DD239208B1 - Verfahren zur herstellung von 1-o-alkyl-2-o-trifluoralkylglycerophospho-l-serinen - Google Patents

Description

CH₂-O-R

)-CFo II

CHp-O-P-O-X

0"

Bedeutungen besitzen und X eine CH₃-Gruppierung oder einen Alkylrest mit 2 bis6 Kohlenstoffatomen, der auch durch Cl, Br, OH, NH₂, NHCH₃ N(CH₃I₂ oder N(CH₃)₃ substituiert sein kann, bedeutet, mit L-Serin unter dem katalytischen Einfluß von Phosphorlipase D umsetzt und das entstandene Glycerophosphoserin-Derivat nach an sich bekannten Methoden isoliert.

Anwendungsgebiet der Erfindung

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von i-O-Alkyl-2-O-trifluoralkylglycerophospho-L-serinen der allgemeinen Formel 1, in der

CH₂-O-R

CH-O-(CH₀) -CF., I

I 9

CH₂-O-P-O-CH₂-CH-COOH

ι ι

OH NH₂

R ein Alkylrest mit 5 bis 30 Kohlenstoffatomen und π = 1,2,3 ist, und von deren Salzen.

Die Verbindungen stellen Analoge zu den natürlichen vorkommenden Phosphatidylserinen dar. Sie besitzen gegenüber letzteren eine erhöhte Biostabilität, da sie zum Beispiel durch die Phopholipase A₁ und A₂ nicht gespalten werden. Anwendungsgebiet der Erfindung ist die pharmazeutische bzw. chemische Industrie.

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen

Phosphatidylserine lassen sich durch Kondensation von Phospatidsäuren, Phosphatidsäurechloriden oder Phosphatidsäureesterchloriden mit geschützten Serinderivaten und anschließender Abspaltung der Serin-Schutzgruppen synthetisieren. Auch die Umsetzung von Diacylglycerolhalogenhydrinen mit geschützten Phosphoserinen ist als Herstellungsweise für Phosphatidylserine bekannt (A. J. Slotboom et al., Chem. Phys. Lipids, 5 [1970] 310-397; H.Ebil, Chem. Phys. Lipids, 26 [1980] 405-429; A. Hermetter et al., Chem. Phys. Lipids, 30 [1982] 35-45). Des weiteren sind sie auch durch enzymatisch katalysierte Umsetzungen aus anderen natürlichen Phospholipiden, wie zum Beispiel Eilecithin, erhalten worden. Verfahren zur Herstellung der Glycerophospho-L-serine vom Typ I sind nicht bekannt.

Ziel der Erfindung

Es ist daher das Ziel der Erfindung, ein Verfahren zu entwickeln, welches die Herstellung der Glycerophospho-L-serine vom Typ I gestattet.

-2- 239 208 Darlegung des Wesens der Erfindung

Erfindungsgemäß werden die i-O-Alkyl^-O-trifluoralkylglycero-S-phospho-L-serine der allgemeinen Formel I erhalten, indem man i-O-Alkyl^-O-trifluoralkylglycero-S-phosphorsäureester der allgemeinen Formel II, in der R und η die bereits

CH₂-O-R

CH-O-(CrO-CF., II

ι P

CH₉-O-P-O-X

genannten Bedeutungen besitzen und X eine CH₃-Gruppierung oder einen Alkylrest mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, der auch durch Cl, Br, OH, NH₂, NHCH₃, N(CH₃)₂ oder N(CH₃J₃ substituiert sein kann, bedeutet, mit L-Serin unter dem katalytischer! Einfluß von Phospholipase D umsetzt. Das Enzym läßt sich aus leicht zugänglichen pflanzlichen Rohstoffen, zum Beispiel aus Weißkohl, nach an sich bekannten Methoden gewinnen.

Zur Herstellung der Verbindung vom Typ I wird ein Phospholipid vom Typ Il mit überschüssigem L-Serin in einer wäßrigen Acetat- oder Tris-Puffer-Lösung oder Suspension pH 4,8 bis 8,5), die Calciumchlorid (0,01 bis 0,1 M) enthält und der Ether oder ein Gemisch von Ether mit weiteren organischen Lösungsmitteln, zum Beispiel Chloroform, sowie Phosphorlipase D zugesetzt wurde, bei Temperaturen zwischen 5 und 60"C, vorzugsweise 40°C, unter intensivem Rühren umgesetzt. Nach einer Reaktionszeit von 0,5 bis 24 Stunden wird zur Desaktivienjng des Enzyms eine 0,1 M EDTA-Lösung zugegeben und das entstandenen Phosphatidylserin-Analoge isoliert und durch chromatographische Verfahren gereinigt. Die erfindungsgemäß synthetisierten Verbindungen sind cancerostatisch wirksam.

So zeigt zum Beispiel das i-O-Hexydecyl^-O-U^^-trifluor-ethylglycero-S-phospho-L-serin eine 100% Wachstumshemmung von Ehrlich-Ascites-Tumorzellen bei Konzentrationen < 10"⁴M.

Ausführungsbeispiel

1-0-Hexadecyl-2-0-(2.2,2-trifluorethyl)glycero-3-phospho-L-serin (Formel I: R = C₁₆H₃₃, η = 1)

a) Zu einer Lösung von 1g L-Serin in 1,9 ml 0,1 M Acetatpuffer (pH 5,6) mit 0,1 M CaCI₂, werden 40mg 1-0-Hexadecyl-2-0-(2,2,2-trifluorethyDglycero-3-phosphocholin(Formel II:R = Ci₆H₃₃,n = 1,X = CHr-CHH^(CH₃I₃),2mitEther/Chloroform(9:1,v/v, ethanolfrei) und 100mg eines aus 500g Weißkohl gewonnenen Phospholipase-D-Präparates gegeben. Nach 4 Stunden Rühren bei 40⁰C wird das Gemisch bei 20"C mit 4,35ml 0,1 M EDTA-Lösung versetzt, die organische Phase durch Einleiten von Stickstoff verdampft und die wäßrige Phase mit dem 4,3fachen Volumen Chloroform/Methanol (5:8, v/v) 30 Minuten gerührt. Darauf wird die organische Phase abgetrennt und eingeengt. Der erhaltene Rückstand wird an 20 g Carboxymethylcellulose (Servacel CM 52) säulenchromatographisch getrennt. Nach Elution mit 75ml Chloroform (Fraktion 1), je 500ml Chloroform/ Methanol (9:1,8:2,7:3,1:1 v/v; Fraktionen 2 bis 5) wird das Glycerophosphoserin-Derivat durch Einengen der Fraktion 5 in reiner Form erhalten (12mg). DC (Merck Kieselgel 60, Fertigplatte): Rf 0,13 (CHCI,/CH₃OH/H₂0,50:24:4, v/v/v).

b) Umsetzung von 1 g L-Serin und 40mg 1-0-Hexadecyl-2-0-(2,2,2-trifluorethyl)glycero-3-phosphosäure-2-brom-ethylester (Formel II: R = Ci₆Hs₃, η = 1,X = CH₂-CH₂-Br) analog a). Nach Aufarbeitung und chromatographischer Trennung des Reaktionsgemisches analog a) werden 1,35mg des Glycerophosphoserin-Derivates erhalten.

Eine Vergleichsmöglichkeit der Antitumorwirkung bietet die Vergleichssubstanz ET-I8-OCH3, die als eine der wirksamsten in der BRD entwickelten cytostatisch wirkenden Verbindungen auf Phospholipidbasis gilt. Die nach dem beanspruchten Verfahren hergestellten Verbindungen weisen eine deutlich höhere Antitumorwirksamkeit besonders bei niedrigeren Wirkstoffkonzentrationen gegenüber Ehrlich-Ascites-Tumorzellen in vitro als die Vergleichssubstanz auf: Wachstumshemmung (%) von Ehrlich-Ascites-Tumorzellen durch Phosphatidylserin-Analoge in vitro Wirkstoffkonzentration (Molar)

Substanz 1 · 10~⁴ 2 · ICT⁵ 1 · 10~⁵ 5 · 10

Vergleichssubstanz

U0CH3 100 62 23

Lo-P-C

(ET.I8-OCH3)

Substanz 99 68 34

EOR OCH₂CF₃ O-P-S

P=C = Phosphocholin P=S= Phosphoserin

,-β

Claims (1)

1." Verfahren zur Herstellung von i-O-Alkyl-S-O-trifluoralkyl-glycero-S-phospho-L-serinen der allgemeinen Formel I,

CH₉-O-R
\ ^d

CH-O-(CH₂) -CF, I

I Ο * ^{n ό}

CHp-O-f^-O-CHp-CH
• .1

OH NH₂

in der R ein Alkylrest mit 5 bis 30 Kohlenstoffatomen und η = 1,2,3 ist, und von deren Salzen dadurch gekennzeichnet, daß man i-O-Alkyl-Z-O-trifluoralkyl-glycero-S-phosphorsäureesterder allgemeinen Formel II, inderR und η die bereits genannten