NL1025709C2 - 3- (1-ó3- (1,3-benzothiazool-6-yl)propylcarbamoyl!cycloalkyl)propaanzuur- derivaten als nep-remmers. - Google Patents

Description

3-(1-[3-(1/3-BENZOTHIAZOOL-6-YL)PROPYLCARBAMOYL]CYCLOALKYl·)PROPAANZÜÜRDERIVATEN ALS

NEP -REMMERS

5 De onderhavige uitvinding betreft remmers van neu traal endopeptidase-enzym (NEP), toepassingen daarvan, werkwijzen voor de bereiding daarvan, tussenproducten die bij de bereiding daarvan worden gebruikt en preparaten die dergelijke remmers bevatten. Deze remmers hebben nut op 10 allerlei therapeutische gebieden, waaronder de behandeling van mannelijke en vrouwelijke seksuele dysfunctie, met na-· me vrouwelijke seksuele dysfunctie (female sexual dysfunc-tion, FSD), in het bijzonder wanneer de PSD vrouwelijke seksuele opwindingsstoornis (female sexual arousal disor-15 der, FSAD) is.

NEP-remmers worden beschreven in WO 91/07386, WO 91/10644, WÖ 02/02513, WO 02/079143 en EP 1.258.474.

Het gebruik van NEP-remmers voor het behandelen van FSD wordt beschreven in EP 1.097.719-A1. Het gebruik van 20 NEP-remmers voor het behandelen van mannelijke seksuele dysfunctie (male sexual dysfunction, MSD) wordt beschreven in WO 02/03995.

Dé onderhavige uitvinding voorziet in een klasse van krachtige NEP-remmers, die het voordeel hebben dat deze 25 selectief zijn voor NEP ten opzichte van soluble secreted endopeptidase (SEP). De verbindingen van de onderhavige uitvinding zijn ook selectief voor NEP ten opzichte van ACE. Behalve hun selectiviteit bezitten de verbindingen van de onderhavige uitvinding ook onverwacht goede farma- 1025709

2 I

cokinetische eigenschappen, in het bijzonder een goede I

orale biologische beschikbaarheid en een geschikte wer- I

.kingsduur voor het nuttig effect in νίνο. I

Volgens een eerste aspect voorziet de onderhavige I

5 uitvinding in een verbinding met de algemene formule (I) I

of farmaceutisch aanvaardbare zouten, solvaten of polymor- I

fen daarvan I

in 1 I—I

p’ O Η Γ Τή · I

0 0 0) I

15 waarin: I

Rl H of CH3 is, - I

R2 Ci-C2-alkyl is en I

η 1 of 2 is. I

Een voorkeursaspect van de onderhavige uitvinding I

20 zijn verbindingen met formule (I), waarin η 1 is. I

In een andere voorkeursuitvoeringsvorm is R1 methyl. I

In nog een andere voorkeursuitvoeringsvorm is R2 me- I

thyl. I

Een uitvoeringsvorm van de onderhavige uitvinding die I

25 bijzondere voorkeur verdient, zijn verbindingen met formu- I

le (I), waarin R1 methyl is, R2 methyl is en η 1 is; R1 wa- I

terstof is, R2 ethyl is en η 1 is; Rl methyl is, R2 ethyl I

is en η 1 is; en R1 waterstof is, R2 ethyl is en n 2 is. I

De verbindingen van de onderhavige uitvinding zijn: I

30 (1) (R)-2-Methyl-3-(1-{[3-(2-methyl-l,3-benzothiazool-6- I

yDpropyl] carbamoyl }cy cl opent yl)propaanzuur (voorbeeld 1), I

(2) 3-(1-{[3-(2-ethyl-1,3-benzothiazool-6- I

yl)propyl]carbamoyl}cyclopentyl)propaanzuur (voorbeeld 2), I

(3) (R)-2-Methyl-3-(l-{[3-(2-ethyl-l,3-benzothiazool-6- I

35 yDpropyl]carbamoyl}cyclopentyl)propaanzuur (voorbeeld 4), I

1025709 I

3 (4) 3-(l-{[3-(2-Ethyl-l, 3-benzothiazool-6-yl)propyl]carbamoyl}cyclohexyl)propaanzuur (voorbeeld 3), (5) 3-(l-{ [3-(2-Methyl-l,3-benzothiazool-6- yl) propyl] carbamoyl}cyclohexyl) propaanzuur (voorbeeld 5), 5 (6) 3-(l-{[3-(2-Methyl-1,3-benzothiazool-6- yl)propyl]carbamoyl}cyclopentyl)propaanzuur (voorbeeld 6), (7) (R)-2-Methyl-3-(l-{[3-(2-methyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propyl]carbamoyl}cyclohexyl)propaanzuur en (8) (R)-2-Methyl-3-(l-{[3-(2-ethyl-l,3-benzothiazool-6-10 yl)propyl]carbamoyl}cyclohexyl)propaanzuur.

Voörkeursverbindingen van de onderhavige uitvinding zijn: (1) (R)-2-Methyl-3-(l-{[3-(2-methyl-l,3-benzothiazool-6- yl)propyl]carbamoyl}cyclopentyl)propaanzuur (voorbeeld 1), 15 (2) 3-(l-{[3-(2-Ethyl-l,3-benzothiazool-6- yl)propyl]carbamoyl}cyclopentyl)propaanzuur (voorbeeld 2), (3) (R)-2-Methyl-3-(l-{[3-(2-ethyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propyl]carbamoyl}cyclopentyl)propaanzuur (voorbeeld 4), (4) 3-(l-{[3-(2-Ethyl-l,3-benzothiazool-6- 20 yl)propyl]carbamoyl}cyclohexyl)propaanzuur (voorbeeld 3), (5) 3-(1-{[3-(2-Methyl-l,3-benzothiazool-6- yl)propyl]carbamoyl}cyclohexyl)propaanzuur (voorbeeld 5) en (6) 3-(1-{[3-(2-Methyl-l,3^benzothiazool-6- 25 yl)propyl]carbamoyl}cyclopentyl)propaanzuur (voorbeeld 6).

De verbindingen die de meeste voorkeur verdienen, zijn: (1) (R)-2-Methyl-3-(l-{[3-(2-.methyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propyl]carbamoyl}cyclopentyl)propaanzuur (Voorbeeld 1), 30 (2) 3-(l-{l3-(2-Ethyl-l,3-benzothiazool-6- yl)propyl]carbamoyl}cyclopentyl)propaanzuur (Voorbeeld 2), (3) (R)-2-Methyl-3-(l-{[3-(2-ethyl-lf3-benzothiazool-6-yl)propyl]carbamoyl}cyclopentyl)propaanzuur (Voorbeeld 4) en 1025709

I 4 I

I (4) 3-(1-((3-(2-Ethyl-l,3-benzothiazool-6- I

I yl)'propyl]carbamoyl}cyclohexyl)propaanzuur (voorbeeld 3). I

I Farmaceutisch aanvaardbare zouten van de verbindingen I

I met formule (I) omvatten de zuuradditie- en basezouten I

I 5 (waaronder dizouten) daarvan. I

Geschikte zuuradditiezouten worden gevormd met zuren I

I die niet-toxische zouten vormen. Voorbeelden omvatten de I

I acetaat-, aspartaat-, benzoaat-, besylaat-, bicarbonaat- I

I /carbonaat-, bisulfaat-, camsylaat-, citraat-, edisylaat-, I

I 10 esylaat-, fumaraat-, gluceptaat-, gluconaat-, glucuronaat- I

I , hibenzaat-, hydrochloride-/chloride-, hydrobromide- I

I /bromide-, hydrojodide-/jodide-, waterstoffosfaat-, I

I isethionaat-, D- en L-lactaat-, malaat-, maleaat-, malo- I

I naat-, mesylaat-, methylsulfaat-, 2-napsylaat-, nicoti- I

I 15 naat-, nitraat-, orotaat-, pamoaat-, fosfaat-, saccharaat- I

I , stearaat-, succinaat-, sulfaat-, D- en L-tartraat- en I

I tosylaatzouten. I

I Geschikte basezouten worden gevormd uit basen die I

I niet-toxische zouten vormen. Voorbeelden omvatten de alu- I

20 minium-, ammonium-, arginine-, benzathine-, calcium-, cho- I

I line-, diethylamine-, diolamine-, glycine-, lysine-, mag- I

nesium-, meglumine-, olamine-, kalium-, natrium-, trome- I

I thamine- en zinkzouten. I

I Zie voor een overzicht van geschikte zouten: stahl en I

I 25 Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Se- I

I lection and Use, Wiley-VCH, Weinheim, Duitsland (2002). I

I Een farmaceutisch aanvaardbaar zout van een verbin- I

I ding met formule (I) kan gemakkelijk worden bereid door I

I tezamen mengen van oplossingen van de verbinding met for- I

I 30 mule (I) en het gewenste zuur of de gewenste base, naar I

I gelang van hetgeen van toepassing is. Het zout kan uit I

I oplossing neerslaan en worden verzameld door filtratie, of I

I worden verkregen door afdamping van het oplosmiddel. I

I Farmaceutisch aanvaardbare solvaten in overeenstem- I

I 35 ming met de onderhavige uitvinding omvatten hydraten en I

I 1025709 5 solvaten waarin het oplosmiddel voor de kristallisatie isotopisch gesubstitueerd kan zijn, bijv. DaO, aceton-d«, DMSO-d6.

Eveneens binnen de strekking van de onderhavige uit-5 vinding vallen clathraten, geneesmiddel-acceptor- inclusiecomplexen waarin, in tegenstelling tot de voornoemde solvaten, het geneesmiddel en de acceptor aanwezig zijn in niet-stoechiometrische hoeveelheden. Zie voor een overzicht van dergelijke complexen: J. Pharm. Sci., 64 10 (8), 1269-1288, door Haleblian (augustus 1975).

Alle verwijzingen hierin naar verbinding en met formule (I) omvatten verwijzingen naar zouten daarvan en naar solvaten en clathraten van verbindingen met formule (I) en zouten daarvan.

15 De onderhavige uitvinding omvat alle polymorfen van verbindingen met formule (I) als hiervoor gedefinieerd.

Eveneens binnen de strekking van de onderhavige uitvinding zijn de zogenaamde "prodrugs" van de verbindingen met formule (I). Bepaalde derivaten van verbindingen met 20 formule (I) die zelf weinig of geen farmacologische activiteit hebben, kunnen, wanneer deze na toediening in of aan het lichaam worden gemetaboliseerd, dus leiden tot verbindingen met formule (I) met de gewenste activiteit. Dergelijke derivaten worden "prodrugs" genoemd.

25 Prodrugs in overeenstemming met de onderhavige uit vinding kunnen bijvoorbeeld worden geproduceerd door vervangen van geschikte functies die in de verbindingen met formule (I) aanwezig zijn door bepaalde resten die voor deskundigen bekend zijn als "pro-resten" en bijvoorbeeld 30 worden beschreven in "Design of Prodrugs" door H. Bund-gaard (Elsevier, 1985).

Ten slotte kunnen bepaalde verbindingen met formule (I) zelf als prodrugs van andere verbindingen met formule (I) fungeren.

1025709

6 I

Verbindingen met formule (I) die één of meer asymme- I

trische koolstofatomen bevatten, kunnen als twee of meer I

optische isomeren bestaan. Wanneer een verbinding met I

formule (I) een alkenyl- of alkenyleengroep bevat, zijn I

5 geometrische cis-/trans- (of Z/E) isomeren mogelijk, en I

waar de verbinding bijvoorbeeld een keto- of oximgroep be- I

vat, kan tautomere isomerie ("tautomerie") optreden. Het I

zal duidelijk zijn dat een enkele verbinding meer dan één I

type isomerie kan vertonen. I

10 Vervat in de strekking van de onderhavige uitvinding I

zijn alle optische isomeren, geometrische isomeren en tau- I

tomere vormen van verbindingen met formule (I), waaronder I

verbindingen die meer dan één type isomerie vertonen, en I

mengsels van één of meer daarvan. I

15 Cis-/ trans - i someren kunnen worden gescheiden door I

middel van gebruikelijke technieken die voor deskundigen I

bekend zijn, bijvoorbeeld gefractioneerde kristallisatie I

en chromatografie. I

Gebruikelijke technieken voor de bereiding/isolering I

20 van afzonderlijke stereo-isomeren omvatten de omzetting I

van een geschikte optisch zuivere precursor, scheiding van I

het racémaat (of het racemaat van een zout of derivaat) I

met behulp van, bijvoorbeeld, chirale HPLC, of gefractio- I

neerde kristallisatie van diastereo-isomere zouten die I

25 worden gevormd door reactie van het racemaat met een ge- I

schikt optisch actief zuur of een geschikte optisch actie- I

ve base, bijvoorbeeld wijnsteenzuur. I

De onderhavige uitvinding omvat ook alle farmaceu- I

tisch aanvaardbare isotopische variaties van een verbin- I

30 ding met formule (I). Een isotopische variatie wordt ge- I

definieerd als één waarin ten minste één atoom is vervan- I

gen door een atoom met het zelfde atoomgetal, maar met een I

atoommassa die verschilt van de atoommassa die doorgaans I

in de natuur wordt aangetroffen. I

1025709 I

7

Voorbeelden van isotopen die geschikt zijn voor opneming in de verbindingen van de onderhavige uitvinding omvatten isotopen van waterstof zoals aH en 3H, koolstof zoals 13C en 14C, stikstof zoals 1SN, zuurstof zoals 170 en 180, 5 fosfor zoals 32P, zwavel zoals 35S, fluor zoals ieF en chloor zoals 36C1.

Substitutie van de verbindingen van de onderhavige uitvinding met isotopen zoals deuterium, dat wil zeggen 2H, kan bepaalde therapeutische voordelen opleveren die voort-10 vloeien uit een grotere metabolische stabiliteit, bijvoorbeeld een toegenomen in vivo halfwaardetijd of lagere do-seringseisen, en kunnen dus in bepaalde omstandigheden de voorkeur verdienen.

Bepaalde isotopische variaties van de verbindingen 15 met formule (I), bijvoorbeeld die waarin een radioactieve isotoop is opgenomen, zijn nuttig bij verdelingsstudies van geneesmiddel en/of substraatweefsel. De radioactieve isotopen tritium, dat wil zeggen 3H, en koolstof-14, dat wil zeggen 14C, zijn met name nuttig voor dit doel met het 20 oog op het gemak van hun opneming en de gemakkelijke wijze van detectie.

Isotopische variaties van de verbindingen met formule (I) kunnen in het algemeen worden bereid door middel van gebruikelijke technieken die voor deskundigen bekend zijn, 25 of door middel van werkwijzen die analoog zijn aan die welke worden beschreven in de begeleidende voorbeelden en bereidingen mét behulp van de juiste isotopische variaties van geschikte reagentia.

De verbindingen met formule (I) kunnen worden ge-30 vriesdroogd, gesproeidroogd of gedroogd onder indamping, hetgeen een vaste laag, een poeder of een film van kristallijn of amorf materiaal bezorgt. Voor dit doel kan dro-. gen door middel van magnetron- of radiofrequentiegolven worden gebruikt. .

1025709

I 8 I

I De verbindingen met formule (I) kunnen door middel I

I van de volgende werkwijze worden bereid als wordt beschre- I

I ven in het onderstaande schema (I): I

I e1 ƒ-(PH2)n " I

I ! "V-H-"

I oo 0 0 du) / I

I w . I

I 10 I

I o1» r(f2,n I

I ! U h in V-rz I

I o O (IV) I

I 15 (b) . I

I R1 Γ(ξΗ*)η I

I § Lx h \ r^—r2 i

I 0 0 (η I

I 20 w I

I De verbindingen met formule (IV) kunnen worden bereid I

I door in reactie brengen van verbindingen met formule (II) I

I en (III) onder de condities van stap (a). .van de werkwijze: I

I vorming van amidebinding - dergelijke reacties kunnen on- I

I 25 der allerlei condities worden uitgevoerd die voor deskun- I

I digen bekend zijn. I

I In een typisch geval kan het carbonzuur worden geac- I

I tiveerd door behandeling met een middel zoals 1,1'- I

I carbonyldiimidazool (GDI), fluor-Ν,Ν,Ν',Ν'-tetramethyl- I

I 30 formamidiniumhexafluorfosfaat (TFFH), of een combinatie I

I van reagentia zoals azabenzotriazool-l-yloxytris(pyrro- I

I lidino)fosfoniumhexafluorfosfaat (PyAOP) èn l-hydroxy-7- I

I azabenzotriazool (HOAt). Als alternatief kan de reactie I

I worden uitgevoerd door toevoeging van een koppelingsmiddel I

I 35 voor peptiden zoals O-(7-azabenzotriazool-l-yl)-Ν,Ν,Ν',N'- I

,1025709 I

9 uroniumhexafluorfosfaat (HATU) of O-benzotriazool-l-yl-N,N,N' ,N' -uroniumhexafluorfosfaat (HBTU) of N,N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), 1,3- diisopropylcarbodiimide (DIC) aan een mengsel van het zuur 5 en het atnine. De reactie wordt uitgevoerd en een geschikt oplosmiddel zoals CH2C12, pyridine, N,N-dimethylformamide (DMF), Ν,Ν-dimethylaceetamide (DMA) of l-methyl-2-pyrrolidinon tussen 0°C en het kookpunt van het oplosmiddel .

10 Bij voorkeur wordt de omzetting gerealiseerd met be hulp van CDI, triethylamine en isopropylacetaat als oplosmiddel .

Het product van stap (a) van de werkwijze wordt vervolgens behandeld onder de condities van stap (b) van de 15 werkwijze: verwijdering van de beschermende groep BG. Geschikte groepen worden beschreven in "Protective Groups in Organic Synthesis" door T.W. Greene en P.G.M. Wuts, John Wiley and Sons, Ine., 1991.

De condities die nodig zijn voor verwijdering van de 20 beschermende groep zijn vaak specifiek voor die beschermende groep; condities voor hun verwijdering kunnen worden aangetroffen in referenties zoals Greene, T.W., Wuts, P.G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley In-terscience, en Kocienski, P.J., Protecting Groups, Thieme.

O

25 Bij voorkeur is BG een tert-butylgroep en bestaat de ontscherming uit katalyse door middel van zuur met een geschikt oplosmiddel bij kamertemperatuur. De voorkeurs-condities zijn trifluorazijnzuur in dichloormethaan.

R, r-ipH*)n 30 i t / PG-0Y>X>O0H + o o . (II) (b) .35 1 0 25 7 0

10 I

Ρ'Γ(\Η2)" I

? L) η |Γ V-r2 I I

χ·^^-ε ! I

O o (VI) I

(X) I (a) ' I

1 r^?Hz)n I

? L) h fTv*2 I

10 PQ-OyN^YNv^V^s I

o o (IV) I

In een alternatieve werkwijze kunnen verbindingen met I

formule (IV) worden bereid uit verbindingen met formule

(X) en (VI) door stap (a) van de werkwijze die een koppe- I

15 ling van aryl - al lyl omvat. Geschikte condities zijn voor I

de deskundigen bekend. De verbindingen met formule (X)

kunnen worden bereid uit verbindingen met formule (II) en I

allylamine door stap (b) van de werkwijze die vorming van

een amidebinding omvat. Dergelijke reacties kunnen onder I

20 allerlei condities worden uitgevoerd die voor deskundigen I

bekend zijn.

De verbindingen met formule (II) en (III) kunnen wor- I

den bereid volgens werkwijzen die worden beschreven in WO I

02/079143. I

25 Bovendien kunnen verbindingen met formule (III)' wor- I

den bereid als hierna wordt beschreven: I

?e I

(V) I

(VI)

30 I

(C) I

35 I

1025709 I

11 PG ,^'νΙ'Ι PG s (VII) (t)

5 t^r^K

λ ιΐΓ y—r2 (fli)

De verbindingen met formule (VII) kunnen worden bereid uit verbindingen met formule (V) en (VI) onder de 10 condities van stap (c) van de werkwijze, een koppeling van aryl-allyl. Geschikte condities zijn voor de deskundigen bekend. Met name geschikte condities zijn die van de kop-pelingsreactie van Suzuki-Miyaura [Angew. Chem. Int. Ed., 2001, 40(24), 4544-4568], met een gehydroboreerd tussen- 15 product, dat wordt bereid uit een op geschikte wijze beschermd allylaminederivaat (bijv. di(tert-butyl)allyl-imidodicarbonaat; Bio-organic & Medicina! Chemistry Letters, 1999, 7, 1625-1636), en een boraanderivaat, zoals 9-BBN.

2 0 De vèrbindingen met formule (III) kunnen worden be reid uit verbindingen met formule (VII) onder de condities van stap (b) van de werkwijze: verwijdering van de beschermende groep BG, als hierin wordt beschreven.

+ j^YA—* . (VI) (b) 30 w 35 .

