NO326776B1 - CHK1-inhibitorer, farmasoytiske sammensetninger samt anvendelser derav - Google Patents

CHK1-inhibitorer, farmasoytiske sammensetninger samt anvendelser derav Download PDF

Info

Publication number
NO326776B1
NO326776B1 NO20033858A NO20033858A NO326776B1 NO 326776 B1 NO326776 B1 NO 326776B1 NO 20033858 A NO20033858 A NO 20033858A NO 20033858 A NO20033858 A NO 20033858A NO 326776 B1 NO326776 B1 NO 326776B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
compound
methyl
mmol
pyrazin
mhz
Prior art date
Application number
NO20033858A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20033858L (no
NO20033858D0 (no
Inventor
Edward A Kesicki
Laurence Edward Burgess
John Joseph Gaudino
Adam Wade Cook
Scott Douglas Cowen
Kathleen S Keegan
Original Assignee
Icos Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Icos Corp filed Critical Icos Corp
Publication of NO20033858D0 publication Critical patent/NO20033858D0/no
Publication of NO20033858L publication Critical patent/NO20033858L/no
Publication of NO326776B1 publication Critical patent/NO326776B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/498—Pyrazines or piperazines ortho- and peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinoxaline, phenazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/28—Radicals substituted by singly-bound oxygen or sulphur atoms
    • C07D213/30—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/36—Radicals substituted by singly-bound nitrogen atoms
    • C07D213/40—Acylated substituent nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/76—Nitrogen atoms to which a second hetero atom is attached
    • C07D213/77—Hydrazine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/20—Oxygen atoms
    • C07D215/24—Oxygen atoms attached in position 8
    • C07D215/26—Alcohols; Ethers thereof
    • C07D215/32—Esters
    • C07D215/34—Carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D231/38—Nitrogen atoms
    • C07D231/40—Acylated on said nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/32—One oxygen, sulfur or nitrogen atom
    • C07D239/42—One nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/47—One nitrogen atom and one oxygen or sulfur atom, e.g. cytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/12—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/20—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/36—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D241/38—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atoms
    • C07D241/40—Benzopyrazines
    • C07D241/44—Benzopyrazines with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D251/00—Heterocyclic compounds containing 1,3,5-triazine rings
    • C07D251/02—Heterocyclic compounds containing 1,3,5-triazine rings not condensed with other rings
    • C07D251/12—Heterocyclic compounds containing 1,3,5-triazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D251/14—Heterocyclic compounds containing 1,3,5-triazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrogen or carbon atoms directly attached to at least one ring carbon atom
    • C07D251/22—Heterocyclic compounds containing 1,3,5-triazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrogen or carbon atoms directly attached to at least one ring carbon atom to two ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D253/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D251/00
    • C07D253/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D251/00 not condensed with other rings
    • C07D253/06—1,2,4-Triazines
    • C07D253/065—1,2,4-Triazines having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D253/07—1,2,4-Triazines having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms, or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D257/04—Five-membered rings
    • C07D257/06—Five-membered rings with nitrogen atoms directly attached to the ring carbon atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/32—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/38—Nitrogen atoms
    • C07D277/44—Acylated amino or imino radicals
    • C07D277/48—Acylated amino or imino radicals by radicals derived from carbonic acid, or sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbonylguanidines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D453/00—Heterocyclic compounds containing quinuclidine or iso-quinuclidine ring systems, e.g. quinine alkaloids
    • C07D453/02—Heterocyclic compounds containing quinuclidine or iso-quinuclidine ring systems, e.g. quinine alkaloids containing not further condensed quinuclidine ring systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Catalysts (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

