MXPA06014480A

MXPA06014480A - Particulas incluidas en un substrato poroso para la remocion de analitos objetivo de una muestra.

Info

Publication number: MXPA06014480A
Application number: MXPA06014480A
Authority: MX
Inventors: Ruben G Carbonell
Original assignee: Pathogen Removal And Diagnosti
Priority date: 2004-06-09
Filing date: 2005-06-09
Publication date: 2007-03-21
Also published as: AU2010235889A1; AU2005254959B2; KR101248642B1; NZ551646A; EA200800787A1; IL179615A0; KR20070024716A; WO2005123952A2; AU2005254959A1; AP2006003861A0; HK1101596A1; US8163563B2; EP1766069B1; CA2569473A1; US20120129150A1; EP1766069A4; IL179615A; EA013385B1; BRPI0511977A; AU2010235889B2

Abstract

La invencion provee dispositivos, equipos de prueba y metodos para la remocion de agentes objetivo de una muestra; el dispositivo contiene una o mas matrices porosas que tienen tamanos de poro mayores de 10 mum, y una pluralidad de particulas impregnadas en las mismas; los agentes objetivo unen el dispositivo, y son removidos de la muestra.

Description

PARTÍCULAS INCLUIDAS EN UN SUBSTRATO POROSO PARA LA REMOCIÓN DE ANALITOS OBJETIVO DE UNA MUESTRA REFERENCIA RECIPROCA A LAS SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama el beneficio bajo 37 U.S.C. § 119(e) basada en la solicitud provisional de E.U.A. No. 60/617,669, presentada en octubre 13 de 2004, la cual reclama el beneficio bajo 35 U.S.C. § 119(e) para la solicitud provisional de E.U.A. No. 60/616,118, presentada en octubre 6 de 2004, la cual reclama el beneficio bajo 35 U.S.C. § 119(e) para la solicitud provisional de E.U.A. No. 60/578,061 , presentada en junio 9 de 2004, cuyos contenidos enteros se incorporan en la presente como referencia.

CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a dispositivos y métodos para la remoción de agentes objetivo de una muestra. En particular, la invención se refiere a la remoción de patógenos de muestras biológicas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El procedimiento de adsorción de especies biológicas a soportes sólidos encuentra muchas aplicaciones prácticas en la purificación, detección y remoción de moléculas objetivo de corrientes de componentes múltiples. Por ejemplo, ligandos de intercambio iónico, hidrofóbicos y de afinidad, son capaces de absorber muchos agentes preferiblemente a soportes cromatográficos que afectan su separación de soluciones acuosas. Una vez adsorbido, el agente biológico puede ser eluido como un producto, o detectado por ELISA y otros procedimientos analíticos. En algunos casos, la solución que contiene al agente biológico objetivo contiene también grandes entidades tales como eritrocitos, virus, bacterias, liposomas, leucocitos y agregados de varios tamaños. En muchos de estos casos, es deseable permitir que los grandes agregados fluyan a través de la matriz o soporte sólido sin que interfieran con la capacidad de los agentes biológicos objetivo para unirse al soporte. Esto requiere espacios de poros (es decir, intersticios) en la matriz sólida que sean bastante grandes para acomodar el flujo de las grandes entidades. Infortunadamente, los grandes espacios de poros pueden tener un área de superficie reducida que limita la capacidad de la matriz sólida para unirse a los agentes objetivo. En otros casos, es deseable filtrar realmente las grandes partículas para facilitar la separación adsortiva de los agentes objetivo más pequeño. Un ejemplo es la remoción de células de un medio de cultivo para recuperar un producto extracelular. Además, existen muchos casos en donde es deseable unir, más que filtrar, las entidades biológicas que sean muy grandes. Por ejemplo, es de importancia adsorber específicamente muchos patógenos, incluyendo priones infecciosos, virus, bacterias y toxinas, de mezclas de agentes biológicos. Estas entidades tienen con frecuencia dificultad para tener acceso a los poros pequeños que se requieren para la unión en los dispositivos de separación y purificación de muestras disponibles actualmente. Fibras o telas no tejidas, referidas también como fibras de polímero sopladas por fusión o telas unidas por hilatura, son bien conocidas y se usan para la filtración y separación de partículas finas del aire y soluciones acuosas (véase, por ejemplo, las patentes de E.U.A. Nos. 4,011 ,067 y 4,604,203, cada una de las cuales se incorpora en su totalidad en la presente como referencia). La carga de materia en partículas adsortiva en telas no tejidas, es también bien conocida en la técnica (véase, por ejemplo, las patentes de E.U.A. Nos. 4,433,024; 4,797,318; y 4,957,943, cada una de las cuales se incorpora en su totalidad en la presente como referencia). Aplicaciones incluyen respiradores faciales para la remoción de materia en partículas y contaminantes gaseosos, prendas protectoras, artículos para la retención de fluidos y paños para la limpieza de aceite. Más recientemente, se han reportado métodos para la fabricación de telas no tejidas impregnadas de partículas para separación y purificación. Véase, por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 5,328,758, incorporada en su totalidad en la presente como referencia. La patente enseña partículas funcionalizadas para la unión de ligandos de afinidad. Se describe que las partículas son sopladas en las fibras de polímero durante la etapa de soplado por fusión. La tela no tejida comprende poros que tienen tamaños de poro en la escala de 0.24 a 10 µm. de preferencia 0.5 a 5 µm. Se especifica también que el material de tela impregnado debe tener un tiempo de Gurley de por lo menos 2 segundos. El documento WO93/01880 describe un material de filtro de tela no tejida para la remoción de leucocitos, que se produce dispersando en un medio una masa de un gran número de piezas de fibras pequeñas que tienen un diámetro de fibra de no más de 0.01 µm y una longitud de aproximadamente 1 a 50 µm, junto con fibras cortas hilables y tejibles que tienen una longitud promedio de 3 a 15 mm. Las patentes de E.U.A. Nos. 4,550,123 y 4,342,811 , cada una de las cuales se incorpora en su totalidad en la presente como referencia, describen fibras y películas poliméricas microporosas que contienen partículas capaces de sorber vapores, líquidos y solutos. Partículas sorbentes típicas incluyen carbón activado, gel de sílice y materiales tipo filtro molecular. La invención como se describe en la presente, provee dispositivos y métodos para la purificación de muestras y la detección y remoción de agentes objetivo de una muestra con eficiencia y especificidad incrementadas, y ahorros sustanciales en tiempo y costo, sobre los dispositivos de la técnica anterior.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención como se revela y se describe en la presente, provee métodos, dispositivos y equipos para la remoción de agentes objetivo de una muestra. En un aspecto, la invención provee un dispositivo para la separación de por lo menos un agente objetivo de una muestra. El dispositivo contiene una o más matrices porosas que tienen tamaños de poro mayores de 10 µm, y una pluralidad de partículas impregnadas en las mismas, en donde el agente objetivo (por lo menos uno) se une a las una o más matrices porosas, partículas, o ambas, y es removido de la muestra. En una modalidad, la matriz porosa, las partículas, o ambas, tienen tamaños de poro uniformes o variables. En otra modalidad, las partículas tienen un tamaño de poro de aproximadamente 0.001 µm a aproximadamente 0.1 µm. En otra modalidad, las partículas comprenden una resina porosa que tiene poros interconectados con áreas de superficie en la escala de aproximadamente 1-2 m2/g de resina desecada a aproximadamente 300 m2/g de resina desecada. En otra modalidad, la matriz porosa comprende fibras naturales, fibras sintéticas, o ambas. En una modalidad preferida, la matriz porosa comprende por lo menos una tela no tejida. En otra modalidad, la matriz porosa es una mezcla de dos o más de los mismos tipos o diferentes tipos de telas tejidas y/o no tejidas. En otra modalidad, el dispositivo de la reivindicación 1 , en donde las partículas comprenden un polimetacrilato, una resina de metacrilato, una resina modificada, o una combinación de los mismos. En una modalidad, el dispositivo contiene una resina modificada y una o más matrices porosas que comprenden polipropileno tratado con plasma que es funcionalizado con un grupo reactivo que comprende un ligando que tiene una amina primaria y un espaciador hidrofílico que contiene unidades de polietilenglicol. En otra modalidad, las partículas están interpuestas entre las una o más matrices porosas. En una modalidad, las partículas, la matriz porosa, o ambas, son funcionalizadas con uno o más grupos reactivos. Los agentes objetivo son unidos a las partículas, matriz porosa, o ambas, por medio de absorción, adsorción, intercambio iónico, enlaces covalentes, enlaces hidrofóbicos, dipolo, cuadripolo, unión por puentes de hidrógeno, interacciones especificas y formación de especies cargadas, por medio de interacción por afinidad a ligandos específicos, o una combinación de los mismos. En otra modalidad, las partículas son resinas de polimetacrilato o metacrilato que incluyen, a manera de ejemplo y no de limitación, una matriz de polímero de FRACTOGEL™ EMD, TOYOPEARL™ o TSK-GEL™. En otra modalidad, la resina es TOYOPEARL™ Amino 650 que incluye, por ejemplo, Amino 650U, Amino 650M, o una forma acetilada parcial de Amino 650M o Amino 650U. La resina acetilada parcial incluye de aproximadamente 5% a aproximadamente 95% o más de resinas acetiladas. En una modalidad, la resina acetilada parcial incluye de aproximadamente 10% a aproximadamente 85% de resina acetilada. En otra modalidad, la resina acetilada parcial incluye de aproximadamente 20% a aproximadamente 75% de resina acetilada. En otra modalidad, la resina acetilada parcial incluye de aproximadamente 30% a aproximadamente 60% de resina acetilada. En otra modalidad, la resina acetilada parcial incluye de aproximadamente 40% a aproximadamente 60% de resina acetilada. Se pretende en la presente que por la recitación de dichas escalas especificadas, las escalas citadas incluyan también todas aquellas cantidades enteras específicas entre las escalas citadas. Por ejemplo, en la escala de aproximadamente 40 y 60%, se pretende que abarque también 45%, 50%, 55%, 57%, etc., sin que se cite realmente cada escala específica con la misma. En otra modalidad, la resina incluye resinas húmedas (es decir, completamente prehídratadas), resinas secas (es decir, no prehidratadas antes del contacto con la muestra, y/o desecadas previamente pero hidratadas antes del contacto con la muestra). El uso de una resina húmeda y/o seca acetilada parcial, se contempla también dentro del alcance de la invención. En otro aspecto, el dispositivo contiene una matriz tejida o no tejida porosa funcionalizada que tiene la capacidad de adsorber los agentes objetivo. En una modalidad, el dispositivo contiene una matriz no porosa, así como una matriz porosa, de las cuales una o ambas matrices pueden ser funcionalizadas. En otra modalidad, la matriz porosa contiene tamaños de poro uniforme o variable mayores de 10 µm. En otro aspecto, la invención provee métodos para la separación de por lo menos un agente objetivo de una muestra, que comprende: (a) proveer una muestra que contiene potencialmente uno o más agentes objetivo; (b) proveer un dispositivo que comprende (i) una o más matrices porosas que tienen tamaños de poro mayores de 10 µm, y (ii) una pluralidad de partículas impregnadas en la matriz porosa, en donde las partículas tienen la capacidad de unir por lo menos un agente objetivo; (c) someter la muestra al dispositivo; (d) unir por lo menos un agente objetivo a las partículas, las una o más matrices porosas, o ambas; y (e) separar por lo menos un agente objetivo de la muestra. En otro aspecto, la invención provee equipos de prueba para la separación, detección y purificación de muestras objetivo, que comprenden uno o más de los siguientes: (a) un dispositivo que contiene una matriz porosa que tiene tamaños de poro mayores de 10 µm, y una pluralidad de partículas impregnadas en la misma, (ii) un contenedor que contiene uno o más de reguladores de pH, reactivos, agentes químicos, reactivos de funcionalización, enzimas, agentes de detección o materiales de control, (iii) instrucciones para el uso del equipo de prueba, y (iv) materiales de empacamiento. Otras modalidades preferidas de la invención serán evidentes para los expertos en la técnica a la luz de lo que se sabe en la técnica, a la luz de los siguientes dibujos anexos y descripción de la invención, y a la luz de las reivindicaciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 describe una representación esquemática para telas no tejidas impregnadas de resina (RINs). Las telas no tejidas tienen un tamaño de poro de aproximadamente 12 µm, y están impregnadas con un soporte de resina poroso. El tamaño de poro medio es suficientemente grande para permitir que eritrocitos fluyan libremente a través del dispositivo sin que exhiban signo alguno de daño. Partículas (10), fibras (20), partículas impregnadas (11) y tela no tejida (21), se muestran en la misma. La figura 2 describe una representación esquemática de un dispositivo formado de hojas cuadradas de una tela tejida o no tejida. Una disposición escalonada de hojas de tela tejida o no tejida es recubierta con ligandos de afinidad sobre ambos lados. La muestra fluye en una trayectoria tortuosa entre las hojas. El tamaño de poro de las hojas se ajusta de acuerdo a la aplicación deseada. La figura 3 describe una micrografía electrónica de barrido de la capa interior/interior de la muestra 13 calandrada a 65.5°C, y 1785 kg/m con resina. La micrografía muestra áreas de las cavidades de la muestra 13 a aumento de 50X. La figura 4 muestra una micrografía electrónica de barrido de la capa interior/exterior de la muestra 11 calandrada a 82.2°C y 7140 kg/m, con resina. La micrografía muestra áreas de las cavidades de la muestra 11 a aumento de 50X. La figura 5 muestra una gráfica de barras que indica los resultados de una prueba de Micro BCA de 12 fracciones colectadas para el diferente número de capas de membrana (matriz porosa). Se mostraron diferentes concentraciones de ß-lactoglobulína en fracciones de flujo pasante de una solución que pasa a través de una capa de membrana incluida en resina ("resina" marcada), o una capa de membrana ("control" marcado). La figura 6 muestra una gráfica de barras que indica los resultados de una prueba de Micro BCA de 12 fracciones colectadas para el diferente número de capas de membrana. Se mostraron diferentes concentraciones de ß-lactoglobulina en fracciones de flujo pasante de una solución que pasa a través de dos capas de membrana incluidas en resina ("resina" marcada), o dos capas de membrana ("control" marcado). La figura 7 muestra una gráfica de barras que indica los resultados de una prueba de Micro BCA de 12 fracciones colectadas para el diferente número de capas de membrana. Se mostraron diferentes concentraciones de ß-lactoglobulina en fracciones de flujo pasante de una solución que pasa a través de tres capas de membrana incluidas en resina ("resina" marcada), o tres capas de membrana ("control" marcado). La figura 8 muestra una gráfica de barras que indica los resultados de una prueba de Micro BCA de 12 fracciones colectadas para el diferente número de capas de membrana. Se mostraron diferentes concentraciones de ß-lactoglobulina en fracciones de flujo pasante de una solución que pasa a través de cuatro capas de membrana incluidas en resina ("resina" marcada), o cuatro capas de membrana ("control" marcado). La figura 9 describe la distribución de partículas, sobre rollos de membrana. Se dispersaron uniformemente partículas de resina sobre la membrana inferior, sin derrame sobre los bordes de la membrana.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Métodos, dispositivos y equipos para la separación eficiente de moléculas objetivo de una muestra, se describen en la presente. Los métodos, equipos y dispositivos de la invención son útiles en una variedad de aplicaciones que incluyen purificación, separación y procesamiento de productos génicos expresados de células, producción y suministro de agentes biofarmacéuticos, y aplicaciones de pronóstico, diagnóstico y/o detección, entre otros. La invención descrita en la presente define dispositivos novedosos que separan diferentes componentes de una muestra, y permiten el flujo de especies más grandes a través del dispositivo, mientras que proveen grandes áreas de superficie para unir los agentes objetivo. Aplicaciones particulares de esta invención, incluyen la remoción de patógenos tales como priones, virus, hongos, bacterias y toxinas de muestras biológicas tales como, por ejemplo, una muestra de sangre que incluye sangre entera, composiciones que contienen eritrocitos, concentrados de eritrocitos, concentrados de plaquetas, plasma, derivados de plasma, leucocitos, sangre privada de leucocitos, cultivo de células de mamífero, caldos de fermentación y otros medios usados para la fabricación y el suministro de agentes biofarmacéuticos, y la preparación de agentes terapéuticos. 1. Definiciones Las definiciones usadas en esta solicitud son para propósitos ilustrativos, y no limitan el alcance de la invención. Como se usa en la presente, el término "resinas modificadas" se define ampliamente dentro del alcance de la invención, e incluye análogos, variantes y derivados funcionales de una resina con y sin un grupo funcional. La modificación incluye, por ejemplo, sustitución, deleción o adición de entidades químicas (por ejemplo, aminoácidos) respecto a una resina particular, o su grupo funcional, o ambos. Por ejemplo, sustitución con amino, acetilación y/o acetilación parcial de resinas, se incluyen en la definición de resinas modificadas. Como se usa en la presente, el término "agentes objetivo" se define ampliamente dentro del alcance de la invención, e incluye agentes químicos, biológicos o físicos que son capturados por el dispositivo de la invención. Agentes objetivo incluyen moléculas, compuestos, constituyentes de células, organelos, agregados, toxinas, priones y microorganismos tales como patógenos que incluyen virus, bacterias, hongos y protozoarios, entre otros. Las moléculas objetivo incluyen también moléculas poliméricas tales como moléculas de polinucleótidos, por ejemplo, ADN, ARN, híbrido de ADN-ARN, ARN antisentido, ADNc, ADN genómico, ARNm, ribozima, moléculas de ácido nucleico naturales, sintéticas o recombinantes, oligopéptidos, oligonucleótidos, péptidos, híbridos de ácido nucleico-péptido, antígeno, anticuerpo, fragmentos de anticuerpo, grandes proteínas, y agregados tales como vWF FVIII y HDL, entre otros Como se usa en la presente, se pretende que el término "patógeno" signifique cualquier agente rep cable que pueda encontrarse en, o que infecte a, una muestra biológica tal como una muestra de sangre Dichos patógenos incluyen los varios virus, bacterias, protozoanos y parásitos conocidos por los expertos en la técnica, que se encuentran generalmente en, o infectan a, sangre entera o componentes sanguíneos, y otros contaminantes patogénicos aún no conocidos Ejemplos ilustrativos de dichos patógenos incluyen, pero no están limitados a, bacterias tales como especies de Streptococcus, especies de Eschenchia y especies de Bacillus, virus tales como el virus de la inmunodeficiencia humana y otros retrovirus, virus de herpes, paramixovirus, citomegalovirus, virus de hepatitis (incluyendo virus de hepatitis A, hepatitis B y hepatitis C), poxvirus y togavirus, y parásitos tales como parásitos de la malaria, que incluyen especies de Plasmodium, y parásitos del género Trypanosoma Como se usa en la presente, el término "muestra" incluye cualquier muestra que contenga un agente objetivo que pueda ser capturado por el dispositivo y método de la invención Pueden obtenerse muestras de cualquier fuente que contenga potencialmente un agente objetivo Dichas fuentes incluyen animales, plantas, suelo, aire, agua, hongos, bacterias y virus, entre otros Se obtienen muestras de animales, por ejemplo, de biopsia de tejido, sangre, cabello, raspados bucales, plasma, suero, piel, ascitis, efusión pleural, fluido de toracentesis, fluido espinal, fluido linfático, médula ósea, fluido respiratorio, fluido intestinal, fluido genital, heces, orina, esputo, lágrimas, saliva, tumores, órganos, tejidos, muestras de constituyentes de cultivo de células in vitro, células fetales, células de placenta o células y/o fluido amniótico, entre otros. Como se usa en la presente, el término "medios de cultivo de células" incluye cualquier medio de cultivo procariótico o eucariótico tal como, por ejemplo, medios de cultivo de bacterias, levaduras y otros medios de cultivo microbiológicos de células, medios de cultivo de células de mamífero, cultivo de células vegetales y cultivo de insectos, caldos de fermentación, y otros medios usados para la producción y el suministro de agentes biofarmacéuticos y la preparación de agentes terapéuticos. Como se usa en la presente, el término "muestra de sangre" incluye, por ejemplo, y no a manera de limitación, sangre entera, composiciones que contienen eritrocitos (por ejemplo, concentrados de eritrocitos y concentrados de plaquetas), leucocitos y sangre privada de leucocitos, proteínas sanguíneas tales como factores de la coagulación sanguínea, enzimas, albúmina, plasminógeno e inmunoglobulina; y componentes líquidos de la sangre, tales como plasma, derivados de plasma, y composiciones que contienen plasma, entre otras muestras de sangre. Como se usa en la presente, el término "composición que contiene eritrocitos" significa sangre entera, concentrados de eritrocitos, y cualquier otra composición que contenga eritrocitos. A excepción de eritrocitos, la composición puede contener también una solución biológicamente compatible, tal como ARC-8, Nutricell (AS-3), ADSOL (AS-1), Optisol (AS-5) o RAS-2 (Erythrosol), y uno o más componentes celulares de la sangre, una o más proteínas sanguíneas, o una mezcla de uno o más componentes celulares de la sangre y/o una o más proteínas sanguíneas. Dichas composiciones pueden contener también un componente líquido de la sangre, tal como plasma. Como se usa en la presente, el término "partícula" significa formas porosas o no porosas orgánicas o inorgánicas que tienen un diámetro de aproximadamente 1 a aproximadamente 200 µm o más e incluyen, por ejemplo, y no a manera de limitación, fibras con una relación de longitud a diámetro de aproximadamente 1 µm a aproximadamente 20 µm o más, además de partículas adsortivas tales como granulos, perlas, resinas o polvos, entre otros. Como se usa en la presente, los términos "sorbente", "adsortivo" o "sorción", significan capaces de absorber y contener, ya sea por absorción o adsorción. Como se usa en la presente, el término "unión" se define ampliamente dentro del alcance de la invención, e incluye cualquier tipo de procedimientos de unión física, química o biológica entre dos entidades e incluye, por ejemplo, y no a manera de limitación, absorción, adsorción, unión por enlaces covalentes, intercambio iónico, enlaces hidrofóbícos, unión por puentes de hidrógeno, dipolo, cuadripolo o interacción por afinidad, formación de especies cargadas, y la unión de ligandos de afinidad (por ejemplo, incluyendo péptidos, olígonucleótidos, proteínas, brazos de espaciador, porciones hidrofóbicas, materiales fluorados), entre otros. Como se usa en la presente, el término "solución acabada" se refiere a una solución que ha recibido una cierta cantidad de la proteína, toxina, virus, bacterias u otros organismos objetivo, en su forma pura, parcialmente purificada o cruda. 2. Matriz porosa Los dispositivos de la presente invención comprenden una matriz porosa que tiene partículas impregnadas en la misma. La selección de una matriz porosa puede variar ampliamente dentro del alcance de la invención. Matrices útiles incluyen telas tejidas y no tejidas (tales como telas fibrosas), fibras microporosas y membranas microporosas. Estas fibras pueden hacerse de cualquier material y por cualquier método conocido en la técnica, incluyendo soplado por fusión, unión por hilatura y electrohilatura. Se desean particularmente telas fibrosas, debido a que dichas telas proveen grandes áreas de superficie, siendo preferidas las telas fibrosas no tejidas debido a facilidad de fabricación, bajo costo de material y libertad de variación en textura de fibras y densidad de fibras. Una amplia variedad de diámetros de fibra, por ejemplo, 0.05 a 50 µm, se usa en la preparación del dispositivo de la presente invención. El espesor de la matriz se hace variar para adaptar la utilidad deseada del dispositivo, por ejemplo, aproximadamente 0.1 µm a aproximadamente 100 cm de espesor, o más. La matriz puede usarse en la forma de una sola hoja, o puede apilarse como se desee para lograr la capacidad de adsorción deseada. En una modalidad, se requiere calandrado o presurización de la matriz porosa para lograr el espesor y tamaño de poro deseados. La matriz porosa de los dispositivos de la invención se hace de una amplia variedad de fibras naturales y sintéticas, de acuerdo a las propiedades físicas y químicas precisas de la matriz porosa deseada para la aplicación final. La matriz porosa de la invención se selecciona de fuentes naturales o sintéticas que incluyen, por ejemplo, poliéster, polipropileno, rayón, fibra aramídica y/o algodón, entre otras. Contemplado también dentro del alcance de la presente invención, es el uso de dos o más matrices diferentes con diferentes características químicas o físicas. En una modalidad de la presente invención, la matriz porosa es una mezcla de dos o más de los mismos tipos o tipos diferentes de telas tejidas y/o no tejidas. En otra modalidad, se usa un híbrido de dos o más matrices porosas con diferentes tamaños de poro, una matriz teniendo tamaños de poro más pequeños que actúan para capturar los materiales más pequeños, mientras que la otra matriz teniendo tamaños de poro más grandes que actúan como un filtro para materiales más grandes (leucocitos, por ejemplo). En otra modalidad, se coloca una matriz porosa funcionalizada para separaciones por afinidad con un tamaño de poro predeterminado dentro de otra membrana como soporte. 2.1. Telas no tejidas Las telas no tejidas son telas fibrosas aleatorias, formadas por medios mecánicos, en húmedo o de tendido al aire, y que tienen áreas abiertas de interconexión a través de la sección transversal. Las telas no tejidas son usualmente hojas porosas planas que se hacen directamente de fibras separadas o de película plástica o plástico fundido. Estas telas se definen ampliamente como estructuras de hoja o tela unidas entre sí, por ejemplo, enmarañando fibras o filamentos, o perforando películas mecánicamente, térmicamente o químicamente usando varias técnicas que incluyen unión con adhesivo, entrelazamiento mecánico por agujeteado o chorro de fluido, enmarañamiento, unión térmica y puntada de costura. Típicamente, las telas no tejidas tienen diámetros de flujo medio en los poros (MPF) que varían de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 µm. En una modalidad, la matriz porosa tiene un tamaño de poro de por lo menos 10 µm. En una modalidad preferida, la matriz porosa tiene un tamaño de poro de más de 10 µm. En otra modalidad, la matriz porosa tiene un tamaño de poro de más de 15 µm. Se pretende en la presente que por la recitación de dichos valores numéricos específicos, los valores citados incluyan también todas aquellas cantidades enteras específicas entre los valores citados. Por ejemplo, se pretende que más de 10 µm abarque también 12, 20, 30, 45, 70, 100, 200, 300, 400 y 500 µm, etc., sin que se cite realmente cada escala específica en la misma. El diámetro de poro medio de la tela puede seleccionarse para que corresponda al diámetro de poro deseado para el flujo de los grandes agregados en la mezcla biológica. Por ejemplo, en el caso de eritrocitos, el diámetro de poro para el flujo sería del orden de aproximadamente 12 µm. En este caso, cualquier partícula porosa o no porosa con diámetros mucho más allá de 12 µm, sería atrapada en los espacios entre las fibras, y las partículas estarían aún disponibles para adsorción de la especie objetivo. Como resultado, pueden usarse partículas de diámetro significativamente más pequeño para adsorción, mientras que permitan el flujo de las especies más grandes a través de los espacios de poros. Las telas no tejidas se hacen de fibras que, dependiendo del método de fabricación, tienen diámetros en la escala de, por ejemplo, aproximadamente 0.01 a aproximadamente 10 µm. Las fibras consisten de una amplia variedad de materiales que incluyen fibras naturales y fibras sintéticas. Las fibras naturales incluyen, por ejemplo, celulosa, algodón y lana, entre otras. Las fibras sintéticas incluyen polímeros comunes tales como polipropileno y poliéster (PET, tereftalato de polietileno). Polímeros adecuados incluyen polialquilenos tales como polietileno y polipropileno, cloruro de polivinilo, poliamidas tales como los varios nylons, poliestirenos, poliarilsulfonas, alcohol polivinílico, polibutileno, acetato etilvinílico, poliacrilatos tales como metacrilato de polimetilo, policarbonato, materiales celulósicos tales como butirato-acetato de celulosa, poliésteres tales como tereftalato de poli(etileno), poliimidas, y poliuretanos tales como poliéter poliuretanos, y combinaciones de los mismos.

