DK167978B1 - Glycero-3(2)-phospho-l-serin-derivater og salte deraf, fremgangsmaade til fremstilling af saadanne forbindelser og farmaceutiske praeparater indeholdende disse - Google Patents

Glycero-3(2)-phospho-l-serin-derivater og salte deraf, fremgangsmaade til fremstilling af saadanne forbindelser og farmaceutiske praeparater indeholdende disse Download PDF

Info

Publication number
DK167978B1
DK167978B1 DK106287A DK106287A DK167978B1 DK 167978 B1 DK167978 B1 DK 167978B1 DK 106287 A DK106287 A DK 106287A DK 106287 A DK106287 A DK 106287A DK 167978 B1 DK167978 B1 DK 167978B1
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
serine
glycero
groups
group
general formula
Prior art date
Application number
DK106287A
Other languages
English (en)
Other versions
DK106287D0 (da
DK106287A (da
Inventor
Hans Brachwitz
Peter Langen
Christine Lehmann
Eckart Matthes
Juergen Schildt
Iduna Fichtner
Albin Hermetter
Friedrich Paltauf
Original Assignee
Hafslund Nycomed Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DD27823185A external-priority patent/DD238979A1/de
Priority claimed from DD27823085A external-priority patent/DD238978A1/de
Priority claimed from DD27856085A external-priority patent/DD239208B1/de
Priority claimed from DD27856185A external-priority patent/DD239209A1/de
Priority claimed from DD27856285A external-priority patent/DD239405A1/de
Application filed by Hafslund Nycomed Pharma filed Critical Hafslund Nycomed Pharma
Publication of DK106287D0 publication Critical patent/DK106287D0/da
Publication of DK106287A publication Critical patent/DK106287A/da
Application granted granted Critical
Publication of DK167978B1 publication Critical patent/DK167978B1/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/10—Phosphatides, e.g. lecithin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

