MXPA05006814A - Atropisomeros de derivados de 4-arilquinolin-2-ona 3-sustituida. - Google Patents

Abstract

Los atropisomeros de los derivados de 4-arilquinolin-2-ona 3-sustituida que tienen la formula general (ver formula general) en donde R, R1, R2, R3, R4 y R5 son como se definiera en la presente, o una sal, solvato o profarmaco no toxico, farmaceuticamente aceptable del mismo. Los atropisomeros pueden modular los canales de K+ activados por calcio de gran conductancia y son utiles en el tratamiento de trastornos que son sensibles a la apertura de los canales de potasio. Ademas, los atropisomeros pueden ser estables, es decir no se interconvierten, durante periodos de hasta un mes o mas.

Description

ATROPISOMEROS DE DERIVADOS DE 4-ARILQUINOLIN-2-ONA 3-SUSTITUIDA ANTECEDENTES DE LA INVENCION Los canales de potasio son proteínas transmembrana, los cuales son expresados obicuamente en células de mamíferos y representan uno de los grupos más grandes y más diversos de canales de iones desde una perspectiva molecular. Los canales de potasio juegan un papel clave en la regulación del potencial de la membrana celular y la modulación de la excitabilidad celular. Los canales de potasio son regulados mayormente por el voltaje, metabolismo celular, calcio y procesos mediados por receptores. [Cook, N. S., Trends in Pharmacol. Sciences (1988), 9, 21; y Quast, U. y colaboradores, Trends in Pharmacol. Sciences (1989), 10, 431] . Los canales de potasio activados por calcio (Kca) son un grupo diverso de canales de iones que comparten una dependencia sobre los iones de calcio intracelular por la actividad. La actividad de los canales ca es regulada por el [Ca2+] intracelular, el potencial de la membrana y la fosforilación. En base a sus conductancias de canales individuales en soluciones de + simétrico, los canales Kca se dividen en tres subclases: gran conductancia (también referidos en el campo como ttBK" o "Maxi-K"), que tienen una REF: 165011 conductancia mayor que aproximadamente 150 picosemens ("pS") ; conductancia intermedia, que tienen una conductancia de aproximadamente 50-150 pS; y conductancia pequeña, que tienen una conductancia menor que aproximadamente 50 pS. Los canales de potasio activados por calcio de gran conductancia están presentes en muchas células excitables, inclusive neuronas, células cardiacas y diversos tipos de células de músculo liso. [Singer, j. y colaboradores, Pflugers Archiv. (1987) 408, 98; Baro, I. y colaboradores, Pflugers Archiv. (1989) 414 (Suppl. 1), S168; y Ahmed, F. y colaboradores, Br. J. Pharmacol. (1984) 83, 227]. Los iones de potasio juegan un papel dominante en el control del potencial latente de la membrana en la mayoría de células excitables y mantienen el voltaje de la transmembrana cerca del potencial de equilibrio de K+ ("Ek") de aproximadamente -90 miliVoltios ("mV") . Se ha mostrado que la apertura de canales de potasio cambia el potencial de la membrana celular hacia el Ek, lo que da por resultado la hiperpolarización de la célula. [Cook, N. S., Trends in Pharmacol. Sciences (1988), 9, 21]. Las células hiperpolarizadas muestran una respuesta reducida a los estímulos de despolarización potencialmente perjudicial. Los canales BK que son regulados tanto por el voltaje como por el Ca2+ intracelular actúan al limitar la despolarización y la entrada de calcio y pueden ser particularmente efectivos en el bloqueo de estímulos perjudiciales. Por lo tanto, la hiperpolarización celular por vía de la apertura de los canales BK puede dar por resultado la protección de las células neuronales, así como también otros tipos de células, por ejemplo células cardíacas. [Xu, W., Liu, Y., Wang, S., McDonald, . , Van Eyk, J.E., Sidor, A. y O'Rourke, B. (2002) Cytoprotective Role of Ca2+-activated K+ Channels in the Cardiac Inner Mitochondrial Membrane. Science 298, 1029-1033] . Se ha reportado una variedad de compuestos sintéticos y de origen natural con actividad de apertura de BK. Los derivados descritos de 4-aril-3-hidroxiquinolin-2-ona son de interés particular, por ejemplo, en la patente norteamericana No. 5,892,045, expedida el 6 de abril de 1999, patente norteamericana No. 5,922,735, expedida el 13 julio de 1999, patente norteamericana No. 6,353,119, expedida el 5 de marzo de 2002. A pesar de los avances en el campo que fueron posibles por los derivados de 4-aril-3-hidroxiquinolin-2-ona observados anteriormente, se desean avances adicionales en la clase de compuestos capaces de modular los canales de potasio, en particular los canales de potasio activados por calcio de gran conductancia. De manera deseable, estos compuestos serían útiles en el tratamiento de condiciones que surgen de la disfunción de la polarización y conductancia de la membrana celular.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION De acuerdo con la presente invención, se proporcionan atropisómeros de 4-arilquinolin-2-ona 3-sustituida. Los atropisómeros son compuestos que tienen la fórmula general en donde R, R1, R2, R3, R4 y R5 son como se define posteriormente o una sal, solvato o profármaco no t x co¾ farmacéuticamente aceptabl@¾ie los mismos; caracterizados en que los compuestos son enriquecidos atropisoméricamente y, de preferencia, son sustancialmente puros con respecto a un atropisómero . En virtud de la presente invención, ahora es posible proporcionar atropisómeros estables de derivados de 4-arilquinolin-2-ona 3-sustituida . Muy sorprendentemente, de acuerdo con la presente invención, se ha descubierto que los atropisómeros no se interconvierten fácilmente, aún después de periodos extendidos, por ejemplo 30 días o más. Como resultado, las composiciones farmacéuticas se pueden adaptar para ser enriquecidas en el atropisómero más efectivo para el tratamiento de la condición fijada como objetivo. La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden los atropisómeros de derivados de 4-arilquinolin-2-ona 3-sustituida y métodos para el tratamiento de condiciones sensibles a la actividad de apertura de canales de potasio, tal como, por ejemplo, isquemia, apoplejía, convulsiones, epilepsia, asma, síndrome de intestino irritable, migraña, lesión traumática del cerebro, lesión de la médula espinal, disfunción sexual e incontinencia urinaria.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra una representación estructural de dos atropisómeros de acuerdo con la presente invención. La figura 2 es un cromatograma de CLAR de una mezcla racémica de los atropisómeros de acuerdo con la presente invención. La figura 3 es un cromatograma de CLAR de un atropisómero de acuerdo con la presente invención. La figura 4 es un cromatograma de CLAR de un atropisómero de acuerdo con la presente invención.

La figura 5 es un crómate-grama de CLAR de una mezcla racémica de los atropisómeros de acuerdo con la presente invención. La figura 6 es un cromatograma de CLAR de un atropisómero de acuerdo con la presente invención. La figura 7 es un cromatograma de CLAR de un atropisómero de acuerdo con la presente invención.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Las definiciones estereoquímicas y las convenciones utilizadas en este texto siguen generalmente al McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms, S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Book Company, Nueva York (1984) y Stereochemistry of Organic Compounds, Eliel, E. y Wilen, S., John iley & Sons, Inc., Nueva York (1994). Muchos compuestos orgánicos existen en formas ópticamente activas, es decir, tienen la capacidad de girar el plano de la luz polarizada del plano. En la descripción de un compuesto ópticamente activo, los prefijos D y L o R y S se utilizan para indicar la configuración absoluta de la molécula acerca de su(s) centro (s) quiral(es). Los prefijos d y 1 o (+) y (-) se emplean para designar el signo de rotación de la luz polarizada del plano por el compuesto, con (-) o 1 se da a entender que el compuesto es levógiro y (+) o d significa que el compuesto es dextrógiro.

