JPH08131084A - 麻痺性貝毒の除去方法及びそれに用いる微生物 - Google Patents
麻痺性貝毒の除去方法及びそれに用いる微生物Info
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- JPH08131084A JPH08131084A JP6303208A JP30320894A JPH08131084A JP H08131084 A JPH08131084 A JP H08131084A JP 6303208 A JP6303208 A JP 6303208A JP 30320894 A JP30320894 A JP 30320894A JP H08131084 A JPH08131084 A JP H08131084A
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- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
- Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
Landscapes
- Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Feed For Specific Animals (AREA)
- Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 ゴニオトキシン類及び／又はサキシトキシン
分解能を有するエンテロバクター属に属する微生物菌体
もしくは該微生物菌体含有物、又は該微生物から得られ
る酵素もしくは該酵素含有物を貝類に対して与えること
により、貝類に含まれるゴニオトキシン類及び／又はサ
キシトキシンを分解することを特徴とする麻痺性貝毒の
除去方法。 【効果】 貝の味、肉質、鮮度に影響を与えたり、貝を
死なせることなく、麻痺性貝毒を除去することができ
る。
分解能を有するエンテロバクター属に属する微生物菌体
もしくは該微生物菌体含有物、又は該微生物から得られ
る酵素もしくは該酵素含有物を貝類に対して与えること
により、貝類に含まれるゴニオトキシン類及び／又はサ
キシトキシンを分解することを特徴とする麻痺性貝毒の
除去方法。 【効果】 貝の味、肉質、鮮度に影響を与えたり、貝を
死なせることなく、麻痺性貝毒を除去することができ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、麻痺性貝毒の除去方法
に関し、更に詳しくは、麻痺性貝毒であるゴニオトキシ
ン類及び／又はサキシトキシンを微生物等を用いて分解
する方法とその微生物に関する。
に関し、更に詳しくは、麻痺性貝毒であるゴニオトキシ
ン類及び／又はサキシトキシンを微生物等を用いて分解
する方法とその微生物に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、魚介類の毒が従来になく注目され
ている。その背景には、水産物の輸入の増加、沿岸養殖
漁業の発達による漁業形態の変化、消費者の安全意識の
向上等の社会的要因が考えられる。
ている。その背景には、水産物の輸入の増加、沿岸養殖
漁業の発達による漁業形態の変化、消費者の安全意識の
向上等の社会的要因が考えられる。
【０００３】麻痺性貝毒（以下、ＰＳＰという。ＰＳ
Ｐ：paralytic shellfish poison）は、渦鞭毛藻のAlex
andrium tamarensis、A. catenella、Gymnodinium cate
natum、Pyrodnium bahamense var.compressa. （以下有
毒プランクトンという）等が産生する猛毒で、食物連鎖
によってまず貝類が毒化し、ついでヒトがこれを食べて
中毒を起こす。最近日本では、このＰＳＰによる種々の
貝類の毒化が全国的に発生しており問題となっている。
また、世界的にみてもアジア諸国を初め、北米大陸、北
海沿岸諸国、ボルネオ、パプアニューギニア、南米のヴ
ェネズエラ、チリなどで報告され、ＰＳＰの貝類毒化は
増加傾向にある。このＰＳＰの主体は、ゴニオトキシン
類、サキシトキシンと考えられている。
Ｐ：paralytic shellfish poison）は、渦鞭毛藻のAlex
andrium tamarensis、A. catenella、Gymnodinium cate
natum、Pyrodnium bahamense var.compressa. （以下有
毒プランクトンという）等が産生する猛毒で、食物連鎖
によってまず貝類が毒化し、ついでヒトがこれを食べて
中毒を起こす。最近日本では、このＰＳＰによる種々の
貝類の毒化が全国的に発生しており問題となっている。
また、世界的にみてもアジア諸国を初め、北米大陸、北
海沿岸諸国、ボルネオ、パプアニューギニア、南米のヴ
ェネズエラ、チリなどで報告され、ＰＳＰの貝類毒化は
増加傾向にある。このＰＳＰの主体は、ゴニオトキシン
類、サキシトキシンと考えられている。
【０００４】ＰＳＰの除去方法としては、先に本発明者
が提案したホタテガイの減毒方法である用水のろ過・オ
ゾン殺菌処理と無毒藻類の投与方法（養殖 Vol.30, N
o.2,P.74-77, (1993)）があるが、設備が大型化した
り、処理期間に１〜４週間程度要するなどの問題があっ
た。このＰＳＰは加熱などに対しても安定であり、100
〜120℃で３時間処理（J. Food Sci., VOL.56, No.6,
P.1572-1575 (1991)）しても、ある程度しか減毒できな
い。そのうえ貝肉の味・肉質が変化したり、生では食べ
られない等の問題があった。また、ホタテガイなどで
は、一般的にウロと呼ばれる中腸腺を摘出する物理的な
方法も取られているが、毒が水溶性のため作業途中に可
食部が汚染を受けるなど、必ずしも安全な方法ではなか
った。このようにＰＳＰを除去する方法は非常に困難で
あり、十分な方法がないのが現状である。
が提案したホタテガイの減毒方法である用水のろ過・オ
ゾン殺菌処理と無毒藻類の投与方法（養殖 Vol.30, N
o.2,P.74-77, (1993)）があるが、設備が大型化した
り、処理期間に１〜４週間程度要するなどの問題があっ
た。このＰＳＰは加熱などに対しても安定であり、100
〜120℃で３時間処理（J. Food Sci., VOL.56, No.6,
P.1572-1575 (1991)）しても、ある程度しか減毒できな
い。そのうえ貝肉の味・肉質が変化したり、生では食べ
られない等の問題があった。また、ホタテガイなどで
は、一般的にウロと呼ばれる中腸腺を摘出する物理的な
方法も取られているが、毒が水溶性のため作業途中に可
食部が汚染を受けるなど、必ずしも安全な方法ではなか
った。このようにＰＳＰを除去する方法は非常に困難で
あり、十分な方法がないのが現状である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明の課題
