MXPA04012518A - Profarmacos de aminoacidos excitadores. - Google Patents

Profarmacos de aminoacidos excitadores.

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James Allen Monn
Concepcion Pedregal-Tercero
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Abstract

La presente invencion se refiere a profarmacos de aminoacidos excitadores sinteticos y a procedimientos para su preparacion. La invencion se refiere ademas a metodos de uso y a composiciones farmaceuticas que comprenden, los compuestos para el tratamiento de trastornos neurologicos y trastornos psiquiatricos.

Description

PROFÁRMACOS DE AMINOÁCIDOS EXCITADORES Campo de la Invención La presente invención proporciona profármacos de aminoácidos excitadores sintéticos (compuestos de Fórmula I) y procedimientos para su preparación. La invención se refiere además a procedimientos de uso y a composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de Fórmula I para el tratamiento de trastornos neurológicos y trastornos psiquiátricos. Antecedentes de la Invención El tratamiento de trastornos neurológicos o psiquiátricos, tales como trastornos de ansiedad, se ha asociado a la activación selectiva de receptores de aminoácidos excitadores metabotrópicos. Por ejemplo, el ácido ( + )-4-amino-2-sulfonilbiciclo[3.1.0]-hexano-4,6-dicarboxílico se describe como un agonista del receptor mGluR2 activo en la patente de Estados Unidos No. 5,688,826 (la patente '826), expedida el 18 de noviembre de 1997. Además, el ácido ( + )-2-amino-4-fluorobiciclo[3.1.Ojhexano-2,6-dicarboxílico se describe como un agonista del receptor mGluR2 activo en la patente de Estados Unidos No. 5,958,960 (la patente '960), expedida el 28 de septiembre de 1999. La presente invención proporciona formas profármaco de compuestos agonistas del receptor mGluR2, que mejoran la potencia in vivo del compuesto precursor respectivo y producen mayor exposición oral del compuesto precursor. Los compuestos de la presente invención representan la mejor técnica para mantener la seguridad y eficacia de agonistas del receptor mGluR2 descrito con anterioridad con una mayor biodisponibilidad oral. En las solicitudes PCT números de serie PCT/US01/45866 y PCT/US02/00488 se describen profármacos de aminoácidos excitadores sintéticos y procedimientos para su preparación. Sumario de la Invención La presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I (I) en la que A es H-(Q)p-; Q se selecciona independientemente, en cada aparición, del grupo aminoacilo; p es un número entero de 1 a 10; X es O, S, SO, S02 o CR3R4; R3 es fluoro, X'OR5, SO3H, tetrazol-5-iIo, CN, PC>3R62, hidroxi o O2, y R4 es hidrógeno; o cada uno de R3 y R4 representa fluoro; o R3 y R4 representan juntos =0, =NOR7 o =CR8R9; o uno de R3 o R4 representa amino y el otro representa carboxilo; o R3 representa N3, (CH2)mCOOR5a, (CH2)mpo3R6a2. NHCONHR50 o NHS02R5C, y R4 representa hidrógeno; o R3 y R4 representan juntos =CHCOOR5D, = CHP03R6a2 0 =CHCN; X' representa un enlace, CH2 o CO; m es un número entero de 1 a 3; R5, R5aj R5b_ R5C R7 _ R8 y R9 sorii de forma independiente, un átomo de hidrógeno; un grupo alquilo (1-6C) opcionalmente substituido; un grupo alquenilo (2-6C) opcionalmente substituido; un grupo alquinilo (2-6C) opcionalmente substituido; un grupo aromático opcionalmente substituido; un grupo heteroaromático opcionalmente substituido; un grupo carbocíclico no aromático; un grupo heterocíclico no aromático; un grupo carbocíclico monocíclico no aromático condensado con uno o dos grupos aromáticos o heteroaromáticos monocíclicos; o un grupo heterocíclico monocíclico no aromático condensado con uno o dos grupos aromáticos o heteroaromáticos monocíclicos; R6 y R6a representan independientemente hidrógeno o un grupo alquilo (1-6C); R10 es hidrógeno o fluoro; y es hidrógeno, fluoro o hidroxi; o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. La presente invención proporciona también un compuesto de Fórmula I en la que los substituyentes son como se han definido antes, con tal que el compuesto no sea uno en el que X es CR3R _ en donde R^ es fluoro y R^ es hidrógeno, p es 1 y Q es L-alanilo; o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. La presente invención proporciona también un compuesto de Fórmula I en la que A es H-(Q)p-; Q se selecciona independientemente, en cada aparición, del grupo aminoacilo; p es un número entero de 1 a 3; X es O, S, SO, SO2 o CR3R4; R3 es f|Uoro o hidroxi, y R^ es hidrógeno; o R^ y R4 representan juntos =0; R^0 es hidrógeno o fluoro; y R11 es hidrógeno, fluoro o hidroxi; o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. La presente invención proporciona también un compuesto de Fórmula I en la que A es H-(Q)p-; Q es L- alanilo; p es 1 ; X es CR3R4; R3 es fluoro y R4 es hidrógeno; R10 es hidrógeno; y R^ es hidrógeno; o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. Se apreciará que los compuestos de Fórmula I contienen al menos cuatro átomos de carbono asimétricos. La presente invención incluye todas las formas estereoisoméricas de los compuestos de Fórmula I, incluyendo cada uno de los enantiómeros individuales y sus mezclas tales como formas profármaco de compuestos descritos en la patente '826 tales como, por ejemplo, ácido 1 SR,4RS,5RS,6RS-4-am no-(2-sulfonilbiciclo[3.1.0]-hexano)-4,6-dicarboxílico. Otro aspecto de la presente invención proporciona una formulación farmacéutica que comprende, en asociación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, un compuesto de Fórmula I, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. Otro aspecto de la presente invención proporciona un método para afectar a los receptores de glutamato metabotrópico ligados a cAMP en un paciente, que comprende administrar a un paciente que requiere una neurotransmisión modulada de aminoácidos excitadores una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula I. La presente invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I para la fabricación de un medicamento para afectar a los receptores de glutamato metabotrópico ligados a cAMP en un paciente. Otro aspecto de la presente invención proporciona un método de administración de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula II que comprende administrar a un paciente que requiere neurotransmisión modulada de aminoácidos excitadores una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula I. La presente invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I para la fabricación de un medicamento para administrar una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula II. Otro aspecto de la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno neurológico en un paciente que comprende administrar al paciente que necesite del tratamiento mismo, una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula I. La presente invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I para la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno neurológico en un paciente. Otro aspecto de la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno psiquiátrico en un paciente que comprende administrar al paciente que necesite del tratamiento mismo, una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula I. La presente invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula 1 para la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno psiquiátrico en un paciente. Los compuestos de Fórmula I se pueden preparar por un procedimiento que es análogo a uno conocido en la técnica química para la producción de compuestos heterocíclicos estructuralmente análogos o por un nuevo procedimiento descrito en la presente. Tales procedimientos e intermedios útiles para la fabricación de un compuesto de Fórmula I como se ha definido antes se ilustran por los siguientes procedimientos en los que, a no ser que se indique de otro modo, los significados de los radicales genéricos son como se definen en la presente. La presente invención proporciona un procedimiento para preparar compuestos de Fórmula I que comprende acilar un compuesto de fórmula (ii): (H) con un aminoacilo correspondiente de Fórmula III PgN-A- (iil) en la que PgN es un grupo protector de nitrógeno y A es como se ha definido antes; a continuación, para cualquiera de los procedimientos anteriores, cuando se protege un grupo funcional usando un grupo protector, retirar el grupo protector; a continuación, para cualquiera de los procedimientos anteriores: cuando se requiere una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de Fórmula I, hacer reaccionar la forma básica de tal compuesto de Fórmula I con un ácido proporcionando un contraión farmacéuticamente aceptable; o para un compuesto de Fórmula I que tiene una parte ácida, hacer reaccionar la forma ácida de tal compuesto de Fórmula I con una base que proporciona el catión farmacéuticamente aceptable; o para un compuesto zwitteriónico de Fórmula I, neutralizar la forma de sal de adición de ácido o la forma sal de adición de base de tal compuesto de Fórmula I; o por cualquier otro procedimiento convencional. La presente invención también proporciona compuestos de Fórmula I, en la que X es CH2, R10 es fluoro, y los otros variables son como se han definido antes. Descripción Detallada de la Invención Se ha encontrado que los compuestos de la invención son profármacos útiles de compuestos que son agonistas selectivos de receptores de glutamato metabotrópicos y, por lo tanto, son útiles en el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central tales como enfermedades neurológicas, por ejemplo, enfermedades neurodegenerativas y como agentes antipsicóticos, ansiolíticos, para el abandono de drogas, antidepresivos, anticonvulsivos, analgésicos y antieméticos. Se apreciará que los compuestos de Fórmula I contienen al menos cuatro átomos de carbono asimétricos, estando tres en el anillo ciclopropano y uno en el carbono a del grupo aminoácido. Por consiguiente, los compuestos de la invención pueden existir en y aislarse en forma enantioméricamente pura, en forma racémica o en una mezcla diastereoisomérica. La parte de aminoácido tiene preferiblemente la configuración de aminoácidos natural, es decir, la configuración L relativa al aldehido D-gliceroI. La presente invención incluye sales farmacéuticamente aceptables de un compuesto de Fórmula I. Estas sales pueden existir en combinación con la porción ácida o básica de la molécula y pueden existir en forma de sales de adición de ácidos, de amonio primario, secundario, terciario o cuaternario, de metales alcalinos o de metales alcalinotérreos. Por lo general, las sales de adición de ácidos se pueden preparar por la reacción de un ácido con un compuesto de Fórmula I. De forma alternativa, las sales de adición de ácidos se pueden preparar haciendo reaccionar el penúltimo compuesto (intermedio protegido) con equivalentes apropiados de ácido para producir la forma de sal correspondiente que, a su vez, se puede hacer reaccionar para producir un compuesto de Fórmula I u otras sales. Las sales de metales alcalinos y de metales alcalinotérreos se preparan por lo general por la reacción de la forma hidróxido de la sal del metal deseado con un compuesto de Fórmula I. Algunas sales particulares proporcionan ciertas ventajas de formulación debido a su forma cristalina. Las formas amorfas no cristalinas de compuestos pueden ser higroscópicas. Las formas cristalinas de compuestos farmacéuticos son a menudo más deseables debido a que presentan propiedades en estado sólido favorables. Los ácidos empleados corrientemente para formar tales sales incluyen ácidos inorgánicos, por ejemplo, ácidos clorhídrico, bromhídrico, nítrico, sulfúrico o fosfórico, o con ácidos orgánicos, tales como ácidos carboxílicos orgánicos, por ejemplo, ácidos glicólico, maleico, hidroximaleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, salicíclico, o acetoxibenzoico u orgánico sulfónico, 2-hidroxietanosulfónico, tolueno-p-sulfónico, metanosulfónico, naftaleno-2-sulfónico, bencenosulfónico o etanosulfónico. Además de las sales farmacéuticamente aceptables, en la invención se incluyen otras sales. Estas pueden servir como intermedios en la purificación de compuestos o en la preparación de otras sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables, o son útiles para identificación, caracterización o purificación. En la presente invención, los compuestos de Fórmula I incluyen solvatos de los mismos. En particular, los compuestos de Fórmula I incluyen sus hidratos. Además, la presente invención contempla profármacos de compuestos fluorados como se describe en las Solicitudes Internacionales Números PCT/JP99/03984, PCT7JP99/00324 y PCT7JP01/05550. Véanse las Publicaciones Internacionales Números WO/0012464, WO/9938839 y WO/0200605, respectivamente. Por ejemplo, la presente invención contempla profármacos de ácido 1 S,2f?,5S,6S-2-amino-6-fIuoro-4-oxobiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico; ácido 1 S,2f?,4S,5S,6S-2-amino-6-fluoro-4-hidroxibiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico; ácido 1 S,2fi,3R,5S,6S-2-amino-3-fluorob¡ciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico; y ácido 1 S,2f?,3S,5S,6S-2-amino-6-fluoro-3-hidroxibiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico. Se ha demostrado que una diversidad de funciones fisiológicas están sujetas a la influencia de una estimulación excesiva o inapropiada de la transmisión de aminoácidos excitadores. Se cree que los compuestos de Fórmula I de la presente invención tienen la capacidad de tratar una diversidad de trastornos neurológicos en mamíferos asociados con este estado, incluyendo trastorno neurológico agudo tal como deficiencias cerebrales después de cirugía de derivación cardiaca e injerto, ictus (apoplejía), isquemia cerebral, traumatismo de la médula espinal, traumatismo craneal, hipoxia perinatal, paro cardíaco y lesión neuronal hipoglucémica. Se cree que los compuestos de Fórmula I tienen la capacidad de tratar una diversidad de trastornos neurológicos crónicos tales como enfermedad de Alzheimer, corea de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica, demencia inducida por SIDA, lesión ocular y retinopatía, trastornos cognitivos y Parkinson idiopático e inducido por fármacos. La presente invención también proporciona métodos para tratar estos trastornos que comprenden administrar a un paciente que lo necesita una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. Los compuestos de Fórmula I de la presente invención tratan una diversidad de trastornos neurologicos diferentes en pacientes que están asociados con disfunción del glutamato, incluyendo espasmos musculares, convulsiones, cefaleas migrañosas, incontinencia urinaria, dolor, trastorno disfórico premenstrual (PDD), psicosis (tal como esquizofrenia), tolerancia, deshabituación, abandono y deseo de drogas (tales como nicotina, opiáceos, cocaína, benzodiazepinas y etanol), ansiedad y trastornos relacionados, emesis, edema cerebral, dolor crónico y discinesia tardía. Los compuestos de Fórmula I también son útiles como agentes antidepresivos y analgésicos. Por lo tanto, la presente invención también proporciona métodos para tratar estos trastornos que comprenden administrar a un paciente que lo necesita una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. Las siguientes definiciones se dan para explicar el significado y alcance de diversos términos usados en la presente. Los términos generales usados en la presente tienen sus significados habituales. El término "afectar" se refiere a un compuesto de Fórmula II que actúa como agonista en un receptor de aminoácido excitador. El término "receptor de aminoácido excitador" se refiere a un receptor de glutamato metabotrópico, un receptor que se acopla a efectores celulares a través de proteínas que se unen a GTP. El término "receptor de glutamato metabotrópico ligado a cAMP" se refiere a un receptor metabotrópico que está acoplado para inhibir la actividad de adenilato ciclasa. El término "trastorno neurológico" se refiere tanto a estados patológicos neurodegenerativos agudos como crónicos, incluyendo deficiencias cerebrales después de cirugía de derivación cardiaca o injerto, isquemia cerebral (por ejemplo apoplejía que resulta del paro cardíaco), traumatismo de la médula espinal, traumatismo craneal, enfermedad de Alzheimer, corea de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica, demencia inducida por SIDA, hipoxia perinatal, lesión neuronal hipoglucémica, lesión ocular y retinopatía, trastornos cognitivos, Parkinson idiopático e inducido por fármacos. Este término incluye también otros estados patológicos neuronales que están causados por disfunción del glutamato, incluyendo espasmos musculares, cefaleas migrañosas, incontinencia urinaria, tolerancia, deshabituación , abandono y deseo de drogas (es decir, opiáceos, benzodiazepinas, nicotina, cocaína o etanol), abandono del tabaco, emesis, edema cerebral, dolor crónico, trastornos del sueño, convulsiones, síndrome de Tourette, trastorno por déficit de atención y discinesia tardía. El término "trastorno psiquiátrico" se refiere tanto a estados patológicos psiquiátricos agudos como crónicos incluyendo esquizofrenia, ansiedad y trastornos relacionados (por ejemplo, ataques de pánico, y trastornos cardiovasculares relacionados con el estrés), depresión, trastornos bipolares, psicosis, trastornos obsesivo-compulsivos, trastorno de ansiedad generalizada, trastorno de estrés agudo y trastorno de pánico. Tal y como se usa en la presente, el término "cantidad eficaz" se refiere a la cantidad o dosis del compuesto, tras la administración de la dosis única o múltiple al paciente, que proporciona el efecto deseado en el paciente bajo diagnóstico o tratamiento. Se puede determinar fácilmente una cantidad eficaz por el médico encargado, como experto en la técnica, mediante el uso de técnicas conocidas y observando los resultados obtenidos en circunstancias análogas. Al determinar la cantidad o dosis eficaz de compuesto administrado, se considerarán una serie de factores por el médico encargado, incluyendo, pero no limitados a: la especie de animal; su tamaño, edad y salud general; la enfermedad específica en cuestión; el grado de o implicación o la intensidad de la enfermedad; la respuesta del paciente particular; el compuesto particular administrado; el modo de administración; las características de biodisponibilidad de la preparación administrada; el régimen de dosificación seleccionada; el uso de medicación concomitante; y otras circunstancias relevantes. Por ejemplo, una dosis diaria típica puede contener de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 300 mg del ingrediente activo. Los compuestos se pueden administrar por una diversidad de vías que incluyen las vías oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular, bucal o intranasal. Como alternativa, el compuesto se puede administrar por infusión continua. Tal y como se usa en la presente, el término "paciente" se refiere a un mamífero, tal como un ratón, cobaya, rata, perro o ser humano. Se sobreentiende que el paciente preferido es un ser humano. El término "tratamiento" (o "tratar") tal y como se usa en la presente incluye su significado aceptado generalmente que incluye impedir, prevenir, limitar, y retardar, detener o invertir la progresión de un síntoma resultante. Como tales, los métodos de la presente invención abarcan tanto la administración terapéutica como profiláctica.
Los términos químicos generales usados en la presente tienen sus significados habituales. Por ejemplo, el término "alquilo (1-6C) significa un grupo lineal o ramificado. Ejemplos de valores para un grupo alquilo (1-6C) incluyen alquilo (1-4C) tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo e isobutilo. El término "alquenilo (2-6C) " incluye alquenilo (2-4C), tal como alilo. El término "alquinilo (2-6C) " incluye alquinilo (2-4C), tal como propinilo. El término "opcionalmente substituido", tal como se usa en los términos "grupo alquilo (1-6C) opcionalmente substituido," "grupo alquenilo (2-6C) opcionalmente substituido" y "grupo alquinilo (2-6C) opcionalmente substituido," significa en la presente que uno o más substituyentes pueden estar presentes, preferiblemente de uno a tres, estando seleccionados dichos substituyentes de átomos y grupos que, cuando están presentes en el compuesto de Fórmula I, no impiden que el compuesto de Fórmula I module la función del receptor de glutamato metabotrópico. Ejemplos de átomos y grupos que pueden estar presentes en un grupo alquilo (1-6C) opcionalmente substituido, un grupo alquenilo (2-6C) opcionalmente substituido o un grupo alquinilo (2-6C) opcionalmente substituido son un grupo aromático opcionalmente substituido, un grupo heteroaromático opcionalmente substituido, un grupo carbocíclico no aromático, un grupo heterocíclico no aromático, un grupo carbocíclico monocíclico no aromático condensado con uno o dos grupos aromáticos o heteroaromáticos monocíclicos y un grupo heterocíclico monocíclico no aromático condensado con uno o dos grupos aromáticos o heteroaromáticos monocíclicos. El término "grupo heteroaromático" incluye un anillo aromático de 5 a 6 miembros que contiene de uno a cuatro heteroátomos seleccionados de oxígeno, azufre y nitrógeno y un grupo bicíclico aromático que comprende un anillo de 5 a 6 miembros que contiene de uno a cuatro heteroátomos seleccionados de oxígeno, azufre y nitrógeno condensado con un anillo benceno o un anillo de 5 a 6 miembros que contiene de uno a cuatro heteroátomos seleccionados de oxígeno, azufre y nitrógeno. Ejemplos de grupos heteroaromáticos son furilo, tiofenilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, imidazolilo, pirimidilo, benzofurilo, benzotiofenilo, benzoimidazolilo, benzoxazolilo, benzotiazolilo e indolilo. El término "grupo aromático" incluye fenilo y un anillo carbocíclico aromático policíclico tal como naftilo. El término "opcionalmente substituido" tal como se usa en los términos "grupo heteroaromático opcionalmente substituido" y "grupo aromático opcionalmente substituido," significa en la presente que pueden estar presentes uno o más su bstituyentes, estando seleccionados dichos substituyentes de átomos y grupos que, cuando están presentes en el compuesto de Fórmula I, no impiden que el compuesto de Fórmula I module la función del receptor de glutamato metabotropico. Ejemplos de átomos y grupos que pueden estar presentes en un grupo heteroaromático opcionalmente substituido o un grupo aromático opcionalmente substituido son amino, hidroxi, nitro, halógeno, alquilo (1-6C), alcoxi (1-6C), alquiltio (1-6C), carboxi, alcoxi (1 -6C)carbonilo, carbamoílo, alcanoil (1-6C)amino, alquil ( 1 -6C)sulfoniIo, alquil (1 -6C)sulfon¡lamino, fenilo opcionalmente substituido, fenoxi, feniltio, fenilsulfonilo, fenilsulfonilamino, toluenosulfonilamino, fluoroalquilo (1-6C) y fluoroalcoxi (1-6C). Ejemplos de valores particulares son amino, hidroxi, fluoro, cloro, bromo, yodo, metilo, metoxi, metiltio, carboxi, acetilamino, metanosulfonilo, nitro, acetilo, fenoxi, feniltio, fenilsulfonilo, metanosulfonilamino y trifluorometilo. Ejemplos de valores para un grupo aromático opcionalmente substituido son 1-naftilo, 2-naftilo, fenilo, 2-bifenilo, 3-bifenilo, 4-bifenilo, 2-hidroxifenilo, 3-hidroxifenilo, 4-hidroxifenilo, 2-fluorofenilo, 3-fluorofenilo, 4-fIuorofenilo, 2,4-difluorofenilo, 3,4-difluorofenilo, pentafluorofenilo, 2-clorofenilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 2,4-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 3-cloro-4-fluorofenilo, 3,5-dicIorofenilo, 2-bromofenilo, 3-bromofenilo, 4-bromofenilo, 2-metilfenilo, 3- metilfenilo, 4-metilfenilo, 2-metoxifenilo, 3-metoxifeniIo, 4-metoxifenilo, 2,3-dimetoxifenilo, 2,5-dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo, 2-trifluorometilfenilo, 3-trifluorometilfenilo, 4-trifluorometilfenilo, 2-fluoro-3-trifluorometilfenilo, 3-trifluorometil-4-fluorofeniIo, 3-trifluorometiI-5-fluorofenilo, 2-fIuoro-5-trifIuorometiIfenilo, 2-fenoxifenilo, 3-fenoxifenilo, 3-carboxifenilo y 4-carboxifenilo.
El término "grupo carbocíclico no aromático" incluye un grupo monocíclico, por ejemplo un grupo cicloalquilo (3-10C), tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclononilo o ciclodecilo y un grupo policíclico condensado tal como 1-adamantilo o 2-adamantilo, 1- decalilo, 2-decalilo, 4a-decalilo, biciclo[3, 3, 0]oct-1 -ilo, -2-ilo o -3 - i I o , biciclo[4,3,0]non-1 -ilo, -2-ilo, -3-¡lo o -7-¡lo, biciclo[5,3,0]dec-1-ilo, -2-ilo, -3 -i I o , -4-ilo, -8-ilo o -9-ilo y biciclo[3,3,1]non-1-iIo,-2-ilo,-3-ilo o 9-ilo. El término "grupo heterocícüco no aromático" incluye un anillo de 4 a 7 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de oxígeno, azufre y nitrógeno, por ejemplo azetidin-1 -ilo o -2-ilo, pirrolidin-1 -ilo, -2-ilo o -3-ilo, piperidin-1 -ilo, -2-ilo, -3-ilo o -4-ilo, hexahidroazepin-1 -ilo, -2-ilo, -3-ilo o -4-ilo, oxetan-2-ilo o -3-ilo, tetrahidrofuran- 2- iIo o -3-ilo, tetrahidropiran-2-ilo, -3-ilo o -4-ilo, hexahidrooxepin-2-ilo, -3-ilo o -4-ilo, tietan-2-ilo o -3-ilo, tetrahidrotiofen-2-ilo o -3-ilo, tetrahidrotiopiran-2-ilo, -3-ilo o -4-iIo, hexahidrotiepin-2-ilo, -3-¡lo o -4-¡lo, piperazin-1 -ilo o - 2- ilo, morfolin-1 -ilo, -2 - i I o o -3-iIo, tiomorfolin-1 -ilo, -2-ilo o - 3- ilo, tetrahidropirimidin-1 -ilo, -2-ilo, -4-ilo o -5-ilo, imidazolin-1 -ilo, -2-ilo o -4-ilo, ¡midazolidin-1 -ilo, -2-ilo o -4-ilo, oxazolin-2-ilo, -3-ilo, -4-ilo o -5-ilo, oxazolidin-2-iIo, -3-ilo, -4-ilo o -5-ilo, tiazolin-2-ilo, -3-ilo, -4-ilo o -5-ilo, o tiazolidin-2-ilo, -3-¡lo, -4-ilo o -5-ilo. El término "grupo carbocíclico monocíclico no aromático condensado con uno o dos grupos aromáticos o heteroaromáticos monocíclicos" incluye un grupo cicloalquilo (3-10C) condensado con un anillo benceno o un anillo aromático de 5 a 6 miembros que contiene de uno a cuatro heteroátomos seleccionados de oxígeno, azufre y nitrógeno, tal como indanilo, 1 ,2,3,4-tetrahidronaft-1 -ilo o -2-ilo, 5,6,7,8-tetrahidroquinolin-5-ilo, -6-ilo, -7-ilo u 8-ilo, 5,6,7,8-tetrahidroisoquinolin-5-ilo, -6-ilo, -7-ilo u 8-ilo, 4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-4-ilo, -5-ilo, -6-ilo o -7-ilo, dibenzo[2,3,6,7]cicIoheptan-1-ilo o -4-ilo, dibenzo[2,3,6,7]ciclohept-4-en-1 -ilo o -4-ilo o 9-fluorenilo. El término "grupo heterocíclico monocíclico no aromático condensado con uno o dos grupos aromáticos o heteroaromáticos monocíclicos" incluye un anillo de 4 a 7 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de oxígeno, azufre y nitrógeno, condensado con un anillo benceno o un anillo aromático de 5 a 6 miembros que contiene de uno a cuatro heteroátomos seleccionados de oxígeno, azufre y nitrógeno, tal como 2,3-dihidrobenzopiran-2-ilo, -3-ilo o -4-ilo, xanten-9-ilo, 1,2,3,4-tetrahidroquinolin-1-ilo, -2-ilo, -3-ilo o -4-ilo, 9,10-dihidroacridin-9-ilo o - 10- i I o , 2,3-dihidrobenzotiopiran-2-ilo, -3-ilo o -4-ilo, o dibenzotiopiran-4-ilo. El término "grupo protector de nitrógeno" tal como se usa en la presente y como se representa por "PgN " Se refiere a los grupos destinados a proteger o bloquear el grupo nitrógeno contra reacciones indeseables durante los procedimientos sintéticos. La elección del grupo protector de nitrógeno adecuado usado dependerá de las condiciones que serán empleadas en las posteriores etapas de reacción en las que se requiere protección, como es bien conocido por un experto en la técnica. Grupos protectores de nitrógeno comúnmente usados se describen en T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3a Ed. (John Wiley & Sons, New York (1999)). Un grupo protector de nitrógeno preferido es fer-butoxicarbonilo. El término "grupo protector de carboxilo," tal como se usa en la presente y se representa por "Pg^," se refiere a uno de los derivados éster del grupo ácido carboxílico empleado comúnmente para bloquear o proteger el grupo ácido carboxílico mientras se llevan a cabo reacciones sobre otros grupos funcionales del compuesto. Valores particulares incluyen, por ejemplo, metilo, etilo, íer-butilo, bencilo, metoximetilo, trimetilsililo y similares. Otros ejemplos de tales grupos se pueden encontrar en T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, 3a Ed. (John Wiley & Sons, New York (1999)). Grupos protectores de carboxilo preferidos son metilo y etilo. El éster se descompone usando un procedimiento convencional que no afecta a otra porción de la molécula. El término "grupo protector de hidroxilo" representa un grupo sobreentendido por un experto en la técnica química orgánica del tipo descrito en el Capítulo 2 de Greene and Wuts. Grupos protectores de hidroxilo representativos incluyen, por ejemplo, grupos éter, grupos éter etílico substituido, grupos éter isopropílico, grupos éter fenílico y fenílico substituido, grupos éter bencílico y bencílico substituido, grupos éter alquilsililo, grupos protectores éster y similares. La especie de grupo protector de hidroxilo empleado no es crítica con tal que el grupo hidroxilo derivatizado sea estable a las condiciones de las posteriores reacciones en otras posiciones de la molécula intermedia y se pueda retirar selectivamente en el punto apropiado sin alterar al resto de la molécula incluyendo cualquier otro grupo(s) protector de hidroxilo. El término "aminoacilo" significa un aminoacilo derivado de un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de aminoácidos naturales y no naturales como se definen en la presente. Los aminoácidos naturales pueden ser neutros, positivos o negativos, dependiendo de los substituyentes en la cadena lateral. "Aminoácido neutro" significa un aminoácido que contiene substituyentes de cadena lateral sin carga. Aminoácidos neutros ejemplares incluyen alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, triptofano, metionina, glicina, serina, treonina, cisteína, glutamina y asparagina. "Aminoácido positivo" significa un aminoácido en el que los substituyentes en la cadena lateral están cargados positivamente al pH fisiológico. Aminoácidos positivos ejemplares incluyen lisina, arginina e histidina. "Aminoácido negativo" significa un aminoácido en el que los substituyentes en la cadena lateral tienen una carga negativa neta al pH fisiológico, aminoácidos negativos ejemplares incluyen ácido aspártico y ácido glutámico. Aminoácidos preferidos son -aminoácidos. Los aminoácidos más preferidos son a-aminoácidos que tienen estereoquímica L en el carbono a. a-aminoácidos naturales ejemplares son valina, isoleucina, prolina, fenilalanina, triptofano, metionina, glicina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, lisina, arginina, histidina, ácido aspártico y ácido glutámico. "Aminoácido no natural" significa un aminoácido para el que no existe codón de ácidos nucleicos. Ejemplos de aminoácidos no naturales incluyen, por ejemplo, los isómeros D de los a-aminoácidos naturales que se han indicado antes; Aib (ácido aminobutírico), pAib (ácido 3-aminoisobutírico), Nva (norvalina), ß-Ala, Aad (ácido 2-aminoadípico), pAad (ácido 3-aminoadípico), Abu (ácido 2-aminobutírico), Gaba (ácido ?-aminobutírico), Acp (ácido 6-aminocaproico), Dbu (ácido 2,4-diaminobutírico), ácido a-aminopimélico, TMSA (trimetilsilil-AIa), alie (alo-isoleucina), Nle (norleucina), ter-Leu, Cit (citrulina), Orn, Dpm (ácido 2,2'-diaminopimélico), Dpr (ácido 2,3-diaminopropiónico), a- o ß-Nal, Cha (cicIohexil-Ala), hidroxiprolina, Sar (sarcosina), O-metiltirosina, fenilglicina y similares; aminoácidos cíclicos; aminoácidos Na-alquiIados en los que el aminoácido ealquilado es aminoácido NT-alqui!o (1-10C) tal como MeGIy (Na-metilglicina), EtGly (Na-etilglicina) y EtAsn (Na-etilasparagina) y aminoácidos en los que el carbono a tiene dos substituyentes en cadena lateral, a-aminoácidos no naturales ejemplares incluyen D-alanina, D-leucina y fenilglicina. Los nombres de aminoácidos naturales y no naturales y sus restos usados en la presente siguen los convenios de nomenclatura sugeridos por la Comisión Conjunta de Nomenclatura Bioquímica (JCBN) IUPAC-IUB que se describe en "Nomenclature and Symbolism for Amino Acids and Peptides (Recommendations, 1983)" European Journal of Biochemistry, 138, 9-37 (1984). En caso de que los nombres y abreviaturas de aminoácidos y restos de los mismos empleados en esta especificación y en las reivindicaciones adjuntas difieran de los indicados, se explicarán los nombres y abreviaturas diferentes. Aunque todos los compuestos de Fórmula I son agonistas del receptor de mGluR2 útiles activos, se prefieren ciertos compuestos. Los siguientes párrafos definen las clases preferidas. A) Q es glicilo, alanilo, valilo, leucilo, ¡soleucilo, prolilo, fenilalanilo, tirosilo, triptofilo, metionilo, lisilo o serinilo. B) Q es alanilo. C) Q es metionilo. D) p es 1. E) p es 2. F) X es S02.
G) X es CR3R4. H) R3 es fluoro y R4 es hidrógeno. I) R3 es hidroxi y R4 es hidrógeno. J) R3 y R4 juntos representan =0. K) R10 es hidrógeno. L) R10 es fluoro. M) R11 es hidrógeno. N) El compuesto es una base libre.
O) El compuesto es una sal. P) El compuesto es la sal de clorhidrato. Q) El compuesto es la sal mesilato. R) El compuesto es la sal esilato. S) El compuesto es la sal tosilato. Los párrafos anteriores se pueden combinar para definir otras clases preferidas de compuestos. Los compuestos de Fórmula I son útiles para el tratamiento de trastornos de mamíferos y el mamífero preferido es un ser humano. Los compuestos de la presente invención se pueden preparar por una diversidad de procedimientos, algunos de los cuales se ilustran en los siguientes esquemas. El orden particular de las etapas requerido para producir los compuestos de Fórmula I es dependiente del compuesto particular que se sintetice, del compuesto de partida y del carácter lábil de las partes sustituidas. Algunos substituyentes pueden haberse eliminado en los siguientes esquemas por motivos de claridad y no pretenden limitar la enseñanza de los esquemas en modo alguno. Como apreciará un experto en la técnica, los substituyentes R15 y R 6 representan la cadena lateral apropiada para formar el aminoacilo deseado. Si no están disponibles de forma comercial, los materiales de partida necesarios para los siguientes esquemas pueden prepararse por procedimientos que se seleccionan de técnicas convencionales de química orgánica y heterocíclica, técnicas que son análogas a las síntesis de compuestos estructuralmente similares conocidos y los procedimientos descritos en las preparaciones y ejemplos, incluyendo los nuevos procedimientos. Esquema 1 (?) Los compuestos de Fórmula I se convierten por medio de procedimientos enzimáticos o hidrolíticos in vivo formando compuestos de Fórmula II, como se muestra en el Esquema 1 anterior. En particular, se puede preparar una forma cristalina de un compuesto de Fórmula I de acuerdo con la ruta representada en el Esquema 2 siguiente.
Esquema ( La hidrólisis del compuestos de peptidilo protegido con diéster de formula (iii) con una base adecuada tal como hidróxido de litio o hidróxido sódico en un disolvente adecuado, tal como THF o THF/agua, proporciona el compuesto dipeptidilo protegido diácido de formula (iv). Se puede desproteger un compuesto de fórmula (iv) con un ácido adecuado en un disolvente adecuado. Tales condiciones pueden producir la sal de ácido correspondiente del compuesto de dipeptidilo diácido, representado en la sal de Fórmula I, como un sólido amorfo o, directamente, un sólido cristalino, en el que X" representa el anión correspondiente. En e! caso de un sólido amorfo, puede presentarse una posterior cristalización en disolventes adecuados. Se pueden formar sales carboxilato mediante la introducción de una especie catiónica por un reactivo tal como acetato sódico. Finalmente, se puede proporcionar el compuesto zwitteriónico por tratamiento del compuesto de sal cristalina con una base apropiada. Por ejemplo, un compuesto de peptidilo protegido diácido de fórmula (iv) cuando se trata con gas ácido clorhídrico en un disolvente adecuado proporciona la sal de clorhidrato desprotegida como un sólido amorfo. El compuesto clorhidrato amorfo se puede cristalizar entonces en acetona y agua proporcionando el compuesto sal de clorhidrato cristalina. En el caso de un sólido cristalino que se forma directamente, la filtración de la mezcla de reacción puede proporcionar la sal cristalina. El compuesto zwitteriónico se proporciona por tratamiento de la sal de clorhidrato cristalina con hidróxido sódico; como alternativa, el tratamiento del compuesto sal mesilato o el compuesto sal tosilato con hidróxido sódico también proporcionará el compuesto zwitteriónico. Se apreciará por los expertos en la técnica que se puede preparar un compuesto de Fórmula I en un procedimiento en el que los intermedios indicados no se aislan. Esquema 3 (ii) <"') El diéster de formula (ii) se acila con un compuesto de Fórmula III usando un agente de acoplamiento adecuado para proporcionar un compuesto de peptidilo protegido con diéster de formula (iii). Como alternativa, esta transformación se podría conseguir usando el cloruro de ácido de un compuesto de Fórmula III. Reactivos de acoplamiento de péptidos adecuados incluyen diciclohexilcarbodiimida (DCC), 1-(3- dimetilaminopropil)-3-etiIcarbodiimida (EDC), cloroformiato de isobutilo, clorofosfato de difenilo, 2-cloro-4,6-dimetoxi-1 ,3,5- triazina (CDMT), cloruro bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfínico y hexafluorofosfato de benzotriazol-1 - iloxitris(dimetilamino)fosfonio.
Esquema (i) (?) En el Esquema 4 anterior, se trata un compuesto de Fórmula II, un diácido, con un agente protector de carboxilo adecuado, tal como ácido clorhídrico catalítico o cloruro de tionilo y metanol o etanol, proporcionando el diéster correspondiente de formula (ii). Como alternativa, se puede tratar primero un compuesto de Fórmula II con un agente protector de nitrógeno tal como BOC2O proporcionando un compuesto protegido en nitrógeno de fórmula (i). A continuación, se puede tratar compuesto de fórmula (i) con un agente protector de carboxilo tal como yoduro de metilo en presencia de una base tal como carbonato potásico, seguido por un agente de desprotección de nitrógeno tal como ácido clorhídrico o ácido trifluoroacético proporcionando un compuesto de fórmula (ii). Adicionalmente, un experto en la técnica reconocerá que dependiendo de X, puede ser necesario un agente protector apropiado. Por ejemplo, si X representa CR3R _ R3 representa hidroxi y representa hidrógeno, entonces un experto en la técnica apreciará que puede ser necesario un grupo protector de hidroxilo adecuado antes de proceder con cualquiera de los esquemas anteriores. Los compuestos de Fórmula II son conocidos en la técnica. Por ejemplo, se pueden encontrar preparaciones de estos compuestos en las patentes de Estados Unidos números 5,688,826 (la patente '826) y 5,958,960 (la patente '960). Sobre los procedimientos anteriormente descritos se han realizado diversas mejoras en la ruta sintética para los compuestos de Fórmula II. Las mejoras implican oxidación con azufre y alcohol, así como la resolución óptica de diversos intermedios como se describe más adelante. La primera mejora se refiere a la conversión descrita en la patente '826, en la columna 8, líneas 22 a 34 y columna 7, comienzo de la columna 33 (Fórmula V), que implica la oxidación de un compuesto de Fórmula VII de la patente '826 Fórmula (Vil) de la patente '826 para formar un compuesto de Fórmula V de la patente '826 Fórmula (V) de la patente '826 Se ha descubierto que el complejo trióxido de azufre-piridina o anhídrido trifluoroacético en combinación con DMSO son los preferidos entre muchos métodos de oxidación conocidos en la técnica. En segundo lugar, con respecto a la resolución de un compuesto de Fórmula III de la patente '826 Fórmula (III) de la patente '826 en la que R2 representa un grupo carboxilo, a la que se hace referencia en la columna 8, líneas 3 a 7 y columna 6, comenzando en la línea 1 (Fórmula III), se ha descubierto que se prefieren (R)- -metilbencilamina y quinina. Se prefiere de forma particular (R)-a-metilbencilamina. Además, se ha descubierto que cuando se oxida el sulfuro de un compuesto de Fórmula III de la patente '826 en la que X es azufre para formar un compuesto de Fórmula III de la patente '826 en la que X es sulfonilo, como se hace referencia en la patente '826 en la columna 8, líneas 39-53, se prefiere un sistema acuoso básico y peróxido de hidrógeno usado en combinación con un catalizador. Los siguientes Ejemplos ¡lustran con más detalle los compuestos de la presente invención y los métodos para su síntesis. Los Ejemplos no pretenden limitar el alcance de la invención en modo alguno y no se interpretarán en este sentido. Todos los experimentos se realizaron bajo presión positiva de nitrógeno seco o argón. Todos los disolventes y reactivos se adquirieron de fuentes comerciales y se usaron tal como se recibieron, a menos que se indique lo contrario. Se puede obtener tetrahidrofurano seco (THF) por destilación en sodio o cetil benzofenona sódica antes de usar. Los espectros de resonancia magnética nuclear de protón (RMN 1H) se obtuvieron en un aparato Bruker Avance II bay-500 a 500 MHz, un Bruker Avance I bay-200 a 200MHz, o un Varían Inova/Varian 300/Varian 400 a 500 MHz. La espectroscopia de masas por electroionización (ESI) se llevó a cabo en un aparato Agilent MSD/B usando acetonitrilo/acetato amónico acuoso como fase móvil. La Espectroscopia de Masas con Bombardeo de Átomos Rápidos (FABMS) se llevó a cabo en un aparato VG ZAB-2SE. La Espectroscopia de Masas de Desorción de Campo (FDMS) se llevó a cabo usando un aparato VG 70SE o un Varían MAT 731. Las rotaciones ópticas se miden con un polarímetro Perkin-EImer 241. La separación cromatográfica en un Waters Prep 500 LC se lleva a cabo de forma general usando un gradiente lineal de disolventes indicados en el texto. Las reacciones se controlan por lo general para determinar su finalización usando cromatografía de capa fina (CCF). La cromatografía de capa fina se llevó a cabo usando placas E. Merck Kieselgel 60 F254. 5 cm X 10 cm, 0,25 mm de espesor. Las manchas se detectaron usando una combinación de detección UV y química (placas empapadas en una solución de molibdato cérico amónico [75 g de molibdato amónico y 4 g de sulfato de cerio (IV) en 500 mi de ácido sulfúrico acuoso al 10%] y luego calentado en una placa caliente). La cromatografía instantánea se llevó a cabo como se describe por Still, ef al. Still, Kahn and Mitra, J. Org. Chem., 43, 2923 (1978). El análisis elemental para carbono, hidrógeno y nitrógeno se determinó en un analizador elemental Control Equipment Corporation 440 Elemental Analyzer o se realizó por Centro de Análisis de la Universidad Complutense (Facultad de Farmacia, Madrid, España). Los puntos de fusión se determinaron en capilares de vidrio abiertos en un aparato de puntos de fusión en un baño de aire caliente Gallenkamp o en un aparato de puntos de fusión de Büchi y están sin corregir.
