CZ69597A3 - Acetohydroxy acid synthetase promoter for expression of genes introduced into plants - Google Patents

Acetohydroxy acid synthetase promoter for expression of genes introduced into plants Download PDF

Info

Publication number
CZ69597A3
CZ69597A3 CZ97695A CZ69597A CZ69597A3 CZ 69597 A3 CZ69597 A3 CZ 69597A3 CZ 97695 A CZ97695 A CZ 97695A CZ 69597 A CZ69597 A CZ 69597A CZ 69597 A3 CZ69597 A3 CZ 69597A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
promoter
sequence
gene
ahas
plants
Prior art date
Application number
CZ97695A
Other languages
English (en)
Inventor
Gabriele Dietrich
Jane Smith
Jianying Peng
Original Assignee
American Cyanamid Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23171273&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ69597(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by American Cyanamid Co filed Critical American Cyanamid Co
Publication of CZ69597A3 publication Critical patent/CZ69597A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8209—Selection, visualisation of transformants, reporter constructs, e.g. antibiotic resistance markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

Oblast techniky
Předloženy vynález se týká isolovaných ne - kódujících nukleotidových sekvencí, které se používají jako promotory pro expresi heterologních genů v rostlinách.
Předložený vynález se také týká vektorů a rostlinných buněk, které obsahují isolované nukleotidové sekvence.
Dosavadní stav techniky
Rostlinná říše je rozdělena do dvou oddělení, Bryophyta a Tracheophyta. Oddělení Tracheophyta zahrnuje přes 256,000 druhů seskupených do čtyř pododdělení. Pododdělení pteropsida zahrnuje třídu Angiospermae. Tato třída je rozdělena do dvou podtříd, dvouděložné rostliny a jednoděložné rostliny.
Protože jednoděložné rostliny zahrnují mnoho důležitých obilnin a krmiv, jsou genetické rostliny v intenzívním zájmu, aby byly schopné produkovat transgení jednoděložné rostliny. Je známo asi 50,000 druhů jednoděložných rostlin. Tyto druhy zahrnují lilie, palmy, orchideje, kosatce, tulipány, ostřice a trávy. Trávy zahrnují kukuřici, pšenici, rýži a všechny ostatní obilniny.
Naneštěstí jsou jednoděložné rostliny velmi obtížně manipulovatelné genetickým inženýrstvím a proto nejvíce práce s rostlinami je provedeno s dvouděložnými rostlinami.
Podrobně jsou známé dvě skupiny s přibližně 200,000 druhy. Blatouch, hledík, karafiát, magnolie, mák, kapusta, růže, hrách a dále mexický pryšec, bavlník, kaktus, mrkev, borůvka, máta peprná, rajské jablíčko, slunečnice, jilm, dub a javor představují 19 z 250 rodin dvouděložných rostlin.
Ί
Genetická informace molekuly DNA obvykle slouží jako matrice pro syntézu velkého množství kratších molekul RNA, většina z nich zpětně slouží jako matrice pro syntézy specifických polypeptidových řetězců. Specifické nukieotidové částice (často nazývané promotory), jsou rozpoznávány molekulami RNA polymerasy, které startují syntézy RNA. Po této genetické transkripci je funkční řetězec RNA ukončen, druhá třída signálů vede k zakončení syntézy RNA a odtržení molekul RNA polymerázy z jejich příslušných matric DNA.
V běžném případě existuje množství společných použitých pro řízení exprese heterologních jednoděložných rostlinách.
promotorů genů v
David McElroy a spol., (The Plant Cell 2:163-171,1990) popisuje, že v dočasných zkouškách exprese konstruktu, v kterých byl promotor z aktinu 1 (Act 1) rýže fúzován do bakteriálního genu beta-glukuronidasy v transformovaných protoplastech rýže, se ukázalo, že aktinový promotor řídí vysoké úrovně genových expresí. Tato exprese byla asi šestkrát větší než ta, která byla provedena s promotorem genu alkoholdehydrogenasy 1 (Adh 1) kukuřice, a která byla závislá na přítomnosti intaktního Actl 5 intronu.
David McElroy a spol., (Mol. Gen. Genet. 231:150-160,1991) popisuje, že optimalizované vektory pro transformaci jednoděložných rostlin byly konstruovány také použitím promotoru viru květákové mosaiky (Cauliflower Mosaic Virus,CaMV) nebo promotoru Actl. Dočasné expresívní pokusy byly provedeny v obou transformovaných protoplastech rýže a kukuřice. Přídavek intronu Actl a optimalizované místní iniciace translace GUS-u, ke kterékoli promotorové sekvenci významně zvýšil· expresi genu. Je také uveden, jako nepublikovaný výsledek, že se aktinový promotor osvědčil· k řízení exprese GUS-u v dočasných pokusech s protopiasty pšenice, dubu, ječmene a čiroku obecného.
Wanggen Zhang a spol., (The plant Cell 3:11551165,1991) zaznamenali, že v in šitu hybridizačních studi'.ích transgenních rostlin rýže nesoucích genovou fůzi Actl-GUS bylo prokázáno, že promotor Actl má konstitutivní model exprese v obou vegetativních a produktivních tkáních. Jun Cao a spol., (Plant Cell Reports 11:586-591,1992) poznamenali, že transgenní rostliny ryže byly vybrány na bialophos následnou transformací s genem bar exprimovaným pod kontrolou bud promotoru CaMV 35S, nebo pod kontrolou rýže Actl.
Alan H. Christensen a spol.,
18:675-689,1992) uvádí, Že transformované fúzovaným genem kukuřice Ubi-l-CAT) vykazovaly přibližně desetkrát vyšší úroveň aktivity CATznež buňky kukuřice transformované fúzovaným genem CaMV-35S-GUS v dočasných expresívnich pokusech. Analýzy northernového přenosu transkripčních úrovní přepisu genů Ubi-1 a Ubi-2 s následným tepelným šokem sazenic kukuřice prokázaly, že oba dva geny jsou exprimovány konstitutivně při 25C, ale pokud jsou indukovány tepelným šokem.
promotoru (Plant Molecular Biology protopiasty kukuřice
Seiichi Toki a spol., (Plant Physiol.100:1503 1507,1992) popisuje, že stabilně transformované transgenní rostliny rýže byly získány pomocí transformace electroporation- mediated a to genu bar exprimovaného pod kontrolou promotoru kukuřice Ubi-1 a následnou selekcí bialophos. Tento výsledek ukazuje, že promotor Ubi-1 může být použit k řízení dostatečně vysokých úrovní exprese genu v rýži, aby poskytnul selekci a regeneraci plodných transgenních rostlin rýže .
J. Troy a spol., (Plant Physiol. 102:1077-1034,1993) popisuje, že stabilně transformované rostliny pšenice byly získány následným bombardováním calli odvozených z nevyvinutých zárodků ε oběma geny bar a GUS, kde každý z nich byl exprimován pod kontrolou promotoru kukuřice Ubi-1 s následnou selekcí na bialophos. Tento výsledek ukazuje, že promotor Ubi-1 může být použit k řízení dostatečně vysokých úrovní genové exprese v pšenici, aby umožnil selekci a regeneraci plodných transgenních rostlin.
Yuechun Wan a Peggy G. Lemaux, (Plant Physiol. 104:3748,1994) popisují, že stabilně transformované rostliny plodného zárodečných tkání ječmene s oběma geny a to geny bar a GUS, kde každý z nich byl exprimován pod kontrolou promotoru kukuřice Ubi-1 a následnou selekcí bialophos. Tento výsledek opět ukazuje, že promotor Ubi-1 může být použit k řízení dostatečně vysokých úrovní exprese genu v ječmeni, aby umožnil selekci a regeneraci plodných transgenních rostlin. Experiment zahrnující bombardování malého počtu rostlin bud s genem Ubi-bar, nebo s genem CaMV 35S-bar neukazuje dostatečný rozdíl v množství získaných transformantů.
ječmene byly získány pomocí bombardování
Junko Kyozuka a spol., (Mol. Gen. Genet. 228:4048,1991) popisuje, že fůze promotorů Adhl a GUS byla zavedena do protoplastů rýže k získání transgenních rostlin rýže. Aktivita promotoru GUS v transgenních rostlinách byla zkoumána pro stanovení modelu exprese tohoto promotoru. Bylo nalezeno, že promotor kukuřice Adhl podporuje konstitutivní expresi ve všech částech zkoumaných rostlin. Jak bylo dříve prokázáno pro expresi promotoru Adhl v kukuřici , Adhl řídící expresi promotoru GUS byl indukován v kořenech za anaerobních podmínek.
D.I. Last a spol., (Theor. Appl. Genet. 81:581538,1991) uvádí, že byl modifikován promotor kukuřice Adhl pomocí vícenásobných kopií anaerobního citlivého prvku genu kukuřice Adhl a prvků ocs z genu octopin syntf^sa z mikroorganismu Agrobakterium tumefaciens (pEmu). V dočasných expresívních pokusech procoplastů rozdílných druhů jednodéložných rostlin transformovaných genem pEmu-GUS poskytnul nej lepší konstrukt deset až padesátkrát vyšší úroveň exprese než promotory v pšenici, kukuřici, rýži a lolium multi flórům.
Robert Bower a Robert G. Birch (The Plant Journal 2 (3):409-416,1992) popsali stabilní transformanty získané následnou transformací embryogenního kalusu cukrové třtiny genem z neomycin fosfotransferázy pod kontrolou promotoru Emu.
D.A. Cnamberlain a spol., (Aust. J, Plat.Physiol., 21:95-112,1994) popsali promotor Emu, který byl použitý k řízení exprese čtyř rozdílných selektovatelnš označených genů (neomycinfosfotransferása, hygromycinfosfotransterasa phophinothryicin ; N-acetyltransferasa a mutant acetolaktat synti%sa, udělující resistenci k herbicidům), které byly transformovány v genech rýže a pšenice. Kalus pšenice a transformované rostliny rýže byly získány po selekci transformantů, což ukázalo na možnost použití promotoru k řízení exprese výběrově označených genů pro získání transformovaných obilnin.
Přehled promotorových prvků použitých ke kontrole cizí genové exprese, v transgenních obilninách byl· nedávno publikován a je zanesen na toto místo pomocí odkazu (viz McElroy a Brettel,1994).
Množství promotoru je běžná používané pro transformaci dvouděložných rostlin. Tyto promotory pocházejí z rozmanitých odlišných zdrojů. Jedna skupina obecně používaných promotorů byla isolována z mikroorganismu Agrobakterium tumefaciens, kde jejich funkce k řízení exprese genů opine synthetasy je nesena na úseku TDNA, který je zapojený do rostlinného genomu během infekce. Tyto promotory zahrnují promotor (ocs) octopin synthetasy (L. Comai a spol., Nátuře 317:741744,1985; C. Waldron a spol., Plant Mol. Biol. 5:103108,1985), promotor (mas) mannopin synthetasy (L. Comai a spol., Nátuře 3 17 :741 -744; 1985,K.E. McBride a
K.R. Summerfelt, Plant Mol. Biol. 14: 269-276,1990) a promotor (nos) nopalin synthetasy (M.W. Bevan a spol·., Nátuře 304: 184 -187,1983;L. Herrera-Estre1la a spol.,
Nátuře 304: 184-187,1983, R.T. Fraley a spol., P.N.A.S. 80: 4803-4807,1983, M. De Block a spol., EMBO J.3: 1681-1689,1984,R Hain a spol., Mol. Gen. Genet.
199:161-168,1985). Tyto promotory jsou aktivní v široce rozmanitých tkáních rostlin.
Několik virových promotorů je také používáno k řízení exprese heterologních genů v dvouděložných rostlinách (J.C. Kridl a R.M. Goodman,Bio Essays 4:4-8,1996). Promotor viru květákové mozaiky CMV 35S je jedním z nejčastěji používaných promotorů pro transformaci dvouděložných rostlin, protože z.ajištuje vysoké úrovně exprese genů v téměř všech tkáních (J.Oděli a spol., Nátuře 313: 810 -812,1985; D.W. Ow. a spol.,
Science 234:856 -959,1986 ;D. M. Shah a spol., Science 233: 478-481,1986). Modifikace těchto promotorů jsou také používány včetně konfigurací s dvěma tandemy promotorů 35S (R. Kay a spol., Science 236: 1299 Ί
1302,1987) a promotorem mas-35S (L. Comai a spol., Plant Mol. biol. 15: 373-381,1990), které se skládají z promotoru mannopin syrithetasy v tandemu s promotorem 35S. Další virové promotory, které mohou být používány zahrnují promotor viru květákové mozaiky 193 (J. Paszkowski a spol., EMBOJ. 3: 2717-2722.1984; E. Balazs a spol·., Gene 40: 343-348,1985) a promotor 34s z viru s krtičníkové mozaiky (M. Sanger a spol., Plant Mol. Biol. 14: 433-443,1990).
Studie exprese acetohydroxykyselina syrithetasy (AHAS) v množstvích rostlin ukazuje, že je AHAS exprimována ve všech tkáních rostlin. Gail Schraitt a Bijay K. Singh (Pesticide Sci 30 (4): 418-419,1990) popisuje, že zkoušky enzymů provedených na různých tkáních fazole měsíční prokázaly, že aktivita AHAS byla přítomna ve všech testovaných tkáních zahrnující listy, stonky, kořeny, květy, tobolky a meristémy. Stanovená aktivita AHAS byla zcela konstantní ve stoncích, ale pokleslá v listech, kořenech a meristémech v průběhu jejich stárnutí.
Sharon J. Kheeler a spol., (Plant Physiol. 102:10091018,1993) popisují, že tabák obsahuje dva geny kódující enzym acetohydroxykyselina synthetasu SurA a SurB. Oba dva geny se zdají být exprimovány ve všech typech tkání s přibližně čtyřnásobnou variantou v úrovni exprese v různých tkáních. Vývoj orgánů ukazuje nejvyšší úroveň exprese, studiích bylo prokázáno, byly pozorovány jako aktivních nebo dělících
V in sítu hybridizačních že nejvyšší úrovně exprese konstantní v metabolicky buňkách. Gen SurB byl exprimován ve vyšší úrovni než gen SurA ve všech zkoumaných tkáních.
Tnerese Ouellet a spol., (The Plant Journal 2: 321330,1992) uvádí, že druhy Brassica obsahují multigenové rodiny kódující acetohydroxykyselina synthetásu. Čtyři z pěti genů AHAS byly identifikovány v Brassica napus. Byly provedeny ochranné zkoušky použitím genově specifických nukleotidových sond RNAsy k stanovení modelových expresí různých členů genové rodiny v mnohých druzích Brassica. Dva z genů AHAS1 a AHAS3 byly exprimovány konstitutivně ve všech zkoumaných tkáních. AHAS2 nebyla zjištěna a lze se proto domnívat, še tento representant je pseudogenem.
Dále L. Sharner a N. Moorthy Mallipudi (In The Imidazolinone Herbicides ed. Dále L. Sharner a Susan
L. 0Conor CRC Press,Boča Raton,FL,199I) popisují srovnání aktivity AHAS v mladých listech kukuřice a v buňkách BMS rostoucích v suspenzní kultuře, které ukázalo , že aktivita na gram čerstvé váhy v buňkách BMS byla přibližně 5,8 krát vyšší než ve vzorcích mladého listu. Vzhledem k tomu, že jsou buňky BMS aktivně rostoucí dělením, je tento výsledek souhlasný s výsledky předcházejících studií s tabákem a fazolí měsíční, které prokázaly, že mladší aktivně rostoucí buňky tkání mají více aktivity než starší tkáně. Podstata vynálezu
AHAS promotory z kukuřice jsou používány k expresi genů ve vysokých úrovních a do různých tkáních rostlin. Promotory z genů kukuřice alsl a als2 jsou klonovány a sekvencovány (obr. 1,obr.2,obr.3) a promotorové oblasti z těchto genů jsou potom zavedeny do plasmidů 5 k zapsání genu beta-glukuronidasy (GUS). Oba dva promotorové fragmenty jsou z linie kukuřice XI 12. Fragment promotoru alsl je přibližně 1400 párů bází dlouhý; zatímco fragment promotoru als2 obsahuje jen 819 párů bází. K stanovení aktivity AHAS promotorů jsou potom chimérické plasmidy transferovány do protoplastů kukuřice (black mexican sweet) a do protoplastú rýže pro analýzu dočasných úrovní exprese. Pro srovnání jsou protoplasty také transformovány plasmidem s promotorem CaMV 35S, který řídí zapsání genu GUS. Exprese chimérických plasmidů v buňkách kukuřice je stanovena analyzováním aktivity enzymu GUS. Aktivita promotoru kukuřice als2 byla rovna nebo vyšší než aktivita promotoru kukuřice CaMV 35S a to v obou typech buněk (obr.4). Obrázek 5 ukazuje výsledky zkoušek beta-glukuronidasy provedených na liniích buněk kukuřice BMS, které jsou stabilně transformovány bud plasmidem pCD221B (als2-GUS-ocs terminátorový plasmid), nebo pasmidem pAC400 (CaMV 35S-GUS-ocs terninátor ový plasmid) . Analýza rozdělování mRNA v promotoru AHAS prostřednictvím v in šitu hybridizace nukleotidových sond rádioaktivně označených tkání rostlin ukazuje, že promotory kukuřice AHAS jsou aktivní ve většině rostlinných částech (obr.6,obr. 7%br.8) .
Aktivita promotoru AHAS Arabidopsis je analyzována v rostlinách Arabidopsis, které jsou stabilně transformovány použitím. bakterie Agrobakterium tumefaciens. Oblast proti směru exprese promotorového genu AHAS Arabidopsis je fúzována se zapsaným genem GUS, který je vložený do binárního vektoru pBIN19 a použitím transformace Arabidopsis. Analýza transformovaných rostlin ukazuje expresi GUS (ukazující na promotorovou aktivitu) ve většině rostlinných částech.
Vědci prozkoumali cesty k využití genetické modifikace, aby propůjčili rostlinám žádané ujř* . .
charaktestiky. Techniky genetického inženýrství používané ke zlepšení takových charakteristik jako chut, textura, velikost, odolnost k pesticidům a herbicidům, - barva, kyselost nebo sladkost potravinářských plodin jsou shledávány jako rychlejší strategie než tradiční metody křížení (crossbreeding). Předložený vynález se týká AHAS promotorů z kukuřice a Arabidopsis,vektorů a rostlinných buněk obsahujících tyto promotory. (Pro účely této přihlášky je promotor definován jako nukleotidová sekvence zřízena ve směru exprese genu, která působí jako signál pro navázání RNA polymerasy.)
Geny kukuřice alsl a als2 jsou klonovány a sekvenovány a promotorové oblasti z těchto genů jsou potom zavedeny do plasraidu 5' k reportérovému genu GUS. Pro účely této přihlášky je reportérový gen definován jako nukleotidová sekvence, která je fúzována po směru sekvence genu ve vztahu k promotoru, takže transkripty iniciované promotorem probíhají přes reportérový gen. Reportérový gen kóduje některou lehce měřitelnou enzymovou aktivitu; například v tomto předloženém vynálezu exprese chimérických plasrnidů v buňkách kukuřice je stanovena pomocí analyzování enzymové aktivity beta-glukuronidasy (GUS).
Odborník znalý ve svém oboru by měl ocenit, že jsou promotory AHAS vysoce aktivní v mnoha různých tkáních rostlin, a že mohou být použité k expresi nových genů v rozmanitých rostlinách. Nové geny zahrnují, ale aniž jsou omezeny, geny pro odolnost k herbicidům k detoxifikaci a odolnost vůči patogenům rostlin.
Nárokované promotory mohou být použité pro expresi heterologních genů v jednoděložných rostlinách, které zahrnují aniž by omezovaly, kukuřici, rýži, pšenici, ječmen, čirok obecný, oves, žito a proso seté. Odborník znalý ve svém oboru by měl též ocenit, že nárokované promotory budou také řídit expresi ve dvouděložných rostlinách, ačkoliv exprese promotorů jednoděložných rostlin ve dvouděložných rostlinách je očekávána v nižších úrovních než rostlinách.
jednoděložných k řízení exprese a transgenických
Odborník znalý ve svém oboru by měl zhodnotit, že promotor kukuřice als2 může být použitý k řízení genové exprese i v dalších druzích jednoděložných rostlin. Například promotor rýže Actl řídí expresi v protoplastech kukuřice, promotor kukuřice Emu byl použitý pro selekci transgenické pšenice, ječmene a rýže a promotor Arabidopsis AHAS (promotor dvouděložných rostlin) byl použitý genu AHAS v tr ansgenickérn tabáku bramborech. Nárokovaný promotor kukuřice als2 funguje nejlépe v kukuřici, ale také řídí expresi genů v jiných jednoděložných rostlinách. Založeno na studiích provedených na kukuřici a ostatních druzích( měl by tento promotor řídit konstitutivní expresi genu v celé rostlině. Nejvyšší úrovně exprese jsou pozorovány bud v aktivně se dělících, nebo metabolických tkáních.
Rozmanitost různých technik dobře známých odborníkům znalým ve svém oboru zahrnuje, aniž by se tím mikroprojektilové bombardování, PEGomezovala, mediated transformaci vlákna, které byly ,elektroporaci a siiikované používány pro transformování jednoděložných plodin. Všechny tyto techniky zahrnují použití vektorů DNA sekvencí, které mají vhodné pro použití v pro dodání nukleotidových být transformovány. Vektory tomto předloženém vynálezu zahrnují, aniž by tím byly omezeny, vektory nesoucí signální znaky genů transgenického materiálu, resistenci k hydromycinu, používané pro selekci zahrnující geny udělující kanamycinu, bialophosu a imidazolinonu a herbicidům sulfonylmočoviny.
Následující příklady slouží pouze pro ilustraci vynálezu a rozsah vynálezu v žádném případě neomezují.
Příklady provedení vynálezu
Účinnost promotorů alsl a als2 je stanovena měřením aktivity v genu GUS v protoplastech kukuřice a rýže nebo v buněčných liniích kukuřice nesoucích konstrukty, v kterých jsou tyto promotorové sekvence fúzované do genu GUS. Příprava vektorů a transformační protokol jsou popsány dole.
Příklad 1: Konstrukty obsahující chimérické geny CaMV 35S-GUS, alsl-GUS a als2-GUS.
Plasmid pAC400 je odvozený od plasmidu pUC19, který obsahuje 418 párových bází (pb) fragmentu EcoRI-Xbal promotoru CaMV 35S klonovaného proti směru exprese genu, fragment 1,7 kb Xbal-Pstl obsahující gen GUS a fragment. 7 00 bp Pstl-BamHI obsahuj ící terminátor octopin synthetasy. Geny alsl a als2 jsou získány pomocí metody sreening genomické knihovny připravené z kukuřičné linie XI 12. Fragment EcoRI-NcoI, který obsahuje 1,4 kilobazy (kb) sekvence proti směru exprese genu z iniciačního kodonu ATG genu aisl je subklonován do plasmidu pAC400 v místě promotoru CaMV 35S, aby vytvořil plasmid pCD223B. Fragment 819 bp Pstl-Ncol proti směru exprese genu z ATG genu als2 byl subklonován před stejným terminátorem GUS-ocs fůzí v pBluescript® KS - (Stratagene) , aby vytvořil plasmid pCD221B. Sekvence promotoru als2 z kukuřice je vyjádřena na obrázku 3.
Příklad 2: Transformace a analýza protoplastů rýže a kukuřice
Protoplasty jsou izolovány z buněčných suspenzí rýže (Nortai) nebo kukuřice (black mexican sweet; BMS) a transformovány plasmidy pAC221B nebo pAC400 podle transformačních protokolů PEG-mediated L.A.Lyznik a spol., (Plant Mol. biol 13:151-161,1989) a J.Y.Peng a spol., (Plant Cell Rept 9:168-172,1990). Pro dočasné analýzy jsou protoplascy rýže pokládány na filtry Millipore, které jsou umístněné v nejvyšší části media, které obsahuje krmné buňky a transformované protoplasty BMS jsou kultivovány ve 3 ml kapalného media. Po dvou dnech transformace jsou kultury protoplastů sebrány a extrahovány v extrakčnírn pufru. Aktivita GUS je měřena fluorimetricky podle protokolu R.A. Jefferson (Plant Mol. Biol. Rept 5: 387 405,1987 ) .
Aby byly získány stabilní transformanty z kukuřičné kultury BMS, jsou protoplasty ko-trans formovány pomocí pFF19K (obsahující volitelný signální znak genu kódující neómycin fosfotransferasu) a pCD221B nebo pAC400. Po transformaci jsou protoplasty kultivovány na filtru Millipore, který je umístněn v nejvyšší části media, které obsahuje krmné (feeder) buňky. Týden později jsou protoplasty přeneseny do media, které obsahuje feeder buňky a 100 mg/1 kanamycinu. Kultury protoplastů jsou přeneseny do čerstvého media MS se 100 mg/1 kanamycinu až se stanou resistentní kalusy viditelnými. Jednotlivé kalusy kanamycinu jsou sebrány a rostou dva až tři týdny v přítomnosti kanamycinu. Kalusy resistentní na kanamycin jsou obarveny pomocí X-Gluc nebo analyzovány pomocí MUG podle protokolu R.A. Jefferson (1987), aby bylo provedeno screening GUS-pozitivních kalusů. Kalus identifikovaný jako expresívní GUS je usazen do extrakčního pufru a analyzován; GUS aktivita je měřena fluor imetr icky.
Údaje z těchto experimentů jsou uvedeny na obrázcích 4 a 5 .
Mutant genu kukuřice imidazoiinovým herbicidům promotorem kukuřice als2, poskytuje resistenci k a je použitý, za řízení jako volitelný signální znak k získání transgenického kalusu po transformaci obou buněk BMS a A188 x B7 3 a buněk rýže. Tento výsledek podporuje myšlenku, že promotor ais2 řídí dostatečně vysokou úroveň exprese, aby řídil expresi signálního znaku.
Příklad 3: Hybridizace v in šitu
Podložní sklíčka jsou připravena jak je v podstatě popsáno v J.A. Langdale a spol., (Gene Dev. 2: 106115,1588) . Tkáň je fixována v 4% formaldehydu, dehytratována v etanolu, projasněna xylenem a zapuštěna do parafinového filmu. Tkáň je dále rozřezána do 8-10 /im tenkých řezů a umístněna na podložní sklíčko potažené póly-L-lysinem. Parafin je odstraněn xylenem a tkáň je rehydratována promytím v etanolu a propláchnutím ve vodě. Nukieotidové sondy RNA jsou připraveny ze dvou řetězců (+ a -) fragmentu 17 2 nukleotidů (nt) z kódující oblasti genu als2 a fragmentu 392 nt z kódující oblasti SSU, použitím jednotky Ambion Maxisript,©.Podložní sklíčka jsou hybridizovány podle protokolu Meyerowitz a spol. (Plant Mol. Bio. Rept., 5:242-250,1988), při 50 °C přes noc, v 1:4 zředěném roztoku SPB [100 /ul 10 X solí (3M NaCI, lOmM Tris pH 6,8, 50 mM DTA) ; 400 pl formamidu; 200 μΐ 50% dextranového sulfátu; 40 pl 10 mg/ml tRNA; 10 yal 1 MDTT; 50 ul 10 mg/ml póly A] s nukleotidovou sondou denaturovanou v 50% forrcaldehydu a lOmM DTT při 80 °C, po 30 sekund. Podložní sklíčko bylo promyto dvakrát 15 minut ve vodném pufru (IX sole, 50 % forrnamid, lOmM Tris pH 3, lmM EDTA a lOmM DTT), při 50 °C, zpracováno s RNasou A (20 ^ig/ml v pufru NTE po 30 minut, při 37 °C, promyto pětkrát v pufru NTE, při 37 °C po celou hodinu, promyto dvakrát po 30 minutách, ve vodném pufru při 50 °C, dehydratováno etanolem a sušeno vzduchem. Podložní sklíčka jsou autoradiografovány ponořením do předem zahřáté emulze na 37 °C, v tmavém prostoru, sušeny od 30 minut do 1 hodiny a skladovány v temnotě při 4 °C až do vyvolání. Podložní sklíčka jsou vyvíjeny 2 minuty, propláchnuty ve vodě, fixovány alespoň 5 minut a znovu propláchnuty ve vodě. Tkáň je obarvena pomocí Alcien Blue a odbarvena v etanolu a xylenu. Po podlepení podložního sklíčka pomocí Permount, je tkáň pozorována použitím tmavého pole mikroskopu.
Údaje z experimentů v in šitu hybridizace ukazují (viz obrázky 6-8), že geny jsou též exprimovány pomocí embrya kukuřice.
\
Příklad 4: Vyhodnocení exprese
Vyhodnocení exprese promotoru AHAS je možné provést za prvé:
Konstrukcí fúzovaného genu als2-GUS a určením modelu aktivity GUS uvnitř transgenických rostlin obilí nebo řýže. Předcházející studie použitím promotoru kukuřice demonstrovaly uskutečnitelnost vyhodnocení exprese kukuřičného promotoru v rýži (Junko Kyozuka, a spol.,
Mol. Gen. Genet. 228: 40 -48,1991) . Po selekci transgenických rostlin jsou provedeny histochemické analýzy na tkáních rostlin v různých stádiích vývoje, aby byly stanoveny obě typové speciíity tkáně a buňky. Tyto techniky jsou běžně používány k vyhodnocení promotorové aktivity v obou typech jednoděložných a dvouděložných rostlin.
za druhé:
Dočasné expresívní testy jsou provedeny v protoplastech připravených z rozdílných druhů rostlin následnou transformací konstruktů als2-GUS. Tento pokus je použitý k vyhodnocení schopnosti rozdílných promotorů fungovat v heterologních druzích. Protoplasty jsou transformovány vhodným konstruktem a inkubovány, aby umožnily expresi zavedených genů a akumulaci proteinů. Po následné inkubaci jsou buňky testovány na přítomnost proteinu, který je kodován pomocí transgenu, aby byla stanovena účinnost promotoru řídícího expresi transgenu.
Stručný popis výkresů
Obrázek 1 popisuje sekvenci promotoru AHAS ALŠI z
kukuř ice XA17 .
Obrázek 2 popisuje sekvenci promotoru AHAS ALS2 z
kukuř ice XA17 .
Obrázek 3 popisuje sekvenci promotoru AHAS ALS2 2
kukuř ice XI 12 .
Obrázek 4 ukazuje bar graf představu j ící aktivitu
beta-glukuronidasy z dočasných zkoušek protoplastů buněk kukuřice (black mexican sweet) nebo sus penzních buněk rýže po transformaci plasmidu pCD221B (als2promotor-GUS-ocs terminátorový plasmid) nebo plasmidu pAV400 (CaMV 35S-GUS-ocs terminátorový olasmid). Aktivita GUS je vypočítána v jednotkách pmol/min/rng proteinu. Výsledky jsou ze tří nezávislých exper imentú.
Obrázek 5 ukazuje bar graf, představující aktivitu beta-glukuronidasy ve stabilně transformovaných buněčných liniích (black rnexican sweet) po transformaci bud plasmidem pCD221B (als2 promotor-GUSocs terminátor), nebo plasmidem pAC400 (CaMV 35S-GUSocs terminátor). CK označuje netransformované kontrolní tkáně. Aktivita GUS je vypočítána v jednotkách pmol/min/mg proteinu.
Obrázek 6 ukazuje v in šitu hybridizační studii listu přeslenu ze dvou týdnu starých zrnových semenáčů použitím nukleotidových sond RNA radioaktivně označených. Vlákninové úseky byly připraveny a hybridizovány nukleotidovou sondou RNA, kódující bud negativní řetězec AHAS (AHAS-), nebo pozitivní řetězec AHAS (AHAS + ) . Pro srovnání, SSU (RUBISCO malá podjednotka) negativní řetězec (SSU-), nebo SSU pozitivní řetězec (SSU+) nukleotidových sond byly také používány. V každém případě pouze pozitivní řetězec ( + ) je očekáván, že bude hybridizovat k rnRNA přítomné v tkáních, a) SSU+ nukleotidová sonda; b) SSUnukleotidová sonda; C) AHAS+ nukleotidová sonda; d) AHAS- nukleotidová sonda.
Obrázek 7 ukazuje v in šitu hybridizační studii obilných zrn starých 12dnů po opylení připravených jak je popsáno pro obrázek 6, a) embryo a suspenzor, AHAS+ nukleotidová sonda; b) embryo a suspenzor, AHASnukleotidová sonda; c) perikarp (oplodí), aleurone (lepek) a endosperm, AHAS- nukleotidová sonda; d) perikarp (oplodí), aleurone (lepek) a endosperm AHA+ nukleotidová sonda.
--¾ - ·**τ *♦·<·Obrázek 8 ukazuje v in šitu hybr idizační studii apikálního meristému mladých rostlin obilí připravených, jak je popsáno v obrázku 6, a) a b) AHAS + nukleotidová sonda; c) a
d) AHAS- nukleotidová sonda.
SEZNAM SEKVECÍ (1) Všeobecné informace:
(i) Přihlašovatel: Dietrich, Gabriele (ii) Název vynálezu: Ne-kódující DNA 5' k strukturálnímu genu (promotor) pro acetohydroxykyselina synthetasu (AHAS), která je použitá pro expresi zavedených genů do rostlin, (iii) Počet sekvencí: 3 (iv) Korespondenční adresa:
(A) Adresát: American Cyanamid Company
(B) Ulice : One Cyanamid Plaza
(C) Město : Wayne
(D) Stát: New Jersey
(E) Země : USA
(F) PSČ : 0747 0-8425
(v) Počítačově čitelná forma:
(A) Typ media: floppy disk (B) Počítač: kompatibilní s IBM PC (C) Operační systém: PS-DOS/MS-DOS (D) Software: Patentln Release #1.0,verse #1.25 (vi) Údaje o současné přihlášce:
(A) Číslo přihlášky: US lf (B) Datum podání: 05.09.95 (C) Klasifikace: C12N,A01H (viii)Informace o zástupci/agentovi:
(A) Jméno:Harrington, James J.
(B) Registrační číslo: P38,711 (C) Garant/číslo rejstříku: 32,348 (ix) Telekomunikační informace:
(A) Telefon: 201-831-3246 (B) Telefax: 201-831-3305 (2) Informace pro identifikační číslo sekvence 1 (SEQ ID NO:1) :
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 413 páry bází
(B) Typ: nukleotidová kyselina
(C) Řetězec: jednoduchý
(D) Topologie : lineární
ii) Typ molekuly: DNA (genomická)
(iii) Hypotetický : ne
(iv) Anti-sense: ne (xi) Popis sekvence: SEQ ID:1:
TCTAGAGAAA CTAAACTACT AATAAAAATT ATTTTTAGCA TATTTTAGTA 6 0 CTGTNGTTTA
TATTTNNAAA TGATAAAGTT TAACTAAAAG TGCACCGCTA AACCACCGTA
120 AATCCAAAGA
GACCGTAAAT CTCTTCCACG CACTCTGTCG TGTACCAACG TGCTGTGGAA
180 ACGCTCACGT
ACCTTTGTGT ATTATGTACG GATTCGGGCA ACGGACATTT CGACGTCGGT
240
TTGCCAGTCC
NATTCCCATC TGAACCACAC ATCTCTGAAC AAAAGTAGGG GAGGCGCCCG
300 CGTAGCCCCC
TTTCCCACAA TCCCACTCCG TGCCAGGTGC CACCCTCCCC AAGCCCTCGC
360 GCCGCTCCGA
GACAGCCGCC CGCAACCATG GCCACCGCCG CCACCGCGGC CGCCGCGCTC
413 ACC (2) Informace pro SEQ ID NO:2:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 509 párů bází (B) Typ: nukleotidová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi)Popis sekvence: SEQ ID NO:2:
CCGGATTTCC CTGTTGCGGA TTGCGGGTGG CAGCCTGGCA GGTGGGTGCG 6 0 ACCCCGTTTG
GATTCCCTTG TCTGGGCCCC TTGTGTCAGT ACCGTCTGTA CTCCGATGAC
120 ATGCACCGTC
GTCCACAGTC AAGTCCAAAA TCTCCCCTCT TTTTTTTAAC GGAACAGTTC
180 AAAACCTCCT
TGACGCACGC TGTCGTGTAC CAGCACTCGG TGGACACCAC GTTTGTAATC
240 CAGGCCGACA
CGTCGGTCCC ACGTCGACAG GCCCCACCGT CCGGTCTGTA GCGTGTACGT
300 ATTCGGGCGA
CGGACGTGTC GTCGTCGTCT TGCGAGTCCC ATTCCCATCA CCATCTGAGC
360 CACACATCCT
CTGAACAAAA GCAGGGAGGC CTCCACGCAC ATCCCCCTTT CTCCACTCCG
420 GTCCGTGGCA
CCCACCCCAA ACCCTCGCGC CGCCTCCGAG ACAGCCGCCG CAACCATGGC
480
GCCGCGTCTA CCGCGCTCAC TGGCGCCAC
509 (2) Informace pro SEQ ID NO:3:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 829 párů bází (B) Typ: nukleotidvá kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: linární (ii) Typ molekuly: DNA (genomický) cACCGc voC-C
(xi) Popis CTGCAGGTCA 60 sekvence: SEQ ID NO:3:
ACGGATCACC TATCAACATC CCAGCTAAAA
GTGGGTGAGT 12 0 TGAGTCTGTC TTGTGGAAAA AACGTTTTAC
AAAAACAGTT 180 GAACAAGATT GACTGTTCCT CCGGGAGGGT
TGAGCGAAAG 240 GTGAGGAAAC AGAGCGGAGG GCTTGGAGGT
GGAGTTGAGC 300 TTGATGACGA CACCGTACTG GCGTACCAGG
CTGAAGCTGT 360 CGCCGCCGCT GCTCATCTTG TNGGCTGTGC
TGCGGGTGGC 420 AGCCTGGCAG GTGGGTGCGA CCCGTTTGGA
GTGTCAGTAC CGTCTGTACT CCGATGACAT GCACANCGTC
480
ACAGTAAAAA
GGGGGAAAAC
TTTCTCCTGG
AATTAACAAT
TTGGAACATC
GTTACAGATG
GACCTCGGTA
GTCAGACGCC
CCTAGTAGTG
AACACCGGGC
NCGGTGTCCC
TGTTGCGGAT
CTCCCTGATC
TGGGCCCTTT
GTCCACAGTC
AAGTCCACAA
TCTCCCCTCT
0
CAGCGCTCAC
600
GCCCCACCGT
660
TGCNNNNGTC
720
AGGGAAGGCC
780
GGAAACCCTC
TTTTTTAACG
TGGACACCAC
CCGGTCTGTA
CCANNNCCCA
TCTACGCACA
GCGCCGCCTC
GAATAGTTNC
GTTTGTAATC
GCGTGTACGT
TCACCATCTG
TCCCCCTTTC
CGAGACAGCC
AAAATCTCCT
CACGCCGACA
ATTCGGGCAA
AGCCATCACA
TNNCTNNNNT
GCCGCAACCA
TGACGCACGC
TATCGTGTAC
CGTCGNTCCC
ACGTCGACAG
CGGACGTGTC
GTCGTCGTCT
TCTCATGCGT
GAANAAAAGC
CCGTGTCCGT
GGCACCCAGG
TGGCCACCG

Claims (16)

  1. heterologní gen.
    genů kukuřice alsía als2.
  2. 2¼ tkáních uvedených rostlin, obsahující expresi nukleotidové sekvence podle nároků 1,2,3,4,5 nebo 6.
  3. 3. Isolovaná nukleotidox AHAS pro expresi genů x heterologní gen, kde promotor AHAS je vybrán z:
    ' 0 V É N Á R 0 K Y sekvence, obsahuj ící promotor rostlinách a sekvenci kóduj ící sekvence, obsahuj ící promotor rostlinách a sekvenci kóduj ící >tor AHAS je vybrán z promotorů sekvence, obsahuj ící promotor rostlinách a sekvenci kóduj ící
    a) nukleotidové sekvence podle uvedenou na obrázku 1. SEQ. ID
    b) nukleotidové sekvence podle uvedenou na obrázku 2, SEQ. ID
    c) nukleotidové sekvence podle uvedenou na obrázku 3, SEQ. ID
    nároku 1/ obsahuj ící sekvenci NO. 1 nároku obsahuj íc í sekvenc i NO. 2 ; ne ;bo nároku L obsahuj ící sekvenci NO. 3 .
  4. 4. Isolovaná nukleotidové sekvence, obsahující promotor AHAS pro expresi genů v rostlinách a sekvenci kódujícího heterologního genu, kde promotorem AHAS je promotor pro gen als2 kukuřice.
  5. 5. Sekvence podle nároku 1, kde promotorové sekvence je získana z jednoděložné rostliny.
  6. 6. Sekvence podle nároku 1, kde promotorové sekvence je získána z kukuřice.
  7. 7. Transformovaný vektor, obsahující nukleotidovou sekvenci podle nároků 1,2,3,4,5 nebo 6.
  8. 8. Rostlinná buňka, obsahující vektor podle nároku 7.
  9. 9. Rostlina, obsahující nukleotidovou sekvenci podle nároků 1,2,3,4,5 nebo 6.
  10. 10. Způsob exprese heterologního genu v rostlině vyznačující se tím, že probíhá ve vysoké úrovni a v různých
  11. 11. Konstrukt nukleové kyseliny, obsahující sekvence podle nároků 1,2,3,4,5 nebo 6.
  12. 12. Konstrukt nukleové kyseliny podle nároku 11 vyznačující se tím, že heterologníra genem nukleotidové sekvence je mutant genu, který je schopný poskytnout resistenci k volitelnému transgenickému materiálu.
  13. 13. Konstrukt nukleové kyseliny podle nároku 12 vyznačujíc se tím, že heterologním genem nukleotidové sekvence je gen AHAS .
  14. 14. Metoda používající konstruktu nukleové kyseliny jako volitelného signálního znaku vyznačující se tím, že konstruktem nukleové kyseliny je konstrukt podle nároku 12, kde metoda obsahuje následující kroky:
    a) rekombinantně transformování rostlinného materiálu pomocí insertování konstruktu nukleové kyseliny
    b) umístnění rostlinného materiálu do růstového media obsahujícího sloučeninu
    c) identifikování rostlinných materiálů schopných růstu v přítomnosti sloučeniny.
  15. 15. Metoda podle nároku 14 vyznačující se tím, že rnutantem genu je AHAS gen.
  16. 16. Metoda podle nároku 14 vyznačující se tím, že sloučeninou je imidazolinon nebo sulfonyl močovina.
CZ97695A 1994-09-08 1995-09-05 Acetohydroxy acid synthetase promoter for expression of genes introduced into plants CZ69597A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/303,266 US5750866A (en) 1994-09-08 1994-09-08 AHAS promoter useful for expression of introduced genes in plants
PCT/US1995/011199 WO1996007746A1 (en) 1994-09-08 1995-09-05 Acetohydroxyacid synthase promoter expression of introduced genes in plants

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ69597A3 true CZ69597A3 (en) 1997-09-17

Family

ID=23171273

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ97695A CZ69597A3 (en) 1994-09-08 1995-09-05 Acetohydroxy acid synthetase promoter for expression of genes introduced into plants

Country Status (26)

Country Link
US (2) US5750866A (cs)
EP (1) EP0779928B1 (cs)
JP (1) JP3655922B2 (cs)
KR (1) KR970705637A (cs)
CN (1) CN1210404C (cs)
AT (1) ATE291631T1 (cs)
AU (1) AU701239B2 (cs)
BG (1) BG64062B1 (cs)
BR (1) BR9509202A (cs)
CA (1) CA2198497C (cs)
CZ (1) CZ69597A3 (cs)
DE (1) DE69534101T2 (cs)
EE (1) EE03933B1 (cs)
ES (1) ES2240978T3 (cs)
FI (1) FI119818B (cs)
HU (1) HU221795B1 (cs)
MD (1) MD2312B2 (cs)
MX (1) MX9701684A (cs)
NO (1) NO323171B1 (cs)
NZ (1) NZ293093A (cs)
PL (1) PL188062B1 (cs)
RO (1) RO117190B1 (cs)
RU (1) RU2197527C2 (cs)
SK (1) SK30697A3 (cs)
UA (1) UA48951C2 (cs)
WO (1) WO1996007746A1 (cs)

Families Citing this family (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5659026A (en) * 1995-03-24 1997-08-19 Pioneer Hi-Bred International ALS3 promoter
AU762993C (en) 1998-02-26 2004-06-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Constitutive maize promoters
EP1462522B1 (en) * 1998-02-26 2006-08-16 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize Met-1 promoter
US6504083B1 (en) * 1998-10-06 2003-01-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize Gos-2 promoters
US6528701B1 (en) 1999-03-02 2003-03-04 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Rice ubiquitin-derived promoters
US7122721B1 (en) 1999-10-05 2006-10-17 Basf Aktiengesellschaft Plant gene expression under the control of constitutive plant V-ATPase promoters
MX233208B (es) 2000-04-28 2005-12-20 Basf Ag Uso del gen mutante ahas 2 del maiz xi12 y herbicidas de imidazolinona para la seleccion de plantas de maiz, arroz y trigo, monocotiledoneas transgenicas, resistentes a los herbicidas de imidazolinona.
EP2292768A1 (en) 2002-07-09 2011-03-09 BASF Plant Science GmbH Use of AHAS mutant genes as selection marker in potato transformation
US20060064784A1 (en) 2002-08-07 2006-03-23 Basf Plant Science Gmbh Nucleic acid sequences encoding proteins associated with abiotic stress response
CA2516042A1 (en) 2003-02-17 2004-09-02 Metanomics Gmbh Preparation of transgenic plants comprising a nucleic acid molecule encoding an l450 polypeptide-exhibiting faster growth and/or increased yield
EP2194135A3 (en) 2003-04-15 2010-10-06 BASF Plant Science GmbH Nucleic acid sequences from yeast encoding proteins associated with abiotic stress response and transformed plant cells and plants with increased tolerance to environmental stress
EP1654368A2 (en) 2003-08-01 2006-05-10 BASF Plant Science GmbH Process for the production of fine chemicals
WO2007087815A2 (en) 2004-12-17 2007-08-09 Metanomics Gmbh Process for the control of production of fine chemicals
EP2080769A3 (en) 2004-07-02 2010-12-01 Metanomics GmbH Process for the production of fine chemicals
CN101001956B (zh) 2004-07-31 2014-09-24 梅坦诺米克斯有限公司 制备具有更快生长和/或更高产量的生物
AU2005286427B2 (en) 2004-09-24 2011-09-15 Basf Plant Science Gmbh Plant cells and plants with increased tolerance to environmental stress
EP2053057A3 (en) 2004-09-24 2009-07-15 BASF Plant Science GmbH Nucleic acid sequences encoding proteins associated with abiotic stress response and plant cells and plants with increased tolerance to environmantal stress
EP2573188A2 (en) 2005-03-02 2013-03-27 Metanomics GmbH Process for the production of fine chemicals
EP1871883A1 (en) * 2005-03-02 2008-01-02 Metanomics GmbH Process for the production of fine chemicals
US7737326B2 (en) * 2005-04-29 2010-06-15 Midwest Oil Seeds Inc. EPSPS promoter from maize
MX2008012252A (es) 2006-03-24 2009-01-14 Basf Plant Science Gmbh Proteinas que se relacionan con la respuesta al estres abiotico y homologos.
AU2007299219A1 (en) 2006-04-05 2008-03-27 Metanomics Gmbh Process for the production of a fine chemical
CA2651961A1 (en) 2006-05-31 2007-12-06 Metanomics Gmbh Manipulation of the nitrogen metabolism
WO2008043849A2 (en) 2006-10-13 2008-04-17 Basf Plant Science Gmbh Plants with increased yield
US20080176225A1 (en) * 2007-01-18 2008-07-24 Steve Roffler Membrane bound reporter gene system
CA2682349C (en) 2007-04-04 2017-08-22 Basf Plant Science Gmbh Ahas mutants
US20100162432A1 (en) 2007-05-22 2010-06-24 Basf Plant Science Gmbh Plant cells and plants with increased tolerance and/or resistance to environmental stress and increased biomass production-ko
AR067318A1 (es) 2007-05-22 2009-10-07 Basf Plant Science Gmbh Plantas con mayor tolerancia y/o resistencia aumentada al estres ambiental y mayor produccion de biomasa
EP2193201A1 (en) 2007-09-18 2010-06-09 BASF Plant Science GmbH Plants with increased yield
EP2594647A3 (en) 2007-09-21 2013-07-24 BASF Plant Science GmbH Plants with increased yield
DE112008003318T5 (de) 2007-12-19 2011-04-21 Basf Plant Science Gmbh Pflanzen mit erhöhtem Ertrag und erhöhter Toleranz gegenüber Umweltstress (IY-B)
DE112008003433T5 (de) 2007-12-21 2010-11-04 Basf Plant Science Gmbh Pflanzen mit erhöhtem Ertrag (KO NUE)
DE112009000313T5 (de) 2008-02-27 2011-04-28 Basf Plant Science Gmbh Pflanzen mit erhöhtem Ertrag
BRPI0917855A2 (pt) 2008-08-19 2015-08-18 Basf Plant Science Gmbh Métodos para produzir uma célula de planta transgênica, planta ou parte da mesma, para produzir uma composição agrícola, para produzir uma planta transgênica, e para aumentar o rendimento, célula de planta transgênica, planta ou parte da mesma, semente, molécula de ácido nucleico isolada, construção de ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, processos para produzir um polipeptídeo, e para identificar um composto, polipeptídeo, anticorpo, tecido de planta, material de propagação material colhido ou planta, composição, e, uso de uma proteína relacionada a rendimento ou proteína relacionada a estresse e a rendimento.
WO2010034672A1 (en) 2008-09-23 2010-04-01 Basf Plant Science Gmbh Plants with increased yield (lt)
MX2011004270A (es) 2008-10-23 2011-07-13 Basf Plant Science Gmbh Plantas con rendimiento aumentado (nue).
DE112009002342T5 (de) 2008-10-23 2012-06-14 Basf Plant Science Gmbh Verfahren zum Herstellen einer transgenen Zelle mit erhöhtem Gehalt an gamma-Aminobuttersäure (GABA)
CN101475941B (zh) * 2008-11-28 2011-09-07 北京市农林科学院 一种玉米Zmptil基因启动子及其应用
AU2010275363A1 (en) 2009-07-23 2012-02-02 Basf Plant Science Company Gmbh Plants with increased yield
EP3121283B1 (en) 2009-08-31 2018-05-02 BASF Plant Science Company GmbH Regulatory nucleic acid molecules for enhancing seed-specific gene expression in plants promoting enhanced polyunsaturated fatty acid synthesis
CN111560375A (zh) * 2009-08-31 2020-08-21 巴斯夫植物科学有限公司 用于增强植物中种子特异的和/或种子优先的基因表达的调节性核酸分子
SG178389A1 (en) 2009-08-31 2012-03-29 Basf Plant Science Co Gmbh Regulatory nucleic acid molecules for enhancing constitutive gene expression in plants
EP2319872A1 (en) 2009-11-04 2011-05-11 BASF Plant Science GmbH Amylopectin type starch with enhanced retrogradation stability
MX2012005719A (es) 2009-11-17 2012-07-30 Basf Plant Science Co Gmbh Plantas con rendimiento aumentado.
BR112014014029B1 (pt) * 2011-12-30 2021-12-14 Dow Agrosciences Llc Polinucleotídeo compreendendo um promotor bidirecional
JP6220794B2 (ja) * 2011-12-30 2017-10-25 ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー 合成二方向植物プロモーターｕｂｉ１のための構築物および方法
CN102676549B (zh) * 2012-01-09 2014-04-09 中国中医科学院中药研究所 一个参与丹参酮生物合成的cyp450基因及其编码产物与应用
CA2870908A1 (en) * 2012-04-27 2013-10-31 Synthetic Genomics, Inc. Compositions and methods for modulating the sensitivity of cells to ahas inhibitors
US10231397B2 (en) 2013-01-29 2019-03-19 Basf Plant Science Company Gmbh Fungal resistant plants expressing EIN2
US10435705B2 (en) 2013-01-29 2019-10-08 Basf Plant Science Company Gmbh Fungal resistant plants expressing HCP6
CA2897482A1 (en) 2013-01-29 2014-08-07 Basf Plant Science Company Gmbh Fungal resistant plants expressing hcp7
CN105008542B (zh) 2013-03-08 2020-02-07 巴斯夫植物科学有限公司 表达MybTF的抗真菌性植物
CN107699563B (zh) * 2013-03-14 2022-02-22 孟山都技术有限公司 植物调控元件和其用途
WO2016124515A1 (en) 2015-02-04 2016-08-11 Basf Plant Science Company Gmbh Method of increasing resistance against soybean rust in transgenic plants by increasing the scopoletin content
EP3054014A3 (en) 2016-05-10 2016-11-23 BASF Plant Science Company GmbH Use of a fungicide on transgenic plants

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4943674A (en) * 1987-05-26 1990-07-24 Calgene, Inc. Fruit specific transcriptional factors
US5013659A (en) * 1987-07-27 1991-05-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
EP0360750A3 (en) * 1988-09-22 1991-01-02 Ciba-Geigy Ag Novel herbicide tolerant plants
ES2104628T3 (es) * 1990-05-09 1997-10-16 American Cyanamid Co Metodo para evitar daños a los cultivos en presencia de combinaciones pesticidas sinergeticas.
GB9024728D0 (en) * 1990-11-14 1991-01-02 Ici Plc Herbicide resistant plants
TW208716B (cs) * 1990-12-27 1993-07-01 American Cyanamid Co
US5731180A (en) * 1991-07-31 1998-03-24 American Cyanamid Company Imidazolinone resistant AHAS mutants

Also Published As

Publication number Publication date
EP0779928A1 (en) 1997-06-25
US6025541A (en) 2000-02-15
SK30697A3 (en) 1997-12-10
AU3544895A (en) 1996-03-27
EE9700213A (et) 1998-02-16
RU2197527C2 (ru) 2003-01-27
AU701239B2 (en) 1999-01-21
BG101270A (en) 1997-10-31
JPH10504968A (ja) 1998-05-19
MD2312B2 (ro) 2003-11-30
CN1157637A (zh) 1997-08-20
HUT77109A (hu) 1998-03-02
MX9701684A (es) 1997-06-28
CA2198497A1 (en) 1996-03-14
FI119818B (fi) 2009-03-31
FI970958A (fi) 1997-03-06
CN1210404C (zh) 2005-07-13
PL188062B1 (pl) 2004-12-31
JP3655922B2 (ja) 2005-06-02
EP0779928B1 (en) 2005-03-23
NO971069D0 (no) 1997-03-07
KR970705637A (ko) 1997-10-09
EE03933B1 (et) 2002-12-16
ES2240978T3 (es) 2005-10-16
ATE291631T1 (de) 2005-04-15
DE69534101T2 (de) 2006-03-23
RO117190B1 (ro) 2001-11-30
HU221795B1 (hu) 2003-01-28
NZ293093A (en) 1999-01-28
WO1996007746A1 (en) 1996-03-14
NO971069L (no) 1997-05-07
US5750866A (en) 1998-05-12
CA2198497C (en) 2009-11-03
FI970958A0 (fi) 1997-03-06
NO323171B1 (no) 2007-01-15
PL319053A1 (en) 1997-07-21
BR9509202A (pt) 1997-12-30
UA48951C2 (uk) 2002-09-16
BG64062B1 (bg) 2003-11-28
DE69534101D1 (de) 2005-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ69597A3 (en) Acetohydroxy acid synthetase promoter for expression of genes introduced into plants
MXPA97001684A (en) Expression of the promoter acetohidroxiacido-synthase of genes introduced in plan
Tada et al. Expression of a monocot LHCP promoter in transgenic rice.
JP2015524672A (ja) 植物における導入遺伝子発現のためのトウモロコシ非翻訳領域の使用
AU2017234672B2 (en) Zea mays regulatory elements and uses thereof
AU2017235944B2 (en) Zea mays regulatory elements and uses thereof
CN111527212A (zh) 使用来自叶绿素结合Ab基因的调控元件表达转基因的组合物和方法
EP0938572B1 (en) Promoter from tobacco
JP4452823B2 (ja) カルス及び種子胚特異的発現活性を有するプロモーター
OĞRAŞ et al. Expression and inheritance of GUS gene in transgenic tobacco plants
KR101847974B1 (ko) 단자엽 식물 형질전환을 위한 벼 Os09g0553100 유전자 유래의 항시 발현용 프로모터 및 이의 용도
US6355864B1 (en) Versatile rpL34 promoter elements and use thereof
US20210222184A1 (en) Compositions and methods for expressing transgenes using regulatory elements from rubisco activase genes
EP2423316B1 (en) Method for determining meiotic recombination frequencies in plants
Song et al. Expression of a rice chlorophyll a/b binding protein promoter in sweetpotato
KR101170153B1 (ko) ＤＮＡ 수복능이 향상된 대장균 ｒｅｃＡ 형질전환 담배식물체
EP1268829B1 (en) Atrsp gene promoters
Sherman Studies on plant gene transfer systems
Battraw Stable transformation of sorghum and rice
JP2002272469A (ja) 高等植物のｄｎａ損傷応答性遺伝子発現制御能を示すシス制御配列

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic