NO311493B1 - Anvendelse av modifisert pektin for fremstilling av et medikament til behandling eller forebygging av cancer - Google Patents
Anvendelse av modifisert pektin for fremstilling av et medikament til behandling eller forebygging av cancer Download PDFInfo
- Publication number
- NO311493B1 NO311493B1 NO19970039A NO970039A NO311493B1 NO 311493 B1 NO311493 B1 NO 311493B1 NO 19970039 A NO19970039 A NO 19970039A NO 970039 A NO970039 A NO 970039A NO 311493 B1 NO311493 B1 NO 311493B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- cancer
- mcp
- cells
- galectin
- cell
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 47
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 24
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 title claims description 26
- 239000001814 pectin Substances 0.000 title claims description 25
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 title claims description 25
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title description 4
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5-tetrahydroxypentanal Chemical class OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 59
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 5
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 17
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 17
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 15
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024207 chronic leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006512 mast cell neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006971 mastocytoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015347 renal cell adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims 1
- 229920002230 Pectic acid Polymers 0.000 claims 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 208000017058 pharyngeal squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 239000010318 polygalacturonic acid Substances 0.000 claims 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 abstract description 23
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 128
- 102000000802 Galectin 3 Human genes 0.000 description 50
- 108010001517 Galectin 3 Proteins 0.000 description 50
- 229940040387 citrus pectin Drugs 0.000 description 48
- 239000009194 citrus pectin Substances 0.000 description 48
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 26
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 26
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 23
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 19
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 18
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 18
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 17
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 16
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 16
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 11
- 108010044715 asialofetuin Proteins 0.000 description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 10
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 9
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 9
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 8
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 7
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 7
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 7
- 150000008195 galaktosides Chemical class 0.000 description 7
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 6
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 6
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 6
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 108010038196 saccharide-binding proteins Proteins 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000007563 Galectins Human genes 0.000 description 5
- 108010046569 Galectins Proteins 0.000 description 5
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 5
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 5
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 5
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 201000005825 prostate adenocarcinoma Diseases 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 4
- 102000023852 carbohydrate binding proteins Human genes 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000000795 Galectin 1 Human genes 0.000 description 3
- 108010001498 Galectin 1 Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- KFEUJDWYNGMDBV-LODBTCKLSA-N N-acetyllactosamine Chemical group O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 KFEUJDWYNGMDBV-LODBTCKLSA-N 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000002266 amputation Methods 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 230000008619 cell matrix interaction Effects 0.000 description 3
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 3
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 231100000065 noncytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002020 noncytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 101000608756 Mus musculus Galectin-3 Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 2
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Chemical group OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 108091008400 carbohydrate binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000010102 embolization Effects 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- -1 polysaccharide compound Chemical class 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 208000011581 secondary neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical group 0.000 description 2
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCDWFBFHIIKIPM-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2h-1,3-benzothiazole-2-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2N(CC)C(S(O)(=O)=O)SC2=C1 PCDWFBFHIIKIPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- CKIPPJHUIHDREQ-TUJAQXOJSA-N Arabino-galactose Chemical compound O[C@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CO1 CKIPPJHUIHDREQ-TUJAQXOJSA-N 0.000 description 1
- 239000011547 Bouin solution Substances 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 244000248349 Citrus limon Species 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical group O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001326189 Gyrodactylus prostae Species 0.000 description 1
- 101000608757 Homo sapiens Galectin-3 Proteins 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical group O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- 102000002297 Laminin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010000851 Laminin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000007433 Lymphatic Metastasis Diseases 0.000 description 1
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010033701 Papillary thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 101001042486 Rattus norvegicus Galectin-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010043515 Throat cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000016571 aggressive behavior Effects 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-KCDKBNATSA-N aldehydo-L-fucose Chemical group C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-KCDKBNATSA-N 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000002403 aortic endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- DZGCGKFAPXFTNM-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydron;chloride Chemical compound Cl.CCO DZGCGKFAPXFTNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 108060002885 fetuin Proteins 0.000 description 1
- 102000013361 fetuin Human genes 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 125000002519 galactosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 238000001030 gas--liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 102000048551 human LGALS3 Human genes 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 208000010949 lymph node disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- DWCZIOOZPIDHAB-UHFFFAOYSA-L methyl green Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC(=CC=1)[N+](C)(C)C)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 DWCZIOOZPIDHAB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 description 1
- 235000020374 simple syrup Nutrition 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000003003 spiro group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 208000013076 thyroid tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L zinc stearate Chemical compound [Zn+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/732—Pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en anvendelse av modifisert pektin for fremstilling av et medikament til behandling eller forebygging av cancer i pattedyr.
Forekomsten av mange cancerformer er ventet å øke ettersom populasjonen eldes. F.eks. er prostata cancer den mest vanlige diagnostiserte cancerform i USA og den andre led-ende årsaken til dødsfall hos menn med cancer. Det er ventet at i 1994 vil det være 200.000 nye tilfeller av prostata cancer som blir diagnostisert samt 38.000 dødsfall fra prostata cancer, og disse tallene er ventet å fortsatt øke ettersom populasjonen blir eldre. Omtrent 50 % av pasientene som blir diagnostisert med prostata cancer har en sykdom som har eller vil forsvinne fra prostata. Prostata cancer spres til skjelettsystemet og pasientene dør vanligvis med omfattende benmetastatisk sykdom. Det finnes for tiden ikke noen effektiv legende terapi og lite legende terapi for pasienter med metastatisk sykdom.
Prosessen med tumorcelle-metastaser krever at cellene forflytter seg fra primærtumoren og invaderer grunnmembranen, beveges gjennom blodstrømmen fra tumorcelleemboli, reagerer med vasculært endothel til målorganet, ekstravaserer og prolifererer for å danne sekundære tumorkolonier som beskrevet av E.C. Kohn, Anticancer Re., 13, 2553
(1993); og L.A Kiotta, P.S. Steeg, W.G. Stettler-Stevenson, Cell 64, 327 (1991).
Det er generelt akseptert at mange stadier med metastatisk kaskade involverer cellulære interaksjoner modifisert av celleoverflatekomponenter såsom karbohydrat-bindende proteiner, som innbefatter galactosidbindende lectiner (galectiner) som beskrevet av A. Raz, R. Lotan, Cancer Metastasis Rev. 6, 433 (1987); og J. Gabius, Biochim Biophys Acta 1071, 1 (1991). Behandling av Bl6 melanom og uv-2237 fibrosarcomaceller in vitro med anti-galectin-monoklonale antistoffer før deres intravenøse (i.v.) injeksjon inn i nåle-venen til syngeniske mus resulterer i en betydelig inhibering av utviklingen av tumor-lungekoloni som beskrevet av L. Meromsky, R. Lotan, A. Raz, Cancer Res. 46, 5270
(1991). Transfeksjon av lavmetastatisk, lav galectin-3-uttrykkende uv-2237-cl 15 fibrosarcomaceller med galectin-3 cDNA resulterte i en økning av metastatisk fenotype til transfekterte celler, som beskrevet av A. Raz, D. Zhu, V. Hogan, J. Shah, T. Raz, R. Karkash, G. Pazerini, P. Carmi, Int. J. Cancer 46, 871 (1990). Det er videre blitt etablert en korrelasjon mellom nivået av galectin-3-ekspresjon i humane papillær-thyroidcarci-nomer og tumorstadier av humane colorektale og gastriske carcinomer som beskrevet av L. Chiariotti, M.T. Berlinjieri, P. DeRosa, C. Battaglia, N. Berger, C.B. Bruni, A. Fusco, Omeogene 7, 2507 (1992); L. frimura, Y. Matsushite, R C. Sutton, D. Carralero, D.. Ohanesian, K R. Cleary, D M. Ota, Int J Cancer 51, 387 (1991); R. Lotan, H. Ito, W. Yasui, H. Yokozak, D. Lotan, E. Tahara, Int J Cancer 56, 474 (1994); og M.M. Lotz, C.W. Andrews, CA. Korzelius, E.C. Lee, GD. Steele, A. Clarke, AM. Mercurio, PNAS, USA 90, 3466 (1993).
Enkeltsukkere såsom metyl-a-D-laktosid og lakto-N-tetrose er blitt vist å inhibere metastaser av B16-melanomceller, mens D-galactose og arabinogalactose inhiberte lever-metastaser til L-l-sarcomceller som beskrevet av J. Beauth et al., J Cancer Res Clin Oncol 113, 51 (1987).
Det er kjent at intravenøs injeksjon av B16-Fl-murin-melanomceller med citruspektin eller modifisert citruspektin inn i syngeniske mus resulterte i en betydelig økning eller reduksjon av lungekolonisering, som beskrevet av D. Platt og A. Raz, J. Nati Cancer Inst. 84:438-42 (1992). Før oppdagelsen beskrevet heri eksisterte det ikke noen effektiv behandling for inhibering av cancermetastase ved anvendelse av et ikke-cytotoksisk middel ved oral administrering. Det eksisterer derfor et behov for en terapi som er basert på oral administrering av et ikke-cytotoksisk middel.
Foreliggende oppfinnelse vedrører anvendelse av modifisert pektin for fremstilling av et medikament til behandling eller forebygging av cancer ved oral administrering til et pattedyr, hvor nevnte modifiserte pektin er pH-modifisert sitruspektin, vannoppløselig og har en tilsynelatende gjennomsnittlig molekylvekt på omtrent 1 til omtrent 15 Kd.
Den foretrukne utførelsesformen ifølge foreliggende oppfinnelse tilveiebringer følgelig en ny terapi hvor oralt inntak av et ikke-cytotoksisk naturlig kompleks karbohydrat rikt på gallactosidresiduer, dvs. pH-modifisert citruspektin (MCP), virker som en potent inhibitor av spontan prostata-carcinommetastase.