1025709

12 I

(VIII) I

(a) I

%—r2 I

(lil) I

10 Als alternatief kan amine (III) worden bereid uit I

verbindingen met formule (VIII) door stap (a) van de werk- I

wijze die reductie van meervoudige koolstof-koolstof- en I

koolstof-stikstof-bindingen omvat. Geschikte condities I

zijn voor de deskundigen bekend. Met name geschikte con- I

15 dities omvatten behandeling met Boc20, NiCl2 en NaBKi, ge- I

volgd door ontscherming van de ontstane tertiaire butyl- I

groep als hierboven wordt beschreven. De verbindingen met I

formule (VIII) kunnen worden bereid uit acrylonitril en I

verbindingen met formule (VI) door stap (b) van de werk- I

20 wijze die koppeling van aryl-allyl omvat, waarin X een ha- I

logeen, bij voorkeur jood, is. Geschikte condities zijn I

voor de deskundigen bekend. Met name geschikte condities I

omvatten behandeling met Pd(OAc)2< P(o-tolyl)3 en NaOAc in I

DMF. /v. Kl I

,5 I

25 yr. I /_‘R2 I

o I

(IX) I

30 I (a) I

35

(VIII) I

1 025 7G 9 I

13

Als alternatief kunnen de verbindingen met formule (VIII) worden bereid uit cyanóazijnzuur en verbindingen 5 met formule (IX) door stap (a) van de werkwijze: condensatie. Geschikte condities zijn voor de deskundigen bekend. Geschikte condities worden beschreven in "Advanced Organic Chemistry" door Jerry March, 4de editie, Wiley-Interscience, blz. 945. De verbindingen met formule (IX) 10 zijn bekend in dé literatuur (bijv. Zhurnal Obshchei Khi-mii, (1964), 34(11), 3801-6).

Alle bovenstaande reacties en de bereidingen van nieuwe uitgangsmaterialen die in de voorgaande werkwijzen worden gebruikt, zijn gebruikelijke. Geschikte reagentia 15 en reactiecondities voor hun uitvoering of bereiding, alsmede procedures voor het isoleren van de gewenste verbindingen zijn voor deskundigen bekend, waarbij wordt verwezen naar literatuurprecedenten en de voorbeelden en bereidingen hierna.

20 De verbindingen van de onderhavige uitvinding vormen een klasse van NEP-remmers, die selectief zijn voor NEP ten opzichte van SEP.

In het algemeen is het voor een geneesmiddel van belang om zo selectief als mogelijk te zijn voor het gewens-25 te doelenzym; bijkomende activiteiten geveii aanleiding tot eventuele bijwerkingen. SEP werd relatief kortgeleden geïdentificeerd en haar exacte fysiologische rol dient nog in volledige zin te worden vastgesteld. Ongeacht het feit welke rol SEP al of niet kan spelen is het echter een so-30 lïde stelregel uit de geneeskundige chemie om ervoor te zorgen dat een geneesmiddel selectiviteit bezit over nauw-verwante mechanistische doelen van een onbekende fysiologische functie.

Zonder gebonden te zijn aan enige theorie wordt het 35 duidelijk dat NEP en SEP in staat zijn tot het hydrolyse- 1025709

14 I

ren van vele van dezelfde biologisch belangrijke peptiden I

zoals enkefaline, endotheline (ET), big-endotheline (Big I

ET), bradykinine, substantie P, angiotensine 1, atriaal I

natriuretisch peptide (ANP) en gonadotropic releasing hor- I

5 mone, (GnRH). - I

Indien een patiënt wordt behandeld met een geneesmid- I

del dat NEP en SEP remt, kan de hydrolyse van vele van de- I

ze peptiden (waarvan de meeste niet betrokken zijn bij de I

verbetering van de seksuele functie die gepaard gaat met I

10 de remming van NEP) worden verminderd en zullen de niveaus I

van deze peptiden derhalve stijgen. Een aantal bijwerkin-

gen in verband met een stijging van de gehalten van deze I

peptiden kan worden aangenomen: de bloeddruk kan lager I

worden wanneer de ANP-gehalten stijgen; een stijging van I

15 de enkefalineniveaus kan leiden tot veranderingen in de I

pijnwaarneming; endotheline-1 is een krachtige vasocon- I

strictor die de mate van omzetting van Big ET in ET ver- I

mindert, of de hydrolyse van ET-1 kan tot veranderingen I

van de bloeddruk leiden. I

20 Indien de patiënt dus een voor NEP selectieve remmer I

wordt gegeven zullen de stijgingen in de gehalten van deze I

substraatpeptiden minder zijn aangezien het actieve SEP- I

enzym nog steeds aanwezig zal zijn. Alle bijwerkingen in I

verband met veranderingen in de gehalten van deze peptiden I

25 zullen dus ook minder zijn. I

Bovendien kan het mRNA voor SEP in uiteenlopende ge- I

halten in andere weefsels worden aangetroffen, waaronder I

de testes, het hart, de hersenen, de nieren, de speeksel- I

klieren, de schildklieren, de placenta, de dunne darm en I

30 het ovarium (eigen gegevens en van Bonvouloir et al.). I

Bij muizen is het RNA voor SEP ook aangetoond in de milt I

en de bijnieren. Een NEP-remmer die geen SEP remt zal I

derhalve waarschijnlijk een grotere kans op een schoner I

fysiologisch profiel bieden. I

1025709 _ ___I

15

Heel verrassend is door het identificeren van een klasse van NEP-retnmers die selectief zijn ten opzichte van •SEP ontdekt dat deze verbindingen gunstige farmaco-kinetische eigenschappen voor orale toediening hebben.

5 Een oraal toegediend geneesmiddel dient een goede bi ologische beschikbaarheid - dat is het vermogen tot het gemakkelijk passeren van het maagdarm - (MD) kanaal - en een zodanige metabolische omzettingssnelheid te hebben dat dit niet aan een uitgebreid metabolisme wordt onderworpen 10 als dit van het MD-kanaal in de systemische circulatie komt. Moleculen die snel worden gemetaboliseerd zullen een geringere biologische beschikbaarheid hebben aangezien meer verbinding door het metabolisme zal worden verwijderd als deze in de systemische circulatie komt. Zodra een ge-15 neesmiddel zich in de systemische circulatie bevindt is de metabolische omzettingssnelheid eveneens van belang voor het bepalen van de verblijfduur van het geneesmiddel in het lichaam - een snel metabolisme van een geneesmiddel zal tot een korte werkingsduur ervan leiden.

20 Het is dus duidelijk dat het voor geneesmiddelmolecu- len van belang is om eigenschappen te bezitten die het mogelijk maken het MD-kanaal gemakkelijk te passeren en in het lichaam toch slechts langzaam te worden gemetaboliseerd.

25 De CACO-2-assay is een algemeen aanvaard model voor het voorspellen van het vermogen van een bepaald molecuul om het MD-kanaal te passeren. De moleculen van de onderhavige uitvinding doorlopen het CACO-2-systeem goed.

De hoofdmoot van het metabolisme van geneesmiddelmo-30 leculen vindt in het algemeen plaats in de lever. Derhalve is het gebruik van menselijke levermicrosomen (human liver microsomes, HLM) een algemeen aanvaarde werkwijze voor het meten van de gevoeligheid van een bepaald mole- . cuul voor metabolisme in de lever. De verbindingen van de 35 onderhavige uitvinding zijn stabiel voor HLM.

1025709

16 I

Van de verbindingen die een goede passage van het I

CACO-2-systeem kennen en stabiel zijn voor HLM wordt voor- I

speld dat deze een goede orale biologische beschikbaarheid I

(goede absorptie in het MD-kanaal en minimale extractie I

5 van de verbinding als deze de lever passeert) en een lange I

verblijfduur in het lichaam hebben - voldoende om het ge- I

neesmiddel doeltreffend te doen zijn. I

Bovendien zijn de verbindingen van de onderhavige I

uitvinding in de vrije zuurvorm kristallijn, zodat men I

10 geen zoutvorming behoeft toe te passen en deze dus bijzon- I

der gemakkelijk te hanteren zijn. I

De verbindingen van de onderhavige uitvinding zijn I

remmers van het van zink afhankelijke, neutraal endopepti- I

dase EC.3.4.24.11., en men heeft het vermoeden dat de ver- I

15 bindingen van de onderhavige uitvinding de hierna opgesom- I

de ziektetoestanden zullen kunnen behandelen. Dit enzym I

is betrokken bij de afbraak van verscheidene biologisch I

actieve oligopeptiden, waarbij peptidebindingen aan de I

aminozijde van hydrofobe aminozuurresten worden gesplitst. I

20 De peptiden die worden gemetaboliseerd omvatten atriaal I

natriuretisch peptide (ANP), bombesine, bradykinine, aan I

het calcitonine-gen gerelateerd peptide, endothelinen, en- I

kefalinen, neurotensine, substantie P en vasoactieve pep- I

tiden uit de darmen. Sommige van deze peptiden hebben I

25 krachtige vaatverwijdende en neurohormoonfuncties, diure- I

tische en natriurethische activiteit of grijpen in op ge- I

dragseffecten. I

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen I

door het remmen van neutraal endopeptidase EC.3.4.24.11. I

30 dus de biologische effecten van biologisch actieve pepti- I

den potentiêren. De verbindingen hebben met name bruik- I

baarheid bij de behandeling van een aantal stoornissen, I

waaronder hypertensie, pulmonale hypertensie, perifere I

vasculaire ziekte, hartinsufficiëntie, angina, nierinsuf- I

35 ficiëntie, acute nierinsufficiëntie, cyclisch oedeem, I

1025709 I

17 ziekte van Menière, hyperaldosteronisme (primair en secundair) en hypercalciurie. De uitdrukking hypertensie omvat alle ziekten die worden gekenmerkt door supranormale bloeddruk, zoals essentiële hypertensie, pulmonale hyper-5 tensie, secundaire hypertensie, geïsoleerde systolische hypertensie, hypertensie die verband houdt met diabetes, hypertensie die verband houdt met atherosclerose, en reno-vasculaire hypertensie, en strekt zich verder uit tot aandoeningen waarbij een verhoogde bloeddruk een bekende ri-10 sicofactor vormt. Dienovereenkomstig omvat de uitdrukking "behandeling van hypertensie" de behandeling of preventie van complicaties die voortvloeien- uit hypertensie, en andere daarmee verband houdende comorbiditeiten, waaronder congestieve hartinsufficiëntie, angina, beroerte, glau-15 coom, verminderde nierfunctie, waaronder nierinsufficiëntie, obesitas en metabolische ziekten (waaronder metabolisch syndroom). Metabolische ziekten omvatten met name diabetes en verminderde glucosetolerantie, met inbegrip van de complicaties daarvan, zoals diabetische retinopa-20 thie en diabetische neuropathie.

Behalve hun vermogen tot het potentiêren van de effecten van ANF hebben de verbindingen nut bij de behandeling van glaucoom. Als een andere uitkomst van hun vermogen tot hét remmen van neutraal endopeptidase 25 EC.3.4.24.11. kunnen de verbindingen van de onderhavige uitvinding activiteit hebben op andere therapeutische ge- . bieden, waaronder bijvoorbeeld de behandeling van menstruele stoornissen, vroegtijdige weeën, pre-eclampsie, endo-metriöse en voortplantingsstoornissen (in het bijzonder 30 mannelijke en vrouwelijke infertiliteit, polycystisch ova-riumsyndroom, mislukte implantatie). De verbindingen van de onderhavige uitvinding zouden ook astma, ontsteking, leukemie, pijn, pijn door kanker, depressie, druggebruik, cirrose, epilepsie, affectieve stoornissen, dementie en 35 geriatische verwardheid, obesitas en gastro-intestinale 1025709

18 I

stoornissen (in het bijzonder diarree en prikkelbare-darm- I

syndroom), wondgenezing (in het bijzonder diabetische en I

veneuze ulcera en doorligwonden), septische shock, de mo- I

dulering van de maagzuurafscheiding, de behandeling van I

5 hyperreninisme, cystische fibrose, restenose, diabetische I

complicaties en atherosclerose kunnen behandelen. I

In een voorkeursuitvoeringsvorm zijn de verbindingen I

van de onderhavige uitvinding nuttig bij de behandeling I

van mannelijke en vrouwelijke seksuele dysfunctie. De

10 verbindingen van de onderhavige uitvinding zijn met name I

gunstig voor de behandeling van PSD (in het bijzonder I

FSAD) en mannelijke seksuele dysfunctie (in het bijzonder I

mannelijke erectiele dysfunctie (MED). I

In overeenstemming met de onderhavige uitvinding kan I

15 FSD worden gedefinieerd als problemen bij of onvermogen I

van een vrouw om bevrediging in seksuele expressie te vin- I

den. FSD is een gemeenschappelijke uitdrukking voor ver- I

scheidene uiteenlopende vrouwelijke seksuele stoornissen I

(Leiblum, S.R. (1998). Definition and classification of I

20 female sexual disorders, Int. J. Impotence Res., 10, S104- I

S106; Berman, J.R., Bernvan, L. & Goldstein, I. (1999). I

Female sexual dysfunction: Incidence, pathophysiology, I

evaluations and treatment options. Urology, 54, 385-391). I

De vrouw kan lijden aan het ontbreken van seksueel verlan- I

25 gen, problemen met opwinding of orgasme, pijn bij ge- I

slachtsgemeenschap, of een combinatie van deze problemen. I

Verscheidene typen van de ziekte, medicaties> letsels of I

psychologische problemen kunnen FSD veroorzaken. Behande- I

lingen van de ontwikkeling ervan vormen het doel om speci- I

30 fieke subtypen van FSD te behandelen, voornamelijk stoor- nissen op het gebied van verlangen en opwinding.

De categorieën FSD kunnen het best worden gedefini- I

eerd door deze in tegenstelling tot de fasen van een nor- I

male vrouwelijke seksuele respons te nemen: verlangen, op- I

35 winding en orgasme (Leiblum, S.R. (1998) . Definition and I

1025709 I

19 classification of female sexual disorders. Int. J. Impo-tence Res., 10, S104-S106). Verlangen of libido is de . aanzet tót seksuele expressie. De uitingen omvatten vaak seksuele gedachten wanneer men zich in het gezelschap van 5 een geïnteresseerde partner bevindt, of wanneer men wordt blootgesteld aan andere erotische prikkels. Opwinding is de vasculaire respons op seksuele prikkeling, waarvan een belangrijk onderdeel een genitale respons is, en deze omvat toegenomen vochtigheid van de vagina, verlenging van 10 de vagina en toegenomen genitale sensatie/gevoeligheid.

Orgasme is de ontlading van seksuele spanning die tijdens de opwinding is opgebouwd.

Derhalve treedt FSD op wanneer een vrouw een ontoereikende of onbevredigende respons in één van deze fasen 15 heeft, doorgaans verlangen, opwinding of orgasme. FSD-categorieën omvatten hypoactieve seksuele luststoornis, seksuele opwindingsstoomis, orgasmische stoornissen en seksuele pijnstoornissen. Hoewel de verbindingen van de onderhavige uitvinding de genitale respons op seksuele 20 prikkeling (zoals bij vrouwelijke seksuele opwindings-stoornis) zullen verbeteren, kunnen deze hierdoor ook daarbij optredende pijn, problemen en ongemak die met de geslachtsgemeenschap gepaard gaan, wegnemen, en aldus andere vrouwelijke seksuele stoornissen behandelen; 25 Hypoactieve seksuele luststoornis komt voor indien een vrouw weinig of geen verlangen naar seks heeft, of geen of weinig seksuele gedachten of fantasieën heeft.

Dit type FSD kan worden veroorzaakt door lage testosterongehalten, vanwege de natuurlijke menopauze of menopauze j 30 die wordt veroorzaakt door een chirurgische ingreep. Andere oorzaken omvatten ziekte, medicaties, vermoeidheid, depressie en angst. .

Vrouwelijke seksuele opwindingsstoomis (FSAD) wordt gekenmerkt door ontoereikende genitale respons op seksuele 35 prikkeling. De genitaliën ondergaan niet de respons die 1025709

I 20 I

I een normale seksuele opwinding kenmerkt. De wanden van de I

I vagina worden nauwelijks vochtig, zodat geslachtsgemeen- I

I schap pijnlijk is. Orgasmen zouden kunnen worden bemoei- I

I lijkt, De opwindingsstoomis kan worden veroorzaakt door I

I 5 een verlaagd oestrogeengehalte bij de menopauze of na de I

I geboorte van kinderen of tijdens het zogen, alsmede door I

I ziekten, met vasculaire componenten zoals diabetes en I

I atherosclerose. Andere oorzaken vloeien voort uit de be- I

I handeling met diuretica, antihistaminica, antidepressiva I

I 10 (bijv. SSRI's) of antihypertensieve middelen. I

I Seksuele pijnstoornissen (bijv. dyspareunie en vagi- I

I nisme) worden gekenmerkt door pijn die het resultaat is I

I van penetratie en kan worden veroorzaakt door medicaties I

I die het vochtig worden verminderen, endometriose, ontste- I

I 15 kingsziekte van het bekken, ontstekingsziekte van de dar- I

I men en problemen van de urinewegen. I

I De mate van voorkomen van FSD is moeilijk te schatten I

I omdat de uitdrukking verscheidene typen problemen be- I

I strijkt, waarvan sommige moeilijk te meten zijn, en omdat I

I 20 de belangstelling voor het behandelen van FSD een relatief I

I recente is. De seksuele problemen van vele vrouwen hangen I

I vaak rechtstreeks samen met het vrouwelijke verouderings- I

I proces of met chronische ziekten zoals diabetes en hyper- I

I tensie. I

I 25 Omdat FSD uit verscheidene subtypen bestaat die symp- I

I tomen in afzonderlijke fasen van de seksuele responscyclus I

I laten zien, is er geen enkelvoudige therapie. De huidige I

I behandeling van FSD richt zich voornamelijk op psychologi- I

I sche of relationele zaken. De behandeling van FSD ontwik- I

I 30 kelt zich geleidelijk terwijl meer klinische en weten- I

I schappelijke basisstudies de aandacht op het onderzoek van I

I dit medische probleem richten. Vrouwelijke seksuele I

I klachten hebben niet alle een psychologische pathofysiolo- I

I gie, met name bij die personen die als onderdeel van de I

I 35 algemene vrouwelijke seksuele klacht vasculogene dysfunc- I

I 1025709_^_ _I

21 tie (bijv. FSAD) vertonen. Er zijn tegenwoordig geen toegelaten geneesmiddelen voor de behandeling van FSD. Een empirische therapie met geneesmiddelen omvat de toediening van oestrogenen (topicaal of als hormoonvervangingsthera-5 pie), androgenen of geneesmiddelen die de stemming veranderen, zoals buspiron of trazodon. Deze mogelijkheden voor behandeling zijn vaak onbevredigend vanwege het geringe effect ervan, of onaanvaardbare bijwerkingen.

Aangezien de belangstelling voor het farmacologisch 10 behandelen van FSD van relatief recente datum is, bestaat de therapie uit het volgende: psychologisch advies, in de detailhandel verkrijgbare seksuele glijmiddelen, en kandidaten voor onderzoek, waaronder geneesmiddelen die zijn toegelaten voor andere aandoeningen. Deze medicaties be-15 staan uit hormonale middelen, hetzij testosteron, hetzij combinaties van oestrogeen en testosteron. Van recenter datum zijn vasculaire geneesmiddelen, die effectief zijn gebleken bij mannelijke erectiele dysfunctie. Men heeft echter van geen van deze middelen aangetoond dat deze bij-20 zonder effectief is bij het behandelen van FSD.

The Diagnostic and Statistical Manual (DSM) IV van de American Psychiatrie Association definieert vrouwelijke seksuele opwindingsstoornis (FSAD) als: "een aanhoudend of steeds terugkerend onvermogen tot het verkrijgen of tot 25 het einde van de seksuele activiteit handhaven van een toereikende respons van vochtig worden-opzwelling bij seksuele opwinding. De stoornis veroorzaakt aanzienlijk ongemak of problemen tussen personen."

De opwindingsrespons bestaat uit vasocongestie in het 30 bekken, vochtig worden van de vagina en uitzetting en opzwelling van de uitwendige genitaliën. De stoornis veroorzaakt aanzienlijk ongemak en/of problemen tussen personen.

FSAD is een zeer veel voorkomende seksuele stoornis t 35 die pre-, peri- en postmenópauzale (+HRT) vrouwen treft.

1025709

I 22 I

I Deze gaat gepaard met concomiterende stoornissen, zoals I

I depressie, cardiovasculaire ziekten, diabetes en UG- I

I stoornissen. I

I De voornaamste gevolgen van FSAD zijn het ontbreken I

I 5 van een respons/opzwelling, te weinig vochtig worden en I

I het ontbreken van een aangename genitale sensatie. De se- I

I cundaire gevolgen van FSAD zijn verminderde seksuele lust, I

I pijn tijdens de geslachtsgemeenschap en problemen bij het I

I bereiken van een orgasme. I

I 10 Onlangs is verondersteld dat er een vasculaire grond I

I bestaat voor ten minste een deel van de patiënten met I

I symptomen van FSAD (Goldstein et al., Int. J. Impot. Res., I

I 10, S84-S90, 1998), waarbij gegevens van dieren dit in- I

I zicht ondersteunen (Park et al., Int. J. Impot. Res., 9, I

I 15 27-37, 1997). I

I Geneesmiddelen die kandidaat zijn voor het behandelen I

I van FSAD, waarvan de efficiëntie wordt onderzocht, zijn I

I therapieën voor primaire erectiele dysfunctie die de cir- I

I culatie in de mannelijke genitaliën bevorderen. Deze be- I

20 staan uit twee typen preparaten, orale of sublinguale ge- I

I neesmiddelen (Apomorfine, Fentolamine, remmers van fosfo- I

I diësterase-5 (PDE-5), bijv. Sildenafil) en prostaglandine I

I (PGEj,) die worden geïnjecteerd of transuretraal worden toe- I

I gediend aan mannen, en topicaal aan de genitaliën van I

I 25 vrouwen. I

I De verbindingen van de onderhavige uitvinding zijn I

I gunstig doordat deze te voorzien in middelen voor het her- I

I stel van een normale seksuele opwindingsrespons - namelijk I

I toegenomen bloeddoorstroming van de genitaliën, hetgeen I

I 30 leidt tot een vaginale, clitorale en labiale respons. Dit I

I zal resulteren in een toegenomen vochtig worden van de va- I

I gina via transudatie van plasma, een toegenomen aanpassing I

I van de vagina en toegenomen genitale gevoeligheid. De I

I verbindingen van de onderhavige uitvinding voorzien dus in I

I 1025709 23 middelen voor het herstellen of potentiêren van de normale seksuele opwindingsrespons.

Zonder ons door enige theorie gebonden te achten nemen wij aan dat neuropeptiden zoals vasoactief darmpeptide 5 (vasoactive intestinal peptide, VIP) de voornaamste, neuro-transmitterkandidaten zijn voor de controle van de vrouwelijke seksuele opwindingsrespons, met name bij de controle van de genitale bloeddoorstroming. VIP en andere neuropeptiden worden afgebroken/gemetaboliseerd door NEP EC 10 3.4.24.11. NEP-remmers zullen dus het endogene verslap pende effect op de vasculatuur door VIP, dat tijdens de opwinding wordt afgegeven, potentiêren. Dit zal tot een behandeling van FSAD leiden, zoals door een toegenomen genitale bloeddoorstroming en dus een genitale respons. Wij 15 hebben aangetoond dat selectieve remmers van NEP EC 3.4.24.11. de door bekkenzenuwen gestimuleerde en door VIP veroorzaakte stijgingen van de vaginale en clitorale bloeddoorstroming versterken. Bovendien versterken selectieve NEP-remmers de door VIP en zenuwen bevorderde ver-20 slapping van de geïsoleerde vaginawand.

De onderhavige uitvinding is dus gunstig doordat deze voorziet in middelen voor het herstel van een normale seksuele opwindingsrespons - namelijk een toegenomen bloeddoorstroming van de genitaliën, hetgeen leidt tot een va-25 ginale, clitorale en labiale respons. Dit zal resulteren in een toegenomen vochtig worden van de vagina via transu-datie van plasma, een toegenomen aanpassing van de vagina en een toegenomen gevoeligheid van de vagina. De onderhavige uitvinding voorziet derhalve in middelen voor het 30 herstellen of potentiêren van de normale seksuele opwindingsrespons .

Mannelijke seksuele dysfunctie omvat mannelijke erec-tiele dysfunctie, ejaculatiestoomissen, zoals premature ejaculatie (PE), anorgasmie (onvermogen tot het bereiken 1025709 t·.

24 I

van een orgasme) en luststoornissen, zoals hypoactieve I

seksuele luststoomis (geen belangstelling voor seks). I

Het zal duidelijk zijn dat alle verwijzingen hierin I

naar behandeling de curatieve, palliatieve en profylacti- I

5 sche behandeling omvatten. I

De verbindingen van de onderhavige uitvinding vinden I

toepassing in de volgende subpopulaties van patiënten met I

FSD: jonge, oudere, pre-menopausale, peri-menopausale en I

post-menopausale vrouwen met of zonder hormoonvervangings- I

10 therapie. I

De verbindingen van de onderhavige uitvinding vinden I

toepassing in patiënten met FSD die voortvloeit uit: I

i) vasculogene etiologieën, bijv. cardiovasculaire of I

atherosclerotische ziekten, hypercholesterolemie, roken I

15 van sigaretten, diabetes, hypertensie, bestralings- en pe- I

rineaal trauma, trauma van het iliohypogastrische pudenda- I

le vasculaire systeem. I

ii) neurogene etiologieën, zoals letsel van het ruggen- I

merg of ziekten van het centrale zenuwstelsel, waaronder I

20 multiple sclerose, diabetes, Parkinsonisme, cerebrovascu- I

laire accidenten, perifere neuropathieën, trauma of radi- I

cale bekkenoperatie. I

iii) hormonale/endocriene etiologieën, zoals dysfunctie I

van de hypothalamische/hypofysaire/gonadale baan, of dys- I

25 functie van de ovaria, dysfunctie van de pancreas, chirur- I

gische of medische castratie, androgeentekort, hoge circu- I

lerende gehalten van prolactine, bijv. hyperprolactinemie, I

natuurlijke menopause, vroegtijdige ovariuminsufficiêntie, I

hyper- en hypothyroidie. I

30 iv) psychogene etiologieën, zoals depressie, obses- I

sief/compulsieve stoornis, angststoornis, postnatale de- I

pressie/"baby blues", emotionele en relationele problemen, I

faalangst, huwelijksproblemen, dysfunctionele attituden, I

seksuele fobieën, religieus taboe of traumatische ervarin- I

35 gen uit het verleden. I

1025709_| 25 v) door geneesmiddelen veroorzaakte seksuele dysfunctie die het resultaat is van een therapie met selectieve rem- ; mers van de heropname van serotonine (SSRI's) en andere antidepressieve therapieën (met tricyclische verbindingen 5 en de voornaamste kalmeringsmiddelen), anti-hypertensieve thèrapieën, sympatholytische geneesmiddelen, chronische therapie van orale contraceptiva.

Patiënten met een milde tot matige MED zouden voordeel hebben van behandeling met een verbinding van de on- 10. derhavige uitvinding, en patiënten met een ernstige MED zouden eveneens kunnen reageren. Voorlopige onderzoeken doen echter vermoeden dat de mate van respons van patiënten met milde, matige en ernstige MED groter zal zijn in combinatie met een remmer van PDE5. Milde, matige en ern-15 stige MED zijn uitdrukkingen die voor deskundigen bekend zijn, maar richtlijnen kunnen worden aangetroffen in The Journal of Urology, vol. 151, 54-61 (januari 1994) .

De verbindingen van de onderhavige uitvinding vinden toepassing in de volgende subpopulaties van patiënten met 20 MED: psychogene, endocriene, neürogene, atherogene, en door geneesmiddelen veroorzaakte seksuele dysfunctie (lac-togene), en seksuele dysfunctie die in verband staat met factoren die het zwellichaam betreffen, met name venogene oorzaken. Deze patiëntgroepen worden in meer bijzonderhe-25 den beschreven in Clinical Andrology, vol. 23, nr. 4, blz. 773-782, en hoofdstuk 3 van het boek door I. Eardley èn K. Sethia "Erectile Dysfunction - Current Investigation and Management, gepubliceerd door Mosby-Wolfe.

30 Assay-condities

Productie van natuurlijk NEP-enzym: NEP wordt geïsoleerd uit nieren door de werkwij ze te volgen die wordt beschreven door Kenny en Booth (Booth, A.G. & Kenny, A.J. (1974), Biochem. J., 142, 575-581).

1025709

I 26 I

I Recombinant SEP-enzym wordt geproduceerd met behulp I

I van één van de twee alternatieve werkwijzen: I

I Werkwijze 1: een kweek van Chinese hamsterovarium I

I (CHO)-cellen wordt getransfecteerd met het plasmide NCIMB, I

I 5 registratienummer 41110, waarbij de lipofectaminewerkwijze I

I wordt gebruikt zoals wordt beschreven in het protocol voor I

I lipofectaminereagens (Invitrogen Ltd., Paisley, VK) . Het I

I celmedium wordt 24 of 48 uur na transfectie geoogst en I

I ontdaan van celresten door gedurende 5 minuten centrifuge- I

I 10 ren bij 3000 x g. Het medium wordt vervolgens gedurende I

I de nacht bij 4°C gedialyseerd tegen 50 mM HEPES met I

I pH=7,4/10% glycerol, met behulp van een wslide a lyser" I

I van Pierce en Warner, Chester, VK. Het gedialyseerde mon- I

I ster wordt vervolgens in kleine volumina ingevroren en be- I

I 15 waard onder vloeibare stikstof. I

I Werkwijze 2: een stabiele menselijke embryonale nier I

I (human embryonic kidney, HEK) cellijn die recombinant SEP I

I produceert, werd in de eigen laboratoria gemaakt volgens I

I moleculaire en celbiologische standaardwerkwijzen. Deze I

I 20 HEK-SEP-cellijn wordt gekweekt in kolven of rolflessen I

I volgens standaard protocollen voor HEK-cellen, in media I

I die zijn aangevuld met hygromycine B. Het medium wordt I

I verzameld en gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur ge- I

I centrifugeerd bij 3000 x g om de celresten te verwijderen I

I 25 en vervolgens gedurende ten minste 6 uur gedialyseerd met I

I dialysebuffer (50 fflM HEPES met pH=7,4/l0% glycerol), waar- I

I bij een "slide a lyser" van Pierce en Warner, Chester, VK, I

I wordt gebruikt. Gedurende deze 6 uur wordt de dialysebuf- I

I fer tenminste één maal vervangen. I

I 30 I

I Assay voor SEP- of NEP-peptidaseactiviteit I

I De peptidaseactiviteit van SEP of NEP wordt gemeten I

I door het bestuderen van het vermogen tot het proteolyseren I

I van het synthetische peptidesubstraat Rhodaminegroen-Gly- I

I 35 Gly-dPhe-Leu-Arg-Arg-Val-Cys(QSY7)-3Ala-NH2: I

I 1025709 I

27

De reagentia voor de assay worden eerst als volgt bereid :

Een substraatoplossing wordt bereid door verdunnen van een 2 mM voorraadoplossing in 100% DMSO van Rhodamine-5 groen-Gly-Gly-dPhe-Leu-Arg-Arg-Val-Cys (QSY7) -pAla->NH2 in 50 mM HEPES-buffer met pH=7,4 (Sigma, VK) tot een concentratie van 2 μΜ.

Een klein volume van het hierboven beschreven SEP- of NEP-enzym wordt ontdooid en vervolgens verdund in 50 mM 10 HEPES, met pH = 7,4 die 1 EDTA-vrij cocktailtablet met proteaseremmer (Roche Diagnostics, VK) per 25 ml bevat. De verdunning geschiedt met een tevoren bepaalde factor die voor elke partij enzym specifiek is, zodat 15 μΐ voldoende enzym bevat om gedurende de assay ongeveer 30% van 15 het substraat in product om te zetten.

Er wordt een 4% oplossing in DMSO bereid die bestaat uit 4 ml DMSO plus 96 ml 50 mM HEPES met pH=7,4. Een oplossing van product wordt bereid door toevoegen van 500 μΐ substraatoplossing aan 250 μΐ enzymoplossing plus 250 μΐ 20 4% oplossing in DMSO, en gedurende 16 uur incuberen bij 37°C.

De assays worden als volgt ingezet:

In een zwarte microtiterplaat met 384 putjes wordt 15 μΐ enzymoplossing toegevoegd, aan 15 μΐ 4% oplossing in 25 DMSO. Een gelijksoortige, niet-specifieke blanco proef wordt als achtergrondwaarde ingezet, waarbij de 15 μΐ van de 4% oplossing in DMSO bovendien 40 μΜ fosforamidon bevat. 30 μΐ substraatoplossing wordt vervolgens toegevoegd aan zowel de assay als de blanco proef en vervolgens wordt 30 de plaat gedurende 1 uur geincubeerd bij 37°C. Na de incubatie wordt een fluorescentiemeting gedaan (Ex485/Em538). Met een BMG galaxy fluorescentieaflezer (BMG Lab Technologies, Offenberg, Duitsland).

1025709

28 I

De proteolytische activiteit van het enzym komt over- I

een met de fluorescentie van het monster minus de fluores- I

centie van de niet-specifieke blanco proef die de achter- I

grondwaarde geeft. I

5 Er kan een fluorescentiemeting worden gedaan , van 60 I

μΐ product in een putje van een identieke microtiterplaat. I

Desgewenst wordt deze waarde, tezamen met de fluorescen- I

tie-eenheden van de SEP-assay gebruikt voor het berekenen I

van het percentage van het substraat dat gedurende een in- I

10 cubatieperiode van 1 uur werd geproteolyseerd of voor het I

omzetten van de gemeten stijging van de fluorescentie in I

andere nuttige eenheden, zoals aantal ng geproteolyseerd I

substraat/min/ml enzym. I

Met behulp van de assay worden de ICS0-waarden van I

15 NEP- en SEP-remmers bepaald: I

Ter bepaling van de IC50 van SEP- of NEP-remmers (bij- I

voorbeeld fosforamidon), worden verscheidene assays uitge- I

voerd als hierboven beschreven, waarbij een reeks van I

testconcentraties van de remmer in de 15 μΐ oplossing in I

20 DMSO wordt opgenomen (gemaakt door de juiste verdunning I

van een 10 mM voorraadoplossing van remmer in 100% DMSO I

met 4% DMSO/50 mM HEPES met pH=7,4) . Met behulp van een I

geschikt standaard-computerprogramma voor het bewerken van I

grafische gegevens wordt een S-vormige dosis-responskromme I

25 bewerkt tot een grafiek van log concentratie van remmer I

tegen het % remming of het % activiteit. De ICso-waarde I

wordt berekend als de concentratie van de remmer die 50% I

van de maximale remming veroorzaakt. In een typisch geval I

wordt voor een bepaalde IC50-bepaling een doseerbereik van I

30 ten minste 10 concentraties van remmer gebruikt die in I

grootte halve logeenheden verschillen. I

Voor remmers die een ICso-uitkomst van minder dan on- I

geveer 2 nM geven, wordt de assay herhaald onder gewijzig- I

de assay-condities waarin de gebruikte hoeveelheid enzym I

35 wordt verminderd tot ongeveer 1/10 & 1/20 deel; de sub- I

1025709 I

29 straatconcentratie wordt verhoogd tot 5 μΜ en de incuba-, tieduur wordt verlengd tot 3 uur. Dit verlaagt de poten-tiegrens (grens van sterke binding) van de assay tot een niveau waarbij de schatting van de ICso-waarde van de ver-5 bindingen waarvan de K-waarde in het bereik van 0,2-2 nM ligt niet wordt beperkt door de concentratie van het enzym.

De verbindingen van de onderhavige uitvinding zijn getest in de bovenstaande assays. Alle verbindingen zijn 10 krachtige NEP-remmers met een ICso-waarde van <20 nanomo-lair en een selectiviteit voor NEP ten opzichte van SEP van ten minste 1000 maal.

(R )-2-Methyl-3-(l-{[3-(2-methyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propyl]carbamoyl}cyclopentyl)propaanzuur (voorbeeld 1) 15 heeft een activiteit tegen NEP die kan worden uitgedrukt als een IC50 van 1 nM en een selectiviteit voor NEP ten opzichte van SEP van 1900 maal.

Het nut van de verbindingen van de onderhavige uitvinding voor het behandelen van FSD en MED kan verder wor-20 den bepaald met behulp van de technieken die worden beschreven in WO 02/079143.

De gunstige farmacokinetica van de verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen worden aangetoond door middél van de CACO-2-proef. De CACO-2-assay is een alge-25 meen aanvaard model voor het voorspellen van het vermogen van een bepaald molecuul om het MD-kanaal te passeren. De verbindingen van de onderhavige uitvinding passeren de CACO-2 goed. Dit kan als volgt worden gedefinieerd. Verbindingen met een klaarblijkelijke permeabiliteit (Papp)-30 waarde in de CACO van >5xl0'6 cm/s (bij pH=7,4) en >15xl0'6 cm/s (bij pH=6,5) worden beschouwd een goede permeabiliteit te hebben en voorspeld mag worden dat deze in het MD-kanaal goed zullen worden geabsorbeerd.

De proef wordt uitgevoerd zoals hierna wordt beschre-35 ven: .

1025709

I 30 I

I Celkweek I

I CACO-2-cellen werden met 4,0 x 104 cellen/putje geënt I

I in Falcon Multiwell®-platen met elk 24 putjes. De cellen I

I 5 werden gekweekt in kweekmedia die bestonden uit minimaal I

I essentieel medium (Gibco 21090-022) dat was aangevuld met I

I 20% foetaal runderserum, 1% niet-essentiêle aminozuren, 2 I

I mM L-glutamine en 2 mM natriumpyruvaat. Het kweekmedium I

I werd elke week driemaal vervangen en de cellen werden on- I

I 10 derhouden bij 37°C, 5% C03 en een relatieve vochtigheid van I

I 90%. De permeabiliteitsstudies werden uitgevoerd toen de I

I monolagen tussen 15 en 18 dagen oud waren. De cellen wer- I

I den gebruikt tussen cyclus 23 en 40. I

I 15 Permeabiliteitsstudies: I

I Elke proefverbinding werd bereid als een 10 mM oplos- I

I sing in DMSO, en 62,5 μΐ van deze oplossing werd vervol- I

I gens toegevoegd aan 25 ml transportbuffer. Nadolol (25 I

I μΜ) werd aan elk putje toegevoegd als een marker van de I

I 20 volledigheid van de membranen. Deze oplossingen werden I

I samen met transportbuffer vervolgens verwarmd tot 37°C. I

I De transportbuffer was HBSS (Hank's balanced salt solu- I

I tion) met pH=7,4 of pH=6,5. Voor de aanvang van elke stu- I

I die werd elke monolaag driemaal gewassen met HBSS. Trans- I

I 25 portbuffer zonder toegevoegde verbinding werd in elk ont- I

I vangend putje gebracht, 250 μΐ aan de apicale zijde en 1 I

I ml in het basolaterale putje. De studie werd begonnen I

I door toevoegen van oplossing van geneesmiddel aan elk do- I

I norputje, 250 μΐ aan de apicale putjes en 1 ml aan het I

I 30 basolaterale putje. Na een twee uur durende incubatie bij I

I 37°C werden de monsters uit alle putjes verwijderd voor I

I LC-MS-MS-analyse. I

I De verbindingen van de onderhavige uitvinding hebben I

I een CACO-2 A-B-waarde >5. I

I 1025709 I

31

Microsomen uit de menselijke lever vormen een algemeen aanvaard model voor de voorspelling van de metabolische stabiliteit van geneesmiddelmoleculen voor metabolisme in de lever. De verbindingen van de onderhavige uit-5 vinding zijn stabiel voor metabolisme door HLM. Verbindingen met een halfwaardetijd in HLM van <90 min. worden te snel gemetaboliseerd en verwacht mag worden dat deze een te korte verblijfsduur in het lichaam laten zien, en ten opzichte van de metabolisch stabiele verbindingen een 10 lagere biologische beschikbaarheid vertonen. De verbindingen van de onderhavige uitvinding hebben halfwaardetij-den in HLM van > 110 min.

De proef wordt als volgt uitgevoerd: 15 Incubaties met microsomen

Alle incubaties werden uitgevoerd in een geschud waterbad dat met een thermostaat was ingesteld op 37°C. Elk incubaat bevatte 0,5 μΜ CYP. Cofactoren werden toegevoegd . als een NADPH-regeneratiesysteem. Het bestond uit 1,2 mM 20 NADP, 5 . mM MgCl2 x 6 H20,. 5 mM DL-isocitroenzuur en één eenheid/ml isocitroenzuurdehydrogenase, die zeer zuiver was. Alle reagentia werden opgelost in fosfaatbuffer (50 mM; pH=7>4). De substraatconcentratie was 1 μΜ. De substraten werden opgelost van acetonitril, waarbij de uit-25 eindelijke concentratie in acetonitril in het incubatie-merigsel minder dan 0,1% (vol/vol) was. Uit de controle-incubaties werd NADP weggelaten. In alle experimenten werden de monsters gedurende 5 minuten bij 37°C voorgeïn-cubeerd met microsomen, substraat en regeneratiesysteem, 30 waarbij NADP ontbrak. De reactie werd ingezet door toevoeging van NADP. De incubatieduur was 1 uur. Volumina van 100 μΐ werden verwijderd na 0, 3, 5, 10, 15, 20, 30, . 45 en 60 min. De volumina werden geëxtraheerd met 400 μΐ 1025709

32 I

1M azijnzuur en 2,0 ml ethylacetaat en geanalyseerd door I

middel van LC-MS-MS. I

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen I

worden gecombineerd met één of meer andere actieve verbin- I

5 dingen die worden gekozen uit de opsomming: I

1) Eén of meer in de natuur voorkomende of synthetische I

prostaglandinen of esters daarvan. Geschikte prostaglan-

dinen voor gebruik hierin omvatten verbindingen zoals al- I

prostadil, prostaglandine Ei, prostaglandine E0, 13,14- I

10 dihydroprostaglandine Ei, prostaglandine Es, eprostiniol, I

natuurlijke, synthetische en semi-synthetische prostaglan- I

dinen en derivaten daarvan, met inbegrip van die welke I

worden beschreven in WO-00033825 en/of US 6.037.346, gepu- I

bliceerd op 14 maart 2000, die hierin alle worden opgeno- I

15 men door verwijzing, PGE0, PGEi, PGAi, PGBi, PGFi a, 19- I

hydroxy-PGAi, 19-hydroxy-PGBi, PGE2# PGB2, 19-hydroxy-PGA2, I

19-hydroxy-PGB2, PGE3a, carboprosttromethamine, dinoprost- I

tromethamine, dinoproston, lipoprost, gemeprost, meten- I

oprost, sulprostune, tiaprost en moxisylaat. I

20 2) Eén of meer verbindingen die antagonist zijn van de I

α-adrenergische receptor, ook bekend als α-adrenoceptoren I

of a-receptoren of a-blokkers. Geschikte verbindingen I

voor gebruik hierin omvatten: de α-adrenegische receptor- I

blokkers, zoals worden beschreven in PCT octrooiaanvrage

25 WO 99/30697, gepubliceerd op 14 juni 1998, waarvan de be- I

schrijvingen die betrekking hebben op α-adrenergische re- I

ceptoren hierin worden opgenomen door verwijzing, en deze I

omvatten selectieve (Χι-adrenoceptor of α2- I

adrenoceptorblokkers en niet-selectieve adrenoceptorblok- 30 kers, geschikte αχ-adrenoceptorblokkers omvatten: fentola-

mine, fentolaminemesylaat, trazodon, alfuzosine, indorami- I

ne, naftopidil, tamsulosine, dapiprazool, fenoxybenzamine, I

idazoxan, efaraxan, yohimbine, rauwolfia-alkaloïden, Re- I

cordati 15/2739, SNAP 1069, SNAP 5089, RS17053, SL I

1025709 ___ | 33 89.0591, doxazosine,. terazosine, abanoquil en prazosine; a2-adrenoceptorblokkers uit US 6.037.346 [14 maart 2000] zijn dibenamine, tolazoline, trimazosine en dibenamine, α-adrenergische receptoren zoals worden beschreven in de 5 Amerikaanse octrooischriften: 4.188.390; 4.026.894; 3.511.836; 4.315.007; 3.527.761; 3.997.666; 2.503.059; 4.703.063; 3.381.009; 4.252.721 en 2.599.000, die hierin alle worden öpgenomen door verwijzing; a2-adrenoceptorblokkers omvatten: clonidine, papaverine, pa-10 paverinehydrochloride, eventueel in aanwezigheid van een cariotonisch middel zoals pirxamine; 3) Eén of meer NO-donor (NO-agonist) verbindingen. Geschikte NO-donorverbindingen voor gebruik hierin omvatten organische nitraten, zoals mono-, di- of tri-nitraten of 15 organische nitraatesters waaronder glyceryltrinitraat (ook békend als nitroglycerine), isosorbide-5-mononitraat, iso-sorbidedinitraat, pentaerytritoltetranitraat, erytrityl-tetranitraat, natriumnitroprusside (SNP), 3-morfolino-sydnonimine, molsidomine, S-nitroso-N-acetylpenicillamine 20 (SNAP), S-nitroso-N-glutathion (SNO-GLU), N-hydroxy-L-arginine, amylnitraat, linsidomine, linsidominechloor-hydraat, (SIN-1), S-nitroso-N-cysteïne, diazeniumdiolaten, (NONOaten), 1,5-pèntaandinitraat, L-arginine, ginseng, zizphi fructus, molsidomine, Re-2047, genitrosyleerde max-25 isylytderivaten zoals NMI-678-11 en NMI-937 zoals worden beschreven in gepubliceerde PCT-octrooiaanvrage WO 0012075.

4) Eén of meer openers of modulatoren van het kaliumka-naal. Geschikte openers/modulatoren van het kaliumkanaal 30 voor gebruik hierin omvatten nicorandil, cromokalim, lev-cromakalim, lemakalim, pinacidil, cliazoxide, minoxidil, charybdotóxine, glyburide, 4-aminopyridine, BaCl2.

5) Eén of meer dopaminergische middélen, bij voorkeur apomorfiné of een selectieve D-2, D-3 of D2/D3-agonist zoals 1025709

I 34 I

I pramipexool en ropirinol (waarop aanspraak wordt gemaakt I

I in WO-0023056), PNU 95666 (waarop aanspraak wordt gemaakt I

I in WO-0040226). I

I 6) Eén of meer vaatverwijdende middelen. Geschikte I

I 5 vaatverwijdende middelen voor gebruik hierin omvatten ni- I

I modepine, pinacidil, cyclandelaat, isoxsuprine, chloorpru- I

I mazine, haloperidol, Ree 15/2739, trazodon. I

I 7) Eén of meer agonisten van thromboxaan A2. I

I 8) Eén of meer middelen die actief zijn op het CZS. I

I 10 9) Eén of meer ergot-alkaloïden. Geschikte ergot- I

I alkaloïden worden beschreven in Amerikaans octrooischrift I

I 6.037.346, gepubliceerd op 14 maart 2000, en omvatten ace- I

I I

tergamine, brazergoline, bromerguride, cianergoline, del- I

I orgotril, disulergine, ergonovinemaleaat, ergotaminetar- I

I 15 traat, etisulergine, lergotril, lysergide, mesulergine, I

I metergoline, metergotamine, nicergoline, pergolide, propi- I

I sergide, proterguride, terguride. I

I 10) Eén of meer verbindingen die de werking van natrure- I

I tische factoren moduleren, met name atriale natruretische I

I 20 factor (ook bekend als atriaal natruretisch peptide), na- I

I truretische factoren van type B en type C, zoals remmers I

I van neutraal endopeptidase, I

I 11) Eén of meer verbindingen die angiotensine converte- I

I rend enzym remmen, zoals enapril, en gecombineerde remmers I

I 25 van angiotensine converterend enzym en neutraal endopepti- I

I dase, zoals omapatrilat. I

I 12) Eén of meer antagonisten van de angiotensinereceptor, I

I zoals losartan. I

I 13) Eén of meer substraten voor NO-synthase, zoals L- I

I 30 arginine. I

I 14) Eén of meer blokkers van het calciumkanaal, zoals am- I

I lodipine. I

I 15) Eén of meer antagonisten van endothelinereceptoren en I

I remmers van endotheline converterend enzym. I

I 1025709 I

35 16) Eén of meer cholesterolverlagende middelen, zoals statinen (bijv. atorvastatine/Lipitor - handelsmerk) en fibraten.

17) Eén of meer antiklonteringsmiddelen van bloedplaatjes 5 en antitrombotische middelen, bijv. tPA, uPA, warfarine, hirudine en andere trombineremmers, heparine, remmers van tromboplastine activerende factor.

18) Eén of meer sensibiliserende middelen van insuline, zoals rezuline en hypoglykemische middelen zoals glipizi- 10 de.

19) L-DOPA of carbidopa.

20) Eén of meer remmers van acetylcholinesterase, zoals donezipil.

21) Eén of meer steroide of niet-steroide middelen tegen 15 ontstekingen.

22) Eén of meer modulatoren van de estrogeenreceptor en/of agonisten van estrogeen en/of antagonisten van es-trogeen, bij voorkeur raloxifeen, tibolon of lasofoxifeen, (-)-cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidine-l-yl)ethoxy)fenyl]- 20 5,6,7,8-tetrahydronaftaleen-2-ol en farmaceütisch aan vaardbare zouten daarvan, waarvan de bereiding uitvoerig wordt beschreven in WO 96/21656.

23) Eén of meer modulatoren van cannabinoïde receptoren.

24) Eén of meer remmers van een NPY (neuropeptide Y), 25 meer in hét bijzonder remmers van NPY1 of NPY5, bij voor-' kuer een remmer van NPYl, waarbij de NPY-remmers (waaronder NPY Yl. en NPY Y5) bij voorkeur een ICS0 van minder dan 100 nM en liever van minder dan 50 nM hebben. Een assay voor het identificeren van NPY-remmers wordt gegeven in 30 WO-A-98/52890 (zie blz. 96, regel 2 tot en met 28).

25) Eén of meer analoga van vasoactive intestinal protein (VIP), viP-mimetica, VIP-analogon, waarop meer in het bijzonder wordt ingegrepen door één of meer van de VIP-receptorsubtypen VPAC1, VPAC of PACAP (pituitory adenylate 35 cyclase activating peptide) , één of meer van een VIP- 1025709

36 I

receptoragonist of een VIP-analogon (bijv. Ro-125-1553) of I

een VIP-fragment, één of meer van een oc- I

adrenoceptorantagonist met een VIP-combinatie (bijv. Invi- I

corp, Aviptadil). I

5 26) Eén of meer van een melanocortinereceptoragonist of I

een modulator of een melanocortineversterker, zoals mela- I

notan II, PT-14, PT-141 of verbindingen waarop aanspraak I

wordt gemaakt in WO 09964002, WO 00074679, WO 09955679, WO I

00105401, WO-00058361, WO 00114879, WO 00113112, WO I

10 09954358. I

27) Eén of meer van een serotoninereceptoragonist, - I

antagonist of -modulator, meer in het bijzonder agonisten, I

antagonisten of modulatoren van 5HT1A- (waaronder VML I

670), 5HT2A-, 5HT2C-, 5HT3- en/of 5HT6-receptoren, waaron-

15 der die welke worden beschreven in WO 09902159, WO I

00002550 en/of WO 00028993. I

28) Eén of meer androgenen, zoals androsteron, dehydro- I

androsteron, testosteron, androstaandion en een syntheti- I

sche androgeen. I

20 29) Eén of meer oestrogenen, zoals oestradiol, oestron, I

oestriol en een synthetische oestrogeen, zoals oestrogeen- I

benzoaat. I

30) Eén of meer modulatoren van transporteurs voor nora-

drenaline, dopamine en/of serotonine, zoals bupropion, GW- I

25 320659. I

31) Eén of meer agonisten en/of modulatoren van een pu- I

rinergische receptor. I

32) Eén of meer antagonisten van een neurokinine (NK) - I

receptor, waaronder die welke worden beschreven in WO- I

30 09964008. I

33) Eén of meer agonisten, antagonisten of modulatoren I

van een opioïde receptor, bij voorkeur agonisten van de I

ORL-1-receptor. I

1025709 | 37 34) Eén of meer agonisten of modulatoren van oxytocine-/vasopressinereceptören, bij voorkeur een selectieve ago-nist of modulator van oxytocine.

35) Eén of meer PDE-remmers, meer in het bijzonder een 5 remmer van PDE 2, 3, 4, 5, 7 of 8, bij voorkeur een. remmer van PDÈ2 of PDE5, en liefst een remmer van PDE5 (zie hierna) , waarbij deze remmers bij voorkeur een ICso-waarde tegen het respectievelijke enzym van minder dan 100 nM hebben. Geschikte remmers van cGMP PDE5 voor het gebruik 10 volgens de onderhavige uitvinding omvatten: de pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-onen die worden beschreven in EP-A-0463756, de pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-onen die worden beschreven in EP-A-0526004, 15 de pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-onen die worden beschreven in gepubliceerde internationale octrooiaanvrage WO 93/06104, de isomere pyrazolo[3,4-d]pyrimidine-4-onen die worden beschreven in gepubliceerde internationale octrooiaanvrage 20 WO 93/07149, de chuinazoline-4-onen die worden beschreven in gepubliceerde internationale octrooiaanvrage WO 93/12095, de pyrido[3,2-d]pyrimidine-4-onen die worden beschreven in gepubliceerde internationale octrooiaanvrage WO 94/05661, 25 de purine-6-onen die worden beschreven in gepubliceerde internationale octrooiaanvrage WO 94/00453, de pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-onen die worden beschreven in gepubliceerde internationale octrooiaanvrage WO 98/49166, 30 de pyrazolo[4,3-dlpyrimidine-7-onen die worden beschreven in gepubliceerde internationale octrooiaanvrage WO 99/54333, de pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-4-onen die worden beschreven in EP-A-0995751, 1025709

I 38 I

I de pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-onen die worden beschreven I

I in gepubliceerde internationale octrooiaanvrage WO I

I 00/24745, I

I de pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-4-onen die worden beschreven I

I 5 in EP-A-0995750, I

I de verbindingen die worden beschreven in gepubliceerde in- I

I ternationale octrooiaanvrage WO 95/19978, I

I de verbindingen die worden beschreven in gepubliceerde in- I

I ternationale octrooiaanvrage WO 99/24433, I

I 10 de verbindingen die worden beschreven in gepubliceerde in- I

I ternationale octrooiaanvrage WO 93/07124, I

I de pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-onen die worden beschreven I

I in gepubliceerde internationale octrooiaanvrage WO I

I 01/27112, I

I 15 de pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-onen die worden beschreven I

I in gepubliceerde internationale octrooiaanvrage WO I

I 01/27113, I

I de verbindingen die worden beschreven in EP-A-1092718 en I

I de verbindingen die worden beschreven in EP-A-1092719. I

I 20 Andere geschikte remmers van PDE5 voor het gebruik I

I volgens de onderhavige uitvinding omvatten: I

I 5-[2-ethoxy-5-(4-methyl-l-piperazinylsulfonyl)fenyl]-1- I

I methyl-3-n-propyl-l>6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3- I

I d]pyrimidine-7-on (sildenafil), ook bekend als 1-t [3- (6,7- I

I 25 dihydro-l-methyl-7-oxo-3-propyl-lH-pyrazolo[4,3- I

I d]pyrimidine-5-yl)-4-ethoxyfenyl]sulfonyl]-4- I

I methylpiperazine (zie EP-A-0463756); I

I 5-(2-ethoxy-5-morfolinoacetylfenyl)-1-methyl-3-n-propyl- I

I l,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on I

I 30 (zie EP-A-0526004); I

I 3-ethyl-5-[5-(4-ethylpiperazine-l-ylsulfonyl)-2-n- I

I propoxyfenyl]-2-(pyridine-2-yl)methyl-2,6-dihydro-7H- I

I pyrazolo [4,3-dlpyrimidine—'7-on (zie WO 98/49166); I

10257Π9 I

39 3-ethyl-5-[5-(4-ethylpiperazine-l-ylsulfonyl)-2-(2-methoxyethoxy)pyridine-3-yl]-2-(pyridine-2-yl)methyl-2,6-dihydro-7H-pyrazolö[4,3-d]pyrimidine-7-on (zie WO 99/54333) ; 5 (+)-3-ethyl-5-[5-(4-ethylpiperazine-l-ylsulfonyl)-2-(2- methoxy-1(R)-methylethoxy)pyridine-3-yl]-2-methyl-2,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on, ook bekend als 3-ethyl-5-{5-[4-ethylpiperazine-l-ylsulfonyl]-2-([(IR)-2-methoxy-l-methylethyl]oxy)pyridine-3-yl}-2-methyl-2,6-10 dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on (zie WO 99/54333) ; 5-[2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazine-l-ylsulfonyl)pyridine-3-yl]-3-ethyl-2-[2-methoxyethyl]-2,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on, ook bekend als l-{6-15 ethoxy-5-[3-ethyl-6,7-dihydro-2-(2-methoxyethyl)-7-oxo-2H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-5-yl]-3-pyridylsulfonyl}-4-ethylpiperazine (zie WO 01/27113, voorbeeld 8); 5-[2-iso-butoxy-5-(4-ethylpiperazine-l- ylsulfonyl)pyridine-3-yl]-3-ethyl-2-(l-methylpiperidine-4-20 yl)-2,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on (zie WO 01/27133, voorbeeld 15); 5-[2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazine-l-ylsulfonyl)pyridine-3-yl]-3-ethyl-2-fenyi-2,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3- d]pyrimidine-7-on (zie WO 01/27113, voorbeeld 66); 25 5-(5-acetyl-2-propoxy-3-pyridinyl)-3-ethyl-2-(1-isopropyl- 3-azetidinyl)-2,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on (zie WO 01/27112, voorbeeld 124); 5-(5-acetyl-2-butoxy-3-pyridinyl)-3-ethyl-2-(l-ethyl-3-azetidinyl)-2,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on 30 (zie WO 01/27112, voorbeeld 132); (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methyleendioxyfenyl)pyrazino[2',1':6,1]pyrido[3,4-b]indool-1,4-dion (IC-351), dat wil zeggen de verbinding van de voorbeelden 78 en 95 van gepubliceerde intematio- 1025709

I 40 I

I nale octrooiaanvrage WO 95/19978, alsmede de verbinding I

I van voorbeelden 1, 3, 7 en 8; I

I 2-E2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazine-l-yl-l-sulfonyl)fenyl]-5- I

I methyl-7-propyl-3H-imidazo[5,1-f][l,2,4]triazine-4-on I

I 5 (vardenafil) ook bekend als 1-[[3-(3,4-dihydro-5-methyl-4-

I oxo-7-propylimidazo[5,1-f]-as-triazine-2-yl)-4- I

I ethoxyfenyl]sulfonyl]-4-ethylpiperazine, dat wil zeggen de I

I verbindingen van voorbeelden 20, 19, 337 en 336 van gepu- I

I bliceerde internationale octrooiaanvrage WO 99/24433, en I

I 10 de verbinding van voorbeeld 11 van gepubliceerde interna- I

I tionale octrooiaanvrage WO 93/07124 (EISAI), en de verbin- I

I dingen 3 en 14 van Rotella D.P., J. Med. Chem., 2000, 43, I

I 1257. I

I Nog andere geschikte remmers van PDE5 omvatten: 4- I

I 15 broom-5-(pyridylmethylamino)-6-[3-(4-chloorfenyl)propoxy] - I

I 3-(2H)pyridazinon; I

I 1-[4-[(1,3-benzodioxool-5-ylmethyl)amino]-6-chloor-2- I chinozolinyl]-4-piperidinecarbonzuur, mononatriumzout;

I (+)-cis-5,6a,7,9,9a-hexahydro-2-[4-(trifluormethyl)fenyl- I

I 20 methyl-5-methylcyclopent [4,5] imidazo[2,l-b]purine-4 (3H)on; I

I furazlocilline; I

I cis-2-hexyl-5-methyl-3,4,5,6a,7,8,9,9a-octahydrocyclo- I

I pent[4,5]imidazo[2,l-b]purine-4-on; I

I 3-acetyl-l-(2-chloorbenzyl)-2-propylindool-6-carboxylaat; I

I 25 3-acetyl-l-(2-chloorbenzyl)-2-propylindool-6-carboxylaat; I

I 4-broom-5-(3-pyridylmethylamino)-6-(3-(4-chloorfenyl)pro- I

I poxy)-3-(2H)pyridazinon; I

I l-methyl-5-(5-morfolinoacetyl-2-n-propoxyfenyl)-3-n-pro- I

I pyl-l,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on; I

I 30 1-[4-[(l,3-benzodioxool-5-ylmethyl)amino]-6-chloor-2- I

I chuinazolinyl]-4-piperidinecarbonzuur, natriumzout; I

I Pharmaprojeets nr. 4516 (Glaxo Wellcome); I

I Pharmaprojeets nr. 5051 (Bayer); I

I Pharmaprojeets nr. 5064 (Kyowa Hakko; zie WO 96/26940); I

I 35 Pharmaprojeets nr. 5069 (Schering Plough); I

1025709 I

41 GF-196960 (Glaxo Wellcome); E-8010 en E-4010 (Eisai);

Bay-38-3045 & 38-9456 (Bayer) en Sch-51866.

5 Voor het. behandeling van FSD kunnen de verbindingen van de onderhavige uitvinding bij voorkeur worden gecombineerd met een of meer actieve bestanddelen die worden gekozen uit de opsomming: a) een remmer van PDE5, liever 5-[2-ethoxy-5-(4-methyl-10 1-piperazinylsulfonyl)fenyl]-l-methyl-3-n-propyl-l,6- dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on (sildenafil); (6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methy- leendioxyf enyl) pyraizino [2', 1' : 6,1 ] pyrido [3,4 -b] indool -1,4-dion (IC-351); 15 2-[2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazine-l-yl-l-sulfonyl)fenyl]-5- methyl-7-propyl-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazine-4-on (vardenafil); 5-[2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazine-l-ylsulfonyl)pyridine-3-yl]-3-ethyl-2-[2-methoxyethyl]-2,6-dihydro-7H-pyrazolo-20 [4,3-d]pyrimidine-7-on en 5-(5-acetyl-2-butoxy-3-pyridinyl)-3-ethyl-2-(1-ethyl-3-azetidinyl)-2,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on en farmaceutisch aanvaardbare zouten daarvan; b) een remmer van NPY Yl; 25 c) een agonist van dopamine, zoals apomorfine of een selectieve agonist van D2, D3 of D2/D3, zoals pramipexool en ropirinol; d) een agonist of modulator van de melanocortine-receptor, of een versterker van melanocortine, bij vöor- 30 keur melanotan II, PT-14, PT-141; e) een agonist, antagonist of modulator van 5HT2C; f) een modulator van de estrogeenreceptor, agonisten van estrogeen en/of antagonisten van estrogeen, bij voorkeur raloxifeen, tibolone of lasofoxifeen; 1025709

42 I

g) een androgeen, zoals androsteron, dehydroandrosteron, I

testosteron, androstaandion en een synthetisch androgeen I

en I

h) een oestrogeen, zoals oestradiol, oestron, oestriol I

5 en een synthetische oestrogeen, zoals oestrogeenbenzoaat. I

Voor het behandelen van MED kunnen de verbindingen I

van de onderhavige uitvinding bij voorkeur worden gecombi- I

neerd met één of meer actieve bestanddelen die worden ge- I

kozen uit de opsomming: I

10 a) een remmer van PDE5, liever 5-[2-ethoxy-5-(4-methyl- I

1- piperazinylsulfonyl)fenyl]-l-methyl-3-n-propyl-l,6- I

dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on (sildenafil); I

(6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4- I

methyleendioxyfenyl)-pyrazino[2',1':6,l]pyrido[3,4- I

15 b]indool-1,4-dion (IC-351); I

2- [2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazine-l-yl-l-sulfonyl)fenyl]-5- I

methyl-7-propyl-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazine-4-on I

(vardenafil); I

5- [2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazine-l-ylsulfonyl)pyridine-3- I

20 yl]-3-ethyl-2-[2-methoxyethyl]-2,6-dihydro-7H-pyrazolo- I

[4,3-d]pyrimidine-7-on en I

5-(5-acetyl-2-butoxy-3-pyridinyl)-3-ethyl-2-(l-ethyl-3- I

azetidinyl)-2,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on I

en farmaceutisch aanvaardbare zouten daarvan; I

25 b) een remmer van NPY Yl; I

c) ' een agonist van dopamine (bij voorkeur apomorfine) of I

een selectieve agonist van D2, D3 of D2/D3, zoals prami- I

pexool en ropirinol; I

d) een agonist of modulator van de melanocortine- I

30 receptor, of een versterker van melanocortine, bij voor- I

keur melanotan II, PT-14, PT-141 en I

e) een agonist, antagonist of modulator van 5HT2C. I

Combinaties die voor het behandelen van FSD met name I

de voorkeur verdienen, zijn de verbindingen van de onder- I

1025709 I

43 havige uitvinding en één of meer actieve bestanddelen die worden gekozen uit de opsomming: 5- [2-ethoxy-5-(4-methyl-l-piperazinylsulfonyl)fenyl] -1-methyl-3-n-propyl-l,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimi-5 dine-7-on (sildenafil); (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methyleendioxyfenyl)pyrazino[2',1':6,1]pyrido[3,4-b]in-dool-l,4-dion (IC-351); 2- [2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazine-l-yl-l-sulfonyl)fenyl]-5-10 methyl-7-propyl-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazine-4-on (vardenafil); 5- [2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazine-l-ylsulfonyl)pyridine-3-yl]-3-ethyl-2-[2-methoxyethyl]-2,6-dihydro-7H-pyrazolo-[4,3-d]pyrimidine-7-on en 15 5-(5-acetyl-2-butoxy-3-pyridinyl)-3-ethyl-2-(l-ethyl-3- azetidinyl)-2,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on; apomorfine; melanotan II;.

PT-141; 20 lasofoxifeen; raloxifeen; tibolon; een androgeen, zoals androsteron, dehydroandrosteron, testosteron, androstaandion en een synthetische androgeen, en 25 een oestrogeen, zoals oestradiol, oestron, oestriol en een synthetische oestrogeèn, zoals oestrogeenbenzoaat.

Combinaties die voor het behandelen van MED met name de voorkeur verdienen, zijn de verbindingen van de onderhavige uitvinding en één of meer actieve bestanddelen die 30 worden gekozen uit de opsomming: 5-[2-ethoxy-5-(4-methyl-l-piperazinylsulfonyl)fenyl]-l-methyl-3-n-propyl-l,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimi-. dine-7-on (sildenafil); 1025709

44 I

(6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methy- I

leendioxyfenyl)pyrazino[2' ,1' :6,l]pyrido[3,4-b] indool-l,4- I

dion (IC-351); I

2-'[2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazine-l-yl-l-sulfonyl) fenyl]-5- I

5 methyl-7-propyl-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazine-4-qn I

(vardenafil); I

5-[2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazine-l-ylsulfonyl)pyridine-3- I

yl]-3-ethyl-2-[2-methoxyethyl]-2,6-dihydro-7H-pyrazolo- I

[4,3-d]pyrimidine-7-on en I

10 5-(5-acetyl-2-butoxy-3-pyridinyl)-3-ethyl-2-(l-ethyl-3- I

azetidinyl)-2,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on; I

apomorfine; I

melanotan II en I

PT-141. I

15 Voor het behandelen van cardiovasculaire stoornissen, I

in het bijzonder hypertensie, kunnen de verbindingen van I

de onderhavige uitvinding worden gecombineerd met één of I

meer actieve bestanddelen die worden gekozen uit de opsom- I

ming: I

20 a) blokkers van de angiotensinereceptor (ARB), zoals I

losartan, valsartan, telmisartan, candesartan, irbesartan, I

eprosartan en olmesartan; I

b) blokkers van het calciumkanaal (CCB), zoals amlodipi- I

ne; I

25 c) statinen, zoals atorvastatine; I

d) remmers van PDE5, zoals sildenafyl, tadalafil, var- I

denafil, 5-[2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazine-l-ylsulfo- I

nyl)pyridine-3-yl]-3-ethyl-2-[2-methoxyethyl]-2,6-dihydro- I

7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-on; I

30 5-(5-acetyl-2-butoxy-3-pyridinyl)-3-ethyl-2-(l-ethyl-3- I

azetidinyl)-2,6-dihydro-7H-pyrazolo [4,3-d]pyrimidine-7-on I

en I

de pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-4-onen die worden beschreven I

in WO 00/27848, in het bijzonder N-[[3 —(4,7-dihydro-l- I

35 methyl-7-oxo-3-propyl-lH-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-5-yl)- I

1025709 I

45 4-propoxyfenyl]sulfonyl]-l-methyl-2-pyrrolidinepropaan-amide [DA-8159 (voorbeeld 68 van WO 00/27848)]; e) bèta-blokkers, zoals atenolol of carvedilol; f) ACE-remmers, zoals quinapril, enelapril en 5 lisinopril; g) alfa-blokkers, zoals doxazosine; h) selectieve antagonisten van de aldosteronreceptor (SARA), zoals eplerenon of spironolacton en i) agonisten van imidazoline Ii zoals rilmenidine en 10 moxonidine.

Indien een combinatie van actieve middelen wordt toegediend, dan kunnen deze gelijktijdig, afzonderlijk of opeenvolgend worden toegediend.

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen 15 alleen worden toegediend, maar bij humane therapie zal dit in het algemeen geschieden in vermenging met een geschikt (e) farmaceutisch(e) excipiënt, verdunningsmiddel of drager die of dat wordt gekozen ten aanzien van de voorgenomen toedieningsroute en de farmaceutische standaardprak-20 tijk.

De onderhavige uitvinding voorziet in een farmaceutisch preparaat dat een verbinding met formule (I) of farmaceutisch aanvaardbare zouten, solvaten of polymorfen daarvan, en een farmaceutisch aanvaardba(a)r(e) verdun-25 ningsmiddel of drager omvat.

Orale toediening

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen oraal worden toegediend. Orale toediening kan inslikken 30 behelzen, zodat de verbinding het gastro-intestinale kanaal binnentreedt, of buccale of sublinguale toediening kan worden gebruikt, waarbij de verbinding de bloedstroom rechtstreeks via de mond binnentreedt.

Preparaten die geschikt zijn voor orale toediening 35 omvatten vaste preparaten, zoals tabletten, capsules die 1025709

46 I

vaste deeltjes bevatten, vloeistoffen of poeders, pastil- I

les (waaronder met vloeistof gevulde), kauwgommen, prepa- I

raten die uit zeer vele kleine of nanodeeltjes bestaan, I

gelen, films (waaronder mucoadhesieve), ovules, sprays en I

5 vloeibare preparaten. I

Vloeibare preparaten omvatten suspensies, oplossin- I

gen, siropen en elixers. Dergelijke preparaten kunnen I

worden gebruikt als vulmiddelen in zachte of harde capsu- I

les en omvatten in een typisch geval een drager, bijvoor- I

10 beeld water, ethanol, propyleenglycol, methylcellulose, of I

een geschikte olie, en een of meer emulgatoren en/of sus- I

pendeermiddelen. Vloeibare preparaten kunnen ook worden I

bereid door de hernieuwde samenstelling van een vaste I

stof, bijvoorbeeld uit een sachet. I

15 De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen I

ook worden gebruikt in snel oplossende, snel désintegre- I

rende doseervormen zoals die welke worden beschreven in I

Expert Opinion in Therapeutic Patents, 11 (6), 981-986, I

door Liang en Chen (2001). I

20 Een typisch tablet kan worden bereid met behulp van I

standaardwerkwijzen die voor een formuleringschemicus be- I

kend zijn, bijvoorbeeld door rechtstreekse samenpersing, I

granulering (droog, nat, of smelten), smelten en stollen, I

of extrusie. Het tabletpreparaat kan uit één of meer la- I

25 gen bestaan en al of niet bekleed zijn. I

Voorbeelden van excipiënten die geschikt zijn voor I

orale toediening omvatten dragers, bijvoorbeeld cellulose, I

calciumcarbonaat, dibasische calciumfosfaat, mannitol en I

natriumcitraat, bindmiddelen voor granulering, bijvoor- I

30 beeld polyvinylpyrrolidine, hydroxypropylcellulose, hy- I

droxypropylmethylcellulose en gelatine, desinte- I

greermiddelen, bijvoorbeeld natriumzetmeelglycolaat en si- I

licaten, smeermiddelen, bijvoorbeeld magnesiumstearaat en I

stearinezuur, bevochtigingsmiddelen, bijvoorbeeld natrium- I

1025709 I

47 laurylsulfaat, conserveermiddelen, ainti-oxidanten, geuren smaakstoffen en kleurstoffen.

Vaste preparaten voor orale toediening kunnen worden geformuleerd voor onmiddellijke en/of gemodificeerde af-5 gifte. Preparaten voor gemodificeerde afgifte omvatten vertraagde, ononderbroken, gepulseerde, gecontroleerde dubbele, doelgerichte en geprogrammeerde afgifte. . De bijzonderheden van geschikte technologieën voor gemodificeerde afgifte, zoals hoog-energetische dispersies, osmotische 10 en beklede deeltjes kunnen worden aangetroffen in Pharma-ceutical Technology On-line, Verma et al., 25(2), 1-14 (2001). Andere preparaten voor gemodificeerde afgifte worden beschreven in Amerikaans octrooischrift nr. 6.106.864.

.15

Parenterale toediening

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen ook rechtstreeks worden toegediend in de bloedstroom, in de spieren of in een inwendig orgaan. Geschikte wijzen 20 van parenterale toediening omvatten intraveneuze, intra-arteriêle, intrapèritoneale, intrathecale, intraventricu-laire, intra-uretrale, intrasternale, intracraniale, in-tramusculaire. en subcutane toediening. Geschikte wijzen van parenterale toediening omvatten naald- (waaronder mi-25 cronaald)injectoren, naaldvrije injectoren en infusietech-nieken.

Parenterale preparaten zijn in een typisch geval waterige oplossingen die excipiënten zoals zouten, koolhydraten en buffermiddelen (bij voorkeur tot een pH van 3 30 tot 9) bevatten, maar voor sommige toepassingen kunnen deze op geschikte wijze geformuleerd zijn als een steriele, niet-waterige oplossing of als een gedroogde vorm die zal worden gebruikt met een geschikt vehiculum zoals steriel, pyrogeenvrij water.

1025709

48 I

De bereiding van parenterale preparaten onder sterie- I

le omstandigheden, bijvoorbeeld door vriesdrogen, kan ge- I

makkelijk worden gerealiseerd met behulp van farmaceuti- I

sche standaardtechnieken die voor deskundigen bekend zijn. I

5 I

De oplosbaarheid van verbindingen met formule (I) die I

bij de bereiding van parenterale oplossingen worden ge- I

bruikt, kan worden verhoogd door een geschikte bewerking, I

bijvoorbeeld door het gebruik van hoog-energetische ge- I

10 sproeidroogde dispersies (zie WO 01/47495) en/of door het I

gebruik van de juiste formuleringstechnieken, zoals door I

het gebruik van middelen die de oplosbaarheid verhogen. I

Preparaten voor parenterale toediening kunnen worden I

geformuleerd voor onmiddellijke en/of gemodificeerde af- I

15 gifte. Preparaten voor gemodificeerde afgifte omvatten I

die voor vertraagde, ononderbroken, gepulseerde, gecontro- I

leerde tweeledige, doelgerichte en geprogrammeerde afgif- I

te. I

20 Topicale toediening I

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen I

ook topicaal worden toegediend op de huid (bij voorkeur op I

de genitaliën) of slijmvliezen, zowel dermaal als trans- I

dermaal. Typische preparaten voor dit doel omvatten ge- I

25 len, hydrogelen, lotions, oplossingen, crèmes, zalven, I

stuifpoeders, smeersels, schuimen, films, huidpleisters, I

wafels, implantaten, sponzen, vezels, verbanden en micro- I

emulsies. Ook liposomen kunnen worden gebruikt. Typische I

dragers omvatten alcohol, water, minerale olie, vloeibare I

30 petrolatum, witte petrolatum, glycerine en propyleengly- I

col. Penetratieverbeteraars kunnen worden opgenomen (zie I

bijvoorbeeld Finnin en Morgan, J. Pharm. Sci., 88 (10), I

955-958 (oktober 1999). I

Andere wijzen van topicale toediening omvatten afgif- I

35 te door iontoforese, elektroporatie, fonoforese, sonofore- I

1025700 I

49 se en naaldvrije injectie of injectie met behulp van micronaaiden.

Preparaten voor topicale toediening kunnen worden geformuleerd voor onmiddellijke en/of gemodificeerde afgif-5 te. Preparaten voor gemodificeerde afgifte omvatten preparaten voor vertraagde, ononderbroken, gepulseerde, gecontroleerde, tweeledige, doelgerichte en geprogrammeerde afgifte. De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen voor toediening dus worden geformuleerd in een vas-10 tere vorm, een geïmplanteerd depotpreparaat, dat voor een langdurige afgifte van de actieve verbinding zorgt.

Geinhaleerde/intranasale toediening

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen 15 ook intranasaal of door inhalatie worden toegediend, in een typisch geval in de vorm van een droog poeder (hetzij alleen, als een mengsel, bijvoorbeeld in een droog mengsel met lactose, hetzij als een preparaat van gemengde deeltjes, bijvoorbeeld gemengd met fosfolipiden) uit een dro-20 ge-poederinhalator, of als een aerosolspray uit een onder druk staande houder, pomp, spray, vemevelaar (bij voorkeur een vernevelaar die met behulp van elektrohydrodyna-mica een fijne mist produceert), met of zonder het gebruik van een geschikt drijfgas, zoals dichloorfluormethaan.

25 De onder druk staande houder, pomp, spray of verneve laar bevat een oplossing of suspensie van de actieve verbinding die bijvoorbeeld ethanol (eventueel waterige ethanol) of een geschikt alternatief middel voor het disperge-ren, solubiliseren of behulpzaam zijn bij de afgifte van 30 het actieve middel, (een) drijfgas(sen) als oplosmiddel en een eventuele oppervlakteactieve stof, zoals sorbitantrio-.leaat of een oligomelkzuur, omvat.

Voorafgaand aan het gebruik in een droog poeder of suspensiepreparaat wordt het geneesmiddelproduct verkleind 35 tot een afmeting die geschikt is voor afgifte door inhala- 102,5 70 9

50 I

tie (in een typisch geval minder dan 5 micron) . Dit kan I

worden gerealiseerd door middel van een geschikte verklei- I

ningswerkwijze, zoals malen door middel van een schroef- I

straal, malen door middel van een wervelbedstraal, bewer- I

5 king met een superkritische vloeistof, waarbij nanodeel- I

tjes worden gevormd, homogenisatie onder hoge druk of I

sproeidrogen. I

Een geschikt preparaat in de vorm van een oplossing I

voor gebruik in een vemevelaar die met behulp van elek- I

10 trohydrodynamica een fijne mist produceert, kan 1 μg tot I

10 mg van de verbinding van de onderhavige uitvinding per I

slag bevatten, en het slagvolume kan uiteenlopen van 1 μΐ I

tot 100 μΐ. Een typisch preparaat kan een verbinding met I

formule (I), propyleenglycol, steriel water, ethanol en I

15 natriumchloride bevatten. Alternatieve oplosmiddelen die I

in plaats van propyleenglycol kunnen worden gebruikt, om- I

vatten glycerol en polyethyleenglycol. I

Capsules, doordrukverpakkingen en patronen (die bij- I

voorbeeld uit gelatine of HPMC zijn gemaakt) voor gebruik I

20 in een inhalator of insufflator kunnen zodanig worden ge- I

formuleerd dat deze een poedermengsel van de verbinding I

van de onderhavige uitvinding, een geschikte poedergrond- I

stof zoals lactose of zetmeel, en een prestatiemodificator I

zoals L-leucine, mannitol of magnesiumstearaat bevatten. I

25 Bij droge-poederinhalatoren en aerosolen wordt de do- I

seereenheid bepaald door middel van een ventiel dat een I

afgemeten hoeveelheid afgeeft. De eenheden in overeen- I

stemming met de onderhavige uitvinding worden in een ty- I

pisch geval zo ingesteld dat een afgemeten dosis of "puf" I

30 wordt toegediend die 1 μg tot 50 mg van de verbinding met I

de formule (I) bevat. De totale dagelijkse dosis zal in I

een typisch geval in het bereik van 1 \iq tot 50 mg, zoals I

1 mg tot 50 mg zijn, en deze kan in een enkelvoudige do- I

1025709 I

51 sis, of vaker, als verdeelde doses gedurende de dag worden toegediend.

Preparaten voor geinhaleerde/intranasale toediening kunnen worden geformuleerd voor onmiddellijke en/of gemo-5 dificeerde afgifte. Preparaten voor gemodificeerde, afgifte omvatten preparaten voor de vertraagde, ononderbroken, gepulseerde, gecontroleerde tweeledige, doelgerichte en geprogrammeerde afgifte.

10 Rectale/intravaginale toediening

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen rectaal of vaginaal worden toegediend, bijvoorbeeld in de vorm van een suppositorium, pessarium of clysma. Cacaoboter is een traditionele grondstof voor een suppositorium, 15 maar naar gelang van hetgeen van toepassing is kunnen diverse alternatieven worden gebruikt. Preparaten voor rec-tale/vaginale toediening, kunnen worden geformuleerd voor onmiddellijke en/of gemodificeerde afgifte. Preparaten voor gemodificeerde afgifte omvatten preparaten voor de 20 vertraagde, ononderbroken, gepulseerde, gecontroleerde tweeledige, doelgerichte en geprogrammeerde afgifte.

Oculaire/andiale toediening .

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen 25 ook rechtstreeks aan het oog of het oor worden toegediend, in een typisch geval in de vorm van druppels van een fijn-verdeelde suspensie of oplossing in isotonische, steriele zoutoplossing waarvan de pH is geregeld. Andere preparaten die geschikt zijn voor oculaire en andiale toediening 30 omvatten zalven, biologisch afbreekbare (bijv. absorbeer-bare gelsponzen, collageen) en niet-biologisch afbreekbare (bijv. siliconen)implantaten, wafels, lenzen en uit vaste deeltjes of blaasjes bestaande systemen, zoals niosomen of liposomen. Een polymeer zoals een verknoopt polyacryl-35 zuur, polyvinylalcohol, hyaluronzuur, een cellulosepoly- 1025709

52 I

meer, bijvoorbeeld hydroxypropylmethyl-cellulose, hydroxy- I

ethylcellulose of methylcellulose of een heteropolysaccha- I

ridepolymeer, bijvoorbeeld gelangom, kan worden opgenomen I

tezamen met een conserveermiddel, zoals benzalkoniumchlo- I

5 ride. Dergelijke preparaten kunnen ook worden afgegeven I

door iontoforese. I

Preparaten voor oculaire/andiale toediening kunnen I

worden geformuleerd voor onmiddellijke en/of gemodificeer- I

de afgifte. Preparaten voor gemodificeerde afgifte omvat- I

10 ten preparaten voor de vertraagde, ononderbroken, gepul- I

seerde, gecontroleerde tweeledige, doelgerichte of gepro- I

grammeerde afgifte. I

Benodigde technologieën I

15 De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen I

worden gecombineerd met oplosbare macromoleculaire enti- I

teiten, zoals cyclodextrine of polymeren die polyethyleen- I

glycol bevatten, met als doel het verbeteren van hun op- I

losbaarheid, de oplossingssnelheid, het maskeren van de I

20 smaak, de biologische beschikbaarheid en/of stabiliteit. I

Complexen van geneesmiddel/cyclodextrinen zijn bij- I

voorbeeld in het algemeen nuttig gebleken voor de meeste I

doseervormen en toedieningsroutes. Zowel insluitings- als I

niet-insluitingscomplexen kunnen worden gebruikt. Als een I

25 alternatief voor rechtstreekse complexering met het ge- I

neesmiddel kan het cyclodextrine als een hulpadditief wor- I

den gebruikt, dus als een drager, verdunningsmiddel of so- I

lubiliseerder. Voor deze doeleinden worden het vaakst al- I

fa-, bèta- en gamma-cyclodextrinen gebruikt, waarvan voor- I

30 beelden kunnen worden aangetroffen in Internationale oc- I

trooiaanvrage nr. WO 91/11172, WO 94/02518 en WO 98/55148. I

Dosering I

Voor toediening aan menselijke patiënten ligt de to- I

35 tale dagelijkse dosis van de verbindingen van de onderha- I

1025709 I

53 vige uitvinding in een typisch geval tussen 0,1 mg en 1000 mg, hetgeen, uiteraard, afhankelijk is van de wijze van toediening. Orale toediening kan bijvoorbeeld een totale dagelijkse dosis van 5 mg tot 1000 mg, zoals 5 tot 500 mg, 5 vereisen, terwijl een intraveneuze dosis slechts 0,01 tot 30 mg/kg lichaamsgewicht, zoals 0,1 tot 10 mg/kg, liever 0,1 tot 1 mg/kg lichaamsgewicht kan vereisen. De totale dagelijkse dosis kan worden toegediend in enkelvoudige of verdeelde doses.