Las abreviaturas, símbolos y términos usados en los ejemplos tienen los siguientes significados. Ac = acetilo Anal. = Análisis elemental ATR = Reflexión Interna Total Atenuada Bn o Bzl = bencilo Bu = butilo BOC = t-butoxicarbonilo caled = calculado D2O = óxido de deuterio DCC = diciclohexilcarbodiimida DCM = 1 ,2-dicIorometano DIBAL-H = hidruro de diisobutil aluminio D AP = 4-dimetilaminopiridina DMF = dimetilformamida DMSO = dimetil sulfóxido DSC = calorimetría de barrido diferencial EDC = clorhidrato de N-etil-N'N'-dimetilaminopropil carbodiimida ES = Electropulverización Et = etilo EtOH = etanol FAB = Bombardeo con Átomos Rápidos (Espectroscopia de Masas) FDMS = Espectro de Masas de Desorción de Campo FTIR = Espectrometría Infrarroja por Transformada de Fourier HOAt = 1 -hidroxi-7-azabenzotriazol HOBt = 1 -hidroxibenzotriazol CLAR = Cromatografía Líquida de Alta Resolución EMAR = Espectro de Masas de Alta Resolución ¡-PrOH = isopropanol IR = Espectro Infrarrojo L = litro Me = metilo MeOH = metanol MPLC = Cromatografía Líquida de Media Presión P.f. = Punto de fusión MTBE = t-butil metil éter NBS = N-bromosuccinimida RMN = Resonancia Magnética Nuclear CP-CCF = Cromatografía de Capa Fina Centrífuga Preparativa Ph = fenilo p.o. = administración oral i-Pr = isopropilo Sal de Rochelle = tartrato sódico potásico ta = temperatura ambiente SM = material de partida TBS = rer-butildimetilsililo TEA = trietilamina Temp. = temperatura TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano CCF = Cromatografía de Capa Fina t-BOC = fer-butoxicarbonilo Procedimiento General A Acoplamiento con EDC entre aminas y N-BOC-(L)-aminoácidos Se suspende el éster amino dialquílico de partida (un compuesto de fórmula ii, Esquema 3) (1.0 equiv.) en diclorometano seco bajo nitrógeno. Se agrega secuencialmente el N-Boc-(L)-aminoácido correspondiente (1.5-2.0 equiv), EDC (1.5-2.0 equiv), HOBt (1.5-2.0 equiv) y dimetilaminopiridina (DMAP, 0.1-0.2 equiv). Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente hasta que se considera completa por CCF a no ser que se indique de otro modo. Se diluye la mezcla de reacción con acetato de etilo y se lava secuencialmente con NaHC03 acuoso saturado y/o NaHS04 acuoso y salmuera. Después de secar sobre sulfato sódico y evaporar al vacío se purifica el residuo crudo (un compuesto de fórmula i¡¡) por cromatografía sobre gel de sílice usando el eluyente apropiado (de forma típica acetato de etilo/hexanos). Procedimiento General B Acoplamiento con anhídrido entre amina y anhídridos isobu tí lieos N-BOC-(¿-)-aminoác¡do Se agrega N-metilmorfolina (NMM, 1.5 equiv. en 1 mi de CH2CI2) a una solución del N-Boc-(L)-aminoácido correspondiente (1.5 equiv) en diclorometano seco (10 mi) a -20°C bajo nitrógeno seguido por la adición, gota a gota de cloroformiato de /so-butilo (IBCF, 1.5 equiv, en 5 mi CH2CI2) a una velocidad tal que la temperatura de reacción interna no sobrepase -15°C. Se agita la mezcla de reacción resultante a -20°C durante 30 minutos y luego se agrega una solución a -20°C de clorhidrato del éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6 )-2-(2'-amino-propionilamino)-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (1.0 equiv) en diclorometano (10 mi) a una velocidad tal que la temperatura de reacción interna no sobrepase -15°C. Una vez completada la adición, se retira el baño de enfriamiento y se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente hasta que se considera completa por CCF. Se diluye la mezcla de reacción con acetato de etilo y se lava secuencialmente con NaHC03 acuoso saturado, NaHS04 acuoso y salmuera. Después de secar sobre sulfato de magnesio y evaporación al vacío, se purifica el residuo crudo por cromatografía sobre gel de sílice usando el eluyente apropiado (de forma típica hexanos/acetato de etilo). Procedimiento General C Remoción secuencial del grupo protector N-Boc y éster Se agita el derivado peptídico diéster N-Boc correspondiente (un compuesto de fórmula iü, Esquema 2) (1.0 equiv) en una mezcla 1:1 de THF/LiOH 2,5 N (10-20 equiv) a temperatura ambiente durante hasta 4 horas. Se diluye la reacción con H20 y se lava con acetato de etilo. Se descarta la capa orgánica. Se ajusta la fase acuosa hasta pH 2 con HCI 1N (NaCI añadido a la fase acuosa para potenciar la capacidad de extracción cuando sea necesario) y se extrae exhaustivamente el producto ácido N-boc dicarboxílico (un compuesto de fórmula iv) con acetato de etilo. Se combinan todos los extractos orgánicos, se lavan con salmuera, se secan sobre MgS04 y se concentran hasta sequedad al vacío para proporcionar el producto carboxilato deseado como un sólido espumoso. Se disuelve en acetato de etilo y se enfría hasta 0°C. Se purga la mezcla de reacción con gas HCI anhidro hasta que se satura de HCI. Se agita la mezcla de reacción resultante a 0°C durante hasta 4 horas. Se aisla el derivado peptídico totalmente desprotegido (un compuesto de Fórmula I) en forma de su sal de clorhidrato por filtración bajo N2 o por concentración de la mezcla de reacción hasta sequedad seguido por trituración con acetato de etilo o Et20 y concentración hasta un polvo blanco. De forma opcional, para eliminar el disolvente residual y el HCI en exceso, la reconstitución de los productos en H20, congelación y posterior liofilización proporciona los productos clorhidrato deseados. Preparación 1 Ester dietílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A6- tia-biciclo[3.1.01hexano-4.6-dicarboxílico A una pasta de diácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2As-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (10g, 42.5 mmol, patente de Estados Unidos No. 5,688,826) en 100 mi de etanol 2B a temperatura ambiente se agrega cloruro de tionilo (15.5 mi, 212.6 mmol) gota a gota durante 20 minutos, seguido por enjuagado con 40 mi de etanol. Se calienta la suspensión hasta reflujo y se agita durante la noche. El análisis por RMN 1H a 500 MHz (CD3OD) de una alícuota concentrada revela el consumo completo del material de partida y el monoéster intermedio. Se deja que la solución resultante se enfríe hasta temperatura ambiente, luego se concentra hasta un residuo gelatinoso. Se agrega EtOAc (50 mi) a la gelatina que se concentra además hasta un sólido, luego se diluye con otros 94 mi de EtOAc. Se agrega carbonato sódico acuoso al 15% (70 mi) lentamente a la mezcla con removido a mano para proporcionar la disolución de forma gradual, produciendo un pH final de 7.95. Se filtra la precipitación de carbonato sódico resultante antes de extraer las capas. Se vuelve a extraer la capa acuosa con EtOAc (2 x 100 mi). Se lavan los extractos orgánicos combinados con salmuera (1 x 100 mi), se secan (MgS04), se filtran y concentran al vacío proporcionando aceite amarillo apagado que solidifica produciendo el compuesto del título como un sólido blanquecino (11.71 g, 95% rendimiento). Recristalización Se calienta una mezcla del compuesto del título (200 mg) en EtOAc (800 µ?) hasta 56°C, momento en el que se produce la disolución. Después de agitar durante 15 minutos a 56°C, se agrega heptano (1 mi) gota a gota a la disolución. Se desconecta la calefacción. Se deja que la solución se enfríe hasta 52°C momento en el que se produce la precipitación. Después de enfriar y diluir adicionalmente con heptano (600 µ?), se forma una suspensión. Se agita la suspensión resultante a temperatura ambiente durante 1 hora antes de filtrar, se lava con heptano (2 x 500 µ?) y se seca a 45°C durante la noche produciendo 145 mg (73% de recuperación) del compuesto del título como un sólido blanco. p.f. 80-83 °C. [CC]25D -57,7o (C 1,04, CH3OH). R N 1H 500 MHz (CDCl3) d 4.31 (c, 2H, J = 7.0 Hz), 4.20 (m, 2H), 3.78 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 3.36 (dd, 1H, J = 4.0, 7.0 Hz), 2.93 (dd, 1H, J = 4.0, 7.0 Hz), 2.81 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.46 (t, 1H, J = 4.0), 1.34 (t, 3H, J = 7.0), 1.30 (t, 3H, J = 7.0). RMN 3C (125 MHz, CDCI3) d 171.68, 168.57, 63.26, 62.42, 59.96, 56.06, 43.78, 32.25, 22.49, 14.31, 14.25. FTIR (ATR) 3364.15 (s), 1725.95 (s), 1304.91 (s), 1259.24 (s), 1200.84 (s), 1104.91 (s), 1022.99 (s), 896.45 (s), 851.21 (s) cm_ . Análisis calculado para C,., H17N06S: C, 45.35; H, 5.88; N, 4.81. Encontrado: C, 45.02; H, 5.75; N, 4.82. Preparación 2 Ester dietíiico del ácido (1 R.4S.5S.6S~)-4-(2'S-fer- butoxicarbonilamino-prop¡onilamino)-2,2-d¡oxo-2A6-tia- bicicl ?G3.1.01hexano-4,6-dicarboxílíco Se agrega cloroformiato de iso-butilo (30.4 mi, 234 mmol) gota a gota durante 10 minutos a una solución de N- Boc-L-alanína (43.52 g, 230 mmol) y N-metilmorfolina (25.5 mi, 232 mmol) en 457 mi de cloruro de metileno a -30°C bajo nitrógeno. Se agita la suspensión clara resultante a -25 a -30°C durante 30 minutos momento en el que se agrega una solución de éster dietílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (63.90 g, 219 mmol, Preparación 1) en 213 mi de cloruro de metileno durante 25 minutos de tal modo que la temperatura de reacción no sobrepasa -25 °C. Tras completarse la adición, se retira el baño de enfriamiento y se deja agitando a temperatura ambiente durante 60 minutos, momento en el que la temperatura de reacción alcanza 19 °C y el color se vuelve naranja apagado. Se trata la reacción con 350 mi de HCI 1N y se separan las capas. Se lava la capa orgánica con NaHC03 acuosa saturada (1 x 350 mi) y salmuera (1 x 350 mi), se seca ( a2S04), se filtra y se concentra al vacío hasta una espuma blanca (105.2 g, 104%). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d: 7,62 (s amplio, 1H), 4.90 (d amplio, 1H, J = 7,1 Hz), 4.34-4.10 (m, 6H), 3.39 (ddd, 1H, J = 7.2, 3.9, 1.0 Hz), 3.00 (dd, 1H, J = 7.1, 3.9 Hz), 2.90 (d amplio, 1H, J = 14.9 Hz), 2.43 (t, 1H, J = 4.1 Hz), 1.46 (s, 9H), 1.31 (m, 9H). RMN 13C (75 MHz, CDCI3) d: 173.0, 168.6, 167.6, 80.9, 76.5, 63.3, 62.3, 59.9, 55.7, 42.8, 31.5, 28.2, 22.7, 16.6, 14.0, 13.9. EM (ES) m/z 461,0 [M-H]-.
Preparación 3 Ácido (1 R .4S.5S,6S^-4-(2' S-fer-butoxicarbon i lamí no- pro pión ¡lamí no)-2.2-dioxo-2A6-tia-b ¡ciclo G3.1.01hexano-4,6- dicarboxílico Se agregan 490 mi (980 mmol) de hidróxido sódico 2N a una solución de éster dietílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S-fer-butoxicarbonilamino-propionilamino)-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxíIico (181.4 g, 392 mmol teóricos, Preparación 2) en 292 mi de THF a temperatura ambiente. Se deja que la mezcla bifásica se agite vigorosamente a temperatura ambiente durante 1.25 horas momento en el que la reacción es homogénea. Se diluye la mezcla con 490 mi de acetato de etilo y se separan las capas. Se diluye la capa acuosa con 490 mi de acetato de etilo y se reduce el pH de la mezcla hasta 1.5 con HCI concentrado. Se separan las capas y se vuelve a extraer la fase acuosa con 245 mi de acetato de etilo. Se secan las capas orgánicas combinadas (Na2S04), se filtran y se concentran proporcionando 167.9 g (105%) del compuesto del título como una espuma blanca. Este material se usó sin caracterización en los Ejemplos 1 y 2. Preparación 4 Ester dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2.2-dioxo- 2A6-tia-biciclof3.1.01hexano-4,6-d¡carboxíl¡co Se agrega cloruro de tionilo (6.2 mi, 85.0 mmol) gota a gota a una suspensión agitada rápidamente de ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]-hexano-4,6-dicarboxílico (10.0 g, 42.5 mmol, patente de Estados Unidos No. 5,688,826) en MeOH (170 mi, 5 °C). Una vez completada la adición, se deja que la mezcla de reacción se caliente lentamente hasta temperatura ambiente, luego se calienta bajo reflujo durante 48 h. Se eliminan los volátiles bajo presión reducida y se divide el residuo entre una solución saturada de NaHC03 (200 mi) y acetato de etilo (400 mi). Se separan las capas y se extrae la fase acuosa con acetato de etilo (2 x 400 mi cada vez). Se secan las capas orgánicas combinadas sobre K2C03 y se concentran bajo presión reducida proporcionando 8.10 g (30.8 mmol) del compuesto del título con un rendimiento del 72%. [cc]2D3 = -84° (c = 0.5, MeOH).
Análisis calculado para C9H13N06S: C, 41.06; H, 4.98; N, 5.32. Encontrado: C, 40.94; H, 4.93; , 5.30. EM (ES) m/z 264.0 [M + H]+. Preparación 5 Ester dimetílico del ácido (1 R,4S,5S.6S)-4-(2'S-fer-butoxicarbonilamino-3'-fenil-propionilamino)-2.2-dioxo-2A6-tia- bícicloí3.1.0lhexano-4,6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando N-BOC-(L)-fenilalanina disponible de forma comercial y éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3. .0]hexano-4,6-dicarboxílico (Preparación 4). Se mantiene la mezcla de reacción a reflujo durante la noche. Se purifica por CP-CCF, rotor de 4 mm Si02, (acetato de etilo al 10%/hexanos hasta 100% de acetato de etilo). Rendimiento 0.85 g (88 %, 1.67 mmol) de una espuma blanca. [a]¾3 = -35.2° (c = 0.45, CHCI3). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 1.43 (9H, s), 2.38-2.40 (1H, m), 2.86 (1H, d, J = 15.0 Hz), 2.91 (1H, dd, J = 4.4, 7.3 Hz), 3.04 (2H, d, J = 7.3 Hz), 3.35-3.39 (1H, m), 3.77 (3H, s), 3.84 (3H, s), 4.11 (1H, d, J = 14.3), 4.30 (1H, c aparente, J = 7.3), 4.96 (1H, d amplio, J = 6.6 Hz), 6.96 (1H, s amplio), 7.22-7.36 (5H, m). Análisis calculado para C23H30N2O9SO.1 H20: C, 53.92; H, 5.94; N, 5.47. Encontrado: C, 53.62; H, 5.90; N, 5.28. EM (ES) m/z 509.16 [M - H]"; 411.2 [M - Boc]+. Preparación 6 Éster dimetílico del ácido ( 1 R.4S.5S.6S)-4-(2'S-fer- butoxicarbonilamino-3'S-metil-pentanoilamino)-2.2-dioxo-2A - tia-biciclof3.1.01hexano-4,6-dicarboxilico Se prepara según el Procedimiento general A usando N-BOC-(L)-isoleucina disponible comercialmente y éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (Preparación 4). Se mantiene la mezcla de reacción a reflujo durante la noche. Se purifica por CP-CCF, rotor de 4 mm Si02, (10 % de acetato de etilo/hexanos hasta 100% de acetato de etilo). Rendimiento 0.75 g (83 %, 1.57 mmol) de una espuma blanca. [a] D = -32,65° (c = 0,49, CHCI3). RMN 1H (300 Hz, CDCI3) d 0.91 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.93 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.10-1.18 (1H, m), 1.46 (9H, s), 1.42-1.52 (1H, m), 1.81-1.86 (1H, m amplio), 2.51 (1H, t, J = 4.0 Hz), 2.95 (1 H, d, J = 15.0 Hz), 3.06 (1H, dd, J = 4.4, 7.3 Hz), 3.43 (3H, dd, J = 3.7, 7.0 Hz), 3.78 (3H, s), 3.85 (3H, s), 3.82- 3.90 (1H, m), 4.20 (1H, d, J = 14.7 Hz), 4.94 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.19 (1H, s amplio). Análisis calculado para C20H32N2O9S: C, 50.41; H, 6.77; N, 5.88. Encontrado: C, 50.32; H, 6.92; N, 5.76. EM (ES) m/z 475.1 [ - H]\ Preparación 7 Ester dimetílico del ácido (1 R.4S.5S.6S)-4-í2'S-fer- butoxicarbonilam¡no-3'-metil-butirilam¡no)-2,2-dioxo-2A6-tia- biciclof3.1.01hexano-4.6-dicarboxíl¡co Se prepara según el Procedimiento general A usando N- BOC-(L)-val¡na disponible de forma comercial y éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-d¡oxo-2A6-t¡a- b¡ciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (Preparación 4). Se mantiene la mezcla de reacción a reflujo durante la noche. Se purifica por CP-CCF, rotor de 4 mm Si02, (10 % de acetato de etilo/hexanos 100% de acetato de etilo). Rendimiento 0.41 g (47 %, 0.89 mmol) de una espuma blanca. [cc]2D3 = -35.36° (c = 0.51, CHCI3). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 0.93 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.96 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.46 (9H, s), 2.06-2.13 (1H, m), 2.50 (1H, t, J = 4.0 Hz), 2.94 (1H, d, J = 15.0 Hz), 3.04 (1H, dd, J = 4.4, 7.3 Hz), 3.43 (1H, dd, J = 3.3, 6.6), 3.78 (3H, s), 3.80-3.86 (1H, m), 3.86 (3H, s), 4.24 (1H, d, J = 15.0 Hz), 4.94 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.15 (1 H, s amplio). Análisis calculado para C19H30N2O9S: C, 49.34; H, 6.54; N, 6.06. Encontrado: C, 49.33; H, 6.44; N, 6.05. EM (ES) m/z 461.2 [M - H]" Preparación 8 Ester dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6SV4-(2'S-fer- butoxicarbon¡lamino-4'-metil-pentanoilamino)-2,2-dioxo-2A6- t¡a-biciclor3.1.0lhexano-4,6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando N-BOC-(L)-leucina monohidrato disponible de forma comercial y éster dimetíllco del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (Preparación 4). Se mantiene la mezcla de reacción a reflujo durante la noche. Se purifica por CP-CCF, rotor de 4 mm Si02, (acetato de etilo al 10%/hexanos hasta acetato de etilo al 100%). Rendimiento 0.85 g (94 %, 1.78 mmol) de una espuma blanca. 2D = -46.15° (c = 1.04, CHCI3). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 0.92 (3H, d, J = 6.2 Hz), 0.95 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.47 (9H, s), 1.42-1.47 (1H, m), 1.63-1.67 (1H, m), 2.46 (1H, t, J = 3.7 Hz), 2.87 (1H, d, J = 15.0 Hz), 3.04 (1H, dd, J = 4.4, 7.3 Hz), 3.41 (1H, dd, J = 3.7, 7.0), 3.78 (3H, s), 3.86 (3H, s), 4.00-4.05 (1H, m), 4.20 (1H, d, J = 15.0 Hz), 4.75 (1H, d, J = 6.6 Hz), 7.43 (1H, s amplio). Análisis calculado para C20H32 2O9S: C, 50.41; H, 6.77; N, 5.88. Encontrado: C, 50.30; H, 6.82; N, 5.75. EM (ES) m/z 475.2 [M - H]\ Preparación 9 Éster dimetílico del ácido (1 R.4S.5S.6S)-4-í2'S,6'-bis-fer- butoxicarbonilamino-hexanoílamino)-2 ,2-dioxo-2A6-tia- b¡ciclo[3.1.01hexano-4,6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando N-BOC-Lys(BOC)-OH disponible de forma comercial y éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (Preparación 4). Se mantiene la mezcla de reacción a reflujo durante la noche. Se purifica por CP-CCF, rotor de 4 mm S¡02, (acetato de etilo al 10%/hexanos hasta acetato de etilo al 100%). Rendimiento 1.04 g (93 %, 1,76 mmol) de una espuma blanca. [oc]2D3 = -32.0° (c = 0.5, CHCI3). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 1.44 (9H, s), 1.46 (9H, s), 1.39-1.53 (3H, m), 1.56-1.65 (1H, m), 1.77-1.84 (2H, m), 2.50 (1H, t, J = 4.4 Hz), 2.98-3.20 (4H, m), 3.42 (1H, dd, J = 3.7, 7.0 Hz), 3.76 (3H, s), 3.86 (3H, s), 4.01 (1H, dd, J = 7.7, 13.2 Hz), 4.09-4.19 (1H, m), 4.71 (1H, t, J = 7.3 Hz), 5.13 (1H, s amplio), 7.59 (1H, s amplio). Análisis calculado para C25H4i 3Oi S: C, 50.75; H, 6.98; N, 7.10. Encontrado: C, 50.36; H, 6.99; N, 6.87. EM (ES) m/z 590.2 [M - H]".
Preparación 1 O Ester dimetílico del ácido (1 R.4S.5S.6S)-4-r2'S-fer- butoxicarbonilamino-4'-(tritil-carbamoil)-butirilamino1-2.2- dioxo-2\6-tia-biciclof 3.1.01hexano-416-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando N-BOC-(L)-glutamina (Trt)-OH disponible de forma comercial y éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (Preparación 4). Se mantiene la mezcla de reacción a reflujo durante la noche. Se purifica por CP-CCF, rotor de 4 mm Si02, (acetato de etilo al 10%/hexanos hasta acetato de etilo al 100%). Rendimiento 0.53 g (48%, 0.72 mmol) de una espuma blanca. [oc]2D3 = -8,0° (c = 0,50, MeOH). RMN H (300 MHz, CDCI3) d 1.42 (9H, s), 1.83-1.88 (1H, m), 2.03-2.18 (1H, m), 2.16 (1H, t, J = 4.0 Hz), 2.57-2.64 (1H, m), 2.60 (1H, d, J = 15.0 Hz), 2.64-2.80 (1H, m), 2.88 (1H, dd, J = 4.4, 7.3 Hz), 3.26 (1H, dd, J = 4.0, 7.0 Hz), 3.47 (3H, s), 3.76-3.90 (1H, m), 3.81 (3H, s), 4.05 (1H, d, J = 15.0 Hz ), 5.47 (1H, s amplio), 7.02 (1H, s amplio), 7.20-7.35 (15H, m), 8.68 ( 1 H , s amplio). Análisis calculado para C38H43 3O10S: C, 62.20; H, 5.91; N, 5.73. Encontrado: C, 61.83; H, 6.09; N, 5.57. E (ES) m/z 731.9 [M - H]"; EMAR calculado para C38H43N3OioS [M + Na]+, 756.2567. Encontrado, 756.2585. Preparación 11 Éster dimetílico del ácido (1 R.4S.5S.6S -4-r(1 '-ter- butoxicarbonil-pirrolidina-2'S-carbon¡n-amino1-2.2-dioxo-2A6- tia-biciclor3.1.0.1haxano-4,6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-(L)-prolina disponible de forma comercial (0.61 g, 2.9 mmol) y éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A8-tia-biciclo[3. .0]hexano-4,6-dicarboxílico (0.5 g, 1.9 mmol, Preparación 4). Se purifica usando CP-CCF (acetato de etilo/hexanos) proporcionando 0.87 gramos (99.2%) del compuesto del título. 23 [a] D =-61.2 (c=0.49, CHCI3).
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 1.51 (9H, s), 1.75-1.98 (3H, m), 2.35-2.5 (2H, m), 2.84 (1H, d, J = 14.7 Hz), 2.9-3.03 (1H, m), 3.25-3.4 (1H, m), 3.3-4.1 (2H, m), 3.76 (3H, s), 3.86 (3H, s), 4.14-4.31 (2H, m), 8.66 (1H, s). EM (ES) m/z 459.2 [M-1]\ Preparación 12 Éster dimetílico del ácido (1 R,4S.5S.6S)-4-(2'S-fer- butoxicarbonilamino-4'-metilsulfanil-but¡rilamino)-2,2-dioxo- 2A6-tia-biciclof3.1.0.1hexano-4,6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-(L)-metionina disponible de forma comercial (0.71 g, 2.9 mmol) y éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (0.5 g, 1.9 mmol, Preparación 4). Se purifica usando CP-CCF (acetato de etilo/hexanos) proporcionando 0.85 gramos (90.5%) del compuesto del título. [a]2D3 = -20.4 (c = 0.49, CHCI3). RMN H (300 MHz, CDCI3) d 1.46 (9H, s), 1.69 (1H, s), 1.8-2.05 (2H, m), 1.9-2.0 (1H, m), 1.95-2.3 (3H, s amplio), 2.0-2.2 (1H, m), 2.4-2.8 (2H, m), 2.48 (1H, t, J = 4.0 Hz), 2.58 (1H, s amplio), 2.92 (1H, d, J = 14.7 Hz), 3.01 (1H, dd, J = 4.4, 7.0 Hz), 3.42 (1H, dd, J = 3.7, 7.3 Hz), 3.78 (3H, s), 3.87 (3H, s), 4.22-4.24 (2H, m), 5.06 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.27 (1H, s). EM (ES) m/z 493.1[M-1]\ Preparación 13 Ester dimetílico del ácido (1 R,4S.5S,6SV4-r2'S-fer- butoxi carbón i la m ino-3 '-(1 - fer-butoxicarbon i 1-1 H-indol-3-il)- propionilamino1-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclof3. .0.]hexano-4,6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-(L)-triptofano(Boc) disponible de forma comercial (1.1 g, 2.8 mmol) y éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A6-tia- iciclo[3. .0]hexano-4,6-dicarboxílico (0.5 g, 1.9 mmol, Preparación 4). Se purifica usando CP-CCF (acetato de etilo/hexanos) proporcionando 0.7 g (56.7%) del compuesto del título.
RMN H (300 MHz, CDCI3) d 1.44 (9H, s), 1.67 (9H, s), 2.37 (1H, s amplio), 2.86 (1H, d, J = 15.0 Hz), 2.88 (1H, t, J = 4.4 Hz), 3.15 (2H, d, J = 6.6 Hz), 3.39 (1H, dd, J = 3.7, 7.0 Hz), 3.73 (3H, s), 3.83 (3H, s), 4.18 (1H, d, J = 14.7 Hz), 4.37-4.44 (1H, m), 5.01 (1H, d amplio, J = 8.1 Hz), 7.11 (1H, s amplio), 7.25-7.59 (4H, m), 8.14 (1H, d amplio, J = 8.4 Hz). 23 [a] D = -19.6 (c = 0.51, CHCl3).
Análisis calculado para CsoHag sO-nSH ,0 C4H802: C, 55.35; H, 6.42; N, 5.70. Encontrado: C, 54.98; H, 6.09; , 6.07. EMAR calculado para C30H39N3O11 a^S, 672.2203. Encontrado, 672.2180. Preparación 14 Éster dimetílico del ácido (1 R.4S.5S,6S)-4-r2'S-fer- butox¡carbon¡lamino-3'-(4-fer-butoxicarboniloxi-fenil)- ropionilaminol-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclor3. .0.]hexano-4,6- Se prepara según el Procedimiento general A usando ácido 2S-fer-butoxicarbonilamino-3-(4-fer-butoxicarboniIox¡-fenil)-propiónico disponible de forma comercial (1.1 g, 2.9 mmol) y éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2- dioxo-2As-tia-biciclo[3. .0]hexano-4,6-dicarboxílico (0.5 g, 1.9 mmol, Preparación 4). Se purifica usando CP-CCF (acetato de etilo/hexanos) proporcionando 0.94 g (79.0%) del compuesto del título. [a]2D3 = +4 (c=1.00, CH3OH). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 1.44 (9H, s), 1.56 (9H, s), 2.44 (1H, t, J = 4.0 Hz), 2.88 (1H, d, J = 14.7 Hz), 2.98 (1H, dd, J = 4.4, 7.3 Hz), 3.04 (2H, d, J = 7.3 Hz), 3.38 (1H, dd, J = 4.0, 7.3 Hz), 3.77 (3H, s), 3.83 (3H, s), 4.11 (1H, d, J = 14.3 Hz), 4.22-4.29 (1H, c aparente, J = 7.3 Hz), 4.92 (1H, d amplio, J = 7.7 Hz), 7.07 (1H, s amplio), 7.1-7.26 (4H, m). EMAR calculado para C28H38N2012SNa, 649.2043. Encontrado, 649.2001. Preparación 15 Éster dimetílico del ácido (1 R.4S.5S.6S)-4-(3'-acetoxi-2'S-fer- butoxicarbon¡lamino-propion¡l)amino-2.2-dioxo-2A - tiabiciclof3.1.01hexano-4,6-dicarboxílico BocHN Se prepara según el Procedimiento General A usando ácido 3-acetoxi-2S-(íer-butoxicarbonilamino)propiónico (0.25 g, 1.0 mmol, Preparación 44) y éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-am¡no-2,2-dioxo-2A6-tia-b¡ciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (0.2 g, 0.8 mmol, Preparación 4) con la salvedad de que no se usa DMAP. Se purifica usando CP-CCF (acetato de etilo/hexanos) proporcionando 0.19 g (48.2%) del compuesto del título. [oc]2D3 = -24 (c=1.0, CH3OH). RMN H (300 MHz, CDCI3) d 1.47 (9H, s), 2.10 (3H, s), 2.51 (1H, t, J = 4.4 Hz), 2.99-3.07(2H, m), 3.43 (1H, dd, J = 4.0, 7.3 Hz), 3.77(3H, s), 3.86 (3H, s), 4.14-4.40 (4H, m), 5.29 (1H, d amplio, J = 7.3 Hz), 7.64 (1H, s amplio). EMAR calculado para C19H28 2011SNa, 515.1312. Encontrado, 515.1305. Preparación 16 Éster dietílico del ácido (1 R.2S.4R.5R.6R)-2-amino-4- fluorobiciclor3.1.01hexano-2,6-dicarboxílico A una suspensión de ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-am¡no-4-fluorobiciclo[3.1.0]-hexano-2,6-dicarboxílico (14.45 g, 71.12 mmol, patente de Estados Unidos No. 5,958,960) en 202 mi de etanol absoluto a temperatura ambiente se añadió cloruro de tionilo (26 mi, 356 mmol) gota a gota durante 20 minutos. Se calienta la suspensión bajo reflujo y se deja agitando durante 3 horas. Se deja enfriar hasta temperatura ambiente y se agita durante la noche. Se concentra la solución resultante al vacío hasta un residuo y se diluye con 136 mi de acetato de etilo y se trata con 306 mi de carbonato sódico acuoso al 10% durante 15 minutos con agitación a mano de tal modo que el pH final es 10. Se separan las capas y se lava la capa acuosa con acetato de etilo (1 x 136 mi). Se lavan los extractos orgánicos combinados con salmuera (1 x 136 mi), se secan (MgS04), se filtran y concentran al vacío proporcionando 17.07 g (93%) del compuesto del título como un sólido blanco. [a]2D = +20.37° (c = 1.1, MeOH). p.f. = 64-66 °C. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d 1.28 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.31 (3H, t, J = 6.8 Hz), 1.34-1.45 (1H, m), 1.85 (2H, s amplio), 2.17-2.21 (2H, m), 2.32-2.34 (1H, m), 2.49 (1H, dd, J = 7.8, 14.1 Hz), 4.24 (2H, de, J = 1.5, 7.3 Hz), 5.33-5.52 (1H, m). Análisis calculado para C12H 8FN04: C, 55.59; H, 7.00; N, 5.40. Encontrado: C, 55.29; H, 6.75; N, 5.45. EM (ES) m/z encontrado 260.3 [M + H] + . Preparación 17 Ester dietílico del ácido (1 R.2S.4R.5R.6R)-2-r2'S-fter- butoxicarbonilamino)propioninamino-4- flurobiciclof3.1.01hexano-2,6- dicarboxílico Se agrega N-metilmorfolina (22.44 ml, 204 mmol), seguido por cloroformiato de /'so-butilo (26.48 ml, 204 mmol) gota a gota durante 15 minutos a una solución de N-Boc-L-alanina (38.62 g, 204 mmol) en 396 ml de cloruro de metileno a -22 °C bajo nitrógeno de tal modo que la temperatura de reacción no exceda -18°C. Se deja la suspensión clara resultante agitando a -20°C durante 30 minutos, momento en el que se agrega una solución de éster dietílico del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]-hexano-2,6-dicarboxílico (49.46 g, 191 mmol, Preparación 16) en 247 ml de cloruro de metileno durante 40 minutos de tal modo que la temperatura de reacción no exceda -16°C. Una vez completada la adición, se retira la reacción del baño de enfriamiento y se deja agitando a temperatura ambiente durante 70 minutos, momento en el que la temperatura de reacción alcanza 15 °C y el color se hace naranja apagado. Se trata la reacción con 408 ml de HCl 1 N y se agita durante 5 minutos luego se separan las capas. Se lava la capa orgánica con bicarbonato sódico acuoso saturado (1 x 408 mi), se seca (Na2S04), se filtra y se concentra al vacío hasta una espuma blanca (88.16 g). Análisis calculado para C20H3iFN2O7«0,1 CH2CI2: C, 55.00; H, 7.16; N, 6.38. Encontrado: C, 55.18; H, 7.18; N, 6.49. EM (ES) m/z 431.3 [M + H] + , 331.2 [M + H-Boc] + . Preparación 18 Ácido (1 R.2S.4R.5R.6RV2-f2'S-(fer- butoxicarbonilam¡no)propioniHam¡no-4- fluorobiciclor3.1.01hexano-2,6-dicarboxíl¡co Se agregan 238 mi (477 mmol) de hidróxido sódico 2N a una solución de éster dietílico del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-[2'S-(rer-butoxicarbonilamino)propionil]-amino-4-flurobiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (88.16 g, 191 mmol, Preparación 17) en 238 mi de THF a temperatura ambiente. Se deja agitando la mezcla bifásica vigorosamente a temperatura ambiente durante 2.5 horas, momento en el que la reacción es homogénea. Se diluye la mezcla con 238 mi de t-butil metil éter, seguido por mezclado y separación de las capas. Se diluye además la capa acuosa con 238 mi de agua y se filtra para separar el material en partículas. Se trata la solución con HCI concentrado (42.9 mi, 515 mmol) durante 30 minutos, seguido opcionalmente por germinado con el compuesto del título y agitación durante 1 hora. Se filtra la suspensión resultante, se lava con agua (2 x 100 mi) y se seca a vacío a 45 °C durante 40 horas proporcionando 72.2 g del compuesto del título como un sólido blanco. Se agita una porción del sólido (69.5 g) con 490 mi de acetona durante 1 hora produciendo una solución turbia; se filtra y se lava con acetona (2 x 100 mi). Se concentra el filtrado al vacío hasta una espuma blanca que se seca además al vacío a 45 °C durante 16 horas proporcionando 61.8 g (86%, corregido por acetona al 12% p/p) del compuesto del título. Este material se usó en los Ejemplos 14-18 sin caracterización. Preparación 19 Ester dietílico del ácido M S.2S.4S.5R.6R)-4-acetiloxi-2-(fer- butoxicarbonil)aminobiciclof3.1.0lhexano-2.6-dicarboxíl¡co Se agrega anhídrido acético (0.514 mi, 5.0 mmol) a una solución de éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(íer- butoxicarbonil)amino-4-hidroxibiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (1.50 g, 4.20 mmol, documento US 5958960), piridina (0.365 mi, 4.62 mmol) y DMAP (0.513 g, 4.20 mmol) en diclorometano (40 mi) bajo nitrógeno. Se agita a temperatura ambiente durante 16 horas, se diluye con diclorometano y se vierte en solución acuosa de ácido cítrico al 10 % (50 mi). Se lava la capa orgánica con agua (50 mi) y salmuera (50 mi). Se seca sobre MgS04, se filtra y se concentra al vacío, produciendo el compuesto del título como un sólido blanco (1.295 g, 75 %) . LCMS: m/z 400 [ + H]+ y m/z 300 [M + H - C02*Bu]+ @ RT 1.39 min. Preparación 20 Ester dietílico del ácido (1 S.2S.4S,5R,6R)-4-acetilox¡-2- aminobiciclof3.1.0lhexano-2,6-dicarboxílíco Se disuelve éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-4-acetiloxi-2-(fer-butoxicarbonil)aminobiciclo-[3.1.Ojhexano-2,6-dicarboxílico (1.25 g, 3.13 mmol, Preparación 19) en una solución de TFA al 95 % en diclorometano (60 mi) y se agita bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 5 minutos.
