NO323171B1 - Isolert nukleotidsekvens som omfatter en acetohydroksysyresynthasepromoter, anvendelse derav, transformasjonsvektor, plantecelle og plante omfattende nevnte nukleotidsekvens, nukleinsyrekonstruksjon omfattende sekvensen og fremgangsmate for anvendelser derav. - Google Patents
Isolert nukleotidsekvens som omfatter en acetohydroksysyresynthasepromoter, anvendelse derav, transformasjonsvektor, plantecelle og plante omfattende nevnte nukleotidsekvens, nukleinsyrekonstruksjon omfattende sekvensen og fremgangsmate for anvendelser derav. Download PDFInfo
- Publication number
- NO323171B1 NO323171B1 NO19971069A NO971069A NO323171B1 NO 323171 B1 NO323171 B1 NO 323171B1 NO 19971069 A NO19971069 A NO 19971069A NO 971069 A NO971069 A NO 971069A NO 323171 B1 NO323171 B1 NO 323171B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- gene
- promoter
- plant
- nucleotide sequence
- maize
- Prior art date
Links
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title claims description 31
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title claims description 31
- 230000009466 transformation Effects 0.000 title claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims description 13
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims description 10
- 108010000700 Acetolactate synthase Proteins 0.000 title description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 90
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 80
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims abstract description 58
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 57
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims abstract description 56
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 claims abstract description 55
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 claims abstract description 55
- 101710103719 Acetolactate synthase large subunit Proteins 0.000 claims description 47
- 101710182467 Acetolactate synthase large subunit IlvB1 Proteins 0.000 claims description 47
- 101710171176 Acetolactate synthase large subunit IlvG Proteins 0.000 claims description 47
- 101710176702 Acetolactate synthase small subunit Proteins 0.000 claims description 47
- 101710147947 Acetolactate synthase small subunit 1, chloroplastic Proteins 0.000 claims description 47
- 101710095712 Acetolactate synthase, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 47
- 101710196435 Probable acetolactate synthase large subunit Proteins 0.000 claims description 47
- 101710181764 Probable acetolactate synthase small subunit Proteins 0.000 claims description 47
- 101710104000 Putative acetolactate synthase small subunit Proteins 0.000 claims description 47
- 102100027328 2-hydroxyacyl-CoA lyase 2 Human genes 0.000 claims description 40
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 24
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 claims description 15
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 9
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 claims description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 claims description 6
- CAAMSDWKXXPUJR-UHFFFAOYSA-N 3,5-dihydro-4H-imidazol-4-one Chemical compound O=C1CNC=N1 CAAMSDWKXXPUJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940100389 Sulfonylurea Drugs 0.000 claims description 3
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 claims description 2
- -1 sulfonylurea compound Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 abstract description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 13
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 abstract description 8
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 abstract description 7
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 abstract description 6
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 abstract description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 28
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 24
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 21
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 21
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 16
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 10
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 10
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 10
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 8
- 108010003581 Ribulose-bisphosphate carboxylase Proteins 0.000 description 7
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 7
- 101150021974 Adh1 gene Proteins 0.000 description 6
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 6
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 6
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 6
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N (4r,7s,10s,13s,16r)-16-acetamido-13-(1h-imidazol-5-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15-tetraoxo-7-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14-tetrazacycloheptadecane-4-carboxamide Chemical compound N1C(=O)[C@@H](NC(C)=O)CSSC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CC1=CN=CN1 FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N 0.000 description 5
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 5
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 5
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 4
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 4
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 4
- 108020004518 RNA Probes Proteins 0.000 description 4
- 239000003391 RNA probe Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 3
- 244000045232 Canavalia ensiformis Species 0.000 description 3
- 108010066133 D-octopine dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 3
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 3
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000010617 Phaseolus lunatus Nutrition 0.000 description 3
- 241000482268 Zea mays subsp. mays Species 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 101150054900 gus gene Proteins 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 3
- 101710197633 Actin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102100032047 Alsin Human genes 0.000 description 2
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 2
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 2
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 2
- 101100437498 Escherichia coli (strain K12) uidA gene Proteins 0.000 description 2
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 2
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 2
- 101000776160 Homo sapiens Alsin Proteins 0.000 description 2
- 108700005084 Multigene Family Proteins 0.000 description 2
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 2
- 241000592342 Tracheophyta Species 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 108700041896 Zea mays Ubi-1 Proteins 0.000 description 2
- 108010050181 aleurone Proteins 0.000 description 2
- 101150103518 bar gene Proteins 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 108010083942 mannopine synthase Proteins 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- JXCKZXHCJOVIAV-UHFFFAOYSA-N 6-[(5-bromo-4-chloro-1h-indol-3-yl)oxy]-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid;cyclohexanamine Chemical compound [NH3+]C1CCCCC1.O1C(C([O-])=O)C(O)C(O)C(O)C1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 JXCKZXHCJOVIAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000208140 Acer Species 0.000 description 1
- 101710187578 Alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 240000001436 Antirrhinum majus Species 0.000 description 1
- 241000233788 Arecaceae Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 108700003860 Bacterial Genes Proteins 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 1
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 1
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 description 1
- 241000219357 Cactaceae Species 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 240000006497 Dianthus caryophyllus Species 0.000 description 1
- 235000009355 Dianthus caryophyllus Nutrition 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000002395 Euphorbia pulcherrima Species 0.000 description 1
- 241000701484 Figwort mosaic virus Species 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 1
- 240000002024 Gossypium herbaceum Species 0.000 description 1
- 235000004341 Gossypium herbaceum Nutrition 0.000 description 1
- 101000664887 Homo sapiens Superoxide dismutase [Cu-Zn] Proteins 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000234435 Lilium Species 0.000 description 1
- 244000100545 Lolium multiflorum Species 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 241000218378 Magnolia Species 0.000 description 1
- 241000218922 Magnoliophyta Species 0.000 description 1
- 235000006679 Mentha X verticillata Nutrition 0.000 description 1
- 235000002899 Mentha suaveolens Nutrition 0.000 description 1
- 235000001636 Mentha x rotundifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241001045988 Neogene Species 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000233855 Orchidaceae Species 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 240000001090 Papaver somniferum Species 0.000 description 1
- 235000008753 Papaver somniferum Nutrition 0.000 description 1
- 241000425347 Phyla <beetle> Species 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 1
- 108010068086 Polyubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 244000305267 Quercus macrolepis Species 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 244000082988 Secale cereale Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 102100038836 Superoxide dismutase [Cu-Zn] Human genes 0.000 description 1
- 240000000581 Triticum monococcum Species 0.000 description 1
- 235000003532 Triticum monococcum subsp monococcum Nutrition 0.000 description 1
- 241000722921 Tulipa gesneriana Species 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 241001106462 Ulmus Species 0.000 description 1
- 240000000851 Vaccinium corymbosum Species 0.000 description 1
- 235000003095 Vaccinium corymbosum Nutrition 0.000 description 1
- 235000017537 Vaccinium myrtillus Nutrition 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 101150037081 aroA gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 235000021014 blueberries Nutrition 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000408 embryogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 1
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 1
- 108010002685 hygromycin-B kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000554 iris Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N sulfonylurea Chemical class OC(=N)N=S(=O)=O YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
- C12N15/8209—Selection, visualisation of transformants, reporter constructs, e.g. antibiotic resistance markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse er rettet mot isolerte nukleotid-sekvenser som omfatter en acetohydroksysyre-syntasepromoter, anvendelse derav, transformasjonsvektor, plantecelle og plante omfattende nevnte nukleotidsekvens, nukleinsyrekonstruksjon omfattende sekvensen og fremgangsmåte for anvendelser derav.
Planteriket er delt i to phyla, Bryophyta og Tracheophyta. Phylum Tracheophyta innbefatter mer enn 266.000 arter gruppert i fire subphyla. Subphyium pteropsida innbefatter klassen Angiospermae. Denne klassen er delt i to underklasser, dikotyledoner (tofrøbladede) og monokotyledoner (enfrøbladede).
Siden enfrøbladede innbefatter mange av de viktige korn- og fdrplanter, er plantegenetikere sterkt interessert i å kunne frembringe transgene monokotyledoner. Ca. 50.000 arter monokotyledoner er kjent. Disse inkluderer liljer, palmer, orkideer, iris, tulipaner, halvgress og gress. Gressartene inkluderer mais, hvete, ris og alle andre cerealier. Uheldigvis har det vært meget vanskelig å genetisk manipulere monokotyledoner, slik at det meste av arbeidet med planter har vært med dikotyledoner.