OPPFINNELSENS TEKNISKE OMRÅDE
Foreliggende oppfinnelse angår forbindelser som er anvendelige for å hemme enzymer som reparerer og opprettholder den uskadde helhet til genetisk materiale. Mer spesielt angår foreliggende oppfinnelse CHK1-inhibitorer, anvendelse av slike for fremstilling av et medikament for behandling av kreft samt farmasøytisk preparat inneholdende nevnte forbindelse.
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN
Et viktig og betydelig mål for helsevesenet er å oppdage og gjøre tilgjengelig sikrere og mer effektive medikamenter for behandling av kreft. De fleste kjemoterapeutiske midler virker ved å forstyrre DNA-metabolismen, DNA-syntesen, DNA-transkripsjonen eller spindelfunksjonen til mikrotubuli, eller ved å forstyrre kromosomenes strukturelle helhet ved innføring av DNA-skader. Disse prosessene påvirker både normale celler og tumorceller. Å opprettholde DNA uskadd er avgjørende for normale cellers levedyktighet og derfor har anti-cancer-medikamenter den laveste terapeutiske indeks av alle medikamentklasser.
En enkelt celle skaper en nøyaktig kopi av sine kromosomer og segregerer deretter hver kopi inn i celler ved en prosess som kalles mitose. Mitose-cyklusen kan deles i tre viktige hendelser: DNA-replikasjon, kromosomsegregering og celledeling. Celler har sansemekanismer for å opprettholde rekkefølgen av disse trinnene i forhold til hverandre og for å sikre at hvert trinn er utført med stor nøyaktighet. Sansemekanismene for disse prosessene kalles "kontrollpunkter" i L. H. Hartwell et al, Science, 3. nov., 1989,246
(4930): 629-34.
Det er rapportert at kontrollpunkter for cellecyklusen omfatter minst tre forskjellige klasser polypeptider. Hver klasse av polypeptid virker sekvensielt som en respons på cellecyklussignaler eller på defekter i kromosommekanismer (Carr. (1996) Science, 271: 314-315). En familie av proteiner oppdager eller sanser DNA-skade eller abnormaliteter i cellecyklusen. Disse sensorene omfatter mutert Ataxia-Telangiectasia (Atm) og Rad-relatert Ataxia-Telangiectasia (Atr) (Keegan et al, (1996) Genes Dev., 10: 24232437). En annen klasse av polypeptider amplifiserer og overfører signalet som er oppdaget av detektoren, og er eksemplifisert ved Rad53 (Allen et al, (1994) Genes Dev., 8: 2416-2488) og Chkl. I tillegg medierer cellecyklus-effektorer, så som p53, en cellulær respons som omfatter for eksempel stans av mitose og/eller meiose og apoptose.
DNA-skade kan fremkalles av medikamenter, stråling eller kan dannes spontant under den normale metabolismens forløp. Kontrollpunkter for DNA-skade sikrer at celler med ikke-reparerte DNA-skader ikke går inn DNA-syntese-fasen eller mitose før kromosomskadene er fjernet. Stans av cellecyklus kan gi bedre anledning til DNA-reparasjon og øker celledelingens nøyaktighet.
DNA-skade kan gjenkjennes gjennom hele cellecyklusen. Kontrollpunkter sikrer at veksten av celler stanses ved multiple cellecyklus-faser. Som et resultat av dette kan flere multiple cellecyklus-signaloverføringsbaner oppstå i løpet av sensibilisering av celler overfor DNA-skadende midler.
En stor del av det man i dag vet om funksjonen til kontrollpunkter for cellecyklus, er avledet fra undersøkelsen av tumor-avledete cellelinjer. I mange tilfeller har tumorceller mistet viktige kontrollpunkter for cellecyklus (Hartwell et al, Science, 16. des., 1994; 266
(5192): 1821-8). Det har blitt rapportert at et nøkkeltrinn i utviklingen av celler til en neoplastisk tilstand, er dannelsen av mutasjoner som inaktiverer cellecyklusens kontrollpunkt-baner, så som p53. (Weinberg, R. A. (1995) Cell 81: 323-330; Levin. A. J.
(1997) Cell 88: 3234-331). Tap av disse kontrollpunktene for cellecyklus, resulterer i uheldig cyklisering av tumorceller som en respons på DNA-skadende midler. Når de utsettes for cellulært stress, så som DNA-skade og cellecyklus-prosesser med redusert nøyaktighet, har tumorceller vanskelig for å endre kinetikken til cellecyklus-progresjonen. Hemming og forstyrrelse av ytterligere kontrollpunktsmekanismer for DNA-skade, kan derfor ytterligere sensitivisere tumorceller for anti-cancer-behandling, så som stråling og kjemoterapi. Ikke-cancerøst vev som har intakte kontrollpunkter for cellecyklus, isoleres vanligvis fra midlertidig forstyrrelse av en enkelt kontrollpunkt-bane. Tumorceller har imidlertid defekter i mekanismer som kontrollerer cellecyklus-progresjon, slik at forstyrrelse av andre kontrollpunkter, for eksempel kontrollpunktet for DNA-skade, gjør dem spesielt sensitive for DNA-skadende midler. For eksempel er tumorceller som inneholder mutant p53, defekte både i kontrollpunktet for Gl-DNA-skade og med hensyn deres evne til å opprettholde kontrollpunktet for G2-DNA-skade. (Bunz et al, Science, 20. nov. 1998; 282 (5393): 1497-501; Levin). Kontrollpunkt-inhibitorer som har som mål å initiere G2-kontrollpunktet eller S-fase-kontrollpunktet, er forventet å ytterligere ødelegge den evne disse tumorceller har til å reparere DNA-skade, og vil derfor selektivt drepe dem i forhold til normale celler. Det er derfor forventet at kontrollpunkt-inhibitorer vil forbedre den terapeutiske indeks som er et mål for sannsynligheten for tumor-kontroll i forhold til sannsynligheten for toksisitet overfor normalt vev, både ved stråling og systemisk kjemoterapi. Den evne kontrollpunkt-inhibitorer har til å forbedre den terapeutiske indeks, kan være avhengig av tumor-type. Tumorer med cellecyklus-defekter som er komplementære til de DNA-skadede kontrollpunkt-mekanismer, kan være mest sensitive overfor inhibitor-medikament-behandling. I motsetning til dette er det forventet at DNA-PK-inhibitorer, en annen spesiell klasse av potensielle terapeutiske midler, sensitiviserer tumorer uavhengig av celletype. En systematisk tilnærming ved bruk av kontrollpunkt-inhibitorer og DNA-PK-inhibitorer, kan også være effektivt ved behandling av metastase-sykdommer som stråleterapi ikke kan nå. Kontrollpunkt-proteinene Atm og Atr er antatt å initiere en signaloverføringsbane som fører til cellecyklus-stans i nærvær av DNA-skade eller enhver blokkering av DNA-replikasjon. Atm har vist seg å spille en rolle i et kontrollpunkt for DNA-skade som en respons på ioniserende stråling (IR). Pasienter som mangler funksjonell Atm, utvikler sykdommen Ataxia Telangiectasia (A-T). Symptomer på A-T omfatter ekstrem sensitivitet overfor ioniserende stråling (IR), degenerasjon av lillehjernen, okulotan telangiektasi, gonadal mangel, immunsvikt og øket risiko for kreft (Shiloh, Eur. J. Hum. Genet 1995; 3 (2): 116-38). Fibroblaster utvunnet fra disse pasientene, er antatt å ha defekter i Gl-, S- og G2-kontrollpunkter og gir ufullstendig respons på IR (Kastan et al. Cell, 13. nov. 1992; 71 (4): 587-97; Scott et al, Int. J. Radiat. Biol, , Des., 1994; 66 (6 Suppl): S157-63; og Beamish et al,. J. Biol, Chem, 26. aug, 1993; 271 (34): 20486-93). Atm kan derfor oppdage dobbel-trådet DNA-skade forårsaket av IR og radiomimetiske medikamenter, og kan gi signal om å stanse cellecyklusen slik at skaden kan repareres. Atr er et kontrollpunkt-protein som stimuleres av faktorer som forårsaker dobbel-trådete DNA-brudd, enkelt-trådete DNA-brudd og faktorer som blokkerer DNA-stråling. Overekspresjon av Atr i muskelceller på iso-kromosom 3q, resulterer i blokkering av differensiering, unormalt antall centrosomer, ustabile kromosomer og opphever Gl-stansen som en respons på IR (Smith et al, Nat. Genet, mai 1998; 19 (1): 39-46). Overekspresjon av en kinase-inaktiv, dominant, negativ mutant av Atr, sensitiviserer celler overfor IR, ultrafiolett lys (UV), MMS og cisplatin (Cliby et al, EMBOJ, 2. jan. 1998,17(1): 159-69 og Wright et al, Proe, Na t' l Acad. Sei, USA, 23. juni 1998; 95 (13): 7445-50). Celler som inneholder overuttrykt mutant-stamme av Atr, kan heller ikke stanse G2 som en respons på IR. I tillegg er Atr relatert til kromosomer i meiotiske celler hvor DNA-brudd og unormale DNA-strukturer vedvarer som et resultat av prosessen meiotisk rekombinasjon (Keegan et al, Genes Dev, 1. oktober 1996; 10 (19): 433-37). Også Atr, som Atm, oppdager DNA-skade og faktorer som blokkerer DNA-replikasjon, og initierer også cellecyklus-stans ved G2 og S for DNA-reparasjon. Chkl antas å være nedstrøms for proteinkinasene Atm og/eller Atr i signaloverføringsbanen for DNA-skade-kontrollpunktet. (Se Sanchez et al, Science, 1997; 277: 1497-1501; US-patent nr. 6.218.109.) I pattedyrceller blir Chkl fosforylert som en respons på faktorer som forårsaker DNA-skade, inkludert IR, UV og hydroksyurea (Sanchez et al, 1997; Lui et al, Genes Dev, 2000; 14: 1448-1459). Fosforyleringen og aktiveringen av Chkl i pattedyrceller, er avhengig av Atm (Chen et al, 1999) og Atr (Lui et al, 2000). I gjærsoppen S. pombe synes også Chkl å være involvert i responsen på IR og blokkerer replikasjon (Boddy et al, 1998; Walworth et al, 1993). Videre har Chkl vist seg å fosforylere både "weel" (0'Connell et al., EMBOJ, 1997; 16: 545-554) og Pdsl-(Sanchez et al, Science 1999; 286: 1166-1171) genprodukter som er kjent for å være viktige for cellecyklus-kontroll. Disse undersøkelsene viser at pattedyr-Chkl spiller en rolle i begge de Atm-avhengige kontrollpunkter for DNA-skade, hvilket fører til stans ved S-fasen. Imidlertid gjenstår det fremdeles å belyse den rolle Chkl har for kontrollpunktet for S-fase-replikasjon i pattedyrceller. Det er interessant at Chkl fra knockout-mus dreper embryo, noe som tyder på at Chkl spiller en rolle i utviklingen av en organisme, i tillegg til dens rolle i kontrollpunkter for DNA-skade. Chkl kan fremkalle G2-stans ved fosforylering og inaktivering av Cdc25C, fosfatasen med dobbel spesifisitet, som normalt defosforylerer cyklin B/cdc2 mens celler går inn i mitose (Fernery et al, Science, 5. sep. 1997; 277 (5331): 1495-7; Sanchez et al; Matsuoka et al og Blasina et al, Curr. Biol, , 14. jan. 1999; 9 (1): 1-10). Denne mekanismen for regulering av Cdc2-aktivitet, stimulerer cellecyklus-stans for å forhindre at celler går inn i mitose i nærvær av DNA-skade eller ikke-replikert DNA.
OPPSUMMERING AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse angår kraftige og selektive kjemosensitiviseringsmidler som er anvendelige ved behandling av sykdommer og tilstander som er relatert til DNA-skade eller skader ved DNA-replikasjon. De foreliggende forbindelser er inhibitorer av kontrollpunktet kinase Chkl. Spesielt har aryl- og heteroarylsubstituerte urea-forbindelser vist betydelig aktivitet ved hemming av Chkl.
Et første aspekt ved foreliggende oppfinnelse vedrører forbindelser som er kjennetegnet ved at de er gitt ved følgende formel:
hvor
Y'er O eller S;
W er valgt fra gruppen som består av
eventuelt substituert med fra én til fire substituenter valgt fra gruppen som består av Ci^alkyl, eventuelt substituert aryl, N(R<7>)2, CF3, N3, C(0)R7, CN, Ci-3alkylenaryl, C,-3alkylenN(R<12>)2, OR<7>, halo og Z' er valgt fra gruppen som består av
hvori:
Q' er valgt fra gruppen som består av hydrogen, OR7, SR7 og N(R<7>)2;
J' er valgt fra gruppen som består av CR<8>, NR<8>,0 og S;
K' er valgt fra gruppen som består av CR<9>, NR<9>,0 og S;
L' er valgt fra gruppen som består av CR<10>, NR<10>,0 og S;
M' er valgt fra gruppen som består av CR1 \ NR<1>', O og S;
hvori:
R7 uavhengig er valgt fra gruppen som består av hydrogen, Ci^alkyl, C2-6alkenyl, sykloalkyl, aryl, heteroaryl, SO2R12, Ci^alkyl substituert med én eller flere halogen, hydroksy, aryl, heteroaryl, heterosykloalkyl, N(R<12>)2 og SO2R<12>, Ci-3alkylenaryl, Ci. 3alkylenheteroaryl, Ci.3alkylenC3.8 heterosykloalkyl, Ci.3alkylenSC>2aryl, eventuelt substituert Ci.3alkylenN(R<12>)2, OCF3, Ci.3alkylenN(R<12>)3<+>, C3.8heterosykloalkyl og CH(Ci. 3alkylenN(R )2)2, eller to R -grupper danner sammen en eventuelt substituert 3- til 6-leddet alifatisk ring;
R<8>, R9 og R<10> er valgt uavhengige av hverandre fra gruppen som består av null, hydrogen, halogen, eventuelt substituert Ci.6alkyl, C2.6alkenyl, OCF3, N02, CN, NC, N(R7)2, OR7, C02R7, C(0)N(R<7>)2, C(0)R<7>, N(R<13>)COR<7>, N(R<13>)C(0)OR<7>, N(R<7>)C(0)OR<7>, N(R<7>)C(0)Ci.3alkylenC(0)R<7>, N(R<7>)C(0)Ci.3alkylenC(0)OR<7>, N(R<7>)C(0)-Ci.3alkylenOR<7>, N(R<7>)C(0)C,.3alkylenNHC(0)OR<7>, N(R<7>)C(0)Ci.3alkylenS02NR<7>, CF3, Ci.3alkylenN(R<12>)S02aryl, CioalkylenN(R<12>)S02heteroaryl,Ci.3alkylenOCi.3alkylenaryl, Ci.3alkylenN(R12)Ci.3alkylenaryl, Ci-3alkylenN(R<12>)Ci.3alkylenheteroaryl, Q-3alkylenN(R12)C(0)R7, Ci.3alkylenN(R12)C(0)Ci.3alkylenOR2, Ci-3alkylenN(RI2)C(0)aryl, CMalkylenN(R12)C(0)Ci-3alkylenN(R12)2, Ci.3alkylenN(R<12>)C(0)heteroaryl, Ci.3alkylenOR<7> og SR<7>, hvor R<7> er som definert ovenfor;
R<11> er valgt fra gruppen som består av null, hydrogen, eventuelt substituert
Ci-6alkyl og halogen;
R<12> er valgt fra gruppen som består av hydrogen, Ci^alkyl, Ci-6Sykloalkyl, aryl, heteroaryl, Ci.3alkylenaryl og S02Ci.6alkyl, eller to R<12->grupper danner sammen en eventuelt substituert 3- til 6-leddet ring; og
R<13> er valgt fra gruppen som består av hydrogen, Ci^alkyl, C2-6alkenyl, C2-6alkynyl og aryl;
forutsatt at når Q' er hydrogen eller OCH3, er minst én av R<8>, R<9> og R<10> ikke valgt
fra hydrogen, CH3, OCH3 eller halogen;
hvori aryl betyr en monosyklisk eller polysyklisk aromatisk gruppe og heteroaryl betyr et monosyklisk eller bisyklisk ringsystem som inneholder én eller to aromatiske ringer og som inneholder minst ett nitrogen, oksygen eller svovelatom i en aromatisk ring;
og farmasøytisk akseptable salter derav.
Foreliggende oppfinnelse angår også farmasøytiske preparater som inneholder én eller flere av forbindelsene ifølge det første aspekt ved oppfinnelsen. Videre vedrører oppfinnelsen anvendelse av en forbindelse ifølge det første aspekt ved oppfinnelsen for fremstilling av et preparat for behandling av kreft i et menneske.
DETALJERT BESKRIVELSE AV DE FORETRUKNE UTFØRELSESFORMER
Stråling og de fleste kjemoterapeutiske midler er terapeutisk fordelaktige fordi de drar nytte av uheldig tumorcelle-proliferasjon. Cellulære prosesser, så som DNA-skade-reparasjon og cellecyklus-kontrollpunkter, beskytter tumorceller fra de toksiske effekter av fysiske og kjemiske midler. Behandling som modulerer de grunnleggende molekylære mekanismer ved cellecyklus-progresjon og resistens mot DNA-skade, kan forsterke tumorcelle-dreping og øke den terapeutiske indeks for eksisterende terapiformer.
De fleste kjemoterapeutiske midler virker ved å forstyrre DNA-metabolismen. Fordi disse prosessene skjer i både normale celler og tumorceller og fordi opprettholdelsen av uskadd DNA er essensiellt for cellenes levedyktighet, har anticancer-medikamenter den laveste terapeutiske indeks av alle medikamentklasser. Ved å identifisere og hemme cellulære prosesser som tumorceller er avhengige av, kan effektiviteten av stråling og behandlingsregimer for kjemoterapi forbedres.
Forstyrrelse av funksjonen til kontrollpunkt-protein for DNA-skade, tilveiebringer nye hjelpemidler for å drepe tumorceller i forhold til normale celler. For eksempel sikrer Chkl at celler med ureparerte DNA-lesjoner forårsaket av visse medikamenter eller stråling, ikke gjennomgår DNA-syntese-fase eller mitose før kromosomlesjonene er fjernet. En tumorcelle som er behandlet med en Chkl-inhibitor i kombinasjon med et DNA-skadende middel, kan følgelig drepes ved bruk av lavere mengder DNA-skadende middel enn en tumorcelle som er behandlet med det DNA-skadende middel alene.
Feil ved cellecyklus-kontrollpunkter i normale celler, gjør et individ disponert for, eller forårsaker direkte, mange sykdomstilstander, så som kreft, ataxia telangiectasia, embryo-abnormaliteter og forskjellige immunologiske defekter forbundet med avvikende B- og T-celle utvikling. Det sistnevnte er forbundet med de patologiske tilstandene lupus, artritt og autoimmune sykdommer. Innen forskningen er det derfor gjort en stor innsats med fokus på å identifisere cellecyklus-kontrollpunkter og proteinene som er essensielle for kontrollpunktenes funksjon.
Ikke-cancerøst vev som har intakte celle-kontroUpunkter, isoleres vanligvis fra midlertidig forstyrrelse av en enkel kontrollpunkt-bane, så som Chkl-banen. Tumorceller har imidlertid multiple defekter i baner som kontrollerer cellecyklus-progresjon, slik at forstyrrelse av kontrollpunktet for DNA-skade kan gjøre dem spesielt sensitive for DNA-skadende midler. Kontrollpunkt-inhibitorer er derfor forventet å forbedre den terapeutiske indeks som er et mål for sannsynligheten for tumor-kontroll, i forhold til sannsynligheten for toksisitet i normalt vev overfor stråling og systemisk kjemoterapi. I motsetning til dette er muligens andre klasser av inhibitorer ikke mottagelige for kombinasjons-kjemoterapi, fordi både normalt vev og tumorvev kan være sensitivisert i like stor grad.
Et første aspekt ved foreliggende oppfinnelse vedrører forbindelser som er kjennetegnet ved at de er gitt ved følgende formel:
hvor
Y'er O eller S;
W er valgt fra gruppen som består av
eventuelt substituert med fra én til fire substituenter
valgt fra gruppen som består av Ci.6alkyl, eventuelt substituert aryl, N(R<7>)2, CF3, N3, C(0)R7, CN, Ci-3alkylenaryl, Ci-3alkylenN(R<12>)2, OR<7>, halo og
Ca.3 al kyl en
foretrukket er W Z' er valgt fra gruppen som består av
hvori:
Q' er valgt fra gruppen som består av hydrogen, OR<7>, SR<7> og N(R<7>)2;
J' er valgt fra gruppen som består av CR<8>, NR<8>,0 og S;
K' er valgt fra gruppen som består av CR<9>, NR<9>,0 og S;
L' er valgt fra gruppen som består av CR<10>, NR<10>,0 og S;
M' er valgt fra gruppen som består av CR<1>', NR1 \ O og S;
hvori:
R<7> uavhengig er valgt fra gruppen som består av hydrogen, Ci^alkyl, C2-6alkenyl, sykloalkyl, aryl, heteroaryl, SO2R<12>, Ci^alkyl substituert med én eller flere halogen, hydroksy, aryl, heteroaryl, heterosykloalkyl, N(R<12>)2 og SO2R<12>, Cijalkylenaryl, Ci. 3alkylenheteroaryl, Ci.3alkylenC3-8 heterosykloalkyl, Ci-3alkylenS02aryl, eventuelt substituert Ci.3alkylenN(R<l2>)2, OCF3, Ci.3alkyIenN(R<12>)3<+>, C3.8heterosykloalkyl og CH(Ci. 3alkylenN(R<l2>)2)2, eller to R<7->grupper danner sammen en eventuelt substituert 3- til 6-leddet alifatisk ring;
R<8>, R<9> og R<10> er valgt uavhengige av hverandre fra gruppen som består av null, hydrogen, halogen, eventuelt substituert Ci.6alkyl, C2-6alkenyl, OCF3, N02, CN, NC, N(R<7>)2, OR<7>, C02R7, C(0)N(R<7>)2, C(0)R<7>, N(R<l3>)COR<7>, N(R<13>)C(0)OR<7>, N(R<7>)C(0)OR<7>, N(R<7>)C(0)Ci.3alkylenC(0)R7, N(R<7>)C(0)Ci-3alkylenC(0)OR<7>, N(R<7>)C(0)-Ci.3alkylenOR<7>, N(R<7>)C(0)Ci.3alkylenNHC(0)OR<7>, N(R<7>)C(0)Ci.3alkylenS02NR<7>, CF3, Ci.3alkylenN(R12)S02aryl,Ci.3alkylenN(R12)S02heteroaryl, CioalkylenOCLsalkylenaryl, Ci-3alkylenN(R<12>)Ci.3alkylenaryl, Ci.3alkylenN(R<12>)Ci.3alkylenheteroaryl, Q-3alkylenN(R12)C(0)R7, Ci.3alkylenN(R12)C(0)Ci.3alkylenOR2, Ci.3alkylenN(R12)C(0)aryl, Ci.3alkylenN(R12)C(0)Ci-3alkylenN(R12)2, Ci.3alkylenN(R<12>)C(0)heteroaryl, Ci.3alkylenOR7 og SR<7>, hvor R7 er som definert ovenfor;
R<11> er valgt fra gruppen som består av null, hydrogen, eventuelt substituert
Ci^alkyl og halogen;
R<12> er valgt fra gruppen som består av hydrogen, Ci^alkyl, Ci-6sykloalkyl, aryl, heteroaryl, Ci.3alkylenaryl og S02Ci-6alkyl, eller to R<l2->grupper danner sammen en eventuelt substituert 3- til 6-leddet ring; og
R<13> er valgt fra gruppen som består av hydrogen, Ci.6alkyl, C2-6alkenyl, C2-6alkynyl og aryl;
forutsatt at når Q' er hydrogen eller OCH3, er minst én av R<8>, R<9> og R<10> ikke valgt fra hydrogen, CH3, OCH3 eller halogen;
hvori aryl betyr en monosyklisk eller polysyklisk aromatisk gruppe og heteroaryl betyr et monosyklisk eller bisyklisk ringsystem som inneholder én eller to aromatiske ringer og som inneholder minst ett nitrogen, oksygen eller svovelatom i en aromatisk ring;
og farmasøytisk akseptable salter derav.
I en foretrukket utførelsesform ifølge det første aspekt av oppfinnelsen er Q' OR<7. >Videre er det foretrukket at R<13> er hydrogen.
Slik betegnelsen "alkyl" er anvendt her, omfatter den rettkjedede og forgrenede hydrokarbongrupper som inneholder det angitte antall karbonatomer, typisk metyl, etyl og rettkjedede og forgrenede propyl- og butylgrupper. Hvis ikke annet er angitt, kan hydrokarbongruppen inneholde opptil 20 karbonatomer. Betegnelsen "alkyl" omfatter " brobundet alkyl", d.v.s. en C6-C16 bicyklisk eller polycyklisk hydrokarbongruppe, for eksempel norbornyl, adamantyl, bicyklo[2.2.2]oktyl, bicyklo[2.2.1]heptyl, bicyklo[3.2.1]oktyl eller dekahydronaftyl, Alkylgrupper kan være substituerte, for eksempel med hydroksy (OH), halogen, aryl, heteroaryl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, amino (N(R<a>)2) og sulfonyl (S02R<a>), hvor Ra er valgt fra gruppen som består av hydrogen, Ci-6alkyl, cykloalkyl, aryl og S02Ci-6alkyl, eller to Ra-grupper danner sammen en eventuelt substituert 3- til 6-leddet ring,
Betegnelsen "cykloalkyl" er definert som en cyklisk Cs-shydrokarbongruppe, f.eks. cyklopropyl, cyklobutyl, cykloheksyl og cyklopentyl. "Heterocykloalkyl" er tilsvarende definert som cykloalkyl og omfatter bicykliske og polycykliske grupper, bortsett fra at ringen inneholder én til tre heteroatomer valgt fra gruppen som består av oksygen, nitrogen og svovel. Cykloalkyl- og heterocykloalkylgruppene kan være mettede eller delvis umettede ringsystemer som er substituert med for eksempel én til tre grupper valgt uavhengige av hverandre fra CMalkyl, Ci^alkylenOH, C(=0)NH2, NH2, okso (=0), aryl, trifluoretanoyl og OH. Heterocykloalkylgruppene er eventuelt ytterligere N-substituert med Ci.3alkylenaryl eller Cijalkylen-heteroaryl.
Betegnelsen "alkenyl" er definert akkurat som "alkyl", bortsett fra at substituenten inneholder en karbon-karbon dobbeltbinding,
Betegnelsen "alkynyl" er definert akkurat som "alkyl", bortsett fra at substituenten inneholder en karbon-karbon trippelbinding,
Betegnelsen "alkylen" angir en alkylgruppe som har en substituent. For eksempel angir betegnelsen "Ci-3alkylenC(0)OR" en alkylgruppe som inneholder én til tre karbonatomer substituert med en -C(0)OR-gruppe. Alkylengruppen er eventuelt substituert med én eller flere aryl, heteroaryl og OR<7>, hvor R<7> er definert som nedenfor. Betegnelsen "halogen" slik den er definert her, omfatter fluor, brom, klor og jod. Betegnelsen "aryl", alene eller i kombinasjon, er her definert som en monocyklisk eller polycyklisk aromatisk gruppe, fortrinnsvis en monocyklisk eller bicyklisk aromatisk gruppe, f.eks. fenyl eller naftyl. Hvis ikke annet er angitt, kan en "aryl"-gruppe være usubstituert eller substituert, for eksempel med én eller flere, og spesielt én til fire, halogen, d_6alkyl, C2.6alkenyl, OCF3, N02, CN, NC, N(R<a>)2, ORb, C02R<b,>
C(0)N(R<b>)2, C(0)R<b>, N(R<a>)COR<b>, N(R<a>)C(0)OR<b>, N(R<a>)C(0)OR<b>, N(R<a>)C(0)Ci.3-alkylenC(0)R<b>, N(R<b>)C(0)Ci.3alkylenC(0)OR<b>, N(R<b>)C(0)Ci.3alkylenOR<b>, N(R<b>)C(0)-C,.3alkylenNHC(0)OR<b>, N(R<b>)C(0)Ci.3alkylenS02NR<b>, Ci.3alkylenOR<b> og SR<b>, hvor R<b >er valgt fra gruppen som består av hydrogen, C^alkyl, C2-6alkenyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, S02R<a> og Ci^alkyl substituert med halogen, hydroksy, aryl, heteroaryl, heterocykloalkyl, N(R<a>)2 eller S02R<a> og Ra er som tidligere definert. Eksempler på arylgrupper omfatter fenyl, naftyl, tetrahydronaftyl, 2-klorfenyl, 3-klorfenyl, 4-klorfenyl, 2-metylfenyl, 4-metoksyfenyl, 3-trifluormetylfenyl, 4-nitrofenyl, 2-metoksyfenyl, 2,4-metoksyklorfenyl og lignende. Betegnelsene "arylCi.3alkyl" og "heteroarylCi.3alkyl" er definert som en aryl- eller heteroarylgruppe som har en Ci-3alkyl-substituent.
Betegnelsen "heteroaryl" er her definert som et monocyklisk eller bicyklisk ringsystem som inneholder én eller to aromatiske ringer og som inneholder minst ett nitrogen, oksygen eller svovelatom i en aromatisk ring, og som kan være usubstituert eller substituert, for eksempel med én eller flere, og spesielt én til fire, substituenter, for eksempel hydrogen, Ci^alkyl, Ci.6alkoksy, aryl, N(R<a>)2, ORb og halogen, hvor Ra og R<b> er definert som tidligere. Eksempler på heteroarylgrupper omfatter, men er ikke begrenset til, tienyl, furyl, pyridyl, oksazolyl, kinolyl, isokinolyl, indolyl, triazolyl, isotiazolyl, isoksazolyl, imidizolyl, benzotiazolyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, tiazolyl og tiadiazolyl.
Betegnelsen "hydroksy" er definert som -OH.
Betegnelsen "3- til 6-leddet ring" slik den er anvendt her, angir karbocykliske og heterocykliske alifatiske eller aromatiske grupper som omfatter, men ikke er begrenset til, morfolinyl, piperidinyl, fenyl, tiofenyl, furyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrimidinyl og pyridinyl, eventuelt substituert med én eller flere, og spesielt én til tre, grupper eksemplifisert ovenfor for "aryl"-grupper.
Karbonatom-innholdet i hydrokarbon-holdige grupper, er angitt med senket skrift som betegner laveste og høyeste antall karbonatomer i gruppen, f.eks. angir "Ci.6alkyl" en alkylgruppe som har fra og med ett til og med seks karbonatomer.
Når en binding i strukturene heri, mangler en substituent, er substituenten for eksempel metyl,
Når det ikke er angitt at et karbonatom i en ring er bundet til noen substituent, er det underforstått at karbonatomet inneholder et hensiktsmessig antall hydrogenatomer. Når det ikke er angitt at noen substituent er bundet til for eksempel en karbonylgruppe eller et nitrogenatom, er det dessuten underforstått at substituenten er hydrogen, f.eks.
Forkortelsen "Me" er metyl, forkortelsen CO og C(O) er karbonyl (C=(0)).
Betegnelsen N(R<X>)2, hvor x representerer en bokstav eller et tall som for eksempel Ra, Rb, R4, R<12> og lignende, anvendes for å betegne to Rx-grupper bundet til et felles nitrogenatom. Når den anvendes i en slik betegnelse, kan Rx-gruppene være like eller forskjellige og er valgt fra gruppen som definerer Rx-gruppen.
I et annet aspekt angår foreliggende oppfinnelse farmasøytiske sammensetninger som er kjennetegnet ved at de omfatter en forbindelse ifølge det første aspekt ved oppfinnelsen, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, i kombinasjon med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer.
Et ytterligere aspekt vedrører forbindelsene ifølge det første aspekt ved oppfinnelsen for anvendelse ved behandling av kreft i et menneske.
Videre vedrører foreliggende oppfinnelse også anvendelse av en forbindelse ifølge det første aspekt ved oppfinnelsen for fremstilling av et preparat for behandling av kreft i et menneske.
Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse har vist seg å være selektive overfor for Chkl så vel som mot andre proteinkinaser som omfatter Cdc2, Chk2, Atr, DNA-PK, PKA og CaM KIL
Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes for å forsterke den terapeutiske effekt av stråling og/eller kjemoterapeutika som anvendes ved behandling av kreft og andre celleproliferasjons-forstyrrelser hos mennesker eller dyr. For eksempel kan forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse anvendes for å forsterke behandlingen av tumorer som vanligvis behandles med en antimetabolitt, f.eks. methotrexat eller 5-fluoruracil (5-FU). En Chkl-inhibitor-forbindelse kan administreres i kombinasjon med et kjemoterapeutisk middel som kan fremkalle enkel- eller dobbel-trådete DNA-brudd eller som kan blokkere DNA-replikasjon eller celleproliferasjon. Alternativt kan en Chkl-inhibitor-forbindelse administreres i kombinasjon med terapiformer som omfatter anvendelsen av et antistoff, f.eks. herceptin, som har aktivitet ved hemming av kreftcellers proliferasjon. Følgelig er kreft, så som kolorektal kreft, hode- og halskreft, pankreaskreft, brystkreft, magekreft, blærekreft, vulvakreft, leukemier, lymfomer, melanomer, nyrecelle-karsinomer, eggstokkkreft, hjernetumorer, osteosarkomer og lungekarsinomer, mottagelig for forsterket behandling i kombinasjon med Chkl-inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Tumorer eller neoplasmer omfatter vekst av vevsceller hvor formeringen av celler er ukontrollert og progressiv. Enkelte typer slik vekst er godartede men andre betegnes som "ondartede", og kan føre til at organismen dør. Ondartete neoplasmer, eller "kreft", kan skilles fra godartet vekst ved at de, i tillegg å ha en aggressiv celleproliferasjon, kan invadere det omgivende vev og metastasere. Videre er ondartete neoplasmer karakterisert ved at de fremviser større mangel på differensiering (større "dedifferensiering") og organisering i forhold til hverandre og omgivende vev. Denne egenskapen betegnes "anaplasi."
Neoplasmer som kan behandles med forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, omfatter også faste tumorer, d.v.s. karsinomer og sarkomer. Karsinomer omfatter ondartede neoplasmer som er avledet fra epitelceller som infiltrerer (d.v.s. invaderer) det omgivende vev og er opphav til metastaser. Adenokarsinomer er karsinomer som er avledet fra kjertel vev eller fra vev som danner tydelige kjertelstrukturer. En annen stor kategori av krefttyper omfatter sarkomer som er tumorer hvor cellene er innleiret i en fibrillær eller homogen substans, som embryonisk bindevev. Oppfinnelsen muliggjør også behandling av kreft i det myeloiske system eller lymfesystemet, som omfatter leukemier, lymfomer og andre krefttyper som vanligvis ikke foreligger som en tumormasse, men er fordelt i de vaskulære eller lymforetikulære systemer.
Chkl-aktivitet er forbundet med forskjellige former for kreft, for eksempel voksen og pediatrisk onkologi, vekst av faste tumorer/malignitet, myksoid karsinom og mndcellekarsinom, lokalt utviklede tumorer, metastasert kreft, humane bløtvevssarkomer som omfatter Ewings sarkom, kreftmetastaser som omfatter lymfe-metastaser, platecelle-karsinom, spesielt i hode og hals, spiserørsplatecelle-karsinom, oralt karsinom, blodcelle-maligniteter som omfatter multippelt myelom, leukemier som omfatter akutt lymfocytt-leukemi, akutt ikke-lymfocytt-leukemi, kronisk lymfocytt-leukemi, kronisk myelocytt-leukemi og hårcelle-leukemi, effusjonslymfomer (lymfomer i kroppshulrom), tymisk lymfom-lungekreft (som omfatter småcelle-karsinom, hud-T-celle-lymfom,
Hodgkins lymfom, ikke-Hodgkins lymfom, kreft i den adrenale cortex, ACTH-produserende tumorer, ikke-småcellet kreft, brystkreft som omfatter småcelle-karsinom og kanalkarsinom), gastrointestinal kreft (som omfatter magekreft, kolonkreft, kolorektal kreft og polypper forbundet med kolorektal neoplasi), pankreaskreft, leverkreft, urologisk kreft (som omfatter blærekreft, så som primære overfladiske blæretumorer, invasivt overgangscelle-karsinom i blæren og muskelinvasiv blærekreft, prostatakreft, maligniteter i de kvinnelige kjønnsorganer (som omfatter eggstokk-karsinom, primære peritoneale epitel-neoplasmer, livmorhals-karsinom, uterin endometriekreft, vaginakreft, vulvakreft, uterin kreft og faste tumorer i eggstokkfollikkelen), maligniteter i de mannlige kjønnsorganer (som omfatter testikkelkreft og peniskreft), nyrekreft (som omfatter nyrecelle-karsinom, hjernekreft (som omfatter intrinsiske hjernetumorer, nevroblastoma, astrocyttiske hjernetumorer, gliomer og metastasisk tumorcelle-invasjon i sentralnervesystemet), benkreft (som omfatter osteomer og osteosarkomer), hudkreft (som omfatter ondartet melanom, tumorprogresjon av humane hud-keratinocytter og platecellekreft), tyroid kreft, retinoblastom, nevroblastom, peritoneal effusjon, ondartet pleural effusjon, mesoteliom, Wilms' tumorer, galleblærekreft, trofoblast-neoplasmer, hemangiopericytom og Kapos' sarkom.
Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse kan også forsterke effektiviteten til medikamenter ved behandling av inflammatoriske sykdommer. Eksempler på sykdommer hvor det kan være fordelaktig med kombinasjonsterapi er revmatoid artritt, psoriasis, vitiligo, Wegeners granulomatose og systemisk lupus erythematosus (SLE). Behandling av artritt, Wegeners granulomatose og SLE, omfatter ofte anvendelse av immunosuppressive terapiformer, så som ioniserende stråling, methotrexat og cyklofosfamid. Slik behandling fører vanligvis, enten direkte eller indirekte, til DNA-skade. Hemming av Chkl-aktivitet i de berørte immunceller gjør cellene mer sensitive for disse standardbehandlingene. Psoriasis og vitiligo behandles vanligvis med ultrafiolett stråling (UV) i kombinasjon med psoralen. De foreliggende DNA-skadende midler induserer den drepende effekt av UV og psoralen og øker den terapeutiske indeks for dette behandlingsregimet. Generelt sett styrker forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse reguleringen av inflammatoriske sykdoms-celler, når de kombineres med for tiden benyttede immunosuppressive medikamenter.
Foreliggende oppfinnelse omfatter alle mulige stereoisomerer og geometriske isomerer av forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse. Foreliggende oppfinnelse omfatter ikke bare racemiske forbindelser, men også optisk aktive isomerer. Når en forbindelse er ønsket som en enkelt enantiomer, kan det oppnås enten ved optisk spaltning av sluttproduktet eller ved stereospesifikk syntese fra enten rent isomer-utgangsmateriale eller ved bruk av et kiralt hjelpereagens, se for eksempel Z. Ma et al., Tetrahedron: Asymmetry, 8 (6), s. 883-888 (1997). Optisk spaltning av sluttproduktet, et mellomprodukt eller et utgangsmateriale, kan oppnås ved hvilken som helst egnet metode som er kjent på området. I tillegg skal foreliggende oppfinnelse, i tilfeller hvor tautomerer av forbindelsene er mulig, omfatte alle tautomere former av forbindelsene. Det er her vist at spesifikke stereoisomerer kan fremvise en eksepsjonell evne til å hemme Chkl i kombinasjon med kjemo- eller radioterapi, med mindre bivirkninger enn det som vanligvis er forbundet med kjemoterapeutisk eller radioterapeutisk behandling.
Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse kan inneholde mange funksjonelle grupper. De innførte funksjonelle grupper kan deretter, om det er ønskelig eller nødvendig, modifiseres for å gi et prodrug for formulering og/eller administrering. Egnede prodrugs omfatter for eksempel syrederivater som amider, estere og lignende. Det er også anerkjent av fagfolk på området at N-oksyder kan anvendes som prodrugs.
Betegnelsen farmasøytisk akseptable salter, slik den er anvendt her, viser til forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse, som inneholder sure grupper og danner salter med egnede kationer. Egnede farmasøytisk akseptable kationer omfatter alkalimetall-(f.eks. natrium eller kalium) og jordalkalimetall-kationer (f.eks. kalsium eller magnesium). De farmasøytisk akseptable salter av forbindelsene med strukturformel (I), (II) og (III), som inneholder en basisk gruppe, er syreaddisjonssalter dannet med farmasøytisk akseptable syrer. Eksempler omfatter hydroklorid-, hydrobromid-, sulfat- eller bisulfat-, fosfat- eller hydrogenfosfat-, acetat-, benzoat-, succinat-, fumarat-, maleat-, laktat-, citrat-, tartrat-, glukonat-, metansulfonat-, benzensulfonat- og p-toluensulfonat-saltene. I lys av det foregående skal enhver henvisning til forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse, omfatte forbindelsene ifølge oppfinnelsen, så vel som farmasøytisk akseptable salter og solvater derav.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan administreres terapeutisk i form av rent kjemikalium, men det er foretrukket å administrere forbindelsene som farmasøytiske preparater eller formuleringer. Videre tilveiebringer følgelig foreliggende oppfinnelse farmasøytiske preparater som omfatter en forbindelse ifølge oppfinnelsen, eller farmasøytisk akseptable salter derav, sammen med én eller flere farmasøytisk akseptable bærere og eventuelt andre terapeutiske og/eller profylaktiske bestanddeler. Bærerne er "akseptable" i den betydning at de er forenlige med de andre bestanddeler i preparatet og ikke er skadelige for mottakeren. Hemming av kontrollpunktet kinase blir vanligvis målt ved å benytte et dose-respons-forsøk hvor et sensitivt forsøkssystem blir brakt i kontakt med en interessant forbindelse i en rekke konsentrasjoner, som omfatter konsentrasjoner hvor ingen eller minimal effekt observeres, via høyere konsentrasjoner hvor delvis effekt observert, til metningskonsentrasjoner hvor maksimal effekt observeres. Teoretisk kan slike forsøk med dose-respons-effekt av inhibitorforbindelser, beskrives som en sigmoidal kurve som uttrykker grad av hemming som en funksjon av konsentrasjon. Teoretisk passerer også kurven gjennom et punkt hvor konsentrasjonen er tilstrekkelig til å redusere aktiviteten til kontrollpunkt-enzymet til et nivå som er 50% av differansen mellom minimal og maksimal enzymaktivitet i forsøket. Denne konsentrasjonen er definert som den inhiberende konsentrasjon (50%) eller ICso-verdien. Bestemmelse av ICso-verdier utføres fortrinnsvis ved bruk av konvensjonelle, biokjemiske (acellulære) forsøksmetoder eller celle-baserte forsøksmetoder.
Ved sammenligning av effektiviteten til inhibitorer vises det ofte til komparative ICso-verdier, hvor en høyere IC50 indikerer at testforbindelsen er mindre potent og en lavere IC50 indikerer at forbindelsen er mer potent enn en referanseforbindelse. Forbindelser som er anvendelige ved metoden ifølge foreliggende oppfinnelse, har en IC50-verdi på minst 0.1 nM når den måles ved hjelp av dose-respons-forsøk. Foretrukne forbindelser har en IC50-verdi som er lavere enn 10 uM. Mere foretrukne forbindelser har en ICso-verdi som er lavere enn 500 nM. Enda mere foretrukne forbindelser ifølge foreliggende invention har en ICso-verdi som er lavere enn 250 nM, lavere enn 100 nM eller lavere enn 50 nM.
Forbindelser og farmasøytiske preparater som er egnet for anvendelse i forbindelse med foreliggende oppfinnelse, omfatter de hvor den aktive bestanddel blir administrert i en effektiv mengde for å oppnå den tilsiktede hensikt. Mer spesifikt betyr en "terapeutisk effektiv mengde" en mengde som effektivt hemmer utviklingen av eller lindrer de eksisterende symptomer hos pasienten som behandles. Bestemmelse av den effektive mengde er godt innenfor kompetansen til fagfolk på området, spesielt i lys av den detaljerte beskrivelse som gis her.
En "terapeutisk effektive dose" angir den mengde forbindelse som fører til at den ønskede effekt oppnås. Toksisitet og terapeutisk effektivitet for slike forbindelser kan bestemmes ved standard farmasøytiske prosedyrer ved bruk av cellekulturer eller forsøksdyr, f.eks. for å bestemme LD5o (den dose som er dødelig for 50% av populasjonen) og ED5o (den dose som er terapeutisk effektiv for 50% av populasjonen). Doseforholdet mellom toksiske og terapeutiske effekter er den terapeutiske indeks som uttrykkes som forholdet mellom LD50 og ED50. Forbindelser som har høy terapeutisk indeks (d.v.s. en toksisk dose som er hovedsakelig høyere enn den effektive dose) er foretrukne. Tallmaterialet som oppnås kan anvendes for å bestemme et doseområde for human bruk. Dosen av slike forbindelser ligger fortrinnsvis innen et område av systemiske ("circulating") konsentrasjoner som omfatter ED50, med liten eller ingen toksisitet. Dosen kan variere innen dette området avhengig av den doseform og den administreringsmåte som benyttes.
Det bestemte preparat, administreringsmåte og dose, velges av den enkelte lege på bakgrunn av pasientens tilstand. Dosemengde og doseintervall kan justeres individuelt for å gi plasmanivåer av den aktive forbindelse som er tilstrekkelige for å opprettholde de ønskede terapeutiske effekter.
Farmasøytiske preparater ifølge foreliggende oppfinnelse kan formuleres slik at de omfatter én eller flere cytokiner, lymfokiner, vekstfaktorer eller andre hematopoetiske faktorer, som kan redusere bivirkninger som kan komme av, eller være relatert til, administrering av det farmasøytiske preparatet alene. Cytokiner, lymfokiner, vekstfaktorer eller andre hematopoetiske faktorer som spesielt er anvendelige i farmasøytiske preparater ifølge foreliggende oppfinnelse, omfatter, men er ikke begrenset til, M-CSF, GM-CSF, TNF, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IFN, TNF, G-CSF, Meg-CSF, GM-CSF, trombopoietin, stamcellefaktor, erytropoetin, angiopoietiner som omfatter Ang-1, Ang-2, Ang-4, Ang-Y og/eller det humane angiopoietin-lignende polypeptid, vaskulær endotel-vekstfaktor (VEGF), angiogenin, ben-morfogenetisk protein-1 (BMP-1), BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6, BMP-7, BMP-8, BMP-9, BMP-10, BMP-11, BMP-12, BMP-13, BMP-14, BMP-15, BMP-reseptor IA, BMP-reseptor IB, hjerne-avledet neurotrofisk faktor, ciliær neurotrofisk faktor, ciliær neurotrofisk faktor-reseptor, cytokin-fremkalt nøytrofil kjemotaktisk faktor 1, cytokin-fremkalt nøytrofil kjemotaktisk faktor 2, cytokin-fremkalt nøytrofil kjemotaktisk faktor 2, endotel-cellevekstfaktor, endotelin 1, epidermal vekstfaktor, epitel-avledet nøytrofil attraktant, fibroblast-vekstfaktor (FGF) 4, FGF 5, FGF 6, FGF 7, FGF 8, FGF 8b, FGF 8c, FGF 9, FGF 10, sur FGF, basisk FGF, glial-cellelinje-avledet neurotrofisk faktor-reseptor 1, glial-cellelinje-avledet neurotrofisk faktor-reseptor 2, vekstrelatert protein, vekstrelatert protein, vekstrelatert protein, vekstrelatert protein, heparin-bindende epidermal vekstfaktor, hepatocytt-vekstfaktor, hepatocytt-vekstfaktor-reseptor, insulin-lignende vekstfaktor I, insulin-lignende vekstfaktor-reseptor, insulin-lignende vekstfaktor II, insulin-lignende vekstfaktor-bindingsprotein, keratinocytt-vekstfaktor, leukemihemmende faktor, leukemihemmende faktor-reseptor, nerve-vekstfaktor, nerve-vekstfaktor-reseptor, neurotrofin-3, neurotrofin-4, placenta-vekstfaktor, placenta-vekstfaktor 2, blodplate-avledet endotelcelle-vekstfaktor, blodplate-avledet vekstfaktor, blodplate-avledet vekstfaktor A-kjede, blodplate-avledet vekstfaktor AA, blodplate-avledet vekstfaktor AB, blodplate-avledet vekstfaktor B-kjede, blodplate-avledet vekstfaktor BB, blodplate-avledet vekstfaktor-reseptor, blodplate-avledet vekstfaktor-reseptor, pre-B-cellevekst-stimulerende faktor, stamcellefaktor, stamcellefaktor-reseptor, transformerende vekstfaktor (TGF), TGF, TGF 1, TGF 1.2, TGF 2, TGF 3, TGF 5, latent TGF 1, TGF-bindingsprotein I, TGF-bindingsprotein II, TGF-bindingsprotein III, tumornekrosefaktor-reseptor type I, tumornekrosefaktor-reseptor type II, urokinase-typen av plasminogenaktiverende reseptor, vaskulær endotel-vekstfaktor og kimære proteiner og biologiske eller immunologisk aktive fragmenter derav.
Forbindelsene som er anvendelige ifølge oppfinnelsen kan være konjugerte eller bundet til hjelpegrupper som fremmer hvilken som helst egenskap av forbindelsene som kan være fordelaktige ved metoder for terapeutisk anvendelse. Slike konjugater kan fremme avlevering av forbindelsene til et spesielt interessant anatomisk sete eller område (f.eks. en tumor), muliggjøre forlengede terapeutiske konsentrasjoner av forbindelsene i målceller, endre farmakokinetiske og farmakodynamiske egenskaper til forbindelsene og/eller forbedre den terapeutiske indeks eller sikkerhetsprofilen til forbindelsene. Egnede hjelpegrupper omfatter for eksempel aminosyrer, aligopeptider eller polypeptider, f.eks. antistoffer, så som monoklonale antistoffer og andre syntetiske antistoffer; og naturlige eller syntetiske ligander for reseptorer i målceller eller målvev. Andre egnede tilsetningsmidler omfatter fettsyre- eller lipidgrupper for å fremme biodistribuering eller opptak av forbindelsen i målceller (se f.eks. Bradley et al., Clin. Cancer Res. (2001) 7: 3229.
Den terapeutiske indeks for preparater som omfatter én eller flere forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse, kan forbedres ved å konjugere forbindelsen(e) med antitumor-antistoffer som tidligere beskrevet (for eksempel Pietersz og McKinzie, Immunol, Rev. (1992) 129: 57; Trail et al., Science (1993)261: 212; Rowlinson-Busza og Epenetos, Curr. Opin. Onco. 1992; 4: 1142). Tumor-rettet avlevering av forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse, vil forsterke den terapeutiske fordel ved å minske potensielle ikke-spesifikke toksisiteter som kan være en følge av strålebehandling eller kjemoterapi. I et annet aspekt kan Chkl-inhibitorer og radioisotoper eller kjemoterapeutiske midler, være konjugert til samme antistoff-molekyl. Alternativt kan Chkl-inhibitor-konjugerte tumorspesifikke antistoffer administreres før, i løpet av eller etter administrering av kjemoterapeutisk-konjugert antitumor-antistoff eller radioimmunoterapi.
Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse kan forsterke den terapeutiske fordel av stråle-kjemoterapibehandling, som omfatter induksjonskjemoterapi, primær (neoadjuvant) kjemoterapi og både adjuvans stråleterapi og adjuvans kjemoterapi. I tillegg er ofte stråle- og kjemoterapi indusert som adjuvans til kirurgi ved behandling av kreft. Hnsikten med stråle- og kjemoterapi som adjuvans, er å redusere risikoen for tilbakefall og å øke sykdomsfri overlevelse når den primære tumor er kontrollert.
Kjemoterapi anvendes som behandlingsadjuvans ved kolon-, lunge- og brystkreft, ofte når sykdommen er metastasisk. Adjuvans stråleterapi er indisert for mange sykdommer som omfatter kolon-, lunge- og brystkreft som beskrevet ovenfor. For eksempel blir stråling ofte anvendt både pre- og post-kirurgisk som en del av behandlingsstrategien ved rektalt karsinom. Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse er derfor spesielt anvendelige etter kirurgisk behandling av kreft, i kombinasjon med radio-og/eller kjemoterapi.
En forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse kan også radiosensitivisere en celle. Betegnelsen"radiosensitivisere", slik den brukes her, er definert som et molekyl, fortrinnsvis lavmolekylært, som administreres til mennesker eller andre dyr i en terapeutisk effektiv mengde for å øke sensitiviteten til cellene som skal radiosensitiviseres overfor elektromagnetisk stråling og/eller for å fremme behandling av sykdommer som kan behandles med elektromagnetisk stråling. Sykdommer som kan behandles med elektromagnetisk stråling, omfatter neoplastiske sykdommer, godartede og ondartede tumorer og kreftceller.
Betegnelsene "elektromagnetisk stråling", "stråling" og "stråle", slik de er brukt her, omfatter, men er ikke begrenset til, stråling som har en bølgelengde på 10" til 100 meter. Fordelaktig kan det anvendes elektromagnetisk stråling i form av: gammastråling (10"<2>° til IO"13 m), røntgenstråling (IO"12 til IO'9 m), ultrafiolett lys (10 nm til 400 nm), synlig lys (400 nm til 700 nm), infrarød stråling (700 nm til 1.0 mm) og mikrobølgestråling (1 mm til 30 cm).
I mange av nåtidens kreftbehandlings-protokoller anvendes radiosensitiviseringsmidler som aktiveres av elektromagnetisk stråling, f.eks. røntgenstråler. Eksempler på røntgenaktiverte radiosensitiviseringsmidler omfatter, men er ikke begrenset til, følgende: metronidazol, misonidazol, desmetylmisonidazol, pimonidazol, etanidazol, nimorazol, mitomycin C, RSU 1069, SR 4233, E09, RB 6145, nikotinamid, 5-bromdeoksyuridin (BUdR), 5-jod-deoksyuridin (IUdR), bromdeoksycytidin, fluordeoksyuridin (FUdR), hydroksyurea, cisplatin og terapeutisk effektive analoger og derivater av disse.
Ved fotodynamisk terapi (PDT) ved kreft anvendes synlig lys som strålingsaktivator for det sensitiviserende middel. Eksempler på fotodynamiske radiosensitiviseringsmidler omfatter, men er ikke begrenset til, følgende: hematoporfyrin-derivater, FOTOPHRIN®, benzoporfyrin-derivater, NPe6, tinn-etioporfyrin (SnET2), pheoborbid-a, bakterioklorofyll-a, naftalocyaniner, ftalocyaniner, sink-ftalocyanin og terapeutisk effektive analoger og derivater av disse.
Radiosensitiviseringsmidler kan administreres sammen med en terapeutisk effektiv mengde av én eller flere forbindelser, i tillegg til Chkl-inhibitoren. Slike forbindelser omfatter, men ikke begrenset til, forbindelser som fremmer innføringen av radiosensitiviseringsmidler i målcellene, forbindelser som kontrollerer strømmen av terapeutiske midler, næringsstoffer og/eller oksygen til målcellene, kjemoterapeutiske midler som virker på tumoren med eller uten ytterligere stråling eller andre terapeutisk effektive forbindelser for behandling av kreft eller annen sykdom. Eksempler på ytterligere terapeutiske midler som kan anvendes sammen med radiosensitiviseringsmidler, omfatter, men er ikke begrenset til, 5-fluoruracil (5-FU), leucovorin, oksygen, carbogen, transfusjon av røde blodlegemer, perfluorkarboner (f.eks.. FLUOSOLW®-DA), 2.3-DPG, BW12C, kalsiumkanalblokkere, pentoxifyllin, antiangiogenese-forbindelser, hydralazin og L-BSO.
Kjemoterapeutiske midler som kan anvendes, omfatter, men er ikke begrenset til, alkyleringsmidler, antimetabolitter, hormoner og antagonister derav, radioisotoper, antistoffer, så vel som naturlige produkter og kombinasjoner derav. For eksempel kan en inhibitor-forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse administreres med antibiotika så som doxorubicin og andre antracyklin-analoger, sennepsgass så som cyklofosfamid, pyrimidinanaloger så som 5-fluoruracil, cisplatin, hydroksyurea, taxol og dens naturlige og syntetiske derivater og lignende. I tilfeller med sammensatte tumorer, så som adenokarsinom i bryst, hvor tumorene omfatter gonadotropin-avhengige og gonadotropin-uavhengige celler, kan for eksempel forbindelsen administreres sammen med leuprolid eller goserelin (syntetiske peptidanaloger av LH-RH). Andre antineoplastiske protokoller omfatter anvendelsen av en inhibitor-forbindelse sammen med en annen behandlingsmåte, f.eks. kirurgi eller stråling, her også kalt "supplerende anti-neoplastiske modaliteter". Eksempler på kjemoterapeutiske midler er listet opp i følgende tabell.
Eksempler på kjemoterapeutiske midler som er spesielt anvendelige sammen med radiosensitiviseringsmidler, omfatter for eksempel adriamycin, camptothecin, karboplatin, cisplatin, daunorubicin, doxorubicin, interferon (alfa, beta, gamma), interleukin 2, irinotekan, docetaxel, paclitaxel, topotekan og terapeutisk effektive analoger og derivater av disse.
Når det her vises til behandling, vil fagfolk på området forstå at det omfatter forebygging, så vel som behandling av etablerte sykdommer eller symptomer. Det er videre underforstått at mengden av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse, som det er nødvendig å bruke ved behandling, varierer med type lidelse som behandles og med pasientens alder og tilstand, og bestemmes til syvende og sist av den behandlende lege eller veterinær. Imidlertid er vanlig anvendte doser for behandling av voksne mennesker, i området 0.001 mg/kg til ca. 100 mg/kg pr. dag. Den ønskede dose kan, etter hva som er hensiktsmessig, administreres i en enkelt dose eller som flere doser, administrert i passende intervaller, for eksempel som to, tre, fire eller flere underdoser pr. dag. I praksis er det legen som fastsetter det bestemte doseringsregime som er best egnet for en bestemt pasient, og dosen varierer med den bestemte pasientens alder, vekt og respons. De ovennevnte doser er eksempler på gjennomsnittstilfeller, men det kan være enkelte tilfeller hvor høyere eller lavere doser er en fordel, og slike er innenfor omfanget av foreliggende oppfinnelse.
Preparater ifølge foreliggende oppfinnelse kan administreres på en måte som er vanlig ved behandling av de angitte sykdommer, så som oralt, parenteralt, transmukosalt (f.eks. sublingualt eller via bukkal administrering), topisk, transdermalt, rektalt, via inhalering (f.eks. nasal inhalering eller dyp lungeinhalering). Parenteral administrering omfatter, men er ikke begrenset til, intravenøs, intraarteriell, intraperitoneal, subkutan, intramuskulær, intratekal og intraartikulær. Parenteral administrering kan også gjennomføres ved å anvende en høytrykks-metode som PULVERJECT™.
For oral administrering, som omfatter bukkal administrering, kan preparatet være i form av tabletter eller sugetabletter som blir formulert på vanlig måte. For eksempel kan
tabletter og kapsler for oral administrering inneholde vanlige tilsetningsmidler så som bindemidler (for eksempel sirup, akasiegummi, gelatin, sorbitol, tragant, slim av stivelse eller polyvinylpyrrolidon), fyllemidler (for eksempel laktose, sukker, mikrokrystallinsk cellulose, maisstivelse, kalsiumfosfat eller sorbitol), glattemidler (for eksempel magnesiumstearat, stearinsyre, talkum, polyetylenglykol eller silika), desintegrasjonsmidler (for eksempel potetstivelse eller natriumstivelseglykolat) eller fuktemidler (for eksempel natriumlaurylsulfat). Tablettene kan overtrekkes i henhold til metoder som er velkjente på området.
Alternativt kan forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, innarbeides i orale, flytende preparater som for eksempel vandige eller oljeaktige suspensjoner, løsninger, emulsjoner, siruper eller miksturer. Videre kan preparater som inneholder disse forbindelsene, fremstilles som et tørt produkt som skal blandes med vann eller annet egnet vehikkel før bruk. Slike flytende preparater kan inneholde vanlig additiver, for eksempel oppslemmingsmidler, så som sorbitolsirup, metylcellulose, glukose/sukker-sirup, gelatin, hydroksyetylcellulose, hydroksypropylmetylcellulose, karboksymetylcellulose, aluminiumstearat-gel og hydrogenert spiselig fett; emulgeringsmidler så som lecitin, sorbitan-monooleat eller akasiegummi; ikke-vandige vehikler (som kan omfatte spiselige oljer), så som mandelolje, fraksjonert kokosnøttolje, olje-estere, propylenglykol og etylalkohol; og konserveringsmidler så som metyl- eller propyl-p-hydroksybenzoat og sorbinsyre.
Slike preparater kan også formuleres som suppositorier som f.eks. inneholder vanlige suppositoirum-baser, så som kakaosmør eller andre glycerider. Preparater for inhalering kan typisk foreligge i form av en løsning, suspensjon eller emulsjon som kan administreres som et tørt pulver eller i form av en aerosol ved bruk av et vanlig drivmiddel så som diklordifluormetan eller triklorfluormetan. Typiske topiske og transdermale preparater omfatter vanlige vandige eller ikke-vandige vehikler, så som øyedråper, kremer, salver, lotions og pastaer, eller er i form av et plaster eller en membran som er tilsatt legemiddel.
I tillegg kan preparater ifølge foreliggende oppfinnelse formuleres for parenteral administrering via injeksjon eller kontinuerlig infusjon. Preparater for injeksjon kan være i form av suspensjoner, løsninger eller emulsjoner med oljeaktige eller vandige vehikler og kan inneholde formuleringsmidler, så som oppslemmings-, stabiliserings- og/eller dispergeringsmidler. Alternativt kan den aktive bestanddel være i pulverform som skal blandes med et egnet vehikkel (f.eks. sterilt, pyrogenfritt vann) før bruk.
Et preparat i henhold til foreliggende oppfinnelse, kan også formuleres som et depot-preparat. Slike langtidsvirkende preparater kan administreres ved implantering (for eksempel subkutant eller intramuskulært) eller ved intramuskulær injeksjon. I samsvar med dette kan forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse formuleres med egnede polymer-materialer eller hydrofobe materialer (f.eks. en emulsjon i en akseptabel olje), ionebytterharpikser eller som tungtoppløselige derivater (f.eks. et tungtoppløselig salt).
For veterinær anvendelse administreres en forbindelse med formel (I), (II) eller (III), eller et ikke-toksisk salt derav, i form av et hensiktsmessig akseptabelt preparat i henhold til vanlig veterinær-praksis. Veterinæren kan enkelt bestemme det doseringsregime og den administreringsmåte som er mest hensiktsmessig for ett spesielt dyr.
Spesifikke, ikke-begrensende eksempler på forbindelser med strukturformel (I), (II) og (III) er gitt nedenfor, hvor syntesen ble utført i henhold til metodene som er oppgitt nedenfor.
For å lette oversikten kan en forbindelse som har en bestemt struktur, finnes under det tilsvarende forbindelsesnummer i de følgende tabeller, hvor noen av forbindelsene som er anvendelige ved metoden er oppsummert. For eksempel er strukturen som er kalt forbindelse 1, en forbindelse med strukturformel (IV), hvor R<27> er hydrogen og R<28> er - C(0)NH(CH2)2(2-N-metylpyrrolidyl).
Hetero-ring-substitusjoner:
Tiourea-forbindelser:
Blandet klasse:
Generelt kan forbindelser med strukturformlene (I), (II) og (III), som omfatter de med formlene (IV), (V), (VI) og (VII), fremstilles i henhold til de følgende synteseskjema. For skjemaet som er beskrevet nedenfor, er det anerkjent innen faget at beskyttelsesgrupper kan anvendes når det er nødvendig, i henhold til generelle prinsipper for syntese-kjemi. Disse beskyttelsesgruppene fjernes i syntesens siste trinn under basiske, sure eller hydrogenolytiske betingelser som er opplagte for fagfolk på området. Ved anvendelse av hensiktsmessig manipulering og beskyttelse av hvilke som helst kjemiske funksjonelle grupper, kan syntesen av forbindelser med strukturformlene (I), (II) og (III), ikke spesifikt angitt her, utføres ved hjelp av metoder som er analoge med skjemaene angitt nedenfor.
Dersom ikke annet er angitt, ble alle utgangsmaterialer anskaffet fra kommersielle leverandører og anvendt uten ytterligere rensning. Alle reaksjoner og kromatografi-fraksjoner ble analysert ved hjelp av tynnsjiktskromatografi på 250-mm silikagel-plater, ble visualisert med UV(ultrafiolett)-lys og l2(jod)-farging. Flash-kolonnekromatografi ble utført ved bruk av Biotage 40M silikagel (230-400 mesh). Produkter og mellomprodukter ble renset med flash-kromatografi eller omvendt fase-HPLC.
Forbindelsene med de generelle strukturformler (I) og (II), kan fremstilles ifølge de følgende generelle synteseskjemaer som illustrert nedenfor
Generelt sett blir et arylamin, representert ved formelen Ar-NH2, omsatt med ca. 0.75-1.25 mol-ekvivalenter 4-nitrofenylklorformiat. Reaksjonen blir fortrinnsvis utført under inert atmosfære, for eksempel nitrogen (N2), og blir vanligvis holdt ved lav temperatur (omtrent 0°C). Det resulterende produkt blir behandlet med ca. 0.75-1.25 mol-ekvivalenter av et heteroarylamin, representert ved formelen HetAr-NH2, fortrinnsvis under inert atmosfære ved romtemperatur (omtrent 25°C), hvilket gir en rå arylpyrazin-disubstituert urea-forbindelse.
En mer detaljert forklaring av fremstillingen av forbindelser med standardformlene (I) og (II), kan omfatte for eksempel det følgende generelle
skjema 2.
Trinn ( l ) : TMS- Diazometan- forestring
En avkjølt (omtrent 0°C), omrørt løsning av 4-amino-3-metoksybenzosyre (5.0 g;
30 mmol) i tørr metanol (150 ml), ble langsomt tilsatt trimetylsilyldiazometan (60 ml 2.0 M løsning i heksaner, 120 mmol) i løpet av 1 time. Etter omrøring i 4 timer ble reaksjonsblandingen inndampet ved redusert trykk, oppløst i etylacetat (200 ml), vasket med 10% vandig natriumkarbonat og mettet natriumkloirdløsning, deretter tørket (MgSCU), filtrert og inndampet under vakuum,
hvilket ga den ønskede ester i form av et gråhvitt, fast stoff (94% utbytte).
Trinn ( 2) : p- nitrofenyl- karbamat- prosedvre
