PT97281A

PT97281A - Processo para a preparacao de novos derivados contendo fosforo

Info

Publication number: PT97281A
Application number: PT97281A
Authority: PT
Inventors: Roger Edward Markwell; Robert William Ward; Shahzad Sharroq Rahmann
Original assignee: Beecham Group Plc
Priority date: 1990-04-10
Filing date: 1991-04-08
Publication date: 1992-01-31
Also published as: ZA912574B; JPH05506651A; AU7650291A; GB9008065D0; EP0527761A1; WO1991015506A1; NZ237732A; IE911165A1; AU637903B2; CA2080228A1

Description

0 presente invente refere—se a novos derivados de fósforo, atos processos para as sua preparação e è sua utilização em medicina» Em particular, o presente invento refere-se à sua utilização como inibidores de enzimas da família colagenase de metaloproteases neutras, para o tratamento de doenças artríticas s outras» A família de enzimas colagenase dos mamíferos compreende numerosas proteases, exemplificada pela própria colagenase intersticial (tipo I), estremeiisinas (também conhecidas por proteoglicanases ou transirias) , fibroblasto e gelatinases leucó-citas polimorfonucleares ÍPMNL) (também conhecidas por colagen--Iv-ases) e "pump—1" ímetaloprotease putativa 1, metaloprotease uterina). A pertença à família colagenase de proteases dos mamíferos é evidente devido à posse de numerosas propriedades altamente características e experimentalmente verificáveis, et ai« , Biochem. -J » , 240 , 913, 1936? Breathnach et al. , ids Res., .15, 1139, 198 7? Mui ler et al., Biochem. u. , 1933? Collier et al_._ ,S J- Biol, Chem., 263, 6579, 1930? al», Biochem. d .. , 463, 1989 ? Quantin et al. ,

Pathol., 17, 445, 19803 A gama de aplicações terapêuticas do invento descrita anteriorroente reflete o papel fundamental do colagénio e de outros substratos protsínicos da família colagenase de enzimas na matriz do tecido conjuntivo por todo o corpo. As aplicações estendem-se ãs intervenções clinicas em muitas doenças e fenómenos que envolvem a destruição do colagénio e de outros componentes do tecido conjuntivo e também à remodelação de tecido desordenado ou normal t

Considera-se que os inibidores da família colagenase de enzimas proporcionam tratamentos úteis paras doenças artríticas, tais como artrite reumatóide e osteoartrite, reumatismo do tecida mole, policondrite e tendinits; doenças de reabsorção óssea, tais como osteoporose, doença de Paget, hi per para tiroidismo e colestí 'jína? a destruição aumentada do colagénio que ocorre em ) associação com a diabetes? as classes recessivas da epidermose distréfica bulhosa? doença peridsntal e consequências relacionadas com a produção genqival de colagenase, ou de libertação da colagenase FliNL a que se segue a infiltração celular para a gengiva inflamada., incluindo o combate à maior susceptibilidade dos pacientes diabéticos à doença ρ-eridental ? ulceração cárnea, e.g. induzida por álcalis ou outras queimaduras, por radiação, por deficiência de vitamina E ou retirsóide? ulceração da pele e do tracto gastro-intestinal e cura de ferimentos anormal? condições pós-operatórias, que incluem a anastomose do cólon, sm que os níveis de colagenase são aumentados? cancro-, onde os membros da família colagenase de enzimas têm sido implicados na neovascularização necessária para suportar o crescimento e sobrevivência do tumor EP„ Basset et al.. feture, 348, 699, 19903 na remodelação de tecido necessária para acomodar o crescimento de tumores primários e secundários e na penetração das células de tumor através da membrana de base das paredes vasculares durante a metástase? e as doenças da desmielinização dos sistemas nervosos central e periférico, incluindo síndromas em que a perda de mislina é o evento patológico principal e aqueles em que a desmielinização resulta na atrofia do axánio. A degradação da mislina nestas doenças, exemplifiçada pela sselerose múltipla, é mediada por membros da família colagenase de enzimas»

Como um exemplo particular do valor terapêutico dos inibidores da família colagenase de enzimas, tais como são revelados no presente invento, as doenças artríticas crónicas que levam -á perda proteog1i cano artxcu1açóes, c o1agenases , extensa de colagénio, componentes de eiastina e da cartilagem, osso © tendões no interior das submeter-se-iam ao tratamento com inibidores das proteoglicanases íestromelisinas) e geiatinases. tidas correntemente como sendo as principais enzimas envolvidas.

Estas enzimas têm sido detectadas em extractos do tecido sinovial e cartilagíneo a t@m sido também extensamente estudadas em culturas de tecidos de uma larga gama de tecidos conjuntivos, À parte o controlo da biassíntese, secreção e activação das enzimas, a regulação natural mais importante destas enzimas nos estados normal e de doença, é considerada ser a produção endógena de inibidores tais como a família de Inibidor se Tecido de Metaloproteases (TIHPS) e α-2-macroglobulina, Um desequilíbrio entre os níveis locais das enzimas proteolíticas e inibidores naturais permitirá que ocorra a destruição de componentes do tecido conjuntivo.

Os compostos descritos no presente invento, sendo inibidores sintéticos e de baixo peso molecular desta família de enzimas, oferecem um caminho terapeuticamente útil em que um mais normal ou não patológico equilíbrio entre a inibição e a activi-dade enzimática pode ser restaurada; por conseguinte, eles actuam no sentido de complementar © suplementar os inibidores d© enzima endógenos, Na verdade, devido a estas enzimas actuarem normaimente apenas dentro de ambientes pericelulares restritos, antes de serem inactivadas por inibidores que circulam na sangue e se apresentarem na maioria dos exsudatos inflamatórios, os inibidores de baixo peso molecular aqui reveladas podem ser mais eficazes do que os inibidores proteínicos endógenos que são excluídos pelo seu tamanho das regiões localizadas de destruição do tecido conjuntivo.

Q Fedida de Patente Europeia NS 88 3íΦ 492.9 (Beecham Group) revela uma classe de derivadas de fósforo que ttm activi-dade como inibidares de colagenase e utilidade no tratamento da artrite reumatóide e doenças relacionadas nas quais a actividad© :olagenolí fc.ica é um fac: :or de contribuição. >

Novos compostos sstruturalmente relacionados foram agora descobertos, os quais são inibidores de colagenase e, por conseguinte, de utilidade potencial no tratamento rfe doenças em que a actividade colagenolitica e a remodelação de tecido estão implicadas. é proporcionado um seu sal, solvato ou

De acordo com o presente invento, composto de fórmula ds estrutura íI) ou um hidratos >

R representa hidrogénio, alquilo Cj_^ ou henzilo facultativa- men te subs ti tu.í. d o! “epresenta hidrogénio ou alquilo C., representa alquilo p e 7 I 1 Η e R,» formam sx inteiro de conjuntamente sde 1 até 9,

a porção - (CH._, í CH. μ ) — onde é urri q q é um inteiro desde 2 a i Θ e a porção -(CH^) --- é adjacente ao ^ P suporta R-, marcado com um asterisco- átomo de carbono que na fórmula de estrutura < I) e ) representa onde

Rr- é escolhido de entre hidrogénio, alquilo C, , , alcoKicarbonilo C-,__i5 aroílo, aralquilo ou xicarbonilo em cada um dos quais a porção arilo é vamente substituída» aluanaíío aralquilo-faculiati- alquilo um grupo porção a A menos que especificado de outra maneira, cada grupo é, preferivelmente, um grupo C^_g? mais preferivelmente, C, , e pode ser de cadeia linear ou ramificada. Uma l—ts rilo é, preferivelmente, fenilo»

Qs substituintes facultativos podem ser escolhidos de entre OH, alquil halogéneo. para uma porção arilo : C alcoKi C , e 1—& i ~ò R etilo ou ben representa, preferivelmente ilo, especialmente hidrogénio hidrogén meti lo,

Os valores para Rj incluem hidrogénio, me ti lo,, etilo, isopropilo e n-butilo, Ha forma de grupo alquilo, R^ representa, preferivelmente, metilo ou etilo» 8 - r

R.-j representa, prs ferivs 1 msnte» n-butilo, isp-butiio ::>u sec-buti 1d, especial mente iso-butilo»

Os valores para Fu e E. em conjunto incluem — ίϋΗ„> ~X~ onde ρ ε q têm valores tais que R-r e Rfazem parte de ai. -J* : uma estrutura azalactama de 11 ou 13 até 16 membros e X representa -MR,-·" onde R,_ representa, hidrogénio., meti 1 o, ben z i 1 q , t- bu to i c a r bon i 1 o ou her> z i 1 ο x i c a r bon i I o» São mais preferidos o formam conjuntamente a porção rompastos em que R-r CCi-i-,) -X-CCR-J -2 p 2 q onde ρ é 4 e q é 5, ou. p é 3 e q é 6. ? QU P S 4 q è ó, OU p é 4 e q é 3 e X r e ρ r esen t a — l1 IRc--, onde t J R5 rep! resenta hidrogénio ou metilo» Os compostos de f órs mula de estrutura Cl > podem formar sais com bases, e»g» hidróxido de sódio» Os compostos de formula de estrutura < I) têm um átomo de azoto básico e podem formar sais par adição de ácido, e«g. com ácido clorídrico» Estes compostos fazem parte do presente invento»

Quando os compostos de fórmula de estrutura (I), ou os seus sais, formam solvatos ou hidratos, estes também formam um aspecto do presente invento»

Os compostos de fórmula de estrutura Cl) têm pelo menos dois, e podem ter trás ou mais centros assimétricos e, por conseguinte, existem em mais do que uma forma estereomérica, 0 inventa estende-se a todas estas formas e ás suas misturas, que incluem racematos e misturas diastereoméricas»

Os isómeros preferidos são os que têm a configuração S no centro quiral que suporta E,, e a configuração S no centro quiral que suporta R-*, .Ji estrutura <I). marcados com um asterisco na fórmula de

Os compostos de fórmula de estrutura (I), ou os seus sais, solvatos ou hidrates, estio preferivelmente numa forma farmaceuticamente aceitável» Por forma farmaceuticamente aceitável, quer dizer, inter aliai de um nível de pureza farmaceutica— mente aceitável, excluindo os aditivos farmacêuticos normais, tais como diluent.es e agentes de suporte, e que nlo incluem nenhum material considerado tóKico nos níveis normais de dosagem. saiu eu h-:

Os compostos de fórmula de estrutura (I), ou os seus solvatos ou hidratos, estio preferivelmente numa forma ancialmente pura. Uma forma substancialmente pura conterá geralmente pelo menos htí %, numa 75 %, mais preferivelmente 9Θ % e ou 99 % do composto de fórmula de solvato» base ponderai, preferivelmente ainda mais preferivelmente 95 % estrutura Cl), ou o seu sal ou

Os compostos de fórmula de estrutura Cl), ou os seus sais, solvatos ou hidratas, podem ser isolados na forma de sólidos cristalinos ou na forma de espumas ou gomas.

Uma forma farmaceuticamente aceitável preferida é a forma c rista1ina» 0 presente de estrutura (I), ou invento proporciona os compostos de fórmula os seus sais, solvatos ou hidratos farmaceu ticamente aceitáveis, para util activos, particularmente como saçlo como agentes terapêuticos agentes para o tratamento de de condições em qu.e ocorre a degradação do tecido conjuntivo outros componentes proteínicos músculo do esqueleto que resul do corpo,, tais como desordens do tam da actividade colagenolítica, 10

I particularmente reumatismo e/ou condições artríticas e remodelação do tecido. pe* COÍft pOStQS utilidade potencial no degradação da mielins em outras condições em me ta1oprotsases neu t ra < Ϊ ) tíiff! também a prevenção da periférico? e colagenase de outro„ de fórmula de es-trutura tratamento do cancro? para no sistema nervoso central s que os membros da família s f/ãííí um papel patológico ou

a □ pre preparação de •ente invento também proporciona um proce um composto de fórmula de estrutura (I), -•O para processo esse que compreende a conversão da um grupo R,-,r. para hidrogénio por separação de um grupo R,-,A de um composto de fórmula de v estrutura (II)s

em que R.^ representa alquilo, fsnilo facultativa,mente substituído ou benzi lo facultativamente substituído? R'2”i representa hidrogénio, alquilo, fenilo facultativamente substituído ou benzi lo facultativamente substituído? e R-j 3 R^3 R^ e R^ são definidas da mesma maneira que para a fórmula 5 de estrutura <I) para hidrogénio. e, quando necessário, a conversão de R. A separação de R.~,^ e, quando necessário, a de Rt,. , pode ser levada a cabo em ácido ou álcali aquoso ou utilizando um haleto de trimetilsililo, preferivelmente faromotrimetilsilana, num solvente inerte, por exemplo diclorometano ou acetonitrilo. Os ésteres de benzilo podem aiternativamente ser removidos por hidrogenélise ou outros processos de desbenzilação padrão. Os resíduos de fenilo podem ser removidos por hidrogensção sobre 6 x i d o de p 1 a t i n a„

Quando ambos os R.-^ e R.-,^ são alquilo, a separação apenas de R.-,a, para dar um composto de fórmula de estrutura C11 > em que R.-^ representa hidrogénio s R->j alquilo, que é um composto de fórmula de estrutura (I) em que R representa alquilo, pode ser levada a cabo por tratamento com álcali em excesso sob condições suaves, por exemplo com hidróxido de sódio aquoso num solvente alcoólico è temperatura ambiente.

De modo semelhante, quando Ré benzi 1í facultativa-

grupo benzi lo apenas pode um composto de fórmula de drogénio e R01 alquiles. o!» X ments substituído e R.-^ é alquilo, o ser separado por hidroqsnação para dar estrutura ÍII) em que-? R.~representa h guinte, dar um A separação de um grupo alquilo R ser levada a cabo como ss descreveu composto de fórmula; de estrutura (I) pode, por anter iormen em que R re cons te pa presen ,ra hidrogénio.

Quando R num representa hidrogénio e composto de fórmula de estrutura R-71 num composto de fórmula de

Cl) estrutura 12 ϊ

ίΙΣ) não representa hidrogénio, então mas também de R.-,.. é convenientemente çlo» Preferivelmente, R.-lA e R.·-, são jC.k> jlL meti lo, etilo ou benzilo» a separação não só d efectuada numa única ambos alquilo, tal

e R 1 reac— como rmula de sstrutu-

Será constatado qus os compostos dt próprios ra (II), em que R-,., representa hidrogénio, são eles jTÍ Λ compostos do invento ds fórmula de estrutura (I),

Os compostos de fórmula de estrutura (II) podem ser preparadas por tratamento de um composto de fórmula de estrutura (111) s

(III)

esíi que R ^ , a fórmula represeri ta R-;i R.--,> e R01 À< V j£i i. de estrutura hidrogénio), são dsfinidos de mesma maneira (II ) (com a 0 ;f; iie peão de que com um composto de fórmula de que para não estrutura (IV) ο

em que R-* e R^? canjuntamente, s-So definidos da mesma maneira que para a fórmula-de estrutura (I). A rea< r* íSq : pr efsriv B1 ll£< en te 1 __ 1 trr /et O eE a i. abo na pr esença de um aqen te ; de ac ΟΠ 1 amento. 4* i -Lite i como diciclo -hexil car bod iimida DU i -et 5.1 -3-L3- ~ i d X met il amino) pro ρ i 1 j c a rbc odiimi da ,, hidr QC 1 areto, na pr esenc: {?. de 2L —hi d ro xi benzot ria sole, ou util i zando 1, 1 ' -· carbo nil di imida Am ::<le;i num ; 50 lv ente xnei i· ir. al C QffiO diclorom eta no ou acetoni triIo„ do grupo R._,. pode, em seguida,, processos descritos anteriormente de fórmula de estrutura (!) para "utura (II) em que R^^ representa A separação seiectiva r-r .ievada a caibo uixlizanoo os para a preparação de compostos dar compostos ds fórmula de estr h i d rogén io„

Os compostos intermediários de fórmula de estrutura podem ser preparados pelo tratamento de um composto de a de estrutura CV) , ou um seu saí i R, OR \ 20 NH.

/ OR 21

(V) BHW que R1 ? R.-,φ e A- V t)m Λ são dsf inidos da mesma nsan e i r a que para a de estrutura (III), com um comi: sosto de fórmula . de es tru.— T -n. \ X H } ou (VIB), ou um seu sal= r2

?2

R11 C02r12 (VIA)

Em que R„ é definido da mesma maneira que para a fórmula de estrutura. (I), R^1 é um grupo separável , tal coma

Paloqáneo, íBetariossulfoniloxi ou trifluorametanossu.lfoniloKi, e R _ reprsssnta i· 4« hidroqér \ia ou um grupo ds protecção de carbouilo Θ5 £ cí remoção d c? Li ϊΠ grupo de irotecçlo de carbonilo R10. 0 método prefer ido é a fScUIÇ· ão de (V) c :om (VIA)»

Quando é utilizado um composto de fórmula de estrutura <VIB>, a aminaçio redutora pode ser levada a cabo par hidrogena-ção sobre um catalisador de metal nobre, tal como paládio sobre carbono, au por reacc-Io com cianoboro—hidreto de sódio a pH entre 6 e 7. Os 501ventes de álcool alquilico inferior, tal como metanol e etanol, são adequados para ambas as reacçSes. Estas reacçSes podem ser levadas a cabo na presença de crivos moleculares « A reacção de hidrogenação é preferida, mas este processo impede a utilização de compostos de fórmulas de estrutura (V) e (VIB) em que qualquer dos grupos Rr?1 ou R10 representa

* V

protecção de carboxilo é rupos de protecçlo éster drãa de hidrólise básica ido de sódio aquoso 1 N em em 1,4—dioxano» benzilo» Preferivelmente» um grupa de um éster de metiio ou de etilo» Os g pode® ser removidos sob condições pa·· utilizando base diluída tal como hidróx metanol ou hidróxido de potássio aquoso

Quando o composto de fórmula de estrutura CV) está na forma da base livre, o composto de fórmula de estrutura iVIB) é adequadamente um a-cetoéster (R^_ = alquilo) 5

Quando o composto de fórmula de estrutura (V) é um sal, tal como o sal hidrocloreto, o composta de fórmula de estrutura (VIB) é adequadamente um sal «-cetoácido íR^? - H), por exemplo, o sal de sódio» A preparação de compostos de fórmula de estrutura (III), utilizando um composto de fórmula de estrutura (VIA), pode ser levada a cabo sob condições de alquilaçao padrão» Um grupo separável de halogénio é, preferivelmente, bromo e um grupo separável com base em oxigénio ê, preferivelmente, trifluorometa— nossu1foni1oxi. >

Os compostos de fórmula alternativamente, ser preparados pela de fórmula de estrutura (VII), ou um s s s t r utura condensação de •eu sa 1 r. III) podem, um composto

R2 h2n ^2^2 (vil, eiis que R.-, é definido da mesma maneira que para a fórmula de estrutura (í) e R, é um grupo de protecção de carboidloj com um aldeído R^-CHO, em que R* é definido da mesma maneira que para a fórmula de estrutura (I) e tratando o produto de condensação com um dialquil ou trialquilfosfito apropriado, por exemplo dimetil-fosfito, e removendo depois disso o grupo de protecção de carbo-xilo,, 0 grupo carboxilo έ convenientemente protegido na forma de um éster de alquilo ou de benzilo, o qual pode ser removido utilizando condições de hidrólise ou de hidrogenação padrão.

Como se descreveu anteriormente em conexão com a aminação redutora dos compostos de fórmula de estrutura ÍVIB), onde um grupo de protecçlo benzilo R é removido por hidrogena— çãc, então Re R,,, estão restringidos a alquilo. v ϋ. i

Alternativamente, os compostos de fórmula de estrutura <11> ? em que e R21 representam alquilo ou benzilo facultativamente substituído, podem ser preparados pela reacção de um composto de fórmula de estrutura (VIII) i

(VIII) na qual Re R„ fórmula de estrutura são definidos da mesma maneira que para a < I >,, com um composto de fórmula de estrutura '11 “”.A.

OR 21 (IX) na qu.a 1 Rj é definido da mesma maneira que para a fórmula de estrutura (I), e R?1 representam alquilo, fenilo facultativa-mente substituído du. benzi lo facultativamente substituído e é um grupo separável definido da mesma maneira que para a fórmula de estrutura (VIA) , na. presença, de uma base tal como trietilamina. C í ,, 8-bisí dimeti 1 amina) -naf- potássio anidro num solvente ou Proton Sponge (esponja protónica) talenoi, ou utilizando carbonato de âlCOÓlÍCO „

Quando R|^ é um grupo separável com base em oxigénio, por exemplo trifluorometanossulfoniloxi, que é preferido, o deslocamento do grupo separável é convenientemente levado a cabo j

na presença de Proton típonge num soivents inerte, tal coma acetonitrilo ou diclorometano, durante um psrÍDdD de tempo de vários dias na ausência da luz.

Uma outra preparação alternativa de compostos de fórmula de estrutura (Ili) pode ser ieVada a cabo pela reacção de um composto de fórmula de estrutura < 3 χ)? conforme anteriormente íqí ue finidOj, com um composto foi· mu 1¾ de estrutura (VII) na qual ^ grupo de protecção de carboxilo, utilizando condições conforme as descritas para a reacção dos compostos fórmula de estrutura (VIII) com compostos fórmula de estrutura (IX) s, depois disso, a remoção do çru.po de protecção R

Os grupos de protecção de carboxilo adequados incluem os grupos alquilo, benzilo, trialquilsilila e trialquilsilileti·-lo. Um grupo de protecção de trialquilsililo é especialmente útil na medida em que pode ser prontamente .incorporado, in si tu. por exemplo pela adição de hexametildissilano aos reagentes em acetonitrilo na presença de trietilamina e selectivamente removido em metanol aquoso, sem a imposição de quaisquer limitações nos valores de ROÍS e R01 . Outros agentes de si 1 ilação incluem cloreto de trimetilsililo e N»N—dietiltrimetilsililamina.

Um grupo de protecção de alquilcarboxilo Ri? pode ser removido por hidrólise básica, por exemplo utilizando hidróxido de sódio em metanol aquoso ou hidróxido de potássio em 1,4-dioxa-no aquoso.

Apreciar-se-á que quando o grupo de protecção de carboxilo Rr-, é alquilo, e R?1 podem representar alquila, fenilo ou derivados de benzilo, mas quando R|2 representa um qrupo benzilo, e R.-,., são limitados a alquilo e fenilo. * * jiv Λ ΐ

Quando oe compostas de fórmula de estrutura (III) são preparados por esta via? prefere~-se que R._t_ e representem benzi lo e R^j represente- trif luorometanossulfonilosi no composto de fórmula de estrutura (IX) e R1Í7 represente trimetilsililo ou metilo no composto de fórmula de estrutura (Vil),

I

Qs compostos de fórmula de estrutura (VIII) podem ser preparados pelo tratamento de um composto de fórmula de estrutura (VII)

I *2

H2N C02R12 (VII) em que é definido da mesma maneira que para a fórmula de estrutura (1), Rrepresenta hidrogénio e em que o grupo amino é X <u facultativamente protegido? com um composto de fórmula de estrutura (IV) conforme foi anteriormente definido? na presença de um agente de acoplamento conforme foi anteriormente descrito para a preparação de compostas de fórmula de estrutura (II) a partir de compostos de fórmulas de estrutura (III) e (IV),

Os compostos de fórmula de estrutura (IX) podem ser preparados a partir de d ©í*“ ivados de hidroxialqui1fosfonato por conversão do grupo hidroxilo para o grupo separável Rjj por métodos convencionais. Por exemplo? onda Rjj representa triflua— rametanossulfoniloxi? pode ser adicionado anidrido trifluorometa-nossulfónico a uma solução do hidroxialquilfosfonato num solvente 2«

* I

inerte tal cama diclorometano5 sendo a reacção levada a cabo a temperatura reduzida sob uma atmosfera inerte, de acordo com o método geral de E. Vedejs et al., Journal of Organic Chemistry 5Θ, 2165? <1985),

Os compostos de hidroxialquilofosfonato podem por sua vs? ser preparados pela reacção do fosfito correspondente, por exemplo dibenzilfosfita, com um aldeído R^-CHO no qual é definido do mesmo modo qu.e para a fórmula de estrutura (I) de acordo com o método geral de F. Texier-Bouliet e A» Foucaud, Synthesis, 916 (1982)« Os fosfitos de benzi lo e de alquilo ou estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados a partir de materiais de partida comercialmente disponíveis por métodos padrlo.

