NO169171B

NO169171B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive glycero-3(2)-fosfo-l-serinderivater

Info

Publication number: NO169171B
Application number: NO87870834A
Authority: NO
Inventors: Hans Brachwitz; Peter Langen; Christine Lehmann; Eckart Matthes; Juergen Schildt; Iduna Fichtner; Albin Hermetter; Friedrich Paltauf
Original assignee: Hafslund Nycomed Pharma
Priority date: 1985-07-03
Filing date: 1987-02-27
Publication date: 1992-02-10
Also published as: NO169171C; HUT43861A; NO870834D0; HU198076B; FI870732A; JPS63500658A; DK167978B1; DK106287D0; FI82473B; FI82473C; JPH0751588B2; FI870732A0; WO1987000173A1; DK106287A; NO870834L; EP0229128B1; EP0229128A1; DE3671630D1

Description

Oppfinnelsen vedrører en analogifremgangsmåte for fremstilling av nye cytostatisk virksomme glysero-3(2)-fosfo-L-serinderivater.

Fra A. Slotboom et al., Chem. Phys. Lipidis 5 (1970), 321-325

er det kjent fremstillingsfremgangsmåter for forskjellige fosfatidylseriner som i 1- og 2-stilling er forestret med fettsyrer og som i forbindelse med fosfatidyletanolaminer skal utgjøre anti-koagulasjonsmidler for blodkoagulering.

I E. Eibl, Chemistry and Physics of Lipids, 26 (1980), 420-422 er det beskrevet fosfatidylseriner som i 1- og/eller 2-stilling av glyserol er forestret med fettsyrer, eller i 1-

og 2-stilling er forestrede med langkjedede alkoholer og skal utgjøre de aktive komponentene ved blodkoagulering.

I DD 222.595 er det beskrevet fosfokolinderivater, i EP-A-0 100 499 fosfolipidderivater som viser anti-tumorvirkning. Serinderivater er ikke nevnt. Fra Honma et al., Cancer Research 41 (1981), side 3212 ff er det kjent at 0-alkyl-lysofosfatidylkoliner og —etanolaminer forhindrer veksten av Ml- og H-60 celler, i motsetning til dette viser 0-alkyl-lysofosfatidylseriner ingen slike effekter.

Det er nå overraskende funnet at bestemte, nye glysero-3-(2)-fosfoserinderivater oppviser en utmerket cytostatisk virkning.

Gjenstand for oppfinnelsen er følgelig en analogifremgangsmåte for fremstilling av nye, terapeutisk virksomme, glysero-3(2)-fosfo-L-serinderivater med generell formel

hvori

A står for usubstltuert eller substituert (C5-C3Q)-alkoksy, usubstituert eller substituert (C5-C30)-alkenoksy, hvorved en dobbeltbinding i alkenoksyresten ikke utgår fra det C-atomet som er bundet til oksygenatomet, halogen eller en gruppe av den generelle formelen

hvori

n står for 0, 1, 2 eller 3, eller en av de to restene B og C, som er lik A eller forskjellig fra denne, har en for A angitt betydning eller står for hydrogen, og den andre resten står for en fosfatidyl-L-seringruppe av formelen

under den forutsetning at bare en av restene A, B eller C står for (<C>5-C30)-alkoksy eller (C5-<C>30)-alkenoksy, eller deres farmasøytisk godtagbare salter, som er kjennetegnet ved at en a) omsetter et glysero-3(2)-fosforsyrederivat av den generelle formelen

hvori

A er som definert i formel (I), en av restene

D og E har en i formel (I) for A angitte betydning, eller står for hydrogen, og den andre resten står for en gruppe av den generelle formelen

hvori

X og Y enten er like og står for hydroksy eller halogen, eller Y står for laverealkoksy eller aryloksy, idet kun en av restene A, D eller E står for (C5-C30)-alkoksy eller (C5-C30)-alkenoksy, eller salter derav med et beskyttet L-serinderivat av den generelle formelen

hvori

Zi står for en karboksyl- og

Z2 står for en aminobeskyttelsesgruppe, fortrinnsvis i nærvær av et kondensasjonsmiddel, deretter avspaltes beskyttelsesgruppene og Z2 i en hvilken som helst rekkefølge eller samtidig og de eventuelt dannede glyserofosforsyreesteren eller -halogenidene forsåpes, eller

ved at en

b) bringer en glysero-3(2)-fosforsyreester av den generelle formelen

hvori

A er som definert i formel (I), en av restene

L og M har den i formel (I) for A angitte betydning, eller står for hydrogen, og den andre resten er en gruppe av den generelle formelen

hvori

R^ står for eventuelt med hydroksy eller halogensubstituert (C1-C6)-alkyl,

R2, R3 og R4, som er like eller forskjellige, står uavhengig av hverandre for hydrogen eller metyl, og

n står for et helt tall fra 1 til 6, idet kun en av restene Å, L eller M står for (C5-C30)-alkoksy eller (C5-C30)<->alkenoksy, til omsetning med L-serin i nærvær av fosfolipase D, og de dannede forbindelsene av den generelle formel I eller saltene derav isoleres, og om ønsket, overføres en ved fremgagsmåtevariant a) eller b) oppnådd forbindelse av den generelle formel (I), eller et farmasøytisk ikke-akseptabelt salt derav til et farmasøytisk akseptabel sal±.

Glyserofosfo-L-serinderivater av den generelle formel I har i et hvert tilfelle et chiralitetssentrum i serindelen av molekylet og kan, avhengig av betydningen av restene A, B og C, oppvise et andre cheralitetssentrum i glyseroldelen av molekylet. Gjenstand for oppfinnelsen og omfattet av den generelle formelen I er følgelig også alle mulige chirale og diastereomere former av forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen.