Pueden prepararse también telas no tejidas de combinaciones de polímeros co-extruídos tales como poliéster y polialquilenos. Copolímeros de los monómeros de los polímeros descritos anteriormente, se incluyen también dentro del alcance de la presente invención. Además, las telas no tejidas son telas combinadas que están en mezcla íntima de fibras finas y fibras discontinuas rizadas. En una modalidad, la tela no tejida del dispositivo de la invención incluye también una tela de soporte permeable laminada a uno o ambos lados de la tela, como se describe en la patente de E.U.A. No. 4,433,024 (incorporada en su totalidad en la presente como referencia), o contiene adicionalmente fibras de refuerzo. Las telas no tejidas se hacen por diferentes medios, que incluyen soplado por fusión y unión por hilatura. Existen varios procedimientos mecánicos para la unión de telas no tejidas entre sí, por ejemplo, las membranas se soldán entre sí usando una selladora/cortadora ultrasónica, o por el uso de una prensa que aplica simultáneamente calor y presión. Los no tejidos tendidos en seco contienen capas de fibras, cada capa conteniendo fibras paralelas o posicionadas aleatoriamente. La unión con un adhesivo o calor es necesaria para la tela no tejida tendida en seco. Las telas no tejidas tendidas en húmedo, son no tejidos tipo papel que contienen una disposición aleatoria de fibras estratificadas, la estratificación resultando de la deposición de fibras a partir de una suspensión acuosa espesa. Las telas no tejidas punzonadas se caracterizan por la condición enmarañada de fibras de las que se forman, en donde el enmarañamiento resulta de la aplicación de calor, humedad y agitación a una tela fibrosa. Las telas no tejidas entrelazadas por hilatura tienen fibras enmarañadas por acción de chorros de agua a alta velocidad (procedimiento denominado también hidroenmarañamiento). 3. Partículas En un aspecto, el dispositivo de la presente invención incluye partículas, así como la matriz porosa. Las partículas tienen la capacidad de unir los agentes objetivo. Las partículas son porosas, no porosas, o ambas. En una modalidad, las partículas porosas son partículas sorbentes capaces de adsorción o absorción del agente objetivo. Las partículas se hacen de un material o una combinación de dos o más materiales, cuyos materiales sean no hinchables o hinchables en fluidos orgánicos o fluidos acuosos, y sean sustancialmente insolubles en agua o fluidos. Se ha encontrado ventajoso en algunos casos, usar partículas en dos o más escalas de tamaño de partícula que estén dentro de la escala amplia. El tamaño y la forma de las partículas pueden variar ampliamente dentro de la alcance de la invención, y dependen hasta cierto grado del tipo de soporte de matriz poroso en el cual dichas partículas se incorporan. Por ejemplo, las partículas tienen una forma esférica, una forma regular o una forma irregular, o una combinación de las mismas. Las partículas usadas en el dispositivo de la invención tienen un tamaño aparente dentro de la escala de aproximadamente 1 a 2 µm a aproximadamente 200 a 300 µm. En general, las diferencias en los tamaños de partícula útiles son dictadas por el tipo de matriz porosa en el cual las partículas se incorporan, los procedimientos y el equipo que se usan para formar la matriz porosa, y la porosidad de la matriz formada de esta manera. Por ejemplo, telas fibrosas no tejidas y matrices de polímero fibriladas, pueden formularse con la escala de tamaño entera de las partículas. De preferencia, se usan partículas de aproximadamente 40 a 200 µm de tamaño para los no tejidos, mientras que se prefieren partículas de 1 a 100 µm de tamaño para matrices de politetrafluoroetileno (PTFE) fibriladas. Incluidas también dentro del alcance de la presente invención, son partículas que tienen una escala amplia de tamaños de poro. Partículas con un tamaño de poro relativamente grande se usan para la captura eficiente de las moléculas objetivo más grandes, tales como proteínas, mientras que partículas con tamaños de poro más pequeños se usan para la captura eficiente de moléculas objetivo más pequeñas. La escala de tamaños de poro disponibles es, por ejemplo, de aproximadamente 0.001 µm a aproximadamente 0.1 µm. En una modalidad, los tamaños de poro son de aproximadamente 0.1 a 055 µm. En otra modalidad, los tamaños de poro son de aproximadamente 0.6 a 2 µm. En otra modalidad, los tamaños de poro son de aproximadamente 0.25 a 5 µm, o más. Se pretende en la presente que por la recitación de dichas escalas especificadas, las escalas citadas incluyan también todas aquellas cantidades enteras específicas entre las escalas citadas. Por ejemplo, en la escala de aproximadamente 0.1 a 0.55 µm, se pretende que abarquen también 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, µm, etc., sin que se cite realmente cada escala específica con la misma. Las partículas se hacen de carbono o un compuesto orgánico que puede ser un polímero o copolímero. Por ejemplo, se hacen partículas de un copolímero de estireno y divinilbenceno, y derivados de los mismos, éster de polimetacrilato, polímero o copolímero derivatizado de aziactona, partículas de óxido inorgánicas revestidas de materiales orgánicos, tales como sílice, alúmina, óxido de aluminio, titania, óxido de titanio, zirconia y otros materiales cerámicos, vidrio, celulosa, agarosa y una amplia variedad de diferentes polímeros que incluyen poliestireno y metacrilato de polímetilo, resinas acrílicas y otros tipos de geles usados para electroforesis, entre otros. Otras partículas adecuadas para los propósitos de esta invención, incluyen cualquier partícula que pueda ser revestida con materiales sorbentes insolubles, hinchables o no hinchables sobre sus superficies externa y/o interna. En una modalidad, las partículas se hinchan hasta un volumen de aproximadamente 2 a 5 veces o más, en comparación con su peso seco original. La función del revestimiento es proveer funcionalidades y propiedades físicas específicas, que puedan ser adaptadas de acuerdo a la prueba de separación específica deseada. Estas funciones incluyen sorción, intercambio iónico, quelación, exclusión esteárica, afinidad quiral, etc. Materiales de partícula preferidos para dichos revestimientos incluyen partículas de óxido inorgánicas, más preferiblemente partículas de sílice. Dichas partículas con superficies revestidas, son bien conocidas en la técnica; véase, por ejemplo, Snyder y Kirkland, "Introduction to Modern Liquid Chromatography", 2a. ed., John Wiley & Sons, Inc. (1979) y H. Figge et al., Journal of Chromatography 351 (1986) 393-408, e incluyen partículas de sílice modificadas y partículas de sílice con grupos orgánicos enlazados covalentemente que incluyen grupos ciano, ciciohexilo, Ce (octilo) y C?8 (octadecilo). Los revestimientos pueden aplicarse mecánicamente por entrelazamiento in situ de polímeros, o pueden ser grupos funcionales unidos covalentemente a la superficie de las partículas. La cantidad de partículas incorporadas en la matriz porosa puede variar ampliamente dentro del alcance de la presente invención. En general, la cantidad de partículas varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 99% en volumen del dispositivo. De preferencia, la cantidad es mayor de 20% en volumen, y más preferiblemente mayor de 50% en volumen. De esta manera, un dispositivo de la presente invención puede contener hasta 95% o más en peso de partículas, proveyendo de esta manera una capacidad potencialmente alta para la unión del objetivo. Las partículas de la invención soportan en general una amplia escala de valores de pH, por ejemplo, valores de pH de aproximadamente 4 o menos, a valores de pH de aproximadamente 12 o más. Las partículas de la invención son versátiles y se usan para llevar a cabo una variedad de pruebas de separación cromatográficas o no cromatográficas. Ejemplos de los métodos de separación contemplados dentro del alcance de la presente invención, incluyen separaciones de fase invertida, separaciones por afinidad, separaciones de lecho expandido, cromatografía de intercambio iónico, filtración en gel, separación cromatográfica de componentes, extracción de fase sólida, entre otros métodos para la separación, medición o colecta de agentes objetivo químicos o biológicos de otros componentes de una muestra. Las partículas se usan también para unión a, y de esta manera la separación de, agentes objetivo de polipéptidos y/o moléculas de ácido nucleico de una muestra. Una partícula preferida del dispositivo de la invención, es una resina porosa. Resinas porosas para separaciones por adsorción, están disponibles en una amplia variedad de materiales diferentes, que incluyen sílice, vidrio, celulosa, agarosa, y una amplia variedad de polímeros diferentes, que incluyen poliestireno, metacrilato de polimetilo, poliacrilamida, agarosa, hidrogel, resinas acrílicas, y otros tipos de geles usados para electroforesis. Muchas de las resinas de adsorción porosas tales como sílice, vidrio y polímeros pueden desecarse, y pueden tener poros interconectados con áreas de superficie en la escala de aproximadamente 1 a 2 m2/g de resina desecada, hasta más de 300 m2/g de resina desecada. Otros tipos de resinas son geles entrelazados que no pueden desecarse sin que se dañe la estructura. Estos tipos de resinas no tienen normalmente un área de superficie específica, puesto que los materiales son capaces de difundirse uniformemente a través de la matriz entrelazada. Contemplado también dentro del alcance de la invención, es el uso de resinas modificadas que incluyen análogos, variantes y derivados funcionales de una resina natural o modificada, o los grupos funcionales de las mismas. La modificación incluye, por ejemplo, sustitución, deleción o adición de entidades químicas (por ejemplo, aminoácidos) a una resina particular, o su grupo funcional, o ambos. Por ejemplo, sustitución con amino, acetilación y/o acetilación parcial de resinas, se incluyen dentro del alcance de la invención. Cualquier modificación al grupo funcional de una resina se incluye también dentro del alcance de las resinas modificadas de conformidad con la invención. Otros tipos de resinas naturales o modificadas útiles dentro del alcance de la invención incluyen, pero no están limitados a, fenil sepharose, butil sepharose, octil sepharose, poliestireno entrelazado con divinilbenceno, hydrocell C3 poliestireno-divínilbenceno, hydrocell C4 poliestireno-divinilbenceno, hydrocell fenil políestireno-divinilbenceno, metil HIC metacrilato-butil HIC metacrilato, fenil de alto contenido de poros amplios, fractogel EMD, resina hidrofóbica-copolímero de metacrilato de propilo fractogel EMD, resina hidrofóbica-copolímero de metacrilato de fenilo octil sepharose, fenil sepharose, Toyopearl HIC, Toyopearl Amino-650S, Toyopearl Amino-650M, Toyopearl Amino-650C, Toyopearl Amino-650EC, Toyopearl butil-650S, Toyopearl butil-650C, Toyopearl butil-620M, Toyopearl éter-650S, Toyopearl éter-650C, Toyopearl éter-650M, Toyopearl hexil-650S, Toyopearl hexil-650C, Toyopearl hexil-650M, Toyopearl fenil-650S, Toyopearl fenil-650C (PRDT), Toyopearl fenil-650M y Toyopearl 659CU (PRDT), entre otros. Todas las resinas Toyopearl están disponibles comercialmente de Tosoh Biosep, Montgomeryvílle, PA. Las resinas Sepharose están disponibles de GE Healthcare, Piscataway, NJ. Las resinas Fractogel están disponibles de Merck, Darmstadt, Alemania. Las resinas Hydrocell están disponibles a través de BioChrom Labs, Inc., Terre Haute, IN. Las resinas restantes son nombres genéricos para una variedad de materiales de base para resinas que están disponibles públicamente. Si se empacan resinas porosas en una columna, el diámetro hidrodinámico disponible para flujo es determinado por el diámetro de partícula y la fracción de huecos del lecho: tf. e ( i ) l - ¿" en donde Dh es el diámetro hidráulico equivalente para flujo entre partículas, f es el diámetro de partícula, y e es la fracción de huecos. Como resultado, para permitir que grandes especies fluyan a través de la columna, es necesario usar grandes partículas que a su vez incrementen la resistencia a la difusión para adsorción en la resina. Por ejemplo, para permitir que eritrocitos fluyan a través de la columna, son necesarias partículas de alrededor de 65 µm de diámetro que provean un diámetro de poro de 14 µm en el espacio entre las partículas, si la porosidad del lecho es de aproximadamente 0.4. 4. Telas no tejidas impregnadas de resina (RINs) La incorporación de las partículas en la matriz puede lograrse a través de varias formas. Puesto que pueden obtenerse telas no tejidas con un diámetro de poro medio controlado, es posible impregnar partículas de resina porosas tales como las descritas anteriormente, dentro de las fibras que constituyen a las telas no tejidas. Estas telas no tejidas impregnadas pueden hacerse de varias formas. Por ejemplo, pueden hidroenmarañarse partículas secas entre dos telas no tejidas previamente formadas. En forma alternativa, pueden introducirse partículas secas, mientras se estén formando las fibras por soplado por fusión o unión por hilatura. También es posible enmarañar partículas de resina mientras están húmedas, usando procedimientos de tendido en húmedo. En una modalidad, las partículas son impregnadas en fibras ya formadas por hídroenmarañamiento, y no habría unión por fusión de las partículas con la matriz de fibras de polímero. Un método de fabricación preferido, es el calandrado directo de telas no tejidas ya preparadas que podrían ser sopladas por fusión o unidas por hilatura. En una modalidad, las telas no tejidas se extienden uniformemente con partículas que se suministran a una velocidad de masa fija por calandrado directo, de modo que la membrana sea cubierta con una masa determinada de partículas por unidad de área. Una vez que las partículas se dispersan, una segunda membrana se coloca sobre la primera para hacer un sandwich, y la combinación se hace pasar a través de un rodillo de calandria con un diseño que sea capaz de unir las dos membranas entre sí a baja temperatura y presión. Las densidades de partículas sobre la superficie están en la escala de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10 gm/cm2, o más. El tamaño de poro de las membranas usadas para este dispositivo, permite que entidades más grandes tales como, por ejemplo, eritrocitos, pasen a través de las mismas, puesto que su tamaño de poro es mayor de 10 µm. Las partículas en la membrana se unen a un ligando que facilita la unión de las partículas a agentes objetivo tales como, por ejemplo, proteínas de priones de concentrado de eritrocitos y plasma. La operación del procedimiento de calandrado, requiere usualmente una alta temperatura para la unión de los no tejidos, pero la temperatura se mantiene abajo de la temperatura de fusión de las partículas, y no afecta su desempeño. En una modalidad, podrían colocarse partículas más grandes o más densas entre las membranas no tejidas por hidroenmarañamiento. La densidad y el peso de la tela no tejida pueden adquirir una amplia gama de valores que aseguren una alta densidad de partículas sobre la tela, mientras que mantienen las dimensiones deseadas de los poros. Concentraciones de partículas de aproximadamente 60% en p/p pueden impregnarse en las telas. Todos los métodos comunes para la fabricación de telas no tejidas pueden usarse para este procedimiento, incluyendo telas con dos fibras de polímero diferentes, así como fibras co-extruidas con dos polímeros diferentes. Debido a esta flexibilidad, pueden impregnarse resinas húmedas y secas. Si es necesario, pueden incluirse fibras cortadas en la tela para facilitar la captura de las partículas, mientras que se permite aún poros para flujo de las dimensiones necesarias. Las fibras cortadas tienen usualmente menos de 1.27 cm de longitud, y se preparan cortando una sola fibra que está enrollada alrededor de un huso o rodillo. El desmenuzamiento se logra mecánicamente haciendo girar cuchillas giratorias u otras superficies de corte afiladas. Pueden obtenerse fibras cortadas de una variedad de fibras poliméricas o de carbono que tengan una escala de diámetros desde muy pequeñas (menores de aproximadamente 1 µm) hasta grandes (>100 µm). En una modalidad, ligandos específicos son químicamente injertados o recubiertos sobre la fibra, y entonces la fibra es cortada hasta longitudes de aproximadamente 1.27 cm. Pueden distribuirse entonces fibras cortadas sobre una capa individual de tela no tejida (polipropileno u otro polímero) con un tamaño de poro y diámetro de fibra adecuados para permitir que grandes entidades tales como eritrocitos, pasan a través de la membrana (tamaños de poro mayores de 10 µm). Pueden suministrarse fibras cortadas hacia la membrana a una velocidad prescrita que asegure uniformidad en la distribución de las fibras. Una vez que las fibras cortadas estén sobre la superficie, una segunda capa de tela no tejida se pone arriba de las fibras cortadas, y la combinación puede hacerse pasar a través de una calandria para unir las dos capas no tejidas. En una modalidad, una membrana de matriz porosa o fibras cortadas son funcionalizadas con un ligando, y se colocan dentro de otra membrana tal como, por ejemplo, por medio de tecnología de tendido al aire. En otra modalidad, los ligandos son unidos a un polímero, que es extruido subsiguientemente en una fibra. La fibra puede cortarse para obtener segmentos pequeños que podrían integrarse fácilmente entre dos membranas. 