Os compostos intermediários de fórmula de estrutura \V> ou são compostos conhecidos ou podem ser preparados a. partir de derivados de ácido aminoalquilfosfónico utilizando processos padrão para introduzir e R._ conforme for requerido, A protecção da função arai na durante estas reacçSes pode «8Γ nSfC&SSâr* J.ci η A introdução de um grupo meti lo e R0, pode ser realizada pela reacção com diazometano num solvente inerte adequado..

Os compostos de fórmula de estrutura (V) de configuração fixa podem ser preparados pelo método geral de R. Jacquier et al,, Phosphorus and Sulfur 36, 73 (1988).

Qs compostos do férmu.1 preparados por oxidação da função fórmula de estrutura (Xis de estrutura (IV) podem ser Icool primário num composta de

Y

I

Η NH H

Z-N-(CH2)p γρ N- (CH2) q-OH 0 (X)

Os grupos de grupos t-butoxicarbonilo protecção de acoto adequados ÍBOC) e benzilo-x icarbonilo. incluem

em que p e são definidos do mesmo modo que para a fórmul a de estrutura (I >, Y representa um grupo de protecção de azoto e 7 representa R para dar o aldeído correspondente, seguido pe la remoção de 7 onde R^ representa um grupo acilo. c ic1izaç ãO remoção do grupo de

redução e, depois di protecção de azoto Y 50, quando n scsssár 'XO e a intercon :versSo de cabo utilizando clorocrode oxidação de Swern, por η oxxdação pode ser levada a mato de piridínio, ou. sob as condições exemplo pelo tratamento com dime ilsulfóxido e ura haleto de acilo segui d o por t r ieti1amina a 1 - , d» Org. Chem»,, 43, de aminação redutora catalítica sobre um cat por 5 conforme está descrito por D« Swern et 2480 (1978). Os passos de ciclização e podem ser efectuados por hidrogenação alisador de metal nobre adequado. 3

exemplo paládio em carbono, ou por reacção com cianoboro-hidreta de sódio ou boro—hidreto de sódio. Nalguns casos a produção de azalactamas pode ser aumentada levando a cabo o passo de aminação redutora sob condições acídicas.

Os grupos de protecçlo de azoto podem ser removidos por métodos padrão. Um grupo t—butoxicarbonilo ÍBQCJ pode ser removido por tratamento com ácido trifluoroacético a temperatura reduzida» Quando Z representa um grupo de protecção de azoto, pode ser escolhido para suportar a concomitante separação durante a reacçlo de ciclização para dar um composto em que R,_ representa hidrogénio» Por exemplo, quando Z representa um grupo benziloxi-carbonizo, ele será prontamente· removido por hidrogenação catalítica»

Um R,- hidrogénio pode ser interconvertido para um grupo vi al •J quilo C1 α araiquilo ou arilo. 0 g anel azalac ta ma pode ser al Lquil ado para R5“ Por ex emplo , o grupo araina pode ser roet x 1 D R5» 0 pa ssu de metj LlaçS o pode ser nação > catai 4 -l· ica sobre um r.jyhg lisador de por exemplo paládio em carbono, na presença de formaldeído aquoso» Outros processos de meti1ação adequados são descritos por E» Askitoglu et al», Helv» Chim» Acta, 68, 75Θ (1985); E. Engler et al»» Helv» Chim» Acta, 68, 789 (1985)? e M. Lennon et al» . J » Chem» Soc. (perkin I), 622 <1975).

Os compostos de fórmula de estrutura (X) podem ser preparados pela reacção de um composto de fórmula de estrutura íXI) s Η I z-n-(ch2)p Υ t m

•OH (XI) em que ps Y e Z são definidos do mesmo .modo que para a fórmula de estrutura <X) s com um composto de fórmula· de estrutura (XII );i (XII) em que q é definido do mesmo modo qus para a fórmula de estrutura (X > A reacçSo pode ser levad padrão para a formação de uma amida lico e uma amina, por exemplo utili tal c omo 151' ~c a r bon i. 1 d i i m i d a z o 1 e, ou 1 - (3-diffiet .i laminopropi 1) -3-eti 1 c a a cabo utilizando processos a partir de um ácido carbonizando um agente de acoplamento 1,3-diciclo-heMiIcarbodiimida arbodiimida. de ácido podem ser

Os compostos de fórmula de estrutura <XI> são derivados diaminoalcanóico. Estes são compostos conhecidos ou. preparados a partir de materiais de partida conhecidos por métodos padrão. em que

Por exemplo, o composto de fórmula R-^ e representam conjuntemente de estrutur — íCH.-i} —X-2 p

* τ

ande ρ έ 3, q é 6 ε X representa —NH-, é preparado a partir de um composto de fórmula de estrutura (XI) derivado de ornitina que se encontra comercialmente disponível»

Os compostas de fórmula de estrutura (IV) =, em que R? e R, representam conjuntamente ---(CH-,) , onde p é 4, q i* £ D C| ‘ ) é 3, 5 ou b e X representa -NH-, são preparados a partir de um composto de fórmula de estrutura (XI) derivado de um aminoácido de lisina, 0 composto de fórmula de estrutura (XI)» derivado de S--1 isina, em que Y representa t-huioKicarbonilo e 2 representa bencilOKibarbonilo, está comercialmente disponível»

De modo SíríiTifcí I flíãf! fcí£ 3 O COiTípG':t>tlO ds *f ι_/Γ*Π*ΐυ 1 â ds est.ru (l V),, em que R_, e R^ representam conjuntamente - (CH^j) - (CR._,) “, onde p é 1s q é 8 e X representa —NH-, pode *- q p rsps.r sdu a partir do ácido 2ϊ3-diaminopropiónico«

Os c :ompostos de fórmula de estrutura (VII) sSa ou derivados de aminoácid o conhecidos ou podem ser preparados a partir destes derivados por métodos conhecia os» Os compostos de

fórmula de estrutura (VIA) e CVIB) são ou compostos conhecidos ou podem ser preparados a partir de compostos conhecidos por métodos conhecidos»

Os intermediários de fórmula de estrutura (II)? (III) e certos intermediários de fórmula de estrutura (V) aqui revelados são compostos novos e formam um aspecto do presente invento assim como o são os processos descritos para a sua preparação» base

Quando obteníveis? os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula de estrutura (I) podem ser formados convencionalmente por reacção com o ácido ou base apropriados»

Podem ser formado· te apropr i ado« salvatos par cristalização a partir da solven-

Conforme foi anteriarmente mencionado, os compostos de fórmula de estrutura (I) existem em mais do que uma forma diaste-reomérica. Quando os processos do invento produzem misturas deles, os isómeros individuais podem ser separadas um da outra par cromatografia, e»g. HPLC.

Alternativamente, os compostos diastereomérxcos separados podem ser obtidos utilizando-se materiais de partida esterso-isomericamente puros ou separando-se os isómeros desejados dos intermediários em qualquer passo do processo sintético global e convertendo os intermediários para compostos de fórmula de estrutura \ I '> .

Será apreciado que quando um diastereoisómero isolado de um composto de fórmula de estrutura (I) é preparado por mais do que uma variante do processo conforme anteriormente descrito, cada um dos quais permite definir um centra quiral diferente, pode ser possível deduzir a configuração num centro quiral que não é pré-determinado utilizando uma variante particular do processo.

Além disso, apreciar-se-á que não obstante a configuração absoluta num centro quiral particular poder não ser conhecida, à possível caractsrizsr um dado diastersómero relativamente ao seu epímero por meio da refer@nc.la à tíirecção em que o plano de luz polarizada é rodado. 0 presente invento farmacêutica que compreende um roporciona ainda uma composição composto de fórmula de estrutura :6 - * r

íl>, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamènte aceitável, e um agente de suporte farmaceuticamente aceitável,

Uma composição deste inventa é útil no tratamento de desordens músculo—esqueléticas, particularmente doenças artríticas, e para a modulação do remodelação de tecido»

Uma composição do invento também tem utilidade potencial na tratamento do cancro? para a prevenção da degradação da mielina no sistema nervoso central e periférico? e noutras condições em que os membros da família colagenase de metalopro-teases neutras t'§'m papéis patológicos ou outros»

Uma composição do invento, que pode ser preparada por mistura, pode conter um diluente, agente ligante, agente de enchimento, agente de desintegração, agente de aramatização, agente de coloração, agente de lubrificação cu agente de conservação de um modo convencional» Estes excipientes convencionais podem ser empregues de uma maneira, convencional, por exemplo como na preparação de composições de inibídores de enzimas relacionados com peptídeos, tais como o inibidor de ACE enalapril.

Uma composição do invento pode ser adaptada para administração oral, tópica, rectai ou parentérica, mas é preferida a administração oral» As composições parantéricas podem ser administradas intravenosamente, intramuscularmente, intra-articu-larmenta, intradermicarasnte, subcutaneamente ou no fluido cere— bro-espinal =.

Preferivelmente, uma composição farmacfutica do invento está em forma de dosagem unitária e numa forma adaptada para utilização em campos médicos ou veterinários» Por exemplo, tais preparações podem estar numa embalagem acompanhadas por 27 instruções escritas ou impressas para utilização como agentes no tratamento ou profilaxia de qualquer das desordens anteriormente mencionadas» ft gama de dosagem adequada para os compostos do invento pode variar de composto para. composto e pode depender da condição a ser tratada» Dependerá também, ínter alia, da relação da potência para a absorhabi1idade e do modo de administração esco!hido» 0 composto ou composição do invento pode ser formulado para administração por qualquer via, dependendo a via preferida da desordem para a qual se requer o tratamento e está preferivelmente em forma de dosagem unitária ou numa forma que um paciente humano pode administrar a ele próprio numa única dosagem.

As composições pode, por exemplo, estar na forma de comprimidos, cápsulas, saqueias, frascos, pós, grânulos, pastilhas, pós reconstituíveia, ou preparações liquidas, por exemplo soluções ou suspensões ou. supositórios. >

As composições, por exemplo as adequadas para administração oral, podem conter excipientes convencionais tais como agentes ligantes, por exemplo xarope, au-âcia, gelatina, sorbitol, tragacanto, ou polivinilpirrolidona? agentes de enchimento, por fosfato de cálcio, exemplo lactose, açúcar, amido d*- milho. sorbitol ou. glicina$ lubrificantes para comprimidos, por exemplo sstearato de magnésioj desintegrsntes, por exemplo amido, polivi— nilpirrolidona, glicolato de amido e sódio ou celulose microcris-talinas ou agentes molhantes farmaceuticamente aceitáveis tais como sulfato de sódio e laurilo. 28 28 >

As composições podem ser obtidas por métodos convencionais de mistura, de enchimento, de fazer comprimidos ou semelhantes. Podem ser usadas operações repetidas de mistura para distribuir completamente o agente activo nas composições que empregam grandes quantidades de agentes de enchimento. Quando a composição se encontra na forma de um comprimido, pó ou pastilha, pode ser utilizado qualquer agente de suporte adequado para formulação de composições farmacêuticas sólidas, sendo exemplos o estearato de magnésio, amido, glicose, lactose, sacarose, farinha de arroz e giz» Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na prática farmacêutica normal, em particular com um revestimento entérico» A composição pode também estar na forma de uma cápsula ingerível, por exemplo de gelatina contendo o composto, se desejado com um agente de suporte ou outras excipientes. Por exemplo, numa cápsula de gelatina dura que contém a quantidade requerida de um composto do invento na forma de um pó ou. granulado em intima mistura com um lubrificante, tal como sstsarato de magnésio, um agente de enchimento, tal como celulose microcristalins e um desintegrante, tal como glicolato de sódio © amido»

As composições para administração oral na forma de líquidos podem estar na forma de, por exemplo, emulsões, xaropes ou elixires, ou podem ser apresentadas como um produto seco para reconstituição com água ou outro veículo adequado antes da utilização» Estas composições líquidas podem conter aditivos convencionais tais como agentes de suspensão, por exemplo sorbi-tol, xarope, metilcelulose, gelatina, hidroxietilcelulose, carboximetilcelulose, gel de estearato de alumínio, gorduras comestíveis hidrogenadas; agentes de emulsificação, por exemplo lecitina, monoaleato de sarbitano, ou acácia? veículos aquosos ou não aquosos, os quais incluem óleos comestíveis, por exemplo óleo de amêndoa, ά1eo de coca fraccianada, ésteres oleosos, por 29 exemplo ésteres de glicerina ou propxlenog1icol ou álcool etílico, glicerina.;, água ou solução salina normal; conservantes, por exemplo p-hidroxibenzoato de metilo ou de propilo ou ácido sórbico; e, se desejado, agentes de aromatização ou de coloração convencionais.

Os compostos deste invento podem também ser administra™ dos por uma via não oral. De acordo com o processo farmacêutico de rotina, as composições podem ser formuladas, por exemplo para administração rectal, na forma de um supositório, ou para administração parentérica numa forma injectável. Para injecção, por exempla por injecção intra-articular ou por injecção no fluido cérebro-espinal ou por outras vias que darão acesso aos locais de desmielinização, tais como por injecção intramuscular, intrader-rnicâ ou subcutânea, na forma de soluções livremente solúveis ou na forma de armazenamento de depósitos pobremente dispersos, os compostos do .invento podem ser apresentados numa solução aquosa > ou não aquosa, suspensão ou emulsão num líquido farmaceuticamente aceitável, e«g» água estéril livre de pirogénios ou um óleo parentericamente aceitável ou uma mistura de líquidos, que podem conter agentes bacteriostáticos, anti-oxidantes ou outros conservantes, agentes de tamponização ou solutos para tornar a solução isotónica com o sangue, agentes esp-essantes, agentes de suspensão ou outros aditivas farmaceuticamente aceitáveis. Estas formas serão apresentadas em forma de dose unitária estéril tal como ampolas ou dispositivos de injecção disponível ou em formas de mui ti-dose tais como uma garrafa a partir da qual a dose apropriada pode ser drenada ou. uma forma sólida ou concentrada que pode ser utilizada para preparar uma formulação injectável.

Para administração tópica e percutãnea, as preparações podem também ser apresentadas na forma de uma pomada, creme, loção, gel, emplastra. spray,

aerosol, lavagem, tintura para a pele ou

Uma dose unitária para o tratamento de doenças em que estão envolvidas ensiroas da família coiagenase conterá geralmente desde 10 até 1@®® mg e preferivelmente conterá desde 10 até 500 mg, em particular 10« 50, 100, 150, 2Θβ, 250, 3ΘΘ, 350, 400, 450 ou 500 mg. A composição pode s-er administrada uma ou mais veses ao dia, por exemplo 2, 3 ou 4 vezes por dia, de maneira a que a dose diária total para um adulto de 7® kg se venha normal-mente a situar numa gama desde 10 até 3000 mg. Uma tal dosagem corresponde a aproKimadamente ®,15 até 5® mg/kg por dia, AIter— nativamente, em particular para injecção, a dose unitária conterá desde 2 até 20® mg de um composto do invento e será administrada ero múltiplos, se desejado, para dar a dose diária desejada. 0 presente invento proporciona adicionalmente um método de tratamento de condições em que ocorre a degradação do tecido conjuntivo e de outros componentes proteínicos do corpo, tais como reumatismo e/ou condições artríticas em mamíferos, tais como humanos, que compreende a administração ao mamífero em necessidade de tal tratamento de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula de estrutura (I) ou de um seu sal farmaceuticemente aceitável» 0 presente invento também proporciona a utilização de um composta de fórmula de estrutura <I), ou de um seu sal farma-ceuticamente aceitável, para o fabrico de um medicamento para utilização no tratamento de condições em que ocorre a degradação do tecido conjuntivo e de outros componentes proteínicos do corpo, tais como reumatismo e/ou condições artríticas. 31 31 ç au sas era "'C»

Descrições e fcHemplos ilustrara a prepara-de compostos do invento. Todas as temperaturas estio e;<pres-

Descrição 1 <1-HidroKÍpropil)fosfonalo de dibenziio <Bi)

0 (PhCH20)2P

OH VC2H5

Foi empregue o método cera 1 de F« Texier—Bou. 11st e A, 'Foucaud ESynthesis, 1982, 9163» Uma mistura de fosfito de obtido na forma de um 27,82 g; 64 %). Uma 7pentar«o para ui ar um 71; 61 %. 1,95 (2H, m); *? r?i dibenziio i3í,í3 mL; tf,Ί4 mol) e propionaldeído í 1 tf, 21 mL; i eq) foi agitada à temperatura ambiente e foi adicionado numa única porção alumina básica (70 g) Após repouso durante a noite â temperatura ambiente foi adicionado clorofórmio e a alumina foi recolhida e lavada com clorofórmio» 0 filtrado foi evaporado até è. secura ε o óleo límpido resultante foi cromatografado sobre gel de sílica (600 g) com eluição gradiente (éter - metanol a 5 %/~ éter)» 0 composto mencionado em título fc óleo límpido que solidificou em repouso amostra foi recristalizada a partir de é1 sólido cristalino branco; p„f, 81-82 *C.

Encontrados C

requer; C - 63,74; H 5 (CDCl^) 1,04 <3H, t, 3—7 Hz); 1, (ÍH, brs); 3,8 < 1H» 2 tripletos de sobreposição, J--5 e 10 Hz); 4,97-5,18 <4H, m); 7,34 íl®H, s)«

Descrição 2 E{1-TrifluorometanossulfoniloKDprQpillfQsfonato de díben-zilo CD2)

0 (PhCH20)2P o ?-r s-cf3C2H5 o ti tu ilo foi prepar ado pelo CJ. . 0r g» Ch@m - 1985, 50 < 12) , 21653. Uma solução de (1-hidroKipropil)fosfonato de dibenzilo (Dl) <24597 g; Θ,07S mol) em dicloromeiano (1ΒΦ mL) foi arrefecida até -5Θ °C sob azoto» Foi adicionada 2,6-lutidina (11,12 ml..5 0,695 mol) seguida por anidrido trifluorometanossulfónico Ci5,i -mL3 0:iΘ898 mol) mantendo a temperatura a -50 °C = A mistura foi deitada aquecer ientsmente até tí °C e, em seguida, recebida em éter frio. A solução foi sujeita a uma rápida manipulação aquosa lavando-se a camada orgânica com gelo-água fria, ácido clorídrico diluído <k2) e, finalmente, com água salgada. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e foi evaporada até à secura para dar o composto mencionado em titulo na forma de um óleo laranja-cor de rosa (33,77 q? 96 %), o qual foi utilizado sem purificação posterior» $ <CDC1y) 1,00 <3H, t, u=7 Hz)? 1,88 Í2H, m); 4,94 (1H, : triplstos de sobreposição, J=5,5 e 7 Hz)? 4,88-5,22 C4H, m)? 7,35 (10H, m)»

Descrição 5 N-El-(R)-l-Dibenzii-oxifosfiniloropil3-(B)-leucina (D5A) e M-Cl-<S)-l-dibensil-o?ÍÍfosfinilpropii3-(S?-lencina (D5B) CH3

Método ft

Seguindo o método geral da US Pat. 4 808 741 para a preparação de éster de trimetilsilil-ieucina, uma mistura de <S)-leucina (1,15 q5 ¢,0088 mol), hexametildissilaza.no (1,7S mL) e trietilamina (1,30 mL.) em acetonitrilo <13,5 mL) foi aquecida em refluxo durante um total de 4 h.

Em seguida, foi adicionado C(luorometanossulfoni-loxi 5 propi 11 f osf onato de dibensilo (D2) (4,5 g; 0,0i mol) e mistura foi mantida a 40-42 °C durante 4S horas» A reacçSo pode também ser levada a cabo à temperatura ambiente» Após arrete»-i-menfco, a mistura foi filtrada, lavada com metanol e o filtrado foi evaporado até à secura» 0 residuo foi recebido em clorofórmio s lavado com ácido clorídrico diluído í>;2) e, finalmento água. A camada de clorofórmio foi seca sobre sulfato de sórU r, anidro, filtrada e foi evaporada até à secura para dar um sólidn çososo laranja (3,67 g)» O produto cru foi triturado com um volume mínimo de áter/pentano para dar um sólido cristalino qUfa após ser recolhido, lavado com um pouco de éter/pentano frin « seco deu o composto mencionada em titula., isómero R,S (D3A) (0,4/ g? 11 /'), p.f. 112-115 °C,

Desadsorçãa observada Cl (NH_,.) MH 434, C^HT-J‘.IOgP requer M 433, 20

Ca:, 23,09° (c = 0,97 HeOH) C - 63,73? H - 7,42; N 0 — Òò , £ ? H - 7,44? N t); 1,03 <3H, t) % 1,25· (2H, br s)? ç / *-3r (ÍH, br , 5) . :>, N- Γ 1-CS) -dihen zil—oxif o· . *t „ / . 'i

Encontrados - CS) ••leucina (D3B), pode ser obtido por HPLC preparativa utilizando uma coluna Hamilton PRP-l, 3Θ0 x 7,0 mm, 264R com mistura eluente de acetonitrilaságua 40s6@ s um caudal de 4,0 mL/min. Sob estas condições, o isómero R,S (D3A) elui em primeiro lugar com um tempo de retenção de 34,6 min e o isómero S,S CD33B) é satisfatoriamente separado a 42,7 min.

Para α isómero í D3B): FAB <M+H)observados 434, requer M 433, 5 ÍCDCl^) 0 , SS (6H, dd), β,98 C3H, t)j 1,4 1,52-·! ,9 (4H, m>? 2,72 íiH, m>? 3,38 < ÍH, m > ? (4H, m > ? 7,3 2 C10H, s). ,) v. 0 isómero S,S (D3B) ao ser acoplado com derivados de aminoácitío-íS) leva à série S',S,S,

Método B

Uma mistura de hidrocloreto do éster de meti lo de leucina-(S) (0,543 q5 €>,,003 mol) , Cíl-trifluororoetanossulfonilo-K.i)propil3fosfonato de dl benzi lo CD2) (1 , 33 q s 0,003 mol) e carbonato de potássio anidro (1,0 g) em metanol (2 mL) foi aquecida a 5Θ -C, com agitação, durante 4 horas e, em seguida, deixada è. temperatura ambiente durante a noite» A mistura de reacção foi evaporada até à secura in vácuo e foi dissolvida em clorofórmio <5 mL.) e filtrada» 0 filtrado e as lavagens foram combinadas e cromatografadas sobre gel de sílica 60 (50 g), utilizando acetato de etilo - pentano Cí como eluente, para se produzir uma mistura de éster de meti lo de N-C .t-(R)~dihenzil~oxifosf inilpropil 3-ÍS>—leucina e éster de metilo de M—Ei—(S>—dibenzil-axifosf inilpropil j~(8)~lau~· cina na forma de um óleo (8,55 g). Os ésteres podem ser separados dando os seus diastereómeros individuais por cromatografia em coluna sobre gel de sílica inicialmente com éter dietilico a 5© % / pentano como eluente, crescendo para éter dietilico a 100 λ A mistura anterior dos ésteres (1,1 q? ©,0025 mol) em metanol (4,0 mol) foi tratada com uma solução de hidróxido de sódio (0,11 g; 0,08275 mol) em água (1,5 mL) e a solução foi .. ... A 4» .. ,J Λ S!.y J. UiMUiSt £‘ temperatura a imbiente durante ~i a noite» A mi stura foi evaporada para um terço do seu. volume, in vácuo, recebi da em água e extraída com éter» A fracção aquosa 701 -;£(C Xl! i-'1' IC-rrlúcl com ácido cítrico até pH = 3—4 e, em seguida, foi extraída com clorofórmio (5 x)» A fracção de clorofórmio foi seca sobre sulfato de sódio anidro e foi evaporada até à secura in___vscuíi para dar uma mistura dos compostos mencionados em título CD3A) e (D3B) na forma de um óleo que solidificou lentamente»

A trituração do produto com éter deu -Cl· -axifosf inilpropil D-< S)--ieucina ÍD3A) sé-lido cristalino branco, idêntico ao \ tí :j 34 y > : j ã roduto obtido C R)-dibenzi1-forma de um pelo Método

sr hidrolisa·-N—C1 — < S)—d i — pe1o método 3-íS)-1euc in a

Alternativamentef o isómero isolado pode s da separadamente. Por exemplo* o éster de metilo de benξ i1—ox i fosf in i1propi13-< S)-1eucina sob hid ré11se, anterior, deu N-C l-<S)-dibenzii-oííifosf inilpropil (D3B), p.f. 71-73 °C. >