Det i foreliggende beskrivelse anvendte uttrykket "alkoksy" vedrører rettkjedede, enkelt eller flerforgrenede alkylerte grupper som fortrinnsvis oppviser 14-20 karbonatomer, og mest foretrukket 16-18 karbonatomer. Eksempler på foretrukne alkoksyrester er tetra-, penta-, heksa-, hepta-, okta-, nonadecyloksy, eikosyloksy henholdsvis deres forgrendede analoger. Uttrykket "alkenyloksy" står for rettkjedede, enkelt eller flerforgrenede, enkelt eller flerumettede alkenyletergrupper, som fortrinnsvis oppviser 14-20, og mest foretrukket 16-18 karbonatomet, hvorved i disse alkenyleter-gruppene enoletergrupper hvori en olefinisk dobbeltbinding utgår fra det karbonatomer som er bundet til oksygenatomet, uttrykkelig er unntatt. De ovenfor omtalte alkoksy- og også alkenoksyrestene Å, B og C kan være substituert en eller flere ganger, fortrinnsvis enkeltsubstituert, som sub-stituenter kommer fortrinnsvis halogen, hydroksy, alkoksy eller cyano på tale. Betegnelsen "halogen" vedrører de fire halogenatomene klor, brom, jod og fluor, hvorved klor og fluor er spesielt foretrukket.

I en foretrukket klasse av forbindelser av den generelle formel I betyr C fosfatidyl-L-serin-gruppen av formel III, en av restene A og B står for alkoksy eller alkenoksy og den andre resten står for halogen.

En ytterligere foretrukket klasse vedrører forbindelser av den generelle formel I hvori C står for fosfatidyl-L-serin-gruppen av formel III, en av restene A og B står for alkoksy eller alkenoksy og den andre for en endestående fluorert alkoksyrest av formel II. Foretrukket er også forbindelser av den generelle formel I hvori A står for alkoksy eller alkenoksy, B står for hydrogen elle alkoksy og C står for fosfatidyl-L-serin-gruppen av formel III. Foretrukket er endelig også den klasse av forbindelser av den generelle formel I hvori B står for fosfatidyl-L-serin-gruppen av formel III, en av restene A og C står for alkoksy eller alkenoksy og den andre står for halogen.

Spesielt foretrukne enkeltforbindelser med formel I er: l-0-heksadecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-L-serin l-0-heksadecyl-2-fluor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-L-serin l-klor-l-desoksy-3-0-heksadecyl-glysero-2-fosfo-L-serin l-klor-l-desoksy-2-0-heksadecyl-glysero-3-fosfo-L-serin l-0-heksadecyl-2-desoksy-glysero-3-fosfo-L-serin 1-0-(2,2,2-trifluioretyl )-2-0-heksadecyl-glysero-3-f osf o-L-serin l-0-heksadecyl-2-0-(2 ,2 , 2-trif luoretyl )-glysero-3-f osf o-L-serin l-klor-l-desoksy-2-0-oktadecyl-glysero-3-fosfo-L-serin l-0-oktadecyl-2-(2,2,2-trifluoretyl)-glysero-3-fosfo-L-serin 1-O-oktadecy1-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-L-serin. Glysero-3(2)-fosfo-L-serin-derivatene av den generelle formel I og farmasøytisk tålbare salter derav fremstilles ifølge oppfinnelsen fortrinnsvis ved at man a) omsetter et glysero-3(2)-fosforsyrederivat av den gene relle formelen

hvori

A er som definert i formel I, en av restene

D og E har den i formel I for A angitte betydning, eller står for hydrogen, og den andre resten står for en gruppe av den generelle formelen

hvori

X og Y enten er like og står for hydroksy eller halogen, eller Y står for laverealkoksy eller aryloksy, under den forutsetning at bare en av restene A, D eller E står for

(C5-C30)-alkoksy eller (<C>5-<C>30)-alkenoksy, eller salter derav med et beskyttet L-serinderivat av den generelle formelen

hvori

Zi står for en karboksyl- og

Zg står for en aminobeskyttelsesgruppe, fortrinnsvis i nærvær av et kondensasjonsmiddel, deretter avspaltes, i en hvilken som helst rekkefølge eller samtidig, beskyttelsesgruppene Z^ og Z2, og den dannede glyserofosforsyreesteren eller -halogenidene forsåpes, eller

b) en glysero-3(2)-fosforsyreester av den generelle formelen

hvori

A er som definert i formel I, en av restene

L og M har den i formel I for A angitte betydningen, eller står for hydrogen, og den andre resten står for en gruppe av den generelle formelen

hvori

Ri står for eventuelt med hydroksy eller halogen substituert (C1-C6)-alkyl,

n står for et helt tall 1-6, under den forutsetning bare en av restene A, L eller M står for (C5-C30 )-alkoksy eller (C5-C30 )-alkenoksy, bringes til omsetning med L-serin i nærvær av fosfolipase D, og den dannede forbindelsen av den generelle formel I eller dens salt isoleres, og en ifølge fremgangsmåte variant a) eller b) oppnådd forbindelse av den generelle formel I eller et farmasøytisk ikke-akseptabelt salt derav overføres til et farmasøytisk akseptabel salt.

Ifølge fremgangsmåte varient a) kan følgelig forbindelsene av den generelle formel I fremstilles fra glysero-3(2)-fosfor-syrederivater av formel IV og tilsvarende beskyttede L-seriner av formel VI ved i og for seg kjente fremgangsmåter. F.eks. er fremstillingen av fosfatidylseriner med mettede eller umettede acylrester ved kondensasjon av fosfatidsyrer med seriner beskyttet på amino- og karboksylgruppen, eller ved omsetning av diacylglyseroljodhydriner med beskyttede 0-fosfoseriner, hvorved beskyttelsesgruppene på de som mellomprodukter oppnådde beskyttede fosfatidylserinene enten kan avspaltes samtidig eller etter hverandre ved egnede fremgangsmåter, kjente. Istedenfor fosfatidsyrer er det også anvendt fosfatidklorider for reaksjon. På tilsvarende måte kan også alkyl- og alkylensubstituerte glyserofosfoseriner syntetiseres (A. J. Slotboom og P. P. Bonsen, Chem. Phys. Lipids 5 (1970), 301-398; M. Kates, i: E. D. Korn (utgiver) "Methodes in Membrane Biology", bind 8, Plenum Press, New York, 1977, side 219; H. Eibl, Chem. Phys. Lipids 26 (1980) 405-429; A. Hermetter, F. Paltauf og H. Hauser, Chem. Phys. Lipids 30 (1982) 35-45).