En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av metyl-3-amino-4-metoksybenzoat (5.0 g; 27.6 mmol) i tørr diklormetan (175 ml), ble tilsatt pyridin (2.34 ml; 29 mmol), etterfulgt av 4-nitrofenylklorformiat (5.8 g; 29 mmol) under nitrogen(N2)-atmosfære. Etter omrøring i 8 timer ble reaksjonsblandingen vasket med 2N vandig saltsyre (2 x 200 ml), mettet vandig natriumbikarbonat (2 x 200 ml) og mettet natriumkloirdløsning (200 ml), deretter tørket (MgSC<4) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble fortynnet med etylacetat og heksaner (omtrent 800 ml) inntil et presipitat ble dannet. Det faste stoffet ble oppsamlet på en Buchner-trakt med sug og lufttørket, hvilket ga det ønskede karbamat i form av et hvitt, fast stoff (70% utbytte).
Trinn ( 3) : Karbamat- koblings- prosedvre
En omrørt løsning av 4-metoksy-3-(4-nitro-fenoksykarbonylamino)-benzosyre-metylester (30 g; 8.7 mmol) i tørr N-metylpyrrolidin (50 ml), ble tilsatt aminopyrazinet (0.84 g; 8.8 mmol) under N2-atmosfære ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 80°C i 6 timer og fikk deretter avkjøles til romtemperatur. Fortynning med etylacetat (200 ml) og vann (200 ml) ga det ønskede urea i form av et hvitt, fast stoff (54% utbytte).
Trinn ( 4) : Litiumhydroksvd- hvdrolvse- prosedvre
En omrørt løsning av 4-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzosyre-metylester (1.0 g; 3.3 mmol) i metanol (35 ml), ble tilsatt vandig litiumhydroksyd (5 ml av en 2N løsning; 10 mmol) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet ved 67°C i 15 timer og fikk deretter avkjøles til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med vann (100 ml) og vasket med etylacetat (2 x 100 ml). pH i det vandige laget ble regulert til pH 5.2 med 2N vandig saltsyre, og det resulterende utfelte stoff ble oppsamlet på en Buchner-trakt med sug og lufttørket, hvilket ga den ønskede syre i form av et hvitt, fast stoff.
Trinn ( 5) : HBTU- koblings- prosedvre
En omrørt løsning av syren (30 mg; 0.11 mmol) i tørr N-metylpyrrolidinon (2 ml), ble tilsatt 0-benzotrazol-l-yl-N,N,N\N'-tetrametyluronium-heksafluorfbsfat (HBTU; 45 mg; 0.12 mmol), 4-(2-aminioetyl)-morfolin (15.7 ul; 0.12 mmol) og diisopropyletylamin (34 ul; 0.2 mmol) ved romtemperatur under nitrogenatmosfære. Den resulterende løsning ble omrørt i 5 timer, deretter fortynnet med etylacetat (30 ml) og 10% vandig natriumkarbonat (30 ml). Etter kraftig omrøring ved romtemperatur i 15 minutter, ble fellingen oppsamlet på en Buchner-trakt med sug og lufttørket, hvilket ga det ønskede amid i form av et hvitt, fast stoff (59% utbytte).
De følgende forbindelser ble fremstilt ved bruk av den generelle prosedyre som er beskrevet i det ledsagende generelle skjema 2, men hvor R-gruppen i det generelle skjema 2 er erstattet av R-gruppene nedenfor:
Isocvanat- prosedvre:
En omrørt løsning av 2-metoksy-5-metyl-fenylisocyanat (43 ml; 0.3 mmol) i tørr dikloretan (0.4 ml), ble tilsatt 2-aminokinoksalin (43.5 mg; 0.3 mmol) i en reaksjonsflaske under nitrogenatmosfære. Flasken ble lukket og oppvarmet ved 80°C natten over (14 timer). Reaksjonsblandingen ble deretter filtrert og residuet ble vasket med diklormetan, hvilket ga det ønskede urea i form av et hvitt, fast stoff (91% utbytte).
De følgende forbindelser ble fremstilt ved bruk av metoden som er beskrevet i det ledsagende generelle skjema 3, men hvor Ar-gruppen i det generelle skjema 3 er erstattet av Ar-gruppene i tabellen nedenfor:
EKSEMPLER
Eksempel 1
Fremstilling av Forbindelse 115
1 -[2-(l, 1 -difluormetoksy)-fenyl]-3-pyrazin-2-yl-urea 2-(difluormetoksy)fenylisocyanat (1.0 g, 5.4 mmol) og aminopyrazin (0.51 g, 5.4 mmol), ble omsatt i 6 timer i tilbakeløpskokende dimetoksyetan (20 ml). Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur for å utfelle produktet som ble oppsamlet ved filtrering, vasket med etylacetat og tørket under vakuum (765 mg, 50%). 'H-NMR (300 Mhz, d6-DMSO) 8: 10.49 (br s, 1H), 10.26 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.35-8.24 (m, 3H), 7.53-7.00 (m, 4H). Eksempel 2 Fremstilling av Forbindelse 165
1 -(2-metylsulfanylfenyl)-3-pyrazin-2-yl urea
2-(metyltiofenyl)-isocyanat (1.0 g, 6.1 mmol) og aminopyrazin (0.58 g, 6.1 mmol) ble omsatt i 16 timer i tilbakeløpskokende dimetoksyetan (40 ml). Produktet som ble utfelt fra den avkjølte reaksjonsblandingen, ble oppsamlet ved filtrering, vasket med dimetoksyetan og tørket under vakuum (715 mg, 45%). 'H-NMR (300 MHz, d6-DMSO) 8: 10.35 (br s, 1H), 10.29 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.09 (d, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.29 (t, 1H), 7.10 (t, 1H), 2.43 (s, 3H). <13>C NMR (75 Mhz, d6-DMSO) 8: 151.8, 149.2,140.5,137.5,137.3,135.2,130.1,127.1,126.9,123.7,121.4,16.5.
Eksempel 3
Fremstilling av Forbindelse 159
l-(2-metoksy-5-nitrofenyl)-3-pyrazin-2-yl-urea
En blanding av 2-metoksy-5-nitrofenyl-isocyanat (5.0 g, 25 mmol) og aminopyrazin (2.5 g, 26 mmol) i tetrahydrofuran (THF, 250 ml), ble omrørt ved tilbakeløp i 24 timer. Produktet som ble utfelt fra den avkjølte reaksjonsblandingen, ble oppsamlet ved filtrering, vasket med etylacetat og tørket under vakuum (4.3 g, 57%). 'H-NMR (300 MHz, dé-DMSO) (blanding av rotamerer) 8: 10.38 (br s, 1H), 10.27 (s, 1H), 9.39, 8.88 (2 singletter, 1H), 9.10 (d, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.26 (d, 1H), 7.98-8.25 (m, 1H), 7.97-7.84 (m, 1H), 4.05. 4.03 (2 singletter, forhold 77 : 28. 3H).
Eksempel 4
Fremstilling av Forbindelse 14
l-(5-amino-2-metoksyfenyl)-3-pyrazin-2-yl-urea
En løsning av (2-metoksy-5-nitrofenyl)-3-pyrazin-2-yl-urea (Forbindelse 159, Eksempel 3) (16.9 g, 55 mmol) i dimetylformamid (DMF, 320 ml), ble ristet under H2 i nærvær av palladium på karbon(Pd/C)-katalysator (1.6 g, 30% Pd) ved 80°C i 12 timer. Ytterligere en porsjon katalysator ble tilsatt (1.6 g), og ristingen ble fortsatt i ytterligere 8 timer ved samme temperatur. Løsningen ble filtrert gjennom en pute av celite ved bruk av ytterligere 200 ml DMF. Filtratet ble inndampet under vakuum og residuet ble utgnidd med metanol (100 ml). Det faste stoffet ble oppsamlet, omrørt i kokende metanol og tilstedeværende faste stoffer (1.8 g) ble filtrert fra og kastet. Filtratet ble avkjølt ved 4°C natten over. Faste stoffer (1.4 g) ble fjernet ved filtrering og filtratet ble inndampet under vakuum til et gyldenbrunt, fast stoff (2.6 g). Det rå, faste produktet ble utgnidd med THF (200 ml), oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum, hvilket ga produktet i form av et gyldenbrunt, fast stoff (1.85 g, 13%). 'H-NMR (300 Mhz, d6-DMSO) 8:10.10 (s, 1H), 9.94 (br s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.75 (d, 1H), 6.21 (d, 1H), 4.70 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), <13>C NMR (75 Mhz, d6-DMSO) 8: 151.4,149.4,142.6, 140.9,139.8,137.2,135.2,128.7,112.8,107.7,106.0, 56.8.
Eksempel 5
Fremstilling av Forbindelse 48
N-[4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido) fenyl]-succinamsyre
En løsning av l-(5-amino-2-metoksyfenyl-3-pyrazin-2-yl-urea (Forbindelse 14, Eksempel 4) (260 mg, 1 mmol) og ravsyreanhydrid (131 mg, 1.3 mmol) i tørr pyridin (10 ml), ble omrørt i 16 timer ved romtemperatur. Det resulterende faste stoff ble oppsamlet ved filtrering og utgnidd med kloroform og tørket under vakuum, hvilket ga det off-white produkt (175 mg, 50%). 'H-NMR (300 Mhz, dVDMSO) 8:10.15 (s, 1H), 10.05 (s, 1H), 9.87 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.33 (s, 2H), 8.24 (s, 1H), 7.42 (dd, J = 8.8,2.2 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 2.54 (br s, 4H).
Eksempel 6
Fremstilling av Forbindelse 36
(S)-l-(2.2.2-trifluoretanoyl)pyrrolidin-2 karboksylsyre[4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)fenyl] -amid
En løsning av l-(5-amino-metoksyfenyl)-3-pyrazin-2-yl-urea (Forbindelse 14, Eksempel 4) (105 mg, 0.4 mmol) i tørr pyridin (2 ml) ved 0°C, ble behandlet med en løsning av N-trifluoracetyl-(S)-prolylklorid (0.1 M i diklormetan, 4.5 ml, 0.45 mmol) og omrørt i 2 timer ved romtemperatur. Reaksjonen ble stanset med 1 N HC1 (50 ml) og ekstrahert med etylacetat (3 x 50 ml). De samlede organiske lag ble vasket med 1 N HC1 (2 x 20 ml), vann (20 ml), mettet natriumkloridløsning (20 ml), tørket over natriumsulfat og inndampet under vakuum til et beige, fast stoff (60 mg). Omkrystallisering fra acetonitril ga det faste sluttproduktet (30 mg, 17%). 'H-NMR (300 Mhz, d6-DMSO) 8: (10.16-10.06, m, 3H), 8.90 (s, 1H), 8.36-8.30 (m, 2H), 8.25 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.42 (dd, J = 8.8,2.6 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.57 (dd, J = 8.5,4.4 Hz, 1 H), 3.88 (s, 3H), 3.73 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 2.27-2.21 (m, 1H), 2.06-1.90 (m, 3H). LRMS (ESI, positiv) m/e 453.1 (M+l).
Eksempel 7
Fremstilling av Forbindelse 16
(S)-pyrrolidin-2-karboksylsyre[4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-fenyl]-amid
En suspensjon av (S)-l-(2.2.2-trifluoretanoyl)-pyrrolidin-2-karboksylsyre[4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-fenyl]-amid (Forbindelse 36, Eksempel 6) (22 mg, 0.05 mmol) i en blanding av metanol (MeOH, 5 ml) og vann (omtrent 0.25 ml), ble behandlet med KOH (100 mg, stort overskudd). Innen 10 minutter var alle bestanddeler oppløst. Reaksjonsblandingen ble behandlet med vann (20 ml) og ekstrahert med etylacetat (2 x 20 ml). De organiske lag ble samlet og vasket med vann (10 ml) og mettet natriumkloirdløsning (10 ml), tørket med natriumsulfat og inndampet til et gyldenbrunt, faststoff(13mg,75%).
'H-NMR (300 MHz, de-DMSO) 8: 10.13 (s, 1H), 10.03 (s, 1H), 9.85 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.38-8.28 (m, 2H), 8.25 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 8.8,2.6 Hz), 6.98 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H, 3.69 (dd, J = 8.7, 5.6 Hz, 1H), 2.94-2.87 (m, 2H), 2.10-1.97 (m, 1H), 1.81-1.60 (m, 3H). LRMS (ESI, positiv) m/e 357.1 (M + 1).
Eksempel 8
Fremstilling av Forbindelse 42
N-[4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido) fenyl]-metansulfonamid
En løsning av l-5-amino-2-metoksyfenyl)-3-pyrazin-2-yl-urea (Forbindelse 14, Eksempel 4) (260 mg, 1 mmol) i tørr pyridin (15 ml), ble behandlet med metansulfonylklorid (0.08 ml, 1 mmol) og omrørt i 16 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble inndampet under vakuum og det faste residuet ble utgnidd med etanol, oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum, hvilket ga produktet (205 mg, 61%). 'H-NMR (300 Mhz, d6-DMSO) 8:10.16 (s, 1H), 10.07 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.35 (s, 1 H), 8.27 (s, 1H), 8.19 (d, J = 2. 2 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.91 (dd, J = 8.7,2.4 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 2.91 (s, 3H).
Eksempel 9
Fremstilling av Forbindelse 65
1 -(2-metoksy-4-nitrofenyl)-3 -pyrazin-2-yl-urea
En blanding av 2-metoksy-4-nitrofenyl-isocyanat (15.0 g, 77 mmol) og aminopyrazin (7.35 g, 77 mmol) i THF (600 ml), ble omrørt ved tilbakeløp i 24 timer. Produktet som ble utfelt fra den avkjølte reaksjonsblandingen, ble oppsamlet ved filtrering, vasket med etylacetat, utgnidd med varm etanol og tørket under vakuum (16.3 g, 73%). <*>H-NMR (300 Mhz, d6-DMSO) 8: 10.50 (br s, 1H), 10.42 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.48 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.32 (d, 1H), 7.95 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 4.08 (s, 3H).
Eksempel 10
Fremstilling av Forbindelse 32
1 -(4-amino-2-metoksyfenyl)-3 -p yrazin-2-yl-urea
En løsning av (2-metoksy-4-nitrofenyl)-3-pyrazin-2-yl-urea (Forbindelse 65, Eksempel 9) (7.9 g, 27 mmol) i DMF (300 ml), ble ristet under H2 i nærvær av Pd/C-katalysator (1.6 g, 10% Pd) ved 110°C i 4 timer. Blandingen ble filtrert gjennom en pute av celite ved bruk av ytterligere 200 ml DMF. Filtratet ble inndampet under vakuum og residuet ble omkrystallisert fra etanol (med et varmfiltreirngs-trinn), hvilket ga et lysegrått produkt (2.9 g, 41%). <*>H-NMR (300 MHz, d6-DMSO) 8: 9.83 (s, 1H), 9.50 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.19 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8. 5 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.13 (dd, J = 8. 5, 2.0 Hz, 1H), 4.92 (s, 2H), 3.79 (s, 3H). <13>C NMR (75 Mhz, d6-DMSO) 8: 151.6,150.0,149.6,145.2,140.9,136.9,135.1,121.6,116.8,105.5, 98.0, 55.4.
Eksempel 11
Fremstilling av Forbindelse 3
C-dimetylamino-N-[3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)fenyl]-acetamid
En løsning av N,N-dimetylglycin (124 mg, 1.2 mmol) og trietylamin (0.33 ml, 2.4 mmol) i tørr acetonitril (5 ml) ved 0°C, ble behandlet dråpevis med isobutylklorformiat (0.16 ml, 1.2 mmol) og omrørt i 15 min. Denne blandingen ble behandlet dråpevis med en løsning av l-(4-amino-2-metoksyfenyl)-3-pyrazin-2-yl-urea (Forbindelse 32, Eksempel 10)
(100 mg, 0.4 mmol) i dimetylsulfoksyd (DMSO, 1 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer, behandlet med vann (20 ml) og ekstrahert med etylacetat (2 x 15 ml). De samlede organiske lag ble vasket med vann (10 ml) og mettet natriumkloirdløsning (10 ml), tørket over natriumsulfat og inndampet under vakuum. Residuet ble oppløst i DMSO (1 ml) og renset med HPLC (YMC 20 x 50 mm Cl 8 CombiPrep-kolonne, 20 ml/min, 2-50% CH3CN/vann i 6 min, alle løsningsmidler inneholdt 0.05% trifluoreddiksyre (TFA), 0.35 ml injeksjoner, detektor ved 254 nm, detektor-bølgelengde ("path length") 0.2 mm). Produktholdige fraksjoner ble inndampet under vakuum, hvilket ga produktet i form av trifluoracetat(TFA)-saltet (24 mg, 17%).
Eksempel 12
Fremstilling av Forbindelse 8
3-klor-N-[3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido) fenylj-propionamid
En løsning av l-(4-amino-2-metoksyfenyl)-3-pyrazin-2-yl-urea (Forbindelse 32, Eksempel 10) (259 mg, 1 mmol) i pyridin (3 ml) ved 0°C, ble behandlet med kloracetylklorid (0.29 ml, 3 mmol). Suspensjonen ble oppvarmet ved 80°C inntil det meste av faste stoffer var oppløst. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og produktet ble utfelt med eter (10 ml). Dette råproduktet ble anvendt uten rensning i videre reaksjoner, men en porsjon (30 mg) ble renset med HPLC (Luna 10 x 250 mm Cl 8 kolonne, 4.7 ml/min, 2-80% CHsCN/vann i 15 min, alle løsningsmidler inneholdt 0.05% TF A, 0.25 ml injeksjoner, detektor ved 254 nm, detektor-bølgelengde 0.3 mm). Produktholdige fraksjoner ble inndampet under vakuum, hvilket ga produktet.
'H-NMR (300 Mhz, d6-DMSO) 8: 10.00 (s, 2H), 9.94 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.32 (dd, J = 2.5,1.5 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.07 (dd, J = 8.7,2.1 Hz, 1H), 3.90-3.80 (m, 5H), 2.80 (t, J= 6.2 Hz, 2H), LRMS
(ESI, positiv) m/e 350, 352 (M + 1).
Eksempel 13
Fremstilling av Forbindelse 4
(Cykloheksyl-metyl-amino)-N-[3-metoksy-4 (3-pyrazin-2-yl-ureido) fenyl] -propionamid
En blanding av 3-klor-N-[3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)fenyl]-propionamid (Forbindelse 8, Eksempel 12) og N-cykloheksyl-metylamin (0.5 ml, stort overskudd), ble oppvarmet ved 80°C i 1 time og avkjølt til romtemperatur. Råproduktet ble utfelt fra eter (10 ml), oppsamlet ved filtrering og oppløst i DMSO (0.5 ml). Alikvoter (omtrent 0.25 ml) ble renset med HPLC(Luna 10 x 250 mm Cl8 kolonne, 4.7 ml/min, 2-80% CH3CN/vann i 15 min, alle løsningsmidler inneholdt 0.05% trifluoreddiksyre, detektor ved 254 nm, detektor-bølgelengde 0.3 mm). Produktholdige fraksjoner ble inndampet under vakuum, hvilket ga produktet i form av TFA-saltet (4.7 mg, 11%). 'H-NMR (300 Mhz, de-DMSO) 8: 10.18 (s, 1H), 10.07 (s, 1H), 9.98 (s, 1H), 9.04 (br s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.33 (dd, J = 2.6, 1.5 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.09 (dd, J = 8.7,2.1 Hz, 1H), 3.90-3.83 (m, 1H), 3.30-3.16 (m, 2H), 2.81 (t,
J = 6.7 Hz, 1H), 2.74 (d, J= 5.0 Hz, 2H), 2.03-1.89 (m, 2H), 1.89-1.75 (m, 2H), 1.70-1.53 (m, 1H), 1.461.10 (m, 5H). LRMS (ESU, positiv) m/e 427.2 (M + 1).
Eksempel 14
Fremstilling av Forbindelse 2
3-cyklopentylamino-N-[3-metoksy-4-(3-pyrazi. n -2-yl-ureido) fenyl]-propionamid
En blanding av 3-klor-N-[3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)fenyl]-propionamid (Forbindelse 8, Eksempel 12) og cyklopentylamin (0.5 ml, stort overskudd) ble oppvarmet ved 80°C i 1 time og avkjølt til romtemperatur. Produktet ble utfelt fra eter (10 ml), oppsamlet ved filtrering, vasket med eter og tørket under vakuum (24 mg, 60%). 'H-NMR (300 Mhz, d6-DMSO) 8: 10.14 (s, 1H), 10.03 (s, 1H), 9.93 (s, 1H), 8.87 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.31 (dd, J = 2.6,1.5 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 2. Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.04 (dd, J = 8.7,2.1 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.05 (kvintett, J = 6.3 Hz, 1H), 2.80 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.44 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.80-1.67 (m, 2H), 1.65-1.56 (m, 2H), 1.53-142 (m, 2H), 1.37-1.27 (m, 2H). LRMS (ESI, postitiv) m/e 399.1 (M + 1).
Forbindelse 166:
3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzosyre
Trinn 1: Metyl-3-amino-4-metoksybenzoat. En avkjølt (omtrent 0°C), omrørt løsning av 4-amino-3-metoksybenzosyre (5.0 g, 30 mmol) i tørr metanol (150 ml), ble langsomt tilsatt trimetylsilyldiazometan (60 ml 2M løsning i heksaner, 120 mmol) i løpet av 1 time. Etter omrøring i 4 timer ble reaksjonsblandingen inndampet ved redusert trykk, oppløst i etylacetat (200 ml), vasket med 10% vandig natriumkarbonat og mettet natriumkloirdløsning, deretter tørket (MgSC<4), filtrert og inndampet under vakuum, hvilket ga den ønskede ester i form av et gråhvitt, fast stoff (94% utbytte).
Trinn 2: 4-metoksy-3-(4-nitro-fenoksykarbonylamino)-benzosyre-metylester. En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av metyl-3-amino-4-metoksybenzoat (5.0 g, 27.6 mmol) i tørr diklormetan (90 ml), ble tilsatt pyridin (2.34 ml, 29 mmol), etterfulgt av 4-nitrofenylklorformiat (5.8 g, 29 mmol) under nitrogenatmosfære. Etter omrøring i 1 time ble reaksjonsblandingen fortynnet til 200 ml med diklormetan og vasket med 2N vandig saltsyre (2 x 200 ml), mettet vandig natriumbikarbonat (2 x 200 ml) og mettet natriumkloirdløsning (200 ml), deretter tørket (MgSOit) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet til et hvitt, fast stoff som var det ønskede karbamat (98% utbytte).
Trinn 3: 3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzosyre-metylester. En omrørt løsning av 4-metoksy-3-(4-nitro-fenoksykarbonylamino)-benzosyre-metylester (10.64 g, 30.7 mmol) i tørr N-metylpyrrolidinon (31 ml) ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt aminopyrazin (2.92 g, 30.7 mmol) og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 85°C. Etter 6 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur og utgnidd med etylacetat (200 ml). Fellingen som ble dannet ble frafiltrert, skyllet med etylacetat og tørket, hvilket ga urea-forbindelsen i form av et gyldenbrunt, fast stoff (66 % utbytte).
Trinn 4: 3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzosyre. En omrørt suspensjon av 3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzosyre-metylester (6.07 g, 20 mmol) i 200 ml 3:1 MeOPLEfcO ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt litiumhydroksydmonohydrat (8.4 g, 200 mmol) og reaksjonsblandingen ble oppvarmet ved 65°C natten over. Reaksjonsblandingen ble deretter avkjølt til romtemperatur og mesteparten av metanolen ble fjernet ved rotasjonsinndampning. Den gjenværende suspensjon ble nøytralisert til pH ca.4 med konsentrert HC1. Den dannede utfelling ble isolert ved filtrering og skylling med H2O og deretter tørking under høyvakuum, hvilket ga den ønskede syre i form av et hvitt, faststoff(5.34g,93%).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.89 (br s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 3.91 (s, 3H)
Forbindelse 167:
N-butyl-3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
En omrørt suspensjon av forbindelse lxx (32 mg, 0.11 mmol) i 1 ml NMP ved romtemperatur i en lukket reaksjonsflaske, ble tilsatt HBTU (0.4 M i NMP, 300 ul, 0.12 mmol) og suspensjonen ble omrørt i 15 minutter. N-butyl amin (0.4 M i NMP, 300 ul, 0.12 mmol) ble deretter tilsatt, etterfulgt av DIEA (38 ul, 0.22 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over og ble deretter fortynnet med EtOAc (20 ml) og 10% Na2C03 (20 ml) og omrørt raskt i 5 minutter. Presipitatet som ble dannet ble isolert ved filtrering og skylling med H20 og EtOAc. Etter lufttørking ble amidet isolert i form av et gråhvitt, fast stoff (12.2 mg, 32 %).
<l>H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.92 (br s, 1H), 8.37 (br s, 2H), 8.23 (d, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.23 (q, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.35 (m, 2H), 0.92
(t, 3H)
LRMS (apci, positiv) m/e 344.1 (M+l)
Forbindelse 168:
N-benzyl-3 -metoksy-4-(3 -pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av benzylamin (39% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.96 (t, 1H), 8. 91 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.44 (m, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.5 (m, 4H), 7.23 (m, 1H), 4.46 (d, 2H), 3.97 (s, 3H).
LRMS (apci, positiv) m/e 378.1 (M+l).
Forbindelse 169:
3 -metoksy-N-fenetyl-4-(3 -pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av fenetylamin (49% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.92 (br s, 1H), 8.51 (t, 1H), 8.36 (br s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.22 (d, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.36-7.20 (m, 5H), 3.98 (s, 3H), 3.46 (m, 2H), 2.84 (dd, 2H).
LRMS (apci, positiv) m/e 392.1 (M+l).
Forbindelse 170:
3-metoksy-N-(3-fenyl-propyl)-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av fenpropylamin (71% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.92 (br s, 1H), 8.40 (t, 1H), 8.36 (br s, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.32-7.18 (m, 5H), 3.97 (s, 3H), 3.25 (m, 2H), 2.61 (m, 2H), 1.82 (m,2H).
LRMS (apci, positiv) m/e 406.1 (M+l).
Forbindelse 171:
N-(2-benzensulfonyl-etyl)-3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av 2-benzensulfonyl-etylamin (57% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.90 (br s, 1H), 8.43 (br m, 1H), 8.35 (br s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.22 (d, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.72 (m, 1H), 7.63 (m, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.33
(d, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.59 (m, 2H), 3.55 (m, 2H).
LRMS (apci, positiv) m/e 456.0 (M+l).
Forbindelse 172 :
N-(4-Jod-benzyl)-3 -metoksy-4-(3 -pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av 4-jod-benzylamin (66% utbytte).
<*>H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.97 (t, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.26 (d, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.69 (d, 2H), 7.56 (m, 2H), 7.16 (d, 2H), 4.41 (d, 2H), 3.97 (s, 3H). LRMS (apci, positiv) m/e 504.0 (M+l).
Forbindelse 173 :
3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-N-(2-pyridin-2-yl-etyl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av 2-pyridin-2-yl-etylamin (57% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.90 (br s, 1H), 8.51 (br m, 2H), 8. 36 (s, 1H), 8.22 (m, 2H), 7.71 (t, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.21 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.60 (m, 2H), 3.00 (dd, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 393.3 (M+l).
Forbindelse 174:
3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-N-(2-pyridin-4-yl-etyl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av 2-pyridin-4-yl-etylamin (45% utbytte). •H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.93 (s, 1H), 8.63 (d, 2H), 8.51 (t, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.24 (d, 1H), 7.60 (d, 2H), 7.43 (m, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.58 (m, 2H), 3.01 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 393.1 (M+l).
Forbindelse 175:
N-(lH-benzoimidazol-2-ylmetyl)-3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av C-(1H-benzoimidazol-2-yl)-metylamin (53% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.90 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.32 (d, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.61 (m, 3H), 7.47 (m, 2H), 7.12 (m, 2H), 4.66 (s, 2H), 3.98 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 418.2 (M+l).
Forbindelse 176:
N-[2-(lH-indol-3-yl)-etyl]-3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzarnid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av tryptamin (74% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.92 (s, 1H), 8.55 (br t, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.24 (d, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 6.98 (dd, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.56 (m, 2H), 2.96 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 431.2 (M+l).
Forbindelse 177:
3-metoksy-N-[3-(metyl-fenyl-amino)-propyl]-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av Nl-metyl-Nl-fenyl-propan-l,3-diamin (68% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.89 (s, 1H), 8.41 (br s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.23 (d, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.16 (m, 2H), 6.70 (d, 2H), 6.59 (dd, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.38 (m, 2H), 3.30 (m, 2H), 2.87 (s, 3H), 1.77 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 435.2 (M+l).
Forbindelse 178:
N-(l-benzyl-pyrrolidin-3-yl)-3-metoksy-4-(3-pyrazm-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av 3-amino-l-benzyl pyrrolidin (62% utbytte).
<l>H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.88 (br s, 1H), 8.36 (br m, 2H), 8.24 (d, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.32 (m, 4H), 7.22 (m, 1H), 4.39 (br m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.59 (s, 2H), 2.79 (m, 1H), 2.62 (m, 1H), 2.40 (m, 1H), 2.16 (m, 1H), 1.81 (m, 2H). LRMS (esi, positiv) m/e 447.2 (M+l).
Forbindelse 179:
N-(3-(R)-l-beriz<y>l-p<y>rrolidin-3-<y>l)-3-metoksy-4-(3-p<y>razin-2-<y>l-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av 3-(R)-amino-l-benzylpyrrolidin (57% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.83 (br s, 1H), 8.36-8.24 (m, 3H), 8.15 (m, 1H), 7.48 (m, 2H), 7.32 (m, 4H), 7.22 (m, 1H), 4.37 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.59 (s, 2H), 2.78 (m, 1H), 2.63 (m, 1H), 2.41 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 1.80 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 447.1 (M+l).
Forbindelse 180:
N-(3-(S)-l-benzyl-pyrrolidin-3-yl)-3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av 3-(S)-amino-l-benzylpyrrolidin (57% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.85 (s, 1H), 8.34 (br s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.50 (m, 2H), 7.32 (m, 4H), 7.22 (m, 1H), 4.39 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.59 (s, 2H), 2.79 (m, 1H), 2.62 (m, 1H), 2.41 (m, 1H), 2.16 (m, 1H), 1.81 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 447.1 (M+l).
Forbindelse 181:
N-(2-dimetylamino-etyl)-3-metyloksy-N-metyl-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av N,N,N'-trimetyl-etan-l,2-diamin (57% utbytte). •H-NMR (400 MHz, D20) 8 8.17 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.76 (d, 1H), 6.92 (m, 2H), 3.79 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.36 (m, 2H), 2.97 (s, 3H), 2.88 (s, 6H).
LRMS (esi, positiv) m/e 373.2 (M+l).
Forbindelse 182 :
3-metoksy-N-(3-metylamino-propyl)-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av Nl-metyl-propan-l,3-diamin (25% utbytte). •H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.93 (s, 1H), 8.38-8.25 (m, 4H), 7.59 (d, 1H), 7.52 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.92 (m, 2H), 2.92 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 1.82 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 359.1 (M+l).
Forbindelse 183:
N-(3-dimetylamino-propyl)-3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av N,N-dimetylpropyldiamin (81% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.93 (s, 1H), 8.56 (t, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 4.10 (m, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.35 (s, 6H), 3.05 (m, 2H), 1.84 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 373.1 (M+l).
Forbindelse 184:
N-(3-dimetylamino-propyl)-3-metoksy-N-metyl-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av N,N,N'-trimetylpropyldiamin (88% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3/CD3OD) 8 8.60 (s, 1H), 8.33 (d, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.01 (m, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.59 (m, 2H), 2.78 (m, 2H), 2.59 (s, 6H), 2.22 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 387.1 (M+l).
Forbindelse 185:
3-metoksy-N-(3-morfolin-4-yl-propyl)-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av 3-morfolin-4-yl-propylamin (53% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.92 (s, 1H), 8.57 (t, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.28 (d, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.61 (m, 2H), 3.42 (m, 2H), 3.32 (m, 4H), 3.10 (m, 4H), 1.90 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 415.1 (M+l).
Forbindelse 186:
3-metoksy-N-[3-(4-metyl-piperazin-l-yl)-propyl]-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-berizamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av 3-(4-metyl-piperazin-l-yl)-propylamin (63% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.92 (s, 1H), 8.41 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.24 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.31 (m, 11H), 2.70 (m, 2H), 2.41 (m, 2H), 1.72 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 428.1 (M+l).
Forbindelse 187:
{2-[3-metoksy-4-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzoylamino]-etyl}-tirmetyl-ammoniumklorid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 167, ved bruk av 2-N,N,N-trimetylammoniumetylamin (46% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.92 (s, 1H), 8.77 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.30 (d, 1H), 8. 24 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.51 (d, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.70 (m, 2H), 3.50 (m, 2H), 3.15 (s, 9H). LRMS (esi, positiv) m/e 373.1 (M+).
Forbindelse 188:
4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzosyre
Trinn 1: 4-metoksy-3-(4-nitro-fenoksykarbonylamino)-benzosyre-metylester. En omrørt, avkjølt (0°C) løsning av metyl-3-amino-4-metoksybenzoat (5.0 g; 27.6 mmol) i metylenklorid (100 ml), ble tilsatt pyridin (2.4 ml; 29 mmol), etterfulgt av 4-nitrofenylklorformiat (5.8 g; 29 mmol). Etter omrøring i 8 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med metylenklorid (100 ml), vasket med IN saltsyre (2 x 125 ml), 10% vandig natriumkarbonat (2 x 125 ml), mettet natriumkloirdløsning (1 x 125 ml), deretter tørket (MgSC<4) og filtrert. Det filtrerte materialet ble inndampet under redusert trykk. Residuet ble tatt opp i etylacetat (100 ml), etterfulgt av heksaner (700 ml). Presipitatet som ble dannet ble filtrert, hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (80% utbytte).
Trinn 2: 4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzosyre-metylester. En omrørt løsning av karbamatet (1.0 g; 2.9 mmol) i N-metylpyrrolidinon (5 ml), ble tilsatt aminopyrazin (285 mg; 3.0 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 85°C og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til romtemperatur og ble deretter fortynnet med etylacetat (50 ml) og vann (50 ml). Presipitatet som ble dannet ble filtrert og tørket under redusert trykk, hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (55% utbytte).
Trinn 3:4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzosyre. En omrørt løsning av 4-metoksy-3-(3pyrazin-2-yl-ureido)-benzosyre-metylester (1.0 g; 3.3 mmol) i metanol (25 ml), ble tilsatt litiumhydroksyd (5 ml av en 2M vandig løsning). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 60°C og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til romtemperatur og pH ble regulert til 5.5 med saltsyre (IN). Presipitatet som ble dannet ble filtrert og tørket under redusert trykk, hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (58% utbytte).
Forbindelse 189:
N-butyl-4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
En omrørt løsning av 4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzosyre (32 mg; 0.11 mmol) i N-metylpyrrolidinon (1 ml), ble tilsatt 0-benzotrazol-l-yl-N,N,N',N'-tetrametyl-uromumheksalfuorfosfat (HBTU; 45 mg; 0.12 mmol), butylamin (12 ul, 0.12 mmol) og diisopropyletylamin (35 ul; 0.20 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med etylacetat (20 ml) og 10% vandig natriumkarbonat (20 ml) og omrørt i 5 minutter. Presipitatet som ble dannet ble filtrert og tørket under redusert trykk, hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (49% utbytte).
■H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.90 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.23 (m, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.22 (m, 2H), 1.50 (m, 2H), 1.33 (m, 2H), 0.90 (t, 3H).
LRMS (apci, positiv) m/e 344.1 (M+l).
Forbindelse 190:
N-benzyl-4-metoksy-3 -(3 -pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av benzylamin (70% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.92 (s, 1H), 8.90 (br s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.33 (m, 4H), 7.23 (m, 1H), 7.12 (d, 1H), 4.44 (s, 2H), 3.96 (s,
3H).
LRMS (apci positiv) m/e 378.1 (M+l).
Forbindelse 191:
4-metoksy-N-fenetyl-3 -(3 -pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av fenetylamin (68% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.92 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.40 (m, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.33-7.18 (m, 5H), 7.08 (d, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.44 (m, 2H), 2.82 (m,2H).
LRMS (apci positiv) m/e 392.1 (M+l).
Forbindelse 192:
4-metoksy-N-(3 -fenyl-propyl)-3 -(3 -pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av fenpropylamin (65% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.92 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.32-7.22 (m, 5H), 7.18 (m, 1H), 7.10 (d, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.24 (m, 2H), 2.62 (dd, 2H), 1.82 (m, 2H).
LRMS (apci positiv) m/e 406.1 (M+l).
Forbindelse 193:
N-(2-benzensulfonyl-etyl)-4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av 2-benzensulfonyl-etylamin (42% utbytte). •H-NMR (400 MHz, dé-DMSO) 8 8.90 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.38 (br s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.94 (d, 2H), 7.74 (m, 1H), 7.65 (d, 2H), 7.38 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.57 (m, 2H), 3.51 (m, 2H).
LRMS (apci positiv) m/e 456.0 (M+l).
Forbindelse 194:
4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-N-(2-pyridin-2-yl-etyl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av 2-pyridin-2-yl-etylamin (16% utbytte)
<l>H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.90 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.52 (d, 1H), 8.41 (m, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.72 (m, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.22 (m, 1H), 7.08 (d, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.59 (m, 2H), 2.98 (m, 2H).
LRMS (esi positiv) m/e 415.2 (M+l).
Forbindelse 195:
4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-N-(2-pyridin-4-yl-etyl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av 2-pyridin-4-yl-etylamin (41% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.91 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.46 (d, 2H), 8.40 (m, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.26 (d, 2H), 7.08 (d, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.50 (m, 2H), 2.84 (m, 2H).
LRMS (esi positiv) m/e 415.2 (M+l).
Forbindelse 196:
N-(lH-benzoimidazol-2-ylmetyl)-4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av C-(1H-benzoimidazol-2-yl)-metylamin (26% utbytte). •H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.99 (t, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.15 (m, 3H), 4.65 (d, 2H), 3.97 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 418 1 (M+l).
Forbindelse 197:
N-[2-(lH-indol-3-yl)-etyl]-4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av tryptamin (51% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.92 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.43 (t, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.11 (d, 1H), 7.07 (m, 1H), 6.97 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.54 (m, 2H), 2.95 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 431.1 (M+l).
Forbindelse 198:
4-metoksy-N-[3-(metyl-fenyl-amino)-propyl]-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av N-metyl-N-fenylpropyldiamin (81% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.92 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.37 (m, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.14 (m, 3H), 6.70 (d, 2H), 6.58 (t, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.37 (m, 2H), 3.25 (m, 2H), 2.86 (s, 3H), 1.77 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 435.2 (M+l).
Forbindelse 199:
N-(l-benzyl-pyrrolidin-3 -yl)-4-metoksy-3 -(3 -pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av 3-amino-l-benzylpyrrolidin (48% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 5 8.90 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.30 (d, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.32 (m, 4H), 7.22 (m, 1H), 7.15 (d, 1H), 4.37 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.59 (s, 2H), 2.79 (m, 1H), 2.60 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 2.14 (m, 1H), 1.80 (m, 2H). LRMS (esi, positiv) m/e 447.2 (M+l).
Forbindelse 200:
N-(2-dimetylamino-etyl)-4-metoksy-N-metyl-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av N,N,N'-trimetyletyldiamin (93% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 9.39 (br s, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.33 (d, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.16-7.09 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.76 (m, 2H), 3.37 (m, 2H), 2.99 (s, 3H), 2.85 (br s, 6H).
LRMS (esi, positiv) m/e 373.2 (M+l).
Forbindelse 201:
4-metoksy-N-(3-metylamino-propyl)-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzarnid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av N-metylpropyldiamin (15% utbytte). •H-NMR (400 MHz, D20) 8 7.98 (m, 2H), 7.91 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.17 (d, 1H), 6.73 (d, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.29 (m, 2H), 2.98 (m, 2H), 2.61 (s, 3H), 1.88 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 359.2 (M+l).
Forbindelse 202:
N-(3 -dimetylamino-propyl)-4-metoksy-3 -(3 -pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av N,N-dimetylpropyldiamin (51% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, D20) 8 7.98 (s, 1H), 7.96 (s, 2H), 7.81 (s, 1H), 7.16 (d, 1H), 6.72 (d, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.29 (m, 2H), 3.09 (m, 2H), 2.80 (s, 6H), 1.93 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 373.2 (M+l).
Forbindelse 203:
N-(3 -dimetylamino-propyl)-4-metoksy-N-metyl-3 -(3 -pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av N,N,N'-trimetylpropyldiamin (60% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, D20) 8 8.37 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.13 (m, 1H), 7.01 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.51 (m, 2H), 3.11 (m, 2H), 2.96 (s, 3H), 2.80 (s, 6H), 2.01 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 387.1 (M+l).
Forbindelse 204:
4-metoksy-N-[3-(4-metyl-piperazin-l-yl)-propyl]-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av 3-(4-metyl-piperazin-1 -yl)-propylamin (57% utbytte).
<!>H-NMR (400 MHz, D20) 8 8.18 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.32 (d, 1H), 6.85 (d, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.48 (br s, 8H), 3.36 (m, 2H), 3.17 (m, 2H), 2.83 (s, 3H), 1.96 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 428.2 (M+l).
Forbindelse 205:
{2-[4-metoksy-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-bera
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av 2-trimetylammoniumetylamin (63% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, D20) 8 8.17 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.32 (d, 1H), 6.84 (d, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.76 (m, 2H), 3.44 (m, 2H), 3.11 (s, 9H).
LRMS (esi, positiv) m/e 373.0 (M+l).
Forbindelse 206:
4-metoksy-N-(3-morfolin-4-yl-propyl)-3-(3-pyrazin-2-yl-ureido)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 189, ved bruk av 3-morfolin-4-yl-propylamin (69% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.91 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.35 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.54 (d, 1H), 7.10 (d, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.57 (m, 4H), 3.26 (m, 2H), 2.34 (m, 4H), 2. 32 (m, 2H), 1.66 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 415. 2 (M+l).
Forbindelse 207:
3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre
Trinn 1: (5-metyl-pyrazin-2-yl)-karbaminsyre-tert-butylester. En omrørt løsning av 5-metyl-pyrazinkarboksylsyre (13.8 g, 100 mmol) i 300 ml toluen ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt trietylamin (14 ml, 100 mmol), etterfulgt av difenylfosforylazid (21.6 ml, 100 mmol). Etter 30 min ved romtemperatur ble 2-metyl-2-propanol (19 ml, 200 mmol) tilsatt og løsningen ble nedsenket i et 90°C oljebad. Etter 2 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, fortynnet til 600 ml med EtOAc og vasket med 3 x 60 ml 10% Na2C03 og med 1 x 600 ml mettet NaCl. De organiske faser ble tørket (MgS04), filtrert og inndampet til et gult, fast stoff (17.5 g, 83%). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 6 9.16 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.56 (br s, 1H), 2.50 (s, 3H), 1.55 (s, 9H).
Trinn 2: 5-metyl-2-aminopyrazin. En omrørt løsning av (5-metyl-pyrazin-2-yl)-karbaminsyre-tert-butylester (2.1 g, 10 mmol) i 30 ml CH2CI2 ved 0"C under nitrogen, ble tilsatt trifluoreddiksyre (30 ml). Løsningen fikk oppvarmes til romtemperatur natten over. Løsningen ble rotasjonsinndampet for å fjerne TF A, og residuet ble oppløst i 200 ml CH2CI2 og omrørt med 100 ml 10% Na2C03. De organiske faser ble isolert og den vandige løsningen ble ekstrahert med 3 x 100 ml CH2CI2. De organiske faser ble samlet, tørket (MgS04), filtrert og inndampet til et oransje, fast stoff (1 g, 92%). <*>H-NMR (400
MHz, CDCI3) 8 8.46 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 2.49 (s, 3H).
Trinn 3: 3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre-metylester. En omrørt løsning av 3-metoksy-4-(4-nitro-fenoksykarbonylamino)-benzosyre-metylester (11.7 g, 33.8 mmol) i 34 ml NMP ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt 5-metyl-2-aminopyrazin (3.69 g, 33.8 mmol) og reaksjonsblandingen ble nedsenket i et 85°C oljebad. Etter 6 timer fikk reaksjonsblandingen avkjøles til romtemperatur og et presipitat ble dannet. EtOAc (200 ml) ble tilsatt og fellingen ble isolert ved filtrering (4.7 g, 44%).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.79 (br s, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.60 (d, 1H),
7.52 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 2.42 (s, 3H).
Trinn 4: 3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre. En omrørt suspensjon av 3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre-metylester (7.15 g, 22.6
mmol) i 3:1 MeOH:H20 (226 ml) ved RT under N2, ble tilsatt litiumhydroksydmonohydrat (9.5 g, 226 mmol) i form av fast stoff og blandingen ble oppvarmet til 65°C. Etter at denne temperaturen var nådd, ble suspensjonen gradvis en sterk gul løsning. Etter ca. 4 timer ble et presipitat dannet, men reaksjonen ble fortsatt natten over. Etter avkjøling til
romtemperatur ble MeOH fjernet på rotavapor, og den vandige suspensjonen ble fortynnet med 100 ml H20 og nøytralisert til pH=5 med konsentrert HC1. Da pH=5 var nådd, endret suspensjonen farge fra gul til hvit. Suspensjonen ble deretter filtrert gjennom papir på en stor keramikktrakt. Filtreringen gikk svært langsomt og tok mange timer. Filterkaken ble vasket to ganger med H20, Når mesteparten av vannet var fjernet, ble residuet tørket under høyvakuum i en dessikator natten over, hvilket ga den frie syren i form av et hvitt, fast stoff (6 g, 88%). <!>H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.9 (br s, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.51 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 2.42 (s, 3H).
Forbindelse 208:
3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(2-pyridin-2-yl-etyl)-benzamid
En omrørt løsning av 3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre (30 mg, 0.1 mmol) i 1 ml NMP ved RT i en lukket reaksjonsflaske, ble tilsatt HBTU (42 mg, 0.11 mmol). Suspensjonen ble omrørt i 15 minutter og deretter behandlet med 2-etylaminopyridin (13.2 ul, 0.11 mmol), etterfulgt av Hunigs base (35 ul, 0.2 mmol). Etter omrøring natten over ble NMP fjernet ved kolbe til kolbe-overføring ved 70°C under høyvakuum, og residuet ble omrørt med en blanding av CH2C12 (10 ml) og 10% Na2C03 (10 ml) inntil fullstendig oppløsning. De organiske faser ble isolert, tørket (MgSO,»), filtrert og inndampet. Residuet ble utgnidd med EtOAc, hvilket ga et fast stoff som ble isolert ved filtrering (71% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.90 (s, 1H), 8.58 (d, 1H), 8.50 (t, 1H), 8.23 (d, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.82 (t, 1H), 7.48-7.31 (m, 4H), 3.97 (s, 3H), 3.62 (m, 2H), 3.04 (m, 2H), 2.42 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 407.1 (M+l).
Forbindelse 209:
N-(l-benzyl-piperidin-4-yl)-3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av 4-amino-l-benzylpiperidin, bortsett fra at råproduktet ble renset med kromatografi på en Biotage 12S-kolonne ved eluering med 92.5/7.5 CH2Cl2/MeOH (61% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3/CD3OD) 8 8.44 (br s, 1H), 8.32 (d, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.38-7.28 (m, 6H), 7.09 (d, 1H), 4.00 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.60 (s, 2H), 2.98 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.25 (m, 2H), 2.00 (m, 2H), 1.64 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 475.2 (M+l).
Forbindelse 210:
N-(3-dimetylamino-propyl)-3-metoksy-4-[3-5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av N,N-dimetylpropyldiamin (70% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.90 (br s, 1H), 8.55 (t, 1H), 8.26 (d, 1H), 8.22 (s, 1H),
7.52 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.32 (m, 2H), 3.07 (m, 2H), 2.77 (s, 6H), 2.41 (s, 3H), 1.89 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 387.1 (M+l).
Forbindelse 211:
3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(3-morfolin-4-yl-propyl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av 3-morfolin-4-yl-propylamin (79% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.90 (br s, 1H), 8.57 (t, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.62 (m, 2H), 3.31 (m, 8H), 3.12 (m, 2H), 2.41 (s, 3H), 1.92 (m,2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 429.1 (M+l).
Forbindelse 212:
N-(2-dimetylamino-2-fenyl-etyl)-3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av N-(2-dimetylamino)-2-fenyletylamin, bortsett fra at råproduktet ble renset med kromatografi på en Biotage 12S-kolonne ved eluering med 92.5/7.5 CH2Cl2/MeOH (12% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.05 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.20 (m, 3H), 7.41-7.19 (m, 7H), 3.96 (s, 3H), 3.78 (m, 1H), 3.70 (m, 1H), 3.57 (m, 1H), 3.38 (m, 1H), 2.50 (s, 6H), 2.40 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 448.9 (M+l).
Forbindelse 213:
N-(2-dimetylamino-l-fenyl-etyl)-3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av N-(2-dimetylamino)-l-fenyletylamin, bortsett fra at råproduktet ble renset med kromatografi på en Biotage 12S-kolonne ved eluering med 92.5/7.5 CH2Cl2/MeOH (27% utbytte).
<*>H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 11.61 (br s, 1H), 9.71 (br s, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.52-7.21 (m, 7H), 5.05 (br s, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.80 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.37 (s, 6H), 1.79 (br s, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 449.0 (M+l).
Forbindelse 214:
N-(l-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-yl)-3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av 1-aza-bicyklo[2.2.2]okt-3-ylamin (27% utbytte).
•H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.17 (br s, 1H), 8.90 (br s, 1H), 8.24 (d, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.17 (d, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.50 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.95 (m, 1H), 3.10 (m, 1H), 2.90
(m, 1H), 2.64 (m, 4H), 2.42 (s, 3H), 1.87 (m, 1H), 1.80 (m, 1H), 1.59 (m, 2H), 1.31 (m, 1H).
LRMS (esi, positiv) m/e 411.0 (M+l).
Forbindelse 215:
3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(3-R-l-pyridin-2-ylmetyl-pyrrolidin-3-yl)-benzamid
Trinn 1: (3-R-l-pyridin-2-ylmetyl-pyrrolidin-3-yl)-karbaminsyre-tert-butylester. En omrørt løsning av (R)-boc-3-aminopyrrolidin (372.5 mg, 2 mmol) i dikloretan (6 ml) ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt pyridin-2-karboksaldehyd (190 ul, 2 mmol), etterfulgt av natriumtriacetoksyborhydrid (593 mg, 2.8 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over, og reaksjonen ble deretter stanset ved tilsetning av mettet NaHCC>3 (6 ml) under omrøring i løpet av 15 minutter. Reaksjonsblandingen ble deretter fordelt mellom CH2C12 (25 ml) og 10% Na2C03 (25 ml). De organiske faser ble isolert, tørket (MgSO/O, filtrert og inndampet til det rene produktet (526 mg, 95%).
Trinn 2: 3-R-l-pyridin-2-ylmetyl-pyrrolidin-3-ylamindihydroklorid. En omrørt løsning av (3-R-l-pyridin-2-ylmetyl-pyrrolidin-3-yl)-karbaminsyre-tert-butylester (277 mg, 1 mmol) i 10 ml 4N HC1 i dioksan, ble omsatt ved romtemperatur i en lukket kolbe natten over. Reaksjonsblandingen ble inndampet ved rotasjonsinndampning og høyvakuum, hvilket ga di-HCl-saltet (250 mg, kvantitativt).
Trinn 3: Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, bortsett fra at 3-R-l-pyridin-2-ylmetylpyrrolidin-3-ylamin-dihydrokloridsalt ble blandet med overskudd av DIEA (70 ul, 0.4 mmol) i 500 ul NMP, for å danne en løsning som ble satt til syre/HBTU-blandingen. Råproduktet ble renset med kromatografi på en Biotage 12S-kolonne ved eluering med 9/1 CH2Cl2/MeOH (60% utbytte). •H-NMR (400 MHz, CDCU) 8 8.57 (s, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.30 (d, 1H), 6.70 (d, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.66 (dd, 2H), 2.98 (m, 1H), 2.80 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.39 (m, 3H), 1.76 (m, 1H).
LRMS (esi, positiv) m/e 462.3 (M+l).
Forbindelse 216:
3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(3-R-l-metyl-pyrrolidin-3-yl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av 3-(R)-amino-l-metylpyrrolidin (29% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.78 (br s, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.22 (d, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 4.39 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.64 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.39 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.17 (m, 1H), 1.76 (m, 1H).
LRMS (esi, positiv) m/e 385. 3 (M+l).
Forbindelse 217:
N-(3-R-l-benzyl-pyrrolidin-3-yl)-3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzanid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av 3-(R)-amino-l-benzylpyrrolidin, bortsett fra at råproduktet ble renset med kromatografi på en Biotage 12S-kolonne ved eluering med 92.5/7.5 CH2Cl2/MeOH (54% utbytte).
<!>H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 9.09 (br s, 1H), 8.43 (d, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.57 (m, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.33-7.22 (m, 4H), 4.79 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.78 (dd, 2H), 3.13 (m, 2H), 2.76 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.44 (m, 1H), 1.79 (m, 1H).
LRMS (esi, positiv) m/e 461.1 (M+l).
Forbindelse 218:
3 -metoksy-4-[3 -(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido] -N-(3 -R-1 -pyridin-4-ylmetyl-pyrrolidin-3 - yl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av 1-(R)-pyridin-4-ylmetyl-pyrrolidin-3-ylamin (60% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 8.56 (d, 2H), 8.41 (d, 1H), 8.21 (d, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.25 (d, 2H), 6.71 (d, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.66 (dd, 2H), 2.97 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.71 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.39 (m, 2H), 1.78 (m, 1H).
LRMS (esi, positiv) m/e 462.3 (M+l).
Forbindelse 219:
3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(3-R-l-tiofen-2-ylmetyl-pyrrolidin-3-yl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av (R)-l-tiofen-2-ylmetyl-pyrrolidin-3-ylamin (60% utbytte).
■H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.96 (br s, 1H), 8.43 (d, 1H), 8.09 (d, 2H), 7.57 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.10 (d, 1H), 6.91 (m, 2H), 4.80 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.96 (dd, 2H), 3.17 (m, 1H), 3.08 (m, 1H), 2.71 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.42 (m, 2H), 1.80 (m, 1H). LRMS (esi, positiv) m/e 467.2 (M+l).
Forbindelse 220:
N-(3-R-l-cykloheksylmetyl-pyrrolidin-3-yl)-3-metoksy-4-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido] -benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av 1-cykloheksylmetyl-pyrrolidin-3-R-ylamin (71% utbytte).
<!>H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.89 (br s, 1H), 8.32 (d, 1H), 8.23 (d, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 4.38 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.76 (m, 1H), 2.56 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.38 (m, 1H), 2.25-2.06 (m, 3H), 1.77 (m, 3H), 1.61 (m, 3H), 1.40 (m, 1H), 1.19 (m, 3H), 0.83 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 467.3 (M+l).
Forbindelse 221:
3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(3-R-l-metyl-pyrrolidin-3-yl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av 1-metylpyrrolidin-3-R-ylamin (51% utbytte).
<t>ø-NMR (400 MHz, dg-DMSO) 8 8.78 (br s, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.22 (d, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 4.39 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.66 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.39 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.17 (m, 1H), 1.75 (m, 1H).
LRMS (esi, positiv) m/e 385.4 (M+l).
Forbindelse 222:
N-(3-S-l-benzyl-pyrrolidin-3-yl)-3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av 1-benzyl-pyrrolidin-3-S-ylamin, bortsett fra at råproduktet ble renset med kromatografi på en Biotage 12S-kolonne ved eluering med 92.5/7.5 CH2Cl2/MeOH (54% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.81 (br s, 1H), 8.43 (d, 1H), 8.06 (d, 2H), 7.53 (s, 1H), 7.42 (d, 1H), 7.35-7.20 (m, 5H), 4.78 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.78 (dd, 2H), 3.15 (m, 1H), 3.04 (m, 1H), 2.77 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.44 (m, 1H), 1.79 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 461.1 (M+l).
Forbindelse 223:
3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(3-S-l-pyridin-2-ylmetyl-pyrrolidm^ yl)benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av 1-pyridin-2-ylmetyl-pyrrolidin-3-S-ylamin (60% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.56 (d, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.32 (d, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.68 (t, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 7.21 (m, 1H), 4.72 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.79 (dd, 2H), 3.40 (m, 1H), 3.03 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.64 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.35 (m, 1H), 1.78 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 462 1 (M+l).
Forbindelse 224:
3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(3-S-l-pyridin-3-ylmetyl-pyrrolidin-3-yl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av 1-pyridin-3-ylmetyl-pyrrolidin-3-S-ylamin (60% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 8.56 (s, 1H), 8.51 (m, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.08 (s, 2H), 7.64 (d, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.33 (d, 1H), 6.77 (d, 1H), 4.72 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.66 (dd, 2H), 2.97 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.71 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.40 (m, 2H), 1.76
(m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 462.3 (M+l).
Forbindelse 225:
3- metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(3-S-l-pyridin-4-ylmetyl-pyrrolidin-3-yl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av 1-pyridin-4- ylmetyl-pyrrolidin-3-S-ylamin (60% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.56 (d, 2H), 8.41 (d, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.24 (d, 2H), 6.75 (d, 1H), 4.72 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.67 (dd, 2H), 2.98 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.71 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.40 (m, 2H), 1.79 (m,2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 462.3 (M+l).
Forbindelse 226:
3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(3-S-l-tiofen-2-ylmetyl-pyrrolidin-3-yl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av l-tiofen-2-ylmetyl-pyrrolidin-3-S-ylamin (55% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 8.71 (br s, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.11 (d, 2H), 7.55 (s, 1H),
7.44 (d, 1H), 7.39 (d, 1H), 7.20 (d, 1H), 6.91 (m, 2H), 4.78 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.94 (dd, 2H), 3.17 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 2.69 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.42 (m, 2H), 1.80 (m, 2H). LRMS (esi, positiv) m/e 467.2 (M+l).
Forbindelse 227:
N-(3-S-l-cykloheksylmetyl-pyrrolidin-3-yl)-3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido] -benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av 1-cykloheksylmetyl-pyrrolidin-3-S-ylamin (60% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.78 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.23 (d, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.48 (d, 1H), 4.37 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.76 (m, 1H), 2.56 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.38 (m, 1H), 2.25-2.06 (m, 3H), 1.77 (m, 3H), 1.61 (m, 3H), 1.40 (m, 1H), 1.19 (m, 3H), 0.83 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 467.3 (M+l).