J

Descrição 4 N -terc-ButoKicarboni1-N"-benzilexicarbonil-(S)-Iisina- — C 5—hidroxi)pentilamida (D4) h3c h3c Η O ch3°

A uma solução de Να -1 s r e - b u ΐ o;·;i c a r bon í 1 N ~- hsη z 11 o x i -carbonil-íS>-1isína (7,8 g; 21 mal) em diclorameiano anidra ílSô mL) mantida a © °C foi adicionado hidrocloreto de I-\3™dima~ tilaminopropi1 )-3-et.ilearbodiimida (4,3 g? 22,5 mmoi ) e i-hidra-Hibenzotriazole <3,6 gj 2é,5 mmal)» A mistura de reacção foi agitada durante &,5 h a. & C’C, foi adicionado 5—aminopentan-i-ol (2,3 gss 22,5 mmol) s a agitação continuou à temperatura ambiente,, Após 3 horas, a mistura de reacção foi lavada com solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio lé& mL), seca sobre sulfato de magnésio anidra e evaporada i-n vácuo para produzir um ó1so v i sc oso»

Uma purxfxcação por c romatdora f i a f iash > t(CHC1^5MeOH) (2©s:1) v/vj deu o composto mencionado em titulo •Jj» CD4) na forma de um óleo límpido (Β,ΘΙ g)„ (M+H) observados,· 466, requer M 465,

Descrição 5 Cí M -terc-ButGXicarbonil-N~-benziloxicarfaonil--<S)-lisina-—(4-formil)butilaroida <D5)

H

O h3c. h3c Λ ch3 o

A uma solução agitada de cloreto de oxalilo. <1,47 g; 12 mfliol) em diclorometa.no anidro (4*3 mL) mantida sob uma atmosfera da asoto a -6© °C foi adicionado gota a gota dimetilsulfóxido <1,21 q,3 15 mmol), de maneira a que a temperatura permanecesse abaixo de -5© °C« A mistura de reacção foi deixada em agitação a -é€s °C durante 15 minutos, foi-lhe adicionado o álcool <D4) <3,6 gji 7,7 mmol) diluído em diclorometano anidra < 1© mL) e deixada aquecer a.té -25 C'C durante 1 hora» A mistura de reacção foi em seguida arrefecida até -6© °C5 foi adicionado lentamente trietilamina <4,7 gp 46 mmol), de maneira a que a temperatura interna permanecesse abaixa de -5*3 °C« Ao completar—se a adição, a mistura de reacção foi gradualmente aquecida até à temperatura ambiente, lavada com água <3© mL) e com solução aquosa saturada de cloreto de sódio <3© mL). As lavagens aquosas foram extraídas em contraçarrente com diclorometano <2 x3© mL) e as fracções orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro e evaporadas in vácuo para produzirem um óleo límpido viscosa. Uma purificação por cromatograf ia flash L (EtOAc sMeOH) Í2€^sl) v/vj deu a composto mencionado em título CD5) na forma de um óleo (M+H)"1 observados 464« 0,-,,,9.,,-,0, N~, requers M 463. «£L**Ê / O '3 **“

Descrição 6 (5) -5- {N-terc-ButoKicarboni 1 > a.ming-9- (N-henz i 1 esticar ba ni 1 )—l ,8~diazaciclotridecan—Ξ—ona (Dó)

H,C

Η O η3οΛH,c ch3°

Método ft 0 aldeído (D5> (1,8 gs, 3,88 mL) foi dissolvido em etanoi (180 mL) e hidrogenado sobre paládio a '5 X sobre carvão vegetal (200 g) è pressão atmosfera s a 35 °C durante 72 h» A suspensão foi filtrada através de Kies-elgu.hr e evaporada in vácuo para dar 3-EN-terc-butoxicarbonilHamina-ÍS}—!,S-diazacic iotride·--can-2~ona cru.a» A amina crua foi dissolvida num sistema solvente misto de tetra-hidrofurano/água (6s2Θ mL) v/v arrefecido até 0 °C e foi tratada com benziIcloroformato (0,éé g; 3,88 mmol) e carbonato de sódio em excesso para manter um pH entre 10 s 11. A mistura de rea.cção foi deixada em agitação à temperatura ambiente durante a. noite5 lavada com acetato de etilo (3 x 25 íiiL) e as fracçSes orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro e evaporadas in vácuo para produzir um óleo límpido. Uma purificação por cromatografia flash íÍEiOAc:MeOH> (2θη:ί> v/v3 deu o composto mencionado em titulo CD6) na forma de um sólido branco (0,2 q}. observados 447« C„,,H.,r-,Or_-M_r requer; M 447»

Método B 0 3,1 ill O n. dO CD5) *T í**\ ~ í w JU hid t oq (68 £5 kNm ^ > sobre pa! ί _Σ ^ y.. tá C_í .£. v!í W í κ s O bri 8? &v. ; seguida, em met anol acídi co p ar -bu to κ i carbon i13 a mi r;· o -1,8· —d i. a z s Úi rit ‘M 1 i, GC foi t ;ra tada COÍB ben z i, X C larafa rma t O í des cr ito no Métod O H para se ob ter O SHi ti tUlO í : D6) . :a de 1Θ0 psi conforme fox obter o xcTénTixcQ composta mencionada

Descrição 7 {S?-5-fttninQ-S-£N-benziiPKicarbQniI3-1,8-diazaciclotri~ decan-2-ona, sal de trifluoroacetato (D7)

Η O

I H

TFA. - *c da 1 âí_ tama í Dò) (0,19 gs i trata da com ácido trifluo- so I' vente foi evapor .ido com di clon ornetano í 15 ml.) . ds C .1 DT et o de Sod Í Q < 10 mL) ,,

Uma solução arrefecida a & Θ,42 flimoll em diclorametano <5 mLi ro-acético (2 mL), Apès ©,= 5 h c pressão reduzida, o resíduo foi d: e lavado com solução aquosa saturada ds A fracção orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e evaporada in vácuo para dar o composto mencionado em titulo CB7> na forma de um óleo. Este foi utilizado tal qual, sem purificação posterior.

Descrição 8 (S) -3—ÇN-CN- < R) - (l-Fosf onoprooi 1)-(3)-1 euci 13 3araino-8--<N-ben?ilo;<icarbonil )-l ,8-diazaciclptridecan-5-ana. éster de difrengiiP tD8? ch3

Uma solução S)-1euc iπa (D3A) <0 0 mL.) mantido a β ° de N-C1-í R)-1-dibens i1—οκ i fosf in i1propi13-5194 gf, 0,45 minai) em diclàrametana anidro C foi tratada com hidrocloreto de l—(3—dime— ti 1 aminopropi 1)~3-et.i.Icarbodiimida (©,Θ85 g; @,45 ramal) e l-hi-droxibensotriasole (@,@79 *35 0„58 mmol). Após agitação durante @,5 h a mistura de reacção foi sequencialmente tratada com a lactama (D7) (0,15 g) e Ν,Ν-diisopropil-etilamina (0,12 g; 0,89 mmol), A agitação continuou, durante 18 horas â temperatura ambiente e, em seguida, a mistura de reacção foi lavada com solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (2 x 20 mL) e com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 20 mL). As lavagens aquosas foram extraídas em contracorrente com diclorometano e as fracçSes orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro a evaporadas in vácuo para produzirem um óleo» Uma purificação por cromatografia flash (metanol a 2 *» em clorofórmio) deu o composto mencionado em título CD8) na forma de u.m óleo límpido (0,110 g). íM+H)+ observados /63« *“'42^59^4"'

yP requers M 44 ►

S ÍCDC 1-.,) @ r 96 í6H, t)s 1,2 f “,U f· ) « 1 1 s '..‘i 1 ς J— / ij i. «j j—w u. *j / w C18H, m):{ 2 5 7 Θ (1H, m) 5 2 5 9Θ C i H 5 m)s 3,18 í 2H.. ni J f 2>.. 39 (2H, dt), 3?62 (2H, m) I 4 ? 23 <1H s m>§ 4,92-5,12 Í6H, m); 6,0 UH, brs7, 2R- 7,42 í 15H .= m) «

Descrição 9

NSte,rC-B^tOKlcarbon41-Nt-bj0g1Io!til:arbonil_(s)_orniti_ na— <6—hidroxi )— hexilamida

H 0

N H

^OCH2Ph O

Uffia solução de N · terc~hutoxicarboni 1—N^—berfξi 1 okic.sr bonil í'á) ornitina (Í2 y ϊ 3 mol) em diclorometano anidro mL) mantida a 0 '-'C, foi tratada sequencialmente com hidro-cloreta de l-<3-dimetilaminopropii}-3-etilcarbodiimida <7,5 g? Θ,039 mol) e 1-hidroKibenzotriazole <5,3 a; 0,039 mol). A solução foi agitada a 0 ’-!b durante l h, foi tratada com à—amino— •“hexan-i-ol <4,6 g, 0,00=9 mol) e a agitação continuou durante a noite à temperatura ambiente» A mistura foi em seguida lavada com solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio, seca in vácuo para c r oma t og r a f i. a mencionado em sobre sulfata de magnésio anidro e evaporada produzir um óleo viscoso» Uma purificação por f 1 ash £ < CHC1 -r 5 MeOH) í 26 s 1) v / v 3 d ευ. o c om pos to título <D9) na forma de um óleo límpido (9,1 g)„ requer: M 465. íil-t-H)' observadas 466» n h n hi s i iCDCl^) 0,96 (6H, t) ; 1,25-1,4 <5H, m) 5 1,4 <9H, sí ϊ M V2-1 ,é2 < 7H, m) s 1,78 < 1H, m > ρ 3,1 -3,35 Í4H, m) p 3,6 < 21· í 3 "fc· ) ·* 4,12 < 1H, m) ? 5,03 Í2H, tar s) p 5,31 <1H, t) 5 r,3 <5H, m> <íH, d)? 6,73 <1H, farsJp

Descrição 1® N -terc-ButoKicarboni 1 -N~~-benξi 1 qkicarboni1-(S)—orn i ti-na-tS-formil ) penti iamida <Dí®) H 0- νΟ-χΝ-Ά

H^C CH- 0

. ^rOCH2PhNo H 0 álcool <D9) <6,5 gi í-3,9 mmol) dissolvido em dicloro™ metano (5® mL) foi adicionado a unta mistura vigorosamente agitada de clorocromato de piridínio (9 gp 41,8 mmol) e 'de crivos molecu-1ares 4A (2® g> em diclorometano (2®® mL)» Foram adicionadas após 3® minutos e 45 minutos porções adicionais de clorocromato de piridínio (4 g>« Após um tempo de reacção total de i hora, a misturai de reacção foi vertida em éter (2®® mL) e o reci+piente de reacção foi lavado com éter <3 κ 1®® mL). As fracçSes orgânicas combinadas foram filtradas através de Kieselghur e concentra-das in vácuo para produzir um óleo amarelo. Uma purificação por croma tograf ia flash í (EtOAc slíeOH) (49sl) v/v e, em seguida., i,2®ϊ 1 > v/v3 deu o composto mencionado em título íDl®> na forma de um óleo viscoso (3,5 g>» (ΙΉ-Η) ' observados 4ó4. requer / ·!* ò

Descrição 11 (S) -5- (N-terc-Butoxicarboni 1) ensino-?- < N-benai lonicarbo-riil)—i ,7—diagaciclotridecan— 5—ona CDU)

0 aldeído (D1Θ) <k!,5 g) em metanol {30® mL) .foi tratado com paládio a 5 % sabre carvão vegetal <2,5 g), A suspensão foi _*~t hidrogenada á pressão de ίθΰ psi <689 kNm ) e à temperatura ambiente durante 48 h, foi tratada com ácido clorídrico aquoso 2,5 M <2 mL) e a hidrogenaçãa continuou k referida temperatura durante mais 24 h, ft suspensão foi filtrada através de Kiesel-guhr e evaporada in vácuo para dar 3-EN-terc-butoMicarboni13ami-no'-<S)”i ,7---diazaciclot?'idecan--2-ona crua. A amina crua foi dissolvida num sistema solvente misto de tetra-hidrofurano/água <1®mL) v/v arrefecido até Φ °C e foi tratada com benzilclo-roformato <Θ,92 g) e carbonato de sódio em excesso para manter um pH entre 1® e 11, A mistura de reacção foi dei-íada em agitação à temperatura ambiente durante 4 horas, o solvente foi parcialmente evaporado in vacu.o e o resíduo foi εκ traído com diclorosTieta.no <3 κ 5® mL)» As fracçcíes orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro e evaporadas in vácuo para produzir um óleo límpido. Uma purificação por cromatografia flash C CEtOAc s-MeOH) (50s1) v/v3 deu o composto mencionado em título (Dil) na forma de um sólida branco (®,27 q>. !1 observado; 447. C" H-^Oc-N-,· requers M 447 =