For fremstilling av de nye glysero-3(2)-fosfo-L-serin-derivatene av den generelle formel I anvendes fortrinnsvis tilsvarende substituerte glysero-3(2)-fosforsyrer av formel IV, hvori en rest D eller E står for en gruppe av formel V, hvori X og Y står for hydroksy.

Istedenfor de frie syrene kan imidlertid også de tilsvarende fosforsyredihalogenidene (X og Y i V: halogen) anvendes, fortrinnsvis fosforsyredikloridene, som oppnås ved omsetning av de tilsvarende substituerte glyserolene med fosforoksy-halogenider. Ved omsetningen av disse fosforsyredihalogenidene av formel IV (X og Y i V: halogen) med et beskyttet serin av type VI oppstår som mellomprodukter ved seringruppen beskyttede glysero-fosfo-L-serinklorider av forbindelser av den generelle formel I, som før eller etter isolering og før, under eller etter fjernelse av beskyttelsesgruppene kan omvandles til forbindelser av den generelle formel I eller salter derav.

En ytterligere variant av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen består i at man bringer de beskyttede serinene av formel VI til reaksjon med glyserofosforsyreesterhalogenider av formel IV, hvori en rest D eller E er en gruppe av formel V hvori X står for halogen, fortrinnsvis klor, og Y står for laverealkoksy eller aryloksy. De som mellomprodukter oppnådde, ved seringruppen beskyttede alkyl- henholdsvis _ arylesterne av forbindelser av den generelle formel I, kan omvandles ved vanlige kjemiske fremgangsmåter som hydrolyse og avspaltning av beskyttelsesgruppene til syrene av den generelle formel I eller salter derav.

Glyserofosforsyrealkyl(-aryl)ester-halogenider av formel IV er lett tilgjengelige ved omsetning av tilsvarende substituerte glyseroler med fosforsyrealkyl (henholdsvis aryl)-ester-dihalogenider.

Som beskyttede L-serinderivater egner seg for omsetning ifølge oppfinnelsen forbindelser av formel VI hvori Z^ står for en innen peptidkjemien vanlig, vanligvis ved katalytisk hydrogenolyse, hydrazinolyse, behandling med HC1, natriumtio-fenolat eller ved hydrolyse lett avspaltbar karboksyl-beskyttelsesgruppe, som benzyl, tert.butyl, ftalimidometyl-oksy, isopropyl, benzhydryl e.l., og Z2 står for en innen peptidkjemien vanlig, vanligvis ved katalytisk hydrogenolyse, hydrazinolyse, behandling med HC1 eller maursyre fjernbar aminobeskyttelsesgruppe. Slike aminobeskyttelses-grupper er f.eks. acylgrupper, som formyl, acetyl, trifluor-acetyl; alkoksykarbonylgrupper som metoksykarbonyl, tert.but-oksykarbonyl, <p>,<p>,<p->trikloretoksykarbonyl, p-jodetoksy-karbonyl; aralkoksy som benzyloksykarbonyl, p-metoksybenzyl-oksykarbonyl; aryloksykarbonyl som fenoksykarbonyl; silyl-grupper som trimetylsilyl; og andre grupper som trityl, tetrahydropyranyl, vinyloksykarbonyl, O-nitrofenylsulfenyl, difenylfosfynil, p-toluensulfonyl, benzyl o.l. I og for seg kan beskyttelsesgruppene Z^ og Z2 velges på en hvilken som helst måte, som regel er det imidlertid fordelaktig for beskyttelse av L-serinet å velge slike kombinasjoner av beskyttelsesgrupper som kan avspaltes i ett reaksjonstrinn, idet man eksempelvis som beskyttet serinderivat av formel VI anvender N-tert.butyloksy-L-serin-benzhydrylester o.l.

Omsetningen av forbindelser av formel IV med forbindelser av formel VI til de ifølge fremgangsmåtetrinn _a) som mellom-produkt dannede, ved seringruppen fremdeles beskyttede derivaten av forbindelsene av den generelle formel I gjennom-føres generelt på en slik måte at man omsetter et glysero-3(2)-fosforsyrederivat av formel IV, fortrinnsvis et godt tørket salt av en glysero-3(2)-fosforsyre av formel IV, eksempelvis pyridiniumsaltet, med det beskyttede serinet av formel VI i molforhold på 1:1 til 1:5, i nærvær av en sterk base, som pyridin, trietylamin, Eiining-base o.l., og eventuelt et ytterligere inert, apolart organisk oppløsnings-middel som kloroform, eddikester, dietyleter, diisopropyl-eter, benzen, klorbenzen, tetrahydrofuran o.l. Omsetningen gjennomføres fortrinnsvis i nærvær av et egnet kondensasjonsmiddel, f.eks. 2,4,6-triisopropylbenzensulfoklorid, ved romtemperatur eller ved temperaturer som ligger like over eller under romtemperatur. Avspaltningen av beskyttelsesgruppene fra de ved denne omsetningen oppnådde beskyttede mellomproduktene kan, avhengig av de valgte beskyttelsesgruppene, foregå ved fremgangsmåter som er kjente for fagmannen. Eksempelvis kan mellomprodukter i form av benzyhydrylestere beskyttet med alkoksykarbonyl overføres til forbindelser av formel I ved behandling med HC1, fortrinnsvis ved innføring av EC1 i oppløsninger av mellomproduktene i organiske oppløsningsmidler, under avspaltning av begge beskyttelsesgruppene, eventuelle tilstedeværende trityl-beskyttelsesgrupper kan fjernes ved hydrogenolyse, andre ved hydrolyse, hydrazinolyse o.l.

