NO145272B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av et farmakologisk aktivt blandet salt av et sulfoglykopeptid og en nitrogenholdig organisk base - Google Patents

Description

Bakgrunn for oppfinnelsen

Foreliggende oppfinnelse vedrører fremstilling av en

gruppe nye blandede salter av polysvovelsyreestere av naturlig forekommende glykopeptider med metaller og organiske baser.

Beskrivelse av teknikkens stilling

US-patent 3.518.24 3 åpenbarer en fremgangsmåte for å sulfonere glykopeptider av animalsk opprinnelse, og det erholdes således sulfoglykopeptider (heretter referert til som SGLP).

Dette patent åpenbarer også at alkali-, jordalkali- og tungmetall-salter av SGLP er nyttige som medikamenter, f .eks. ved behandling av inflammatoriske sykdommer og spesielt ved behandlingen av ledd-gikt og mavesår. Men disse salter, spesielt jordalkalimetall-saltene, er noe toksiske, og det må følgelig tas spesielle forholdsregler for å redusere deres toksisitet når disse salter blir anvendt for terapeutiske formål.

I US-patent 3.872.075 er det åpenbaret salter av sulfoglykopeptider med metaller og aminosyrer, hvilke salter er utstyrt med antiinflammatoriske, legende, antisekretoriske og anti-peptiske egenskaper, hvilket gjør dem spesielt nyttige ved behandling av mave-tolvfingertarm-sykdommer. Saltene som er åpenbaret i ovennevnte angitte patent, er vesentlig ikke-toksiske og gir en antiinflammatorisk aktivitet som er høyere enn den til SGLP-saltene åpenbaret i US-patent 3.518.24 3.

Men saltene som er åpenbaret i det ovenfor nevnte

US-patent 3.872.075, er ineffektive på det perifere nervesystem,

og er følgelig lite aktive på symptomatologien av forannevnte sykdommer, og spesielt mot den smertefulle spasme som av og til følger med mave-tolvfingertarm-sykdommer. Således er det f.eks. kjent at natriumsaltet av sulfoglykopeptid, selv om det er aktivt ved inhibering av både eksperimentelt induserte sår, av aktiviteten til mave-proteaser og av syresekresjonen i mave-

saften, likevel ikke forandrer den intestinale sammentrekning og er ineffektivt på det perifere nervesystem (se Prino et al,

Eur. J. Pharmacol 15, 199-126, 1971; Prino et al., Arzneim-Forsch.

21, 918-921, 1971; Prino et al., Eur. J. Pharmacol. 17, 279-282, 1972; og Prino et al., Am. J. Dig. Dis., JJ, 863-867, 1972).

Oppsummering av oppfin nelsen

Det er nå blitt funnet, og det er et formål ved denne oppfinnelse, at det er mulig fra forannevnte sulfoglykopeptider også å erholde salter med amino- eller ammonium-baser av naturlig eller syntetisk opprinnelse som har spasmolytisk og anti-cholinergisk aktivitet. Det er blitt funnet at disse salter synergistisk forener den anti-sekretoriske, anti-peptiske og beskyttende virkning som fremvises av sulfoglykopeptider, med den spasmolytiske og anti-sekretoriske aktivitet som fremvises av basene, i en slik utstrekning at mengden av både SGLP og base-komponentene som er til stede i det blandede salt, er langt mindre enn mengden av de samme komponenter når disse blir anvendt separat, med utsikt til å erholde det samme terapeutiske resultat. Det knytter seg en bemerkelsesverdig betydning til en slik synergistisk effekt når det tas i betraktning at medikamenter av denne type ofte blir anvendt ved langvarige behandlinger og at anti-cholinergiske midler ved de doser som rett som det er anvendes, fremviser merkbare og vanligvis uønskede side-effekter.

Det er dessuten blitt funnet at de blandede salter fremstilt i henhold til oppfinnelsen er langt mindre toksiske enn den tilsvarende mengde av basen som inneholdes i det samme salt. Det er følgelig ikke mulig å oppnå en verdsettelse av LDgQ, siden det ved den maksimale dose som ble administrert oralt til rotter, ble erholdt en dødelighet som ligger i området fra 10 til 16%

og som bare var avhengig av det spesifikke salt.

I samsvar med oppfinnelsen er det tilveiebragt en fremgangsmåte for fremstilling av et farmakologisk aktivt blandet salt, hvor anion-andelen er et sulfoglykopeptid-polyanion, og kation-andelen er

a) et alkali- eller jordalkali-metallion, og

b) et nitrogenholdig organisk kation avledet fra en organisk base som har spasmolytisk og anti-cholinergisk

virkning.