Descrição 12 <S)-5-fiffiino-7-EN-benzilpxicarbQnil3-1,7-diazaciclotri-decan-2-ona, sal de trifluoroacetato (Ρ1Ξ)

Η O

Uma solução arrefecida í© CC) da lactama (Dil) (©,13 g> em diclorometano (5 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (3 mL). Após 1 h o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para dar o composto mencionado em título CDí2) na forma de um

Este foi utilizado tal al, sem purificação posterior,, 49

Descrição 15 (S)-5-CN-Eh4-íR)-( i-Fosfonogropil )-(S)-lgiicil3>amino-7--(N-bgnzilQKicarbQnil?-l,7-diasaciclQtridecan-2-ona« éster de dibenziio <D15) ch3

J

Uma solução de N~Cl"-CR>“dihsnzii--oKifosf inilpropil 3 — -<S)~leucina <D3A/ <Θ5 115 g) em diclorometano anidro <2© ffiL)

J mantido a © °C foi tratada com hidrocloreto de l--C3-dimetilami~ noprop.il )-3-et.i. Icaruodiimida (Θ,@5ά g) e 1-hidrojíibenEotriazole (&,Θ36 ç)« Após aqitaçlo durante @?5 h, a mistura de reacção foi sequencialmente tratada com a lactama crua (DÍ2) e N,N-diisopro~ pi 1—et.ilamina <@,©75 g) e a agitação continuou à temperatura ambiente durante 4 horas.·, A mistura foi lavada com água <20 mL> e solução aquosa saturada, de hidrogenocarbonato de sódio (2 κ 20 mL)* As lavagens aquosas foram extraídas em contracorrente com diclorometano e as fracçBes orgânicas combinadas foram secas sobre sulfata de magnésio anidro e evaporadas in___vácuo para produzirem um óleo. Uma purificação por cromatografia flash (metanol a 2 % em clorofórmio) deu o composto mencionado em título <D13> na forma de uma espuma branca (0,í25 g). <M+H)1 observados 763. C^^H&ji?N^07P requer; M 762 =

Descrição 14

Na-terç~Buíqk icarbon í1~N~~bens iloxicarbon i1-(S)-1isina--(6-hidroKÍ)—hescilamida <D14)

O

Uma solução de Ν' -terc-butoxicarbonil-N "-benziloxicar- bonil-ÍS)-Iisina (15,8 gs Θ,,Θ42 mol) em dic 1 ororaetano anidro (206 ml_) mantida a 0 °C, foi tratada sequancialmente com hidro— cloreto de l-í3-dimetilaminopropil >-3-etilcarbodiiiBida (9,96 g? Q,05i mol) e 1-hidroKÍbenzotriazole <7,0 q; 0,051 mol). A solução foi agitada a Θ °C durante 1 h, foi tratada com 6-amino-~he;ían-~l-~ol <4,7 g3 0,046 mol) e a agitação continuou durante a noite à temperatura ambiente» A mistura foi em seguida lavada com solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio, seca sobre sulfata de magnésio anidro e evaporada in____vácuo para produzir um Ó150 vise oso. Uma pu. r i f .1 c aç. 3 o por c r orna tog r a f í a flash C < CHC1 --; MeOH 5 <20sl) v/v3 deu 0 compos to aisncionado em titulo <D14) na forma de um õ 1o o 1impido <16 g) « í M+H> observado: 486, requer M 479» \

Descrição 15 Ν -terc-ButoK icarboni1-N~-benzi1oxicarboni1-í 5)-iisina-—tS-formil)pentilamida (Dl5)

H,C

Η O η"αΥτλ HíC CH,° '

Uma solução agitada de dimetilsulfóKido <3,63 g; θ , Θ46 mo! ) -em dic larameta.no anidro C1Θ® mL) mantida a -és® °C foi tratada com cloreto de axalilo (2,58 g? ã,®I9Q mol) diluído em dic 1 orometan.o (10 mL) a uma velocidade tal de maneira a que a temperatura permaneceu abaiκo de -58 °C. Após agitação durante 20 minutos, foi adicionado gota a gota durante 5 minutos o álcool <D14) <6,35 g; Θ,ã13 mol) dissolvido em diclorometano C5Θ mL)» A mistura de reacção foi agitada a —ò® °C durante 15 minutos, aquecida até -35 °C, agitada durante mais i€í minutos e, em seguida, arrefecida até -60 °C= fi solução foi tratada com trietilamina <8 gs ®,08 mol), aquecida até á temperatura ambiente, lavada com água <2 κ 1©® mL), seca sobre sulfato de magnésio anidro e o solvente foi evaporado sob pressão rsdUEida parei Ώ, Uma purif icação por cromatografia 1) v/v3 deu o compo sto .mencionado em um Ò X ©O í 5 Q ) ’8. C25H: -Ρί—,Ν-τϋ r ~‘? U c< requer s M 477.

Descrição 16 (S) -5-1 N-terc-Butoxicarboni 1) assino-/ - ΐ N-ben ziloxicarbo— nil)-l,8-dia2aciclQtridecan-2-ona CD16) H °

H3C V° Ίι"” N h3c ch3° O^OCHjPh D aldeído CD:lo> <5,0 g) sm metanol C450 ml_> foi tratado com paládio a 5 % sobre carvão vegetal (0,5 g>« A suspensão foi _~r hirirogenada á pressSo de 140 psi (966 kNm ' e ã temperatura ambiente durante 48 h;i foi tratada com ácido clorídrico aquoso 2,5 M (3 ml.) e a hidrogenaçlo continuou à referida temperatura durante mais 24 h„ A suspensão foi filtrada através de Kiesel- guhr s evaporada in___vácuo para dar íS)-3~<N~terc-butoxicar- bonil )amino--1jS-diazaciclotridecan-^-ona crua, A amina crua foi dissolvida num sistema solvente misto de tetra-hidrofurano/água (lôs4S mL) v/v arrefecido até Θ °C e foi tratada com henzilcloro-formato (2,85 g> e carbonato de sódio em excesso para manter um pH entre 10 e ii„ A mistura de reacção foi deixada em agitação à temperatura ambiente durante 4 horas, o solvente foi parcialmente evaporado in vácuo e o resíduo foi extraído com diclorometano C3 x 100 mL) * A fracção orglnica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro s evaporada in vácuo para produzir um óleo límpido» Uma purificação por cramatografia flash CÍEtOAcsHeOH) Í50sl) v/v3 deu o composto mencionado em título (D16) na forma de um sólido branco (2,0 g); p»f» 131,5-134,0 °C» M+ observados 461» 0...,ςΗ_ζΟΝ^υ,-- requerι il 461.

Descrição 17 (S)-5-ftmino-8-EN-ben£ÍlQxiçarbQnii1-l.8-díazaciclQtetrade-can-2-ona. sal de trifluoroacetato ÍD17)

Η O

Uma solução í ft,, 175 g) em dicloromet-ros.cético <3 ml. >» Após arrefecida CΦ C'C) da lactama (Dlé) ;πα <5 írL) foi tratada com ácido trifluo-1 h, o solvente foi evaporado sob pressão

-J. L.UJ.U reduzida, para dar α composto mencionado forma de um óleo» Este foi utilizado tal qu.al? sem purificação posterior«

J

Descrição 18 CS)-5-íN-CN-<R)-<1—Fosfonopropi1)-i3)-leuci13 >amino-8— — (N—bensilQKicarbQnil)-i»8—diazaciclotetradecan—2—ona. éster de dibenzilo CD1S? CH3

I

Uma solução de N-£l-<R)-dibenzil~oKifosf inilprop.113--ÍS)~leucina CD3A) <0,133 g) em diclorometano anidro (10 mL> mantido a @ °C foi tratada com hidrocloreto de i~-(3--dimetilami-nopropil )-3~et.ilcarbodiimida (0,065 g) e 1-hidroxibenzotriazole (¢=,046 g). Após agitação durante ¢,5 h, a. mistura de reacção foi sequencial mente tratada com a lactama crua CD17) e N,N~d ii. sopro-pi Ί-etilamina C®,1 g) e a agitação continuou à temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura foi lavada com água <10 mL) e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio <2 κ 10 mL). As lavagens aquosas foram extraídas em contracorrente com diclorometano e as fracçSes orgânicas combinadas foram secas sobre sulfata de magnésio anidro e evaporadas in vácuo para produzirem um óleo. Uma purificação por cromatografia flash (metanol a 2 % em clorofórmio) deu o composto mencionada em título (DIB) na forma de uma espuma branca (170 mg). (M+H)1" observados 777. Ο,-,-,Η, ,Μ,Ο-,Ρ requers M 776» no ol 4 / ^

Descrição 19 ÇS)-5-(N-terc-BiitoKÍcarbonil )amino-8-{N-metil )-l ,8-di-azaciclotrideçan-2-ona (D19)

vJ

Uma solução de d X -¾Z 3. i SC tl3.?'l 3. <Dé) {©,35 q) em metanol <2© ml..) foi tratada com paládio a 5 Z sobre carvão vegetal < Θ,, 2 : g) e foi hidrogenada d u r &n te 24 h à pi essâò atmosférica e ã t ζΒ -"Π er atura ambiente» í- \ 5 Lí O p 0Π5 cr< O fai f i11rada através de

J

Kieselguhr e o filtrado foi diluído com metanol até um volume-total ds 5© snL» A solução foi tratada com paládio a o % sobre carvão vegetal í©?3 g) seguido por formaldeído aquoso a 4£í ’Á <1 mi-.) e a suspensão resultante foi hidrogenada durante 48 h a uma pressão de 1©© psi <689 kNm *) « A suspensão foi filtrada através d© K.ieselçuhr ε o solvente foi evaporado in vácuo para dar um óleo que;i exposto a éter dietí 1 ico, solidificou» Uma purificação por cromatografia flash E<CHCl7íMeDHsNHT) {9©s9s©,5> v/vj produziu. o composto mencionado em titulo (019) na forma de um óleo amarelo pálido <©,14 g)j p„f. 135-137 °C» íM+ observados 327» C, requer s M 327

Descrição 2Θ (S?-3-ftmino-8-(N-metil)-l,S-diazaciçlotridecan-2--pna, sal de trifluoroacetato CD20?