Ifølge fremgangsmåtetrinn b) kan forbindelsene av den generelle formel I utvinnes fra glysero-3(2)-fosforsyreestere av den generelle formel VII ved enzymatisk katalysert omsetning ved hjelp av fosfolipase D ved i og for seg kjente fremgangsmåter. Enkelte fosfolipider er allerede fremstilt ved hjelp av fosfolipase D (H. Eibl et al., Methods in Enzymology, 72, 1981, 632-639), hvorved det som substrater i reaksjonen er anvendt delvis ikke-naturlig forekommende glyserofosforsyrealkylestere og analoger derav. Ved den enzymatiske syntesen av fosfatidylseriner. fra naturlig fosfatidylkoliner (P. Comfurius et al., Biochim. Biophys. Acta 488, 1977, 36-42) er det hittil bare oppnådd beskjedne utbytter av fosfatidylseriner og hovedsakelig hydrolyse under dannelse av fosfatidylsyrer. Andre, som naturlige substrater, har hittil ikke vært anvendt for fremstilling av fosfatidylseriner ved omestring ved hjelp av fosfolipase D.

I det vesentlige foregår fremstillingen av de nye glysero-3(2)-fosfo-L-serinderivatene av den generelle formel I ved at man lar en forbindelse av den generelle formel VII reagere i vandig oppløsning eller suspensjon under tilsats av organiske oppløsningsmidler som oppløsningsformidlere, f.eks. eter og/eller kloroform og en buffer, f.eks. natriumacetat- eller tris-buffer, ved en pH-verdi fra 4,8 til 8 i nærvær av et kalsiumsalt (molaritet fortrinnsvis 0,01 til 0,1 mol/liter) med L-serin i nærvær av fosfolipase D ved temperaturer mellom 10 og 50°C. En spesiell fordel ved fremgangsmåten ligger i at man kan anvende ubeskyttet serin for omsetning. Etter at reaksjonen har foregått, denne kan f.eks. følges ved hjelp av tynnsjiktkromatografi, inaktiveres enzymet, fordelaktig ved tilsats av 0,1 M etylendiamintetraeddiksyre-oppløsning, og deretter isoleres og renses det dannede glysero-3(2)-fosfo-L-serinderivatet av den generelle formel I på vanlig måte, f.eks. ved hjelp av kromatografiske fremgangsmåter, som tynnsjikt-, søyle- eller høytrykksvæske-kromatografi.

Som nevnt innledningsvis omfattes av den generelle formel I alle mulige chirale og diastereomere former av forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen. Både ved fremgangsmåtevariant a) og også ved f remgangsmåtevariant b) kan det, avhengig av de steriske forholdende i utgangsmaterialene av formel IV,

henholdsvis formel VII, oppnås enten chirale eller diastereomere sluttprodukter. Dersom det i en av de to omtalte fremgangsmåtevariantene anvedes chirale utgangsmaterialer eller materialer som ikke har chiralitetssentrum oppnås chirale former av forbindelser av den generelle formel I. Dersom det derimot anvendes racemiske utgangsmaterialer av formel IV, henholdsvis formel VII, oppnås ved omsetningen ifølge oppfinnelsen med et beskyttet L-serinderivat av formel VI, henholdsvis med L-seriner selv, diastereomerblandinger av forbindelser av den generelle formel I.

De ifølge fremgangsmåtevariant a) eller b) oppnådde forbindelsene av den generelle formel I, eller farmasøytisk ikke-akseptable salter derav, kan overføres til farmasøytisk akseptable salter på vanlig måte med uorganiske eller organiske baser. Saltdannelsen kan eksempelvis gjennomføres ved at man oppløser de nevnte forbindelsene av formel I i et egnet organisk oppløsningsmiddel, f.eks. en lavere alifatisk alkohol, tilsetter en ekvivalent mengde av den ønskede basen, sørger for en god gjennomblanding og etter avsluttet saltdannelse avdestillerer oppløsningsmiddelet i vakuum. Farmasøytisk akseptable salter er f.eks. metallsalter, spesielt alkalimetall- og jordalkalimetallsalter, som natrium-, kalium-, magnesium- eller kalsiumsalter. Andre farmasøytisk akseptable salter er eksempelvis også ammonium-salter, som er avledet fra ammoniakk eller organiske aminer, f.eks. mono-, di- eller tri-lavere-(alkyl, cykloalkyl eller hydroksyalkyl)-aminer, laverealkylendiaminer eller hetero-cykliske baser, f.eks. metylamin, dietylamin, trietylamin, dicykloheksylamin, trietanolamin, etylendiamin, pyridin, piperidin, piperacin, morfolin o.l. Farmasøytisk ikke-akseptable salter av forbindelsen av den generelle formel I kan ved vanlig fornyet saltdannelse overføres til farmasøy-tisk akseptable salter, hvorved det farmasøytisk ikke-anvendbare kationet erstattes med et farmasøytisk anvendbart kation. Alternativt kan man også nøytralisere et farma-søytisk ikke-anvendbart salt og deretter omsette den derved oppnådde frie syren med en base som gir et farmasøytisk akseptabelt salt.

Det for fremgangsmåtevariant a) som utgangsmateriale anvendte glysero-3(2)-fosforsyrederivatet av den generelle formel IV er enten kjent eller kan fremstilles ifølge i og for seg kjente fremgangsmåter (f.eks. H. Brachwitz et al., Chem. Phys. Lipids 31, 1982, 33-52, A. Hermetter et al., Chem. Phys. Lipids, 30, 1982, 35-45), spesielt ifølge de nærmere angivelsene i utførelseseksemplene. Den for fremgangsmåtevariant b) som utgangsmateriale anvendte glysero-3(2 )-fosforsyreesteren av den generelle formel VII er også enten kjent eller kan fremstilles ved kjente fremgangsmåter (DDR-patent nr. 222 594 og nr. 222 595).

En fosfolipase D som er egnet for den enzymatiske omsetningen kan med utgangspunkt i allerede kjente fremgangsmåter oppnås på enkel måte fra hodekål, ved at denne homogeniseres, homogenisatet filtreres og den vandige fasen sentrifugeres i 45 min. ved 25.000 g. Den klare overvæsken blandes med 2 volumdeler aceton. Det dekanteres fra det dannede bunnfallet ved hjelp av en dykkefritte og resten sentrifugeres i 20 min. ved 13.000 g. Det aceton-fuktige enzymholdige preparatet tørkes i vakuum over fosforpentoksyd.