Después de este tiempo se retira el TFA/diclorometano al vacío. Se disuelve el producto crudo en una suspensión de NaHC03 (1.00 g) en diclorometano (50 mi) y se agita durante 30 minutos. Se filtra la suspensión, se lava con diclorometano (3 x 25 mi) y se concentra al vacío proporcionando 916 mg (98 %) del producto como un aceite amarillo. LCMS: m/z 300 [M + H]+ @ RT (Tiempo de Retención) 0.92 min. Preparación 21 Ester dietílico del ácido f 1 S.2S.4S.5R.6R)-4-acetiloxi-2-r2'S-(fer-butoxncarbonilaminopropion¡n-aminobic¡clo[3.1.0lhexano- 2.6-dicarboxílico Se agregan secuencialmente EDC (0.519 g, 2.72 mmol), HOBt (0.314 g, 2.32 mmol), D AP catalítico (0.024 g, 0.19 mmol) y trietilamina (1.08 mi, 7.76 mmol) a una suspensión de éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-4-acetiloxi-2-aminobiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (0.80 g, 1.94 mmol, Preparación 20) y Boc-/_-Ala (0.477 g, 2.52 mmol) en diclorometano anhidro (50 m!) bajo nitrógeno. Después se agita a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 minutos, la suspensión blanca inicial se disuelve totalmente. Se agita la reacción durante 16 horas, se diluye con diclorometano y se lava con solución acuosa saturada de NaHC03 (50 mi), solución acuosa 1,0 N de HCI (3 x 20 mi) y solución de salmuera saturada (40 mi). Se seca la capa orgánica sobre MgS04 y se filtra y concentra al vacío. Se purifica la amida cruda resultante por cromatografía en columna usando una mezcla (4:1) de acetato de etilo y hexanos como eluyente, proporcionando 638 mg (75 %) del producto como un sólido blanco. RMN 1H (CD3OD)*: d 5.05 (1H, d, 5.7 Hz), 4.09 (2H, c, 7.3 Hz), 4.02 (2H, c, 7.3 Hz), 4.01-3.94 (1H, m), 2.65-2.59 (2H, m), 2.38 (1H, d, 14 Hz), 2.10-2.03 (3H, m), 1.91 (3H, s), 1.78 (1H, dd, 5.9 Hz, 16 Hz), 1.59 (1H, s amplio), 1.34 (9H, s), 1.16 (6H, 2 x t, 7.3 Hz); *Nota. Protones intercambiables no observados por RMN = 2. LCMS: m/z 471 [M + H]+ y m/z 371 [M + H - 002'???] + @ RT 1.30 min. Rf 0.50 (80% acetato de etilo : heptano). Preparación 22 Ester díetílico del ácido M S.2S.4S.5R.6R1-2-amino-4-hidroxi- bicicloF3.1.0.1hexano-2,6-dicarboxílico Se enfría una solución de éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-fer-butoxicarbonilamino-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (5.0 g, 14.0 mmol, documento US 5958960) en acetato de etilo hasta 0°C. Se burbujea HCI (g) anhidro en la solución hasta saturación y se agita durante 0.5 horas. Se deja calentar la reacción hasta temperatura ambiente y se agita durante 1 hora. Se concentra la mezcla de reacción y se divide entre acetato de etilo y H20. Se trata la capa acuosa con NaHCC>3 (ac) y se extrae con acetato de etilo. Se secan los orgánicos con K2C03 y se concentran proporcionando 2.2 g (59.7%) de sólidos blancos. [<x]2D3 = -30.8 (c=0.52, CH3OH). RMN H (300 MHz, CDCI3) d 1.26 (3H, t, J = 7.33 Hz), 1.36 (3H, t, 7.33 Hz), 1.60 (1H, dd, J = 5.87, 15.40 Hz), 1.64 (1H, t, J = 2.93 Hz), 2.27 (2H, s amplio), 2.15-2.29 (3H, m), 3.93 (1H, s amplio), 4.13 (2H, c, J = 6.97 Hz), 4.27-4.36 (3H, m). Análisis calculado para C12Hi9N05: C, 56.02; H, 7.44; N, 5.44. Encontrado: C, 55.75; H, 7.36; N, 5.40. EM (ES) m/z 258.1 [M + H] + .
Preparación 23 Éster dietílico del ácido (1 S.2S,4S,5R,6R)-2-(2'-fer- bu toxica rbonilam ino-acetüami no ?-4-h idroxi- biciclo[3.1.0lhexano-2,6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-Glicina (458 mg, 2.62 mmol, Aldrich) y éster dietílico del ácido (1S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidrox¡-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (450 mg, 1.75 mmol, Preparación 22). Se purifica en 35 g de sílice eluyendo con un gradiente de 50/50 hasta 20/80 de hexanos/acetato de etilo. Rendimiento: 560 mg (77%). RMN 1H (400 Hz, CDCI3) d 1.28 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.29 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.48 (9H, s), 1.57 (2H, m), 2.21 (1H, m), 2.41 (1H, dd, J = 2.9, 5.8 Hz), 2.81 (1H, d, J = 15.6 Hz), 3.76 (1H, d, J = 5.8 Hz), 4.10-4.18 (3H, m), 4.26 (2H, c, J = 7.3 Hz), 4.33 (1H, m), 5.10 (1H, s amplio), 6.86 (1H, s amplio). Análisis calculado para C19H3o 208: C, 55.06; H, 7.30; N, 6.76. Encontrado: C, 55.24; H, 7.50; N, 6.76.
EM (ES) m/z 415.2 [ + H] + , 437.2 [M + Na]+. Preparación 24 Ester dietílico del ácido M S.2S.4S.5R.6R -2-f2'S-fer- butoxicarbonilamino-3'-metil-butirilamino)-4-hidroxi- biciclof3.1.01hexano-2.6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-L-Valina (569 mg, 2.62 mmol, Sigma) y éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]-hexano-2,6-dicarboxílico (450 mg, 1.75 mmol, Preparación 22). Se purifica el material crudo en 35 g de sílice; se eluye con un gradiente de 70/30 a 20/80 de hexanos/acetato de etilo. Rendimiento: 694 mg (87%) de una espuma blanca. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d 0.95 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.00 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.29 (6H, t, J = 7.3 Hz), 1.45 (9H, s), 1.52-1.60 (2H, m), 2.08 (1H, m), 2.20 (1H, m), 2.42 (1H, m), 2.81 (1H, d, J = 15.6 Hz), 3.86 (1H, dd, J = 6.3, 8.8 Hz), 4.14 (2H, c, J = 7.3 Hz), 4.21-4.32 (4H, m), 5.00 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.63 (1H, s).
Análisis calculado para C22H36 208: C, 57.88; H, 7.95; N, 6.14. Encontrado: C, 57.87; H, 8.03; N, 6.12. EM (ES) m/z 457.2 [M + H]+, 479.2 [M + Na]+. Preparación 25 Ester dietílico del ácido (1 S,2S.4S.5R.6R)-2-(2'S-fer- butoxi carbón ila mi no-4'-meti l-pentanoi lamino )-4-h id roxi- biciclo[3.1.01hexano-2.6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-L-Leucina (606 mg, 2.62 mmol, Chemlog) y éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidrox¡-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (450 mg, 1.75 mmol, Preparación 22). Se purifica el material crudo en 35 g de sílice; se eluye con un gradiente de 70/30 a 20/80 de hexanos/acetato de etilo. Rendimiento 689 mg (84%) de una espuma blanca. RMN H (400 MHz, CDCI3) d 0.96 (6H, m), 1.28 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.29 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.46 (9H, s), 1.45-1.73 (5H, m), 2.20 (1H, m), 2.42 (1H, m), 2.80 (1H, d, J = 16.1 Hz), 4.07-4.35 (7H, m), 4.81 (1H, d amplio), 6.86 (1H, s amplio).
Análisis calculado para C23H38N2C O, 1 H20: C, 58.48; H, 8.15; N, 5.93. Encontrado: C, 58.22; H, 7.94; N, 5.92. EM (ES) m/z 471.2 [M + H] + , 493.2 [M + Na] + . Preparación 26 Ester dietílico del ácido (1 S.2S.4S,5R.6R)-2-(2'S-fer- butoxi carbón i lamín o-3'S-metil-pentano¡ lamino )-4-h id roxi- b¡cicloí3.1.01hexano-2.6-dícarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-L-lsoleucina (606 mg, 2.62 mmol, Aldrích) y éster dietílico del ácido (1S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (450 mg, 1.75 mmol, Preparación 22). Se purifica el material crudo en 35 g de sílice eluyendo con un gradiente de 70/30 a 20/80 de hexanos/acetato de etilo. Rendimiento: 731 mg (89%). RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d 0.92 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.97 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.17 (1H,m), 1.29 (6H, t, J = 6.8 Hz), 1.46 (9H, s), 1.53 (1H, dd, J = 5.8, 15.6 Hz), 1.58 (1H, t, J = 2.4 Hz), 1.74 (1H, m), 1.83 (1H, m), 2.20 (1H, m), 2.43 (1H, m), 2.80 (1H, d, J = 15.6 Hz), 3.88 (1H, dd, J = 7.3, 8.8 Hz), 4.12-4.32 (6H, m), 4.98 (1H, d, J = 7.3 Hz), 6.60 (1H, s). Análisis calculado para CasHssNaOsO^h^O: C, 58.25; H, 8.16; N, 5.91. Encontrado: C, 58.17; H , 8.11; N , 5.91. EM (ES) m/z 471.2 [M + H] + , 493.2 [M + Na] + . Preparación 27 Ester dietílico del ácido (1 S.2S.4S.5R,6R)-2-í2'-(2-fer- butoxicarbon¡lamino-acetilamino)-acetilamino1-4-hidroxi- biciclo 3.1.0lhexano-2.6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-Gly-Gly (474 mg, 2.04 mmol) y clorhidrato de éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidrox¡-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-d¡carboxílico (400 mg, 1.36 mmol, Preparación 22 sin tratamiento básico) con las siguientes excepciones. No se usa DMAP. Se agrega un equivalente de trietilamina. Se purifica el material crudo en 35 g de sílice; se eluye con acetato de etilo. Rendimiento: 517 mg (81%). [a]2Q = -18,18 (c=0.55, MeOH).
RMN H (300 Hz, CDCI3) d 1.26 (3H, t, J = 6.8 Hz), 1.27 (1H, t, J = 7.3 Hz), 1.28 (3H, t, J = 6.8 Hz), 1.46 (9H, s), 1.59 (1H, t, J = 3.4 Hz), 1.62 (1H, dd, J = 6.3, 16.1 Hz), 2.21 (1H, dd, J = 2.9, 5.8 Hz), 2.46 (1H, dd, J = 2.4, 5.8 Hz), 2.73 (1H, d, J = 15.6 Hz), 3.78-3.91 (3H, m), 4.01-4.15 (3H, m), 4.24 (2H, c, J = 6.8 Hz), 4.32 (1H, d, J = 5.8 Hz), 5.28 (1H, amplio), 6.87 (1H, t amplio, J = 4.9 Hz), 7.39 (1H, s amplio). E AR calculado para C2iH34N309, 472.2295. Encontrado, 472.2303. CLAR: 16.755 min. Columna: Simetría C18, 3.5 um, 4.6X150 mm. ? = 230 nM. Velocidad de flujo: 1 ml/min. Gradiente: ACN 10% a 50% /agua que contiene TFA al 0.1% durante 25 min. Preparación 28 Ester dietílico del ácido (1 S,2S.4S.5R.6R)-2-í2'-(2S-fe/-- putoxicarbonilamino-propionilamino)-acetilamino1-4-hidroxi- b i ciclo [3.1.01hexano-2.6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-Ala-Gly (502 mg, 2.04 mmol) y clorhidrato de éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidrox¡-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (400 mg, 1.36 mmol, Preparación 22 sin tratamiento básico) con las siguientes excepciones. No se usa DMAP. Se agrega un equivalente de trietilamina. Se purifica el material crudo en 35 g de sílice eluyendo con acetato de etilo. Rendimiento: 500 mg (76%). [ct]2D3 = -31 ,37(c=0.55, MeOH). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 1.27 (3H, t, J = 6.8 Hz), 1.28 (3H, t, J = 6.8 Hz), 1.42 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.45 (9H, s), 1.58 (1H, t, J = 3.4 Hz), 1.64 (1H, dd, J = 5.8, 15.6 Hz), 2.23 (1H, dd, J = 3.4, 5.8 Hz), 2.50 (1H, dd, J = 2.9, 6.3 Hz), 2.69 (1H, d, J = 15.6 Hz), ABc de dobletes (2H, vA = 3.87, vB = 3.98 JAB = 17.1 Hz, JD = 6.3 Hz), 3.92 (1H, m), 4.07-4.16 (3H, m), 4.24 (2H, c, J = 7.3 Hz), 4.32 (1H, b), 5.08 (1H, b), 6.84 (1H, t amplio, J = 4,88 Hz), 7.14 (1H, s amplio). EMAR calculado para C22H36 3Og, 486.2452. Encontrado, 486.2451. Preparación 29 Éster dietílico del ácido (1 S.2S.4S.5R.6R)-2-(2'-¿er- butox¡carbon¡lamino-3'-fenil-propion¡larriino)-4-hidroxi- b¡ciclo[3.1.0lhexano-2.6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-L-fenilalanina (772 mg, 2.91 mmol) y éster dietílico del ácido ( S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxíIico (480 mg, 1.94 mmol, Preparación 22). Se concentra la mezcla de reacción cruda, se disuelve en diclorometano, se somete a cromatografía instantánea a través de un tapón corto de gel de sílice con acetato de etilo/DCM (1:1) y se concentra al vacío produciendo un aceite amarillo. Se purifica además el material por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 30%/hexanos hasta acetato de etilo al 80%/hexanos proporcionando 852 mg (87%) del compuesto del título. 23 [a] D = -23.66 (c = 0.93, MeOH).
RMN 1H (400 MHz, CD3OD). d 1.22 - 1.30 (6H, m), 1.35 (9H, s), 1.59 (1H, t, J = 2.9 Hz), 1.70 (1H, dd, J = 5.5, 15.4 Hz), 2.06 (1H, m), 2.40 (1H, d, J = 15.4 Hz), 2.63 (1H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 2.76 (1H, dd, J = 9.2, 13.9 Hz), 4.08 - 4.33 (6H, m), 7.20 - 7.29 (5H, m). EM encontrado 505.0 [M + H]+. EMAR calculado para C26H36 2O8, 505.2550. Encontrado, 505.2559. Preparación 30 Ester dietílico del ácido MS,2S.4S,5R.6R')-2-r2'-fer- butoxicarbonilamino-4Wtritil-carbamoil Vbuttrilaminol^- hidroxi-biciclors.l .01hexano-2.6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-L-glutamina(Tritil)-OH (1,40 g, 2,86 mmol) y éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidrox¡-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (490 mg, 1.90 mmol, Preparación 22), con la excepción de que no se usa DMAP. Se concentra la mezcla de reacción cruda, se disuelve en diclorometano, se somete a cromatografía instantánea a través de un tapón corto de gel de sílice con acetato de etilo y se concentra al vacío produciendo un aceite amarillo. La purificación adicional por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 30%/hexanos hasta acetato de etilo al 100%/hexanos proporciona 1.3 g (94%) del compuesto del título. [a]¾3 = -21.28 (c = 0.94, MeOH). R N 1H (400 MHz, CD3OD.) d 1.18 - 1.26 (6H, m), 1.44 (9H, s), 1.62 - 1.74 (3H, m), 1.91 - 2.00 (1H, m), 2.05 (1H, m), 2.38 - 2.48 (3H, m), 2.54 (1H, m), 4.00 - 4.27 (6H, m), 7.18 -7.30 (15H, m). E encontrado 728.2 [M + H]+. E AR calculado para C41H49N30g, 728.3547. Encontrado, 728.3533. Preparación 31 Éster dietílico del ácido (1S.2S.4S.5R,6R)-2-(2'S.6'-bis-fe/*- butoxicarbonilamino-hexanoilamino)-4-hidroxi- biciclo[3.1.01hexano-2.6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-L-lisina(Boc)-OH (910 mg, 2.63 mmol) y éster dietílico del ácido (1S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidroxi-biciclo[3. .0.]hexano-2,6-dicarboxílico (450 mg, 1.75 mmol, Preparación 22), con la excepción de que no se agrega DMAP a la mezcla de reacción. Se concentra la mezcla de reacción cruda, se disuelve en diclorometano, se somete a cromatografía instantánea a través de un tapón corto de gel de sílice con acetato de etilo y se concentra al vacío produciendo un aceite amarillo. La purificación adicional del material por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/hexanos (1:1) proporciona 800 mg (78%) del compuesto del título. [ct]2D3 = -30.19 (c=0.53, MeOH).
RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.21 - 1.24 (6H, m), 1.26 - 1.77 (27H, m), 2.07 (1H, m), 2.42 (1H, d, J = 15.8 Hz), 2.59 (1H, dd, J = 2.6, 5.5 Hz), 3.03 (1H, t, J = 6.2 Hz), 3.99 (1H, m), 4.07 - 4.28 (5H, m). EM encontrado 586.1 [M + H]+. EMAR calculado para C28H47N3OK), 586.3340. Encontrado, 586.3348. Preparación 32 Ester dietílico del ácido (1 S.2S.4S.5R.6R)-2-r2'-fer- butoxicarbonilamino-3 tritil-carbamoin-propionilaminol^- hidroxi-biciclorS.I .01hexano-2,6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-L-asparagina(Tritil)-OH (1.35 g, 2.84 mmol) y éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidrox¡-biciclo[3. .0]hexano-2,6-dicarboxílico (476 mg, 1.85 mmol, Preparación 22), con la excepción de que no se agrega DMAP a la mezcla de reacción. Se concentra la mezcla de reacción cruda, se disuelve en diclorometano, se somete a cromatografía instantánea a través de un tapón corto de gel de sílice con acetato de etilo y se concentra al vacío produciendo un aceite amarillo. La purificación adicional del material por cromatografía sobre gel de sílice eiuyendo con acetato de etilo al 20%/hexanos hasta acetato de etilo al 50%/hexanos proporciona 1.07 g (81%) del compuesto del título. [a]2D3 = -25.45 (c=0.55, MeOH).
RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.19 - 1.26 (6H, m), 1.45 (9H, s), 1.61 - 1.69 (2H, m), 2.05 (1H, m), 2.44 (1H, d, J = 15.4 Hz), 2.51 - 2.72 (3H, m), 4.02 - 4.21 (4H, m), 4.25 (1H, d, J = 5.5 Hz), 4.36 (1H, dd, J = 4.8, 8.8 Hz), 7.18 - 7.30 (15H, m). EM encontrado 714.1 [M + H]\ EMAR calculado para C4oH47N309, 714.3391. Encontrado, 714.3380. Preparación 33 Éster dietílico del ácido (1 S.2S.4S.5R.6R)-2-f2'-fer- butoxicarbonilamino-3'-(1'-fer-butoxicarbonil-1H-indol-3'-il)- propionilaminol-4-hidroxi-biciclor3.1.Olhexano-2.6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-L-triptofano(Boc)-OH (1.18 g, 2.91 mmol) y éster dietílico del ácido (1S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidrox¡-biciclo[3.1.0.]hexano-2,6-dicarboxílico (520 mg, 1.90 mmol, Preparación 22). Se concentra la mezcla de reacción cruda, se disuelve en diclorometano, se somete a cromatografía instantánea a través de un tapón corto de gel de sílice con acetato de etilo y se concentra al vacío produciendo un aceite amarillo. La purificación adicional del material por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/DCM (1:1) proporciona 1.2 g (92%) del compuesto del título. [a]2D = -12·5 (c=0.96, MeOH). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.18 - 1.27 (6H, m), 1.34 (9H, s), 1.62 (1H, t, J = 2.9 Hz), 1.67 (9H, s), 1.74 (1H, dd, J = 5.9, 15.2 Hz), 2.07 (1H, m), 2.46 (1H, d, J = 15.7 Hz), 2.60 (1H, d, J = 2.9, 5.9 Hz), 2.89 (1H, dd, J = 9.3, 15.0 Hz), 3.16 (1H, dd, J = 4.9, 15.2 Hz), 4.04 - 4.12 (2H, m), 4.18 - 4.24 (2H, m), 4.27 (1H, d, J = 5.4 Hz), 4.43 (1H, dd, J = 5.4, 9.3 Hz), 7.26 (2H, m), 7.52 (1H, s), 7.64 (1H, d, J = 7.3 Hz), 8.10 (1 H, d, J = 8.3 Hz). E encontrado 644.8 [M + H]+, 666.8 [M + Na] + . EMAR calculado para C33H44 3O10l 666.3002. Encontrado, 666.2988. Preparación 34 Ester dietílico del ácido (1 S.2S.4S.5R.6R -2-(1 '-ter- butoxicarbon¡l-pirrol¡dina-2'S-carbon¡n-4-hidroxi- b¡ciclof3.1.0lhexano-2.6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-L-prolina y éster dietílico del ácido (1S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidroxi-bic¡clo[3.1.0.]hexano-2,6-dicarboxílico (Preparación 22). Se purifica el material crudo en 110 g de sílice en un sistema ISCO eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 80% /hexanos hasta acetato de etilo al 100% proporcionando 699 mg (84%) del compuesto del título. [a]¾3 = -52.53 (c=0.99, MeOH). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.26 (6H, m), 1.44 (9H, s), 1.62 (1H, m), 1.73(1H, dd, J = 5.4, 15.3Hz), 1.84 (1H, m), 1.97 (1H, m), 2.07 (4H, m), 2.41 (1H, d, J = 15.3 Hz), 2.50 (1H, m), 2.59 (1H, m), 4.12 (2H, m), 4.20 (1H, c, J = 7.4 Hz), 4.27 (1H, d, J = 5.4 Hz). EM encontrado 454.9 [M + H] + , 476.8 [M + Na]+. EMAR calculado C22H3 N208Na, 477.2213. Encontrado, 477.2210 Preparación 35 Éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-[2'S-fer- butox¡carbonilamino-3'-(4-fer-butoxicarboníloxi-fen inoro pión Mam i nol^-hidroxi-biciclors.1.01hexano-2,6- dicarboxilico Se prepara el compuesto del título según el Procedimiento general A usando ácido 2S-íer-butoxicarbon ¡lamín o-3-(4-íer-butoxicarbo ni loxi-fenil)-propiónico y éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidroxi-biciclo[3.1.0.]hexano-2,6-dicarboxílico (Preparación 22). Se purifica el material crudo en 110 g de sílice en un sistema Isco eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 60%/hexano hasta acetato de etilo al 90%/hexanos proporcionando 1.09 g (91%) del compuesto del título. 23 [a] D = -12 (c=1.0, eOH).
RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.25 (6H, m), 1.37 (9H, s), 1.52 (9H, s), 1.68 (1H, dd, J = 5.4, 15.3 Hz), 2.06 (1H, m), 2.38 (1H, d, J = 15.3 Hz), 2.64 (1H, m), 2.79 (1H, dd, J = 8.4, 13.9 Hz), 3.05 (1H, dd, J = 5.4, 13.9 Hz), 4.20 (6H, m), 7.04 (2H, d, J = 8.4Hz), 7.26 (2H, d, J = 8.4Hz). EM encontrado 621.8 [ + H]+, 643.8 [M + Na]+. EMAR calculado para C3 H44N2OH Na, 643.2843. Encontrado, 643.2845. Preparación 36 Ester dietílico del ácido (1 S.2S,4S.5R,6R)-2-(2'S-fer- butoxicarbonílam¡no-4'-met¡lsulfanil-butirílam¡no)-4-h¡droxi- bic¡clo[3.1.01hexano-2,6-dicarboxílico El compuesto del título se preparó según el Procedimiento general A usando (Boc-L-metionina) y éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-amino~4-hidroxi-biciclo[3. .0.]hexano-2,6-dicarboxílico (Preparación 22). El material crudo se purificó en 110 g de sílice en un sistema Isco eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 80%/hexanos hasta acetato de etilo al 100% proporcionando 1.0 g (92%) del compuesto del título. [a] D = -30 (c=1.0, MeOH). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.26 (6H, m), 1.43 (9H, s), 1.84 (6H, m), 2.06 (1H, m), 2.2 (1H, m), 2.48 (1H, m), 2.61 (1H, m), 3.37 (1H, m), 2.49 (1H, m), 4.2 (6H, m). EM encontrado 488.8 [ + H]\ 510.8 [M + Na]+. EMAR calculado para C22H36 208S a, 511.2090. Encontrado, 511.2071. Preparación 37 Ester dietílico del ácido (1 S.2S.4S,5R,6R)-2-(2'S-fer- b utoxi carbón i lamino-propio ni lamí no)-4-h idroxi- b¡ciclo[3.1,0lhexano-2,6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando N-BOC-(Z-)-alanina disponible de forma comercial y éster dietílico del ácido (1S,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-hidrox¡-biciclo[3.1.0.]hexano-2,6-dicarboxílico (Preparación 22). Se mantiene la mezcla de reacción a reflujo durante la noche. Se purifica por CLAR preparativa, columna de 1 X 500 g de Si02, (acetato de etilo al 10%/hexanos hasta acetato de etilo al 100%). Rendimiento: 3.0 g (90 %, 7.00 mmol) de una espuma blanca. [a] D = -32,31° (c = 0.37, CHCI3). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 1.28 (6H, t, J = 7.3 Hz), 1.34 (3H, d, J = 7.3 Hz), 1.46 (9H, s), 1.51-1.58 (2H, m), 1.64 (1H, s), 2.19 (1H, dd, J = 3.3, 6.2 Hz), 2.40 (1H, dd, J = 2.9, 6.2 Hz), 2.80 (1H, d, J = 15.8 Hz), 4.10-4.36 (6H, m), 4.92 (1H, s amplio), 6.94 (1H, s amplio). Análisis calculado para 02??32?2?8·0,1 H20: C, 55.83; H, 7.54; N, 6.51. Encontrado: C, 55.57; H, 7.64; N, 6.44. EM (ES) m/z 429.2 [M + H] + , 329.1 [M - Boc] + . Preparación 38 Clorhidrato de éster dietílico del ácido (1 S,2S.4S.5R.6R)-2-(2'S-amino-propionilamino -4-hidroxi-biciclof3.1.Olhexano-2.6- dicarboxílico Se purga una solución de éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'S-rer-butoxicarbonilamino-propionilamino)-4-hidrox¡-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (2.95 g, 6.88 mmol, Preparación 37) en acetato de etilo (30 mi) a 0°C con gas HCI anhidro hasta que se satura la solución con HCI. Se agita la mezcla de reacción resultante a 0°C hasta que se considera que se ha completado la reacción por CCF. Se purga la mezcla de reacción durante 30 minutos con N2 para eliminar el exceso de gas HCI. Se concentra la suspensión resultante hasta sequedad al vacío proporcionando 2,47 g (98%, 6.78 mmol) de la sal de clorhidrato de amino deseada. No es necesaria purificación adicional. [<x]2D = -28.0° (c = 0.50, MeOH). RMN 1H (300 MHz, CDCI) d 1.24 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.28 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.50 (3H, d, J = 7.3 Hz), 1.61 (1H, t, J = 2.9 Hz), 1.76 (1H, dd, J = 5.9, 15.8 Hz), 2.10 (1H, dd, J = 3.3, 5.9 Hz), 2.43 (1H, d, J = 15.4 Hz), 2.60 (1H, dd, J = 2.9, 6.2 Hz), 3.90 (1H, c, J = 7.0, 13.9 Hz), 4.15 (2H, c, J = 7.3 Hz), 4.14-4.31 (3H, m). Análisis calculado para C15H24N2O6*HCI'0,7H2O: C, 47.73; H, 7.05; N, 7.42. Encontrado: C, 47.96; H, 6.91; N, 7.04. EM (ES) m/z 329.1 [M + H] + . Preparación 39 Ester dietílico del ácido ( 1 S.2S.4S.5R.6R)- 2-T2'S-(2S-fer- butoxicarbonilamino-propionilamino) propionilaminol-4- hidroxi-biciclor3.1.0.1hexano-2.6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando clorhidrato de éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'S-amino-propionilamino)-4-hidroxi-bic¡clo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (0.2 g, 0.55 mmol, Preparación 38) y Boc-(L)-alanina (0.16 g, 0.82 mmol) con la excepción de que no se usa D AP. Se purifica usando CP-CCF (acetato de etilo/hexanos) proporcionando 0.13 g (47,3%) del compuesto del título. [a] D3 = -46.2 (c = 0.52, CHCI3). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 1.27 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.28 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.36 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.37 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.44 (9H, s), 1.58-1.65 (2H, m), 2.19 (1H, dd, J = 3.0, 5.9 Hz), 2.46 (1H, dd, J = 2.6, 5.9 Hz), 2.70 (1H, d, J = 15.4 Hz), 4.09-4.33 (7H, m), 4.48 (1H, p aparente, J = 7.0 Hz), 5.05 (1H, d amplio, J = 6.6 Hz), 6.79 (1H, d amplio, J = 7.7 Hz), 7.26 (1H, s). EMAR calculado para C23H38N3O9, 500.2608. Encontrado, 500.2598.
Preparación 40 Ester dietílico del ácido (1 S.2S.4S.5R.6R)- 2-\2'S-(2-ter- butoxicarbonilamino-acetilamino)-prop¡onilamino1-4-hidroxi- b i ciclo [3.1.0.1hexano-2,6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general A usando Boc-glicina (0.29 g, 1.6 mmol) y clorhidrato de éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'S-amino-propion¡Iam¡no)-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (0.4 g, 1.1 mmol, Preparación 38) con la excepción de que no se usa DMAP. Se purifica usando CP-CCF (acetato de etilo/hexanos) proporcionando 0.14 g (26,2%) del compuesto del título. [a] 2D = - (c=1.00, CDCI3). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 1.27 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.29 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.38 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.45 (9H, s), 1.57-1.65 (2H, m), 2.19 (1H, dd, J = 3.3, 5.9 Hz), 2.44 (1H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 2.74 (1H, d, J = 15.8 Hz) 3.70-3.86 (2H, m), 4.08-4.34 (6H, m), 4.56 (1H, p aparente, J = 7.0 Hz), 5.31 (1H, s amplio), 6.88 (1H, d amplio, J = 7.0 Hz), 7.50 (1H, s). EMAR calculado para C22H3C5N3O9, 486.2452. Encontrado, 486.2444. Preparación 41 Éster dietílico del ácido (1 S.2S.4S.5R.6R)-2-r2'-(2S-fer- butoxicarbonilamino-4-metil-pentanoilamino)-propionilaminol- 4-hidroxi-biciclo[3.1.01hexano-2.6-d¡carboxílico Se prepara según el Procedimiento general B usando monohidrato N-BOC-(L)-leucina disponible de forma comercial y clorhidrato de éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'S -a mino-pro pionilamino)-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2, 6-dicarboxílico (0.2 g, 0.55 mmol, Preparación 38). Se purifica por CP-CCF, rotor de 4 mm S¡02, (acetato de etilo al 10%/hexanos hasta acetato de etilo al 100%). Rendimiento 0.54 g (62%, 1.00 mmol) de una espuma blanca. 23 [a] D = -61.2° (c = 0.49, MeOH).
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 0.93 (3H, d, J = 6.2 Hz), 0.94 (3H, d, J = 6.2 Hz), 1.25 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.27 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.36 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.43 (9H, s), 1.53 (1H, d, J = 9.5 Hz), 1.55-1.69 (5H, m), 2.18 (1H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 2.44 (1H, dd, J = 2.9, 6.2 Hz), 2.70 (1H, d, J = 15.8 Hz), 4.06 (1H, s amplio), 4.13 (4H, c, J = 7.3 Hz), 4.18-4.28 (2H, m), 4.31 (1H, d, J = 5.9 Hz), 4.41-4.45 (1H, m), 4.85 (1H, s amplio), 6.57 (1H, d, J = 7.3 Hz), 6.97 (1H, s amplio). Análisis calculado para C26H43N3O90, 1 H20: C, 57.46; H, 8.01; N, 7.73. Encontrado: C, 57.18; H, 8.00; N, 7.64. EMAR calculado para C26H43N309 [M + Na] + , 564.2897. Encontrado, 564.2922. Preparación 42 Ester dietílico del ácido (1 S.2S.4S.5R.6R^-2-f2'-(2S-fer- b utoxicarbo ni lamín o-3-metil-but¡ rila mi no)-propion ¡lamí nol-4- hidroxi-biciclor3.1.01hexano-2,6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general B usando N-BOC-(L)-valina disponible de forma comercial y clorhidrato de éster dietílico del ácido (IS^S^S.SR.eRJ^-ÍZ'S-amino-propionilamino)-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (0.2 g, 0.55 mmol, Preparación 38). Se purifica por CP-CCF, rotor de 4 mm S¡02, (acetato de etilo al 10%/hexanos hasta 67% acetato de etilo). Rendimiento 0.36 g (43%, 0.68 mmol) de una espuma blanca. [a]2D3 = -65.5° (c = 0.58, MeOH). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 0.91 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.97 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.27 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.28 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.37 (3H, d, J = 17.3 Hz), 1.44 (9H, s), 1.54-1.61 (3H, m), 2.12-2.20 (2H, m), 2.42 (1H, dd, J = 2.6, 5.9 Hz), 2.70 (1H, d, J = 15.4 Hz), 3.90 (1H, t, J = 6.6 Hz), 4.13 (2H, c, J = 7.0 Hz), 4.20-4.29 (2H, m), 4.31 (1H, d, J = 5.9 Hz), 4.40-4.48 (1H, m), 4.93 (1H, s amplio), 6.41 (1H, d, J = 7.3 Hz), 6.91 (1H,bs). Análisis calculado para C25H4i N3O9»0,2CH2Cl2: C, 55.58; H, 7.66; N, 7.72. Encontrado: C, 55.76; H, 7.27; N, 7.49. EM (ES) m/z 528.3 [M + H] + . Preparación 43 Ester dietílico del ácido (1S.2S.4S,5R.6R -2-(2'S-acetilamino- prop¡onilaminol-4-hidrox¡-biciclor3.1.OIhexano-2,6- dicarboxílico Se agita una solución de clorhidrato de éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'S-amino-propionilamino)-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (0.30 g, 0.82 mmol, Preparación 38) en CH2CI2 (30 mi) a 0 °C y se agregan secuencialmente trietilamina (0.16 g, 1.6 mmol) después cloruro de acetilo (0.10 g, 1.18 mmol). Se deja que la mezcla de reacción se caliente mientras se agita durante la noche. Se diluye la mezcla de reacción con acetato de etilo (700 mi) y se lava con NaHS04 acuoso y salmuera. Se seca la capa orgánica sobre sulfato de magnesio. Se purifica por CP-CCF, rotor de 4 mm Si02, (acetato de etilo al 10%/hexanos hasta acetato de etilo al 100%) proporcionando 0.24 g (79%, 0.65 mmol) de una espuma blanca. 23 [a] D = -48° (c = 0.5, MeOH).
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 1.27 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.28 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.37 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.55-1.62 (2H, m), 1.99 (3H, s), 2.19 (1H, dd, J = 3.3, 6.6 Hz), 2.40 (1H, dd, J = 2.6, 5.9 Hz), 2.77 (1H, d, J = 15.8 Hz), 4.07 (2H, c, J = 7.0 Hz), 4.21-4.31 (2H, m), 4.33 (1H, d, J = 6.2 Hz), 4.43-4.47 (1H, m), 6.13 (1H, bs), 7.06 (1H, bs). Análisis calculado para C17H26N207: C, 55.13; H, 7.08; N, 7.56. Encontrado: C, 55.05; H, 7.12; N, 7.29. EMAR calculado para C17H26N207 [M + Na]+, 393.1638. Encontrado, 393.1644.
Preparación 44 Ácido 3-acetoxi-2S-(fer-butoxicarbonilamino')propiónico Se agrega N-metilmorfolina (2.8 g, 27.2 mmol) y dicarbonato de di-rer-butilo (5.8 g, 25.2 mmol) a una solución de O-acetil-L-serina (3.7 g, 25.2 mmol) en 1:1 dioxano:agua. Se agita la reacción durante 24 horas, luego se divide entre acetato de etilo y agua. Se extrae la fase acuosa con acetato de etilo y se descarta la orgánica. Se ajusta el pH a 0-1 con NaHS04 acuoso. Se extrae la fase acuosa con acetato de etilo, se seca sobre Na2S0 , se filtra y se concentra al vacío. Se purifica por medio de cromatografía instantánea produciendo 2.6 g (41.7%). El material se usó en la Preparación 15 sin caracterización. Preparación 45 (1 S.5R)-3-(fer-Butoxicarbonilamino'>-3-(fer-butoxicarbonih-6-oxabiciclo[3.1.Olhexano agrega una solución de metilmalonato de f-buti I o (129 g, 0.75 mol) en THF (385 mi) a una suspensión de LiH (14.9 g, 1.875 mol) en THF (900 mi) y N,N-dimetilpropilenurea (DMPU, 155 g, 1.2 mol) durante 30 minutos mientras se mantiene la temperatura a 0-5°C. Se calienta la mezcla de reacción hasta 65°C y se agrega una solución de c/s-1,4-dicloro-2-buteno (95%, 100 g, 0.8 mol, 1.08 equiv.) en THF (100 mi) durante 5.5 horas, manteniendo la temperatura a 63-67°C. Se agita la reacción durante 4 horas a 65°C. Un tratamiento con agua/MTBE de la mezcla de reacción proporciona 1 -(metoxicarbonil)-l -(ter-butoxicarbonil)ciclopent-3-eno. RMN H (300 MHz, CDCI3) d 5.57 (s, 2H, CH = CH), 3.71 (s, 3H, CH3), 2.95 (s, 4H, 2CH2), 1.42 (s, 9H, C(CH3)3). IR (película) 1734 (C = 0), 1646, 1268, 1149 cm'1. Se enfría la solución de reacción que contienel- (metoxicarbonil)-l - (íer-butoxicarbonil)ciclopent-3-eno hasta 10-15°C y se agrega a una solución enfriada (10-15°C) de NaOH 1 N (1.3 I, 1.3 mol) durante 30 minutos. Se agita la solución de reacción a 25°C durante 24 horas y se controla por ensayo de CG (Cromatografía de Gases). Cuando se completa la reacción de hidrólisis, se agrega a la mezcla de reacción TBE (645 mi) y se agita la solución durante 5 minutos. Se dejan sedimentar las capas y se separan. Se descarta la capa orgánica. Se agrega una solución de NaHSQ4 1.5M (1470 mi) para acidificar la capa acuosa (pH 2-3). Se agrega TBE (1.3 I) y se separan las capas. Se extrae la capa acuosa con MTBE (385 mi) y se lavan las capas orgánicas combinadas con solución de LiCI al 5%. La capa orgánica se concentra bajo vacío y se diluye con heptano (780 mi). La solución se concentra hasta aproximadamente 500 mi y se agita la suspensión resultante 1 hora a temperatura ambiente. Se filtra el sólido, se lava con heptano (250 mi) y se seca a vacío a 35°C produciendo 103.29 g (rendimiento del 61%) de 1-(ácido carboxílico)-1 -(ferbutoxicarbonil)ciclopent-3-eno como un sólido blanco, p.f. = 119°C. RMN 1H (300 MHz, CDCI3), d 5.61 (s, 2H, CH = CH), 3.00 (s, 4H, 2CH2), 1.46 (s, 9H, C(CH3)3). IR: 3800-3000 (amplio, COOH), 1741 (C02R), 1705 (C02H), 1283), 1149 cm"1. Se disuelve 1-(ácido carboxílico)-1 -(ter-butoxicarbonil)ciclopent-3-eno (50 g, 236 mmol) en 850 mi de tolueno:MTBE 70:30 bajo nitrógeno en un matraz de 1 ! con agitación mecánica. Se agrega cloruro de tionilo (33.6 g, 283 mmol, 1.2 equiv.) a la mezcla de reacción agitada, manteniendo la temperatura a 23°C. Se enfría la solución de reacción hasta 0-5°C y se agrega trietilamina (32.2 g, 318 mmol, 1,35 equiv), gota a gota durante 30 minutos. Se calienta la mezcla de reacción hasta 23°C y se agita durante 1 hora. Se agrega la mezcla de reacción rápidamente gota a gota a agua desionizada (625 mi), manteniendo la temperatura a 20-25 °C. Se separan las capas y se lava la capa orgánica con 500 mi de solución de NaHC03 1M. La concentración de la capa orgánica aisla el 1 -(clorocarbonil)-1 -(fer-butoxicarbonil)ciclopent-3-eno como un líquido amarillo claro. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 5.61 (s, 2H, CH = CH), 3.04 (c aparente, J = 15.1 Hz, 4H, 2CH2), 1.49 (s, 9H, C(CH3)3). IR (película) 1796 (COCI), 1743 (C02R), 1274 , 1233, 1158 cm'1. Se agrega una solución de sulfato ácido de tetrabutilamonio (0.81 g, 2.4 mmol) en agua desionizada (700 mi) a azida de sodio (20.16 g, 310 mmol). Se agrega la solución que contiene 1 -(clorocarbonil)- -(fer-butoxicarbonil)ciclopent-3-eno en MTBE/tolueno a la solución de azida durante 45 minutos. Se agita la mezcla de reacción durante 3 horas a 23°C hasta que se consume el 1-(clorocarbonil)-l -(fer-butoxicarbonil)ciclopent-3-eno, como se confirma por análisis CG de la solución de reacción, Se separan las capas y se lava la capa orgánica con NaHCC>3 1 M (540 mi) y agua desionizada (540 mi, luego 270 mi). Se seca la capa orgánica con Na2S04 y se filtra. Se concentra la solución bajo vacío proporcionando 1-(acil azida)-1 -(ter-butox¡carbonil)ciclopent-3-eno como un aceite. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 5.58 (s, 2H, CH = CH), 2.96 (t aparente, J = 2.3 Hz, 4H, 2CH2), 1.46 (s, 9H, C(CH3)3). IR (película) 2137 (CON3), 1720 (C02R), 1246 (s, 1185, 1136 cm"1. Se agrega la solución de 1-(acil azida)-1 -(ter-butoxicarbonil)ciclopent-3-eno durante 1 hora a 110 mi de tolueno a 95°C. La emisión de gas nitrógeno se agrega a velocidad controlada bajo estas condiciones. Se destila MTBE de la reacción durante la adición. Se agita la reacción durante 1 hora a 95°C y se deja enfriar hasta 23°C durante la noche. La concentración del disolvente bajo vacío proporciona 1-(isocianato)-1 - (fer- butoxicarboniI)ciclopent- 3-eno como un aceite. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 5.67 (s, 2H, CH = CH), 3.01 (d, J = 15.6 Hz, 2H), 2.61 (d, J = 15.6 Hz, 2H), 1.50 (s, 9H, C(CH3)3). IR (película) 2258 (-NCO), 1732 (-C02R), 1157 cm-1. Se agrega t-butanol (35 g, 471 mmol) a una solución de t-butóxido potásico (1M en THF, 471 mi, 471 mmol) bajo nitrógeno. Se enfría la solución de reacción hasta 0-5°C y se agrega la solución de tolueno que contiene 1 -(isocianato)-l -(rer-butoxicarbonil)ciclopent-3-eno durante 60 minutos, manteniendo la temperatura a 0-10°C. La reacción se calienta hasta 23°C, se agita durante 2 horas y se ensaya por CG para determinar la desaparición del material de partida isocianato. Se agrega la mezcla de reacción a una mezcla de agua desionizada (1.2 I) y MTBE (1.2 I) a 15°C. La solución se agita durante 20 minutos y se separan las capas. Se lava la capa orgánica con una solución de salmuera al 20% (250 mi) y se separan las capas. Se transfiere la capa orgánica por medio de destilación, hasta aproximadamente 250 mi. Se agrega heptano (500 mi) y se concentra la solución hasta un volumen total de 250 mi. Se enfría la solución de suspensión resultante hasta 0°C, se agita durante 2 horas y se filtra. Se lava la torta del filtro con heptano frío (2 x 100 mi) y se seca a vacío produciendo 34.54 g (52% de rendimiento de 1-(ácido carboxílico)-1 -(íer-butoxicarbonil)ciclopent-3-eno) de -{ter-butoxicarbonilamino)-1-(fer-butoxicarbonil)-ciclopent-3-eno como un sólido blanco, p.f. 87-89 °C. RMN H (500 MHz, CDCI3) d 5.63 (s, 2H, CH = CH), 5.1 (s amplio, 1H, NH), 2.99 (d, J = 17.2 Hz, 2H), 2.57 (d, J = 16.0 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.44 (s, 9H). RMN 13C (CDCI3) d 173.3, 154.9, 127.7, 81.1, 64.5, 44.8, 28.3, 27.8. IR (KBr): 3451, 2981, 2932, 1712, 1489, 1369, 1154 cm"1. EM (FIA) m/e (intensidad relativa, %) 284.2 (M+ + 1, 56), 228.2 (73), 172.1 (97), 128.0 (100). Se agrega una solución de 1 -(fer-butoxicarbonilamino)- 1 -(fer-butoxicarbonil)-ciclopent-3-eno (20.00 g, 71 mmol) en 100 mi de EtOAc a una mezcla de sulfato ácido de tetrabutilamonio (4.08 g, 10 mmol, 0.17 equiv), monoperoxiftalato de magnesio hidratado (MMPA, 52.4 g, 4.76 % de oxígeno activo = 2.1 equiv) y agua desionizada (100 mi). Se agita la reacción con un agitador mecánico durante 19 horas. Se agrega una solución de sulfito sódico (18 g) en agua desionizada (100 I) a la mezcla de reacción durante 30 minutos. Se diluye la mezcla con 100 mi de EtOAc y se separan las capas. Se lava la capa orgánica con H2O desionizada (100 mi), NaOH 2N (2 x 100 mi) y H20 desionizada (2 x 100 mi). Se destila la capa orgánica a 75-90°C a presión atmosférica hasta que el volumen alcanza 40 mi. La solución se enfría hasta 75 °C y se agrega heptano caliente (120 mi). La solución se enfría hasta 65°C y se germina opcionalmente con el producto deseado. Se deja que la suspensión resultante se enfríe hasta temperatura ambiente y luego se enfría en un baño de hielo durante 1 hora. El producto se filtra y se lava con 80 mi de heptano:EtOAc 4:1 frío, luego se seca a vacío a 40°C obteniendo 15.45 g (rendimiento del 73%) del compuesto del título como un sólido blanco. El compuesto se puede purificar adicionalmente por recristalización de isopropanol:agua 2:1. p.f. 130-133 °C. RMN 1H (500 MHz, CDCI3) d 5.0 (s amplio, 1H), 3.58 (s, 2H), 2.41 (d, J = 15.3 Hz, 2H), 2.20 (d, J = 15.2 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.40 (s, 9H).
RMN 13C (CDCI3) d 171.3, 154.3, 81.2, 79.5, 62.8, 57.0, 38.6, 28.3, 27.7. IR (KBr): 3453, 2982, 2932, 1726, 1708, 1489, 1369, 1293, 1156, 840 crrf1. EM (FIA) m/e (intensidad relativa, %) 300.3 (M+ + 1, 65), 244.4 (68), 188.2 (100) 144.1 (99). Preparación 46 Diclorhidrato de (1 R.3R .S-dUmetilbencilamino'jpropano Se calienta (7^-a-metilbencilamina (98% ee, 121 g, 1 mol) hasta 100°C bajo nitrógeno. Se agrega dibromopropano (25.4 mi, 50.5 g, 250 mmol) gota a gota durante 70 min. Se calienta la mezcla durante otras 3 horas y luego se enfría hasta 80°C. Se agrega solución concentrada de NaOH (50%) (30 mi) gota a gota durante 10 minutos. Se agrega agua (30 mi) para disolver los sólidos y se deja enfriar la mezcla hasta temperatura ambiente durante 30 minutos. Se agrega TBE (100 mi). Se disuelve el precipitado añadiendo 100 mi de agua y se separan las capas. Se lava la capa orgánica con 50 mi de salmuera, se seca (Na2S04) y se concentra bajo vacío produciendo 126.0 g de aceite amarillo claro. Se destila el aceite bajo vacío a 70°C (temperatura en licuación), usando una columna de 12 pulgadas (30.48 cm) para eliminar el exceso de (R)- a-metilbencilamina. Se disuelve el residuo del recipiente (68 g de diamina cruda) en 1 I de /-PrOH en un matraz de 2 I con un agitador mecánico. Se agrega HCI concentrado (12 M, 45 mi, 540 mmol), gota a gota durante 10 minutos. Se agregan otros 100 mi de /'-PrOH para asegurar el mezclado completo de la suspensión espesa. Se agita la mezcla durante 90 minutos y se filtra. Se lava la torta con /-PrOH y se seca a vacío a 40°C obteniendo 64.32 g (72% rendimiento, basado en dibromopropano) del compuesto del título como un sólido blanco. R N 1H (500 MHz, DMSO-c/e) d 9.93 (s amplio, 2H), 9.47 (s amplio, 2H), 7.56 (d, J = 7.0 Hz, 4H), 7.37 (m, 6H), 4.27 (m, 2H), 2.84 (m, 2H) 2.48 (m, 2H), 2.1 (m, 2H), 1.56 (d, J = 6.7 Hz, 6H). Preparación 47 (1S)-1-(fer-Butoxicarbonilam¡no)-1-(fer-butoxicarboniO- ciclopent-4-en-3-ona Se disuelve diclorhidrato de (1R,3R)-1,3-di(metilbencilamino)propano (24.65 g, 69.3 mmol, Preparación 46) en 150 mi de agua con agitación. Se agregan a la solución 35 mi (175 mmol) de solución de NaOH 5 N, seguido por 150 mi de MTBE. Después de agitar 15 minutos, se separan las capas y se extrae la capa acuosa con 100 mi de MTBE. Se lavan las capas orgánicas combinadas con 100 mi de salmuera, se seca con Na2S04 y se concentra bajo vacío produciendo 18.06 g (92% rendimiento) de 1R,3R-di(metilbencilamino)-propano como un aceite incoloro. Se disuelven 20.59 g (73.5 mmol) de 1R, 3R-di(metilbencilamino)propano en 30 mi de cada uno de MTBE seco y THF, bajo flujo de N2 en un matraz de cuatro bocas de 500 mi con agitador superior. Se enfría la solución hasta -45°C y se agregan 59 mi (147 mmol) de solución de n-BuLi (2.5 M en hexanos) gota a gota durante 17 minutos. Se agita la solución amarillo claro durante 2 horas a -45 °C. Se agrega una solución de (1 S,3S,5R)-3-(?er-butoxicarbonilamino)-3-(rer-butoxicarbonil)-6-oxabiciclo[3.1.Ojhexano (10.00 g, 33.4 mmol) en 55 mi de THF seco, gota a gota durante 28 minutos, manteniendo la temperatura por debajo de -40°C. Se enjuaga el embudo de adición con otros 5 mi de THF. Se agita la mezcla de reacción durante 18 horas a -45 °C y luego se enfría rápidamente mediante la adición gota a gota de ácido sulfúrico acuoso 4 N (75 mi). Se retira el baño de enfriamiento después de completarse la adición. Se separan las capas y se extrae la capa acuosa con 50 mi de MTBE. Se lavan las capas orgánicas combinadas con 50 mi cada uno de agua y salmuera, se secan con a2S04 y se concentran bajo vacío produciendo 9.78 g de 578242 crudo como un sólido blanco. Se disuelve el sólido en 33 mi de MTBE caliente y se agrega heptano (66 mi) en varias porciones. Se deja que la solución agitada se enfríe hasta temperatura ambiente, luego se agita la mezcla durante 1 hora a 0°C. Se filtra el sólido, se lava con 2 x 10 mi de heptano:MTBE 2:1 frío y se seca a vacío durante 4 horas a 35°C proporcionando 8.52 g (rendimiento del 85%) de (1 S,3R)-1 -(fer-butoxicarbonilamino)-1-(fer-butoxicarbonil)-3-hidroxiciclopent-4-eno como un sólido blanco. p.f. 111-112 C. Ensayo de HPLC quirálico: 99.7% de ee. [a]D = +114 (c 1, MeOH) RMN 1H (500 MHz, CDCI3) d 6.1 (bs, 1H), 5.9 (bs, 1H), 5.55 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.8 (m, 1H), 4.44 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.87 (dd, J = 14.5, 7.5 Hz, 1H), 2.00 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.42 (s, 9H). IR (KBr): 3413, 2983, 1703, 1491, 1370, 1309, 1255, 1155, 1055 cm"1. EM (FIA) m/e (intensidad relativa, %) 300.3 (M+ + 1, 15), 226.2 (29), 170.1 (100), 126.1 (89), 108.3 (20). Se agrega 2,2,6,6-tetrametil-1 -piperidiniloxi (radical libre) (TEMPO) (0.84 g, 5.3 mmol) y KBr (0.63 g, 5.3 mmol, en 2 mi de agua) a una solución de (1 S,3R)-1 -(fer-butoxicarbonilamino)-1 -(rer-butoxicarbonil)-3-hidroxiciclopent-4-eno (20 g, 66.8 mmol) en MTBE (200 mi). Se enfría la mezcla de reacción hasta 0 °C y se agrega una solución de NaOCI (3.14%, 240 g, 100 mmol) que contenía NaHC03 (8.4 g), gota a gota, manteniendo la temperatura por debajo de 5°C. Se agita la reacción 1 hora a 0°C y se deja calentar hasta temperatura ambiente. Se separan las capas y se extrae la capa acuosa con MTBE (2 x 200 mi). Se lavan las capas orgánicas combinadas con 200 mi de solución de HCl 1N que contiene 2.21 g de KI seguido por solución al 10% de Na2S03 (200 mi). Se lava la capa orgánica con agua (2 x 200 mi) y se concentra hasta sequedad bajo vacío. Se disuelve el producto crudo en MTBE (60 mi) a 50 °C y se cristaliza mediante adición de heptano (200 mi) durante 1 hora. Se enfría la mezcla hasta 0°C durante 2 horas y luego se filtra. Se lava la torta del filtro con 100 mi de heptano:MTBE frío (65:35) y se seca a vacío produciendo 16.99 g (rendimiento del 89%) del compuesto del título como un sólido blanco. p.f. 116-18 °C. [<x]D = +123 (c 1, MeOH). RMN 1H (500 MHz, CDCI3) d 7.4 (s amplio, 1H), 6.32 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 5.6 (s amplio, 1H), 2.87 (d, J = 18.2 Hz, 1H), 2.9 (d, J = 18.2 Hz, 1H), 1.43 (s, 18H). RMN 13C (CDCI3) d 206.1, 170.2, 16. ,8, 154.9, 136.1, 84.5, 66.1, 46.6, 28.9, 28.4.
IR (KBr): 3419, 2983, 1722, 1487, 1730, 1300, 1259, 1151, 1012 cm" . EM (FIA) m/e (intensidad relativa, %) 254.2 (M+ + 1, 11), 242.3 (18), 228.2 (13), 186.1 (76), 143.2 (11), 242.3 (100). Preparación 48 Bromuro de 1 -(2-fer-butox¡-2-oxoet¡ntetrahidrotiofen¡o Br" Se agrega bromoacetato de t-butilo (2.44 I, 16.52 mol, 1 equiv) a una solución de tetrahidrotiofeno (2.19 I, 24.8 mol, 1.5 eq) en acetona (11.38 I), en un matraz de 22 I durante 30-60 minutos mientras se mantiene la temperatura de 15-25°C usando un baño de agua. Se agita la reacción durante 22 horas y se ensaya una muestra por RMN 1H para confirmar la finalización de la reacción. Se filtra el precipitado, se lava con acetona (2 I) y se seca a vacío durante 3 días a 28-33°C produciendo 4.328 Kg (rendimiento del 92.5 %) del compuesto del título. RMN H (500 MHz, DIVISO d-6) 5 4.40 (s, 1H), 3.51 (m, 2H), 3.48 (m, 2H), 2.23 (m, 2H), 2.13 (m, 2H), 1.42 (s, 9H). Preparación 49 Ester di-fer-butílico del ácido (1S,2S.5R,6R)-2-(fer- butoxicarbonilamino)-4-oxo-biciclo[3. .01hexano-2.6- dicarboxílico Se agrega KOtBu (42 mi, 42 mmol, solución 1 M en THF, 2.5 equiv) a una solución a 0 °C de bromuro de 1-(2-íer-butoxi-2-oxoetil)tetrahidrotiofenio (11.9 g, 42 mmol, 2.5 equiv., Preparación 48) en acetonitrilo (30 mi) bajo N2 durante 10 minutos manteniendo la temperatura por debajo de 5°C. Se agita la solución lechosa fría durante 1.5 horas. Se agrega trifluoroetanol (6.9 g, 69 mmol, 4.1 equiv) gota a gota. Se agrega una solución de (1 S)-1 -(fer-butoxicarbonilam¡no)-1 -(íer-butox¡carbonil)-ciclopent-4-en-3-ona (5 g, 16.8 mmol, Preparación 47) y trifluoroetanol (13.3 g, 132 mmol, 7.9 equiv) en acetonitrilo (20 mi) durante 5 minutos, manteniendo la temperatura a 3-5°C. Se agita la solución durante 4.5 horas a 0-5°C. Se agrega MTBE (155 mi) y H20 (80 mi) a la mezcla de reacción fría. Se separan las capas y la capa orgánica se lava con H20 (50 mi), luego con salmuera al 20% (50 mi). Se concentra la capa orgánica mediante destilación a presión atmosférica hasta aproximadamente 30 mi. Se agrega heptano (100 mi) y se concentra la solución. Se agrega más heptano según se necesita hasta que la temperatura del vapor del destilado alcanza 93°C. Se agrega THF (65 mi) proporcionando una solución del compuesto del título. Preparación 50 Ester di-fer-butílico del ácido (1 S,2S.5R.6R -2-(fer- butoxicarbonilam¡no)-4-oxo-bic¡clor3.1.0lhexano-2.6- dicarboxílico Se agregan 1.7 I de solución acuosa saturada de K2CO3 a una solución a 0°C de bromuro de 1 -(2-íer-butox¡-2-oxoetil)tetrahidrotiofenio (757 g, 2.67 mol, Preparación 48) en 2.2 I de CH2CI2, manteniendo la temperatura por debajo de 10°C. Después de agitar la mezcla bifásica 1.5 horas, se agregan 223 mi de solución de NaOH al 50% en varias porciones, manteniendo la temperatura por debajo de 5°C. Se agita la mezcla 3 horas y se filtra. Se enjuagan las sales con CH2CI2. Se separan las capas y se extrae la capa acuosa con 600 mi de CH2CI2. Se secan las capas orgánicas combinadas sobre K2C03 sólido y se concentran bajo vacío produciendo 533.3 g (rendimiento del 98%) de (2-fer-butoxi-2-oxoetil)tetrahidrotiofenio como un aceite amarillo pálido. Tras almacenar en el refrigerador, el aceite cristaliza produciendo un sólido blanquecino, p.f.48-50 °C. RMN 1H (500 MHz, CDCI3) d 3.12 (m, 2H), 3.00 (m, 2H), 2.85 (s, 1H), 2.41 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.38 (s, 9H). Se agregan 474 mi (6.5 mol, 10 equiv) de trifluoroetanol a una solución a 0 °C de (1S)-1-(íer-butoxicarbonilamino)-1-(íer-butoxicarbonil)-ciclopent-4-en-3-ona (194 g, 653 mmol) en 650 mi de CH2CI2. Se agrega una solución de (2-fer-butoxi-2-oxoeti!)tetrahidrotiofenio (396 g, 1.96 mol) en 325 mi de CH2CI2 gota a gota durante 40 minutos, manteniendo la temperatura por debajo de 10°C. Se retira el baño de hielo después de 1 hora. Se agrega agua desionizada (680 mi) y se separan las capas. Se extrae la capa acuosa con 400 mi de CH2CI2. Se lavan las capas orgánicas combinadas con 500 mi de salmuera, se secan con Na2S04 y se concentran bajo vacío obteniendo 587 g de un sólido oleoso de color ámbar. Se disuelve el sólido en 400 mi de CH2CI2 y se eluye a través de un tapón de gel de sílice de 1.6 kg usando hexanos:éter metil f-butílico:CH2CI2 5:1:1 como eluyente proporcionando a total de 13.2 I de eluyente. Se concentra el eluyente produciendo 398.7 g de un sólido blanco. Se disuelve el sólido en 3 I de hexanos:MTBE 70:30 a reflujo. Se deja que la solución se enfríe hasta temperatura ambiente durante la noche, luego se enfría en un baño de hielo durante 1 hora. Se filtra el sólido, se enjuaga con disolvente frío (aproximadamente 700 mi) y se seca a vacío a 35°C obteniendo 173 g (rendimiento del 64%) de éster di-fer-butílico del ácido (1 S,2S,5R,6R)-2-(íer-butoxicarbonilamino)-4-oxo-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico como un sólido blanco. p.f. 144-46 °C. [a]D = +30.5 (c 1 , CHCI3). RMN H (500 MHz, CDCI3) d 5.36 (d, 1H), 2.88 (m, 1H), 2.64 (dd, J = 5.2, 3.2 Hz, 1H), 2.37 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 2.23 (s amplio, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.43 (s, 18H). RMN 13C (125 MHz, CDCI3) d 206.2, 171.2, 168.5, 155.3, 83.4, 82.7, 80.7, 61.2, 43.2, 36.0, 34.328.4, 28.2, 28.0, 25.3. IR (CHCI3): 2982, 1744, 1719, 1485, 1394, 1309 ctn"1. E (ES + ) m/e (intensidad relativa, %) 412.2 (M+ + 1, 79), 356.2 (50), 300.1 (97), 276.1 (68), 244.1 (100). Análisis calculado para C2iH33N07 (411,29): C, 61.30; H, 8.08; N, 3.40. Encontrado: C, 61.32; H, 8.04; N, 3.51. Preparación 51 Ester di-fer-butílico del ácido (1 S.2S.4S.5R.6R)-2-f ter- butoxicarbonilam¡no)-4-hidroxi-bic¡clof3.1.OIhexano-2.6- dicarboxílico Se enfría la solución de la Preparación 49 hasta 0°C bajo nitrógeno y se agrega tri-sec-butilborohidruro de litio (L-Selectride™, 1 M en THF, 21 mi, 21 mmol) gota a gota. Se agita la mezcla de reacción durante 45 minutos a 0°C. Se agrega una solución de carbonato sódico 2M (31 mi) gota a gota, manteniendo la temperatura por debajo de 8°C. Se agrega una solución de H2O2 al 30% (7.15 g, 63 mmol) en 20 mi de agua, manteniendo la temperatura por debajo de 15°C. Después de agitar 10 minutos, se agregan MTBE (210 mi) y agua desionizada (100 mi). Se separan las capas y la capa orgánica se lava con solución saturada de Na2SC>3 (40 mi) y solución de NaHS04 1 M (40 mi). Se concentra la capa orgánica por destilación a presión atmosférica hasta un volumen de aproximadamente 90 mi. La destilación continúa y se agrega heptano para mantener un volumen constante. Cuando la temperatura de vapor del destilado alcanza 93°C, se enfría la solución hasta 70°C y se agregan 7 mi de THF. Se enfría la solución hasta 0°C y se agita durante 1 hora. Se filtra el sólido, se lava con heptano frío (10 mi) y se seca a vacío a 50°C obteniendo 4.68 g (rendimiento del 67%) de éster di-fer-butílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(fer-butoxicarbonilamino)-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico como un sólido blanco, p.f. 187-88 °C. RMN H (CDC , 500 MHz) d 5.31 (s amplio, 1H), 4.38 (d, JAB = 10.5 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 11.0, 6.0 Hz, 1H), 2.68 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 2.17 (m, 1H), 2.07 (m, 1H), 1.58 (m, J = 15.2 Hz, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.44 (s, 9H), 1.43 (s, 9H). RMN 13C (75 MHz, CDCI3) d 175.2, 170.5, 155, 83.2, 81.3, 80.1, 73.7 , 66.9 , 43.1, 36.0 , 34.4 , 29.3 , 28.3 , 28.1, 27.4, 22.1. IR (CHC ): 3445, 2982, 1714, 1485, 1361 crrf1. EM (ES + ) m/e (intensidad relativa, %) 414.2 ( + + 1, 58), 358.1 (75), 302.1 (78), 246.0 (100). [ ]D = -28.6 (c 1, MeOH). Preparación 52 Ácido (1 R.2S.4R.5 .6R)-2-(2'S-2'-(fer- butox¡carbonilam¡no)propionil)amino-4-fluoro- b i c¡ el o G3.1.01hexano-2.6-dicarboxílico Se agrega una solución de éster di-fer-butílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(íer-butoxicarbonilamino)-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (25.00 g, 60.5 mmol, Preparación 51) en CH2CI2 (230 mi) a una solución a -78°C de Deoxofluor™ (16.05 g, 72.6 mmol, 1.2 equiv) en CH2CI2 (105 mi) durante 2 h. Se agita la mezcla de reacción durante 1.5 horas y se agregan 1.66 g adicionales de Deoxofluor™. Se agita la solución 30 minutos y se deja calentar hasta -10°C. Se agrega una solución de NaHC03 saturado (105 mi) gota a gota durante 20 minutos, manteniendo la temperatura por debajo de 5°C. Se ajusta el pH de la capa acuosa hasta 7 añadiendo 160 mi de solución saturada de NaHC03. Se deja calentar la mezcla hasta temperatura ambiente y se separan las capas. Se extrae la capa acuosa con 100 mi de CH2CI2-Las capas orgánicas combinadas se lavan con 250 mi de salmuera, luego se secan con Na2S04. Se elimina el disolvente bajo vacío y se agrega heptano (75 mi) al producto crudo. Se calienta la mezcla resultante hasta 50°C hasta que se disuelven todos los sólidos y se agita a temperatura ambiente durante 24 horas. Se enfría la mezcla hasta 0°C en un baño de hielo y se filtra. Se enjuaga el producto con heptano frío y se seca a vacío produciendo 20.23 g (rendimiento del 80%) de éster di-íer-butílico del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(fer-butoxicarboniIamino)-4-fIuoro-biciclo[3. .0]hexano-2,6-dicarboxílico como un sólido blanco. p.f. 140-143 °C. [a]D = + 20.6 (c 1, CHCI3). RMN H (CDCI3, 500 Hz) d. 5.45 (dd, J H-F = 56, JH-H = 4.8 Hz, 1H), 5.28 (bs, 1H), 3.00 (m, 1H), 2.23 (bs, 1H), 2.11 (m, 1H), 2.08 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.45 (s, 9H), 1.43 (s, 9H), 1.37 (m, 1H). RMN 13C (CDCI3, 75 MHz) d 177.7, 170.5, 155.0, 94.4, 92.0, 82.2, 81.5, 80.2, 64.7, 37.7, 33.2, 29.7, 29.3, 28.3, 28.1, 27.8, 20.4.
EM (ES + ) m/e (intensidad relativa, %) 416.2 (M+ + 1, 66), 360.1 (67), 304.1 (100), 248.0 (60). IR (CHCI3): 3444, 2981, 1715, 1485, 1369 cm"1. Se agrega SOCI2 (21.29 g, 13.05 mi, 0.179 mol, 5 eq) a una solución de éster di-fer-butílico del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(fe/--butoxicarbonilamino)-4-fluoro-biciclo-[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxíiico (14.87 g, 0.036 mol) en EtOH (abs, 149 mi) gota a gota durante 10 minutos sin enfriar para producir una solución a reflujo suave. Se mantiene la solución a reflujo. Se elimina el disolvente de la reacción bajo vacío. Se disuelve el residuo en EtOAc (150 mi) y se agrega una solución de Na2C03 al 10% (75 mi) gota a gota durante 5-10 minutos con agitación. Se separan las capas y se extrae la capa acuosa con EtOAc (50 mi). Se lavan los extractos orgánicos combinados con salmuera (1 x 50 mi), se secan sobre Na2S04, se filtran y se concentra el producto, éster dietílico del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-amino-4-fluoro-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico, al vacío hasta un líquido espeso que solidifica en reposo (11.02 g). Se agrega N-metilmorfolina (22.44 mi, 204 mmol) a una solución de N-Boc-L-alanina (38.62 g, 204 mmol) en 396 mi de cloruro de metileno a -22°C bajo nitrógeno, seguido por la adición de cloroformiato de /so-butilo (26.48 mi, 204 mmol) gota a gota durante 15 minutos de tal modo que la temperatura de reacción no exceda -18°C. Se agita la suspensión clara resultante a -20°C durante 30 minutos, luego se agrega una solución del éster dietílico del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-amino-4-fluoro-biciclo[3. .0]hexano-2,6-dicarboxílico (49.46 g, 191 mmol) en 247 mi de cloruro de metileno durante 40 minutos de tal modo que la temperatura de reacción no exceda -16°C. Se retira la reacción del baño de enfriamiento y se agita a temperatura ambiente durante 70 minutos. Se agregan 408 mi de ácido clorhídrico 1 N, se agita durante 5 minutos y se separan las capas. Se lava la capa orgánica con bicarbonato sódico acuoso saturado (1 x 408 mi), se seca (Na2S04), se filtra y se concentra el producto, éster dietílico del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(2'S-2'-(fer-bu toxica rbonilamino)propionil)amino -4 -fluoro -biciclo[3. .0]hexano-2,6-dicarboxílico, al vacío hasta una espuma blanca (88.16 g). Se agregan 46.7 mi (93.4 mmol) de hidróxido sódico 2N a una solución de éster dietílico del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(2'S-2'-(íer-butoxicarbonilamino)propionil)amino-4-fluoro-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxíIico crudo (17.5 g, 37.3 mmol teórico) en 46.6 mi de tetrahidrofurano a temperatura ambiente. Se agita la mezcla bifásica vigorosamente a temperatura ambiente hasta homogeneidad, luego se agita durante otra hora (tres horas totales). Se diluye la mezcla con 46 mi de t-butil metil éter, luego se mezcla durante 10 minutos y se separan las capas. En un matraz separado, se agregan 93 mi de agua, luego 8.4 mi (101 mmol) de HCI concentrado. Opcionalmente, se agregan cristales germen (iniciadores) de ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(2'S-2'-(fer-bu toxica rbonilamino)pro pionil)-amino-4-fluoro-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico a la solución ácida, seguido por la capa acuosa de antes. Se agrega la capa acuosa lentamente al principio, de modo que se forma una suspensión moderadamente espesa. En este punto, aumenta la velocidad de adición (40 minutos de tiempo total de adición). Se enjuaga el embudo de adición con agua (16 mi). Se agita la suspensión resultante durante 2 horas, se filtra, se lava con agua (2 x 32 mi) y se seca a vacío a 45 °C hasta peso constante proporcionando 13.9 g (99%) del compuesto del título como un sólido blanco. Preparación 53 Ester dietílico del ácido (1 R.4S.5S.6S)-4-amino-2.2-dioxo-2A6- tia-biciclor3.1.01hexano-4.6-d¡carboxílico Se agrega cloruro de tionilo a una suspensión de ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxíIico (10 g, 42.5 mmol, patente de Estados Unidos No. 5,688,826) en 100 mi de etanol 2B a temperatura ambiente (15.5 mi, 212.6 mmol) gota a gota durante 20 minutos, seguido por enjuagado con 40 mi de etanol. Se calienta la suspensión a reflujo y se agita durante la noche. Se enfría la solución resultante hasta temperatura ambiente y se concentra hasta un residuo gelatinoso. Se agrega acetato de etilo (50 mi) al residuo, seguido por dilución con otros 94 mi de acetato de etilo. Se agrega lentamente carbonato sódico acuoso al 15% (70 mi) a la mezcla con agitación a mano proporcionando gradualmente la disolución, produciendo un pH final de 7.95. Se filtra y se separan las capas. Se extrae la capa acuosa con acetato de etilo (2 x 100 mi). Se lavan los extractos orgánicos combinados con salmuera (1 x 100 mi), se secan (MgS04), se filtran y concentran al vacio proporcionando el compuesto del título como un aceite amarillo apagado que solidifica hasta un sólido blanquecino (11.71 g, rendimiento del 95%). p.f. 80-83 °C. [a]25? -57.7 (c 1.04, CH30H). 500 MHz RMN 1H (CDCI3) d 4.31 (c, 2H, J = 7.0 Hz), 4.20 (m, 2H), 3.78 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 3.36 (dd, 1H, J = 4.0, 7.0 Hz), 2.93 (dd, 1H, J = 4.0, 7.0 Hz), 2.81 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.46 (t, 1H, J = 4.0), 1.34 (t, 3H, J = 7,0), 1.30 (t, 3H, J = 7.0). RMN 3C (125 MHz, CDCI3) d 171.68, 168.57, 63.26, 62.42, 59.96, 56.06, 43.78, 32.25, 22,49, 14,31, 14,25.