Forbindelse 228:
N-(3-S-1-berizyl-pyrrolidin-3-yl)-4-^ benzamid
Trinn 1:4-amino-3-trifluormetoksy-benzosyre-metylester. En omrørt løsning av 4-amino-3-trifluormetoksy-benzosyre (1.2 g, 5.4 mmol) i 16 ml 4:1 THF:MeOH ved 0°C, ble tilsatt TMS-diazometan (2M løsning i heksan, 6 ml, 12 mmol) dråpevis, og omsetningen ble overvåket ved TLC i 2/3 EtOAc/heksan. Ved fullstendig reaksjon ble reaksjonsblandingen inndampet til et hvitt, fast stoff som var metylesteren (1.27 g, kvantitativt).
Trinn 2:4-(4-nitro-fenoksykarbonylamino)-3-trifluormetoksy-benzosyre-metylester. En omrørt løsning av 4-amino-3-tirfluormetoksy-benzosyre-metylester (1.38 g, 5.9 mmol) i 18 ml CH2CI2 ved 0°C under nitrogen, ble tilsatt pyridin (521 ul, 6.4 mmol), etterfulgt av p-nitrofenylklorformiat (1.18 g, 5.9 mmol). Etter 4 timer ved 0"C ble reaksjonsblandingen fortynnet til 60 ml med CH2C12 og vasket med 2 x 60 ml 2N HC1, med 1 x 60 ml H20 og med 1 x 60 ml mettet NaCl. De organiske faser ble tørket (MgSCU), filtrert og inndampet til et hvitt, fast stoff som var karbamatet (2.1 g, 89 %).
Trinn 3: 4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-3-trifluormetoksy-benzosyre-metylester. En omrørt løsning av 4-(4-nitro-fenoksykarbonylamino)-3-trifluormetoksy-benzosyre-metylester (400 mg, 1 mmol) i 1 ml NMP i en lukket reaksjonsflaske ved romtemperatur, ble tilsatt 2-amino-5-metyl-pyrazin (109 mg, 1 mmol) og løsningen ble oppvarmet ved 90°C i 6 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble løsningen fortynnet til 30 ml med EtOAc og vasket med 4 x 30 ml 10% NaHC03 for å fjerne fenol-biproduktet, og med 1 x 30 ml mettet NaCl. De organiske faser ble tørket (MgSOiO, filtrert og inndampet. Utgnidning og filtrering med EtOAc ga et beige, fast stoff som var urea-esteren (136 mg, 37%).
Trinn 4: 4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-3-trifluormetoksy-benzosyre. En omrørt suspensjon av 4-[3-(5-metyl-pyrazm-2-yl)-ureido]-3-trifluormetoksy-benzosyre-metylester (136 mg, 0.37 mmol) i 4 ml 3:1 MeOH:H20 under nitrogen, ble tilsatt litiumhydroksydmonohydrat (154 mg, 3.7 mmol) og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 65°C. Reaksjonsblandingen ble gul/grønn og ble til slutt en løsning. Etter omrøring natten over ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur og delvis inndampet på rotavapor for å fjerne mesteparten av MeOH. Den gjenværende suspensjon ble nøytralisert med 2N HC1 inntil pH=6. Reaksjonen dannet et fnugget presipitat som ble frafiltrert med H20 og tørket natten over under høyvakuum, hvilket ga syren i form av et hvitt, fast stoff (102 mg, 78 %).
Trinn 5: En omrørt suspensjon av 4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-3-tirfluormetoksy-benzosyre (102 mg, 0.29 mmol) i 2.9 ml NMP i en lukket reaksjonsflaske ved romtemperatur, ble tilsatt HBTU (109 mg, 0.29 mmol). Etter 15 minutter ble 3-S-l-benzyl-pyrrolidin-3-ylamin-dihydroklorid (fremstilt analogt med l-pyridin-2-ylmetyl-pyrrolidin-3-ylamin som ble anvendt i syntesen av Forbindelse 215) (73 mg, 0.29 mmol) tilsatt, etterfulgt av DIEA (200 ul, 1.2 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt natten over og NMP ble deretter fjernet under høyvakuum ved 70°C. Residuet ble fordelt mellom 30 ml CH2C12 og 30 ml 10% Na2CC«3. De organiske faser ble isolert og vasket med 1 x 30 ml mettet NaCl, tørket (MgSC>4), filtrert og inndampet til et gult skum som var det ønskede amid (103 mg, 70%).
<l>H-NMR (400 MHz, CDCI3/CD3OD) 8 8.56 (d, 1H), 8.37 (br s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.40-7.28 (m, 6H), 4.73 (m, 1H), 3.68 (dd, 2H), 2.77 (dd, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.43 (m, 1H), 2.37 (dd, 2H), 1.78 (m, 1H).
LRMS (esi, positiv) m/e 514.9 (M+l).
Forbindelse 229:
N-(l-benzyl-piperidin-4-ylmetyl)-3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)ureido]-benzamid
Trinn 1: N-benzylisoirpecotamid. En suspensjon av isonipecotamid (12.3 g, 96 mmol) i 200 ml diklormetan, ble tilsatt benzaldehyd (10.6 g, 100 mmol) og natriumtriacetoksyborhydrid (29.7 g, 140 mmol), og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 5 dager. Den tykke, hvite blandingen ble fortynnet med 100 ml vann og ekstrahert med EtOAc (2 x 20 ml). Den vandige fasen ble gjort basisk med IN NaOH til pH > 12. Det resulterende hvite presipitat ble oppsamlet ved sugefiltrering, Det hvite, faste stoffet ble deretter tatt opp i 50 ml EtOAc og vasket med 20 ml mettet natriumkloirdløsning, deretter tørket (MgS04), filtrert og inndampet, hvilket ga 10.84 g (50 %) av det ønskede produkt.
'H-NMR (400 MHz, CDCU) 8 7.85 (m, 5H), 5.45 (s, 1H), 5.34 (s, 1H), 3.5 (s, 2H), 2.93 (d, J=10.96 Hz, 2H), 2.16 (t, J=12.13 Hz, 1H), 2.01 (t, J=l 1.74 Hz, 2H), 1.87 (d, J= 2.52 Hz, 2H), 1.76 (q, J=12.52 Hz, 2H).
Trinn 2 : 4-aminometyl-l-benzylpiperdin. En løsning av N-benzylisonipecotamid (7.34 g, 34 mmol) i 60 ml vannfri THF, ble tilsatt LiAlH4 (1.9 g, 51 mmol) og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 10 minutter, etterfulgt av oppvarming ved tilbakeløp i 3 timer. Reaksjonen ble stanset ved tilsetning av 100 ml mettet natriumkaliumtartrat og ble ekstrahert med EtOAc (3 x 50 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med 20 ml vann og 20 ml mettet natriumkloirdløsning, deretter tørket over MgS04, filtrert og inndampet, hvilket ga det ønskede produkt. <*>H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 7.13 (m, 5H), 3.42 (s, 2H), 2.91 (m, 2H), 2.59 (m, 2H), 1.97 (m, 2H), 1.62 (m, 2H), 2.21 (m, 5H).
Trinn 3: N-(l-benzyl-piperidin-4-ylmetyl)-3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzamid. Fremstilt fra 4-aminometyl-l-benzylpiperdin i henhold til fremgangsmåten ifølge Forbindelse 208: 'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.1 (s, 2H), 8.81 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.26 (m, 2H), 7.52 (m, 7H), 3.97 (s, 5H), 3.33 (s, 3H), 3.18 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 1.75 (s, 3H), 1.44 (s, 2H).
MS APCI-pos, M+l =489.1.
Forbindelse 230:
N- [3 -S-1 -(4-fluor-benzyl)-pyrrolidin-3 -yl]-3 -metoksy-4-[3 -(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido] - benzamid
Trinn 1: (3S)-3-(tert-butoksykarbonylamino)-l-(4-fluor-benzyl)-pyrrolidin. En løsning av (3S)-(+)-3-(tert-butoksykarbonylamino)pyrrolidin (410 mg, 2.20 mmol) i 22 ml EtOH, ble tilsatt (288 ul, 2.31 mmol) 4-fluorbenzylbromid og (788 mg, 2.42 mmol) finpulverisert cesiumkarbonat. Den omrørte reaksjonsblandingen ble oppvarmet ved 80°C under nitrogen i 3 timer; da viste TLC at reaksjonen var fullstendig. Reaksjonsblandingen ble deretter inndampet under vakuum til ca. 5 ml og ble deretter fortynnet med 30 ml EtOAc og vasket med 20 ml 5% NH4OH. Den vandige fraksjonen ble ekstrahert med dietyleter (3 x 20 ml). De samlede organiske lag ble vasket med 20 ml mettet natriumkloirdløsning, tørket (MgS04), filtrert og inndampet. De rå hvite, faste stoffet ble utgnidd med 1:1 eter-heksan, hvilket ga 501 mg (77%) av det ønskede produkt i form av et hvitt, fast stoff. 'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 7.2-7.3 (m, 2H), 6.9-7.1 (m, 2H), 4.85 (br s, 1H, utskiftbar), 4.18 (br s, 1H), 3.55 (s, 2H), 2.65 (br m, 1H), 2.58 (m, 1H), 2.50 (m, 1H), 2.2-2.4 (m, 2H), 1.5-1.7 (m, 1H), 1.4 (s,9H).
Trinn 2: (3S)-3-amino-l-(4-fluor-benzyl)-pyrrolidin. En løsning av (3S)-3-(tert-butoksykarbonylamino)-l-(4-fluor-benzyl)-pyrrolidin (400 mg, 1.36 mmol), ble omrørt i 15 ml maursyre ved romtemperatur. Etter 3 timer ble den klare, fargeløse løsningen inndampet til tørrhet, og residuet ble tatt opp i 20 ml EtOAc og vasket med 10 ml 5% NH4OH, etterfulgt av 10 ml mettet natriumkloirdløsning. Løsningen ble deretter tørket over MgS04, filtrert og inndampet, hvilket ga 240 mg (91%) av produkt i form av en gul olje. 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 7.28 (m, 2H), 6.99 (m, 2H), 3.56 (d, J=6.2 Hz, 2H), 3.47-3.53 (m, 1H), 2.67-2.71 (m, 2H), 2.42-2.48 (m, 1H), 2.28-2.31 (m, 1H), 2.21-2.28 (m, 1H), 1.59 (s, 2H, NH2), 1.43-1.52 (m, 1H). Triim3:N-[(3S)-l-(4-fluor-benzyl)-pyrrolidin-3-yl]-3-metoksy-4-[3-^ yl)-ureido]-benzamid. Fremstilt fra (3S)-3-amino-l-(4-fluor-benzyl)-pyrrolidin i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208. <l>H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 10.8 (s, 2H), 8.8 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.24 (s, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.37 (s, 2H), 7.15 (m, 2H), 4.4 (br s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.6 (br s. 2H), 3.06 (br s, 1H), 2.65 (br s, 1H), 2.81 (br s, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.16 (s, 1H), 1.83 (s, 1H). MS apci-pos M+l = 479.2.
Forbindelse 231:
3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre 3-S-l-benzyl-pyrrolidin-3-ylester
Trinn 1: 3-metoksy-4-nitro-benzoylklorid. Tionylklorid (3.7 ml, 50 mmol) ble ved romtemperatur satt dråpevis til en omrørt løsning av 3-metoksy-4-nitro-benzosyre (1.0 g, 5.07 mmol) i 15 ml dioksan under nitrogenatmosfære. Etter at tilsetningen var fullført ble reaksjonsblandingen omrørt ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonskolben ble deretter utstyrt med et destillasjonshode og overskudd av tionylklorid og omtrent 14 av løsningsmidlet ble fjernet ved destillasjon i et 120°C oljebad. Det gjenværende løsningsmiddel ble fjernet ved rotasjonsinndampning og residuet ble tatt opp i 20 ml toluen og igjen ble omtrent Vi av løsningsmidlet fjernet ved destillasjon. Den gjenværende løsning ble deretter avkjølt til 0°C, og det hvite, faste stoffet som ble utfelt ble oppsamlet ved sugefiltrering og skyllet med 1:1 Et20-heksan. 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 7.87 (d, J=7.83 Hz, 1H), 7.82 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 4.04 (s, 3H).
Trinn 2: (3S)-l-benzyl-pyrrolidin-3-og lignende. En løsning av (3S)-3-hydroksypyrrolidin (2.0 g, 25 mmol) i 50 ml CH2CI2 under nitrogenatmosfære, ble avkjølt til 0°C og benzaldehyd (2.92 g, 27.5 mmol) ble tilsatt, etterfulgt av lg pulverisert 4A molekylsikter. Natriumtriacetoksyborhydrid (7.4 g, 35 mmol) ble tilsatt i flere porsjoner i løpet av 30 min og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble igjen avkjølt til 0°C og reaksjonen ble stanset ved tilsetning av 10 ml metanol, etterfulgt av 5 ml IN HC1. Molekylsiktede, faste stoffer ble fjernet ved filtrering gjennom et glassfiber-papir og filtratet ble ekstrahert med 20 ml dietyleter. Den organiske fasen ble kastet og den vandige fasen ble først gjort basisk ved tilsetning av kons. ammoniumhydroksyd og deretter ekstrahert med EtOAc (3 x 20 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med 20 ml mettet natriumkloridløsning, tørket (MgSO/j), filtrert og inndampet under vakuum, hvilket ga 3.2 g (73%) av en klar, gul olje som ikke behøvde ytterligere rensning. 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 6 7.2-7.4 (m, 5H), 4.33 (m, 1H), 3.63 (s, 2H), 2.83-3.89 (m, 1H), 2.67 (d, J=9.9 Hz, 1H), 2.53-2.55 (m, 1H), 2.23-2.34 (m, 1H), 2.14-2.20 (m, 2H), 1.70-1.77 (m, 1H).
Trinn 3: 3-metoksy-4-nitro-benzosyre(3S)-l-benzyl-pyrrolidin-3-ylester. En løsning av 3-metoksy-4-nitro-benzoylklorid (608 mg, 2.82 mmol) i 10 ml CH2CI2, ble satt til en omrørt løsning av 500 mg (2.82 mmol) (3S)-l-benzyl-pyrrolidin-3-ol og 1 ml pyridin i 15 ml CH2CI2 ved romtemperatur. Etter omrøring i 18 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 20 ml mettet, vandig NaHC03 og ekstrahert med CH2CI2 (2 x 10 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med 20 ml mettet natriumkloirdløsning, tørket over MgS04, filtrert og inndampet under vakuum, hvilket ga 780 mg (71%) av den ønskede ester i form av en gul olje som stivnet etter tørking under høyvakuum. Det resulterende faste stoffet ble ytterligere renset med utgnidning med 1:1 eter-heksan. 'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 7.83 (d, J=7.83 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.68 (d, J=7.83 Hz, 1H), 7.2-7.4 (m, 5H). 5.44 (br m, 1H), 4.02 (s, 2H), 3.69 (dd, J=30 Hz, J= 3 Hz, 1H), 2.8-3.0 (m, 2H), 2.5-2.6 (m, 1H), 2.3-2.45 (m, 1H), 2.0-2.1 (m, 1H).
Trinn 4: 4-amino-3-metoksy-benzosyre (3S)-l-benzyl-pyrrolidin-3-ylester. Anilinet ble fremstilt ved nikkelborid-reduksjon av 3-metoksy-4-nitro-benzosyre(3S)-l-benzyl-pyrrolidin-3-yl-ester, analogt med fremstillingen av 4-[(benzyl-metyl-amino)-metyl]-2-metoksy-fenylamin som ble anvendt i syntesen av Forbindelse 340. 'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 7.54 (d, J=8.21 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.2-7.4 (m, 5H), 6.65 (d, J=8.21 Hz, 1H), 5.38 (br m, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.69 (q, J= 4.63 Hz, 1H), 3.0 (m, 1H), 2.7-2.9 (m, 2H), 2.5-2.6 (m, 1H), 2.3-2.4 (m, 1H), 1.9-2.1 (m, 1H), MS apci-pos M+l=327.2. Trinn 5: 3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre (3S)-l-benzyl-pyrrolidin-3-ylester. Fremstilt fra 4-amino-3-metoksy-benzosyre (3S)-l-benzyl-pyrrolidin-3-ylester i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208. 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 10.15 (s, 2H), 8.8 (s, 1H), 8.35 (d, J=8.61 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.58 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 7.5 (s, 1H), 7.30-7.35 (m, 4H), 7.26-7.24 (m, 1H), 5.28 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.62 (s, 2H), 2.82 (m, 1H), 2.74 (m, 1H), 2.67 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.28 (m, 1H), 1.91 (m, 1H). MS apci-pos M+l = 462.2.
Forbindelse 232:
N-(3-S-l-benzyl-pyrrolidin-3-yl)-3-metoksy-4-[3-(5-trilfuormetyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzamid
Trinn 1: 3-metoksy-4-[3-(5-trifluormetyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre-metylester. En omrørt løsning av 5-trifluormetylaminopyrazin (326 mg, 2 mmol) i NMP (2 ml) i en lukket reaksjonsfiaske ved romtemperatur, ble tilsatt 4-metoksy-3-(4-nitrofenylkarbonylamino)-benzosyre-metylester (692 mg, 2 mmol), og løsningen ble oppvarmet ved 85°C i 6 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og utgnidd med EtOAc (5 ml), og det gyldenbrune, faste stoffet som ble dannet ble isolert ved filtrering og skylling med EtOAc (213 mg, 28%). 1 H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.78 (s, 1H), 10.16 (br s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.37 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.56 (s, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.83 (s, 3H).
Trinn 2: 3-metoksy-4-[3-(5-trifluormetyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre. En omrørt løsning av 3-metoksy-4-[3-(5-trifluormetyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre-metylester (213 mg, 0.575 mmol) i 5.75 ml 3:1 MeOH:HaO ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt litiumhydroksydmonohydrat (240 mg, 5.8 mmol) og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 65'C. Etter at denne temperaturen var nådd, ble suspensjonen gradvis en sterk gul løsning. Etter ca. 4 timer ble et presipitat dannet, men reaksjonen ble fortsatt natten over. Etter avkjøling til romtemperatur ble MeOH fjernet på rotavapor, og den vandige suspensjonen ble nøytralisert til pH=5 med konsentrert HC1. Da pH=5 var nådd, endret suspensjonen farge fra gul til hvit. Suspensjonen ble deretter filtrert gjennom papir på en keramikktrakt. Da mesteparten vannet var fjernet, ble residuet tørket under høyvakuum i en dessikator natten over (133 mg, 55%).
Trinn 3: En omrørt løsning av 3-metoksy-4-[3-(5-trifluormetyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre (35 mg, 0.1 mmol) i 0.5 ml NMP i en lukket reaksjonsflaske ved RT, ble tilsatt HBTU (41 mg, 0.11 mmol) og reaksjonsblandingen ble omrørt i 15 min. 1-benzyl-pyrrolidin-3-ylamin-dihydroklorid (fremstilt analogt med l-pyridin-2-ylmetyl-pyrrolidin-3-ylamin som ble anvendt i syntesen av Forbindelse 215) (rå, 0.1 mmol) ble deretter tilsatt som en løsning i 0.5 ml NMP med DIEA (69 ul, 0.4 mmol). Etter omrøring natten over ved RT ble NMP fjernet ved destillasjon under høyvakuum ved 70°C. Residuet ble oppløst i 25 ml CH2CI2 med en liten mengde MeOH og vasket med 2 x 25 ml 10%
Na2C03. De organiske faser ble tørket (MgS04), filtrert og inndampet til en rest som ble kromatografert på en Biotage 12S-kolonne med 5/95 MeOH/CH2Cl2. Dette materialet ble inndampet til tørrhet og utgnidd/filtrert med Et20, hvilket ga rent produkt i form av et hvitt, fast stoff (9.5 mg, 19%).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 6 11.53 (s, 1H), 9.86 (br s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.40 (d, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.46 (m, 2H), 7.25 (m, 4H), 4.79 (m, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.73 (dd, 2H), 3.22 (m, 2H), 2.76 (m, 1H), 2.47 (m, 2H), 1.76 (m, 1H).
LRMS (esi, positiv) m/e 515.1 (M+l).
Forbindelse 233:
5-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(2-pyridin-2-yl-etyl)-2-tifluormetyl-benzamid
Trinn 1: Blanding av 5-fluor-4-nitro-2-trifluormetyl-benzosyre og 5-fluor-3-nitro-2-trifluormetyl-benzosyre. En omrørt løsning av 3-fluor-6-trifluormetyl-benzosyre (3.58 g, 17.2 mmol) i 17 ml konsentrert H2S04 ved 0°C, ble forsiktig tilsatt 70% HN03 (17 ml) dråpevis. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet ved 100°C natten over og ble deretter avkjølt til romtemperatur og hellet i 250 ml H20/is under omrøring. EtOAc (250 ml) ble tilsatt og blandingen ble omrørt. Lagene ble separert og de organiske faser ble vasket med 1 x 250 ml H20 og 1 x 250 ml mettet NaCl. De organiske faser ble tørket (MgS04), filtrert og inndampet til en olje som stivnet ved henstand. Det faste stoffet ble en 1:1 blanding av regioisomerer og ble benyttet videre rå.
Trinn 2: Blanding av 5-fluor-4-nitro-2-trifluormetyl-benzosyre-metylester og 5-fluor-3-nitro2-trifluormetyl-benzosyre-metylester. En omrørt løsning av nitro-syrene (rå, 17.2 mmol) i 60 ml 4:1 THF:MeOH ved 0°C, ble tilsatt 2M TMS-diazometan i heksan dråpevis inntil en gul farge ble opprettholdt. Etter 30 minutter ble reaksjonsblandingen inndampet til en rå olje som ble benyttet direkte i neste trinn.
Trinn 3: Blanding av 5-metoksy-4-nitro-2-trifluormetyl-benzosyre-metylester og 5-metoksy-3-nitro-2-trifluormetyl-benzosyre-metylester. En omrørt løsning av fluor-nitroesterne (rå, 17.2 mmol) i 22 ml MeOH ved romtemperatur, ble tilsatt 150 ml 0.5 M natriummetoksyd i MeOH. Den røde løsningen ble omrørt i 30 minutter og deretter fordelt mellom CH2C12 (500 ml) og H20 (500 ml). De organiske faser ble vasket med 2 x 500 ml H20, tørket (MgS04), filtrert og inndampet til et hvitt, fast stoff.
Trinn 4: 5-metoksy-4-amino-2-trifluormetyl-benzosyre-metylester. En omrørt løsning av metoksy-nitroesterne (rå, 17.2 mmol) i 172 ml MeOH ved romtemperatur og spylt med nitrogen, ble forsiktig tilsatt 10% Pd på C (1 g). Suspensjonen ble ført gjennom en vakuum/rense-cyklus tre ganger med hydrogengass og deretter holdt under 1 atmosfære hydrogen. Etter omrøring natten over ble suspensjonen filtrert gjennom GF/F-filterpapir og inndampet til en klar olje. Dette materialet ble direkte overført til en Biotage 40M-kolonne med CH2C12 og ble først eluert med 9/1 heksan/EtOAc for å eluere den uønskede høyere Rf-regioisomer og deretter med 85/15 heksan/EtOAc for å eluere den ønskede lavere Rf-regioisomer. Etter inndamping var den lavere Rf-isomer stivnet til et klart, fast stoff (1.75 g, 41%).1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 7.33 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.85 (s, 3H).
Trinn 5:5-metoksy-4-(4-rutro-fenoksykarbonylamino)-2-rt metylester. En omrørt løsning av 5-metoksy-4-amino-2-trifluormetyl-benzosyre-metylester (552 mg, 2.22 mmol) i 6.6 ml CH2CI2 ved 0°C under nitrogen, ble tilsatt pyridin (180 ul, 2.22 mmol), etterfulgt av p-nitrofenylklorformiat (448 mg, 2.22 mmol) i form av et fast stoff. Etter omrøring i 1 time ble reaksjonsblandingen fortynnet til 30 ml med CH2CI2 og vasket med 2 x 30 ml 2N HC1 og 1 x 30 ml H20. De organiske faser ble tørket (MgS04), filtrert og inndampet til p-nitrofenyl-karbamatet som ble isolert i form av et hvitt skum (878 mg, 96%). <*>H-NMR (400 MHz, CDCI3) 6 8.57 (br s, 1H), 8.30 (d, 2H), 7.77 (br s, 1H), 7.40 (d, 2H), 7.37 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.94 (s, 3H).
Trinn 6: 5-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-2-trifluormetyl-benzosyre-metylester. En omrørt løsning av 5-metoksy-4-(4-nitro-fenoksykarbonylamino)-2-trifluormetyl-benzosyre-metylester (878 mg, 2.1 mmol) i 4.2 ml NMP ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt 2-amino-5-metylpyrazin (232 mg, 2.1 mmol) og reaksjonsblandingen ble oppvarmet ved 85°C. Etter seks timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur og et presipitat ble dannet. Fellingen ble utgnidd med EtOAc (25 ml), og urea-forbindelsen som ble isolert ved filtrering, var i form av et gyldenbrunt, fast stoff (470 mg, 58%).
Trinn 7: 5-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-2-trifluormetyl-benzosyre. En omrørt suspensjon av 5-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-2-trifiuormetyl-benzosyre-metylester (257 mg, 0.67 mmol) i 6.7 ml 3:1 MeOH:H20 ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt litiumhydroksydmonohydrat (281 mg, 6.7 mmol) og blandingen ble oppvarmet ved 85°C. Etter omrøring natten over ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur. MeOH ble fjernet på rotavapor og den gjenværende suspensjon ble nøytralisert med konsentrert HC1 til en pH på omtrent 5. Suspensjonen ble filtrert og skyllet med H2O, og filterkaken ble tørket under høyvakuum, hvilket ga syren i form av et hvitt, fast stoff (161 mg, 61%).1 H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 8.90 (br s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 2.42 (s, 3H).
LRMS (esi, negativ) m/e 369.0 (M-l).
Trinn 8: 5-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(2-pyirdin-2-yl-etyl)-2-trifluormetyl-benzamid. En omrørt løsning av 5-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-2-trifluormetylbenzosyre (37 mg, 0.1 mmol) i 1 ml NMP ved romtemperatur i en lukket reaksjonsflaske, ble tilsatt HBTU (42 mg, 0.11 mmol) og suspensjonen ble omrørt i 15 minutter. 2-aminoetylpyridin (13 ul, 0.11 mmol) ble tilsatt, etterfulgt av DIEA (35 ul, 0.2 mmol) og reaksjonsblandingen ble omrørt natten over. NMP ble deretter fjernet ved kolbe til kolbe-overføring under høyvakuum ved 70°C, og residuet ble utgnidd og filtrert med EtOAc, hvilket ga det ønskede amid i form av et gyldenbrunt, fast stoff (32 mg, 68%). 1 H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.90 (br s, 1H), 8.66 (d, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.52 (t, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.10 (br m, 1H), 7.61 (br d, 1H), 7.57 (br m, 1H), 7.07 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.62 (m, 2H), 3.11 (m, 2H), 2.42 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 475.1 (M+l).
Forbindelse 234:
3-(3-dimetylamino-propoksy)-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre
Trinn 1: 3-(3-dimetylamino-propoksy)-4-nitro-benzosyre-metylester. En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av 3-hydroksy-4-nitro-benzosyre-metylester (394 mg, 2.0 mmol), trifenylfosfln (525 mg, 2.0 mmol) og 3-(dimetylamino)-propanol (237 ul. 2.0 mmol) i tørr tertrahydrofuran (5 ml) ble tilsatt diisopropyl-azodikarboksylat (394 ul, 2.0 mmol i 1 ml tetrahydrofuran). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med saltsyre (30 ml av en IM løsning) og ekstrahert med etylacetat (2x 50 ml). Den vandige løsningen ble gjort basisk med 10% vandig natriumkarbonat (50 ml), og produktet ble ekstrahert med etylacetat (3 x 100 ml). Etylacetaten ble vasket med mettet natriumkloirdløsning (1 x 30 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga det ønskede råprodukt (86% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 7.81 (d, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.65 (d, 1H), 4.23 (t, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.44 (t, 2H), 2.22 (s, 6H), 2.05 (m, 2H).
Trinn 2: 4-amino-3-(3-dimetylamino-propoksy)-benzosyre-metylester. En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av 3-(3-dimetylamino-propoksy)-4-nitro-benzosyre-metylester (282 mg, 1.0 mmol) i metanol (2 ml) og mettet, vandig ammoniumklorid (1 ml), ble tilsatt sinkstøv (2.0 mmol). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med 30 ml 10% vandig natriumkarbonat (2 x 30 ml), mettet natriumkloridløsning (1 x 30 ml), deretter tørket (MgSCU) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga det ønskede produkt i form av et gyldenbrunt, fast stoff (88% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 7.52 (d, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.65 (d, 1H), 4.29 (br s, 1H), 4.09 (t, 2H), 3.85 (s, 3H), 2.49 (t, 2H), 2.25 (s, 6H), 2.00 (m, 2H).
Trinn 3:3-(3-dimetylamino-propoksy)-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre-metylester. En omrørt, avkjølt (omtrent 0'C) løsning av 4-amino-3-(3-dimetylamino-propoksy)-benzosyre-metylester (252 mg, 1.0 mmol) i toluen (3.0 ml), ble tilsatt trietylamin (139 ul, 1.0 mmol) og trifosgen (98 mg, 0.33 mmol). Etter omrøring i 30 minutter ble 5-metyl-2-aminopyrazin (109 mg, 1.0 mmol), tilsatt og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 65°C. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til romtemperatur og ble deretter fortynnet med etylacetat (50 ml) og vann (50 ml). Presipitatet som ble dannet ble filtrert og tørket under redusert trykk, hvilket ga det ønskede materiale i form av et hvitt, fast stoff (40% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.62 (br s, 1H), 8.41 (d, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.59 (d, 1H) 7.49 (s, 1H), 4.15 (t, 2H), 3.81 (s, 3H), 2.42 (m, 5H), 2.18 (s, 6H), 2.01 (m, 2H).
Trinn 4: 3-(3-dimetylamino-propoksy)-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre. En omrørt løsning av 3-(3-dimetylamino-propoksy)-4-[3-(5-netyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzosyre-metylester (1.0 g; 3.3 mmol) i metanol (25 ml), ble tilsatt litiumhydroksyd (5 ml av en 2M vandig løsning). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 60 grader og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til romtemperatur og pH ble regulert til 5.5 med IN saltsyre. Presipitatet som ble dannet ble filtrert og tørket under redusert trykk, hvilket ga det ønskede produkt i form av et gyldenbrunt, fast stoff (52% utbytte).1 H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.62 (br s, 1H), 8.39 (d, 1H), 821 (s, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.43 (s, 1H), 4.15 (t, 2H), 2.42 (m, 5H), 2.18 (s, 6H), 2.01 (m, 2H).
Forbindelse 235:
4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-3-(pyridin-3-ylmetoksy)-benzosyre
Trinn 1:4-nitro-3-(pyridin-3-ylmetoksy)-benzosyre-metylester. En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av 3-hydroksy-4-nitro-benzosyre-metylester (394 mg* 2.0 mmol). trifenylfosfln (525 mg, 2.0 mmol) og 3-pyridylkarbinol (194 ul 2.0 mmol) i tørr tertrahydrofuran (5 ml), ble tilsatt di-isopropyl-azodikarboksylat (394 ul, 2.0 mmol i 1 ml tetrahydrofuran). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med saltsyre (30 ml av en IM løsning) og ekstrahert med etylacetat (2 x 50 ml). Den vandige løsningen ble gjort basisk med 10% vandig natriumkarbonat (50 ml), og produktet ble ekstrahert med etylacetat (3 x 100 ml). Etylacetaten ble vasket med mettet natriumkloridløsning (1 x 30 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga det ønskede råprodukt i form av et gråhvitt, fast stoff (76% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.71 (s, 1H), 8.62 (d, 1H), 7.88 (m, 3H), 7.79 (d, 1H), 7.39 (M. 1H), 5.31 (s, 2H), 3.98 (s, 3H).
Trinn 2: 4-amino-3-(pyirdin-3-ylmetoksy)-benzosyre-metylester. En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av 4-nitro-3-(pyirdin-3-ylmetoksy)-benzosyre-metylester (288 mg, 1.0 mmol) i metanol (2 ml) og mettet vandig ammoniumklorid (1 ml), ble tilsatt sinkstøv (131 mg, 2.0 mmol). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsbalndingen fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med 30 ml 10% vandig natriumkarbonat (2 x 30 ml), mettet natriumkloirdløsning (1 x 30 ml), deretter tørket (MgSCU) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga det ønskede produkt i form av et gult, fast stoff (97% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.78 (s, 1H), 8.61 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.59 (m, 2H), 7. 39 (m, 1H), 6.71 (d, 1H), 5.18 (s, 2H), 4.28 (br s. 2H), 3.85 (s, 3H).
Trinn 3: 4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-xireido]-3-(pyridin-3-ylmetoksy)-benzosyre-metylester. En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av 4-amino-3-(pyridin-3-yl-metoksy)-benzosyre-metylester (258 mg, 1.0 mmol) i toluen (3.0 ml), ble tilsatt trietylamin (139 ul, 1.0 mmol) og trifosgen (98 mg, 0.33 mmol). Etter omrøring i 30 minutter ble 5-metyl-2-aminopyrazin (109 mg, 1.0 mmol) tilsatt, og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 65°C. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til romtemperatur og ble deretter fortynnet med etylacetat (50 ml) og vann (50 ml). Presipitatet som ble dannet ble filtrert og tørket under redusert trykk, hvilket ga det ønskede materiale i form av et hvitt, fast stoff (47% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.29 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.68 (d, 1H), 8. 59 (br s, 1H), 8.48 (d, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.51 (m, 1H), 5.32 (s, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.32 (s,3H).
Trinn 4: 4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-3-(pyridin-3-ylmetoksy)-benzosyre. En omrørt løsning av 4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-3-(pyridin-3-ylmetoksy)-benzosyre-metylester (1.3 g; 3.3 mmol) i metanol (25 ml), ble tilsatt litiumhydroksyd (5 ml av en 2M vandig løsning). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 60 grader og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til romtemperatur og pH ble regulert til 5.5 med IN saltsyre. Presipitatet som ble dannet ble filtrert og tørket under redusert trykk, hvilket ga det ønskede produkt i form av et gyldenbrunt, fast stoff (90% utbytte). <*>H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 10.29 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.68 (d, 1H), 8.59 (br s, 1H), 8.48 (d, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.51 (m 1H), 5.32 (s, 2H), 2. 32 (s, 3H).
Forbindelse 236:
3 -(3 -dimetylamino-propoksy)-4- [3 -(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido] -benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av ammoniakk (33% utbytte). 1 H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.18 (s, 1H), 8.56 (br s, 1H), 8.20 (d, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.40 (s, 1H), 4.03 (m, 2H), 2.40 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.05 (s, 6H), 1.91 (m, 2H).
LRLCMS (esi, positiv) m/e 374.2 (M+l).
Forbindelse 237:
3-(3-dimetylamino-propoksy)-N,N-dimetyl-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av dimetylamin (97% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.30 (br s, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.78 (br s, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.04 (d, 1H), 4.16 (t, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.53 (m, 2H), 2.26 (s, 6H), 2.10 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 401.1 (M+l).
Forbindelse 238:
N-benzyl-3-(3-dimetylamino-propoksy)-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av benzylamin (65% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 8.43 (d, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.91 (br s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.38 (m, 4H), 7.31 (m, 1H), 6.41 (m, 1H), 4.64 (d, 2H), 4.20 (t, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.52 (m, 2H), 2.24 (s, 6H), 2.14 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 463.2 (M+l).
Forbindelse 239:
N-benzyl-3-(3-dimetylamino-propoksy)-N-metyl-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av N-metylbenzylamin (68% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.37 (br s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.37 (m, 4H), 7.31 (m, 1H), 7.18 (m, 2H), 4.67 (br m, 2H), 4.07 (br m, 2H), 2.99 (br s, 3H), 2.53 (s, 3H), 2.50 (br m, 2H), 2.24 (s, 6H), 2.06 (br m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 477.2 (M+l).
Forbindelse 240:
3-(3-dimetylamino-propoksy)-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(2-morfolin-4-yl-etyl)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av 2-morfolin-4-yl-etylamin (69% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 5 8.44 (d, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.90 (br s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.24 (d, 1H), 6.76 (m, 1H), 4.20 (t, 2H), 3.76 (m, 4H), 3.56 (m, 2H), 2.61 (m, 2H), 2.53 (m, 7H), 2.24 (s, 6H), 2.13 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 486.2 (M+l).
Forbindelse 241:
3-(3-dimetylamino-propoksy)-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-[2-(l-metylpyrrolidin-2-yl)-ehyl] -benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av 2-(l-metylpyrrolidin-2-ylamin (68% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 11.35 (br s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.46 (br s, 1H), 7.20 (m, 1H), 4.19 (m, 2H), 3.76 (m, 1H), 3.44 (m, 1H), 3.15 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.42 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.25 (s, 6H), 2.22 (m, 1H), 2.13 (m, 2H), 1.90 (m, 2H), 1.77 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 484.3 (M+l).
Forbindelse 242:
N-(2-dimetylamino-etyl)-3-(3-dimetylamino-propoksy)-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av 2-dimetylamino-etylamin (37% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.38 (br s, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.96 (br s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.27 (d, 1H), 6.79 (m, 1H), 4.20 (m, 2H), 3.53 (m, 2H), 2.52 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.26 (m, 2H), 2.24 (s, 6H), 2.22 (s, 6H), 2.12 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 444.2 (M+l).
Forbindelse 243:
N-(3-S-l-benzyl-pyrrolidin-3-yl)-3-(3-dimetylamino-propoksy)-4-[3-5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido] -benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av 1-benzyl-pyrrolidin-3-S-ylamin (20% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 8.61 (br s, 1H), 8.45 (d, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.16 (m, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.39 (d, 1H), 7.31 (m, 4H), 7.16 (m, 1H), 4.72 (m, 1H), 4.18 (m, 2H), 3.72 (dd, 2H), 3.04 (m, 1H), 2.96 (m, 1H), 2.69 (m, 1H), 2.53 (m, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.40 (m, 2H), 2.25 (s, 6H, 2.11 (m, 2H), 1.76 (m, 1H).
LRMS (esi, positiv) m/e 532.2 (M+l).
Forbindelse 244:
4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-3-(pyridin-3-ylmetoksy)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av ammoniakk (99% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.27 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.66 (d, 1H), 8.60 (br s, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.03 (m, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.37 (br m, 1H), 7.26 (br s, 1H), 5.32 (s, 2H), 2.32 (s, 3H).
LRMS (apci, positiv) m/e 379.1 (M+i).
Forbindelse 245:
N-metyl-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-3-(pyridin-3-ylmetoksy)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av metylamin (99% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.25 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.60 (m, 3H), 8. 26 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.37 (m, 1H), 5.34 (s, 2H), 2.79 (d, 3H), 2.36 (s, 3H).
LRMS (apci, positiv) m/e 393.2 (M+l).
Forbindelse 246:
N,N-dimetyl-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-3-(pyridin-3-ylmetoksy)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av dimetylamin (88% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.16 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.66 (d, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.28 (d, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.37 (br s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.03 (d, 1H), 5.30 (s, 2H), 2.95 (s, 6H), 2.33 (s, 3H).
LRMS (apci, positiv) m/e 407.4 (M+l).
Forbindelse 247:
N-benzyl-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-3-(pyridin-3-ylmetoksy)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av benzylamin (41% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO) 8 10.23 (s, 1H), 9.05 (t, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.67 (d, 1H), 8.58 (br s, 1H), 8.33 (d, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.33 (m, 4H), 7.25 (m, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.50 (d, 2H), 2.32 (s, 3H).
LRMS (apci, positiv) m/e 469.1 (M+l).
Forbindelse 248:
N-benzyl-N-metyl-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl^
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av N-metylbenzylamin (71% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.16 (s, 1H), 8.76 (br s, 1H), 8.64 (d, 1H), 8.57 (m, 1H), 8.28 (brm, 1H), 7.95 (brm, 1H), 7.48 (m, 1H), 7.40-7.23 (brm, 7H), 7.06 (m, 1H), 5.23 (br m, 2H), 4.62 (br m, 2H), 2.88 (s, 3H), 2.33 (s, 3H).
LRMS (apci, positiv) m/e 483.3 (M+l).
Forbindelse 249:
4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-(2-morfolin-4-yl-etyl)-3-(pyridin-3-ylmetoksy)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av 2-morfolin-4-yl-etylamin (99% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.27 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.66 (d, 1H), 8.61 (br s, 1H), 8.52 (t, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.36 (m, 1H), 5.33 (s, 2H), 3.56 (m, 4H), 3.40 (m, 2H), 2.48 (m, 2H), 2.43 (m, 4H), 2.34 (s, 3H).
LRMS (apci, positiv) m/e 492.4 (M+l).
Forbindelse 250:
4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-N-[2-(l-metyl-pyrrolidin-2-yl)-etyl] 3 -(pyridin-3 -ylmetoksy)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av 2-(l-metylpyrrolidin-2-yl)-etylamin (99% utbytte). 1 H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.21 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.64 (d, 1H), 8.58 (br s, 1H), 8.49 (m, 1H), 8.33 (d, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.34 (m, 1H), 5.33 (s, 2H), 3.28 (m, 2H), 2.95 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.04 (m, 2H), 1.90 (m, 2H), 1.62 (m, 2H), 1.44 (m, 2H).
LRMS (apci, positiv) m/e 490.3 (M+l).
Forbindelse 251:
N-(2-dimetylamino-etyl)-4-[3 -(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido] -3 -(pyridin-3 -ylmetoksy)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 208, ved bruk av 2-dimetylamino-etylamin (99% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.24 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.66 (d, 1H), 8.60 (br s, 1H),
8.43 (t, 1H), 8.30 (d, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.35 (brm, 1H), 5.32 (s, 2H), 3.36 (m, 2H), 2.39 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.18 (s, 6H).
LRMS (apci, positiv) m/e 450.2 (M+l).
Forbindelse 252:
N-(3-S-l-benzyl-pyrrolidin-3-yl)-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-3-(pyridin-3-ylmetoksy)-benzamid
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 215, ved bruk av 1-benzyl-pyrrolidin-3-S-ylamin (99% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.26 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8. 66 (d, 1H), 8.60 (br s, 1H), 8.47 (d, 1H), 8.28 (d, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.51 (m, 1H), 7.32 (m, 4H), 7.24 (m, 1H), 5.31 (s, 2H), 4.40 (m, 1H), 3.60 (s, 2H), 2.80 (m, 1H), 2.64 (m, 1H), 2.45 (m, 2H), 2. 34 (s, 3H), 2.15 (m, 1H), 1.85 (m, 1H).
LRMS (apci, positiv) m/e 538.2 (M+l).
Forbindelse 253:
l-[2-(3-dimetylamino-propoksy)-5-metyl-fenyl]-3-pyrazin-2-yl-urea
Trinn 1: (2-hydroksy-5-metyl-fenyl)-karbaminsyre-tert-butylester. En omrørt løsning av 2-amino-4-metyl-fenol (6.15 g; 50 mmol) i dioksan (100 ml), ble tilsatt karbonsyre-di-tert-butylester (9.8 g; 45 mmol), etterfulgt av natriumbikarbonat (12.6 g; 150 mmol i 75 ml H2O). Etter omrøring i 8 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 100 ml etylacetat og vasket med IN vandig saltsyre (2 x 100 ml), mettet vandig natriumbikarbonat (1 x 100 ml) og mettet natriumkloridløsning (100 ml), deretter tørket (MgSC>4) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga den ønskede (2-hydroksy-5-metyl-fenyl)-karbaminsyre-tert-butylester i form av et brunt, fast stoff (95% utbytte).
Trinn 2: [2-(3-dimetylamino-propoksy)-5-metyl-fenyl]-karbaminsyre-tert-butylester. En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av (2-hydroksy-5-metyl-fenyl)-karbaminsyre-tert-butylester (447 mg, 2.0 mmol), trifenylfosfin (525 mg, 2.0 mmol) og 3-(dimetylamino)-l-propanol (237 ul, 2.0 mmol) i tørr tetrahydrofuran (5 ml), ble tilsatt di-isopropyl-azodikarboksylat (394 ul, 2.0 mmol) i 1 ml tetrahydrofuran. Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med 30 ml 10% vandig natriumkarbonat (2 x 30 ml), mettet natriumkloirdløsning (1 x 30 ml), deretter tørket (MgSC*4) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga det ønskede råprodukt.
Trinn 3: 2-(3-dimetylamino-propoksy)-5-metyl-fenylamin. En omrørt løsning av [2-(3-dimetylamino-propoksy)-5-metyl-fenyl]-karbaminsyre-tert-butylester (617 mg, 2.0 mmol) i 5 ml dioksan, ble tilsatt saltsyre (2 ml; 4N i dioksan). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 20 ml IN saltsyre og vasket med etylacetat (2 x 30 ml). Det vandige laget ble gjort basisk med 10% vandig natriumkarbonat (50 ml) og ekstrahert med etylacetat (3 x 50 ml). Etylacetaten ble vasket med mettet natriumkloirdløsning (1 x 30 ml) og ble deretter tørket (MgSCU) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga det tilsvarende anilin.
Trinn 4: l-[2-(3-dimetylamino-propoksy)-5-metyl-fenyl]-3-pyrazin-2-yl-urea. En omrørt, avkjølt (omtrent 0"C) løsning av 2-(3-dimetylamino-propoksy)-5-metyl-fenylamin (208 mg, 1.0 mmol) i toluen (3.0 ml) ble tilsatt trietylamin (140 ul, 1.0 mmol) og trifosgen (98 mg, 0.33 mmol). Etter omrøring i 30 minutter ble aminopyrazin (95 mg, 1.0 mmol) tilsatt og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 65°C. Etter omrøring i 4 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur og omrørt i 8 timer. Fellingen som ble dannet ble filtrert, skyllet med toluen (2 x 1 ml) og tørket under redusert trykk (35%
utbytte).
1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.45 (s, 1H), 8.39 (br s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.21 (d, 1H), 8.19 (d, 1H), 4.09 (t, 2H), 2.55 (t, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.26 (s, 6H), 2.05 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 330.10 (M+l).
Forbindelse 254:
l-[2-(2-dimetylamino-etoksy)-5-metyl-fenyl]-3-pyrazin-2-yl-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253, ved bruk av N,N-dimetyletanolamin (36% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.79 (br s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 4.15 (t, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.31 (t, 2H), 2.26 (s, 6H),
LRMS (esi, positiv) m/e 316.21 (M+l).
Forbindelse 255:
l-[5-metyl-2-(pyridin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-pyrazin-2-yl-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253, ved bruk av 3-hydroksymetylpyridin (10% utbytte). 1 H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 8.82 (s, 1H), 8.65 (d, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.21 (s, 2H), 8.05 (s, 1H), 7.81 (m, 2H), 7.35 (m, 1H), 6.9 (dd, 2H), 5.15 (s, 2H), 2.39 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 336.21 (M+l).
Forbindelse 256:
l-{5-metyl-2-[3-(2-okso-pyrrolidin-l-yl)-propoksy]-fenyll-3-pyrazin--2-yl-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253, ved bruk av 3-(2-okso-pyrrolidin-1 -yl)-propanol (10% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.79 (s, 1H), 8. 29 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8. 05 (s, 1H), 6.92 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 3.99 (t, 2H), 3.38 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 2.20 (t, 2H), 2.00 (t, 2H), 1.91 (t,2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 392.2 (M+Na).
Forbindelse 257:
l-[5-metyl-2-(2-morfolin-4-yl-etoksy)-fenyl]-3-pyrazin-2-yl-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253, ved bruk av 2-morfolin-4-yl-etanol (39% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.79 (s, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.05 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 4.19 (t, 2H), 3.59 (m, 4H), 2.80 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.22 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 358.2 (M +1).
Forbindelse 258:
1 - [5 -metyl-2-(3 -morfolin-4-yl-propoksy)-fenyl.] -3 -(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253, ved bruk av 3-morfolin-4-yl-propanol (8% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 9.01 (s, 1H), 8.62 (br s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 6.91 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 4.05 (t, 2H), 3.59 (m, 4H), 2.48 (s, 3H), 2.45 (t, 2H), 2.35 (m, 4H), 2.21 (s, 3H), 2.00 (t, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 386.31 (M+l).
Forbindelse 259:
l-[2-(3-dimetylamino-propoksy)-5-metyl-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253, ved bruk av 3-dimetylamino-propanol (40% utbytte). 1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.37 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.09 (br s, 1H), 6.80 (dd, 2H), 4.05 (t, 2H), 2.55 (t, 2H), 2.54 (s, 3H), 2. 36 (s, 3H), 2.26 (s, 6H), 2.05 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 344.20 (M+l).
Forbindelse 260:
l-[5-metyl-2-(2-morfolin-4-yl-etoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253, ved bruk av 2-morfolin-4-yl-etanol (10% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 10.79 (br s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 6.81 (dd, 2H), 4.20 (t, 2H), 3.75 (m, 4H), 2.91 (t, 2H), 2.61 (m, 4H), 2.55 (s, 3H), 2.35 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 372.1 (M+l).
Forbindelse 261:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(pyridin-2-ylmetoksy)-fenyl]-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253, ved bruk av 2-hydroksymetylpyridin (21% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 8.61 (d, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.61 (t, 1H), 7.31 (d, 1H), 7.18 (t, 1H), 6.88 (d, 1H), 6.75 (d, 1H), 5.18 (s, 2H), 2.30 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 372.2 (M+Na).
Forbindelse 262:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(pyridin-4-ylmetoksy)-fenyl]-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253, ved bruk av 4-hydroksymetylpyridin (18% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.84 (s, 1H), 8.55 (d, 2H), 7.91 (s, 1H), 7.47 (d, 2H), 6.88 (d, 1H), 6.72 (d, 1H), 5.28 (s, 2H), 2.22 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 350.21 (M+l).
Forbindelse 263:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(pyridin-3-ylmetoksy)-fenyl]-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253, ved bruk av 3-hydroksymetylpyridin (10% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.82 (s, 1H), 8.68 (m, 2H), 8.25 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.38 (m, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.88 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 5.10 (s, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.35 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 350.21 (M+l).
Forbindelse 264:
l-[2-(2-dimetylamino-etoksy)-5-metyl-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253, ved bruk av N,N-dimetyletanolamin (11% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.69 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 4.11 (t, 2H), 2.72 (t, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.22 (s, 6H). LRMS (esi, positiv) m/e 330.20 (M+l).
Forbindelse 265:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[2-(pyridin-3-ylmetoksy)-5-trifluormetyl-fenyl]-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253, ved bruk av 3-hydroksymetylpyridin og 2-hydroksy-5-trifluormetylanilin (40% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, dVDMSO) 8 8.81 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.59 (br s, 1H), 8.01 (d, 1H), 7.45 (t, 1H), 7.3 (br s, 1H), 5.39 (s, 2H), 2.35 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 404.10 (M+l).
Forbindelse 266:
l-[5-metyl-2-(6-metyl-pyridin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-(^^
Trinn 1: (6-metyl-pyridin-3-yl)-metanol. En omrørt, avkjølt (0°C) løsning av 6-metyl-nikotinsyre (5.0 mmol) i tetrahydrofuran (10 ml), ble tilsatt litiumaluminiumhydrid (20 mmol; 20 ml av en IM løsning i tetrahydrofuran) dråpevis. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 4 timer og behandlet sekvensielt med 1 ml H20,1 ml 15% vandig natriumhydroksyd og 3 ml H2O. Reaksjonsblandingen ble filtrert og vasket med tetrahydrofuran (3 x 50 ml). Filtratet ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga alkoholen i form av en klar, viskøs olje.
Trinn 2-3: Mitsunobu-reaksjon og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 4: En omrørt løsning av 5-metyl-pyrazin-2-karboksylsyre (138 mg, 1.0 mmol) i toluen (3.0 ml), ble tilsatt difenylfosforylazid (216 ul, 1.0 mmol) og trietylamin (140 ul, 1.0 mmol). Reaksjonsblandingen ble plassert under nitrogen og oppvarmet til 90°C i 15 minutter. Temperaturen ble senket til 65°C og 5-metyl-2-(6-metyl-pyridin-3-ylmetoksy)-fenylamin (228 mg, 1.0 mmol) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved denne temperaturen i 4 timer og ble deretter omrørt ved romtemperatur i 8 timer. Fellingen som ble dannet i løpet av reaksjonen, ble filtrert, skyllet med toluen (2x1 ml) og tørket under redusert trykk (36% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 11.45 (br s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.19 (d, 1H), 6.9 (m, 3H), 5.05 (s, 2H), 2.65 (s, 3H), 2.4 (s, 3H), 2.35 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 364.16 (M+l).
Forbindelse 267:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(2-pyridin-2-yl-etoksy)-fenyl]-urea
Trinn 1-2: Mitsunobu-reaksjon ved bruk av 2-(2-pyridyl)-etanol og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 5-metyl-2-(2-pyridin-2-yletoksy)-fenylamin (37% utbytte). 1 H-NMR (400 MHz, CDCU) 8 10.70 (br s, 1H), 8.65 (d, 1H), 8.45 (br s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.59 (t, 1H), 7.29 (t, 1H), 6.80 (dd, 2H), 4.49 (t, 2H), 3.39 (t, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.39 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 364.14 (M+l).
Forbindelse 268:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(3-pyridin-2-yl-propoksy)-fenyl]-urea
Trinn 1-2: Mitsunobu-reaksjon ved bruk av 3-(2-pyridyl)-propanol og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 5-
metyl-2-(3-pyridin-2-yl-propoksy)-fenylaniin (5% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 10.89 (br s, 1H), 8.59 (d, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.45 (br s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.59 (t, 1H), 7.15 (d, 2H), 6.88 (dd, 2H), 4.05 (t, 2H), 3.10 (t, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.40 (t, 2H), 2.35 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 378.10 (M+l).
Forbindelse 269:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(3-pyridin-4-yl-propoksy)-fenyl]-urea
Trinn 1-2: Mitsunobu-reaksjon ved bruk av 3-(4-pyridyl)-propanol og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 5-metyl-2-(4-pyridin-2-yl-propoksy)-fenylamin (28% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 811.15 (br s, 1H), 8.51 (d, 2H), 8.25 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.15 (d, 2H), 6.82 (d, 1H), 6.75 (d, 1H), 4.05 (t, 2H), 2.91 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.25 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 378.16 (M+l).
Forbindelse 270:
1 - {2-[2-(Benzyl-metyl-amino)-etoksy]-5-m
Trinn 1-2: Mitsunobu-reaksjon ved bruk av N-metyl-N-benzyletanolamin og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 2-[2-(benzyl-metyl-amino)-etoksy]-5-metyl-fenylamin (17% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 10.70 (br s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.32 (m, 5H), 6.85 (s, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.62 (s, 2H), 2.92 (t, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.29 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 406.01 (M+l).
Forbindelse 271:
l-[5-metyl-2-(l-metyl-piperidin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1-2: Mitsunobu-reaksjon ved bruk av 3-hydroksymetyl-l-metylpiperidin og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 5-metyl-2-(l-metyl-piperidin-3-ylmetoksy)-fenylamin (16% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 11.25 (br s, 1H), 8.45 (br s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.22 (s, 2H), 6.80 (d, 1H), 6.74 (d, 1H), 3.80 (m, 2H), 3.15 (br d, 1H), 2.80 (br d, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.30 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.50-2.00 (m, 6H), 1.00-1.25 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 370.01 (M+l).
Forbindelse 272:
l-{2-[2-(4-dimetylamino-fenyl)-etoksy]-5-metyl-fenyl}-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1-2: Mitsunobu-reaksjon ved bruk av 2-(4-dimetylamino-fenyl)-etanol og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 2-[2-(4-dimetylamino-fenyl)-etoksy]-5-metyl-fenylamin (10% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 11.15 (br s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.80 (m, 2H), 7.25 (m, 2H), 6.82 (s, 2H), 6.75 (d, 2H), 4.25 (t, 2H), 3.20 (t, 2H), 2.99 (s, 6H), 2.55 (s, 3H), 2.41 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 405.90 (M+l).
Forbindelse 273:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(3-pyridin-3-yl-propoksy)-fenyl]-urea
Trinn 1-2: Mitsunobu-reaksjon ved bruk av 3-(3-pyridyl)-propanol og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 5-metyl-2-(3-pyridin-3-yl-propoksy)-fenylamin (16% utbytte). 1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 10.95 (br s, 1H), 8.51 (m, 2H), 8.35 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.21 (t, 1H), 6.79 (d, 1H), 6.75 (d, 1H), 4.09 (t, 2H), 2.90 (t, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.25 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 377.91 (M+l).
Forbindelse 274:
l-[2-(2-dimetylamino-l-dimetylaminometyl-etoksy)-5-metyl-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1-2: Mitsunobu-reaksjon ved bruk av l,3-bis-dimetylamino-propan-2-ol og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 2-(2-amino-4-metylfenoksy)-N,N,N',N'-tetrametyl-propan-l,3-diamin (4% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 9.69 (br s, 1H), 8.95 (br s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 6.80 (dd, 2H), 4.19 (m, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 2.65 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.45 (s, 6H), 2. 8 (s, 6H), 2.35 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 386.92 (M+l).
Forbindelse 275:
l-[5-metyl-2-(2-S-l-metyl-pyrrolidin-2-ylmetoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-y^
Trinn 1-2: Mitsunobu-reaksjon ved bruk av l-metyl-pyrrolidin-2-S-ylmetanol og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 5-metyl-2-(l-metyl-pyrrolidin-2-S-ylmetoksy)-fenylamin (12% utbytte). 1 H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.10 (s, 1H), 9.85 (br s, 1H), 9.65 (brs, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 6.90 (s, 1H), 7.02 (d, 1H), 6.85 (d, 1H), 4.33 (br s, 2H), 3.88 (m, 1H), 3.59 (m, 1H), 3.19 (m, 1H), 2.99 (d, 2H), 2.70-2.85 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 1.80-2.10 (m, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 355 91 (M+l)
Forbindelse 276:
l-[2-(2-S-l-benzyl-pyrrolidin-2-ylmetoksy)-5-metyl-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1-2: Mitsunobu-reaksjon ved bruk av l-benzyl-pyrrolidin-2-S-ylmetanol og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 5-metyl-2-(l-benzylpyrrolidin-2-S-ylmetoksy)-fenylamin (3% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, dVDMSO) 8 9.95 (s, 1H), 9.90 (br s, 1H), 9.59 (br s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.25-7.50 (m, 6H), 6.96 (d, 1H), 6.90 (d, 1H), 4.75 (d, 2H), 4.33 (m, 4H), 4.10 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.80-2.10 (m, 3H), 1.10-1.30 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 432.31 (M+l).
Forbindelse 277:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(2-pyrrolidin-l-yl-etoksy)-fenyl]-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 2-pyrrolidin-l-yl-etanol (28% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, dVDMSO) 8 10.01 (s, 1H), 9.85 (br s, 1H), 9.72 (br s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.01 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 4.40 (t, 2H), 3.62 (m, 4H), 3.21 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.00 (m, 2H), 1.88 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 356.2 (M+l).
Forbindelse 278:
l-{5-metyl-2-[2-(l-metyl-pyrrolidin-2-yl)-etoksy]-fenyl}-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 2-(l-metylpyrrolidin-2-yl)-etanol (32% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.01 (s, 1H), 9.85 (br s, 1H), 9.72 (br s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.01 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 4.20 (m, 3H), 3.00-4.00 (m, 11H), 2.80 (d, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.25 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 370.2 (M+l).
Forbindelse 279:
l-[2-(3H-imidazol-4-ylmetoksy)-5-metyl-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av (3H-imidazol-4-yl)-metanol (24% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.51 (br s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.20-7.50 (m, 2H), 7.10 (d, 1H), 6.75 (d, 1H), 4.99 (s, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.25 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 339.1 (M+l).
Forbindelse 280:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(2-pyridin-3-yl-etoksy)-fenyl]-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 2-pyridin-3-yl-etanol (16% utbytte)
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 10.98 (br s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.49 (d, 1H), 8.35 (s, 2H) 8.20 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.19 (m, 1H), 6.82 (dd, 2H), 4.31 (t, 2H), 3.21 (t, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.35 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 364.2 (M+l).