は、貝の味、肉質、鮮度に影響を与えるような過激な処
理をすることなく、かつ貝を死なせることなくＰＳＰを
食用可能な規制値（出荷の自主の規制値：４マウスユニ
ット（ＭＵ）；１ＭＵは、体重20ｇのマウスを15分間で
死亡させる毒量と定義され、約0.2μｇのサキシトキシ
ン様物質に相当する。（昭和53年水研第963号水産庁長
官通達））以下にする穏和な貝毒除去方法を提供するこ
とである。
は、貝の味、肉質、鮮度に影響を与えるような過激な処
理をすることなく、かつ貝を死なせることなくＰＳＰを
食用可能な規制値（出荷の自主の規制値：４マウスユニ
ット（ＭＵ）；１ＭＵは、体重20ｇのマウスを15分間で
死亡させる毒量と定義され、約0.2μｇのサキシトキシ
ン様物質に相当する。（昭和53年水研第963号水産庁長
官通達））以下にする穏和な貝毒除去方法を提供するこ
とである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記課題に鑑み鋭意研究
の結果、本発明者は、エンテロバクター属に属する微生
物のうち、麻痺性貝毒であるゴニオトキシン類及び／又
はサキシトキシンを分解するものがあること、及び該微
生物又は該微生物から得られる酵素を貝類に対して与え
ることにより、麻痺性貝毒を除去できることを見出し、
本発明を完成した。
の結果、本発明者は、エンテロバクター属に属する微生
物のうち、麻痺性貝毒であるゴニオトキシン類及び／又
はサキシトキシンを分解するものがあること、及び該微
生物又は該微生物から得られる酵素を貝類に対して与え
ることにより、麻痺性貝毒を除去できることを見出し、
本発明を完成した。
【０００７】即ち、本発明は、ゴニオトキシン類及び／
又はサキシトキシン分解能を有するエンテロバクター属
に属する微生物菌体もしくは該微生物菌体含有物、又は
該微生物から得られる酵素もしくは該酵素含有物を貝類
に対して与えることにより、貝類に含まれるゴニオトキ
シン類及び／又はサキシトキシンを分解することを特徴
とする麻痺性貝毒の除去方法である。また、本発明は、
ゴニオトキシン類及び／又はサキシトキシン分解能を有
するエンテロバクター・クロアカエである。以下、本発
明を詳細に説明する。
又はサキシトキシン分解能を有するエンテロバクター属
に属する微生物菌体もしくは該微生物菌体含有物、又は
該微生物から得られる酵素もしくは該酵素含有物を貝類
に対して与えることにより、貝類に含まれるゴニオトキ
シン類及び／又はサキシトキシンを分解することを特徴
とする麻痺性貝毒の除去方法である。また、本発明は、
ゴニオトキシン類及び／又はサキシトキシン分解能を有
するエンテロバクター・クロアカエである。以下、本発
明を詳細に説明する。
【０００８】Ｉ．微生物の分離・培養 ＰＳＰとしては、以下の一般式
【０００９】
【化１】
【００１０】 ──────────────────────────────────── 基質 Ｒ1 Ｒ2 Ｒ3 Ｒ4 ──────────────────────────────────── サキシトキシン Ｈ Ｈ Ｈ ＣＯＮＨ2 ゴニオトキシン−１ ＯＨ Ｈ ＯＳＯ3 - ＣＯＮＨ2 ゴニオトキシン−２ Ｈ Ｈ ＯＳＯ3 - ＣＯＮＨ2 ゴニオトキシン−３ Ｈ ＯＳＯ3 - Ｈ ＣＯＮＨ2 ゴニオトキシン−４ ＯＨ ＯＳＯ3 - Ｈ ＣＯＮＨ2 ゴニオトキシン−５ Ｈ Ｈ Ｈ ＣＯＮＨＳＯ3 - ゴニオトキシン−６ ＯＨ Ｈ Ｈ ＣＯＮＨＳＯ3 - ゴニオトキシン−８ Ｈ ＯＳＯ3 - Ｈ ＣＯＮＨＳＯ3 - ────────────────────────────────────
【００１１】で表されるゴニオトキシン類及びサキシト
キシンが主に知られている。本発明者は、ＰＳＰを分解
する酵素を生産する微生物を捜すため、ＰＳＰで毒化し
た貝、たとえばホタテガイと同一の海域に棲息し、かつ
同様の食餌性（好餌性）を有して有毒プランクトンを補
食するにもかかわらず毒化しない魚類、たとえば北海道
噴火湾沿岸に棲息するアイナメ（Hexagrammos otakii）
の消化管から、ＰＳＰと炭素源及び窒素源とを含む培地
で増殖する貝毒分解微生物を分離した。
キシンが主に知られている。本発明者は、ＰＳＰを分解
する酵素を生産する微生物を捜すため、ＰＳＰで毒化し
た貝、たとえばホタテガイと同一の海域に棲息し、かつ
同様の食餌性（好餌性）を有して有毒プランクトンを補
食するにもかかわらず毒化しない魚類、たとえば北海道
噴火湾沿岸に棲息するアイナメ（Hexagrammos otakii）
の消化管から、ＰＳＰと炭素源及び窒素源とを含む培地
で増殖する貝毒分解微生物を分離した。
【００１２】［分離方法］有毒プランクトンを捕食し、
その結果蓄積されるＰＳＰが分解を受けていると思われ
る魚の消化管を菌の起源とし、分離培地としてＹＰＧＮ
培地（脱イオン水１リットル中に、酵母エキス2.5ｇ、
ペプトン５ｇ、グルコース１ｇ及び塩化ナトリウム30ｇ
を含み、固形培地の場合はさらに寒天15ｇを含む。ｐＨ
は5.5である。）に、実施例１に記載した方法で調製し
たＰＳＰ粗精製画分を容量比で10％添加したものを用
い、ＰＳＰと炭素源及び窒素源とを含む培地で生育でき
る微生物のみを検索した。培養温度としては、魚の体
温、棲息海域の水温に近い23℃付近とし、この温度で分
離した。
その結果蓄積されるＰＳＰが分解を受けていると思われ
る魚の消化管を菌の起源とし、分離培地としてＹＰＧＮ
培地（脱イオン水１リットル中に、酵母エキス2.5ｇ、
ペプトン５ｇ、グルコース１ｇ及び塩化ナトリウム30ｇ
を含み、固形培地の場合はさらに寒天15ｇを含む。ｐＨ
は5.5である。）に、実施例１に記載した方法で調製し
たＰＳＰ粗精製画分を容量比で10％添加したものを用
い、ＰＳＰと炭素源及び窒素源とを含む培地で生育でき
る微生物のみを検索した。培養温度としては、魚の体
温、棲息海域の水温に近い23℃付近とし、この温度で分
離した。
【００１３】本分離菌はＰＳＰ、主にはゴニオトキシン
類及び／又はサキシトキシン、更に好ましくはゴニオト
キシン−２、ゴニオトキシン−３を分解する酵素を有
し、表１、表２、表３、表４及び図１の顕微鏡写真に示
すような微生物学的性状を有する。
類及び／又はサキシトキシン、更に好ましくはゴニオト
キシン−２、ゴニオトキシン−３を分解する酵素を有
し、表１、表２、表３、表４及び図１の顕微鏡写真に示
すような微生物学的性状を有する。
【００１４】
【表１】
【００１５】
【表２】
【００１６】
【表３】
【００１７】
【表４】
【００１８】以上の菌学的性質をもとに、本発明のＰＳ
Ｐ分解能を有する微生物（以下、ＰＳＰ分解菌という）
の分類学的地位をバージェイズ・マニュアル・オブ・シ
ステマティック・バクテテリオロジー（Bergey's Manua
l of Systematic Bacteriology Volume 1 (1989)）の記
載と分類項目を参照したところ、エンテロバクター・ク
ロアカエ（Enterobacter cloacae）に属する新菌株と同