Forbindelsene av den generelle formel I og salter derav er biologisk meget aktive og har spesielt en utpreget antitumor-virkning. Disse verdifulle farmakologiske egenskapene kan påvises in vitro og in vivo under anvendelse av standard-fremgangsmåter, eksempelvis ved at hemningen av formeringen av Ehrlich-Ascites-tumorcelle in vitro under innvirkning av glysero-3(2)-fosfor-L-serinderivater av den generelle formel I bestemmes. I dette forsøket (tabell I) bevirker forbindelsen ifølge oppfinnelsen, eksempelvis

l-0-heksadecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-L-serin

(forbindelse nr. 1)

l-0-heksadecyl-2-fluor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-L-serin

(forbindelse nr. 2)

1 - klor-l-desoksy-3-0-heksadecyl-glysero-2-f osf o-L-serin

(forbindelse nr. 3)

1-0-(2 ,2 , 2-trif luiore tyl )-2-0-heksadecyl-glysero-3-f osf o-L-serin (forbindelse nr. 4),

allerede i meget lav konsentrasjon en signifikant hemning av celleveksten av Ehrlich-Ascites-tumorceller.

In vitro virksomheten av forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen er kvalitativt sammenlignbar med det cytostatisk virksomme l-0-oktadecyl-2-0-metyl-glysero-3-fosfokolinet, som allerede har funnet klinisk anvendelse innenfor kreftterapien (P. G. Munder et al. i: "Augmentig Agents in Cancer Therapy", side 441-458, Raven Press, New York, 1981; W. E. Berdel et al. Cancer, 50, 1982, 2011-2015). Sammenlignet med sammen-ligningsstoffet har forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen den fordelen at en signifikant antitumor-virksomhet inntrer allerede ved vesentlig lavere konsentrasjoner, slik at det for å oppnå den samme cytostatiske virkningen må administreres betydelig mindre doseringsenheter. På grunn av disse egenskapene kan man med forbindelsene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse vente en fordelaktig anvendelse innenfor humanmedisinen til behandling og profylakse av tumorsykdommer. Totalt sett er den utpregede antitumorvirk-ningen av glysero-3(2)-fosfo-L-derivatene fresmtilt ifølge oppfinnelsen overraskende, idet det hittil har vært antatt

(kfr. D. R. Hoffman et al., Research Commun in Chem. Pathology and Pharmacology, 44, 1984, 239-306) at anti-tumorvirkningen av alkylfosfolipid-analoger er begrenset til forbindelser som inneholder en fosfokolingruppe.

Forbindelsene av den generelle formel I kan anvendes som helbredelsesmidler, f.eks. i form av farmasøytiske preparater som inneholder forbindelsene i blanding med et for enteral eller parenteral administrering egnet farmasøytisk, organisk eller uorganisk inert hjelpe- og/eller bærermateriale, som f.eks. farmasøytisk akseptable oppløsningsmidler kommer gelatin, gummi arabicum, melkesukker, stivelse, magnesium-stearat, talk, vegetabilske oljer, polyalkylenglykoler, vaselin o.l. på tale. De farmasøytiske preparatene kan foreligge i fast form, eksempelvis som tabletter, dragéer, suppositorier, kapsler o.l., eller i flytende form, eksempelvis som oppløsninger, suspensjoner eller emulsjoner. Eventuelt er de steriliserte og inneholder hjelpestoffer, som konserverings-, stabiliserings- og emulgeringsmidler, salter for endring av det osmotiske trykket o.l. Spesielt kan farmasøytiske preparater inneholder forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen i kombinasjon med andre terapeutisk verdifulle stoffer. Med disse kan forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen formuleres med de ovenfor angitte hjelpe-og/eller bærerstoffene til kombinasjonspreparater.

De følgende eksemplene belyser oppfinnelsen nærmere: Eksempel 1: 1- 0- Heksadecyl- 2- klor- 2- desoksv- glvsero- 3- fosfo- L- serin

l-0-heksadecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosforsyre:

335 mg (1 mmol) l-0-heksadecyl-2-klor-2-desoksy-glyserol oppløses i 10 ml tørr tetrahydrofuran, tilsettes 0,6 ml pyridin, den derved oppnådde oppløsningen tilsettes dråpevis til en oppløsning av 0,35 ml (3,755 mmol) fosforoksyklorid i 3,5 ml vannfri tetrahydrofuran ved 0°C under omrøring og omrøres i ytteligere 3 timer ved 0°C. Deretter tilsettes 16 ml av en 10$ natriumbikarbonatsuspensjon, det omrøres i 15 min. , innstilles med fortynnes saltsyre på en pH på 7 og ekstraheres flere ganger med eter/kloroform. Ekstraktene inndampes i vakuum, derved oppnås 390 mg ( 92% av teoretisk) råprodukt, som er tilstrekkelig rent for videre omsetning.

Rf: 0,15 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25# NH3 = 50:25:6, v/v/v). 1 -O-heksadecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosf o-N-tert.-butoksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester: 225 mg (0,54 mmol) l-0-heksadecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosforsyre, 0,3 g (0,81 mmol) N-tert.butoksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester og 0,657 g (2,35 mmol) 2,4,6-triisopropylbenzensulfoklorid omrøres i 13 ml vannfri pyridin i 36 timer ved romtemperatur. Det tilsettes noen dråper vann, inndampes i vakuum, etterdestilleres flere ganger med toluen, resten opptas i eter, filtreres og inndampes. Det derved oppnådde råproduktet absorberes på kiselgel (35 g, "KG 60", Merck 40-63 yim) og elueres i to omganger med 50 ml kloroform og kloroform/metanol (9:1). Det utvinnes fraksjoner etter hver 15 ml. Fraksjonene 6-12 samles og inndampes. Derved oppnås 161 mg rent produkt (38$ av teoretisk).

Rf: 0,72 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25# NE3 = 65:35:5, v/v/v).

1-O-heksadecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-L-serin:

161 mg (0,21 mmol) l-0-heksadecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-N-tert.butoksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester oppløses i 30 ml tørr kloroform og gjennomstrømmes under omrøring ved O^ i 15 min. av tørr HCl-gass. Deretter innføres i 1 time tørt nitrogen. Oppløsningen vaskes deretter med fortynnet, vandig ammoniakk og vann og inndampes. Det derved oppnådde råproduktet renses over kiselgel (10 g "KG 60", Merck 40-63 jjm; elueringsmiddel: CHC13/CH30H/, 2:1 v/v med økende metanolgradient). Etter samling av de ved tynnsjiktkromato-gram-enhetlige fraksjonene og avdampning av oppløsnings-middelet oppnås 38 mg rent produkt (36$ av teoretisk).

Rf: 0,13 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CECI3/CH3OE/H2O = 50:25:4, v/v/v).

<C>22H45C1PN07(502> 02) Beregn. C52.63 H9,04 N2.79

Funnet C51,76 H8,82 N2,60

Analogt fremgangsmåten "beskrevet i eksempel 1 fremstilles forbindelsene i eksemplene 2-9: Eksempel 2: 1- O- heksadecyl- 2- fluor- 2- desoksy- glysero- 3- fosfo- L- serin

1-O-heksadecyl-2-fluor-2-desoksy-glysero-3-fosforsyre:

fra 334 mg (1,05 mmol) l-0-heksadecyl-2-fluor-2-desoksy-glyserol

Utbytte: 320 mg (76$ av teoretisk)

Rf: 0,15 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25£ NH3 = 50:25:6, v/v/v). l-0-heksadecyl-2-fluor-2-desoksy-glysero-3-f<p>sfo-N-tert.but-oksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester: fra 184 mg (0,46 mmol) l-0-heksadecyl-2-fluor-2-desoksy-glysero-3-fosforsyre

Utbytte: 190 mg rent produkt (54$ av teoretisk)

Rf: 0,75 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25# NE3 = 65:35:5, v/v/v).

1-O-heksadecyl-2-fluor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-L-serin: fra 190 mg (0,25 mmol) l-0-heksadecyl-2-fluor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-N-tert.butoksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester Utbytte: 88 mg rent produkt (72$ av teoretisk)

Rf: 0,12 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHC13/CH30H/H20 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 3: l- klor- l- desoks. y- 3- 0- heksadecyl- glysero- 2- fosfo- L- serin

1-klor-l-desoksy-3-0-heksadecyl-glysero-2-fosforsyre:

fra 350 mg (1,05 mmol) l-klor-l-desoksy-3-0-heksadecyl-glyserol

Utbytte: 322 mg rent produkt (74$ av teoretisk)

Rf: 0,18 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CE30H/25$é NH3 = 50:25:6, v/v/v). 1 - klor-l-desoksy-3-0-heksadecyl-glysero-2-fosf o-N-tert.-butoksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester: fra 322 mg (0,77 mmol) l-klor-l-desoksy-3-0-heksadecyl-glysero-2-fosforsyre

Utbytte: 318 mg rent produkt (53$ av teoretisk)

Rf: 0,80 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25# NE3 = 65:35:5, v/v/v).

l-klor-l-desoksy-3-0-heksadecyl-glysero-2-fosfo-L-serin:

fra 308 mg (0,40 mmol) l-klor-l-desoksy-3-0-heksadecyl-glysero-2-fosfo-N-tert.butoksykarbonyl-L-serinbenzhydryl-ester

Utbytte: 87 mg rent produkt (4356 av teoretisk)

Rf: 0,13 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 4: l- klor- l- desoksy- 3- 0- oktadecyl- glysero- 2- fosfo- L- serin

l-klor-l-desoksy-3-0-oktadecyl-glysero-2-fosforsyre:

fra 417 mg (1,15 mmol) l-klor-l-desoksy-3-0-oktadecyl-glyserol

Utbytte: 450 mg rent produkt ( 89% av teoretisk)

Ef: 0,18 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25# NH3 = 50:25:6, v/v/v). 1 - kl or -1 - de soksy - 3 - 0-oktadecyl -glysero-2-f osf o-N-tert.-butoksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester: fra 320 mg (0,72 mmol) l-klor-l-desoksy-3-0-oktadecyl-glysero-2-fosforsyre

Utbytte: 258 mg rent produkt (45$ av teoretisk)

Ef: 0,80 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25# NH"3 = 65:35:5, v/v/v).

1-klor-l-desoksy-3-0-oktadecyl-glysero-2-fosfo-L-serin:

fra 258 mg (0,32 mmol) l-klor-l-desoksy-3-0-oktadecyl-glysero-2-fosfo-N-tert.butoksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester Utbytte: 61 mg rent produkt (36$ av teoretisk)

Ef: 0,13 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 5: 1- O- oktadecyl- 2- fluor- 2- desoksy- glysero- 3- fosfo- L- serin

1-O-oktadecyl-2-fluor-2-desoksy-glysero-3-fosforsyre:

fra 346 mg (1 mmol) l-0-oktadecyl-2-fluor-2-desoksy-glyserol Utbytte: 324 mg rent produkt ( 7b% av teoretisk)

Ef: 0,15 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/255é NH3 = 50:25:6, v/v/v).

1-O-oktadecyl-2-fluor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-N-tert.butyl-oksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester: fra 307 mg (0,72 mmol) l-0-oktadecyl-2-fluor-2-desoksy-glysero-3-fosforsyre

Utbytte: 281 mg rent produkt (50$ av teoretisk)

Rf: 0,75 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CECl3/CH3OH/255é NH3 = 65:35:5, v/v/v).

1-O-oktadecyl-2-fluor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-L-serin:

fra 281 mg (0,36 mmol) l-0-oktadecyl-2-fluor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-N-tert.butoksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester Utbytte: 54 mg rent produkt ( 29% av teoretisk)

Ef: 0,13 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 6: 1- 0- oktadecyl- 2- klor- 2- desoksy- glysero- 3- fosfo- L- serin

1-0-oktadecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosforsyre:

fra 544 mg (1,5 mmol) l-0-oktadecyl-2-klor-2-desoksy-glyserol Utbytte: 597 mg rent produkt ( 90% av teoretisk)

Ef: 0,16 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25# NE3 = 50:25:6, v/v/v).

1- O-oktadecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-N-tert.-butoksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester: fra 443 mg (1 mmol) l-0-oktadecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosforsyre

Utbytte: 382 mg rent produkt (48$ av teoretisk)

1-O-oktadecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-L-serin:

fra 382 mg (0,48 mmol) l-0-oktadecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-N-tert.butoksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester

Utbytte 102 mg rent produkt (4056 av teoretisk)

Ef: 0,13 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHC13/CE30H/H20 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 7: l- 0- tetradecyl- 2- klor- 2- desoksy- glysero- 3- fosfo- L- serin l-0-tetradecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosforsyre: fra 368 mg (1,2 mmol) l-0-tetradecyl-2-klor-2-desoksy-glyserol

Utbytte: 445 mg rent produkt (9656 av teoretisk)

Rf: 0,14 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH3OH/2556 NH3 = 50:25:6, v/v/v). 1 - O-tetradecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosf o-N-tert.-butoksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester: fra 425 mg (1,1 mmol) l-0-tetradecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosforsyre

Utbytte: 423 mg rent produkt (5256 av teoretisk)

Ef: 0,72 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH3OH/2556 NH3 = 65:35:5, v/v/v).

l-0-tetradecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-L-serin:

fra 192 mg (0,26 mmol) l-0-tetradecyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-N-tert.butoksykarbonyl-L-serinbenzhydrylester Utbytte: 39,5 mg rent produkt (3256 av teoretisk)

Ef: 0,13 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHC13/CE30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 8: 1-0-( 1- metyl- heptadecyl )- 2- klor- 2- desoksy- glysero- 3- fosfo- L-serin 1-0-(1-metyl-heptadecyl)-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfor-syre: fra 363 mg (1 mmol) l-0-(1-metyl-heptadecyl)-2-klor-2-desoksy-glyserol

Utbytte: 372 mg rent produkt (8456 av teoretisk)

Rf: 0,15 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH3OH/2556 NH3 = 50:25:6, v/v/v).

1-0-(1-metyl-heptadecyl)-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfo-L-serin : fra 370 mng (0,59 mmol) l-0-(l-metyl-heptadecyl)-2-klor-2-desoksy-glysero-3-f osf o-N-tert .butoksykarbonyl-L-serinbenz-hydrylester

Utbytte: 122 mg rent produkt (3956 av teoretisk)

Rf: 0,14 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 9: 1- 0- pentyl- 2- klor- 2- desoksy- glycero- 3- fosfo- L- serin

l-0-pentyl-2-klor-2-desoksy-glycero-3-fosforsyre:

fra 271 mg (1,5 mmol) l-0-pentyl-2-klor-2-desoksy-glycerol Utbytte: 250 mg rent produkt (6456 av teoretisk)

Rf: 0,10 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH3OH/2556 NH3 = 50:25:6, v/v/v). l-0-pentyl-2-klor-2-desoksy-glycero-3-fosf o-N. tert .butoksy-karbonyl-L-ser inbenzhydry les ter : fra 208 mg (0,8 mmol) l-0-pentyl-2-klor-2-desoksy-glycero-3-fosforsyre

Utbytte: 407 mg rent produkt (8356 av teoretisk)

Rf: 0,70 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHCl3/CH3OH/255é NH3 = 65:35:5, v/v/v).

1-0-penty1-2-klor-2-desoksy-glycero-3-fosfo-L-serin:

fra 406 mg (0,66 mmol) l-0-pentyl-2-klor-2-desoksy-glycero-3-fosfo-N-tert.butoksy-L-serinbenzhydrylester Utbytte: 64 mg rent produkt ( 28% av teoretisk)

Rf: 0,11 ("Kieselgel 60", Alufolie Merck; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 10:

1- O- heksadecyl- 2- desoksy- glysero- 3- fosfo- L- serin

En blanding av 1 g L-serin, 1,9 ml 0,1 M acetatbuffer (pH 5,6) med 0,1 M CaCl2, 40 mg l-0-heksadecyl-2-desoksy-glysero-fosforsyreetylester, 2 ml eter/kloroform (9:1, v/v) og 100 mg av et fra ca. 500 g hodekål utvunnet fosfolipase-D-preparat omrøres intenst i 40 timer ved 40°C. Etter avkjøling til romtemperatur tilsettes 4,35 ml 0,1 M etylendiamintetra-eddiksyre. Det organiske oppløsningsmiddelet fjernes ved innledning av nitrogen. Blandingen omrøres _med 4,3 volumdeler kloroform/metanol (5:8, v/v) i 30 min. og det utfelte, ikke omsatte, serinet fjernes ved avsuging. Filtratet omrøres med 1 volumdel vann og 3,7 volumdeler kloroform i 10 min., den organiske fasen fraskilles og inndampes. Den oppnådde resten adskilles søylekromatografisk på 20 g karboksymetylcellulose ("Servacel CM 52"), elueringen foretas trinnvis med 75 ml kloroform (fraksjon 1), deretter hver gang 500 ml kloroform/metanol (9:1, 8:2, 7:3, 1:1, v/v), fraksjonene 2-5. Sluttproduktet oppnås fra fraksjon 5 i ren form.

Utbytte: 15 mg rent produkt ( 33% av teoretisk).

Rf: 0,13 ("Kieselgel 60", ferdigplate; CHC13/CH30H/E20 = 50:25:4, v/v/v).

Analogt denne fremgangsmåten fremstilles forbindelsene i eksemplene ll-2o.