Para una estructura química dada, estos compuestos, llamados estereoisómeros, son idénticos excepto que son imágenes de espejo entre si. Un estereoisómero específico de un par de imágenes de espejo también puede ser referido como un enantiómero y una mezcla de estos isómeros es llamada frecuentemente una mezcla enantiomérica . Los términos "mezcla racémica" y "racemato" se refieren a una mezcla equimolar de dos especies enantioméricas, exentas de actividad óptica. Además, como se utiliza en este texto, los términos "mezcla racémica" y "racemato" se proponen para incluir mezclas equimolares de los dos atropisómeros . El término "quiral" se refiere a moléculas que tienen la propiedad de no poder superponerse sobre el compañero de imagen de espejo, mientras que el término "aquiral" se refiere a moléculas que pueden ser superpuestas sobre su compañero de imagen de espejo. El término "estereoisómero" se refiere a compuestos que tienen una idéntica constitución química, pero que difieren con respecto al ordenamiento de los átomos o grupos en el espacio. El término "diastereómero" se refiere a un estereoisómero que no es un enantiómero, por ejemplo, un estereoisómero con dos o más centros de quilaridad y cuyas moléculas no son imágenes de espejo entre sí. Los diastereómeros tienen diferentes propiedades físicas, por s.ejemplo puntos de fusión, puntos de ebullición, propiedades espectrales y reactividades. Las mezclas de diastereómeros se pueden separar bajo procedimientos analíticos de alta resolución, tales como la electroforesis y la cromatografía. El término "enantiómeros" se refiere a dos estereoisómeros de un compuesto que no pueden ser superpuestos como imágenes de espejo entre sí. El término "atropisómero" se refiere a un estereoisómero que resulta de la rotación restringida alrededor de uniones individuales donde la barrera de rotación es suficientemente alta para permitir el aislamiento de las especies isoméricas. Típicamente, la rotación alrededor de la unión individual en la molécula es impedida, o se disminuye grandemente la velocidad, como resultado de las interacciones esféricas con otras partes de la molécula y los sustituyentes en ambos extremos de la unión individual no son simétricos. El término "enriquecido atropisoméricamente" significa que el compuesto, es decir la mezcla de atropisómeros, comprende una proporción o porcentaje mayor de uno de los atropisómeros del compuesto, con relación al otro atropisómero, es decir mayor que 50% en mol. El término "sustancialmente puro" significa que el compuesto, es decir la mezcla de atropisómeros, comprende al menos 90% en mol, preferiblemente al menos 95% en mol y más preferiblemente al menos 99% en mol de un atropisómero . El término "sustancialmente libre" significa que el compuesto comprende menos de 10% en mol, preferiblemente menos de 5% en mol y más preferiblemente menos de 1% en mol de un atropisómero. Los términos "interconversión" e "interconvertir" significan la conversión de un compuesto atropisoméricamente enriquecido a una mezcla racémica. Los términos "estable" y "estabilidad" significan que un compuesto atropisoméricamente enriquecido no se interconvierte a temperatura ambiente, es decir 25 °C, en forma de solución, por ejemplo una solución de 3 miligramos por mililitro ("mg/mL") en etanol, durante un periodo de al menos aproximadamente 1 dia, preferiblemente al menos aproximadamente 10 días y más preferiblemente al menos aproximadamente 30 días. En la prueba de estabilidad de acuerdo con la presente invención, se pueden utilizar solventes diferentes de etanol, por ejemplo 2-propanol, o mezclas de solventes alcohólicos con co-solventes, por ejemplo tolueno. Cuando los compuestos de la presente invención están presentes en forma sólida, es decir, no disueltos o dispersados en un líquido, son frecuentemente aún más resistentes a la interconversión que cuando están en una forma líquida.

El término "sal farmacéuticamente aceptable" se propone para incluir sales no tóxicas que son sintetizadas del compuesto precursor que contiene un radical básico o ácido por medio de métodos químicos, convencionales. Generalmente, estas sales se pueden preparar al hacer reaccionar las formas de ácidos o bases libres de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiado en agua o en un solvente orgánico o en una mezcla de los dos; generalmente, se prefiere los medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo . Las listas de sales adecuadas se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18- edición, Mack Publishing Company, Easton, PA, 1990, página 1445. Las bases inorgánicas adecuadas, tales como bases de metales alcalinos y alcalinotérreos incluyen cationes metálicos, tales como sodio, potasio, magnesio, calcio y similares. Los compuestos de la presente invención son útiles en la forma de la base o ácido libre o en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Todas las formas están dentro del alcance de la invención. El término "halógeno" utilizado en este texto y en las reivindicaciones se propone para incluir flúor, bromo, cloro y yodo mientras que el término "haluro" se propone para incluir un anión de fluoruro, bromuro, cloruro y yoduro. El término "cantidad terapéuticamente efectiva" significa la cantidad total de cada componente activo que es suficiente para mostrar un beneficio significante para el paciente, es decir, la curación de condiciones agudas caracterizadas por las aperturas de canales de K+ activados por calcio de gran conductancia o un incremento en la velocidad de curación de estas condiciones. Cuando se aplica a un ingrediente activo individual, administrado solo, el término se refiere a ese ingrediente solo. Cuando se aplica a una combinación, el término se refiere a cantidades combinadas de los ingredientes activos que dan por resultado el efecto terapéutico, ya sea administradas en combinación, en serie o simultáneamente. El término "compuestos de la invención", y expresiones equivalentes, se proponen para incluir los compuestos de la fórmula I, e incluir profármacos, sales y solvatos farmacéuticamente aceptables, por ejemplo hidratos. De manera similar, la referencia a los productos intermediarios, ya sea que se reclamen por si mismos o no, se propone para incluir sus sales y solvatos, donde el contexto asi lo permita. Las referencias al compuesto de la fórmula I también incluyen los compuestos de las fórmulas II y III. El término "derivado" significa un compuesto modificado químicamente, en donde la modificación es considerada una rutina por el químico de experiencia ordinaria, tal como un éster o una amida de un ácido, grupos protectores, tales como un grupo bencilo para un alcohol o tiol y un grupo terc-butoxicarbonilo para una amina. El término "solvato" significa una asociación física de un compuesto de esta invención con una o más moléculas de solvente. Esta asociación física incluye la unión de hidrógeno. En ciertos casos, el solvato será capaz del aislamiento, por ejemplo, cuando una o más moléculas de solvente se incorporan en la estructura reticular del cristal del sólido cristalino. El "solvato" incluye solvatos tanto en fase de solución como aislables. Los solvatos ejemplares incluyen hidratos, etanolatos, metanolatos y similares. El término "paciente" incluye tanto humanos como otros mamíferos . El término "composición farmacéutica" significa una composición que comprende un compuesto de la invención en combinación con al menos un portador farmacéutico, individual, por ejemplo un adyuvante, excipiente o vehículo, tal como diluyentes, agentes conservadores, materiales de relleno, agentes reguladores del flujo, agentes