10 Deze doseringen zijn gegrond op een gemiddelde mense lijke persoon met een gewicht van ongeveer 65 tot 70 kg. De arts zal dadelijk doses kunnen bepalen voor personen waarvan het gewicht buiten dit bereik valt, zoals kinderen en ouderen.

15 De deskundige zal ook inzien dat bij de behandeling van bepaalde aandoeningen (waaronder FSD en MED) de verbindingen van de onderhavige uitvinding als een enkelvoudige dosis op basis van "naar behoefte" kunnen worden genomen (dat wil zeggen als dat nodig of gewenst is).

20 In een voorkeursuitvoeringsvorm worden de verbindin gen van de onderhavige uitvinding systemisch (zoals oraal, buccaal en sublinguaal) en bij voorkeur oraal afgegeven. Bij voorkeur wordt een dergelijke systemische (liefst orale) toediening gebruikt ter behandeling van vrouwelijke 25 seksuele dysfunctie, bij voorkeur FSAD.

In een uitvoeringsvorm die bijzondere voorkeur verdient wordt dus voorzien in het gebruik van de verbindingen van de onderhavige uitvinding bij de vervaardiging van een systemisch afgegeven (bij voorkeur oraal afgegeven) 30 geneesmiddel voor de behandeling of profylaxe van FSD, bij voorkeur FSAD.

Bij een oraal preparaat dat de voorkeur verdient, wordt gebruik gemaakt van tabletten voör onmiddellijke afgifte of snel dispergerende of oplossende doseringsprepa- 1025709

I · 54 I

I raten (fast dispersing or dissolving dosage/formulations; I

I FDDF's). I

I In een andere voorkeursuitvoeringsvorm worden de ver- I

I bindingen van de onderhavige uitvinding topicaal toege- I

I 5 diend, bij voorkeur rechtstreeks aan de vrouwelijke geni- I

I taliën, in hèt bijzonder de vagina. I

I Aangezién NEP in het gehele lichaam aanwezig is, is I

I het zeer tegen de verwachting in dat verbindingen van de I

I onderhavige uitvinding systemisch kunnen worden toegediend I

I 10 en in de vrouwelijke genitaliën een therapeutische respons I

I realiseren zonder ondraaglijke (schadelijke) bijwerkingen I

I teweeg te brengen. In EP 1.097.719-A1 en het diermodel I

I hierna hebben we aangetoond dat NEP-remmers die in een mo- I

I del voor konijnen (in vivo) systemisch waren toegediend de I

I 15 bloeddoorstroming in de genitaliën na seksuele prikkeling I

I (nagebootst door prikkeling van de bekkenzenuw) verhoog- I

I denzonder de cardiovasculaire parameters nadelig te bein- I

I vloeden, zoals door het veroorzaken van een aanzienlijke I

I hypotensie of hypertensie. I

I 20 De verbindingen van de onderhavige uitvinding worden I

I bij voorkeur toegediend voor de behandeling van FSD bij de I

I seksueel gestimuleerde patiënt (met seksuele stimulatie I

I worden audio-, visuele of tastOstimulatie bedoeld). De I

I stimulatie kan voor, na of tijdens de toediening geschie- I

I 25 den. I

I De verbindingen van de onderhavige uitvinding ver- I

I sterken dus de routes/mechanismen die ten grondslag liggen I

I aan seksuele opwinding in de vrouwelijke genitaliën, en I

I herstellen of verbeteren de seksuele opwindingsrespons bij I

I 30 seksuele stimulatie. I

I Een voorkeursuitvoeringsvorm voor ziet dus in het ge- I

I bruik van een verbinding van de onderhavige uitvinding bij I

I de bereiding van een geneesmiddel voor de behandeling of I

I profylaxe van FSD bij de gestimuleerde patiënt. I

I 1025709 I

55

Voor veterinair gebruik wordt een verbinding van de onderhavige uitvinding toegediend als een geschikt, aanvaardbaar preparaat in overeenstemming met de normale, veterinaire praktijk en de dierenarts zal het doseerregime 5 en de toedieningsroute bepalen die voor een bepaald dier de meest geschikte zijn.

De volgende preparaatvoorbeelden zijn louter illustratief en niet bedoeld om de. strekking van de onderhavige uitvinding te beperken. "Actief bestanddeel" betekent 10 een verbinding van de onderhavige uitvinding.

Preparaat 1: een preparaat wordt bereid met behulp van de volgende bestanddelen: gewicht/mg

Actief bestanddeel 250

Cellulose, microkristallijne 400

Siliciumdioxide, uitgegloeide 10

Stearinezuur 5

Totaal 665 15 De bestanddelen worden gemengd en samengeperst tot tabletten.

Preparaat 2: een intraveneus preparaat kan als volgt worden bereid:

Actief bestanddeel. 100 mg

Isotonische zoutoplossing 1000 ml 20

Typische preparaten die nuttig zijn voor de topicale toediening van de verbindingen van de onderhavige uitvinding aan de genitaliën zijn als volgt:

Preparaat 3: een spray.

25 Actief bestanddeel (1,0%) in isopropanol (30%) en wa ter.

1025709

56 I

Preparaat 4: een schuim: I

Actief bestanddeel, ijsazijn, benzoëzuur, cetylalco- I

hol, methylparahydroxybenzoaat, fosforzuur, polyvinylalco- I

hol, propyleenglycol, natriumcarboxymethylcellulose, stea- I

5 rinezuur, diêthylstearamide, Van Dyke parfum nr. 63.01, ge- I

zuiverd water en isobutaan. I

Preparaat 5: een gel. I

Actief bestanddeel, docusaatnatrium BP, isopropylal- I

10 cohol BP, propyleenglycol, natriumhydroxide, carbomeer I

934P, benzoëzuur en gezuiverd water. I

Preparaat 6: een crème: I

Actief bestanddeel, benzoëzuur, cetylalcohol, laven- I

15 del, verbinding 13091, methylparaben, propylparaben, pro- I

pyleenglycol, natriumcarboxymethylcellulose, natrium- I

laurylsulfaat, stearinezuur, triethanolamine, ijsazijn, I

ricinusolie, kaliumhydroxide, sorbinezuur en gezuiverd wa- I

ter. I

20 I

Preparaat 7: een pessarium: I

Actief bestanddeel, cetomacrogol 1000 BP, citroen- I

zuur, PEG 1500 en 1000 en gezuiverd water. I

25 De onderhavige uitvinding omvat bovendien: I

(i) een farmaceutisch preparaat dat een verbinding I

van de onderhavige uitvinding, tezamen met een farmaceu- I

tisch aanvaardba(a)r(e) excipiënt, verdunningsmiddel of I

drager omvat, I

30 (ii) een verbinding van de onderhavige uitvinding of I

een farmaceutisch aanvaardbaar zout, solvaat of polymorf I

daarvan, voor het gebruik als een geneesmiddel. I

(iii) hét gebruik van een verbinding van de onderhavi- I

ge uitvinding als een geneesmiddel voor het behandelen of I

35 voorkomen van een aandoening waarvoor een gunstige thera- I

1025708 I

57 peutisch respons kan worden verkregen door de remming van neutraal endopeptidase.

(iv) het gebruik van een verbinding van de onderhavi ge uitvinding als een geneesmiddel voor het behandelen of 5 voorkomen van hypoactieve seksuele luststoomis, seksuele opwindingsstoornis, orgasmische stoornis of seksuele pijnstoornis, en bij voorkeur seksuele opwindingsstoornis, orgasmische stoornis of seksuele pijnstoomis, en liever seksuele opwindingsstoornis.

10 (v) een werkwijze voor het behandelen van PSD of MED

in een zoogdier, waaronder het behandelen van het zoogdier met een effectieve hoeveelheid van een verbinding van de onderhavige uitvinding.

(vi) een farmaceutisch preparaat voor het behandelen 15 van FSD of MED, dat een verbinding van de onderhavige uitvinding tezamen met een farmaceutisch aanvaardba(a)r(e) excipiënt, verdunningsmiddel of drager omvat.

(vii) een verbinding van de onderhavige uitvinding vopr het gebruik bij het behandelen van FSD of MED.

20 (viii) het gebruik van een verbinding van de onderhavige uitvinding bij de vervaardiging van een geneesmiddel voor het behandelen of voorkomen van FSD of MED.

De onderhavige uitvinding wordt toegelicht door de volgende niet-beperkende voorbeelden, waarin de volgende 25 afkortingen en definities worden gebruikt:

Arbocel® filtreermiddel br. breed brm breed multiplet

Boe tert-butoxycarbonyl 30 CDI 1,1'-carbonyldiimidazool δ chemische verschuiving d doublet Δ verhitten DCCI dicyclohexylcarbodiimide 35 DCM dichloormethaan 1025709

58 I

DMA dimethylaceetamide I

DMF Ν,Ν-dimethylformamide I

DMSO dimethylsulfoxide I

ES+ electrospray-ionisatie, positieve scan

5 ES' electrospray-ionisatie, negatieve scan I

Vb voorbeeld I

u uren I

HOBt 1-hydroxybenzotriazool I

HPLC high pressure liquid chromatography I

10 m multiplet I

m/z piek in massaspectrum

min. minuten I

sm.p. smeltpunt I

MiBK methyl-iso-butylketon I

15 MS massaspectrum I

NMR kernspinresonantie I

Pree precursor I

Ber. bereiding I

k kwartet I

20 kwin. kwintet I

s singlet I

t triplet I

t-BMA tert-butylmethylether I

Tf trifluormethaansulfonyl I

25 TFA trifluorazijnzuur I

THF tetrahydrofuran I

TLC dunnelaagchromatografie I

TS+ thermospray-ionisatie, positieve scan I

WSCDI 1-(3-dimethylaminopropyl)-3- I

30 ethylcarbodiimidehydrochloride, in water I

oplosbaar. I

lH-kernspinresonantie(NMR)spectra kwamen in alle ge-

vallen overeen met de voorgestelde structuren. Kenmerken- I

de chemische verschuivingen (δ) worden gegeven in delen-

35 per-miljoen vanaf tetramethylsilaan, waarbij voor de aan- I

1025709 I

59 duiding van de voornaamste pieken gebruikelijke afkortingen worden gebruikt: (bijv. s, singlet; d, doublet; t, triplet; k, kwartet; m, multiplet; br, breed. De volgende afkortingen zijn gebruikt voor algemene oplosmiddelen: CD-5 Cl3 deuteróchloroform; DMSO, dimethylsulfoxide. De, afkorting psi betekent ponden per vierkante inch en LRMS betekent lage-resolutie massaspectrometrie. Wanneer dun-nelaagchromatografie (TLC) is gebruikt heeft dit betrekking op TLC over silicagel met behulp van silicagel 60 10 F25«-platen, Rf is de afstand die door een verbinding is afgelegd gedeeld door de afstand die door het vloeistof front op een TLC-plaat is af gelegd. De smeltpunten werden be paald met behulp van een Perkin-Elmer DSC7 die werkte met een verwarmingssnelheid van 20°C/minuut.

15

Voorbeeld 1 (R)-2-Methyl-3-(1-([3-(2-methyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propyl]carbamoyl)cyclopentyl)propaanzuur 20 i cy h rrv 0 o." 25 tert-Butyl-(2R)-2-methyl-3-[1-({[3-(2-methyl-l,3-benzo-thiazool-6-yl)propyl] aminojcarbonyl) cyclopentyl]propanoaat (bereiding 7 en Bereiding 8) (7,4 g> 16,7 mmol) werd opge- 30 lost in dichloormethaan (10 ml), trifluorazijnzuur (10 ml) toegevoegd en het mengsel gedurende 5 uur geroerd bij kamertemperatuur . De reactie werd afgebroken door de toevoeging van kaliumcarbonaat (10% oplossing in water) voor het aanpassen van de pH tot ca. 3 (er was ca. 120 ml no-35 dig). Het ontstane mengsel werd geëxtraheerd met 1025709

60 I

dichloormethaan (3 x 100 ml), de gecombineerde organische I

lagen werden gedroogd met MgSO* en ingedampt. Het residu I

werd gezuiverd door flash-chromatografie [Si02; methanol in I

dichloormethaan 1% tot 2%] , hetgeen het gewenste zuur als I

5 een heldere olie (5,66 g, 87%) opleverde. Deze partij I

werd gecombineerd met 1,4 g materiaal uit een voorgaande I

reactie en gedurende 3 uur geroerd in pent aan (100 ml) . . I

De pentaanlaag werd verwijderd, het residu gekrast om het

gomachtige residu losser te maken en gedurende nog 2 uur I

10 geroerd met een andere portie pentaan (100 ml) . Het ont- I

stane witte poeder werd verzameld op een glasfilter en on- I

der vacuüm gedroogd bij 45°C, hetgeen de titelverbinding I

als een vrijvloeiend wit poeder opleverde (sm.p. 105- I

106°C) (6,52 g). Gevonden: C, 64,93; H, 7,29; N, 7,18. I

15 Voor C21H28N2O3S is vereist: C, 64,92; H, 7,26; N, 7,21. I

^H-NMR (CDCI3, 500 MHz) 8h: 7,85 (1H, d) , 7,61 (1H, d) , I

7,23 (1H, dd), 5,89 (1H, brm) , 3,25-3,35 (2H, m) , 2,81 I

(3H, s), 2,74 (2H, m) , 2,45 (1H, m) , 2,10 (1H, m) , 1,98 I

(1H, m) , 1,89 (1H, m) , 1,88 (2H, m) , 1,55-1,68 (5H, m) , I

20 1,49 (2H, m) , 1,17 (3H, d) , I

i3C-NMR (CDCI3, 125 MHz) δ0: 180,5, 177,4, 166,7, 151,7, I

138,5, 135,9, 126,7, 122,1, 120,7, 54,5, 42,7, 39,6, 37,4,

36,6, 36,1, 33,4, 31,3, 24,0, 24,3, 19,9, 19,3. I

m/z (electrospray negatief ion); 387 (M-H+) I

25 Metingen van de optische rotatie werden gedaan in een I

oplossing in methanol (5,7 mg, in 5 ml) met de volgende I

resultaten: I

[cc] 25S89 -4,4 I

[0t] 25578 “4,6 I

[a] 2S54e "^TTi I

- 7,9 I

~~ ta] 25365 I

1025709 I

61

De zuiverheid werd vastgesteld als >99% door middel van HPLC-analyse met vijf verschillende omgekeerde fase-koloramen:

Percentage Zuiverheid 225 zus 254 am

Hoofd Belangrijk- Hoofd Belangrijk- Retentie- piek ste verent- piek ate veront- duur van reiniging reiniging hoofd piek.min.

Phenomenex Fenyl 100% = 99,95% 0,05% JTS

Hexyl 3 |im

Phenomenex Synergi 99,95% 0,05% 99,9% 0,04% . 3,8

Polar RP 4 |un

Develosil Combi ÏÖÖ% - 99,9% 0,04% 3,9 RP Cj» 3pm

Dionex Acclaim 99,95% 0,05% 99,9% 0,03% . 3,9

Cis 3μπ»

Zwaartekracht 99,4% 0,06% 99,9% 0,04% ÏTS

Cu 3μιη 5 HPLC-condities: Analytisch

Temperatuur: omgeving

Detectie: 225, 254 nm

Mobiele fase: A: water: MeCN: TFA

10 95:5:0,1% (vol/vol)

B: MeCN

elutie met lineaire gradiënt (zie hierna) 15 Stroomsnelheid: 1 ml/min.

Condities oplosmiddel gradiënt: 1025709

62 I

Γ“ Tijd %~Β I

0,0 Ö I

_ ö I

5,0 95 I

ΤΠ 95 I

__ _

5 De chirale zuiverheid werd vastgesteld op 98% door I

capillaire elektroforese. Hiervoor werd vergeleken met I

een authentiek monster van de tegengestelde enantiomeer I

die langs een gelijksoortige route werd bereid, met behulp I

van de condities die hierna worden beschreven. I

1025709 I

63 CE-condities

Capillair Agilent, uitgegloeide silica, capillair met verlengde lichtweg van 64,5 cm (effectieve lengte 56 cm) , 50 μηι I.D.

Temperatuur 15 °C

Detectie UV bij 230, 254 en 260 nm

Oplossing van monster ca. 1 mg/ml in loopbuffer:water: methanol:aceton (1:10:1:0,5)

Systeem/Gege- vensbestand HP 3DCE (zie aangehechte prints)

Injectie 4 seconden van 50 mbar voor monster, vervol gens 2 seconden van 50 mbar voor water Loopbuffer 250 mg α-cyclodextrine en 50 mg SBE-β-

cyclodextrine, opgelost in boraxbuffer met pH = 9,3, 50 mM (Agilent CE-opiossing), 5 ml Voorbereiding Nieuw capillair: 10 minuten 930 mBar, 1,0 M NaOH

Tussen de metingen: 2 minuten 930 mBar, 0,1 M NaOH, spoel 2 sec. met water, 4 minuten met loopbuffer bij 930 mBar

Voltage 25 kV (oplopend van 0-25 kV in 30 seconden)

Looptijd 20 minuten.

Een alternatieve procedure voor de productie van de titelverbinding wordt hierna gegeven: 5 tert-Butyl(2R)-2-methyl-3-[1-({[3-(2-methyl-l,3-benzothia-zool-6-yl)propyl]amino}carbonyl)cyciopentyl]propanoaat (bereiding 7 en Bereiding 8) (2,4 g, 5,4 mmol) werd opge lost in tolueen (7 inl) , trifluorazijnzuur (4,1 ml) toege-10 voegd en het mengsel gedurende 6 uur geroerd bij 17°C. De reactie werd afgebroken door de toevoeging van natriumcar- 1025709

64 I

bonaat (9% oplossing in water) om de pH op 3 te brengen I

(er was 30 ml nodig) . MiBK (15 ml) werd toegevoegd. De I

organische fase werd afgescheiden en het product geêxtra- I

heerd in natriumcarbonaat (9% oplossing in water, 2x5 I

5 ml). Het product werd geëxtraheerd in isopropylacetaat I

(35 ml) door de pH met 5M HC1 in 1 uur op 4,5 te brengen. I

De organische fase werd door middel van destillatie onder I

atmosferische druk geconcentreerd tot een volume ten op- I

zichte van het uitgangsmateriaal van 5 ml/g. Men liet de I

10 olie afkoelen tot omgevingstemperatuur, uitkristalliseren I

en gedurende 1 uur bij 0 tot -5°C tot korrels verkleinen. I

De vaste stof werd verzameld met behulp van vacuümfiltra- tie, gewassen met isopropylacetaat (5 ml) en onder vacuüm

bij 40°C gedurende de nacht gedroogd, hetgeen de titel ver- I

15 binding als een vrij vloeiend, wit poeder opleverde (sm.p. I

= 105-106°C) [1,3 g, 3,3 mmol, (62%)]. I

Voorbeeld 2 I

3-(1-([3-(2-Ethyl-l,3-benzothia20ol-6-yl)propyl]carba- I

20 moyl)cyclopentyl)propaanzuur I

h rr.»—v I

V I

25 O O I

Deze verbinding werd bereid met behulp van een proce- I

dure die analoog was aan die welke werd beschreven in I

voorbeeld 1, door uit te gaan van tert-butyl-3-[1-({[3-(2- I

30 ethyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propyl]aminojcarbonyi)cyclo- I

pentyl]propanoaat uit bereiding 9. I

Sm.p. = 127,5-129,5°C; I

^-NMR (d6-DMS0, 400 MHz) '8b: 7,89 (1H, d) , 7,63 (1H, s) , I

7,25 (1H, d), 5,69 (1H, brm) , 3,37 (2H, m) , 3,15 (2H, k) , I

35 2,76 (2H, m) , 2,31 (2H, m), 1,96-1,87 (6H, m) , 1,70-1,55 I

1025709 I

H

65 (4H, m) , 1,47 (3H, t) , m/z (ES+) : 411 (MNa+) , 389 (MH+) ; m/z (ES‘) : 387 (M-H+) .

Gevonden: C, 64,74; H, 7,28; N, 7,14.

Voor C2iH28N203S is vereist: C, 64,92; H, 7,26; N, 7,21.

5

De zuiverheid werd vastgesteld op >98% door middel van HPLC-analyse met drie verschillende omgekeerde fase-kolommen:

Percentage Zuiverheid 225 nm "" 254 nm ~~~~~~~~

Hoofd Belangrijk- Hoofd Belangrijk- Retentie- piek ete veront- piek ste veront- duur van reiniging reiniging hoofd piek.min.

Luna Fenyl Hexyl 3 99,25% 0,51% 98,79% 0,56% 9,80 μπ\ (150 x 4,6 mm)

Phenoraenex Synergi' 99,25% 0,49% 99,14% 0,44% 9,98

Polar RP 4 μιη (150 x 4,6 mm)

Curosil PFP 1 99,31% Ö7Ï% 98,21% 0,84% 9,05 (150 x 4,6 mm) 10 HPLC-condities: Analytisch

Temperatuur: omgeving

Detectie: 225, 254 nm

Mobiele fase: A: water:MeCN:TFA

15 95:5:0,1% (vol/vol)

B: MeCN

elutie met lineaire gradiënt (zie hierna) 20 Stroomsnelheid: 1 ml/min.

Condities oplosmiddel gradiënt: 1025709 '

66 I

Tijd (min.) % B I

0,2-15 0-100 I

15-18 : ÏÖÖ I

18-18,2 1 100-0 I

_____ -

Voorbeeld 3 I

3-(1-([3-(2-Ethyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propyl3carba- I

5 moyl Vcyclohexyl) propaanzuur I

"V^Y^QJ-λ I

0 o I

Deze verbinding werd bereid met behulp van een proce- I

15 dure die analoog was aan die welke werd beschreven in I

Voorbeeld 1, door uit te gaan van tert-butyl-3-(l-{ [3-(2- I

ethyl -1,3-benzothiazool-6-yl)propyl]carbamoyl}cyclohexyl)- I

propanoaat uit bereiding 12. I

^-NMR (de-DMSO, 400 MHz) ba: 7,86 (1H, d) , 7,64 (1H, d) , I

20 7,24 (1H, dd), 5,72 (1H, brs), 3,32 (2H, m), 3,13 (2H, k) , I

2,75 (2H, m), 2,27 2H, m) , 1,88 {2H, kwin), 1,85-1,73 (4H, I

m), 1,60-1,23 (8H, m) , 1,46 (3H, t) ; m/z (ES+) : 425 (MNa+) , I

403 (MH+) ; m/z (ES): 401 (M-H+) . I

25 Voorbeeld 4 I

(R)-2-Methyl-3-(1-([3-(2-ethyl-1,3-benzothiazool-6-yl)- I

propyl]carbamoyl)cyclopentyl)propaanzuur I

1025709 I

67 o o 5 ·

De titel verbinding werd bereid met behulp van de procedure die werd beschreven in voorbeeld 1, door uit te gaan van tert-butyl-(2R) -2-methyl-3-[1-({ [3-(2-ethyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propyl]amino}carbonyl)cyclopentyl] -10 propanoaat uit bereiding 10.

^-NMR {CDCI3, 400 MHz) Sgz 7,86 (1H, d) , 7,62 (1H, d) , 7,24 (1H, dd), 5,81 (1H, brm), 3,27 (2H, m), 3,12 (2H, k), 2,74 (2H, m), 2,43 (1H, tn) , 2,11-2,05 (1H, tn) , 1,98-1,81 (4H, m) , 1,69-1,40 (7H, m) , 1,45 (3H, t) , 1,16 (3H, d) ; 15 m/z (ES+) : 425 (MNa+) , 403 (MH+) ; m/z (ES‘) : 401 (M-H+) .

Voorbeeld 5 3- (1-([3-(2-Methyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propyl]car-bamoyl)cyclohexyl)propaanzuur 20 h ΓΤ o o 25/.

De titelverbinding werd bereid met behulp van een procedure die analoog was aan die welke werd beschreven in Voorbeeld 1, door uit te gaan van tert-butyl-3-(1-{ [3-(2-30 methyl-1,3-benzothiazool-6-yl)propyl]carbomoyl}cyclohexyl) propanoaat uit bereiding 13.

^-NMR (CD3OD, 400 MHz) δκ: 7,78 (1H, d) , .7,71 (1H, brm), 7,34 (1H, d), 3,29-3,23 (verborgen) (2H, m), 2,80 (3H, s) , 2,77 (2H, tn), 2,22-2,17 (2H, m) , 2,05-1,98 (2H, m) , 1,92- 1025709

I 68 I

I 1,85 (2H, m) , 1,78-1,74 (2H, m) , 1,63-1,51 (3H, m) , 1,44- I

I 1,22 (5H, m); m/z (APCI+) : 389 (ΜΗ*) I

I Gevonden: I

I C, 64,05; H, 7,39; N, 8,82. I

I 5 voor C21H28N2O3S.0,25H2O is vereist: I

I C, 64,18; H, 7,31; N, 7,13. I

I Voorbeeld 6 I

I 3- (1-{[3- (2-Methyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propyl3carba- I

I 10 moyl)cyclopentyl)propaanzuur I

I ua C3 H — I

I 15 0 0 ' I

I I

I De titelverbinding werd bereid met behulp van een I

I 20 procedure die analoog was aan die welke werd beschreven in I

I voorbeeld 1, door uit te gaan van tert-butyl-3-(1-{[3-(2- I

I methyl-1,3-benzothiazool-6-yl)propyl]carbomoyljcyclo- I

I pentyl)propanoaat uit bereiding 14. I

I 1H-NMR (CDCI3, 400 MHz) 6h: 7,85 (1H, d) , 7,61 (1H, d) , I

I 25 7,24 (1H, dd), 5,70 (1H, brs), 3,30 (1H, m), 2,81 (3H, s), I

I 2,74 (2H, m) , 2,30 (2H, m) , 1,97-1,84 (6H, m) , 1,69-1,56 I

I (4H, m), 1,50-1,41 (2H, m) ,- m/z (APCI+) : 375 (MH+) ; (APCI' I

I ) : 373 (ΜΗ*) . I

I 30 Bereiding 1 I

I Pi(tert-butyl)-3-(2-methyl-l,3-benzothiazool-6-yl)pro- I

I pyllmidodicarbonaat I

I 1025709_

35 I

69 ' ^

. °Y° jfTV

.5 -, τ ° ;.

Di (tert-butyl)allylimidodicarbonaat [Bioorganic & Me-dicinal Chemistry Letters, 1999, 7, (1625-1636)] (8,75 g, 34 tnmol) werd bij 0°C behandeld met 9-BBN [Aldrich] (136 ml, 0,5 M oplossing in tetrahydrofuran, 2 equivalenten, 68 10 mmol) en de oplossing gedurende 45 minuten geroerd bij kamertemperatuur. Kaliumfosfaat (23 ml, 3 M oplossing in water, 2,0 equivalenten, 69 mmol) werd voorzichtig toegevoegd en de reactiekolf vervolgens bedekt met aluminiumfolie. Een oplossing van 6-broom-2-methylbenzothiazool [J. 15 chem. Soc., 1936, 1225; DE3528032A1] (7,80 g, 34 mmol, 1 equivalent) in dimethylforniamide (50 ml) werd toegevoegd, hetgeen werd gevolgd door 1,1'-bis(difenylfosfino)-ferroceenpalladium(II)dichloride-dichloormethaan, 1:1- complex (2,77 g, 3,4 mmol, 0,1 equivalent) en het reactie-.20 mengsel gedurende 18 uur geroerd bij kamertemperatuur. Het reactiemengsel werd in vacuüm geconcentreerd en het residu gezuiverd door kolomchromatografie’ [Si02, pen- taan:ethylacetaat = 5:1, vervolgens 3:1], hetgeen het ge wenste product als een heldere olie (11,2 g, 84%) oplever-25 de.

Analyse van ^-NMR toonde aan dat het materiaal een lichte verontreiniging van sporen oplosmiddel en 9-BBN had.

^H-NMR (CDC13, 400 MHz) δκ: 7,81 (1H, d) , 7,60 (1H, s) , 3Ó 7,23 (1H, d) , 3,60 (2H, t) , 2,77 (3H, s) , 2,71 (2H, t) , 1,97-1,88 (2H, m) , 1,45 (18H, s) ; m/z (APCI+) : 407 (MH+) , 307 (ΜΗ*-Boe) .

Bereiding 2 102.57 09

70 I

Pi(tert-butyl)-3-(2-ethyl-1,3-benzothi azool-6-yl)propyl- I

imidodicarbonaat I

5 ^ I

°Y° I

'o . I

10 I

Dit 2-ethylthiazooltussenproduct werd bereid op een I

wijze die analoog was aan die van bereiding 1 met 6-broom- I

15 2-ethylbenzothiazool [Buil. Soc. Chim. Fr., 1967, 2812-23] I

als het arylbromidebestanddeel. I

^-NMR (dg-DMSO, 400 MHz) 6h: 7,84 (1H, d) , 7,64 (1H, s) , I

7,26 (1H, d), 3,60 (2H, m) , 3,12 (2H, k) , 2,73 (2H, t) , I

1,07-1,86 (2H, m) , 1,47 (9H, s) , 1,45 (3H, t) ; m/z (APCI+) : I

20 421 (MH+) , 3,21 (MH+-Boc) . I

Bereiding 3 I

3 - (2-methyl-1,3-benzothiazool-6-yl) propylaminedihydro- I

chloridezout I

25 I

H2N^xxy~ I

30 .2HCI I

N,N-Di-tert-butoxycarbonyl-3-(2-methyl-l,3-benzo- I

35 thiazool-6-yl)propylamine (11,2 g, 27,5 mmol) werd opge- I

102.5709 I

71 lost in 1,4-dioxaan (30 ml), behandeld met waterstofchlo-ride' (25 ml, 4M oplossing in 1,4-dioxaan, 100 mmol) en de oplossing gedurende 18 uur geroerd bij kamertemperatuur. Het reactiemengsel werd ingedampt tot een witte, vaste 5 stof die werd fijngewreven met een mengsel van pentaan. en diethylether (3:1), hetgeen het gewenste aminebis-HCl-zout als een witte, vaste stof (6,05 g, 78%) opleverde. lH-NMR (de-DMSO, 400 MHz) 6h: 7,98 (3H, brs) , 7,85 (1H, s) , 7,81 (1H, d) , 7,31 (1H, d) , 2,78-2,73 (4H, m) , 2,75 (3H, 10 s) ,. 1,94-1,85 (2H, m) ; m/z (APCI+) : 207.

Een alternatieve procedure voor de productie van de titelverbinding wordt gegeven in de onderstaande bereidin-.gen 4 en 5.

15

Bereiding 4 3- (2-Methyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propylaminedihydrochlo-ridezout (Alternatieve procedure) 20 . Stap (1): 3-(2-Methylbenzothiazool-6-yl)acrylonitril Λ jrr>-

Aan een geroerde oplossing van 6-jóod-2-methyl-benzothiazool [WO 2002090443A1] (13,1 g, 47,64 mmol) in 30. DMF (500 ml) werd onder Na bij kamertemperatuur acrylonitril (6,27 ml, 95,28 mmol), vervolgens NaOAc (2,86 g, 47,04 mmol), vervolgens Pd(0Ac)2 (1,07 g, 4,76 mmol) en vervolgens P(o-tolyl)3 (2,90 g, 9,53 mmol) toegevoégd. Het ontstane mengsel werd onder Na gedurende ~ 24 uur bij 130eC 35 en vervolgens gedurende 2 dagen bij kamertemperatuur ge- 1025709

72 I

roerd. De reactie werd afgebroken met water (750 ml) en I

het mengsel vervolgens geëxtraheerd (Et20, 3 x 200 ml) . De I

gecombineerde organische lagen werden gedroogd (MgS04), ge- I

filtreerd en in vacuüm geconcentreerd. Het ontstane resi- I

5 du werd gezuiverd door flash-kolomchromatografie, waarbij I

werd geêlueerd met 10:1 * pentaan:EtOAc en vervolgens 3:1 I

pentaan-.EtOAc, hetgeen de titel verbinding· als een olie I

(9,00 g, 94%) en als een ~3:l-méngsel van "trans":"cis"- I

isomeren opleverde.

10 ^-NMR (6h) 2,85 (3H, m) , 5,45 en 5,90 (1H, m), 7,50 (2H, I

m) , 7,90 (2H, m) ; I

APCI-MS: 201 (100%) [MH+] . I

Stap (2) I

15 [3-(2-Methylbenzothiazool-6-yl)propyl]carbaminezure tert- I

butylester I

J jl ^— I

20 I

Aan een geroerde oplossing van 3-(2- I

methylbenzothiazool-6-yl)acrylonitril (9,00 g, 45,00 mmol) I

in MeOH (1 1) werd onder N2 bij kamertemperatuur Boc20 I

25 (19,64 ml, 90,00 mmol) en vervolgens NiCl2 (5,84 g, 45,00 I

mmol) toegevoegd. Aan het ontstane mengsel werd portiege- I

wijs in ~20 min. voorzichtig NaBIU (13,62 g, 300,00 mmol) I

toegevoegd. Het ontstane mengsel werd onder N2 bij kamer- I

temperatuur gedurende ~1,5 uur geroerd, gefiltreerd door I

30 Arbocel® en in vacuüm geconcentreerd. Het ontstane residu I

werd gezuiverd door flash-kolomchromatografie, waarbij I

werd geêlueerd met 3:1 = pentaan:EtOAc en vervolgens 1:1 I

pentaan: EtOAc, hetgeen de titelverbinding als een olie I

(5,00 g, 36%) opleverde. I

1025709 I

73 ^-NMR (6h) 1,40 (9H, s) , 1,85 (1H, m) , 2,65 (1H, m) , 2,75 (1H, m) , 2,90 (3H, m) , 3,05 (1H, τη) , 3,15 (1H, m) , 3,50 . (2H, m), 7,30 (1H, m) , 7,65 (1H, m) , 7,90 (1H, τη) ; APCI-MS: 307 (75%) [MH+) , 251 (50%), 203 (100%).

5

Stap (3) . 3 - (2 -Methylbenzothiazool - 6 -yl) propylaminedihydrochlori -dezout 10 I T v-

H2Ns^sAAS

.2HCI

15

Aan een geroerde oplossing van £3 - (2-methylbenzothiazool - 6-ylj propyl ] carbaminezure tert-butyl- ester (248 mg, 0,78 mmol) in DOM (10 ml) werd onder Na bij kamertemperatuur 4N HCl in dioxaan (5 ml) toegevoegd en 20 het ontstane mengsel onder Na bij kamertemperatuur gedurende 4 uur geroerd. De oplosmiddelen werden in vacuüm verwijderd en het residu fijngewreven met Et20 (3 x 10 ml).

Het filtraat werd·· in vacuüm geconcentreerd, hetgeen de ti-telverbinding als een kleurloos schuim (195 mg, 99%) ople-25 verde, dat volgens •‘•H-NMR van voldoende zuiverheid was om zonder verdere zuivering in de volgende stap te worden gebruikt.

Bereiding 5 .

30 3- (2-Methyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propylaminedihydro- chloridezout (Alternatieve procedure)

Stap (1) .

35 2-13-(2-Methylbenzothiazool-5-yl)propyl)isoindool-1,3-dion 102570Ö

I 74 I

I _ j r^rN I

I 5 ° I

I I

I Aan een slurrie van 2-(2-propenyl)-ΙΗ-isoindool- I

I 1,3(2H)-dion (18,7 g, 0,1 mol) (allylftaalimide: Journal I

I of Organic Chemistry, (1952), 17, 68-76) in THF (38 ml, 2 I

I 10 ml/g) werd een oplossing (0,5 M) van 9-BBN in THF (240 ml, I

I 1,2 eq.) in 45 minuten toegevoegd, waarbij de temperatuur I

I tussen 0 en 5°C werd gehouden. Men liet de oplossing ver- I

I volgens in één uur opwarmen tot omgevingstemperatuur en I

I werd gedurende nog 1 uur geroerd. Een oplossing van K2CO3 I

I 15 (27,6 g, 0,20 mol, 2 eq.) in 50 ml water werd in 15 minu- I

I ten .toegevoegd, gevolgd door 2-methyl-6-broom- I

I benzothiazoöl (20,5 g, 0,09 mol, 0,9 eq.) dat was opgelost I

I in DMF (120 ml), en dichloor [1,1' -bis(difenylfosfino) - I

I ferroceen]palladium(II)dichloormethaanadduct (2,4 g, 0,03 I

I 20 eq.). Het reactiemengsel werd gedurende 1 uur verwarmd I

I tot 50°C en vervolgens onmiddellijk afgekoeld tot omge- I

I vingstemperatuur. Water (260 ml, 19 ml/g) en t-BME (560 I

I ml, 30 ml/g) werden toegevoegd en de oplossing werd ge- I

I roerd. Het reactiemengsel werd gefiltreerd door een fil- I

I 25 terhulp om de vaste deeltjes te verwijderen. De fasen I

I werden gescheiden en de bovenste organische fase werd be- I

I houden. De organische fase werd door middel van vacuüm- I

I filtratie geconcentreerd tot ongeveer 3 ml/g met betrek- I

I king tot het theoretische product. De donkere slurrie I

I 30 werd gedurende 30 minuten bij 0 tot -5°C fijngewreven, ge- I

I filtreerd onder vacuüm en vervolgens gewassen met gekoelde I

I t-BME (0,4 1, 4,5 ml/g) . De ontstane vaste stof werd ge- I

I durende de nacht onder vacuüm gedroogd bij 55°C, hetgeen I

I 2- [3- (2-methylbenzothiazool-5-yl)propyl)isoindool-1,3-dion I

I 35 (20,5 g, 0,061 mol, 68%) gaf. I

I 1025709 I

75 . Sm.p. = 126°C. . .

^-NMR (cU-DMSO, 300 MHz), 5: 1,95-1,98 (m, 2H) , 2,72-2,77 (τη, 5H),. 3,63 (t, 2H) , 7,32 (d, 1H), 7,75 (d, 1H),7,74- 7,83 (m, 5H).

5

Stap (2) 3-(2-Methyl-1,3-benzothiazool-6-yl)propylaminedihydro-chloridezout: io fr ηΓ ^—

.2HCI

15 Aan een slurrie van 2-[3-U-methylbenzothiazool-S- ylJpropyl) isoindool-1,3-dion (20 g, 0,06 mol) in water (130 ml, 6,5 ml/g) en ethylalcohol (200 ml, 10 ml/g) werd methylamine in water (40 gew./gew. oplossing, 117 g, 1,54 mol, 26 eq.) in 10 minuten toegevoegd, hetgeen een oplos-20 sing vormde. De oplossing werd gedurende 18 uur geroerd bij 25°C. Dichlobrmethaan (300 ml, 15 ml/g) werd toege-voegd en het reactiemengsel gedurende 15 minuten geroerd. De fasen werden gescheiden en. de organische., fase werd behouden. Het resterende product werd uit de waterfase ge-25 extraheerd met dichloorméthaan. (100 ml, 5 ml/g). De gecombineerde organische fasen werden gewassen met 1 M K2C03 (300 ml, 15 ml/g). De fasen werden gescheiden en de organische fasë wérd gewassen met water (300 ml, 15 ml/g). De organische fase werd onder vacuüm ingedampt tot een klein 30 volume en er werd isopropylalcohol toegevoegd, hetgeen éen .uiteindelijk reactievolume van 10 ml/g met betrekking tot 2-[3-(2-methylbenzothiazool-5-yl)propyl]isoindool-1,3-dion . gaf. De oplossing in isopropylalcohol werd verwarmd tot 70°C en geconcentreerde HC1. (12,5 ml, 0,125 mol, 2,1 eq.) 35 in 10 minuten toegevoegd. IPA (90 ml, 4,5 ml/g) werd ver- 1Ö 25 709