Fremgangsmåten karakteriseres ved å blande en oppløsning av et sulfoglykopeptid i dets syreform med en oppløsning av et alkali- eller jordalkali-metallsalt av et sulfoglykopeptid, og så blande den således erholdte oppløsning med en oppløsning av en nitrogenholdig organisk base som har spasmolytisk og anti-cholinergisk virkning, og således erholde en oppløsning av det blandede salt, og adskille det blandede salt fra oppløsningsmidlet.

Beskrivelse av de foretrukne utførelser

Som foran nevnt har utførelser av eksperimentelle prøver vedrørende anti-sekretorisk- og anti-sår-aktivitet, vist en høyere synergistisk aktivitet til saltene fremstilt i henhold til oppfinnelsen sammenlignet med for de enkelte SGLP og base-komponenter. Spesielt slike salter som inneholder fra omkring 5 til omkring 20 vekt% med base-komponent, viste seg å inhibere eksperimentelt induserte sår og sekresjon av sur mavesaft i en større utstrekning enn summen av aktivitetene vist av basen og sulfoglykopeptidet når disse ble administrert separat. Ved utførelser av andre prøver ble det vist at de spesifikke aktiviteter til salt-komponentene, så som den anti-peptiske aktivitet til sulfoglykopeptidet og den anti-cholinergiske og spasmolytiske aktivitet til basene, ikke ble modifisert.

Foretrukne, men ikke begrensende eksempler på forannevnte organiske baser er: atropin, hyoscin, anisotropin og papaverin. Blandt metallkationene er natrium spesielt foretrukket.

For å erholde de blandede salter blir det bare dannet salt av en del av de sure funksjoner som er til stede i sulfoglykopeptid-makromolekyler, med de organiske kationer som stammer fra de forannevnte baser, mens de gjenværende funksjoner blir holdt bundet ved hjelp av ione-bindinger til metallioner, fortrinnsvis natrium.

Fremstillingen av de blandede salter blir utført ved først

å fullstendig frigjøre alle sure funksjoner i en forhåndsbestemt mengde med sulfoglykopeptid, og blande den således erholdte frie syre med en vandig oppløsning inneholdende en slik mengde av metall (f.eks. natrium)-saltet av sulfoglykopeptid at det oppnås den prosent med fri-syre-funksjoner som tilsvarer den ønskede konsentrasjon.

Den således erholdte oppløsning blir så blandet med den mengde base som er nødvendig for å nøytralisere nevnte fri-syre-funksjoner. Ved inndampning av oppløsningen, erholdes saltene.

For å fremstille sulfoglykopeptidet i dets fri syre-form fra dets metall (f.eks. natrium)-salt og også for å frigjøre de organiske baser som har sympatikolytisk-lignende aktivitet, fra deres salter, er det spesielt fordelaktig å anvende kationiske og anioniske ionebytter-harpikser, slik som f.eks. de som er kommersielt kjent under varenavnet "AMBERLITE" IR 120 (kationisk harpiks) og "AMBERLITE" IRA 410 (anionisk harpiks). Men anvendelsen av slike harpikser kan begrenses til behandlingen av sulfoglykopeptid-saltet, på grunn av at de forannevnte baser til enhver tid også kan erholdes ved hjelp av konvensjonelle metoder, f.eks. ved behandling av de vandige oppløsninger av salter derav med alkalier som har passende styrke (natriumkarbonat, ammoniakk, natriumhydroksyd etc). Basene er også kommersielt tilgjengelige som fri baser.

Dersom de frie baser som man har til hensikt å anvende, ikke er vannoppløselige, blir deres fremstilling og saltdannelses-reaksjonen med oppløsningen av det delvis avsaltede sulfoglykopeptid passende utført i nærvær av et oppløsningsmiddel.

De mest egnede oppløsningsmidler er de vannblandbare

lavere alkoholer og ketoner. Spesielt foretrukket er etanol, metanol og oppløsninger av 20 til 80% aceton i vann.

Oppfinnelsen beskrives ytterligere i de følgende eksempler.

Fremstilling av blandede salter.

EKSEMPEL 1

Atropin- natriumsalt av sulfoglykopeptid.

3.754 gram av sulfoglykopeptid-natriumsaltet erholdt ved fremgangsmåten beskrevet i U.S. patentskrift nr.3.518.243 og med følgende karakteristikker:

ble oppløst i 187 ml destillert vann og oppløsningen ble perkolert gjennom en kolonne inneholdende et sjikt av en sterk kationisk harpiks (AMBERLITE <®>IR 120 H<+>). Perkolatet ble samlet i en oppløs-ning av 41.590 gram av det samme sulfoglykopeptid-natriumsalt som tidligere ble anvendt, oppløst i 208 ml destillert vann. Harpiks-sjiktet ble vasket med 100 ml destillert vann og vaskevannet ble forenet med den foregående oppløsning, og det ble således erholdt en oppløsning med et samlet volum på 480 ml og med en pH-verdi på omkring 2. En oppløsning av 5 gram med atropin-base oppløst i 50 ml med 95% etanol ble satt til denne oppløsning. Etter fullføring av tilsetningen ble det erholdt en vesentlig nøytral pH-verdi. Oppløs-ningen ble tilsist inndampet under redusert trykk, og ga 48 gram av atropin-natriumsaltet av sulfoglykopeptid med følgende karakteristikker:

Det således erholdte blandede salt var vann-oppløselig endog ved romtemperatur og oppløselig i 50% etanol.

EKSEMPEL 2

N- butyl- hyoscinammonium- natriumsalt av sulfoglykopeptid.

1,0 gram av natriumsaltet av sulfoglykopeptidet i eksempel

1 ble oppløst i 50 ml destillert vann og oppløsningen ble perkolert gjennom en kolonne inneholdende et sjikt av en sterk kationisk harpiks (AMBERLITE ® IR 120 H<+>). Perkolatet ble samlet i en opp-løsning av 7,464 gram av det samme sulfoglykopeptid-natriumsalt i 3 7 ml destillert vann. Harpiks-sjiktet ble vasket med 100 ml destillert vann og vaskevannet ble forenet med den tidligere erholdte oppløsning, og det ble således erholdt en oppløsning med et samlet volum på 190 ml og med en pH-verdi på omkring 2,5.

En oppløsning av 2 gram hyoscin-butylbromid i 50 ml destillert vann ble behandlet separat med en sterk anionisk harpiks (AMBERLITE ® IRA 410 0H~), og perkolatet ble etter tilsetning til vaskevannet fra harpiksen, blandet under kraftig røring med forannevnte sure oppløsning, og det ble således etter fullføring av tilsetningen erholdt 320 ml av en oppløsning med en pH på 6.

Ved inndamping under redusert trykk ble det erholdt 9 gram med N-butyl-hyoscinammonium-natriumsalt av sulfoglykopeptid med følgende karakteristikker:

Det således erholdte blandede salt var vann-oppløselig ved romtemperatur og vesentlig uoppløselig i 80% etanol.

EKSEMPEL 3

8- metyltropinium- 3-( 2'- propyl) pentanoat- natriumsalt av sulfoglykopeptid ( kort referert til som SGLP/ Na/ anisotropine).

3,027 gram av det samme sulfoglykopeptid-natrimsalt som i eksempel 1 ble oppløst i 151 ml destillert vann og den således erholdte oppløsning ble perkolert gjennom en kolonne inneholdende et sjikt av en sterk kationisk harpiks (AMBERLITE ® IR 120 H<+>). Perkolatet ble oppsamlet i en oppløsning av 43,380 gram av det samme SGLP-natriumsalt i 216 ml destillert vann. Harpiks-sjiktet ble vasket med 150 ml destillert vann og vaskevannet ble forenet med den tidligere erholdte oppløsning, og det ble således erholdt en oppløsning med et samlet volum på 520 ml og med en pH-verdi på 2,8.

En oppløsning av 5 gram anisotropin-metylbromid, d.v.s. 8-metyltropiniumbromid-3-(2<1->propyl)pentanoat, i 100 ml destillert vann ble perkolert gjennom en sterk anionisk harpiks (AMBERLITE ® IRA 410 0H~). Harpiksen ble så vasket med 150 ml destillert vann. Perkolatet ble satt til vaskevannet fra harpiksen, og dette ga en oppløsning med en pH-verdi på 11 og med et samlet volum på 250 ml. Denne oppløsning ble under kraftig røring blandet med forannevnte sure oppløsning, og dermed ble det etter fullføring av tilsetningen erholdt en klar oppløsning med en pH-verdi på 5,5 og et volum på

780 ml.

Ved inndamping under redusert trykk ble det erholdt 48 gram av 8-metyltropinium-3-(2<1->propyl)pentanoat-natriumsaltet av SGLP

med følgende karakteristikker:

Det således erholdte blandede salt var fullstendig vann-oppløselig ved romtemperatur og oppløselig i 50% etanol.

EKSEMPEL 4

Papaverin- natriumsalt av sulfoglykopeptid.

1,457 gram av det samme SGLP-natriumsalt fra eksempel 1 ble oppløst i 73 ml destillert vann og oppløsningen ble perkolert gjennom en kolonne inneholdende et sjikt av en sterk kationisk harpiks

(AMBERLITE <®> IR 120 H<+>). Perkolatet ble oppsamlet i en oppløsning av det samme SGLP-natriumsalt (21,432 gram) oppløst i 107 ml destillert vann. Harpiks-sjiktet ble vasket med 150 ml destillert vann og vaskevannet ble forenet med den tidligere erholdte oppløsning,

og det ble således erholdt en oppløsning med et samlet volum på

350 ml og en pH-verdi på 2,8. Denne oppløsning ble blandet med en hydroalkoholisk oppløsning erholdt ved å perkolere 2,5 gram papaverin-hydroklorid oppløst i 50 ml 50% etanol gjennom et sjikt av en sterk anionisk harpiks (AMBERLITE ® IRA 410 0H~), og deretter vaske harpiksen med 150 ml 50% etanol.

Ved å forene de to oppløsninger ble det erholdt en oppløs-ning med et samlet volum på tilnærmet 500 ml og med en pH-verdi på omkring 5,2. Denne oppløsning ble deretter inndampet under redusert trykk, og ga således 24 gram av papaverin-natriumsaltet av sulfoglykopeptid med følgende karakteristikker:

Det således erholdte blandede salt var vann-oppløselig- ved romtemperatur .

EKSEMPEL 5

Blandet salt av 4- amino- 5- klor- [ 2( dietylamino) etyl ]- 2- metoksy-benzamid og natrium- sulfoglykopeptid.

7,310 gram av SGLP-natriumsaltet fra eksempel 1 ble opp-løst i 365 ml destillert vann og den således erholdte oppløsning ble perkolert gjennom en kolonne inneholdende et sjikt av en sterk

(R) +

kationisk harpiks (AMBERLITE ir 120 H ). Perkolatet ble oppsamlet i en oppløsning av 37,500 gram av det samme SGLP-natriumsalt i 174 ml destillert vann. Harpiks-sjiktet ble vasket med 150 ml destillert vann og vaskevannet ble forenet med den tidligere erholdte oppløsning, og ga således 700 ml av en oppløsning med en pH-verdi på 1,5.

Denne oppløsning ble blandet med en hydroalkoholisk oppløs-ning erholdt ved å perkolere 10 gram 4-amino-5-klor-[2-(dietylamino) etyl ]-2-metoksy-benzamid-monohydroklorid oppløst i 100 ml 96% etanol

gjennom et sjikt av en sterk anionisk harpiks (AMBERLITE <®> IRA

410 OH ),og deretter vaske harpiksen med moderat oppvarmet (40°C) 80% etanol.

Ved å forene de to oppløsninger ble det erholdt en oppløs-ning med et volum på 1300 ml og med en pH-verdi på omkring 5,2. Denne oppløsning ble så inndampet under redusert trykk, og ga 49 gram med blandet salt av 4-amino-5-klor- [2-(dietylamino)etyl]-2-metoksy-benzamid og natrium-sulfoglykopeptid med følgende karakteristikker :

Det således erholdte blandede salt var fullstendig oppløselig i

vann og 50% etanol ved romtemperatur.

Farmakologiske prøver.

For å vise den farmakologiske aktivitet til det SGLP-

blandede salt fremstilt i henhold til denne oppfinnelse, blir det her beskrevet noen resultater erholdt med

anisotropin-natriumsaltet av sulfoglykopeptid (SGLP/Na/anisotropin)

som har blitt testet på rotter ved en rekke farmakologiske prøver, i sammenligning med resultatene som ble vist med anisotropin-metyl-bromid (8-metyltropinium-bromid-3-(2'-propyl)-pentanoat) og natriumsaltet av sulfoglykopeptid (SGLP/Na).

Det har blitt funnet at anisotropin-saltet av sulfoglykopeptid er svært svakt toksisk for rotter etter oral administrasjon. Uttrykt som anisotropin-innhold er det iakttatt en bemerkelses-

verdig minskning i toksisiteten til dette medikament (Tabell I).

