NL8800692A - Werkwijze voor de bereiding van algen met verbeterde biologische werkingen. - Google Patents

Description

NL 34929-Kp/vD

* “ *

Werkwijze voor de bereiding van algen met verbeterde biologische werkingen.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor de bereiding van algen met verbeterde biologische werking.

Algen zijn sinds eeuwenlang door de mens ge-5 bruikt voor voedings- en voederdoeleinden. Zo werden algen voornamelijk geconsumeerd door de volkeren uit het Verre Oosten; recentelijk echter worden ze ook gebruikt in een droge vorm of in de vorm van tabletten in de ontwikkelde landen.

Algen zijn de dragers van zeer waardevolle voedingsmaterialen, 10 aangezien hun droge vorm hoge concentraties stoffen bevat, die essentieel zijn voor een gezond leven, zoals vitaminen, proteïnen, complexen van proteïne micro-elementen, sacchariden, meervoudig onverzadigde vetzuren en dergelijke.

In recente jaren werd verontreiniging van milieu 15 een wereldwijds probleem. Heden ten dage is de verontreiniging van zeeën en oceanen door toxische zware metalen (bijv. lood, kwik, cadmium, koper) alsmede tumor-indueerende middelen (bijv. gecondenseerde polycyclische aromatische verbindingen) niet verwaarloosbaar. Het is een moeilijk probleem, 20 dat deze middelen in het organisme van de algen worden opgehoopt. Dientengevolge kunnen "volledige algae", verkregen uit de zee of gekweekt onder andere natuurlijke omstandigheden niet worden gebruikt voor humane of dierlijke voedings-doeleinden, voederdoeleinden, kosmetika en therapie; slechts 25 zulke fracties van de "volledige algae" kunnen worden gebruikt, die tevoren zijn gezuiverd van de biologische schadelijke materialen. Een zuiveringsmethode van dit type is bijv. beschreven door Carames de Guovëa ^Cosmetics and Toiletries 95^, 47 (1980)_/. Een zuiver ingsmethode betekent echter een interventie-30 ontleding van een deel van de biologisch werkzame stoffen van de algen, waarbij de biologische waarde van de aldus verkregen algenfractie aanzienlijk afnam ^Zajic: Properties and Products of Algae: Edition Planum, New York, (1970)_7·

Als gevolg hiervan wordt de bereiding van ste-35 riele algen vrij van beschadiging van het milieu hoe langer hoe meer belangrijk.

.8800692 '4 f - 2 -

Een aantal methoden zijn bekend voor het kunstmatig kweken van algen, die uitgevoerd kunnen worden bijv. in een open basin onder zonlicht of in een gesloten ruimte onder condities, die steriliteit waarborgen hetzij onder natuurlijke 5 of kunstmatige belichting, hetzij door uitsluiting van elk licht.

Volgens de gepubliceerde Japanse octrooiaanvrage nr. 56.96690 worden algen gekweekt door gebruikmaking van maritime algenstammen in gesteriliseerd zeewater, in een oplos-10 sing met daarin diverse voedingszouten onder invloed van een kunstmatige lichtbron.

Volgens de gepubliceerde Japanse octrooiaanvrage nr. 45.17146 wordt het indrustrieel kweken van unicellulaire groene Chlorella-algen uitgevoerd op een steriel zoetwater-15 kweekmedium onder de uitsluiting van kooldioxide en licht.

Het kweken van unicellulaire groene zoetwateral-gen wordt voorts beschreven in het Franse octrooischrift nr. 2.103.462 volgens welk octrooischrift het op industriële schaal kweken fotosynthetisch wordt gerealiseerd onder ge-20 bruikmaking van voedingsoplossingen, die geschikte voedingszouten bevatten.

Volgens de gepubliceerde Hongaarse octrooiaanvragen nrs. 4613/84 en 4614/84 wordt het kweken van de algen gerealiseerd in een mineraal water van natuurlijke oorsprong, 25 medicinaal of thermaal water of in een mengsel daarvan ver- _2 rijkt met een metaalverbinding tot een concentratie van 10 mol/1.

In elk van de bekende oplossingen kunnen algen, te gebruiken voor het bereiden van voedsel, voeder of medi-30 cijnen,kunstmatig worden bereid onder steriele condities. Bij deze processen worden de algen onder condities gekweekt resulterende in eigenschappen van de aldus verkregen algen, die gelijk waren aan die van algen, die spontaan in de natuur groeiden onder onschadelijke milieucondities; of waren de 35 eigenschappen van de aldus verkregen algen slechts in geringe mate afwijkend, afhankelijk van de manier waarop het kunstmatig kweken plaatsvond.

De algen, die kunstmatig werden gekweekt onder gebruikmaking van de methoden van de stand der techniek be- . 880 0692.

- 3 -

K

vatten slechts sporen, indien dit het geval is, van diverse elementen, zoals seleen, zink of zilver.

Bekend is verder, dat seleen een veelzijdige biologische werking heeft, zoals gepubliceerd in een uitgebreide 5 publicatie van Thressa et al. ^Nitrition Review 3j>·, 7 (1977)_/, Shamberger [j. of Env. Path, and Tox. 4, 305 (1980)J of Masukawa et al. /Ëxperientia 39, 405 (1983)_/. Het is derhalve bekend, dat seleen op zichzelf een hypotensieve werking heeft, de ischaemische, hypoxy en infarcttoestanden van het hart ver-10 betert en dat het voorts de cerodale lipofuscinose van het centrale zenuwstelsel belemmert; bovendien oefent seleen een gunstige werking uit op periodonititis en bleek de mogelijkheid van de ontwikkeling van kankerziektes te doen verminderen. Bovendien bleek seleen een mutagenese-remmend middel te 15 zijn. Een aantal afwijkingen of ziektes, zoals respectievelijk levernecrose, myonecrose, destructie van het erytrocietmem-braan, interstitiale laesies, ST-verhoging in het ECG, kwashi-orcorsyndroom (proteïne malnutritie) en multiple sclerose bleken te worden geïnduceerd tengevolge van een seleendefi-20 ciëntie.

De gunstige werking van seleen is voornamelijk gebaseerd op zijn activerende werking, gericht op het gluta-thion-peroxidase-enzym, dat de meest belangrijke endogene inhibitor van de schadelijke peroxidatieprocessen is. Zijnde 25 een onontbeerlijk bestanddeel van de prosthetische groep van het glutathionperoxidase-enzym is seleen één van de meest belangrijke en onontbeerlijke stoffen van het leven, dat niet wordt opgehoopt in het organisme en dat derhalve voortdurend dient te worden gesuppleerd. Tot nu toe werd seleen exclusief 30 geïntroduceerd in het organisme door middel van anorganische verbindingen (seleendioxide, natriumseleniet en dergelijke).

Het doel van de onderhavige uitvinding is het verschaffen van algen met bijzondere biologische eigenschappen en, tengevolge van hun toegenomen seleengehalte, algen die 35 in staat zijn biologische werking van seleen te handhaven.

De uitvinding is gebaseerd op de erkenning, dat onder bepaalde omstandigheden de algen niet alleen gehandhaafd kunnen worden als levend in seleen-houdende oplossingen, d.w.z. dat zij niet vergaan, doch dat zij bovendien groeien en dus .8800692 ? - 4 - ** gekweekt worden in een voedingsoplossing met daarin seleen in een hoge concentratie. Deze erkenning is verrassend, aangezien volgens de stand der techniek te verwachten was, dat de algen gedood zullen worden door het giftige seleen.

5 Voorts is de uitvinding gebaseerd op de erken ning, dat seleen in het organisme van een alg, dat gekweekt wordt op een seleen-houdend kwsekmedium, wordt opgenomen onder bepaalde omstandigheden.

De uitvinding heeft derhalve betrekking op een 10 werkwijze voor de bereiding van algen met verbeterde biologische werking, waarbij de gekozen algenstam wordt gekweekt onder steriele omstandigheden op een kweekmedium bestaande uit zoetwater en voedingszouten in aanwezigheid van kooldioxide en licht langs een fotosynthetische weg, of met de 15 uitsluiting van licht op een kweekmedium dat bovendien een koolstof- , waterstof-, zuurstof- en stikstofbron bevat, waarna de aldus verkregen algen worden afgezonderd. Volgens de onderhavige werkwijze worden aan het kweekmedium anorganische en/of organische seleenverbinding(en) toegevoegd in -7 -3 20 een concentratie van 10 tot 2x10 mol/1, waarna het kweekmedium wordt geïnoculeerd met een zuivere algekweek, die in staat is seleen snel op te nemen. De zuivere kweek wordt verkregen door inoculeren van de gekozen algestam op een vloeibaar kweekmedium met daarin anorganische of eventueel orga-25 nische voedingsmaterialen, gevolgd door behandeling ervan met N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine. Uit de door mutatie aldus verkregen afzonderlijke bestanddelen van de stam worden die gekozen, die in staat zijn snel seleen op te nemen, gekweekt na mutatie op een seleen-houdend kweekmedium en met 30 een groeisnelheid, die tenminste gelijk is aan die van de wilde stam. Na inoculeren van het kweekmedium met de aldus verkregen zuivere kweek en na de kweekperiode wordt de alg afgezonderd en desgewenst gedroogd tot een watergehalte naar keuze en tenslotte ontleed met behulp van geluidsgolven of 35 door vermalen in een op zichzelf bekende wijze.

Volgens de uitvinding wordt zuivere alg gekweekt, die in staat is seleen in te bouwen, bij voorkeur bereid uit unicellulaire groene of blauwe algen, zoals Chlorella sp., Scenedesmus sp. of Spirulina sp. : zodanig, dat na de behande- .8800692 i - 5 - ling met N-methyl-N1-nitro-N-nitrosoguanidine de cellen zorgvuldig worden uitgewassen en gedispergeerd op een reeks vaste kweekmedia, bereid door halve verdunning en aangevuld met -7 een seleenverbinding tot een concentratie tussen 10 en -3 5 2x10 mol/1. De meeste voorkeur verdienende stammen van de hier ontwikkelde met een snelle groei en in staat om seleen snel in te bouwen worden .geselecteerd en verder gekweekt in een vloeibaar medium, waarbij de aldus verkregen zuivere algerikweek wordt blootgesteld aan industriële productie.

10 Zodoende wordt seleen ingebouwd tijdens de groei van het organisme van de algen, die op de bovenbeschreven wijze werden behandeld, in een concentratie, die gemiddeld 10^ keer hoger is dan die in de oorspronkelijke algenstam.

Gedestilleerd water wordt gebruikt als vloeistof 15 in het kweekmedium, dat voor de industriële kweek van de algenstam werd gebruikt, die in staat is snel seleen in te bouwen. Naast de algemeen gebruikte bekende voedingsmateri-alen worden deze kweekmedia eveneens gesuppleerd met anorganische en/of organische seleenverbindingen. Het aldus 20 bereide en gesteriliseerde kweekmedium wordt gelnoeuleerd met de algenstam, die op de bovenbeschreven wijze werd verkregen, die in staat is snel seleen op te nemen. In het verloop van zijn groei nemen de algen seleen in hun eigen organisme op zonder de bovenbeschreven ongewenste toxische 25 verontreinigingen.

De aldus bereide algen werden afgezonderd van het kweekmedium en zorgvuldig gedroogd op een bp zichzelf bekende wijze onder milde omstandigheden bij een optimale temperatuur van 65°C en niet hoger dan 80°C. De gedroogde algen worden 30 op geschikte wijze ontleed door vermalen tot een deeltjesgrootte van ca. 1 yam. Alternatief kan het natte algenconcentraat worden ontleed met behulp van geluidsgolven en vervolgens gedroogd onder de bovenvermelde omstandigheden.

De aldus verkregen algen bevinden zich in de vorm 35 van poeder met daarin 250 tot 4000 yig/g seleen, dat direct kan worden geconsumeerd of gebruikt als zodanig of in voedsel, voeder, kosmetika of te zamen met therapeutisch bruikbare en biologisch werkzame stoffen en/of hun toevoegsel, in de vorm van elk commercieel beschikbaar preparaat van deze producten, .0800692 - 6 - * bij voorkeur in de vorm van tabletten en capsules of in andere vorm.

De belangrijkste voordelen van de werkwijze volgens de uitvinding kunnen als volgt worden samengevat: 5 a) De algen kunnen worden gekweekt in een eenvou dige inrichting onder gebruikmaking van een gemakkelijk uit te voeren goedkope methode.

b) Na het kweken geen zuivering of uit meerdere trappen bestaande opwerking noodzakelijk is.

10 c) De algen worden gekweekt onder steriele om standigheden, met uitsluiting van milieuverontreinigingen, waarbij de verkregen algen bijzonder geschikt zijn voor humane consumptie.

d) De onderhavige werkwijze maakt de bereiding 15 van algen mogelijk met een hoog seleengehalte en met verbeterde biologische en fysiologische werking vergeleken met die van de bekende algen.

e) De volgens de onderhavige werkwijze verkregen algen kunnen bij voorkeur en op uitgebreide schaal worden 20 gebruikt, bijv. voor voeding, in de kosmetische industrie, voor therapeutische doeleinden en andere gebieden.

Het gebruik van algen, gekweekt volgens de onderhavige werkwijze, is vooral aan te bevelen in de therapie, aangezien seleen een activerend middel is met betrekking tot 25 de prosthetische groep van het glutathion-peroxidase-enzym. Seleen wordt in het organisme niet opgehoopt, zodat zijn suppletie mogelijk gemaakt kan worden met behulp van de algen, die zijn verkregen onder toepassing van de onderhavige werkwijze, waarbij alle gezondheidsaandoeningen kunnen worden 30 gemedicateerd, die het gevolg zijn van seleendeficiëntie.

De werkwijze volgens de uitvinding wordt nader toegelicht aan de hand van de volgende niet beperkende Voorbeelden.

VOORBEELD I

35 Een scenedesmus obtisiusculus kweek werd gehand haafd in een 250 ml kolf in een schudkweek op Bold's vloeibaar kweekmedium met daarin 100 tot 500 yag/ml N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine bij 25 - 27°C gedurende 30 min. Na deze behandeling werden de cellen zorgvuldig gewassen met . 8800692.

- 7 - water en vervolgens gedispergeerd op een Bold's kweekmediumreeks, die met agar in vaste toestand werd gebracht·. Deze kweekmediumreeks bevatte seleen in een concentratie, die gewoonlijk toenam tot een dubbele waarde elk van 3,125 yig/ml 5 tot 400 yig/ml. De kolonies, die gevormd werden uit de cellen, opgegroeid en in leven gebleven op deze kweekmediumreeks, werden geïsoleerd, waarna de geselecteerde cellijnen werden vermenigvuldigd op een laboratoriumschaal in een Bold's voe-dingsoplossing met daarin tenminste 20 yag/ml seleen. Die kolo-10 nies werden vermenigvuldigd, die bij voorkeur het seleen opnemen en een groeisnelheid hebben, die praktisch identiek is aan die van de wilde (contróle) stam in een kweekmedium met daarin tenminste 20 yag/ml seleen.

Het seleengehalte van de algen werd bepaald door 15 drogen bij 65°C, waarbij de cellen eerst geïsoleerd werden en zorgvuldig met water werden gewassen, gevolgd door ontleding ervan door middel van geluidsgolven, waarbij het seleengehalte werd gemeten onder gebruikmaking van atoomabsorptiemethode.

Het seleengehalte van het aldus verkregen algen-20 poeder was als volgt:

Stam seleengehalte (yug/g algenpoeder ) onbehandeld "wild" I stam 50 onbehandeld .".wild” II stam 30 25 Code No. FM-I-120 stam 1300

Code No. FM-1-1871 stam 2400

Code No. FM-441/87 stam 1600

Code No. FM-449/87 stam 1800

30 VOORBEELD II

Er werd 40 mg natriumseleniet toegevoegd aan 8 1 Knop-Pringsheim's kweekmedium, dat werd overgebracht in een algenkweekglasfles van 10 1. De aldus verkregen kweekoplos-sing werd gesteriliseerd bij 121°C onder een overdruk van 1 2^ bar gedurende 30 min. Dan werd de steriele oplossing afgekoeld en geïnoculeerd met een zuivere kweek van Scenedesmus obtisiusculus, die in staat is snel seleen in te bouwen. Steriele lucht met 5 vol.% kooldioxide werd door het kweekmedium geborreld bij 25°C, terwijl het systeem werd belicht . a 8 0 0 6 9 2.

- 8 -f met behulp van een elektrische ontladingsbuis, die werkte bij 4000 lux en een golflengte van 440 tot 520 en 640 tot 700 ^im.

Na een kweekperiode van 14 dagen werden de algen 5 afgezonderd van het kweekmedium en vervolgens met water gewassen. De aldus verkregen algenmassa werd ontleed met behulp van geluidsgolven en vervolgens zorgvuldig gedroogd bij een temperatuur beneden 65°C. Het seleengehalte van het aldus verkregen algenpoeder bedroeg 1200 yig/g.

10 VOORBEELD III

Er werden 8,0 natriumnitriet, 0,8 g magnesium-sulfaatheptahydraat, 0,8 g dikaliumwaterstoffosfaat, 2,5 ml Arnon's spoorelementoplossing alsmede 5 g glucose, 0,1 g cysteine en 0,1 g methionine opgelost in 8 1 gedestilleerd 15 water, dat werd overgebracht in een algenkweekfermentor van 10 1. De aldus verkregen voedingsoplossing werd gesupple-menteerd met 50 mg natriumseleniet, waarna de oplossing door een steriliserend filter werd geleid en vervolgens onder zorgvuldig gehouden steriele omstandigheden gexnoculeerd met 20 een zuivere algenkweek van Scenedesmus obtisiusculus, die in staat was snel seleen op te nemen. Na een kweekperiode van 4 dagen bij 25 tot 28°C in het donker werden de algen van het kweekmedium afgezonderd en met water gewassen. De aldus verkregen algenmassa werd ontleed door middel van geluidsgol-25 ven en vervolgens gedroogd bij een temperatuur beneden 65°C. Het seleengehalte van het aldus verkregen algenpoeder bedroeg 1380 ^ug/g.

VOORBEELD IV

De in Voorbeeld II beschreven werkwijze werd op-30 gevolgd, met dien verstande, dat in plaats van de hittebehandeling het kweekmedium werd gesteriliseerd door dit te leiden door een G-5 type steriliserend bacteriumfilter. Het seleengehalte van het aldus verkregen algenpoeder was 1300 yjg/g.

VOORBEELD V

35 De in Voorbeeld II of III beschreven werkwijze werd opgevolgd met dien verstande, dat in plaats van Scenedesmus obtisiusculusstam, een Chlorella vulgaris algenstam werd gebruikt, die in staat was seleen snel in te bouwen, welke stam werd onderworpen aan de in Voorbeeld I beschreven .6800692 - 9 - f mutatiebehandeling.

Het seleengehalte van het aldus verkregen algenpoeder was als volgt: stam seleengehalte 5 (^ig/g algenpoeder) "Wild" I stam 140 "Wild" II stam 140 DV-35-42 stam 3200 10 DV-78-20 stam 2300 DV-104-21 stam 1500

VOORBEELD VI

De in Voorbeeld II of III beschreven werkwij ze werd 15 opgevolgd, met dien verstande, dat in plaats van de Scenedes-mus obtisiusculusstam een Chlorella minitissima algenstam werd gebruikt, die in staat was seleen snel in te bouwen. Het seleengehalte van het aldus verkregen algenpoeder bedroeg 1400 jiq/g.

20 VOORBEELD VII

De in Voorbeeld II of III beschreven werkwijze werd opgevolgd, met dien verstande, dat men de voedingsoplos-sing liet opwarmen tot een temperatuur van ten hoogste 50°C, waarbij een Aphanocapsa thermalis algenstam werd gebruikt, 25 die thermodurisch was en in staat was snel seleen in te bouwen. Het seleengehalte van het aldus verkregen algenpoeder was als volgt: stam seleengehalte (yWg/g algenpoeder) 30 "Wild" I stam 130 DV-12-220 stam 1100 DV-12-340 stam 1550

VOORBEELD VIII

35 De in Voorbeeld II beschreven methode werd opge volgd , met dien verstande, dat in plaats van de Scenedesraus obtisiusculusstam een Spirulina sp. algenstam, behorende tot de blauwe algen, werd gebruikt, die in staat was snel seleen in te bouwen. Het seleengehalte van het aldus verkregen algen-40 poeder was als volgt: . 8800692.

τ - 10 - ,) stam seleengehalte algenpoeder) "Wild" I stam 50 "Wild" II stam 30 5 HE-87-104 stam 1100 HE-89-241 stam 1200 HE-89-302 stam 1500

VOORBEELD IX

10 De in Voorbeeld II beschreven werkwij ze werd op gevolgd, met dien verstande, dat de temperatuur van de voe-dingsoplossing werd verlaagd tot 8°C, terwijl een draadvormige blauwe Nostoc commune algenstam werd gebruikt, die koude-bestendig was en in staat was snel seleen in te bouwen. Het se-15 leengehalte van het aldus verkregen algenpoeder was als volgt: stam seleengehalte (yag/g algenpoeder) "Wild" stam 140 BK-1218-2 stam 1140 2o---

VOORBEELD X

_3 5x10 M natriumseleniet werd toegevoegd aan 8 1 Bold's kweekmedium, dat door filtratie werd gesteriliseerd, waarna het werd overgebracht in een algenkweekfles van 10 1.

25 Het aldus verkregen kweekmedium werd geïnoculeerd met een zuivere kweek van Chlorella fusca, bereid op de in Voorbeeld I beschreven wijze en dat in staat was snel seleen in te bouwen. De algen werden gedurende 14 dagen gekweekt op de in Voorbeeld II beschreven wijze. Dan werd de algenmassa afge-30 filtreerd, zorgvuldig met water gewassen en beneden 80°C gedroogd. Het seleengehalte van het aldus verkregen algenpoeder bedroeg 2700 yig/g.

VOORBEELD XI

Een Scenedesmus obliquusstam, gekweekt op de in 35 Voorbeeld I beschreven wijze en in staat was seleen in te bouwen werd geïnoculeerd in een kweekfles met daarin 8 1 _7

Bold's voedingsoplossing en 10 M natriumseleniet. Daarna werd de methode van Voorbeeld I opgevolgd onder oplevering van een algenpoeder met een seleengehalte van 300 jig/g.

. 8800692.

f - 11 -

VOORBEELD XII

De werkwijze van Voorbeeld II werd opgevolgd, met dien verstande, dat de afgezonderde algen werden gedroogd bij 65°C en vervolgens ontleed door middel van ver-5 malen tot een deeltjesgrootte van 1 ^im. Het seleengehalte van de aldus verkregen algenpoeder bedroeg 1200 yag/g.

. 8800692

Claims (10)

1. Werkwij ze voor de bereiding van algen met een verbeterde biologische werking, waarbij de geselecteerde al-genstam wordt gekweekt onder steriele omstandigheden op een kweekmedium bestaande uit zoet water en voedingszouten in 5 aanwezigheid van kooldioxide en licht langs een fotosynthe-tische weg, of met uitsluiting van licht op een kweekmedium dat bovendien koolstof-, waterstof-, zuurstof- en stikstof-bron bevat, waarna de aldus verkregen algen worden afgezonderd, met het kenmerk, dat aan het kweekmedium 10 anorganische en/of organische seleenverbinding(en) wordt of -7 -3 worden toegevoegd in een concentratie tussen 10 en 2x10 mol/1, gevolgd door inoculeren van het kweekmedium met een zuivere algenkweek, die in staat is snel seleen in te bouwen, waarna na het kweken de verkregen algen desgewenst worden 15 gedroogd en ontleed door middel van geluidsgolven of door malen, waarbij de zuivere algenkweek wordt verkregen door inoculeren van de geselecteerde algenstam op een vloeibaar kweekmedium met daarin anorganische of eventueel organische voedingsmaterialen, gevolgd door behandeling ervan met N-20 methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, waarna de stam op een kweekmedium, dat bovendien seleen bevat, wordt gekweekt en tenslotte de individuele, die snel seleen inbouwen en die een groeisnelheid hebben, die tenminste gelijk is aan die van de oorspronkelijke stam worden geselecteerd.

2. Werkwijze volgens conclusie 1, m e t het kenmerk , dat als anorganische seleenverbinding(en) in het kweekmedium natriumseleniet en/of seleendioxide worden gebruikt.

3. Werkwijze volgens conclusie 1, m e t het 30 kenmerk , dat als organische seleenverbinding(en) in het kweekmedium selenocysteïne en/of selenomethionine worden gebruikt.

4. Werkwijze volgens conclusie 1, m e t het kenmerk , dat als geselecteerde algenstam Chlorella of

35 Scenesmus-algenstam wordt gebruikt.

5. Werkwijze volgens conclusie 1, m e t het kenmerk , dat als algenstam Aphanocapsa thermalis wordt . 8fc006U t - 13 - » ί gebruikt.

6. Werkwijze volgens conclusie 1, m e t het kenmerk, dat als geselecteerde algenstam Nostoc commune wordt gebruikt.

7. Werkwij ze volgens conclusie 1, m e t het kenmerk , dat als geselecteerde algenstam Chlorella minitissima of Chlorella fusca wordt gebruikt.

8. Werkwijze volgens conclusie 1, m e t het kenmerk , dat als geselecteerde algenstam een zoet 10 water blauwe algenstam wordt gebruikt.

9. Werkwijze volgens conclusie 8, m e t het kenmerk , dat als blauwe algenstam een Spirulina sp. wordt gebruikt.

10. Werkwijze volgens conclusie 1, m e t het 15 kenmerk , dat als geselecteerde algenstam Scenedesmus obtisiusculus of Scenedesmus obliquus wordt gebruikt. .8800692