Dikotyledoner er den største av de to gruppene med ca. 200.000 kjente arter. Soleie, løvemunn, nellik, magnolia, valmue, kål, rose, ert, julestjerne, bomullsplante, kaktus, gulrot, blåbær, mint, tomat, solsikke, alm, eik og lønn utgjør 19 av de 250 familier av tofrøbladede.
Den genetiske informasjon i et DNA-molekyl tjener vanligvis som templat for syntesen av et stort antall kortere RNA-molekyler, hvorav de fleste selv tjener som templater for syntesen av spesifikke polypeptidkjeder. Spesifikke nukleotid-segmenter (ofte betegnet promotere) gjenkjennes av RNA polymerasemolekyler som utløser RNA-syntese. Etter at transkripsjon av en funksjonell RNA-kjede er fullført, fører en annen klasse av signaler til terminering av RNA-syntesen og løsrivning av RNA polymerasemolekylene fra deres respektive DNA-templater.
For tiden finnes en rekke vanlige promotere som benyttes for å utløse heterolog genekspresjon i enfrøbladede planter.
David McElroy, et al., (1990) registrerte at bestemmelser av transient ekspresjon av en konstruksjon hvor promoteren fra ris-aktin 1 genet (Act 1) var fusjonert til det bakterielle p-glukuronidasegenet (GUS) i transformerte ris-protoplaster, viste at aktinpromoteren utløser høye nivåer av genekspresjon. Denne ekspresjon var ca. seks ganger høyere enn den som sees med maisens alkohol-dehydrogenase 1 gen- (Adh1) promoteren, og er avhengig av nærværet av et intakt Act1 5'-intron.
David McElroy, et al., (1991) registrerte at det kunne konstrueres optimaliserte vektorer for enfrøblad-transformasjon, ved å benytte enten blomkålmosaikkvirus (CaMV) 35S promoteren eller Act1 promoteren. Bestemmelser av transient ekspresjon ble foretatt både på transformerte ris- og mais-protoplaster. Addisjon av Act1-intranet og optimalisert GUS-translasjons-initieringssete til hver promotersekvens, økte genekspresjonen betydelig. Det er også registrert som et upublisert resultat at aktinpromoteren ble vist å utløse GUS-ekspresjon i transientbestemmelser av hvete-, havre-, bygg- og durra-protoplaster.
Wanggen Zhang, et al., (1991) registrerte at transgene risplanter som var bærere av et Act1-GUS-gen ved in situ hybridiseringsundersøkelser viste at Act1-promoteren har et konstitutivt ekspresjonsmønster i både vegetativt og reproduktivt vev.
Jun Cao, et al., (1992) registrerte at transgene risplanter ble selektert på bialophos etter transformasjon med bar-genet uttrykt under kontroll av enten CaMV 35S promoteren eller ris Act1 -promoteren.
Alan H. Christensen, et al., (1992) registrerte at mais-protoplaster transformert med en mais Ubi-1-CAT-genfusjon, oppviste ca. 10 ganger høyere nivåer av CAT-aktivitet enn maisceller transformert med en CaMV-35S-GUS-genfusjon ved bestemmelser av transient ekspresjon. Northern-blottanalyse av Ubi-1- og Ubi-2-transkripsjonsnivåer etter varmesjokkbehandling av maisspirer, viste at begge genene uttrykkes konstitutivt ved 25°C, men induseres etter varmesjokk.
Seiichi Toki, et al., (1992) registrerte at stabilt transformerte transgene risplanter ble oppnådd etter elektroporering-mediert transformasjon av bar-genet uttrykt under kontroll av mais Ubi-1-promoteren og seleksjon på bialophos. Dette resultat viser at Ubi-1-promoteren kan benyttes for å utløse tilstrekkelig høye nivåer av genekspresjon i ris til å muliggjøre seleksjon og regenerering av fertile, transgene risplanter.
J. Troy, et al., (1993) registrerte at stabilt transformerte hveteplanter ble oppnådd etter bombardement av kallus-vev som skrev seg fra umodne embryoer, både med bar-genet og GUS som begge uttrykkes under kontroll av mais Ubi-1-promoteren, etterfulgt av seleksjon på bialophos. Dette resultat viser at Ubi-1-promoteren kan benyttes til å utløse tilstrekkelig høye nivåer av genekspresjon i hvete til å muliggjøre seleksjon og regenerasjon av fertile, transgene planter.
Yuechun Wan og Peggy G. Lemaux (1994) registrerte at stabilt transformerte fertile byggplanter ble oppnådd etter mikroprosjektil-bombardement av embryonisk byggvev med både bar-genet og GUS som begge uttrykkes under kontroll av mais Ubi-1-promoteren, etterfulgt av seleksjon på bialophos. Dette resultat viser at Ubi-1-promoteren kan benyttes til å utløse tilstrekkelig høye nivåer av genekspresjon i bygg til å muliggjøre seleksjon og regenerasjon av fertile, transgene planter. Forsøk hvor det inngikk bombardering av et lite antall planter med enten Ubi-bar eller CaMV 35S-bar oppviste ingen signifikant forskjell i antallet av oppnådde transformanter.
Junko Kyozuka, et al., (1991) registrerte at det ble innført en mais Adh1-promoter-GUS-fusjon i ris-protoplaster for å oppnå transgene risplanter. GUS-aktiviteten i de transgene plantene ble undersøkt for å bestemme GUS-ekspresjonsmønsteret. Mais Adh1 -promoteren viste seg å påskynde konstitutiv ekspresjon i alle deler av de undersøkte planter. Som tidligere demonstrert for Adh1-ekspresjon i mais, ble Adh1 -utløst GUS-ekspresjon indusert i røtter under anerobe betingelser. D.l. Last, et al., (1991) registrerte at når mais Adhi-promoteren ble modifisert ved addisjon av flere kopier av det anerobe responsive element av mais Adh1-genet og ocs-elementene fra octopine-syntasegenet til Agrobacterium tumefaciens (pEmu). I bestemmelser av transient ekspresjon av protoplaster av forskjellige enfrøbladede arter som var transformert med pEmu-GUS, ga den beste konstruksjonen 10-15 ganger høyere ekspresjonsnivåer enn CaMV 35S-promoteren i hvete, mais, ris, enkornshvete og lolium multiflorum.
Robert Bower og Robert G. Birch (1992) registrerte at det ble oppnådd stabile transformanter etter transformasjon av embryogent sukkerrør-kallus med neomycin-fosfotransferase-genet under kontroll av Emu-promoteren.
D.A. Chamberlain, et al., (1994) registrerte at Emu-promoteren ble benyttet til å utløse ekspresjonen av fire ulike selekterbare markørgener (neomycin-fosfotransferase, hygromycin-fosfotransferase, fosfinotryicin-N-acetyltransferase og en mutant acetolacetatsyntase som gir herbicidresistens) som ble transformert inn i både hvete og ris. Det ble oppnådd hvetekallus og transformerte risplanter etter seleksjon av transformanter, hvilket viser at promoteren kan benyttes for å utløse ekspresjon av selekterbare markørgener for å oppnå transformerte cerealier.
En oversikt over promoter-elementer benyttet til å kontrollere fremmed genekspresjon i transgene cerealier, er nylig publisert og inkorporeres herved med hele sitt innhold i foreliggende beskrivelse (McElroy og Brettel, 1994).
For tiden benyttes en rekke promotere for transformasjon av tofrøbladede planter. Disse promoterne kommer fra et utvalg av ulike kilder. En gruppe vanlig benyttede promotere ble isolert fra Agrobacterium tumefaciens, hvor de har den virkning at de utløser ekspresjon av antatte syntasegener som bæres på det T-DNA-segment som integreres i plantegenomet under infeksjon. Disse promoterne inkluderer octopine-syntase- (oes) promoteren (L. Comai, et al., 1985; C. Waldron, et al., (1985), mannopine-syntase- (mas) promoteren (L. Comai, et al., 1985; K.E. McBride og K.R. Summerfelt, 1990) og nopaline-syntase- (nos) promoteren (M.W. Bevan et al., 1983; L. Herrera-Estrella, et al., 1983, R.T. Fraley, et al., 1983, M. De Block, et al., 1984, R. Hain, et al., 1985). Disse promoterne er virksomme i et stort utvalg av plantevev.
Flere virale promotere benyttes også til å utløse heterolog genekspresjon i dikotyledoner (J.C. Kridl og R.M. Goodman, 1986). Blomkål-mosaikkvirus 35S-promoteren er en av de mest anvendte promotere for transformasjon av dikotyledoner fordi den gir høye genekspresjonsnivåer i nesten alle slags vev (J. Odell, et al., 1985; D.W. Ov, et al., 1986; D.M. Shah, et al., 1986). Også modifikasjoner av denne promoter benyttes, herunder en konfigurasjon med to tandem 35S-promotere (R. Kay, et al., 1987) og mas-35S-promoteren (L. Comai, et al., 1990), som består av mannopine-syntase-promoteren i tandem med 35S-promoteren. Begge disse promoterne utløser enda høyere genekspresjonsnivåer enn en enkelt kopi av 35S-promoteren. Andre virale promotere som har vært benyttet er bl.a. blomkål-mosaikkvirus 19S-promoteren (J. Paszkowski, et al., 1984; E. Balazs, et al.) og 34S-promoteren fra brunrot-mosaikkviruset (M. Sanger, et al., 1990).
Undersøkelser av AHAS-ekspresjon i en rekke planter tyder på at AHAS uttrykkes i alt plantevev. Gail Schmitt og Bijay K. Singh (1990) registrerte at enzymbestemmelser foretatt på forskjellig limabønnevev, viste at AHAS-aktiviteten forekom i alt undersøkt vev, inklusivt blad, stengler, røtter, blomster, belger og meristem. AHAS-aktiviteten viste seg å være relativt konstant i stenglene, men avtok i blad, røtter og meristem med tiltagende alder.
Sharon J. Kheeler, et al., (1993) registrerte at tobakk inneholdt to gener som koder for acetohydroksysyresyntase, SurA og SurB. Begge genene synes å uttrykkes i alle vevstyper, med en ca. fire gangers variasjon i ekspresjonsnivået i forskjellige vev. Utviklende organer synes å ha høyest ekspresjonsnivå. In situ hybridiseringsundersøkelser viste at de høyeste ekspresjonsnivåene konsekvent ble observert i metabolsk aktive eller hurtig delende celler. SurB ble uttrykt i høyere nivåer enn SurA i alle undersøkte vev.
Therese Ouellet, et al., (1992) registrerte at Brassica-arter inneholder multigen-familier som koder for acetohydroksysyre-syntase. Fire av de fem AHAS-genene har vært påvist i Brassica napus. RNAse-beskyttelsesmålinger ved bruk av genspesifikke prober ble foretatt for å bestemme ekspresjonsmønsteret i de forskjellige medlemmer av genfamilien i forskjellige Brassica-arter. To av genene AHAS1 og AHAS3, viste seg å bli konstitutivt uttrykt i alle undersøkte vev. AHAS2-transkripter ble bare påvist i reproduktive organer og ekstraembryonisk vev i frø. Transkripter som koder for det fjerde genet, AHAS4, ble ikke påvist og det antas derfor at dette utgjør et pseudogen.
Dale L. Shaner og N. Moorthy Mallipudi (1991) registrerte at sammenligning av AHAS-aktivitet i unge maisblad og BMS-celler dyrket i suspensjonskultur, viste at aktiviteten av BMS-cellene per gram frisk vekt, var ca. 5,8 ganger høyere enn i bladprøvene. Siden BMS-cellene er under aktiv deling, stemmer dette resultat overens med resultater av tidligere undersøkelser med tobakk og limabønner som viste at yngre, aktivt delende vev, har mer AHAS-aktivitet enn eldre vev.
AHAS-promotere fra mais benyttes for å uttrykke innførte gener i høye nivåer og i forskjellige plantevev. Promotere fra alsl- og als2-genene i mais er klonet og sekvensert (Figur 1, Figur 2, Figur 3) og promoter-regionene fra disse genene er deretter innført i et plasmid 5' for rapportørgenet beta-glukuronidase (GUS). Begge promoterfragmentene er fra XI12-maislinjen. alsl-promoterfragmentet haren lengde på ca. 1400 basepar, mens als2-promoterfragmentet inneholder 819 basepar. For å bestemme aktiviteten av AHAS-promoterne overføres de kimære plasmidene deretter i Black Mexican Sweet mais-protoplaster og ris-protoplaster for analyse av transiente ekspresjonsnivåer. Til sammenligning transformeres også protoplaster med et plasmid med CaMV 35S-promoteren som utløser GUS-rapportørgenet. Ekspresjonen av de kimære plasmidene i maiscellene bestemmes ved å analysere GUS-enzymaktivtteten. Aktiviteten av mais-als2-promoteren var lik eller høyere enn aktiviteten av CaMV 35S-promoteren i begge celletypene (Figur 4). Figur 5 viser resultatene av beta-glukuronidasebestemmelser foretatt på mais BMS-cellelinjer som var stabilt transformert med pCD221 B (als2-GUS-ocs terminator plasmid) eller pAC400 (CaMV 35S-GUS-ocs terminator plasmid). Analyse av fordelingen av AHAS mRNA i plantevev ved in situ hybridisering av radioaktivt merkede RNA-prober, viser at mais AHAS -promotere er aktive i de fleste plantedeler (Figur 6, Figur 7, Figur 8).
Aktiviteten av Arabidopsis AHAS-promoteren analyseres i Arabidopsis-planter som er stabilt transformert ved bruk av Agrobacterium tumefaciens. Oppstrøms-promoterregionen av Arabidopsis AHAS-genet fusjoneres til GUS-rapportørgenet, innskutt den binære vektor pBIN19, og benyttes til å transformere Arabidopsis. Analyse av transformerte planter viser GUS-ekspresjon (som indikasjon på promoteraktiviteten) i de fleste plantedeler.
KORT BESKRIVELSE AV TEGNINGENE
Figur 1 viser AHAS-promotersekvensen ALS1 fra mais XA17.
Figur 2 viser AHAS-promotersekvensen ALS2 fra mais XA17.
Figur 3 viser AHAS-promotersekvensen ALS2 fra mais XI12.
Figur 4 er et stolpediagram som angir beta-glukuronidase-aktivitet fra transientbestemmelser av protoplaster av Black Mexican Sweet maisceller eller ris suspensjonsceller etter transformering med pCD221B (als2-promoter-GUS-ocs terminator plasmid) eller pAC400 (CaMV 35S-GUS-ocs terminator plasmid). GUS-aktiviteten beregnes som pmol/min/mg protein. Resultatene er fra tre uavhengige forsøk. Figur 5 er et stolpediagram som representerer beta-glukuronidase-aktiviteten av stabilt transformerte Black Mexican Sweet maiscellelinjer etter transformering med pCD221B (als2-promoter-GUS-ocs terminator) eller pAC400 (CaMV 35S-GUS-ocs terminator). CK står for utransformert kontrollvev. GUS-aktiviteten beregnes som pmol/min/mg protein. Figur 6 - in situ hybridiseringsundersøkelser av blad whorl fra 2 uker gamle kornspirer, ved å benytte radioaktivt merkede RNA-prober. Vevssnitt ble fremstillet og hybridisert til RNA-prober som koder enten for AHAS sensekjeden (AHAS-) eller
AHAS antisensekjeden (AHAS+). Til sammenligning ble også SSU (RUBISCO liten subenhet) sensekjeden (SSU-) eller SSU antisensekjeden (SSU+) prober benyttet. I begge tilfellene forventes kun antisensekjeden (+) å hybridisere til det tilstedeværende mRNA i vevet a) SSU+ probe; b) SSU- probe; c) AHAS+ probe; d) AHAS- probe.
Figur 7 - in situ hybridiseringsundersøkelser av maiskjemer 12 dager etter pollinering, fremstillet som beskrevet for Figur 6, a) embryo og suspensor,
AHAS+ probe; b) embryo og suspensor, AHAS- probe; c) pericarp, aleuron og endosperm, AHAS- probe; d) pericarp, aleuron og endosperm AHAS+ probe.
Figur 8 - in situ hybridiseringsundersøkelser av apikalt meristem fra unge maisplanter fremstillet som beskrevet i Figur 6 a) og b) AHAS+ probe; c) og d) AHAS- probe.