FTIR (ATR) 3364.15 (s), 1725.95 (s), 1304.91 (s), 1259.24 (s), 1200.84 (s), 1104.91 (s), 1022.99 (s), 896.45 (s), 851.21 (s) cm-1. Análisis calculado para C, 45.35; H, 5.88; N, 4.81. Encontrado: C, 45.02; H, 5.75; N, 4.82. Preparación 54 Éster dietílico del ácido (1 R.4S.5S.6S)-4-(2'S-4'-metiltio-2'- (fer-butoxicarboninaminobutanoninamino-2,2-dioxo-2As-tia- bicicloí3.1.0lhexano-4.6-dicarboxílico Se agrega N-metilmorfolina (14.4 mi, 130.9 mmol) a una solución transparente de N-Boc-L-metionina (32.64g, 130.9 mmol) en 110 mi de cloruro de metileno a -22°C bajo nitrógeno, seguido por la adición de cloroformiato de iso-butilo (17 mi, 130.9 mmol) gota a gota durante 7 minutos para mantener la temperatura de reacción a -22°C. Una vez completada la adición, se formó una suspensión clara resultante. Se agita a de -22 a -26°C durante 30 minutos. Se agrega una solución de éster dietílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.OJhexano- 4,6-dicarboxílico (35.65 g, 122.4 mmol, Preparación 53) en 107 mi de cloruro de metileno durante 15 minutos seguido por un enjuague de 36 mi de cloruro de metileno. Se retira la reacción del baño de enfriamiento y se agita a temperatura ambiente durante 70 minutos. Se agregan 51 mi de ácido clorhídrico 5 N a la solución, luego se separan las capas. Se vuelve a extraer la capa acuosa con cloruro de metileno (2 x 107 mi). Se lavan las capas orgánicas combinadas con bicarbonato sódico acuoso saturado (1 x 107 mi), se secan (MgS04), se filtran y se concentran al vacío proporcionando 65.82 g (rendimiento del 103% en peso del compuesto del título como una espuma blanca. [a]25D -12.7 (c 1.2, CH3OH). 500 MHz RMN 1H (CDCI3) d 7.53 (s, 1H), 5.06 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 4.34 - 4.20 (m, 6H), 3.41 (dd, 1H, J = 4.0, 7.0), 2.97 -2.89 (m, 2H), 2.64 - 2.59 (m, 2H, J = 4.0), 2.12 - 1.89 (m, 5H), 1.47 (s, 9H), 1.32 (t, 6H, J = 7.0). RMN 13C (125 MHz, CD3OD) d 172.53, 169.03, 167.88, 156.00, 80.62, 63.45, 62.56, 60.20, 55.33, 52.78, 42.81, 31.52, 31.38, 30.12, 28.49, 22.69, 15.44, 14.23, 14.143. FTIR (ATR) 3341.88 (w), 2979.38 (s), 1733.03 (s), 1674.92 (s), 1514.58 (s), 1315.80 (s), 1255.15 (s), 1161.47 (s), 1142.63 (s), 1025.68 (s), 854.85 (s), 763.53 (s) cm-1. Preparación 55 Sal monosódica del ácido (1 R.4S,5S.6S)-4-(2'S-4'-metiltio-2'- (fer-butoxicarboninaminobutanon¡namino-2,2-dioxo-2A6-tia- biciclo[3.1.0lhexano-4,6-dicarboxílico Se agregan 141 mi (282 mmol) de hidróxido sódico 2N a una solución de éster dietílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S-4'-metiltio-2'-(fer-butoxicarbonil)aminobutanonil)-amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (58.95 g, 112.8 mmol teóricos, Preparación 54) en 141 mi de tetrahidrofurano a temperatura ambiente. Se agita la mezcla vigorosamente a temperatura ambiente durante dos minutosy luego se separan las capas. Se diluye adicionalmente la capa acuosa con 141 mi de agua y se agrega ácido clorhídrico concentrado, gota a gota para reducir el pH hasta 4.46. Se agita durante 10 minutos para obtener una suspensión clara. Se agrega más ácido clorhídrico concentrado a la suspensión para reducir el pH hasta 1,4(se usan un total de 17 mi de HCI conc, 204 mmol). Después de agitar durante 2 horas, se filtra la suspensión. Se lava la torta con agua (2 x 118 m!) y se seca de nuevo la torta al vacío a 45°C durante 16 horas y a 58°C durante 5 horas proporcionando 52.96 g (rendimiento del 96% en peso del compuesto del título como un sólido blanco. p.f. (descomposición) 258°C. [CC]25D - 25.2 (c 1.03, ?2?). 500 MHz RMN H (D20) d 4.07 - 4.01 (m, 2H), 3.45 - 3.43 (m, 1H), 3.11 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.85 (m, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.47 - 2.35 (m, 3H), 1.96 - 1,90 (m, 4H), 1.78 - 1.72 (m, 1H), 1.28 (s, 9H). RMN 3C (125 MHz, CD30D) d 174.45, 173.58, 172.80, 157.46, 81.71, 61.41, 55.04, 53.24, 42,29, 31.71, 30.85, 29.41 , 27.79, 23.65, 14.41. FTIR (ATR) 3287.62 (s), 1698.00 (s), 1528.91 (s), 1327.36 (s), 1283.74 (s), 1245.90 (s), 1174.81 (s), 1109.06 (s), 1053.05 (s), 874.27 (s), 808.95 (s) cm-1. Preparación 56 Ácido (1 R.4S,5S,6S)-4-(2'S-4'-metiltio-2'-(fer- butoxicarbonil)aminobutanoninamino-2,2-dioxo-2A -tia- biciclor3.1.01hexano-4,6-dicarboxilico Se agregan 397 ml (795 mmol) de hidróxido sódico 2N a una solución de éster dietílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S-4'-metiltio-2'-(fer-butoxicarboniI)aminobutanon¡l)-amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxíIico 166.15 g, 318 mmol, Preparación 54) en 480 ml de tetrahidrofurano a temperatura ambiente. Se agita vigorosamente la mezcla a temperatura ambiente durante dos minutos, momento en el que la reacción se hace homogénea formando una solución amarillo/verde apagado transparente. Se agita durante otras dos horas a temperatura ambiente, diluye la solución con 480 mi de éter íer-butil metílico y luego se separan las capas. Se agrega la capa acuosa gota a gota a una solución de ácido clorhídrico concentrado (71.5 mi, 858 mmol) en agua (960 mi). Se agrega acetato de etilo (500 mi) seguido por el resto de la capa acuosa, resultando una emulsión y diluyendo además con acetato de etilo (460 mi). Se agita la emulsión durante 40 minutos, se filtra y se lava con agua (2 x 250 mi). Se separan las capas del filtrado y se vuelve a extraer la capa acuosa con acetato de etilo (500 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavan con salmuera (75 mi), se secan (MgS04), se filtran y concentran al vacío proporcionando 125.26 g (rendimiento del 84% corregidodel compuesto del título como una espuma blanca. Preparación 57 2-Bromo-2-fluoro-2-(3-oxociclopentil)acetato de etilo Se agregan 8.45 mi (50.4 mmol) de cloruro de trietilsililo a una suspensión de 2.99 g de Zn activado (45.8 mmol) en acetonitrilo anhidro (100 mi) a -20°C y se agita la mezcla durante 5 minutos. Se agregan 8.0 mi (57.3 mmol) de 2,2-dibromo-2-fluoracetato de etilo y se agita la mezcla durante 90 minutos a -20°C. Se agregan 1.86 mi (22.9 mmol) de 2-ciclopenten-1 -ona y se agita la mezcla de reacción durante la noche, dejando que la temperatura se eleve lentamente hasta temperatura ambiente. Se agrega HCI 1N (125 mi) y EtOAc (100 mi). Se lava la capa orgánica con NaHC03 saturado (2 x 150 mi), agua (2x150 mi) y salmuera (2x150 mi), se seca sobre MgS04 anhidro, se filtra y se concentra bajo presión reducida. Se purifica el residuo por cromatografía en columna usando EtOAc/hexano (1:8) como eluyente produciendo el compuesto del título (5.36 g, rendimiento total 88%) como un aceite incoloro como una mezcla de diastereoisómeros. RMN 1H (300 MHz, CDCI3): 1.34-1.41 (m, 6H), 1.91-1.95 (m, 1H), 2.04-2.68 (m, 11H), 3.12-3.31 (m, 2H), 4.33-4.43 (m, 4H). Activación con Zn: Se agregan 10 mi de HCI concentrado a una suspensión de 100 g de polvo de Zn en agua (900 mi). Se agita la mezcla durante 20 minutos a temperatura ambiente. Se decanta el agua y se lava el residuo con agua (3 x 250 mi), acetona (3 x 150 mi) y éter (2 x 100 mi). Se seca el residuo bajo presión reducida a 35°C durante la noche. Preparación 58 (1f?S, 5RS. 6F?S)-6-Fluoro-2-oxobiciclor3. .01hexano-6- carboxilato de etilo Se agregan 13.0 mi (75.0 mmol) de etildiisopropilamina a una solución de 2.0 g (7.5 mmol) de 2-bromo-2-fluoro-2-(3-oxociclopentil)acetato de etilo (Preparación 57) en DMF (8 mi), a 0°C y se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente. Se agrega una solución de HCI 1N (20 mi), agua (15 mi) y EtOAc (75 mi). Se extrae la capa orgánica, se lava con NaHC03 saturado (2 x 100 mi), agua (2 x 100 mi) y salmuera (2 x 100 mi), se seca sobre MgS04 anhidro, se filtra y se concentra bajo presión reducida. Se purifica el residuo por cromatografía en columna usando EtOAc/hexano (1:4) como eluyente produciendo el compuesto del título (1.17 g, rendimiento del 84%) como una mezcla trans:cis 5:1 de isómeros como un aceite incoloro. R N 1H (300 MHz, CDCI3): 1.33 (t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.19-2.34 (m, 3H), 2.41-2.49 (m, 1H), 2.59 (d, 1H, J = 6.6 Hz), 2.71-2.76 (m, 1H), 4.29 (c, 2H, J = 7.1 Hz). Preparación 59 Ácido H RS,2Sff.5ffS.6ffS)-2-espiro-5'-hidantoin-6-fluoro- b i ciclo [3.1.01hexano-6-carboxíl¡co Se agita una mezcla de (1 f?S,5RS,6/ S)-6-fluoro-2-oxobiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxilato de etilo (0.1 g, 0.54 mmol, Preparación 58) y NaOH 1N (0.55 mi, 0.55 mmol) en EtOH (1 mi) durante 10 minutos con enfriamiento en hielo. Se agrega HCI 1 N a la mezcla gota a gota hasta que el pH es 1 y se divide la mezcla resultante entre EtOAc y salmuera. La fase acuosa se extrae con EtOAc dos veces y se secan las capas orgánicas combinadas sobre MgS04 y luego se concentran bajo presión reducida. Se agita una mezcla del residuo, (NH4)2C03 (0.31 g, 3.2 mmol) y KCN (0.11 g, 1.62 mmol) en EtOH y agua (1:1) (2 mi) a 60°C durante la noche. Se enfría en un baño de hielo y se acidifica la mezcla por tratamiento con KHS04 1N. Se retira el disolvente bajo presión reducida y se vuelve a disolver el residuo en MeOH, se filtra y se concentra al vacío. El producto crudo se puede usar sin otra purificación. Preparación 60 C\R. 2S. 5R. 6R)-Dietil-2-(2'R-fer-butoxicarbonilamino- propionilamirto)-6-fluoro-biciclof 3.1.OIhexano-2.6- dicarboxilato v (1S. 2R. 5S. 6S)-Dietil-2-(2'R-fer- butoxicarbonilamino-propionilamino)-6-fluoro- biciclo[3.1.0lhexano-2,6-dicarboxilato Isómero A Isómero B Se agregan 1.59 g (5.0 mmol) de Ba(OH)2 a una solución de 0.32 g (1.5 mmol) de ácido (1R*, 2S*,5f?*,6f?*)-2-espiro-5'- hidantoin-6-fluoro-biciclo[3.1.0]hexano-6-carboxílico (Preparación 59) en agua (10 mi) y se agita la mezcla a 105°C durante la noche. Se acidifica la solución hasta pH 1 con HCI 1N a 0°C, luego se concentra bajo presión reducida. Se vuelve a disolver el residuo y se concentra bajo presión reducida con EtOH absoluto varias veces hasta que el sólido está perfectamente seco. Se agregan 0..37 mi (5.,0 mmol) de SOCI2 al residuo disuelto en EtOH absoluto (20 mi) a 0°C, luego se agita la mezcla a reflujo durante 5 horas. Se basifica la solución con NaHC03 saturado y se agrega EtOAc (25 mi). Se separa la capa orgánica y se extrae la capa acuosa con más EtOAc (2x25 mi). Se secan las capas orgánicas combinadas sobre MgS04 anhidro, se filtran y se concentran a presión reducida. Se disuelve el residuo en 20 mi de una mezcla de DCM-DMF (4:1), 0.73 g (1.9 mmol) de HATU, 0.26 g (1.9 mmol) de HoAt, 0.35 g (1.8 mmol) de L-Ala. Se agregan 2.7 mi (15.3 mmol) de diisopropiletilamina y se agita la mezcla en Ar durante la noche. Se agrega DCM (15 mi), se separa y se lava con NaHC03 saturado (2 x 25 mi), agua (2 x 25 mi) y salmuera (2 x 25 mi). Se lava la capa acuosa con MgS04 anhidro, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo por cromatografía en columna usando EtOAc/hexano (1:2) como eluyente produciendo el compuesto del título (0.33 g, rendimiento total del 51%) como una mezcla 1:1 de diastereoisómeros como un aceite incoloro. La mezcla de diastereoisómeros se separó por CLAR quiral usando el siguiente procedimiento analítico: Chiralpak AD 10m, 4,6 x 250mm; Eluyente: IPA al 10% en Hexano; Velocidad de flujo: 1.0 ml/min; UV: 215 nm. Tiempo de retención del Isómero A = 5.9 mln. Tiempo de retención del Isómero B = 9.2 min. Isómero A: (1f?, 2S, 5R, 6R, 2'R)-Dietil-2-(2'-íer-bu toxica rbonilamino-pro pionilamino)-6-f luoro -bi ciclo [3.1.0]hexano-2,6-dicarboxilato RMN H (300 MHz, CDCI3): 1.18 (t, 3H, J = 7.1 Hz), 1.23 (t, 1H, J = 7.1 Hz), 1.36 (s, 9H), 1.56-1.68 (m, 1H), 2.03-2.11 (m, 2H), 2.21-2.31 (m, 1H), 2.37-2.45 (m, 1H), 2.61-2.63 (m, 1H), 4.09-4.16 (m, 5H), 5.10 (bd, 1H, J = 6.6 Hz), 7.11 (bs, 1H). RMN 13C (75 MHz, CDCI3): 13.9, 14.0, 17.7, 24.9 (d, J = 1.0 Hz), 28.1, 31.5 (d, J = 10.9 Hz), 34.9 (d, J = 9.4 Hz), 36.4 (d, J = 8.8 Hz), 49.1, 61.5, 61.8, 67.4, 77.2, 81.5 (d, J = 242.6 Hz), 155.4, 168.6 (d, J = 25.1 Hz), 171.8 y 172.7 ppm. Isómero B: (1S, 2R, 5S, 6S, 2'R)-Dietil-2-(2'-fer-bu toxica rbonilamino-pro pionilamino)-6-f luoro -biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxilato RMN 1H (300 MHz, CDCI3): 1.13 (t, 3H, J = 7.1 Hz), 1.18 (t, 1H, J = 7.1 Hz), 1.31 (s, 9H), 1.51-1.60 (m, 1H), 1.98-2.07 (m, 2H), 2.15-2.22 (m, 1H), 2.26-2.39 (m, 1H), 2.55-2.60 (m, 1H), 4.07-4.12 (m, 5H), 5.20 (bs, 1H), 7.22 (bs, 1H). RMN 13C (75 Hz, CDCI3): 13.7, 13.8, 18.0, 24.7, 28.0, 31.4 (d, J = 10.9 Hz), 34.5 (d, J = 8.9 Hz), 36.3 (d, J = 9.4 Hz), 49.1, 61.4, 61.7, 67.3, 77.2, 81.4 (d, J = 242.6 Hz), 155.2, 168.5 (d, J = 25.1 Hz), 171.7 y 172.8 ppm. Preparación 61 Ácido (1R. 2S, 5R. 6ff)-2-amino-6-fluoro-biciclor3. .Olhexano- 2,6-dicarboxílico Se mantiene a reflujo una solución de 30 mg (0.07 mmol) de Isómero A de la Preparación 60 en HCI 6N (2 mi) durante la noche. Se elimina el disolvente bajo presión reducida, se lava el residuo con éter, se disuelve en MeOH (1 mi) y se agrega óxido de propileno (2 mi). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante la noche. Se decanta el disolvente, se lava el residuo con éter y se seca con una corriente de Ar produciendo el compuesto del título (12 mg, 85%) como un sólido blanco. [cc]D = -25.0 (c=0.80 mg/ml, H20). Preparación 62 Ácido (1S. 2R. 5S. 6S)-2-Amino-6-fluoro-bic¡clor3.1.Olhexano- 2.6-dicarboxílico Comenzando con una solución del Isómero B de la Preparación 60, se prepara el compuesto del título esencialmente como en la Preparación 61. [<x]D = 21.7 (c=0.46 mg/ml, HzO). Preparación 63 (6S'¾-4-Tiabiciclof3.1.01hex-2-eno-6-carboxilato de etilo Se acopla un matraz de tres bocas y cinco litros con un agitador, un termopar y un tubo de adición de teflón y se carga una entrada de N2 con 2000 mi de tiofeno (d = 1.05g / mi, 25.0 mol al comienzo y aumentando hasta 45 mol con adición de solución de diazoacetato de etilo en tiofeno, 17.1 equiv. basados en la adición total de diazoacetato de etilo y sin corregir para la potencia de EDA, 19.0 equiv. basados en la potencia corregida de diazoacetato de etilo. Se agrega a esto, bajo N2, 0.968 g de Rh2(octanoato)4 (1.24 mmoles, 0.0472 % en mol basado en los g de diazoacetato de etilo sin corregir para la potencia, 0.052 % en mol basado en los moles de diazoacetato de etilo puro, Johnson Mathey. Lote No. 059255001). Se calienta la suspensión a 46°C y se agita a 46°C durante 10 minutos para hacer que la disolución sea una solución verde. Se agrega a la solución, por una bomba de desplazamiento positivo, una solución de 300 g de diazoacetato de etilo (90% puro, 2.63 moles, 2.37 moles pura, 1.00 equiv., Aldrich: Lote No. 17603PI) disuelto en 1600 mi de tiofeno. La velocidad de adición es tal que el tiempo de adición total es de 8 horas; la velocidad lenta de adición suprime la formación de esteres etílicos de maleato y fumarato. Cuando no queda diazoacetato de etilo (aproximadamente treinta minutos), se enfría la reacción color ámbar oscuro (3.985 g) hasta 23°C. Se divide la mezcla de reacción en porciones y la porción mayor (3.240 g de 3.985 g total = 81.3%) se concentra directamente a un aceite. El producto crudo se hace pasar a través de un aparato de destilación por medio de láminas de limpieza a 1,5 torr (200 Pa) y 23°C para desgasificar el producto y eliminar la cantidad residual de tiofeno. El producto se destila entonces a 120°C y 1.3 torr. El compuesto del título (amarillo apagado) se recolecta en dos fracciones, 155.0 g y 32.2 g. El análisis por CLAR determina una potencia de 78% y 76% para los dos lotes, respectivamente. La cristalización del destilado anterior se lleva a cabo por disolución en metanol (2 mi por 1 g de destilado) y enfriamiento hasta -10°C, momento en el que la solución se germina opcionalmente si no se observa crecimiento de cristales. Una vez que ha comenzado el crecimiento del cristal, la mezcla se enfría adicionalmente hasta -45°C y se agita durante 2 a 3 horas, se filtra y se lava con metanol frío (-45°C) (1 x 1 mi por 1 g de destilado). El material se seca al vacío a 24°C proporcionando el compuesto del título como un sólido de blanco a blanquecino con una recuperación del 80-85% y una potencia >98%. Preparación 64 (4S.6S)-4-h¡droxi-2-tiabiciclor3.1.01hexano-6-carboxilato de etilo Se agrega complejo de borano-THF (98 mi, 98 mmol) durante 15-20 minutos a una solución de (6S)-4-tiabiciclo[3.1.0]hex-2-eno-6-carbox¡lato de etilo (22.2 g, 131 mmol) en 136 mi de tetrahidrofurano bajo nitrógeno a 0°C. Después de agitar a 0°C durante 30 minutos, se deja que la reacción se caliente hasta 15°C y hasta finalizar la agitación por CLAR (1.5-2 horas). La reacción se enfría hasta 0°C y se transfiere durante 10-15 minutos a 111 mi de una solución tampón pH 7 1N previamente enfriada (0°C) mientras se mantiene la temperatura a 0°C. Se agrega a la mezcla perborato potásico monohidrato (15.6 g, 157 mmol) en forma de sólido en cinco porciones de tal forma que la temperatura se mantiene por debajo de 20°C. Se deja que la solución se caliente hasta temperatura ambiente y se agita durante 1 hora seguido por la adición de 222 mi de agua. Después de agitar durante 2 horas, se enfrían rápidamente los peróxidos añadiendo tiosulfato sódico pentahidratado (9.7 g) disuelto en 24 mi de agua, seguido por agitación durante 10 minutos. La mezcla se extrae con acetato de etilo (2 x 222 mi). Se lavan los extractos orgánicos combinados con bicarbonato sódico acuoso saturado (1 x 222 mi) seguido por salmuera (1 x 222 mi) y concentración al vacío hasta sequedad. El producto crudo se disuelve en 1 ,2-dlcloroetano (1 mi por 1 g de aceite crudo) y se carga en una columna de gel de sílice (4 g de gel de sílice por 1 g de aceite crudo suspendido y compactado en acetato de etilo al 15%-heptano). La columna se eluye con acetato de etilo al 15% -heptano hasta que el producto es visible por CCF, momento en el que el disolvente se cambia a acetato de etilo al 50% -heptano. Se combinan todas las fracciones que contienen el producto del título y se concentran al vacío hasta un aceite. El rendimiento total está en el intervalo de 55-65%. Preparación 65 (6S)-4-oxo-2-Tiabiciclof3.1.Olhexano-6-carboxilato de etilo Se agrega lentamente una solución de anhídrido trifluoroacético (33.2 mi, 235 mmol) en 73 mi de cloruro de metileno durante 30 minutos (temperatura mantenida por debajo de -66°C) a una solución de dimetilsulfóxido (33.4 mi, 471 mmol) en 194 mi de cloruro de metileno a -70°C. Después de agitar durante 20 minutos, se agrega durante 60 minutos una solución de (4S,6S)-4-hidroxi-2- tiabiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxilato de etilo (34.1 g, 181 mmol) en 194 mi de cloruro de metileno, de modo que la temperatura se mantenga por debajo de -60°C. Después de agitar durante 1 hora, se trata la reacción con trietilamina (75.7 mi, 543 mmol) durante 35 minutos tal que la temperatura permanece por debajo de -50°C. Se deja agitando la reacción durante una hora más, momento en el que se retira el baño de enfriamiento y se agregan 400 mi de ácido clorhídrico 2 N. Tras calentar hasta 0°C, se separan las capas y se lava la capa orgánica con ácido clorhídrico 2N (1x 300 mi), bicarbonato sódico acuoso 1N (1 x 670 mi) y agua (1 x 300 mi) seguido por secado sobre sulfato sódico, filtrado y concentrado al vacío hasta un aceite rojo que solidifica en reposo. El producto crudo se aplica en una almohadilla de gel de sílice (2 g por 1 g de alcohol de partida compactado con cloruro de metileno) y se eluye con cloruro de metileno (200-300 mi). Se recolectan todas las fracciones que contienen producto y se concentran proporcionando el compuesto del título como un sólido naranja/marrón de acetona. Los rendimientos típicos corregidos están en el intervalo de 85-90%. Preparación 66 (6S.11 S)-8,10-dioxo-2-tiaesp¡rorbiciclor3.1.OIhexano-4,5'- imidazolidinl-6-carboxílico Se combinan carbonato amónico (2.46 g, 25.6 mmol) y cianuro potásico (0.817 mg, 12.5 mmol) en 19.9 mi de metanol y se dejan agitando durante 30 minutos. La mezcla se trata con una solución de (6S)-4-oxo-2-tiabiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxilato de etilo acetona (2.39 g, 12.8 mmol) en 19.9 mi de metanol y la reacción se calienta hasta 30°C y se agita durante 23 horas. Se evaporan los volátiles y se disuelve el residuo en hidróxido sódico 2.75N (13.1 mi) y se agita durante 1 hora. Después de diluir con 13.1 mi de agua, se reduce el pH hasta 3.1 con ácido clorhídrico concentrado y se siembra opcionalmente con hidantoina acida de (6S, 11 f?)-8 , 10-dioxo-2-tiaespiro[biciclo[3. .0]hexano-4,5'-imidazolidin]-6-carboxílico. Se reduce el pH hasta 1.0 y se enfría la suspensión hasta 0°C y se agita durante 1.25 horas. Se recolecta el sólido color castaño, se lava con agua fría (2.3 mi y 0.8 mi) y se seca durante la noche al vacío a 40°C produciendo 2.00 g (55% corregido en pureza) de ácido (6S,11 f?)-8, 10-dioxo-2-tiaespiro[biciclo[3.1.0]hexano-4,5'-imidazolidin]-6-carboxilico. Se diluye el filtrado con 50 mi de acetato de etilo y se trata con 18 g de cloruro sódico. Después de agitar durante 15 minutos, se separan las capas y se lava adicionalmente la capa acuosa con acetato de etilo (2 x 50 mi). Los extractos orgánicos combinados se secan con sulfato sódico, se filtran y se concentran al vacío hasta una suspensión (aproximadamente 5 mi) a la que se agrega éter fer-butil metílico (25 mi) seguido por agitación durante la noche. El sólido se recolecta, se lava con éter íer-butil metílico y se seca al vacío a 40°C durante 2 horas proporcionando 0.64 g (10% corregido en pureza) del compuesto del título como una mezcla 1:1 de hidantoínas diastereoisoméricas. Este segundo cultivo de hidantoínas se combina con el primer cultivo y se somete a la etapa siguiente. Resolución Se agrega (R)-fenilglicinol (9.0 g, 65.7 mmol) a una suspensión de ácido racémico (15 g, 65.7 mmol, aproximadamente relación 6:1 de hidantoínas diastereoisoméricas) en 300 mi de etanol y 75 mi de agua. La mezcla se calienta hasta aproximadamente 80°C para efectuar la disolución. Se deja que la solución oscura se enfríe lentamente y se observa precipitación a 40-45°C. Se enfría adicionalmente la suspensión a 0°C y se mantiene durante 1-1.5 horas. Se recolecta el sólido, se lava (con agitación) con etanohagua 4:1 (1 x 60 mi, previamente enfriado hasta 0°C) y se seca al vacío a 65°C durante 12-24 horas. Los rendimientos típicos de la sal resuelta están en el intervalo de 37-45% con >98% de y >98% ee observados. La sal resuelta se disuelve en 6 volúmenes (mi por g) de agua, seguido por tratamiento con 1.1 equivalentes de HCI concentrado. La suspensión se enfría hasta 0°C y se deja agitando durante 1 hora, seguido por filtración, enjuagado con 1 volumen de agua fría y secado al vacío a 60°C. Los rendimientos típicos del compuesto del título son >90 % con % de y % ee >99%. Preparación 67 Ácido (6S.11S)-2.2.8.10-tetraoxo-2- tiaespirofbicicloí3.1.01hexano-4.5'-imidazolidin1-6-carboxilico Se agrega ácido (6S, 11 S)-8, 10-dioxo-2-t¡aespiro[biciclo[3.1.0]hexano-4,5'-imidazolidin]-6-carboxíIico (3.4 g, 14.9 mmol) a una mezcla de 6.8 mi de agua, 0.7 mi de hidróxido sódico acuoso al 50% y 186 mg (0.74 mmol) de ácido túngstico o wolfrámico. La solución resultante se calienta hasta 50°C y se trata con peróxido de hidrógeno al 35% (7.7 mi, 74.5 mmol) lentamente durante 66 minutos. Se deja agitando la reacción después de esto a 47-48°C durante 5 horas, seguido por enfriamiento hasta 0°C, filtrado sobre una almohadilla delgada de Celite y enjuagado con agua fría (1 x 2 mi). El filtrado se calienta hasta 50°C y se trata con ácido clorhídrico concentrado hasta pH = 1.5. La suspensión se deja enfriar hasta temperatura ambiente y se agita durante la noche. Tras enfriar hasta 0°C, la suspensión se filtra, se lava con agua fría (2 x 2 mi) y se seca a vacío a 55°C hasta peso constante, proporcionando 3.19 g (82%) del compuesto del título como un sólido blanco: [a]25D -48,6 (c, 1.19, 1 N NaOH). p.f.275 °C (gris), 295 °C (marrón). RMN 1H 500 MHz (DMSO-c6) d 13.15 (s amplio, 1H), 10.99 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 3.85 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 3.74 (dd, 1H, J = 7.0, 4.0 Hz), 3.03 (d, 1H, J = 15.5 Hz), 2.80 (dd, 1H, 7.0, 4.0 Hz), 2.39 (t, 1H, J = 4.0 Hz). RMN 3C (125 MHz, DMSO-cfa) d 174.39, 169.87, 156.35, 62.67, 52.59, 44.16, 31.69, 21.92; FTIR (KBr) 3317 (s), 3250 (s), 3211 (s), 3086 (w), 1791 (s), 1742 (s), 1713 (s), 1327 (s), 1192 (s), 1140 (s) cm"1. Análisis calculado para C8H8N206S: C, 36.93; H, 3.10; N, 10.77. Encontrado: C, 36.76; H, 3.07; N, 10.60. Preparación 68 Ácido (1f?.4S.5S,6S 4-r(2'SM2'-amino)-propion¡llamino-(2- sulfonilbic¡clof3.1.01hexano)-4.6-dicarboxíl¡co agrega a un reactor de Parr de acero inoxidable, hidantoína de ácido (6S,11 S)-2,2,8,10-tetraoxo-2- tiaesp¡ro[bic¡clo[3.1.0Jhexano-4,5'-imidazolidin]-6-carboxílico(2.50 g, 9.60 mmol) e hidróxido sódico 2N (24.0 mi, 48.0 mmol). Después se calienta la mezcla hasta 95°C y se agita durante 21 horas, se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente y se trata con carbón activado (1.25 g). La mezcla se filtra a través de Celite y el filtrado se concentra hasta 17 g y se diluye con H20 proporcionando un peso de 24 g. Se reduce el pH hasta 6.5 usando HCI concentrado y se calienta la mezcla hasta 62°C. Después de reducir el pH hasta 2.5 usando HCI concentrado, se produce la cristalización. La suspensión se deja enfriar hasta 30°C antes de ajustar el pH a 1.7 y se reduce su temperatura hasta 5°C. Después se mantiene la suspensión a esta temperatura durante18 horas, se recolecta el sólido y se lava con H20 frío (2 x 2.9 mi). Se seca el sólido blanco al vacío a 45°C proporcionando el compuesto del título (1.81 g, 80%). El compuesto del título se suspende en 10 volúmenes de agua y se calienta hasta 85°C durante 3-4 horas, se enfría hasta temperatura ambiente, se agita durante 2-3 horas, se filtra y se lava con agua (1 x 1 volúmenes). La recuperación es >95%. Preparación 69 (6S)-2-Oxobic¡clor3. .01hexano-6-carboxilato de etilo Se agregan 87.4 mi (585 mmol) de 1,8-diazab¡ciclo[5,4,0]undec-7-eno gota a gota durante 15 minutos a una suspensión de bromuro de (etoxicarbonilmetil)dimetilsulfonio (134 g, 585 mmol) en 486 mi de acetonitrilo a temperatura ambiente. Después de agitar durante 1 hora, se trata la mezcla amarilla con 40 g (487 mmol) de^ 2-ciclopenten-1 -ona durante 10 minutos. Se deja la mezcla agitando durante la noche, momento en el que se agregan 480 mi de éter fer-butil metílico, seguido por lavado con ácido clorhídrico 1N (1 x 240 mi). Se lava la capa acuosa con éter fer-butil metílico (1 x 240 mi). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (1 x 400 mi), se secaron (MgS04), se filtraron y se concentraron al vacío proporcionando el (6S)-2-oxobiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxiíato de etilo crudo como un sólido naranja (84.8 g). El material crudo se puede purificar por destilación (~138°C, 10 mm Hg (1333 Pa)), seguido por suspensión del destilado solidificado en heptano, filtración y secado. Preparación 70 Ácido (±) (6SV2-oxobiciclor3.1.OIhexano-6-carboxílico Se agregan 89 mi (178 mmol) de hidróxido sódico 2N a una solución de (6S)-2-oxobiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxilato de etilo crudo (30.2 g, 180 mmol, no corregido) en 30 mi de etanol a temperatura ambiente. Tras agitar durante 80 minutos, se lava la mezcla de reacción con éter íer-butil metílico (1 x 90 mi) y se trata la capa acuosa con ácido clorhídrico concentrado (18 mi) hasta alcanzar pH = 1,0. Se trata la mezcla con 15 g de cloruro sódico seguido por lavado con acetato de etilo (3 x 90 mi). Los extractos orgánicos combinados se secan ( a2S04), se filtran y se concentran al vacío produciendo 23.8 g (94%, sin corregir) del compuesto del título como un sólido blanquecino. Preparación 71 Sal N-bencil-a-metilbencilamina del ácido ( + ) (6S)-2- oxobiciclo[3.1.Olhexano-6-carboxílíco Se agregan 18 g (85.1 mmol) de (S)-N-bencil- -metilbencil-amlna a una solución de ácido (±) (6S)-2-oxobiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxílico crudo (11.9 g, 84.9 mmol, se supone potencia del 100%) en 119 mi de acetato de etilo:etanol 6:1 a reflujo. Después de la disolución, se deja la mezcla enfriar, opcionalmente seguido por germinado a 52°C. Tras enfriar a temperatura ambiente y agitar otras 13.5 h, se recolectan los cristales y se lavan con acetato de etilo:etanoI 6:1 (2 x 48 mi). El secado al vacío dio 10.8 g (36%, 77% de) de la sal resuelta como un sólido. El de de la sal se determina por análisis de CG quiral del derivado éster metílico preparado como sigue: se disuelven 150 mg de la sal resuelta en 5 mi de cloruro de metileno y se lava con ácido sulfúrico 1 N (2 x 1 mi). La capa orgánica se seca, se filtra, se diluye con 2 mi de metanol y se trata con 1 mi de trimetilsilil diazometano 2M en hexanos. Después de agitar a temperatura ambiente durante 15 minutos, se concentra la mezcla al vacío proporcionando el éster metílico adecuado para el análisis de CG quiral. Condiciones de la GC: columna 30 m X 0,25 mm X 0.25 µ ß-DEX 325, temperatura del horno 140°C, gas portador helio @ 1 ml/min, detección FID a 250°C, divisiones de 1 µ? 1:100, muestra @ 1mg/ml en cloruro de metileno. Preparación 72 (6S)-2-Oxobic¡clor3. .OIhexano-6-carboxilato de etilo Se agregan 198 mi (198 mmol) de hidróxido sódico 2N a una suspensión de 46.3 g (132 mmol) de sal N-bencil-oc-metilbencilamina del ácido (6S)-2-oxobiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxílico n 200 mi de acetato de etilo. Después de mezclar bien, se separan las capas y se lava la capa acuosa con acetato de etilo (1 x 200 mi). Se trata la capa acuosa con 18 mi (211 mmol) de ácido clorhídrico concentrado y 100 g de cloruro sódico. La mezcla se deja agitando durante 30 minutos seguido por lavado con acetato de etilo (2 x 200 mi). Los orgánicos combinados se secan (MgS04), se filtran y se concentran al vacío proporcionando 18.3 g (99%) del ácido resuelto [ácido (+) (6S)-2-oxobiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxílico] como un sólido blanco. A continuación, se disuelven 10 g (71 mmol) del producto de ácido resuelto crudo anterior en 42 mi de etanol y se trata con 4 mi (71 mmol) de ácido sulfúrico concentrado, gota a gota. Se calienta la mezcla hasta 45°C y se deja agitando durante 75 minutos. Tras enfriar hasta temperatura ambiente, se agregan 42 mi de agua junto con 20 mi de acetato de etilo y 12 g de bicarbonato sódico. Tras agitar durante varios minutos, se lava la mezcla con acetato de etilo (2 x 50 mi). Los extractos orgánicos combinados se secan (MgSOz}.), se filtran y se concentran al vacío proporcionando 11 g (92%) del (6S)-2-oxobiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxilato de etilo crudo como un sólido blanco. La cristalización de heptano:éter fer-butil metílico 6:1 (3.5 mi por g de sustrato) proporcionó este compuesto del título con un rendimiento aproximado del 80% y un ee >98% como se determina por análisis de CG quiral. Preparación 73 Acetato de (6S)-6-(etoxicarbon¡l)bic¡clor3.1.01hex-2-en-2-ilo Se calienta a reflujo usando un aparato de Dean-Stark durante 2.5 horas, una mezcla de (6S)-2-oxobiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxilato de etilo (380.1 g, 2.26 mol) y ácido sulfúrico (18 M, 6.3 mi, 0.11 mol) en acetato de isopropenilo (2.26 L) momento en el que el análisis de CG revela una mezcla 9:1 del compuesto del título versus (6S)-2-oxobiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxilato de etilo. Después de eliminar 950 mi de disolvente por destilación durante 1 hora, la CG muestra que la relación producto:material de partida es 17:1. Se agrega acetato de isopropenilo adicional (900 mi) y H2S04 concentrado (3.15 mi) y la mezcla se agita a reflujo durante otras 15 horas, momento en el que la CG muestra una relación 27:1 de producto/material de partida. Después de eliminar por destilación otros 1.35 I de disolvente, se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente antes de que se diluya con MTBE (2 I), H20 (250 mi) y NaHC03 acuoso saturado (600 mi). Se separan las capas y se lava la capa orgánica con salmuera (400 mi). Las capas acuosas combinadas se extraen con MTBE (400 mi) y se secan las capas orgánicas combinadas (Na2S04), se filtran y se concentran hasta un aceite rojo oscuro/marrón (540 g). El aceite crudo se divide en dos porciones iguales y se filtra a través de una almohadilla de Si02 instantánea (713 g para cada lote), eluyendo con heptano:acetato de etilo 10:1. Las fracciones que contienen producto de ambos tapones se combinan y se concentran proporcionando el compuesto del título como un aceite amarillo (460 g, 97%; 90% corregido para el disolvente por RMN). La cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/hexanos (1:5) proporciona una muestra analíticamente pura del compuesto del título como un aceite incoloro [a]25D +185 (c 1.48, CHCI3). RMN H 500 MHz (CDCI3) d 5.19-5.18 (m, 1H), 4.12 (c, 1H, J = 7.0 Hz), 4.11 (c, 1H, J = 7.0 Hz), 2.74-2.69 (m, 1H), 2.48-2.43 (m, 2H), 2.22-2.19 (m, 1H), 2.16 (s, 3H), 1.39 (dd, 1H, J = 2.5, 2.5 Hz), 1.25 (t, 3H, J = 7.0 Hz).
RMN 3C (125 MHz, CDCI3) d 173.37, 169.01, 152.26, 111.56, 61.28, 32.47, 32.40, 29.72, 24.97, 21.67, 14.95. FTIR (CHCI3) 3026 (m), 2985 (m), 1724 (s), 1272 (s), 1187 (s) cm"1. ES EMAR calculado para C11H18N04 [M + NH4]+ 228.1236, encontrado 228.1252. Preparación 74 (3S.1f?.6f?)-7-Oxa-5-oxotriciclor4.1.0.0<2,4>lheptano-3- carboxilato de etilo Se calienta a reflujo y se agita durante 17 horas, momento en el que el análisis de CG muestra conversión completa a (6S)-4-oxobiciclo[3.1.0]hex-2-eno-6-carboxilato de etilo una mezcla de acetato de (6S)-6-(etoxicarbonil)biciclo[3.1.0]hex-2-en-2-ilo (212.2 g, 1.01 mol) y 2,3-dicloro-5,6-diciano-1 ,4-benzoquinona (252.0 g, 1.11 mol) en 2.02 I de 1,4-dioxano. La mezcla se enfría hasta temperatura ambiente y se diluye con THF (564 mi). Después, se enfría la mezcla hasta 8°C, se agrega 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (377 mi, 2.52 moi) durante 30 minutos de modo que la temperatura de reacción se mantenga por debajo de 10°C. La mezcla se enfría entonces hasta 5°C y se agrega hidroperóxido de fer-butilo (70 % en peso en agua, 210 mi, 1.51 mol) durante 50 minutos, manteniendo la temperatura de reacción por debajo de 9°C. Después se agita la mezcla durante otros 50 minutos, se filtra la reacción y se lava la torta marrón con MTBE (2 x 800 mi). Se agregan al filtrado 1.20 I de HCI 1N y, después de mezclar bien, se separan las capas. La capa orgánica se lava secuencialmente con NaHC03 acuoso saturado (1.20 I), Na2S203 acuoso saturado (1.20 I) y salmuera (600 mi). Después, se seca la solución (Na2S04), se concentra hasta un lodo naranja que se diluye con 200 mi de heptano. Los volátiles se evaporan produciendo un sólido naranja que se tritura en 350 mi de heptano y se filtra, lavando la torta con más heptano (2 x 175 mi). El sólido recolectado se seca al vacío a temperatura ambiente durante 17 horas proporcionando 138.7 g (75%) del compuesto del título como un sólido amarillo/marrón. La cristalización en MTBE proporciona una muestra analíticamente pura del compuesto del título como un sólido blanco. [ ]25D +2.3 (c 1.20, CHCI3), +8,4° (c 1.28, acetona); p.f. 129-130 °C. RMN 1H 500 MHz (CDCI3) d 4.16 (c, 2H, J = 7.0 Hz), 3.99 (t, 1H, J = 2.5 Hz), 3.24-3.23 (m, 1H), 2.96-2.94 (m, 1H), 2.21-2.19, (m, 1H), 2.08 (t, 1H, J = 3.0 Hz), 1.26 (t, 3H, J = 7.0 Hz).