5. Modificación de superficie Incluidas también dentro del alcance de la presente invención, son telas tejidas o no tejidas con superficie modificada (SMNs) y partículas con superficie modificada que son funcionalizadas sobre una o más superficies internas y/o externas con un grupo reactivo. La funcionalízación se logra por la adición de uno o más grupos reactivos a una superficie de la matriz porosa (por ejemplo, telas tejidas o no tejidas), partículas, o ambas. El grupo reactivo interactúa con el agente objetivo, y se une al mismo. La interacción entre el grupo reactivo y el agente objetivo, es una interacción química, física y/o biológica. En una modalidad, la matriz porosa, las partículas, o ambas, son modificadas en su superficie con un grupo funcional capaz de formar un enlace químico covalente con un agente objetivo. Grupos funcionales útiles dentro del alcance de la invención incluyen, pero no están limitados a, uno o más de los siguientes grupos: epoxi, formilo, tresilo y esteres de hidroxisuccinimida, entre otros. Otros grupos útiles dentro del alcance de la invención incluyen, pero no están limitados a, uno o más de los siguientes grupos: ácido sulfónico, aminas cuaternarias, grupos carboxílicos, aminas primarias, grupos ciano, ciciohexilo, octilo y octadecilo, oxirano, esteres de N- hidroxisuccinimida, esteres de sulfonilo, carbamato de imidazolilo, aminas cuaternarias, grupos carboxílícos, ligando de colorante, ligando de afinidad, antígeno-anticuerpo, moléculas de ácido nucleico, grupos para intercambio iónico, quelación, reacciones de oxidación/reducción, reacciones de exclusión esteárica, reacciones de catálisis, reacciones hidrofóbicas, fase invertida, y otras reacciones encontradas normalmente en separaciones cromatográficas. Los grupos funcionales, por ejemplo, ligandos, son conjugados químicamente con el soporte, o pueden ser unidos por medio de enlazadores, tales como estreptavidina, beta-alanina, glicina, polímeros que contengan glicina-serina, hidrocarburos de cadena corta de la fórmula -(CH2)-, polietilenglicol, ácido épsilon amino caproico, y enlazadores que comprendan --0(CH2)n, en donde n es de 1 a 30. Si se desea, los ligandos pueden ser unidos por uno o por varios enlazadores digeribles diferentes, por ejemplo, porciones fotolábiles o lábiles a ácido, que permitan la separación selectiva de una población de ligandos para análisis. Los ligandos separados pueden usarse, por ejemplo, como medios de purificación por afinidad para proteínas y separación enantiomérica (por ejemplo, para concentrar, aislar, detectar, caracterizar, cuantificar o identificar objetivos en una muestra), como herramientas terapéuticas de diagnóstico, catalizadores e intensificadores de reacciones químicas, y como estabilizadores selectivos de proteínas. En una modalidad, membranas no tejidas son revestidas con ligandos de afinidad como un grupo funcional, cuyos ligandos de afinidad tienen afinidad específica por priones sobre su superficie. El ejemplo de ligandos de afinidad incluye una amina primaria con un espaciador hidrofílico que contiene unidades de polietilenglicol. Los ligandos pueden colocarse sobre la membrana (por ejemplo, polipropileno tratado con plasma, de Macopharma) a través de injerto químico, o por un método de revestimiento en emulsión de látex (impregnación). 5.1. Polimerización de liqandos sobre la matriz porosa La polimerización de monómeros sobre una matriz porosa, introduce grupos epoxi sobre la superficie de estas matrices, lo cual a su vez facilita la unión química del ligando a la superficie de la matriz. En una modalidad, se aplica una emulsión de monómeros sobre telas de algodón, polipropileno, poliéster y nylon, por impregnación. La impregnación es un procedimiento continuo que se usa en la industria textil para el teñido, blanqueo y revestimiento de telas. Información adicional sobre la impregnación, se encuentra en el sitio web de Celanese LLC: www.vectranfiber.com, incorporado en la presente como referencia. La impregnación consiste en general de una serie de rodillos de compresión usados para impregnar una tela con un líquido, por paso continuo de la tela a través del líquido, y entonces entre los rodillos, para hacer salir el exceso de solución. Es posible usar una técnica de impregnación de un sólo agarre y de una sola inmersión. Habeish et al., IMPROVING COTTON DYEING AND OTHER PROPERTIES BY EMULSIÓN POLYMERIZATION WITH GLYCIDYL METHACRYLATE, American Dyestuff Repórter, abril, 26-34 (1986), cita incorporada en la presente como referencia, han aplicado emulsiones de metacrilato de glicidilo (GMA) a fibras de algodón usando técnicas de impregnación. Después de la impregnación, el exceso de agua se evapora, y la polimerización se lleva a cabo a temperaturas elevadas. La cantidad de polímero sobre la superficie de las fibras está en la escala de aproximadamente 1 a aproximadamente 10% o más. La polimerización puede llevarse a cabo también sobre telas no tejidas de PET, PP, etc., con el tamaño de poro deseado (>10 µm). 5.2. Revestimientos de látex sobre telas Se sintetizan emulsiones de látex por polimerización en emulsión convencional en agua, para obtener pequeñas partículas del polímero deseado. Varios iniciadores de radicales libres y solubles y agentes tensioactivos aniónicos y no aniónicos, pueden usarse para crear las emulsiones. En una modalidad, las emulsiones de látex son revestidas sobre la matriz porosa por impregnación como se describió anteriormente, sobre fibras individuales o telas no tejidas de PP, PET y otros polímeros. Un ejemplo de este tipo de procedimiento es provisto por De Boos y Jedlinek, APPLICATION OF EPOXI FUNCTIONAL POLIACRYLATE EMULSIÓN TO TEXTILES, J. Macromol. Sci-Chem. A17(2), 311-235 (1982), cita incorporada en la presente como referencia. 6. Métodos de uso Los métodos, equipos y dispositivos de la invención, son útiles en una variedad de aplicaciones que incluyen pronóstico, diagnóstico, detección, purificación, separación, procesamiento de productos génicos expresados in vitro, y la producción y el suministro de agentes biofarmacéuticos. Esta invención es aplicable a cualquier dispositivo que esté disponible comúnmente para operaciones de membrana, desde placa plana, bobinado espiral o incluso dispositivos de cartucho de fibras huecas. Puede inducirse el flujo a través del dispositivo por cualquier medio común, desde gravedad hasta bombas, dependiendo de la disminución de presión y la magnitud de flujo deseadas. Las técnicas de purificación y extracción de la invención ofrecen ventajas sobre las técnicas de purificación convencionales, reduciendo el número de pasos de purificación, mejorando los rendimientos, incrementando la pureza, y superando las limitaciones asociadas con los métodos tradicionales. Los dispositivos de la invención son altamente sensibles, capaces de separar cantidades diminutas de patógenos de una muestra. En una modalidad, los dispositivos de la presente invención se usan para la remoción de patógenos tales como priones, que incluyen PrPc, PrPse, PrPres, virus, bacterias y toxinas de sangre entera, concentrados de eritrocitos, concentrados de plaquetas, plasma, derivados de plasma, leucocitos, sangre privada de leucocitos, cultivo de células de mamífero, caldos de fermentación, y otros medios usados para la producción y el suministro de agentes biofarmacéuticos y la preparación de agentes terapéuticos. Pueden separarse patógenos múltiples de la muestra concomitantemente y rápidamente por medio de los dispositivos de la presente invención, de cualquier corriente en la industria del procesamiento de plasma destinada a la producción de productos terapéuticos y/o farmacéuticos. En particular, los métodos y dispositivos de la presente invención optimizan el procedimiento de purificación de proteínas, y mejoran el procedimiento de fabricación de agentes biofarmacéuticos, incrementando la eficiencia y pureza. Los agentes biofarmacéuticos son fármacos que son proteínas, péptidos u otros polinucleótídos complejos o macromoléculas basadas en proteínas (referidos en conjunto como "productos génicos"). Su procedimiento de fabricación implica la recuperación del producto génico deseado de la biomasa de su hospedero, tal como plasma u otras fuentes biológicas humanas y no humanas (por ejemplo, cultivos de células recombinantes o no recombinantes, leche de animales transgénicos o extractos de plantas recombinantes o no recombmantes). La separación de rendimientos comercialmente viables de la proteína deseada de una biomasa es desafiante, ya que la última contiene proteínas, moléculas de ácido nucleico y otras entidades químicas de ocurrencia natural no deseadas del hospedero. Los procedimientos de separación y purificación de proteínas presentan desafíos únicos debido a la variedad de proteínas, la naturaleza diferente de impurezas y contaminantes posibles, y la cantidad de producto que se va a separar de los medios. Las tecnologías de purificación convencionales implican en general una serie de pasos de purificación. Dentro de cada paso, el rendimiento disminuye y los costos de fabricación aumentan. Los costos de separación y purificación de proteínas representan típicamente más de 50% del total de los costos de fabricación. En otra modalidad, los dispositivos de la invención están diseñados de modo que realicen dos operaciones simultáneas: filtración, asi como adsorción. En esta modalidad, el tamaño de poro de la tela es reducido suficientemente para rechazar materia en partículas de gran tamaño, mientras que al mismo tiempo mantiene un tamaño de poro bastante grande para permitir el paso de la muestra que contiene a la molécula deseada. Esta tecnología logra pasos simultáneos de filtración y adsorción en un sólo dispositivo, y reemplaza a la filtración por membrana seguida de cromatografía de columna adsortiva. Por ejemplo, los dispositivos de la invención hacen posible adsorber una molécula deseada o no deseada secretada extracelularmente directamente de un medio de cultivo. En otra modalidad, los dispositivos de la invención se usan como una alternativa a columnas para técnicas de remoción adsortiva en la industria biotecnológica. Estas técnicas usan interacciones bioquímicas tales como, por ejemplo, intercambio iónico, quelación, reacciones de oxidación/reducción, exclusión esteárica, catálisis, interacción hidrofóbica, fase invertida, ligando de colorante, ligando de afinidad, antígeno-antícuerpo, y otras interacciones encontradas normalmente en las técnicas cromatográficas y/u otras técnicas de separación. 7. Equipos de prueba Contemplados también dentro del alcance de la invención, son equipos de prueba para la purificación y separación de muestras de agentes objetivo de la muestra. Los equipos de prueba completos contienen soluciones y dispositivos para la separación y purificación del objetivo de muestras biológicas. Por ejemplo, el equipo de prueba contiene una placa de 96, 384 ó 1536 cavidades para la purificación de muestras de alto rendimiento, y/o soluciones para la unión de ligandos a las partículas dentro del dispositivo de la invención para construir según especificaciones, proteínas individuales, anticuerpos y soluciones requeridas para la separación de proteínas en un formato de placa. En general, los equipos de prueba de la invención contienen uno o más de los siguientes: (1) uno o más contenedores que contienen a los dispositivos como se describen en la presente; (2) instrucciones para poner en práctica los métodos descritos en la presente; (3) uno o más componentes de prueba; y (4) materiales de empacamiento. Los dispositivos descritos en la presente son empacados para incluir muchos de los componentes necesarios, si no todos, para la realización de los métodos de separación de la invención. Por ejemplo, los equipos de prueba incluyen al dispositivo que contiene a la matriz porosa y las partículas, además de uno o más de reguladores de pH, reactivos, agentes químicos, reactivos de funcionalización, enzimas, agentes de detección, materiales de control, o similares, entre otros. En una modalidad, el equipo contiene además los grupos funcionales en contenedores separados, y los grupos funcionales tendrían que ser unidos a las partículas y/o la matriz porosa, antes de que se realice una prueba. En forma alternativa, el dispositivo puede proveerse en el equipo sin grupos funcionales, en cuyo caso la matriz porosa, las partículas, o ambas, son de preferencia pre-funcionalizadas. Los dispositivos de la invención pueden ser de cualquier tamaño y forma deseados. De preferencia, el dispositivo es un material tipo hoja el cual, por ejemplo, está en forma de un disco o tira. Otros artículos que pueden proveerse como parte del equipo de prueba, incluyen jeringas de superficie sólida, pipetas, probetas y contenedores. El revestimiento de la matriz porosa o las partículas con materiales de monocapa o materiales más densos, provistos por entrelazamiento in situ de polímeros, o uniendo covalentemente moléculas funcionales sobre las superficies de la matriz porosa o las partículas, permite la optimización de la selectividad cromatográfica y la eficiencia de separación. La detección puede facilitarse acoplando la matriz porosa, las partículas, o ambas, a un agente detectable. Ejemplos de agentes detectables incluyen, pero no están limitados a, varias enzimas, grupos prostéticos, materiales fluorescentes, materiales luminiscentes, materiales bioluminiscentes, materiales radiactivos, colorantes dispersos, partículas de oro, o una combinación de los mismos.