Forskere undersøker muligheter for anvendelse av genetisk modifikasjon for å overføre ønskelige egenskaper til planter. Teknikker for genetisk manipulering for å forbedre kjennetegn som smak, tekstur, størrelse, motstandsevne mot skadedyr og herbicidresistens, farve, surhet eller søthet av matvekster, utforskes som en betydelige raskere strategi enn tradisjonelle kryssningsmetoder.
Foreliggende oppfinnelse retter seg mot en isolert nukleotidsekvens kjennetegnet ved at den omfatter en AHAS-promoter av als2-genet operabelt forbundet i planter til en sekvens som koder for et heterologt gen; hvor AHAS-promoteren av als2-genet er valgt fra: (a) nukleotidsekvensen omfattende sekvensen i Figur 1, SEKV. ID. NR.:1; (b) nukleotidsekvensen omfattende sekvensen i Figur 2, SEKV. ID. NR.:2; eller (c) nukleotidsekvensen omfattende sekvensen i Figur 3, SEKV. ID. NR.:3.
Foretrukket er den isolerte nukleotidsekvensen ifølge foreliggende oppfinnelse kjennetegnet ved at den omfatter en AHAS-promoter av als2-genet for ekspresjon av gener i planter, samt en sekvens som koder for et heterologt gen, hvor AHAS-promoteren av ate2-genet er promoteren for als2-genet i mais. I andre aspekt omhandler foreliggende oppfinnelse en transformasjonsvektor som omfatter nukleotidsekvensen ifølge oppfinnelsen, en plante som omfatter nevnte vektor, samt en moden plante som omfatter nukleotidsekvensen ifølge oppfinnelsen.
Et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse utgjør anvendelse av en nukleotidsekvens ifølge krav 1, av en mais-AHAS-promoter av als2-genet ifølge SEQ ID NR: 3 for ekspresjon av markørgener i monokotyledone planter.
I enda et ytterligere aspekt omfatter foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for å uttrykke et heterologt gen i en plante i høye nivåer og i forskjellige vev i nevnte plante, kjennetegnet ved at planten eller vevet omfatter en nukleotidsekvens ifølge krav 1, 2 eller 3.
Foreliggende oppfinnelse omfatter også nukleinsyrekonstruksjoner som omfatter nukleotidsekvensen ifølge foreliggende oppfinnelse. Foretrukket kjennetegnes nukleinsyrekonstruksjonen ifølge oppfinnelsen ved at det heterologe gen av nukleotidsekvensen er et mutant gen som kan gi resistens mot et selekterbart, transgent materiale. Enda mer foretrukket er det heterologe genet av nukleotidsekvensen et AHAS-gen.
I et enda ytterligere aspekt dekker foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for anvendelse av en nukleinsyrekonstruksjon som selekterbar markør, kjennetegnet ved at nukleinsyrekonstruksjonen er konstruksjonen ifølge krav 9, og hvor fremgangsmåten omfatter følgende trinn: (a) rekombinant omdannelse av et plantemateriale ved å innføre nukleinsyrekonstruksjonen; (b) anbringelse av plantematerialet på et vekstmedium som omfatter en forbindelse; (c) identifisering av plantematerialer som er i stand til å vokse i nærvær av forbindelsen. Foretrukket er det mutante gen et AHAS-gen og/eller hvor forbindelsen er en imidazolinon- eller sulfonylurea-forbindelse. (I denne sammenheng er en promoter definert som en nukleotidsekvens som finnes oppstrøms for et gen som virker som signal for bindingen av RNA-polymerase). Genene alsl og als2 i mais klones og sekvenseres, hvoretter promoter-regionene fra disse genene innføres i et plasmid 5' for GUS-rapportørgenet. I denne sammenheng er et rapportørgen definert som en nukleotidsekvens fusjonert nedstrøms for den aktuelle promoter, slik at transkripter som initieres ved promoteren fortsetter forbi rapportørgenet. Rapportørgener som koder for en eller annen lett målbar enzymaktivitet; i forbindelse med foreliggende oppfinnelse, for eksempel ekspresjonen av kimære plasmider i maisceller, bestemmes ved å analysere beta-glukuronidase- (GUS) enzymaktiviteten.
Fagmannen vil kjenne til at AHAS-promotere er høyaktive i mange forskjellige plantevev og at de kan benyttes for å uttrykke nye gener i en rekke planter. Nye gener inkluderer, men er ikke begrenset til, gener for herbicidresistens, avgiftning og resistens mot plantepatogener. De her aktuelle promoterne kan benyttes for heterolog genekspresjon i monokotyledoner, inklusivt, men ikke begrenset til, mais, ris, hvete, bygg, durra, havre, rug og hirse. Fagmannen vil også være kjent med at de her aktuelle promotere også vil utløse ekspresjon i dikotyledoner, men at ekspresjon av monokotyledon-promotere i dikotyledoner forventes å skje på lavere nivåer enn i enfrøbladede.
Fagmannen vil også være kjent med at mais als2-promoteren kan benyttes for å utløse genekspresjon i andre enfrøbladede arter. For eksempel utløser ris Act1-promoteren genekspresjon i mais-protoplaster, og mais Emu-promoteren har således vært benyttet til å selektere transgen hvete, bygg og ris, og Arabidopsis AHAS-promoteren, en dikotyledon-promoter, har vært benyttet til å utløse AHAS-genekspresjon i transgen tobakk og transgen potet. Mais als2 ifølge oppfinnelsen virker best i mais, men utløser også genekspresjon i en annen monokotyledon. På grunnlag av undersøkelser foretatt på mais og andre arter, skulle denne promoter kunne utløse konstitutiv ekspresjon av et gen overalt i en plante. De høyeste ekspresjonsnivåer sees enten i aktivt delende eller metabolsk aktivt vev.
En rekke forskjellige teknikker som er velkjent for fagmannen og som inkluderer, men ikke er begrenset til, mikroprosjektil-bombardement, PEG-mediert transformasjon, elektroporering og silikonfibre, har vært benyttet for å omdanne enfrøbladede vekster. Alle disse teknikkene involverer bruken av DNA-vektorer for avgivelse av den nukleotidsekvens som skal transformeres. Egnede vektorer for bruk ifølge foreliggende oppfinnelse innbefatter, men er ikke begrenset til, vektorer som bærer markørgener benyttet for seleksjon av transgent materiale, inklusivt gener som gir resistens mot hygromycin, kanamycin, bialophos samt imidazolinon- og sulfonylurea-herbicider.
Det etterfølgende eksempel tjener kun til å illustrere oppfinnelsen og må ikke på noen måte oppfattes som begrensende for denne.
EKSEMPEL
Effektiviteten av alsl- og als2-promoterne fastslås ved å måle GUS-aktivitet i mais- og ris-protoplaster eller maiscellelinjer som er bærere av konstruksjoner hvor disse promotersekvensene er fusjonert til GUS-genet. Fremstillingen av vektorene og transformasjonsprotokollen er beskrevet nedenfor.
Konstruksjoner som inneholder de kimære CaMV 35S-GUS-, als1-GUS- og als2-GUS-genene
Plasmid pAC400 er et pUC19-basert plasmid som inneholder en fusjon av det 418 basepar (bp) EcoRI-Xbal-fragment av CaMV 35S-promoteren klonet oppstrøms for et 1,7 kb Xbal-Pstl-fragment som inneholder GUS-genet, og et 700 bp Pstl-BamHI-fragment som inneholder octopine-syntase-terminatoren. Genene alsl og als2 oppnås ved screening av et genomisk bibliotek fremstillet fra mais linje X112. Et EcoRI-Ncol-fragment inneholdende 1,4 kilobase (kb) av sekvensen oppstrøms fra ATG-initieringskodonet av alsl -genet, subklones inn i pAC400 i stedet for
CaMV 35S-promoteren for å frembringe pCD223B. Et 819 bp Pstl-Ncol-fragment oppstrøms fra ATG av als2 ble subklonet inn foran den samme GUS-ocs-terminatorfusjon i pBluescript® KS (Stratagene) for å frembringe pCD221B. Sekvensen av als2-promoteren fra mais X112 er vist i Figur 3.
Transformasjon og bestemmelse av protoplaster av ris og mais
Protoplaster isoleres fra ris- (Nortai) eller mais- (Black Mexican Sweet; BMS) suspensjonsceller og transformeres med pAC221B eller pAC400 i henhold til de PEG-medierte transformasjonsprotokoller til LA Lyznik et al., (1989) og J.Y. Peng et al. (1990). For transiente bestemmelser utplates transformerte ris-protoplaster på Milliporefiltere anbragt på toppen av medium som inneholder "feeder"-celler, og transformerte BMS-protoplaster dyrkes i 30 ml_ flytende medium. 2 dager etter transformasjon samles protoplastkulturene som deretter ekstraheres med GUS-ekstraksjonsbuffer. GUS-aktiviteten måles fluorimetrisk i henhold til beskrivelsen til R.A. Jefferson (1987).