RMN 13C (125 MHz, CDCI3) d 201.19, 168.84, 62.42, 57.04, 51.25, 31.16, 30.54, 29.60, 14.79. FTIR (KBr) 3087 (w), 3059 (w), 3051 (w), 3007 (w), 2993 (w), 2963 (w), 1753 (s), 1719 (s), 1273 9s), 1191 (s), 1009 (m), 848 (m) crrT1. Análisis calculado para C9H10O4: C, 59.34; H, 5.53. Encontrado: C, 59.32; H , 5.43. Preparación 75 (6S)-4-oxobiciclof 3. .0lhex-2-eno-6-carboxilato de etilo Aunque el compuesto del título se usa de forma típica in situ en la preparación de (3S, 1 f?,6f?)-7-oxa-5-oxotriciclo[4, 1 ,0,0<2,4>]heptano-3-carboxilato de etilo, se obtiene una muestra analíticamente pura del compuesto del título filtrando la mezcla de reacción que contiene este compuesto y evaporando el filtrado produciendo un sólido marrón. El sólido se resuspende en acetato de etilo, la suspensión se filtra y se concentra el filtrado. La cromatografía del residuo sobre gel de sílice con acetato de etilo /hexanos (1:5 a 1:2) da el compuesto del título, que se recristaliza de acetato de etilo caliente y se somete a cromatografía de nuevo usando las condiciones anteriores produciendo el compuesto del título como un sólido blanco. [oc]25D -268 (c 1.17, CHCI3). p.f. 97-98 °C. RMN H 500 MHz (CDCI3) d 7.60 (ddd, 1H, J = 5.5, 2.5, 0.75 Hz), 5.73 (dd, 1H, J = 5.0, 0.5 Hz), 4.15 (c, 2H, J = 7.0 Hz), 2.96-2.94 (m, 1 H), 2.63-2.61 (m, 1H), 2.60 (t, 1H, J = 2.5 Hz), 1.26 (t, 3H, J = 7.0 Hz). RMN 3C (125 MHz, CDCI3) d 203.96, 168.61, 160.33, 130.29, 62.03, 46.53, 30.72, 29.62, 14.82. FTIR (KBr) 3080 (m), 2996 (m), 1717 (s), 1695 (s), 1266 (s), 1291 (m), 1191 (s), 1179 (s) crn"1. Análisis calculado para C9H10O3: C, 65.05; H, 6.07. Encontrado: C, 64.97; H, 6.01. Preparación 76 f4S.6S)-4-Hidroxi-2-oxobiciclor3.1.01hexano-6-carboxilato de etilo Se trata una solución agitada de (3S,1 fi,6/?)-7-oxa-5-oxotriciclo[4, 1 ,0,0<2,4>]-heptano-3-carboxilato de etilo (36.3 g, 0.20 mol) en 667 mi de acetona secuencialmente con acetato sódico (36.1 g, 0.44 mol), yoduro sódico (65.8 g, 0.44 mol) y ácido acético (27.5 mi, 0.48 mol). La mezcla se deja agitando a 30°C durante 15 horas antes de eliminar la acetona al vacío dejando un sólido marrón que se divide entre acetato de etilo (323 mi) y H20 (323 mi). Las capas se separan y se lava la capa acuosa con acetato de etilo (3 x 323 mi). Los orgánicos combinados se lavan secuencialmente con Na2S203 acuoso saturado (364 mi) y NaHC03 acuoso saturado (364 mi). Cada lavado acuoso se vuelve a extraer con acetato de etilo (323 mi). Los orgánicos combinados se secan (Na2S04), se filtran y se concentran hasta un aceite rojo-marrón que se disuelve en 300 mi de etanol. La evaporación de los volátiles proporciona el producto del título como un aceite rojo-marrón (41.8 g, 114 %). La cromatografía en columna sobre gel de sílice usando acetato de etilo/hexanos (1:2 a 2:1) seguida por cristalización de MTBE caliente proporciona una muestra analíticamente pura del compuesto del título como un sólido blanco. [a]25D +3.9 (c 1.39, CHCI3), +6.0° (c 1.69, MeOH). p.f. 81-82 °C. 500 MHz RMN 1H (CDCI3) d 4.60 (s amplio, 1H), 4.16 (c, 2H, J = 7.0 Hz), 2.66 (dd, 1H, J = 5.0, 4.0 Hz), 2.42-2.40 (m, 1H), 2.34 (dd, 1H, J = 19.0, 5.5 Hz), 2.24 (bd, 1H, J = 3.0 Hz), 2.07 (d, 1H, J = 19.0 Hz), 1.91 (t, 1H, J = 3.0 Hz), 1.27 (t, 3H, J = 7.0 Hz). RMN 13C (125 MHz, CDCI3) d 209.74, 170.07, 69.04, 62.32, 43.47, 36.89, 34.95, 26.14, 14.83. FTIR (CHCI3) 3607 (w), 3447 (w), 3025 (m), 2985 (w), 1739 (s), 1728 (s), 1270 (s),1187 (s) crrf1. Análisis calculado para C9H 204: C, 58.69; H, 6.57. Encontrado: C, 58.48; H, 6.63. Preparación 77 2-r((1R)-1-Feniletinamino1(2S.4S.6 )-2-c¡ano-4- hidroxibiciclo[3.1.Olhexano-6-carboxilato de etilo Se agregan (R)-metiIbencilamina (46.3 mi, 0.359 mol) y NaCN (20.8 g, 0.424 mol), manteniendo la temperatura entre 20 y 25 °C a una solución de (4S,6S)-4-hidrox¡-2-oxobiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxiiato de etilo (68.2 g corregido hasta 60.0 g debido a la contaminación con etanol, 0.326 mol) en etanol (332 mi) y H20 (332 mi). Se agrega entonces HCI concentrado (35.3 mi, 0.424 mol) durante 10 minutos mientras se mantiene la temperatura de reacción anterior. La mezcla marrón oscuro se agita durante una hora antes de que se siembre opcionalmente con el compuesto del título para iniciar la cristalización. La suspensión se agita durante una hora antes de añadir H20 (664 mi). Después se agita la suspensión otras 1.75 horas, se recolecta el compuesto del título en forma de sólido color castaño que se lava con H20 (332 mi). Se inyecta aire a través de la torta húmeda del filtro durante 25 minutos antes de que el material se use directamente en la hidrólisis del nitrilo (peso de la torta húmeda 145 g). Aunque el compuesto del título se descompone rápidamente durante un secado al vacío a temperaturas mayores de 25°C, es posible secar pequeñas muestras al vacío a temperatura ambiente sin descomposición. [a]25D +81.6 (c 1.18, CHCI3). p.f.70-72 °C (descomposición). RMN 1H 500 MHz (CDCI3) d 7.39 (d, 2H, J = 7.0 Hz), 7.26-7.16 (m, 3H), 4.31 (d, 1H, J = 5.0 Hz), 4.22 (c, 1 H, J = 6.5 Hz), 3.93-3.85 (m, 2H), 2.33 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.01 (bt, 1H, J = 4.5 Hz), 1.64 (dd, 1H, J = 15.0, 5.0 Hz), 1.55-1.54 (m, 1H), 1.40-1.39 (m, 4H), 1.17 (t, 3H, J = 7.0 Hz). RMN 13C (125 MHz, CDCI3) d 170.54, 144.85, 128.61, 127.45, 127.38, 121.88, 72.17, 61.02, 60.66, 56.57, 45.82, 36.70, 34.45, 25.83, 21.75, 14.22. FTIR (KBr) 3568 (m), 3489 (m), 3285 (m), 2923 (m), 2228 (w), 1712 (s), 1298 (m), 1197 (m) crn"1. FAB EMAR calculado para C18H23N203 [M + H]+ 315.1709, encontrado 315.1704. Preparación 78 Ácido 2-r(Mf?)-1-fen¡let¡naminol(2S.4S.6ff)-4- h¡droxibiciclor3.1.01hexano-2,6-dícarboxílico Se agrega lentamente H202 al 30% (44.5 mi, 0.426 mol), manteniendo la temperatura por debajo de 27°C a una solución de la torta húmeda de 2-[((1R)-1-feniletil)amino](2S,4S,6f?)-2-c¡ano-4-hidroxibicicIo[3.1.0]hexano-6-carboxilato de etilo (0.326 mmol teóricos) en DMSO (220 mi). La temperatura se reduce hasta 19°C y se agrega de forma lenta y cuidadosa NaOH 5N (52.3 mi, 0.262 mol) durante los primeros 15 minutos, manteniendo la temperatura entre 22 y 27°C. Para controlar esta reacción exotérmica se requiere un baño de hielo de capacidad apropiada. Después, se agita la mezcla marrón heterogénea durante 20 minutos al intervalo de temperatura anterior, la CLAR mostró que el material de partida se había consumido produciendo un intermedio amida. Después de agitar la reacción otras 1.5 horas, se agrega Na2S03 (13.7 g, 0.109 mol) y se agita la mezcla durante 15 minutos, momento en el que la mezcla prueba negativamente para peróxidos por papel de almidón-yodo. Después de la adición de NaOH 3N (291 mi, 0.873 mol), se calienta la mezcla hasta 85°C y se agita durante 18 horas. La mezcla marrón homogénea se enfría hasta 30°C y se agrega HCl concentrado para reducir el pH a 3.6 manteniendo la temperatura entre 30 y 35°C. Después de comenzar la cristalización a pH 3.6, se agita la suspensión durante 15 minutos antes de reducir el pH hasta 2.5. Después de agitar la mezcla durante 10 minutos más, ésta se enfría hasta 2°C durante 2 horas antes de recolectar el sólido gris y lavarlo con H20 fría (400 mi) y EtOH (300 mi). El sólido recolectado se seca al vacío a 45°C durante 17 horas proporcionando 42.9 g (43% del inicio de la Preparación 18) del compuesto del título. Con el fin de adelantar el proceso, todo el compuesto del título producido en la reacción, se recupera del licor madre de la siguiente forma. Se evapora la porción etanólica del licor madre y se combina el residuo con la porción acuosa del licor madre. Después de destilar el H20 (485 mi) bajo presión reducida, se ajusta el pH del licor madre a 12.9 con 70 mi de NaOH 5N y 5 mi de NaOH al 50%. Después se lava la solución con /7-BuOH (3 x 800 mi), se ajusta su pH a 2.5 con HCl concentrado y se concentra la solución. El residuo se diluye con EtOH (100 mi) y se evaporan los volátiles (2X). El residuo se diluye con EtOH (150 mi) y el sólido color castaño que contiene compuesto del título adicional y sales se lava con EtOH (75 mi) y se seca a 50°C al vacío hasta un peso de 102 g. Ambos lotes del compuesto del título se usaron en la subsiguiente esterificación. [oc]25D +4.5 (c 1.41, 1 N NaOH). p.f.220 °C (gris desde blanquecino), 280 °C (marrón). RMN H 500 MHz (D20, KOD) d 7.39 (d, 2H, J = 7.0 Hz), 7.19-7.04 (m, 5H), 3.92 (d, 1H, J = 5.0 Hz), 3.67 (c, 1H, J = 7.0 Hz), 1.76 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 1.54-152 (m, 1H), 1.37 (dd, 1H, J = 15.0, 5.0 Hz), 1.15 (d, 3H, J = 6.5 Hz), 1.12 (dd, 1H, J = 6.0, 3.0 Hz), 0.92 (t, 1H, J = 3.3 Hz). RMN 13C (125 MHz, D20, KOD) d 185.82, 182.96, 148.01, 131.31, 129.97, 129.78, 74.99, 73.84, 58.78, 46.91, 38.05, 35.02, 27.34, 27.15. FTIR (KBr) 3366 (m), 3072 (s), 2886 (s), 1696 (m), 1611 (m), 1560 (m), 1455 (m), 1377 (m), 1278 (m), 1202 (m), 1188 (m) cm'1. Análisis calculado para C16H19NOs: C, 62.94; H, 6.27; N, 4.59. Encontrado: C, 62.70; H, 6.21; N, 4.67. Preparación 79 2-G(( 1 RV1-Feniletihamino1(2S.4S.6R 2-carbamoil-4- hidroxibiciclof3.1.Olhexano-6-carboxilato de etilo Aunque el compuesto del título se usa típicamente in situ en la preparación de ácido 2-[((1R)-1-feniletil)amino](2S,4S,6 ?)-4-hidroxibiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico, se puede aislar el compuesto aunque con alguna pérdida de rendimiento debido a la hidrólisis del éster acompañante durante la hidrólisis del nitrilo. En el aislamiento, se divide la mezcla de reacción de hidrólisis del nitrilo entre CH2CI2 y H20 tan pronto se consuma el 2-[((1/?)-1-feniletil)amino](2S,4S,6R)-2-ciano-4-hidroxibiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxilato de etilo. Después la capa orgánica se seca ( gS04) y se concentra, el residuo se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando EtOAc/hexanos (2:1) hasta EtOAc proporcionando el compuesto del título como una espuma blanca [a]25D +61.3 (c 1,20, CHCI3). RMN 1H 500 MHz (CDCI3) d 7.32-7.20 (m, 5H), 7.19 (bd, 1H, J = 4.0 Hz), 5.49 (bd, 1H, J = 4.0 Hz), 4.88 (d, 1 H, J = 11.5 Hz), 4.24 (dd, 1H, J = 11.5, 6.0 Hz), 4.06-4.00 (m, 2H), 3.77 (c, 1H, J = 7.0 Hz), 2.21 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.18-2.15 (m, 2H), 1.71 (bs, 1H), 1.54 (dd, 1H, J = 14.5, 6.0 Hz), 1.38, (d, 3H, J = 6.5 Hz), 1.32 (t, 1H, J = 3.3 Hz), 1.24 (t, 3H, J = 7.0 Hz). RMN 13C (125 MHz, CDCI3) d 180.42, 171.47, 146.05, 128.97, 127.43, 126.48, 73.16, 70.76, 61.08, 56.00, 42.82, 35.97, 35.67, 26.13, 21.53, 14.34.
FTIR (CHCI3) 3441 (m), 3345 (m), 2975 (w), 1725 (s), 1665 (s), 1288, 1186 (m) cnV1. Análisis calculado para C18H24N204: C, 65.04; H, 7.28; N, 8.43. Encontrado: C, 65.41; H, 7.58; N, 8.32. Preparación 80 2-r(n/?)-1-FeniletihaminoU2S.4S.6f?)-2-fetoxicarbonih-4- hidroxibiciclor3. .01hexano-6-carboxilato de etilo Se agrega cloruro de acetilo (11.2 ml, 157 mmol) mediante un embudo de adición, de forma que se mantiene el reflujo moderado, a una suspensión de ácido 2-[((1f?)-1-feniletil)amino](2S,4S,6f?)-4-hidroxibiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (4 g, 13 mmol) en 48 ml de etanol a temperatura ambiente. La mezcla resultante se deja agitando otras 16 horas a reflujo y tras enfriar hasta temperatura ambiente se concentra al vacío hasta un residuo sólido. El sólido se trata lentamente con una solución de bicarbonato sódico (6.6 g) en 100 ml de agua seguido por lavado con acetato de etilo (2 x 100 ml). Los orgánicos combinados se secan (MgS04), se filtran y se concentran al vacío produciendo 4.7 g (99%) del compuesto del título como un sólido. La cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con CH2CI2/MeOH (95:5) seguida por cristalización en Et20 proporciona una muestra analíticamente pura del compuesto del título como un sólido blanco. [a]25D +52.5 (c 1.30, CHCIs). p.f. 73-74 °C. RMN 1H 500 MHz (CDCI3) d 7.29-7.14 (m, 5H), 4.25 (de, 1H, 11.0, 7.0 Hz), 4.18 (dd, 1H, J = 9.5, 5.5 Hz), 4.10 (de, 1H, J = 11.0, 7.0 Hz), 3.92 (de, 1H, J = 11.0, 7.0 Hz) 3.82 (de, 1H, J = 11.0 Hz, 7.0 Hz), 3.67 (c, 1H, J = 7.0 Hz), 2.73 (d, 1H, J = 9.5 Hz), 2.15-2.12 (m, 2H), 2.01-1.99 (m, 1H), 1.89 (dd, 1H, J = 6.0, 3.0 Hz), 1.61 (dd, 1H, J = 15.0, 6.0 Hz), 1.36 (t, 1H, J = 3.5 Hz), 1.33-1.30 (m, 6H), 1.18 (t, 3H, J = 7.0 Hz). RMN 13C (125 MHz, CDCI3) d 178.11, 171.59, 146.32, 128.41, 127.07, 126.85, 73.33, 70.15, 62.07, 60.75, 56.66, 44.72, 36.78, 33.61, 26.24, 20.07, 14.37, 14.23. FTIR (KBr) 3492 (s), 3303 (m), 3055 (w), 2981 (w), 2896 (w), 1722 (s), 1705 (s), 1289 (m), 1251 (m), 1177 (m) cm"1. Análisis calculado para C2oH27N05: C, 66.46; H, 7.52; N, 3.88. Encontrado: C, 66.42; H, 7.44; N, 3.92. Preparación 81 2-r((1f?)-1-Fenilet¡naminoU2S,4f?.6f?)-2-(etoxicarbonin-4- fluorob¡ciclor3.1.OIhexano-6-carboxilato de etilo Se agrega Deoxo-Fluor (45.1 ml, 0.245 mol) durante 15 minutos, manteniendo la temperatura entre -15 y -20°C a una solución de 2-[((1f?)-1-feniletil)amino](2S,4S,6fi)-2- (etoxi carbón i l)-4-h¡droxibiciclo[3.1.0]hexano-6-carboxilato de etilo (59.0 g crudo, 0.163 mol) en CH2CI2 (690 ml) a -20°C. La mezcla se agita durante 20 minutos a esta temperatura y a 0°C durante 15 minutos antes de que se añada lentamente Na2C03 acuoso al 15% (650 ml), manteniendo la temperatura por debajo de 10°C. Se separan las capas y la capa acuosa se vuelve a extraer con CH2CI2 (150 mi). Las capas orgánicas combinadas se secan (Na2S04) y se concentran hasta un aceite marrón (73 g). El aceite se purifica en una almohadilla de gel de sílice (400 g) eluyendo con EtOAc/heptano (1:6) proporcionando el compuesto del título como un aceite amarillo (49.7 g, 84%). [a]25D +36.2 (c 1.30, CHCI3). RMN 1H 500 MHz (CDCI3) d 7.29-7.14 (m, 5H), 5.22 (ddt, 1H, J = 8.0, 4.5 Hz, JHF = 56.0 Hz), 4.16 (de, 1H, J = 11.0, 7.0 Hz), 4.05 (de, 1H, 11.0, 7.0 Hz), 3.96 (de, 1H, 10.5, 7.0 Hz), 3.85 (de, 10.5, 7.0 Hz), 3.66 (c, 1H, 6.5 Hz), 2.45 (dd, 1H, J = 14.0, 8.0 Hz), 2.16-2.12 (m, 1H), 1.95 (t, 1H, J = 3.5 Hz), 1.81 (dt, 1H, J = 3.5 Hz, JHF = 3.5 Hz), 1.51 (ddd, 1H, J = 14.0, 8.0 Hz, JHF = 22.0 Hz), 1.32 (d, 3H, J = 6.5 Hz), 1.27 (t, 3H, J = 7.0 Hz), 1.21 (t, 3H, J = 7.0 Hz). RMN 3C (125 MHz, CDCI3) d 175.29, 171.66, 146.21, 128.45, 127.03, 126.90, 92.65 (d, JCF = 182 Hz), 68.68 (d, JCF = 4.9 Hz), 61.70, 60.92, 56.13, 38.60 (d, JCF = 23.0 Hz), 33.07 (d, JCF = 7.6 Hz), 32.23 (d, JCF = 22.0 Hz), 26.26, 20.22 (d, JCF = 3.9 Hz), 14.41 , 14.24. FTIR (CHCI3) 3028 (w), 2983 (w), 1724 (s), 1705 (s), 1293 (m), 1242 (m), 1190 (m), 1037 (m), 1013 (m) crrf1. Análisis calculado para C20H26FNO4: C, 66.10; H, 7.21; N, 3.85. Encontrado: C, 66.02; H, 7.00; N, 3.95. Preparación 82 Clorhidrato de aminal R,2SAR,5R,QR-2-am\no-4- fluorobiciclor3.1.01hexano-2,6-dicarboxilico Se coloca bajo hidrógeno 3.44 x 105 Pa (50 psi) durante 18 horas una mezcla de 2-[((1 ?)-1 -feniletil)amino](2S, 4R,6R)-2-(etoxicarbonil)-4-fluorobiciclo[3.1.0]-hexano-6-carboxilato de etilo protegido por amina (68.4 g, 0.188 mol), HCl concentrado (15.7 mi, 0.188 mol) y Pd/C al 10% (seco, 13.7 g) en EtOH (400 mi). El catalizador se separa por filtración y el filtrado se evapora produciendo el compuesto del título como una espuma blanquecina (59.2 g, 106% corregido hasta 97% debido a contaminación con EtOH). La cristalización en EtOAc/MTBE proporciona una muestra analíticamente pura del compuesto del título como un sólido blanco. [a]25D +55.6 (c 1.17, CHCI3). p.f. 86-88 °C. RMN 1H 500 MHz (CDCI3) d 9.20 (s amplio, 2H), 5.50 (ddt, 1H, J = 8.0, 4.5 Hz, JHF = 56.0 Hz), 4.31 (c, 1H, J = 7.0 Hz), 4.20-4.07 (m, 3H), 2.88 (t, 1H, J = 3.0 Hz), 2.71 (dd, 1H, J = 14.5, 8.0 Hz), 2.48-2.43 (m, 2H), 2.16 (ddd, 1H, J = 14.5, 7.5 Hz, JHF = 22.0 Hz), 1.34 (t, 3H, J = 7.0 Hz), 1.25 (t, 3H, J = 7.0 Hz) RMN 13C (125 MHz, CDCI3) d 171.12, 169.41, 91.94 (d, JCF = 189 Hz), 63.85, 63.66 (d, JCF = 3.8 Hz), 61.73, 34.55 (d, JCF = 26.4 Hz), 31.58 (d, JCF = 7.8 Hz), 30.80 (d, JCF = 24.1 Hz), 20.22, 14.31, 14.21. FTIR (KBr) 3353 (m), 3173 (w), 2745 (m), 1729 (s), 1547 (m), 1294 (m), 1269 (m), 1195 (m), 1011 (m) cm'1. Análisis calculado para C 2Hi8FN04: C, 48.74; H, 6.48; N, 4.74. Encontrado: C, 48.80; H, 6.41; N, 4.76. Preparación 83 Ácido 1 R.2S.4f?.5 ?.6f?-2-amino-4-fluorob¡cicloí3.1.Olhexano- 2,6-dicarboxílico Se agrega lentamente una solución de NaOH 3N (251 mi, 0.753 mol) a clorhidrato del ácido 1 R,2S,4R,5R,6R-2-amino-4-fluorobic¡clo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxíllco (59.2 g crudo, 0.188 mol teórico), manteniendo la temperatura por debajo de 26°C. Después de agitar la mezcla durante 10 minutos, ésta se vuelve homogénea. La mezcla se agita durante 1.25 horas a temperatura ambiente antes de que el pH se reduzca lentamente hasta pH 2.8 usando HCI concentrado mientras se mantiene la temperatura entre 20 y 26°C. A pH 2.8, la mezcla comienza a cristalizar y la suspensión se agita a este pH durante 10 minutos antes de que el pH se reduzca hasta 2.1 con HCI concentrado. Después de otros 15 minutos de agitación, se agrega /'-PrOH (67 mi) y se enfría la suspensión hasta 0°C y se agita durante 2 horas. El sólido se recolecta y se lava con 37 mi de H20//-PrOH frío (4:1). El sólido recolectado se seca al vacío a 40 °C durante 18 horas, proporcionando el compuesto del título como un sólido blanco (33.1 g, 87% desde el inicio de la Preparación 23). Preparación 84 Resuspensión de ácido 1 f?,2S,4 ,5 ?,6R-2-amino-4- fluorobiciclof3.1.01hexano-2,6-dicarboxílico Se calienta hasta 89°C durante una hora una suspensión agitada de ácido 1 R,2S,4/?,5f?,6f?-2-amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (33.0 g, 0.162 mmol) en H20 (165 mi) y se agrega /'-PrOH (41 mi). La mezcla se agita entonces durante 5 minutos a reflujo (83°C) antes de que ésta se enfríe hasta temperatura ambiente y se agita durante 4 horas. El producto se recolecta, se lava con /-PrOH/H20 (1 :4, 40 mi) e /'-PrOH (25 mi) y se seca al vacío a 40°C durante 18 horas proporcionando el compuesto del título como un sólido blanco (30.6 g, 93%). Preparación 85 Ester etílico del ácido 1 f?.2S.4 ?.5 ?.6R-2-amino-4- fluorobiciclor3.1.01hexano-2,6-dicarboxilico Se agrega cloruro de tionilo (26 mi, 356 mmol) gota a gota durante 20 minutos a una suspensión de ácido 1f?,2S,4f?,5 ?,6f?-2-amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (14.45 g, 71.12 mmol) en 202 mi de etanol absoluto a temperatura ambiente. La suspensión se calienta hasta reflujo y se deja agitando durante 3 horas, seguido por enfriamiento hasta temperatura ambiente durante la noche. La solución resultante se concentra al vacío hasta un residuo que se diluye con 136 mi de acetato de etilo y se trata con 306 mi de carbonato sódico acuoso al 10% durante 15 minutos con agitación a mano de tal modo que el pH final es 10. Se separan las capas y la capa acuosa se lava con acetato de etilo (1 x 136 mi). Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera (1 x 136 mi), se secan (MgS04), se filtran y se concentran al vacío proporcionando 17.07 g (93%) del compuesto del título como un sólido blanco. FDMS: M++1 = 260. Análisis calculado para C12H 8FNO4-0.1 H20: C, 55.21; H, 7.03; N, 5.37. Encontrado: C, 55.10; H, 6.96; N, 5.22. p.f. = 64-66 °C. [a]D25 = +20 (c = 0.96, MeOH), [a]D25 = +15 (c = 1.21, DMSO) Preparación 86 Ester etílico del ácido 1 R.2S.4R.5R.6R-2-12'S-2'-(ter- butoxicarbonilamino')propion¡llamino-4- flurob¡ciclo[3.1.0lhexano-2,6-d¡carboxíl¡co Se agrega N-metilmorfolina (22.44 mi, 204 mmol) seguida por cloroformiato de /so-butilo (26.48 mi, 204 mmol) gota a gota durante 15 minutos de tal modo que la temperatura de reacción no exceda -18 °C a una solución de N-Boc-L-alanina (38.62 g, 204 mmol) en 396 mi de cloruro de metileno a -22 °C bajo nitrógeno. La suspensión clara resultante se deja agitando a -20°C durante 30 minutos, momento en el que se agrega una solución de áster etílico del ácido 1 ,2S,4 ?,5R,6 ?-2-amino-4-fluorobiciclo[3.1.Ojhexano-2,6-dicarboxílico (49.46 g, 191 mmol) en 247 mi de cloruro de metileno durante 40 minutos, de modo que la temperatura de reacción no exceda -16 "C. Una vez completada la adición, se retira la reacción del baño de enfriamiento y se deja agitando a temperatura ambiente durante 70 minutos, momento en el que la temperatura de reacción ha alcanzado 15°C y el color se vuelve naranja apagado. La reacción se trata con 408 mi de ácido clorhídrico 1N, seguido por agitación durante 5 minutos y separación de las capas. La capa orgánica se lava con bicarbonato sódico acuoso saturado (1 x 408 mi), se seca (Na2SC>4), se filtra y se concentra al vacío hasta una espuma blanca (88.16 g). FDMS: M++1 = 260. Análisis calculado para ? 2?^ 8FNO4-0.1 H20: C, 55.21; H, 7.03; N, 5.37. Encontrado: C, 55.10; H, 6.96; N, 5.22. p.f. = 64-66 °C. [a]D25 = +20 (c = 0.96, MeOH), [a]D25 = +15 (c = 1.21, DMSO). Preparación 87 Ácido -\R.2SAR.5R.6R-2-]2'S-2'-(ter- butoxicarbonilamino)propioninamino-4- fluorobiciclo[3.1.01hexano-2,6-d¡carboxílico Se agregan 238 mi (477 mmol) de hidróxido sódico 2N a una solución de éster etílico del ácido 1 R,2S,4R,5R,6R-2-[2'S-2'-(fer-butoxicarbonilamino)propionil]amino-4-flurobiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (88.16 g, 191 mmol) en 238 mi de tetrahidrofurano a temperatura ambiente. La mezcla bifásica se deja agitando vigorosamente a temperatura ambiente durante 2.5 horas, momento en el que la reacción es homogénea. La mezcla se diluye con 238 mi de t-butil metil éter, seguido por mezclado y separación de las capas. La capa acuosa se diluye adicionalmente con 238 mi de agua y se filtra para separar el material en partículas. La solución se trata con HCI concentrado (42.9 mi, 515 mmol) durante 30 minutos, seguido opcionalmente por sembrado con el compuesto del título y agitación durante 1 hora. La suspensión resultante se filtra, se lava con agua (2 x 100 mi) y se seca a vacío a 45 °C durante 40 horas proporcionando 72.2 g del compuesto del título como un sólido blanco. Se deja agitando una porción del sólido (69.5 g) con 490 mi de acetona durante 1 hora produciendo una solución turbia que se filtra, lavando con acetona (2 x 100 mi). El filtrado se concentra al vacío hasta una espuma blanca que se seca además al vacío a 45°G durante 16 horas proporcionando 61.8 g (corregido para el 12% peso/peso de acetona) del compuesto del título. Ejemplo 1 Clorhidrato del ácido HR.4S.5S.6S)-4-(2'S- aminopropionil)amino-l-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclof3.1.Olhexano- 4.6-dicarboxílico Se agrega una solución de cloruro de hidrógeno en acetato de etilo (3.7 M, 514 mi) durante 20 minutos a una suspensión de ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S-íer-butoxicarbonil-amino-propionilamino)-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.Ojhexano-4,6-dicarboxílico (110.0 g, 271 mmol, Preparación 3) en 563 mi de acetato de etilo. Después se agita la suspensión durante 2.5 horas, se filtra y se lava la torta con acetato de etilo (1 x 200 mi, 1 x 115 mi). Después de secar a vacío a 46 °C durante 18 horas, el compuesto del título se recolecta como un sólido blanco (85.77 g, 92%). RMN 1H (300 MHz, Metanol-d4) d: 4.12 (d amplio, 1H, J = 14.6 Hz), 3.94 (c, 1H, J = 7.1 Hz), 3.52 (ddd, 1H, J = 7.0, 3.9, 0.9 Hz), 3.16 (d, 1H, J = 14.6 Hz), 3.02 (dd, 1H, J = 7.0, 4.4 Hz), 2.49 (t, 1H, J = 4.1 Hz), 1.52 (d, 3H, J = 7.1 Hz). Ejemplo 2 Tosilato del ácido (1 R.4S.5S.6S 4-(2'S-2'- am¡noprop¡onil)amino-2.2-dioxo-2A6-tia-bic¡clor3.1.0.lhexano- 4.6-dicarboxílico Se calienta hasta 75°C una suspensión de ácido (1 R,4S,5S16S)-4-(2'S-fer-butoxicarbonilami no-pro pionilamino)-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4, 6-dicarboxílico (300 mg, 0.738 mmol, Preparación 3) y monohidrato de ácido toluenosulfónico (140 mg, 0.738 mmol) en tolueno (3 mi) y se agita durante 45 minutos antes de dejar enfriar hasta temperatura ambiente y se agita durante 16 horas. Se filtra la suspensión y se lava la torta con tolueno (2 x 1 mi). Después de secar a vacío a 45°C durante 1 hora, se recolectan 307 mg (87%) del compuesto del título como un sólido blanco, p.f. (DSC) 233 °C. RMN 1H (500 MHz, CD3OD) d 7.70 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 7.24 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 4.11 (d, 1H, J = 15 Hz), 3.94 (c, 1H, J = 7.0Hz), 3.53 (dd, 1H, J = 7.0, 4.0 Hz), 3.13 (dd, 1H, J = 14, 1.0 Hz), 3.02 (dd, 1H, J = 7.0, 4.5 Hz), 2.48 (t, 1H, J = 4.5 Hz), 2.37 (s, 3H), 1.52 (d, 3H, J = 7.5 Hz). RMN 13C (125 MHz, CD3OD) d 170.70, 170.32, 169.80, 142.04, 140.78, 128.79, 125.79, 60.20, 54.73, 48.77, 42.44, 30.84, 22.22, 20.20, 16.09. Ejemplo 3 Clorhidrato del ácido M R.4S.5S.6S)-4-(2'S-amino-3'-hidroxi- propionil)-amtno-2,2-dioxo-2Á6-tia-biciclo[3.1.OIhexano-4.6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(3'-acetoxi-2'S-fer-butoxicarbonilamino-propionil)-amino-2,2-dioxo-2A6- tiabiciclo[3.1.0]hexano-4!6-dicarboxílico (380 mg, 0,77 mmol, Preparación 15). [a]¾3 = -19.23 (c = 0.52, MeOH). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 2.48 (1H, t, J = 4.0 Hz), 3.04 (1H, dd, J = 4.4, 7.3 Hz), 3.17 (1H, d, J = 14.7 Hz), 3.51 (1H, dd, J = 4.4, 7.0 Hz), 3.77 (1H, dd, J = 7.0, 10.6 Hz), 3.94-4.12 (3H, m). Análisis calculado para C10Hi4N2O8S'HCI'H2O: C, 31.88; H, 4.55; N, 7.44; Cl, 9.41. Encontrado: C, 31.53; H, 4.40; N, 7.32; Cl, 9.24. EMAR calculado para C10H15 2O8S, 323.0549. Encontrado, 323.0533. Ejemplo 4 Clorhidrato del ácido (1 R.4S.5S,6S)-4-r(pirrolidin-2'S- carbonil)-amino1-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclor3, 1.0.1hexano-4.6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C empleando éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-[(1 '-ter-butoxicarbonil-pirroIidina-2'S-carbonil)-amino]-2,2-dioxo-2A6- tia-biciclo[3.1.0.]hexano-4,6-dicarboxílico (0.8 g, 1.7 mmol, Preparación 11) proporcionando 0.42 g (67.0%) del compuesto del título. [a]¾3 = -32 (c=1.00, CH3OH). R N 1H (300 MHz, CD3OD) d 1.98-2.12 (3H, m), 2.40-2.50 (1H, m), 2.52 (1H, t, J = 4.4 Hz), 2.99 (1H, dd, J = 4.4, 7.0 Hz), 3.2 (1H, d, J = 14.7 Hz), 3.29-3.42 (3H, m), 3.54 (1H, m), 4.13 (1H, d, J = 15.8 Hz), 4.30 (1H, dd, J = 6.2, 9.2 Hz). EMAR calculado para C12H17N2O7S, 333.0756. Encontrado, 333.0740. Ejemplo 5 Clorhidrato del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S-amino-4'- metilsulfan¡l-butirilamino)-2.2-dioxo-2A6-t ia- bi ciclo[3.1.0.1h exano -4.6-dicarboxíl¡ co Se prepara según el Procedimiento general C empleando éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S-rer-bu toxica rbonilamino-4'-metilsulfaníl-b utiri lamino)-2,2-d ioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0.]hexano-4,6-dicarboxílico (0.77 g, 1.6 mmol, Preparación 12) proporcionando 0.41 g (54.9%) del compuesto del título. [a]¾3 = +4 (c=1.00, MeOH). RMN 1H (300 MHz, CD3OD) d 2.1-2.2 (2H, m), 2.13 (3H, s), 2.47 (1H, t, J = 4.4 Hz), 2.58-2.63 (2H, m), 3.02 (1H, dd, J = 4.0, 7.0 Hz), 3.12 (1H, d, J = 14.7 Hz), 3.52 (1H, dd, J = 3.3, 6.6 Hz), 3.98 (1H, t, J = 6.2 Hz), 4.14 (1H, d, J = 14.7 Hz). EMAR calculado para C12H19N207S2, 367.0634. Encontrado, 367.0634. Ejemplo 6 Clorhidrato del ácido (1R.4S,5S,6S)-4-r2'S-amino-3'-MH- indol-3 -¡O-propionila mino 1-2,2 -dioxo -2 A6-tia- biciclo[3.1.01hexano-4.6-dicarboxíl¡co Se prepara según el Procedimiento general C empleando éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-[2'S-fer-b utoxi carbón i lam i no-3 '-(1 -íer-bu toxica rbo ni 1-1 H-indol-3-il)-propionilamino]-2,2-dioxo-2A6~tia-biciclo[3.1.0.]hexano-4,6-dicarboxílico (0.54 g, 0.83 mmol, Preparación 13) proporcionando 0.28 g (73.6%) del compuesto del título. [a]¾3 = +7.8 (c=1.02, CH3OH). RMN 1H (300 MHz, CD3OD) d 2.47-2.53 (1H, m), 3.05-3.18 (3H, m), 3.44-3.57 (2H, m), 4.13-4.23 (2H, m), 7.07-7.41 (3H, m), 7.71-7.78 (2H, m), 8.22 (1H, d aparente, J = 7.7 Hz). Análisis calculado para C, 47.22; H, 4.40; N, 9.18. Encontrado: C, 46.51; H, 3.96; N, 8.54. EM (ES) m/z 420,1 [M-1]\ Ejemplo 7 Clorhidrato del ácido (1 R.4S.5S.6S')-4-r2,S-amino-3'-(4- h¡droxi-fenil)-propion¡lamino1-2.2-dioxo-2A6-tia- bic¡clor3.1.0.1hexano-4,6-d¡carboxílico Se prepara según el Procedimiento general C empleando éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-[2'S-fer- butoxicarbonilam¡no-3'-(4-fer-butoxicarbon¡loxi-feniI)- propionil-amino]-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0.]hexano-4,6- dicarboxílico (0.33 g, 0.53 mmol, Preparación 14) proporcionando 0.13 g (56.4%) del compuesto del título. [a]¾3 = -6 (c=1.00, ?20). RMN ? (300 ???, CD3OD) d 2.47 (1 ?, t, J = 4.0 ??), 2.87 (1?, dd, J = 9.2, 14.7 ??), 3.05-3.12 (2?, m), 3.23 (1?, dd, J = 5.1, 14.7 ??), 3.55 (1?, dd, J = 4.0, 7.0 Hz), 4.00 (1H, dd, J = 4.8, 9.2 Hz), 4.13 (1H, d, J = 14.7 Hz), 6.80 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.13 (2H, d, 8.8 Hz). EMAR calculado para C16HigN208S, 399.0862. Encontrado, 399.0844. Ejemplo 8 Clorhidrato del ácido (1 R.4S,5S.6S)-4-(2'S-amino-3'-fen¡l- propionilamino)-2.2-dioxo-2A6-t¡a-bic¡clor3.1.QIhexano-4,6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S-fer-butoxicarbonilamino-3'-fen¡l-propionilamino)-2,2-dioxo-2A6-t¡a-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (Preparación 5). Rendimiento 0.55 g (85 %, 1.31 mmol) de un sólido blanco. [a]¾3 = +4.17 (c = 0.48, MeOH). RMN 1H (300 MHz, CD3OD) d 2.45 (1H, t, J = 4.0 Hz), 2.98 (1H, dd, J = 9.2, 14.7 Hz), 3.06 (1H, dd, J = 4.4, 7.0 Hz), 3.10 (1H, d, J = 14.6 Hz), 3.33 (1H, dd, J = 4.8, 13.6 Hz), 3.52 (1H, dd, J = 3.3, 7.3 Hz), 4.08 (1H, dd, J = 5.1, 8.8 Hz), 4.10 (1H, d, J = 15.4 Hz), 7.31-7.42 (5H, m). RMN 3C (300 MHz, D20 w/ 1 ,4-dioxano): d 172.55, 171.94, 170.01, 134.31, 130.39, 130.27, 130.01, 129.00, 61.38, 54.76, 54.37, 43.07, 37.36, 31.57, 23.18. Análisis calculado para ??6?18 2075·1 ,5 HCI: C, 43.97; H, 4.50; N, 6.41. Encontrado: C, 43.59; H, 4.17; N, 6.46. EM (ES) m/z encontrado 383.1 [ + H]+. EMAR calculado para Ci6H19N207S [M + H]+: 383.0913. Encontrado: 383.0923. Ejemplo 9 Clorhidrato del ácido (1 R,4S.5S.6S)-4-(2'S-am¡no-3'S-metil- pentanonilamino)-2.2-dioxo-2A6-tia-biciclor3.1.01hexano-4.6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2*S-fer-butoxicarbonilamino-3'S-metil-pentanoilamino)-2,2-dioxo-2A6-tia-bicicIo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (Preparación 6). Rendimiento 0.43 g (80 %, 1.12 mmol) de un sólido blanco. [a]¾3 = +4.08 (c = 0.49, MeOH). RMN 1H (300 MHz, CD3OD) d 0.98 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.07 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.15-1.24 (1H, m), 1.53-1.62 (1H, m), 1.95-2.04 (1H, m), 2.44 (1H, t, J = 4.0 Hz), 3.06 (1H, dd, J = 4.4, 7.0 Hz), 3.14 (1H, d, J = 15.0 Hz), 3.52 (1H, dd, J = 3.7, 7.0 Hz), 3.73 (1H, d, J = 5.1 Hz), 4.10 (1H, d, J = 14.7 Hz).
Análisis calculado para C13H2oN207S«HCI«0.5 H20: C, 39.64; H, 5.63; N, 7.11. Encontrado: C, 39.38; H, 5.39; N, 7.04. E (ES) m/z encontrado 349.1 [M + H]+. HREM (ES) calculado para C13H2iN207S [M + H]+, 349.1069.