EJEMPLOS Los expertos en las técnicas relevantes entenderán que varias otras modificaciones y adaptaciones adecuadas a los métodos de aplicaciones descritos en la presente, son fácilmente evidentes a partir de la descripción de la invención contenida en la misma, en vista de la información conocida por los expertos en la técnica, y pueden hacerse sin que se aparten del alcance de la invención, o cualquier modalidad de la misma. Habiendo descrito ahora la presente invención en detalle, la misma se entenderá más claramente haciendo referencia a los siguientes ejemplos, los cuales se incluyen con la misma solamente para propósitos de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la invención.

EJEMPLO 1 Telas no tejidas con superficie modificada (SMNs) Las telas no tejidas con superficie modificada son especialmente útiles cuando la especie objetivo que será adsorbida es grande, y es incapaz de penetrar los poros de las resinas. En este caso, la superficie de las fibras que comprenden la tela no tejida fue modificada para afectar la adsorción de los agentes objetivo. El paso de adsorción implica intercambio iónico, interacciones hidrofóbicas o por afinidad, o cualquier otro procedimiento de adsorción común. Si se usan SMNs sin las partículas, el área de superficie por unidad de volumen del material disponible para unión, es controlada por la porosidad de la tela y el diámetro de las fibras: d/ en donde av es el área de superficie específica por unidad de volumen de sólido, aV es el diámetro de la fibra, y e es la fracción de huecos. Puesto que están disponibles diámetros de las fibras en cualquier parte en la escala de 100 nm a 10 µm, y las porosidades están normalmente en la escala de 0.4 a 0.5, pueden lograrse áreas de superficie muy grandes en estos dispositivos. Por ejemplo, con un diámetro de fibra de 0.1 µm, el área de superficie por unidad de volumen de tela estaría en el orden de: a, = 2x\ ' /mJ' = 2fím2 í?:m* Q) Esto se compara bastante favorablemente con el área de superficie por unidad de volumen de muchos soportes cromatográficos porosos. Sin embargo, puesto que el diámetro de flujo medio en los poros de la tela puede ser controlado independientemente, los tamaños de poro pueden alcanzar varias mieras de diámetro. Técnicas tales como la electrohilatura son capaces de producir diámetros incluso más pequeños, resultando en áreas mucho más grandes por volumen.

Cualquier modificación de superficie que facilite la unión de un agente objetivo al dispositivo y sea compatible con la química de las matrices porosas específicas usadas en el dispositivo, es abarcada dentro del alcance de la invención. Dicha modificación incluye, por ejemplo, la formación de especies cargadas, la unión de ligandos de afinidad, péptidos, oligonucleótidos, proteínas, brazos de espaciador, porciones hidrofóbicas y materiales fluorados, entre otras. Puesto que la superficie de las fibras en las telas no tejidas tiende a ser lisa, estas superficies presentan una configuración preferida para la exposición de ligandos de afinidad a una especie grande particular, tales como proteínas de priones, un virus o una bacteria.

EJEMPLO 2 Configuración del dispositivo para la remoción de proteínas de priones (PrP) Este ejemplo demuestra la posibilidad del diseño de diferentes configuraciones del dispositivo para remover la infecciosidad de la encefalopatía espongiforme transmisible endógena, permitiendo la adsorción a superficies no porosas de varias geometrías. La ¡nfecciosidad endógena de concentrados de eritrocitos, implica la remoción de PrPsc infecciosa (forma de scrapie de la proteína del prión) o PrPres (forma resistente de la proteína del prión), a una concentración total de aproximadamente 200 ng/ml. En una bolsa de concentrado de eritrocitos (rbcc) que contenía 350 ml, hubo un total de 7x10"5 g de PrP. Dado que una monocapa de proteína cubre una superficie con una monocapa de densidad de aproximadamente 2 mg/m2, el área de superficie total requerida para la unión de toda la PrP endógena en rbcc, se calcula de la manera siguiente: A =-- — - ,- -- 3.5*10 ' m1 (4) 2.?rl O igtmí en donde A es el área total del dispositivo.

Como es evidente de la ecuación anterior, el área de superficie total que se requiere para la unión de priones, es relativamente pequeña y acomoda varias geometrías del dispositivo adecuadas para la exposición de ligandos de afinidad a la densidad correcta de la superficie.

A. Hojas cuadradas Una serie de hojas cuadradas N de tela no tejida que tienen ambos lados revestidos con ligandos expuestos a la sangre, tiene un área de superficie total dada por la ecuación: 2;V¿? - 3.5^lO-2m' (5) En donde N es el número de hojas, y L es la longitud/ancho de una hoja cuadrada. En el caso de 10 hojas (N = 10), el ancho requerido de cada hoja sería: Un dispositivo de este tipo consiste de una disposición escalonada de hojas con el fluido fluyendo en la trayectoria tortuosa entre las hojas, según se demuestra en la figura 2.

B. Fibras revestidas Una serie de telas no tejidas N revestidas con ligandos de afinidad en el exterior, tiene un área de superficie total dada por las ecuaciones: en donde R es el radio de una fibra. Por ejemplo, el número de fibras de radio de 5 µm y longitud de 5 cm, sería: = 22,7.80 (S) El volumen de estas fibras sería: Vf - NxR'l - 8 74xl (TV ---y- = .087m/ (9) en donde Vf es el número de fibras. Como es evidente de la ecuación anterior, el volumen de las fibras fue relativamente pequeño, el cual se debe principalmente al diámetro de fibra muy pequeño que da lugar a un área de superficie muy grande por unidad de volumen. Para que se permita el flujo adecuado de eritrocitos a través de dicha estera de fibras, la porosidad tendría que ser bastante alta, por ejemplo, de aproximadamente 50%. En este caso, el volumen del dispositivo sería casi el doble del volumen de fibras, o 0.17 ml. Este es un volumen muy pequeño, indicando de nuevo que un dispositivo para este tipo de captura no necesita ser grande para cubrir los requisitos de capacidad. Por ejemplo, una estera de fibras de 2 cm de radio tendría que ser de sólo aproximadamente 0.135 mm de espesor para proveer este volumen. Una o más hojas de fibras pueden ser revestidas con ligandos de afinidad en el exterior.

C. Partículas Las partículas no porosas pequeñas exhiben también un área de superficie muy alta por unidad de volumen. El número y el volumen de las partículas que se requiere tengan el área de superficie indicado anteriormente, se calcularon en una forma similar a la que se usó en el caso de estructuras cilindricas: 3.5*10"' w7 ?- = ? R' ( Í0) J -i j en donde Vs es el volumen de una partícula.

Dadas las partículas de radio de 10 µm, el número y el volumen de partículas dados por la ecuación 5, son: ,V - 2 79*10' , p ? La ecuación muestra que un volumen extremadamente pequeño de pequeñas partículas podría ser dispersado con partículas más grandes, o podría ser suspendido en un gel entrelazado (tal como agarosa) con grandes poros que permiten el flujo fácil de eritrocitos a través del sistema.

EJEMPLO 3 Unión de dos capas de membranas por calandrado con o sin resina Para desarrollar un dispositivo de remoción de priones, dos capas de membranas de polipropileno fueron calandradas exitosamente bajo temperatura ambiente/7140 kg/m y 65.5°C/1785 kg/m, con densidad de la resina a 1 mg/cm2. Se sellaron membranas calandradas usando un sellador ultrasónico. El porcentaje de hemolisis de las muestras de membranas calandradas, estuvo bien dentro del límite aceptable. Se usó calandrado para la impregnación de resinas Amino 650M entre dos capas de membrana. Se impregnaron partículas de resina Toyopearl Amino 650M entre dos capas de membranas de telas no tejidas. Membranas de polipropileno (capa interior) y poliéster (capa exterior), que se usan comúnmente en leucofiltros MacoPharma, fueron buenos candidatos para estas membranas, puesto que ya han sido aprobadas para el procesamiento de sangre humana. Para investigar si podrían ser inmovilizadas partículas sin que se impida el flujo de eritrocitos a través del dispositivo, las membranas de la capa interior y/o exterior fueron calandradas con o sin partículas. Se logró el calandrado prensando las membranas entre dos rodillos en hojas.

Materiales y métodos Se enrolló un rodillo de membrana de polipropileno (PP) y un rodillo de membrana de poliéster (PET) sobre un huso de plástico de 7.62 cm de diámetro interno. El ancho de los rodillos fue de aproximadamente 0.5 m. Las membranas tenían 22.5 cm de ancho y 800 m de longitud. Las membranas fueron cortadas en hojas cuadradas de 22.5 cm x 22.5 cm. Se extendió resina seca a 1 mg/cm2 sobre un lado de la membrana, y se cubrió entonces con otra membrana. Las muestras solas de membrana no necesitaron que la resina se extendiera. Las muestras anteriores se hicieron pasar a través de dos rodillos de calandria, un rodillo estampado y un rodillo liso. Ambos rodillos pueden calentarse para incrementar la temperatura para el calandrado. Se controló también la presión entre los rodillos. Se pusieron a prueba muestras calandradas por examen visual, medición de peso, examen de sección transversal por SEM (microscopía electrónica de barrido), prueba de tamaño de poro y prueba del por ciento de hemolisis de flujo pasante, después del paso de sangre entera a través del dispositivo calandrado.

Procedimiento para la medición del por ciento de hemolisis Se cortaron muestras de membrana en círculos de 25 mm, y se colocaron en portafiltros Millipore Swinnex de 25 mm. Cada muestra se puso a prueba por duplicado en flujo pasante, y entonces por triplicado en placas de 96 cavidades. Cada muestra se enjuagó con 2 ml de regulador de pH de trabajo (el regulador de pH de trabajo es citrato a 20 mM y NaCI a 140 mM, pH 7.0), y entonces se bombeó sangre entera a través de las membranas desde arriba a 0.5 mL/min. Cinco ml de flujo pasante se colectaron de cada muestra. El flujo pasante o sangre no tratada se centrifugó a 12000 rpm por 10 minutos a 4°C para tomar el sobrenadante. Tres alícuotas de 100 µL de cada muestra se colocaron en las tres cavidades de una placa de 96 cavidades. La absorbancia de luz UV de cada muestra se leyó a 415 nm. El valor promedio de A 15nm se dividió entre el valor de 100% de lisis de la misma sangre. El porcentaje de hemolisis es aceptable si es menor de 1%.

Resultados CUADRO 1 De la inspección visual, se determinó que las muestras números 4, 7 y 13 son las mejores para la inclusión de partículas. Cuando se incrementa la temperatura de los rodillos, puede usarse una menor presión para unir las membranas como se muestra para las muestras 4 y 13. La membrana de la capa exterior se hizo de poliéster, y era mucho más gruesa y más firme que la capa interior. Para calandrar la capa exterior con membrana de capa interior o exterior, se requirieron temperaturas y presiones mayores de los rodillos como se muestra para la muestra 21.

CUADRO 2 Medición de peso Para la densidad de la resina, 1 mg/cm2 equivale a 10 g/m2 (1 mg/cm2 x 104 cm2/m2 = 10 g/cm2). El peso de la capa individual, doble capa y doble capa incluida son resina, fue relativamente proporcional. Los resultados mostraron que la resina se mantuvo bien entre dos capas de membranas. La micrografía electrónica de barrido (SEM) de las muestras 11 y 13, reveló que la mayoría de las partículas de resina quedaron intactas después del calandrado, aún cuando algunas estaban agrietadas. La muestra 2 se examinó también por SEM, y reveló resultados similares. Sobre el rodillo estampado de la calandria, había espacios de rejilla cuadrados de 2 mm x 2 mm. Durante el calandrado, las membranas se prensaron fuertemente en donde las rejillas se tocaban. Esta área es referida como el área de unión. El área de la cavidad se refiere a un área que está más lejos del área de unión. La muestra 11 es un ejemplo de inmovilización de partículas de resina entre una capa interior y una capa exterior. La figura 3 muestra áreas de las cavidades de la muestra 11 a aumento de 50X. La muestra 13 es un ejemplo de inmovilización de partículas de resina entre dos capas interiores. La figura 4 muestra áreas de las cavidades de la muestra 13 a aumento de 50X.

Distribución de tamaño de los poros Los resultados de la distribución de tamaño de los poros de muestras calandradas, se muestran en el cuadro 3 siguiente. Para las muestras calandradas, los tamaños de poro más pequeño, medio y más grande disminuyeron 30% a 50%, en comparación con la capa individual. Para determinar si la disminución en el tamaño de poro impediría el paso de eritrocitos a través del dispositivo, se realizaron más pruebas en la hemolisis del flujo sanguíneo entero.

CUADRO 3 Distribución de tamaño de los poros de muestras calandradas EJEMPLO 4 Optimización del calandrado usando altas densidades de partículas El rodillo de calandria usado en esta prueba, fue ordenado por ProMetic de BF Perkins El rodillo se hace de acero inoxidable, grabado con un diseño de panal, y revestido con revestimiento desprendible de teflón El rodillo posterior usado fue revestido de caucho (1 90 cm a 2 54 cm de espesor). Se extendieron manualmente muestras de 4 g de resina seca en muestras de 30 cm x 20 cm (600 cm2) de membrana de polipropileno tratada con plasma, que corresponde a una densidad de partículas de 6.6 mg de resina/cm2. Una segunda muestra de membrana se puso arriba de la capa de resina, y el sandwich se hizo pasar a través de los rodillos de calandria a 10 m/min. El siguiente cuadro contiene los resultados obtenidos durante las pruebas: CUADRO 4 Resultados de la optimización del calandrado 1 Un espacio de cero, indica que el diseño penetra el rodillo inferior por 0.00254 cm.

Las muestras se observaron bajo el microscopio, y no mostraron agujeros minúsculos. Se conservó una muestra de cada prueba (sólo sin resina) para referencia futura.

EJEMPLO 5 Unión de una ß-lactoglobulina, y características de flujo de membranas calandradas impregnadas de resina Este experimento se llevó a cabo para determinar las curvas de saturación para la unión de una proteína modelo (ß-lactoglobulina) a materiales de membrana calandrados que contenían resina seca a una densidad de 4 mg/cm2. Se calandró material de membrana de polipropileno a 76.6°C, y 2677.5 kg/m que contenían resina seca a una densidad de 4 mg/cm2. Este material de membrana fue cortado y ensamblado en unidades de filtro Millipore Swinnex. Cada unidad de filtro contenia una pila de 1 a 4 capas de membrana más una capa de membrana no calandrada en el lado de salida de la unidad de filtro. Una solución de 0.5 mg/mL de ß-lactoglobulina en 1X PBS se hizo pasar a través de la unidad de filtro a 1.5 mL/min usando una bomba peristáltica. Se colectaron fracciones de 0.5 mL por 4 minutos, y se analizaron para su concentración de proteínas usando el equipo de prueba Micro BCA de Pierce (Pierce, Rockford, IL). Las figuras 5 a 7 muestran los resultados de la prueba Micro BCA de las 12 fracciones colectadas para el número diferente de capas de membrana. Se usó como control membrana calandrada sin resina. Los resultados de este experimento muestran la diferencia en unión entre la membrana con resina atrapada y el control. Todas las pruebas exhibieron una pendiente inicial similar de concentración no unida; sin embargo, las capas 2 a 4 no se hicieron funcionar bastante para mostrar la condición saturada.

CUADRO 5 Proteína unida total y la cantidad de proteína unida por peso de resina La cantidad de proteína unida se incrementa en general para cada capa adicional de membrana, alcanzando un máximo a tres capas de membrana, seguido de una disminución muy pequeña con cuatro capas (cuadro 5). Puesto que los filtros que contenían 2 a 4 capas de membrana no se hicieron funcionar bastante para exhibir condiciones saturadas, no se sabe que estuvieran realizando unión.

EJEMPLO 6 Distribución de partículas sobre los rodillos de membrana Se desarrolló una unidad de dispersión de partículas para reemplazar la distribución manual de perlas usada previamente. El equipo ha sido puesto a prueba y calibrado. El aplicador de polvo fue ajustado manualmente para 60%, que fue equivalente a una velocidad de dispensación de 6.52 a 6.99 Kg/hora (exhibida). La velocidad de dispensación medida determinada por peso fue de 6.65 Kg/h (promedio de tres determinaciones), dentro de 5% del valor objetivo de 6.96 Kg/hora. El polvo dispensado pareció ser distribuido con uniformidad (evaluación visual), y sin derrame sobre los bordes de la membrana. La figura 9 muestra la distribución de partículas sobre la membrana inferior después de hacer funcionar la línea por aproximadamente 1 hora. Los bordes agudos formados por el área que contiene a las partículas, pueden notarse en ambos lados de la membrana. Otro rasgo notable es la falta de polvo sobre la correa transportadora, aún después de cierto tiempo de producción.

EJEMPLO 7 Materia adherente de priones Una lista de resinas usadas para la unión de priones, se discute a continuación: a) Amino 650M - Resina de base para el acoplamiento de péptidos y otros ligandos. Esta resina de base ha demostrado utilidad en la unión de proteínas de priones, tanto PrPc normales como PrPsc (o PrPres) infecciosas. La resina se usó en el formato cromatográfico de columna, y los presentes inventores han demostrado remoción/unión de PrPsc (hámster, vCJD de ratón, Fukuoka de ratón, spCJD de humano y vCJD de humano) de concentrado de eritrocitos, plasma y sangre entera, hasta el límite de detección por técnicas in vitro (Western Blot), y una reducción en infecciosidad del scrapie 263K de hámster, es decir, modelo in vivo (concentrado de eritrocitos) de aproximadamente 4 logs. b) Toyopearl - SYA - Este tripéptido ha demostrado utilidad en la unión de proteínas de priones, tanto PrPc normal como PrPsc (o PrPres) infecciosas. La resina se usó en el formato cromatográfico de columna, y los presentes inventores han demostrado remoción/unión de PrPsc (hámster, vCJD de ratón, Fukuoka de ratón, spCJD de humano y vCJD de humano) de concentrado de eritrocitos, hasta el límite de detección por técnicas in vitro (Western Blot), y una reducción en infecciosidad del scrapie 263K de hámster, es decir, modelo in vivo de aproximadamente 4 logs. c) Toyopearl - DVR - Este tripéptido ha demostrado utilidad en la unión de proteínas de priones, tanto PrPc normal como PrPsc (o PrPres) infecciosas. La resina se usó en el formato cromatográfico de columna, y los presentes inventores han demostrado remoción/unión de PrPsc (hámster, vCJD de ratón, Fukuoka de ratón, spCJD de humano y vCJD de humano) de concentrado de eritrocitos, hasta el límite de detección por técnicas in vitro (Western Blot), y una reducción en infecciosidad del scrapie 263K de hámster, es decir, modelo in vivo de aproximadamente 4 logs. Se han usado Amino 650M, SYA y DVR a escala completa, es decir, 1 unidad completa de concentrado de eritrocitos hecha pasar sobre la resina (aproximadamente 350 ml). El tamaño de la columna fue de 10 ml de resina hinchada. SYA, DVR y Amino funcionan a 400 µmoles/g (resina seca).

EJEMPLO 8 Comparación de la unión de PrPsc a Amino 650M y Amino 650U a partir de SBH acabado en regulador de pH, plasma filtrado y sangre entera Amino 650U es una mezcla de diferentes tamaños de perla que incluye Amino 650M, y es menos costosa de producir que 650M. Se puso a prueba Amino 650U para PrP endógena, y para su capacidad para unir PrPsc en todas las matrices usadas comúnmente, regulador de pH, plasma filtrado y sangre entera, y se comparó con la unión con Amino 650M desafiada con sangre entera acabada. El experimento se diseñó para comparar la unión de PrPsc de regulador de pH acabado, plasma y sangre entera a Amino 650U, y establecer la unión de PrPc endógena de plasma y sangre entera con Amino 650U. Además, el experimento se diseñó para determinar el efecto de la leucofiltración en la remoción de PrPc. Regulador de pH acabado se refiere a la adición de homogenizado de cerebro a regulador de pH de trabajo. Sangre entera acabada es la adición de homogenizado de cerebro a sangre entera de humano o hámster. No se encontró diferencia en la señal para la remoción de priones por 650U o 650M cuando estuvo presente en plasma o sangre entera. En conclusión, Amino 650U y 650M funcionaron igualmente. La cantidad de PrPc removida por leucofiltración, fue mayor que la calculada en plaquetas y leucocitos en conjunto. De esta manera, fue posible que la leucofiltración capturara también parte de la PrPc derivada de plasma. Se ha mostrado que los leucofíltros se comportan en forma diferente con respecto a la captura de PrPc derivada de plasma de humano y hámster. Es posible que mientras que la PrPc del plasma de hámster no fue capturada por el filtro, la PrPc del plasma de humano si lo fue. Por último, también es probable que la diferencia entre los dos resultados se deba a ia falta de correlación entre PrPc y la infecciosidad.