For å gjenvinne stabile transformanter fra mais-BMS-kultur, kotransformeres protoplaster med pFF19K (inneholdende det selekterbare markørgen som koder for neomycin-fosfotransferase) og pCD221B eller pAC400. Etter transformasjon dyrkes protoplastene på Milliporefiltere anbragt på toppen av medium som inneholder feeder-celler. En uke senere overføres protoplastkulturene til medium som inneholder feeder-celler og 100 mg/L kanamycin. Protoplastkulturer overføres til friskt MS-medium med 100 mg/L kanamycin inntil resistent kallusvev kommer tilsyne. Individuelt kanamycinresistent kallus plukkes og dyrkes i ytterligere 2 til 3 uker i nærvær av kanamycin. Kanamycin-resistent kallus farves med X-Gluc eller måles med MUG i henhold til beskrivelsen til R.A. Jefferson (1987) for screening med henblikk på GUS-positivt kallus. Kallus som er fastslått å uttrykke GUS, oppmales i ekstraksjonsbuffer og bestemmes; GUS-aktivitet måles fluorimetrisk.
Data fra disse forsøkene fremgår av Figurene 4 og 5.
Et mutant mais-AHAS-gen som gir resistens mot imidazolinon-herbicider og utløses av mais als2-promoteren, benyttes som en selekterbar markør for å oppnå transgent kallus etter transformasjon av både BMS- og A188 x B73-celler og ris-celler. Dette resultat understøtter den tanke at als2-promoteren utløser tilstrekkelig høye ekspresjonsnivåer til å utløse markør-genekspresjon.
In situ hybridisering
Objektglass fremstilles i det vesentlige som beskrevet av J.A. Langdale et al.
(1988). Vev fikseres i 4% formaldehyd, dehydratiseres i etanol, klarnes med xylen og innleires i parafilm. Vevet snittes i 8-10 pm snitt og anbringes på objektglass dekket med poly-L-lysin. Parafinen fjernes med xylen og vevet rehydratiseres ved vasking i etanol og rensing i vann. Det fremstilles RNA-prober fra begge kjeder (+ og -) av et 172 nukleotid- (nt) fragment fra den als2-kodende region og et 392 nt fragment fra den SSU-kodende region, ved å benytte Ambion Maxiscript® settet. Objektene hybridiseres i henhold til beskrivelsen til Meyerowitz et al., (1988) ved 50°C over natten i en 1:4 fortynning av SPB [100 iiL av 10 X salter (3M NaCI, 10 mM Tris, pH 6,8, 50 mM DTA); 400 nL formamid; 200 50% dekstransulfat; 40 nL 10 mg/mL tRNA; 10 nL 1 MDTT; 50 10 mg/mL poly A] med en probe denaturert i 50% formaldehyd og 10 mM DTT ved 80°C i 30 sekunder. Objektglassene vaskes 2X i 15 minutter i vaskebuffer (1X salter, 50% formamid, 10 mM Tris pH 8,1 mM EDTA og 10 mM DTT) ved 50°C, behandles med RNase A (20 ng/ml_ i NTE i 30 minutter ved 37°C, vaskes 5X i NTE-buffer ved 37°C i tilsammen 1 time, vaskes 2X 30 minutter i vaske-buffer ved 50°C, dehydratiseres i etanol og lufttørkes. Objektglassene autoradiograferes ved dypping i en emulsjon som på forhånd var oppvarmet til 37°C i mørkerom, tørking i 30 minutter til 1 time og oppbevaring i mørke ved 4°C inntil fremkalling. Objektglassene fremkalles i 2 minutter, renses i vann, fikseres i minst 5 minutter og renses på nytt i vann. Vevet farves med Alcien Blue og avfarves i etanol og xylen. Etter montering med Permount, undersøkes vevet ved bruk av et mørkefelt-mikroskop.
Data fra in situ hybridiseringsforsøkene i Figur 6-8 viser at genet også uttrykkes gjennom hele mais embryoet.
Det er mulig å vurdere ekspresjonen av AHAS-promoteren ved:
1. å konstruere et als2-GUS-fusjonsgen og bestemme GUS-aktivitetsmønsteret i transgene mais- eller ris-planter. Tidligere undersøkelser ved bruk av en maispromoter har demonstrert muligheten for evaluering av maispromoter-ekspresjon i ris (Junko Kyozuka, et al., 1991). Etter seleksjon av transgene planter, foretas histokjemiske analyser på plantevev i forskjellig utviklingstrinn for å bestemme både vevs- og celletype spesifisitet. Denne teknikk er alminnelig anvendt for å evaluere promoteraktivitet på de enfrøbladede og tofrøbladede; 2. bestemmelser av transient ekspresjon foretas på protoplaster fremstillet fra forskjellige plantearter etter transformasjon av als2-GUS-konstruksjoner. Denne fremgangsmåte benyttes for å vurdere de ulike promoteres evne til å funksjonere i heterologe arter. Protoplaster transformeres med den aktuelle konstruksjon og inkuberes slik at det innførte gen kan uttrykkes og proteinet akkumuleres. Etter inkuberingen undersøkes cellene med henblikk på nærvær av proteinet som kodes av transgenet for å bestemme effektiviteten av promoteren som utløser transgen ekspresjon.
REFERANSER
1. David McElroy et al., (1990) Isolation of an ef f icient actin promoter for use. in rice transformation. The Plant Cell 2: 163-171. 2. David McElroy et al., (1991) Construction of expression vectors based on the rice actin 1 {Acti) 5' region for use in monocot transformation. Hol. Gen Genet. 231: 150-160. 3. Wanggen Zhang et al., (1991) Analysis of the Ac ti 5' region activity in transgenic rice plants. The plant Cell 3: 1155-1165. 4. Jun Cao et al., (1992) Regenexation of herbicide resistant transgenic rice plants following microprojectile-aediated transformation of suspension culture cells. Plant Cell Reporta 11: 586-S91. 5. Alan E. Christensen et al., (1992) Haize polyubiquitin genes: s true ture, thermal perturbation of expression and tranacript splicing, and promoter activity following transfer to protoplasts by electroporation. Plant Molecular Biology 18: 675-669. 6. Seiichi loki et al., (1992) Expression of a maize ubiquitin gene promoter-bar chimeric gene in transgenic rice plants. Plant Physiol. 100: 1503-1S07. 7. J. Troy et al., (1993) Rapid production of multiple independent lines of fertile transgenic wheat { Tr& ticvua aestivxim) . Plant Physiol. 102: 1077-1084. 8. Yuechun Wan and Peggy 6. Lemaux, (1994) Generation of a large number of independently transformed fertile barley plants. Plant Physiol. 104: 37- 48. 9. Junko Kyozuka et al., (1991) Anaerobic induction and tissue-specific expression of maize Adhl promoter in transgenic rice and their progeny. Mol. Gen. Genet. 228: 40-48. 10. D. I. Last et al., (1991) pEmu: an improved promoter for gene expression in cereal cells. Theor. Appl. Genet. 81: 581-588. 11. Robert Bower and Robert G. Birch (1992) Transgenic sugarcane plants via microprojectile bombardment. The Plant Journal 2 (3): 409-416. 12. D. A. Chamberlain et al*, (1994) The use of the Emu promoter with antibiotic and herbicide resistanee genes for the selection of transgenic wheat callus and rice plants. Aust. J. Plat. Physiol., 21: 95-112. 