de desintegración, agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes de suspensión, agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes perfumadores, agentes antibacterianos, agentes fúngales, agentes lubricantes y agentes de dispersión, dependiendo de la naturaleza del modo de administración y las formas de dosificación. Por ejemplo, se pueden utilizar los ingredientes listados en Remington' s Pharmaceutical Sciences, 18- edición, Mack Publishing Company, Easton, PA, 1990. La frase "farmacéuticamente aceptable" se emplea en este texto para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del alcance del juicio médico acertado, adecuados para el uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación en proporción con la relación razonable de riesgo/beneficio. El término "profármacos farmacéuticamente aceptables" utilizado en este texto significa aquellos profármacos de los compuestos útiles de acuerdo con la presente invención que son, dentro del alcance del juicio médico acertado, adecuados para el uso en contacto con los tejidos de humanos y animales inferiores sin la toxicidad indebida, irritación, respuesta alérgica y similares, en proporción con una relación razonable de riesgo/beneficio y que son efectivos para su uso propuesto, asi como también formas zwitteriónicas, donde sea posible, de los compuestos de la invención. El término "profármacos", como se utiliza en este texto, se propone para incluir cualquier portador unido covalentemente que libera un fármaco precursor, activo de la presente invención in vivo cuando este profármaco se administra a un paciente. Puesto que se sabe que los profármacos mejoran numerosas cualidades deseables de los productos farmacéuticos (es decir, solubilidad, biodisponibilidad, preparación, etcétera) , los compuestos de la presente invención se pueden suministrar en forma de profármaco. De esta manera,, el artífice experto apreciará que la presente invención incluye profármacos de los compuestos actualmente reclamados, métodos para el suministro de los mismos y composiciones que contienen los mismos. Los profármacos de la presente invención se preparan al modificar grupos funcionales que están presentes en el compuesto de tal manera que las modificaciones sean escindidas, ya sea en una manipulación rutinaria o in vivo, para formar el compuesto precursor. La transformación in vivo puede ser, por ejemplo, como resultado de algún proceso metabólico, tal como la hidrólisis química o enzimática de un éster carboxílico, fosfórico o de sulfato o la reducción u oxidación de una funcionalidad susceptible. Los profármacos incluyen compuestos de la presente invención en donde un grupo hidroxi, amino o sulfidrilo se une a cualquier grupo que, cuando el profármaco de la presente invención se administra a un paciente, es escindido para formar un grupo hidroxilo libre, amino libre o sulfidrilo libre, respectivamente. Los grupos funcionales que se pueden transformar rápidamente in vivo, mediante la escisión metabólica, forman una clase de grupos reactivos con el grupo carboxilo de los compuestos de esta invención. Estos incluyen, pero no están limitados a, grupos tales como alcanoilo (tales como acetilo, propionilo, butirilo y similares) , aroilo sustituido y no sustituido (tal como benzoilo y benzoilo sustituido) , alcoxicarbonilo (tal como etoxicarbonilo) , trialquilsililo (tal como trimetil- y trietilsililo) , monoésteres formados con ácidos dicarboxilicos (tal como succinilo) y similares. Debido a la facilidad con la cual los grupos metabólicamente escindibles de los compuestos útiles de acuerdo con esta invención son escindidos in vivo, los compuestos que llevan estos grupos pueden actuar como profármacos. Los compuestos que llevan los grupos metabólicamente escindibles tienen la ventaja que pueden exhibir una biodisponibilidad mejorada como resultado de la solubilidad mejorada y/o velocidad de absorción conferida con el compuesto precursor en virtud de la presencia del grupo metabólicamente escindible. Una discusión completa de los profármacos se proporciona en los siguientes: Design of Prodrugs, H. Bundgaard, ed. , Elsevier, 1985; ethods in Enzymology, K. Widder y colaboradores, Ed., Academic Press, 42, páginas 309-396, 1985; A Textbook of Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, ed. , capitulo 5; "Design and Applications of Prodrugs" páginas 113-191, 1991; Advanced Drug Delivery Reviews, H. Bundgard, 8, páginas 1-38, 1992; Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, página 285, 1988; Chem. Pharm. Bull., N. Nakeya y colaboradores, 32, página 692, 1984; Pro-drugs as Novel Delivery Systems, T. Higuchi y V. Stella, Volumen 14 de A.C.S. Symposium Series, y Bioreversible Carriers in Drug Design, Edward B. Roche, ed. , American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987. El término "tratar" se refiere a: (i) prevenir que ocurra una enfermedad, trastorno o condición en un paciente que puede estar predispuesto a la enfermedad, trastorno y/o condición pero que aún no se ha diagnosticado que lo tiene; (ii) inhibir la enfermedad, trastorno o condición, es decir, detener su desarrollo; y (iii) aliviar la enfermedad, trastorno o condición, es decir, causar la regresión de la enfermedad, trastorno y/o condición. Los derivados de 4-arilquinolin-2-ona 3-sustituida de la presente invención son compuestos atropisoméricamente enriquecidos que tienen la fórmula en donde R y R son cada uno independientemente hidrógeno o metilo; R2, R3 y R4 son cada uno independientemente hidrógeno, halógeno, nitro o trifluorometilo, con la condición que R2, R3 y R4 no sean todos hidrógeno; y una sal, solvato o profármaco no tóxico, farmacéuticamente aceptable de los mismos . En un aspecto preferido de la invención, R1 es hidrógeno. En otro aspecto preferido de la invención R1 es metilo. Todavía en otro aspecto de la invención, R, R2 y R4 son hidrógeno, R3 es trifluorometilo y R5 es cloro. Un atropisómero de la invención puede ser representado por la fórmula: Con el propósito dé describir la presente invención, la estructura anterior es referida arbitrariamente en este texto como el (-) atropisómero o el atropisómero (A). La sección destacada del anillo de fenilo en la posición 4 de la quinolinona indica la rotación parcial del anillo de fenilo fuera del plano en el cual está situada la quinolinona. Otro atropisómero de la invención puede ser representado por la fórmula: Con el propósito de describir la presente invención, la estructura anterior es referida arbitrariamente en este texto como el (+) atropisómero o atropisómero (B) . Los compuestos preferidos para el uso en el método de esta invención incluyen los compuestos de la fórmula I listados a continuación: (1) 4- (5-cloro-2-hidroxifenil) -l-metil-3- (2-hidroxietil) -6- (trifluorometil) -2 (1H) -quinolinona; (2) 4- (5-cloro-2-hidroxifenil) -l-metil-3- (2-hidroxietil) -7-trifluorometil-2 (1H) -quinolinona; (3) 4- (5-cloro-2-hidroxifenil) -3- (2-hidroxietil) (trifluorometil) -2 (1H) -quinolinona; y (4) 4- (5-cloro-2-hidroxifenil) -3- (2-hidroxietil) -7- (trifluorometil) -2 (1H) -quinolinona. Los compuestos de la fórmula I se pueden preparar mediante diversos procedimientos conocidos para aquellas personas expertas en el campo, tales como, por ejemplo, aquellos descritos en las patentes norteamericanas Nos. 6,184,231, expedida el 6 de febrero de 2001 y 6,353,119, expedida el 5 de marzo de 2002. El siguiente esquema de reacción ilustra los procedimientos generales, representativos para la preparación de productos intermediarios y métodos para la preparación de compuestos de la fórmula I de acuerdo con esta invención.