Når behandlet i henhold til foreliggende oppfinnelse, ble 7 av 16 tumorbærende rotter observert å være sykdomsfrie ifølge autopsi (ikke synlig metastase i lymfeknuter eller lunger) etter fjerning av primærtumorer på dag 14 etter inokulering av 10^ Dunning-rotteprostata-adenocarcinom-MLL-celler, mens 16/16 av rottende i kontrollgruppen hadde metastaser. Antall tumorlungekolonier i de gjenværende dyrene ble betydelig redusert ved et oralt inntak på 1 % (vekt/volum) MCP sammenlignet med kontrollgruppen (kontroll), 9+4; 1%MCP, 1+1), uten effekt på veksten av primærtumorene. Invitro inhiberte MCP MLL-celleadhesjonen til rotteendothel-celler på en tids- og dose-avhengig måte samt deres kolonidannelse i semi-fast medium. Den mulige virkningsmekanismen til MCP ser ut til å involvere tumorcelleoverflate-karbohydrat-bindende proteiner. Fig. IA er et kart som illustrerer at antall rotter som led under lungemetastase ble betydelig redusert sammenlignet med kontrollen i 0.1 % MCP og 1.0 % MCP. Fig. IB er et kart som illustrerer at lungene til 1,0 % MCP-behandlede dyr hadde betydelig færre metastasekolonier enn kontrollgruppene.
Fig. 1C er et fotomikrografi av lungene til kontrollrottene.
Fig. ID er et fotomikrografi av lungene til 1.0 % MCP-rotter.
Fig. 2 er et plott av celleoverflatefarging og westernblott analyser (innskudd) for ekspresjon av rotte-galectin-2 i MLL-celler. Fig. 3 A er en graf som illustrerer kobling av MLL-celler i fravær eller nærvær av forskjellige konsentrasjoner av MCP i 90 min. ved 4°C. Fig. 3B er en graf som illustrerer tidsforløpet for kobling av MLL-cellene til et konfluent monolag av RAEC i fravær eller nærvær av 0.03 % vekt/volum MCP. Fig. 3C er et fotomikrografi av fluorescent-MLL-celleadhesjon til RAEC-celler i fravær av MCP. Fig. 3D er en fotomikrograf av fluorescent-MLL-celleadhesjonen til RAEC-cellene i fravær av 0,1 % vekt/volum MCP. Fig. 4A er et kart som viser effekten av MCP på MLL-kolonidannelsen i 0.5 % agarose.
Fig. 4B er et fase-kontrast-fotomikrografi av MLL-celleveksten uten MCP.
Fig. 4C er et fase-kontrast-fotomikrografi av MLL-celleveksten med 0,1 % (vekt/volum)
MCP.
Fig. 5 er et fotomikrografi av humant primært prostata-adenocarcinomvev som illustrerer tilstedeværelse av galectin-3. Fig. 6 er en graf som illustrerer effekten av CP og MCP på Bl6F1-adhesjonen til laminin i nærvær av varierende konsentrasjoner av CP (0) eller MCP (0). Vertikale kolonner viser gjennomsnittlig +-standardawik beregnet fra t-fordelingen av gjennomsnittet. Fig. 7A er et fase-kontrast-fotomikrografi av B16F1-celler sådd ut på laminin. Cellene ble dyrket i kun DMEM. Fig. 7B er et fase-kontrast-fotomikrografi av Bl6F1-celler sådd ut på laminin dyrket i nærvær av 0,5 % CP og DMEM. Fig. 7C er et fase-kontrast-fotomikrografi av Bl6F1 -celler sådd ut på laminin dyrket i nærvær av 0,5 % MCP og DMEM. Fig. 8 er et kart som illustrerer effektene av CP og MCP på asialofetuin-indusert homotypisk aggregasjon i nærvær av kun 20 ug/ml asialofetuin (A) eller med tilsatt 0,5 % CP (B) eller 0,5 % MCP (C). Vertikale kolonner viser gjennomsnittlig standardavvik beregnet fra t-fordelingen av gjennomsnittet. Fig. 9A er et fase-kontrast-fotomikrografi av homotypisk aggregasjon av B16-F1-celler i nærvær av kun 20 ug/ml asialofetuin. Fig. 9B er et fase-kontrast-fotomikrografi av homotypisk aggregasjon av B16-F2-celler i nærvær av 0,5 % CP og asialfetuin. Fig. 9C er et fase-kontrast-fotomikrografi av homotypisk aggregasjon av B16-F2-celler i nærvær av 0,5 % MCP og asialfetuin.
Fig. 10 er en graf som illustrerer binding av galectin-3 til MCP-belagte brønner.
Fig. 11 er en graf som illustrerer effekter av CP og MCP på evnen som B16F1-cellene har til å danne kolonier i 0„5 % agarose (CP 0 MCP 0).
Anvendt heri angir betegnelsen "terapeutisk" behandling oral administrering av en forut bestemt mengde av modifisert citruspektin til et individ etter at individet er blitt diagnostisert å ha canser som er effektiv for økt overlevelse til individet.
Betegnelsen "canser" refererer seg til en hvilken som helst neoplastisk forstyrrelse, inkludert slike cellulære forstyrrelser som f. eks. nyrecellecanser, Kaposi's sarcom, kronisk leukemi, brystcanser, sarcom, ovarie-carcinom, rektalcanser, halscanser, melanom, tarm-canser, blærecanser, mastocytom, lungecanser, brystadenocarcinom, pharyngial sqamos cellecarcinom og mage-tarm eller mage-canser. Canseren som blir behandlet i foreliggende oppfinnelse er fortrinnsvis human prostatacanser, mest foretrukket er adenocarcinom til human prostata.
Forkortelser anvendt heri er: CP, naturlig citruspektin; MCP, pH-modifisert CP; EHS, Englebreth-Holm Swarm; DMEM, Dulbecco's modifiserte Eagle's minimal essentielt medium; CMF-PBS, Ca<2+-> og Mg2+-fritt fosfatbufret saltvann, pH 7,2; BSa, bovin-serumalbumin.
Nylig er effekten av citruspektin (CP), et kompleks polysaccharid rikt på galactosyl-residuer og dets pH-modifiserte derivat (MCP) analysert på eksperimentell metastase av B16-melanom som beskrevet i artikkelen: Modulation of the Lung Colonization of Bl 6-Fl Meanoma Cells ved Citrus Pectin, Journal of the National Cancer Institute, Vol. 84, No. 6, 18. mars 1992, og denne er inkorporert heri som referanse. Det ble oppdaget at ved samtidig injeksjon av MCP med B16-Fl-celler intravenøst resulterte i en betydelig inhibering av deres evne til å kolonisere lungene til injiserte mus. pH-modifikasjon av CP, som vil bli beskrevet mer fullstendig nedenfor, og resulterte i dannelse av ikke-forgrenede karbohydratkjeder med mindre størrelse og lignende sukkersammensetning av umodifisert CP. MCP ser ut til å være ikke-toksisk, in vitro og in vivo.
Modifisert pektin anvendt i foreliggende oppfinnelse blir dannet ved delvis depolymerise-ring av citruspektin, fortrinnsvis ved pH-modifikasjon.
Som kjent for fagfolk innenfor dette området har umodifisert pektin et molekyl-vektsom-råde på mellom omtrent 20.000 - 400.000. Det er en polysaccharidforbindelse tilstede i celleveggene til alle plantevev som virker som et intercellulært sementeringsmateriale. En av de rikeste kildene på pektin er sitron eller appelsinskall som inneholder omtrent 30 % av dette polysaccharidet. Det oppstår naturlig som delmetylesteren til a-0_4)-kob-lede D-polygalacturonat-sekvenser avbrutt av (l_2)-L-rhamnose-residuer. Naturlige sukkere, D-galactose, L-arabinose, D-xylose og L-fucose danner sidekjeder på pektin-molekylet. Strukturstudier ble utført av D. A. Rees, A.W. Wight, J. Chem. Soc. B, 1971, 1366. Sekundær og tertiær struktur i oppløsning og i geler er beskrevet i D.A. Rees, E.J. Welsh, Angew. Chem. Int. Ed. 16, 214 (1977). En oversikt og bibliografi er utført av Towle, Christensen, i Industrial Gums, R.L. Whistler, Ed. (Academic Press, New York, 2. utgave, 1973) side 429-461. En betydningsfull bok når det gjelder pektiner er av Z.I. Kertesz, The Pectic Substances (Interscience, New York, 1951).
Pektin fremstår som et grovt eller fint pulver, gul-hvit farget, omtrent luktfri, og med en gummiaktig smak. Det er nesten fullstendig opløselig i 20 deler vann, danner en viskøs oppløsning inneholdende negativt ladede, meget hydrerte partikler. Det er surt for litmus og uoppløselig i alkohol eller i fortynnet alkohol, og i andre organiske oppløsningsmidler.
Det blir lettere oppløst i vann dersom det først blir fuktet med alkohol, glycerol eller sukkersirup, eller om det først blir blandet med 3 eller flere deler sukrose. Det er stabilt under svakt sure tilstander, mens mere sterkt sure eller basiske tilstander forårsaker depolymerisasjon.
Et foretrukket pektin som kan anvendes som et utgangsmateriale for fremstilling av pH-modifisert citruspektin for anvendelse i foreliggende oppfinnelse kan bli oppnådd fra Sigma Chemical Co. of St. Louis, Missouri. Dette materiale har en molekylvekt på 70-100 kd, utgjør omtrent 85 vekt-% galacturoniske og 9.5 vekt-% metoksylgrupper og inneholder midnre enn omtrent 10 vekt-% fuktighet. Det er tilgjengelig som et pulver. Citruspektin er også tilgjengelig fra ICN Biomedicals som Pectin 102587 RT.