i DK 167978 B1
Den foreliggende opfindelse angår en gruppe af hidtil ukendte glycero-3(2)-phospho-L-serin-derivater , der er ejendommelige ved, at de har den almene formel
ChL-A
I 2 CH-B (I)
CH2-C
5 hvori A betyder C^-C^g-alkoxy, halogen eller en gruppe med den almene formel —0—(CH2)n—CF3 (II) hvori n er 0, 1, 2 eller 3, og hvori den ene af grupperne B og C har en af de for gruppen A angivne betydninger, mens den anden gruppe 10 er en phosphatidy1-L-seringruppe med formlen
0 ^COOH
-o-p-o-ch2-ch (III) OH ^"NH2 under den forudsætning, at mindst én af grupperne A, B eller C betyder C^-C^^-alkoxy. Opfindelsen angår endvidere de farmaceutisk acceptable salte af forbindelser med den ovenfor viste formel I med baser, en frem-13 gangsmåde til fremstilling af de omhandlede forbindel ser samt farmaceutiske præparater indeholdende de omhandlede forbindelser.
DK 167978 B1 2
Glycerophospho-L-serin-derivaterne med den almene formel I har i hvert enkelt tilfælde et chiralitetscentrum i serin-delen af molekylet, og i afhængighed af betydningen af grupperne A, B og C kan derivaterne indehol-5 de endnu et chiralitetscentrum i glycerin-delen af mole kylet. Forbindelserne ifølge opfindelsen med den almene formel I omfatter dermed alle de mulige chirale og dia-stereomere former af forbindelserne.
Udtrykket "alkoxy" refererer til ligekædede eller en 10 eller flere gange forgrende alkylethergrupper, som for trinsvis indeholder 14 - 20 carbonatomer, især 16 -18 carbonatomer. Som eksempler på foretrukne alkoxy-grupper kan anføres tetra-, penta-, hexa-, hepta-, octa-og nonadecyloxy, eicosyloxy samt deres forgrenede ana-15 loge.
Udtrykket "halogen" henfører til de fire halogener chlor, brom, iod og fluor, blandt hvilke chlor og fluor er særligt foretrukne.
I en foretrukken klasse af forbindelser med den almene 20 formel I betyder C den ovenfor viste phosphatidy1-L-se- ringruppe med formlen III, og den ene af grupperne A og B er C^-C^g-alkoxy, mens den anden er halogen.
En anden foretrukken klasse består af forbindelser med den almene formel I, hvori C betyder den ovenfor viste 25 phosphatidy1-L-serin-gruppe med formlen III, og hvori den ene af grupperne A og B er C^-C^g-alkoxy, mens den anden er en endestillet fluor-substitueret alkoxygruppe med formlen II.
Man foretrækker også sådanne forbindelser med den alme-30 ne formel I, hvori A betyder C^-C^g-alkoxy, B betyder C^-C^Q-alkoxy, og C betyder den ovenfor viste phosphatidy 1-L-serin-gruppe med formlen III.
DK 167978 Bl 3
Endelig foretrækker man enhver klasse af forbindelser med den almene formel I, hvori B betegner phosphatidyl-L-serin-gruppen med formlen III, og hvori den ene af grupperne A og C betyder C^-C^g-alkoxy, mens den anden 5 betyder halogen.
Særligt foretrukne forbindelser ifølge opfindelsen er: l-0-hexadecyl“2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-serin l-0-hexadecyl-2-fluor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-serin l-chlor-l-desoxy-3-0-hexadecyl-glycero-2-phospho~L-serin 10 l-chlor-l-desoxy-2-0-hexadecyl-glycero-3-phospho-L-serin l-0-hexadecyl-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-serin l,2-di-0-hexadecyl-glycero-3-phospho-L-serin 1-0-(2,2,2-trifluorethyl)-2-0-hexadecyl-glyeero-3-phos-pho-L-serin 15 l-0-hexadecyl-2-0-(2,2,2-tri fluorethyl)-glycero-3-phos- pho-L-serin l-chlor-l-desoxy-2-0-octadecyl-glycero-3-phospho-L-serin l-0-octadecyl-2-(2,2,2-trifluorethyl)-glycero-3-phospho-L-serin og 20 l-0-octadecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-serin.
De omhandlede glycero-3(2)-phospho-L-serin-derivater med den almene formel I og deres farmaceutiske acceptable salte fremstilles ved en fremgangsmåde, der er ejendommelig ved, at man: 25 (a) omsætter et glycero-3(2)-phosphorsyre-derivat med den almene formel C «2—A (IV)
CH —D
CH2-E
DK 167978 B1 4 hvori A har den ovenfor anførte betydning, og hvori den ene af grupperne D og E har en af de ovenfor for A angivne betydninger, mens den anden er en gruppe med den almene formel Λ _o— P= 0 (V)
^Y
5 hvori' X og Y enten er ens og betegner hydroxy el ler halogen, eller hvor Y betegner lavere alkoxy eller, ai^yloxy under den forudsætning, at mindst én af grupperne A, D eller E betegner C^-C^Q-alkoxy eller et salt deraf med et beskyttet L-serin-deri-10 vat med den almene formel ^/C00Z1 HO-CH2-CH (VI) xnh-z2 hvori betyder en carboxy-beskyttende gruppe og betyder en amino-beskyttende gruppe, fortrinsvis i nærværelse af et kondensationsmiddel, hvorefter man i vilkårlig rækkefølge eller samtidigt fra-15 spalter beskyttelsesgrupperne Z^ og Z^ og eventuelt hydrolyserer den dannede glycerophosphorsyreester eller det dannede giycerophosphorsyrehalogenid, eller (b) omsætter en glycero-3(2)-phosphoresyreester med 20 den almene formel DK 167978 B1 5
CH - A
I 2 CH — L (VII) ch2~m hvori A har den ovenfor angivne betydning, og hvori den ene af grupperne L og M har en af de ovenfor for A angivne betydninger, mens den anden er en gruppe med den almene formel / OH yr — 0 —P = 0 — 0—P=0 /¾ X0R, X0-(CH2)n-N-!~R3 * • (Tina) eller (Mb) 5 hvor er C^-C^-alkyl, der eventuelt er substitue ret med hydroxy eller halogen, R2, R^ og R^, der er ens eller forskellige, hver for sig betegner hydrogen eller methyl, og n er et helt tal fra 1 til 6, forudsat at mindst én af grupperne A, L eller 10 M betyder C^-C^g-alkoxy, med L-serin i nærværelse af phospholipase D og isolerer den dannede forbindelse med formlen I eller et salt heraf, hvorefter man om ønsket (c) overfører en under (a) eller (b) opnået forbindelse 15 med den almene formel I eller et farmaceutisk ikke- acceptabelt salt deraf i et farmaceutisk acceptabelt DK 167978 B1 6 salt deraf.
Ifølge fremgangsmådevarianten (a) kan forbindelserne med den almene formel I således fremstilles ud fra glyce-ro-3(2)-phosphorsyrederivater med formlen IV og tilsva-5 rende beskyttede L-serin-forbindelser med formlen VI
ved i sig selv kendte metoder, der er nærliggende for fagmanden. Eksempelvis er det kendt at fremstille phos-phatidyIseriner med mættede og umættede acylgrupper ved kondensation af phosphatidsyrer med seriner, hvis 1G amino- og carboxylgrupper er beskyttede, eller ved omsæt ning af diacylglycerol-iodhydriner med beskyttede 0-phos-phoseriner, hvorved beskyttelsesgrupperne spaltes fra de som mellemprodukter dannede beskyttede phosphati-dylseriner, enten samtidigt eller efter hinanden, ved 15 passende metoder. I stedet for phosphatidsyrer kan man anvende phosphatidsyrechlorider i reaktionen. Alkyl-og alkylen-substituerede glycerophosphoseriner lader sig syntetisere på analog måde (A.J. Slotboom og P.P.
Bonsen, Chem. Phys. Lipids _5(1970), 301 - 398; M. Kates 20 i: E.D. Korn (udgiver) Methods in Membrane Biology,
Vol. 8, Plenum Press, New York, 1977, s. 119 ff.; H.
Eibl, Chem. Phys. Lipids 26^ (1980), 403 - 429; A. Her-metter, F. Paltauf og H. Hauser, Chem.Phys.Lipids M] (1982), 35 - 45).
25 Til fremstilling af de hidtil ukendte glycero-3(2)-phos- pho-L-serin-derivater med den almene formel I anvender man fortrinsvis tilsvarende substituerede glycero-3(2 )-phosphorsyrer med den ovenfor viste formel IV, hvori den ene af grupperne D og E er en gruppe med formlen 30 V, hvori X og Y begge er hydroxy.
I stedet for de frie syrer kan man også anvende de tilsvarende phosphorsyredihalogenider (X og Y er halogen i formlen V), fortrinsvis phosphorsyredichloriderne, som DK 167978 B1 7 man opnår ved at omsætte tilsvarende substituerede glyceroler med phosphoroxyhalogenider. Ued omsætningen af et sådant phosphorsyredihalogenid med formlen IU (X og Y er halogen i formel U) med en beskyttet serin af ty-5 pen vist ved formlen VI opstår som mellemprodukt et på serin-gruppen beskyttet glycero-phospho-L-serin-chlorid af en forbindelse med den almene formel I, som før eller efter isolering og før, under eller efter fjernelse af de beskyttende grupper kan omdannes til en forbin-10 delse med den almene formel I eller et salt deraf.
En anden variant af fremgangsmåden ifølge opfindelsen består i, at man omsætter den beskyttede serin med formlen VI med glycerophosporsyreester-halogenider med formlen IV, hvori en af grupperne D eller E betegner en 15 sådan gruppe med formlen V, hvor X er halogen, fortrins vis chlor, og Y er lavere alkoxy eller aryloxy. De som mellemprodukter opnåede serin-gruppe-beskyttede alkyl-eller arylestere af forbindelser med den almene formel I omdannes til de tilsvarende syrer med den almene for-20 mel I eller salte deraf ved sædvanlige kemiske metoder, herunder hydrolyse og fraspaltning af de beskyttende grupper.
GlycerophosphorsyrealkyKeller aryl)ester-halogeniderne med formlen IV er let tilgængelige gennem omsætning 25 af tilsvarende substituerede glyceroler med phosphorsy- realkyl (eller ary 1)ester-dihalogenider.
Som beskyttede L-serin-derivater til brug ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen egner sig sådanne forbindelser med formlen VI, hvori betegner en inden for peptid-30 kemien brugbar, let fraspaltelig carboxy-beskyttende gruppe, som eksempelvis kan fraspaltes ved katalytisk hydrogenolyse, hydrazinolyse, behandling med HC1 eller natriumthiophenolat eller ved hydrolyse, såsom benzyl, DK 167978 B1 8 tert.-butyl, phthalimidomethyloxy, isopropyl eller benz-hydryl, og hvori Z^ betegner en inden for peptidkemien sædvanlig amino-beskyttende gruppe, der eksempelvis kan fjernes ved katalytisk hydrogenolyse, hydrazino-5 lyse eller behandling med HC1 eller myresyre. Sådanne amino-beskyttende grupper er eksempelvis acylgrupper, såsom formyl, acetyl eller tri fluoracetyl, alkoxycarbo-nylgrupper, såsom ethoxycarbony1, tert.-butoxycarbony1, β,β,β-trichlorethoxycarbonyl eller β-iodethoxycarbonyl, 10 aralkoxycarbony1, såsom benzyloxycarbony1 eller p-methoxy- benzyloxycarbonyl, aryloxycarbonyl, såsom phenoxycarbo-nyl, silylgrupper, såsom trimethylsilyl og andre grupper, såsom trityl, tetrahydropyranyl, vinyloxycarbony1, o-nitrophenylsulfonyl, diphenylphosphinyl, p-toluensul-15 fonyl, benzyl og lignende.