También debe ser evidente para aquellas expertas en el campo que la sustitución apropiada de tanto los materiales como los métodos descritos en este texto producirá los ejemplos ilustrados posteriormente y aquellos incluidos por el alcance de esta invención.

ESQUEMA. DE REACCION 1 (a) LiHMDS/THF, -78 °C a TA (b) HC1 12N (c) pTSA, Tolueno, reflujo (d) LiHMDS (e) (CH30)2S02, K2C03 (f) hv, MeOH La preparación de la mezcla racémica de los compuestos de la fórmula I se puede llevar a cabo mediante las reacciones ilustradas en el esquema de reacción 1. El compuesto coumarina de la fórmula V se prepara preferiblemente al condensar la ?-butirolactona con el éster metílico de un ácido salicílico sustituido de la fórmula IV, el cual entonces es ciclizado fácilmente con una cantidad catalítica de ácido para producir la benzopiran-4-ona de la fórmula VI. El tratamiento del compuesto VI con una anilina sustituida de la fórmula VII como se ilustra en el paso (d) produjo el dihidrofurano de la fórmula VIII, el cual entonces es metilado opcionalmente con un agente de metilación, tal como sulfato de dimetilo. El hidrofurano de la fórmula VIII entonces se sujeta de manera ventajosa a una ciclización fotoquímica en un solvente orgánico, inerte para proporcionar el compuesto deseado de la fórmula I. Un esquema de reacción preferido para preparar los compuestos de la fórmula I se expone a continuación: ESQUEMA DE REACCION 2 Me3COOMe, THF NaH DS, O-ta, d) -78 a -40°C, 2 h e) NaOH, EtOH, f) 40°C, 1.5 h g) LiH DS h) O-ta, 1 h, luego H20, ta, 2 h i) i-PrOH, HC1 j) 45°C, 3 h Otro esquema de reacción preferido para preparar los compuestos de la fórmula I se expone a continuación: ESQUEMA DE REACCION 3 b) Ac20, Et3N, CH2C12, 4 h c) Mel, acetona, K2CO3, ta d) LiOH, H20, EtOH, 18 h, ta e) n-Bu4NF, THF, 36 h De acuerdo con la presente invención, el producto de reacción que contiene el (-) atropisómero y el (+) atropisómero se puede resolver para proporcionar una fracción enriquecida y de manera preferible sustancialmente pura, con respecto a uno de los atropisómeros. Preferiblemente, la reacción que contiene el atropisómero deseado, por ejemplo el (-) atropisómero, está sustancialmente libre del atropisómero correspondiente, por ejemplo el (+) atropisómero. Preferiblemente, se proporcionan dos fracciones: una primera fracción enriquecida, y de preferencia sustancialmente pura, con respecto al (-) atropisómero y una segunda fracción enriquecida, y de preferencia sustancialmente pura, con respecto al (+) atropisómero . El método particular para resolver la mezcla de atropisómeros no es critico para la presente invención. Se puede emplear cualquier método conocido para aquellas personas expertas en el campo, por ejemplo, la formación de sales diastereoméricas, iónicas (o complejos de coordinación) con compuestos quirales y la separación mediante la cristalización fraccional u otros métodos, la formación de compuestos diastereoméricos con reactivos de derivatización quiral, la separación de los diastereómeros y la conversión a los atropisómeros puros, la separación de atropisómeros directamente bajo condiciones quirales sobre una variedad de matrices que incluyen la cromatografía supercritica y la hidrólisis enzimática. Véase, por ejemplo, Stereochemistry of Carbón Compounds, supra; Lochmuller, C. H., (1975) J. Chromatogr., 113: (3) 283-302). Por ejemplo, las sales diastereoméricas se pueden formar mediante la reacción de bases quirales enantioméricamente puras, tales como, por ejemplo, brucina, quinina, efedrina, estricnina, a-metil-ß-feniletilamina (anfetamina) y similares con compuestos de la invención que llevan una funcionalidad ácida, tales como ácido carboxilico y ácido sulfónico . Las sales diastereoméricas se pueden inducir para separar mediante la cristalización fraccional o la cromatografía iónica. Para la separación de los compuestos de la invención que llevan una funcionalidad de amina, la adición de ácidos carboxílicos y sulfónicos quirales, tales como por ejemplo ácido canforsulfónico, ácido tartárico, ácido mandélico o ácido láctico, puede dar por resultado la formación de las sales diastereoméricas. Alternativamente, la mezcla racémica de los compuestos a resolverse se puede hacer reaccionar con un enantiómero de un compuesto quiral para formar un par diastereomérico . Por ejemplo, los compuestos diastereoméricos se pueden formar al hacer reaccionar los compuestos de la invención con reactivos de derivatización quiral enantioméricamente puros, tales como, por ejemplo, derivados de mentilo, seguido por la separación de los diastereómeros y la hidrólisis para producir el compuesto atropisoméricamente enriquecido, libre. Un método preferido para determinar la pureza óptica involucra hacer ésteres quirales, tales como un éster mentílico o éster osher, por ejemplo, acetato de cc-metoxi-a- (trifluorometil) fenilo [Jacob III. (1982) J. Org. Chem. 47:4165], de la mezcla racémica y analizar el espectro de la resonancia magnética nuclear ("RMN") por la presencia de los dos diastereómeros atropisoméricos . Alternativamente, una mezcla racémica de los dos atropisómeros se puede separar mediante la cromatografía utilizando una fase estacionaria quiral, véase, por ejemplo, Chiral Liquid Chromatography; V¡ . J. Lough, Ed. Chapman and Hall, Nueva York, (1989) ; Okamoto, "Optical resolution of dihydropyridine enantiomers by high-performance liquid chromatography using fenylcarbamates of polysaccharides as a chiral stationary phase", J. of Chromatogr. 513:375-378, (1990) . Los atropisómeros de los compuestos de la invención se pueden separar y se pueden aislar mediante la cromatografía en una fase estacionaria quiral, por ejemplo, con una columna Chiralpak AD utilizando por ejemplo una fase móvil que contiene: (a) 2-propanol; y (b) hexano que contiene una pequeña proporción (0.1 - 0.15%) de ya sea ácido trifluroacético ("TFA") o dietilamina ("DEA") . Alternativamente, el grupo de alcohol primario en los compuestos de la invención podría ser esterificado con un ácido carboxílico quiral para formar ésteres quirales, los cuales se pueden someter a la hidrólisis diastereoselectiva por una enzima, por ejemplo, esterasa. La caracterización de los atropisómeros se puede realizar mediante cualquier técnica adecuada que sea conocida para aquellas personas expertas en el campo. Los ejemplos de técnicas adecuadas incluyen la espectroscopia de RMN, por ejemplo RMN de protones o RMN C13, espectroscopia infrarroja, espectroscopia ultravioleta, mediciones físicas, por ejemplo punto de fusión, cristalografía de rayos x y cromatografía quiral para la pureza enantiomérica. Generalmente, los atropisómeros se pueden distinguir por medio de métodos utilizados para distinguir otras moléculas quirales con átomos de carbono asimétricos, tales como la rotación óptica y el dicroísmo circular. Muy sorprendentemente de acuerdo con la presente invención, se ha descubierto que los atropisómeros resueltos son estables. Como resultado, es posible proporcionar compuestos enriquecidos, y de preferencia sustancialmente puros, con respecto al atropisómero deseado que es resistente a la interconversión a la mezcla racémica. La capacidad para proporcionar atropisómeros estables es ventajosa. Por ejemplo, un atropisómero que sea más activo para tratar una cierta condición se puede proporcionar en dosificaciones que pueden ser sustancialmente menores que una dosificación de la mezcla racémica que tiene la misma efectividad, . por ejemplo, hasta una mitad menos. Alternativamente, una dosificación que es la misma como la dosificación de la mezcla racémica se puede proporcionar teniendo una efectividad mejorada. Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas asi como también formas solvatadas que incluyen formas hidratadas, tales como monohidrato, dihidrato, hemihidrato, trihidrato, tetrahidrato y similares. Los productos pueden ser solvatos verdaderos, mientras que en otros casos, los productos pueden retener únicamente el solvente adventicio o pueden ser una mezcla del solvente más algún solvente adventicio. Se debe apreciar por aquellas personas expertas en el campo que las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y se propone que sean incluidas dentro del alcance de la presente invención. Se cree que ciertos compuestos de la fórmula I pueden existir en dos formas tautoméricas . Se debe apreciar por aquellas personas expertas en el campo que cuando R1 es hidrógeno en el átomo de nitrógeno adyacente al átomo de carbono carbonilo, el anillo de quinolina puede existir en una forma de enol . Se propone que ambos tautómeros enólicos de los compuestos de la fórmula I sean incluidos dentro del alcance de la presente invención. Los abridores de los canales BK ejercen sus efectos celulares al incrementar la probabilidad de apertura de estos canales [Gribkoff, V.K. y colaboradores, Neuroscientist, 7:166-177 (2001); Gribkoff, V.K. y colaboradores, Adv.

Pharmacol . , 37:319-348 (1997); cKay, M. C. y colaboradores, J. Neurophysiol. , 71:1873-1882 (1994); y Olesen, S.-P., Exp. Opin. Invest. Drugs, 3:1181-1188 (1994)]. Este incremento en la apertura de los canales BK individuales da por resultado colectivamente la hiperpolarización de membranas celulares, particularmente en células despolarizadas, producidas mediante incrementos significantes en la conductancia mediada por BK de células completas. La hiperpolarización, a su vez, reduce la excitabilidad de células nerviosas y musculares y disminuye la probabilidad de apertura de canales de Ca2+ dependientes del voltaje, disminuyendo de manera efectiva las concentraciones intracelulares de este catión potencialmente peligroso . La capacidad de los compuestos de la invención para abrir los canales BK y para incrementar las corrientes mediadas por BK (K+) de salida de células completas se valoró bajo condiciones de fijación de voltaje al determinar su capacidad para incrementar al corriente de salida medida por BK (mSlo o hSlo) de mamíferos clonados que es expresada de manera heteróloga en oocitos Xenopus [Butler, A. y colaboradores, Science, 261:221-224 (1993); Dworetzky, S. I. y colaboradores, Mol. Brain Res., 27:189-193 (1994); Gribkoff, V.K. y colaboradores, Mol. Pharmacol., 50:206-217 (1996)]. Las dos construcciones de BK empleadas representan proteínas homologas estructuralmente casi idénticas y han probado ser farmacológicamente indistinguibles en las pruebas. Para aislar la corriente de BK de la corriente nativa (sin BK de fondo) , la toxina iberiotoxina bloqueadora de canales BK especifica y potente (IBTX) (Galvez, A. y colaboradores, J. Biol. Chem., 265:11083-11090 (1990)] se empleó en una concentración supramáxima, por ejemplo, 50-100 nanomolar ("nM") . La contribución relativa de la corriente mediada por canales BK a la corriente de salida total se determinó mediante la substracción de la corriente restante en presencia de IBTX (corriente sin BK) de los perfiles de corriente obtenidos en todas las otras condiciones experimentales (control, fármaco y lavado) [Gribkoff, V.K. y colaboradores, Mol. Pharmacol . , 50:206-217 (1996)]. Se determinó que en las concentraciones sometidas a prueba, los compuestos perfilados no afectaron significantemente las corrientes nativas sin BK en los oocitos. Todos los compuestos se sometieron a prueba en 5-10 oocitos y se reportan en la concentración indicada de 10 micromolar ("µ?") ; el efecto de los compuestos seleccionados de la invención sobre la corriente de BK se expresó como el porcentaje de corriente sensible a IBTX de control en un voltaje de la transmembrana individual (+140 mV) y se lista en la tabla 1. Los registros se realizaron utilizando técnicas de fijación de voltaje de dos eléctrodos, estándar [Stuhmer, . y colaboradores, Methods in Enzymology, Volumen 207:319-339, (1992)]; los protocolos de fijación de voltaje consistieron de despolarizaciones graduales de 500-750 milisegundos ("ms") de duración, de un potencial de retención de -60 mV, a un voltaje final de hasta +140 mV en pasos de 20 mV. La tabla 2 lista los datos de corriente-voltaje (I-V) para dos compuestos de la invención, aplicados a oocitos en una concentración de 10 µ?. Los medios experimentales (solución modificada de Barth) consistieron de milimolar (wm ") : NaCl (88), NaHC03 (2.4), KC1 (1.0), HEPES (10), MgS04 (0.82), Ca(N03)2 (0.33), CaCl2 (0.41) ; pH 7.5.

TABLA 1 * a 10 µ? expresado como un porcentaje de incremento sobre la corriente de BK en los protocolos, paso de voltaje a +140 mV.