En 0,5 % og mere foretrukket, en 1.0 vekt/volum vandig oppløsning (alle oppløsnings-konsentrasjoner heri er uttrykt som vekt/volum hvis ikke annet er angitt) av citruspektin blir fremstilt og sterilisert under UV-bestråling i omtrent 48 timer. For å delvis depoly-merisere pektin blir pektinoppløsningen modifisert ved økning av pH til 10.0 med NaOH (3 N) i 30 minutter og deretter reduseres pH til 3.0 med HC1 (3N) ifølge fremgangsmåten beskrevet av Alberscheim et al., i artikkelen "A Method for Analysis of Sugars in Plant Cell Wall Polysaccharides by Gas Liquid Chromatography", Carbohydrate Research, 5:340-346, 1967, og hele beskrivelsen er inkorporert heri som referanse. Etter omtrent 10-24 timer blir pH til oppløsningen ekvilibrert til omtrent 6.3. Oppløsningen blir deretter vasket med etanol (70 %) og tørket med aceton (100%). Dette resulterer i vesentlig demetoksylerte pektinfragmenter som har en gjennomsnittlig molekylmasse på omtrent 10 kd bestemt ved viskositetsmålinger ved 25°C i et Ubbelohde No. 1-visko-meter med natrium-heksametallfosfat ved 20 mM (pH 4.5), 0,2 % EDTA og (0,9 %) NaCl ifølge fremgangsmåten til Christensen i artikkelen "Methods of Grading Pectin in Relation to the Molecular Weight (intrinsic viscosity of pectin)", Food Research 19:163-165 (1954), idet hele beskrivelsen er inkorporert heri som referanse. Anvendt heri skal betegnelsene "modifisert pektin" og "MCP" referere til depolymerisert pektin. Det er mere foretrukket at modifisert pektin anvendt i foreliggende oppfinnelse har en molekylvekt på fra omtrent 1-15 kd og mest foretrukket er omtrent 10 kd, og blir fortrinnsvis fremstilt i henhold til protokollen angitt ovenfor, og er fortrinnsvis vannoppløse-lig. Tørkede MCP-fragmenter kan deretter bli rehydrert med Ca<2+> og Mg<2+->fri fosfat-bufret saltvann (pH 7.2) (CMF-PBS) til en endelig stamoppløsning på 0,5 (vekt/volum).
Som angitt i foreliggende oppfinnelse blir MCP administrert oralt, og foreliggende oppfinnelse tilveiebringer anvendelse av en sammensetning som inneholder MCP og en for-døyelig farmasøytisk bærer. Egnede fordøyelige farmasøytiske bærere innbefatter gela-tinkapsler, hvor MCP er innkapslet i tørr form, eller tabletter hvor MCP er blandet sammen med hydroksypropyl-cellulose, hydroksypropyl-metylcellulose, magnesium-stearat, mikrokrystallinsk cellulose, propylenglykol, sinkstearat og titandioksyd og lignende. Sammensetningen kan bli formulert som en væske ved anvendelse av renset vann, smaks-midler og sukrose som en fordøyelig bærer for å danne en sammensetning som smaker godt når den blir konsumert av individet.
Nøyaktig dose og doseringsregime er en funksjon av variabler såsom individets alder, vekt, medisinsk historie og lignende. Foretrukket dose og doseringsregime basert på vekten av MCP-komponenter (dvs. uten hensyn til den fordøyelige bærer) som er effektiv for behandling av canser er en daglig dose på omtrent 10 til omtrent 1000 mg/kg kroppsvekt til individet. MCP blir administrert oralt ved like intervaller, dvs. fra omtrent 10 til omtrent 1000 mg/kg hver 24. time og/eller 2,5 til 250 mg/kg hver 6. time. Denne samme dosering og doseringsregimet er foretrukket for anvendelse ved behandling av prostatacanser i pattedyr, inkludert human prostata-canser, for å redusere eller inhibere metastaser. Det antas at denne dosen og doseringsregimet vil være effektiv for forhind-ring av canser i pattedyrindivider med en høy risiko når administrert som en oral profy-laktisk sammensetning.
Eksempler
De forskjellige aspekter av foreliggende oppfinnelse er videre beskrevet i følgende eksempler.
Dunning (R3327)-rotteprostata-adenocarcinom-modellen til prostata-cancer ble utviklet av Dunning fra et spontant forekommende adenocarcinom tilstede i en hanrotte som beskrevet av W.F. Dunning, Nati Cancer Inst Mono 12, 351 (1963). Flere underlinjer er blitt utviklet fra den primære tumoren som har varierende differensierings- og metastase-egenskaper som beskrevet av J.T. Isaacs, W.D.W. Heston, R.M. Weissman, D.S. Coffey, Canser Res 38, 4353 (1978). MAT-LyLu (MLL)-sublinjen er en hurtigvoksende, dårlig differensiert adenocarcinom-cellelinje som ved injeksjon med 1x10^ MLL-celler inn i låret til rotten, fører til at dyret dør i løpet av omtrent 25 dager sekundært til omfattende primær tumorbelastning som beskrevet av J.T. Isaacs, W.B. Isaacs, W.F.J. Feitz, J. Scheres, The Prostate 9, 261 (1986); og K.J. Pienta, B.C. Murphy, W.B. Isaacs, J.T. Isaacs, D.S. Coffey, The Prostate 20, 233 (1992). Primær-MLL-tumor begynner å metastasere omtrent 12 dager etter tumorcelle-inokulasjon og fjerning av primærtumoren ved benamputasjon før dette resulterer i leging av dyret. Dersom amputasjonen blir ut-ført etter dag 12, dør de fleste dyrene av lunge- og lymfeknute-metastase i løpet av 40 dager, som beskrevet av K.J. Pienta, B.C. Murphy, W.B. Isaacs, J.T. Isaacs, D.S. Coffey, The Prostate 20, 233 (1992).
I foreliggende oppfinnelse påvirker oppløselig MPC, gitt oralt i drikkevannet på et kronisk grunnlag, evnen som MLL-tumoren har til å etablere spontane metastaser.
For mer fullstendig å illustrere foreliggende oppfinnelse og med referanse til fig. IA i tegningene, ble rotter injisert med 1x10^ MLL-celler i bakbenet på dag 0. På dag 4, når primærtumorene var omtrent 1 cm<3> i størrelse, ble 0.01 %, 0,1 % eller 1.0 % (vekt/- volum) MCP tilsatt til drikkevannet til rottene (N = 8 per gruppe, eksperimenter utført to ganger) på et kontinuerlig grunnlag. På dag 14 ble rottene bedøvet og primære tumorer ble fjernet ved amputering av bakbenet. Tilsetning av MCP til drikkevannet påvirket ikke den primære tumorveksten ved noen konsentrasjon (gjennomsnittlig tumorvekt: kontroll, 4.2±0.26 g; 0,01 %, 4.7±0.7 g; 0.1 %, 4.3±0.37 g; 1.0%, 5.0±0.25 g. Rottene ble deretter fulgt til dag 30 når alle gruppene ble ofret og obdusert. Dyrene fortsat-te å innta MCP i drikkevannet i løpet av denne perioden. Kontroll og behandlede dyr økte vekten tilfredsstillende og det var ingen observerbar toksisitet i MCP-behandlede dyr. Lungene ble fjernet, skylt i vann og fiksert over natten i Bouin's oppløsning. Antall rotter som led av lungemetastaser ble betydelig redusert sammenlignet med kontrollen (15/16 rotter med metastaser) i 0.1 % (P<0.03) MCP (7/14 rotter med metastaser)
(p<0.001) grupper (fig. IA) rotter konsumerte 30+ 4 ml vann pr. dag i alle gruppene. Antallet MLL-tumorkolonier ble bestemt ved å telle disse under et disseksjonsmikro-skop. Lungene til 1.0 % MCP-behandlede dyr hadde i gjennomsnitt betydelig færre metastatiske kolonier enn kontrollgruppene (9+4 i kontroll sammenlignet med 1+1 i behandlet gruppe (p<0.05) (fig. IB) (Mann-Whitney-test). Effekten av MCP så ut til å være avhengig av konsentrasjonen i drikkevannet. Fig. 1C og ID angir også lunger fra
tumorbærende dyr (C-kontroll, D-1.0 % MCP) og viser effekten av MCP på reduksjon i antall utviklede overflate MLL lungekolonier. 1 % MCPreduserte også betydelig antall dyr med positiv lymfeknutesykdom (55 % i kontroll, 13 % i MCP-behandlet, p<0.01). Behandlede dyr led ingen tilsynelatende toksisitet fra MCP-behandlingen. Dyrene økte vekten ved samme rate som kontrollene. Daglig vanninntak var 30±4 ml pr. rotte i kontrollene og behandlede grupper. Pelskonsistens, total adferd og avføringsfargen var ufor-andret.
På grunn av at det tidligere er blitt demonstrert at MCP kan interferere med celle-celle-interaksjoner formidlet av celleoverflate-karbohydrat-bindende galectin-3-molekyler ble spørsmålet om MLL-celler uttrykker galectin-3 undersøkt. MLL-cellene, som mange
andre cancerceller, uttrykker galectin-3 på deres celleoverflate og dette blir bestemt ved kvantitativ fluorescens flow-cytometrisk analyse som vist i fig. 2, og ved immunblotting av total celle ekstrahert med mono-spesifike kanin anti-galectin-3-peptid-antistoffer som vist i fig. 2 (blot inset).
Tumor-endothel-adhesjon antas å være en nøkkelhendelse i den metastatiske prosessen og derfor ble effekten av MCP på MLL-endothel-celle-interaksjonen undersøkt. Adhesjon av Cr-merkede MLL-celler til konfluente monolag av rotte-aorta-endothelceller (RAEC) i nærvær eller fråvær av MCP er demonstrert i fig. 3 A. MCP ble funnet å være en potent inhibitor av MLL-celleadhesjon til endothel-cellene i fig. 3A og 3B.
MLL- og RAEC-cellene ble dyrket i RPMI 1640-medium supplert med 10 % føtalt bovinserum. RAEC ble dyrket til konfluens i vevskulturbrønner. 2.4 x 10^ MLL-celler ble inkubert i 30 min. med 5 uCi Na5^Cr04 ved 37°C i 2 ml semmfritt medium med 0,5 % bovint serumalbumin. Etter omfattende vasking ble 10^ MLL-celler pr. brønn tilsatt til RAEC-monolag i kvadruplikat. Sin det fremgår av fig. 3 A ble kopling av MLL-cellene i fravær eller nærvær av forskjellige konsentrasjoner av MCP i 90 min. ved 4°C vurders. Cellene ble vasket tre ganger i kald fosfat-bufret saltvann for å fjerne ubundne celler. Cellene ble deretter løst med 0.1 NaOH i 30 min. ved 37°C og radioaktiviteten ble bestemt i en B-teller. Hvert punkt representerer gjennomsnittet av fire brønner og eksperi-mentene ble utført i duplikat. Kolonnene representerer standard feil. Som det fremgår av fig. 3B ble tidsforløpet for kobling av MLL-cellene til et konfluent monolag av RAEC i fravær (—) eller nærvær av 0.03 % (vekt/volum) MCP bestemt. Tilstedeværelse av 0.03 % MCP inhiberte koblingen av MLL-celler til RAEC. Fluorescens MLL-celleadhesjonen til RAEC 10<5> MLL-cellene ble inkubert i 30 min. i 0.1 % FITC, etter omfattende vasking ble cellene tilsatt til RAEC-monolag. Binding av MLL-cellene i fravær (fig. 3C) eller tilstedeværelse (fig. 3D) av 0.1 % (2/v) MCP (vist ved x 160). Det fremgår at MLL-cellene adhererte hurtig til RAEC-monolaget mens bare en begrenset grad av cellekobling ble observert i nærvær av MCP. Billedlig fremstilling av effekten av MCP på adhesjonsprosessen er vist i fig. 3C og fig. 3D. MLL-cellene ble fluorescens-merket i suspensjon med FITC, eksponert for confluente monolag av rotte-endothelceller i 0.5 %% bovin-serumalbumin uten (fig. 3C) eller med 0.1 % (fig. 3D) i 60 min. Kulturene ble vasket for å fjerne ikke-adherente celler og deretter fotografert. I ikke-behandlede kulturer adhererer fluorescens MLL-cellene nesten jevnt bundet til endothel-monolag (fig. 3C), mens ved tilstedeværelsen av 0.1 % MCP kan nesten ingen fluorescens-celler bli detektert i assosiasjon med RAEC-monolag i mikroskopfeltet (fig. 3D).
Evnen som celler har til å bli dyrket i semi-fast medium, dvs. forankrings-uavhengighet, kan anvendes som et kriterium for celletransformasjon og inhibering av en slik fremgangsmåte ved medikamenter eller antistoffer som blir anvendt for å etablere deres ef-fektivitet. Vekst av cellene i et semi-fast medium krever at de migrerer, invaderer og etablerer nye tumor-foki i en fremgangsmåte som ser ut til å etterligne mange av trinne-ne ved in vivo metastaser. Det er tidligere blitt foreslått at evnen som tumorceller har til å reagere med karbohydrat-residuene til glykoproteiner via celleoverflate-galectin-3 er relatert til deres evne til å reagere med galactose-residuet til agarose (en polymer av D-galactose og L-anhydro-galactose) og å tilveiebringe den minimale støtte som er nødven-dig for celle-proliferasjon i dette halv-faste mediet. Frem til nå er det blitt demonstrert at anti-galectin-3 -monoklonale antistoffer kan inhibere veksten til tumorcellene i agarose. Transfeksjon av normale must-fibroblaster med muse-galectin-3-cDNA resulterer i ervervelse av forankrings-uavhengig vekst.
For å bestemme veksten av MCP på MLL-kolonidannelse ble 0.5 % agarose, MLL-celler frakoblet dyrkede monolag med 0.02 % EDTA i kalsium- og magnesium-fri (CMF)~ PBS og suspendert ved 4 x 10^ celler/ml i fullstendig RPMI med eller uten MCP i varierende konsentrasjoner. Cellene ble inkubert i 30 min. ved 37°C og deretter blandet 1:1 (vol/vol) med en oppløsning av 1 % agarose i RPMI 1:4 (vol/vol) forvarmet ved 45°C.
2 ml alikvoter av blandingen ble plassert på toppen av et på forhånd støpt lag av 1 % agarose i 6 cm-diameter skåler. Cellene ble inkubert i 8 dager ved 37°C, deretter fiksert, opptelt og fotografert. Fig. 4A illustrerer antallet av dannede kolonier og ble bestemt av en blindet observatør ved anvendelse av et invertert fasemikroskop. Tilstedeværelse av 0.1 % MCP inhiberte betydelig antall MLL-kolonier tilstede i forhold til kontrollen (p<0.01 ved Mann-Whitney). Kolonnene representerer gjennomsnittet og S E. av tripli-kat-eksperimenter. Fase-kontrast-fotomikrografier av MLL-celler dyrket uten (fig. 4B) eller med (fig. 4C) 0.1 % (vekt/volum) MCP x 160. Som vist i fig. 4A inhiberer MCP MLL-cellekolonidannelsen i agarose på en doseavhengig måte. MCP inhiberte både antall MLL-kolonier og deres størrelse (fig. 4B og 4C). Den inhibitoriske effekt av MCP ser ut til å være cytostatisk istedet for cytotoksisk siden den ikke har noen effekt på raten av MLL-cellevekst i dyrkede monolag in vitro (data ikke vist). MCP har lignende virkninger på evnen som andre tumorceller har til å danne kolonier i bløt agar, inkludert B16-F melanom, UY-2237 fibrosarcom, HT-1080 human fibrosarcom og A375 human melanom. Det er ikke kjent om MCP blokkerer bindingen av MLL-cellene til galactose-residuene av agar, eller konkurerer med bindingen av en karbohydrat-inneholdende vekstfaktor med celleoverflate-galectin-3. Det er ikke kjent om MCP-inhiberingen av tumorcelle-lungekolonidannelsen in vivo blir etterlignet ved inhibering av kolonidannelsen in vitro, til tross for at en slik korrelasjon ser ut til å eksistere (fig. 1 og fig. 4).
Resultatene presentert her tilveiebringer en ny, ikke-toksisk, oral anvendelse for å forhindre spontane prostata cancer-metastaser. I preliminære eksperimenter er det oppdaget at galectin-3 er tilstede i humane prostata cancer-patologiske vevsprøver samt som humane prostata adenocarcinom-cellellinje PC-3. For immunhistokjemien ble 5 um for-malinfikserte paraffin-innbefattede primære prostatiske adenocarcinomsnitt deparaffini-sert, rehydrert og mikrobølgebehandlet (medium - høy) i 10 min. i en 1 mM natrium-citrat-buffer. Etter vasking i PBS ble snittene blokkert i normalt geiteserum i 30 min. og deretter inkubert med primær antistoff rotte-anti-galectin-3-TIB-166-monoklonalt antistoff. Snitt ble deretter vasket i DPBS i 30 min. og deretter inkubert med biotinylert anti-rotte IgG, vasket og inkubert med avidin-biotinylert pepperrot-peroksidase etterfulgt av et peroksidasesubstrat 3'-3'-diaminobenzidin. Snittene ble motfarget med 3 % metyl-grønn og applisert med gelatin-glycerin. Snittet demonstrert i fig. 5 er fra en pasient med invasiv prostatacanser. PC-3-celleekstraktet ble immunblottet og analysert for tilstedeværelse av human galectin-3 som beskrevet i teksten til fig. 2. Ekspresjon av galectin-3 i prøver fra human prostata ble undersøkt ved immun-histokjemi med TIB-166 anti-galectin-3-monokolan -antistoffer. Galectin-3 ble hovedsakelig uttrykt i prostata-carcinom-celler med liten stromafarging og variabel normal epithel-farging (fig. 5). Galectin-3-farging med dette antistoffet var assosiert med intens nukleær, cytoplastisk og celleoverflate-farging. Ytterligere undersøkelser vil avgjøre rollen til galectin-3 i normalt og can-serholdig prostatavev samt evnen som MCP har til å inhibere human prostatametastase i nakne mus. MCP-molekyler ser ut til å bli absorbert i blodstrømmen etter oral administrering og konkurerer med naturlig ligand-gjenkjenning av tumorcelleoverflate-galectiner vesentlige for vellykket etablering av sekundære tumorcellekolonier. Ytterligere arbeid er på vei for å karakterisere de aktive delene av MCP samt deres serumnivåer på grunn av at lite er kjent når det gjelder de molekylære trekkene til pektiner. Det ser ut som om effekten av MCP er i tidlige stadier av metastase, som muligens inhiberer dannelsen av tumorcelle-emboli samt inhiberer interaksjonen av canserceller med endothelet til målorganet, istedenfor senere hendelser såsom metastatisk cellevekst på grunn av at MCP ikke har noen effekt på MLL-primær tumorvekst eller angiogenese.
På grunn av at naturlig citruspektin (CP) og pH-modifisert sitruspektin (MCP) er sterkt forgrenede og ikke-forgrenede kompleks-polysakkarider, rike på galactosid-residuer, med evne til å bli bundet til den karbohydrat-bindende domentil galectin-3, er det heri studert effekten av CP og MCP på celle-celle og celle-matriks-interaksj onene formidlet ved karbohydrat-gjenkjenning. MCP, men ikke CP, inhiberer Bl6-F1 melanomcelle-adhesjon til laminin og asialofetuin-indusert homotypisk aggregasjon. Både MCP og CP inhiberer forankrings-uavhengig vekst av Bl6-F1-cellene i semifast medium, dvs. agarose. Disse resultater indikerer at karbohydrat-gjenkjenning ved celleoverflate-galectin-3 kan være involvert i celle-ekstracellulær matriks-interaksjon og spille en rolle i forankrings-avhengig vekst samt som in vivo embolisering av tumorceller.
Endogene vertebrat-galactosid-bindende lectiner er blitt identifisert og karakterisert i forskjellige vev og celler. Lectiner er delt inn i to omfattende klasser basert på deres størrelser, molekylmasser som er på -14 kDa som er nylig blitt betegnet som galectin-1 og galectin-3. Galectin-3 representerer et vidt område av molekyler, dvs., murine 34 kDa (mL-34) og humane 31 kDa (hL-31) tumor-assosierte galactosid-bindende lectiner, 35 kDa fibroblast-karbohydrat-bindende protein (CBP35), IgE-bindende protein (eBP), 32 kDa makrofag ikke-integrin-laminin-bindende protein, (Mac-2), og rotte, mus og humane former av 29 kDa galactosid-bindende lectin (L-29). Molekulære kloningsstudier har vist at polypeptidene er identiske. Galectin-3 inneholder to strukturelle domener, en amino-terminal domene inneholdende en collagen-lignende sekvens og globulær karbok-sy-terminal domene som omfatter galactosid-bindende sete. Dersom alle overnevnte galactocid-bindende lectiner deler de samme naturlige ligandene er ennå ikke kjent. Til tross for at galectin-3 er blitt betraktet å være et S-type lectin som krever reduserende betingelser for dets karbohydrat-bindende aktivitet, har senere studier produsert bevis som angir det motsatte. Flere analyselinjer har demonstrert at galectiner deltar i celle-celle og celle-matrise-interaksjoner ved gjenkjenning og binding av komplementære gly-kokonjugater og spiller derved en avgjørende rolle i forskjellige normale og patologiske prosesser.
Galectin-3 blir i stor grad uttrykt av aktiverte makrofager og oncogeniske transformerte og metastatiske celler. Forhøyet ekspresjon av polypeptidet er assosiert med en økt ka-pasitet for forankrings-uavhengig vekst, homotypisk aggregasjon og tumorcelle-lungekolonisering, som tyder på at galectin-3 fremmer tumorcelle-embolisering i sirkulasjon og forsterker metastaser. Vi har nylig rapportert at intravenøs injeksjon av CP øker lungekolonisering ab B16-F1 murine melamonceller, mens MCP reduserer lungekoloniseringen. Til tross for at den økte lungekoloniseringen til CP sannsynligvis er forårsaket av dets evne til å fremme homotypisk aggregasjon, forblir mekanismen hvorved MCP forhindrer lungekolonisering mindre bestemt.
Laminin, hoved-ikke-collagen-komponenten i grunnmembranene, er et N-koblet glykoprotein inneholdende poly-N-acetyllaktosamin-sekvenser, og er implisert i celle-adhesjon, migrering, vekst, differensiering, invasjon og metastaser. Galectiner som blir bundet med høy affinitet til oligosaccharider inneholdende poly-N-acetyllaktosamin-sekvenser blir også bundet til karbohydrat-sidekjedene til laminin på en spesifikk sukker-avhengig måte.
For ytterligere å studere de funksjonelle egenskapene til galectin-3 er det anvendt heri CP og MCP, og undersøkt om de påvirker galectin-3-relaterte egenskaper til B16-F1 murine melanomceller. Vi har oppdaget at (a) MCP, men ikke CP, inhiberer celleadhesjon til laminin; (b) MPC inhiberer asialofetuin-indusert homotypisk aggregasjon, mens CP forsterker denne; og (c) både CP og MCP inhiberer forankringsuavhengig vekst i semifast medium.
CP og EHS-laminin ble oppnådd fra Sigma, St. Louis, Missouri. MCP ble dannet fra CP ved pH-modifikasjon ifølge ovennevnte prosedyre til Albersheim et al. Asialofetuin ble dannet ved svak syrehydrolyse av fetuin (Spiro method; Grand Island Biological Co., Grand Island, New York) i 0.05 M J^Stø ved 80°C i 1 time. Rekombinant galectin-3 ble ekstrahert fra bakterielle celler ved enkel-trinn rensing gjennom en asialofetuin-affinitetskolonne som beskrevet andre steder. Rekombinant galectin-3 eluert av laktose ble omfattende dialysert mot CMF-PBS før bruk. Anti-galectin-3 -monoklonalt antistoff ble oppnådd fra Dr. R. Lotan, University of Texas, M.D.Anderson. Pepperrot-peroksidase (HRP)-konjugert kanin anti-rotte (IgG + IgM og 2, 2'-azino-di(3-etyl-benztiazolin-sulfonsyre) (ABTS) substratsett ble oppnådd fra Zymed, South San Fran-sisco California. B16-F1 murine melanomceller ble dyrket i Dulbecco's modifiserte Eagles minimalt essentielt medium (DMEM) supplementert med 10 % varme-inaktivert fetalt bovinserum, ikke-essensielle aminosyrer, 2MM-glutamin og antibiotika. Cellene ble opprettholdt ved 37°C i en fuktatmosfære ved 7 % CO2 og 93 % luft.
Celleadhesjon til laminin — Vevskultur-brønner i 96-brønners plater ble forbelagt over natten ved 4°C med EHS laminin (2 ug/brønn) i CA<2+-> og Mg<2+->fritt fosfatbufret
saltvann, pH 7.2 (CMF-PBS), og de gjenværende proteinbindende setene ble blokkert i 2 timer ved romtemperatur med 1 % borinserum-albumin (BSA) i CMF-PBS. Cellene ble høstet med 0.02 % EDTA i CMF-PBS og suspendert med serum-fritt DMEM. 5 x 10^ celler ble tilsatt til hver brønn i DMEM med eller uten CP eller MCP i varierende konsentrasjoner. Etter inkubasjon i 2 timer ved 15-37°C, ble ikke-adherente celler vasket av med DMP-PBS. Adherente celler ble fiksert med metanol og fotografert. Det relative antallet adherente celler ble bestemt i henhold til prosedyren til Olier et al. Cellene ble farget med metylenblått etterfulgt av tilsetningav HCI-etanol for å frigjøre fargestoffet. Optisk tetthet (650 nm) ble målt av en plateavleser.
Asialofetuin-indusert homotypisk aggregasjon ~ Cellene ble frakoblet med 0.02 % EDTA I CMF-PBS og suspendert ved 1 x IO<6> celler/ml i CMF-PBS med eller uten 20 ug/ml adialfetuin og 0.5 % CP eller 0.5 % MCP. Alikvoter inneholdende 0.5 ml celle-suspensjon ble plassert i silikoniserte glassrør og agitert ved 80 rpm i 60 min. ved 37°C. Aggregasjonen ble deretter terminert ved fiksering av cellene med 1 % formaldehyd i CMF-PBS. Prøvene ble anvendt for opptelling av antall enkeltceller og resulterende aggregasjon ble beregnet ifølge følgende ligning: (1-Nt/Nc) x 100, hvor Nt og Nc representerer antall enkeltceller i nærvær av de testede forbindelser og de i kontrollbufferen
(CMF-PBS).
Galectin-3-bindingen til MCP — 96-brønners platene ble belagt med CMF-PBS inneholdende 0.5 % MCP og 1 % BSA og tørket over natten. Rekombinant galectin-3 i serie fortynnet i CMP-PBS inneholdende 0.5 % BSA og 0.05 % Tween-20 (oppløsning A) i nærvær eller fråvær av 50 mM laktose ble tilsatt og inkubert i 120 min., hvoretter brøn-nene ble drenert og vasket med CMD-PBS inneholdende 0.1 % BSA og 0.05 % Tween-20 (oppløsning B). Rotte anti-galectin-3 i oppløsning A ble tilsatt og inkubert i 60 min., etterfulgt av vasking med oppløsning B, og inkubasjon med HRP-konjugert kanin anti-totte lgG - lgM i oppløsning A i 30 min. Etter vasking ble de relative mengder av bundet enzym konjugert i hver brønn bekreftet ved tilsetning av ABTS. Grad av hydrolyse ble målt ved 405 nm.
Kolonidallelse i halvfast medium ~ Cellene ble frakoblet med 0.02 % EDTA i CMF-PBS og suspendert ved 1x10^ celler/ml i fullstendig DMEM med eller uten CP eller MCP ved varierende konsentrasjoner. Cellene ble inkubert i 30 min. ved 37°C og deretter blandet 1:1 (vol/vol) med en oppløsning av 1 % agarose i destillert vann-fullstendig DMEM (1:4, vol/vol) forvarmet ved 45°C. 2 ml alikviter av blandingen ble plassert på toppen av et forstøt lag av 1 % agarose i 6 cm diameters skåler. Cellene ble inkubert i 14 dager ved 37°C, og antall dannede kolonier ble bestemt ved anvendelse av et invertert fasemikroskop etter fiksering ved tilsetning av 2.6 % glutaraldehyd i CMF-PBS.
Det ble tidligere vist at laminin kan virke som en ligand for oppløselig galectin-3 og Bl6-Fl-celler uttrykker galectin-3-molekyler på deres celleoverflate. Disse resultatene sammen med virkningen av CP og MCP på lungekolonisering av i.v. injiserte B16-Fl-celler førte til undersøkelsen om deres virkninger på B16-Fl-celleadhesjonen til laminin for å vurdere den mulige rollen til celleoverflate galectin-3 i en slik prosess. Som vist i fig. 6 og 7A-C inhiberte MCP betydelig celleadhesjon til laminin på en dose-avhengig måte, mens CP ikke hadde noen tilsynelatende effekt på hverken cellebinding eller spredning på laminin. Den enkle sukkerinhibitoren av galectin-3-laktose inhiberte ikke celleadhesjon til laminin ved konsentrasjoner så høye som 100 mM (data ikke vist). Konkurrerende bindingsanalyse som anvender oppløselig rekombinant galectin-3 blokkerte ikke celleadhesjon til laminin og anti-Mat-2-monoklonal-antistoffene sviktet også i dette henseendet (data ikke vist). Dette tyder på at den inhibitoriske effekten til MCP ikke bare kan skyl-des avbrudd av interaksjonen mellom galectin-3 og N-acetyllactosaminyl-sidekjedene på laminin, på grunn av at cellene kan anvende integriner for binding til proteinkjernen til laminin. Anti-Mac-2-monoklonal-antistoff er ikke rettet mot den karbohydratbindende domene til galectin-3, men til dets N-terminale ende, og den nøyaktige mekanisme hvorved MCP blokkerer adhesjonen, i kontrast til CP og laktose, forblir følgelig fortsatt uklar. Den inhibitoriske effekten til MCP er ikke forårsaket av cytotoksisiteten på grunn av at MCP (0.5 %) hverken påvirket levedyktigheten eller in vitro-veksten til cellene.
En god korrelasjon har blitt etablert mellom muligheten som tumorcellene har til å gjen-nomgå homotypisk aggregasjon in vitro og deres metastatiske potensiale in vivo. B16
melanom-celleklumper produserer flere lungekolonier etter i.v. injeksjon enn det enkeltceller gjør. Anti-galectin-3-antistoff er blitt vist å inhibere asialofetuin-indusert homotypisk aggregasjon, og dette tyder på at celleoverlfate-galectin-3-polypeptider tilveiebringer dannelse av homotypiske aggregater etter deres interaksjon med sidekjedene til gly-koproteinene. Som vist i fig. 8 og 9A-C, reduserte MCP betydelig dannelsen av homotypiske aggregater, mens CP forsterket denne. Det er mest sannsynlig at ikke-forgrenet
MCP etterligner adferden til den spesifikke sukker-inhibitoren, dvs. laktose, slik at den
maskerer interaksjonen til celleoverlfate-galectin-3-molekylene med galactosid-residuene til asialofetuin, som resulterer i en redusert homotypisk aggregasjon. Det er sannsynlig å anta at den strukturelle karakteristikken til en forgrenet karbohydratpolymer muliggjør at CP virker som en kryss-bindende bro mellom ved siden av liggende celler, og dette fører til den forsterkede dannelsen av homotypiske aggregater. Sett under ett kan det tyde på at MCP kan forhindre metastaser ved å ødelegge celle-celle og celle-matrise-interaksjoner som er nødvendige for at tumorcellene danner metastatiske lesjoner.
Ovennevnte effekter til MCP når det gjelder å inhibere B16-F1-celleadhesjon til laminin og homotypisk aggregasjon kan være forårsaket av dens interaksjon med galectin-3 på celleoverflaten, på grunn av at CP tidligere er blitt vist å binde B16-F1-celleoverflaten på en laktose-avhengig måte. For å henlede bindingen av galectin-3 til MCP er det blitt anvendt en enzym-bundet immunosorbent analyse hvor det ble oppdaget at rekombinant galectin-3 bandt immobilisert MCP på en dose-avhengig måte, og bindingen var fullstendig blokkert av laktose (fig. 9). Disse resultater fører til at man kan henlede de inhibitoriske effekter av MCP på homotypisk aggregasjon til dets binding til celleoverlfate-galectin-3-molekyler. Derimot vet vi ikke hvordan MCP, men ikke CP, forstyrrer Bl6-F1-celleadhesjon til laminin. På grunn av at pH-modifikasjon av CP, som er en forgrenet kompleks polysacchaird-polymer, resulterer i dannelsen av ikke-forgrenede karbohydratkjeder til den samme sukkersammensetningen, er det sannsynlig at MCP bindes med mere aviditet til celleoverlfate-galectin-3-molekyler enn det CP gjør. Sett sammen med det faktum at anti-integrin-antistoffer inhiberer murin B16 melanomcelle-kobling til laminin-substrater, antas det at MCP sterisk inhiberer laminin-gjenkjenningen til integrin-klassen av laminin-reseptorer, eller at interaksjonen av celleoverflalte-galectin-3 med poly-N-acetyllaktosamin-sekvenser på laminin kan virke sammen med integriner for celleadhesjon til laminin. Muligheten av at interaksjon av MCP med galectin-1, som har samme sukkerspesifisitet som galectin-3, kan påvirke dets prosesser for å ødelegge Bl 6-Fl-celleadhesjon til laminin og homotypisk aggresjon kan sannsynligvis utelukkes på grunn av at galectin-1 er et utskilt protein.
Evnen som celler har til å vokse i semi-fast medium, dvs. "forankrings-uavhengighet", blir anvendt som et kriterie for celletransformasjon på grunn av at denne egenskapen vanligvis bare innehas av transformerte og tumorigene celler. Tidligere er det blitt foreslått at evnen som tumorcellene har til å reagere med glykoprotein-karbohydrat-residuer via celleoverflate-galectin-3 er relatert til deres evne til å reagere med galactose-residuene til agarose (en polymer av D-galactose og L-anhydrogalactose) og til effekten av kolonidannelse i dette halvfaste medium. Det er også blitt vist at antigalectin-3-monoklonale antistoffer inhiberer veksten av tumorcellene i agarose og at det er et invers forhold mellom ekspresjon av galectin-3 og suppresjon av den transformerte fenotypen. Transfeksjon av normal musefibroblast med muse-galectin-3 cDNA resulterer i evnen til forankrings-uavhengig vekstegenskaper. For ytterligere å verifisere muligheten av at celleoverflate-galectin-3 spiller en nøkkelrolle for celler til å vokse i semifast medium, er det heri undersøkt effektene av CP og MCP på forankrings-uavhengig vekst av B16-F1 melanomceller. Som vist i fig. 11 inhiberer CP og MCP veksten av B16-F1 cellekolonier i den semifaste matrise på en dose-avhengig måte. Laktose-inhibert forankrings-uavhengig vekst på en dose-avhengig måte er også utført (data ikke vist). Dose-avhengig inhibitorisk effekt av CP og MCP var ikke begrenset til B16-F1 melanom-celler. Veksten i bløt-agar til UV-2237-103 murin fibrosarcomceller, HT1080 humane fibrosarcomceller og A375C1.49 humane melanomceller ble også likeledes inhibert. Det er mulig at opløselig CP og MCP fullstendig med galactose-residuene til agarose for galectin-3-binding fører til tilsynelatende vekstinhibering ved å frata cellene minimal støtte til matrisen som er nødvendig for celle-proliferasjon. Det kan også argumenteres med at CP og MCP samt anti-galactin-antistoffer muligens oppfører seg som en antagonist til en inntil nå ikke-anerkjent glukokonjugat-vekstfaktor som reagerer med galectin-3 eller som sterisk hindrer avgangen til kjente vekstfaktorer til membran-reseptorene. Det faktum at in vitro forankrings-avhengig vekst og tumorigenisitet av Bl6-F1-cellene i turgeniske mus ikke ble ødelagt av MCP (0.5 %) gjør det mulig å utelukke ovennevnte muligheter. På grunn av at evnen som cellene har til å vokse i semifast medium blir anvendt som et kriterium for celletransformajson kan ervervelse av celleoverflate-galectin-3 være et tidlig trinn i den post-transformerte kaskaden.
Claims (5)
1.
Anvendelse av modifisert pektin for fremstilling av et medikament til behandling eller forebygging av cancer ved oral administrering til et pattedyr, hvor nevnte modifiserte pektin er pH-modifisert sitruspektin, vannoppløselig og har en tilsynelatende gjennomsnittlig molekylvekt på omtrent 1 til omtrent 15 Kd.
2.
Anvendelse ifølge krav 1, ved at nevnte cancer er prostata-cancer eller human prostata-cancer.
3.
Anvendelse ifølge krav 1, hvori nevnte cancer omfatter renal cellecancer, Kaposi's sarkom, kronisk leukemi, brystcancer, sarkom, ovariekarcinom, rektal cancer, cancer i svel-get, melanoma, coloncancer, blærecancer, mastocytom, lungecancer, brystadenokarci-nom, faryngeal platecellekarcinom, mage-tarmcancer, magecancer eller prostatacancer.
4.
Anvendelse ifølge krav 1, hvori nevnte modifiserte pektin er tilstede i en blanding med en farmasøytisk akseptabel fordøyelig bærer.
5.
Anvendelse ifølge krav 1, der pektinet består av en vesentlig demetoksylert polygalaktu-ronsyre.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/271,821 US5834442A (en) | 1994-07-07 | 1994-07-07 | Method for inhibiting cancer metastasis by oral administration of soluble modified citrus pectin |
| PCT/US1995/007547 WO1996001640A1 (en) | 1994-07-07 | 1995-06-14 | Method for inhibiting cancer metastasis by oral administration of soluble modified citrus pectin |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO970039D0 NO970039D0 (no) | 1997-01-06 |
| NO970039L NO970039L (no) | 1997-02-17 |
| NO311493B1 true NO311493B1 (no) | 2001-12-03 |
Family
ID=23037234
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19970039A NO311493B1 (no) | 1994-07-07 | 1997-01-06 | Anvendelse av modifisert pektin for fremstilling av et medikament til behandling eller forebygging av cancer |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5834442A (no) |
| EP (1) | EP0768885B1 (no) |
| JP (1) | JP2008111002A (no) |
| CN (1) | CN1157567A (no) |
| AT (1) | ATE276753T1 (no) |
| AU (1) | AU695677B2 (no) |
| BR (1) | BR9508245A (no) |
| CA (1) | CA2194586A1 (no) |
| DE (1) | DE69533550T2 (no) |
| DK (1) | DK0768885T3 (no) |
| ES (1) | ES2227555T3 (no) |
| FI (1) | FI965269A (no) |
| MX (1) | MX9700118A (no) |
| NO (1) | NO311493B1 (no) |
| PT (1) | PT768885E (no) |
| WO (1) | WO1996001640A1 (no) |
Families Citing this family (44)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020107222A1 (en) * | 1993-03-01 | 2002-08-08 | David Platt | Modified polysaccharides for treatment of cancer |
| ES2222509T3 (es) * | 1996-03-21 | 2005-02-01 | David Platt | Material de pectina modificado. |
| US6258383B1 (en) * | 1998-08-14 | 2001-07-10 | Lactoferrin Products Company | Dietary supplement combining colostrum and lactoferrin in a mucosal delivery format |
| US6500807B1 (en) * | 1999-02-02 | 2002-12-31 | Safescience, Inc. | Modified pectin and nucleic acid composition |
| KR100401456B1 (ko) * | 1999-12-24 | 2003-10-11 | (주) 한국신과학 기술센타 | 수컷의 생식 독성 억제에 유효한 펙틴을 포함한 약학 조성물 |
| EP1261354A4 (en) * | 2000-02-01 | 2004-09-15 | Safescience Inc | ADMINISTRATION METHOD AND SYSTEM FOR GENE THERAPY |
| DE10057976B4 (de) * | 2000-11-22 | 2005-02-03 | Südzucker AG Mannheim/Ochsenfurt | Verfahren zur Herstellung von Pektinhydrolyseprodukten |
| ES2376739T3 (es) * | 2001-03-27 | 2012-03-16 | Galectin Therapeutics Inc. | Administración conjunta de un polisacárido con un agente quimioterapéutico para el tratamiento del cáncer |
| US6982255B2 (en) * | 2001-03-27 | 2006-01-03 | Anatole Klyosov | Delivery of a therapeutic agent in a formulation for reduced toxicity |
| US6914055B2 (en) * | 2001-03-27 | 2005-07-05 | Anatole Klyosov | Delivery of a therapeutic agent in a formulation for reduced toxicity |
| US6645946B1 (en) * | 2001-03-27 | 2003-11-11 | Pro-Pharmaceuticals, Inc. | Delivery of a therapeutic agent in a formulation for reduced toxicity |
| US6770622B2 (en) | 2001-06-08 | 2004-08-03 | Gary A. Jarvis | N-terminally truncated galectin-3 for use in treating cancer |
| US6680306B2 (en) * | 2001-06-21 | 2004-01-20 | Glycogenesys, Inc. | Method for enhancing the effectiveness of cancer therapies |
| US20030004132A1 (en) * | 2001-06-22 | 2003-01-02 | Yan Chang | Method and material for treating immune diseases |
| AU2002362613A1 (en) * | 2001-09-28 | 2003-04-07 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Galectins-1-and-4 in tumor development |
| US6890906B2 (en) * | 2001-11-21 | 2005-05-10 | Glycogenesys, Inc. | Method for controlling angiogenesis in animals |
| US20040121981A1 (en) * | 2001-11-21 | 2004-06-24 | Glycogenesys, Inc. | Method for controlling angiogenesis in animals |
| JP2006515647A (ja) * | 2003-01-16 | 2006-06-01 | プロ−ファーマシューティカルズ，インク． | 癌の治療効果増進のための抗癌剤と修飾多糖体の併用 |
| US20050026849A1 (en) * | 2003-03-28 | 2005-02-03 | Singh Chandra U. | Water soluble formulations of digitalis glycosides for treating cell-proliferative and other diseases |
| US20040223971A1 (en) * | 2003-04-07 | 2004-11-11 | Glycogenesys, Inc. | Composition and uses of galectin antagonists |
| AU2004229399B2 (en) * | 2003-04-07 | 2010-08-05 | Prospect Therapeutics, Inc. | Composition and uses of galectin antagonists |
| WO2005007110A2 (en) * | 2003-07-11 | 2005-01-27 | Pro-Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for hydrophobic drug delivery |
| US20050053664A1 (en) * | 2003-09-08 | 2005-03-10 | Eliezer Zomer | Co-administration of a polysaccharide with a chemotherapeutic agent for the treatment of cancer |
| US20050282773A1 (en) * | 2004-01-14 | 2005-12-22 | Pro-Pharmaceuticals, Inc. | Modified polysaccharides in combination with anti-cancer drugs for enhanced treatment of cancer |
| WO2005079314A2 (en) * | 2004-02-13 | 2005-09-01 | Pro-Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods used to treat acne and candida |
| EP1765874A1 (en) | 2004-03-26 | 2007-03-28 | Glycogenesys, Inc. | Modified pectins, compositions and methods related thereto |
| JP2008503583A (ja) * | 2004-06-22 | 2008-02-07 | プロ−ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド | 抗がん薬、抗血管形成薬、及び多糖類を共デリバリーするための組成物及び方法 |
| US20060074050A1 (en) * | 2004-07-14 | 2006-04-06 | Glycogenesys, Inc. | Composition and method for treating hyperproliferative diseases |
| WO2006017417A2 (en) * | 2004-08-02 | 2006-02-16 | Pro-Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for the enhancement of chemotherapy with microbial cytotoxins |
| US8916541B2 (en) | 2011-01-05 | 2014-12-23 | Better Health Publishing, Inc. | Synergistic combination of honokiol and modified citrus pectin in cancer therapy |
| US9427449B2 (en) * | 2005-08-26 | 2016-08-30 | Econugenics, Inc. | Binding of galectin-3 by low molecular weight pectin |
| WO2008011216A2 (en) | 2006-05-16 | 2008-01-24 | Pro-Pharmaceuticals, Inc. | Galactose-pronged polysaccharides in a formulation for antifibrotic therapies |
| CN100394923C (zh) * | 2006-05-26 | 2008-06-18 | 范晓青 | 低分子柑桔果胶用于调节血糖血脂和改善脂肪肝中的应用 |
| CN101269087B (zh) * | 2007-11-02 | 2011-11-09 | 中国人民解放军第四军医大学 | 果胶-5-氟尿嘧啶结肠癌双靶向前体药物及制备方法 |
| CN102085214A (zh) * | 2011-01-27 | 2011-06-08 | 范晓青 | 低分子柑橘果胶联和临床常用化疗药用于控制癌症和癌症转移扩散 |
| AR086543A1 (es) * | 2011-05-25 | 2014-01-08 | Bg Medicine Inc | Inhibidores de galectina-3 y metodos de uso de los mismos, composicion farmaceutica |
| EP2768396A2 (en) | 2011-10-17 | 2014-08-27 | Butterfly Network Inc. | Transmissive imaging and related apparatus and methods |
| EP2797942B1 (en) | 2011-12-28 | 2018-10-31 | Galectin Therapeutics Inc. | Composition of novel carbohydrate drug for treatment of human diseases |
| ES2848538T3 (es) | 2012-06-06 | 2021-08-10 | Galectin Therapeutics Inc | Composiciones de galacto-ramnogalacturonato para el tratamiento de enfermedades asociadas con elevada óxido nítrico sintasa inducible |
| DK2900061T3 (da) | 2012-09-17 | 2020-03-02 | Galectin Therapeutics Inc | Fremgangsmåde til forstærkning af specifikke immunterapier ved cancerbehandling |
| JP6055928B2 (ja) | 2012-10-10 | 2016-12-27 | ガレクティン・セラピューティクス・インコーポレイテッドＧａｌｅｃｔｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． | 糖尿病性腎症および関連障害の処置のためのガラクトース分枝炭水化物化合物 |
| US9339515B2 (en) | 2013-02-20 | 2016-05-17 | Galectin Therapeutics, Inc. | Method for treatment of pulmonary fibrosis |
| US9667889B2 (en) | 2013-04-03 | 2017-05-30 | Butterfly Network, Inc. | Portable electronic devices with integrated imaging capabilities |
| EP3510052A4 (en) | 2016-09-02 | 2020-06-17 | Thailand Center of Excellence for Life Sciences | PROCESS FOR THE PREPARATION OF A LATEX EXTRACT OF HEVA |
Family Cites Families (62)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2132577A (en) * | 1934-08-28 | 1938-10-11 | Gen Foods Corp | Method of preparing pectin |
| US2036922A (en) * | 1935-01-31 | 1936-04-07 | Kelco Co | Alginic acid and process of making same |
| US2791508A (en) * | 1952-08-30 | 1957-05-07 | Rivoche Eugene Joel | Food products and method of making the same |
| US2786763A (en) * | 1953-01-06 | 1957-03-26 | Rivoche Eugene Joel | Food process |
| US2859115A (en) * | 1953-07-07 | 1958-11-04 | Rivoche Eugene Joel | Nutrient food products and process of producing same |
| US3023104A (en) * | 1960-07-05 | 1962-02-27 | American Viscose Corp | Food compositions incorporating cellulose crystallite aggregates |
| US3396034A (en) * | 1964-01-20 | 1968-08-06 | Motomco Inc | Process of converting difficultly dispersible materials into a readily dispersible form and products obtained thereby |
| US3573058A (en) * | 1967-01-30 | 1971-03-30 | Swift & Co | Microcrystalline cellulose compositions co-dried with hydrocolloids |
| US3764707A (en) * | 1970-03-04 | 1973-10-09 | Marine Colloids Inc | Algin salt-mannogalac- for gum containing aqueous cosmetic lotion |
| US3946110A (en) * | 1974-05-30 | 1976-03-23 | Peter, Strong Research And Development Company, Inc. | Medicinal compositions and methods of preparing the same |
| GB1474990A (en) * | 1974-09-02 | 1977-05-25 | Gen Foods Corp | Slow set pectin and process for preparing same |
| DE2442980A1 (de) * | 1974-09-07 | 1976-03-18 | Gen Foods Corp | Gelierendes pektin und verfahren zu dessen herstellung |
| JPS5454169A (en) * | 1977-10-08 | 1979-04-28 | Asahi Chem Ind Co Ltd | Compound |
| US4263334A (en) * | 1978-05-31 | 1981-04-21 | Fmc Corporation | Water dispersible cellulosic powder and method of making the same |
| ATE1039T1 (de) * | 1978-11-16 | 1982-06-15 | Unilever Nv | Emulsionen und verfahren zu ihrer herstellung. |
| US4264592A (en) * | 1979-01-22 | 1981-04-28 | Kosta Xhajanka | Citrus fruit fresh cream |
| US4241099A (en) * | 1979-02-26 | 1980-12-23 | Tiemstra Peter J | Pectin formulations, products and methods having delayed-action acidulants |
| US4268533A (en) * | 1979-11-21 | 1981-05-19 | General Foods Corporation | Quick-set low methoxyl pectin composition |
| DE3168085D1 (en) * | 1980-11-22 | 1985-02-14 | Unilever Nv | Water-in-oil emulsion spread having a fat content ranging from 25 to 65 wt%, which comprises a dispersed aqueous phase containing a gelling system |
| US4370354A (en) * | 1981-12-03 | 1983-01-25 | Hercules Incorporated | Stabilized fruit suspensions and method for preparing the same |
| US5308838A (en) * | 1982-05-07 | 1994-05-03 | Carrington Laboratories, Inc. | Uses of aloe products |
| DE3228231A1 (de) * | 1982-07-28 | 1984-02-02 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V., 8000 München | Arzneimittel, calciummischsalze von polymeren, anionischen carbonsaeuren und/oder schwefelsaeureestern, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| US4430349A (en) * | 1982-12-23 | 1984-02-07 | The Coca-Cola Company | Artificially sweetened gelled yogurt |
| FR2545101B1 (fr) * | 1983-04-29 | 1985-08-16 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede de modification des pectines de betterave, produits obtenus et leurs applications |
| US4568673A (en) * | 1984-03-20 | 1986-02-04 | Wayne State University | Compositions inhibiting murine MXT ductal carcinoma |
| JPS61231967A (ja) * | 1985-04-04 | 1986-10-16 | Ajinomoto Co Inc | 低脂肪食品 |
| US4737582A (en) * | 1985-06-28 | 1988-04-12 | The Procter & Gamble Company | Absorbent vegetable materials |
| DK153442C (da) * | 1985-10-14 | 1988-12-19 | Poul Bachmann | Middel, baseret paa pektinholdigt materiale, til behandling og forebyggelse af diarre hos mennesker og dyr |
| DE3541945A1 (de) * | 1985-11-27 | 1987-06-04 | Lomapharm Rudolf Lohman Gmbh K | Immunstimulierend wirkende polysaccharide aus zellkulturen von echinacea purpurea (l.) moench und echinacea angustifolia, d.c. verfahren zu ihrer herstellung und sie enthaltende pharmazeutische zubereitungen |
| AU593618B2 (en) * | 1986-03-06 | 1990-02-15 | Unilever Plc | Spread |
| US4686106A (en) * | 1986-06-16 | 1987-08-11 | General Foods Corporation | Pectin food product |
| JPS63139108A (ja) * | 1986-12-02 | 1988-06-10 | Kanebo Ltd | 皮膚化粧料 |
| US4774095A (en) * | 1986-12-16 | 1988-09-27 | The Procter & Gamble Company | Filling-containing, dough-based products containing cellulosic fibrils and microfibrils |
| US4959227A (en) * | 1987-02-17 | 1990-09-25 | Amer Moh S | High dietary fiber low lactose liquid food and a method of producing same |