定し、エンテロバクター・クロアカエ １０２９株と命
名した。なお、本菌は平成６年11月８日に日本国茨城県
つくば市の工業技術院生命工学工業技術研究所にFERM B
P-4877として寄託されている。
Ｐ分解能を有する微生物（以下、ＰＳＰ分解菌という）
の分類学的地位をバージェイズ・マニュアル・オブ・シ
ステマティック・バクテテリオロジー（Bergey's Manua
l of Systematic Bacteriology Volume 1 (1989)）の記
載と分類項目を参照したところ、エンテロバクター・ク
ロアカエ（Enterobacter cloacae）に属する新菌株と同
定し、エンテロバクター・クロアカエ １０２９株と命
名した。なお、本菌は平成６年11月８日に日本国茨城県
つくば市の工業技術院生命工学工業技術研究所にFERM B
P-4877として寄託されている。
【００１９】［微生物の培養方法］上記ＰＳＰ分解菌の
培養は、ＹＰＧＮ培地やＰＳＰ粗精製画分を含む滅菌海
水などを用いて、23℃程度で行うことができる。特に好
ましくは、既報（日本農芸化学会誌 Vol.65, No.12,
P.1753-1760, (1991)、食品衛生学雑誌 Vol.33, No.3,
P.223-230, (1992) ）及び田沢らによって報告された
方法（北海道衛生研究所報告書 Vol.38, P.60-62, (19
88) ）を以下のように改変して培養する。すなわち、毒
化した試料ホタテガイの中腸腺約20ｇに20mlの0.1Ｎ塩
酸を加え、テフロンホモジナイザーにて室温で３分間ホ
モジナイズした後、沸騰湯上で熱抽出する。抽出液をワ
ットマンＮｏ．１ろ紙でろ過し、得られたＰＳＰ粗画分
を上記培地に容量比で10％程度添加するのが特に好まし
い。
培養は、ＹＰＧＮ培地やＰＳＰ粗精製画分を含む滅菌海
水などを用いて、23℃程度で行うことができる。特に好
ましくは、既報（日本農芸化学会誌 Vol.65, No.12,
P.1753-1760, (1991)、食品衛生学雑誌 Vol.33, No.3,
P.223-230, (1992) ）及び田沢らによって報告された
方法（北海道衛生研究所報告書 Vol.38, P.60-62, (19
88) ）を以下のように改変して培養する。すなわち、毒
化した試料ホタテガイの中腸腺約20ｇに20mlの0.1Ｎ塩
酸を加え、テフロンホモジナイザーにて室温で３分間ホ
モジナイズした後、沸騰湯上で熱抽出する。抽出液をワ
ットマンＮｏ．１ろ紙でろ過し、得られたＰＳＰ粗画分
を上記培地に容量比で10％程度添加するのが特に好まし
い。
【００２０】II．ＰＳＰの除去方法 ＰＳＰ、主にはゴニオトキシン類及び／又はサキシトキ
シン、更に好ましくはゴニオトキシン−２及び／又はゴ
ニオトキシン−３を除去する方法としては、毒化した貝
が生育する海域、又は貝を養殖する海域や蓄養池、養殖
用水槽等において、上記のように培養したＰＳＰ分解菌
の生菌や、該ＰＳＰ分解菌の菌体含有物、あるいはＰＳ
Ｐ分解菌から分離精製したＰＳＰ分解酵素、該酵素含有
物などを単独で又は組み合わせて給餌させたり、賦形剤
や無毒プランクトン等と混合して投与し、捕食させる方
法等が挙げられる。
シン、更に好ましくはゴニオトキシン−２及び／又はゴ
ニオトキシン−３を除去する方法としては、毒化した貝
が生育する海域、又は貝を養殖する海域や蓄養池、養殖
用水槽等において、上記のように培養したＰＳＰ分解菌
の生菌や、該ＰＳＰ分解菌の菌体含有物、あるいはＰＳ
Ｐ分解菌から分離精製したＰＳＰ分解酵素、該酵素含有
物などを単独で又は組み合わせて給餌させたり、賦形剤
や無毒プランクトン等と混合して投与し、捕食させる方
法等が挙げられる。
【００２１】例えば、容量2.5トンの水槽に、ろ過海水
２トンをはり、その中に、毒化した平均貝長15±２cm、
平均貝重150±50ｇ、中腸腺中のＰＳＰ量が約300ＭＵの
ホタテガイ400枚を入れ、その中に本ＰＳＰ分解菌を乾
燥重量として約15〜20ｇ程度添加し、12〜60時間程度培
養する。菌体含有物としては、ＰＳＰ分解生菌、ＰＳＰ
分解生菌と動・植物プランクトン等との混在物、菌体破
砕物等が挙げられる。
２トンをはり、その中に、毒化した平均貝長15±２cm、
平均貝重150±50ｇ、中腸腺中のＰＳＰ量が約300ＭＵの
ホタテガイ400枚を入れ、その中に本ＰＳＰ分解菌を乾
燥重量として約15〜20ｇ程度添加し、12〜60時間程度培
養する。菌体含有物としては、ＰＳＰ分解生菌、ＰＳＰ
分解生菌と動・植物プランクトン等との混在物、菌体破
砕物等が挙げられる。
【００２２】ＰＳＰ分解酵素の分離精製は、常法によっ
て行えばよく、例えば、菌体破砕液をそのまま、特に好
ましくは硫酸アンモニウムを添加して０〜40％飽和画分
とすればよい。
て行えばよく、例えば、菌体破砕液をそのまま、特に好
ましくは硫酸アンモニウムを添加して０〜40％飽和画分
とすればよい。
【００２３】得られたＰＳＰ分解酵素は、好ましくは補
酵素とともに使用する。補酵素としては、ジチオスレイ
トール（ＤＴＴ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌ
クレオチド（ＮＡＤＨ）、還元型ニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチドリン酸塩（ＮＡＤＰＨ）、フラビンア
デニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、フラビンモノヌクレ
オチド（ＦＭＮ）等が挙げられ、それらの中でも特にＤ
ＴＴを含めて用いるのが好ましい。
酵素とともに使用する。補酵素としては、ジチオスレイ
トール（ＤＴＴ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌ
クレオチド（ＮＡＤＨ）、還元型ニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチドリン酸塩（ＮＡＤＰＨ）、フラビンア
デニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、フラビンモノヌクレ
オチド（ＦＭＮ）等が挙げられ、それらの中でも特にＤ
ＴＴを含めて用いるのが好ましい。
【００２４】賦形剤としては、通常使用される乳糖、ケ
イソウ土等であればよく、特に限定されない。また、混
合投与に用いる無毒プランクトンとしては、例えば、カ
エトセロス属、スケレトネマ属、タラシオシラ属等の珪
藻類に属する植物プランクトンや、ユーグレナ属等の緑
藻類に属する動物（植物）プランクトン等が挙げられ
る。これら無毒プランクトンとＰＳＰ分解菌との混合比
率は、特に限定されないが１：１〜１：５程度が好まし
い。混合方法としては、ＰＳＰ分解菌と無毒プランクト
ンを別々に培養した後混合する方法がある。以上のよう
な方法により、北海道噴火湾のホタテガイに夏場発生す
るＰＳＰの最高値300ＭＵ付近のものを、自主規制値で
ある４ＭＵ以下に減毒、又は除去できた。
イソウ土等であればよく、特に限定されない。また、混
合投与に用いる無毒プランクトンとしては、例えば、カ
エトセロス属、スケレトネマ属、タラシオシラ属等の珪
藻類に属する植物プランクトンや、ユーグレナ属等の緑
藻類に属する動物（植物）プランクトン等が挙げられ
る。これら無毒プランクトンとＰＳＰ分解菌との混合比
率は、特に限定されないが１：１〜１：５程度が好まし
い。混合方法としては、ＰＳＰ分解菌と無毒プランクト
ンを別々に培養した後混合する方法がある。以上のよう
な方法により、北海道噴火湾のホタテガイに夏場発生す
るＰＳＰの最高値300ＭＵ付近のものを、自主規制値で
ある４ＭＵ以下に減毒、又は除去できた。
【００２５】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものでは
ない。
するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものでは
ない。
【００２６】（実施例１） ［ＰＳＰ分解菌の分離、調製］北海道噴火湾沿岸の２年
齢ホタテガイ（Patinopecten yessoensis 、平均貝長：
96±11mm、平均重量：98±16g)をＰＳＰ抽出のための試
料貝として用いた。これらはいずれもマウス致死法(Sch
antz, J., McFarren, F., Schafer, C., and Lewis, H:
J. Assoc. Off. Chem., No.41, p.160-172, (1958)）に
よる定量で規定値を越える毒性値が検出されたもので、
この毒化した貝からのＰＳＰ粗画分（ゴニオトキシン
類、サキシトキシン及びその他のＰＳＰ成分の混合画
分）の抽出は、既報（日本農芸化学会誌 Vol.65, No.1
2, P.1753-1760, (1991)、食品衛生学雑誌 Vol.33, N
o.3, P.223-230, (1992) ）及び田沢らによって報告さ
れた方法（北海道衛生研究所報告書 Vol.38, P.60-62,
(1988) ）を以下のように改変して行った。
齢ホタテガイ（Patinopecten yessoensis 、平均貝長：
96±11mm、平均重量：98±16g)をＰＳＰ抽出のための試
料貝として用いた。これらはいずれもマウス致死法(Sch
antz, J., McFarren, F., Schafer, C., and Lewis, H:
J. Assoc. Off. Chem., No.41, p.160-172, (1958)）に
よる定量で規定値を越える毒性値が検出されたもので、
この毒化した貝からのＰＳＰ粗画分（ゴニオトキシン
類、サキシトキシン及びその他のＰＳＰ成分の混合画
分）の抽出は、既報（日本農芸化学会誌 Vol.65, No.1
2, P.1753-1760, (1991)、食品衛生学雑誌 Vol.33, N
o.3, P.223-230, (1992) ）及び田沢らによって報告さ
れた方法（北海道衛生研究所報告書 Vol.38, P.60-62,
(1988) ）を以下のように改変して行った。
【００２７】すなわち、試料ホタテガイの中腸腺約20ｇ
に20mlの0.1Ｎ塩酸を加え、テフロンホモジナイザーに
て室温で３分間ホモジナイズした後、沸騰湯上で熱抽出
した。抽出液をワットマンＮｏ．１ろ紙及びSep-PackＣ
18（Waters社製）でろ過後、さらに限外ろ過（ろ過膜：
UT3TGC、ミリポア社製）してＰＳＰ粗画分とした。
に20mlの0.1Ｎ塩酸を加え、テフロンホモジナイザーに
て室温で３分間ホモジナイズした後、沸騰湯上で熱抽出
した。抽出液をワットマンＮｏ．１ろ紙及びSep-PackＣ
18（Waters社製）でろ過後、さらに限外ろ過（ろ過膜：
UT3TGC、ミリポア社製）してＰＳＰ粗画分とした。
【００２８】ＰＳＰ粗画分におけるゴニオトキシン類及
びサキシトキシンの検出と同定は、既報（日本農芸化学
会誌 Vol.65, No.12, P.1753-1760, (1991)、食品衛生
学雑誌 Vol.33, No.3, P.223-230, (1992) など）に従
って薄層クロマトグラフィー及びろ紙電気泳動によって
行った。ＰＳＰの定量は、安元と大島による高速液体ク
ロマトグラフィー法（Kotaki Y.,Oshima, Y.,and Yasum
oto, T.:Bull. Jpn. Soc. Sci. Fish.,Vol.51, No.6,
p.1009-1013 (1985) 、安元 健「化学と生物」Vol.27,
No.6, P.401-406 (1992)）を以下のように改変して行
った。
びサキシトキシンの検出と同定は、既報（日本農芸化学
会誌 Vol.65, No.12, P.1753-1760, (1991)、食品衛生
学雑誌 Vol.33, No.3, P.223-230, (1992) など）に従
って薄層クロマトグラフィー及びろ紙電気泳動によって
行った。ＰＳＰの定量は、安元と大島による高速液体ク
ロマトグラフィー法（Kotaki Y.,Oshima, Y.,and Yasum
oto, T.:Bull. Jpn. Soc. Sci. Fish.,Vol.51, No.6,
p.1009-1013 (1985) 、安元 健「化学と生物」Vol.27,
No.6, P.401-406 (1992)）を以下のように改変して行
った。
【００２９】すなわち、ＰＳＰ標品をInertsil ODS-2
カラム（4.6×250mm）に負荷し、ゴニオトキシン類につ
いては１−ヘプタスルホン酸ナトリウム２mMを含む10mM
リン酸アンモニウム溶液（ｐＨ7.2）を移動層として溶
出し、またサキシトキシンについてはこの移動層にアセ
トニトリルを容量比で10％添加した溶液で溶出した。
カラム（4.6×250mm）に負荷し、ゴニオトキシン類につ
いては１−ヘプタスルホン酸ナトリウム２mMを含む10mM
リン酸アンモニウム溶液（ｐＨ7.2）を移動層として溶
出し、またサキシトキシンについてはこの移動層にアセ
トニトリルを容量比で10％添加した溶液で溶出した。
【００３０】この溶出画分を、過ヨウ素酸７mMを含む50
mMリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ9.0）で標識し、0.5Ｍ
酢酸で中和した後、励起波長330nm、発光波長390nmで各
ＰＳＰ成分を検出し、そのピーク高さからゴニオトキシ
ン類及びサキシトキシンを定量した。なお、サキシトキ
シン標準品は米国食品医薬品局（Ｆ．Ｄ．Ａ）のＳ．Ｈ
ａｌｌ博士から譲渡されたものを使用し、ゴニオトキシ
ン標準品は東北大学農学部大島康克博士から譲渡された
ものを使用した。
mMリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ9.0）で標識し、0.5Ｍ
酢酸で中和した後、励起波長330nm、発光波長390nmで各
ＰＳＰ成分を検出し、そのピーク高さからゴニオトキシ
ン類及びサキシトキシンを定量した。なお、サキシトキ
シン標準品は米国食品医薬品局（Ｆ．Ｄ．Ａ）のＳ．Ｈ
ａｌｌ博士から譲渡されたものを使用し、ゴニオトキシ
ン標準品は東北大学農学部大島康克博士から譲渡された
ものを使用した。
【００３１】この結果、サキシトキシンが約10ＭＵ、ゴ
ニオトキシン−２が約150ＭＵ及びゴニオトキシン−３
が約50ＭＵの粗画分得られた。
ニオトキシン−２が約150ＭＵ及びゴニオトキシン−３
が約50ＭＵの粗画分得られた。
【００３２】一方、北海道噴火湾において捕獲したアイ
ナメ（Hexagrammos otakii）から摘出した消化管約20ｇ
に30mlの滅菌海水を加え、ブレンダーミルによって室温
で５分間ホモジナイズした後、3,000r.p.m. で10分間遠
心分離した。上清液をＹＰＧＮ培地（脱イオン水１リッ
トル中に、酵母エキス2.5ｇ、ペプトン５ｇ、グルコー
ス１ｇ及び塩化ナトリウム30ｇを含み、固形培地の場合
はさらに寒天15ｇを含む。ｐＨは5.5である。）で希釈
し、常法に従って固形ＹＰＧＮ培地表面に分散接種し
た。23℃で一夜培養して出現するコロニーのそれぞれを
ＹＰＧＮ培地に釣菌接種し、再度23℃で一夜培養した。
これら分離微生物のそれぞれを、上記で得られた約200
ＭＵのＰＳＰ粗画分を含む10mlの滅菌海水に接種し、23
℃で振盪培養した。微生物の増殖を波長590nmにおける
比濁度にて測定し、貝毒を含む栄養源として良好に生育
する微生物１株を得た。
ナメ（Hexagrammos otakii）から摘出した消化管約20ｇ
に30mlの滅菌海水を加え、ブレンダーミルによって室温
で５分間ホモジナイズした後、3,000r.p.m. で10分間遠
心分離した。上清液をＹＰＧＮ培地（脱イオン水１リッ
トル中に、酵母エキス2.5ｇ、ペプトン５ｇ、グルコー
ス１ｇ及び塩化ナトリウム30ｇを含み、固形培地の場合
はさらに寒天15ｇを含む。ｐＨは5.5である。）で希釈
し、常法に従って固形ＹＰＧＮ培地表面に分散接種し
た。23℃で一夜培養して出現するコロニーのそれぞれを
ＹＰＧＮ培地に釣菌接種し、再度23℃で一夜培養した。
これら分離微生物のそれぞれを、上記で得られた約200
ＭＵのＰＳＰ粗画分を含む10mlの滅菌海水に接種し、23
℃で振盪培養した。微生物の増殖を波長590nmにおける
比濁度にて測定し、貝毒を含む栄養源として良好に生育
する微生物１株を得た。
【００３３】（実施例２） ［ＰＳＰ分解生菌体のみによるホタテガイ生体のＰＳＰ
除去方法］
除去方法］
【００３４】
【表５】
【００３５】上記培地組成の培地を500ml容の坂口フラ
スコに100ml入れ、綿栓後、オートクレーブにて121℃で
20分殺菌した。ＰＳＰ粗画分はオートクレーブにて110
℃で15分間別殺菌後、上記培地に混ぜた。本培地に、別
の斜面培地においてあらかじめ培養したＰＳＰ分解菌を
１白金耳接種し、23℃にて24時間培養した。得られた培
養液を3,000r.p.m.で30分遠心分離し、上澄みを廃棄
後、ｐＨ5.5の10mM酢酸緩衝液で撹拌洗浄し、さらに10,
000r.p.m.で20分間遠心分離し、この操作を２回繰り返
しＰＳＰ分解菌を得た。
スコに100ml入れ、綿栓後、オートクレーブにて121℃で
20分殺菌した。ＰＳＰ粗画分はオートクレーブにて110
℃で15分間別殺菌後、上記培地に混ぜた。本培地に、別
の斜面培地においてあらかじめ培養したＰＳＰ分解菌を
１白金耳接種し、23℃にて24時間培養した。得られた培
養液を3,000r.p.m.で30分遠心分離し、上澄みを廃棄
後、ｐＨ5.5の10mM酢酸緩衝液で撹拌洗浄し、さらに10,
000r.p.m.で20分間遠心分離し、この操作を２回繰り返
しＰＳＰ分解菌を得た。
【００３６】得られた菌体約1.7ｇをｐＨ5.5の10mM酢酸
緩衝液20mlに懸濁し、この懸濁液とともに、毒化したホ
タテガイ（平均貝長及び平均貝重は同前）６枚を、海水
30リットルを満たした水槽（大きさ37×25×50cm、容量
約38リットル）中で蓄養した。水温は14℃に維持しなが
ら、菌液浸漬により６時間、その後普通海水により18時
間処理した。同様の処理を３日間続けた（添加区）。ま
た、菌体を加えない以外、同様にしてホタテガイ６枚を
蓄養した（無添加区）。
緩衝液20mlに懸濁し、この懸濁液とともに、毒化したホ
タテガイ（平均貝長及び平均貝重は同前）６枚を、海水
30リットルを満たした水槽（大きさ37×25×50cm、容量
約38リットル）中で蓄養した。水温は14℃に維持しなが
ら、菌液浸漬により６時間、その後普通海水により18時
間処理した。同様の処理を３日間続けた（添加区）。ま
た、菌体を加えない以外、同様にしてホタテガイ６枚を
蓄養した（無添加区）。
【００３７】上記処理を始めて24時間、48時間、72時間
経過後に添加区及び無添加区のホタテガイ各２枚を取り
出し、各ホタテガイの中腸腺約10ｇに10mlの0.1Ｎ塩酸
を加え、テフロンホモジナイザーにて室温で３分間ホモ
ジナイズした後、沸騰湯上で熱抽出した。抽出液をワッ
トマンＮｏ．１ろ紙及びSep-PackＣ18（Waters社製）で
ろ過後、さらに限外ろ過（ろ過膜：UT3TGC、ミリポア社
製）して分析用サンプルとした。ＰＳＰの定量は、実施
例１と同様の方法で行った。結果を図２に示す。図２か
ら明らかなように、ＰＳＰ分解菌体添加区のホタテガイ
は、無添加区に比べてＰＳＰ量が著しく低下し、出荷規
制値４ＭＵ以下となった。
経過後に添加区及び無添加区のホタテガイ各２枚を取り
出し、各ホタテガイの中腸腺約10ｇに10mlの0.1Ｎ塩酸
を加え、テフロンホモジナイザーにて室温で３分間ホモ
ジナイズした後、沸騰湯上で熱抽出した。抽出液をワッ
トマンＮｏ．１ろ紙及びSep-PackＣ18（Waters社製）で
ろ過後、さらに限外ろ過（ろ過膜：UT3TGC、ミリポア社
製）して分析用サンプルとした。ＰＳＰの定量は、実施
例１と同様の方法で行った。結果を図２に示す。図２か
ら明らかなように、ＰＳＰ分解菌体添加区のホタテガイ
は、無添加区に比べてＰＳＰ量が著しく低下し、出荷規
制値４ＭＵ以下となった。
【００３８】［ＰＳＰ分解生菌体のみによるＰＳＰ粗画
分のＰＳＰ除去方法］試験管内での前記の方法で得たＰ
ＳＰ生菌体のＰＳＰ画分に対する効果について検討し
た。23℃で好気的に反応させた後、残存する各毒性成分
を高速液体クロマトグラフィーで定量した。結果を図３
に示す。
分のＰＳＰ除去方法］試験管内での前記の方法で得たＰ
ＳＰ生菌体のＰＳＰ画分に対する効果について検討し
た。23℃で好気的に反応させた後、残存する各毒性成分
を高速液体クロマトグラフィーで定量した。結果を図３
に示す。
【００３９】数種の未同定ピーク、及び矢印で示したゴ
ニオトキシン類の高さはいずれも反応時間の経過に伴な
って減少し、特に我国における養殖ホタテガイの主要貝
毒性成分であるゴニオトキシン−２のピークは反応開始
後16時間で完全消失した。また、ゴニオトキシン−２の
異性体であるゴニオトキシン−３のピーク高さの減少は
ゴニオトキシン−２のピーク高さの減少に遅れ、ゴニオ
トキシン−３のピークが完全に消失するためには24時間
以上の反応が必要であった。更に、反応時間の経過に伴
ってサキシトキシンの毒性値は10ＭＵから３ＭＵに減少
した。
ニオトキシン類の高さはいずれも反応時間の経過に伴な
って減少し、特に我国における養殖ホタテガイの主要貝
毒性成分であるゴニオトキシン−２のピークは反応開始
後16時間で完全消失した。また、ゴニオトキシン−２の
異性体であるゴニオトキシン−３のピーク高さの減少は
ゴニオトキシン−２のピーク高さの減少に遅れ、ゴニオ
トキシン−３のピークが完全に消失するためには24時間
以上の反応が必要であった。更に、反応時間の経過に伴
ってサキシトキシンの毒性値は10ＭＵから３ＭＵに減少
した。
【００４０】［ＰＳＰ分解生菌体のみによる中腸腺のＰ
ＳＰ除去方法］前記の方法で得たＰＳＰ分解生菌体1.8
ｇをｐＨ5.5の10mM酢酸緩衝液約20mlに懸濁し、毒化し
たホタテガイ（同前）６枚から摘出した中腸腺６個（平
均重量約10ｇ）に、濾過海水（水温14℃）500ml中で８
時間作用させた。その後、中腸腺約10ｇに10mlの0.1Ｎ
の塩酸を加え、テフロンホモジナイザーにより室温下で
３分間ホモジナイズした後、沸騰湯上で熱抽出した。抽
出液をワットマンＮｏ．１ろ紙及びSep-PackＣ18（Wate
rs社製）でろ過後、さらに限外ろ過（ろ過膜：UT3TGC、
ミリポア社製）して分析用サンプルとした。ＰＳＰの定
量は、実施例１と同様の方法で行った。結果を図４に示
す。
ＳＰ除去方法］前記の方法で得たＰＳＰ分解生菌体1.8
ｇをｐＨ5.5の10mM酢酸緩衝液約20mlに懸濁し、毒化し
たホタテガイ（同前）６枚から摘出した中腸腺６個（平
均重量約10ｇ）に、濾過海水（水温14℃）500ml中で８
時間作用させた。その後、中腸腺約10ｇに10mlの0.1Ｎ
の塩酸を加え、テフロンホモジナイザーにより室温下で
３分間ホモジナイズした後、沸騰湯上で熱抽出した。抽
出液をワットマンＮｏ．１ろ紙及びSep-PackＣ18（Wate
rs社製）でろ過後、さらに限外ろ過（ろ過膜：UT3TGC、
ミリポア社製）して分析用サンプルとした。ＰＳＰの定
量は、実施例１と同様の方法で行った。結果を図４に示
す。
【００４１】図４から明らかなように、反応８時間経過
後、中腸腺中のゴニオトキシン類（特にゴニオトキシン
−２及びゴニオトキシン−３）が分解されている。よっ
て、本発明のＰＳＰ分解菌は、貝に捕食されてＰＳＰの
蓄積されている中腸腺に進入しなくても、直接中腸腺な
どの組織内に進入し、ＰＳＰを分解できることがわかっ
た。
後、中腸腺中のゴニオトキシン類（特にゴニオトキシン
−２及びゴニオトキシン−３）が分解されている。よっ
て、本発明のＰＳＰ分解菌は、貝に捕食されてＰＳＰの
蓄積されている中腸腺に進入しなくても、直接中腸腺な
どの組織内に進入し、ＰＳＰを分解できることがわかっ
た。
【００４２】（実施例３） ［ＰＳＰ分解生菌のみによる部分精製したゴニオトキシ
ン−２の分解反応］北海道噴火湾沿岸で採取した２年齢
ホタテガイ（Patinopecten yessoensis 、平均貝長：96
±11mm、平均重量：98±16g)をＰＳＰ抽出のための試料
貝として用いた。これらはいずれもマウス致死法(Schan
tz, J.,McFarren, F.,Schafer, C.,and Lewis, H:J. As
soc. Off. Chem., 41, 160-172) による定量で規定値を
越える毒性値が検出されたもので、この毒化した貝から
のＰＳＰ粗画分（ゴニオトキシン類、サキシトキシン及
びその他のＰＳＰ成分の混合画分）の抽出と、この画分
からのゴニオトキシン−２の部分精製は、既報（日本農
芸化学会誌 Vol.65, No.12, P.1753-1760, (1991)、食
品衛生学雑誌 Vol.33, No.3, P.223-230, (1992) ）及
び田沢らによって報告された方法（北海道衛生研究所報
告書 No.38,P.60-62, (1988)）を以下のように改変し
て行った。
ン−２の分解反応］北海道噴火湾沿岸で採取した２年齢
ホタテガイ（Patinopecten yessoensis 、平均貝長：96
±11mm、平均重量：98±16g)をＰＳＰ抽出のための試料
貝として用いた。これらはいずれもマウス致死法(Schan
tz, J.,McFarren, F.,Schafer, C.,and Lewis, H:J. As
soc. Off. Chem., 41, 160-172) による定量で規定値を
越える毒性値が検出されたもので、この毒化した貝から
のＰＳＰ粗画分（ゴニオトキシン類、サキシトキシン及
びその他のＰＳＰ成分の混合画分）の抽出と、この画分
からのゴニオトキシン−２の部分精製は、既報（日本農
芸化学会誌 Vol.65, No.12, P.1753-1760, (1991)、食
品衛生学雑誌 Vol.33, No.3, P.223-230, (1992) ）及
び田沢らによって報告された方法（北海道衛生研究所報
告書 No.38,P.60-62, (1988)）を以下のように改変し
て行った。
【００４３】すなわち試料ホタテガイの中腸腺約20ｇに
20mlの0.1Ｎ塩酸を加え、テフロンホモジナイザーにて
室温で３分間ホモジナイズした後、沸騰湯上で熱抽出し
た。抽出液をワットマンＮｏ．１ろ紙及びSep-PackＣ18
（Waters社製）でろ過後、さらに限外ろ過（ろ過膜：UT
3TGC、ミリポア社）してＰＳＰ粗画分とした。
20mlの0.1Ｎ塩酸を加え、テフロンホモジナイザーにて
室温で３分間ホモジナイズした後、沸騰湯上で熱抽出し
た。抽出液をワットマンＮｏ．１ろ紙及びSep-PackＣ18
（Waters社製）でろ過後、さらに限外ろ過（ろ過膜：UT
3TGC、ミリポア社）してＰＳＰ粗画分とした。
【００４４】ついで粗画分をBio-Gel P-2カラム（３×
50cm）に負荷し、脱イオン水で洗浄した後、0.03Ｍ酢酸
で溶出される画分を集めて濃縮した。その後これをBio-
Rex70カラム（Ｈ＋型、1.7×16cm）に負荷し、脱イオン
水で洗浄した後、0.03Ｍ酢酸で溶出された画分を集めて
これをゴニオトキシン−２部分精製画分とした。
50cm）に負荷し、脱イオン水で洗浄した後、0.03Ｍ酢酸
で溶出される画分を集めて濃縮した。その後これをBio-
Rex70カラム（Ｈ＋型、1.7×16cm）に負荷し、脱イオン
水で洗浄した後、0.03Ｍ酢酸で溶出された画分を集めて
これをゴニオトキシン−２部分精製画分とした。
【００４５】このゴニオトキシン−２を基質として、実
施例２に記載した方法に従って反応を行い、反応生成物
の検討を行った。反応生成物の検出は、コンウェイ微量
拡散法（Kikuchi,S. and Ishimoto, M. :Zeitshrift fu
r Allgemeine MikrobiologieNo.20, p.405-413 (198
0)）によって行った。結果を図５に示す。図５より、ゴ
ニオトキシン−２の減少量に比例して生成するアンモニ
ア量が増加していることから、ゴニオトキシン−２のア
ンモニアの遊離を伴う分解経路が推定される。
施例２に記載した方法に従って反応を行い、反応生成物
の検討を行った。反応生成物の検出は、コンウェイ微量
拡散法（Kikuchi,S. and Ishimoto, M. :Zeitshrift fu
r Allgemeine MikrobiologieNo.20, p.405-413 (198
0)）によって行った。結果を図５に示す。図５より、ゴ
ニオトキシン−２の減少量に比例して生成するアンモニ
ア量が増加していることから、ゴニオトキシン−２のア
ンモニアの遊離を伴う分解経路が推定される。
【００４６】（実施例４） ［菌体破砕物（酵素含有物）によるＰＳＰ粗画分のＰＳ
Ｐの除去方法］実施例１の方法にて得られたＰＳＰ分解
生菌体を、ＤＴＴを含む50mMリン酸緩衝液（ｐＨ6.8）
に懸濁した後、超音波によって破砕した。その後、10,0
00r.p.mで20分間遠心分離し、常法に従い上清液（粗酵
素画分）を得た。この粗画分を部分精製するために、常
法に従って硫安分画を行い、Ｉ：０〜40％、II：40〜70
％、III ：70〜90％、IV：90％の４分画を得た。各分画
に対し、補酵素としてＡ：ＤＴＴ（Dithiothreitol）を
１mM、Ｂ：ＮＡＤＨ（Redused Nicotinamide adenine d
inucleotide）を100μＭ、Ｃ：ＮＡＤＰＨ（Redused Ni
cotinamide adenine dinucleotide phsphate）を100μ
Ｍ、Ｄ：ＦＡＤ（Flavin adenine dinucleotide）及び
ＦＭＮ（Flavine mononucleotide）をそれぞれ20μＭ添
加した。これを約200ＭＵのＰＳＰ粗画分とともに１時
間反応させ、各補酵素の影響を調べた。硫安分画Ｉの結
果を表６に示す。
Ｐの除去方法］実施例１の方法にて得られたＰＳＰ分解
生菌体を、ＤＴＴを含む50mMリン酸緩衝液（ｐＨ6.8）
に懸濁した後、超音波によって破砕した。その後、10,0
00r.p.mで20分間遠心分離し、常法に従い上清液（粗酵
素画分）を得た。この粗画分を部分精製するために、常
法に従って硫安分画を行い、Ｉ：０〜40％、II：40〜70
％、III ：70〜90％、IV：90％の４分画を得た。各分画
に対し、補酵素としてＡ：ＤＴＴ（Dithiothreitol）を
１mM、Ｂ：ＮＡＤＨ（Redused Nicotinamide adenine d
inucleotide）を100μＭ、Ｃ：ＮＡＤＰＨ（Redused Ni
cotinamide adenine dinucleotide phsphate）を100μ
Ｍ、Ｄ：ＦＡＤ（Flavin adenine dinucleotide）及び
ＦＭＮ（Flavine mononucleotide）をそれぞれ20μＭ添
加した。これを約200ＭＵのＰＳＰ粗画分とともに１時
間反応させ、各補酵素の影響を調べた。硫安分画Ｉの結
果を表６に示す。
【００４７】
【表６】
【００４８】表６より、菌体破砕物から得られた酵素が
ＰＳＰを分解するにはＤＴＴが必須であることが分かっ
た。更に、その他の補酵素を加えると分解が促進され
た。次に、各硫安画分におけるゴニオトキシン−２の分
解活性について調べた。各硫安画分にＤＴＴを１mM添加
し、実施例２において部分精製したゴニオトキシン−２
を基質として反応させた。実施例１と同様にして高速ク
ロマトグラフィーにより反応後に残存するゴニオトキシ
ン−２量を定量した。結果を図６に示す。
ＰＳＰを分解するにはＤＴＴが必須であることが分かっ
た。更に、その他の補酵素を加えると分解が促進され
た。次に、各硫安画分におけるゴニオトキシン−２の分
解活性について調べた。各硫安画分にＤＴＴを１mM添加
し、実施例２において部分精製したゴニオトキシン−２
を基質として反応させた。実施例１と同様にして高速ク
ロマトグラフィーにより反応後に残存するゴニオトキシ
ン−２量を定量した。結果を図６に示す。
【００４９】図６から明らかなように、画分IVではゴニ
オトキシン−２はほとんど分解されておらず、酵素活性
が見られない。これに対し、画分Ｉ及び画分IIではゴニ
オトキシン−２の残量が少なく、酵素の主体が画分Ｉ及
び画分IIに分画されていることが分かる。
オトキシン−２はほとんど分解されておらず、酵素活性
が見られない。これに対し、画分Ｉ及び画分IIではゴニ
オトキシン−２の残量が少なく、酵素の主体が画分Ｉ及
び画分IIに分画されていることが分かる。
【００５０】（実施例５） ［ＰＳＰ分解生菌体と無毒プランクトンとの混合給餌に
よるホタテガイ生体のＰＳＰ除去方法］実施例１の方法
で得られたＰＳＰ分解生菌体を、1010個／ml（乾燥重量
約1.7ｇ）の濃度になるように10mMの酢酸緩衝液300ml
（ｐＨ5.5）に懸濁した。一方、カエトセロス属、スケ
レトネマ属及びタラシオシラ属の珪藻類に属するプラン
クトン、並びにユーグレナ属の緑藻類に属するプランク
トンの生菌体を108個／ml（乾燥重量約２ｇ）の濃度に
なるように同緩衝液300mlに懸濁した。
よるホタテガイ生体のＰＳＰ除去方法］実施例１の方法
で得られたＰＳＰ分解生菌体を、1010個／ml（乾燥重量
約1.7ｇ）の濃度になるように10mMの酢酸緩衝液300ml
（ｐＨ5.5）に懸濁した。一方、カエトセロス属、スケ
レトネマ属及びタラシオシラ属の珪藻類に属するプラン
クトン、並びにユーグレナ属の緑藻類に属するプランク
トンの生菌体を108個／ml（乾燥重量約２ｇ）の濃度に
なるように同緩衝液300mlに懸濁した。
【００５１】両液を混合撹拌後、この混合懸濁液ととも
に、毒化したホタテガイ（平均貝長及び平均貝重は同
前）６枚を、海水30リットルを満たした水槽（同前）中
で蓄養した。水温は14℃に維持しながら、菌液浸漬によ
り６時間、その後普通海水により18時間処理した。同様
の処理を３日間続けた。
に、毒化したホタテガイ（平均貝長及び平均貝重は同
前）６枚を、海水30リットルを満たした水槽（同前）中
で蓄養した。水温は14℃に維持しながら、菌液浸漬によ
り６時間、その後普通海水により18時間処理した。同様
の処理を３日間続けた。
【００５２】上記処理を始めて24時間、48時間、72時間
経過後にホタテガイ各２枚を取り出し、各ホタテガイの
中腸腺約10ｇに10mlの0.1Ｎ塩酸を加え、テフロンホモ
ジナイザーにて室温で３分間ホモジナイズした後、沸騰
湯上で熱抽出した。抽出液をワットマンＮｏ．１ろ紙及
びSep-PackＣ18（Waters社製）でろ過後、さらに限外ろ
過（ろ過膜：UT3TGC、ミリポア社）して分析用サンプル
とした。ＰＳＰの定量は実施例１と同様にして行った。
結果を図７に示す。なお、各実施例に示したように、Ｐ
ＳＰを出荷規制値に以下にまで減毒あるいは除去するこ
とが可能であり、かつホタテガイの味と肉質における品