Forbindelse 281:
l-[5-metyl-2-(3-piperidin-l-yl-propoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 3-piperidin-l-yl-propan-l-ol (33% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.21 (br s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.25 (s, 2H), 8.15 (s, 1H), 6.80 (dd, 2H), 4.15 (t, 2H), 2.53 (t, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.45 (m, 4H), 2.39 (s, 3H), 2.10 (m, 2H), 1.61 (m, 4H), 1.45 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 384.2 (M+l).
Forbindelse 282:
l-[5-metyl-2-(l-metyl-piperidin-4-yloksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 1-metylpiperidin-4-ol (4% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 11.22 (br s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 6.81 (dd, 2H), 4.25 (m, 1H), 2.8 (m, 2H), 2.59 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.19 (m, 4H), 1.90 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 355.9 (M+l).
Forbindelse 283:
l-[2-(l-benzyl-pipeirdin-4-yloksy)-5-metyl-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266, ved bruk av 1-benzyl-piperidin-4-ol (1% utbytte).
LRMS (esi, positiv) m/e 432.0 (M+l).
Forbindelse 284:
l-[5-metyl-2-(3-(S)-l-metyl-piperidin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1: (l-metyl-piperidin-3-(S)-yl)-metanol. En omrørt, avkjølt løsning av (S)-(+)-N-boc-nipekotinsyre (5.0 mmol) i tetrahydrofuran (10 ml), ble tilsatt litiumaluminiumhydrid (20 ml, 20 mmol IM i tetrahydrofuran) dråpevis. Reaksjonen ble tilbakeløpskokt i 12 timer og deretter avkjølt til 0°C. Reaksjonen ble stanset med 1 ml FfeO, 1 ml 15% vandig natriumhydroksyd, 3 ml H2O. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filterkaken ble vasket med tetrahy&ofuran (3 x 50 ml.) Filtratet ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga en klar, viskøs olje.
Trinn 2-3: 5-metyl-2-(l-metyl-piperidin-3-(S)-ylmetoksy)-fenylamiii. Mitsunobu-reaksjon og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 4: Fremstilt i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 266 (33% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 11.25 (br s, 1H), 8.45 (br s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.22 (s, 2H), 6.80 (d, 1H), 6.74 (d, 1H), 3.80 (m, 2H), 3.15 (br d, 1H), 2.80 (br d, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.30 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.50-2.00 (m, 6H), 1.00-1.25 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 370.0 (M+l).
Forbindelse 285:
l-[5-metyl-2-(3-(R)-l-metyl-pipeirdin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-iirea
Trinn 1-3: 5-metyl-2-(l-metyl-piperidiii-3-(R)-ylmetoksy)-fenylamiii i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 284 ved bruk av (R)-(+)-N-boc-nipekotinsyre.
Trinn 4: 5-metylpyrazin-2-karboksylsyre-azid (1.2 ekv.) oppløst i vannfri toluen (0.1 M konsentrasjon) ble oppvarmet til 90°C. Etter 20 minutter hadde N2-utviklingen avtatt og den karamellfargede reaksjonsblandingen ble avkjølt til 60°C før tilsetning av anilinet fremstilt ovenfor som en løsning i toluen (1 ekv.). Etter omrøring i 4 timer ved 60°C ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur natten over. Presipitatet som ble dannet ble isolert ved filtrering (49% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 11.25 (br s, 1H), 8.45 (br s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.22 (s, 2H), 6.80 (d, 1H), 6.74 (d, 1H), 3.80 (m, 2H), 3.15 (br d, 1H), 2.80 (br d, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.30 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.50-2.00 (m, 6H), 1.00-1.25 (m, 2H).
LRMS (esi, positiv) m/e 370.0 (M +1).
Forbindelse 286:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(l-pyridin-3-yl-etoksy)-fenyl]-urea
Trinn 1: l-pyridin-3-yl-etanol. En omrørt, avkjølt (-78°C) løsning av pyridin-3-karbaldehyd (15 mmol) i tetrahydrofuran (40 ml), ble tilsatt metylmagnesiumbromid (5 ml, 15 mmol, 3M i dietyleter). Etter omrøring i 2 timer ble reaksjonen stanset med mettet vandig ammoniumklorid (5 ml). pH ble regulert til ~5.0 med vandig natriumkarbonat, og produktet ble ekstrahert med etylacetat (3 x 100 ml). Etylacetaten ble vasket med mettet natriumkloirdløsning (1 x 100 ml), tørket (MgSCU) og filtrert. Det filtrerte materialet ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga en gul olje.
Trinn 2-3: 5-metyl-2-(l-pyridin-3-yl-etoksy)-fenylamin. Mitsunobu-reaksjon og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 4: Urea-dannelse ble utført i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 285 (17% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.49 (br s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.52 (d, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.72 (d, 1H), 7.20 (t, 1H), 6.70 (d, 1H), 6.65 (d, 1H), 5.49 (q, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 1.75 (d, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 363.8 (M+l).
Forbindelse 287:
l-[5-metyl-2-(l-metyl-piperidin-2-ylmetoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1-2:5-metyl-2-(l-metyl-piperidin-2-ylmetoksy)-fenylamin. Mitsunobu-reaksjon og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse ble utført i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 285 (11% utbytte.)
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 10.90 (br s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 6.80 (s, 2H), 4.51 (m, 1H), 2.58-3.00 (m, 4H), 2.52 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 1.50-2.25 (m, 7H).
LRMS (esi, positiv) m/e 369.9 (M+l).
Forbindelse 288:
l-(S-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(tetrahydro-furan-2-ylmetoksy)-fenyl]-urea
Trinn 1-2:5-metyl-2-(tetrahydro-furan-2-ylmetoksy)-fenylamin. Mitsunobu-reaksjon og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse ble utført i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 285 (12% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 11.25 (br s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 6.8 (s, 2H), 4.42 (m, 1H), 3.80-4.10 (m, 4H), 2.52 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 1.20-2.20 (m, 4H).
LRMS (ESI, positiv) m/e 342.9 (M+l).
Forbindelse 289:
l-[5-metyl-2-(l-metyl-piperidin-4-ylmetoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-^
Trinn 1: (l-metyl-piperidin-4-yl)-metanol. En omrørt, avkjølt løsning av 1-metyl-piperdin-4-karboksylsyre (5.0 mmol) i tetrahydrofuran (10 ml), ble tilsatt litiumaluminiumhydrid (20 ml, 20 mmol, IM tetrahydrofuran) dråpevis. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 4 timer og behandlet med 1 ml H20,1 ml 15% vandig natriumhydroksyd og 3 ml H2O..Reaksjonsblandingen ble filtrert og vasket med tetrahydrofuran (3 x 50 ml). Filtratet ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga en klar, viskøs olje.
Trinn 2-3: 5-metyl-2-(l-metyl-piperidin-4-yImetoksy)-fenyIamin. Mitsunobu-reaksjon og anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 4: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 285 (54% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 511.18 (br s, 1H), 8.62 (br s, 1H), 8.38 (br s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.78 (d, 1H), 3.85 (d, 2H), 2.90 (br d, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.35 (m, 6H), 1.50-2.10 (m, 7H).
LRMS (esi, positiv) m/e 369.2 (M+l).
Forbindelse 290:
l-[5-metyl-2-(l-metyl-piperidin-3-yloksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea Trinn 1-2: 5-metyl-2-(l-metyl-pipeirdin-3-yloksy)-fenylamin. Mitsunobu-reaksjon og
anilin-avbeskyttelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 253.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 285 (3% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 6 10.75 (br s, 1H), 8.59 (br s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 6.90 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 4.40 (m, 1H), 2.58 (s, 3H), 2.39 (s, 6H), 1.60-2.80 (m, 8H).
LRMS (esi, positiv) m/e 356.1 (M+l).
Forbindelse 291:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[S-metyl-2-(l,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-ylmetoksy)-fenyl]-urea
Trinn 1: Kinolin-3-karboksylsyre-metylester. En omrørt løsning av kinolin-3-karboksylsyre (346 mg, 2 mmol) oppløst i 4:1 THF:MeOH (6 ml) ved 0°C, ble tilsatt TMS-diazometan (2M i heksan) porsjonsvis inntil en diazometan-gul farge vedvarte. Reaksjonsblandingen ble inndampet, hvilket ga metylesteren i form av et gyldenbrunt, fast stoff (244 mg, 65%). 1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 9.44 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.17 (d, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.84 (dd, 1H), 7.62 (dd, 1H), 4.02 (s, 3H).
Trinn 2:1^3»4-tetrahydro-kinolin-3-karboksylsyre-metylester og l-etyl-l,2,3»4-tetrahydrokinolin-3-karboksylsyre-metylester. En omrørt løsning av kinolin-3-karboksylsyre-metylesteren (244 mg, 1.3 mmol) i iseddik (13 ml) ved romtemperatur, ble tilsatt NaBH4 (345 mg, 9.1 mmol) porsjonsvis (kraftig reaksjon). Etter fullført tilsetning ble reaksjonsblandingen mørkegul. Etter omrøring i 3 timer hadde fargen blitt blekgul. Reaksjonsblandingen ble hellet i 50 ml H2O og 50 ml CH2CI2 og omrørt raskt i 15 min. Lagene ble separert og de organiske faser ble inndampet til en gul olje. TLC i 15/85 EtOAc/heksan viste at utgangsmaterialet var fullstendig forbrukt og viste to nye lavere rf-flekker. Forbindelsen ble kromatografert ved bruk av en Biotage 12M-kolonne (fylt med CH2CI2) og eluert med 15/85 EtOAc/heksan. Den høyeste flekken tilsvarte det N-etylerte produktet (123 mg, 43%). Den laveste flekken tilsvarte den ønskede tetrahydrokinolin-3-karboksylsyre-metylester (93 mg, 37%). N-etyl-derivat: 'H-NMR (400
MHz, CDCI3) 8 7.08 (dd, 1H), 6.99 (d, 1H), 6.60 (m, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.42 (m, 3H), 3.27 (m, 1H), 2.98 (m, 3H), 1.14 (t, 3H). N-H-derivat: <l>H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 6.98 (m, 2H), 6.62 (dd, 1H), 6.47 (d, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.52 (m, 1H), 3.34 (m, 1H), 3.00 (m, 2H), 2.90 (m, 1H).
Trinn 3: (l,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-yl)-metanol. En omrørt løsning av 1,2,3,4-tetrahydrokinolin-3-karboksylsyre-metylesteren (93 mg, 0.49 mmol) i 1.5 ml Et20 ved 0°C under nitrogen, ble tilsatt L1AIH4 (IM i Et20) dråpevis under kraftig gassutvikling og dannelse av et hvitt presipitat. Etter 30 min ble reaksjonen forsiktig behandlet med 15% NaOH (3 ml), 3 ml Et20 ble tilsatt og blandingen ble omrørt raskt ved RT i 15 min. Lagene ble separert og det vandige laget ble ekstrahert (1x10 ml) med Et20. De organiske faser ble samlet, tørket (MgS04), filtrert og inndampet til alkoholen (64 mg, 80%).<1>H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 6.97 (m, 2H), 6.62 (dd, 1H), 6.47 (d, 1H), 3.66 (m, 1H), 3.58 (m, 1H), 3.40 (m, 1H), 3.08 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.53 (m, 1H), 2.18 (m, 1H).
Trinn 4: [5-metyl-2-(l,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-ylmetoksy)-fenyl]-karbaminsyre-tert-butylester. En omrørt løsning av 2-N-Boc-amino-4-metylfenol (88 mg, 0.39 mmol), (l,2,3,4-tetrahydrokinolin-3-yl)-metanol (64 mg, 0.39 mmol) og trifenylfosfin (103 mg, 0.39 mmol) i 850 ul THF ved 0°C under nitrogen, ble tilsatt en løsning av DIAD (77 ul, 0.39 mmol) i 850 ul THF. Reaksjonsblandingen fikk oppvarmes til romtemperatur natten over, ble inndampet og overført direkte til en Biotage 12M-kolonne med CH2CI2 og eluert med 96/4 heksan/EtOAc. Produktet ble isolert i form av en gul olje (129 mg, 89%).'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 7.92 (br s, 1H), 7.06 (br s, 1H), 6.99 (m, 2H), 6.81 (m, 1H), 6.73 (s, 2H), 6.65 (dd, 1H), 6.51 (d, 1H), 3.96 (m, 2H), 3.37 (ddd. 2H), 2.79 (ddd. 2H), 2.56 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 1.54 (s, 9H).
Trinn 5: 3 -(2-tert-butoksykarbonylaminb-4-metyl-fenoksymetyl)-3,4-dihydro-2H-kinolin-1-karboksylsyre-benzylester. Til en omrørt løsning av [5-metyl-2-(l,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3ylmetoksy)-fenyl]-karbaminsyre-tert-butylester. En omrørt løsning av 2-N-Boc-amino-4-metylfenol (129 mg, 0.35 mmol) i CH2CI2 (1.5 ml) ved 0°C under nitrogen, ble tilsatt DIEA (61 ul, 0.35 mmol), etterfulgt av benzylklorformiat (50 ul, 0.35 mmol) og DMAP (4 mg, 0.035 mmol). Etter 24 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet til 30 ml med CH2CI2 og vasket med (2 x 30 ml) 2N HC1 og (2 x 30 ml) mettet NaHC03. De organiske faser ble tørket (MgSO/O, filtrert og inndampet til en brun olje som så ut til være en blanding av produkt og utgangsmateriale.
Trinn 6: 3 -(2-amino-4-metyl-fenoksymetyl)-3,4-dihydro-2H-kinolin-1 -karboksylsyre-benzylester. En løsning av den rå 3-(2-tert-butoksykarbonylamino-4-metyl-fenoksymetyl)-3,4-dihydro-2H-kinolin-l-karboksylsyre-benzylesteren (rå, 0.35 mmol) i 4N HC1 i dioksan (2 ml) ved romtemperatur, ble omrørt under et tørkerør natten over. Suspensjonen ble inndampet på rotavapor, fortynnet til 30 ml med CH2CI2 og ristet med 10% Na2C03 (30 ml). De organiske faser ble isolert, tørket (MgSC^), filtrert og inndampet til en brun olje som var det rå anilinet som ble anvendt uten rensning i den urea-dannende reaksjon.
Trinn 7:3- {4-metyl-2-[3 -(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-fenoksymetyl} -3,4-dihydro-2H-kinolin-l-karboksylsyre benzylester. En 0.5 M løsning av 5-metyl-pyrazin-2-karboksylsyre-azidet (204 ul) ble fortynnet med toluen (408 ul) i en septum-lukket reaksjonsflaske som var nedsenket i et 90°C oljebad, under nitrogen og omrøring. Etter ca. 20 minutter hadde nitrogengass-utviklingen stanset, så reaksjonsblandingen fikk avkjøles til romtemperatur og ble behandlet med en løsning av den rå 3-(2-amino-4-metyl-fenoksymetyl)-3,4-dihydro-2H-kinolin-l-karboksylsyre-benzylesteren (ca. 0.101 mmol) i toluen (620 ul). Blandingen ble omrørt ved 65°C i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur natten over og et presipitat ble dannet. Fellingen ble filtrert fra med toluen og så ut til å være en blanding av Cbz-beskyttet og avbeskyttet produkt.
Trinn 8: 1 -(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(l ,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-ylmetoksy)-fenyljurea. En omrørt suspensjon av den rå 3-{4-metyl-2-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-fenoksymetyl}-3,4-dihydro-2H-kinolin-l-karboksylsyre-benzylesteren (6.6 mg, 12 mol) ble oppvarmet i 5 ml EtOAc på et gassbluss ("heat gun") inntil den var løst. Den klare løsningen ble avkjølt til romtemperatur og behandlet med trietylamin (3.4 ul, 24 umol), etterfulgt av Pearlmans katalysator (20% palladiumhydroksyd på karbon, 9 mg). Blandingen ble ført gjennom en vakuum/rense-cyklus tre ganger med hydrogengass og deretter holdt under 1 atmosfæres hydrogen-trykk i 1 time. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom GF/F-filterpapir med EtOAc og inndampet til et hvitt, fast stoff som var det ønskede produkt (4.7 mg, 100%).1 H-NMR (400 MHz, CDCI3/CD3OD) 8 8.23 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.04 (t, 1H), 6.97 (d, 1H), 6.81 (m, 2H), 6.67 (t, 1H), 6.58 (d, 1H), 4.04 (m, 2H), 3.57 (d, 1H), 3.26 (t, 1H), 2.92 (ddd, 2H), 2.64 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.31 (s, 3H). LRMS (apci, positiv) m/e 404.2 (M+l).
Forbindelse 292:
l-[2-(l-etyl-l,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-ylmetoksy)-5-metyl-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)urea
Trinn 1: (l-etyl-l,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-yl)-metanol. En omrørt løsning av 1-etyl-l,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-karboksylsyre-metylester (123 mg, 0.56 mmol) i 1.5 ml Et20 ved 0°C under nitrogen, ble dråpevis tilsatt LAH (IM i Et20) under kraftig gassutvikling og dannelse av et hvitt presipitat. Etter 30 min. viste TLC i 3/7 EtOAc/heksan fullstendig forbruk av utgangsmaterialet og tilsynekomst av en ren lavere rf-flekk. Reaksjonen ble forsiktig behandlet med 15% NaOH (3 ml), 3 ml Et20 ble tilsatt og blandingen ble omrørt raskt ved RT i 15 min. Lagene ble separert og det vandige laget ble ekstrahert med 1x10 ml Et20. De organiske faser ble samlet, tørket (MgS04), filtrert og inndampet til en klar olje som var den ønskede alkohol (105 mg, 95%).
Trinn 2 : [2-(l-etyl-l,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-ylmetoksy)-5-metyl-fenyl]-karbaminsyre-tertbutylester. En omrørt løsning av (l-etyl-l,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-yl)-metanol (105 mg, 0.55 mmol, fremstilt i 2. trinn for forbindelse 126xx), 2-N-Boc-amino-4-metylfenol (123 mg, 0.55 mmol) og trifenylfosfin (144 mg, 0.55 mmol) i 850 ul THF ved 0°C under nitrogen, ble tilsatt en løsning av DIAD (108 ul, 0.55 mmol) i 850 ul THF. Reaksjonsblandinegn fikk oppvarmes til romtemperatur natten over, ble inndampet og overført direkte til en Biotage 12M-kolonne med CH2CI2 og eluert med 96/4 heksan/EtOAc, hvilket ga den ønskede alkylerte fenol i form av et hvitt skum (40 mg, 18%). 'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 7.92 (br s, 1H), 7.08 (dd, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.99 (d, 1H), 6.75 (s, 2H), 6.62 (d, 1H), 6.59 (dd, 1H), 3.98 (m, 2H), 3.39 (m, 4H), 3.20 (m, 1H), 2.79 (ddd. 2H), 2.58 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 1.56 (s, 9H), 1.16 (t, 3H).
Trinn 3: 2-(l-etyl-l,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-ylmetoksy)-5-metyl-fenylamin. En løsning av [2(1 -etyl-1,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-ylmetoksy)-5-metyl-fenyl]-karbaminsyre-tert-butylester (40 mg, 0.1 mmol), ble omrørt i 4N HC1 i dioksan (2 ml) ved romtemperatur under et tørkerør natten over. Suspensjonen ble inndampet på rotavapor, fortynnet til 30 ml med CH2CI2 og ristet med 10% Na2C03 (30 ml). De organiske faser ble isolert, tørket (MgSC«4), filtrert og inndampet til en brun olje som ble anvendt uten rensning i den følgende reaksjon.
Trinn 4: l-[2-(l-etyl-l,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-ylmetoksy)-5-metyl-fenyl]-3-(5-metylpyrazin-2-yl)-urea. En 0.5 M løsning av acylazidet (182 ul) ble fortynnet med 364 ul toluen i en septum-lukket reaksjonsflaske nedsenket i et 90°C oljebad, under nitrogen og omrøring. Etter ca. 20 minutter hadde N2-gass-utviklingen stanset, så reaksjonsblandingen fikk avkjøles til romtemperatur og ble behandlet med en løsning av 2-( 1-etyl-1,2,3,4-tetrahydro-kinolin-3-ylmetoksy)-5-metyl-fenylamin (27 mg, 0.91 mmol) i 550 ul toluen. Blandingen ble omrørt ved 65°C i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur natten over og et presipitat ble dannet. Fellingen ble filtrert fra med toluen og det ønskede urea ble isolert i form av et gyldenbrunt, fast stoff (7 mg, 18%). 'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 11.34 (br s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.11 (br s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.25 (m, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.12 (t, 1H), 6.97 (d, 1H), 6.80 (m, 2H), 6.70 (d, 1H), 6.61 (t, 1H), 4.05 (m, 2H), 3.52 (m, 2H), 3.32 (t, 1H), 3.17 (m, 1H), 2.91 (ddd, 2H), 2.69 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 1.04 (t, 3H). LRMS (apci, positiv) m/e 431.9 (M+l).
Forbindelse 293:
l-[5-metyl-2-(l-metyl-piperidin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-kinoksalin-2-yl-urea
Trinn 1: Kinoksalin-2-karbonylazid. En omrørt løsning av kinoksalin-2-karboksylsyre (348 mg, 2 mmol) i THF (6 ml) ved romtemperatur under nitrogen, ble behandlet med di-isopropyletylamin (365 ul, 2.1 mmol), etterfulgt av difenylfosforylazid (410 ul, 1.9 mmol). Etter omrøring natten over ble reaksjonsblandingen fortynnet til 60 ml med Et20 og vasket med 2 x 60 ml mettet NaCl. Det oppstod en uoppløselig, brun olje som ble tappet ut med det vandige laget og som antakelig var en difenylfosfat-urenhet. De organiske faser ble tørket (MgSOii), filtrert og inndampet til et gyldenbrunt, fast stoff som var acylazidet (350 mg, 92%). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 9.58 (s, 1H), 8.32 (d, 1H), 8.21 (d, 1H), 7.94 (m, 2H).
Trinn 2: l-[5-metyl-2-(l-metyl-piperidin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-kinoksalin-2-yl-urea. En løsning av kinoksalin-2-karbonylazid (66 mg, 0.33 mmol) i toluen (1.7 ml), ble omrørt under nitrogen og nedsenket i et 90°C varmebad. Etter 20 min ble reaksjonsblandingen avkjølt til 65°C og 5-metyl-2-(l-metyl-piperidin-3-ylmetoksy)-fenylamin (70 mg, 0.3 mmol) ble tilsatt som fast stoff. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 65°C i 4 timer og fikk deretter avkjøles til romtemperatur natten over. Det resulterende utfelte stoff ble oppsamlet ved filtrering og vasket med toluen (62 mg, 51%). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.58 (br s, 1H), 9.27 (br s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.91 (d, 1H), 7.76 (t, 1H),
7.61 (t, 1H), 6.86 (m, 2H), 4.03 (m, 2H), 2.91 (d, 1H), 2.61 (d, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.25 (m, 1H), 2.09 (s, 1H), 1.81 (m, 3H), 1.57 (m, 2H), 1.05 (m, 1H). LRMS (apci, positiv) m/e 405.9 (M+l).
Forbindelse 294:
l-[5-metyl-2-(pyridin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-kinoksalin-2-yl-urea
Trinn 1: l-[5-metyl-2-(pyridin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-kinoksalin-2-yl-urea. En omrørt løsning av kinoksalin-2-karbonylazid (92 mg, 0.46 mmol, fremstilt som ovenfor) i 1.5 ml toluen under nitrogen, ble nedsenket i et 90°C varmebad. Etter 20 min ble reaksjonsblandingen avkjølt til 65°C og behandlet med 5-metyl-2-(pyridin-3-ylmetoksy)-fenylamin (90 mg, 0.42 mmol) som fast stoff. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 65°C i 4 timer og fikk deretter avkjøles til romtemperatur natten over. Det resulterende utfelte stoff ble oppsamlet ved filtrering. Råproduktet ble kromatografert på en Biotage 12M-kolonne med 2/3 EtOAc/heksan, hvilket ga ren urea i form av et gyldenbrunt, fast stoff (20 mg, 12%). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.99 (br s, 1H), 9.64 (br s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.48 (d, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.55 (t, 1H), 7.42 (t, 1H), 7.17 (d, 1H), 7.12 (m, 1H), 6.93 (m, 2H), 5.26 (s, 2H), 2.41 (s, 3H). LRMS (apci, positiv) m/e 385.9 (M+l).
Forbindelse 295:
Trinn 1 Mitsunobo-prosedyre:
l-[2-(4-metyl-2-nitro-fenoksy)-etyl]-aziridin. En løsning av 2-nitro-4-metylfenol (505 mg, 3.3 mmol, 1.1 ekv.) og 2-aziridin-l-yl-etanol (3.0 mmol, 1 ekv.) i 10 ml THF, ble omrørt ved 0°C. Trifenylfosfin (0.87 g, 3.30 mmol, 1.1 ekv.) og di-isopropylazodikarboksylat (0.67 g, 3.30 mmol, 1.1 ekv.) ble tilsatt, og løsningen fikk
oppvarmes til romtemperatur. Etter 18 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 100 ml EtOAc og vasket med vann (3 x 20 ml). Den organiske fasen ble igjen vasket med IN HC1 (3x 20 ml). Det vandige laget ble gjort basisk med 3N NaOH til pH > 12 og ekstrahert med EtOAc (3x 50 ml), hvilket ga et råprodukt. Sluttproduktet ble renset med flash-kromatografi ved eluering med 5-10 % MeOH i diklormetan. 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 8 7.66 (s, 1H), 7.32 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 7.01 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 4.26 (t, J= 5.09 Hz, 2H), 2.67 (t, J = 5.48 Hz, 2H), 2.34 (s, 3H), 1.79 (m, 2H), 1.34 (m, 2H).
Trinn 2 Nitro-reduksjon.
2-(2-aziridin-l-yl-etoksy)-5-metyl-fenylamin. En løsning av 3-nitro-4-alkoksytoluen (1.0 mmol) i 20 ml EtOH, ble hydrogenert ved 2 atm over 300 mg 10% Pd på karbon i 30 minutter. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering gjennom et glassfiber-filter og filtratet ble inndampet, hvilket ga det ønskede produkt som ble anvendt direkte uten ytterligere rensning.
Trinn 3 Urea-dannelse l-[2-(2-aziridin-l-yl-etoksy)-5-metyl-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea. En løsning av 5-metylpyrazin-2-karboksylsyre-azid (196 mg, 1.2 mmol, 1.2 ekv.) i 20 ml vannfri toluen, ble oppvarmet til 90°C. Etter 20 minutter hadde N2-utviklingen avtatt og reaksjonsblandingen ble avkjølt til 60°C før tilsetning av anilin (1.0 mmol, 1 ekv.) som en løsning i 2 ml toluen. Etter omrøring i 4 timer ved 60°C ble reaksjonsblandingen fordelt mellom 50 ml EtOAc og mettet NaHC03. Den organiske fasen ble vasket med mettet natriumkloirdløsning, tørket over MgS04, filtrert og inndampet. Residuet ble renset med flash-kromatografi ved eluering med 5 % MeOH i diklormetan.1 H-NMR (400 MHz, dg-DMSO): 8 10.80 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 6.82 (m, 2H), 4.2 (m, 2H), 2.7 (m, 2H), 2.5 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 1.89 (s, 2H), 1.30 (m, 2H). MS APCI-Pos. M/e 328.0 (M+l).
Forbindelse 296:
l-[2-(3-dimetylamino-benzyloksy)-5-metyl-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Fremstilt fra (3-dimetylamino-fenyl)-metanol som beskrevet ovenfor for forbindelse 295.
'H-NMR (400 MHz, CDC13): 8 11.69 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.26 (m, 1H), 6.87 (m, 6H), 5.01 (s, 2H), 2.93 (s, 6H), 2. 35 (s, 6H), MS APCI-Pos. M/e 391.9 (M+l).
Forbindelse 297:
l-[2-(l-isopropyl-pyrrolidin-3-yloksy)-5-metyl-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-virea
Fremstilt fra 3-hydroksy-l-isopropyl-pyrrolidin som beskrevet ovenfor for forbindelse 295. <l>H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 10.08 (s, 2H), 8.65 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 6.81 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 4.85 (s, 1H), 2.91 (m, 1H), 2.75 (m, 2H), 2.48 (m, 1H), 2.4 (s, 3H), 2.36 (m, 1H), 2.27 (m, 1H), 2.21 (s, 3 H). 1.85 (m, 1H), 1.01 (m, 6H). MS APCI-Pos. M/e 369.9 (M+l).
Forbindelse 298:
l-[5-metyl-2-(l-metyl-pyrrolidin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea.
Fremstilt fra (l-metyl-pyrrolidin-3-yl)-metanol som beskrevet ovenfor for forbindelse 295.
'H-NMR (400 MHz, dé-DMSO): 8 10.13 (s, 2H), 8.67 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 6.81 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 7.83 Hz, 1H), 4.88 (s, 1H), 2.75 (m, 4H), 2.5 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.3 (s, 3H), 2.24 (s, 3H). MS APCI-Pos. M/e 341.9 (M+l).
Forbindelse 299:
Trinn 1:3-hydroksymetyl-piperidin-l-karboksylsyre-tert-butylester. En omrørt løsning av 3-hydroksymetyl-piperdin (403 mg, 3.5 mmol, 1 ekv.) i 20 ml CH2CI2 og 5 ml mettet NaHCC-3 ved 0°C, ble tilsatt di-tert-butyldikarbonat (803 mg, 3.68 mmol, 1.05 ekv.) i flere porsjoner. Etter omrøring ved 0°C i 2 timer ble løsningen fortynnet med 10 ml vann og ekstrahert med 2 x 20 ml CH2CI2. De samlede ekstrakter ble vasket med vann, deretter mettet natriumkloridløsning og ble tørket over MgSC>4, filtrert og inndampet, hvilket ga det Boc-beskyttede amin som ble anvendt i neste trinn.
Trinn 2-4: 3-{4-metyl-2-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-fenoksymetyl}-piperidin-l-karboksylsyre-tert-butylester ble fremstilt fra 3-hydroksymetyl-pipeirdin-l-karboksylsyre-tert-butylester som beskrevet ovenfor for forbindelse 295. Den ble renset med flash-kromatografi ved eluering med 5% MeOH i CHCI3.
Trinn 5: l-[5-metyl-2-(piperidin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea Fjerning av Boc-gruppen ble utført ved behandling av en 0°C løsning av det beskyttede derivatet (180 mg, 0. 395 mmol) i 15 ml CH2C12, med 2 ml TF A. Etter omrøring i 18 timer ved romtemperatur ble reaksjonsblandingen inndampet under vakuum, og residuet ble tatt opp i 20 ml EtOAc og vasket med 10 ml NaHC03. Den vandige fasen ble ekstrahert med EtOAc (2 x 30 ml), og de samlede ekstrakter ble vasket med 20 ml mettet natriumkloirdløsning, tørket over MgSC>4, filtrert og inndampet, hvilket ga 128 mg (91%) av det ønskede amin. 'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 10.16 (s, 1H), 10.09 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 6.8 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.69 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.09 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.34 (m, 2H), 2.3 (s, 3H), 2.27 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 1.92 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.53 (m, 1H), 1.37 (m, 1H), 1.11 (m, 1H). MS APCI-Pos. M/e 356.0 (M+l).
Forbindelse 300:
l-[5-fiuor-2-(pyirdin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1: 3-(4-fluor-2-nitro-fenoksymetyl)-pyridin. En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av l,4-difluor-2-nitro-benzen (3.0 mmol) og 3-pyridylkarbinol (3.1 mmol) i tetrahydrofuran (8 ml), ble tilsatt litium-bis(trimetylsilyl)amid (3.2 mmol; 3.2 ml av en 1.0 M løsning i tetrahydrofuran). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med 30 ml 10% vandig natriumkarbonat (2 x 30 ml), mettet natriumkloirdløsning (1 x 30 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga det ønskede råprodukt.
Trinn 2: 5-fluor-2-(pyridin-3-ylmetoksy)-fenylamin. En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av 4-fluor-2-nitro-fenoksymetyl)-pyridin (1.0 mmol) i metanol (2 ml) og mettet vandig ammoniumklorid (1 ml), ble tilsatt sinkstøv (2.0 mmol). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med 30 ml 10% vandig natriumkarbonat (2 x 30 ml), mettet natriumkloirdløsning (1 x 30 ml), deretter tørket (MgSC>4) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga det ønskede råprodukt.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 295 (23% utbytte).
'NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.62 (br s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.75 (d, 1H), 8.43 (br s, 1H),
8.25 (d, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.43 (m, 1H), 6.95 (m, 2H), 6.68 (m, 1H), 5.15 (s, 2H), 2.43 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 354.10 (M+l).
Forbindelse 301:
l-[5-fluor-2-(l-metyl-piperidin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-virea
Trinn 1-2:1 henhold til fremgangsmåten for forbindelse 300, ved bruk av l,4-difluor-2-nitrobenzen og l-metyl-3-hydroksymetylpiperidin.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 285 (62% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.22 (m, 3H), 7.21 (m, 2H), 6.78 (m, 2H), 3.85 (m, 2H), 3.21 (m, 1H), 2.85 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 1.50-2.30 (m, 8H). LRMS (esi, positiv) m/e 374.21 (M+l).
Forbindelse 302:
l-[5-fluor-2-(l-metyl-piperidin-4-yloksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1-2:1 henhold til fremgangsmåten for forbindelse 300, ved bruk av l,4-difluor-2-nitrobenzen og l-metyl-4-hydroksypiperidin.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 295 (78% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.49 (br s, 1H), 8.89 (br s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.22 (d, 1H), 8.10 (s, 1H), 6.80 (m, 1H), 6.70 (m, 1H), 4.25 (m, 1H), 2.90 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 1.80-2.30 (m, 6H).
LRMS (esi, positiv) m/e 359.91 (M+l).
Forbindelse 303:
l-[4-fluor-2-(pyirdin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1: 3-(5-fluor-2-nitro-fenoksymetyl)-pyridin. En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av 2-nitro-5-fluor-fenol (2.0 mmol), trifenylfosfin (2.0 mmol) og 3-hydroksymetylpyridin (2.0 mmol) i tørr tertrahydrofuran (5 ml), ble tilsatt di-isopropyl-azodikarboksylat (2.0 mmol i 1 ml tetrahydrofuran). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med 30 ml 10% vandig natriumkarbonat (2 x 30 ml), mettet natriumkloridløsning (1 x 30 ml), deretter tørket (MgSC>4) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga det ønskede råprodukt.
Trinn 2: 4-fluor-2-(pyridin-3-ylmetoksy)-fenylamin. Nitro-reduksjon i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 300.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 295 (60% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.41 (br s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.75 (d, 1H), 8.40 (t, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.43 (t, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.80 (m, 2H), 5.12 (s, 2H), 2.43 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 354.21 (M+l).
Forbindelse 304:
1-[4-fluor-2-(l-metyl-piperidin-3-ylmetote^
Fremstilt i henhold til fremgangsmåtene for forbindelse 303, ved bruk av 2-nitro-5-fluorfenol og l-metyl-3-hydroksymetylpiperidin.
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.50 (br s, 1H), 8.19 (m, 2H), 6.65 (m, 2H), 3.85 (m, 2H), 3.60 (s, 3H), 2.80-3.20 (m, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 1.60-2.10 (m 5H).
LRMS (esi, positiv) m/e 373.95 (M+l).
Forbindelse 305:
l-[4-fluor-2-(l-metyl-piperidin-4-yloksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Fremstilt i henhold til fremgangsmåtene for forbindelse 303, ved bruk av 2-nitro-5-fluorfenol og l-metyl-4 hydroksypiperidin. 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.35 (br s, 1H), 9.49 (s, 1H), 8.35 (m, 2H), 8.05 (s, 1H), 6.65 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 2.90 (m, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 1.80-2.30 (m, 6H).
LRMS (esi, positiv) m/e 359.93 (M+l).
Forbindelse 306:
l-[3,4-difluor-2-(pyridin-3-ylmetoksy)-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1:3-(2,3-dilfuor-6-nitro-fenoksymetyl)-pyridin. En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av 2,3-difluor-6-nitrofenol (2.0 mmol), trifenylfosfin (2.0 mmol) og 3-hydroksymetylpyridin (2.0 mmol) i tørr tertrahydrofuran (5 ml), ble tilsatt di-isopropyl-azodikarboksylat (2.0 mmol i 1 ml tetrahydrofuran). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med 30 ml 10% vandig natriumkarbonat (2 x 30 ml), mettet natriumkloirdløsning (1 x 30 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga det ønskede råprodukt.
Trinn 2: 3,4-difluor-2-(pyridin-3-ylmetoksy)-fenylamin. Nitro-reduksjon i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 300.
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 295 (20% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.49 (br s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.65 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.10 (m, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.98 (m, 1H), 5.25 (s, 2H), 2.52 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 372.10 (M+l).
Forbindelse 307:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(pyirdin-4-yloksy)-fenyl]-urea
Trinn 1: 5-metyl-2-(pyridin-4-yloksy)-fenylamin. En omrørt løsning av 2-amino-4-metylfenol (616 mg; 5.0 mmol) og 4-klorpyridin (625 mg; 5.5 mmol) i dimetylsulfoksyd (5 ml), ble tilsatt natriumhydroksyd (600 mg; 15.0 mmol i 1 ml vann). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 100°C og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 50 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 50 ml) og mettet natriumkloirdløsning (50 ml), deretter tørket (MgSCU) og filtrert. Råproduktet ble renset ved bruk av Biotage 40M-kolonne ved eluering med metylenklorid : metanol: ammoniakk (90:8:2), hvilket ga en lysegul olje (10% utbytte).
Trinn 2: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 295 (36% utbytte). 1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.41 (br s, 1H), 8.52 (m, 3H), 8.33 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.80-7.00 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.45 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 335.91 (M+l).
Forbindelse 308:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(pyridin-3-yloksy)-fenyl]-urea
Trinn 1: 3-(4-metyl-2-nitro-fenoksy)-pyridin. En omrørt løsning av l-klor-4-metyl-2-nitrobenzen (686 mg; 4.0 mmol) og pyridin-3-ol (418 mg; 4.40 mmol) i dimetylformamid (5 ml), ble tilsatt kaliumkarbonat (1.22 g, 8.80 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 50°C og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 50 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 50 ml) og mettet natriumkloirdløsning (50 ml), deretter tørket (MgSCvj) og filtrert. Råproduktet ble renset ved bruk av Biotage 40M-kolonne ved eluering med heksaner og etylacetat (1:1), hvilket ga en lysegul olje (27% utbytte).
Trinn 2: 5-metyl-2-(pyridin-3-yloksy)-fenylamin. En omrørt, avkjølt (omtrent 0°C) løsning av 3-(4-metyl-2-nitro-fenoksy)-pyridin (1.0 mmol) i metanol (2 ml) og mettet vandig ammoniumklorid (1 ml), ble tilsatt sinkstøv (2.0 mmol). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med 30 ml 10% vandig natriumkarbonat (2 x 30 ml), mettet natriumkloirdløsning (1 x 30 ml), deretter tørket (MgSC<4) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga en brun olje (95% utbytte).
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 295 (45% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 6 11.49 (br s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.05 (br s, 1H), 7.21 (m, 2H), 6.92 (m, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.45 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 335.91 (M+l).
Forbindelse 309:
l-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-3-[5-metyl-2-(pyirdin-2-yloksy)-fenyl]-urea
Trinn 1: 2-(4-metyl-2-nitro-fenoksy)-pyridin. En omrørt løsning av l-klor-4-metyl-2-nitrobenzen (686 mg; 4.0 mmol) og pyridin-2-ol (418 mg; 4.40 mmol) i dimetylformamid (5 ml), ble tilsatt kaliumkarbonat (1.22 g, 8.80 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 50°C og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 50 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 50 ml) og mettet natriumkloridløsning (50 ml), deretter tørket (MgSC>4) og filtrert. Råproduktet ble renset ved bruk av Biotage 40M-kolonne ved eluering med heksaner og etylacetat (1:1), hvilket ga en lysegul olje (11% utbytte).
Trinn 2: 5-metyl-2-(pyridin-2-yloksy)-fenylamin. En omrørt, avkjølt (omtrent 0"C) løsning av 2-(4-metyl-2-nitro-fenoksy)-pyridin (1.0 mmol) i metanol (2 ml) og mettet vandig ammoniumklorid (1 ml), ble tilsatt sinkstøv (2.0 mmol). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med 30 ml 10% vandig natriumkarbonat (2 x 30 ml), mettet natriumkloirdløsning (1 x 30 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Den filtrerte løsningen ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga et hvitt skum (77% utbytte).
Trinn 3: Urea-dannelse i henhold til fremgangsmåten for forbindelse 295 (43% utbytte).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 8.51 (br s, 1H), 8.42 (br s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.51 (t, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.95 (d, 1H), 6.75 (d, 1H), 6.35 (t, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.45 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 335.91 (M+l).
Substituerte aminopvrazin- urea- forbindelser. Generell prosedyre:
En 0.3 M omrørt løsning av aminopyrazin-derivatet (1 ekv.) i dikloretan ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt 2-metoksy-5-metylfenylisocyanat (1 ekv.). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 80°C natten over og deretter avkjølt til romtemperatur. I de fleste tilfeller ble produktet utfelt og isolert ved filtrering. Alternativt kunne produktet isoleres med silikagel-kromatografi ved bruk av EtOAc/heksan eller CH2Cl2/MeOH som elueringsmiddel.
Forbindelse 310:
3 -(2-metoksy-5 -metyl-fenyl)-1 -metyl-1 -pyrazin-2-yl-urea
Trinn 1: 2-metylaminopyrazin. En omrørt løsning av 2M metylamin i 1 ml metanol ved romtemperatur, ble tilsatt 2-klorpyrazin. Reaksjonen ble forseglet og oppvarmet til 60°C i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble inndampet til en blanding av utgangsmateriale og de ønskede 2-metylaminopyraziner i et forhold på 1:2. Materialet ble anvendt rått i den urea-dannende reaksjon.1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 7.97 (d, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 2.96 (s, 3H).
Trinn 2: En 0.3 M omrørt løsning av 2-metylaminopyrazin (1 ekv.) i dikloretan ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt 2-metoksy-5-metylfenylisocyanat (1 ekv.). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 80°C natten over og deretter avkjølt til romtemperatur. I de fleste tilfeller ble produktet utfelt og isolert ved filtrering. Alternativt kunne produktet isoleres med silikagel-kromatografi ved bruk av EtOAc/heksan eller CH2Cl2/MeOH som elueringsmiddel. <l>H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.57 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 6.80 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 2.32 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 273. 2 (M+l).
Forbindelse 311:
l-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-4-metylpyrazin.<1>H-NMR (400 MHz, CDC13) 5 11.12 (br s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 6.81 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 2.35 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 273.2 (M+l).
Forbindelse 312:
l-(5,6-dimetyl-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Trinn 1: 2-amino-5,6-dimetylpyrazin. Glycin-amidin-dihydrobromid (620 mg, 2.64 mmol) ble omrørt i 6 ml MeOH ved -30°C (acetonitril/C02-bad) i en lukket kolbe.
Butandion (232 pl, 2.64 mmol) ble omrørt separat i 6 ml H2O med natriumacetat (700 mg) inntil homogen blanding. Diketonet ble satt til amidin-løsningen med pipette, etterfulgt av 2.5 ml 3.6M NaOH. Den gule løsningen fikk oppvarmes langsomt til romtemperatur og ble deretter omrørt natten over. MeOH ble fjernet på rotavapor og den vandige løsningen ble ekstrahert med 3 x 30 ml EtOAc. De samlede organiske ekstrakter ble tørket (MgSO^t), filtrert og inndampet til et gult, fast stoff som inneholdt noen urenheter. Det faste stoffet ble utgnidd med EtOAc/Et20 og filtrert, hvilket ga ren forbindelse (55 mg, 17%). 'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 7.76 (s, 1H), 4.25 (br s, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.37 (s, 3H).
Trinn 2: Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-5,6-dimetylpyrazin.1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.43 (br s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.64 (br s, 1H), 6.81 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.35 (s, 3H). LRMS (apci, positiv) m/e 287.1 (M+l).
Forbindelse 313:
1 -(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-3 -(5-trifluormetyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1: 2-amino-S-trifluormetylpyrazin. Fremstilt i henhold til metoden ifølge Miesel. J., US-patent nr 4.293.552 (1981).
Trinn 2: Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-5-trifluormetylpyrazin.<1>H-NMR (400 MHz, dVDMSO) 8 10.59 (s, 1H), 9.78 (br s, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 3.87 (s, 3H), 2.22 (s, 3H). LRMS (ESI, positiv) m/e 327.1 (M+l).
Forbindelse 314:
l-(5,6-difenyl-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Trinn 1:2-hydroksy-5,6-difenylpyrazin. En omrørt suspensjon av glycin-amidhydroklorid (1.1 g, 10 mmol) i 20 ml MeOH ved 0°C, ble tilsatt 20% NaOH (10 ml, 50 mmol). En klar løsning ble dannet som ble behandlet langsomt og porsjonsvis med benzil (2.1 g, 10 mmol) i form av fast stoff. Den gule løsningen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter nøytralisert til omtrent pH=7 med konsentrert HC1. Den sterke gule fargen forsvant og et gyldenbrunt presipitat ble dannet. Materialet ble isolert ved filtrering med MeOH og utgnidd med EtOAc, hvilket ga 2-hydroksy-5,6-difenylpyrazin (2 g, 80%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.24 (s, 1H), 7.42-7.31 (m, 4H), 7.39-7.21 (m, 6H).
Trinn 2: 2-klor-5,6-difenylpyrazin. En omrørt løsning av 2-hydroksy-5,6-difenylpyrazin (430 mg, 1.7 mmol) i 5.2 ml POCI3 i en lukket reaksjonsflaske, ble oppvarmet ved 100°C i 4 timer. Den oransje løsningen ble avkjølt til romtemperatur og omrørt raskt i en blanding av CH2C12 (100 ml) og iskald 10% Na2C03 (100 ml) i 15 minutter. Det organiske laget ble isolert og vasket med 2 x 100 ml 10% Na2C03. De organiske faser ble isolert, tørket (MgSC«4), filtrert og inndampet til klorpyrazinet i form av et hvitt, fast stoff (450 mg, kvantitativt). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.59 (s, 1H), 7.45-7.39 (m, 4H), 7.36-7.24 (m, 6H).
Trinn 3:2-azido-5,6-difenylpyrazin. En omrørt løsning av 2-klor-5,6-difenylpyrazin (45 mg, 0.17 mmol) i 500 ul DMF ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt natriumazid (11 mg, 0.17 mmol) og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 100"C. Etter omrøring natten over ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, fortynnet med EtOAc (30 ml) og vasket med 4 x 30 ml H2O og 1 x 30 ml mettet NaCl. De organiske faser ble islolert, tørket (MgS04), filtrert og inndampet til 2-azidopyrazinet i form av et gult, fast stoff (45 mg, kvantitativt). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 9.73 (s, 1H), 7.58-7.42 (m, 6H), 7.36-7.23 (m, 4H).
Trinn 4: 2-amino-5,6-difenylpyrazin. En omrørt løsning av 2-azido-5,6-difenylpyrazin (45 mg, 0.17 mmol) i 50 ml EtOAc ved romtemperatur, ble tilsatt trietylamin (100 ul), etterfulgt av Pearlmans katalysator (50 mg). Suspensjonen ble ført gjennom en vakuum/rense-cyklus tre ganger med hydrogengass og deretter holdt under 1 atmosfære hydrogen i 2 timer. Suspensjonen ble deretter filtrert gjennom GF/F-filterpapir med EtOAc og inndampet. Råproduktet ble eluert gjennom en Biotage 12S-kolonne med 1/1 EtOAc/heksan, hvilket ga rent produkt i form av en klar olje (25 mg, 59%).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 8.04 (s, 1H), 7.42-7.20 (m, 10H), 4.62 (br s, 2H).
Trinn 5: Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-5,6-difenylpyrazin. 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.34 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.37-7.23 (m, 10H), 6.81 (d, 1H), 6.66 (d, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.33 (s, 3H).
Forbindelse 315:
l-[3-benzyl-5-(4-metoksy-fenyl)-pyrazin-2-yl]-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-3-benzyl-4-(4-metoksyfenyl)pyrazin. 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.51 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.96 (d, 2H), 7.34 (m, 5H), 7.03 (d, 2H), 6.80 (m, 2H), 4.28 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 2.30 (s, 3H). LRMS (ESI, positiv) m/e 477.2 (M+l).
Forbindelse 316:
l-(6-azido-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Trinn 1: Tetrazolol[l,5-a]pyrazin-5-ylamin. Fremstilt i henhold til metoden ifølge Shaw, J. T.; et al, J. Heterocyclic Chem. 1980,17,11.
Trinn 2: Fremstilt ved bruk av p-nitrofenylkarbamat og den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 166 (trinn 2), ved bruk av tetrazolo^S-ajpyrazin-S-ylamin^H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 9.72 (br s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.80 (br s, 1H), 6.88 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 3.84 (s, 3H), 2.36 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 300.0 (M+l).
Forbindelse 317:
l-(6-arnino-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
En omrørt løsning av l-(6-azido-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea (8 mg, 27 umol) i 95% EtOH (2 ml) ved romtemperatur, ble tilsatt konsentrert NH4OH (10 Hl) og 10% Pd på C (25 mg). Suspensjonen ble ført gjennom en vakuum/rense-cyklus tre ganger med hydrogengass og deretter holdt under 50 psi hydrogentrykk og ristet på en
Parr-rister. Etter 2 timer ble vakuum/rense-cyklusen gjentatt og reaksjonen ble holdt under hydrogen i ytterligere 2 timer. Suspensjonen ble deretter filtrert gjennom GF/F-filterpapir med EtOH og inndampet til en gul film (3 mg, 41%). 'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 8.19 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.83 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.33 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 274.2 (M+l).
Forbindelse 318:
1 -(6-klor-pyrazin-2-yl)-3 -(2-metoksy-5 -metyl-fenyl)-urea
En omrørt løsning av 2-amino-6-klorpyrazin (130 mg, 1 mmol) i 3 ml THF ved 0°C under nitrogen, ble tilsatt metylmagnesiumjodid (3M i Et20, 330 ul, 1 mmol), hvilket ga en gul suspensjon som ble omrørt ved 0°C i 15 minutter. Suspensjonen ble behandlet med det rene isocyanatet (147 ul, 1 mmol) og fikk oppvarmes til romtemperatur natten over. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom EtOAc (30 ml) og 10% Na2C03 (30 ml). De organiske faser ble isolert og vasket med 1 x 30 ml 10% Na2C03 og 1 x 30 ml mettet NaCl. De organiske faser ble tørket (MgS04), filtrert og inndampet til et rått residu som ble utgnidd med EtOAc og som etter filtrering ga urea-produktet i form av et hvitt, fast stoff (27 mg, 9%). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.26 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.09 (br s, 1H), 6.84 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.35 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 293.0 (M+l).
Forbindelse 319:
l-(5-brom-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Trinn 1: 2-amino-5-brompyrazin. En omrørt, avkjølt (0°C) løsning av aminopyrazin (5.0 g, 52.6 mmol) i metylenklorid (200 ml), ble tilsatt N-bromsuccinimid (9.39 g, 52.8 mmol). Etter omrøring i 24 timer ble reaksjonsblandingen vasket med vandig 10% natriumkarbonat (3 x 50 ml), vann (50 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Det filtrerte materialet ble inndampet under redusert trykk, tatt opp i en minimal mengde etylacetat (5 ml), etterfulgt av heksaner (200 ml). De dannede gule krystaller ble filtrert og tørket. (56 % utbytte).
Trinn 2: Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-4-brompyrazin. 'H-NMR (400 MHz, CDCI3/CD3OD) 8 8.55 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 6.81 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 2.34 (s, 3H).
Forbindelse 320:
l-(3,5-dibrom-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-4,6-dibrompyrazin. 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 7.98 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.79 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 2.32 (s, 3H).
Forbindelse 321:
l-[5-(l,3-diokso-l,3-dihydro-isoindol-2-ylmetyl)-pyrazin-2-yl]-3-(2-metoksy-5-metylfenyl)-urea
Trinn 1: (5-brommetyl-pyrazin-2-yl)-karbaminsyre-tert-butylester. En omrørt løsning av 2-Boc-amino-5-metylpyrazin (1.34 g, 6.4 mmol) i 20 ml CCU ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt N-bromsuccinimid (1.14 g, 6.4 mmol), etterfulgt av benzoylperoksyd (125 mg). Løsningen ble bestrålet med en 100 watts lyskaster, noe som førte til kraftig tilbakeløpskoking i reaksjonsblandingen. Etter 2 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, fortynnet til 125 ml med CH2CI2 og vasket med 1 x 125 ml 10% natrium bisulflttløsning og 1 x 125 ml mettet NaCl. De organiske faser ble tørket (MgSCU), filtrert og inndampet til en brun olje som ble overført direkte til en Biotage 40S-kolonne med CH2CI2 og eluert med 15/85 EtOAc/heksan, hvilket ga det ønskede benzyliske bromid i form av et gult, fast stoff (954 mg, 51%). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 9.22 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.37 (br s, 1H), 4.54 (s, 2H), 1.55 (s, 9H).
Trinn 2: [5-(13-diokso-13-dihydro-isoindol-2-ylmetyl)-pyrazin-2-yl]-karbaminsyre-tert-butylester. En omrørt løsning av ftalimid (971 mg, 6.6 mmol) og pulverisert K2CO3 (1.37 g, 9.9 mmol) i acetonitril (9.9 ml) ved romtemperatur under nitrogen, ble tilsatt bromidet (954 mg, 3.3 mmol) i form av fast stoff. Suspensjonen ble oppvarmet til 65"C i 4 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble reaksjonsblandingen fordelt mellom EtOAc (60 ml) og H20 (60 ml). De organiske faser ble isolert og vasket med 2 x 50 ml H2O og 1 x 50 ml mettet NaCl. De organiske faser ble tørket (MgS04), filtrert og inndampet. Råproduktet ble utgnidd med CH2CI2 og filtrert for å fjerne fast overskudd av ftalimid, og flltrateted ble delvis inndampet og overført direkte til en Biotage 40S-kolonne og eluert med 3/7 EtOAc/heksan, hvilket ga det ønskede ftalimid i form av et hvitt, fast stoff (495 mg, 42%). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 9.17 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.85 (m, 2H), 7.71 (m, 2H), 7.39 (br s, 1H), 4.97 (s, 2H), 1.52 (s, 9H).
Trinn 3: 2-(5-amino-pyrazin-2-ylmetyl)-isoindoI-l,3-dion. En omrørt løsning av ftalimidet (495 mg, 1.4 mmol) i 7 ml CH2CI2 ved romtemperatur i en lukket kolbe, ble tilsatt trifluoreddiksyre (7 ml). Etter omrøring natten over ble reaksjonsblandingen inndampet for å fjerne overskudd av trifluoreddiksyre og ble deretter oppløst i 200 ml 10/1 CH2Cl2/MeOH, omrørt raskt og behandlet med en løsning av 10% Na2C03 (200 ml). De organiske faser ble isolert, tørket (MgSCX;), filtrert og inndampet, hvilket ga det frie aminopyrazinet i form av et gult, fast stoff (260 mg, 73%).1 H-NMR (400 MHz,
CDCI3) 8 8.25 (s, 1H), 7.85 (m, 2H), 7.77 (s, 1H), 7.74 (m, 2H), 4.83 (s, 2H).
Trinn 4: Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-(5-aminopyrazin-2-ylmetyl)-isoindol-l,3-dion. 'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8 8.38 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.86 (m, 2H), 7.76 (m, 2H), 6.81 (m, 2H), 4.98 (s, 2H),3.91 (s, 3H), 2.31 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 418.1 (M+l).
Forbindelse 322:
l-(5-aminometyl-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
En omrørt løsning av l-[5-(l,3-diokso-l,3-dihydro-isoindol-2-ylmetyl)-pyrazin-2-yl]-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea (16 mg, 38 umol) i 380 ul 95% EtOH og 100 ul DMF ved romtemperatur i en lukket reaksjonsflaske, ble tilsatt hydrazinmonohydrat (3.8 ul, 76 Umol). Etter omrøring natten over ved romtemperatur var et hvitt presipitat dannet. Fellingen ble filtrert fra, tørket og utgnidd med EtOAc for å fjerne ftalimid-baserte urenheter, hvilket ga produktet i form av et hvitt, fast stoff (7.9 mg, 72%). 1 H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 9.54 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 6.93 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 4.51 (d, 2H), 4.39 (br s, 2H), 3.89 (s, 3H), 2.23 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 288.2 (M+l).
Forbindelse 323:
l-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-3-(6-metoksy-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1: 2-amino-6-metoksypyrazin. En omrørt løsning av metanol (89 ul; 2.2 mmol) i dioksan (1 ml), ble tilsatt natriumhydrid (53 mg; 2.2 mmol). Etter omrøring i 30 minutter ble 2-amino-6-klorpyrazin (258 mg; 2.0 mmol) tilsatt og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 90°C. Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 30 ml) og mettet natriumkloridløsning (30 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Råproduktet ble renset ved bruk av en Biotage 12i-kolonne ved eluering med heksan og etylacetat (3:1), hvilket ga et hvitt, fast stoff (11% utbytte).
Trinn 2: Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-6-metoksypyrazin (8% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.15 (s, 1H), 8.05 (br s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 6.89 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 2.38 (s, 3H). LRMS (ESI, positiv) m/e 289.10 (M+l).
Forbindelse 324:
1 -(6-benzyloksy-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Trinn 1: 2-amino-6-benzyloksypyrazin. En omrørt løsning av benzylalkohol (432 ul; 4.0 mmol) i dioksan (2 ml), ble tilsatt natriumhydrid (96 mg; 4.0 mmol). Etter omrøring i 30 minutter ble 2-amino-6-klorpyrazin (258 mg; 2.0 mmol) tilsatt og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 90°C. Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 30 ml) og mettet natriumkloridløsning (30 ml), deretter tørket
(MgS04) og filtrert. Råproduktet ble renset ved bruk av en Biotage 12i-kolonne ved eluering med heksan og etylacetat (3:1), hvilket ga et hvitt, fast stoff (33% utbytte).
Trinn 2: Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-6-benzyloksypyrazin (34% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, aVDMSO) 8 9.99 (s, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.52 (d, 2H), 7.41 (m, 3H), 6.92 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 5.39 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.21 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 365.10 (M+l).
Forbindelse 325:
l-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-3-(5-metoksy-pyrazin-2-yl)-urea
En omrørt løsning av l-(5-brom-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea (47 mg; 0.14 mmol) i N-metylpyrrolidinon (300 ul), ble tilsatt natriummetoksyd (0.5 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 100°C. Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 30 ml), mettet natriumkloirdløsning (30 ml), deretter tørket (MgSCXO og filtrert. Råproduktet ble renset ved bruk av en 0.5 mm preparativ plate ved eluering med heksan og etylacetat (1:1), hvilket ga et gult, fast stoff (13% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.12 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 6.80 (dd, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 2.38 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 289.10 (M+I).
Forbindelse 326:
l-(5-etynyl-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Trinn 1: 2-amino-5-alkynylpyrazin. En omrørt løsning av 5-brom-2-aminopyrazin (432 mg; 2.5 mmol), Pd (Ph3P)2Cl2 (91 mg; 0.13 mmol), Cul (1.2 g, 6.5 mmol) i trietylamin (8 ml), ble tilsatt TMS-acetylen. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 60°C i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 30 ml), mettet natriumkloirdløsning (30 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Råproduktet ble fortynnet i 1 ml metanol og natriumhydroksyd (10 ml av en IN vandig løsning). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 30 ml), mettet natriumkloirdløsning (30 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Råproduktet ble renset ved bruk av en biotage 12L-kolonne ved eluering med metylenklorid og metanol (98:2), hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (40% utbytte).
Trinn 2 : Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-5-alkynylpyrazin (20% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10.25 (s, 1H), 9.80 (br s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.82 (s, 3H), 2.22 (s, 3H).
LRMS (esi, positiv) m/e 283.10 (M+l).
Forbindelse 327:
l-(5-etyl-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Trinn 1: 2-amino-5-etylpyrazin. En omrørt løsning av 5-etynyl-2-aminopyrazin (18 mg; 0.151 mmol) i etylacetat (500 ul) ble tilsatt trietylamin (63 ul; 0.45 mmol) og Pd(OH)2
(0.01 mmol; 20% vekt på karbon). Reaksjonen ble plassert under en hydrogenatmosfære ved 45 psi og ble ristet i 6 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og inndampet under redusert trykk, hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (84% utbytte).
Trinn 2 : Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-5-etylpyrazin (27% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.65 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 6.80 (dd, 2H), 3.92 (s, 3H), 2.81 (q, 2H), 2.39 (s, 3H), 1.39 (t, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 287.21 (M+l).
Forbindelse 328:
1 -(5-cyano-pyrazin-2-yl)-3 -(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Trinn 1: 2-amino-5-cyanopyrazin. En omrørt løsning av 5-brom-2-aminopyrazin (1.0 g, 5.8 mmol), Cul (2.76 g, 14.5 mmol), 18-krone-6 (121 mg; 0.46 mmol), kaliumcyanid (943 mg; 14.5 mmol) i dimetylformamid (20 ml), ble tilsatt Pd(PPh3)4 (196 mg; 0.17 mmol). Etter omrøring ved romtemperatur i 20 minutter ble reaksjonsblandingen plassert i et 155°C oljebad i 2 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til romtemperatur og ble deretter hellet i kloroform (300 ml). Presipitatet som ble dannet ble filtrert og utgnidd med heksaner, hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (60% utbytte).
Trinn 2 : Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-5-cyanopyrazin (30% utbytte). 'HNMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 8.89 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 6.91 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.22 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 283.91 (M+l).
Forbindelse 329:
l-(5-benzoyl-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Trinn 1: 5-benzoyl-pyrazin-2-karboksylsyre. En omrørt, avkjølt (0°C) løsning av 2-pyrazinkarboksylsyre (3.0 g, 24.2 mmol) og benzaldehyd (7.4 ml; 73 mmol) i en 50% vandig løsning av svovelsyre (40 ml) og 25 ml eddiksyre, ble tilsatt FeSC"4 • 7 H2O (20.3 g, 73 mmol oppløst i 50 ml vann) og t-butylperoksyd (9.2 ml; 73 mmol) tilsatt samtidig. Etter omrøring i 1 time ble reaksjonsblandingen behandlet med 200 ml vann. Det dannede presipitat ble filtrert og vasket med metylenklorid (3 x 100 ml), hvilket ga et gyldenbrunt, fast stoff (36% utbytte).
Trinn 2: l-(5-benzoyl-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea. En omrørt løsning av 5-benzoyl-pyrazin-2-karboksylsyre (912 mg; 4.0 mmol) og trietylamin (584 ul; 4.2 mmol) i toluen (12 ml), ble tilsatt difenylfosforylazid (860 ul; 4.0 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 30 minutter, etterfulgt av tilsetning av t-butanol (764 ul, 8.0 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 90°C og omrørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 30 ml), mettet natriumkloirdløsning (30 ml), deretter tørket (MgSCu) og filtrert. Materialet ble renset ved bruk av en Biotage 40M-kolonne ved eluering med heksan og etylacetat (1:1), hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (14% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 9.41 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.08 (d, 2H), 7.61 (t, 1H), 7.52 (t, 2H), 6.90 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 3.92 (s, 3H), 2.39 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 363.21 (M+l).
Forbindelse 330:
l-[5-(hydroksy-fenyl-metyl)-pyrazin-2-yl]-3-(2-m
En omrørt løsning av l-(5-benzoyl-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea (22 mg; 0.061 mmol) i metanol (1 ml), ble tilsatt natriumborhydrid (10 mg; 0.3 mmol). Etter omrøring i 12 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 30 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 30 ml), mettet natriumkloirdløsning (30 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Det filtrerte materialet ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga et hvitt, fast stoff (91% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.48 (br s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.25-7.45 (m, 5H), 6.89 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 5.85 (d, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.37 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 365.24 (M+l).
Forbindelse 331:
l-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-3-(6-fenyl-pyrazin-2-yl)-urea
Suzuki prosedyre
Trinn 1: En omrørt løsning av 2-amino-6-klor pyrazin (400 mg; 3.1 mmol) og fenylboronsyre (415 mg; 3.4 mmol) i dioksan (6 ml) og etanol (3 ml), ble tilsatt cesiumkarbonat (2.28 g, 7.0 mmol i 3 ml vann), etterfulgt av Pd(PPh3)4 (185 mg; 0.16 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 75°C og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 50 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 50 ml), mettet natriumkloirdløsning (50 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Materialet ble renset ved bruk av en Biotage 40M-kolonne ved eluering med etylacetat, hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (84% utbytte).
Trinn 2: Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-6-fenylpyrazin (33% utbytte).1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 11.11 (br s, 1H), 8.612 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.03 (m, 2H), 7.51 (m, 3H), 6.87 (d, 1H), 6.77 (d, 1H). LRMS (ESI, positiv) m/e 355.6 (M+l).
Forbindelse 332:
l-(3-brom-5-fenyl-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Trinn 1: 2-amino-3-brom-5-fenylpyrazin. En omrørt løsning av 3,5-dibrom-2-aminopyrazin (200 mg; 0.79 mmol) og fenylboronsyre (106 mg; 0.87 mmol) i dioksan (4 ml) og etanol (2 ml), ble tilsatt cesiumkarbonat (571 mg; 1.75 mmol i 2 ml vann), etterfulgt av Pd(PPh3)4 (46 mg; 0.04 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 75°C og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 50 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 50 ml), mettet natriumkloridløsning (50 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Materialet ble renset ved bruk av en Biotage 12L-kolonne ved eluering med heksaner og etylacetat (3:1), hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (88% utbytte).
Trinn 2: Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-3-brom-5-fenylpyrazin (18% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.36 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.63 (d, 2H), 7.59 (m, 3H), 6.85 (dd, 2H), 3.92 (s, 3H), 2.39 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 413.2 415.2 (M+l).
Forbindelse 333:
1 -(2-metoksy-5 -metyl-fenyl)-3 -(5 -fenyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1: 2-amino-5-fenylpyrazin. En omrørt løsning av 3-brom-5-fenyl-2-aminopyrazin
(80 mg; 0.32 mmol) i etylacetat (1 ml), ble tilsatt trietylamin (139 ul; 1.0 mmol) og Pd(OH)2 (10 mg; 20% vekt på karbon). Reaksjonsblandingen ble plassert under hydrogenatmosfære ved 45 psi og ristet i 6 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og inndampet under redusert trykk. Produktet ble renset ved bruk av en Biotage 12L-kolonne ved eluering med etylacetat, hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (75% utbytte).
Trinn 2: Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-5-fenylpyrazin (25% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.36 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.63 (m, 2H), 7.59 (m, 3H), 7.28 (br s, 1H), 6.82 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 2.33 (s, 3H). LRMS (ESI, positiv) m/e 335.21 (M+l).
Forbindelse 334:
l-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-3-kinoksalin-2-yl-urea
Trinn 1: 2-klorkinoksalin (1.0 g, 6 mmol) ble tilsatt ammoniakk i metanol (8 ml av en 2M løsning). Reaksjonen ble forseglet i en flaske, oppvarmet til 80°C og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og inndampet under redusert trykk. Residuet ble tatt opp i metylenklorid og filtrert. Heksan ble tilsatt inntil et presipitat ble dannet. Prsipitatet ble filtrert og ble funnet å være det ønskede produkt (5% utbytte).
Trinn 2: Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av kinoksalin-2-ylamin. (26% utbytte). 'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 11.63 (br s, 1H), 10.59 (br s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.97 (d, 1H), 7.81 (m, 2H), 7.64 (m, 1H), 6.98 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 3.97 (s, 3H), 2.23 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 309.4 (M+l).
Forbindelse 335:
l-(3,6-dimetyl-pyrazin-2-yl)-3-(2-metoksy-5-metyl-fenyl)-urea
Trinn 1: 2-azido-3,6-dimetylpyrazin. En omrørt løsning av 2-klor-3,5-dimetylpyrazin (1.0 ml; 8.3 mmol) i dimetylformamid (10 ml), ble tilsatt natriumazid (539 mg; 8.3 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 100°C og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 50 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 50 ml), mettet natriumkloirdløsning (50 ml), deretter tørket (MgS04) og filtrert. Materialet ble renset ved bruk av en Biotage 12L-kolonne ved eluering med heksaner og etylacetat (3:1), hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (42% utbytte).
Trinn 2: 2-amino-3,6-dimetylpyrazin. En omrørt løsning av 3-azido-2,5-dimetylpyrazin (100 mg; 0.66 mmol) i metanol (800 ul) ble tilsatt 12N HC1 (100 ul) og tinnklorid-dihydrat (149 mg; 0.66 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 60°C og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 50 ml etylacetat og vasket med vandig 10% natriumkarbonat (1 x 50 ml), mettet natriumkloirdløsning (50 ml), deretter tørket (MgSCU) og filtrert. Materialet ble renset ved bruk av en Biotage 12i-kolonne ved eluering med etylacetat, hvilket ga et gråhvitt, fast stoff (38% utbytte).
Trinn 3: Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 310, ved bruk av 2-amino-3,6-dimetylpyrazin.\ (15% utbytte). <l>H-NMR (400 MHz, CDC13) 8 8.22 (br s, 1H), 8.01 (s, 1H), 6.82 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 2.38 (s, 3H). LRMS (esi, positiv) m/e 287.20 (M+l).
Forbindelse 336:
Trinn 1: 2-metoksy-4-metoksymetyl-l-nitro-benzen. En 250 ml rundbunnet kolbe som inneholdt 5.4 g (39 mmol) 3-metoksy-4-nitrobenzylalkohol i 30 ml THF og 30 ml DMF, ble tilsatt 38 g (117 mmol, 3 ekv.) finpulverisert cesiumkarbonat, etterfulgt av 24 ml (390 mmol, 10 ekv.) jodmetan. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 18 timer og ble deretter fordelt mellom 100 ml vann og 100 ml dietyleter. Den vandige fasen ble ekstrahert med eter (2 x 100 ml), og de samlede organiske ekstrakter ble vasket med mettet natriumkloirdløsning (2 x 50 ml), tørket over MgS04, filtrert gjennom en kort propp av silika og inndampet. Residuet ble renset med flash-kromatografi ved eluering med 1:1 EtOAc-heksan, hvilket ga 6.76 g (88%) av metyleteren i form av en gul olje. 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 8 7.84 (d, J=8.2 Hz, 1H) 7.10 (s, 1H), 6.94 (d, J=9.1 Hz, 1H), 4.51 (s, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.44 (s, 3H).
Trinn 2: 2-metoksy-4-metoksymetyl-fenylamin. I et 250 ml Parr-apparat ble 2.1 g,(10.6 mmol) 2-metoksy-4-metoksymetyl-1 -nitro-benzen i 40 ml etanol, hydrogenen ved 2 atm over 300 mg 10% Pd på karbon i 2.5 timer. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering gjennom et glassfiber-filter og filtratet ble inndampet, hvilket ga 1.61 g (91 %) produkt i form av en lysegul olje. 'H-NMR (400 MHz, CDCI3): 8 6.80 (s, 1H), 6.74 (d, J=7.8 Hz, 1H), 6.67 (d, J=7.8 Hz). 4.35 (s, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.78 (br d, 2H), 3.35 (s, 3H). MS ESI-pos,M+l = 168.1
Trinn 3: l-(2-metoksy-4-metoksymetyl-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea.
Generell difenylfosforylazid-koblingsmetode: En løsning av 5-metylpyrazin-2-karboksylsyre (365 mg, 2.64 mmol) i 20 ml vannfri toluen, ble tilsatt di-isopropyletylamin (483 ul, 2.77 mmol), og blandingen ble omrørt ved romtemperatur inntil det faste stoffet var oppløst, deretter ble difenylfosforylazid tilsatt, og løsningen ble oppvarmet til 90° C. Etter 20 minutter hadde N2-utviklingen avtatt og den karamellfargede reaksjonsblandingen ble avkjølt til 60°C før tilsetning av 2-metoksy-4-metoksymetylanilin som en løsning i 4 ml toluen. Etter omrøring i 6 timer ved 60°C ble blandingen avkjølt til romtemperatur og fortynnet med 20 ml 5% NH4OH og ekstrahert med EtOAc (3 x 50 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med 20 ml vann og 20 ml mettet natriumkloridløsning, deretter tørket over MgS04, filtrert og inndampet. Det brune residuet ble renset med flash-kromatografi
(ved eluering med 5% MeOH i CH2C12), hvilket ga 219 mg (27%) av det ønskede produkt.
'H-NMR (400 MHz, CDC13): 8 11.36 (s, 1H), 9.47 (s, 1H) 8.40 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.94 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.39 (s, 3H), 2.52 (s, 3H). MS ESI-pos, M+l=303. 2
Forbindelse 337:
l-(4-benzyloksymetyl-2-metoksy-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1: 4-benzyloksymetyl-2-metoksy-l-nitro-benzen. En omrørt suspensjon av finpulverisert cesiumkarbonat (8.0 g, 24.5 mmol) ble tilsatt 3-metoksy-4-nitrobenzylalkohol (1.5 g, 8.18 mmol), etterfulgt av benzylbromid (2 ml, 16.4 mmol). Etter omrøring ved romtemperatur i 18 timer ble suspensjonen fortynnet med 100 ml dietyleter og vasket med 3 x 50 ml vann, deretter 50 ml mettet natriumkloridløsning. Den organiske fasen ble tørket over MgS04, filtrert gjennom en propp av silika og inndampet. Den resulterende oransje oljen ble renset med flash-kromatografi ved eluering med 2:1 heksanEtOAc, hvilket ga 1.87 g (84%) av benzyleteren. 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 8 7.85 (d, J= 8.2 Hz, 1H) 7.3-7.4 (m, SH), 7.26 (s, 1H), 6.97 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.61 (s, 2H), 4.59 (s, 2H), 3.96 (s, 3H).
Trinn 2: 4-benzyloksymeryl-2-metoksy-fenylamin. En løsning av 4-nitro-3-metoksybenzylbenzyleter (2.2 g, 8.1 mmol) og ammoniumacetat (2.46 g, 32 mmol, 4 ekv.) i 30 ml MeOH, ble omrørt ved 0"C, og 1.3 g (20 mmol, 2.5 ekv.) sinkstøv ble tilsatt i flere porsjoner. Etter 1 time ble reaksjonsblandingen fordelt mellom 40 ml vann og 40 ml etylacetat. Den organiske fasen ble tørket over MgS04 og inndampet. Residuet ble anvendt direkte i neste trinn uten ytterligere rensning, 'H-NMR (400 MHz, CDCh): 8 7.35 (m, 5H), 6.82 (s, 1H), 6.77 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.45 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.79 (s, 2H). MS ESI-pos. M+l = 244.2.
Trinn 3: l-(4-benzyloksymetyl-2-metoksy-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea. Fremstilt i henhold til den generelle difenylfosforylazid-koblingsmetode beskrevet ovenfor for forbindelse 336.<1>H-NMR (400 MHz, CDC13): 8.11.36. (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.32 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.38 (m, 5H), 6.97 (s, 2H), 4.56 (s, 4H), 3.96 (s, 3H), 2.53 (s, 3H),). MS APCI-pos. M+l = 379.3
Forbindelse 338:
1 - {4-[(benzyl-metyl-amino)-metyl]-2-metoksy-fenyl} -3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1:3-metoksy-4-nitro-benzylbromid. En 250 ml rundbunnet kolbe som inneholdt 10 g (54.6 mmol) 4-nitro-3-metoksybenzylalkohol i 30 ml THF, ble tilsatt 36 g (109 mmol, 2 ekv.) karbontetrabromid, etterfulgt av 15.9 g (60 mmol, 1.1 ekv.) trifenylfosfin ved 0°C. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 3 timer. Etter fjerning av løsningsmidlet ble residuet renset med flash-kromatografi ved eluering med 10:90 EtOAc-heksan, hvilket ga 11 g (82%) av produktet i form av et gult, fast stoff. 'H-NMR (400 MHz, CDCI3): 8 7.86 (s, 1H), 7.84 (m, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.07 (m, 1H), 4.47 (s, 2H), 4.00 (s, 3H).
Trinn 2: N-benzyl-N-(3-metoksy-4-nitro-benzyl)-amin. En 150 ml rundbunnet kolbe som inneholdt 1.97 g (8.0 mmol) 3-metoksy-4-nitro-benzylbromid i 20 ml THF, ble tilsatt 2.4 g
(24 mmol, 3 ekv.) trietylamin, etterfulgt av 2.5 g (24 mmol, 3 ekv.) benzylamin. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer og ble deretter fordelt mellom 50 ml etylacetat og mettet natriumkloirdløsning. Den organiske fasen ble tørket over MgS04 og inndampet. Residuet ble renset med flash-kromatografi ved eluering med 1-4% MeOH i diklormetan, hvilket ga 1.6 g (73%) av benzylaminet i form av en gul olje. <!>H-NMR (400 MHz, CDC13): 8 7.84 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 7.34 (m, 5H), 7.16 (s, 1H), 6.99 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.81 (s, 2H).
Trinn 3: Benzyl-(3-metoksy-4-nitro-benzyl)-karbaminsyre-tert-butylester. En 150 ml rundbunnet kolbe som inneholdt 0.92 g (3.4 mmol, 1 ekv.) N-benzyl-N-(3-metoksy-4-nitro-benzyl)-amin i 2 ml diklormetan, ble tilsatt Boc-anhydrid (0.74 g, 3.4 mmol, 1 ekv.) og ble deretter omrørt ved romtemperatur i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble så fordelt mellom 40 ml vann og 40 ml etylacetat. Den organiske fasen ble tørket over MgS04 og inndampet. Ingen ytterligere rensning var nødvendig. 'H-NMR (400 MHz, CDCI3): 8 7.81 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 7.2-7.3 (m, 6H), 6.93 (m, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.39 (m, 4H), 3.88 (s, 3H), 1.53 (s,9H).
Trinn 4-6: l-{4-[(benzyl-metyl-amino)-metyl]-2-metoksy-fenyl}-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea. Benzyl-(3-metoksy-4-nitro-benzyl)-karbaminsyre-tert-butylester ble redusert til det tilsvarende anilin i henhold til den generelle hydrogeneringsprosedyre som er beskrevet detaljert ovenfor for forbindelse 336. Det rå anilinet ble anvendt i følgende koblingstrinn: En løsning av 5-metylpyrazin-2-karboksylsyre (34.5 mg, 0.25 mmol) som var tilsatt trietylamin (28 mg, 0.275 mmol) i 5 ml vannfri toluen, ble omrørt ved romtemperatur inntil det faste stoffet var oppløst. Difenylfosforylazid (62 mg, 0.225 mmol) ble tilsatt og løsningen ble oppvarmet til 90°C i 20 min. Reaksjonskaret ble deretter overført til et 60°C oljebad og anilinet (0.25 mmol) ble tilsatt som en løsning i 2 ml toluen. Etter omrøring i 4.5 timer ved 60°C ble blandingen avkjølt til romtemperatur, fortynnet med EtOAc, vasket med mettet NaHC03 og deretter mettet natriumkloirdløsning. Den organiske fasen ble tørket over MgS04, filtrert og inndampet. Det resulterende residuet ble renset med preparativ TLC ved eluering med 5% MeOH i CH2CI2, hvilket ga den ønskede urea-forbindelse. Boc-gruppen ble fjernet ved behandling av det Boc-beskyttede amin i 15 ml CH2CI2, med 3 ml TFA og omrøring ved romtemperatur i 3 timer. Blandingen ble fortynnet med EtOAc (50 ml), vasket med 20 ml mettet NaHC03, etterfulgt av 20 ml mettet natriumkloirdløsning. Den organiske fasen ble deretter tørket over MgSC«4, filtrert og inndampet, hvilket ga det frie aminet. 'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 11.35 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.28 (d, J= 8.21 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.36 (s, 6H), 6.96 (s, 1H), 6.94 (d, J= 8.21 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.84 (s, 2H), 3.81 (s, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.13 (s, 1H). MS APCI-pos. M+l = 377.9.
Forbindelse 339:
l-(2-metoksy-4-metylaminometyl-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1 +2: (3-metoksy-4-nitro-benzyl)-metyl-karbaminsyre-tert-butylester. 3-metoksy-4-nitro-benzylbromid ble alkylert med metylamin på en måte som ligner den som er beskrevet ovenfor for den analoge benzyl-derivat-forbindelsen 338, og det resulterende sekundære amin ble beskyttet i form av et Boc-derivatet.1 H-NMR (400 MHz, CDCU): 8 7.84 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.87 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 4.46 (s, 2H), 3.95 (s, 7H), 2.85 (s, 3H), 1.53 (s, 9H).
Trinn 3: (4-amino-3-metoksy-benzyl)-metyl-karbaminsyre-tert-butylester. I et 250 ml Parr-apparat ble 0.98 g (3.5 mmol) (3-metoksy-4-nitro-benzyl)-metyl-karbaminsyre-tert-butylester i 40 ml etanol, hydrogenert ved 2 atm over 300 mg 10% Pd på karbon, i 15 minutter. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering gjennom et glassfiber-filter og filtratet ble inndampet, hvilket ga et råprodukt i form av en lysegul olje.1 H-NMR (400 MHz, CDC13): 8 6.69 (m, 3H), 3.95 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 2.8 (m, 2H), 2.75 (s, 3H), 1.51 (s, 9H).
Trinn 4+5: l-(2-metoksy-4-metylaminometyl-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea. En løsning av (4-amino-3-metoksy-benzyl)-metyl-karbaminsyre-tert-butylester, ble omdannet til ureaet i henhold til den generelle difenylfosforylazid-koblingsmetode som er beskrevet detaljert for forbindelse 336. Boc-gruppen ble fjernet som beskrevet ovenfor for forbindelse 338. 'H-NMR (400 MHz, de-DMSO): 8 9.91 (s, 2H), 8.78 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.07 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.85 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.59 (s, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.26 (s, 3H). MS APCI-Pos. M+l =301.8.
Forbindelse 340:
l-{4-[(Benzyl-metyl-amino)-metyl]-2-metoksy-feny
Trinn 1: N-benzyl-N-(3-metoksy-4-nitro-benzyl)-metyl-amin. En løsning av N-metyl-benzylamin ble alkylert med 3-metoksy-4-nitro-benzylbromid som beskrevet ovenfor for forbindelse 338.
'H-NMR (400 MHz, CDC13): 8 7.83 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.35 (s, 4H), 7.26 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.01 (d, J = 7.04 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.55 (s, 4H), 2.22 (s, 3H).
Trinn 2: 4-[(benzyl-metyl-amino)-metyl]-2-metoksy-fenylamin. Nikkelborid-reduksjon, generell metode: En omrørt løsning av nikkelklorid-heksahydrat (820 mg, 3.45 mmol) i 12 ml EtOH og 3 ml THF ved 0°C, ble tilsatt NaBH4 (130 mg, 3.45 mmol). Den resulterende sorte suspensjon ble omrørt ved 0°C mens N-benzyl-(3-metoksy-4-nitro-benzyl)-metyl-amin ble tilsatt som en løsning i 5 ml THF. Etter flere minutter ble
260 mg NaBH4 tilsatt i flere porsjoner i løpet av 10 minutter, og reaksjonsblandingen fikk deretter oppvarmes til romtemperatur. Etter 2 timer viste TLC fullstendig omdanning til et nytt, mer polart produkt. På dette tidspunkt ble 1.5 ml 5% NH4OH tilsatt, og reaksjonsblandingen ble omrørt i ca. 10 min inntil det sorte, faste stoffet hadde fått en kornaktig konsistens. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom et glassfiber-filter som ble skyllet med THF. Det klare, fargeløse filtratet ble inndampet til omtrent 1/4 volum, fortynnet med 30 ml vann og ekstrahert med EtOAc (3 x 30 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med mettet natriumkloridløsning, tørket over MgS04 og filtrert gjennom en kort propp av silika og inndampet under vakuum, hvilket ga 575 mg (65%) av det ønskede produkt i form av et gråhvitt, fast stoff. 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 8 7.2-7.4 (m, 5H), 7.85 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.74 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.66 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.73 (br s. 2H) 3.49 (s, 2H), 3.45 (s, 2H), 2.18 (s, 3H). MS (APCI-pos) M+l= 256.9
Trinn 3: l-{4-[(Benzyl-metyl-amino)-metyl]-2-metoksy-fenyl}-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea.
5-metylpyrazin-2-karboksylsyre (250 mg, 1.8 mmol) og di-isopropyletylamin (330 ul, 1.9 mmol) i 20 ml toluen, ble omrørt under nitrogenatmosfære i en 50 ml rundbunnet kolbe inntil syren var oppløst. Difenylfosforylazid (523 mg, 1.9 mmol) ble tilsatt, og løsningen ble oppvarmet til 90°C. Etter 20 minutter hadde nitrogenutviklingen avtatt og løsningen hadde mørknet til karamell-farge. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 65°C og 4-[(benzyl-metyl-amino)-metyl]-2metoksy-fenylamin (486 mg, 1.9 mmol) ble tilsatt som en løsning i 5 ml toluen. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 65°C i 6 timer og ble deretter avkjølt til romtemperatur, fortynnet med 30 ml EtOAc og vasket med 15 ml 5% NH4OH. Den vandige fasen ble ekstrahert med EtOAc (2 x 20 ml), og de samlede organiske lag ble vasket med 30 ml mettet natriumkloridløsning, tørket over MgS04, filtrert og inndampet. Det resulterende residu ble renset med flash-kromatografi, hvilket ga 285 mg (40%) av det ønskede produkt som ble ytterligere renset med utgnidning med dietyleter. Sm.p.=142-143°C.1 H-NMR (400 MHz, CDC13): 8 11.33 (s, 1H), 9.51 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.27 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.2-7.4 (m, 5H), 6.96 (d, J = 7.83 Hz, 1H) 3.97 (s, 3H), 3.53 (s, 4H), 2.53 (s, 3H), 2.22 (s, 3H). <13>C-NMR (400 MHz, CDCI3): 8 153.70,149.03,147.48, 147.4,145.99,138.73,137.38,134.81,129.19,128.42,127.16,121.89,119.81,111.05, 104.49, 94.98, 87.22, 61.81, 56.37,42.5. MS (APCI-pos) M+l=392.0.
Forbindelse 341:
l-(4-dimetylaminometyl-2-metoksy-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1: (3-metoksy-4-nitro-benzyl)-dimetyl-amin.
3-metoksy-4-nitro-benzylbromid ble behandlet med dimetylamin i henhold til metoden beskrevet ovenfor for forbindelse 338, hvilket ga det ønskede produkt. 'H-NMR (400 MHz, CDCI3): 8 7.86 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.3 (s, 1H), 6.98 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.5 (s, 2H), 2.3 (s, 6H).
Trinn 2: 4-dimetylaminometyl-2-metoksy-fenylamin.
(3-metoksy-4-nitro-benzyl)-dimetyl-amin ble redusert til det tilsvarende anilin i henhold til nikkel-boird-metoden som er beskrevet for forbindelse 340 ovenfor, og ble anvendt i neste
trinn uten karakterisering.
Trinn 3: l-(4-dimerylaminometyl-2-metoksy-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea. 4-dimetylaminometyl-2-metoksy-fenylamin ble omdannet til (5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea-forbindelsen i henhold til difenylfosforylazid-metoden som er beskrevet ovenfor for forbindelse 336. Råproduktet ble renset med preparativ TLC ved eluering med 5% MeOH i CH2C12. 'H-NMR (400 MHz, ds-DMSO): 8 11.21 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.21 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.89 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.92 (s, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.24 (s, 6H), MS APCI-Pos. M+l =316. 0.
Forbindelse 342:
l-(4-aminometyl-2-metoksy-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
Trinn 1:2-(3-metoksy-4-nitro-benzyl)-isoindol-l,3-dion. En 250 ml rundbunnet kolbe som inneholdt 10 g (55 mmol) 4-nitro-3-metoksybenzylalkohol i 150 ml THF, ble tilsatt dietylazodiakarboksylat (8.03 g, 54.6 mmol, 1 ekv.) og trifenylfosfin (15.0 g, 57.3 mmol), etterfulgt av 11.6 g ftalimid (57.3 mmol) ved 0°C. Reaksjonsbalndingen fikk deretter gradvis nå romtemperatur natten over. Det dannede hvite presipitat ble oppsamlet ved sugefiltrering. Omkrystallisering fra acetonitril ga 13.8 g (81%) av det ønskede produkt.
<*>H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 7.79 (m, 5H), 7.19 (s, 1H), 7.08 (d, J= 8. 80 Hz, 1H), 4.91 (s, 2H), 3.87 (s, 3H).
Trinn 2: 2-(4-amino-3-metoksy-benzyl)-isoindol-l,3-dion. I en 500 ml Parr-beholder ble en delvis oppløst suspensjon av 2-(3-metoksy-4-nitro-benzyl)-isoindol-l,3-dion (1.50 g, 4.80 mmol) i 100 ml EtOH og 30 ml THF, hydrogenert over 250 mg 10 % Pd-C ved 2.5 atm i 1 time. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering gjennom et glassfiber-filter, og det klare, lysegule filtratet ble inndampet under vakuum. Produktet ble vasket med 30 ml dietyleter og oppsamlet ved sugefiltrering, hvilket ga 1.28 g (95%) av anilinet i form av fine, lysegrønne nåler. tø-NMR (400 MHz, CDC13): 8 7.82 (m, 2H), 7.81 (m, 2H), 6.93 (s, 1H), 6.9 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.63 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.74 (s, 2H), 3.84 (s, 3H).
Trinn 3: Acylazid-kobling, generell metode
1- [4-(l,3-diokso-13-dihydro-isoindol-2-ylmetyl)-2-metoksy-fenyl]-3-(5-metyl-pyrazin-2- yl)-urea. En løsning av 5-metyl-pyrazin-2-karbonylazid (510 mg, 3.15 mmol) i 15 ml vannfri toluen, ble omrørt under nitrogenatmosfære i en 50 ml rundbunnet kolbe. Reaksjonskolben ble nedsenket i et 90°C oljebad, og da den indre temperatur nådde 90°C var gassutviklingen tydelig og løsningen begynte å mørkne. Etter 20 min hadde brusingen avtatt og løsningen hadde mørknet til karamell-farge. Reaksjonskolben ble flyttet til et 65°C bad, og 2-(4-amino-3metoksy-benzyl)-isoindol-l,3-dion (884 mg, 3.15 mmol)
oppslemmet i toluen (5 ml), ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 65°C i 6 timer, deretter avkjølt til romtemperatur. Produktet som ble utfelt fra løsningen etter avkjøling til romtemperatur, ble oppsamlet ved sugefiltrering. I tilfeller hvor produktet ikke utfelles fra reaksjonsblandingen benyttes følgende opparbeidelse: Etter avkjøling til romtemperatur blir den brune løsningen fortynnet med 5% vandig NH4OH og ekstrahert med EtOAc (3x). De samlede ekstrakter blir vasket med mettet natriumkloirdløsning, tørket over MgS04, filtrert og inndampet. Residuet blir deretter renset med flash-kromatografi i et passende løsningsmiddelsystem.
Trinn 4: l-(4-aminometyl-2-metoksy-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea.. En suspensjon av l-[4-(l,3-diokso-l,3-dihydro-isoindol-2-ylmetyl)-2-metoksy-fenyl]-3(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea (620 mg, 1.48 mmol) i 22 ml EtOH under nitrogenatmosfære, ble i en 100 ml rundbunnet kolbe oppvarmet under omrøring til 70°C. Hydrazinmonohydrat (1.4 ml) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved 70°C. Etter 10 minutter hadde reaksjonsblandingen blitt en fullstendig homogen karamellfarget løsning. Etter ytterligere none minutter begynte produktet å utfelles fra løsningen. Etter 20 min ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur og det hvite, faste produktet ble oppsamlet ved sugefiltrering. Råproduktet, som inneholdt noe ftalhydrazid-biprodukt, ble tatt opp i 80 ml EtOAc og vasket med vann (3 x 20 ml). Vaskevolumene ble ekstrahert med 30 ml EtOAc og de samlede organiske lag ble vasket med mettet natriumkloirdløsning, deretter tørket over MgS04, filtrert og inndampet under vakuum, hvilket ga 400 mg (94%) av det ønskede amin. Sm.p.=168-169°C. 'H-NMR (400 MHz, de-DMSO): 8 9.88 (br s, 2H), 8.78 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.05 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.85 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.68 (s, 2H), 2.42 (s, 3H) 1.80 (b. s, 2H, NH2). MS (APCI-pos) M-17 (-NH3) = 270.1 (APCI-neg) M-l=285.8.
Alkyl-derivater av Forbindelse 342.
Forbindelse 343:
En løsning av l-(4-aminometyl-2-metoksy-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea (0.25 mmol, 1.0 ekv.) og 1 ml trimetylortoformat i 4 ml MeOH, ble omrørt ved romtemperatur, deretter ble tiofen-2-karboksaldehyd (2.5 mmol, 10 ekv.) tilsatt og blandingen ble oppvarmet ved 80°C. Etter 18 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur og inndampet under vakuum. Det resulterene imin ble tatt opp i 5 ml vannfri MeOH og omrørt ved 0°C. Natrium-borhydrid (0.75 mmol, 3 ekv.) ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 30 minutter, ble deretter fortynnet med 2 ml vann og fordelt mellom 50 ml EtOAc og 30 ml mettet NaHC03. Den organiske fasen ble vasket med mettet natriumkloirdløsning, tørket over MgS04, filtrert og inndampet. Ved behov ble produktet renset med flash-kromatografi ved eluering med en passende MeOH-CH2Cl2-blanding,
l-(2-metoksy-4-{[(tiofen-2-ylmetyl)-aminol-meryl}-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO): 8 10.01 (s, 2H), 8.79 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.17 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 7.59 (d, J= 6.26 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.15 (m, 2H), 7.05 (s, 1H), 6.97 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 4.02 (s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.88 (s, 1H), 3.78 (s, 1H), 2.43 (s, 3H). MS APCI-Pos, ingen detekterbare molekylioner.
Forbindelse 344:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 343, ved bruk av tiofen-3 -karboksaldehyd.
l-(2-metoksy-4-{[(tiofen-3-ylmetyl)-aminol-metyl}-fenyl)-3-(5 metyl-pyrazin-2-yl)-urea
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 9.92 (s, 2H), 8.78 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.07 (d, J= 7.81 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.3 (s, 1H), 7.11 (d, J = 4. 88 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.87 (d, J=7.81 Hz, 1H), 3.9 (s, 3H), 3.67 (s, 2H), 3.65 (s, 2H), 2.42 (s, 3H), MS APCI-Neg, M-l =382.0.
Forbindelse 345:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 343, ved bruk av furfural.
l-(4-{[(Furan-2-ylmetyl)-amino]-metyl}-2-metoksy-fenyl)-3-(5-meryl-pyrazin-2-yl)-urea •H-NMR (400 MHz, MeOD): 8 8.57 (s, 1H), 8.2 (s, 1H), 8.1 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.88 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 6.36 (s, 1H), 6.27 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.74 (s, 2H), 3.71 (s, 2H), 2.48 (s, 3H). MS APCI-Neg, M-l =366.0.
Forbindelse 346:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 343, ved bruk av furan-3 -karboksaldehyd.
l-(4-{[(furan-3-ylmeryl)-amino]-metyl}-2-metoksy-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
'H-NMR (400 MHz, MeOD): 8 8.58 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.13 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.91 (d, J= 7.04 Hz, 1H), 6.5 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.78 (s, 2H), 3.69 (s, 2H), 2.49 (s, 3H). MS APCI-Neg, M-l =366.0
Forbindelse 347:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 343, ved bruk av 2-metoksybenzaldehyd.
l-{2-metoksy-4-[(2-metoksy-benzylamino)-metyl]-fenyl}-3-(5-metyl-pyrazin-2-yI)-urea
'H-NMR (400 MHz, CDC13): 8 11.3 (s, 1H), 9.97 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.22 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.28 (m, 2H), 7.06 (s, 1H), 6.88 (m, 3H), 4.08 (s, 1H), 3.93 (s, 5H), 3.81 (s, 5H), 2.5 (s, 3H). MS APCI-Pos, M+l =407.8.
Forbindelse 348:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 343, ved bruk av 3 -metoksybenzaldehyd.
l-{2-metoksy-4-[(3-metoksy-benzylamino)-metyl]-fenyl}-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
'H-NMR (400 MHz, dVDMSO): 8. 8.57 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.11 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 7.83 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.91 (m, 3H), 6.83 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.75 (s, 4H), 2.48 (s, 3H). MS APCI-Neg, M-l =406.0
Forbindelse 349:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 343, ved bruk av 4-metoksybenzaldehyd.
l-{2-metoksy-4-[(4-metoksy-benzylamino)-metyl]-fenyl}-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 9.91 (s, 2H), 8.78 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.07 (d, J= 7.81 Hz, 1H), 7.25 (d, J= 8.78 Hz, 2H), 7.03 (s, 1H), 6.88 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.62 (s, 2H), 3.6 (s, 2H), 2.42 (s, 3H). MS APCI-Pos. M+l =407.9.
Acyl-derivater
Forbindelse 350:
En løsning av l-(4-aminometyl-2-metoksy-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea (100 mg, 0.35 mmol) i 30 ml THF og 15 ml vandig NaHC03, ble behandlet med 3.7 mmol (1.05 ekv.) acetylklorid. Den bifasiske reaksjonsblanding ble kraftig omrørt ved romtemperatur og ble etter 2 timer fortynnet med 10 ml vann og ekstrahert med EtOAc (3 x 20 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med mettet natriumkloridløsning, tørket over MgS04 og filtrert gjennom en kort propp av silika. Filtratet ble inndampet og det resulterende residuet ble utgnidd med dietyleter. Om nødvendig ble ytterligere rensning utført ved hjelp av flash-kromatografi ved eluering med et passende metanol-CH2Cl2-løsningsmiddelsystem.
N-{3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzyl}-acetamid
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 9.92 (s, 2H), 8.75 (s, 1H), 8.28 (t, J= 5.87 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.07 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.78 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 4.19 (s, 1H), 4.18 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 2.4 (s, 3H), 1.85 (s, 3H). MS ESI-pos. M+l = 330.2.
Forbindelse 351:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 350, ved bruk av metoksyacetylklorid.
2-metoksy-N-{3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzyl}-acetaiiiid
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 9.51 (s, 2H), 8.34 (s, 1H), 7.89 (t, J= 6.26 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.65 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 6.54 (s, 1H), 6.38 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 4.2 (s, 1H), 4.19 (s, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.79 (s, 2H), 3.29 (s, 3H), 2.35 (s, 3H). MS APCI-Pos. M+l = 359.9.
Forbindelse 352:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 350, ved bruk av dimetylamino-acetylklorid.
2-dimetylamino-N-{3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzyl}-acetamid
'H-NMR (400 MHz, MeOD): 8 8.56 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.09 (d, J = 7.83 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.86 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 4.37 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.03 (s, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.3 (s, 6H). MS APCI-Neg, M-l = 370.9.
Forbindelse 353:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 350, ved bruk av 2-(2-pyridyl)-acetylklorid.
N- {3-metoksy-4- [3-(5-mety l-pyrazin-2-yl)-ureido] -benzy l}-2-py ridin-2-y I-acetamid
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO): 8 9.94 (s, 2H), 8.77 (s, 1H), 8.63 (t, J= 5.87 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.44 (d, J= 6.26 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.08 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 7.7 (d, J= 10.17 Hz, 1H), 7.35 (q, J= 5.74 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.79 (d, J = 9.39 Hz, 1H), 4.25 (s, 1H), 4.24 (s, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.53 (s, 2H), 2.42 (s, 3H). MS APCI-Pos M+l = 407.1.
Forbindelse 354:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 350, ved bruk av 2-(4-metoksyfenyl)acetylklorid.
N-{3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzyl}-2-(4-metoksy-fenyl)-acetamid
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO): 8 9.94 (s, 2H), 8.77 (s, 1H), 8.54 (t, J=4.7 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.08 (d, J= 7.83 Hz, 2H), 7.89 (m, 1H), 7.22 (t, J= 7.83 Hz, 1H), 6.89 (s, 3H), 4.25 (s, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.8 (s, 3H), 3.73 (s, 2H), 3.45 (s, 2H), 2.42 (s, 3H). MS (APCI-Pos) M+l = 436.2.
Forbindelse 355:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 350, ved bruk av benzoylklorid.
N-{3-metoksy-4-[3-(5-meryl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzyI}-benzamid
<*>H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 9.95 (s, 2H), 9.02 (t, J= 5.48 Hz, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.1 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 7.9 (d, J = 7.83 Hz, 2H), 7.48 (m, 3H), 7.04 (s, 1H), 6.88 (d, J= 10.17 Hz, 1H), 4.46 (s, 1H), 4.44 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 2.42 (s, 3H). MS APCI-Pos, M+l =391.9.
Forbindelse 356:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 350, ved bruk av pyridin-2-karbonylklorid.
Pyridin-2-karboksylsyre-3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzylamid
<*>H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 9.94 (s, 2H), 9.29 (t, J= 6.26 Hz, 1H), 8.77 (m, 1H), 8.65 (m, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.05 (m, 3H), 7.61 (m, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.89 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 4.47 (s, 1H), 4.45 (s, 1H), 3.88 (s, 1H), 2.42 (s, 3H). MS APCI-Pos, ingen detekterbare molekyl-ioner.
Forbindelse 357:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 350, ved bruk av nikotinoylklorid.
N-{3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzyl}-nikotinamid
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 10 (s, 2H), 9.26 (t, J= 5.87 Hz, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.77 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 8.27 (s, 2H), 8.16 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 7.58 (m, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.95 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 4.53 (s, 1H), 4.51 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.47 (s, 3H). MS APCI-Pos, M-l = 397.9.
Forbindelse 358:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 350, ved bruk av isonikotinoylklorid.
N-{3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzyl}-isonikotinamid
<*>H-NMR (400 MHz, de-DMSO): 8 9.92 (s, 2H), 9.27 (t, J= 5.87 Hz, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.71 (d, J= 6.3 Hz, 2H), 8.18 (s, 1H), 8.08 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.77 (d, J= 6.3 Hz, 2H), 7 (s, 1H), 6.86 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.43 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 2.39 (s, 3H). MS APCI-pos, ingen detekterbare molekylioner.
Forbindelse 359:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 350, ved bruk av tiofen-2-karbonylklorid.
Tiofen-2-karboksylsyre-3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzylamid
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 9.96 (s, 2H), 9.03 (t, J= 6.26 Hz, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.11 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 7.82 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 7.77 (d, J= 3.91 Hz, 1H), 7.16 (d, J= 3.91 Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.88 (d, J= 10.17 Hz, 1H), 4.43 (s, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 2.42 (s, 3H). MS APCI-pos, M-l = 397.9.
Forbindelse 360:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 350, ved bruk av 4-dimetylamino-2-karbonylklorid.
3-dimetylamino-N-{3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzyl}-benzamid
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 9.94 (s, 2H), 8.9 (t, J= 5.87 Hz, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.09 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 7.26 (t, J= 7.83 Hz, 1H), 7.2 (s, 2H), 7.02 (s, 1H), 6.87 (d, J= 8.61 Hz, 2H), 4.44 (s, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.93 (s, 6H), 2.42 (s, 3H), MS APCI-pos, M+l = 434.9.
Forbindelse 361:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 350, ved bruk av 1 -fenyl-4-trifluormetyl-1 H-pyrazol-3 -karbonylklorid.
1- fenyl-4-trifluormetyl-lH-pyrazol-3-karboksylsyre3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzylamid
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 9.96 (s, 2H), 9.09 (t, J= 6.26 Hz, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.12 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 7.59 (m, 6H), 7.02 (s, 1H), 6.89 (d, J = 8.61 Hz, 1H), 4.43 (s, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.9 (s, 3H), 2.42 (s, 3H). MS TIC-pos M+l = 526.2.
Sulfonylerte derivater
Forbindelse 362:
En løsning av l-(4-aminometyl-2-metoksy-fenyl)-3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-urea (0.25 mmol, 1.0 ekv.), 4-dimetylaminopyridin (5 mg), di-isopropyletylamin (36 mg, 0.275 mmol,. 1.1 ekv.) i THF (5 ml), ble fremstilt, og tiofen-2-sulfonylklorid (0.275 mmol, 1.1 ekv.) ble tilsatt. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom EtOAc (75 ml) og mettet NaHC03. Etter separering av lagene ble det organiske laget vasket med vann, mettet natriumkloridløsning, tørket over MgS04, filtrert og inndampet. Residuet ble renset med flash-kromatografi ved eluering med 5 % MeOH i diklormetan og utgnidning med eter, hvilket ga rene produkter.
Tiofen-2-sulfonsyre3-metoksy-4-[3-(5-methyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzylamid 'H-NMR (400 MHz, dVDMSO): 8 9.96 (s, 2H), 8.77 (s, 1H), 8.33 (t, J = 7.04 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.07 (d, J = 7.83 Hz, 1H), 7.93 (d, J= 4. 7 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.18 (t, J= 3.91 Hz, 1H), 6.9 (s, 1H), 6.8 (t, J= 7.04 Hz, 1H), 4.05 (s, 1H), 4.03 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.51 (s, 3H). MS APCI-Pos, M+l = 433.9.
Forbindelse 363:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 362 ved bruk av benzensulfonylklorid.
N-{3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzyl}-benzensulfonamid
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO): 8 9.95 (s, 2H), 8.77 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.13 (t, J= 6.26 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 7.04 Hz, 2H), 7.58 (m, 3H), 6.85 (s, 1H), 6.77 (d, 7=8. 61 Hz, 1H), 3.96 (s, 1H), 3.95 (s, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.42 (s, 3H). MS APCI-Pos, M+l =428.2.
Forbindelse 364:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 362 ved bruk av 2-trifluormetoksybenzensulfonylklorid.
N-[3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzyl}-2-trifluormetoksy-benzensulfonamid
'H-NMR (400 MHz, dé-DMSO): 8 9.94 (s, 2H), 8.77 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.02 (d, J = 8.61 Hz, 1H), 7.89 (m, 1H), 7.72 (t, J= 7.83 Hz, 1H), 7.51 (d, J= 7.83 Hz, 2H), 6.88 (s, 1H), 6.75 (d, J=10.17 Hz, 1H), 4.11 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 2.42 (s, 3H). MS APCI-Pos, M+l =512.0.
Forbindelse 365:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 362 ved bruk av 3-metoksybenzensulfonylklorid.
3-metoksy-N- {3-metoksy-4- [3-(5-mety 1-py razin-2-y l)-ureido] -benzyl}-benzensulfonamid
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 9.92 (s, 2H), 8.73 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.01 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 7.45 (t, J= 7.83 Hz, 1H), 7.34 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.14 (m, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.74 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 3.93 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 2.38 (s, 3H). MS APCI-Pos, M+l =458.0.
Forbindelse 366:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 362 ved bruk av 4-metoksybenzensulfonylklorid.
4-metoksy-N-{3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzyl}-benzensulfonamid
'H-NMR (400 MHz, de-DMSO): 8 9.93 (s, 2H), 8.74 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.02 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.69 (d, J= 8.61 Hz, 2H), 7.05 (d, J= 9.39 Hz, 2H), 6.81 (s, 1H), 6.74 (d, J= 7.83 Hz, 1H), 3.88 (s, 2H), 3.79 (s, 6H), 2.39 (s, 3H), MS APCI-Pos, M+l =458.2.
Forbindelse 367:
Fremstilt i henhold til den generelle prosedyre beskrevet for forbindelse 362 ved bruk av pyridin-2-sulfonylklorid.
Pyridin-2-sulfonsyre-3-metoksy-4-[3-(5-metyl-pyrazin-2-yl)-ureido]-benzylamid
'H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8 9.91 (s, 2H), 8.74 (s, 1H), 8.68 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.99 (m, 2H), 7.86 (d, J = 7.83 Hz, 1H), 7.6 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.74 (d, J= 8.61 Hz, 1H), 4.1 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.32 (s, 1H), 2.38 (s, 3H). MS APCI-Pos, M+l =428.9.
Eksempel 15
Identifisering av Chkl- inhibitorer
Det humane Chkl-cDNA ble identifisert og klonet som beskrevet tidligere i den internasjonale søknad PCT/US98/18558, innlevert 4. september, 1998. En FLAG-markør ble innsatt i ramme med amino-terminusen i Chkl av full lengde. 5'-primeren inneholder et EcoRI-sete, en Kozak-sekvens og koder også for en FLAG®-markør for affinitetsrensning ved bruk av antistoffet M2 (Sigma, Saint Louis, IL). 3'-primeren inneholder et Sall-sete. Det PCR-amplifiserte fragmentet ble klonet inn i pCI-Neo som et EcoRI-Sall-fragment (Invitrogen, Carlsbad, CA), deretter subklonet som et EcoRI-Notl-fragment i pFastBacI (Gibco-BRL, Bethesda, MD). Rekombinante baculovirus ble fremstilt som beskrevet i bruksanvisningen for "Bac-to-Bac" fra Gibco-BRL, og anvendt for å infisere Sf-9-celler som var dyrket i CCM3 -medium (HyClone Laboratories, Logan, UT) for ekspresjon av FLAG®-merket Chkl-protein.
FLAG®-merket Chkl ble renset fra frosne pellets av baculovirus-infiserte SF9-celler. Frosne cellepellets ble blandet med et likt volum 2X lyseringsbuffer som inneholdt 100 mM Tris-HCl pH 7.5,200 mM NaCl, 50 mM B-glycerofosfat, 25 mM NaF, 4 mM MgCl2,0.5 mM EGTA, 0.2% TWEEN®-20,2 mM natriumvanadat, 2 mM DTT og en blanding av proteaseinhibitorer (Complete mini, Boehringer Mannheim 2000 katalognr. 1836170). Celler ble deretter støtt forsiktig 20 ganger med pistill i en støte-homogenisator og sentrifugert ved 48.400 x g i 1 time. M2-affiniteten ble forvasket med 10 kolonnevolumer 50 mM glycin pH 3.5, etterfulgt av tre ganger med 20 mM Tris pH 7.5 og 150 mM NaCl etter hverandre, og til slutt en Tris NaCl-vask. Kolonnen ble deretter vasket med 25 kolonnevolumer 20 mM Tris pH 7.5,150 mM NaCl, 0.1% TWEEN®-20,1 mM EGTA, 1 mM EDTA og IX Complete mini protease-tabletter. Det klarede lysatet ble deretter bundet til M2-affinitetsharpiks i serie ("batch") ved 4°C i 4 timer. Blandingen av harpiks og lysat ble deretter hellet i en kolonne og væsken som kom ut ble oppsamlet. Harpiksen ble vasket med 10 kolonnevolumer 20 med Tris pH 7.5,150 mM NaCl og 3 mM N-oktyl glucosid. FLAG®-merket Chkl ble deretter eluert fra kolonnen med 6 kolonnevolumer kald 20 mM Tris pH 7.5,150 mM NaCl, 3 mM N-oktyl glucosid som inneholdt 0.5 mg/ml FLAG-peptid (Sigma, 2000 katalognr. F3290). Tre fraksjoner ble oppsamlet og analysert med hensyn til FLAG-merket Chkl.
Proteinkinasen ble anvendt for å utvikle et assay for Chkl-kinase-aktivitet som omfatter 100 ng renset FLAG®-Chkl (150 pmol ATP/min), 20 um Cdc25C-peptid (H-leu-tyr-arg-ser-pro-ser-met-pro-glu-asn-leu-asn-arg-arg-arg-arg-OH) (SEKV ID NR: 1), 400 um ATP, 2 uCi [<32>P]-gATP, 20 mM Hepes pH 7.2, 5 mM MgCl2,0.1% NP40 og 1 mM DTT. Dette assayet ble anvendt for å screene omtrent 100.000 små molekyl-inhibitorer. Reaksjonene ble initiert ved tilsetning av ATP-holdig reaksjonblanding og ble utført ved romtemperatur i 10 min. Reaksjonene ble stanset ved tilsetning av fosforsyre (150 mM totalkonsentrasjon) og overført til fosfocellulose-plater. Fosfocellulose-platene ble vasket fem ganger med 150 mM fosforsyre og lufttørket. Scintillasjonsvæske ble tilsatt og platene ble tellet i en Wallac scintillasjonsteller. Screeningen identifiserte flere Chkl-inhibitorer som har IC50-verdier i området 1 til 100 uM.
Eksempel 16
Chkl- kinase- inhibitorer er selektive
Chkl-inhibitorer ifølge foreliggende oppfinnelse ble testet for selektivitet overfor én eller flere andre proteinkinaser, d.v.s. DNA-PK, Cdc2, kaseinkinase I (CKI), Chk2, p38-MAP-kinase, proteinkinase A (PKA) og kalsium-calmodulin-proteinkinase II (CaM Kil). Assay-prosedyrer for alle disse kinaser, bortsett fra for Chk2, er tidligere beskrevet i litteraturen, bl.a. i den midlertidige US-søknad 60/229.899, innlevert 1. september 2000 og US-søknad 08/184.605, innlevert 21. januar 1994, som begge inntas som referanse heri.
Forbindelsenes aktivitet overfor Chk2 ble undersøkt i henhold til følgende: 128 ng renset His-merket Chk2 ble inkubert med opptil 100 mM Chkl-inhibitor, i nærvær av 4 mM ATP, 1 mCi [<32>P]g-ATP, 20 mM Hepes pH 7.5, 5 mM MgCl2 og 0.25% NP40, i 20 minutter ved romtemperatur. Reaksjonene ble stanset med en totalkonsentrasjon på 150 mM fosforsyre og 5/8 av reaksjonsblandingen ble overført til fosfocellulose-plater. Platene ble vasket fem ganger med 150 mM fosforsyre og lufttørket. Scintillant ble tilsatt og radioaktiviteten ble tellet ved bruk av en Wallac beta-teller. p38 MAP-kinase, PKA, CaM Kil og Cdc2 ble anskaffet fra New England Biolabs, og assayene ble utført i henhold til produsentens instruksjoner ved bruk av 4-50 u.M ATP og ved testing av Chkl-inhibitor-konsentrasjoner så høye som 100 uM. Alle inhibitorer som ble testet hadde minst 5 ganger høyere selektivitet for Chkl enn for de andre enzymene.
Eksempel 17
Chkl- inhibitorer blokkerer Chkl- funksjon i celler
Chkl aktiveres som respons på ioniserende stråling og visse kjemiske DNA-skadende midler. I nærvær av DNA-skade aktiveres Chkl og forårsaker cellecyklusstans i pattedyrceller. Den best karakteriserte cellecyklus-stans fremkalt av Chkl, er G2-stans. Aktivering av Chkl ved DNA-skade resulterer i fosforylering og inaktivering av Cdc25C, den fosfatasen med dobbel spesifisitet som normalt defosforylerer cyclin B/cdc2 når celler går inn i mitose (Funari et al; Science, 5. sept. 1997; 277 (5331) 1495-7; Sanchez et al; Matsuoka et al. og Blasina et al). Denne negative reguleringen av Cdc2-aktivitet forårsaker cellecyklus-stans for å forhindre at celler går inn i mitose i nærvær av DNA-skade eller ureplikert DNA. Hemming av Chkl tillater derfor celler å gå gjennom cellecyklusen i nærvær av DNA-skade eller ureplikert DNA.
For å bevise at Chkl-inhibitorene forhindret Chkl-funksjon i celler, ble inhibitorer testet i molekylær-celle-baserte assays. Siden pattedyr-Chkl har vist seg å fosforylere Cdc25C in vitro, hvilket indikerer at den regulerer cyclin B/cdc2 negativt som en respons på DNA-skade, ble den evne Chkl-inhibitoreene har til å forbedre aktiviteten til CyclinB/cdc2, analysert. Assayat ble utformet som følger: HeLa-celler ble bestrålet med 800 rad og inkubert i 7 timer ved 37°C. Fordi disse cellene er funksjonelt p53-negative, stanser de utelukkende i G2. Deretter ble nocodazol tilsatt til en konsentrasjon på 0.5 ug/ml og inkubert i 15 timer ved 37°C. Tilsetningen av nocodazol ble utført for å fange opp alle celler som fortsatte gjennom G2-stans og inn i M. Til slutt ble Chkl-inhibitor tilsatt i 8 timer, cellene ble høstet, lysert og like mengder protein ble immunopresipitert med et antistoff mot Cyclin Bl (New England Biolabs) som foreslått av produsenten. Ip ble deretter analysert med hensyn til CyclinB-relatert cdc2-kinase-aktivitet, ved å undersøke histon-Hl-kinase-aktivitet (Yu et al, JBiol Chem, 11. des., 1998; 273 (50): 33455-64). Resultatene viste at Forbindelse 29 overskygger den IR-fremkalte inaktivering av Cyclin B/Cdc2.
I tillegg ble det i assay for mitotisk indeks, undersøkt hvorvidt Chkl-inhibitorene opphever kontrollpunktet for IR-fremkalt G2-DNA-skade. HeLa-celler (omtrent 1 x 106) ble behandlet som beskrevet ovenfor. Cellene ble høstet ved sentrifugering, vasket én gang med PBS, deretter oppslemmet i 2.5 ml 75 mM KC1 og sentrifugert på nytt. Cellene ble deretter fiksert i 3 ml nyfremstilt, kald eddiksyre:metanol (1:3) og inkubert på is i 20 minutter. Cellene ble pelletert, fikseringsløsningen ble sugd opp, og oppslemmet i 0.5 ml PBS. Mitotisk fordeling ("spreads") ble fremstilt ved at pipettere 100 ul av de fikserte cellene ble utpipettert på objektglass og prøven ble så dekket med 1 ml fikseringsløsning. Preparatene ble deretter lufttørket, merket med Wrights farge (Sigma) i 1 minutt, etterfulgt av én vask i vann og én vask i 50% metanol. Mitotiske celler ble identifisert ved tilstedeværelsen av kondenserte kromosomer og mangelen på kjernekappe. Både Forbindelse 12 og 29 viste en økning i antall mitotiske celler under bestråling som påviser at den IR-fremkalte G2-stans er opphevet.
Opphevelse av kontrollpunktet for IR-fremkalt G2, tillater at cellene fortsetter gjennom cellecyklusen, antagelig i nærvær av DNA-skade, som vist ved analyse av DNA-innhold ved FACS-profil. 293T-celler ble behandlet med 800 rad ioniserende stråling og økende konsentrasjoner (opptil 80 mM) av noen av Chkl-inhibitorene. Cellene ble deretter høstet og fiksert med 5 ml kald 70% etanol ved -20°C natten over. Cellene ble deretter pelletert ved sentifugering ved 1000 x g i 10 minutter og merket med 1 ml løsning som inneholdt 50 mg/ml propidiumjodid og 250 mg/ml RNase i 30 minutter ved romtemperatur. Merkede celler ble deretter analysert med FACS på FL2 ved bruk av et Becton-Dickinson-apparat. Disse forsøkene viste at de cellene som ble behandlet med stråling og vehikkel alene, forble i G2-stans, mens de Chkl-inhibitor-behandlede cellene ble fordelt mellom Gl- og S-fasen. Dette resultatet, sammen med resulatene ovenfor, tyder på at Chkl-inhibitorene tillater at cellene fortsetter cyklusen under ioniserende stråling,
Eksempel 18
Chkl- inhibitorer forsterker celledrap ved kreft- behandling
For å teste hypotesen om at hemming av Chkl forsterker drapseffekten av DNA-skadende midler, ble celler inkubert i nærvær av selektiv Chkl-inhibitorer og enten bestråling eller kjemiske DNA-skadende midler. Cellene ble platet med en tetthet på 1000-2000 pr. brønn i 96-brønners mikrotiterplater som ble dyrket i RMPI1640 som inneholdt 10% FBS, 100 U/ml penicillin og 100 ug/ml streptomycin, i 18 timer ved 37°C i en fuktet inkubator med 5% CO2. Cellene som ble testet omfatter HeLa, ACHN, 786-0,
HCT116, SW620, HT29, Colo205, SK-MEL-5, SK-MEL-28, A549, H322, OVCAR-3, SK-OV-3, MDA-MB-231, MCF-7, PC-3, HL-60, K562 og MOLT4. Alle cellelinjer var humane og cellelinje-betegnelsene viser til følgende:
Celler ble behandlet med media som inneholdt kjemoterapeutiske medikamenter alene eller kjemoterapeutiske medikamenter og Forbindelse 12 og 29. Cellene ble inkubert i omtrent 5 dager før veksten ble målt ved å bestemme grad av 3H-tymidin-opptak.
De kjemoterapeutiske medikamenter omfatter etoposid, doxorubicin, cisplatin, klorambucil, 5-fluoruracil (5-FU). Den medikament-konsentrasjon som var nødvendig for å hemme cellevekst av ubehandlede kontrollceller til 90%, ble definert som GL90.1 konsentrasjoner som var lavere enn 100 uM, forsterket Forbindelse 12 og 29 dreping av 5-FU fra 2 til 10 ganger.
Forbindelse 2 og 12 ble testet med ytterligere antimetabolitter, som omfatter methotrexat, hydroksyurea, 2-kloradenosin, fludarabin, azacytidin og gemcitibin, med hensyn til deres evne til å forsterke dreping. Det ble funnet at disse Chkl-inhibitorene forsterket celledrap ved bruk av hydroksyurea, fludarabin, 5-azacytidin og methotrexat, hvilket indikerer at kombinasjonen av hemming av Chkl og blokkering av DNA-syntese fører til økt celledød ved bruk av disse midlene.
I tillegg ble den evne Chkl-inhibitoren har til å forsterke dreping ved bestråling, testet. I HeLa-celler ble det funnet at Forbindelse 12 og 29 forsterket dreping ved bestråling 2-3 ganger.
Eksempel 19
Dvretumor- modeller
For å teste den evne Chkl-inhibitorer har til å forsterke dreping av tumorer i mus ved bruk av 5-FU, ble det laget Xenograft-tumormodeller ved bruk av kolon-tumor-cellelinjer. Colo205- og HT29-celler (humant kolon-karsinom) ble anvendt for å dyrke xenograft-tumorer i 6-8 uker gamle tymiske Balb/C (nu/nu)-hunmus. Musene ble holdt i en kasse med laminar luftstrøm under patogenfrie forhold, og ble foret med steril mat og vann adlibitum. Cellelinjer ble dyrket til subkonfluens i RPMI 1640-media tilsatt 10% FBS, 100 U/ml penicillin, 100 ug/ml streptomycin og 1.5 mM L-glutamin i et fuktet miljø som inneholdt 5% CO2. Enkle cellesuspensjoner ble fremstilt i CMF-PBS og cellekonsentrasjonen ble regulert til 1 x 108 celler/ml. Musen ble inokulert subkutant (s.c) i høyre side eller høyre lår med totalt 1 x IO<7> celler (100 ul).
Musene ble randomisert (5 mus/gruppe) i fire behandlingsgrupper og ble benyttet når tumoren hadde oppnådd en vekt på 75-100 mg (vanligvis 7-11 dager etter inokulering). Tumorene ble målt med skyvelære, og tumorvekten ble beregnet ved bruk av den empirisk avledede formel: tumorvekt (mg) = tumorlengde (mm) x tumorbredde (mm)2/3.3. Behandlingen bestod av i) 100 ul intraperitoneal (i.p). injeksjon av 5-FU ved 50 mg/kg, 100 mg/kg eller 150 mg/kg. En doseavhengig forsinkelse i tumorvekst ble observert hos musen som var behandlet med 5-FU. Tumorstørrelsen ble overvåket annenhver dag under hele forsøket.

Claims (7)

1. Forbindelse, karakterisert ved at den er gitt ved følgende formel: hvor Y'er O eller S; W er valgt fra gruppen som består av eventuelt substituert med fra én til fire substituenter valgt fra gruppen som består av Ci-6alkyl, eventuelt substituert aryl, N(R<7>)2, CF3, N3, C(0)R7, CN, Ci-3alkylenaryl, Ci-3alkylenN(R12)2, OR7, halo og Z' er valgt fra gruppen som består av hvori: Q' er valgt fra gruppen som består av hydrogen, OR7, SR7 og N(R<7>)2; J' er valgt fra gruppen som består av CR<8>, NR<8>,0 og S; K' er valgt fra gruppen som består av CR<9>, NR<9>,0 og S; L' er valgt fra gruppen som består av CR<10>, NR<10>,0 og S; M' er valgt fra gruppen som består av CR1NR11,0 og S; hvori: R<7> uavhengig er valgt fra gruppen som består av hydrogen, Ci^alkyl, C2-6alkenyl, sykloalkyl, aryl, heteroaryl, SO2R12, Ci-6alkyl substituert med én eller flere halogen, hydroksy, aryl, heteroaryl, heterosykloalkyl, N(R<12>)2 og SO2R<12>, Cijalkylenaryl, Ci. 3alkylenheteroaryl, Ci.3alkylenC3.8 heterosykloalkyl, Ci-3alkylenS02aryl, eventuelt substituert Ci.3alkylenN(R,<2>)2, OCF3, Ci.3alkylenN(R<12>)3<+>, C3.8heterosykloalkyl og CH(Ci-3alkylenN(R<12>)2)2, eller to R<7->grupper danner sammen en eventuelt substituert 3- til 6-leddet alifatisk ring; R<8>, R<9> og R1<0> er valgt uavhengige av hverandre fra gruppen som består av null, hydrogen, halogen, eventuelt substituert Ci^alkyl, C2-6alkenyl, OCF3, N02, CN, NC, N(R<7>)2, OR<7>, C02R<7>, C(0)N(R<7>)2, C(0)R<7>, N(R<13>)COR<7>, N(R<13>)C(0)OR<7>, N(R<7>)C(0)OR<7>, N(R<7>)C(0)Ci.3alkylenC(0)R7, N(R<7>)C(0)Ci_3alkylenC(0)OR<7>, N(R<7>)C(0)-Ci.3alkylen0R<7>, N(R<7>)C(0)Ci.3alkylenNHC(0)OR<7>, N(R<7>)C(0)C1.3alkylenS02NR<7>, CF3, Ci-3alkylenN(R12)S02aryl, Ci.3alkylenN(R12)S02heteroaryl, Ci.3alkylenOCi.3alkylenaryl, Ci.3alkylenN(R<12>)Ci-3alkylenaryl, Ci.3alkylenN(R12)Ci.3alkylenheteroaryl, Q-3alkylenN(R12)C(0)R7, C,.3alkylenN(R12)C(0)Ci.3alkylenOR2, Ci.3alkylenN(R12)C(0)aryl, Ci-3alkylenN(R12)C(0)Ci-3alkylenN(R12)2, Ci.3alkylenN(R<12>)C(0)heteroaryl, Ci.3alkylenOR7 og SR<7>, hvor R<7> er som definert ovenfor; R<11> er valgt fra gruppen som består av null, hydrogen, eventuelt substituert Ci-6alkyl og halogen; R<12> er valgt fra gruppen som består av hydrogen, Ci^alkyl, Ci-6sykloalkyl, aryl, heteroaryl, Cioalkylenaryl og S02Ci.6alkyl, eller to R<12->grupper danner sammen en eventuelt substituert 3- til 6-leddet ring; og R<13> er valgt fra gruppen som består av hydrogen, Ci^alkyl, C2-6alkenyl, C2-6alkynyl og aryl; forutsatt at når Q' er hydrogen eller OCH3, er minst én av R<8>, R<9> og R1<0> ikke valgt fra hydrogen, CH3, OCH3 eller halogen; hvori aryl betyr en monosyklisk eller polysyklisk aromatisk gruppe og heteroaryl betyr et monosyklisk eller bisyklisk ringsystem som inneholder én eller to aromatiske ringer og som inneholder minst ett nitrogen, oksygen eller svovelatom i en aromatisk ring; og farmasøytisk akseptable salter derav.
2. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at W er
3. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved atQ'er OR .
4. Forbindelse ifølge krav 3, karakterisert ved at R<13> er hydrogen.
5. Farmasøytisk sammensetning karakterisert ved at den omfatter en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-4, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, i kombinasjon med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer.
6. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-4 for anvendelse ved behandling av kreft i et menneske.
7. Anvendelse av en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-4 for fremstilling av et preparat for behandling av kreft i et menneske.
NO20033858A 2001-03-02 2003-09-01 CHK1-inhibitorer, farmasoytiske sammensetninger samt anvendelser derav NO326776B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US27312401P 2001-03-02 2001-03-02
PCT/US2002/006452 WO2002070494A1 (en) 2001-03-02 2002-03-01 Aryl and heteroaryl urea chk1 inhibitors for use as radiosensitizers and chamosensitizers

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20033858D0 NO20033858D0 (no) 2003-09-01
NO20033858L NO20033858L (no) 2003-10-10
NO326776B1 true NO326776B1 (no) 2009-02-16

Family

ID=23042649

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20033858A NO326776B1 (no) 2001-03-02 2003-09-01 CHK1-inhibitorer, farmasoytiske sammensetninger samt anvendelser derav

Country Status (28)

Country Link
US (3) US7067506B2 (no)
EP (1) EP1379510B1 (no)
JP (1) JP4222833B2 (no)
KR (2) KR20080046228A (no)
CN (1) CN100374425C (no)
AT (1) ATE511503T1 (no)
AU (1) AU2002258451B2 (no)
BR (1) BR0207811A (no)
CA (1) CA2439709C (no)
CY (1) CY1111590T1 (no)
DK (1) DK1379510T3 (no)
EA (1) EA014954B1 (no)
ES (1) ES2365504T3 (no)
GE (1) GEP20053659B (no)
HK (1) HK1062438A1 (no)
HR (1) HRP20030688B1 (no)
IL (1) IL157563A0 (no)
IS (1) IS6935A (no)
MX (1) MXPA03007920A (no)
NO (1) NO326776B1 (no)
NZ (1) NZ527787A (no)
PL (1) PL212707B1 (no)
PT (1) PT1379510E (no)
RS (1) RS52077B (no)
SI (1) SI1379510T1 (no)
UA (1) UA76977C2 (no)
WO (1) WO2002070494A1 (no)
ZA (1) ZA200306721B (no)

Families Citing this family (98)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8124630B2 (en) 1999-01-13 2012-02-28 Bayer Healthcare Llc ω-carboxyaryl substituted diphenyl ureas as raf kinase inhibitors
JP2002534468A (ja) 1999-01-13 2002-10-15 バイエル コーポレイション ｐ３８キナーゼ阻害剤としてのω−カルボキシアリール置換ジフェニル尿素
UA76977C2 (en) * 2001-03-02 2006-10-16 Icos Corp Aryl- and heteroaryl substituted chk1 inhibitors and their use as radiosensitizers and chemosensitizers
WO2003068228A1 (en) 2002-02-11 2003-08-21 Bayer Pharmaceuticals Corporation Aryl ureas with angiogenesis inhibiting activity
CA2482341A1 (en) * 2002-04-09 2003-10-23 7Tm Pharma A/S Novel methoxybenzamide compounds for use in mch receptor related disorders
US7202244B2 (en) 2002-05-29 2007-04-10 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Chk-1 inhibitors
JP4881559B2 (ja) 2002-06-27 2012-02-22 ノボ・ノルデイスク・エー／エス 治療薬としてのアリールカルボニル誘導体
RU2340605C2 (ru) 2002-06-27 2008-12-10 Ново Нордиск А/С Арилкарбонильные производные в качестве терапевтических средств
WO2004009558A2 (en) 2002-07-24 2004-01-29 Ptc Therapeutics, Inc. Ureido substituted benzoic acid compounds, their use for nonsense suppression and the treatment of diseases caused by such mutations
US20040034038A1 (en) * 2002-08-13 2004-02-19 Goaquan Li Urea kinase inhibitors
US7056925B2 (en) * 2002-08-13 2006-06-06 Abbott Laboratories Urea kinase inhibitors
AU2003226929A1 (en) * 2002-11-25 2004-06-18 7Tm Pharma A/S Novel benzamide compounds for use in mch receptor related disorders
JP3990718B2 (ja) 2003-01-09 2007-10-17 ファイザー・インク キナーゼ阻害剤としてのジアゼピノインドール誘導体
NZ562414A (en) * 2003-02-21 2009-02-28 Resmed Ltd Headgear assembly for nasal pillow mask
US7557129B2 (en) 2003-02-28 2009-07-07 Bayer Healthcare Llc Cyanopyridine derivatives useful in the treatment of cancer and other disorders
US7320986B2 (en) 2003-03-07 2008-01-22 Abbott Labortories Fused tri and tetra-cyclic pyrazole kinase inhibitors
GB2400101A (en) * 2003-03-28 2004-10-06 Biofocus Discovery Ltd Compounds capable of binding to the active site of protein kinases
PT1636585E (pt) 2003-05-20 2008-03-27 Bayer Pharmaceuticals Corp Diarilureias com actividade inibidora de cinase
US7297709B2 (en) 2003-05-22 2007-11-20 Abbott Laboratories Indazole, benzisoxazole, and benzisothiazole kinase inhibitors
US20050245563A1 (en) * 2003-05-29 2005-11-03 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Chk-1 inhibitors
US8637553B2 (en) 2003-07-23 2014-01-28 Bayer Healthcare Llc Fluoro substituted omega-carboxyaryl diphenyl urea for the treatment and prevention of diseases and conditions
WO2005016909A1 (en) * 2003-08-15 2005-02-24 Astrazeneca Ab Substituted thiophenes and uses thereof
US7338957B2 (en) * 2003-08-28 2008-03-04 Irm Llc Compounds and compositions as protein kinase inhibitors
MXPA06002296A (es) 2003-08-29 2006-05-22 Pfizer Tienopiridina-fenilacetamidas y sus derivados utiles como nuevos agentes antiangiogenicos.
CA2539320A1 (en) * 2003-09-17 2005-03-31 Icos Corporation Use of chk1 inhibitors to control cell proliferation
CA2541949A1 (en) 2003-10-07 2005-05-26 Renovis, Inc. Amide derivatives as ion-channel ligands and pharmaceutical compositions and methods of using the same
US7163939B2 (en) * 2003-11-05 2007-01-16 Abbott Laboratories Macrocyclic kinase inhibitors
US20050096324A1 (en) * 2003-11-05 2005-05-05 Zhi-Fu Tao Macrocyclic kinase inhibitors
EP2444397A1 (en) 2004-01-06 2012-04-25 Novo Nordisk A/S Heteroaryl-ureas and their use as glucokinase activators
WO2005072733A1 (en) * 2004-01-20 2005-08-11 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Dyarylurea compounds as chk-1 inhibitors
JP5136929B2 (ja) 2004-03-24 2013-02-06 アボット・ラボラトリーズ 三環式ピラゾール系キナーゼ阻害薬
US7625949B2 (en) 2004-04-23 2009-12-01 Roche Palo Alto Llc Methods for treating retroviral infections
US7166738B2 (en) 2004-04-23 2007-01-23 Roche Palo Alto Llc Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors
US20050276765A1 (en) * 2004-06-10 2005-12-15 Paul Nghiem Preventing skin damage
GB0512324D0 (en) * 2005-06-16 2005-07-27 Novartis Ag Organic compounds
WO2006012308A1 (en) * 2004-06-25 2006-02-02 Icos Corporation Bisarylurea derivatives useful for inhibiting chk1
KR20070043996A (ko) * 2004-07-02 2007-04-26 이코스 코포레이션 Ｃｈｋ1의 억제에 유용한 화합물
BRPI0514466A (pt) * 2004-08-19 2008-06-10 Icos Corp composto, composição, e, métodos de inibir a quinase 1 do ponto de controle em uma célula, de sensibilizar células, e de inibir a proliferação celular aberrante
DE102004055582A1 (de) 2004-11-18 2006-05-24 Bayer Cropscience Ag N-Heterocyclyl-phthalsäurediamide
CA2589274A1 (en) * 2004-12-07 2006-06-15 Locus Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of protein kinases
CA2589271A1 (en) * 2004-12-07 2006-06-15 Locus Pharmaceuticals, Inc. Urea inhibitors of map kinases
US7576099B2 (en) 2005-02-28 2009-08-18 Renovis, Inc. Amide derivatives as ion-channel ligands and pharmaceutical compositions and methods of using the same
JP5117374B2 (ja) * 2005-03-29 2013-01-16 イコス・コーポレイション Ｃｈｋ１阻害に有用なヘテロアリール尿素誘導体
BRPI0617720A2 (pt) 2005-10-19 2011-08-02 Hoffmann La Roche compostos inibidores de nnrt de fenil-acetamida, usos dos referidos compostos e composição farmacêutica que os contém
US8014957B2 (en) 2005-12-15 2011-09-06 Fred Hutchinson Cancer Research Center Genes associated with progression and response in chronic myeloid leukemia and uses thereof
GEP20105074B (en) 2005-12-21 2010-09-10 Novartis Ag Pyrimidinyl aryl urea derivatives being fgf inhibitors
CA2635888A1 (en) * 2006-01-04 2007-07-19 Locus Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of protein kinases
JP2009541323A (ja) * 2006-06-22 2009-11-26 マリンクロット インコーポレイテッド 拡張された共役を有するピラジン誘導体およびその使用
EP1882475A1 (en) * 2006-07-26 2008-01-30 Novartis AG Method of treating disorders mediated by the fibroblast growth factor receptor
US9056136B2 (en) * 2006-10-06 2015-06-16 Natural Pharmacia International, Inc. Weakly basic 2-nitroimidazoles for the non-invasive detection of tissue hypoxia
NZ575394A (en) 2006-10-20 2012-01-12 Icos Corp Compositions of chk1 inhibitors and cyclodextrin
JP2010510222A (ja) * 2006-11-17 2010-04-02 シェーリング コーポレイション 増殖性障害に対する併用療法
WO2008140724A1 (en) 2007-05-08 2008-11-20 Schering Corporation Methods of treatment using intravenous formulations comprising temozolomide
US9000027B2 (en) * 2008-02-04 2015-04-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Chk1 suppresses a caspase-2 apoptotic response to DNA damage that bypasses p53, bcl-2 and caspase-3
ES2378513T3 (es) 2008-08-06 2012-04-13 Pfizer Inc. Compuestos 2-heterociclilamino piracinas sustituidas en posición 6 como inhibidores de CHK-1
US8314108B2 (en) 2008-12-17 2012-11-20 Eli Lilly And Company 5-(5-(2-(3-aminopropoxy)-6-methoxyphenyl)-1H-pyrazol-3-ylamino)pyrazine-2-carbonitrile, pharmaceutically acceptable salts thereof, or solvate of salts
EP2241557A1 (de) * 2009-04-02 2010-10-20 Æterna Zentaris GmbH Chinoxalin-Derivate und deren Anwendung zur Behandlung gutartiger und bösartiger Tumorerkrankungen
CN101857575A (zh) * 2009-04-07 2010-10-13 上海合全药业有限公司 2-氨基-5-甲基吡嗪的工业化制备方法
CN101560175B (zh) * 2009-05-08 2012-10-10 南京大学 一类硫脲类衍生物及其制备方法与用途
AU2010273816B2 (en) 2009-06-29 2015-07-09 Incyte Holdings Corporation Pyrimidinones as PI3K inhibitors
EP2305643A1 (en) * 2009-10-02 2011-04-06 Ikerchem, S.L. New histone deacetylase inhibitors based simultaneously on trisubstituted 1h-pyrroles and aromatic and heteroaromatic spacers
WO2011075630A1 (en) * 2009-12-18 2011-06-23 Incyte Corporation Substituted fused aryl and heteroaryl derivatives as pi3k inhibitors
WO2011075643A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Incyte Corporation Substituted heteroaryl fused derivatives as pi3k inhibitors
WO2011130342A1 (en) 2010-04-14 2011-10-20 Incyte Corporation FUSED DERIVATIVES AS ΡI3Κδ INHIBITORS
JP5585822B2 (ja) * 2010-05-11 2014-09-10 東レ・ファインケミカル株式会社 光学活性ニペコチン酸誘導体の製造方法
GB201008005D0 (en) 2010-05-13 2010-06-30 Sentinel Oncology Ltd Pharmaceutical compounds
US9062055B2 (en) 2010-06-21 2015-06-23 Incyte Corporation Fused pyrrole derivatives as PI3K inhibitors
EP2655374B1 (en) 2010-12-20 2019-10-23 Incyte Holdings Corporation N-(1-(substituted-phenyl)ethyl)-9h-purin-6-amines as pi3k inhibitors
WO2012094297A1 (en) * 2011-01-03 2012-07-12 The Regents Of The University Of California Azuvirin peptides
WO2012125629A1 (en) 2011-03-14 2012-09-20 Incyte Corporation Substituted diamino-pyrimidine and diamino-pyridine derivatives as pi3k inhibitors
US9126948B2 (en) 2011-03-25 2015-09-08 Incyte Holdings Corporation Pyrimidine-4,6-diamine derivatives as PI3K inhibitors
AR087760A1 (es) 2011-09-02 2014-04-16 Incyte Corp Heterociclilaminas como inhibidores de pi3k
GB201119799D0 (en) 2011-11-16 2011-12-28 Sentinel Oncology Ltd Pharmaceutical compounds
AR090548A1 (es) 2012-04-02 2014-11-19 Incyte Corp Azaheterociclobencilaminas biciclicas como inhibidores de pi3k
AU2014293011A1 (en) 2013-07-26 2016-03-17 Race Oncology Ltd. Compositions to improve the therapeutic benefit of bisantrene
GB201402277D0 (en) 2014-02-10 2014-03-26 Sentinel Oncology Ltd Pharmaceutical compounds
US10077277B2 (en) 2014-06-11 2018-09-18 Incyte Corporation Bicyclic heteroarylaminoalkyl phenyl derivatives as PI3K inhibitors
PT3262046T (pt) 2015-02-27 2020-12-24 Incyte Corp Sais de inibidor de pi3k e processos para a sua preparação
US9732097B2 (en) 2015-05-11 2017-08-15 Incyte Corporation Process for the synthesis of a phosphoinositide 3-kinase inhibitor
US9988401B2 (en) 2015-05-11 2018-06-05 Incyte Corporation Crystalline forms of a PI3K inhibitor
JP6966996B2 (ja) 2015-09-17 2021-11-17 シティ・オブ・ホープCity of Hope Ｐｃｎａ阻害剤
SI3411036T1 (sl) 2016-02-04 2022-03-31 Pharmaengine, Inc. 3,5-disubstituirani pirazoli, uporabni kot kontrolne točke inhibitorjev kinaze 1 (CHK1), ter njihovi pripravki in uporaba
CN106632093A (zh) * 2016-11-23 2017-05-10 山东友帮生化科技有限公司 一种2‑溴‑5,6‑二苯基吡嗪的制备方法
KR20190130621A (ko) 2017-03-31 2019-11-22 시애틀 지네틱스, 인크. Chk1 저해제와 wee1 저해제의 조합물
EP3461480A1 (en) 2017-09-27 2019-04-03 Onxeo Combination of a dna damage response cell cycle checkpoint inhibitors and belinostat for treating cancer
CN112040945A (zh) 2018-06-12 2020-12-04 Vtv治疗有限责任公司 葡萄糖激酶激活剂与胰岛素或胰岛素类似物组合的治疗用途
JP7482122B2 (ja) * 2018-07-03 2024-05-13 アイエフエム デュー インコーポレイテッド Ｓｔｉｎｇ活性に関連する状態を治療するための化合物および組成物
GB201813060D0 (en) * 2018-08-10 2018-09-26 Artios Pharma Ltd Novel compounds
CN111377874A (zh) * 2018-12-28 2020-07-07 南京艾德凯腾生物医药有限责任公司 一种制备赛乐西帕中间体的方法
JP2022515309A (ja) * 2018-12-28 2022-02-18 四川科倫博泰生物医薬股▲フン▼有限公司 置換アリール化合物、その製造方法及び用途
CN111377873B (zh) * 2018-12-28 2023-03-28 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 氨基嘧啶化合物及其制备方法和用途
JP7260718B2 (ja) 2019-11-29 2023-04-18 メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッド ジアザインドール誘導体及びそのＣｈｋ１阻害剤としての使用
WO2021119236A1 (en) 2019-12-10 2021-06-17 Seagen Inc. Preparation of a chk1 inhibitor compound
GB202107924D0 (en) 2021-06-03 2021-07-21 Sentinel Oncology Ltd A pharmaceutical salt
GB202107932D0 (en) 2021-06-03 2021-07-21 Sentinel Oncology Ltd Preparation of a CHK1 Inhibitor Compound
CN115353512A (zh) * 2021-07-30 2022-11-18 上海翊石医药科技有限公司 一种杂环脲类化合物及其制备方法和用途
CN113717115A (zh) * 2021-08-27 2021-11-30 湖北石河医药科技有限公司 一种赛乐西帕中间体的制备方法及其在制备赛乐西帕中的应用
WO2023172880A2 (en) * 2022-03-07 2023-09-14 City Of Hope Pcna inhibitors and uses thereof

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2762743A (en) * 1953-03-11 1956-09-11 Merck & Co Inc 1-phenyl-3(3-as-triazinyl) urea compositions for the treatment of coccidiosis and method for preparing the same
US4609659A (en) * 1985-01-16 1986-09-02 Merck & Co., Inc. 2,6-disubstituted derivatives of 3-nitropyrazines useful as adjuncts to radiation therapy
US5215738A (en) * 1985-05-03 1993-06-01 Sri International Benzamide and nicotinamide radiosensitizers
US5041653A (en) * 1985-05-03 1991-08-20 Sri International Substituted benzamide radiosensitizers
SU1624949A1 (ru) 1987-12-15 1996-02-27 И.И. Красильников м,N-БУТИРИЛАМИНОБЕНЗАМИД, ОБЛАДАЮЩИЙ РАДИОСЕНСИБИЛИЗИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ
SU1621447A1 (ru) 1989-06-29 1996-02-27 О.В. Арапов м,-(N-ТРИФТОРАЦЕТИЛАМИНО)БЕНЗАМИД, ОБЛАДАЮЩИЙ РАДИОСЕНСИБИЛИЗИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ
US5212738A (en) * 1991-04-12 1993-05-18 Martin Marietta Magnesia Specialties Inc. Scanning laser measurement system
AU2871592A (en) 1991-10-11 1993-05-03 Du Pont Merck Pharmaceutical Company, The Cyclic ureas and analogues useful as retroviral protease inhibitiors
WO1994026715A1 (en) * 1993-05-11 1994-11-24 Smithkline Beecham Plc Amidine derivatives as gastric acid secretion inhibitors
US5547966A (en) * 1993-10-07 1996-08-20 Bristol-Myers Squibb Company Aryl urea and related compounds
GB9420999D0 (en) * 1994-10-18 1994-12-07 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
US6033582A (en) * 1996-01-22 2000-03-07 Etex Corporation Surface modification of medical implants
US6051218A (en) * 1996-02-02 2000-04-18 The Regents Of The University Of California Tumor radiosensitization using gene therapy
US6093742A (en) 1997-06-27 2000-07-25 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of p38
AU9211098A (en) * 1997-09-03 1999-03-22 American Home Products Corporation Thiourea for increasing hdl-cholesterol levels, which are useful as anti-atherosclerotic agents
US6218109B1 (en) * 1997-09-05 2001-04-17 Baylor College Of Medicine Mammalian checkpoint genes and proteins
PL341059A1 (en) * 1997-12-11 2001-03-26 Janssen Pharmaceutica Nv Mimetic anilides of retinoic acid
WO1999031073A1 (fr) 1997-12-15 1999-06-24 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Nouveaux derives de pyrimidine-5-carboxamide
PT1042305E (pt) 1997-12-22 2005-10-31 Bayer Pharmaceuticals Corp Inibicao de quinase p38 utilizando difenilureias simetricas e assimetricas
TR200002616T2 (tr) 1997-12-22 2000-11-21 Bayer Corporation Simetrik ve simetrik olmayan sübstitüe edilmiş difenil üreler kullanılarak raf kinazın inhibe edilmesi
US6268387B1 (en) * 1997-12-23 2001-07-31 Warner-Lambert Company Thiourea and benzamide compounds, compositions and methods of treating or preventing inflammatory diseases and atherosclerosis
US6383744B1 (en) 1998-07-10 2002-05-07 Incyte Genomics, Inc. Human checkpoint kinase
DK1115707T3 (da) * 1998-09-25 2004-03-01 Astrazeneca Ab Benzamidderivater og deres anvendelse som cytokininhibitorer
GB9823873D0 (en) * 1998-10-30 1998-12-30 Pharmacia & Upjohn Spa 2-ureido-thiazole derivatives,process for their preparation,and their use as antitumour agents
FR2787322B1 (fr) 1998-12-18 2002-10-18 Galderma Res & Dev Emulsion huile-dans-eau comprenant un agent actif micronise et un systeme emulsionnant approprie
AU3631500A (en) 1999-03-19 2000-10-09 Du Pont Pharmaceuticals Company N-adamant-1-yl-n'-(4-chlorobenzothiazol-2-yl) urea useful in the treatment of inflammation and as an anticancer radiosensitizing agent
UA71971C2 (en) 1999-06-04 2005-01-17 Agoron Pharmaceuticals Inc Diaminothiazoles, composition based thereon, a method for modulation of protein kinases activity, a method for the treatment of diseases mediated by protein kinases
DE60024631T2 (de) 1999-07-26 2006-06-14 Banyu Pharma Co Ltd Biaryl-harnstoff-derivate
US6670167B1 (en) 1999-11-01 2003-12-30 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Catalytic domain of the human effector cell cycle checkpoint protein kinase materials and methods for identification of inhibitors thereof
AU2001229727B2 (en) 2000-02-07 2004-10-14 Bristol-Myers Squibb Co. 3-aminopyrazole inhibitors of cyclin dependent kinases
US6211164B1 (en) * 2000-03-10 2001-04-03 Abbott Laboratories Antisense oligonucleotides of the human chk1 gene and uses thereof
UA76977C2 (en) * 2001-03-02 2006-10-16 Icos Corp Aryl- and heteroaryl substituted chk1 inhibitors and their use as radiosensitizers and chemosensitizers

Also Published As

Publication number Publication date
JP2004523568A (ja) 2004-08-05
EA200300947A1 (ru) 2004-04-29
CA2439709A1 (en) 2002-09-12
UA76977C2 (en) 2006-10-16
ZA200306721B (en) 2004-05-03
ATE511503T1 (de) 2011-06-15
NZ527787A (en) 2005-12-23
PT1379510E (pt) 2011-07-15
PL212707B1 (pl) 2012-11-30
US20050245525A1 (en) 2005-11-03
CN1507436A (zh) 2004-06-23
NO20033858L (no) 2003-10-10
IS6935A (is) 2003-08-29
BR0207811A (pt) 2005-02-01
HRP20030688B1 (hr) 2013-12-06
MXPA03007920A (es) 2003-12-04
WO2002070494A1 (en) 2002-09-12
CN100374425C (zh) 2008-03-12
EA014954B1 (ru) 2011-04-29
IL157563A0 (en) 2004-03-28
AU2002258451B2 (en) 2006-08-31
US20100105683A1 (en) 2010-04-29
HK1062438A1 (en) 2004-11-05
EP1379510B1 (en) 2011-06-01
CA2439709C (en) 2011-05-03
DK1379510T3 (da) 2011-08-29
GEP20053659B (en) 2005-11-10
JP4222833B2 (ja) 2009-02-12
CY1111590T1 (el) 2015-10-07
RS52077B (sr) 2012-06-30
US7067506B2 (en) 2006-06-27
HRP20030688A2 (en) 2005-10-31
KR20030078957A (ko) 2003-10-08
ES2365504T3 (es) 2011-10-06
SI1379510T1 (sl) 2011-10-28
PL364564A1 (en) 2004-12-13
NO20033858D0 (no) 2003-09-01
YU69003A (sh) 2006-05-25
EP1379510A1 (en) 2004-01-14
KR100861829B1 (ko) 2008-10-07
KR20080046228A (ko) 2008-05-26
US20030069284A1 (en) 2003-04-10
US7608618B2 (en) 2009-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO326776B1 (no) CHK1-inhibitorer, farmasoytiske sammensetninger samt anvendelser derav
AU2002258451A1 (en) Aryl and Heteroaryl Urea CHK1 Inhibitors for Use as Radiosensitizers and Chemosensitizers
US7560462B2 (en) Compounds useful for inhibiting CHK1
US20150353538A1 (en) Compounds and therapeutic uses thereof
CA2602199C (en) Heteroaryl urea derivatives useful for inhibiting chk1
US20080318974A1 (en) Compounds Useful for Inhibiting Chk1
JP2008535830A5 (no)
CA2571424A1 (en) Bisarylurea derivatives useful for inhibiting chk1

Legal Events

Date Code Title Description
CREP Change of representative

Representative=s name: ZACCO NORWAY AS, POSTBOKS 2003 VIKA, 0125 OSLO, NO

MM1K Lapsed by not paying the annual fees