Encontrado, 349.1086. Ejemplo 10 Clorhidrato del ácido (1 R.4S.5S.6S)-4-(2'S-amino-3'-metil- butirilamino)-2.2-dioxo-2A6-tia-biciclor3.1.01hexano-4.6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S-fer-butoxicarbonilamino-3'-metil-butirilamino)-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (Preparación 7). Rendimiento 0.18 g (88 %, 0.49 mmol) de un sólido blanco como la sal HCI. [a]¾3 = +7.84 (c = 0.51, MeOH). RMN 1H (300 MHz, CD3OD) d 1.04 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.09 (3H, d, J = 7.0 Hz), 2.22-2.29 (1H, m), 2.44 (1H, t, J = 4.0 Hz), 3.05 (1H, dd, J = 4.4, 7.0 Hz), 3.10 (1H, d, J = 14.7 Hz), 3.52 (1H, dd, J = 4.0, 7.3 Hz), 3.67 (1H, d, J = 5.5 Hz), 4.10 (1H, d, J = 14.7 Hz). Análisis calculado para C12H18N2O7S*HCI*0.4H2O: C, 38.12; H, 5.20; N, 7.41. Encontrado: C, 37.78; H, 4.90; N, 7.15. EM (ES) m/z encontrado 335.1 [M + H]+. Ejemplo 11 Clorhidrato del ácido (1 R.4S.5S.6S)-4-(2'S-amino-4'-metil- pentanoilamino)-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclor3.1.01hexano-4.6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S-fer-butoxicarbonilam¡no-4'-metil-pentanoilamino)-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (Preparación 8). Rendimiento 0.50 g (76%, 1.30 mmol) de un sólido blanco como la sal HCI. [a]¾? = -4.0 (c = 0.50, MeOH). RMN 1H (300 MHz, CD3OD) d 1.00 (3H, d, J = 5.5 Hz), 1.02 (3H, d, J = 5.9 Hz), 1.62-1.79 (3H, m), 2.42 (1H, t, J = 4.0 Hz), 3.04 (1H, dd, J = 4.4, 7.3 Hz), 3.13 (1H, d, J = 15.0 Hz), 3.52 (1H, dd, J = 3.3, 7.0 Hz), 3.84-3.89 (1H, m), 4.10 (1H, d, J = 15.0 Hz). Análisis calculado para C-i3H2oN207S*HCI*0.3H20: C, 40.01; H, 5.58; N, 7.18. Encontrado: C, 39.66; H, 5.57; N, 6.99. EM (ES) m/z encontrado 349.1 [M + H]+. Ejemplo 12 Bisclorhidrato del ácido (1 R.4S.5S.6S)-4-(2'S.6'-diamino- hexanoilamino)-2.2-d¡oxo-2A6-tia-b¡ciclo[3.1.Olhexano-4.6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S,6'-bis-fer-butoxicarbonilamino-hexanoilamino)-2,2-dioxo-2As-tia-b i ciclo [3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (Preparación Rendimiento 0,56 g (86 %, 1.28 mmol) de un sólido blanco como la sal bisclorhidrato. [a]¾3 = -4.0 (c = 0.50, MeOH). RMN 1H (300 MHz, CD3OD) d 1.48-1.55 (2H, m), 1.67-1.74 (2H, m), 1.89-1.97 (2H, m), 2.47 (1H, t, J = 4.0 Hz), 2.97 (2H, t aparente, J = 4.0), 3.08 (1H, dd, J = 4.4, 7.0 Hz), 3.20 (1H, d, J = 15.0 Hz), 3.53 (1H, dd, J = 3.7, 7.0 Hz), 3.93 (1H, t aparente, J = 6.2 Hz), 4.08 (1H, d, J = 14.7 Hz). Análisis calculado para C13H2i 3O7S«2HCI«0.2H2O: C, 35.49; H, 5.36; N, 9.55. Encontrado: C, 35.30; H, 5.48; N, 9.42. EM (ES) m/z encontrado 364.1 [M + H] + . Ejemplo 13 Clorhidrato del ácido (1 R.4S.5S.6S -4-(2'S-amino-4'-carbamoil-butirilamino)-2,2-dioxo-2Aa-tia-biciclof 3.1.Olhexano- 4.6-dicarboxílico Se agita el éster dimetílico del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-[2'S-fer-butoxicarbonilamlno-4'-(tr¡til-carbamoil)-butirilam¡no]-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílíco (0.48 g, 0.65 mmol, Preparación 10) en una mezcla 1:1 de LiOH 2,5 N y THF (6 mi de volumen total) a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción se ajusta a pH = 2 con HCI 1 y se extrae el producto con acetato de etilo. Se combinan todos los orgánicos, se lavan con salmuera, se secan sobre MgS04 y se concentran proporcionando 0.46 g de ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-[2'S-rer-butoxicarbonilam¡no-4'-(tritil-carbamoil)-buti ri lamino] -2, 2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico como una espuma blanca. Se disuelve el diácido en DCM y se agita a temperatura ambiente como anisol (0.28 g, 2.6 mmol) y luego se agrega consecutivamente TFA (3.70 g, 32.5 mmol). Se agita la mezcla de reacción resultante a temperatura ambiente durante 2 horas y se concentra al vacío. Se tritura el aceite amarillo resultante en Et20 hasta que se forma un precipitado blanco que fluye libremente. Se recolecta la sal TFA por filtración a vacío bajo una manta de N2. Se disuelve el producto en 1 mi de HCI 1N y se somete a liofilización proporcionando el producto deseado como la sal HCI. Rendimiento: 0.16 g (62 %, 0.40 mmol) de un sólido blanco. [a]¾3 = +8.0 (c = 1.0, H20). RMN H (300 MHz, CD3OD) d 2.00-2.08 (2H, m), 2.37-2.41 (3H, m), 2.93 (1H, dd, J = 4.4, 7.3 Hz), 3.04 (1H, d, J = 14.7 Hz), 3.45 (1H, dd, J = 3.7, 7.0 Hz), 3.86 (1H, t aparente, J = 5.9 Hz), 4.05 (1H, d, J = 14.7 Hz). Análisis calculado para C12H 7N3O8S»HCI»2.0H2O: C, 33.07; H, 5.09; N, 9.64. Encontrado: C, 33.37; H, 4.69; N, 9.39. EM (ES) m/z encontrado 363.9 [M + H] + . HREM (ES) calculado para Ci2HieN30eS [M + H]+: 364.0815. Encontrado: 364.0825. Ejemplo 14 Clorhidrato del ácido (1 R.2S.4R.5R.6FO-2-(2'S-amino- prop¡on¡namino-4-fluorobiciclor3.1.0lhexano-2.6-dicarboxíl¡co Se agita una suspensión de ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(2'S-2'-(fer-butoxicarbonilamino)-propioniI)amino-4-fluoro-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (53.0 g corregido para acetona, 142 mmol) en 447 mi de acetona a 50°C durante 35 minutos. Se filtra la solución turbia para clarificar, seguido por enjuagado con 100 mi de acetona. Se agregan 22.1 mi (265 mmol) de ácido clorhídrico concentrado, gota a gota al filtrado blanquecino transparente durante 5 minutos. Se calienta la mezcla hasta 45-50°C y se agita durante 90 minutos. Opcionalmente se siembra la mezcla con clorhidrato del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(2'S-aminopropionil)am¡no-4-fluorobiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico, seguido por desconexión del calor y dejar que se enfríe gradualmente hasta temperatura ambiente. Después de 2 horas, la temperatura alcanza 25°C y se agrega acetona (942 mi) a la suspensión durante 90 minutos. Se agita la suspensión 16 horas adicionales, seguido por filtración, lavado con acetona (2 x 200 mi) y secado a vacío a 45°C durante 9 horas y a temperatura ambiente durante otras 64 horas produciendo 40.2 g (91% del compuesto del título como un sólido blanco. Recristalización Se disuelven 1.06 g en 0.5 mi de agua y 2.12 mi de acetona con calentamiento a 50°C, seguido por dilución con otros 5.3 mi de acetona y opcionalmente siembra. Se agregan otros 4.2 mi de acetona a la mezcla turbia apagada seguido de nuevo opcionalmente por siembra, desconexión del calor y se deja enfriar gradualmente hasta temperatura ambiente durante 1 hora. Se diluye la suspensión resultante con otros 9.5 mi de acetona durante 30 minutos seguido por agitación durante 15 horas. Después de filtrar, se lava con acetona (2 x 5 mi) y se seca a vacío a 45 °C durante 10 horas y a temperatura ambiente durante 60 horas, se obtienen 0.905 g (85% de recuperación del compuesto del título como un sólido blanco. p.f. (DSC) 183 °C. [a]25D +33° (c 1.06, CH3OH). RMN 1H 500 MHz (CD3OD) d 5.58-5.42 (m, 1H), 3.92 (c, 1H, J = 7.0Hz), 2.96 (dd, 1H, J = 14, 8.0 Hz), 2.41-2.39 (m, 1H), 2.35-2.30 (m, 1H), 2.10 (t, 1H, J = 3.0 Hz), 1.52 (d, 3H, J = 7.5 Hz), 1.51-1.42 (m, 1H). RMN 3C (125 MHz, CD3OD) d 173.74, 173.62, 170.00, 93.48 y 92.04 (Desdoblamiento C-F), 63.95 y 63.92 (Desdoblamiento C-F), 48.80, 36.89 y 36.70 (Desdoblamiento C-F), 32.97 y 32.91 (Desdoblamiento C-F), 30.05 y 29.87 (Desdoblamiento C-F), 19.37, 16.28. FTIR (DRIFT) 3430 (w), 3016 (s), 1721 (s), 1662 (s), 1496 (s), 1190 (m), 1024 (m), 637 (w) cm-1. Ejemplo 15 Mesilato del ácido MR.2S.4R.5R.6R')-2-(2'S-amino- propioniOamino-4-fluorobiciclor3.1 ,01hexano-2.6-dicarboxílico Se deja agitando a 50°C durante 15 minutos una suspensión de ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-[2'S-(fer-butoxicarbonilamino)propionil]-amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]- hexano-2,6-dicarboxílico (1.87 g corregidos, 4.98 mmol, Preparación 18) en 16.8 mi de acetona. La solución turbia se filtra para clarificar la solución, seguido por enjuagado con acetona (3 x 1,25 mi). El filtro transparente se diluye con 0.935 mi de agua, se coloca en un baño de calentamiento a 50°C y se trata con 0.647 mi (9.97 mmol) de ácido metanosulfónico, gota a gota (se observa emisión de gas). Se produce una suspensión blanca después de 25 minutos. Después de agitar un total de 2 horas, se agregan durante 5-10 minutos otros 35.5 mi de acetona. Se desconecta el calentamiento y se deja que la suspensión se enfríe gradualmente hasta temperatura ambiente durante 2 horas, seguido por filtración, lavado con acetona (2 x 8 mi) y secado a vacío a 45°C durante 14 horas, produciendo 1.77 g (95%) del compuesto del título como un sólido rosa apagado. Se recristaliza una muestra de este material como sigue: se disuelven 1.65 g en 1.16 mi de agua y 4.95 mi de acetona con calentamiento a 50°C, seguido por dilución con otros 1.65 mi de acetona y opcionalmente siembra. Se desconecta el calentamiento y se deja que la mezcla se enfríe gradualmente hasta temperatura ambiente. Se agrega acetona (26.4 mi) simultáneamente durante 40 minutos. Se deja agitando la suspensión resultante unas 3 horas adicionales. Tras filtrado, lavado con acetona (2 x 6 mi) y secado a vacío a 45°C durante 6 horas y a temperatura ambiente durante 60 horas, se obtienen 1.59 g (96% de recuperación) del compuesto del título como un sólido blanco: p.f. (DSC) 206°C. [a]25D +30 (c 1.05, CH3OH). RMN 1H (500 MHz, CD3OD) d 5.58-5.42 (m, 1H), 3.92 (c, 1H, J = 7.0Hz), 2.96 (dd, 1H, J = 14, 8.0 Hz), 2.70 (s, 3H), 2.41-2.39 (m, 1H), 2.35-2.30 (m, 1H), 2.10 (t, 1H, J = 3.0 Hz), 1.52 (d, 3H, J = 7.5 Hz), 1.51-1.42 (m, 1H). RMN 13C (125 MHz, CD3OD) d 173.73, 173.61, 170.02, 93.50 y 92.05 (Desdoblamiento C-F), 63.91, 48.79, 38.30, 36.89 y 36.70 (Desdoblamiento C-F), 32.97 y 32.91 (Desdoblamiento C-F), 30.02 y 29.84 (Desdoblamiento C-F), 19.37, 16.26. FTIR (DRIFT) 3472 (w), 3077 (s), 1717 (s), 1691 (s), 1557 (m), 1220 (s), 1019 (m), 781 (m), 563 (m) cm-1. Análisis calculado para C 2H19FN208S: C, 38.92; H, 5.17; N, 7.56. Encontrado: C, 38.96; H , 4.97; N , 7.51. Ejemplo 16 Esilato del ácido (1 R,2S.4R.5R.6R)-2-(2'S-amino- prop¡oninamino-4-fluorobiciclor3.1.01hexano-2,6-dicarboxílico . EtS03H Se deja agitando durante 5 minutos a 50°C una suspensión de ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-[2'S-(íer-butoxicarbonilamino)propionil]-amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]-hexano-2,6-dicarboxílico (0.2 g, 0.534 mmol, Preparación 18) en 1.8 mi de acetona. Se filtra la solución turbia para aclararla seguido por enjuagado con acetona (1 x 0,4 mi). El filtrado transparente se diluye con 0.1 mi de agua, se coloca en un baño de calentamiento a 50°C y se trata con 0.124 mi (1.07 mmol) de ácido etanosulfónico, gota a gota (se observa emisión de gas). Se produce una suspensión blanca después de 90 minutos. Después de agitar un total de 2 horas, se agregan otros 1.8 mi de acetona durante 5 minutos. El calor se desconecta y se deja que la suspensión se enfríe gradualmente hasta temperatura ambiente durante 1 hora, seguido por agitación otras 2 horas. La filtración, lavado con acetona (2 x 1 mi) y secado a vacío a 45°C durante 4 horas y a temperatura ambiente durante 60 horas proporcionó 0.173 g (84%) del compuesto del título como un sólido blanco, p.f. (DSC) 210°C (descomposición). RMN 1H (500 MHz, CD3OD) d 5.58-5.42 (m, 1H), 3.92 (c, 1H, J = 7.0Hz), 2.96 (dd, 1H, J = 14, 8.0 Hz), 2.80 (c, 2H, 7.3 Hz), 2.42-2.37 (m, 1H), 2.35-2.30 (m, 1H), 2.09 (t, 1H, J = 3.0 Hz), 1.52 (d, 3H, J = 7.5 Hz), 1.51-1.40 (m, 1H), 1.30 (t, 3H, J = 7.5 Hz). Ejemplo 17 Besilato del ácido (1 R.2S.4R,5R,6FO-2-(2'S-amino- prop¡oninamino-4-fluorobiciclor3.1.01hexano-2,6-dicarboxíl¡co Se deja agitando durante 10 minutos a 50°C una suspensión de ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-[2'S-(fer- butoxicarbonilamino)propioniI]-amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]- hexano-2,6-dicarboxílico (0.402 g 1.07 mmol, Preparación 18) en 3.6 mi de acetona. La solución turbia se trata con una cuchara pequeña de Celite y se filtra para aclarar la solución, seguido por enjuagado con acetona (2 x 0.4 mi). El filtrado transparente se coloca en un baño de calentamiento a 50°C y se trata con 226 mg (90%, 1.29 mmol) de ácido bencenosulfónico como una solución en 0.113 mi de agua, seguido por enjuague con 0.4 mi de acetona (se observa emisión de gas). Después de agitar a reflujo suave durante 4 horas, se desconecta el calor y se trata la reacción con 8 mi de acetona durante 10 minutos, seguido opcionalmente por siembra. Se ha formado una suspensión durante 1 hora que se diluye con 3.2 mi de acetona seguido por agitación a temperatura ambiente otras 15.5 horas. La filtración, lavado con acetona (2 x 10 mi) y secado a vacío a 45°C durante 24 h proporcionó 313 mg (62% corregido para acetona al 10% peso) del compuesto del título como un sólido blanco, p.f. (DSC) 132 °C. RMN H (500 MHz, CD3OD) d 7.86-7.80 (m, 2H), 7.46-7.37 (m, 3H), 5.58-5.42 (m, 1H), 3.92 (c, 1H, J = 7.0Hz), 2.96 (dd, 1H, J = 14, 8.0 Hz), 2.42-2.37 (m, 1H), 2.35-2.30 (m, 2H), 2.09 (t, 1H, J = 3.0 Hz), 1.52 (d, 3H, J = 7.5 Hz), 1.51-1.40 (m, 1H). Ejemplo 18 Tosilato del ácido (1 R.2S.4R.5R.6RV2-(2'S-Am¡no- propionil')amino-4-fluorobiciclor3.1.0lhexano-2.6-dicarboxíl¡co . pTolS03H Se deja agitando a 50°C durante 15 minutos una suspensión de ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-[2'S-(íer-butoxicarbonilamino)propioniI]-amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]-hexano-2,6-dicarboxílico (1.04 g corregidos, 2.78 mmol, Preparación 18) en 9.36 mi de acetona. La solución turbia se trata con una cuchara pequeña de Celite y se filtra para clarificar la solución, seguido por enjuagado con acetona (1 x 2.08 mi y luego 1 x 1.04 mi). El filtrado transparente se coloca en un baño de calentamiento a 50°C y se trata con 634 mg (3.33 mmol) de ácido p-toluenosulfónico monohidrato como solución en 0.317 mi de agua, seguido por un enjuagado con 0.317 mi de acetona (se observa emisión de gas). Después de agitar a reflujo suave durante 4 horas, se retira la reacción del baño de calentamiento y se trata con 10.4 mi de acetona durante 10 minutos. La solución transparente incolora se siembra opcionalmente y se observa que se forma un precipitado durante 30 minutos, momento en el que se introducen otros 10.4 mi de acetona durante 20 minutos. La suspensión se deja agitando durante otras 4 horas, seguido por filtración, lavado con acetona (2 x 10 mi) y secado al vacío a 45 °C durante 14 horas proporcionando 995 mg (78% corregidos para acetona al 3 % en peso) del compuesto del título como un sólido blanco, p.f. (DSC) 155 °C. RMN H (500 MHz, CD3OD) d 7.70 (d, 2H, J = 7.5 Hz), 7.34 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 5.58-5.42 (m, 1H), 3.92 (c, 1H, J = 7.0Hz), 2.96 (dd, 1H, J = 14, 8.0 Hz), 2.42-2.30 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.09 (t, 1H, J = 3.0 Hz), 1.52 (d, 3H, J = 7.5 Hz), 1.51-1.40 (m, 1H). Ejemplo 19 Ácido ( 1 R.2S.4R.5R.6R)-2-í2'S-Amino-prop¡oninamino-4- fluorobiciclof3.1.01hexano-2,6-dicarboxílico Se agregan 5 mi de etanol 3A seguido después de unos pocos minutos por 0.27 mi (1.35 mmol) de hidróxido sódico acuoso 5N a una solución de mesilato del ácido (1R,2S,4R,5R,6R)-2-(2'S-amino-propionil)amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (0.5 g, 1.35 mmol, Ejemplo 15) en 1 mi de agua a 50 °C. Se desconecta el calor y la solución transparente incolora se diluye con 2.5 mi de etanol, se siembra opcionalmente y se diluye además con 7.5 mi de etanol durante 30 minutos. La suspensión resultante se deja agitando después de esto con enfriamiento hasta temperatura ambiente durante 1 hora y subsiguientemente a temperatura ambiente durante 2 horas. Se recolecta el sólido y se lava con etanol (1 x 10 mi) seguido por secado al vacío a 45 °C durante 18.5 horas, proporcionando 0.301 g (78% de rendimiento corregido para metanosulfonato sódico al 1.6% en peso y etanol al 3% en peso) del compuesto del título como un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, D20) d 5.45-5.30 (m, 1H), 3.88 (c, 1H, J = 7.0 Hz), 2.58 (dd, 1H, J = 14, 8.0 Hz), 2.33-2.30 (m, 1H), 2.27-2.26 (m, 1H), 1.92 (t, 1H, J = 3.0 Hz), 1.36 (d, 3H, J = 7.1 Hz), 1.41-1.32 (m, 1H). RMN 13C (125 MHz, D20) d 177.46, 176.92, 170.42, 94.56 y 93.19 (Desdoblamiento C-F), 65.36, 49.01, 36.75 y 36.57 (Desdoblamiento C-F), 33.61 y 33.55 (Desdoblamiento C-F), 30.54 y 30.36 (Desdoblamiento C-F), 20.27, 16.67. Ejemplo 20 Sal disódica del ácido (1 R.2S.4R.5R.6R)-2-(2'S-amino- propionil)amino-4-fluorobiciclof3.1.01hexano-2,6-dicarboxílico Se agrega una solución caliente de acetato sódico (46.5 mg, 0.57 mmol) en 470 µ? de metanol con un enjuague de 230 µ? de metanol a una solución de mesilato del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(2'S-amino-propionil)amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (70 mg, 0.19 mmol, Ejemplo 15) en 420 µ? de metanol a 60 °C. Se desconecta el calor. La solución turbia agitada se diluye con 280 µ? de metanol, seguido opcionalmente por siembra para ayudar a la cristalización. La suspensión resultante se enfría lentamente hasta temperatura ambiente durante 1 hora y se agita durante 2 horas a temperatura ambiente. El producto se aisla por filtración, se lava con metanol (2 x 280 µ?) y se seca al vacío a 45 °C durante 15 horas proporcionando 52.5 mg (85% de rendimiento corregido para metanosulfonato sódico al 2.3% en peso y metanol al 0.2% en peso) del compuesto del título como un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, D20) d 5.44-5.29 (m, 1H), 3.89 (c, 1H, J = 7.0 Hz), 2.65 (s, 3H), 2.56 (dd, 1H, J = 14, 8.0 Hz), 2.16-2.13 (m, 1H), 2.10-2.09 (m, 1H), 1.74 (t, 1H, J = 3.1 Hz), 1.38 (d, 3H, J = 7.1 Hz), 1.36-1.28 (m, 1H). RMN 3C (125 MHz, D20) d 180.00, 178.72, 170.13, 95.40 y 93.99 (Desdoblamiento C-F), 65.97, 49.06, 37.25 y 37.07 (Desdoblamiento C-F), 33.01 y 32.94 (Desdoblamiento C-F), 29.64 y 29.46 (Desdoblamiento C-F), 22.48, 16.68. Ejemplo 21 Clorhidrato del ácido MS.2S.4S.5R.6R)-2-(2'S- am¡nopropionil)amino-4-hidroxi-biciclor3.1.01hexano-2,6- dicarboxflico Se agrega hidróxido de litio monohidrato (0.535 g, 12.8 mmol) a una solución de éster dietílico del ácido (1S,2S,4S, 5 R, 6 R)-4-acetiloxi-2-[2'S-(fer-butoxi)carbon i lamino-pro pionil]-aminobiciclo[3.1.0] hexan o-2, 6-dicarboxíIico (0.600 g, 1.28 mmol, Preparación 21) en THF (30 mi) y agua (30 mi). Después de agitar a temperatura ambiente durante 3 horas, la reacción se diluye con agua y se lava con acetato de etilo (2 x 25 mi). La capa acuosa se acidifica hasta pH 1 con solución acuosa de HCI 1N y se extrae con acetato de etilo (3 x 30 mi). Los extractos orgánicos reunidos se concentran, se redisuelven en HCI 1N en acetato de etilo (60 mi), luego se agitan bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 16 horas. Se elimina el disolvente al vacío proporcionando 400 mg (99%) del producto como un sólido blanco. LCMS: m/z 273 [M + H]+ @ RT 0.20 min. RMN H (CD3OD)*: 4.13 (1H, d, 5.9 Hz), 3.80 (1H, c, 6.7 Hz), 2.41-2.31 (2H, m), 1.93 (1H, dd, 6.0 Hz, 2.7 Hz), 1.62 (1H, dd, 5.9 Hz, 15.5 Hz), 1.44 (1H, t, 3.0 Hz), 1.38 (3H, d, 6.8 Hz); *Nota. Protones intercambiables no observados por RMN = 6. Ejemplo 22 Clorhidrato del ácido (1S.2S.4S.5R.6R)-2-(2'-Amino- acetilam¡no)-4-hidroxi-biciclof3.1.01hexano-2,6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'-fer-butoxicarbon¡lam¡no-acetilamino)-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]-hexano-2,6-dicarboxílico (300 mg, 0.84 mmol, Preparación 23), con la excepción de que el grupo protector ter-butoxicarbonilo se retira por tratamiento con HCI 4M en dioxano. Rendimiento: 156 mg (63%). [a]2D3 = -36 (c = 0.5, MeOH). RMN H (400 Hz, CD3OD) d 1.56 (1H, t, J = 2.9 Hz), 1.74 (1H, dd, J = 5.8, 15.4 Hz), 2.12 (1H, m), 2.48 (1H, d, J = 15.4 Hz), 2.61 (1H, m), 3.62 (2H, s), 4.32 (1H, d, J = 5.49 Hz). Análisis calculado para Ci0H14N2Oe'1 ,3HCI»H20: C, 37.11; H, 5.39; N, 8.66. Encontrado: C, 37.36; H, 4.99; N, 8.30. EM (ES) m/z 258.8 [M + H] + . Ejemplo 23 Sal de clorhidrato del ácido (1 S.2S.4S.5R.6R)-2-(2'S-amino- 3'-metil-butirilamino)-4-hidroxibiciclof3.1.OI-hexano-2,6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'S-fer-bu toxica rbonilamino-3'-metiI-butiri lamino) -4-h¡droxi-biciclo-[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (480 mg, 1.19 mmol, Preparación 24), con la excepción de que el grupo protector fer-butoxicarbonilo se retira por tratamiento con HCI 4M en dioxano. Rendimiento: 307 mg (76%). [a]2D3 = +8.33 (c = 0.48, MeOH). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.07 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.11 (3H, d, J = 7.3 Hz), 1.55 (1H, t, J = 2.9 Hz), 1.76 (1H, dd, J = 5.8, 15.6 Hz), 2.14 (1H, dd, J = 3.4, 5.8 Hz), 2.24 (1H, m), 2.50 (1H, d, J = 15.6 Hz), 2.64 (1H, dd, J = 2.9, 5.8 Hz), 3.66 (1H, d, J = 5.4 Hz), 4.32 (1H, d, J = 5.8 Hz). Análisis calculado para C13H20N2O6«HCI« . H20: C, 43.79; H, 6.56; N, 7.86. Encontrado: C, 43.77; H, 6.20; N, 7.47. EMAR calculado para C13H2iN206, 301.1400. Encontrado, 301.1400. Ejemplo 24 Sal de clorhidrato del ácido (1 S.2S,4S,5R,6R)-2-(2'S-amino- 4'-metil-pentanoilamino)-4-hidroxi-bicicloF3.1.01-hexano-2,6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'S-rer-butoxicarbonilamino-4'-metil-pentanoilamino)-4-h¡drox¡-bic¡clo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (460 mg, 1.11 mmol, Preparación 25), con la excepción de que el grupo protector fer-butoxicarbonilo se retira por tratamiento con HCI 4M en dioxano. Rendimiento: 371 mg (95%). [cc]2D3 = +4 (c=0,5, MeOH). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.01 (3H, d, J = 5.8 Hz), 1.03 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.54 (1H, t, J = 2.9 Hz), 1.63-1.82 (4H, m), 2.14 (1H, dd, J = 2.9, 5.8 Hz), 2.49 (1H, d, J = 15.6 Hz), 2.62 (1H, dd, J = 2.9, 5.8 Hz), 3.83-3.86 (1H, m), 4.32 (1H, d, J = 5.8 Hz). Análisis calculado para 014?22?206·???·1.4H20: C, 44.72; H, 6.92; N, 7.45. Encontrado: C, 44.52; H, 6.57; N, 7.13. EMAR calculado para C14H23N205, 315.1556. Encontrado, 315.1569. Ejemplo 25 Sal de clorhidrato del ácido (1 S,2S,4S,5R.6R)-2-(2'S-amino- 3'S-metil-pentanoilamino)-4-hidroxi-biciclor3.1.01-hexano-2,6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2,S-fer-butoxicarbonilamino-3'S-metil-pentanoilamino)-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxíIico (410 mg, 0.99 mmol, Preparación 26), con la excepción de que el grupo protector fer-butoxicarbonilo se retira por tratamiento con HCI 4M en dioxano. Rendimiento: 330 mg (95%). ]2D = +8 (c=0.5, MeOH). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 0.99 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.08 (3H, t, J = 7.3 Hz), 1.17-1.27 (1H, m), 1.53 (1H, t, J = 2.9 Hz), 1.59-1.65 (1H, m), 1.76 (1H, dd, J = 5.8, 15.6 Hz), 1.96-2.00 (1H, m), 2.14 (1H, dd, J = 2.9, 5.8 Hz), 2.46 (1H, d, J = 15.6 Hz), 2.66 (1H, dd, J = 2.9, 5.8 Hz), 3.70 (1H, d, J = 5.4 Hz), 4.31 (1H, d, J = 5.8 Hz). Análisis calculado para Ci4H22N206«1 ,1 HCI«1.2H20: C, 44.71; H, 6.83; N, 7.45. Encontrado: C, 44.38; H, 6.51; N, 7.08.
EMAR calculado para C14H23N2O6, 315.1556. Encontrado, 315.1566. Ejemplo 26 Ácido (1 S.2S.4S.5R.6R -2-r2'-(2-am¡no-acetilam¡no acetilamino1-4-hidroxi-bic¡clo[3.1.01hexano-2,6-dicarboxílico Se trata éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-[2'-(2-íer-butoxi-carbonilamino-acetilam¡no)-acetilamino]-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (360 mg, 0.77 mmol, Preparación 27) con un exceso de HCI 4M en dioxano y se agita durante 40 minutos; se concentra al vacío. Se agrega acetato de etilo y se concentra. Se trata el sólido con THF (3M) y LiOH 1N (3.0 equiv.). Se agita durante 1 hora y luego se agrega HCI 1N hasta pH = 3. Se concentra la reacción al vacío. Se purifica por medio de resina de intercambio iónico DOWEX® 50WX8-100. Rendimiento: 188 mg (78%). [a]¾3 = +3.92 (c=0.51, H20). RMN H 300 MHz, D20) d 1.43 (1H, t, J = 2.9 Hz), 1.53 (1H, dd, J = 5.9, 15.4 Hz), 1.98 (1H, m), 2.23-2.31 (2H, m), 3.70 (2H, s), 3.82 (2H, d aparente, J = 1.1 Hz), 4.16 (1H, d, J = 5.9 Hz). EMAR calculado para C12Hi8N307, 316.1145. Encontrado, 316.1123. Ejemplo 27 Ácido ( 1 S,2S,4S,5R.6R)-2-r2'-(2S-amino-propionilamino)- acet¡laminol-4-h¡droxi-bicicloí3.1.01hexano-2,6-d¡carboxílico Se prepara según el procedimiento general descrito en el Ejemplo 26 usando éster dietílico del ácido (1 S^S^S.SR, 6R)-2-[2'-(2S-fer-butoxicarbon¡Iam i no-propio nilamino)-acetilamino]-4-hidroxi-biciclo[3. .0]hexano-2,6-dicarboxílico (410 mg, 0.84 mmol, Preparación 28). Rendimiento: 200 mg (72%). [ ]¾3 = +23,53 (c = 0,51, H20). RMN H 300 M Hz, D20) d 1.36 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.37 (1H, t, J = 3.3 Hz), 1.49 (1H, dd, J = 5.9, 15.4 Hz), 1.91 (1H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 2.15 (1H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 2.27 (1H, d, J = 15.4 Hz), 3.79 (2H, s), 3.95 (1H, c, J = 7.0 Hz), 4.13 (1H, d, J = 5.5 Hz). EMAR calculado para C13H19 3O7, 330.1301. Encontrado, 330.1290. Ejemplo 28 Clorhidrato del ácido M S.2S.4S.5R,6R)-2-(2'S-amino-3'-fenil- propionilamino)-4-hidroxi-biciclor3.1.01hexano-2,6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'-fer-butoxicarbonilamino-3'-fenil-propionilamino)-4-hidroxi-biciclo-[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (400 mg, 0.89 mmol, Preparación 29). Rendimiento: 290 mg (85%). [a]¾3 = +3.64 (c=0.55, MeOH). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.45 (1H, t, J = 3.3 Hz), 1.60 (1H, dd, J = 5.5, 15.4 Hz), 2.03 (1H, dd, J = 2.6, 5.9 Hz), 2.37 (1H, d, J = 15.4 Hz), 2.55 (1H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 2.90 (1H, dd, J = 8.4, 14.3 Hz), 3.22 (1H, dd, J = 5.1, 14.7 Hz), 3.97 (1H, dd, J = 5.5, 8.8 Hz), 4.21 (1H, d, J = 5.5 Hz), 7.19 - 7.31 (5H, m). EMAR calculado para Ci7H2iN206, 349.1400. Encontrado, 349.1388. Anal. Calculado para C17H2iN206 ¦ HCI · H20: C, 50.69; H, 5.76; N, 6.95; Cl, 8.80. Encontrado: C, 50.66; H, 5.65; N, 6.85; Cl, 8.20. MS encontrado 349.0 [M + H]+. Ejemplo 29 Clorhidrato del ácido MS.2S.4S.5R.6R)-2-(2'S-Amino-4'- carbamoil-but¡r¡lamino)-4-hidroxi-biciclo[3.1.01hexano-2.6- dicarboxílico El compuesto del título se prepara disolviendo éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-[2'-fer-butoxicarbonilamino-4'-(tritil-carbamoil)-butirilamino]-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (1.18 mmol, Preparación 30) en THF (10 mi) y tratando la solución con LiOH 2.5 N (12 mi). Se deja agitando la solución 3 horas y luego se ajusta hasta pH = 2 con HCI 2.5 N. El producto se extrae cuatro veces con acetato de etilo, se seca sobre sulfato sódico anhidro y se concentra al vacío produciendo un polvo blanco. El producto diácido (0.74 mmol) se disuelve en 1 ,2-dicloroetano (3.7 mi) y se trata con anisol (0.3 mi) y ácido trifluoroacético (3.72 mi). La mezcla de reacción se agita a 23°C durante 2.5 horas y luego se concentra al vacío produciendo un aceite marrón. El aceite marrón se disuelve en agua, se extrae cinco veces con diclorometano, se concentra la capa acuosa al vacío, se trata con HCI 1 N (0.74 mi) y se liofiliza. El sólido se trata con otra porción de HCI 1 N (2 mi) y se liofiliza de nuevo proporcionando 446 mg (cuantitativo) del compuesto del título. [o]¾3 = +8.16 (c=0.49, MeOH). RMN H (400 MHz, CD3OD) d 1.60 (1H, t, J = 3.3 Hz), 1.79 (1H, dd, J = 5.5, 15.4 Hz), 2.10 - 2.17 (3H, m), 2.46 - 2.55 (3H, m), 2.60 (1H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 3.94 (1H, t, J = 6.2 Hz), 4.33 (1H, d, J = 5.5 Hz). EM encontrado 330.0 [M + H]+, 351.9 [M + Na]+. EMAR calculado para Ci3H19N307, 330.1301. Encontrado, 330.1295. Ejemplo 30 Bisclorhidrato del ácido (1 S.2S.4S.5R,6R)-2-(2'S.6'-diamino- hexanoilam¡no)-4-hidroxi-biciclor3. .OIhexano-2,6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'S,6'-bis-fer-butox¡carbonilamino-hexano¡lamino)-4-h¡droxi-biciclo- [3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (Preparación 31). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.47-1.59 (3H, m), 1.66-1.78 (2H, m), 1.84 (1H, dd, J = 5.4, 15.2 Hz), 1.91 (2H, m), 2.16 (1H, dd, J = 3.4, 5.7 Hz), 2.45 (1H, d, J-15.7 Hz), 2.66 (1H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 2.97 (2H, t, J = 7.3 Hz), 3.92 (1H, t, J = 6.4 Hz), 4.33 (1H, d, J = 5.4 Hz). EM encontrado 330.0 [M + H]+. Ejemplo 31 Ácido MS.2S.4S.5R,6R)-2-(2'S-am¡no-3'-carbamoil- propionilamino)-4-hidrox¡-b¡c¡clor3.1.Olhexano-2,6- dicarboxílico Se prepara el compuesto del título disolviendo éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-[2'-fer-butoxicarbonilamino-3'-(tritil-carbamoil)-propionilamino]-4-hidroxi-b¡c¡clo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (1.07 mmol, Preparación 32) en THF (12 mi) y tratando la solución con LiOH 2.5 N (12 mi). Se deja agitando la solución 3 horas y se ajusta a pH = 2 con HCI 2.5 N. Se extrae el producto cuatro veces con acetato de etilo, se seca sobre sulfato sódico anhidro y se concentra al vacío produciendo un polvo blanco. El producto diácido (1.22 mmol) se disuelve en 1,2-dicloroetano (6 mi.) y se trata con anisol (1 mi) y ácido trifluoroacético (6 mi). Se deja la reacción agitando a 23°C durante 10 horas y luego se concentra al vacío produciendo un aceite marrón. Se diluye el aceite marrón con éter dietílico y el producto cristaliza como un sólido blanco. Se filtra y se lava con porciones abundantes de éter. Se disuelve el sólido en una cantidad mínima de agua, se trata con HCI 0.5 N (5 mi) y se liofiliza 3 veces proporcionando 386 mg (90%) del compuesto del título. [oc]¾3 = 0 (c=0.5, MeOH). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.59 (1 H, t, 3.4 Hz), 1.76 (1H, dd, J = 5.9, 16.1 Hz), 2.11 (1H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 2.53 (1 H, d, J = 16.1 Hz), 2.55 (1 H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 2.74 (1H, dd, J = 9.8, 17.1 Hz), 2.95 (1H, dd, J = 3.9, 17.1 Hz), 4.19 (1H, dd, J = 3.9, 9.8 Hz), 4.32 (1 H, d, J = 5.9 Hz). MS encontrado 316.0 [ + H]+, 337.9 [M + Na] + . EMAR calculado para 338.0964. Encontrado, 338.0953. Ejemplo 32 Ácido MS.2S.4S.5R.6R)-2-r2'S-amino-3'-M H -indo l-3-i Impropio ni lam i nol-4-h id roxi-bi ciclo [3.1.Olhexano-2,6- dicarboxílico Se prepara disolviendo éster dietílico del ácido 2-[2'-íer-butoxicarbonilamino-3'-(1'-re/"-butoxicarbonil-1H-indol-3'-il)-propionilamino]-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6- dicarboxílico (0.93 mmol, Preparación 33) en THF (11 mi) y tratando la solución con LiOH 2.5 N (11 mi). Se deja la solución agitando 3 horas y luego se ajusta hasta pH = 2 con HCI 2.5 N. Se extrae el producto cuatro veces con acetato de etilo, se seca sobre sulfato sódico anhidro y se concentra al vacío produciendo un polvo blanco. Se disuelve el producto diácido (0.78 mmol) en una solución de HCI 4M en dioxano (20 mi) y se deja agitando la mezcla de reacción 3 horas a 23°C. La mezcla de reacción se concentra, se diluye con diciorometano y se concentra de nuevo al vacío. Se disuelve el producto crudo en metanol, se aplica a una placa de cromatografía radial (gel de sílice), se deja secar por centrifugación y se eluye con MeOH (10%)/NH4OH (1%)/CHCI3 hasta MeOH (60%)/NH4OH (2%)/CHCI3. El producto se disuelve en agua y se liofiliza dos veces proporcionando 139 mg (46%) del compuesto del título. [a]¾3 = +19.23 (c = 0.52, MeOH). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.43 (1H, t, J = 2.9 Hz), 1.57 (1H, dd, J = 5.9, 15.2 Hz), 2.05 (1H, dd, J = 3.4, 6.4 Hz), 2.41 (1H, d, J = 14.7 Hz), 2.46 (1H, dd, J = 2.4, 5.9 Hz), 3.15 (1H, dd, J = 5.4, 14.7 Hz), 3.49 (1H, dd, J = 5.4, 14.7 Hz), 4.05 (1H, dd, J = 5.4, 9.3 Hz), 4.17 (1H, d, J = 5,4 Hz), 7.09 (2H, m), 7.27 (1H, s), 7.37 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.75 (1H, d, J = 7.8 Hz). EM encontrado 388.0 [M + H]+, 409.9 [M + Na] + .
EMAR calculado para C19H2i 306, 388.1508. Encontrado, 388.1502. Ejemplo 33 Sal de clorhidrato del ácido (1 S.2S,4S.5R.6R)-4-hidroxi-2- F(pirrol¡dina-2'S-carbon¡n-aminol-biciclo[3.1.0lhexano-2.6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(1 '-ter-butoxicarbonil-pirrol¡d¡na-2'S-carbonil)-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]-hexano-2,6-dicarboxílico (Preparación 34), con la excepción de que el grupo protector íer-butoxicarbonilo se retira por tratamiento con HCI 4M en dioxano. [a]¾3 = -40 (c = 0.5, MeOH). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.59 (1H, t, J = 3 Hz), 1.78 (1H, dd, J = 5.9, 15.3 Hz), 2.06 (4H, m), 2.42 (1H, m), 2.59 (2H, m), 3.35 (m, 3H), 4.27 (1H, m), 4.32 (1H, d, J = 5.9 Hz). EMAR calculado para C13H19N206, 299.1243. Encontrado, 299.1242.
Anal. Calculado para C13H18N206 ¦ HCI · H20: C, 44.26; H, 6.00; N, 7.94. Encontrado: C, 44.13; H, 5.78; N, 7.62. Ejemplo 34 Sal de clorhidrato del ácido (1 S.2S.4S.5R.8R)-2-r2'S-amino- 3'-(4-h¡drox¡-fenin-propionilamino1-4-h¡droxi- b¡cicloí3.1.0lhexano-2,6-dicarboxíl¡co Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-[2'S-fer-Butoxicarbonilamino-3'-(4-íer-butoxicarboniloxi-fenil)-propionilamino]-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (Preparación 35), con la excepción de que el grupo protector íer-butoxicarbonilo se retiró por tratamiento con HCI 4 en dioxano. Rendimiento: 199 mg (50%). [a]¾3 = +8 (c=0.5, eOH). RMN H (400 MHz, CD3OD) d 1.48 (1H, t, J = 3 Hz), 1.62 (1H, dd, J = 5.9, 15.3 Hz), 2.03 (1H, m), 2.38 (1H, d, J = 15.3Hz), 2.55 (1H, m), 2.8 (1H, dd, J = 8.9, 14.4 Hz), 3.12 (1H, dd, J = 5.4, 14.4 Hz), 3.90 (1H, c, J = 5.4 Hz), 4.21 (1H, d, J = 5.9 Hz), 6.7 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.05 (2H, d, J = 8.4 Hz). EMAR calculado para C17H2iN207, 365.1349. Encontrado, 365.1374. Anal. Calculado para C 7H2oN207 · 1.1 HCI · 1.1 H20: C, 48.12; H, 5.54; N, 6.60. Encontrado: C, 47.89; H, 5.37; N, 6.50. Ejemplo 35 Sal bisamónica del ácido MS.2S.4S.5R.6R)-2-(2'S-amino-4'- metilsufan il-but¡rilamino)-4-hid roxi-bi ciclo G3.1.OIhexano-2,6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'S-íer-butoxicarbonilamíno-4'-metiIsulfan¡l-but¡r¡lamino)-4-hidrox¡-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (Preparación 36), con la excepción de que el grupo protector fer-butoxicarbonilo se retiró por tratamiento con HCI 4M en dioxano. El compuesto final se cargó con MeOH en una placa Chromatotron de 2 mm y se eluyó con CHCI3/MeOH/ H4OH 50/49.5/0.5. Durante el transcurso de la elución la cantidad de NH4OH se aumentó hasta el 1% produciendo el compuesto zwitteriónico. Rendimiento: 136 mg (37%). [a]¾3 = +28 (c=1.0, MeOH). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 1.63 (1H, dd, J = 6.0, 15.6 Hz), 2.03 (2H, m), 2.12 (3H, s), 2.18 (1H, m), 2.35 (1H, m), 2.49 (1H, d, J = 15.6 Hz), 2.65 (2H, t, J = 8.4 Hz), 3.84 (1H, t, J = 6.0 Hz), 4.19 (1H, d, J = 6.0 Hz). EMAR calculado para C13H2i 206S, 333.1120. Encontrado, 333.1105. Ejemplo 36 Ácido MS.2S.4S.5R.6R)-2-r2'S-(2S-amino-propionilamino)- propionilamino1-4-hidroxi-biciclor3.1.0.1hexano)-2.6- dicarboxílico Se agita éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-[2'S-(2S-fer-butoxicarbonil-amino- propionilamino)pro ionilamino]-4-h¡drox¡-bic¡clo[3.1.0.]hexano-2,6-dicarboxílico (0.045 g, 0.1 mmol, Preparación 39) en 1 mi de HCI 4N en dioxano durante 40 minutos luego se concentra la reacción al vacío. El material crudo se agita en THF (5 mi) y LiOH 0.5N (0.35 mmol) durante 1 hora. Se ajusta el pH =2 con HCI 0.5 N y se concentra la reacción. El producto crudo se purifica usando cromatografía de intercambio catiónico (Dowex® 50X8-100; se eluye con piridina al 10% /H20) proporcionando 19 mg (55.3%) del compuesto del título. RMN 1H (300 MHz, D20) d 1.23 (3H, d, J = 7.3 Hz), 1.36 (3H, d, J = 7.3 Hz), 1.40-145 (1H, m), 1.50 (1H, dd, J = 5.5, 15.4 Hz), 1.90-1.96 (1H, m), 2.20 (1H, dd, J = 2.6, 5.9 Hz), 2.29 (1H, d, J = 15.4 Hz), 3.90 (1H, c, J = 7.3 Hz), 4.15-4.22 (2H, m). EM (ES) m/z 342.1 [M-1]\ EMAR calculado para C14H22 3O7, 344.1458. Encontrado, 344.1457. Ejemplo 37 Ácido (1 S, 2S.4S.5 R.6 R)-2-r2'S-(2-amino-aceti lamín ploro pión i lamín ol-4-h id roxi-biciclo[3. .0.lhexano-2,6- dicarboxílico Ester dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-[2'S-(2-íer-butoxicarbonilamino-acetilamino)-propionilamino]-4-hidroxi-biciclo[3.1.0.]hexano-2,6-dicarboxílico (0.12 g, 0.25 mmol, Preparación 40) en THF (5 mi) y LiOH 1 N (1.0 mmol) durante 1 hora. La mezcla se ajusta a pH = 2 usando HCI 1 N y se concentra. El material crudo se agita en una solución saturada de HCI (g) acetato de etilo a 0°C. Se elimina el HCI (g) en exceso purgando con N2 y se concentra la reacción. El producto crudo se purifica usando cromatografía de intercambio catiónico (Dowex® 50X8-100; se eluye con piridina al 10% /H20) proporcionando 0.06 g (72.9%) del compuesto del título. [cc]¾3 = -42.11 (c = 0.57, HzO). RMN 1H (300 MHz, D20) d 1.21 (3H, d, J = 7.3 Hz), 1.39 (1 H, m), 1.50 (1H, dd, J = 5.7, 15.8 Hz), 1.91 (1 H, m), 2.15 (1 H, dd, J = 2.6, 5.9 Hz), 2.28 (1H, d, J = 15.0 Hz), 3.65 (2H, s), 4.14 (1H, d aparente, J = 5.9 Hz), 4.20 (1H, c aparente, J = 7.3 Hz).
EMAR calculado para C13H20N3O7, 330.1301. Encontrado, 330.1299. Ejemplo 38 Ácido MS.2S.4S.5R.6R)-2-r2'S-(2S-amino-4-metil- pentano¡lam¡no)-proprionilamino1-4-hidroxi- b¡ciclo[3.1.01hexano-2,6-dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-[2'-(2S-íer- butoxicarbonilamlno-4-metiI-pentanoiIamino)-propionil-amino]- 4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (Preparación 41). Rendimiento: 0.21 g (57 %, 0.50 mmol) de un sólido blanco. [a]¾3 = -3.64° (c = 0,55, MeOH). RMN 1H (300 MHz, CD3OD) d 0.89 (3H, d, J = 4.4 Hz), 0.91 (3H, d, J = 4.0 Hz), 1.29 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.52 (1H, t, J = 3.3 Hz), 1.55-1.67 (4H, m), 1.97 (1H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 2.38 (1H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 2.45 (1H, d, J = 15.4 Hz), 3.75-3.80 (1H, m), 4.18 (1H, d, J = 5.9 Hz), 4.33 (1H, c aparente, J = 7.0 Hz), Análisis calculado para 017?27?307· 1 , 0 HCI«1.6 ?20: C, 45.30; ?, 6.98; ?, 9.32; CI, 7.87. Encontrado: C, 44.95; ? , 6.54; ?, 9.12; CI, 7.53. HREM (ES) calculado para 017?28?307 [? + ?]+, 386,1927. Encontrado, 386.1911. Ejemplo 39 Ácido (1 S,2S.4S,5R.6R)-2-r2'S-(2-amino-3-metil-butirilamino)- propionilamino]-4-hidroxi-biciclor3.1.01hexano-2.6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dletílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-[2'-(2S-rer-butoxicarbon¡lamino-3-metil-butirilamino)-propionilamino]-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (Preparación 42). Rendimiento: 0.15 g (88 %, 0.37 mmol) de un sólido blanco. [a]¾3 = -15.69° (c = 0.51, MeOH). RMN 1H (300 MHz, CD3OD) d 0.92 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.95 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.28 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.52 (1H, t, J = 2.9 Hz), 1.60 (1H, dd, J = 5.9, 15.4 Hz), 1.98 (1H, dd, J = 3.3, 5.9 Hz), 2.03-2.15 (1H, m), 2.39 (1H, dd, J = 2.9, 6.2 Hz), 2.45 (1H, d, J = 15.4 Hz), 3.56 (1H, d, J = 5.5 Hz), 4.18 (1H, d, J = 5.9 Hz), 4.33 (1H, c aparente, J = 7.0 Hz), 8.82 (1H, s). Análisis calculado para Ci6H25N307'1.0 HCI«1.5H20: C, 44.19; H, 6.72; N, 9.66; CI, 8.15. Encontrado: C, 44.32; H, 6.48; N, 9.14; CI, 7.66. HREM (ES) calculado para C16H26 307 [M + H]+, 372.1771. Encontrado, 372.1758. Ejemplo 40 Mesilato del ácido (1 R.2S.4R.5R.6R)-2-(2'S-2'- am¡nopropion¡namino-4-fluoro-biciclor3.1.QIhexano-2,6- dicarboxílico monohidrato Se agregan 16 mi de agua seguido por 11.4 mi (175 mmol) de ácido metanosulfónico a una solución turbia de ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(2'S-2'-(ter-butoxicarbo n ¡lamino )propioniI)a mi ??-4-fIuoro-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico (32.8 g, 87.5 mmol, Preparación 52) en 295 mi de acetona a reflujo suave, gota a gota, produciendo una solución amarillo apagado transparente que da una suspensión después de 5 minutos. Se agita durante 130 minutos, se retira la fuente de calor y se agregan otros 295 mi de acetona durante 30 minutos. Se enfría la suspensión hasta temperatura ambiente, luego se agita otras 2 horas. Se filtra la suspensión, se lava con acetona (2 x 82 mi) y se seca a vacío a 45 °C durante 16 horas produciendo 31.5 g (93%) del compuesto del título como un sólido blanco.
El material se puede cristalizar además. Se mezclan 30.5 g del producto crudo anterior con 152.5 mi de acetona y 35 mi de agua. Se calienta hasta 55 °C y se agrega agua (3.66 mi) para efectuar la disolución completa. Se diluye la solución con 61 mi de acetona y se siembra opcionalmente. Se retira la fuente de calor y se deja que la mezcla se enfríe gradualmente hasta que haya comenzado una buena nucleación. Se agregan 396 mi de acetona a la suspensión durante 70 minutos, luego se agita a temperatura ambiente durante unas 3 horas adicionales. Se filtra, se lava con acetona (3 x 91 mi) y se seca a vacío a 45 °C varias horas (de forma típica durante la noche) proporcionando 27.7 g (recuperación del 91%) del compuesto del título como un sólido blanco, p.f. (DSC) 200 °C. [a]25D +34° (c 1.0, CH3OH) RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) d 12.76 (s amplio, 2H), 9.18 (s 1H), 8.07 (s amplio, 3H), 5.50-5.36 (m, 1H), 3.87 (d, 1H, J = 6.8 Hz), 2.82 (dd, 1H, J = 14, 8.0 Hz), 2.38 (s, 3H), 2.25 (m, 2H), 1.96 (t, 1H, J = 3.0 Hz), 1.39 (m, 1H), 1.37 (d, 3H, J = 6.8 Hz). RMN 13C 100 MHz (DMSO-d6) d 173.1, 172.3, 169.7, 92.8 (d, Desdoblamiento C-F), 63.2 (d, Desdoblamiento C-F), 48.0, 39.7, 36.4 (d, Desdoblamiento C-F), 32.5 (d, Desdoblamiento C-F), 29.3 (d, Desdoblamiento C-F), 19.3 (d, Desdoblamiento C-F), 16.9. FTIR (KBr) 3461 (w), 3379 (w), 3269 (m), 2653 (s), 2591 (s), 2529 (s), 1724 (s), 1691 (s), 1353 (m), 1287 (s), 1271 (s), 1256 (s), 1212 (s), 1147 (s), 1052 (s), 1024 (s), 787 (m) cm-1. Análisis calculado para C12H2 FN2O9S: C, 37.11; H, 5.45; N, 7.21. Encontrado: C, 37.12; H, 5.45; N, 7.16. Ejemplo 41 Ácido M R.4S,5S.6S)-4-(2'S-4'-met¡ltio-2'- aminobutanoninamino-2.2-dioxo-2A6-t¡a-biciclor3. .Olhexano- 4.6-dicarboxílico monohidrato Se calienta una suspensión de sal monosódica del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S-4'-metilt¡o-2'-(íer-butoxicarboniI)aminobutanonil)amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]-hexano-4,6-dicarboxílico (110.04 g, 225.3 mmoi, Preparación 55) en acetona (110 mi) y agua (550 mi) hasta 55 °C. Se agrega ácido clorhídrico concentrado (56 mi, 675.8 mmol) gota a gota a la suspensión agitada para proporcionar gradualmente la disolución Una vez completada la adición, se agita la solución a 55 °C durante 2 horas. Se retira la fuente de calor y se deja enfriar la solución hasta temperatura ambiente. Se filtra la solución y se enjuaga con 20 mi de agua. Se agrega lentamente hidróxido sódico 2N (165 mi, 330 mmol) a la solución para elevar el pH hasta 1.71, momento en el que se ocurre la precipitación. Se agita durante 10 minutos; se forma una suspensión clara y el pH cae hasta 0.98. Se agrega a la suspensión resultante más hidróxido sódico 2N (62 mi, 124 mmol) para elevar el pH hasta 3.06, seguido por agitación durante 3 horas produciendo un pH final de 3.24. La suspensión se filtra, se lava con agua (2 x 165 mi) y se seca a 45 °C durante 15 horas proporcionando 73.27 g (rendimiento en peso del 85%del compuesto del título como un sólido blanco. p.f. (DSC) 203°C. [a]25D +13,4 (c 1.19, 1N HCI). RMN H 500 MHz (D20) d 3.99 (t, 1H, J = 6.0 Hz), 3.93 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 3.50 (dd, 1H, J = 1.0, 4.0 Hz), 3.12 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.95 (dd, 1H, J = 4.0, 7.0 Hz), 2.48 (t, 2H, J = 8.0 Hz), 2.33 (t, 1H, J = 4.0), 2.09 - 1.98 (m, 5H). RMN 13C (125 MHz, D2O) d 173.50, 172.60, 169.18, 61.66, 54.76, 52.19, 42.55, 31.70, 30.10, 28.09, 23.53, 14.14. FTIR (ATR) 3558.54 (s), 3024.05 (s), 2959.87 (s), 1748.83 (s), 1692.89 (s), 1681.99 (s), 1617.50 (s), 1567.63 (s), 1497.65 (s), 1314.11 (s), 1282.22 (s), 1263.26 (s), 1239.01 (s), 1101.46 (s), 884.62 (s), 809.95 (s), 773.46 (s) cm-1. Análisis calculado para C12H 18N2O7S2. H2O: C, 37.49; H, 5.24; N, 7.29. Encontrado: C, 37.34; H, 5.04; N, 7.15. Ejemplo 42 Tosilato del ácido (1 R.4S,5S,6S -4-í2'S-4'-metiltio-2'- aminobutanonil)am¡no-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclor3.1.Olhexano- 4.6-dicarboxílico Se calienta hasta 75°C una mezcla de diácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S-4'-metiltio-2'-(íer-butoxicarbonil)aminobutanonil)amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (118.09 g corregidos, 253 mmol, Preparación 56) y ácido p-toluenosulfónico monohidrato (54 g, 278 mmol) en tolueno (1180 mi), que resulta en una suspensión espesa. Se agita la suspensión a reflujo durante 165 minutos. Se retira la fuente de calor y se deja enfriar la suspensión hasta temperatura ambiente, seguido por agitación durante la noche. Se filtra la suspensión, se lava con tolueno (3 x 240 mi) y se seca al vacío a 45°C durante 22 horas proporcionando 134.92 g (98% rendimiento del compuesto del título). p.f. (DSC) 255 °C. [a]25D +8.3 (c 1.2, CH3OH). RMN 1H 500 MHz (CD3OD) d 7.71 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.24 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 4.14 (d, 1H, J = 15 Hz), 4.00 (t, 1H, J = 6.0 Hz), 3.54 (dd, 1H, J = 4.0, 7.0 Hz), 3.13 (d, 1H, J = 15 Hz), 3.01 (dd, 1H, J = 4.0, 7.0 Hz), 2.60 (t, 2H, J = 8.0 Hz), 2.49 (t, 1H, J = 4.0 Hz), 2.37 (s, 3H), 2.19 - 2.12 (m, 5H). RMN 13C (125 MHz, CD3OD) d 170.49, 169.69, 168.99, 142.18, 140.67, 182.73, 125.79, 60.26, 54.76, 52.21, 42.44, 30.90, 30.77, 27.20, 22.33, 20.17, 13.96. FTIR (ATR) 3091.19 (w), 1730.91 (s), 1668.22 (s), 1563.97 (s), 1518.49 (s), 1312.69 (m), 1247.46 (s), 1212.05 (s), 1156.33 (s), 1123.09 (s), 1035.95 (s), 1011.36 (s), 892.41 (s), 814.02 (s), 683.69 (s) cm-1. Ejemplo 43 Mesilato del ácido (1 R.4S.5S.6S)-4-(2'S-4'-metiltio-2'- aminobutanoninamino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0lhexano- 4,6-dicarboxílico Se calienta hasta 85°C una suspensión del diácido (1R,4S,5S,6S)-4-(2'S-4'-metiltio-2,-(íer-butoxicarbonil)aminobutanonil)amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico (1.08 g, 2.31 mmol, Preparación 56) en 13 mi de propionitrilo. Se agrega agua (540 µ?) a la suspensión, luego se agrega ácido metanosulfónico, gota a gota (225 µ?, 3.47 mmol). Se agita la suspensión durante 90 minutos. Se retira la fuente de calor y se agrega propionitrilo (30 mi). La suspensión se enfría hasta temperatura ambiente y se agita durante 90 minutos. Se filtra, se lava con propionitrilo (3 x 2.7 mi) y se seca a 45 °C durante la noche produciendo 1.04 g (97% del compuesto del título. p.f. (DSC) 244 °C. [CC]25D +10.2 (c 1.16, CH3OH). RMN H 500 MHz (CD3OD) d 4.16 (d, 1H, J = 15 Hz), 4.00 (t, 1H, J = 6.0 Hz), 3.54 (dd, 1H, J = 4.0, 7.0 Hz), 3.15 (d, 1H, J = 15 Hz), 3.01 (dd, 1H, J = 4.0, 7.0 Hz), 2.71 (s, 3H), 2.61 (t, 2H, J = 8.0), 2.51 (t, 1H, J = 4.0), 2.20 - 2.14 (m, 5H). RMN 13C (125 MHz, CD3OD) d 170.50, 169.71, 169.00, 60.27, 54.78, 52.18, 42.43, 38.35, 30.90, 30.78, 28.20, 22.35, 13.96. FTIR (ATR) 3055.57 (m), 1725.90 (s), 1693.60 (s), 1527.33 (s), 1528.96 (s), 1320.89 (s), 1176.86 (s), 1152.70 (s), 1118.55 (s), 1051.42 (s), 816.49 (s), 786.63 (s) cm-1. Análisis calculado para C 2H 18N2O7S2.CH4O3S: C, 33.76; H, 4.79; N, 6.06. Encontrado: C, 33.98; H, 4.82; N, 5.98. Ejemplo 44 Clorhidrato del ácido ( 1 R.2S.5f?.6f?)-2-(2'R- aminopropionil)amino-6-fluoro-biciclor3.1.0lhexano-2,6- dicarboxílico Se agregan 1.13 mi (2,8 mmol) de LiOH 2.5 N a una solución de 0.20 g (0.47 mmol) del Isómero A de la Preparación 60 en THF (1.2 mi) y se agita la mezcla resultante durante la noche a temperatura ambiente. Se lava la solución con éter, se neutraliza a 0°C con HCI 1N y se extrae con EtOAc (3 x 3 mi). Se secan las capas orgánicas combinadas sobre MgS04 anhidro y se concentran bajo presión reducida. Se disuelve el producto crudo en 3.76 mi de HCI 1N en EtOAc y se agita durante la noche. Se decanta el disolvente, se lava con éter y se seca el producto con una corriente de Ar, produciendo el compuesto del título (83 mg, 57% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN H (300 Hz, CDCI3): 1.28 (d, 3H, J = 7.1 Hz), 1.64-1.69 (m, 1H), 1.86-2.02 (m, 1H), 2.11-2.21 (m, 3H), 2.54 (d, 1H, J = 7.1 Hz), 3.84 (c, 1H, J = 7.1 Hz). Ejemplo 45 Clorhidrato del ácido (1 S.2ff.5S.6S)-2-(2'R- am¡nopropionil)amino-6-fluoro-biciclor3.1.01hexano-2.6- dicarboxílico Comenzando con una solución del Isómero B de la Preparación 60, se prepara el compuesto del título esencialmente como en el Ejemplo 44. RMN 1H (300 MHz, CDCI3): 1.30 (d, 3H, J = 7.1 Hz), 1.59-1.65 (m, 1H), 1.85-2.03 (m, 1H), 2.05-2.25 (m, 3H), 2.53 (d, 1H, J = 6.6 Hz), 3.85 (c, 1H, J = 7.1 Hz). Ejemplo 46 Clorhidrato del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'S- aminopropionil)amino-4-hidroxi-biciclof3.1.01hexano-2,6- dicarboxílico Se prepara según el Procedimiento general C usando éster dietílico del ácido (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(2'S-fer-butoxicarbonilamino-propionilamino)-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]-hexano-2,6-dicarboxíIico (0.47 g, 1.1 mmol, Preparación 37) proporcionando 0.23 g (67.7%) del compuesto del título. [a]¾3 = -4.1 (c=0.49, MeOH). RMN 1H (CD3OD) d 1.51 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.56 (1H, t, J = 2.9 Hz), 1.77 (1H, dd, J = 5.8, 15.8 Hz), 2.1-2.13 (1H, m), 2.52 (1H, d, J = 16.1 Hz), 2.57 (1H, dd, J = 2.9, 5.9 Hz), 3.88 (1H, dd, J = 7.0, 14.3 Hz), 4.32 (1H, d, J = 5.5 Hz). Anal. Calculado para C11H17N206 · 1.1 HCI · 0.9 H20: C, 40.12; H , 5.80; N, 8.53. Encontrado: C, 39.85; H, 5.41; N, 8.36. EMAR calculado para Ci 1 H16N206Na, 295.0906. Encontrado, 295.0883. Los profármacos de la presente invención se pueden evaluar frente al compuesto principal correspondiente por diversos ensayos de recaptación celular. Estos ensayos pueden proporcionar datos comparativos que permitan a un experto en la técnica identificar compuestos que son absorbidos rápidamente en la célula proporcionando una exposición superior. Dos de tales ensayos incluyen el Ensayo de Recaptación de Gly-Sar y el Ensayo Caco-2 descritos a continuación. Ensayo de recaptación de Gly-Sar Se ha observado que algunos fármacos peptidomiméticos administrados por vía oral se absorben a través del sistema transportador de péptidos intestinal, Yang, et al., Pharm. Res. 16(9) (1999). En particular, el transportador de péptidos intestinal hPepTI se ha estudiado para determinar su expresión de la inhibición de la recaptación de peptidilo y su correspondiente nivel de reconocimiento dentro de una célula. Meredith, et al, Eur. J. Biochem., 267, 3723-3728 (2000). Además, la caracterización del mecanismo de absorción intestinal de aminoácidos en el transportador hPepTI se ha señalado como una estrategia eficaz para identificar absorciones de fármacos orales mejoradas. Han, et al., Polym. Prepr. (Am. Chem. Soc, Div. Polym. Chem) 40(1): 259-260 (1999); Sawada, et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 291(2): 705-709 (1999). La patente de Estados Unidos No. 5,849,525 describe métodos que se podrían usar para medir el nivel de afinidad de los compuestos de la presente invención con el transportador hPepTI. Por ejemplo, las células de Ovario de Hámster Chino (CHO) transfectadas de modo estable que sobreexpresan el transportador hPepTI se podrían usar para ensayar compuestos de la presente invención. Las células CHO controlarían la recaptación de Gly-Sar que, cuando se produce la recaptación en presencia de compuestos profármacos de la presente invención lo hace en una cantidad mayor que cuando la célula esté libre de compuestos profármacos de la presente invención será indicio de actividad agonista; y que cuando la recaptación de los compuestos profármacos de la presente invención sea menor que la recaptación en ausencia de compuestos profármacos de la presente invención será indicio de actividad inhibidora. Los compuestos de la presente invención presentan por lo general valores de CE50 de menos de 5 mM. Ensayo de Caco-2 Otro método particular para medir la recaptación de los compuestos de la presente invención en células es para estudiar el vehículo transportador de péptidos de la línea celular intestinal humana Caco-2. Se realizan pases de células de adenocarcinoma humano (Memorial Sloan-Kettering Cáncer Center, Rye, NY, y/o ATCC, Rockville, MD) en medio Eagle modificado por Dulbecco que contenía suero bovino fetal al 10% y solución de aminoácidos no esenciales en Medio Mínimo Esencial al 1% sin adición de piruvato sódico o antibióticos. Estas células estaban exentas de micoplasma y se usaron entre los pases número 28 y 40. Se desarrollan en discos multipocillo revestidos de colágeno para las medidas de flujo entre 5 a 10 x 104 células durante 13-18 días y se reemplaza el medio cada dos a tres días. La recaptación de fármaco se mide a 37°C usando un compuesto de ensayo empleando una técnica de aglomerado-bandeja (véase Gazzola, et al., Anal. Biochem. 115, 368-74 (1981)). El tampón de flujo es solución salina equilibrada con Earle exenta de bicarbonato que contiene 25 mM de Mes valorado hasta pH 6.0 con KOH y cloruro de colina en lugar de cloruro sódico. La osmolalidad del tampón de flujo se ajusta hasta 300±5 mosmol/kg con cloruro de colina. Se usa [3H]lnulina como marcador para el fluido extracelular que se adhiere a las células durante el procedimiento de lavado para estimar el tiempo cero para determinar la velocidad de recaptación. Se preparan a diario soluciones nuevas de compuestos de ensayo y dipéptidos. Al finalizar los experimentos, las células se lisan en agua, se pueden detectar los compuestos de ensayo en lisados celulares usando CL/EM/EM. La proteína se mide por el método descrito en Smith, et al., Anal. Biochem. 150, 76-85 (1985). La recaptación se mide durante 40 minutos. Las velocidades de recaptación inicial se calculan en la región lineal de la regresión del transcurso de tiempo y un tiempo cero estimado como se ha descrito antes usando regresión lineal. La inhibición porcentual se calcula en base a la velocidad de recaptación control medida en ausencia de dipéptido. Para ejemplos de este ensayo de Caco-2, véase Dantzig & Bergin, Biochim. Biophys. Acta 1027, 211-17 (1990). Exposición in vivo Medida por Concentración de Plasma de Rata Para estudiar la exposición in vivo de compuestos de Fórmula II después de la dosificación oral de compuestos de Fórmula I en comparación con compuestos de Fórmula II, se llevan a cabo estudios que miden las concentraciones plasmáticas del compuesto respectivo de Fórmula II en ratas. Se obtienen 344 ratas macho maduras Fischer (190-270 gramos) de Harían Sprague-Dawley, Cumberland, IN, USA y se aclimatan en las instalaciones de estudio durante 3 días. El día 4 se disuelven los compuestos de ensayo en agua tamponada (1mg/ml = compuesto de ensayo/fosfato diácido potásico 20 mM, pH = 2) y se administran por vía oral en forma de dosis única de 5 mg/kg. Se recolectan muestras de sangre por punción cardiaca o a través del seno orbital (último punto de tiempo) a 0.5 y 1 hora o, como alternativa, a 1 y 3 horas. Las muestras de plasma se almacenan a -20°C en presencia de fluoruro de fenilmetilsulfonilo, un inhibidor de proteasa, antes del análisis. Las muestras de plasma y los compuestos patrón internos se tratan previamente por extracción en fase sólida (soporte SAX, metanol/agua/ácido acético diluido). Como se muestra en las Tablas 1A y 1B siguientes, las concentraciones plasmáticas (ng/ml) del compuesto de Fórmula II respectivo para cada uno de los compuestos de ensayo se determinan por CL/EM/EM y se presentan como la suma de las concentraciones a los puntos de tiempo de muestra de 0.5 y 1 hora o, como alternativa, a 1 y 3 horas.
Tabla 1A Ensayo de Exposición In Vivo Compuesto Exposición de la Rata (ng/ml de clorhidrato del ácido (1R,4S,5S.6S)-4-(2'S- Aminopropionil)amino-]-2,2-dioxo-2Xc- tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico) Ejemplo 1 2251 ng/ml (después de 10 mg/kg oralmente Forma no profármaco del 1521 ng/ml (después de 5 mg/kg oralmente Ejemplo 1 3981 ng/ml (después de 10 mg/kg oralmente Tabla 1B Ensayo de Exposición In Vivo Compuesto Exposición de la Rata (ng/ml de clorhidrato del ácido (1R,2S,4R,5R,6R)- 2-(2'S-Aminopropionil)amino-4-fluorobiciclo [3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico) Ejemplo 14 5271 ng/ml (después de 5 mg/kg oralmente Forma no profármaco del 1162 ng/ml (después de 5 mg/kg oralmente Ejemplo 14 1342 ng/ml (después de 10 mg/kg oralmente Como se muestra en las Tablas 1A y 1B, cuando se administran por vía oral a ratas, los compuestos de la presente invención presentan una concentración plasmática comparable a la del compuesto principal. Esto demuestra que los compuestos de la presente invención se convierten en los compuestos principales, los compuestos de Fórmula II, in vivo. Los compuestos de la presente invención se formulan preferiblemente antes de la administración. Por tanto, otro aspecto de la presente invención es una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. Las formulaciones farmacéuticas se pueden preparar por procedimientos bien conocidos por un experto ordinario en la técnica. En la preparación de las composiciones de la presente invención, el ingrediente activo se mezclará normalmente con un vehículo, o estará diluido por un vehículo, o estará inmerso en un vehículo y puede estar en forma de cápsula, sobrecito, papelillo u otro envase. Cuando el vehículo sirve como diluyente, éste puede ser un material sólido, semisólido o líquido que actúe como vehículo, excipiente o medio para el ingrediente activo. Las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, pildoras, polvos, tabletas, sobrecitos, grageas, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles, pomadas que contienen, por ejemplo, hasta 10% en peso de compuesto activo, cápsulas de gelatina dura y blanda, supositorios, soluciones inyectables estériles y polvos envasados estériles. Algunos ejemplos de vehículos, excipientes y diluyentes adecuados incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma, goma arábiga, fosfato de calcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, agua, jarabe, metilcelulosa, metil y propil hidroxibenzoatos, talco, estearato de magnesio y aceite mineral. Las formulaciones pueden incluir adicionalmente agentes lubricantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes conservantes, agentes edulcorantes o agentes aromatizantes. Las composiciones de la invención se pueden formular de modo que proporcionen una liberación rápida, sostenida o retardada del ingrediente activo después de la administración al paciente empleando procedimientos bien conocidos en la técnica. Las composiciones se formulan preferiblemente en una forma de dosis unitaria, conteniendo cada dosis de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 500 mg de ingrediente activo, de preferencia de aproximadamente 25 mg a aproximadamente 300 mg de ingrediente activo. Como se usa en la presente, el término "ingrediente activo" se refiere a un compuesto incluido en el alcance de la Fórmula I. El término "forma de dosis unitaria" se refiere a una unidad físicamente discreta adecuada como dosificación unitaria para sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéutico adecuado.

Claims (27)

  1. REIVINDICACIONES compuesto de Fórmula I (I) caracterizado porque: A es H-(Q)p-; Q se selecciona independientemente, en cada aparición, del grupo amlnoacllo; p es un número entero de 1 a 10; X es O, S, SO, S02 o CR3R4; R3 es fluoro, X'OR5, SO3H, tetrazol-5-ilo, CN, P03R62, hidroxi, N02, N3, (CH2)mCOOR5a, (CH2)mP03R6a2, NHCONHR50 o NHS02R5c y R4 es hidrógeno; o cada uno de R3 y R4 representa fluoro; o R3 y R4 representan juntos =0, = NOR7, =CR8R9, =CHCOOR5b, =CHP03R6a2 o =CHCN; o uno de R3 o R4 representa amino y el otro representa carboxilo; X' representa un enlace, CH2 o CO; m es un número entero de 1 a 3; R5, R5a, R5b, R5c, R7, R8 y R9 son, de forma independiente, un átomo de hidrógeno; un grupo alquilo (1-6C) opcionalmente substituido; un grupo alquenilo (2-6C) opcionalmente substituido; un grupo alquinilo (2-6C) opcionalmente substituido; un grupo aromático opcionalmente substituido; un grupo heteroaromático opcionalmente substituido; un grupo carbocíclico no aromático; un grupo heterocíclico no aromático; un grupo carbocíclico monocíclico no aromático condensado con uno o dos grupos aromáticos o heteroaromáticos monocíclicos; o un grupo heterocíclico monocíclico no aromático condensado con uno o dos grupos aromáticos o heteroaromáticos monocíclicos; R6 y R6a representan independientemente hidrógeno o un grupo alquilo (1-6C); R10 es hidrógeno o fluoro; y R11 es hidrógeno, fluoro o hidroxi; o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
  2. 2. Un compuesto o sal tal y como se describe en la reivindicación 1, con la condición de que el compuesto o sal no sea uno en el que X es CR3R4, en donde R3 es fluoro y R4 es hidrógeno, p es 1 y Q es L-alanilo; o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
  3. 3. Un compuesto o sal tal y como se describe en la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque A es H-(Q)p-; Q se selecciona independientemente, en cada aparición, del grupo aminoacilo; p es un número entero de 1 a 3; X es O, S, SO, S02 o CR3R4; R3 es fluoro o hidroxi y R4 es hidrógeno; o R3 y R4 representan juntos =0; R10 es hidrógeno o fluoro; y R11 es hidrógeno, fluoro o hidroxi.
  4. 4. Un compuesto o sal tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 3, caracterizado porque Q es un aminoacilo derivado de un aminoácido natural.
  5. 5. Un compuesto o sal tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 4, caracterizado porque X es SÜ2-
  6. 6. Un compuesto o sal tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 4, caracterizado porque X es CR3R4, R3 es fluoro y R4 es hidrógeno.
  7. 7. Un compuesto o sal tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 4, caracterizado porque X es CR3R4, R3 es hidroxi y R4 es hidrógeno.
  8. 8. Una sal farmacéuticamente aceptable tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizada porque es una sal de adición de ácidos preparada con un ácido que proporciona un anión farmacéuticamente aceptable; una sal de adición de bases preparada con una base que proporciona un anión farmacéuticamente aceptable para un compuesto que contiene una parte ácida; o un compuesto zwitteriónico que contiene grupos con carga de manera opuesta.
  9. 9. Un compuesto tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizado porque A es H-(Q)p-; Q es L-alanilo; p es 1; X es S02 o CR3R4; R3 es fluoro y R4 es hidrógeno; RIO es hidrógeno; y R11 es hidrógeno; o la sal de clorhidrato, sal tosilato, sal mesilato, sal esilato, sal besilato o sal monosódica del mismo.
  10. 10. La sal farmacéuticamente aceptable tal y como se describe en la reivindicación 9, caracterizada porque es clorhidrato del ácido (1 f?,4S,5S,6S)-4-(2'S-aminopropionil)- amino]-2,2-dioxo-2A -tia-biciclo[3.1.0.]hexano-4,6-dicarboxílico o tosilato del ácido (1 R,4S,5S,6S)-4-(2'S-2'-aminopropionil)amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0.]hexano-4,6-dicarboxílico.
  11. 11. El compuesto tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizado porque es ácido (1 ft,4S,5S,6S)-4-(2'S-4'-metilt¡o-2'-aminobutanoni!)am¡no-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3. .0]hexano-4,6-dicarboxílico o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
  12. 12. El compuesto tal y como se describe en la reivindicación 11, caracterizado porque es ácido (1 ft,4S,5S,6S)-4-(2'S-4'-metiltio-2'-aminobutanonil)amino-2,2-dioxo-2A6-tia-biciclo[3.1.0]hexano-4,6-dicarboxílico monohidrato.
  13. 13. La sal farmacéuticamente aceptable tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizada porque es clorhidrato del ácido 1 S,2S,4S,5R,6R-2-(2'S-aminopropionil)amino-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico.
  14. 14. Un compuesto tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizado porque A es H-(Q)p-; Q es L-alanilo; p es 1 ; X es CR3R4; R3 es fluoro y R4 es hidrógeno; es hidrógeno; y R11 es hidrógeno; o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
  15. 15. El compuesto o sal tal y como se describe en la reivindicación 14, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste de: a) clorhidrato del ácido 1 R,2S,4R,5R,6R-2-(2' S-2'- aminopropionil)amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]hexano- 2,6-dicarboxílico; b) mesilato del ácido 1 R,2S,4R,5R,6R-2-(2' S-2!- aminopropionil)amino-4-fluorobiciclo[3. .0]hexano- 2,6-dicarboxílico; c) esilato del ácido 1 R,2S ,4R,5R,6R-2-{2' S-2'- aminopropionil)amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]hexano- 2,6-dicarboxílico; d) besilato del ácido 1 R,2S,4R,5R,6R-2-(2' S-2'- aminopropionil)amino-4-fIuorobiciclo[3.1.0]hexano- 2,6-dicarboxílico; e) tosilato del ácido 1 R,2S,4R,5R,6R-2-{2'S-2'- aminopropionil)amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]hexano- 2,6-dicarboxílico; f) ácido 1 ,2S,4R,5R,6R-2-(2'S-2'- aminopropionil)amino-4-fluorobiciclo[3.1.0]hexano- 2,6-dicarboxílico; y g) sal monosódica del ácido 1 R,2S,4R,5R,6R-2-(2' S- 2,-aminopropionil)amino-4- fluorobiciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico.
  16. 16. La sal farmacéuticamente aceptable tal y como se describe en la reivindicación 15, caracterizada porque es mesilato del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(2'S-2'-aminopropionil)amino-4-fluoro-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico.
  17. 17. La sal farmacéuticamente aceptable tal y como se describe en la reivindicación 16, caracterizada porque es mesilato del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(2'S-2'-aminopropionil)amino-4-fluoro-biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxílico monohidrato.
  18. 18. Un procedimiento para preparar un compuesto de Fórmula I, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizado porque comprende acilar un compuesto de fórmula (¡i) (H) con un aminoacilo correspondiente de Fórmula III PgN-A- (Ul) en la que PgN es un grupo protector de nitrógeno; a continuación, para cualquiera de los procedimientos anteriores, cuando se protege un grupo funcional usando un grupo protector, retirar el grupo protector; ' a continuación, para cualquiera de los procedimientos anteriores: cuando se requiere una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de Fórmula I, hacer reaccionar la forma básica de tal compuesto de Fórmula I con un ácido proporcionando un contraión farmacéuticamente aceptable; o para un compuesto de Fórmula I que tiene una parte ácida, hacer reaccionar la forma ácida de tal compuesto de Fórmula I con una base que proporciona el catión farmacéuticamente aceptable; o para un compuesto zwitteriónico de Fórmula I, neutralizar la forma de sal de adición de ácido o la forma sal de adición de base de tal compuesto de Fórmula I; o por cualquier otro procedimiento convencional.
  19. 19. Un método para afectar a los receptores de glutamato metabotrópico ligados a cAMP en un paciente, caracterizado porque comprende administrar a un paciente que requiere neurotransmisión modulada de aminoácidos excitadores, una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto tal y como se describe en la reivindicación 1.
  20. 20. Un método para administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula II, en la que X y R10 son como se definen tal y como se describe en la reivindicación 1, cuyo método está caracterizado porque comprende administrar a un paciente que requiere neurotransmisión modulada de aminoácidos excitadores, una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto tal y como se describe en la reivindicación 1.
  21. 21. Un método para tratar un trastorno neurológico en un paciente, caracterizado porque comprende administrar al paciente que necesita del tratamiento mismo, una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto tal y como se describe en la reivindicación 1.
  22. 22. El método tal y como se describe en la reivindicación 21, caracterizado porque el trastorno neurológico es, deficiencias cerebrales después de derivación cardiaca e injerto; isquemia cerebral; traumatismo de la médula espinal; traumatismo craneal; enfermedad de Alzheimer; corea de Huntington; esclerosis lateral amiotróf ¡ca; demencia inducida por SIDA; hipoxia perinatal; lesión neuronal hipoglucémica; lesión ocular y retinopatía; trastornos cognitivos; enfermedad de Parkinson idiopática e inducida por fármacos; espasmos musculares; cefaleas migrañosas; incontinencia urinaria; tolerancia, deshabituación, abandono y deseo irreprimible de drogas; abandono del tabaco; émesis; edema cerebral; dolor crónico; trastornos del sueño; convulsiones; síndrome de Tourette; trastorno con déficit de atención; y discinesia tardía.
  23. 23. El método tal y como se describe en la reivindicación 22, caracterizado porque el trastorno neurológico es tolerancia, deshabituación, abandono y deseo irreprimible de drogas; o abandono del tabaco.
  24. 24. Un método para tratar un trastorno psiquiátrico en un paciente, caracterizado porque comprende administrar al paciente que necesita del tratamiento mismo, una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto tal y como se describe en la reivindicación 1.
  25. 25. El método tal y como se describe en la reivindicación 24, caracterizado porque el trastorno psiquiátrico es esquizofrenia, ansiedad y trastornos relacionados, depresión, trastornos bipolares, psicosis y trastornos obsesivo-compulsivos.
  26. 26. El método tal y como se describe en la reivindicación 25, caracterizado porque el trastorno psiquiátrico es ansiedad y trastornos relacionados.
  27. 27. Una formulación farmacéutica, caracterizada porque comprende, en asociación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, un compuesto de Fórmula I, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
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