質の劣化もなかった。
経過後にホタテガイ各２枚を取り出し、各ホタテガイの
中腸腺約10ｇに10mlの0.1Ｎ塩酸を加え、テフロンホモ
ジナイザーにて室温で３分間ホモジナイズした後、沸騰
湯上で熱抽出した。抽出液をワットマンＮｏ．１ろ紙及
びSep-PackＣ18（Waters社製）でろ過後、さらに限外ろ
過（ろ過膜：UT3TGC、ミリポア社）して分析用サンプル
とした。ＰＳＰの定量は実施例１と同様にして行った。
結果を図７に示す。なお、各実施例に示したように、Ｐ
ＳＰを出荷規制値に以下にまで減毒あるいは除去するこ
とが可能であり、かつホタテガイの味と肉質における品
質の劣化もなかった。
【００５３】
【発明の効果】本発明によれば、貝の味、肉質、鮮度に
影響を与えたり、貝を死なせることなく、麻痺性貝毒を
除去することができる。
影響を与えたり、貝を死なせることなく、麻痺性貝毒を
除去することができる。
【図１】本発明分離菌株エンテロバクター・クロアカエ
１０２９を示す顕微鏡写真である。
１０２９を示す顕微鏡写真である。
【図２】ＰＳＰ分解菌添加及び無添加における各種ＰＳ
Ｐの量の経時変化を示すグラフである。
Ｐの量の経時変化を示すグラフである。
【図３】残存する各毒性成分を高速液体クロマトグラフ
ィーで定量した結果を示すグラフである。
ィーで定量した結果を示すグラフである。
【図４】残存する各毒性成分を高速液体クロマトグラフ
ィーで定量した結果を示すグラフである。
ィーで定量した結果を示すグラフである。
【図５】ゴニオトキシン−２の分解に伴うＮＨ4 +の生成
量を示すグラフである。
量を示すグラフである。
【図６】各硫安画分におけるゴニオトキシン−２の残量
を示すグラフである。
を示すグラフである。
【図７】無毒プランクトン及びＰＳＰ分解菌とＰＳＰと
の反応における、各反応時間でのＰＳＰ相対残存量を示
すグラフである。
の反応における、各反応時間でのＰＳＰ相対残存量を示
すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (8)
- 【請求項１】 ゴニオトキシン類及び／又はサキシトキ
シン分解能を有するエンテロバクター属に属する微生物
菌体もしくは該微生物菌体含有物、又は該微生物から得
られる酵素もしくは該酵素含有物を貝類に対して与える
ことにより、貝類に含まれるゴニオトキシン類及び／又
はサキシトキシンを分解することを特徴とする麻痺性貝
毒の除去方法。 - 【請求項２】 エンテロバクター属に属する微生物がエ
ンテロバクター・クロアカエである請求項１記載の麻痺
性貝毒の除去方法。 - 【請求項３】 エンテロバクター属に属する微生物がエ
ンテロバクター・クロアカエ １０２９株である請求項
１記載の麻痺性貝毒の除去方法。 - 【請求項４】 ゴニオトキシン類及び／又はサキシトキ
シンを生体蓄積する貝がホタテガイである請求項１記載
の麻痺性貝毒の除去方法。 - 【請求項５】 ゴニオトキシン類及び／又はサキシトキ
シン分解能を有するエンテロバクター属に属する微生物
菌体もしくは該微生物菌体含有物、又は該微生物から得
られる酵素もしくは該酵素含有物を、動物及び／又は植
物プランクトンに混合して貝類に捕食させることによ
り、貝類に含まれるゴニオトキシン類及び／又はサキシ
トキシンを分解することを特徴とする麻痺性貝毒の除去
方法。 - 【請求項６】 蓄養池内にて捕食させることを特徴とす
る請求項５記載の麻痺性貝毒の除去方法。 - 【請求項７】 ゴニオトキシン類及び／又はサキシトキ
シン分解能を有するエンテロバクター・クロアカエ。 - 【請求項８】 ゴニオトキシン類及び／又はサキシトキ
シン分解能を有するエンテロバクター・クロアカエ １
０２９株。
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|---|---|---|---|
| JP30320894A JP3670694B2 (ja) | 1994-11-11 | 1994-11-11 | 麻痺性貝毒の除去方法及びそれに用いる微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08131084A true JPH08131084A (ja) | 1996-05-28 |
| JP3670694B2 JP3670694B2 (ja) | 2005-07-13 |
Family
ID=17918187
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30320894A Expired - Fee Related JP3670694B2 (ja) | 1994-11-11 | 1994-11-11 | 麻痺性貝毒の除去方法及びそれに用いる微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3670694B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009171954A (ja) * | 2008-10-22 | 2009-08-06 | Kitasato Institute | 麻痺性貝毒成分の除去 |
| WO2009096398A1 (ja) * | 2008-01-28 | 2009-08-06 | School Juridical Person Kitasato Institute | 麻痺性貝毒成分の除去 |
| CN104621228A (zh) * | 2015-01-24 | 2015-05-20 | 中国海洋大学 | 一种促进贝类体内麻痹性贝毒排出的方法 |
| CN108977506A (zh) * | 2018-08-08 | 2018-12-11 | 浙江海洋大学 | 一种快速筛选产生膝沟藻毒素微生物菌株的方法及所用的地高辛标记dna探针 |
-
1994
- 1994-11-11 JP JP30320894A patent/JP3670694B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| CN104621228A (zh) * | 2015-01-24 | 2015-05-20 | 中国海洋大学 | 一种促进贝类体内麻痹性贝毒排出的方法 |
| CN108977506A (zh) * | 2018-08-08 | 2018-12-11 | 浙江海洋大学 | 一种快速筛选产生膝沟藻毒素微生物菌株的方法及所用的地高辛标记dna探针 |
| CN108977506B (zh) * | 2018-08-08 | 2022-03-25 | 浙江海洋大学 | 一种快速筛选产生膝沟藻毒素微生物菌株的方法及所用的地高辛标记dna探针 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3670694B2 (ja) | 2005-07-13 |
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