TABLA 2 los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento de pacientes para condiciones que surgen de la disfunción de la polarización y la conductancia de membranas celulares y, preferiblemente, son indicados para el tratamiento de la isquemia, apoplejía, convulsiones, epilepsia, asma, síndrome de intestino irritable, migraña, lesión traumática del cerebro, lesión de la médula espinal, disfunción sexual, incontinencia urinaria y especialmente disfunción eréctil masculina, otros trastornos sensibles a la actividad de activación de canales BK. Por consiguiente, en un aspecto de la presente invención, se proporciona un método para el tratamiento o prevención de condiciones sensibles a la apertura de canales de potasio en un paciente en necesidad del mismo, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I o una sal o solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. En otro aspecto, esta invención proporciona un método para el tratamiento de o la protección de trastornos que son mediados por la apertura de los canales de K+ activados por calcio de gran conductancia en un paciente en necesidad del mismo, el cual comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Preferiblemente, los compuestos de la fórmula I son útiles en el tratamiento de la isquemia, apoplejía, convulsiones, asma, síndrome del intestino irritable, migraña, lesión traumática del cerebro, incontinencia urinaria y disfunción sexual tanto en hombres (disfunción eréctil, por ejemplo, debido a diabetes mellitus, lesión de la médula espinal, prostatectomía radical, etiología psicogénica o cualquier otra causa) y mujeres al mejorar el flujo sanguíneo a los genitales, especialmente el cuerpo cavernoso y otros trastornos sensibles a la actividad de activación de canales B . En otro aspecto, esta invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto de la fórmula I y un portador. Las composiciones farmacéuticas incluyen formas de dosificación adecuadas para la administración oral, parenteral (inclusive subcutánea, intramuscular, intradérmica e intravenosa), bronquial o nasal. De esta manera, se si utiliza un portador sólido, la preparación puede ser en tabletas, se puede colocar en una cápsula de gelatina dura en polvo o en forma de pelotillas o en la forma de un trocisco o una pastilla rombótica. El portador sólido puede contener excipientes convencionales, tales como agentes aglutinantes, materiales de relleno, lubricantes para la fabricación de tabletas, desintegrantes, agentes humectantes y similares. Si se desea, la tableta puede ser revestida con película mediante técnicas convencionales. Si se emplea un portador líquido, la preparación puede estar en la forma de un jarabe, emulsión, cápsula de gelatina suave, vehículo estéril para inyección, suspensión líquida acuosa o no acuosa o puede ser un producto seco para la reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes del uso. Las preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales, tales como agentes de suspensión, agentes de emulsificación, agentes humectantes, vehículos no acuosos (inclusive aceites comestibles) , conservadores, asi como también agentes saborizantes y/o colorantes. Para la administración parenteral, un vehículo comprenderá normalmente agua estéril, al menos en gran parte, aunque se pueden utilizar soluciones salinas, soluciones de glucosa y similares. Las suspensiones inyectables también se pueden utilizar, caso en el cual se pueden emplear agentes de suspensión convencionales. Los conservadores convencionales, agentes amortiguadores y similares también se pueden adicionar a las formas de dosificación parenterales . La administración de un compuesto de la fórmula I directamente en las formulaciones parenterales es particularmente útil. Las composiciones farmacéuticas se preparan mediante técnicas convencionales que son apropiadas para la preparación deseada que contiene cantidades apropiadas del ingrediente activo, esto es, el compuesto de la fórmula I de acuerdo con la invención. La dosificación de los compuestos de la fórmula I para lograr un efecto terapéutico dependerá no únicamente de factores tales como la edad, peso y sexo del paciente y modo de administración, sino también del grado de actividad de activación de canales de potasio deseada y la potencia del compuesto particular que se utiliza para el trastorno particular de la enfermedad tratada. También se contempla que el tratamiento y la dosificación del compuesto particular se pueden administrar en una forma de dosificación unitaria y que la forma de dosificación unitaria será ajustada por consiguiente por una persona experta en el campo para reflejar el nivel relativo de actividad. La decisión en cuanto a la dosificación particular a emplearse (y el número de veces a ser administrada al dia) está dentro de la discreción del médico y puede ser variada mediante la titulación de la dosificación a las circunstancias · particulares de esta invención para producir el efecto terapéutico deseado. Una dosificación adecuada de un compuesto de la fórmula I o una composición farmacéutica del mismo para un mamífero, inclusive el hombre, gue sufre de, o probablemente que sufre de cualquier otra condición descrita en este texto, es una cantidad de ingrediente activo de aproximadamente 0.01 microgramos por kilogramo {µg/ g) a 50 miligramos por kilogramo (mg/kg) de peso corporal y, preferiblemente, de aproximadamente 0.01 µg/kg a 5 mg/kg de peso corporal para la administración oral. Para la administración parenteral, la dosis puede estar en el rango de 0.1 µg/kg a 1 mg/kg de peso corporal para la administración intravenosa. El ingrediente activo será administrado preferiblemente en dosis iguales de una a cuatro veces al día. Sin embargo, usualmente se administra una dosificación pequeña y la dosificación es incrementada gradualmente hasta que se determina la dosificación óptima para el hospedante bajo tratamiento. Los compuestos de la presente invención se pueden emplear solos o en combinación con otros agentes terapéuticos, adecuados que son útiles en el tratamiento de la disfunción de la polarización y conductancia de membranas celulares, por ejemplo, la disfunción sexual, tales como inhibidores de monofosfato de guanina cíclico, fosfodiaterasa ("cGMP PDE") y particularmente inhibidores de cGMP PDE V, tal como sildenafil. Los agentes terapéuticos ejemplares son los inhibidores de PDE V seleccionados de imidazo-quinazolinas (véase O 98/08848), carbazoles (véase WO 97/03675, WO 97/03985 y WO 95/19978), imidazopurinonas (véase WO 97/19947), bencimidazoles (véase WO 97/24334), pirazoloquinolinas (véase patente norteamericana No. 5,488,055), derivados de ácido antranílico (véase WO 95/18097), heterociclos fusionados (véase WO 98/07430) y tienopirimidinas (véase DE 19632423) . El clorhidrato de alosetrón se puede combinar con los compuestos de la presente invención para tratar el síndrome de intestino irritable (véase, por ejemplo, las patentes norteamericanas Nos. 5,360,800 y 6,284,770) . Los agentes terapéuticos anteriores, cuando se emplean en combinación con los compuestos de la presente invención, se pueden utilizar, por ejemplo, en aquellas cantidades indicadas en the Physician' s Desk Reference (PDR) o de otra manera determinadas por una persona de experiencia ordinaria en el campo.

Sin embargo, se entenderá que la cantidad del compuesto realmente administrada será determinada por un médico, en vista de las circunstancias relevantes que incluyen la condición a ser tratada, la selección del compuesto a ser administrado, la ruta de administración seleccionada, la edad, peso y respuesta del paciente individual y la gravedad de los síntomas del paciente.

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos se proporcionan a manera de ilustración y no se deben considerar como limitantes del alcance de las reivindicaciones que siguen. En los siguientes ejemplos, todas las temperaturas se proporcionan en. grados centígrados. Los puntos de fusión que se registraron en un aparato de punto de fusión capilar Gallenkamp no están corregidos. Los espectros de la resonancia magnética de protones (R N 1H) se registraron en un espectrómetro Bruker AC de 300 o 500 megaHertzios ("mHz") . Todos los espectros se determinaron en los solventes indicados y los cambios químicos se reportan en unidades d campo abajo del tetrametilsilano estándar, interno (TMS) y las constantes de acoplamiento interprotones se reportan en Hertzios (Hz) . Los patrones de separación se designan como sigue: s, singulete; d, doblete; t, triplete; q, cuarteto, m, multiplete; br, pico amplio; dd, doblete de dobletes; bd, doblete amplio; dt, doblete de tripletes; bs, s amplio, singulete amplio; dq, doblete de cuartetos. Los espectros infrarrojos (IR) utilizando bromuro de potasio (KBr) se determinaron en un espectrómetro Perkin Elmer 781 de 4000 cnf1 a 400 cm"1, calibrado a una absorción de 1601 cirf1 de una película de poliestireno y se reportan en centímetros recíprocos (cm-1) . Los espectros de masas de baja resolución (E ) y el peso molecular aparente (MH+) o (M-H)~ se determinaron en un dispositivo Finnigan TSQ 7000. El análisis de CL-EM se llevó a cabo en un instrumento Shimadzu utilizando una columna YMC C18 (4.6 x 50 mm) empleando un gradiente lineal de 4 u 8 minutos de 0% a 100% del solvente B en A (solvente A: 10% de metanol, 90% de agua, 0.1% de TFA; solvente B: 90% de metanol, 10% agua, 0.1% de TFA) con un detector de luz ÜV ajustado a 220 nm. Los análisis de elementos se reportan como el porcentaje en peso. A menos que se indique de otra manera en las modalidades específicas, R2 y R4 son H en el título descriptivo de los ejemplos.

EJEMPLO 1 4- (5-Cloro-2-hidroxifenil) -3- (2-hidroxietil) -6 (trifluorometil) -2 (1H) -quinolinona El compuesto anterior se preparó como se describe a continuación.