Uma solução arrefs Cu,175 g) em diclorometano í ácido trifluoroacético <3 mL) do sob pressão reduzida para. cru (02¾) na forma de um óleo cida i& CC) da dlazalaotama (019) 5 mL) foi tratada gota a gota com „ Após í h, d solvente foi evapora-dar o composto mencionado em titulo = Este foi utilizado tal qual, sem purif terior»

J

Descrição 51 íB>— 5-ΐΝ—ΕΝ— (RI- { i-Fosfonogrosil)—(S)—leucil3 3-amino—8— -<N-metil)-l,S-diazaciclotridecan-2-ona, éster de dibenzilo (D2Í)

Uma solução de N~ E - (S)-1suci na (D3ft ) < Θ,133 q} mantida a 0 °C foi tratada com oprop.il>-3—etilcarbodiimida í€ (004é g) » A mistura foi deiM 1-(R)~d i hen zí1—okiíosfIni1propiliem diclorometano anidro (10 mL) hidrocloreto de l-(3-dimetilam.in-r065 g) e l-hidrosíibenzotriazole :ada em agitação durante 0,5 h á temperatura ambiente s, em seguida, a mistura de reacção foi tratada com amina CD20) dissolvida em diclorometano ίίθ mL), seguida por N,N-diisopropil~et.ilamina <y,1 g)„ Após agitação durante ÍB horas, a mistura foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 10 mL), seca sobre sulfato de magnésio anidro e o solvente foi evaporado in vácuo para se produzir um óleo. Uma purificação por cromatografia flash (metanol a 2 % em clorofórmio) deu o composto mencionado em titulo (D21) na forma de uma espuma branca (0,17 q>. (if+H) observados 643. .,0_P requer; M 642 -•Ό o-_f ao ^ —

Descrição 22

Cí F N -terc-Butoxicarbonil-N -hensilQ?;icarbQnil-{5)--lisina--(5-hidroxi)-propilamída ΪΡ22)

HjCV0y,;,V)I'N/Sv/N'OH H;,C CH,0 SV A OCBjPh o

J

Uma solução de agitada de fA-terc-butoxicarbonil-N'"--henziIPKicarbonil~CS}-lisina <17,2 g>, mantida a Ô C'C em diclo-rometano anidro <250 mL>, foi tratada com hidrocloreto de 1---(3--dirnetilaminopropi 1 >“3-etilcarbodiiffiida (7,5) e i-hidroxibenzo— triazole <5,3 g), A solução foi agitada a Θ *C durante 1 h, foi tratada com ó-aminopropan-i-ol <4,®8 g> dissolvido em diclorame-tano <50 mL) e a agitação continuou durante 18 horas ã. temperatura ambiente. A solução foi em seguida lavada com solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio, seca sobre sulfato de magnésio anidro e evaporada in vácuo para produzir um óleo viscoso. Uma purificação por croma tograf ia flash C < Et.QAc: MeOH) (49;1) v/vj deu o composto mencionado em título CD22) na forma de um óleo límpido <15,2 g>„

Mh-H)+ observado; 438» requer; π 43' \ 59

Descrição 25

Ng-tare—Butox icar bon i 1 -N'~-hen ξ i Iqk icar bon il-(S)-lisina~ — í 2—formil jetilamide. CD25)

0 composto mencionado em título íD2t>) foi preparado seguindo o processo descrito para a síntese de Ng—terc—buto-Kicsr-·· í— boni 1—N "-bensiIqkicarboni Ϊ,·- < S>—lisina- (4—f ornsi 1) buti lamida <D5) ( rend i raen to s 59 %) (M+fj) observado s C.-,^Η^Ν^υ, requers M 435 =

J

Descrição 24 (S)-5-(N-terc-ButoKicarboni1)amino-B-(N-bsnai1okicarbo-nil)—i «S-diazaciclo—undecan-5-ona (D24)

0 composto mencionado em titulo (D24) foi preparado seguindo o processo descrito para a sintese de (S)-3--ÍN-terc-bu-tοκicarbon.11 >araiηo-7~<N-ben2i 1 oxicarboni 1 > -1,7 - d i a 2 ac i c 1 o t r i d ec a-π-2-ona (DU) (rendimento 11 %) § p.f. 172-174 °C»

J

Descrição 55 <S)-5-ftfliinp-Q-(N-beriZÍoKÍcãrbonii )-i «B-djazacíclo-tinde-can-2-ona, sal de trifluoroacetato íD25) TFA.

VOCH2Ph

O segu; ~bsn; 0 composto mencionado em titulo CD2S Lndo o processo descrito para a síntese de í iοκ icar bon i I) -1 s 7-d iaξ ac ic 1 dt r idecari—2—ona, (D12) e foi utilizado sem purificação roacetato ) foi preparado í S) -3--amino~7“ (N~ sal de trifluo—

Descrição 2& (B)-5-ÇN-EN~(R)-<i-FQsfpnpgropil)-<5)-leucil3>antino-B~ —(N-benzilQKicarbonil)-1«8—diazaciclotridecan—Ξ—ons, éster de dibenzilo CD26)

>-OCH2Ph O titulo (D2ó) foi preparado sin tese de í S) -3--CN— CM-< R) --7-\N-ben z i1οκ ica rfaon i1)-1?7-tí i ben 2 i1o < D13 > , (Rendimentos 0 composto mencionado em seguindo o processo descrito para. a -{ i-fDsianoprop.il >-(S)-leucil Dlamino -dia.saciclotridecan~2-ona5 éster de 44 %>. r.. _ 'i* FAB CM-(PhCH^O)_,P01 observados 473« D^P requer sU ui. tí-uJ *-'t / M 734«

J

Descrição 27 (S)-3~íN-E N-(5)-<1-Fosfonopropí1)-(S)-isuei13 >amino-8--tN-benailoxicarbonil >—1.S-diazaciclotriàgcan-2-ona, éster de dibenziio (D27) CH,

Uma só1ução de N~11-<S) — i-dibenzil~oxifosfini1prepi1 j ~ -(S)-ieucina tD3B) (Θ«27 g) em diclorometano anidra < ΊΘ mL) mantida a Θ í:’C foi tratada com hidrocloreto de 1—(3-dimetilamino— prapi.1 )~3-etilcarbodiimida ίβ» 125 o) s com i-hidraKibensotriazoIe <0,088 g>. Após agitaçlo durante Θ,5 h, a mistura de reacção foi sequencialmente tratada com o sal trifluoroacetato da lactama (D7) (0,75 mmol> e N,N—diisopropil—etilamina (0,16 g)» A agitação continuou durante 18 horas à temperatura ambiente e, em seguida, a mistura de reacção foi lavada com solução aquosa saturada de hidragenocarbonato de sódio <2 « 15 ffiL) e com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 15 mL) « A f re.cção orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e evaporada in vácuo para produzir um óleo. Uma purificação por cromatografia flash (metanol a 2 λ em ciorofôrmxoj deu o composto menexonado em titulo (D27) na forma de um óleo 1imoido (0,31 q>. < S1+H)+ observado s

Descrição 28 (5)-5--ÍN-CW-(S)-C i-Fosfenopropil)-<S)-leucil 3 3-aminQ-8-—(N—benziloxicarbonil)—1,8—diazaciclQtetradecan—2—ona, éster de dibenzilo (D28) CH3

Uma solução de N-Ei-CSi-l-dibenzil-oxifosfinilpropil3-(S)-leucina (D3B> íΦ,Φ91 g) em dic 1 orometano anidra (10 iriL> mantida a 0 °C foi tratada com hidrocloreto de 1 -C3-dimetilami.no-propilJ-3-etilcarbodiimida (&,Θ4 g) e com 1-hidroxibenzatriazQle \@5028 g}« Após agitação durante Θ,5 h, a mistura de reacçâo foi sequencialmente tratada com o sal tr.ifluoroacetato de lactama (Ti (0,23 mmol>

NsN-diisopropil~etilamina (0,054 g)

H agitação continuou durante 18 horas á temperatura ambiente e, em seguida, a mistura de reacção foi lavada com solução aquosa produzir um óleo, (metanol a 2 % sr (M+H) observados J43 '61 10 mL ). A f r acçSo orgânica foi tidro b svapor CdClift Xií VSCUQ P íSF-S ação por cr omatoqraf ia. f 1 ash deu o compos to menciona·: Jo em g> , - W „0 ~P 't / requer; M 776«

Descrição 29 <S)-5-ÍN-CN-CR)-í 1-Fosfonoetil )-(S)--ieucil3afflino-8-(N" -benziloxícarbonii)-!.8-diazaciclotridecan-2-ona. éster de dibenzilo CD29A) e <S)-3-£N-EN-<5)-(i-fosfonoetil)-(3)--leucil3amino-8-(N-benziloKÍcarbQnil)-i.S-djazaciclotride-can-2-ona, éster de dibenzilo (D29B) CH3

Uma solução da mistura isomérica dos ácidos CD29A) e (D2.9B) í®s23 g> em diclorometano anidro (20 mL) mantida a 0 °C foi tratada com hidrocloreto de 1-(3-dimetilaminopropi I >-3~et.il-carbodiimida (0,137 g> e com l-hidroKibenzotriazole (0,097 g)„ Após agitação durante <3,5 h, a mistura de reacção foi sequencial-mente tratada com a lactama (D7> <0,©72 mmol) e Ν,Ν-diisopropil-—etilamina (<3, i85 q ), A agitação continuou, durante 18 horas è. temperatura ambiente s, em seguida., a mistura de reacção foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2<3 mL), A fracção orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e evaporada in vácua para produzir um óleo. Uma purificação por cromatografia flash (metanol a 2 % em clorofórmio) deu o composto mencionado em título ÍD29) na forma de um óleo (<3,32 g). <M+H)‘ observados 749. C41H* r-,Ν J3.-.P requer Sf f ?48,

Descrição 50 N~E (R)—Dibengil-PKifosf inileiil3-C5)-leucina_{Ρ5ΘΑ)_e N—C CS?-~ciibenzil—QKifosf iniletil 3—<S)—leucina (Ρ5ΘΒ)

foi na A mistura de diastereómeros mencionada em título CD30) preparada de modo análogo ao método da Descrição 3, Método B? forma de um sólido branco. <M+H) observados 420. CJ_,._!H.-rí-íNur-P requer; M 419,

EXEMPLO 1 (S?-5-ÍN-EN-C (R)-Í--FosfonQpropii )-<5)-leucil3>amino-l ,8-di-asaciclotridecan-2—ona (Ei)

H f C D8) C 0,1 '1 g) em â 10 /u sobre car vão h« A solução foi

Uma solução do dièstsr fosfónico atanol (3© mL> foi hidrogenada sobra paládio c vegetai à pressão atmosférica durante 24 r filtrada através de Kieselguhr ε o solvente foi evaporado in vácuo 0 resíduo foi triturado com éter dist.ilico (5 mL) para dar o composto mencionado em título na forma de um sólido branco (0,057 p.f. 178,5-180,5 ®C« FAB ÍM+H) observados 449. C.-,^Η^^υ,-,Ν^Ρ requers M 448. T0D) 0,96 (6H, t), 1,1 (3H, t); 1,25-2,08 <17H, m); <1H, m)p 3,05 C5H, m); 3,3 C1H, m de sobreposição com 3 *-> 5 58 (1H, ra) S 4538 (1H, m). rieGD) 68

68 J EXEMPLO 2 CS)-5—ÍN-CM-C CR) — 1—Fosfonopropil) —CS)—leucil3>amino~l-7—di— azaciclotridecan—2—ona CE2)

Uma soluç 24 o do diés ter fos f óni n 0 í w j ·η· \ i) i o ;) ( 0 ,09 g ) em íris tanol {; Ξ5 íiiL ) foi hi d rag enade sobre _ t : £ cí dia ~ vr \Z*. w /R sobre c a r v ão vegeta1 à pre at mos f êrics duran te 24 h » A '--Lí luç-So foi f .11 trad a atrav s k xes© Iguhr s o SQ1V en te foi eva porad o in vácuo» 0 Γ®3 X duo foi tri turatí o com éter QXQ tí li co <5 cnL) para dar o c omposto fnsnc ion ado SíTí t ítalo < E2) na forma de Ufl) s O 1 3. d O branco ( 0 , ®38 g). (M i-H ) *" ob serva dos 449 u ÍJ 20H41°5 ;N4P requers H 448 n

J 0,96 (ÓH? d) 5 1,2 <3H, i> ; í , 35-1,9 < 17H, m) m) 5 ^ 5 9 (1H, m) % 2,98 C 3H, m) ; 3,12 CÍH, m) 2,49 ÍÍH 3,42 C1H, m); 3,7 C1H, t (1H, t)

EXEMPLO {Β)-5-ΐΝ-ΕΝ-ΐ <R)-l-FQsfonQprQpil )-ÍS)-ieucill>aniinQ-l ,7-di-asaciclotetradecan-g-ona (E5) CH3

Uma solução do diéstsr fosfónico CE? 18> (0,,09 g) em metanol (2Θ mL) foi hidrogenada sobre paládio a 5 X sobre carvão vegetal (&..<38 g) à pressão atcnosférica durante 24 h« A solução foi filtrada através da Kieselguhr a o solvente foi evaporado in vácuo. 0 resíduo foi triturado com éter dietílico (5 mL) para

1 COsTípQSfcO mencionado em título (E3) na forma de Ufli só 1 jLdc? ο í Θ,@5 g / K FAB ÍM+H) + , , ooservado: 4ô· 3 C 0 ,H n _ íX-F;' rea ue r s 21 4o 4 O M ·· 162» S ( CD-rrOD ) .J: 0? 98 {6H, t); 1,12 (3H? t)p 1,3- 2,1 < 19H p cn) ρ 2 ií 7—3 s 25 íéHj m)p 3.i72 í i H, m) j 4 s 45 (1H.. ffi \ « * 5 .T J“*P- 4 , d5 1H, m) = 70 - 70 -

EXEMPLO 4 (B)-5-ÍM-CN— ((R)-l—Fosfonopropil )-(S>-leu.cil3>amino"8-—(M—metil>—1,8—diazaciclotridecan—2-ona CE4)