De beskyttende grupper og Z^ kan vælges vilkårligt, men det er dog i reglen en fordel, at man til beskyttelse af L-serin vælger sådanne kombinationer af beskyttende grupper, som kan fraspaltes i et enkelt reakfcåons-20 trin, idet man eksempelvis som beskyttet serin-derivat med formel VI anvender N-tert.-butyloxy-L-serin-benzhy-drylester eller lignende.
Omsætningen af en forbindelse med formlen IV med en forbindelse med formlen VI, hvorved der dannes et mellempro-25 . dukt i form af et derivat af en forbindelse med den almene formel I, som stadig er beskyttet på serin-gruppen, ifølge metode (a), gennemføres sædvanligvis på en sådan måde, at man omsætter et glycero-3(2)-phosphorsyre-deri-vat med formlen IV, fortrinsvis et omhyggeligt tørret 30 salt af en glycero-3(2)-phosphorsyre med formlen IV, eksempelvis pyridiniumsaltet, med den beskyttede serin med formlen IV. Man anvender et molforhold på mellem 1:1 og 1:5, og man gennemfører omsætningen i nærværelse af en stærk base, såsom pyridin, triethylamin, "Hiining- DK 167978 B1 9 base" eller lignende, og eventuelt også i nærværelse af et inert, ikke-polært organisk opløsningsmiddel, såsom chloroform, ethylacetat, diethylether, diisopro-pylether, benzen, chlorbenzen, tetrahydrofuran eller 5 lignende.
Omsætningen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et egnet kondensationsmiddel, eksempelvis 2,4,6-triiso-propylbenzensulfonylchlorid, ved en temperatur x området omkring stuetemperatur.
10 Fraspaltningen af de beskyttende grupper fra det ved den ovennævnte omsætning opnåede beskyttede mellemprodukt kan, i afhængighed af de valgte beskyttelsesgrupper, foregå ved metoder, der er velkendte for fagmanden. Eksempelvis kan mellemprodukter i form af benzhydryles-15 tere, der er beskyttet med alkoxycarbonylgrupper, over føres i forbindelser med formlen I under fraspaltning af begge beskyttelsesgrupper ved behandling med HC1, fortrinsvis ved at lede HC1 igennem opløsninger af mellemprodukterne i organiske opløsningsmidler. Eventuelle 20 trityl-beskyttelsesgrupper kan fjernes ved hydrogeno- lyse, mens andre beskyttende grupper kan fjernes ved hydrolyse, hydrazinolyse eller lignende.
Ifølge fremgangsmådevarianten (b) kan man udvinde forbindelserne med den almene formel I fra glycero-3(2)-25 phosphorsyreestere med den almene formel VII gennem en enzymatisk katalyseret forestring ved hjælp af phospholipase D ved i sig selv kendte metoder.
Man har allerede fremstillet enkelte phospholipider ved hjælp af phospholipase D (H. Eibl et al., Methods 30 in Enzymology, TZ, 1981, 632 - 639), idet man som substra ter ved reaktionen til dels anvendte glycerophosphor-syrealkylestere og hermed analoge forbindelser, som DK 167978 B1 10 ikke var naturligt forekommende. Ved den enzymatiske syntese af phosphatidylseriner ud fra naturlige phospha-tidylcholiner (P. Comfurius et al., Biochim.Biophys.
Acta 488, 1977, 36 - 42) har man hidtil kun kunnet opnå 5 beskedne udbytter af phosphatidylserinerne, og man har især kunne iagttage en hydrolyse under dannelse af phos-phatidsyrer. Man har hidtil ikke anvendt andre substrater end de naturligt forekommende substrater til fremstilling af phosphatidylseriner ved forestring ved hjælp 10 af phospholipase D.
I det væsentlige foregår fremstillingen af de omhandlede glycero-3(2)-phospho-L-serin-derivater på den måde, at man lader en forbindelse med den almene formel VII i vandig opløsning eller suspension reagere med L-serin 15 under tilsætning af organiske opløsningsmidler, eksempel
vis ether og/eller chloroform, og en puffer, eksempelvis en natriumacetat- eller tris-puffer, ved en pH-værdi på mellem 4,8 og 8 i nærværelse af et calciumsalt (ved en molaritet, der fortrinsvis er mellem 0,01 og 0,1 20 mol/liter) under tilstedeværelse af phospholipase D
ved temperaturer på mellem 10 og 50 °C. En særlig fordel ved den omhandlede fremgangsmåde ligger i, at man ved omsætningen kan anvende ikke-beskyttet serin.
Efter gennemført omsætning (der eksempelvis kan følges 25 ved tyndtlagschromatografi) inaktiveres enzymet, for trinsvis ved tilsætning af en 0,1 M ethylendiamintetra-eddikesyreopløsning (EDTA), hvorefter det dannede glycero-3(2)-phospho-L-serin-derivat med den almene formel I isoleres og renses på sædvanlig måde, f.eks. ved hjælp 30 af chromatografiske metoder, såsom tyndtlagschromatogra- fi, kolonnechromatografi eller højtryksvæskechromatografi.
Som allerede anført omfatter den almene formel I alle de mulige chirale og diastereomere former af forbindel- DK 167978 B1 11 seme Ifølge opfindelsen. Såvel ifølge fremgangsmådeva-rianten (a) som ifølge fremgangsmådevarianten (b) kan man opnå enten chirale eller diastereomere slutprodukter i afhængighed af de steriske forhold i udgangsmaterialer-5 ne med formlen IV, henholdsvis formlen VII. Hvis man i en af de to beskrevne fremgangsmådevarianter anvender chirale udgangsmaterialer eller sådanne udgangsmaterialer, som ikke indeholder et chiralitetscentrum, opnår man chirale former af forbindelserne med den almene 10 formel I. Anvender man derimod racemiske udgangsmateria ler med formlen IV eller formlen VII, fører den omhandlede omsætning til blandinger af diastereomere forbindelser med den almene formel I, uanset om man går ud fra et beskyttet L-serin-derivat eller fra L-serin i sig selv.
15 De ved fremgangsmådevarianterne (a) eller (b) opnåede forbindelser med den almene formel I eller disses farmaceutisk ikke-acceptable salte kan ifølge procestrin (c) overføres i tilsvarende farmaceutisk acceptable salte på sædvanlig måde ved hjælp af uorganiske eller 20 organiske baser. Denne saltdannelse kan eksempelvis gennemføres ved, at man opløser den pågældende forbindelse med formlen I i et egnet organisk opløsningsmiddel, eksempelvis en lavere alifatisk alkohol, tilsætter en ækvivalent mængde af den ønskede base og sørger for 25 en omhyggelig blanding. Efter afsluttet saltdannelse afdamper man opløsningsmidlet i vakuum.
Farmaceutisk acceptable salte er eksempelvis metalsalte, især alkalimetal- og jordalkalimetalsalte, såsom natrium-, kalium-, magnesium- eller calciumsalte. Som eksemp-30 ler på andre farmaceutisk acceptable salte kan nævnes ammoniumsalte, som er afledt af ammoniak eller organiske aminer, eksempelvis mono-, di- eller tri-lavere -(alkyl, cycloalkyl eller hydroxyalkyl)-aminer, lavere alkylen-diaminer eller heterocycliske baser, f.eks. methylamin, DK 167978 B1 12 diethylamin, triethylamin, dicyclohexylamin, triethanol-amin, ethylendiamin, pyridin, piperidin, piperazin, morpholin og lignende.
Farmaceutisk ikke-acceptable salte af forbindelser med 5 den almene formel I kan på sædvanlig måde omdannes til farmaceutisk acceptable salte, idet den farmaceutisk ikke-acceptable kation udskiftes med en farmaceutisk anvendelig kation. Som et alternativ hertil kan man neutralisere et farmaceutisk ikke-acceptabelt salt og 10 derefter omsætte den således opnåede frie syre med en base, hvorved der opnås et farmaceutisk acceptabelt salt.
De glycero-3(2)-phosphorsyre-derivater med den almene formel IV, som anvendes som udgangsmaterialer ved frem-13 gangsmådevarianten (a), er enten i sig selv kendte for bindelser eller forbindelser, der kan fremstilles ved i sig selv kendte metoder (se f.eks. H. Brachwitz et al., Chem. Phys. Lipids 3_1> 1982, 33 - 52, og A. Hermet-ter et al., Chem. Phys. Lipids 3JD, 1982, 35 - 45). Der 20 kan især henvises til de nærmere angivelser i udførelses- eksemplerne i de ovennævnte artikler.
De glycero-3(2)-phosphorsyreestere med den almene formel VII, som anvendes som udgangsmaterialer ved fremgangsmådevarianten (b), er ligeledes enten i sig selv kendte 25 forbindelser eller forbindelser, som kan opnås ved i sig selv kendte metoder (se f.eks. DDR-patentskrifterne nr. 222 594 og nr. 222 595).
En phospholipase D, som egner sig til den enzymatiske omsætning, kan i analogi med allerede kendte metoder 30 opnås på enkelt måde ud fra hvidkål, som man homogeni serer, hvorefter man filtrerer homogenisatet og centrifugerer den vandige fase i 45 minutter ved 25000 g.
DK 167978 B1 13
Den klare overvæske omsættes med 2 volumener acetone.
Væsken dekanteres fra det dannede bundfald under anvendelse af en glasfritte, og resten centrifugeres i 20 minutter ved 13000 g og en temperatur på 5 °C. Det med 5 acetone fugtede, enziymholdige præparat tørres over phos- phorpentoxid i vakuum.
Forbindelserne med den almene formel I og saltene deraf er biologisk højaktive, og de har i særdeleshed en udpræget antitumorvirkning. Disse værdifulde farmakologiske 10 egenskaber kan eftervises såvel in vitro som in vivo under anvendelse af standardmetoder, idet man f.eks. bestemmer hæmningen af væksten af Erhlich-Ascites-tu-morceller in vitro under indvirkning af glycero-3(2 )-phospho-L-serin-derivater med den almene formel I.
15 I denne test (tabel I) bevirker de omhandlede forbin delser, som eksempelvis er l-0-hexadecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-serin (forbindelse nr. 1) l-0-hexadecyl-2-fluor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-serin 20 (forbindelse nr. 2) l-chlor-l-desoxy-3-0-hexadecyl-glycero-2-phospho-L-serin (forbindelse nr. 3) og 1-0-(2,2,2-trifluorethyl)-2-0-hexadecyl-glycero-3-phos-pho-L-serin (forbindelse nr. 4), 25 allerede i meget ringe koncentrationer en signifikant hæmning af cellevæksten af Erhlich-Ascites-tumorceller.
DK 167978 B1 14
TABEL I
Hæmning af væksten (%) af Erhlich-Ascites-tumorceller in vitro med forbindelser med den almene formel I i afhængighed af koncentrationen 5 Forbindelse nr. Koncentration (^uM) 100 20 10 5 2 1 % hæmning 1 95 80 55 30 10 16 2 95 82 51 18 13 10 10 3 93 81 68 38 17 15 4 100 74 36 10 V 100 62 23 4 0 0 V = sammenligningsforbindelse: l-0-octadecyl-2-G-methyl-glycero-3-phosphocholin.
15 Virkningen in vitro af de omhandlede forbindelser er kvalitativt sammenlignelig med den cytostatisk virksomme forbindelse l-0-octadecyl-2-0-methyl-glycero-3-phos-phocholin, som allerede har fundet klinisk anvendelse inden for cancerterapien (P.G. Munder et al. i: "Aug-20 menting Agents in Cancer Therapy", s. 441 - 458, Raven Press, New York, 1981; W.E. Berdel et al. Cancer 50, 1982, 2011 - 2015). I forhold til sammenligningsforbindelsen har forbindelserne ifølge opfindelsen den fordel, at der indtræder en signifikant antitumorvirkning allere-25 de ved væsentligt lavere koncentrationer, således at man for at opnå den samme cytostatiske virkning kan nøjes med at indgive betydeligt mindre dosisenheder.
På grund af disse egenskaber giver de omhandlede forbindelser forventninger om en fordelagtig anvendelse inden 30 for den humane medicin til behandling og forebyggelse af tumorsygdomme.
DK 167978 B1 15
Alt i alt er den udprægede antitumorvirkning af de omhandlede glycero-3(2)-phospho-L-serin-derivater overraskende, eftersom man hidtil har antaget (se f.eks. D.R.
Hoffman et al., Research Commun. in Chem. Pathology 5 and Pharmacology 44, 1984, 239 - 306), at antitumorvirk- ningen af alkylphospholipid-analoge er begrænset til forbindelser, som indeholder en phosphocholin-gruppe.
De omhandlede forbindelser med formlen I finder anvendelse som lægemidler, og den foreliggende opfindelse 10 angår derfor også et farmaceutisk præparat, som er ejen dommeligt ved, at det indeholder en forbindelse med formlen I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf i kombination med sædvanlige galeniske hjælpestoffer og/eller bærermaterialer. Hjælpestofferne og bærermate-15 rialerne kan være både organiske og uorganiske, og ti.l enteral eller parenteral indgivelse egner sig f.eks. farmaceutisk harmløse opløsningsmidler, gelatine, gummi arabicum, mælkesukker, stivelse, magnesiumstearat, talkum, planteolier, polyalkylenglycoler, vaseline eller 20 lignende.
De farmaceutiske præparater kan foreligge i fast form, f.eks. som tabletter, drageer, suppositorier, kapsler eller lignende, eller i flydende form, f.eks. som opløsninger, suspensioner eller emulsioner. De kan eventuelt 25 være underkastet sterilisering, og de kan indeholde hjælpestoffer, såsom konserverings-, stabiliserings-eller emulgeringsmidler, salte til forandring af det osmotiske tryk og lignende.
De farmaceutiske præparater kan især indeholde de omhand-30 lede forbindelser i kombination med andre terapeutisk værdifulde stoffer. Sammen med sådanne stoffer kan de omhandlede forbindelser være formuleret til kombinations-præparater ved hjælp af de ovenfor angivne hjælpemidler DK 167978 B1 16 og/eller bærerstoffer.
Opfindelsen illustreres nærmere ved de følgende eksempler. EKSEMPEL 1 l-0-Hexadecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-serin 5 l-0-Hexedecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phosphorsyre: 335 mg (1 mmol) l-0-hexadecyl-2-chlor-2-desoxy-glycerol opløses i 10 ml tør tetrahydrofuran, og der tilsættes 0,6 ml pyridin, hvorefter den således opnåede opløsning tildryppes en opløsning af 0,35 ml (3,755 mmol) phosphor-10 oxychlorid i 3,5 ml vandfri tetrahydrofuran ved 0 °C under omrøring. Der omrøres i yderligere 3 timer ved 0 QC. Der tilsættes 16 ml af en 10¾ natriumbicarbonat-suspension, og der omrøres i 15 minutter, hvorefter blandingen indstilles til en pH-værdi på 7 ved hjælp 15 af fortyndet saltsyre. Derpå ekstraheres blandingen flere gange med en blanding af ether og chloroform. Ekstrakterne inddampes i vakuum, hvorved man opnår 390 mg (92¾ af det teoretiske udbytte) råprodukt, som er tilstrækkeligt rent til at kunne anvendes i de følgende 20 reaktioner.
Rf 0,15 (silicagel 60, Alufolie Merckj 01101^/011^01)/25¾ NH3 = 50:25:6, v/v/v).
l-0-Hexadecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-N-tert.-butoxycarbonyl-L-serinbenzhydrylester: 25 225 mg (0,54 mmol) l-0-hexadecyl-2-chlor-2-desoxy-glyce- ro-3-phosphorsyre, 0,3 g (0,81 mmol) N-tert.-butoxy-carbonyl-L-serin-benzhydrylester og 0,657 g (2,35 mmol) 2,4,6-triisopropylbenzensulfonylchlorid omrøres med DK 167978 Bl 17 13 ml vandfri pyridin ved stuetemperatur i 36 timer.
Derefter tilsættes nogle dråber vand, og der inddampes i vakuum, hvorpå inddampningsresten efterdesti1leres flere gange med toluen. Resten optages i ether, og blan-5 dingen filtreres og inddampes. Det herved opnåede rå produkt adsorberes på silicagel (35 g, KG 60, Merck 40 - 63 ,/Um) og elueres med 50 ml chloroform efterfulgt af 50 ml af en blanding af chloroform og methanol (9:1).
Der opsamles fraktioner på hver 15 ml. Fraktionerne 10 6-12 sammenlægges og inddampes. På denne måde opnår man 161 mg (38?ό af det teoretiske udbytte) rent produkt.
Rf: 0,72 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHCl^/CH^0H/25?i • NH3 = 65:35:5, v/v/v).
l-0-Hexadecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-serin: 15 161 mg (0,21 mmol) l-0-hexadecyl-2-chlor-2-desoxy-glyce- ro-3-phospho-N-tert.-butoxycarbonyl-L-serin-benzhydryl-ester opløses i 30 ml tør chloroform, og under omrøring ved 0 °C ledes tør HCl-gas igennem opløsningen i 15 minutter. Derefter ledes tørt nitrogen igennem opløsnin-20 gen i 1 time. Efter denne behandling vaskes opløsnin gen med fortyndet vandig ammoniak og derefter med vand, hvorpå den inddampes.
Det herved opnåede råprodukt renses over silicagel (10 g KG 60, Merck 40 - 63 ^um; elueringsmiddel: CHCl^/CH^OH, 25 2:1 v/v med stigende methanol-gradient). Efter forening af de i tyndtlagschromatogrammet ensartede fraktioner og afdampning af opløsningsmidlet opnår man 38 mg rent produkt (36¾ af det teoretiske udbytte).
Rf: 0,13 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHC1^/CH^OH/h^O = 30 50:25:4, v/v/v).
C22H45CIPN07 (50Z>02) Beregnet: C 52,63 H 9,04 N 2,79
Fundet : C 51,76 H 8,82 N 2,60.
DK 167978 B1 18
Analogt med den i eksempel 1 beskrevne arbejdsgang fremstilles de i eksemplerne 2-9 angivne forbindelser: EKSEMPEL 2 l-0-Hexadecyl-2-fluor-2-desoxy-qlycero-3-phospho-L-serin 3 l-0-Hexadecyl-2-fluor-2-desoxy-glycero-3-phosphorsyre:
Ud fra 334 mg (1,05 mmol) l-0-hexadecyl-2-fluor-2-desoxy-glycerol. Udbytte: 320 mg (76% af det teoretiske udbytte).
Rf: 0,15 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHClj/CH^OH/255i NH3 = 50:25:6, v/v/v).
10 l-0-Hexadecyl-2-fluor-2-desoxy-glycerO“3-phospho-N-tert.- butoxycarbonyl-L-serin-benzhydrylester:
Ud fra 184 mg (0,46 mmol) l-0-hexadecyl-2-fluor-2-des-oxy-glycero-3-phosphorsyre. Udbytte: 190 mg (54% af det teoretiske udbytte) rent produkt.
15 Rf: 0,75 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHCl^/CH^OH/25% NH3 = 65:35:5, v/v/v).
l-0-Hexadecyl-2-fluor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-serin:
Ud fra 190 mg (0,25 mmol) l-0-hexadecyl-2-fluor-2-desoxy-glycero-3-phospho-N-tert.-butoxycarbonyl-L-serin-benz-20 hydrylester. Udbytte: 88 mg (72% af det teoretiske ud bytte) rent produkt.
Rf: 0,12 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHClj/Ch^OH/t^O = 50:25:4, v/v/v).
l-Chlor-l-desoxy-3-0-hexadecyl-qlycero-2-phospho-L-serin EKSEMPEL 3 DK 167978 B1 19 l-Chlor-l-desoxy-3-0-hexadecyl-glycero-2-phosphorsyre:
Ud fra 350 mg (1,05 mmol) l-chlor-l-desoxy-3-O-hexadecyl-5 glycerol. Udbytte: 322 mg (74% af det teoretiske udbytte).
Rf: 0,18 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25% NH3 = 50:25:6, v/v/v).
l-Chlor-l-desoxy-3-0-hexadecyl-glycero-2-phospho-N-tert.- butoxycarbonyl-L-serin-benzhydrylester: 10 Ud fra 322 mg (0,77 mmol) l-chlor-l-desoxy-3-O-hexadecyl-glycero-2-phosphorsyre. Udbytte: 318 mg (53% af det teoretiske udbytte) rent produkt.
Rf: 0,80 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHClj/CHjOH/25% NH3 = 65:35:5, v/v/v).
15 · l-Chlor-l-desoxy-3-0-hexadecyl-glycero-2-phospho-L-serin:
Ud fra 308 mg (0,40 mmol) l-chlor-l-desoxy-3-O-hexadecyl-glycero-2-phospho-N-tert.-butoxycarbonyl-L-serin-benz-hydrylester. Udbytte: 87 mg (43% af det teoretiske udbytte) rent produkt.
20 Rf: 0,13 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHC^/Ch^QH/t^O = 50:25:4, v/v/v).
l-Chlor-l-desoxy-3-0-octadecyl-qlycero-2-phospho-L-serin EKSEMPEL 4 DK 167978 B1 20 l-Chlor-l-desoxy-3-0-octadecyl-glycero-2-phosphorsyre:
Ud fra 417 mg (1,15 mmol) l-chlor-l-desoxy-3-O-octade-5 cyl-glycerol. Udbytte: 450 mg (89¾ af det teoretiske udbytte).
Rf: 0,18 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHC1 ^/CH^0H/25?0 NH3 = 50:25:6, v/v/v).
l-Chlor-l-desoxy-3-0-octadecyl-glycero-2-phospho-N-tert.-10 butoxycarbonyl-L-serinbenzhydrylester:
Ud fra 320 mg (0,72 mmol) l-chlor-l-desoxy-3-O-octade-cy1-glycero-2-phosphorsyre. Udbytte: 258 mg (45¾ af det teoretiske udbytte) rent produkt.
Rf: 0,80 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHCl^/CH^OH/2550 15 · NH3 = 65:35:5, v/v/v).
l-Chlor-l-desoxy-3-0-octadecyl-glycero-2-phospho-L-serin:
Ud fra 250 mg (0,32 mmol) l-chlor-l-desoxy-3-O-octade-cyl-glycero-2-phospho-N-tert.-butoxycarbonyl-L-serin-benzhydrylester. Udbytte: 61 mg (36¾ af det teoretiske 20 udbytte) rent produkt.
Rf: 0,13 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHCl-j/CH-jOH/^O = 50:25:4, v/v/v).
l-O-Octadecvl-2-fluor-2-desoxy-qlycero-3-phospho-L-serin EKSEMPEL 5 DK 167978 B1 21 l-0-0ctadecyl-2-fluor-2-desoxy-glycero-3-phosphorsyre:
Ud fra 346 mg (1 mmol) l-0-octadecyl-2-fluor-2-desoxy-5 glycerol. Udbytte: 324 mg (76% af det teoretiske udbytte).
Rf: 0,15 (silicagel 60, Alufolie Merck,· CHCl^/CH^OH/25% NH3 = 50:25:6, v/v/v).
l-0-0ctadecyl-2-fluor-2-desoxy-glycero-3-phospho-N-tert.-butoxycarbonyl-L-serin-benzhydrylester: 10 Ud fra 307 mg (0,72 mmol) l-0-octadecyl-2-fluor-2-des- oxy-glycero-3-phosphorsyre: Udbytte: 281 mg (50% af det teoretiske udbytte) rent produkt.
Rf: 0,75 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25% NH3 = 65:35:5, v/v/v).
15 l-0-0ctadecyl-2-fluor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-serin:
Ud fra 281 mg (0,36 mmol) 1-0-octadecy1-2-fluor-2-desoxy-glycerol-3-phospho-N-tert.-butoxycarbonyl-L-serin-benzhy-drylester. Udbytte: 54 mg (29% af det teoretiske udbytte) rent produkt.
20 Rf: 0,13 (silicagel 60, Alufolie Merck; = 50:25:4, v/v/w).
l-0-0ctadecyl-2-chlor-2-desoxy--qlycero-3-phospho-L-serin EKSEMPEL 6 DK 167978 B1 22 l-0-0ctadecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phosphorsyre:
Ud fra 544 mg (1,5 mmol) l-0-octadecyl-2-chlor-2-desoxy-5 glycerol. Udbytte: 597 mg (90¾ af det teoretiske udbytte).
Rf: 0,16 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHCl^/CH^0H/25?o NH3 = 50:25:6, v/v/v).
l-0-0ctadecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-N-tert.~ butoxycarbonyl-L-serin-benzhydrylester: 10 Ud fra 443 mg (1 mmol) l-0-octadecyl-2-chlor-2-desoxy- glycero-3-phosphorsyre. Udbytte: 382 mg (48¾ af det teoretiske udbytte) rent produkt.
Rf: 0,80 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHCl^/CH^OH/25% NH3 = 65:35:5, v/v/v).
15 l-0-0ctadecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-serin:
Ud fra 382 mg (0,48 mmol) l-0-octadecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-IM-tert.-butoxycarbonyl-L-serin-benz-hydrylester. Udbytte: 102 mg (40¾ af det teoretiske udbytte) rent produkt.
20 Rf: 0,13 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHClj/CHjOH/l-^O = 50:25:4, v/v/v).
EKSEMPEL 7 l-Q-Tetradecyl-2-chlor-2-desoxy-qlycero-3-phospho-L-serin DK 167978 B1 23 l-0-Tetradecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phosphorsyre:
Ud fra 368 mg (1,2 mmol) l-0-tetradecyl-3-chlor-2-desoxy-5 glycerol. Udbytte: 445 mg (96% af det teoretiske udbytte).
Rf: 0,14 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25% NH3 = 50:25:6, v/v/v).
l-0-Tetradecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-N-tert.- butoxycarbonyl-L-serin-benzhydrylester: 10· Ud fra 425 mg (1,1 mmol) 1-0-tetradecyl-2-chlor-2-desoxy- glycero-3-phosphorsyre. Udbytte: 423 mg (52% af det teoretiske udbytte) rent produkt.
Rf: 0,72 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25% NH3 = 65:35:5, v/v/v).
15 l-0-Tetradecyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-serin:
Ud fra 192 mg (0,26 mmol) l-0-tetradecyl-2-chlor-2-des-oxy-glycero-3-phospho-N-tert.-butoxycarbonyl-L-serin-benzhydrylester. Udbytte: 39,5 mg (32% af det teoretiske udbytte) rent produkt.
20 ' Rf: 0,13 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).
l-0-Pentyl-2-chlor-2-desoxy-qlycero-3-phospho-L-serin DK 167978 B1 24 EKSEMPEL 8 l-0-Pentyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phosphorsyre:
Ud fra 271 mg (1,5 mmol) 1-0-pentyl-2-chlor-2-desoxy-5 glycerol. Udbytte: 250 mg (64¾ af det teoretiske udbytte).
Rf: 0,10 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHC1^/CHjOH/25% NH3 = 50:25:6, v/v/v).
l-0-Pentyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-N-tert.- butoxycarbonyl-L-serin-benzhydrylester: 10 Ud fra 208 mg (0,8 mmol) 1-0-pentyl-2-chlor-2-desoxy- glycero-3-phosphorsyre. Udbytte: 407 mg (83¾ af det teoretiske udbytte) rent produkt.
Rf: 0,70 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHCl3/CH30H/25?i NHj = 65:35:5, v/v/v).
15 1-0-Penty1-2-chlor-2-desoxy-giycero-3-phospho-L-serin:
Ud fra 406 mg (0,66 mmol) l-0-pentyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-N-tert.-butoxy-L-serin-benzhydrylester. Udbytte: 64 mg (28¾ af det teoretiske udbytte) rent produkt.
20 Rf: 0,11 (silicagel 60, Alufolie Merck; CHCl^/CH^OH/H^O = 50:25:4, v/v/v).
EKSEMPEL 9 l-0-Hexadecyl-2-desoxy-qlycero-3-phospho-L-serin DK 167978 B1 25
En blanding af 1 g L-serin, 1,9 ml 0,1 M acetatpuffer (pH 5,6) indeholdende 0,1 M CaC^, 40 mg 1-0-hexadecy1-5 2-desoxy-glycero-phosphorsyreethylester, 2 ml af en blanding af ether og chloroform (9:1, v/v) og 100 mg af et phospholipase-D-præparat, der er udvundet fra ca. 500 g hvidkål, omrøres kraftigt i 40 timer ved 40 °C.
Efter afkøling til stuetemperatur tilsættes 4,35 ml 10 0,1 M ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA). De organiske opløsningsmidler fjernes ved gennemblæsning med nitrogen. Derefter omrøres blandingen med et 4,3 gange så stort volumen af en blanding af chloroform og methanol (5:8, v/v) i 30 minutter, og den ikke-omsatte serin, som derved 15 skiller sig ud, fjernes ved frasugning.
Filtratet omrøres i 10 minutter med 1 volumen vand og 3,7 volumener chloroform, hvorefter den organiske fase frasepareres og inddampes. Den herved opnåede rest separeres kolonnechromatografisk på 20 g carboxymethylcel-20 lulose (Servacel CM 52), idet man først eluerer med 75 ml chloroform (fraktion 1) og derefter med 500 ml af fire forskellige blandinger af chloroform og methanol (9:1, 8:2, 7:3 og 1:1, v/v), som giver fraktionerne 2-5. Slutproduktet udvindes i ren form fra fraktion 25 5.
Udbytte: 15 mg rent produkt (33?□ af det teoretiske udbytte).
Rf: 0,13 (Merck, silicagel 60, færdig plade,· CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).
DK 167978 B1 26
Analogt med den i eksempel 9 beskrevne arbejdsgang fremstilles de i eksemplerne 10 - 19 angivne forbindelser.
EKSEMPEL 10 1-0-Hexadecy1-2-0-(2,2,2-trifluorethyl)-glycero-3-phospho-5 L-serin_
Ud fra 40 mg 1-0-hexadecy1-2-0-(2,2,2-trifluorethyl)-glycero-3-phosphocholin. Udbytte: 12 mg (30¾ af teorien) rent produkt.
Rf: 0,13 (Merck silicagel 60, færdig plade; 10 CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).
EKSEMPEL 11 l-0-Hexadecyl-2-0-(2,2,2-trifluorethyl)-glycero-3-phos-pho-L-serin_
Ud fra 40 mg l-O-hexadecyl-2-O-(2,2,2-trifluorethy 1) -15 glycero-3-phosphorsyre-2-bromethylester. Udbytte: 13,5 mg (35¾ af teorien) rent produkt.
Rf: 0,13 (Merck silicagel 60, færdig plade; CHC13/CH3OH/H20 = 50:25:4, v/v/v).
EKSEMPEL 12 20 · l-Chlor-l-desoxy-2-0-hexadecyl-qlycero-3-phospho-L-serin
Ud fra 40 mg l-chlor-l-desoxy-2-0-hexadecyl-glycero-3-phosphocholin. Udbytte: 15 mg (37¾ af teorien) rent produkt.
DK 167978 B1 27
Rf: 0,14 (Merck silicagel 60, færdig plade; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).
• EKSEMPEL 13 1-0-(2,2,2-T ri fluorethyl)-2-0-hexadecyl-glycero-3-phos-5 pho-L-serin_
Ud fra 40 mg 1-0-(2,2,2-trifluorethy1)-2-0-hexadecy1-glycero-3-phosphocholin. Udbytte: 18 mg (44% af teorien) rent produkt.
Rf: 0,13 (Merck silicagel 60, færdig plade; 10 CHC13/CH3OH/H20 = 50:25:4, v/v/v).
EKSEMPEL 14 l-0-Eicosanyl-2-chlor-2-desoxy-qlycero-3-phospho-L-serin
Ud fra 40 mg l-0-eicosanyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phosphorsyre-n-butylester. Udbytte: 14,5 mg (34% af 15 teorien) rent produkt.
Rf: 0,15 (Merck silicagel 60, færdig plade; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).
EKSEMPEL 15 l-0-Triacontyl-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-20 serin_____
Ud fra 60 mg 1-0-triacontyl-2-chlor-2-desoxy-glycero- 3-phosphorsyreethylester. Udbytte: 14 mg (33% af teorien) rent produkt.
DK 167978 B1 28
Rf: 0,20 (Merck silicagel 60, færdig plade; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).
EKSEMPEL 16 l-0-0ctadecyl-2-0-(2,2,2-trifluorethyl)-glycero-3-phos-5 pho-L-senn___
Ud fra 40 mg l-0-octadecyl-2-0-(2,2,2-trifluorethyl)-glycero-3-phosphorsyre-2-bromethylester. Udbytte: 13,5 mg (32¾ af teorien) rent produkt.
Rf: 0,14 (Merck silicagel 60, færdig plade; 10 CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).
EKSEMPEL 17 l,2-Di-Q-hexadecyl-qlycero-3-phospho-L-serin
Ud fra 40 mg 1,2-di-0-hexadecyl-glycero-3-phosphocholin. Udbytte: 13 mg (32¾ af teorien) rent produkt.
15 Rf: 0,22 (Merck silicagel 60, færdig plade; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).
EKSEMPEL 18 1-0-Eicosany1-2-0-(2,2,2-trifluorethyl)-glycero-3-phos-pho-L-serin_ 20 Ud fra 40 mg l-0-eicosanyl-2-0-(2,2,2-trifluorethyl)- glycero-3-phosphocholin. Udbytte: 16 mg (40¾ af teorien) rent produkt.
Rf: 0,14 (Merck silicagel 60, færdig plade; CHC13/CH3OH/H20 = 50:25:4, v/v/v).
EKSEMPEL 19 29 DK 167978 B1 l-0-(2-Methoxy-octadecyl)-2-chlor-2-desoxy-glycero-3-phospho-L-senn______
Ud fra 50 mg l-0-(2-methoxy-octadecyl)-2-chlor-2-desoxy-5 glycero-3-phosphorsyreethylester. Udbytte: 16 mg (28% af teorien) rent produkt.
Rf: 0,15 (Merck silicagel 60, færdig plade; CHC13/CH30H/H20 = 50:25:4, v/v/v).

Claims (8)

1. Glycero-3(2)-phospho-L-serin-derivater, kendetegnet ved, at de har den almene formel CH,-A I L CH—B (I) CH2-C hvori A betegner C^-C^g-alkoxy, halogen eller en gruppe med den almene formel — 0— (CH2)n — CF^ (II) 5. hvilken n er 0, 1, 2 eller 3, og hvori den ene af grupperne B og C har en af de for gruppen A angivne betydninger, mens den anden er en phosphatidyl-L-serin-gruppe med formlen 0' .C00H —o —P—0—CH2—CH (III) OH DK 167978 B1 31 under den forudsætning, at mindst én af grupperne A, B og C betegner C^-C^Q-alkoxy, og salte deraf.
2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at mindst én af grupperne A, B og C betegner C.,-C1Q- 16 lo 5 alkoxy.
3. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at en af grupperne A, B og C betegner chlor eller fluor .
4. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet 10 ved, at C betegner phosphatidyl-L-seringruppen med form len III, og at den ene af grupperne A og B betegner C^-C^Q-alkoxy, mens den anden betegner halogen.
5. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at B betegner phosphatidy1-L-serin-gruppen med 15 formlen III, og at den ene af grupperne A og C beteg ner C^-C^Q-alkoxy, mens den anden betegner halogen.
6. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at A betegner C^-C^g-alkoxy, B betegner C^-C^g-alkoxy, og C betegner phosphatidy1-L-serin-gruppen med 20 formlen III.
7. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at C betegner phosphatidyl-L-serin-gruppen med formlen III, og at den ene af grupperne A og B betegner C^-C^g-alkoxy, mens den anden betegner en endestillet 25 fluoreret alkoxygruppe med formlen II.
8. Forbindelse ifølge ethvert af kravene 1-7, kendetegnet ved, at den foreligger i form af dia-stereomere. 1 Fremgangsmåde til fremstilling af glycero-3(2)-phos- DK 167978 B1 32 pho-L-serin-derivater med den almene formel I ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man (a) omsætter et glycero-3(2)-phorphorsyrederivat med den almene formel CH0—A I 2 CH —D (iv) i CH2—E 5 hvori A har den ovenfor angivne betydning, og hvori den ene af grupperne D og E har en af de for gruppen A angivne betydninger, mens den anden er en gruppe med den almene formel — 0— p='o (V) hvori X og Y enten er identiske og betegner hydroxy 10 eller halogen, eller hvori Y betegner lavere alkoxy eller aryloxy, eller et salt heraf under den forudsætning, at mindst én af gruppene A, D og E betegner C^-Cjg-alkoxy, med et beskyttet L-serin-derivat med den almene formel ^/C00Z1 H0 — CH2— CH (vi) xnh-z2 DK 167978 B1 33 hvori er en carboxy-beskyttende gruppe og Z^ er en amino-beskyttende gruppe, fortrinsvis i nærværelse af et kondensationsmiddel, hvorefter man i vilkårlig rækkefølge eller samtidigt fraspalter 5 de beskyttende grupper Z^ og I2 og hydrolyserer eventuelt dannede glycerophosphorsyreestere eller halogenider, eller (b) omsætter en glycero-3(2)-phosphorsyreester med den almene formel CH,-A I z CH - L («') CH2—M 10 hvori A har den ovenfor angivne betydning, og hvori den ene af grupperne L og M har en af de for gruppen A angivne betydninger, mens den anden er en gruppe med den almene formel OH /0- — 0 — p=0 —0 —P=0 / ""-OR. 0-(CH2)n-N^R3 (Mia) eller (Mb) hvori Rn er C,-C,-alkyl, der eventuelt er substi-1 lo 13 tueret med hydroxy eller halogen, og hvori og R^, der er ens eller forskellige, er hydrogen eller methyl og n er et helt tal fra 1-6, under den forudsætning, at mindst en af grupperne A, L og M betegner C^-C^g-alkoxy, med L-serin i nærvæ-20 ‘ relse af phospholipase D og isolerer den dannede forbindelse med den almene formel I eller et salt deraf, hvorefter man om ønsket DK 167978 B1 34 (c) overfører en ifølge (a) eller (b) opnået forbindelse med den almene formel I eller et farmaceutisk ikke-acceptabelt salt deraf i et farmaceutisk acceptabelt salt deraf. 3 10. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det indeholder en forbindelse med den almene formel I ifølge krav 1 eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf i kombination med sædvanlige galeniske hjælpestoffer og/eller bærerstoffer.
DK106287A 1985-07-03 1987-03-02 Glycero-3(2)-phospho-l-serin-derivater og salte deraf, fremgangsmaade til fremstilling af saadanne forbindelser og farmaceutiske praeparater indeholdende disse DK167978B1 (da)

Applications Claiming Priority (12)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DD27823185A DD238979A1 (de) 1985-07-03 1985-07-03 Verfahren zur herstellung von o-alkylglycerophosphoserin-analogen
DD27823185 1985-07-03
DD27823085A DD238978A1 (de) 1985-07-03 1985-07-03 Verfahren zur herstellung von 2-o-alkyl-i-des oxy-1-halogenglycero-3-phospho-l-serinen
DD27823085 1985-07-03
DD27856285 1985-07-15
DD27856085 1985-07-15
DD27856085A DD239208B1 (de) 1985-07-15 1985-07-15 Verfahren zur herstellung von 1-o-alkyl-2-o-trifluoralkylglycerophospho-l-serinen
DD27856185 1985-07-15
DD27856185A DD239209A1 (de) 1985-07-15 1985-07-15 Verfahren zur herstellung von o-alkylsubstituierten glycero- sowie desoxyglycerophospho-serinen
DD27856285A DD239405A1 (de) 1985-07-15 1985-07-15 Verfahren zur herstellung von trifluoralkyl-glycerophospho-l-serinen
PCT/EP1986/000390 WO1987000173A1 (en) 1985-07-03 1986-07-02 Derivatives of glycero-3(2)-phospho-l-serine and pharmaceutical preparations containing them
EP8600390 1986-07-02

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK106287D0 DK106287D0 (da) 1987-03-02
DK106287A DK106287A (da) 1987-03-02
DK167978B1 true DK167978B1 (da) 1994-01-10

Family

ID=27509737

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK106287A DK167978B1 (da) 1985-07-03 1987-03-02 Glycero-3(2)-phospho-l-serin-derivater og salte deraf, fremgangsmaade til fremstilling af saadanne forbindelser og farmaceutiske praeparater indeholdende disse

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP0229128B1 (da)
JP (1) JPH0751588B2 (da)
DE (1) DE3671630D1 (da)
DK (1) DK167978B1 (da)
FI (1) FI82473C (da)
HU (1) HU198076B (da)
NO (1) NO169171C (da)
WO (1) WO1987000173A1 (da)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1249063B (it) * 1991-05-28 1995-02-11 Fidia Spa Impiego di derivati fosfolipidici per la preparazione di composizioni farmaceutiche aventi attivita' immunosoppressiva
ES2034885B1 (es) * 1991-07-10 1994-03-01 Menarini Lab Procedimiento para la preparacion de cetoalquilglicerofosfolipidos.
DE4229877C2 (de) * 1992-09-04 1994-09-15 Max Delbrueck Centrum Phospho- bzw. Phosphono-(N-acyl)-serine und ihre Herstellung
IT1311929B1 (it) * 1999-04-28 2002-03-20 Chemi Spa Procedimento per la preparazione di fosfatidilserine.
WO2005077963A1 (fr) * 2004-01-16 2005-08-25 Institut Superieur Agricole De Beauvais DErivEs de saccharides et d'itols possEdant un groupement O-alkyle ou un groupement O-alkyle et un groupement O-n-butanoyle. Applications comme mEdicaments dans les pathologies prolifEratives tumorales ou bEnignes.

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1123142B (it) * 1979-09-14 1986-04-30 Lpb Ist Farm Uso di glicerilfosforil derivati nella terapia di dislipemie ed epatiti,e composizioni farmaceutiche relative
DD222595A1 (de) * 1984-01-24 1985-05-22 Zi F Molekularbiologie Verfahren zur herstellung von 1-0-alkyl-2-0-(2,2,2-trifluorethyl)glycero-3-phosphocholinen

Also Published As

Publication number Publication date
FI870732A0 (fi) 1987-02-20
EP0229128A1 (de) 1987-07-22
NO169171C (no) 1992-05-20
NO870834D0 (no) 1987-02-27
DE3671630D1 (de) 1990-07-05
JPH0751588B2 (ja) 1995-06-05
DK106287D0 (da) 1987-03-02
FI82473B (fi) 1990-11-30
NO169171B (no) 1992-02-10
HU198076B (en) 1989-07-28
NO870834L (no) 1987-02-27
EP0229128B1 (de) 1990-05-30
DK106287A (da) 1987-03-02
HUT43861A (en) 1987-12-28
FI82473C (fi) 1991-03-11
JPS63500658A (ja) 1988-03-10
WO1987000173A1 (en) 1987-01-15
FI870732A (fi) 1987-02-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1117669B1 (en) Antiviral purine derivatives
US4562179A (en) Phospholipid derivatives, and pharmaceutical composition of the same
CN1223598C (zh) 偕二膦酸酯的制备方法
NO170284B (no) Analogifremgangsmaate til fremstilling av farmakologisk aktive 4'-fo sfatderivater av 4'-demetylepipodofyllotoksinglukosider
EP0337706A1 (en) Substituted aminomethylenebis(phosphonic acid) derivatives
DK167978B1 (da) Glycero-3(2)-phospho-l-serin-derivater og salte deraf, fremgangsmaade til fremstilling af saadanne forbindelser og farmaceutiske praeparater indeholdende disse
EP0184905A1 (en) 2-Acetoacetylglycerol derivatives, their production and use
US4163748A (en) Propane-1,3-diol phosphatides and method of preparing the same
JPH0531560B2 (da)
DK167810B1 (da) Alkylphyosphonoserin, fremgangsmaade til fremstilling deraf og farmaceutisk praeparat indeholdende en saadan forbindelse
AU690805B2 (en) Heteroaryl-substituted deoxy glycero-phosphoethanolamines
US4386079A (en) Method of treating depression
PT97281A (pt) Processo para a preparacao de novos derivados contendo fosforo
EP0350138B1 (en) Processes for preparing phosphonyl hydroxyacyl prolines
EP0355899B1 (en) Nucleotide derivatives
US4531004A (en) Dimetronidazole phosphates
JPH0692424B2 (ja) リン酸エステルの製造法
JP3619277B2 (ja) ジヒドロポリプレニルモノホスフェートの製造方法及びその中間体化合物
EP0118090B1 (en) New 3-alkylthio-2-o-carbamoyl-propane-1.2-diol-1-o-phosphocholines, and processes for their preparation
AU750407B2 (en) Prodrugs of phosphorous-containing pharmaceuticals
FI65261B (fi) Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt anvaendbart dinatriumsalt av n-(fosfonoacetyl)-l-asparaginsyra
EP0548834A1 (en) Stable hexahydrate of etoposide 4'-phosphate disodium salt
KR0149217B1 (ko) 이노시톨 유도체와 그의 제조방법
CN114644651A (zh) 芳氧基磷酰化氨基酸酯化合物的制备方法
CZ20011145A3 (cs) Antivirové purinové deriváty a jejich použití