닌 10 mmol/L의 효과는 제한적이었다.

[표 41a]

5℃±3℃, 바로 세운 위치로 보관된, Met을 포함하거나 포함하지 않는 제형물에 대한 안정성 연구 결과

Met: 메티오닌, BY5: 참조 용액 BY5와 동일함. RS2: 참조 현탁액 II, RS3: 참조 현탁액 III, FVP: 가시적 입자가 없음

[표 41b]

Met: 메티오닌, NT: 시험되지 않음.

[표 42]

25℃±2℃, 60% RH±5% RH, 바로 세운 위치로 보관된, Met을 포함하거나 포함하지 않는 제형물에 대한 안정성 연구 결과

Met: 메티오닌, NT: 시험되지 않음, BY5: 참조 용액 BY5와 동일함. RS2: 참조 현탁액 II, RS3: 참조 현탁액 III, FVP: 가시적 입자가 없음, NT: 시험되지 않음.

[표 43]

5℃±3℃, 바로 세운 위치로 보관된, DS1 또는 DS2로부터의, Met을 포함하거나 포함하지 않는 현재 및 선도 제형물에 대한 연장된 안정성 연구 결과

Met: 메티오닌

[표 44]

25℃±2℃, 60% RH±5% RH, 바로 세운 위치로 보관된, Met을 포함하거나 포함하지 않는 제형물에 대한 연장된 안정성 연구 결과

Met: 메티오닌

[표 45]

메티오닌을 포함하거나 포함하지 않는 제형물에 대한 스트레스(냉동-해동 및 광안정성) 연구 결과

FT: 냉동-해동, (-30℃에서 냉동되고 실온에서 해동됨, 바로 세워둠), 25℃: 25℃±2℃, 60% RH±5% RH, 1000 lx: 1000 lx의 빛 노출과 함께 눕혀둠, 암소: 알루미늄 호일로 덮어 빛 노출 없이 눕혀둠, Met: 메티오닌, BY5: 참조 용액 BY5와 동일함, RS3: 참조 현탁액 III , FVP: 가시적 입자가 없음, NT: 시험되지 않음

[표 46]

환원 펩타이드 맵에 대한 결과

Met: 메티오닌, 5℃: 5℃±3℃, 25℃: 25℃±2℃, 60% RH±5% RH, 1000 lx: 1000 lx의 빛 노출과 함께 눕혀둠, 암소: 알루미늄 호일로 덮어 빛 노출 없이 눕혀둠, HC: 중쇄, LC: 경쇄

F. 결론

품질 속성은 pH 4.5에서 pH 5.5까지의 pH 변이를 갖는 BAN2401 제형물 간에 필적했다. pH 4.0에서는 더 낮은 응집체 형성 속도를, 반대로 보관 동안에는 더 빠른 단편 형성 속도를 나타냈다. 품질 평가, 장기, 가속, 냉동-해동 및 빛을 포함하는 안정성 연구에 기초하여 10 mmol/L 농도로 메티오닌을 포함하는 제형물 및 포함하지 않는 제형물 간에 유의미한 차이는 확인되지 않았다. 약간 더 느린 응집체 형성 속도 및 아미노산 잔기의 약한 산화 억제가 관찰되었지만 차이는 유의미하지 않았다. 결론적으로, 5.0 ± 0.5의 pH에서 BAN2401 200 mg/mL, L-히스티딘/히스티딘 하이드로클로라이드 25 mmol/L, L-아르기닌 200 mmol/L, 폴리소르베이트 80 0.05(w/v)%로 이루어진 F15와 F21을 추가 개발을 위한 우수한 원료 의약품 후보로 결정하였다.

실시예 10: BAN2401 제형물의 안정성에 대한 아르기닌 농도의 영향에 대한 조사

200 mg/mL에서의 BAN2401의 안정성에 대한 아르기닌 농도(0 mmol/L, 50 mmol/L, 100 mmol/L 및 200 mmol/L)의 영향을 평가했다. 각 아르기닌 농도 수준의 샘플을 가속 조건(25℃/60% RH)에서 보관하고 0개월, 1개월, 2개월째에 시험하였다.

A. 샘플 제조

한외여과에 의한 농축된 BAN2401 원료 의약품 공정 중간체의 완충액 교환에 의해 샘플(F1 내지 F4)을 제조하였다. 무균 여과 후, 각 0.4 mL 샘플을 바이알에 충전하였다. 샘플 정보를 표 47에 나타낸다.

[표 47]

샘플 정보

B. 결과

샘플 F1 내지 F4에 대한 이러한 안정성 연구 결과를 표 48 내지 51에 나타낸다. 샘플 간 pH 및 단백질 농도에는 차이가 없었고, 아르기닌 농도 수준은 초기 샘플에 대한 표적과 일치했다.

아르기닌을 함유하는 샘플(F2 내지 F4)에 대한 응집체%는 아르기닌을 함유하지 않는 샘플(F1)의 응집체%보다 낮았다.

[표 48]

샘플 F1의 시험 결과(표적화된 아르기닌 0 mmol/L)

[표 49]

샘플 F2의 시험 결과(표적화된 아르기닌 50 mmol/L)

[표 50]

샘플 F3의 시험 결과(표적화된 아르기닌 100 mmol/L)

[표 51]

샘플 F4의 시험 결과(표적화된 아르기닌 200 mmol/L)

C. 논의 및 결론

이러한 연구 결과는 50 mmol/L 내지 200 mmol/L의 아르기닌 농도가 BAN2401 200 mg/mL 제형물에서 단백질 응집체의 증가를 방지함을 시사하였다. 배치 간 아르기닌 농도의 편차는 배치 간 응집체%의 편차를 초래할 수 있다. 또한, 아르기닌 농도는 안정성 연구에서 응집체%의 증가 경향에 영향을 미칠 수 있다.

히스티딘 완충액을 포함하는 제형물은 200 mg/mL BAN2401, 50 mM 시트르산나트륨 및 100 mM 염화나트륨을 포함하는 샘플을 사용한 실시예 2의 도 11에 나타낸 단편화 백분율을 갖는 샘플 F1에서의 단편화 백분율과 비교하여 BAN2401의 단편화 감소에 대한 영향을 나타내는 것으로 드러났다.

서열 목록

[표 52]

mAb 가변 영역의 아미노산 서열

[표 53]

mAb 불변 영역의 아미노산 서열

[표 54]

mAb CDR의 아미노산 서열

중쇄(서열 번호 11):

경쇄(서열 번호 12):

SEQUENCE LISTING <110> EISAI R&D MANAGEMENT CO., LTD. <120> HIGH CONCENTRATION ANTI-ABETA PROTOFIBRIL ANTIBODY FORMULATIONS AND METHODS OF USE THEREOF <130> 08061.0047-00304 <140> <141> 2021-03-19 <150> 62/992,746 <151> 2020-03-20 <150> 63/027,263 <151> 2019-05-19 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Gly Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Gly Tyr Tyr Tyr Gly Arg Ser Tyr Tyr Thr Met Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 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Claims

수성 약학 제형물로서,
(a) 80 mg/mL 내지 300 mg/mL의 농도로, 인간 Aβ 프로토피브릴에 결합하는 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,
(b) 100 mM 내지 400 mM 아르기닌,
(c) 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80, 및
(d) 약학적으로 허용 가능한 완충액,
을 포함하고, 약학 제형물은 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖고,
단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고,
아르기닌은 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합인, 약학 제형물.
제1항에 있어서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 100 mg/mL 내지 200 mg/mL의 농도로 존재하는, 약학 제형물.
제1항에 있어서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 100 mg/mL의 농도로 존재하는, 약학 제형물.
제1항에 있어서, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편은 200 mg/mL의 농도로 존재하는, 약학 제형물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 메티오닌을 추가로 포함하는 약학 제형물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 완충액이 시트레이트 완충액 또는 히스티딘 완충액인, 약학 제형물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 10 mM 내지 100 mM 시트레이트 완충액 또는 10 mM 내지 100 mM 히스티딘 완충액을 포함하는 약학 제형물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 125 mM 내지 350 mM 아르기닌을 포함하는 약학 제형물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 200 mM 아르기닌을 포함하고, 아르기닌은 아르기닌 하이드로클로라이드인, 약학 제형물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 200 mM 아르기닌 및 25 mM 히스티딘 완충액을 포함하고, 아르기닌은 아르기닌 하이드로클로라이드인, 약학 제형물.
수성 약학 제형물로서,
(a) (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 80 mg/mL 내지 240 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,
(b) 140 mM 내지 260 mM 아르기닌 하이드로클로라이드,
(c) 0.02% w/v 내지 0.08% w/v 폴리소르베이트 80, 및
(d) 15 mM 내지 35 mM 히스티딘 완충액,
을 포함하고, 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖는 약학 제형물.
수성 약학 제형물로서,
(a) (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 80 mg/mL 내지 120 mg/mL의 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편,
(b) 240 mM 내지 360 mM 아르기닌,
(c) 0.02% w/v 내지 0.08% w/v 폴리소르베이트 80, 및
(d) 30 mM 내지 50 mM 시트레이트 완충액,
을 포함하고, 4.5 내지 5.5 범위의 pH를 갖고,
아르기닌은 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합인, 약학 제형물.
다음 단계를 포함하는, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편의 응집체 형성을 감소시키는 방법:
(i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 포함하는 수성 약학 제형물을 80 mg/ml 내지 300 mg/ml의 농도로 제공하는 단계, 및
상기 수성 약학 제형물에 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합을 첨가하는 단계로서, 약학 제형물의 pH는 4.5 내지 5.5의 범위인, 단계.
제13항에 있어서, 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합 이 150 mM 내지 250 mM의 농도로 존재하는, 방법.
제14항에 있어서, 아르기닌, 아르기닌 하이드로클로라이드, 또는 이의 조합 이 200 mM의 농도로 존재하는, 방법.
제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 약학 제형물이 약학적으로 허용 가능한 완충액을 추가로 포함하는, 방법.
제16항에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 완충액이 히스티딘 완충액 또는 시트레이트 완충액인, 방법.
다음 단계를 포함하는, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편의 단편화를 감소시키는 방법:
(i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 (ii) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 단리된 항-Aβ 프로토피브릴 항체 또는 이의 단편을 포함하는 수성 약학 제형물을 80 mg/mL 내지 300 mg/mL의 농도로 제공하는 단계, 및
상기 수성 약학 조성물에 히스티딘 완충액을 첨가하는 단계로서, 약학 제형물의 pH는 4.5 내지 5.5의 범위인, 단계.
제18항에 있어서, 15 mM 내지 35 mM 히스티딘 완충액을 포함하는 방법.
제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 약학 제형물이 0.01% w/v 내지 0.1% w/v 폴리소르베이트 80을 추가로 포함하는, 방법.