En rekke farmakologiske prøver har vist en økning i aktiviteten til det blandede salt overfor aktiviteten til de enkelte salt-komponenter: Dette fenomen er spesielt fremtredende ved behandling av sår forårsaket av pylorus-ligatur (Tabell II), tvangs-sår

(Tabell III) og syre-sekresjon i magesaft (Tabell IV og V).

En rekke forskjellige prøver har vist at noen farmakologiske SGLP- og anisotropin-aktiviteter er opprettholdt i det blandede salt: for eksempel anisotropin-aktiviteten på intestinal hyper-motilitet indusert av en cholinergisk påvirkning (Tabell VI), eller på acetylcnolin-indusert spasme i ileus isolert i guinea-svin, blir kvantitativt opprettholdt i det blandede salt. Heller ikke den anti-peptidiske aktivitet til SGLP blir forandret ved nærværet av aniso-tropinet i det blandede salt (Tabell VII).

TABELL I

Akutt toksisitet etter oral administrasjon til rotter ( som har blitt holdt under observasjon i lo dager) av SGLP-natriumsalt, anisotropin-metyl-bromid og blandet anisotropin-natriumsalt av sulfoglykopeptid (inneholdende 15,6% anisotropin-base).

TABELL II

Inhibering av sår forårsaket av pylorus-ligatur etter oral administrasjon til rotter av SGLP-natriumsalt, N-metyl-oktatropinium-bromid og blandet anisotropin-natriumsalt av sulfoglykopeptid (inneholdende 15,6% anisotropin-base).

Fotnote: ved "poeng" menes den gjennomsnittlige verdi av vilkårlige poenger gitt til iakttatte sår.

SF = Standard-feil

S = Sannsynlignet (statistisk betegnende)

IS = Ikke statistisk betegnende.

TABELL III

Inhibering av tvangs-indusert sår på rotter etter oral administrasjon av SGLP-natriumsalt, anisotropin-metylbromid og blandet anisotropin-natriumsalt av sulfoglykopeptid (inneholdende 7,8% anisotropin-base).

TABELL IV

Effekt på basal mage-sekresjon i rotter som har blitt administrert oralt med SGLP-natriumsalt, anisotropin-metylbromid og blandet anisotropin-natriumsalt av sulfoglykopeptid (inneholdende 15,6% anisotropin-base).

A) Syre-inhibitering av ligatur-indusert mage-sekresjon.

TABELL V

Inhibering av sur mage-sekresjon indusert av pentagastrin (80 jag/kg i.v.) i rotter som har blitt administrert oralt med SGLP-natriumsalt, anisotropin-metylbromid og blandet anisotropin-natriumsalt av sulfoglykopeptid (inneholdende 7,8% med anisotropin-base).

TABELL VI

Aktivitet til SGLP-natriumsalt, anisotropin-metylbromid og blandet anisotropin-natriumsalt av sulfoglykopeptid (inneholdende 15,6% med anisotropin-base) på metacholin-indusert gastrointestinal motilitet i rotter (2 mg/kg s.c.)

TABELL VII

Anti-peptisk aktivitet av SGLP-natriumsalt, anisotropin-metylbromid og blandet anisotropin-natriumsalt av sulfoglykopeptid (inneholdende 7,8% anisotropin-base). Pylorus-ligatur ble opprettholdt i 5 timer og behandlingen ble igangsatt øyeblikkelig etter ligaturbehandlingen.

Claims (5)

1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et farmakologisk aktivt blandet salt hvor anion-andelen er et sulfoglykope<p>tid-polyanion og kation-andelen er: a) et alkali- eller jordalkalimetallion, og b) et nitrogenholdig organisk kation som er avledet fra en organisk base som har spasmolytisk og anti-cholinergisk virkning, karakterisert ved

1) å blande en oppløsning av et sulfoglykopeptid i dets syreform med en oppløsning av et alkali- eller jord-alkalimetallsalt av et sulfoglykopeptid, og

2) å blande den således erholdte oppløsning med en opp-løsning av en nitrogenholdig organisk base som har spasmolytisk og anticholinergisk virkning, og således erholde en oppløsning av det blandede salt, og adskille det blandede salt fra oppløsningsmidlet.

2. Fremgangsmåte i henhold til krav 1, karakterisert ved at det som nevnte base anvendes atropin.

3. Fremgangsmåte i henhold til krav 1, karakterisert ved at det som nevnte base anvendes hyoscin.

4. Fremgangsmåte i henhold til krav 1, karakterisert ved at det som nevnte base anvendes anisotropin.

5. Fremgangsmåte i henhold til krav 1, karakterisert ved at det som nevnte base anvendes papaverin.