Paso A - 3- (2-hidroxietil) -4-hidroxi-6-clorocoumarina A una solución de ?-butirolactona (15.5 g, 178.0 mmol) en THF (100 mL) a -78°C se adicionó una solución en THF 1.0 M de LiHMDS (356 mL, 356 mmol) y la mezcla resultante se agitó a -78 °C durante 1.5 horas. Se adicionó una solución de éster metílico 5-clorosalicílico (16.6 g, pureza de 98%, 89.0 mmol) en THF (95 mL) . Después de la agitación durante 1. hora a 0°C, la mezcla se calentó a temperatura ambiente durante toda la noche para asegurar la reacción completa. Después del enfriamiento a 0°C, se adicionó lentamente HC1 concentrado (12 N, 150 mL) para llevar el pH a 1. La solución de reacción se agitó hasta que el análisis de CLAR indicó la ausencia del producto intermediario de ceto-éster. A la mezcla se adicionaron 400 mL de CH2C12 y 300 mL de ¾0, la fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con- CH2C12 (100 mL) . Las capas orgánicas se combinaron y se secaron sobre Na2SC> anhidro y el solvente se removió bajo presión reducida para proporcionar un sólido. Se adicionó heptano (165 mL) a una solución del sólido en THF (290 mL) para cristalizar el producto. Después del enfriamiento a 0-5°C durante aproximadamente 3 horas, el producto se aisló mediante la filtración y se lavó con heptano. Después del secado in vacuo, se obtuvo un total de 13.9 g (rendimiento del 66%) del compuesto del título como cristales blanquecinos, p.f. 185-186°C; EM m/z 240; R N XH (DMSO-d6, 300 MHz) d 7.84 (d, 1H, J = 2.4 Hz) , 7.61 (dd, 1H, _ .7= 2.4, 8.8 Hz), 7.38 (d, 1H, J= 8.8 Hz), 3.56 (t, 2H, J = 6.6 Hz), 2.73 (t, 2H, J = 6.6 Hz) ; RMN 13C (DMSO-d6, 75 MHz) 6 162.6, 159.9, 150.5, 131.4, 127.9, 122.4, 118.2, 117.8, 103.2, 59.4, 27.6; IR (cirf1) 3247.2, 2945.1, 2458.6, 1664.9, 1623.9, 1572.7, 1311.5, 1378.1, 1070.8, 825.0. Análisis Calculado para CuH904Cl: C, 54.90; H, 3.77; Cl, 14.73. Encontrado: C, 54.79; H, 3.70; Cl, 14.76.

Paso B - 2 ,3-Dihidxo-8-cloro-4H-furoben--opiraii-4-ona A una solución de 3- (2-hidroxietil) -4-hidroxi-6-clorocoumarina (ejemplo 1) (8 g, 33.3 mmol) en tolueno (360 itiL) a temperatura ambiente se adicionó p-TSA (0.95 g, 5.0 mmol) y la solución resultante se calentó a reflujo con la remoción de agua utilizando un condensador Dean-Stark. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se lavó dos veces con una solución saturada de bicarbonato de sodio. El tolueno se removió mediante la destilación atmosférica a un volumen final de 32 mL. Después del enfriamiento a 70°C, el producto comenzó a cristalizarse. La suspensión espesa, cristalina se mantuvo entre 55-65 °C durante 30 minutos, seguido por el enfriamiento a 0-5°C. El producto se aisló mediante la filtración, se lavó con tolueno frío y se secó in vacuo. Se obtuvo un total de 5.5 g (rendimiento del 74%) del compuesto del titulo como cristales blanquecinos, p.f. 144-146°C; EM m/z 223 ( +H)+; RMN XH (CDC13, 300 Hz) d 7.58 (d, 1H, J = 2.5 Hz) , 7.49 (dd, 1H, J = 2.3, 8.8 Hz), 7.30 (d, 1H, J = 8.9 Hz), 4.90 (t, 2H, J= 9.3 Hz), 3.21 (t, 2H, J = 9.5 Hz) ; RMN 13C (CDC13, 75 MHz) d 166.4, 160.3, 153.4, 132.6, 129.6, 122.4, 118.6, 113.8, 103.6, 74.9, 27.1; IR (citf1) 3073.1, 2975.8, 1721.2, 1644.4, 1490.8, 1403.7, 1270.6, 1111.8, 1040.1. Análisis Calculado para CuH703Cl: C, 59.35; H, 3.17; Cl, 15.92. Encontrado: C, 59.13; H, 3.16; Cl, 15.93.

Paso C - 4- (4' -Trifluorometilfenilcarboxamida) -5- (2-hidroxi-5-cloro) -2 , 3-dihidrofurano A una solución de la 2, 3-dihidro-8-clóro-4H-furobenzopiran-4-ona (ejemplo 2) (1.02 g, 4.58 mmol) y 4- (trifluorometil) anilina (0.74 g, 4.58 mmol) en THF (50 mL) a -15 °C se adicionó LiHMDS (10.5 mL, 10.5 mmol, solución 1.0 M en THF) . La solución roja, clara se agitó a -15°C hasta que el análisis de CLAR indicó que quedaba <1% del material de partida (aproximadamente 30 minutos) . La mezcla de reacción se enfrió rápidamente por la adición de una solución acuosa de NaH2P04 (50 mL, 10% en peso en ¾0) . Después de la adición de éter terc-butil-metilico (25 mL) , las capas se separaron y la fase orgánica, rica se lavó sucesivamente con NaH2PC>4 (50 mL, 10% en peso en H20) y solución saturada de salmuera. Después del secado sobre Na2S04, la solución se concentró para proporcionar el compuesto del titulo como un aceite anaranjado, claro (1.76 g, rendimiento del 100%) que se cristalizó con la refrigeración. La adición de diclorometano (20 mL) proporcionó cristales blancos, los cuales se aislaron mediante la filtración, se lavaron con diclorometano (10 mL) y se secaron para proporcionar 1.6 gramos del compuesto del titulo (rendimiento del 90%). p.f. 180 - 180.5°C; E m/z 384 (M+H)+; RMN ¾ (DMS0-d6, 300 Hz) d 9.76 (s, 1H) , 9.34 (s, 1H) , 7.76 (d, 2H, J = 8.5 Hz) , 7.60 (d, 2H, J= 8.7 Hz) , 7.26 (s, 1H) , 7.24 (dd, 1H, J= 2.2, 7.0 Hz), 6.83 (dd, 1H, J = 2.4, 7.1), 4.52 (t, 2H, J = 9.6 Hz) , 3.16 (t,. 2H, J = 9.6 Hz) ; RMN 13C (DMSO-dg, 75 MHz) d 165.5, 159.7, 155.9, 144.7, 132.0, 131.3, 127.3, 123.7, 121.7, 121.2, 119.5, 110.1, 71.5, 32.9; IR (cnf1) 3303.6, 2950.2, 1654.6, 1608.5, 1531.7, 1408.8, 1326.9, 1116.9, 1065.7, 840.4.

Paso D - 4- (5-Cloro-2-hidroxifenil) -3- (2-hidroxietil) -6 (trifInorómetil) -2 (1H) - uinolinona Una solución del 4- (4' -trifluorometilfenil-carboxamida) -5- (2-hidroxi-5-cloro) -2 , 3-dihidrofurano preparado en el ejemplo 3 (1.76 g, 4.58 mmol) en MeOH (500 mL) se purgó con nitrógeno y se irradió con una lámpara Hanovia de 450 W a 30-40 °C hasta que el análisis de CLAR indicó que quedaba <1% del compuesto (ejemplo 3). El MeOH entonces se concentró in vacuo y el aceite resultante se disolvió en diclorometano (50 mL) . Se formaron cristales después de la agitación durante una hora a temperatura ambiente. Después del enfriamiento de la suspensión espesa a 0°C, los cristales se aislaron mediante la filtración y se secaron. Un total de 0.54 g (rendimiento del 30%) del compuesto del titulo se obtuvo como un sólido cristalino con una pureza de CLAR de 97% de área, p.f . 253-255°C; EM m/z 384 (M+H)+. RMN XH (DMSO-d6, 300 MHz) d 12.27 (s, 1H) , 9.91 (s, 1H) , 7.79 (d, 1H, J= 8.3 Hz), 7.53 (d, 1H, J = 8.5 Hz) , 7.42 (dd, 1H, J = 2.4, 8.6 Hz), 7.26 (d, 1H, J = 2.4 Hz) , 7.08 (s, 1H) , 7.06 (d, 1H, J = 8.9 Hz), 4.60 (m, 1H) , 3.44 (m, 2H) , 2.50 (m, 2H) ; RMN 13C (DMSO-ds, MHz) d 163.7, 155.1, 145.9, 141.7, 132.6, 131.5, 131.3, 127.8, 127.4, 125.5, 124.5, 123.5, 121.0, 119.3, 117.9, 60.7, 33.9. El compuesto hecho en el ejemplo 1 es una mezcla racémica del (-) atropisómero y el (+) atropisómero, los cuales son representados estructuralmente en la figura 1. El compuesto del ejemplo 1 se sujetó a la cromatografía quiral. El cromatograma de la mezcla racémica asi como también los atropisómeros individuales se muestran en las figuras 1, 2, 3 y 4, respectivamente.

EJEMPLO 2 4- (5-Cloro-2-hidroxifenil) -l-metil-3- (2-hidroxietil) -6-trifluorometil) -2 (1H) -quinolinona El compuesto anterior se preparó como se describe a continuación.

Paso A: - Ester 2-{3- [2- (terc-butil-difenil-silaniloxi) -etil] -2-oxo-6-trifluorometil-l ,2-dihidro-quinolin-4-il}-4-cloro-fenílico de ácido acético A una solución del compuesto del ejemplo 1 (5.00 g, 13.0 mmol) en DMF seco (100 mL) se adicionó cloruro de terc-butildifenilsililo (10.74 g, 39.1 mmol) e imidazol (2.66 g, 39.1 mmol) a temperatura ambiente bajo argón. La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas y se diluyó con acetato de etilo (300 mL) . La capa orgánica se lavó con agua (2 x 100 mL) , salmuera (100 mL) y se secó. El solvente se evaporó para obtener el éter sililico (6.61 g, 10.63 mmol, 81%). A la solución del éter sililico en diclorometano seco (200 mL) se adicionó Ac20 (5.43 g, 53.2 mmol) y Et3N (5.38 g, 53.2 mmol) a temperatura ambiente bajo argón. La mezcla de reacción se agitó durante 4 horas y la mezcla se diluyó con acetato de etilo (200 mL) . La mezcla orgánica se lavó con agua (2 x 100 mL) , salmuera (100 mL) y se secó. El solvente entonces se evaporó. La purificación se condujo mediante la cromatografía en columna (S1O2) utilizando hexano, acetato de etilo (95:5 a 80:20) como eluyente para proporcionar el compuesto del paso A (6.82 g, 96%, tiempo de retención, "Rt", = 2.3 minutos en una cromatografía líquida Cíe, columna CL Cíe") como un sólido de color blanco. EM [M+H] = 664. RMN ¾ (CD3OD) d 7.74 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.60 (d, J = 6.2 Hz, 1H) , 7.52 (m, 5H) , 7.37 (m, 2H) , 7.31 (m, 5H) , 7.23 (s, 1H) , 7.17 (s, 1H) , 3.94 (m, 1H) , 3.80 (m, 1H) , 2.89 (m, 1H) , 2.72 (m, 1H) , 1.76 (s, 3H) , 0.97 (s, 9H) .

Paso B: - Ester 2-{3- [2- (terc-butil-difenil-silaniloxi) -etil] -l-metil-2-oxo-6-trifluorometil-1 ,2-dihidro-quinolin-4-il}-4-cloro-£enilico de ácido acético Una suspensión del producto del paso A (6.82 g, 10.3 mmol) , yoduro de metilo (4.37 g, 30.8 mmol) y K2CO3 (3.05 g, 30.8 mmol) en acetona (200 mL) a temperatura ambiente se agitó durante 18 horas. Al final se diluyó con acetato de etilo (200 mL) , se lavó con agua (100 mL) , salmuera (100 mL) y se secó. La cromatografía con elusión de gradiente (Si02) utilizando hexanos, acetato de etilo (90:10 a 70:30) proporcionó en compuesto del paso B como el producto principal (5.52 g, 8.1 mmol, 79%, Rt = 2.3 minutos, CL Cíe) como un sólido de color blanco. EM [M+H] = 678. RMN ½ (CD3OD) d 7.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.73 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 7.52 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 7.48 (m, 4H) , 7.34 (m, 3H) , 7.21 (m, 6H) , 3.91 (m, 1H) , 3.76 (m, 4H) , 2.88 (m, 1H) , 2.70 (m, 1H) , 1.71 (s, 3H), 0.94 (s, 9H) . Un producto secundario caracterizado como el derivado de O-metilo tuvo las siguientes características. EM [M+H] = 678. RMN ¾ (CD3OD) d 7.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.95 (d, J = 5.1 Hz, 1H) , 7.52 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 7.48 (m, 4H) , 7.34 (m, 3H) , 7.21 (m, 6H) , 3.91 (m, 1H) , 3.76 (m, 4H) , 2.88 (m, 1H) , 2.70 (m, 1H) , 1.71 (s, 3H) , 0.94 (s, 9H) . La relación del derivado de N-metilo con el derivado de O-metilo fue aproximadamente 9:1.

Paso Cj - 4- (5-Cloro-2-hidroxifenil) -l-metil-3- (2-hidroxietil) -6-trifInorómetil) -2 (1H) -quinolinona El éster acetil-silílico (760 mg, 1.12 mmol) se agitó con LiOH.H20 (320 mg) en EtOH (10 mL) durante 18 horas a temperatura ambiente. ?1 final, los productos volátiles se removieron in vacuo. El residuo se disolvió en THF (5 mL) y se trató con fluoruro de tetra-n-butilamonio (1M en THF, 3 equivalentes) . Después de la agitación durante 18 horas, se agregaron 3 equivalentes adicionales y se agitaron durante otras 18 horas. El THF se evaporó, se dividió entre EtOAc y agua. La capa orgánica se secó (Na2S04) , se evaporó in vacuo. El residuo se purificó mediante la cromatografía en columna de gel sílice con EtOAc:CH2Cl2 (3:2) como eluyente. Las fracciones que contenían el compuesto requerido se combinaron y se evaporaron in vacuo para proporcionar 290 mg (rendimiento del 65%) del producto requerido. La recristalización de EtOAc y hexano proporcionó 152 mg del derivado de N-metilo. RM ½ (500 MHz, DMSO-d6) d 2.56 (2H, m) , 3.40 (2H, m) , 3.75 (3H, s) , 4.57 (1H, m) , 7.05 (1H, d, J = 8.8), 7.14 (1H, s), 7.25 (1H, d, J = 2.6), 7,41 (1H, dd, J = 8.7, 2.7), 7.77 (1H, d, J = 8.8), 7.89 (1H, dd, J = 8.8, 2.0), 9.91 (1H, s); EM m/z 398 ( H+) . El compuesto del ejemplo 2 se sujetó a cromatografía quiral. Los cromatogramas de la mezcla racémica y los atropisómeros individuales se muestran en la figuras 5, 6 y 7, respectivamente.

EJEMPLO 3 Resolución de los Atropisómeros del Ejemplo 1 (-) 4- (5-Cloro-2-hidroJci-fenil) -3- (2-hidroxi-etil) -6-trifluorometil-lH-quinolin-2-ona (+) 4- (5-Cloro-2-hidroxi-fenil) -3- (2-hidroxi-etil) -6-trifInorómetil-lH-quinolin-2-ona Una solución de 1 (~ 50 mg) en i-PrOH: hexano (1:1, 2 mL) se aplicó en cuatro inyecciones a una columna ChiralPak AD, 21 x 250 mm, de 10 µ??? de tamaño de partícula en cuatro inyecciones. La elusión con i-PrOH: hexano (1:19) se llevó a cabo a una velocidad de flujo de 10 mL/minuto. Se empleó un detector ÜVmax a 234 nm. La fracción que contenía el isómero móvil más rápido, isómero A, (tR = 46.1 minutos) con la evaporación proporcionó 20 mg, mientras que la fracción que contenia el pico posterior (tR = 48.3 minutos) con la evaporación proporcionó 21 mg del isómero B. El cromatograma del racemato se muestra en la figura 2.

Caracterización del Atropisómero A (-) : Los espectros de RMN ½ y RMN 13C fueron indistinguibles de aquellos mostrados para el racemato en el ejemplo 1. La rotación óptica para el isómero ? se determinó en MeOH, [a]22D (meOH) = 8.8°.

Caracterización del Atropisómero B (+) : Los espectros de RMN ¦"? y RMN 13C fueron indistinguibles de aquellos reportados para el racemato en el ejemplo 1. La rotación óptica para el isómero B se determinó en MeOH, [oc]22D (meOH) = +9.6°. Los atropisomeros resueltos se sujetaron a la CLAR de fase inversa como se describiera anteriormente con respecto al racemato. Los cromatogramas para cada atropisómero se muestran en las figuras 3 y 4.

EJEMPLO 4 Estabilidad de los Atropisomeros del Ejemplo 3 Estudios de CLAR quiral: Las soluciones de etanol (~ 3 mg/mL) de los dos atropoisómeros del ejemplo 1 se almacenaron a temperatura ambiente y se examinaron mediante la CLAR quiral como se describiera anteriormente en una columna Chiralpak AD ara la racemización. Se descubrió que los dos compuestos son estables aún después de un mes a temperatura ambiente. No se observó una racemización apreciable.

EJEMPLO 5 Resolución de los Atropisómeros del Ejemplo 2 (-) 4- (5-Cloro-2-hidroxi-£enil) -l-metil-3- (2-hidroxi-etil) -6-trifluorometil-lH-quinolin-2-ona (+) 4- (5-Cloro-2-hidroxi-fenil) -l-metil-3- (2-hidroxi-etil) -6-trifluorometil-lH-quinolin-2-ona El racemato se separó como se describe en el ejemplo 3 en una columna Chiralpak AD, 4.6 x 250 mm, 10 µtt? con 2-propanol :hexano : ácido trifluroacético (1600:399:1). El isómero de elusión más rápido (tR = 8.5 minutos) se designó como el isómero A y el isómero más lento (tR = 19.0 minutos) como el isómero B. El cromatograma del racemato se muestra en la figura 5.