| CA1334290C (en) * | 1987-02-26 | 1995-02-07 | Adrienne Elizabeth Clarke | Plant gum material and use thereof in food products |
| US4904697A (en) * | 1987-04-09 | 1990-02-27 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Controlling the growth of certain tumor tissue with chalcone derivatives |
| US4800096A (en) * | 1987-05-29 | 1989-01-24 | General Foods Corporation | Pectin gelling composition |
| US4882187A (en) * | 1987-07-02 | 1989-11-21 | Thomas J. Lipton Inc. | Edible spread and process for the preparation thereof |
| GB8716111D0 (en) * | 1987-07-08 | 1987-08-12 | Unilever Plc | Edible plastic dispersion |
| US5004758A (en) * | 1987-12-01 | 1991-04-02 | Smithkline Beecham Corporation | Water soluble camptothecin analogs useful for inhibiting the growth of animal tumor cells |
| US4828396A (en) * | 1987-12-02 | 1989-05-09 | The Nutrasweet Company | Fluid processor apparatus |
| GB8813161D0 (en) * | 1988-06-03 | 1988-07-06 | Unilever Plc | Emulsions |
| US4911946A (en) * | 1988-06-24 | 1990-03-27 | The Nutra Sweet Company | Carbohydrate cream substitute |
| DK350088D0 (da) * | 1988-06-24 | 1988-06-24 | Kobenhavns Pektinfabrik As | Fremgangsmaade til forbedring af hoejforestret pektins geleringsegenskaber |
| US5153020A (en) * | 1988-06-24 | 1992-10-06 | The Nutrasweet Company | Carbohydrate cream substitute |
| WO1989012403A1 (en) * | 1988-06-24 | 1989-12-28 | The Nutrasweet Company | Carbohydrate cream substitute |
| EP0355908B1 (en) * | 1988-08-17 | 1996-12-18 | Unilever N.V. | Liquid based composition comprising gelling polysaccharide capable of forming a reversible gel and a method for preparing such composition |
| US5071970A (en) * | 1988-11-23 | 1991-12-10 | University Of Florida | Process for producing pectin with a high-to-medium methoxyl content from beet pulp |
| US5011701A (en) * | 1988-12-30 | 1991-04-30 | Kraft General Foods, Inc. | Low calorie food products having smooth, creamy, organoleptic characteristics |
| ATE117512T1 (de) * | 1989-11-22 | 1995-02-15 | Unilever Nv | Dispersion mit zusammenhängender lipider phase und verfahren zu ihrer herstellung. |
| GB8928370D0 (en) * | 1989-12-15 | 1990-02-21 | Unilever Plc | Fluid composition |
| US5100688A (en) * | 1990-02-23 | 1992-03-31 | Cox James P | Saccharide/protein gel |
| US4988530A (en) * | 1990-03-21 | 1991-01-29 | Gerber Products Company | Soluble dietary fiber fortified beverage |
| DE69117059T2 (de) * | 1990-06-19 | 1996-06-27 | Mars Inc | Fettersatz und verfahren zur herstellung von organischen mikrokugeln |
| JP3013935B2 (ja) * | 1990-10-19 | 2000-02-28 | コニカ株式会社 | 感熱転写記録媒体 |
| CA2061498A1 (en) * | 1991-02-26 | 1992-08-27 | Andrew C. Hoefler | Fat substitute |
| US5374444A (en) * | 1991-06-28 | 1994-12-20 | Langner; Bruce J. | Fiber beverage and method of manufacture |
| EP0547647A1 (en) * | 1991-11-12 | 1993-06-23 | Unilever N.V. | Low fat spreads and dressings |
| US5238699A (en) * | 1991-11-27 | 1993-08-24 | Kraft General Foods, Inc. | Ready-to-eat, low/no-fat puddings and process |
| EP0552503A1 (fr) * | 1992-01-23 | 1993-07-28 | Romuald Dr. Kowalski | Composition de sulfate de barium colloidal pour le traitement des néoplasmes du poumon |
| ZA931327B (en) * | 1992-02-26 | 1994-08-25 | Unilever Plc | Water-continuous emulsions based on polysacharides |
| JP3360899B2 (ja) * | 1993-10-08 | 2003-01-07 | 日本医薬品工業株式会社 | 癌予防・治療剤 |
-
1994
- 1994-07-07 US US08/271,821 patent/US5834442A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-06-14 ES ES95925253T patent/ES2227555T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-14 PT PT95925253T patent/PT768885E/pt unknown
- 1995-06-14 DE DE69533550T patent/DE69533550T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-14 AU AU29442/95A patent/AU695677B2/en not_active Ceased
- 1995-06-14 WO PCT/US1995/007547 patent/WO1996001640A1/en active IP Right Grant
- 1995-06-14 CA CA002194586A patent/CA2194586A1/en not_active Abandoned
- 1995-06-14 BR BR9508245A patent/BR9508245A/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 EP EP95925253A patent/EP0768885B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-14 DK DK95925253T patent/DK0768885T3/da active
- 1995-06-14 CN CN95194958A patent/CN1157567A/zh active Pending
- 1995-06-14 AT AT95925253T patent/ATE276753T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 MX MX9700118A patent/MX9700118A/es not_active IP Right Cessation
-
1996
- 1996-12-31 FI FI965269A patent/FI965269A/fi not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-01-02 US US08/735,432 patent/US5895784A/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-01-06 NO NO19970039A patent/NO311493B1/no unknown
-
2008
- 2008-02-04 JP JP2008024405A patent/JP2008111002A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0768885T3 (da) | 2004-12-06 |
| DE69533550T2 (de) | 2005-09-22 |
| EP0768885A4 (en) | 1998-04-29 |
| AU2944295A (en) | 1996-02-09 |
| ES2227555T3 (es) | 2005-04-01 |
| US5834442A (en) | 1998-11-10 |
| DE69533550D1 (de) | 2004-10-28 |
| EP0768885B1 (en) | 2004-09-22 |
| NO970039D0 (no) | 1997-01-06 |
| WO1996001640A1 (en) | 1996-01-25 |
| FI965269A (fi) | 1997-03-07 |
| CN1157567A (zh) | 1997-08-20 |
| MX9700118A (es) | 1997-06-28 |
| US5895784A (en) | 1999-04-20 |
| ATE276753T1 (de) | 2004-10-15 |
| PT768885E (pt) | 2005-01-31 |
| AU695677B2 (en) | 1998-08-20 |
| JP2008111002A (ja) | 2008-05-15 |
| NO970039L (no) | 1997-02-17 |
| CA2194586A1 (en) | 1996-01-25 |
| BR9508245A (pt) | 1997-09-30 |
| EP0768885A1 (en) | 1997-04-23 |
| FI965269A0 (fi) | 1996-12-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0768885B1 (en) | Method for inhibiting cancer metastasis by oral administration of soluble modified citrus pectin | |
| Haralabopoulos et al. | Thrombin promotes endothelial cell alignment in Matrigel in vitro and angiogenesis in vivo | |
| Periyasamy et al. | Salt loading induces redistribution of the plasmalemmal Na/K-ATPase in proximal tubule cells | |
| US20070141101A1 (en) | Method for stimulating angiogenesis and wound healing | |
| Winblade et al. | Sterically blocking adhesion of cells to biological surfaces with a surface‐active copolymer containing poly (ethylene glycol) and phenylboronic acid | |
| Park et al. | Antiangiogenic effect of bile acid acylated heparin derivative | |
| US20220273759A1 (en) | Pharmaceutical association for converting a neoplastic cell into a non-neoplastic cell and uses thereof | |
| Kinsella et al. | Removal of heparan sulfate by heparinase treatment inhibits FGF-2-dependent smooth muscle cell proliferation in injured rat carotid arteries | |
| Konturek et al. | Omentum and basic fibroblast growth factor in healing of chronic gastric ulcerations in rats | |
| EP3349778B1 (en) | Pharmaceutical association of growth factor receptor agonist and adhesion protein inhibitor for converting a neoplastic cell into a non-neoplastic cell and uses thereof | |
| EP3349776B1 (en) | Pharmaceutical association of growth factor receptor agonist and adhesion protein inhibitor for converting a neoplastic cell into a non-neoplastic cell and uses thereof | |
| Roberts et al. | Laminin-dependent and laminin-independent adhesion of human melanoma cells to sulfatides | |
| US20020107222A1 (en) | Modified polysaccharides for treatment of cancer | |
| Vlodavsky et al. | Control of cell proliferation by heparan sulfate and heparin-binding growth factors | |
| Macconi et al. | Enhanced glomerular thromboxane A2 mediates some pathophysiologic effect of platelet-activating factor in rabbit nephrotoxic nephritis: evidence from biochemical measurements and inhibitor trials | |
| JPH11503715A (ja) | 可溶性改質シトラスペクチンの経口投与による癌転移の抑制方法 | |
| Huard et al. | A potential role for the extracellular matrix glycoprotein laminin in macrophage‐tumor‐cell interactions | |
| JP2000344674A (ja) | 血管内皮細胞増殖因子作用の抑制剤及び血管新生の抑制剤 | |
| San Antonio et al. | Heparin sensitive and resistant vascular smooth muscle cells: biology and role in restenosis | |
| Kahle | Biomimetic Proteoglycans Molecularly Engineer Cartilage Pericellular Matrix and Can Be Leveraged as a Multi-Functional Drug Delivery Platform | |
| JP2004238294A (ja) | Ｃｄ４４切断誘導剤 | |
| Guo et al. | The effect and mechanisms of folic acid complement in protecting myocardium and microvascular of type 2 diabetic rats | |
| VLODAVSKY et al. | Heparan sulfate degradation in tumor cell invasion and neovascularization | |
| Ismail | Characterization of lipoprotein-proteoglycan complexes in balloon catheter deendothelialized aorta of rabbits and the uptake of these complexes by smooth muscle cells and macrophages | |
| Shamhart | The impact of the extracellular matrix and type 1 diabetes on cardiac fibroblast activation |