Eksempel 11: l- O- heksadecvl- 2- 0- ( 2. 2 , 2- tr i f luoretyl )- glysero- 3- f osf o- L-serin

fra 40 mg l-0-heksadecyl-2-0-(2,2,2-trifluoretyl)-glysero-3-fosfo-kolin

Utbytte: 12 mg rent produkt (305° av teoretisk)

Rf: 0,13 ("Kieselgel 60", ferdigplate; CHC13/CH30H/E20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 12: l- O- heksadecyl- 2- 0-( 2 . 2 . 2- trif luoretyl )- glysero- 3- f osf o- L-serin

fra 40 mg l-0-heksadecyl-2-0-(2,2,2-trifluoretyl)-glysero-3-fosforsyre-brometylester

Utbytte: 13,5 mg rent produkt (35$ av teoretisk)

Rf: 0,13 ("Kieselgel 60", ferdigplate; CHC13/CH30H/H20 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 13:

1- klor- l- desoksy- 2- O- heksadecyl- glysero- 3- fosfo- L- serin

fra 40 mg l-klor-l-desoksy-2-0-heksadecyl-glysero-3-fosfo-kolin

Utbytte: 15 mg rent produkt (375° av teoretisk)

Rf: 0,14 ("Kieselgel 60", ferdigplate; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 14: l- 0-( 2 . 2 . 2- trif luoretyl ) - 2- O- heksadecyl - gl ysero- 3- f osf o- L-serin

fra 40 mg l-0-(2,2,2-trifluoretyl)-2-0-heksadecyl-glysero-3-fosfokolin ■

Utbytte: 18 mg rent produkt (4456 av teoretisk)

Rf: 0,13 ("Kieselgel 60", ferdigplate; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 15:

l- 0- eikosanyl- 2- klor- 2- desoksy- glysero- 3- fosfo- L- serin

fra 40 mg l-0-eikosanyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfor-syre-n-butylester

Utbytte: 14,5 mg rent produkt (3456 av teoretisk)

Rf: 0,15 ("Kieselgel 60", ferdigplate; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 16:

l- 0- triakontyl- 2- klor- 2- desoksy- glysero- 3- fosfo- L- serin

fra 60 mg l-0-triakontyl-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosfor-syreetylester

Utbytte: 14 mg rent produkt (3356 av teoretisk)

Rf: 0,20 ("Kieselgel 60", ferdigplate; CEC13/CE30H/E20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 17: 1- O- oktadecyl- 2- 0-( 2, 2. 2- tr ifluoretyl)- glysero- 3- fosf o- L-serin

fra 40 mg l-0-oktadecyl-2-0-(2,2,2-trifluoretyl)-glysero-3-fosforsyre-2-brornetylester

Utbytte: 13,5 g rent produkt (3256 av teoretisk)

Rf: 0,14 ("Kieselgel 60", ferdigplate; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 18: l- 0- eikosanyI- 2- 0-( 2. 2. 2- tr ifluoretyl)- glysero- 3- fosf o- L-serin

fra 40 mg l-0-eikosanyl-2-0-(2,2,2-trifluoretyl)-glysero-3-fosfokolin

Utbytte 16 mg rent produkt (4056 av teoretisk)

Rf: 0,14 ("Kieselgel 60", ferdigplate; CHC13/CH30E/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 19: l- klor- l- desoksy- 3- 0-( ci s- 9- oktadecenyl )- glysero- 2- f osf o- L-serin

fra 40 mg l-klor-l-desoksy-3-0-(cis-9-oktadecenyl)-glysero-2-fosforsyreetylester

Utbytte: 15,5 mg rent produkt (3456 av teoretisk)

Rf: 0,13 ("Kieselgel 60", ferdigplate; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Eksempel 20: 1- 0- ( 2- metoksy- oktadecyl) 2- klor- 2- desoksy- glysero- 3- fosfo- L-serin

fra 50 mg 1-0-(2-metoksy-oktadecyl)-2-klor-2-desoksy-glysero-3-fosforsyreetylester

Utbytte: 16 mg rent produkt (2856 av teoretisk)

Rf: 0,15 ("Kieselgel 60", ferdigplate; CHC13/CH30E/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Claims

Patentkrav Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive glysero-3(2)-fosfo-L-serinderivater med den generelle formelen hvori A står for usubstituert eller substituert (C5-C30)-alkoksy, usubstituert eller substituert (C5-C3Q)-alkenoksy, hvorved en dobbeltbinding i alkenoksyresten ikke utgår fra det C-atomet som er bundet til oksygenatomet, halogen eller en gruppe av den generelle formelen hvori n står for 0, 1, 2 eller 3, eller en av de to restene B og C, som er lik A eller forskjellig fra denne, har en for A angitt betydning eller står for hydrogen", og den andre resten står for en fosfatidyl-L-serin-gruppe av formelen idet kun en av restene A, B eller C står for (C5-C30)-alkoksy eller (C5-C3Q)-alkenoksy, eller farmasøytisk akseptable salter derav,karakterisert ved at en a) omsetter et glysero-3(2)-fosforsyrederivat av den gene- relle formelen

hvori

A er som definert i formel (I), en av restene D og E har en i formel (I) for A angitte betydning, eller står for hydrogen, og den andre resten står for en gruppe av den generelle formelen

hvori

X og Y enten er like og står for hydroksy eller halogen, eller Y står for laverealkoksy eller aryloksy, idet kun en av restene A, D eller E står for (C5-C3Q)-alkoksy eller (C5-C30)-alkenoksy, eller salter derav med et beskyttet L-serinderivat av den generelle formelen

hvori

Zi står for en karboksyl- og

Z2 står for en aminobeskyttelsesgruppe, fortrinnsvis i nærvær av et kondensasjonsmiddel, deretter avspaltes beskyttelsesgruppene Z^ og Z2 i en hvilken som helst rekkefølge eller samtidig og de eventuelt dannede glyserofosforsyreesteren eller -halogenidene forsåpes, eller ved at en b) bringer en glysero-3(2)-fosforsyreester av den generelle formelen hvori Å er som definert i formel (I), en av restene L og M har den i formel (I) for A angitte betydning, eller står for hydrogen, og den andre resten er en gruppe av den generelle formelen hvori Ri står for eventuelt med hydroksy eller halogen substituert (C1-C6)-alkyl, R2, R3 og R4, som er like eller forskjellige, står uavhengig av hverandre for hydrogen eller metyl, og n står for et helt tall fra 1 til 6, idet kun en av restene A, L eller M står for (C5-C30)-alkoksy eller (C5-C30)-alkenoksy, til omsetning med L-serin i nærvær av fosfolipase D, og de dannede forbindelsene av den generelle formel I eller saltene derav isoleres, og om ønsket, overføres en ved fremgagsmåtevariant a) eller b) oppnådd forbindelse av den generelle formel (I), eller et farmasøytisk ikke-akseptabelt salt derav til et farmasøytisk akseptabel salt.