Caracterización del Isómero A (-) : El espectro de RMN 1H es indistinguible de aquellos reportados para el racemato en el ejemplo 2. La rotación óptica para el isómero A se determinó en MeOH, [a] 22D (MeOH) = 6.9°.

Caracterización del Isómero B (+) : El espectro de RMN XH es indistinguible de aquellos reportados para el racemato en el ejemplo 2. La rotación óptica para el isómero B se determinó en MeOH, [a] 22D (MeOH) = +5.0°. Los atropisómeros resueltos se inyectaron a la CLAR quiral como se describiera anteriormente con respecto al racemato . Los cromatogramas se muestran en las figuras 6 y 1.

EJEMPLO 6 Actividad Motora, Colónica Inducida por la Tensión de Chorros de Aire Se cree que la tensión ambiental juega un papel clave en el síndrome de intestino irritable y otros estados alterados de motilidad del intestino. En modelos ambientales, se ha mostrado que la tensión ambiental causa una respuesta de defecación incrementada, presumiblemente, un resultado de la actividad entero-motora incrementada. En base a esto, se sometió a prueba la hipótesis que los abridores de canales de potasio maxi-K+ de la presente invención pueden ser efectivos en la reducción de la aceleración inducida por la tensión en la motilidad colónica, como es indicado por la producción de pelotillas fecales. Las ratas se dividieron aleatoriamente en 2 grupos y se trataron con un vehículo (polietilenglicol (400 gramos por mol) , 1 mL/kg, ip) o el compuesto del ejemplo 1 en forma de racemato (20 mg/kg) en el momento cero. A 1.5 horas posteriores al tratamiento, cada rata se recluyó parcialmente en un recipiente de plexiglass1111 y se sujetó a la tensión de chorros de aire. Esto se provocó al exponer a cada uno de los animales recluidos parcialmente a 3-4 episodios de 2 minutos de largo a chorros de aire con un intervalo de 8-10 minutos entre los episodios. La producción fecal se colectó y se registró el peso en húmedo. Los datos se analizaron al combinar la producción individual dentro de cada grupo para calcular un promedio de grupo y los promedios se compararon utilizando una prueba de estadística (prueba t de dos colas, no pareada; p<0.05). La producción fecal del grupo tratado con vehículo fue de 0.37 gramos y la producción fecal del grupo tratado con el compuesto fue 0.03 gramos. Los animales en el grupo tratado con el vehículo mostraron abrumadoramente (9/12) una respuesta de defecación al chorro de aire. En contraste, solo tres de los once animales tratados con el compuesto mostraron una respuesta de defecación. La producción fecal promedio de este grupo fue marcadamente menor que el promedio del grupo tratado con el vehículo. Se descubrió que los compuestos de la presente invención pueden atenuar significantemente la motilidad colónica inducida por la tensión en ratas.

Los resultados de las pruebas biológicas, anteriores demuestran que los compuestos de la invención pueden ser potentes abridores de los canales de + activados por calcio de gran conductancia (canales maxi-K o BK) . Además, se ha descubierto que los atropisomeros tienen diferentes actividades. Aunque la invención ha sido descrita con respecto a los aspectos específicos, aquellas personas expertas en el campo reconocerán que se propone que otros aspectos sean incluidos dentro del alcance de las reivindicaciones que siguen. Por ejemplo, los esquemas de reacción diferentes de aquellos descritos específicamente se pueden utilizar para elaborar los atropisomeros. También, se pueden utilizar otros sustituyentes sustancialmente equivalentes a los sustituyentes específicos descritos en este texto, por ejemplo, R, R1, R2, R3, R4, R5, dentro del alcance de la invención. Además, todos los documentos citados en esta solicitud, por ejemplo las patentes y publicaciones, se incorporan a manera de referencia.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (27)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : en donde R y R1 son cada uno independientemente hidrógeno o metilo; R2, R3 y R4 son cada uno independientemente hidrógeno, halógeno, nitro o trifluorometilo, con la condición que R2, R3 y R4 no sean todos hidrógeno; y R5 es bromo, cloro o nitro; o una sal, solvato o profármaco no tóxico, farmacéuticamente aceptable del mismo. caracterizado porque el compuesto es enriquecido atropisoméricamente .
2. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es sustancialmente puro con respecto a un atropisomero.
3. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque está sustancialmente libre de su atropisómero correspondiente.
4. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto es estable.
5. 5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 es hidrógeno.
6. 6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 es metilo.
7. 7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque R3 es trifluorometilo, R5 es cloro y R, R1, R2 y R4 son hidrógeno.
8. 8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste de: 4- (5-cloro-2-hidroxifenil) -l-metil-3- (2-hidroxietil) -6- (trifluorometil) -2 (1H) -quinolinona; 4- (5-cloro-2-hidroxifenil) -l-metil-3- (2-hidroxietil) -7-trifluorometil-2 (1H) -quinolinona; 4- (5-cloro-2-hidroxifenil) -3- (2-hidroxietil) -6- (trifluorometil) -2 (1H) -quinolinona; y 4- (5-cloro-2-hidroxifenil) -3- (2-hidroxietil) -7- (trifluorometil) -2 (1H) -quinolinona; o una sal, solvato o profármaco no tóxico, farmacéuticamente aceptable del mismo.
9. 9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es 4- (5-cloro-2-hidroxifenil) -3- (2-hidroxietil) -6- (trifluorometil) -2 (1H) -quinolinona .
10. 10. Él compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es 4- (5-cloro-2-hidroxifenil) -l-metil-3- (2-hidroxietil) -6-trifluorometil-2 (1H) -quinolinona.
11. 11. ün atropisomero de la fórmula caracterizado porque R y R1 son cada uno independientemente hidrógeno o metilo; R2, R3 y R4 son cada uno independientemente hidrógeno, halógeno, nitro o trifluorometilo, con la condición que R2, R3 y R4 no sean todos hidrógeno; y R5 es bromo, cloro o nitro; o una sal, solvato o profármaco no tóxico, farmacéuticamente aceptable del mismo.
12. 12. El atropisomero de conformidad con la reivindicación 11 sustancialmente libre de su atropisomero correspondiente de la fórmula caracterizado porque R, R1, R2, R3, R4 y R5 son como se definiera en la reivindicación 11.
13. 13. El atropisómero de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque R1 es hidrógeno.
14. 14. El atropisómero de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque R1 es metilo.
15. 15. El atropisómero de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque es estable durante al menos aproximadamente 1 dia.
16. 16. ün atropisómero de la fórmula caracterizado porque R y R son cada uno independientemente hidrógeno o metilo; R2, R3 y R4 son cada uno independientemente hidrógeno, halógeno, nitro o trifluorometilo, con la condición que R2, R3 y R4 no sean todos hidrógeno; y R5 es bromo, cloro o nitro; o una sal, solvato o profármaco no tóxico, farmacéuticamente aceptable del mismo.
17. 17. El atropisómero de conformidad con la reivindicación 16 sustancialmente libre de su atropisómero correspondiente de la fórmula caracterizado porque R, R1, R2, R3, R4 y R5 son como se definiera en la reivindicación 16.
18. 18. El atropisómero de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque R1 es hidrógeno.
19. 19. El atropisómero de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque R1 es metilo.
20. 20. El atropisómero de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque es estable durante un periodo de al menos aproximadamente 1 día..
21. 21. Una composición, caracterizada porque comprende el compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador farmacéuticamente aceptable.
22. 22. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porgue comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto para el tratamiento de condiciones sensibles a los abridores de canales de potasio activados por calcio de gran conductancia.
23. 23. Uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 para tratar una condición seleccionada del grupo que consiste de isquemia, apoplejía, convulsiones, epilepsia, asma, síndrome del intestino irritable, migraña, lesión traumática del cerebro, lesión de la médula espinal, disfunción sexual e incontinencia urinaria en un mamífero.
24. 24. Uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 para tratar una condición sensible a la apertura de canales de potasio activados por calcio de gran conductancia en un mamífero.
25. 25. Uso de conformidad con la reivindicación 24, en donde la condición se selecciona del grupo que consiste de isquemia, apoplejía, convulsiones, epilepsia, asma, síndrome del intestino irritable, migraña, lesión traumática del cerebro, lesión de la médula espinal, disfunción sexual e incontinencia urinaria.
26. 26. Uso de conformidad con la reivindicación 25, en donde la condición es el síndrome del intestino irritable.
27. 27. Uso de conformidad con la reivindicación 25, en donde la condición es la disfunción sexual .