EJEMPLO 9 Unión de PrPsc de cerebro de hámster a resinas AMN Se llevaron a cabo experimentos de unión comparativos para una serie de resinas (por ejemplo, AMN-13, 14, 15, 16 y 17, Amino 650M y Amino 650U). La serie AMN se refiere a muestras 650U (designadas recientemente como 650C-prdt) con niveles variables de sustitución de aminoácidos, de la manera siguiente: AMN-13; 0.094 eq/L AMN-14; 0.078 eq/L AMN-15; 0.072 eq/L AMN-16; 0.063 eq/L AMN-17; 0.098 eq/L Las resinas se unieron a PrPsc de regulador de pH acabado, plasma y sangre entera. Los resultados demostraron que todas las resinas AMN se unieron igualmente bien cuando fueron desafiadas con regulador de pH acabado y sangre entera acabada. Además, la señal con resinas AMN fue igual a la observada con Amino 650M y 650U. Mediante la comparación de la unión de PrP a la resina de plasma acabada, hubo una señal ligeramente más intensa de Amino 650M en comparación con las demás resinas. Entre las resinas AMN, la número 13 pareció tener una señal de PrP débil, pero muy comparable a la Amino 650U, mientras que los números 15, 16 y 17 funcionaron mejor que la resina Amino 650U. No se observó diferencia notable entre las resinas AMN 14, 15, 16 y 17. En conclusión, el estudio demostró más similitud entre las resinas y, de manera más importante, mostró correlación más estrecha con Amino 650U que con 650M. Las diferencias observadas con plasma, sugirieron que por lo menos con aquel desafío que reduce el nivel de sustitución pueden ser benéficas, y la resina funcionó en forma muy similar a la resina Amino 650M.

EJEMPLO 10 Extracción de proteínas unidas a membranas incluidas en resina, y determinación de la unión de PrPc a partir de homogenizado de cerebro normal de hámster El desarrollo del nuevo dispositivo que usa membranas calandradas incluidas en resina, llevó a la necesidad de desarrollar nuevos procedimientos para la extracción de las proteínas unidas de las resinas. Tuvieron que hacerse cambios al manejo del material, así como la composición, concentración y volumen de la solución de extracción. El experimento se diseñó también para realizar evaluaciones de unión en el nuevo formato, usando membranas incluidas en resina Toyopearl Amino 650M y su forma completamente acetilada. Se trató homogenizado de cerebro normal de hámster (HaBH) con sarkosyl, y se hizo girar a baja velocidad. El sobrenadante resultante se diluyó a una concentración final de 1% usando regulador de pH de trabajo o sangre entera humana. Se hicieron pasar 50 ml de solución acabada a través de portafiltros Swinnex de 47 mm (Millipore) que contenían 4 sandwiches de membranas calandradas incluidas con 4 mg/cm2 de resina cromatográfica a capacidad completa, o una forma de capacidad de sustitución reducida de la misma resina como control ya sea Toyopearl Amino 650M o su forma completamente acetilada. La magnitud de flujo usada fue de 0.5 mL/min, usando una bomba peristáltica. Se colectaron diez alícuotas de 5 mL cada una para cada una de las soluciones acabadas y tipo membrana. Las muestras de flujo pasante de ambas membranas desafiadas con regulador de pH acabado se analizaron por ELISA. Las membranas que contenían resina completamente acetilada y desafiadas con sangre entera acabada, se enjuagaron usando regulador de pH de trabajo. Se trataron secciones de membranas (en algunos casos la pila completa) con regulador de pH de muestra de SDS-PAGE o ácido fórmico a 99%. El tratamiento con ácido fórmico consistió de la adición de 0.5 mL de ácido fórmico a 99% y 10 µL de SDS a 20% a un cuarto de un sandwich de membrana, seguida de incubación por remoción del líquido por 1 hora, y evaporación usando un SpeedVac. Las muestras tuvieron sus volúmenes ajustados a 15 µL usando agua, seguido de la adición de 15 µL de 2X regulador de pH de muestra. El tratamiento con regulador de pH de muestra consistió de la adición de 3 mL de 1X regulador de pH de muestra a la pila completa de membranas, seguida de incubación por 30 minutos y ebullición por 7 minutos. La solución se cosechó sin que se prensaran las membranas, y se centrifugó brevemente para remover toda la resina. Se puso a prueba también una variación del tratamiento anterior. Consistió de la adición de 1 mL de 2X regulador de pH de muestra a dos pilas separadas de membranas que correspondían a 1/4 de un filtro, incubando por 1 hora, seguida de ebullición de sólo una de ellas. Puede usarse elución con regulador de pH de muestra sin ebullición, si el desensamble de los portafiltros llega a ser demasiado riesgoso cuando se usa la infecciosidad.

Una condición final puesta a prueba, fue la incubación de secciones (1/4) de las membranas con regulador de pH de muestra para verificar la unión a la primera, segunda, tercera y cuarta membranas que entran en contacto con la solución de desafío. Se extendieron entonces muestras sobre geles de SDS-PAGE, y se tiñeron para proteína total. Se realizaron también Western blots. El volumen vacío de los portafiltros fue de aproximadamente 7 mL. Después de que se hicieron pasar 50 mL de solución de desafío a través de cada uno de los filtros, seguido de aire, los volúmenes recuperados fueron 45 y 47 mL para sangre entera. Cuando se usó regulador de pH acabado, los volúmenes recuperados fueron de 46 y 46 mL. No hubo diferencia significativa observable cuando se usaron las diferentes soluciones de desafío. El primer portafiltro por abrir fue el que contenía la membrana con Toyopearl completamente acetilada, que fue desafiada con sangre entera acabada. Se observó que a pesar del paso de aire y enjuague con regulador de pH, hubo aún cierta cantidad de sangre dentro del filtro. Durante el intento por enjuagar las membranas con regulador de pH hubo una pérdida significativa de resina, y la membrana se desechó. El portafiltro con Toyopearl Amino 650M desafiado con sangre entera, fue enjuagado con otros 200 mL de regulador de pH. La magnitud de flujo fue mayor que la magnitud máxima (999 en el dial). Tras la apertura del soporte, se observó que había aún una cierta cantidad de sangre dentro, especialmente entre las capas. Se observó también que un par de secciones delineadas por el distribuidor radial, fueron desviadas durante el lavado. La pila de membranas fue cortada en 4 cuartos. Una de las piezas tenia las cuatro capas separadas, y tratadas con regulador de pH de muestra para investigar si las diferentes capas tenían diferente unión. Otro cuarto se separó también en piezas, y se sometió al tratamiento con ácido fórmico. Los dos cuartos restantes se usaron para comparar los tratamientos con y sin calentamiento. Los dos filtros desafiados con regulador de pH acabado se enjuagaron cada uno con 200 mL de regulador de pH. Los filtros se abrieron, y la pila completa fue transferida a un pequeño vial de vidrio, al cual se añadieron 3 mL de regulador de pH de muestra. La resina incluida en las membranas calandradas, pareció mantener las mismas propiedades de unión de PrP características de la resina en el formato de columna. El amino completamente acetilado mostró señal de PrP más débil unida a la membrana en comparación con la señal de amino, apoyando las conclusiones de que el amino completamente acetilado puede no unir eficientemente PrP. En general, los resultados indicaron que 50% de la acetilación, ya sea en una forma mezclada o por síntesis química, redujo la unión de PrPres.

EJEMPLO 11 Unión de PrPc de homogenizado de cerebro normal de hámster a filtros gue contienen membranas impregnadas de partículas El siguiente experimento demuestra la unión de PrP normal (PrPc) de homogenizado de cerebro normal de hámster (NBH) por membranas que contienen partículas de resina. El método de elución descrito en el ejemplo previo, se aplicó a estas muestras. El filtro se abrió, las membranas se pusieron en un vial de vidrio, y se incubaron con mezclado con 2 ml de regulador de pH de muestra NuPage (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA.). El vial se calentó entonces, y se colectó la resina que provino del filtro. Los resultados del Western blot de las proteínas eluidas, indicaron que el método eluyó PrP de la membrana. Los resultados indican también que los filtros con las resinas unieron más PrP que el filtro sin la resina.

EJEMPLO 12 Unión de PrPc de homogenizado de cerebro con scrapie a filtros gue contienen membranas impregnadas de partículas Este experimento demuestra el desempeño de filtros en la unión de PrPsc de homogenizado de cerebro infeccioso de hámster (SBH) acabado en sangre entera y en regulador de pH. Los filtros contenían membranas impregnadas con resinas de capacidad completa, así como resina de capacidad reducida, y sin resina como control. Se realizó elución inyectando 2 ml de regulador de pH de muestra NuPage (de acuerdo a la extracción descrita en el ejemplo 10). El Western blot de las proteínas eluidas mostró fuerte señal sin PK (proteína cinasa), pero señales débiles con PK. Puesto que las proteínas fueron eluidas con SDS a 2%, la digestión con PK se llevó a cabo bajo concentración de detergente a 2% en lugar de SDS a 0.2% (procedimiento estándar). Es probable que la señal débil de PrPres con PK se deba al exceso de SDS en la mezcla de reacción. Los resultados indican señal más débil con las membranas sin resina, pero intensidades de señal similares para las otras resinas puestas a prueba. No se observó diferencia entre SBH en regulador de pH y en sangre entera para resinas de capacidad completa y sin resinas. La resina de capacidad reducida mostró señal más fuerte con regulador de pH acabado en comparación con sangre acabada.

EJEMPLO 13 Prueba del filtro prototipo En este ejemplo, los filtros se ensamblaron en cubiertas de plástico y se soldaron, en una configuración similar a un dispositivo final. El desempeño de dicho dispositivo se evaluó usando varios desafíos, acabados y no acabados. En una modalidad, el dispositivo final estaba formado de una cubierta de plástico rígida o pliable que contenía capas de membrana no calandrada (de 1 a aproximadamente 25 o más), seguida de varias capas (entre 1 y aproximadamente 50, dependiendo de la capacidad deseada del dispositivo) de membranas incluidas en resina, y entre 1 y aproximadamente 25 capas de membranas no calandradas. Los filtros se soldaron entre sí usando una selladora/cortadora ultrasónica, o por el uso de una prensa que aplica calor y presión simultáneamente. En este ejemplo, se usaron calor y presión. El homogenizado de cerebro de hámster se trató con Sarkosyl a 0.5%, y se diluyó 100 veces en regulador de pH, plasma filtrado y sangre entera, y se usó como el desafío para las resinas. Las resinas fueron desafiadas con 80 ml de la muestra a 0.5 ml/min con una bomba peristáltica. Los Western blots de las muestras de PrPres unidas a las resinas, se llevaron a cabo sin digestión por PK. Los resultados indicaron que las membranas funcionaron bien con la espiga en regulador de pH y en plasma, pero la misma espiga en sangre pareció ser reducida.

EJEMPLO 14 Remoción de PrP de RBCC acabado por una serie de dispositivos de filtro Este experimento muestra la remoción de PrP de concentrado de eritrocitos (RBCC) acabado, usando un dispositivo que contiene dispositivo impregnado de partículas. Puesto que el dispositivo fue desafiado con un exceso de proteína objetivo, se usó una serie de dispositivos. El volumen total de RBCC usado fue equivalente a una unidad. Todas las filtraciones se realizaron sin problema obvio alguno, y se usó una bomba para todas las filtraciones. Todos los filtros tenían cubiertas blandas, y fueron puestos a prueba previamente para fuga. Ninguno de los filtros tuvo fuga en la prueba previa o en el experimento real. El tiempo de filtración fue de aproximadamente 10 minutos cada uno para una unidad de RBCC (~ 300 ml). Los filtros se lavaron con aproximadamente 460 ml de regulador de pH de trabajo (cítrato). La eficiencia del paso de lavado se evaluó empíricamente examinando el color del filtro después del lavado. Después del lavado, los filtros se inyectaron con aire para remover todo el líquido en el filtro. Los filtros se trataron con aproximadamente 4.6 ml de regulador de pH de muestra para elución (inyectados en un lado del filtro). El regulador de pH de muestra se colectó y se inyectó en el otro lado del filtro. Este paso se llevó a cabo tres veces. Los resultados indicaron que PrPres escapó del filtro 1 , y fue capturada por el filtro 2, lo cual era de esperarse, puesto que el desafío aplicado fue mayor que la capacidad de un ajuste del filtro. PrPres pudo estar también presente en el eluato del filtro 3, pero abajo del límite de detección del Western blot. Estos resultados comparados con los obtenidos con RBCC en el primer estudio de infecciosidad de PRDT, indican que los filtros funcionaron también como las mismas resinas usadas en un formato de columna. Como con el estudio previo, se hizo pasar un gran exceso de PrPres a través de los filtros, y no es sorprendente que no toda la PrPres fuese capturada en el primer filtro.

