JP5694922B2 - 簡易メンブレンアッセイ装置 - Google Patents
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Description
110 プラスチック板
120 検出部
130 コントロールライン
140 ニトロセルロースメンブレン
150 吸収パッド
160 標識体乾燥パッド
170 サンプル供給パッド
200 割繊型複合繊維
201 コア繊維成分
202 極細割繊繊維成分
250 割繊処理した割繊型複合繊維
300 実施形態2に係る簡易メンブレンアッセイ装置
321 検出部A
323 検出部B
330 コントロールライン
360 標識体乾燥パッド
本発明の実施形態に係るラテラルフロー免疫測定法は、被検出物を捕捉するための捕捉物質が結合したメンブレンを備えた簡易メンブレンアッセイ装置を用いる、検体試料中の被検出物の簡易メンブレンアッセイ法である。本実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置は、標識体部を構成する基材として、極細繊維からなる不織布を用いて、検体試料中の被検出物の存在を検出あるいは定量することを特徴とする。
本実施形態に係る標識体乾燥パッドに用いる極細繊維不織布の詳細について以下に説明する。本実施形態に係る標識体乾燥パッド用極細繊維不織布の製造方法を、割繊型複合繊維のウエブを割繊処理する方法を例に説明する。
ここで、本実施形態に係る被検出物としては何ら限定されるものではなく、各種病原体、各種臨床マーカー等、抗体と抗原抗体反応することが可能ないかなる物質であってもよい。具体例として、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、RSウイルス、HAV、HBs、HIV、ノロウイルス、ロタウイルス等のウイルス抗原、MRSA、A群溶連菌、B群溶連菌、レジオネラ属菌等の細菌抗原、細菌等が産生する毒素、マイコプラズマ、クラミジア・トラコマティス、ヒト絨毛性ゴナドトロピン等のホルモン、C反応タンパク質、ミオグロビン、心筋トロポニン、各種腫瘍マーカー、農薬、環境ホルモン等を例示することができる。
本実施形態に係る捕捉物質は、免疫測定する被検出物と抗原抗体反応する抗体であれば、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよい。
本実施形態に係る標識体としては、金コロイド粒子、白金コロイド粒子、着色ラテックス粒子、磁性粒子、蛍光発光性粒子、酵素等が挙げられる。
本実施形態に係る標識体乾燥パッドの製造方法について説明する。標識体が乾燥する過程において、標識体は、標識体乾燥パッドとして用いられる部材の繊維に付着した状態で乾燥する。所定量の標識体を含む溶液を本実施形態に係る標識体乾燥パッド用極細繊維不織布に塗布、スプレーまたは浸漬等の方法により染み込ませる。その後、温風乾燥や自然乾燥等により乾燥化する。
次に本実施形態の簡易メンブレンアッセイ装置を用いた免疫測定法について説明する。まず検体を検体浮遊/抽出用緩衝液に浮遊/抽出させた検体試料を調製する。検体試料は、被検出物に応じた公知技術を用いて調製することができる。
実施形態2は、検出部120に替えて、2つの検出部を設ける点で実施形態1と異なる。図4は、実施形態2に係る簡易メンブレンアッセイ装置300の模式図である。簡易メンブレンアッセイ装置300は、検出部A321及び検出部B323を有する。また、検出部A321及び検出部B323への変更に対応したコントロールライン330及び標識体乾燥パッド360を有する。以下、2つの検出部を設ける例について述べるが、検出部は2つに限定されるものではない。
実施例1、比較例1〜3について、以下の通り、ラテックス粒子を標識した標識体パッドの放出性を評価した。
検出用の抗体として抗A型インフルエンザウイルス抗体および、抗B型インフルエンザウイルス抗体を用いた。標識体としてラテックスを用い、ラテックスに抗インフルエンザウイルス抗体を共有結合させラテックス浮遊液を調製した。調製したラテックス浮遊液を上述の各種繊維複合体に塗布し、乾燥させて、標識体乾燥パッドを作製した。
上記の方法で作製した標識体乾燥パッドを所定の緩衝液に浸し、撹拌することでラテックス粒子を溶出させた。この溶出液の吸光度(A)を測定するとともに、パッドに塗布した量と同量の標識体を所定の緩衝液に添加した液を対照液として、この試料の吸光度(B)も測定した。これらの結果から以下のようにパッドからの標識体の放出率を求めた。
放出率(%)=吸光度A/吸光度B×100
(1.検査デバイスの作製)
簡易メンブレンアッセイ装置は図4に示すものと同様の構成のものを用いた。ニトロセルロースメンブレン140をプラスチック板110でバッキングした短冊状の部材に、抗A型インフルエンザウイルス抗体および、抗B型インフルエンザウイルス抗体を線状に塗布し、温風下でよく乾燥させた。これの上端に重ねて吸収パッド150を設置した。さらにニトロセルロースメンブレン140の下端に重ねて標識体乾燥パッド360を設置し、これに重ねて検体を供給するサンプル供給パッド170を設けた。これにプラスチックシートでサンプルパッドの一部が露出するように他の部分を覆ったものを所定の幅に裁断して、検査デバイスを作製した。
検体として、A型インフルエンザウイルス及びB型インフルエンザウイルスを用いた。検体は検体浮遊、抽出用の所定の緩衝液を用いて、2倍段階希釈を行い試料とした。次に検査デバイスを水平に置き、検体試料並びに、抽出用の所定の緩衝液のみからなる陰性対照試料をサンプル供給パッド170に50μL供給し、標識体を展開させた。判定は8分後に検出部の着色ラインの有無を目視にて観察して行った。
着色ライン有り:陽性(+)
着色ライン無し:陰性(−)
インフルエンザウイルス抗原の検出結果を表3に示す。実施例1においてA型インフルエンザウイルスの判定は1:3200まで陽性を示し、比較例1から比較例3のA型の判定に比べ、検出感度が高かった。また、実施例1においてB型インフルエンザウイルスの判定は1:1600まで陽性を示し、比較例1から比較例3のB型の判定に比べ、感度が高かった。なお、陰性対照試料は全ての実施例、比較例において陰性を示した。
Claims (9)
- 支持板と、
試料供給部と、
被検出物を標識する標識成分を含む標識体部と、
前記被検出物を検出または定量するための捕捉物質を有する検出部が形成された展開部と、
吸収部とを有し、
繊維径が6μmから20μmである第1の繊維成分の断面外周に繊維径が1μmから10μmである第2の繊維成分を複数配置した構造を有し、前記第1の繊維成分と複数の前記第2の繊維成分とが互いに接着されてなる割繊型複合繊維を、割繊処理した割繊繊維により形成された不織布を前記標識体部に用いることを特徴とする簡易メンブレンアッセイ装置。 - 前記不織布は、前記第1の繊維成分がポリオレフィン系樹脂からなり、前記第2の繊維成分がポリエステル系樹脂からなることを特徴とする請求項1に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
- 前記不織布は、前記第1の繊維成分がポリエチレンであり、前記第2の繊維成分がポリエステルであることを特徴とする請求項2に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
- 前記標識成分が金コロイド粒子、白金コロイド粒子、ラテックス粒子、磁性粒子、酵素の何れかにより標識されていることを特徴とする請求項1に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
- 前記標識成分および前記捕捉物質は、前記被検出物と結合する抗体または抗原結合性断片であることを特徴とする請求項4に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
- 前記被検出物が、微生物、臨床マーカーである生体由来物質、農薬、環境ホルモンまたは、それらの分解物であることを特徴とする請求項5に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
- 前記被検出物をラテラルフロー方式メンブレンアッセイ法で検出または定量することを特徴とする請求項6に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
- 前記展開部に前記標識成分が放出されたことを検証するための検証部をさらに有することを特徴とする請求項7に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
- 複数の種類の前記被検出物を検出するために、前記標識成分及び前記捕捉物質をそれぞれ複数の種類用いることを特徴とする請求項8に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
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