I 76 I

I wijderd door destillatie onder atmosferische druk. De I

I slurrie die ontstond door afkoelen tot 25°C van de reac- I

I tie-oplossing werd gedurende 1 uur bij 0- -5°C afgefil- I

I treerd onder vacuüm en gewassen met gekoelde IPA (40 ml, 2 I

I 5 ml/g). Het product werd gedurende de nacht onder· vacuüm I

I gedroogd bij 55°C, hetgeen 3-(2-methyl-l,3-benzothiazool- I

I e-yDpropylaminedihydrochloridezout [12,0 g, 0,058 mol I

I (72%)] gaf; sm.p. » 215°C. I

I 10 Bereiding 6 I

I 3- (2-Ethyl-l, 3-benzothiazool-6-yl)propylaminedihydro- I

I chloridezout I

I rsi#rvrN I

I 15 I

I .2HCI I

I 20 I

I Dit 2-ethylthiazooltussenproduct werd bereid op een I

I wijze die analoog was aan die van bereiding 3, behalve dat I

I dichloormethaan als het eerste oplosmiddel in plaats van I

I dioxaan werd gebruikt. I

I 25 ^-NMR (CDCls, 400 MHz) ba: 8,04 (1H, s) , 7,95 (1H, d) , I

I 7,62 (1H, d) , 3,36 (2H, k) , 3,02-2,88 (4H, m), 2,10-2,02 I

I C2H, m) , 1,53 (3H, t) ; m/z: 221 (MH+) . I

I Bereiding 7 I

I 30 tert-Butyl-(2R)-2-methyl-3-[1-({[3-(2-methyl-l,3-benzo- I

I thiazool-6-yl)propyl]amino]carbonyl)cyclopentyl]propanoaat I

I 35 I

I 1025709 I

77 ! H — ' o o

Een oplossing van 1-[ (2R) -3-tert-butoxy-2-methyl-3-5 oxopropyl] cyclopentaancarbonzuur [WO 0279143A1] (.6,8 g, 26,5 mmol) in isopropylacetaat (30 ml) werd toegevoegd aan . een oplossing van 1,1'-carbonyldiimidazool (4,76 g, 29,3 mmol, 1,1 equivalent) in isopropylacetaat (60 ml), het mengsel gedurende-3 uur verhit tot 60°C en vervolgens ge- 10. durende de nacht geroerd bij kamertenqperatuur. Een klein volume werd verwijderd, drooggedampt en vervolgens onderzocht door middel van ^-NMR-spectroscopie. Dit wees erop dat de reactie verliep tot een omzetting van ongeveer 90% (Me-doublet voor uitgangszuur bij δ=1,15, Me-doublet voor 15 acylimidazool bij δ » 1,05). Nog een portie 1,1'- carbonyldiimidazool (645 mg, 4 mmol, 0,15 equivalent) werd toegevoegd en het mengsel gedurende nog 1 uur geroerd bij 60°C. Men liet het reactiemengsel afkoelen tot 40°C, triethylamine (4,3 ml, 31 mmol, 1,1 equivalent) en 3-.(2-20 methyl-1,3-benzothiazool-6-yl)propylaminedihydrochloride-zout uit bereiding 3, 4 of 5 (7,1 g, 25,4 mmol, 0,96 equivalent) werden toegevoegd en het mengsel werd gedurende de nacht , verhit tot 60°C. ; Dunnelaagchromatografie liet zien dat de reactie niet volledig was verlopen. Derhalve werd 25 nog een portie aminodihydrochloride toègevoegd (650 mg, 2,3 mmol, 0,09 equivalent), tezamen met triethylamine (330 μΐ, 2,3 mmol, 0,09 equivalent) en het mengsel gedurende de nacht verhit tot 60°c. Men liet het reactiemengsel afkoe-..· len tot kamertemperatuur en vervolgens werd verdund met · 30 water (120 ml en' 2 M zoutzuur (120 ml). Het mengsel werd geëxtraheerd met diethylether (2 x 4 00 ml) en de gecombineerde extracten werden gewassen met 2 M NaOH (2 x 100 ml), gedroogd (MgS04) en ingedampt. Het verkregen olieachtige residu werd gezuiverd door flash-chromatografie [Si02, 1025709

78 I

methanol in dichloormethaan, 0,5% tot 1,5%], hetgeen de I

titelverbinding als een heldere olie (11,5 g, 98%) ople- I

verde. I

^-NMR (CDC13, 500 MHz) 6h: 7,85 (1H, d) , 7,63 (1H, d) , I

5 7,27 (1H, dd), 5,77 (1H, brs) , 3,35-3,25 (2H, m)·, 2,82 I

(3H, s), 2,77 (2H, m), 2,33 (1H, m) , 2,03-2,03 (2H, m) , I

1,89 (3H, m), 1,68-1,55 (5H, m) , 1,45-1,44 (2H, s) , 1,42 I

(9H, s), 1,10 . (3H, d). I

13C-NMR (CDCI3, 125 MHz) 5C: 176,6, 176,6, 166,5, 151,5, I

10 135,8, 126,9, 122,1, 120,8, 80,2, 54,6, 42,4, 39,3, 38,4, I

37,3, 35,0, 33,4, 31,6, 28,0, 24,3, 23,8, 20,0, 19,6. I

.m/z (ES*) : 467 MNa+. I

Een alternatieve procedure voor de titelverbinding I

wordt gegeven in de onderstaande bereiding 8. I

15 I

Bereiding 8 I

tert-Butyl-(2R)-2-methyl-3-[1-(([3-(2-methyl-l,3-benzo- I

thiazool-6-yl)propyl]amino)carbonyl)cyclopentyljpropanoaat I

(Alternatieve procedure) I

20 I

Λ I h _ I

γΟγ^Ν^^ΛΛ^ I

1 ° O I

25 I

Aan een slurrie van 1,1'-carbonyldiimidazool (154,6 I

g, 1,02 mol) in isopropylacetaat (2,5 ml/g) die op 60°C I

werd gehouden, werd een oplossing van 1-[(2R)-3-tert- I

30 butoxy-2 -methyl-3-oxopropyl]cyclopentaancarbonzuur [WO I

0279143A1] (283,4 g, 0,93 mol) in isopropyl acetaat (2,2 I

ml/g) gedurende 2 uur toegevoegd onder een atmosfeer van I

stikstofgas. De resterende oplossing van 1-[(2R)-3-tert- I

butoxy-2-methyl-3-oxopropyl]cyclopentaancarbonzuur werd I

35 gewassen met isopropylacetaat (0,3 ml/g). De oplossing I

1025709 I

79 werd gedurende nog 5 uur op 60°C gehandhaafd, geroerd en vervolgens liet men afkoelen tot kamertemperatuur. 3-(2-Methyl-1,3-benzothiazool-6-yl)propylaminedihydrochloride-zout uit bereiding 3, 4 of .5 (259,8 g, 0,93 mol) werd aan 5 de oplossing toegevoegd. Triethylamine (188,3 g, 1,86 mol) werd in 30 minuten toegevoegd. Het mengsel werd in 10 minuten aan dé kook gebracht onder terugvloeiing en vervolgens werd gedurende 4 uur onder terugvloeiing gehouden, waarna men vervolgens liet afkoelen tot kamertempera-10 tuur. Het mengsel werd gefiltreerd om het onoplosbare materiaal te verwijderen en er werd gewassen met isopropyla-cetaat (2,0 ml/g). De wasvloeistof werd gecombineerd met het filtraat. Water (2,0 ml/g) werd toegevoegd en het mengsel aangezuurd tot pH=5,0 door toevoegen van 5 M zout-15 zuur (375 ml) . Het mengsel werd gefiltreerd om onoplosbaar materiaal te verwijderen. De fasen werden gescheiden en de bovenste organische fase werd behouden. Deze werd vervolgens gewassen met 0,5 M kaliumcarbonaatoplossing in water (238 ml), de fasen werden opnieuw gescheiden en de 20 bovenste organische laag werd behouden. Deze werd gewassen met verzadigde zoutoplossing tot de pH minder dan 9,0 was. Deze oplossing werd verdund met isopropylacetaat tót 5 ml/g, dat vervolgens werd gedestilleerd, waarna men het oplosmiddel verving door tolueen, tot bij atmosferische 25 druk een constant volume werd gehandhaafd. Voor analytische doeleinden kon een monster worden drooggedampt, hetgeen het product als een olie (3,89 g, 0,87 mol, 94% opbrengst) gaf.

30 Bereiding 9 tert-Butyl-3-[1-(([3-(2-ethyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propyl]amino)carbonyl)cyclopentyl]propanoaat 35 1025709

80 I

Ο η I

*0 0. I

5 I

1- (3-tert-Butoxy-3-oxopropyl)cyclopentaancarbonzuur I

[WO 0279143A1) (180 mg, 0,7 tnmol) werd gemengd tezamen met I

het 3-(2-ethyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propylaminedihydro- I

chloridezout uit bereiding 6 (180 mg, 0,65 mmol) , 1-(3- I

10 dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimidehydrochloride (135 I

mg, 0,7 mmol), 1-hydroxybenzotriazool (95 mg, 0,7 mmol) en I

triethylamine (400 μΐ, 2,8 mmol) in dimethylformamide (7 I

ml). Het reactiemengsel werd gedurende de nacht geroerd I

bij 60 °C. Na af koelen tot kamertemperatuur werd het meng- I

15 sel in vacuüm ingedampt en het residu verdund met water I

(50 ml) . Het mengsel werd geëxtraheerd met diethylether I

(3 x 50 ml), de gecombineerde organische fracties werden I

gedroogd met MgS04 en vervolgens ingedampt. Zuivering door I

flash-chromatografie [Si02; ethylacetaat in pentaan (15 tot I

20 20%)] leverde de gewenste verbinding als een lichtbruine I

olie op. I

^H-NMR (CDC13, 400 MHz) 6h: 7,87 (1H, d) , 7,65 (1H, d) , I

7,26 (1H, dd), 5,63 (1H, brs), 3,30 (2H, k), 3,12 (2H, k), I

2,75 (2H, t), 2,20-2,14 (2H, m), 1,98-1,80 (6H, m) , 1,68- I

25 1,58 (5H, m), 1,45 (3H, t), 1,42 (9H, s); I

m/z (ES*) : 467 (MNa*) , 445 (MH+) . I

Als alternatief werd de titel verbinding- gemaakt met I

behulp van een werkwijze die analoog was aan die welke I

werd beschreven in bereiding 7. I

30 I

Bereiding 10 I

tert-Butyl-(2R)-2-methyl-3-[1-(([3-(2-ethyl-l,3-benzothia- I

zool-6-yl)propyl]amino)carbonyl)cyclopentyl]propanoaat I

35 I

1025709 I

81 i C3 h m ^—\ v?y^^Ns/s/^s x I o o 5

De titelverbinding werd bereid met behulp van een werkwijze die analoog was aan die welke werd beschreven voor bereiding 9, door koppelen van het 3-(2-ethyl-l,3-10 benzothiazool-6-yl)propylaminedihydrochloridezout uit bereiding 6 en 1-[ (2R)-3-tert-butoxy-2-methyl-3-oxopropyl]-cyclopen-taancarbonzuur [WO0279143A1].

^-NMR (CDC13, 400 MHz) δκ: 7,87 (1H, d) , 7,66 (1H, s) , 7,27 (1H, m) , 5,77 (1H, brm) , 3,29 (2H, m) , 3,13 (2H, k) , 15 2,77 (2H,. m) , 2,31 (1H, m) , 2,08-1,96 (2H, m) , 1,70-1,43 (10H, m), 1,45 (3H, t), 1,43 (9H, s), 1,10 (3H, d); m/z (ES+) : 481 (MNa+) , 459 (MH+) .

Bereiding 11 20 1-(2-tert-Butoxycarbonylethyl)cyclohexaancarbonzuur "Ύ -

1 O O

Cyclohexaancarbonzuur (2,89 g, 22,6 mmol) werd opgelost in THF (30 ml) en deze oplossing werd in een zodanige 30 snelheid toegevoegd aan een oplossing van lithiumdiisopro-pylamide, die was gekoeld tot -15°C (2M in THF/ n-heptaan/ ethylbenzeen, Aldrich) (24,3 ml, 48,6 mmol), dat de tempe-. ratuur beneden 0eC bleef. Het reactiemengsel werd vervolgens gedurende 2,5 uur bij 0°C geroerd voordat opnieuw 35 werd gekoeld tot -15°C en tèrt-butyl-3-broompropionaat (5 f025709

I 82 I

I g, 23,9 tnmol) in THF (50 ml) in een zodanige snelheid werd I

I toegevoegd dat de temperatuur beneden 0°C bleef. Men liet I

I het reactiemengsel op kamertemperatuur komen en er werd I

I gedurende de nacht geroerd voordat de reactie werd afge- I

I 5 broken door de toevoeging van 2M HC1 en het mengsel werd I

I geëxtraheerd met 2 x 200 ml ethyl acetaat. De gecombineer- I

I de organische lagen werden gedroogd (MgS04) en vervolgens I

I ingedampt tot een oranje olie. Zuivering door flash- I

I chromatografie iSi02,· dichloormethaan/ methanol / NH3 (s.d. I

I 10 = 0,880) (97:3:0,5)) leverde de titelverbinding als een I

I gomachtige olie (800 mg, 14%) op. I

I ^-NMR (CDCls, 400 MHz) δκ: 2,22 (2H, m) , 2,07-2,00 (2H, I

I m), 1,86 (2H, m), 1,45-1,16 (8H, m), 1,41 (9H, s). I

I m/z (ES+) : 255 (M-H4) I

I 15 I

I Bereiding 12 I

I tert-Butyl-3-(l-{[3-(2-ethyl-l,3-benzothiazool-6-yl)pro- I

I pyl) carbamoyl}cyclohexyl)propanoaat I

I 20 I

I v C J H I

I ^°s^sX,N I

I >00 I

I 25 I

I De titelverbinding werd bereid met behulp, van een I

I werkwijze die analoog was aan die welke werd beschreven I

I voor bereiding 9 met 3-(2-ethyl-l,3-benzothiazool-6- I

I yDpropylaminedihydro-chloridezout uit bereiding 6 tezamen I

I 30 met .1-[(2R)-3-tert-butoxy-2-methyl-3- I

I oxopropyl)cyclohexaancarbonzuur uit bereiding 11. I

^-NMR (CDCI3, 400 MHz) δκ: 7,88 (1H, d), 7,65 (1H, s) , I

7,27 (1H, m), 5,65 (1H, brm), 3,34 (2H, m) , 3,14 (2H, k) , I

2,77 (2H, m), 2,15 (1H, m), 1,95-1,27 (14H, m) , 1,45 (3H, I

35 t) , 1,41 (9H, s); I

1025709 I

83 m/z (ES+) : 481 (MNa+), 459 (MH+) .

Bereiding 13 tert-Butyl-3- (l-( [3- (2-methyl-l,3-benzothiazool-6-yl)pro-5 pyl ] carbamoyl) cyclohexyl) propanoaat \ h ΓΤ y— 10 o o 15 De ti telverbinding werd bereid met behulp van een werkwijze die analoog was aan die welke werd beschreven voor bereiding 9, met 3-(2-methyl-l,3-benzothiazool-e- yl) propylamine-dihydrochloridezout uit bereiding 3, 4 of 5 tezamen met 1-[ (2R)-3-tert-butoxy-2-methyl-3- 20 oxopropyl]cyclohexaan-carbonzuur uit bereiding 11.

1H-NMR (CDC13, 400 MHz) δκ: 7,85 (1H, d) , 7,64 (1H, d) , 7,27 (verborgen) (1H, dd) , 5,65 (1H, brm) , 3,33 (2H, m) , 2,81 (3H, s) , 2,77 (2H, m) , 2,18-2,13. (2H, m) , 1,93-1,79 (4H, m), 1,74-1,68 (2H, m) , 1,60-1,23 (7H, m) , 1,40 (9H, 25 s); m/z (ES+) : 467 (MNa+) , 445 (MH4) .

Bereiding 14 tert-Butyl-3-(l-([3-(2-methyl-l,3-benzothiazool-6-yl)pro-30 pyl]carbamoyl)cyclopentyl)propanoaat 'o o 35, 1025709

84 I

De titelverbinding werd bereid met behulp van een I

werkwijze die analoog was aan die welke werd beschreven I

voor bereiding 9 door koppelen van 3-(2-methyl-l,3- I

5 benzothiazool-6-yl)propylaminedihydrochloridezout uit be- I

reiding 3, 4 of 5 en tert-butyl-3-(1-carboxycyclopentyl)- I

propanoaat [WO 0279143A1]. I

^H-NMR (CDCI3, 400 MHz) δκ: 7,85 (1H, d) , 7,62 (1H, d) , I

7,25 (1H, m) , 5,63 (1H, brm) , 3,29 (2H, m) , 2,81 (3H, s) , I

'10 2,75 (2H, m) , 2,19-2,15 (2H, m) , 2,00-1,36 (11H, m) , 1,42 I

(9H, s); I

m/z (APCI+) : 431 (MH+) . I

1025709 I

Claims (16)

1. Verbinding met formule (I) 5 · r-Wn ? i) H 'ff W

10. O (I) waarin; R1 H of CH3 is,

15 R2 Ci-Ca-alkyl is en η 1 of 2 is, een tautomeer daarvan of een farmaceutisch aanvaardbaar zout, solvaat of polymorf van de verbinding of de tautomeer. 20 2. . Verbinding volgens conclusie 1, waarin η 1 is.

3. Verbinding volgens conclusie 1 of conclusie 2, waarin R1 waterstof is..

4. Verbinding volgens conclusie 1 of conclusie 2, waarin Rl methyl is.

5. Verbinding volgens één van de conclusies 1-4, waarin R2 methyl is.

6. Verbinding volgens één van de conclusies 1-4, waarin R2 ethyl is.

7. Verbinding volgens conclusie 1, die wordt gekozen 30 uit: (R)-2-Methyl-3-(l-{ [3-(2-methyl-l,3-benzothiazool-6-yl)pröpyl]carbamoyl}cyclopentyl)propaanzuur (voorbeeld 1), . 3-(l-{[3-(2-Ethyl-l,3-benzothiazool-6-yl)própyl]-35 carbamoylJcyclopentyDpropaanzuur (voorbeeld 2), 1025709

86 I (R)-2-Methyl-3-(1-{[3-(2-ethyl-l,3-benzothiazool-6- I yl) propyl ] carbamoyl} cyclopentyl) propaanzuur (voor- I beeld 4) en I 3- (l-{ [3- (2-Ethyl-l,3-benzothiazool-6-yl)propyl]car- I 5 bamoyl}cyclohexyl)propaanzuur (voorbeeld 3). I

8. Farmaceutisch preparaat dat een verbinding met formu- I le (I) volgens één van de conclusies 1-7, of farma- I ceutisch aanvaardbare zouten, solvaten of polymorfen I daarvan, en een farmaceutisch aanvaardba(a)r(e) ver- I 10 dunningsmiddel of drager omvat. I • 9. Verbinding met formule (I) volgens één van de conclu- I sies 1-7, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout, I solvaat of polymorf daarvan, voor gebruik als een ge- I neesmiddel.

10. Werkwijze voor de behandeling van een stoornis of I aandoening, waarbij bekend is, of kan worden aange- I toond, dat remming van NEP een gunstig effect produ- I ceert in een zoogdier, die omvat het toedienen aan I het zoogdier van een therapeutisch effectieve hoe- I 20 veelheid van een verbinding met formule (I) volgens I één van de conclusies 1-7, of een farmaceutisch aan- I vaardbaar zout, solvaat of polymorf daarvan. I

11. Gebruik van een verbinding met formule (I) volgens I één van de conclusies 1-7, of een farmaceutisch aan- 25 vaardbaar zout, solvaat of polymorf daarvan, bij de I bereiding van een geneesmiddel voor de behandeling I van een stoornis of aandoening, waarbij bekend is, of I kan worden aangetoond, dat remming van NEP een gun- I stig effect produceert. I

12. Verbinding volgens conclusie 9, werkwijze volgens H conclusie 10 of gebruik volgens conclusie 11, waarbij I de stoornis of aandoening wordt gekozen uit hyperten- I sie, essentiële hypertensie, pulmonale hypertensie, I secundaire hypertensie, geïsoleerde systolische hy- I 35 pertensie, hypertensie die verband houdt met diabe- I 1025709 I tes, hypertensie die verband houdt met atherosclerose en renovasculaire hypertensie, perifere vasculaire ziekte, hartinsufficiëntie, angina, nierinsufficiên-tie, acute nierinsufficiëntie, cyclisch oedeem, ziek-5 te van Menière, hyperaldosteronemisme (primair, en se cundair) , hypercalciurie, beroerte, glaucoom, obesi-tas, metabolische ziekten, metabolisch syndroom, diabetes, verminderde glucosetolerantie, diabetische re-tinopathie, diabetische neuropathie, menstruele 10 stoornissen, vroegtijdige weeën, pre-eclampsie, endo- metriose en voortplantingsstoornissen, mannelijke en vrouwelijke infertiliteit, polycystisch ovariumsyn-droom, mislukte implantatie; astma, ontsteking, leukemie, pijn, pijn door kanker, depressie, drugge-15 bruik, cirrose, epilepsie, affectieve stoornissen, dementie en geriatrische verwardheid, gastro-intestinale stoornissen, diarree, prikkelbare-darm- syndroom, wondgenezing, diabetische en veneuze ulcera en doorligwonden, septische shock, maagzuurafschei-20 ding, hypérreninisme, cystische fibrose, restenose, atherosclerose, vrouwelijke seksuele dysfunctie (fe-male sexual dysfunction, FSD), seksuele opwindings- stöornis, vrouwelijke seksuele opwindingsstoornis (female sexual arousal disorder, FSAD), mannelijke 25 seksuele dysfunctie (male sexual dysfunction, MSD), mannelijke erectiele dysfunctie (MED), hypoactieve seksuele luststoornis, orgasmische stoornis en seksuele pijnstoornis.

13. Verbinding, werkwijze of gebruik volgens conclusie 30 12, waarbij de stoornis of aandoening wordt gekozen uit vrouwelijke seksuele dysfunctie (FSD), seksuele opwindingsstoornis, vrouwelijke seksuele opwindings-stoomis (FSAD), mannelijke seksuele dysfunctie (MSD), mannelijke erectiele dysfunctie (MED), hypoac- 1025709

88 I tieve seksuele luststoornis, orgasmische stoornis en I seksuele pijnstoomis. I

14. Verbinding, werkwijze of gebruik volgens conclusie I 13, waarbij de stoornis of aandoening wordt gekozen I 5 uit vrouwelijke seksuele dysfunctie (PSD), vrouwelij- I ke seksuele opwindingsstoomis (FSAD) , mannelijke I seksuele dysfunctie (MSD) en mannelijke erectiele I dysfunctie (MED). I 1025709 I