EJEMPLO 15 Injerto de metacrilato de glicidilo en substratos de polipropileno, tereftalato de polietileno, algodón y nylon El injerto es un método eficiente para cambiar las propiedades de superficie de los polímeros. Los polímeros injertados adaptados con ligandos específicos en combinación con propiedades mecánicas superiores del substrato, hacen que el injerto sea el método más versátil para la unión de proteínas, cuyas aplicaciones requieren con frecuencia cambio de ligandos, así como fuerza mecánica suficiente. En este ejemplo, se realizó el injerto de metacrilato de glicidilo (GMA) en substratos de polipropileno (PP), tereftalato de polietileno (PET), algodón y nylon, para mostrar la posibilidad de aplicación de este procedimiento para la remoción de PrPc de sangre humana. Los substratos usados para las pruebas incluyen tela tejida de algodón, tela tejida de nylon, tela no tejida de PP, membrana no tejida de PP (Macopharma PP175), fibras de PP y fibras de PET, del College of Textiles en NCSU. El procedimiento de injerto se llevó a cabo mediante los siguientes pasos: 1. Se lavaron las muestras con acetona tres veces; 2. Las muestras se secaron en un horno de vacío por más de tres horas; 3. Las muestras se trataron con plasma de argón por 15 segundos a 750W; 4. Las muestras fueron expuestas a aire por 30 minutos; 5. Las muestras se sumergieron entonces en solución de GMA a 10% en una cámara de luz UV por 6 horas. La intensidad de la luz UV fue de 1.1 W/m2. La temperatura de la cámara fue de 30°C, y la de la rejilla de muestras fue mayor de 60°C; 6. Después de polimerización de luz UV, las muestras se lavaron entonces con acetona tres veces; y 7. Las muestras se secaron en un horno de vacío. En esta etapa, las muestras se analizaron sólo para su ganancia de peso y espectro de IR. Después del análisis, la tela no tejida de PP injertada y la membrana no tejida de PP fueron aminadas adicionalmente en solución de hidróxido de amonio a 60°C durante la noche. Estas muestras se lavaron entonces, y se secaron para análisis elemental.

Resultados De los resultados de la medición gravimétrica y espectroscopia IR, los substratos de PP muestran resultados de injerto significativamente mejores que los otros substratos, algodón, nylon y PET. Tres tipos de substratos de PP se han puesto a prueba, fibra de PP, no tejido de PP y membrana no tejida de PP (Macopharma). Las ganancias de peso después del injerto son 85%, 154% y 57%, respectivamente (cuadro 6). Estos valores son mucho mayores que los (-3% a 4%) de los otros substratos. Estos resultados se confirman además por medio de los espectros de IR, en donde los sistemas de PP injertados muestran picos fuertes a 1720 cm'1 relacionados con el grupo carbonilo, y a 845 y 910 cm"1 relacionados con el grupo epóxido, la identificación para GMA. Otros substratos no mostraron mucho cambio cuando compararon la muestra blanco con las muestras después del injerto. Las razones de las diferencias en el injerto de los varios substratos, no son aún claras. Una razón posible es que el enlace C-H podría ser más fácil de romper en el ambiente de PP que en el otro ambiente. Otra razón posible es que las muestras de tela de nylon y algodón podrían haber tenido tratamientos de superficie desconocidos para los presentes inventores. Simplemente, el lavado por acetona puede no ser suficiente para remover el acabado. Es interesante también notar que para la membrana no tejida y la fibra de PP original (Macopharma PP175), las muestras muestran picos en la escala de 840 a 920 cm"1. Sin embargo, ninguno de dichos picos se muestra para las telas no tejidas de PP. Los picos para las primeras podrían ser los resultados de oxidación de las superficies de la muestra, las cuales son del procesamiento a altas temperaturas. Del espectro de IR, la muestra de Macopharma aminada muestra un pico más amplio a 3400 cm"1, que es atribuible a los grupos -OH y -NH2, los resultados de la aminación.

Determinación del área de superficie de materiales no tejidos La determinación del área de superficie de materiales no tejidos, no es una tarea fácil debido a los entrelazamientos complejos de fibras que forman el no tejido. Sin embargo, el área de superficie de una sola fibra puede determinarse con precisión midiendo imágenes microscópicas de la fibra y la longitud. Por lo tanto, es teóricamente posible medir el área de superficie de materiales no tejidos a través de fibras de los mismos materiales por el método de injerto, siempre que las propiedades de superficie de las fibras sean iguales a las de los materiales no tejidos. Este método puede expresarse por medio de la siguiente ecuación: Wt = D(Sf + SNW) en donde Wt es la ganancia de peso por el injerto, Sf es el área de superficie de la fibra, y SNW es el área de superficie del material no tejido. Sólo dos incógnitas están en la ecuación: D y SNW, las cuales pueden determinarse por medio de dos experimentos independientes. El área determinada por este método, es el área de superficie efectiva que corresponde a cada tipo de reacción. En realidad, cualquier reacción cuyos alcances dependan del área de superficie de los substratos, puede usarse por este método.

Conclusiones Las pruebas primarias del injerto de GMA en varios substratos de polímero, muestran que PP es un substrato ideal para dicho injerto. La ganancia de peso del injerto de GMA en PP varía de 60% a 160%, dependiendo de la forma de los materiales de PP. Los efectos del injerto se confirman también por medio de los espectros de FTIR. Además, con base en el injerto, se ha propuesto un método simple para la medición del área de superficie de materiales no tejidos (cuadro 6).

CUADRO 6 Efectos del injerto medidos en ganancia de peso EJEMPLO 16 Unión de PrPc por fibras de PGMA, tela electrohilada, PGMA injertado y substratos de PP impregnados Propósito Determinar la unión de PrPc por fibras de PGMA, tela electrohilada y GMA injertada y no tejidos de polipropileno impregnados.

Procedimiento Los materiales puestos a prueba fueron fibras hiladas por fusión de metacrilato de poliglicidilo (PGMA), telas electrohiladas de PGMA, PGMA injertado y tela no tejida de polipropileno impregnada (GMA-g-PP). Los substratos son muestras del College of Textiles at North Carolina State University, Macopharma PP175 y Macopharma PP 235. Para cada material, se prepararon dos réplicas para la unión de proteínas. Las muestras se prepararon en peso y área aparente (el área medida de las telas). El segundo método se aplicó solamente a las muestras con formas regulares, tales como las membranas Macopharma impregnadas. Todas las muestras fueron cortadas en pequeñas piezas. Cada muestra se sumergió entonces en un tubo cónico (50 ml) que contenía 5 ml de solución de homogenizado de cerebro normal de hámster (HaBH) a 1%. Las muestras se incubaron entonces en una plataforma oscilante por 30 minutos. Después de eso, las muestras se lavaron con 10 ml de regulador de pH de muestra tres veces por 10 minutos, sobre la plataforma oscilante.

Resultados El peso de la muestra, el área y el nivel de aminación que se determinaron por medio del análisis elemental, se muestran en el cuadro 7 siguiente: CUADRO 7 Análisis elemental de las muestras CUADRO 7 (CONTINUACIÓN) Con base en los resultados del Western blot, el PP injertado con PGMA y el PP impregnado con PGMA, se unen a priones.

Equivalentes La invención descrita ilustrativamente en la presente puede ponerse en práctica convenientemente en ausencia de cualquier elemento o elementos, limitación o limitaciones, que no se describan específicamente en la presente. Los términos y las expresiones que se han usado se usan como términos de descripción y no de limitación, y no existe intención de que en el uso de dichos términos y expresiones, se excluya cualquier equivalente de las características mostradas y descritas, o porciones de las mismas, pero se reconoce que varias modificaciones son posibles dentro del alcance de la invención reclamada. De esta manera, debe entenderse que aunque la presente invención se ha descrito específicamente en la presente, los expertos en la técnica pueden recurrir a modificaciones, variaciones y características opcionales de los conceptos descritos en la presente, y que se considera que dichas modificaciones y variaciones están dentro del alcance de esta invención, como se define por medio de las reivindicaciones anexas. Todas las referencias discutidas aquí se incorporan en la presente como referencia. El experto en la técnica apreciará fácilmente que la presente invención está bien adaptada para llevar a cabo los objetivos y lograr los fines y las ventajas que se mencionan, así como aquellos inherentes en la misma. La presente invención puede describirse en otras formas específicas sin que se aparte del espíritu o los atributos esenciales de la misma. Por el contrario, se entenderá claramente que puede recurrirse a varias otras modalidades, modificaciones y equivalentes de la misma que, después de que se lea la descripción de la presente, pueden sugerirse por sí mismas a los expertos en la técnica sin que se aparten del espíritu de la presente invención y/o el alcance de las reivindicaciones anexas.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1 - Un dispositivo para la separación de por lo menos un agente objetivo de una muestra, que comprende una o más matrices porosas que tienen tamaños de poro mayores de 10 µm y una pluralidad de partículas impregnadas en las mismas, en donde el agente objetivo (por lo menos uno) se une a las una o más matrices porosas, partículas, o ambas, y es removido de la muestra.

2 - El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque las partículas son porosas, no porosas, o ambas. 3.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque las una o más matrices porosas, las partículas, o ambas, tienen un tamaño de poro uniforme o variable. 4.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque las partículas tienen un tamaño de poro de aproximadamente 0.001 µm a aproximadamente 0.1 µm. 5.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque las una o más matrices porosas comprenden por lo menos una tela no tejida. 6.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque las una o más matrices porosas comprenden fibras naturales, fibras sintéticas, o ambas. 7 '.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque las partículas comprenden una resina porosa que tiene poros interconectados con áreas de superficie en la escala de aproximadamente 1 a 2 m2/g de resina desecada a aproximadamente 300 m2/g de resina desecada. 8.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el agente objetivo (por lo menos uno) se une a las partículas, a las una o más matrices porosas, o ambas, por medio de absorción, adsorción, intercambio iónico, enlaces covalentes, enlaces hidrofóbicos, interacciones por afinidad, formación de especies cargadas, unión de ligandos de afinidad, o una combinación de los mismos. 9.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque las una o más matrices porosas, las partículas, o ambas, son modificadas en su superficie por cuando menos un grupo reactivo que comprende un grupo químico, un grupo biológico, o ambos. 10.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque el grupo reactivo (por lo menos uno) comprende un grupo funcional que comprende epoxi, formilo, tresilo, esteres de hidroxisuccinimida, ácido sulfónico, aminas cuaternarias, grupos carboxílicos, aminas primarias, grupos ciano, ciciohexilo, octilo y octadecilo, epóxido, oxirano, esteres de N-hidroxisuccinimida, esteres de sulfonilo, carbamato de imidazolilo, aminas cuaternarias, grupos carboxílicos, ligando de colorante, ligando de afinidad, antígeno-anticuerpo, moléculas de ácido nucleico, grupos reactivos para intercambio iónico, quelación, reacciones de oxidación/reducción, reacciones de exclusión esteárica, reacciones de catálisis, reacciones hidrofóbicas o de fase invertida, o una combinación de los mismos. 11.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la muestra es una muestra de sangre, y el agente objetivo (por lo menos uno) comprende priones, virus, bacterias, protozoarios y toxinas, o una combinación de los mismos. 12.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque las partículas comprenden una resina de polimetacrilato, una resina de metacrilato, una resina modificada, o una combinación de las mismas. 13.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque la resina modificada comprende TOYOPEARL™ AMINO 650. 14.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque la resina comprende una resina húmeda, una resina seca, o una combinación de las mismas. 15.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque las partículas comprenden una resina modificada, las una o más matrices porosas comprenden polipropileno tratado con plasma, y el grupo reactivo comprende un ligando que tiene una amina primaria y un espaciador hidrofílico que contiene unidades de polietilenglicol. 16.- El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque las partículas están interpuestas entre las una o más matrices porosas. 17.- Un dispositivo para la separación de por lo menos un agente objetivo de una muestra, que comprende una o más matrices porosas que tienen tamaños de poro mayores de 10 µm, en donde las una o más matrices porosas son modificadas en su superficie por cuando menos un grupo reactivo que comprende un grupo químico, un grupo biológico, o ambos. 18 - Un método para la separación de por lo menos un agente objetivo de una muestra, que comprende: (a) proveer una muestra que contiene potencialmente uno o más agentes objetivo; (b) proveer un dispositivo que comprende (i) una o más matrices porosas que tienen tamaños de poro mayores de 10 µm, y (ii) una pluralidad de partículas impregnadas en las una o más matrices porosas; (c) someter la muestra al dispositivo; (d) unir el agente objetivo (por lo menos uno) a las partículas, a las una o más matrices porosas, o ambas; y (e) separar el agente objetivo (por lo menos uno) de la muestra. 19.- Un equipo de prueba para la separación del objetivo y la purificación de la muestra, que comprende (i) un dispositivo que contiene una o más matrices porosas que tienen tamaños de poro mayores de 10 µm, y una pluralidad de partículas impregnadas en la misma, (ii) un contenedor que contiene uno o más de los reguladores de pH, reactivos, agentes químicos, reactivos de funcionalización, enzimas, agentes de detección o materiales de control, (iii) instrucciones para el uso del equipo de prueba, (iv) materiales de empacamiento, o cualquier combinación de los incisos (ii), (iii) y (iv). 20.- El equipo de prueba de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque los agentes de detección comprenden varias enzimas, grupos prostéticos, materiales fluorescentes, materiales luminiscentes, materiales bioluminiscentes, materiales radiactivos, colorantes dispersos, partículas de oro, o una combinación de los mismos.