Uma solução do díéster fosfónico ÍD21) (0,09 g) em metanol <15 mL) foi hidroqenada sobre paládio a 5 % sobre carvão vegetal (0,08 g) à pressão atmosférica durante 24 h* A solução foi filtrada através de Kisselqu.hr a o solvente foi evaporado in vácuo« 0 resíduo foi triturado com éter dietílico <5 mL) para dar α composto mencionada em titulo <b4) na forma de um sólida b r an c: ο í Θ, €<5 i g ). <M-í-H) observado; 4< C H NO P 21 43 4 5 requer

M

$ (. CD_rOD) ©, 98 {&H 5 t)5 1,1 í 3H, t) 5 1,4-2,1 < 17H, m) 2,7 (1H, m)p 4,4 m); 2, (1H, m) 88 (3H, ... \ 13 / g 3,05-3,4 íòH, m); *3 fi ò5 (1H 71 -

EXEMPLO (5)-3—ΐ M-C Μ-(CR)—i-Fosfonopropil) — CS)—leucil3lamino-i,8-di— asaciclo-undecan-2—ona. sal hidrocioreto CE5)

J

.HC1 Ή

Uma solução do diéster fosfónico C0Ξ6) *0,07 g) em (1Θ íbL) foi tratada com paládio a 5 % sobre carvão vegetal í©?®6 g) e hidrogenada durarste 18 h à pressão atmosférica. ft suspensão foi filtrada através de Kieselgu.hr e o solvente foi evaporado In vácuo para dar uma espuma castanha pálida. A espuma foi dissolvida em etanol e tratada com HC1 etéreo 1 H para dar o composto mencionado em título (E5) na forma de um sólido branco» .5' ÍCD_,GD) 1,0 <ÓH. <3H, t); <2H,

J 1 ;,7-2,1 í 11H, m) ξ 2,7-3,2 (6H, m)s 3,6 CÍH, m) 5 m)5 4,55 (1H, m)» 4,45 CÍH, 3

EXEMPLO 6 t S1 —5—€N—EN— i tS)-X-FQsfonpprppil )-?.S)-Ieu-Cil1>a3jiino-l .,8-di-asaciclQtridecan-2-Qna (E6)

Uma solução do diéster fo metanol C4@ mL) foi hidrogenada sobre vegetal (@,25 g) à pressão atmosiéri foi filtrada através de Kieselguhr a vacuo,, 0 resíduo foi triturado com dar o composto mencionado em título sfónico (D27) (@,29 g) em paládio a 5 % sobre carvão ca durante 24 h, A solução o solvente foi evaporada in éter dietílico (5 mL) para (E6) na forma tíe um sálido ur anu 1

u/ g)« FAB (M+H) -i- observados 449» C._t @H4íh Liç-P requer s π 448» Ή· Ο * o (CEs-QD) í,© <6H, dd)s 1, 1 <3F 1, t>; í,4-2,@ Í17H, m) 2,45 C ÍH, m)ρ 2,85-3,2 (5H, m > % 3,38 UH, m); 3,58 í ÍH m)| 4,49 (1H, t). 4,49 (ÍH, t)

EXEMPLO 7 ÍS)—5-ΐΝ-ΕΝ-((Sl-i-Fosfonopropil)-íS)--lsucil3>affiino-Í,8-di-asaciclQtetradecan-2-Qna <E7) CH3

Uma solução do diéster fosfónico (D2S) (0,085 g) em metanol (20 mL) foi h i d rog en ad a so b r e paládio a 5 % sobre carvão veg s t a 1 {O ;i 08 q) à pressão atmnsfAri ca durante 24 h, A solução foi filtrada atravé s de Kieselguhr e o so1vsnte foi evapor ado i_n v a c u o„ 0 rss i d u o foi triturado com éter dietílico (5 mL) para dar α composto menc i on ad o em t. í tu 1 o (E7; na forma de um Sõ1 ido branco (Φ,Θ45 g>»

M ϋ Ã. ·? S (CD_,0D) i ;10 <6H3 dd)? 0?9S (6Hj m); í 312 <3H? t)j 1 ;i 3-2,0 \ 19H 9 a í)5 2j85—3s25 (6H, m)| 3365 (IHj i m)% 4 j12 (ΪΗ, m) í 4,4'? (1H, dd>- + FAEí (M+H) observados 463, H „.M ,0,-P requer 2i eo 45 ^ EXEMPLO 8 (-5)—5—ΐΝ— EN-( (R)-i-FosfonDDrQDÍi )"(S)-leucil]>amino-l ,8-di-asaciclotridecan-Z—ona (E8A) e (S)—5—CN—CN—ΐ(5)-1-Fosfo— nopropil )-<S)-leucil3 3-amino-i ,8-die-zaeiclotridecan-5-ona (E8B)

Um a SC; ί I me tanol (3Θ mL) Toi. hij vs geia! <0,2 g) è pre· f 0 i fil trada atr 3Vé s d? vs CUO a 0 rs sidu O foi da r α c ompos to menc ion br ancc na f0 rma de uma FAB (M+ H) + obs erv istón ico í D29) i &, 26 g) em ; pai ádio a 5 % sobre carvão a durante 24 h, A solução o so Ivente foi evapor ado in éte r diet ilic 0 (5 mL ) para rn Iti na forma de um sólido

ENSAIO DE INIBIDOR DE COLASENASE 0 tes-te é sssenc ia1mente real içado con forme εΉι,οπ tr descrito em Cawston e Barrett, Anal = Biochim . 99, 34©- •345 (1979) Os compostos - par,a 0 teste são disso 1V i a w ^ Buí metanol submetendo 3. ~os a ultra-sons e são adicionados a colagenase (purificada S« . . 1 Λ. . - .. Cuí liXí , WI-Í Θ. «1 .. UíÃ linha de em tampão» s tubos ds células do Após uns 5 são ensaio «! partir dos sDbrenadantas de •fibrofcílasto do pulmão humano minutos de pré-incubação a

arrefecidos até 4 °C e é adicionada colagénio do tipo I de pele de ratazana H'-—acetilado» Os tubos de ensaio são incubados a 37 °C durante a noite„ 0 colagénio~'-‘H forma fibrilas insolúveis, que são o substrato para a enzima.

Para terminar o ensaio, os tubos de ensaio são girados a 12 ΘΘ@ rpm durante 15 minutos. 0 calagénio-‘~,H não digerido ~y

J forma peletes, enquanto o colagénio-'“’H digerida se encontra na forma de peptídeos no sobrenadante. Uma amostra do sobrenadante é retirada para contagem de cintilação em liquido. A actividade dos inibidores de coiagenase CIC=..:. ; concentração inibitória de 5Θ %> á expressa como a concentração de composto que inibe a concentração conhecida \padrão) de enzima de 5« %.

Claims

REIVINDICASSES lã« - PruCsssso p3f 5 fórmula de estrutura (Π ou um a preparação de um composto de eu sal, solvato ou hidrato;

(I) representa hidrogénio, alquilo ou benzilo facultativa-· mente subst.ituído5 representa hidrogénio ou alouilo C, ,% 1 —t> · e R·^ e formam conjuntaments a porção é um inteiro desde 1 até q á um i ‘PH.-,) “X— \ L;H. inteiro desd* q- °nde p Ξ até 1Θ s a porção -<CH.-j)p~ é adjacente ao átomo de carbono que suporta R-^ marcado com um asterisco na fórmula de estrutura {I) f e X representa —NRg—, onde Fj- é escolhido de entre hidrogénio, alquilo alcanoílo C.-,_á, alcoxi Ci-é,“car~ bonilo, aroilo, aralquilo ou aralquiloxicarbonilo em cada um dos quais a porção arilo é facultativamenta substituída; > \

caracterizado por compreender a conversão de um grupo em hidrogénio por meio de clivagem de um grupo R,-,^ de um composto de fórmula de estrutura <II)s

tuído e R^ representa hidrogénio ou alquilo ou henzilo faculta— tivamente substituído e R, , R.-,, R-, e R‘ são definidos da mesma maneira, que para. a fórmula de estrutura <I)5 e, quando necessário , a conversão de em hidrogénio. indicação 1 r represerst carac-hidro 2;3, - Processo de acordo com a rei teriçado por se preparar um composto no qual génio5 meti lo, etilo ou henzilo.

da „ — Processa de acorda com as caracterizado por se preparar um compost hidrogénio, metilo, etilo, isopropilo ou rei v i n d i c sçõi o no qual n-butilo. ss 1 ou.
2, representa 4â. caçoes 1 a
3, R.-, representa •c. - Processo ds acordo com qualquer uma das reivindi-caracterizado por se preparar um composto no qual n-butilo, iso-butilo ou sec—butilo. CÃ

5i„ - Processo de acordo com qualquer uma das reivindi-a 4, caracterizado por se preparar um composto no qual » \

R,, e H „ f armam 4 canjuntamen i tl0 a porção -íCH,_,) -X-: (CH,-. 5 r * Z ρ χ·: q e q t'è'm valore s tais que R, •Jt e R^ fazem parte de uma a ca .lactama de 11 ou i 3 a 16 membros e X representa -NI R λ'5 r· .ai hidrogénio» me tilo? bensilo, ò-butoKicarl ande ρ feen z i 1 ο κ i c a r bon i. 1 o« ande 6ã» - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5? caractsrizads par se preparar um composto no qual R representa hidrogénio,! R^ representa me ou etil< R, representa iso-butilo e R-^ e formam con juntamente a porção -\CH.-j) “X-í.CH^,) - onde p é 4 e q é 5, ou ρ é 3 e q é è5 ou p é 4 e q é èf ou ρ é 4 e q é 3 e X representa ~NR^-r, onde R_. representa hidrogénio ou metilo» 7ã, - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6,i caracierizado par se preparar um composto na qual os centros quirais marcados com um asterisco na fórmula de estrutura (I) ttm a configuração S quando R? é diferente de hidrogénio» 8§-„ - Processo de acorda com a reivindicação 1,, carac-terizado por se preparar; \B)-3-EW-EW-((R)-l-fosfonopropil)-(S)-lsucil3 lamino-1s8-di-azaciclotridecan-2-onaj CS)-3-EN-CM-í <R)-1-fosfonopropi1)-í S>-1euc113 3amino-1,7-di-azaciclotridecan-2~ona; (8) -3- í Μ- L U~ (\ R) -1 -f osf onopropi 1 )-(3)-1 euc. i 13 3 amino-1 , 8-d i-azaciclotetradecan-2-ona; * ( t v

í S > -3-CN-CN-< (R) ~í-fosf anopropi 1) ~ (S> -ieuc 113 lãmino-S- < N-me-til )-l ?8~diazeciclotridacan-2--ona!; í S)~3~CN~tN~( (R)-1—fasíonopropil) -(S> — leucil 3 3am.ino™i ,8-d.1 -az aoic1ounriecan-2-ona, sa1 hidroc1oreto ? (S) “3-CN-CN- ((S) -1 —f osfonapropi 1 > -<S) -1 euc 113 lamino--· 1,8-tí :i.~ azar. ir .1 oiri dec an—2—aria;

(S) -3~CM-CN- < (S) -1 -f osf onopropi 1 > -(b') asseie1otetradecan-2-onai leucil 3 lamino-l ,tí-di~ <S> -3-CN—CM—((R)-l-fosfonoet.il > — CS)-leucil 3 lamino—1,8-diaza-ciclotridecan-2~ona e , b—α :í.5íS- (S1-3-CN—CN-Í (S) -1-f osf onoet.il) - CS) -leucil 3 lamino ciclotridecan-2-ona« J farmacêu composto um seu. s um agsnf 9§... — Processo para s preparação de uma composiç tica, caracterizado por compreender a associação de de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, a1, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável, e e de suporte farmaceuticamente aceitável» ão um ou c>m 10i» - Método para o tratamento de condiçSes em que ocorre a degradação de tecido conjuntivo e doutros componentes proteináceos do corpo, caracterizado por compreender a administração, a um hospedeiro com necessidade desse tratamento, de uma quantidade eficaz da um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 até 8, sendo a gama de dosagem de composto 80

-χ- activa de aproKimadamenie θ,ΐο até 5© mg por quilograma de peso corporal por dia„ Lisboa.3 8 de Abril de 1991

J. PEREIRA DA CRUZ Agente Oficial da Propriedade industrial RUA VtCTOR CORDON, 10-A 3.» 1200 LISBOA