13. L. Comai et al. (1985) Expression in plants of a mutant aroA gene from Salmonella typhimurium confere tolerance to glyphosate. Nature 317: 741-744. 14. C Waldron et al. (1985) Resistance to hygromycin B: A new marker for plant transformation studies. Plant Mol. Biol. 5: 103-108. 15. Kevin E. McBride and Kristin R. Summer f elt 1990) Improved binary veetors for Agrobac teri am-media fced plant transformation. Plant Mol. Biol. 14: 269-276. 16. Michael Bevan et al. (1983) A chimeric antibiotic resistanee gene as a selectable marker for plant cell transformation. Nature 304: 184-187. 17. Luis Herrera-Estrella et al. (1983) Expression of chimeric genes transferred into plant cells us ing Ti-plasmid-derived vector. Nature 304: 209-213. 18. Robert T. Fraley et al. (1983) Expression of bacterial genes in plant cells. P.N.A.S. 80: 4803-4807. 19. Marc De Block et al. (1984) Expression of foreign genes in regenerated plants and in their progeny. EMBO J.3: 1681-1689. 20. R. Hain et al. (1985) Uptake, integration, expression and genetic transmission of a selectable chimeric gene by plant protoplasts. Mol. Gen. Genet. 199: 161-166. 21. J.C. Kridl and Robert M. Goodman (1986) Transcriptional regulatory sequences from plant viruses. Bio Essays 4:4-8. 22. Joan T. Odell et al. (1985) Identification of DNA eequences reguired for activity- of the cauliflower mosaic virus 35S promoter. Nature 313: 810-812. 23. David W. Ow et al (1986) Transient and stable expression of the firefly luciferase gene in plant cells and transgenic plants. Science 234: 856-959. 24. D.M. Shah et al. (1896) Engineering herbieide toleranee in transgenic plants. Science 233: 478-481. 25. Robert Kay et al. (1987) Duplication of CaMV 35S promoter eequences creates a strong enhancer for plant genes. Science 236: 1299-1302. 26. L. Comai et al. (1990) Novel and useful properties of a chimeric plant promoter combining CaMV 35S and MAS elements. Plant Mol. biol. 15: 373-381. 27. J. Pazskowski et al. (1984) Direct gene transfer to plants. EMBOJ. 3: 2717-2722. 28. Ervin Balazs et al. (1985) Chimeric vector construetion for higher-plant transformation. Gene 40: 343-348. 29. Margaret Sanger et al. (1990) Characteristics of a' strong promoter from figwort mosaic virus: Camparison with the analogous 35S promoter from cauliflower mosaic virus and the regulated mannopine
synthase promoter. Plant Hol. Biol. 14: 433-443. 30. Gail Schmidt and Bijay K. Singh (1990} Tis aue distribution of acetohydroxyacid synthase activity at various development al stages of lima bean. Pesticide Sei. 30 (4) : 418-419. 31. Sharon J. Kheeler et al., (1993) Regul-ation of tobacco acteolactate synthase gene expression. Plant Physiol. 102:1009-1018. 32. Therese Ouellet et al., (1992) Members of the acetohydroxyacid synthase multigene family of Brassica napus have divergent patterns of expression. The Plant Journal 2: 321-330. 33. Dale L. Shaner and N. Hoorthy Mallipudi
(1991) Tmidazolinone-Acetohydroxyacid
synthase interactions. In The Imidazolinone Kerbicides ed. Dale L. Shaner and
Susan li. 0'Connor CRC Press (Boca Raton,
PL.)
34. R. A. Jefferson (1987). Assaying chimeric genes in plants: the GUS gene fus ion system. Plant Mol. Biol. Rept 5: 387-405. 35. L.A. Lyznik et al. (1989). Stable transformation of maize protoplasts with gusA and neo genes. Plant Mol biol 13: 151-161. 36. J.Y. Peng et al. (1990). Co-transformation of iadica rice protoplasts witht ueo and gusA genes. Plant Cell Rept 9: 168-172. 37. J. A. Langdale et al., (1988), Cellular pattern of photosynthetic gene expression in developing maize leaves. Gene Oev. 2: 106-115. 36. E. Heyerowitz et al., (1988), In situ hybridization to RNA in plant tissue. Plant Hol. Bio. Rept., 5: 242-250.
Claims (15)
1. Isolert nukleotidsekvens, karakterisert ved at den omfatter en AHAS-promoter av als2-genet operabelt forbundet i planter til en sekvens som koder for et heterologt gen; hvor AHAS-promoteren av als2-genet er valgt fra: (a) nukleotidsekvensen omfattende sekvensen i Figur 1, SEKV. ID. NR.:1; (b) nukleotidsekvensen omfattende sekvensen i Figur 2, SEKV. ID. NR.:2; eller (c) nukleotidsekvensen omfattende sekvensen i Figur 3, SEKV. ID. NR.:3.
2. Isolert nukleotidsekvens ifølge krav 1, karakterisert ved at den omfatter en AHAS-promoter av als2-genet for ekspresjon av gener i planter, samt en sekvens som koder for et heterologt gen, hvor AHAS-promoteren av als2-genet er promoteren for als2-genet i mais.
3. Sekvens ifølge krav 1, karakterisert ved at promotersekvensen er oppnådd fra en enfrøbladet art, eventuelt fra mais.
4. Transformasjonsvektor som omfatter nukleotidsekvensen ifølge krav 1, 2 eller 3.
5. Plantecelle som omfatter vektoren ifølge krav 4.
6. Moden plante som omfatter nukleotidsekvensen ifølge krav 1, 2 eller 3.
7. Fremgangsmåte for å uttrykke et heterologt gen i en plante i høye nivåer og i forskjellige vev i nevnte plante, karakterisert ved at planten eller vevet omfatter en nukleotidsekvens ifølge krav 1, 2 eller 3.
8. Nukleinsyre konstruksjon, karakterisert ved at den omfatter sekvensen ifølge krav 1,2 eller 3.
9. Nukleinsyrekonstruksjon ifølge krav 8, karakterisert ved at det heterologe gen av nukleotidsekvensen er et mutant gen som kan gi resistens mot et selekterbart, transgent materiale.
10. Nukleinsyrekonstruksjon ifølge krav 9, karakterisert ved at det heterologe gen av nukleotidsekvensen er et AHAS-gen.
11. Fremgangsmåte for anvendelse av en nukleinsyrekonstruksjon som selekterbar markør, karakterisert ved at nukleinsyrekonstruksjonen er konstruksjonen ifølge krav 9, og hvor fremgangsmåten omfatter følgende trinn: (a) rekombinant omdannelse av et plantemateriale ved å innføre nukleinsyrekonstruksjonen; (b) anbringelse av plantematerialet på et vekstmedium som omfatter en forbindelse; (c) identifisering av plantematerialer som er i stand til å vokse i nærvær av forbindelsen.
12. Fremgangsmåte ifølge krav 11, karakterisert ved at det mutante gen er et AHAS-gen, og/eller hvor forbindelsen er en imidazolinon- eller sulfonylurea-forbindelse.
13. Anvendelse av en nukleotidsekvens ifølge krav 1, av en mais-AHAS-promoter av als2-genet ifølge SEQ ID NR : 3 for ekspresjon av markørgener i monokotyledone planter.
14. Anvendelse ifølge krav 13, hvor ekspresjonen av markørgener styrt av mais-AHAS-promoter av als2-genet, bidrar til herbicidresistens, detoksifikasjon og/eller resistens for plantepatogener.
