NO332991B1 - Kalsiumreseptormodulerende forbindelse, farmasoytisk sammensetning og anvendelse derav - Google Patents

Abstract

Det er tilveiebrakt en kalsiumreseptormodulator som innbefatter en forbindelse med formel (I): hvori ring A er en eventuelt substituert 5- til 7-leddet ring; ring B er en eventuelt substituert 5- til 7- leddet heterosyklisk ring; X1 er CR1, CR1R2, N eller NR13; X2 er N eller NR3; Y er C, CR4 eller N; Z er CR5, CR5R6, N eller NR7; Ar er en eventuelt substituert syklisk gruppe; R er H, en eventuelt substituert hydrokarbongruppe, etc.; og --- er en enkeltbinding eller en dobbeltbinding; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 og R13 er uavhengig H, en eventuelt substituert hydrokarbongruppe; eller et salt derav eller et prodrug derav. Forbindelser med formel (II) og (III): hvori ring A er en eventuelt substituert 5- til 7-leddet ring; Q er C, CR5 eller N; R8, R9, R10, R11 og R12 er uavhengig H, en eventuelt substituert hydrokarbongruppe, etc., eller et salt derav er også tilveiebrakt. Også spesifikt X1, R3, R1, Y og X3 i formel (II) og (III) som tidligere.

Description

Foreliggende oppfinnelse angår heterosykliske forbindelser som har kalsiumsensende reseptor (CaSR, heretter kort referert til som Ca-reseptor) modulerende (agonistisk eller antagonistisk) aktivitet, farmasøytiske sammensetninger som inneholder dem, og anvendelse derav.

Kalsiumion (heretter kort referert til som Ca) spiller en essensiell rolle for oppretthold-else av moduleringsfunksjoner hos forskjellige celler, slik som endokrine og eksokrine celler etc, i tillegg til nerve og muskel. Av denne grunn er blod-Ca-nivået nøyaktig opprettholdt innenfor et smalt område. Paratyroidhormon (PTH) spiller en sentral rolle når det gjelder å opprettholde dette blod-Ca-nivået. Derfor responderer sekresjon av PTH fra paratyroidkjertelen nøyaktig på forandring i blod-Ca-nivået og blir modulert i henhold til dette. I virkeligheten, når blod-Ca-nivået forandres, blir blod-PTH-nivået rasket forandret som respons på dette. Muligheten for en mekanisme hvorved den ekstracellulære Ca-konsentrasjonen blir senset av paratyroidkjertelceller og informa-sjonen overført til cellene, har blitt beskrevet tidligere av Brown et al. 1 1993 oppnådde de kloning og karakterisering av en Ca-sensende reseptor (CaSR; heretter kort referert til som en Ca-reseptor) fra bovint paratyroid (Nature, 366, 575-580(1993)).

Ca-reseptoren består av en stor, terminal, ekstracellulær region som spenner 600 aminosyrer ved N-terminalen som har sju transmembranspennende domener som andre G-proteinkoblede reseptorer, og en intracellulær region bestående av 200 eller færre aminosyrer ved karboksyl-C-terminalen.

Det antas at når den ekstracellulære Ca-konsentrasjonen økes, blir fosfolipase (PL)-C aktivert som fører til økning i den intracellulære Ca-konsentrasjonen og inhibering av PTH-sekresjon på grunn av økning i inositoltrifosfat (IP3). Siden, når en høy verdi av den ekstracellulære Ca-konsentrasjonen opprettholdes, blir den intracellulære Ca-konsentrasjonen økt kontinuerlig, det antas at refluks av Ca fra utsiden av cellen også fremmes. PL-A2og D blir aktivert på grunn av økning i ekstracellulær Ca, men det er mulig at disse er via proteinkinase (PK)-C og lignende som aktiveres samtidig via Ca-reseptoren. Ca-reseptoren inhiberer også adenylylsyklase via Gi-protein eller via arachidonsyreproduksjon på grunn av aktivering av PL-A2, og reduserer intracellulær syklisk AMP (Bone, 20, 303-309 (1997)).

Ca-reseptor mRNA uttrykkes i mange vev og ekspresjonsmengden er høy i paratyroidkjertelen, tyroidkjertel-C-celle, medulla og cortex-tykkstigende lem (MTAL og CTAL) og nyreuriniferous tobul, intramedullær oppsamlende tubul (IMCD) og enkefalisk sub fornikal organ (SFO) og hippocampus (Bone, 20, 303-309 (1997)). I tillegg blir ekspre-sjonen uttrykt i mange vev, slik som enkefalisk hypothalamus, cerebellum og olfaktori-kjerne, regioner forskjellige fra TAL og renal uriniferous tubul, lunge, mage, bykspytt-kjertel, tarm og hud. Siden Ca-reseptoren er til stede i forskjellige vev, har dens fysio-logiske funksjon ennå ikke blitt fullt forstått. Imidlertid er det akseptert at Ca-reseptormodulerende (agonistisk eller antagonistisk) legemiddel vil tilveiebringe en ny behandling av forskjellige sykdomstilstander som inkluderer følgende:

1. Legemidler for behandling av beinsykdommer

Siden anabolisk aktivitet manifesteres ved avbrutt administrasjon av PTH, er Ca-reseptormodulerende legemidler som anses å være i stand til å regulere sekresjon av PTH, lovende som et legemiddel for behandling av osteoporose. I tillegg kan Ca-reseptormodulerende legemidler som kan velges fra tyroidkjertel C-celle, være også effektiv for behandling av osteoporose ved stimulering av calcitoninsekresjon. Om samme Ca-reseptoren som den til paratyroidkjertelen er til stede i osteoblast, osteoklast og beincelle, er ikke et spørsmål. Imidlertid er noen Ca-sensende mekanismer sikkert til stede deri og derfor kan legemidler som virker direkte på dem, forventes som et legemiddel for behandling av beinsykdom.

2. Nyrevirkende legemidler

Håndtering av vann og mineraler i nyren er ikke bare basert på resultatene av funksjon som et målorgan for hormoner, slik som PTH, vitamin D etc., men også antas at Ca-reseptoren i nyren fungerer som respons på Ca-konsentrasjonen og magnesiumion-konsentrasjonen i det ekstracellulære fluidet (Kidney Int, 50,2129-2139 (1996)). Videre antas det også at Ca-reseptormodulerende legemidler kan modulere blodmengden i nyren, mengden glomeruløs filtrerning, reninsekresjon og aktivering av vitamin D i tillegg til kontroll av influks og effluks av vann og mineral.

3. Sentralnervesystem og endokrinvirkende legemidler

Ca-reseptor er til stede i tilnærmet alle områder av sentralnervesystemet og er særlig svært godt uttrykt i hippocampus, cerebellum og subfornikal organ (Brain Res, 744.47-56 (1997)). Sel om detaljene når det gjelder funksjonen fremdeles er uklar, er begrepet Ca-reseptorekspresjon etter fødsel i hippocampus, konsistent med begrepet akkvisisjon av LTP ("Long Tightening Phenomenon") (Develop Brain Res, 100,13-21 (1997)) og derfor kan forhold mellom hukommelse og læring antas. Derfor kan Ca-reseptormodulerende legemidler som er gode på hjerneblodbarrierepermeabilitet og selektive for sentralnervesystemet, anvendes for behandling av Alzheimers sykdom. I tillegg, siden tørr munn opptrer hos hyperkalsemiske pasienter, kan Ca-reseptormodulerende legemidler kontrollere dem. Tilstedeværelsen av Ca-reseptor hos musbukspyttkjertel-celler som utskiller ACTH, har blitt rapportert (Mol Endocrinol, 10, 555-565 (1996)). Det antas også at Ca-reseptormodulerende legemidler kan anvendes på Sheehann's syndrom og hypopituitarisme eller hyperpituitarisme.

4. Digestive systemvirkende legemidler

Det antas at en Ca-reseptor er til stede i Auerbach nerveplexus til digestivtrakten og kontrollerer intestinaltraktbevegelse. Konstipasjon er kjent hos hyperkalsemiske pasienter og stimuleringen av digestivtraktbevegelsen er kjent hos hypokalsemiske pasienter i kliniske tester. Eksistensen av en Ca-reseptor i gastrinutskillende celle (G-celle) i magen, har blitt rapportert (J. Clin Invest, 99,2328-2333 (1997)) og intestinal-traktabsorpsjon, konstipasjon, diaré, defekasjon og utskillelse av syre i magen, kan kontrolleres med legemidler som virker på en Ca-reseptor i digestivtrakten. Videre har det blitt funnet at en Ca-reseptor er til stede i humane kolonkreftcellestammer og den kontrollerer c-myc-ekspresjon og proliferasjon (Biochem Biophys Res Commum, 232, 80-83 (1997)), hvor dette er bedre i overensstemmelse med det faktum at Ca-opptak og siderasjon av kolon- og rektumkreft fremviser den negative korrelasjonen og derfor kan Ca-reseptorregulerende legemidler forventes også som et legemiddel for å hindre eller behandle slike kreftformer.

Forskjellige heterosykliske forbindelser er blitt beskrevet i litteraturen. For eksempel beskriver WO 01/53266 en forbindelse med formel:

hvori R, R 1 og R *J er uavhengig H, hydroksyl, etc. Denne forbindelsen har en fosfo-inositid-3-kinaseinhiberende aktivitet og er useful for behandling av koronar obstruk-sjon, etc. Indian J. Chem., Sect. B (1993), 32B(5), 586-9 beskriver syntese av en forbindelse med formel: hvori R er hydrogen, klor, metyl eller metoksy. Imidlertid er ingen anvendelse beskrevet. US-patent 4 746 656 (JP 63-33380 A) beskriver en forbindelse med formel: ; hvori Ri er aryl eller heterosyklisk gruppe, R2er aryl, etc., R3og R4er uavhengig H, alkyl, etc. Denne forbindelsen er en Ca-kanalblokkerer. ;EP 217142 beskriver en forbindelse med formel: ; ; hvori R er hydrogen, alkyl, etc, Ri er hydrogen, nitro, cyano, etc, R2er ferryl, sykloalkyl, etc, R3er hydrogen, acyl etc, og Rs er karboksyl, karbamoyl, etc Denne forbindelsen er også en Ca-kanalblokkerer. ;Imidlertid er en heterosyklisk forbindelse som har Ca-reseptormodulerende aktivitet ikke funnet i litteraturen. ;Formålet med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe forbindelser som har Ca-reseptormodulerende aktivitet som inkluderer nye forbindelser. ;Et annet formål med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe farmasøytiske sammensetninger som inneholder forbindelsene ifølge oppfinnelsen. ;Disse formålene, så vel som andre formål og fordeler ifølge oppfinnelsen, vil klart fremgå for fagmannen fra følgende beskrivelse. ;Foreliggende oppfinnere har inngående undersøkt forbindelser som har Ca-reseptormodulerende aktivitet. Som et resultat har det blitt funnet at forbindelsene representert ved formel (I) som vist senere, har Ca-reseptormodulerende aktivitet anvendelig som medisin og, blant dem er forbindelsene representert ved formlene (II), (III) og (Illa). ;Ifølge foreliggende oppfinnelse er det tilveiebrakt: ;Forbindelse, kjennetegnet ved at den er valgt fra: N-(l-etyl-l-(4-metylfenyl)propyl)-7,7-d^eryl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, ;N-(l-etyl-l-(4-metylfenyl)propyl)-5-(2-fluorfenyl)-7,7-dimetyl-4,5,6,7-tetrahy^ pyrazolo[l,5-a]pyriniidin-3-karboksarnid eller et salt derav, ;N-(l-etyl-l-(4-metylfenyl)propyl)-2,7,7-Mmetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo-[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, ;N-( 1-etyl-1-(4-etylfenyl)propyl)-2,7,7-trim [l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, ;N-(l-etyl-1-(4-metylfenyl)propyl)-5-(2-fluorfenyl)-2,7,7-trimety^ pyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, ;N-(l-etyl-l-(4-etylfenyl)propyl)-5-(2-fluorfenyl)-2,7,7-Mmetyl-4,5,6,7-tetrahydro-pyrazolo[l,5-a]pyrinudin-3-karboksamid eller et salt derav, ;5-(2-klorfenyl)-N-(l-etyl-l-(4-metylfenyl)propyl)-2,7,7-trimetyl-4,5,6,^ pyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, ;N-(l-(4-(dimetylamino)fenyl)-1 -etylpropyl)-5-(2-fluorfenyl)-2,7,7-trimetyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimi<un-3-karboksarrud eller et salt derav, ;N-(l, 1 -dietylbutyl)-5-(2-fluorfenyl)-2,7,7-to pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, ;N-(l -etyl-1 -fenylpropyl)-5-(2-fluorfenyl)-2,7,7-tri^ ;[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, ;3-(5-(l-etyl-1-(4-metylfenyl)propyl)-1 ^ 4,5,6,7-terrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin eller et salt derav, ;3-(5-(l-etyl-l-(4-metylfenyl)propyl)-l,3,4-ua^ 4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin eller et salt derav, ;3-((4-(benzyloksy)-2,2-dietyl-l-pyrrolidinyl)karbonyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin eller et salt derav, ;3-((2,2-dietyl-4-metoksy-l-pyrrolidmyl)karbony hyojopyrazolo[l,5-a]pyrimidin eller et salt derav; eller ;3-((2,2-dietyl-4-fluor-l-pyrrolidinyl)karbonyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-4,5,^ pyrazolo[l,5-a]pyrimidin eller et salt derav. ;Videre er det tilveiebrakt en forbindelse ifølge oppfinnelselen som er en optisk aktiv forbindelse. ;Et ytterligere aspekt ved oppfinnelsen er en farmasøytisk sammensetning som er kjennetegnet ved at den innbefatter forbindelsen ifølge oppfinnelsen. ;I en utførelse er sammensetningen ifølge oppfinnelsen for å hindre eller behandle en sykdom forårsaket av abnormitet i kalsiumkonsentrasjon i en levende kropp eller en kalsiumreseptor. ;I en annen utførelse er sammensetningen ifølge oppfinnelsen for å hindre eller behandle beinsykdommer. ;I en ytterligere utførelse er sammensetningen ifølge oppfinnelsen for å hindre eller behandle osteoporose eller fraktur. ;Et annet aspekt ved oppfinnelsen er anvendelse av en forbindelse ifølge oppfinnelsen, for fremstilling av en sammensetning for å hindre eller behandle beinsykdommer. ;Som for et salt av en forbindelse ifølge oppfinnelsen er et farmasøytisk akseptabelt salt foretrukket. Eksempler på dette inkluderer et salt med en uorganisk base, et salt med en organisk base, et salt med en uorganisk syre, et salt med en organisk syre, et salt med en basisk eller sur aminosyre eller lignende. Foretrukne eksempler på et salt med en uorganisk base inkluderer et alkalimetallsalt, slik som natriumsalt, kaliumsalt eller lignende; et jordalkalimetallsalt, slik som kalsiumsalt, magnesiumsalt eller lignende; og aluminiumsalt; ammoniumsalt; eller lignende. Foretrukne eksempler på et salt med en organisk base inkluderer et salt med trimetylamin, trietylamin, pyridin, pikolin, etanol-amin, dietanolamin, trietanolamin, disykloheksylamin, N,N'-dibenzyletylendiamin eller lignende. Foretrukne eksempler på et salt med en uorganisk syre inkluderer et salt med saltsyre, hydrobromsyre, salpetersyre, svovelsyre, fosforsyre eller lignende. Foretrukne eksempler på et salt med en organisk syre inkluderer et salt med maursyre, eddiksyre, trifluoreddiksyre, fumarsyre, oksalsyre, vinsyre, maleinsyre, sitronsyre, ravsyre, eple-syre, metanesulfonsyre, benzensulfonsyre, p-toluensulfonsyre eller lignende. Foretrukne eksempler på et salt med en basisk aminosyre inkluderer et salt med arginin, lysin, ornitin eller lignende. Foretrukne eksempler på et salt med en sur aminosyre inkluderer et salt med asparginsyre, glutamsyre eller lignende. ;Forbindelsen kan merkes med en isotop (for eksempel<2>H,<3>H,14C,35S,125I eller lignende) eller lignende. ;Når forbindelsen oppnådd ved foreliggende oppfinnelse eller et salt derav, har en dobbeltbinding i molekylet og en sterisk konfigurasjon av Z eller E eksisterer, er hver av stereoisomerene og blandinger derav inkludert i foreliggende oppfinnelse. ;Når en sterisk konfigurasjon eksisterer på grunn av et asymmetrisk karbon i molekylet til forbindelsen oppnådd ved foreliggende oppfinnelse eller et salt derav, er hver av dem og blandinger derav inkludert i foreliggende oppfinnelse. ;Heretter vil fremstilling av forbindelsen ifølge oppfinnelsen bli illustrert. ;Eksempler på fremgangsmåter som kan anvendes for fremstilling av forbindelsene ifølge oppfinnelsen vil bli vist i de etterfølgende reaksjonsskjemaene. ;En forbindelse, hvori Y er C eller CR<4>i forbindelse (III) og forbindelse (Illa), kan fremstilles ved skjema 6. ;En forbindelse, hvori Y er N i forbindelse (III) og forbindelse (Illa), kan fremstilles ved skjema 7. hvori X4 er samme som X<3>og de andre symboler er som definert ovenfor. ; hvori Ar<3>er en eventuelt substituert hydrokarbonring, en eventuelt substituert ikke-aromatisk heterosyklisk ring, en aromatisk hydrokarbonring eller en aromatisk heterosyklisk ring, X<5>er samme som X<3>, og de andre symbolene har samme betydning som beskrevet ovenfor. ;Trinn H, trinn I, trinn J og trinn K kan utføres i henhold til trinn H, trinn I, trinn J og trinn K, respektivt, for å fremstille forbindelse (III-2). ;I forbindelse (II), når X<1>er C-COOR<16>, kan den omdannes som følger: ; hvori A-4 betegner samme betydning som den for A, R<16>betegner et eventuelt substituert karbonatom, og de andre symbolene er som definert ovenfor. ;I trinn L blir forbindelse (11-10) fremstilt ved en reaksjon som gir en karboksylbeskyttende gruppe. ;Alle vanlige fremgangsmåter anvendes i reaksjonen for å gi en karboksylbeskyttende gruppe, for eksempel hydrolyse, reduksjon og eliminering ved anvendelse av en Lewis-syre kan anvendes ifølge foreliggende reaksjon. Det er foretrukket at hydrolysen utføres under nærvær av en base eller en syre. Eksempler på egnet base inkluderer uorganiske baser, slik som alkalimetallhydroksid (for eksempel natriumhydroksid og kalium-hydroksid), jordalkalimetallhydroksid (for eksempel magnesiumhydroksid og kalium-hydroksid), alkalimetallkarbonat (for eksempel natriumkarbonat og kaliumkarbonat), jordalkalimetallkarbonat (for eksempel magnesiumkarbonat og kalsiumkarbonat), alkalimetallbikarbonat (for eksempel natriumbikarbonat og kaliumbikarbonat), alkali-metallacetat (for eksempel natriumacetat og kaliumacetat), jordalkalimetallfosfat (for eksempel magnesiumfosfat og kalsiumfosfat) og alkalimetallhydrogenfosfat (for eksempel dinatriumhydrogenfosfat og dikaliumhydrogenfosfat) og organiske baser, slik som trialkylamin (for eksempel trimetylamin og trietylamin), pikolin, N-metylpyr-rolidin, N-metylmorfolin, l,5-diazabisyklo[4.3.2]non-5-en, l,4-diazabisyklo[2.2.2]non-5-en og l,8-diazabisyklo[4.3.0]-7-undecen. Hydrolyse ved anvendelse av en base utføres i vann eller et hydrofilt organisk løsemiddel eller et blandet løsemiddel i mange tilfeller. Eksempler på passende syre inkluderer maursyre, hydrobromsyre og svovelsyre. ;Foreliggende hydrolysereaksjon blir vanligvis utført i et organisk løsemiddel, vann eller et blandet løsemiddel derav. En reaksjonstemperatur er ikke bestemt begrenset, men blir passende utvalgt avhengig av type karboksylbeskyttende gruppe og en eliminerings-fremgangsmåte. Eliminering ved anvendelse av en Lewis-syre utføres ved å omsette forbindelse (II-9) eller et salt derav med en Lewis-syre, for eksempel trihalogenert bor (for eksempel bortriklorid og bortrifluorid), tetrahalogenert titan (for eksempel titan-tetraklorid og titantetrabromid), og halogenert aluminium (for eksempel aluminium-klorid og aluminiumbromid) eller en organisk syre (for eksempel trikloreddiksyre og trifluoreddiksyre). Denne elimineringsreaksjonen blir foretrukket utført under nærvær av en kationfanger (for eksempel anisol og fenol) og blir vanligvis utført i et løsemiddel slik som nitroalkan (for eksempel nitrometan og nitroetan), alkylenhalid (for eksempel metylenklorid og etylenklorid), dietyleter, karbondisulfid og et løsemiddel som ikke har uheldige effekter på reaksjonen. Disse løsemidlene kan anvendes som en blanding derav. ;Det er foretrukket at eliminering ved reduksjon utføres for å eliminere en beskyttende gruppe, slik som halogenert alkyl(for eksempel 2-jodetyl og 2,2,2-trikloretyl)-ester, og aralkyl(for eksempel benzyl)-ester. Eksempler på en reduksjonsrfemgangsmåte anvendt i foreliggende elimineringsreaksjon, inkluderer vanlig katalytisk reduksjon under nærvær av en kombinasjon av et metall (for eksempel sink og sinkamalgam) eller et salt av en kromforbindelse (for eksempel kromatklorid og kromatacetat) og en organisk eller uorganisk syre (for eksempel eddiksyre, propionsyre og saltsyre); eller vanlig metall-katalysator (for eksempel palladiumkarbon og Raney-nikkel). En reaksjonstemperatur er ikke bestemt begrenset, men en reaksjon utføres under kjølling, ved romtemperatur eller under oppvarming. ;Den således oppnådde forbindelsen (11-10) kan isoleres og renses ved kjente isolerings-og rensingsfremgangsmåter, for eksempel konsentrasjon, konsentrasjon under redusert trykk, ekstraksjon med løsemiddel, krystallisasjon, rekrystallisasjon, overførings-oppløsning og kromatografi. ; hvori R<1>7 ogR1<8>er eventuelt substituert alkylgruppe, allylgruppe eller hydroksygruppe; eller R 17 og R IR kan kombineres med hverandre for å danne en ring, Y" er samme som Y, og de andre symbolene er som definert ovenfor. ;I foreliggende fremgangsmåte blir forbindelse (11-12) fremstilt ved omsetting av forbindelse (II-11) eller et reaktivt derivat ved en karboksylgruppe derav og et salt derav med forbindelsen (XVI) ovenfor eller et reaktivt derivat ved en aminogruppe derav eller et salt derav. Eksempler på passende reaktivt derivat ved aminogruppen til forbindelse (XVI) inkluderer: Schiff-basetype imino fremstilt ved en reaksjon mellom forbindelse (XVI) og en karbonylforbindelse, slik som aldehyd, keton og lignende; silylderivat fremstilt ved en reaksjon mellom forbindelse (XVI) og en silylforbindelse, slik som bis-(trimetylsilyl)acetamid, mono(trimetylsilyl)acetamid, bis(trimetylsilyl)urea og lignende; derivat fremstilt ved en reaksjon mellom forbindelse (XVI) med fosfortriklorid eller fosgen. ;Spesifikke eksempler på passende reaktivt derivat ved en karboksylgruppe til forbindelse (II-11) inkluderer syrehalid, syreanhydrid, aktivert amid, aktivert ester og lignende. Eksempler på passende reaktivt derivat inkluderer: syreklorid; syreazid; blandet syreanhydrid med en syre slik som substituert fosforsyre, slik som dialkylfosforsyre, fenyl-fosforsyre, difenylfosforsyre, dibenzylfosforsyre, halogenert fosforsyre og lignende, dialkylfosforsyre, svovelsyrling, tiosvovelsyre, svovelsyre, sulfonsyre, slik som metan-sulfonsyre og lignende, alifatisk karboksylsyre, slik som eddiksyre, propionsyre, smør-syre, isosmørsyre, pivalinsyre, pentansyre, isopentansyre, trikloreddiksyre og lignende eller aromatisk karboksylsyre, slik som benzosyre og lignende; symmetrisk syreanhydrid; aktivert amid med imidazol; 4-substituert imidazol, dimetylpyrazol, triazol eller tetrazol; aktivert ester slik som cyanometylester, metoksymetylester, dimetyl-iminometylester, vinylester, propargylester, p-nitrofenylester, triklorfenylester, penta-klorfenylester, mesylfenylester, fenylazofenylester, fenyltioester, p-nitrofenylester, p-kresyltioester, karboksylmetyltioester, pyranylester, pyridylester, piperidylester, 8- kinolyitioester og lignende, eller estere med N-hydroksyforbindelse, slik som N,N-di-metylhydroksyamin, l-hydroksy-2-(lH)-pyridon, N-hydroksysuksinimid, N-hydroksy-ftalimid, 1-hydroksy-lH-benzotriazol og lignende. Disse reaktive derivatene kan eventuelt velges avhengig av en type forbindelse (II-11) som anvendes. Eksempler på passende reaktivt derivat av forbindelse (11-12) inkluderer alkalimetallsalter, slik som natriumsalt, kaliumsalt og lignende, jordalkalimetallsalter, slik som kalsiumsalt, magnesiumsalt og lignende, og basisk salter slik som organiske basesalter, slik som ammoniumsalt, trimetylaminsalt, trietylaminsalt, pyridinsalt, pikolinsalt, disykloheksyl-aminsalt, N,N-dibenzyletylendiaminsalt og lignende. Selv om reaksjonen vanligvis utføres i vanlig løsemiddel, slik som vann, alkoholer slik som metanol, etanol og lignende, aceton, dioksan, acetonitril, kloroform, metylenklorid, etylenklorid, tetrahydrofuran, etylacetat, N,N-dimetylformamid og pyridin, kan reaksjonen utføres i i et hvilket som helst annet organisk løsemiddel så lenge de ikke har noen uheldig effekt på reaksjonen. Disse vanlige løsemidlene kan anvendes som en blanding med vann. ;Når forbindelse (II-11) anvendes som formen av en fri syre eller et salt derav i foreliggende reaksjon, er det ønskelig at reaksjonen utføres under nærvær av det normalt anvendte kondensasjonsmidlet, slik som såkalt Vilsmeier-reagens og lignende, fremstilt ved en reaksjon med N,N'-disykloheksylkarbodiimid; N-sykloheksyl-N'-morfolinoetyl-karbodiimid; N-sykloheksyl-N' -(4-dietylaminosykloheksyl)karbodiimid; N,N' -dietyl-karbodiimid, N,N' -diisopropylkarbodiimid, N-etyl-N' -(3 -dimetylaminopropyl)karbo-diimid; N,N' -karbonylbis(2-metylimidazol); pentametylenketen-N-sykloheksylimin; difenylketen-N-sykloheksylimin; etoksyacetylen; 1-alkoksy-l-kloretylen; trialkylfosfitt; polyetylfosfat; polyisopropylfosfat; fosforoksyklorid; difenylfosforylazid; tionylklorid; oksalylklorid; lavere alkylhaloformat, slik som etylklorformat; isopropylklorformat og lignende; trifenylfosfin; 2-etyl-7-hydroksybenzisooksazoliumsalt, 2-etyl-5-(m-sulfo-feny)isooksazoliumhydroksid internt salt; N-hydroksybenzotriazol; l-(p-klorbenzen-sulfonyloksy)-6-klor-lH-benzotriazol; N-N'-dimetylformamid med tionylklorid, fosgen, triklormetylklorformat, fosforoksyklorid eller lignende. Alternativt kan reaksjonen utføres under nærvær av en uorganisk base eller en organisk base, slik som alkalimetall-bikarbonatsalt, tri(lavere)alkylamin, pyridin, N-(lavere)alkylmorfolin, N,N-di(lavere)-alkylbenzylamin og lignende. En reaksjonstemperatur er ikke spesielt begrenset, men reaksjonen blir utført under avkjøling eller under oppvarming. ;En mengde av forbindelse (XVI) som anvendes er 1 til 10 mol ekvivalent, foretrukket 1 til 3 ekvivalent relativt til forbindelse (II-11). ;En reaksjonstemperatur er vanligvis -30 °C til 100 °C. ;En reaksjonstid er vanligvis 0,5 til 20 timer. ;I tillegg når et passende syreanhydrid anvendes, blir forbindelse (11-11) og klorkarbon-syreester (for eksempel metylklorkarbonat, etylklorkarbonat, isobutylklorkarbonat etc.) omsatt under nærvær av en base (for eksempel trietylamin, N-metylmorfolin, N,N-di-metylanilin, natriumbikarbonat, natriumkarbonat, kaliumkarbonat etc.) og blir ytterligere omsatt med forbindelse (XVI). ;En mengde av forbindelse (XVI) som anvendes er vanligvis 1 til 10 mol ekvivalent, foretrukket 1 til 3 mol ekvivalent relativt til forbindelse (II-11). ;En reaksjonstemperatur er vanligvis -30 °C til 100 °C. ;En reaksjonstid er vanligvis 0,5 til 20 timer. ;Den således oppnådde forbindelse (11-12) kan isoleres og renses ved kjente isolerings-og rensingsfremgangsmåter, for eksempel konsentrasjon, konsentrasjon under redusert trykk, ekstraksjon med løsemiddel, krystallisasjon, rekrystallisasjon, overførings-oppløsning og kromatografi. ;Når X<1>er C-COOR<16>i forbindelse (III), kan omdanningen utføres som følger: ; ; hvori symbolene er som definert ovenfor. ;Trinn L og trinn M kan utføres i henhold til trinn L ovenfor og trinn M som ovenfor, respektivt, for å fremstille forbindelse (III-4) og forbindelse (III-5) hvori R<19>er en eventuelt substituert alkylgruppe, allylgruppe, hydroksygruppe, aminogruppe eller sulfanylgruppe, og de andre symbolene er som definert ovenfor. ;I foreliggende fremgangsmåte blir forbindelse (11-13) fremstilt ved en reaksjon mellom forbindelse (V) og et nukleofilt reagens. ;Eksempler på det nukleofile reagenset inkluderer metallfenolat, metallalkoholat, Grignard reagens, alkylmetallreagens, arylmetallreagens og tioalkoholat. ;En mengde av det nukleofile reagenset som anvendes er foretrukket ca. 1 til ca. 5 mol ekvivalent relativt til forbindelse (V). ;Eksempler på et løsemiddel som ikke har uheldige effekter på reaksjonen, inkluderer: etere, slik som dietyleter, tetrahydrofuran og dioksan; aromatiske hydrokarboner, slik som benzen, toluen og xylen; amider, slik som N,N-dimetylformamid og 1-metyl-pyrrolidon; sulfoksider, slik som dimetylsulfoksid. Disse løsemidlene kan anvendes ved blanding i et passende forhold. ;En reaksjonstemperatur er vanligvis ca. -50 °C til ca. 150 °C, foretrukket ca. -10 til ca. 100 °C. ;En reaksjonstid er vanligvis ca. 0,5 til ca. 20 timer. ;Den således oppnådde forbindelsen (11-13) kan isoleres og renses ved kjente isolerings-og rensingsfremgangsmåter, for eksempel konsentrasjon, konsentrasjon under redusert trykk, ekstraksjon med løsemiddel, krystallisasjon, rekrystallisasjon, overførings-oppløsning og kromatografi. ; hvori symbolene er som definert ovenfor. ;Alle forbindelsene anvendt eller oppnådd ifølge foreliggende oppfinnelse inkluderer korresponderende salter, selv hvis det er spesifikt angitt, og de kan byttes ut med hverandre på en i og for seg kjent måte eller modifiserende fremgangsmåter derav. ;Når forbindelsene eller saltene derav oppnådd ifølge foreliggende oppfinnelse er asym-metriske molekyler, kan de separeres til d-formisomerer og 1-formisomerer i henhold til vanlige, optiske oppløsningsfremgangsmåter. ;Forbindelsen eller dens salt oppnådd ved foreliggende oppfinnelse kan anvendes i neste trinn som reaksjonsblanding uten rensing. ;Forbindelsene ifølge oppfinnelsen har en svært god Ca-reseptormodulerende aktivitet og forsterker sekresjonen av PTH og er derfor anvendelig som legemiddel for behandling av beinsykdommer, nyrevirkende legemidler, sentralnervesystem og endokrinvirkende legemidler, digestivsystemvirkende legemidler og lignende. Videre er toksisiteten lav. Derfor kan forbindelsen ifølge oppfinnelsen sikkert administreres til pattedyr (for eksempel menneske, rotte, mus, hund, kanin, katt, ku, hest, gris og lignende). ;Således forventes en farmasøytisk sammensetning som inneholder en forbindelse ifølgs oppfinnelsen å være anvendelig ved behandling og forebyggelse av sykdommer, hvori Ca-reseptormoduleringsaktivitet er påkrevet, slik som ;Ca-reseptormodulerende legemidler: primær eller sekundær hyperparatyroidisme; hypoparatyroidisme; hypertyroidisme; hypotyroidisme; Graves sykdom; Hashimotos toxicose; Pagets sykdom; hypercalcemi assosiert med malignant tumor; hypercalcemi; hypocalcemi; postmenopausal osteoporose; senil osteoporose; sekundær osteoporose; osteomalaci; renal osteodystrofi; fraktur; osteoartritt; reumatoid artritt; osteosarcom; myelom; hypertensjon; diabetes; myokardisk infarkt; Hachingtons sykdom; Parkinsons sykdom; Alzheimers sykdom; demens; cerebral apopleksi; hjernetumor; spinalskade; diabetisk renal sykdom; renal utilstrekkelighet; gastrisk ulcer; tolvfingertarm ulcer; Basedows sykdom; paratyroid kjerteltumor; tyrid kjerteltumor; arteriosklerose og lignende; ;Ca-reseptorantagonistiske legemidler: hypertyroidisme; hypocalcemi; postmenopausal osteoporose; senil osteoporose; sekundær osteoporose; osteomalaci; renal osteodystrofi; fraktur; osteoartritt; reumatoid artritt; osteosarkom; myelom; sentralnerve-systemsykdommer; og lignende, særlig osteoporose. ;Dosering av en forbindelse ifølge oppfinnelsen kan velges på forskjellige måter avhengig av administrasjonsrute og symptomet til pasienten som behandles. Dosering av en forbindelse til en voksen (en kroppsvekt på 50 kg) kan vanligvis velges i området fra ca. 0,1 mg til ca. 500 mg, foretrukket ca. 1 mg til ca. 100 mg i tilfellet oral administrasjon og i området fra ca. 0,01 mg til ca. 100 mg, videre foretrukket ca. 0,1 mg til ca. 10 mg i tilfellet parenteral administrasjon. Doseringen kan administreres med oppdeling i 1-3 ganger daglig. ;Forbindelsen kan formuleres med en farmasøytisk akseptabel bærer og kan administreres oralt eller parenteralt som faste formuleringer, slik som tabletter, kapsler, granuler, pulvere eller lignende; eller flytende formuleringer, slik som siruper, injeksjoner eller lignende. Videre kan det fremstilles formuleringer for transdermal administrasjon, slik som lapper, kataplasmaer, salver (som inkluderer kremer), plastre, tape, lotions, væsker og løsninger, suspensjoner, emulsjoner, sprayer og lignende. ;Som for en farmasøytisk akseptabel bærer, blir et antall organiske eller uorganiske bærersubstanser, som vanligvis anvendes som formuleringsmaterialer, anvendt og blandet sammen som et bulkmiddel, et smøremiddel, et bindemiddel og et desintegrer-ingsmiddel i faste formuleringer; en vehikkel, et løselighetsfremmende middel, et sus-penderingsmiddel, et isotonisitetsmiddel, en buffer og et analgesisk middel i væske-formuleringer. Hvis nødvendig kan formuleringseksipienter, slik som et konserverings-middel, en antioksidant, en stabilisator, et fargestoff, et søtningsstoff og lignende, anvendes. ;Foretrukne eksempler på bulkmiddel inkluderer laktose, sukrose, D-mannitol, stivelse, krystallinsk cellulose, lett vannfri kieselsyre og lignende. Foretrukne eksempler på smøremidler inkluderer magnesiumstearat, kaliumstearat, talkum, kolloidalt silika og lignende. Foretrukne eksempler på bindemiddel inkluderer krystallinsk cellulose, a- stivelse, sukrose, D-mannitol, dekstrin, hydroksypropylcellulose, hydroksypropylmetylcellulose, polyvinylpyrrolidon og lignende. Foretrukne eksempler på desintegrator inkluderer stivelse, karboksymetylcellulose, kalsiumkarboksymetylcellulose, croscar-mellosenatrium, natriumkarboksymetylstivelse, lavsubstituert hydroksypropylcellulose og lignende. Foretrukne eksempler på vehikkel inkluderer vann for injeksjon, alkohol, propylenglykol, makrogol, sesamolje, maisolje og lignende. ;Hvis nødvendig, for formålet smaksmaskering, enterisk belegging eller forlenget virkning, kan orale formuleringer fremstilles ved belegging på en i og for seg kjent måte. Eksempler på dette beleggingsmidlet inkluderer hydroksypropylmetylcellulose, etylcellulose, hydroksymetylcellulose, hydroksypropylcellulose, polyoksyetylenglykol, Tween 80, Pluronic F68 [polyoksyetylen(160)-polyoksypropylen(30)-glykol], cellulose-acetatftalat, hydroksypropylmetylcelluloseftalat, hydroksymetylcelluloseacetatftalat, Eudragit (fremstilt av Rohm Company, metakrylsyre-akrylsyrekopolymer) og lignende. ;Foretrukne eksempler på løselighetsfremmende midler inkluderer polyetylenglykol, propylenglykol, benzylbenzoat, etanol, trisaminometan, kolesterol, trietanolamin, natriumkarbonat, natriumcitrat og lignende. Foretrukne eksempler på suspenderings-middel inkluderer overflateaktive midler, slik som stearyltrietanolamin, natriumlauryl-sulfat, laurylaminopropionsyre, lecitin, benzalkoniumklorid, benzetoniumklorid, glyserinmonostearat og lignende; hydrofile, høymolekylære substanser, slik som poly-vinylalkohol, polyvinylpyrrolidon, natriumkarboksymetylcellulose, metylcellulose, hydroksymetylcellulose, hydroksyetylcellulose, hydroksypropylcellulose og lignende; og så videre. Foretrukne eksempler på isotonisitetsfremmende midler inkluderer natriumklorid, glyserin, D-mannitol og lignende. Foretrukne eksempler på buffer-substanser inkluderer bufFerløsninger av et fosfat, et acetat, et karbonat, et citrat eller lignende. Foretrukne eksempler på analgesiske midler inkluderer benzylalkohol og lignende. Foretrukne eksempler på konserveringsmidler inkluderer paraoksybenzosyre-estere, klorbutanol, benzylalkohol, fenetylalkohol, dehydroeddiksyre, sorbinsyre og lignende. Foretrukne eksempler på antioksidant inkluderer sulfitter, askorbinsyre og lignende. ;Følgende eksempler, fremstilling og eksperimenter beskriver måter og fremgangsmåter for fremstilling og anvendelse av foreliggende oppfinnelse og illustrerer oppfinnelsen. ;Forkortelser anvendt heri, er definert nedenfor. ;DCM = diklormetan ;DCE = dikloretan ;DMAP = dimetylamihopyridin ;DMF = dimetylformamid ;WSC = l-(3-dimetylaminopropyl>^^ M+H =» monoisotop masse pluss ett proton Me = metyl ;Et = etyl ;Ph ~fenyl ;h = timer ;min = minutter ;HPLC høyytelsesvæskekromatografi HOBt = hydroksybenzotriazol LC/MS = væskekromatografi/massespektrometri MS = massespektrometri ;Rt = retensjonstid ;TEA = trietylamin ;TFA =trifluoreddiksyre ;1PE = diisopropyleter TLC = tyimsjiktskromatografi ;THF - tetrahydrofuran ;TMSCN «trimetylsilylcyanid ;HATU = 0<7-a^benzotirazoM^yl)-N^^ ;fluorfosfat ;DIPEA = diisopropylétylarnin ;Referanseeksempel 40 ;N-sytøooktyl-5-fenyl-7-(trifluormetyI)-4^ 3-karboksamid ; Syklooktylamin (24 mg, 0,19 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av forbindelse 1 ;(0,05 g, 0,16 mmol), WSC (37 mg, 0,19 mmol), HOBt (29 mg, 0,19 mmol) og DMAP (23 mg, 0,19 mmol) i DMF (1,5 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 14 timer, fortynnet med DCM (0,5 ml) og mettet NaHC03-løsning (0,5 ml) og deretter separert ved anvendelse av FASE-SEP-filtreringssprøyte. Det organiske sjiktet ble konsentrert og tilsatt preparativ HPLC (Gilson 215-system). De reneste fraksjonene ble samlet opp hvilket ga 64,6 mg (96 % utbytte) av tittelforbindelsen som et hvitt faststoff. Omvendtfase LC/MS: CAPCELLPAKCC18UG120, S-3 um, 2,0 x 50 mm, UV-deteksjon ved 220, 8 min gradient 10-100 % løsemiddel B/A (Løsemiddel A: CH3CN med 0,1 % TF A, løsemiddel B: H20 med 0,1 % TF A), 0,5 ml/min. Rt = 1,90 min, ;(96 % ren). MS (M+H: 421). ;Referanseeksempel 41 ;N-(l-eryl-l-(4-(trilfuormetyl)fenyl)pro^ pyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid ; Til en løsning av 3 (0,5 g, 1,84 mmol) og HATU (0,84 g, 2,21 mmol) i DMF (3 ml) ble det tilsatt DIPEA (0,67 ml, 3,68 mmol) ved romtemperatur. Etter 30 min ble forbindelse 2 (0,59 g, 2,21 mmol) tilsatt dertil. Den resulterende blandingen ble rørt ved 80 °C i 18 timer, konsentrert i vakuum og residuet ble kromatografert på silikagel med AcOEt/heksan (1/1) som eluent hvilket ga 0,28 g (31 % utbytte) av forbindelse 4 som fargeløse prismer. Smeltepunkt 193-194 °C. ;Forbindelsene i eksemplene ble fremstilt på tilsvarende måte med den som er beskrevet i referanseeksempel 40 eller 41. ; Referanseeksempel 1028 (S)-N-(l-(4-klorfenyl)-l-etylpropyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydropyra-zolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid-hydroklorid Trinn A: Til en løsning av 1 (0,4 g, 1,47 mmol) og HATU (0,67 g, 1,77 mmol) i DMF (5 ml) ble tilsatt DIPEA (0,57 g, 4,41 mmol) ved romtemperatur. Etter 1 time ble forbindelse 2 (0,41 g, 1,77 mmol) tilsatt dertil. Den resulterende blandingen ble rørt ved 80 °C i 12 timer og konsentrert i vakuum. Residuet ble fortynnet med AcOEt, vasket med mettet NaHC03aq og saltvann, tørket over MgSC«4 og konsentrert i vakuum. Residuet ble kromatografert på silikagel med AcOEt/heksan (1/1) som ga 0,41 g (62 % utbytte) av forbindelse 4 som fargeløse prismer. Smeltepunkt 105-106 °C. [a]D20 C = -17,68 i CHC13,C = 0,30. ;Trinn B: Til en rørt løsning av forbindelse 3 (90 mg, 0,2 mmol) i Et20 (3 ml) ble det tilsatt 4 M HC1-AcOEt (0,1 ml, 0,4 mmol) ved romtemperatur. Presipitatet ble samlet opp ved filtrering som ga 60 mg (62 % utbytte) av forbindelse 4 som prismer. Smeltepunkt 130-132 °C. [a]D<20>°<C>= 24,3 i CHC13C = 0,48. ;Forbindelsene i eksemplene/referanseeksemplene 1029- 1122 vist i tabell 13, ble fremstilt på tilsvarende måte med den som er beskrevet i referanseeksempel 1028. ; Referanseeksempel 1135 3-(3-benzylpyrroUdm-l-sulfonyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydropyra-zolo [l,5-a]pyrimidin ; Trinn A ;(3-benzylpyrrolidin-l-sulfonyI)acetonitril (2): ;Til en 20 ml eterløsning som inneholder 1,34 g (8,31 mmol) av 3-benzylpyrrolidin avkjølt til -45 °C, ble det tilsatt 0,61 g (4,4 mmol) 2-cyanoetansulfonylklorid som en løsning i 10 ml eter. Reaksjonsblandingen ble varmet til romtemperatur og rørt i 24 timer, hvoretter en olje ble dannet på kolbeveggen. Eterløsningen ble heilt bort fra oljen og filtrert gjennom en kort silikagelplugg. Filtratet således oppnådd, ble konsentrert i vakuum hvilket ga et faststoff som ble renset med flashkromatografi eluert med 75 % heksan/AcOEt hvilket ga 1,25 g (44 %) av tittelforbindelsen som en voks. ;<J>H NMR (CDC13) 8 1,73-1,83 (m, 1H), 2,08-2,15 (m, 1H), 2,57-2,67 (m, 1H), 2,71-2,79 (m, 2H), 3,21 (dd, J = 8,2, 9,7, Hz, 1H), 3,49-3,55 (m, 1H), 3,63 (dd, J = 7,0, 9,4 Hz, 1H), 3,69-3,74 (m, 1H), 3,95 (s, 2H), 7,16 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,21-7,33 (m, 3H). ;Trinn B ;2-(3-benzylpyrrolidin-l-sulfonyl)-3-etoksyacrylonitril(3): ;Til en løsning av 0,14 g (0,53 mmol) av 2 i 0,43 ml (2,6 mmol) trietylortoformat ble det tilsatt 0,25 ml (2,6 mmol) eddiksyreanhydrid. Den resulterende løsningen ble varmet til refluks i 4 timer før konsentrering til en olje. Det urene produktet således oppnådd, ble renset med flashkromatografi eluert med 75 % heksan/AcOEt hvilket ga 0,079 g (46 %) av tittelforbindelsen som en gul olje. ;<!>H NMR (CDCI3) 8 1,42 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,67-1,77 (m, 1H), 2,01-2,09 (m, 1H), 2,53-2,62 (m, 1H), 2,71 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 3,05 (dd, J = 8,4, 9,8 Hz, 1H), 3,35-3,41 ;(m, 1H), 3,48 (dd, J = 7,0, 9,5 Hz, 1H), 3,53-3,59 (m, 1H), 4,31 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 7,15-7,17 (m, 2H), 7,19-7,23 (m, 1H), 7,26-7,31 (m, 2H), 7,76 (s, 1H). ;Trinn C ;3-(3-benzylpyrroUdin-l-sulfonyl)-7,7-dimetyI-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo-[l,5-a]pyrimidin (4): En 2 ml etanolløsning som inneholder 0,079 g (0,247 mmol) av 3 ble behandlet med 0,013 ml (0,27 mmol) av hydrazinmonohydrat og varmet til refluks i 5 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum hvilket ga urent 4-(3-benzylpyrrolidin-l-sulfonyl)-2/7-pyrazol-3-ylamin. Det urene pyrazolet således oppnådd, ble løst i 2 ml 2-metoksyetanol som inneholdt 0,044 g (0,27 mmol) av 3-metyl-l-fenyl-but-2-en-l-on og 0,038 ml (0,49 mmol) trifluoreddiksyre ble tilsatt. Blandingen ble refluksert i tre dager og deretter konsentrert og renset med flashkromatografi eluert med 60 % heksan/AcOEt hvilket ga 3 -(3 -benzylpyrrolidin-1 -sulfonyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-4,7-dihydropyrazolo-[l,5-a]pyrimidin som ble funnet å være kun 90 % ren med HPLC-analyse. Dette materialet ble deretter løst i 1 ml 1:1 THF:etanol og 0,010 g 10 % palladium på karbon. Reaksjonskolben ble satt lokk på med et gummiseptum og tilsatt hydrogen via en ballong. Etter 90 min ved romtemperatur ble katalysatoren fjernet via filtrering og filtratet konsentrert til en olje. Rensing med flashkromatografi eluert med 75 % heksan/AcOEt, ga 0,024 g (20 % fra 3) av tittelforbindelsen som en lysegul olje. ;<l>H NMR (CDC13) 5 1,55-1,66 (m, 7H), 1,94-2,03 (m, 1H), 2,08-2,16 (m, 2H), 2,37-2,50 (m, 1H), 2,58-2,70 (m, 2H), 2,90-2,97 (m, 1H), 3,18-3,27 (m, 1H), 3,31-3,42 (m, 2H), 4,53-4,60 (m, 1H), 5,71(s, 1H), 7,11-7,14 (m, 2H), 7,19-7,23 (m, 1H), 7,26-7,40 (m, 7H), 7,53 (s, 1H). ;MS beregnet: 450; Funnet: 451 (M+H). ;Referanseeksempel 1142 ;(lR,4S)-l,3,3-trimetylbisyklo[2,2,l]hept-2-yl-5-(2-fluorfenyl)-2,7,7-trimetyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksylat ; 1) Til en løsning av 1 (0,4 g, 1,32 mmol) og DMF (1 dråpe) i toluen (4 ml) ble det tilsatt S0C12(0,31,2,64 mmol) ved romtemperatur. Etter røring ved 60 °C i 1 time ble løse-midlet konsentrert i vakuum. Residuet ble fortynnet med toluen og borneol (0,3 g, ;1,98 mmol) og Et3N (0,3 g, 2,90 mmol) ble tilsatt til blandingen. Etter røring ved 60 °C i 1 time ble reaksjonsblandingen vasket med 1 N HC1 og saltvann, tørket over MgSC*4og konsentrert i vakuum. Flashkromatografi ga det ønskede produktet som en olje. Til en rørt løsning av oljen oppnådd (90 mg, 0,2 mmol) i AcOEt (2 ml), ble det tilsatt 4 M HCl-AcOEt (0,5 ml, 2,0 mmol) ved romtemperatur. Presipitatet ble samlet opp ved filtrering hvilket ga 2 som HCl-salt.

MS beregnet: 440; Funnet 441 (M+H),

Forbindelsene i eksemplene 1143-1144 vist i tabell 6, ble fremstilt fra forbindelsen i referanseeksempel 1135 på tilsvarende måte som den som er beskrevet i følgende referanse 1-6.

1) Poulan R F., Tartar A L., Deprez B p., Tetrahedron Lett. 2001,42,1495.

2) Rigo B., Cauliesz P., Fasseur D., Couturier D., Synthetic Communications 1986, 16, 1665.

3) Carlsen H J., Jorgensen K B., J, Heterocyclic Chem., 1994, 31, 805.

4) Kiryanov A A., Sampson P., Seed J., J. Org. Chem., 2001, 66, 7925.

5) Kelly T R., Lang F R., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 5319.

6) Walia J S., Walia A S., Lankin D C, Petterson R C, Singh J., J, Heterocyclic Chem., 1985,22,1117.

Eksperiment 1

Strategi for kloning av cDNA-er som koder humant CaR

Strategi for kloning av cDNA-er som koder humant CaR, er vist nedenfor. For å amplifisere cDNA som koder N-terminal del til human CaR, ble syntetiske DNA-primere,

Cal-U : 5'-AGAGTCGACGCCACCATGGCATTTTATAGCTGCTGCTGG-3' og

Cal-L : 5'-AAATGAGCTCTCGGTTGGTGGCCTTGAC-3', konstruert. I dette tilfellet ble Sall-setet tilsatt ved 5'-enden til amplifisert cDNA. For å amplifisere cDNA som koder den C-terminale delen til humant CaR, ble syntetiske DNA-primere,

Ca2-U : 5'-AAACGAGCTCTCCTACCTCCTCCTCTTC-3' og

Ca2-L : 5'-TCTGCGGCCGCTCCCTAGCCCAGTCTTCTCCTTCC-3', konstruert. I dette tilfellet ble Notl-setet tilsatt ved 3'-enden til amplifisert cDNA. PCR ble utført ved Hot Start-fremgangsmåten. Reaksjonsløsningen til den øvre fasen ble tilsatt til en 1 pg av human nyreavledet cDNA (TOYOBO), 0,3 mM dNTPs og 2,5 enhet LA-Taq-DNA-polymerase (Takara shuzo co.) og fylt opp til 30 ul med vann og buffer festet til enzymet. Til reaksjonsløsningen til den lavere fasen ble det tilsatt 12,5 uM hver av de syntetiske primerne og 0,5 mM dNTP-er og fylt opp til 20 ul med vann og buffer festet til enzymet. Reaksjonsløsningen til den øvre fasen ble tilsatt til den lavere fasen dekket med AmpliWaks PCR GemlOO (Takara Shuzo Co.). Prøvene ble gjort til gjenstand for PCR-amplifisering ved anvendelse av en Thermal Cycler (Perkin-Elmer Co.). De amplifiserte cDNA-ene ble bekreftet med agarosegelelektroforese.

Eksperiment 2

Fremstilling av CaR-ekspresjons-CHO-celler

PCR-produktetene oppnådd i eksperiment 1, ble separert ved agarosegelelektroforese.

PCR-produktene ble fjernet og renset fra gelen og underklonet over i pT7Blue-T-vektor (Takara Shuzo Co.). cDNA-fragmentet som koder den N-terminale delen til det humane CaR, ble frigitt fra den underklonede pT7Blue-T-vektoren behandlet med Sali og Sacl. cDNA-fragmentet som koder den C-terminale delen til humant CaR, ble frigitt fra den underklonede pT7Blue-T-vektoren behandlet med Sacl og Noti. Ved anvendelse av DNA-Ligation kit (Takara Shuzo Co.) ble disse fragmentene innsatt mellom setet til Sali- og Noti- i digerert pMSRaneo-vektor. Således ble pMSRaneo-CaR-dyrecelle-ekspresjon konstruert.

Ti ug av pMSRaneo-CaR ble tilsatt til løsningen som inneholder 8 x IO<6>CHO-K1-celler, og transfeksjon ble utført ved anvendelse av Gene Pulser (0,4 cm kuvette,

0,25 kV, 960 mF) (Bio-Rad Laboratories). Cellene ble dyrket i HamF12 som inneholder 10 % fosterkalveserum i én dag. Etter passering ble cellene dyrket i HamF12 som inneholder 10 % foster og 500 ug/ml Genetisin. Cellene ble sådd på 96-brønns plate i 1 x 10 celler/brønn og transformanter, CaR-uttrykkende CHO-celler, ble valgt i seleksjons-mediet.

Eksperiment 3

Seleksjon av CaR-uttrykkende CHO-cellelinje ved kalsiummobiliserings-undersøkelse

Fremgangsmåte for kalsiummobiliseirngsundersøkelse er vist nedenfor. CaR-uttrykkende CHO-celler ble sådd på en 96-brønns hvit plate i 2 x IO<4>celler/brønn, etter-følgende dyrking i 48 timer. Etter vasking av cellene med fosfatbufret saltvann, ble 100 ul bufferløsning (120 mM NaCl, 22 mM NaHC03,6 mM KC1,0,2 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 5 mM glukose, 5 mM HEPES (pH 7,4)) som inneholder 5 uM FuraPE3AM (Texas Fluorescence Laboratories), tilsatt til brønnene og holdt ved 37 °C i 1 time. Cellene ble vasket to ganger med fosfatbufret saltvann. Etter tilsetting av 180 ul av reaksjonsbufferløsningen (130 mM NaCl, 5,4 mM KC1,0,2 mM CaCl2,0,9 mM MgCl2,10 mM glukose, 20 mM HEPES (pH 7,4)) til brønnene, ble 20 ul av 60 mM CaCl2tilsatt og intracellulær kalsiumkonsentrasjon ble målt med en fluorometrisk av-bildningsplateavleser (FDSS 2000, Hamamatsu photonics). Én klon som øker intracellulær kalsiumkonsentrasjon, ble valgt og anvendt for etterfølgende eksperiment.

Eksperiment 4

GTPYS-bindingsundersøkelse

Fremstilling av membranfraksjon er beskrevet nedenfor. Humane, CaR-uttrykkende CHO-celler ble inokulert til en F500 kolbe i 1,8 x 10<5>celler/kolbe, etterfulgt av dyrking i 2 dager. Cellene ble skrapt med 10 ml fosfatbufret saltvann som inneholder 0,02 % EDTA. Etter sentrifugering (2 000 rpm, 10 min) av cellene ble cellepellet resuspendert i 12 ml homogenatbufferløsning (10 mM NaHCOa, 1 mM EDTA, 1 x proteaseinhibitor-cocktail (pH 7,4)) og homogenisert med Polytron™ (20 000 rpm, 1 min). Celledebris ble fjernet ved sentrifugering (2 000 rpm, 10 min) og deretter ble CaR-uttrykkende cellemembranfraksjon samlet opp ved ultrasentirfugering (Beckman 70 Ti type rotor, 30 000 rpm, 1 time).

GTPyS-bindingsaktivitet ble målt som følger: 20 ug av CaR-uttrykkende cellemembran ble inkubert med testforbindelsene i 10 min. Undersøkelsen ble utført ved romtemperatur i én time i en reaksjonsløsningsblanding som inneholder 20 mM HEPES (pH 7,4),

100 mM NaCl, 1 mM MgCl2,167 ug/ml DTT, 5 uM guanosin-5'-difosfat, 0,4 nM [35S]-guanosin-5'-(Y-tio)trifosfat ([<35>S]-GTPyS) og 6 mM CaCl2. Blandingen ble filtrert gjennom et GF/C-filter. Etter vasking fire ganger med 300 ul fosfatbufret saltvann, ble mengden av [<35>S]-GTPyS bundet til filteret, målt ved anvendelse av en Top-count scintillasjonsteller.

Effekter av testforbindelsene på [<35>S]-GTPyS-binding ble uttrykt i prosent. Denne ble beregnet fra ligningen [100 x (t'-b)]/(t-b), hvor t\ t og b er verdiene til [<35>S]-GTPyS-binding (dpm), f under nærvær av 6 mM kalsium og testforbindelsen, t under nærvær av 6 mM kalsium alene og b under fråvær av både 6 mM kalsium og testforbindelsen.

Antagonisten reduserte doseavhengig [<35>S]-GTPyS-binding i membranpreparatet. Agonisten økte doseavhengig [<35>S]-GTPyS-binding i membranpreparatet.

Resultatene er vist i tabell 7.

Forbindelsene anvendt i forsøket var som følger:

Eks. nr. 318: N-(2-(4-metoksyfenyl)-2-fenyletyl)-5-fenyl-7-(trifluormety^

tetrahydropyrazolo-[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid; MS (ESI, m/z) 521

(M+H)<+>

Eks. nr. 335: N-(bis(4-metoksyfenyl)metyl)-7-meryl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydro-pyrazolo[l,5-a]-pyrimidin-3-karboksamid; MS (ESI, m/z) 483 (M+H)<+>Eks. nr. 310: N-(l-etyl-l-(4-tirfluormetyl)fen^^

4,5,6,7-tetrahydro-pyrazolo[l,5-a]-pyrimidin-3-karboksamid; MS (ESI,

m/z) 525 (M+H)<+>

Eks. nr. 312: 3-((4-(bis(4-metylfenyl)metoksy)-l-piperidinyl)karbonyl)-5-fenyl-7-(Mfluormetyl)-4,5,6,7-tetrahydro-pyrazolo[l,5-a]-pyrimidin; MS (ESI,

m/z) 589 (M+H)<+>

Eks. nr. 436: N<l-adamantyl)-7-metyl-5-fenyl-7-(trifluormetyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid; MS (ESI, m/z) 462

(M+H)<+>

Eks. nr. 423: N-(l-etyl-l-(4-(3-tienyl)fenyl)propyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid; MS (ESI, m/z) 499

(M+H)<+>

Eks. nr. 111: 5-fenyl-N-(2-feiiyl-2-(l-p^

tettahydropyrazolo[l,5-a]pvrim MS (ESI, m/z) 487 (M+Hf.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen har en svært god Ca-reseptormodulerende aktivitet og forsterker sekresjon av PTH, og er derfor anvendelig som legemiddel ved behandling av beinsykdommer, nyrevirkende legemidler, sentralnervesystem og endokrinvirkende legemidler, digestivsystemvirkende legemidler og lignende.

Claims (22)

1. Forbindelse,karakterisert vedat den er valgt fra: N-(l -etyl-1 -(4-metylfenyl)propyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, N-(l-etyl-1-(4-metylfenyl)propyl)-5-(2-^^ pyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, N-(l -etyl-1 -(4-metylfenyl)propyl)-2,7,7-tirmetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo-[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, N-(l-etyl-l-(4-etylfenyl)propyl)-2,7,7-ti^ [l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, N-(l-etyl-l-(4-metylfenyl)propy^ pyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, N-(l -etyl-1 -(4-etylfenyl)propyl)-5-(2-fluorfenyl)-2,7,7-trimetyl-4,5,6,7-teto pyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, 5-(2-klorfenyl)-N-(l -etyl-1 -(4-metylfenyl)propyl)-2,7,7-trimetyl-4,5,6,7-tetrahydro-pyrazolo[l,5-a]pyrirnidin-3-karboksamid eller et salt derav, N-(l-(4-(dimetylamino)fenyl)-l-etylpropyl)-5-(2-fluorfenyl)-2,7,7-tri^ tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, N-(l, 1-dietylbutyl)-5-(2-fluorfenyl)-2,7,7-trimetyl-4,5,6,7-tetrah^ pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, N-(l-etyl-l-fenylpropyl)-5-(2-fluorfeny [l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav, 3-(5-(l-etyl-1-(4-metylfenyl)propyl)-1,3,4^ 4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin eller et salt derav, 3-(5-(l-etyl-1-(4-metylfOTyl)^^ 4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin eller et salt derav, 3-((4-(benzyloksy)-2,2-dietyl-l-pyrrolidinyl)karbonyl)-7,7-dimetyl-5-f^ tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrirnidin eller et salt derav, 3-((2,2-dietyl-4-metoksy-l-pyn-olidinyl)karbonyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-^ hydropyrazolo[l,5-a]pyrirnidin eller et salt derav; eller 3-((2^-dietyl-4-lfuor-l-pyrrolidmyl)karbonyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-4^ pyrazolo[l,5-a]pyrimidin eller et salt derav.

2. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er N-(l -etyl-1 -(4-metylfenyl)propyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahy(kopyrazolo [1,5-a]pyrirnidin-3-karboksarnid eller et salt derav.

3. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er N-(l-etyl-l-(4-metylfenyl)propyl)-5-(2-pyrazolo[l,5-a]pyrmiidin-3-karboksarnid eller et salt derav.

4. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er N-(l-etyl-l-(4-metylfenyl)propyl)-2,7,7-trimetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tefr [l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav.

5. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er N-(l-etyl-l-(4-etylfenyl)propyl)-2,7,7-Mm [l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav.

6. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er N-(l -etyl-1 -(4-metylfenyl)propyl)-5-(2-fluorfenyl)-2,7,7-trimetyl-4,5,6J pyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav.

7. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er N-(l-etyl-1-(4-etylfenyl)prop pyrazolo[l,5-a]pyrirnidin-3-karboksamid eller et salt derav.

8. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er 5-(2-klorfenyl)-N-(l -etyl-1 -(4-metylfenyl)propyl)-2,7,7-trimetyl-4,5,6,7-tetrahydro-pyrazolo[l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav.

9. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er N-(l-(4-(dimetylammo)fenyl)-l-ety^ tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrirnidin-3-karboksarnid eller et salt derav.

10. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er N-(l,l-dietylbutyl)-5-(2-lfuorfeny^ pyrimidin-3-karboksarnid eller et salt derav.

11. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er N-(l-etyl-1-fenylpropyl)-5-(2-fluorfmy [l,5-a]pyrimidin-3-karboksamid eller et salt derav.

12. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er 3-(5-(l -etyl-1 -(4-metylfenyl)propyl)-1,3,4-oksadiazol-2-yl)-2,7,7-trimetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrirnidin eller et salt derav.

13. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er 3 -(5-(l -etyl-1 -(4-metylfenyl)propyl)-1,3,4-tiadiazol-2-yl)-2,7,7-trimetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin eller et salt derav.

14. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er 3-((4-(berizyloksy)-2,2-dietyl-l-pyrrolidinyl)karbonyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-4,^ tetrahydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin eller et salt derav.

15. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er 3-((2,2-dietyl-4-metoksy-l-pyrrolidinyl)karbonyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tetra-hydropyrazolo[l,5-a]pyrimidin eller et salt derav.

16. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er 3 -((2,2-dietyl-4-fluor-1 -pyrrolidinyl)karbonyl)-7,7-dimetyl-5-fenyl-4,5,6,7-tetrahydro-pyrazolo[l,5-a]pyrimidin eller et salt derav.

17. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 2-16,karakterisert vedat den er en optisk aktiv forbindelse.

18. Farmasøytisk sammensetning,karakterisert vedat den innbefatter forbindelsen ifølge krav 1.

19. Sammensetning ifølge krav 18, for å forebygge eller behandle en sykdom forårsaket av abnormitet i kalsiumkonsentrasjon i en levende kropp eller en kalsiumreseptor.

20. Sammensetning ifølge krav 18, for å forebygge eller behandle beinsykdommer.

21. Sammensetning ifølge krav 18, for å forebygge eller behandle osteoporose eller fraktur.

22. Anvendelse av en forbindelse ifølge krav 1, for fremstilling av en sammensetning for å forebygge eller behandle beinsykdommer.