15. Anvendelse ifølge kravene 13 og 14, for fremstilling av en transformasjonsvektor for transformasjon inn i monokotyledone planter, eller deler av nevnte planter.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/303,266 US5750866A (en) | 1994-09-08 | 1994-09-08 | AHAS promoter useful for expression of introduced genes in plants |
| PCT/US1995/011199 WO1996007746A1 (en) | 1994-09-08 | 1995-09-05 | Acetohydroxyacid synthase promoter expression of introduced genes in plants |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO971069D0 NO971069D0 (no) | 1997-03-07 |
| NO971069L NO971069L (no) | 1997-05-07 |
| NO323171B1 true NO323171B1 (no) | 2007-01-15 |
Family
ID=23171273
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19971069A NO323171B1 (no) | 1994-09-08 | 1997-03-07 | Isolert nukleotidsekvens som omfatter en acetohydroksysyresynthasepromoter, anvendelse derav, transformasjonsvektor, plantecelle og plante omfattende nevnte nukleotidsekvens, nukleinsyrekonstruksjon omfattende sekvensen og fremgangsmate for anvendelser derav. |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5750866A (no) |
| EP (1) | EP0779928B1 (no) |
| JP (1) | JP3655922B2 (no) |
| KR (1) | KR970705637A (no) |
| CN (1) | CN1210404C (no) |
| AT (1) | ATE291631T1 (no) |
| AU (1) | AU701239B2 (no) |
| BG (1) | BG64062B1 (no) |
| BR (1) | BR9509202A (no) |
| CA (1) | CA2198497C (no) |
| CZ (1) | CZ69597A3 (no) |
| DE (1) | DE69534101T2 (no) |
| EE (1) | EE03933B1 (no) |
| ES (1) | ES2240978T3 (no) |
| FI (1) | FI119818B (no) |
| HU (1) | HU221795B1 (no) |
| MD (1) | MD2312B2 (no) |
| MX (1) | MX9701684A (no) |
| NO (1) | NO323171B1 (no) |
| NZ (1) | NZ293093A (no) |
| PL (1) | PL188062B1 (no) |
| RO (1) | RO117190B1 (no) |
| RU (1) | RU2197527C2 (no) |
| SK (1) | SK30697A3 (no) |
| UA (1) | UA48951C2 (no) |
| WO (1) | WO1996007746A1 (no) |
Families Citing this family (55)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5659026A (en) * | 1995-03-24 | 1997-08-19 | Pioneer Hi-Bred International | ALS3 promoter |
| DE69933713T2 (de) | 1998-02-26 | 2007-08-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Mais alpha-tubulin 3-18 Promoter |
| EP1464707B1 (en) * | 1998-02-26 | 2006-10-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize alpha-tubulin 3-18 promoter |
| US6504083B1 (en) * | 1998-10-06 | 2003-01-07 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize Gos-2 promoters |
| US6528701B1 (en) | 1999-03-02 | 2003-03-04 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Rice ubiquitin-derived promoters |
| US7122721B1 (en) | 1999-10-05 | 2006-10-17 | Basf Aktiengesellschaft | Plant gene expression under the control of constitutive plant V-ATPase promoters |
| MX233208B (es) | 2000-04-28 | 2005-12-20 | Basf Ag | Uso del gen mutante ahas 2 del maiz xi12 y herbicidas de imidazolinona para la seleccion de plantas de maiz, arroz y trigo, monocotiledoneas transgenicas, resistentes a los herbicidas de imidazolinona. |
| EP2292768A1 (en) | 2002-07-09 | 2011-03-09 | BASF Plant Science GmbH | Use of AHAS mutant genes as selection marker in potato transformation |
| WO2004018687A2 (en) | 2002-08-07 | 2004-03-04 | Basf Plant Science Gmbh | Nucleic acid sequences encoding proteins associated with abiotic stress response |
| US7589256B2 (en) | 2003-02-17 | 2009-09-15 | Metanomics Gmbh | Preparation of organisms with faster growth and/or higher yield |
| EP2194136A3 (en) | 2003-04-15 | 2010-10-06 | BASF Plant Science GmbH | Nucleic acid sequences from yeast encoding proteins associated with abiotic stress response and transformed plant cells and plants with increased tolerance to environmental stress |
| EP1654368A2 (en) | 2003-08-01 | 2006-05-10 | BASF Plant Science GmbH | Process for the production of fine chemicals |
| EP2080769A3 (en) | 2004-07-02 | 2010-12-01 | Metanomics GmbH | Process for the production of fine chemicals |
| WO2006013010A2 (en) | 2004-07-31 | 2006-02-09 | Metanomics Gmbh | Preparation of organisms with faster growth and/or higher yield |
| CA2579927A1 (en) | 2004-09-24 | 2006-03-30 | Basf Plant Science Gmbh | Plant cells and plants with increased tolerance to environmental stress |
| CN101495507B (zh) | 2004-09-24 | 2013-07-17 | 巴斯福植物科学有限公司 | 编码与非生物性胁迫反应相关的蛋白质的核酸序列和具有增加的环境胁迫抗性的植物细胞和植物 |
| MX2007007040A (es) | 2004-12-17 | 2008-10-24 | Metanomics Gmbh | Proceso para el control de produccion de productos quimicos finos. |
| CA2598792A1 (en) | 2005-03-02 | 2006-09-08 | Metanomics Gmbh | Process for the production of fine chemicals |
| US20140199313A1 (en) | 2005-03-02 | 2014-07-17 | Metanomics Gmbh | Process for the Production of Fine Chemicals |
| US7737326B2 (en) * | 2005-04-29 | 2010-06-15 | Midwest Oil Seeds Inc. | EPSPS promoter from maize |
| EP2333078A3 (en) | 2006-03-24 | 2012-01-04 | BASF Plant Science GmbH | Proteins associated with abiotic stress response and homologs |
| CA2644273A1 (en) | 2006-04-05 | 2008-03-27 | Metanomics Gmbh | Process for the production of a fine chemical |
| CA2651961A1 (en) | 2006-05-31 | 2007-12-06 | Metanomics Gmbh | Manipulation of the nitrogen metabolism |
| MX2009003824A (es) | 2006-10-13 | 2010-04-07 | Basf Plant Science Gmbh | Plantas con rendimiento aumentado. |
| US20080176225A1 (en) * | 2007-01-18 | 2008-07-24 | Steve Roffler | Membrane bound reporter gene system |
| BRPI0810077B1 (pt) | 2007-04-04 | 2018-04-24 | Basf Plant Science Gmbh | Polipeptídeo da subunidade grande da acetohidroxiácido sintase, e, métodos para controlar ervas daninhas na adjacência de plantas cultivadas, para identificar ou selecionar uma célula de planta transformada, tecido de planta, planta ou parte da mesma, e para combater vegetação indesejada |
| EP2064330A2 (en) | 2007-05-22 | 2009-06-03 | BASF Plant Science GmbH | Plants with increased tolerance and/or resistance to environmental stress and increased biomass production |
| US20100162432A1 (en) | 2007-05-22 | 2010-06-24 | Basf Plant Science Gmbh | Plant cells and plants with increased tolerance and/or resistance to environmental stress and increased biomass production-ko |
| AU2008300579B2 (en) | 2007-09-18 | 2014-11-13 | Basf Plant Science Gmbh | Plants with increased yield |
| EP2594646A3 (en) | 2007-09-21 | 2013-11-06 | BASF Plant Science GmbH | Plant with increased yield |
| CN101952305B (zh) | 2007-12-19 | 2014-12-24 | 巴斯夫植物科学有限公司 | 具有增加的产量和/或增加的环境胁迫耐受性(iv-bm)的植物 |
| DE112008003433T5 (de) | 2007-12-21 | 2010-11-04 | Basf Plant Science Gmbh | Pflanzen mit erhöhtem Ertrag (KO NUE) |
| BRPI0908093A2 (pt) * | 2008-02-27 | 2019-01-15 | Basf Plant Science Gmbh | núcleo de célula de planta transgênica, célula de planta transgênica, planta ou parte da mesma, molécula de ácido nucleico isolada, construto de ácido nucleico, vetor, núcleo hospedeiro ou célula hospedeira, anticorpo, tecido de planta, material de propagação, pólen, progênie, material colhido ou uma planta, processo para a identificação de um composto, composição, uso de uma molécula de ácido nucleico, processo para produzir um polipeptídeo, polipeptídeo, e, métodos para produzir uma planta transgênica ou uma parte da mesma, para produzir uma composição agrícola, para produzir um núcleo de célula de planta transgênica, uma célula de planta transgênica |
| CN103923892A (zh) | 2008-08-19 | 2014-07-16 | 巴斯夫植物科学有限公司 | 通过在植物或其部分中提高或产生一种或更多活性具有提高产量的植物 |
| BRPI0919153A2 (pt) | 2008-09-23 | 2019-05-07 | Basf Plant Science Gmbh | método para produzir uma planta com rendimento aumentado, molécula de ácido nucleico, construto de ácido nucleico, vetor, processo para produzir um polipeptídeo, poliptídeo, anticorpo, núcleo de célula de planta, célula de planta, tecido de planta, material de propagação, pólen, progênie, material coletado, ou uma planta, ou uma parte da planta, planta transgênica, processo para identificar um composto, método para a produção de uma composição agrícola, composição, uso de ácido nucleico, e, método para a identificação de uma planta com um rendimento aumentado, e para aumentar o rendimento de uma população de plantas |
| AU2009306369A1 (en) | 2008-10-23 | 2010-04-29 | Basf Plant Science Gmbh | A method for producing a transgenic cell with increased gamma-aminobutyric acid (GABA) content |
| WO2010046221A1 (en) | 2008-10-23 | 2010-04-29 | Basf Plant Science Gmbh | Plants with increased yield (nue) |
| CN101475941B (zh) * | 2008-11-28 | 2011-09-07 | 北京市农林科学院 | 一种玉米Zmptil基因启动子及其应用 |
| CN102575260A (zh) | 2009-07-23 | 2012-07-11 | 巴斯夫植物科学有限公司 | 具有增加的产量的植物 |
| EP3418387B1 (en) | 2009-08-31 | 2020-11-25 | Basf Plant Science Company GmbH | Regulatory nucleic acid molecules for enhancing seed-specific gene expression in plants promoting enhanced polyunsaturated fatty acid synthesis |
| CA3167819A1 (en) | 2009-08-31 | 2011-03-03 | Basf Plant Science Company Gmbh | Regulatory nucleic acid molecules for enhancing seed-specific and/or seed-preferential gene expression in plants |
| DE112010003500T5 (de) | 2009-08-31 | 2012-06-14 | Basf Plant Science Company Gmbh | Regulatorische Nukleinsäuremoleküle für die Verstärkung der konstitutiven Genexpression in Pflanzen |
| EP2319872A1 (en) | 2009-11-04 | 2011-05-11 | BASF Plant Science GmbH | Amylopectin type starch with enhanced retrogradation stability |
| WO2011061656A1 (en) | 2009-11-17 | 2011-05-26 | Basf Plant Science Company Gmbh | Plants with increased yield |
| CN104135850B (zh) * | 2011-12-30 | 2017-09-22 | 陶氏益农公司 | 用于合成的双向scbv植物启动子的方法和构建体 |
| CA2855902C (en) * | 2011-12-30 | 2022-06-21 | Dow Agrosciences Llc | Construct and method for synthetic bidirectional plant promoter ubi1 |
| CN102676549B (zh) * | 2012-01-09 | 2014-04-09 | 中国中医科学院中药研究所 | 一个参与丹参酮生物合成的cyp450基因及其编码产物与应用 |
| US9441238B2 (en) | 2012-04-27 | 2016-09-13 | Synthetic Genomics, Inc. | Compositions and methods for modulating the sensitivity of cells to AHAS inhibitors |
| WO2014118018A1 (en) | 2013-01-29 | 2014-08-07 | Basf Plant Science Company Gmbh | Fungal resistant plants expressing ein2 |
| CA2897482A1 (en) | 2013-01-29 | 2014-08-07 | Basf Plant Science Company Gmbh | Fungal resistant plants expressing hcp7 |
| US10435705B2 (en) | 2013-01-29 | 2019-10-08 | Basf Plant Science Company Gmbh | Fungal resistant plants expressing HCP6 |
| BR112015021857B1 (pt) | 2013-03-08 | 2022-05-10 | Basf Plant Science Company Gmbh | Método para aumentar a resistência à ferrugem da soja em uma planta de soja que expressa proteína mybtf e método para a produção de uma planta de soja transgênica que expressa proteína mybtf |
| US9617553B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-04-11 | Monsanto Technology Llc | Plant regulatory elements and uses thereof |
| BR112017016688B1 (pt) | 2015-02-04 | 2024-01-23 | Basf Plant Science Company Gmbh | Método para aumentar a resistência fúngica, método para a produção de um produto e método para criar uma planta resistente a fungos |
| EP3054014A3 (en) | 2016-05-10 | 2016-11-23 | BASF Plant Science Company GmbH | Use of a fungicide on transgenic plants |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4943674A (en) * | 1987-05-26 | 1990-07-24 | Calgene, Inc. | Fruit specific transcriptional factors |
| US5013659A (en) * | 1987-07-27 | 1991-05-07 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase |
| EP0360750A3 (en) * | 1988-09-22 | 1991-01-02 | Ciba-Geigy Ag | Novel herbicide tolerant plants |
| DE69126474T2 (de) * | 1990-05-09 | 1997-12-11 | American Cyanamid Co | Verfahren zur Verhinderung von Ernteschäden verursacht durch synergistische Pestizidkombinationen |
| GB9024728D0 (en) * | 1990-11-14 | 1991-01-02 | Ici Plc | Herbicide resistant plants |
| TW208716B (no) * | 1990-12-27 | 1993-07-01 | American Cyanamid Co | |
| US5731180A (en) * | 1991-07-31 | 1998-03-24 | American Cyanamid Company | Imidazolinone resistant AHAS mutants |
-
1994
- 1994-09-08 US US08/303,266 patent/US5750866A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-09-05 NZ NZ293093A patent/NZ293093A/xx unknown
- 1995-09-05 MX MX9701684A patent/MX9701684A/es active IP Right Grant
- 1995-09-05 BR BR9509202A patent/BR9509202A/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-09-05 RU RU97106101/13A patent/RU2197527C2/ru active
- 1995-09-05 HU HU9701927A patent/HU221795B1/hu active IP Right Grant
- 1995-09-05 JP JP50961796A patent/JP3655922B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-05 PL PL95319053A patent/PL188062B1/pl unknown
- 1995-09-05 CN CNB951949802A patent/CN1210404C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-05 KR KR1019970701508A patent/KR970705637A/ko not_active Application Discontinuation
- 1995-09-05 RO RO97-00422A patent/RO117190B1/ro unknown
- 1995-09-05 SK SK306-97A patent/SK30697A3/sk unknown
- 1995-09-05 EP EP95932390A patent/EP0779928B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-05 DE DE69534101T patent/DE69534101T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-05 WO PCT/US1995/011199 patent/WO1996007746A1/en active Search and Examination
- 1995-09-05 MD MD97-0144A patent/MD2312B2/ro unknown
- 1995-09-05 CZ CZ97695A patent/CZ69597A3/cs unknown
- 1995-09-05 CA CA002198497A patent/CA2198497C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-05 EE EE9700213A patent/EE03933B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-09-05 ES ES95932390T patent/ES2240978T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-05 AU AU35448/95A patent/AU701239B2/en not_active Expired
- 1995-09-05 AT AT95932390T patent/ATE291631T1/de active
- 1995-09-05 UA UA97041679A patent/UA48951C2/uk unknown
-
1997
- 1997-02-27 BG BG101270A patent/BG64062B1/bg unknown
- 1997-03-06 FI FI970958A patent/FI119818B/fi not_active IP Right Cessation
- 1997-03-07 NO NO19971069A patent/NO323171B1/no not_active IP Right Cessation
- 1997-05-23 US US08/862,881 patent/US6025541A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO323171B1 (no) | Isolert nukleotidsekvens som omfatter en acetohydroksysyresynthasepromoter, anvendelse derav, transformasjonsvektor, plantecelle og plante omfattende nevnte nukleotidsekvens, nukleinsyrekonstruksjon omfattende sekvensen og fremgangsmate for anvendelser derav. | |
| AU751402B2 (en) | Synthetic promoters | |
| MXPA97001684A (en) | Expression of the promoter acetohidroxiacido-synthase of genes introduced in plan | |
| MXPA02003098A (es) | Promotor preferido de semilla de maiz. | |
| US6787687B1 (en) | Rin gene compositions and methods for use thereof | |
| US6921815B2 (en) | Cytokinin Oxidase Promoter from Maize | |
| US6762347B1 (en) | NOR gene compositions and methods for use thereof | |
| WO2001014561A1 (en) | Nor gene compositions and methods for use thereof | |
| US8044263B2 (en) | Cytokinin oxidase promoter from maize | |
| US7557264B2 (en) | Gossypium hirsutum tissue-specific promoters and their use | |
| AU2002249270B2 (en) | Constitutive promoter from arabidopsis | |
| AU2002249270A1 (en) | Constitutive promoter from arabidopsis | |
| US7109390B2 (en) | Alternative splicing factors polynucleotides polypeptides and uses therof | |
| OĞRAŞ et al. | Expression and inheritance of GUS gene in transgenic tobacco plants | |
| KR101847974B1 (ko) | 단자엽 식물 형질전환을 위한 벼 Os09g0553100 유전자 유래의 항시 발현용 프로모터 및 이의 용도 | |
| JP2005143338A (ja) | カルス及び種子胚特異的発現活性を有するプロモーター | |
| JP2004534535A (ja) | 新規の植物プロモーター | |
| WO2001027297A2 (en) | VERSATILE rpL34 PROMOTER ELEMENTS AND USE THEREOF | |
| CA2354228A1 (en) | Plants and seeds containing synthetic promoters | |
| MXPA02004307A (es) | Promotor de semilla seleccionada de cebada. | |
| JP2004049144A (ja) | 感染誘導性ｐａｌ遺伝子プロモーター | |
| JP2004049143A (ja) | 感染誘導性ｐｒ４遺伝子プロモーター |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |