MXPA02011682A

MXPA02011682A - Uso de antagonistas de interleuquina-4 y composiciones de los mismos.

Info

Publication number: MXPA02011682A
Application number: MXPA02011682A
Authority: MX
Inventors: John D Pluenneke
Original assignee: Immunex Corp
Priority date: 2000-05-26
Filing date: 2001-05-25
Publication date: 2003-05-14
Also published as: US20030124121A1; ES2549767T3; CA2409267A1; US8679487B2; WO2001092340A2; DE16192152T1; EP2292665B1; US20090104662A1; US9587026B2; US20180171016A1; US20110002913A1; CY1118951T1; US7186809B2; EP2292665A1; EP3190126A1; US20070041976A1; EP2990420B1; DK2990420T3; ATE551363T1; EP2990420A1

Abstract

Metodos para tratar condiciones medicas inducidas por interleuquina-4 implican administrarle un antagonista de IL-4 a un paciente afligido con tal condicion. Los antagonistas de IL-4 adecuados incluyen, pero no se limitan a, receptores de IL-4 (tales como un receptor de IL-4 humana soluble), anticuerpos que unen IL-4, anticuerpos que unen 1L-4R, muteinas de IL-4 que se unen a IL-4R pero que no inducen una respuesta biologica, moleculas que inhiben la transduccion de señal inducida por IL-4, y otros compuestos que inhiben un efecto biologico que es resultado de la union de IL-4 a un superficie celular IL-4R. Los anticuerpos particulares proporcionados en la presente incluyen anticuerpos monoclonales humanos generados por los procedimientos que involucran la inmunizacion de ratones transgenicos. Tales anticuerpos humanos pueden cultivarse contra el receptor de IL-4 humana. Algunos de los anticuerpos inhiben tanto las actividades biologicas inducidas por antagonistas como las inducidas por IL-13.

Description

USO DE ANTAGONISTAS DE INTERLEUQUINA-4 Y COM POSICION ES DE LOS MISMOS ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La ¡nlerleuquina-4 (I L-4) , aníeriormenfe conocida como facíor de eslimulación de células B, o BSF-1 , se caracíerizaba originalmenle por su capacidad de esíimular la proliferación de células B en respuesía a las bajas conceníraciones de anficuerpos dirigidos a la inmunoglobulina superficial. La I L-4 ha demoslrado poseer un espectro mucho más amplio de actividades biológicas, que incluyen co-esíimulación de desarrollo de células T, células cebadas, granulocitos, megacariocitos, y eritrocilos. Además, la I L-4 esíimula la proliferación de varias líneas celulares dependienles de I L-2 e I L-3, induce la expresión de moléculas complejas de hisíocompaíibilidad principal de clase I I en las células B resíaníes, y mejora la secreción de los isolipos IgE e lgG 1 por células B eslimuladas. La I L-4 se encueníra asociada con una respuesía inmunológica de lipo TH2, siendo una de las ciíoquinas segregadas por las células TH2. Se ha idenfificado y caracterizado I L-4 murina y humana, incluyendo la clonación de cADNs de I L-4 y la determinación de las secuencias de aminoácido de nucléoíido y codificadas. (Ver Yokoía, et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85: 5894, 1 986; Noma eí al . , Nature 319:640, 1 986; Grabslein el al. , J. Exp. Med. 763: 1405, 1 986; y la Patente de E. U . No. 5, 01 7,691 .) La I L-4 se une a receptores de superficie celular paríiculares, lo cual da como resultado la íransducción de una señal biológica a células íales como las diversas células efecloras inmunes. Se describen los recepíores de I L-4, y la información de secuencia de ADN y aminoácidos presentada, en Mosley et al., Cell 59:335-348, 20 de Oclubre, 1989 (IL-4R murina); Idzerda eí al., J. Exp. Med. 171:861-873, Mazo de 1990 (IL-4R humana); y la Palente de E.U. No. 5,599,905. El receplor de IL-4 descrilo en estas publicaciones es referido algunas veces como IL-4Ra. Se han reportado otras proteínas por estar asociadas con IL-4Ra en algunos tipos celulares, y por ser componentes de complejos de receptor de IL-4 multi-subunidad. Una de lales subunidades es IL-2R?, también conocida como IL-2R?c. (Ver la discusión de los complejos IL-4R en Sato et al., Current Opinión in Cell Biology, 6:174-179, 1994.) Se ha reporlado que IL-4Ra es un componenle de algunos complejos de receplor de I L-13 mulli-subunidad (Zurawski el al., J. Biol.. Chem. 270 (23), 13869, 1995; de Vries, J. Allergy Clin. Immunol. 102(2): 165, Agoslo de 1998; y Callard et al. Immunology Today, 17(3):108, Marzo de 1996). Se ha involucrado la I L-4 en un cierto número de padecimiento, ejemplos los cuales son la alergia y el asma. Continúan los estudios de las propiedades biológicas de la I L-4, en un esfuerzo por identificar las actividades adicionales asociadas con la ciloquina pleiolrópica, y para elucidar el papel que puede desempeñar la IL-4 en diversos procesos y enfermedades biológicas.

BREVE DESCRI PCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona métodos para tralar algunas condiciones inducidas por I L-4, que comprenden adminisírar un anlagonisía de I L-4 a un pacienle afligido con íal condición . También se proporcionan composiciones para su uso en íales méíodos, que comprenden una caníidad eficaz de un aníagonisía de I L-4 y un diluyente adecuado, excipieníe o portador. La I L-4 endógena puede contacíarse con un aníagonista de I L-4 en méíodos alternos, tales como aquellos que involucran procedimientos ex vivo. Enlre las condiciones a tralarse de acuerdo con la preseníe invención se encueníran la artriíis séptica, dermatiíis herpetiform is, uríicaria idiopáíica crónica, colitis ulcerante, escleroderma, marcado con cicalriz hiperlrófica, mal de Whipple, hiperplasia de próslaía benigna , padecimieníos pulmonares en los cuales la I L-4 desempeña un papel, condiciones en las cuales la inlerrupción de la barrera epiíelial inducida por I L-4 desempeña un papel, padecimieníos del sisíema digestivo en los cuales la I L-4 desempeña un papel, reacciones alérgicas al medicamenlo, mal de Kawasaki, crisis de células falciformes, síndrome de Churg-Sírauss, mal de Grave, pre-eclampsia, síndrome de Sjogren , síndrome linfoproliferaníe autoinmune, anemia hemolítica auloinmune, esófago de Barreíí, uveítis auloinmune, luberculosis, y nefrosis. Los antagonistas de I L-4 encuentran fambién uso como coadyuvaníes a la inmunoíerapia alérgica y como adyuvanles de vacunas. Los anlagonisías de I L-4 incluyen, pero no se limiían a , recepíores de I L-4 (I L-4R) , aníicuerpos que unen I L-4, aníicuerpos que unen I L-4R, muíeínas de I L-4 que se unen a I L-4R pero que no inducen una respuesía biológica, moléculas que inhiben la íransducción de señal inducida por IL-4, y oíros compuestos que inhiben un efecto biológico que es resullado de la unión de I L-4 a una superficie celular I L-4R. Los ejemplos de receplores de I L-4 son formas adecuadas del recepíor de I L-4 humana del NO DE I D DE SEC: 2. Los aníicuerpos particulares proporcionados en la presente incluyen anticuerpos monoclonales humanos generados por procedimienlos que involucran la inmunización de ralones transgénicos. Tales aníicuerpos humanos pueden dirigirse coníra el receplor de IL-4 humana, por ejemplo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DI BUJOS Las Figuras 1 A-C presenlan la secuencia de nucléotido de la región de codificación de un cADN de receptor de I L-4 humana. También se présenla la secuencia de aminoácidos codificada por el cADN . Se aisló el clon de cADN de una biblioleca de cADN derivada de una l ínea de células T humanas T22. La proteína codificada comprende (del término N al íérmino C) un péptido de señal íerminal en N , seguida de un dominio exlracelular, una región de íransmembrana (subrayada) , y un dominio ciíoplásmico, como se describió más delalladameníe a conlinuación. El ADN y las secuencias de aminoácido de las Figuras 1 A a 1 C se presentan también en los NOS. DE I D DE SEC: 1 y 2, respecíivamenle. Las Figuras 2A a 2C represenlan gráficamente la inserción objetivo de un caseíe neo en el sitio de Sma I del exón µ 1 . La consírucción se empleó para generar ralones íransgénicos, como se describe en el Ejemplo 2. La Figura 2A es una diagrama esq uemático de la esírucíura esquemálica de la esírucíura genómica del lugar µ . Las cajas rellenas represenían los exones µ . La Figura 2B es un diagrama esquemático del vector objetivo CmD. Las líneas punteadas denofan aquellas secuencias genómicas µ incluidas en la construcción. Las secuencias de plásmido no se muestran. La Figura 2C es un diagrama esquemálico de lugar µ objeíivo en el cual se ha inseríado el cásele neo en µ 1 . Las Figuras 3A y 3B presenlan la secuencia de nucléotido de un vector designado pGP 1 k, como se describe en el Ejemplo 3 a continuación citado. Esta secuencia de nucleótido se presenta también en el NO DE I D DE SEC:4. La Figura 4 presenta una alineación de la región variable de las secuencias de aminoácido de cadena ligera (región V , designada Vk para la cadena kappa variable) para varios anticuerpos cultivados contra la I L-4R humana. Estos anlicuerpos y secuencias se describen adicionalmenle en los Ejemplos 6, 8, y 9 a coníinuación citados. La primera secuencia en la alineación es para un aníicuerpo designado 1 B7. En las secuencias para los demás anlicuerpos, se muesíran los residuos que difieren del residuo enconírado en esa posición en 1 B7 , y los residuos que son idénlicos al residuo enconírado en esa posición en 1 B7 se indican por "-". La Figura 5 présenla una alineación de la región variable de las secuencias de aminoácido de cadena pesada (VH) para los diversos anlicuerpos cullivados contra la I L-4R humana. Esíos anlicuerpos y secuencias se describen adicionalmeníe en los Ejemplos 6, 8, y 9 a coníinuación. La primera secuencia en la alineación es para un aníicuerpo designado 1 B7. En las secuencias para los otros aníicuerpos, se muestran los residuos que difieren del residuo encontrado en la posición en 1 B7, y los residuos que son idénlicos al residuo enconírado en esa posición en 1 B7 se indican por "-" .

DESCRI PCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La présenle invención proporciona mélodos para tralar algunas condiciones inducidas por I L-4, y para inhibir acíividades biológicas de la iníerleuquina-4 (I L-4) in vivo. Un méíodo comprende adminislrar un anlagonisla de IL-4 a un pacienle afligido con íal condición . Se proporcionan lambién las composiciones para utilizarse en tales métodos para tralar condiciones inducidas por I L-4. Entre las condiciones a íratarse de acuerdo con la presente invención se encueníran la artritis séptica/reacíiva , dermaliíis herpeliformis, uríicaría idiopáfica crónica, escleroderma, marcado con cicalriz hipertrófica, mal de Whipple, hiperplasia de próstaía benigna, padecimieníos pulmonares en los cuales la I L-4 desempeña un papel, condiciones en las cuales la inlerrupción de la barrera epiíelial inducida por I L-4 desempeña un papel , padecimienfos del síslema digesíivo en los cuales I L-4 desempeña un papel , que incluyen enfermedad de iníesíino inflamado y oirás condiciones inflamalorias en el tracto gastroiníesíinal, reacciones alérgicas al medicamenlo, mal de Kawasaki , mal de células falciformes (incluyendo crisis de células falciformes) , síndrome de Churg-Sírauss, mal de Grave, pre-eclampsia, síndrome de Sjogren , síndrome linfoproliferante auíoinmune, anemia hemolílica auíoinmune, esófago de Barrell, uveífis auíoinmune, luberculosis, y nefrosis, como se describe más defalladamenle a conlinuación. Los anlagonisías de I L-4 encuentran también uso como coadyuvantes a la inmunoterapia alérgica y como adyuvaníes de vacunas. Los aníagonisías de I L-4 que pueden emplearse incluyen aquellos compuesíos que inhiben una actividad biológica de la I L-4. La(s) actividad(es) biológica(s) de I L-4 que se inhibe(n) por un aníagonista de acuerdo con los mélodos proporcionados en la présenle son aclividades que desempeñan un papel en la enfermedad particular a tratarse. Los antagonisías adecuados incluyen , pero no se limitan a, receptores de I L-4 (I L-4R) , aníicuerpos que unen I L-4, anlicuerpos que unen I L-4R, muteínas de I L-4 que se unen a I L-4R pero que no inducen respuesías biológicas, moléculas que inhiben la fransducción de señal inducida por I L-4, y otros compuestos que inhiben un efecto biológico que son resultado de la unión de I L-4 a una superficie celular I L-4R. Los ejemplos de íales aníagonisías de I L-4 se describen más delalladameníe a coníinuación . Las modalidades particulares de la invención se refieren a novedosos anticuerpos, polipéptidos, y moléculas de ácido nucleico, como se describe a continuación. Los anticuerpos proporcionados en la presente incluyen , pero no se limitan a, anticuerpos monoclonales humanos que se unen a un receptor de I L-4 humana, y que funcionan como antagonistas tanío de I L-4 como de I L-3.

Indicaciones La presenie invención proporciona mélodos que comprende administrar un antagonista de I L-4 a un paciente afligido con cualquier número de condiciones inducidas por I L-4. Las condiciones inducidas por I L-4 incluyen las condiciones ocasionadas o exacerbadas, direcíamenle o indireclamenle, por la I L-4. Oíros faclores o citoq uinas también pueden desempeñar un papel en tales condiciones, pero la I L-4 induce o media la condición en cierto grado, es decir, al menos en parte. Las actividades biológicas de I L-4 se median a íravés de la unión a receptores de superficie celular específica, referidos como receptores de interleuquina-4 (I L-4R). Las condiciones inducidas por I L- 4 incluyen aquellas que surgen de respuesfa biológicas que son resultado de la unión de I L-4 a un receptor de I L-4 naíiva en una célula, o que pueden inhibirse o suprimirse eviíando que la I L-4 se una a un receplor de I L-4. Las condiciones que pueden tratarse incluyen, pero no se limitan a, padecimientos médicos caracterizados por expresión anormal o de exceso de I L-4, o por una respuesta de huésped anormal a la producción de I L-4. Los ejemplos adicionales son condiciones en los cuales la producción de aníicuerpo inducido por I L-4, o la proliferación o el influjo de un fipo de célula particular, desempeñan un papel. Los padecimienlos inducidos por I L-4 incluyen aquellos en los cuales I L-4 induce la sobreregulación de receplores de I L-4 o la producción acenluada de ofra proleína que desem peñe un papel en una enfermedad (por ejemplo, otra citoquina) . Un mélodo para íraíar un mamífero, incluyendo un pacienle humano, que liene tal padecimiento médico comprende administrarle un anlagonisía de I L-4 al mam ífero o de oíra manera coníacíar la I L-4 endógena con un antagonisla, por ejemplo, en un procedimiento ex vivo. Las condiciones que pueden traíarse de acuerdo con la présenle invención incluyen, pero no se limitan a, artritis séptica/reactiva, dermatitis herpetiformis, urticaria (especialmente urticaria idiopáíica crónica) , úlceras, inflamación gástrica, inflamación mucosal, colitis ulcerante, Mal de Crohn, enfermedad de intestino inflamado, otros padecimieníos del sisfema digesíivo en los cuales I L-4 desempeña un papel (por ejemplo, inflamación inducida por I L-4 de parle del íracto gastrointestinal), condiciones en las cuales la interrupción de la barrera inducida por I L-4 desempeña un papel (por ejemplo, condiciones caracterizadas por la función de la barrera epitelial disminuida en el pulmón o el Irado gaslroiníeslinal), escleroderma, marcado con cicalriz hiperlrófica, mal de Whipple, hiperplasia de próslata benigna, condiciones pulmonares inducidas por I L-4 (incluyendo las lisiadas a conlinuación) , reacciones alérgicas al medicamento, mal de Kawasaki, mal o crisis de células falciformes, síndrome de Churg-Strauss, Mal de Grave, pre-eclampsia, síndrome de Sjogren , síndrome linfoproliferanle auloinmune, anemia hemol ílica autoinmune, esófago de Barrett, uveítis autoinm une, tuberculosis, nefrosis, pemphigus vulgaris o bullous pemphigoid (enfermedades de ampollado autoinmunes) , y miastenia grave (una enfermedad muscular auíoinmune). Los anlagonislas de I L-4 encuenlran íambién uso como adyuvanles a la inmunoterapia alérgica y como adyuvantes de vacuna, especialmente cuando dirigen la respuesta inmunológica hacia una respuesta de TH 1 serán benéficos para tralar o evitar la enfermedad en cuestión .

Artritis séptica/reactiva Pueden emplearse antagonistas de I L-4 para tralar la arlritis séptica, los cuales se conocen también como artritis reactiva o artritis bacteriana. La artritis séptica puede acfivarse por (como resultado de, o desarrollarse subsecueníe a) la infección con fales microbios como Staphylococcus aureus, Chlamydia trachomatis, Yersinia, por ejemplo, Y. enterocolitica, Salmonella, por ejemplo, S. enteritiditis, Shigella y Campylobacter. Se ha reportado que S. aureus es el principal patógeno humano en la artritis séptica, responsable de la mayoría de casos. Las respuestas de Th2 de I L-4 y dependientes de I L-4 desempeñan papeles en la mejora de la artrilis séplica. El(los) anlagonista(s) de I L-4 se emplea(n) de acuerdo con la invención , para inhibir I L-4 y fambién para suprimir la respuesta de Th2 en pacienles que tienen artriíis séptica o en riesgo de desarrollar artrilis séptica . La I L-4 aumenta la persistencia bacleriana y la carga bacíeriana en las arliculaciones, inhibiendo el despeje de las baclerias. Pueden emplearse anlagonislas de I L-4 para ayudar al despeje de bacíerias asociadas con la arfriíis reacíiva, reduciendo así las manifeslaciones clínicas tales como la hinchazón en las articulaciones. Pueden adminisírarse anlagonisías de I L-4 a un pacienle humano afligido con artrilis séptica, a fin de reducir la inflamación de las articulaciones mediada por I L-4. En un planleamiento, se inyecta un anlagonista en una articulación, por ejemplo, en el fluido sinovial en la rodilla. El uso de antagonistas de I L-4 puede beneficiar a pacientes que tengan (o se encuentren en riesgo de) artrilis séplica al suprimir una respuesta de TH2 y mejorar una respuesta de TH 1 contra la infección . Las citoquinas de TH2 pueden contribuir a la persistencia bacteriana en la articulación , mientras que una respuesta de TH 1 desempaña un papel para eliminar las bacíerias. Los anlagonisías pueden adminisírarse a pacienles infeclados con bacíerias u oíros microbios lales como aq uellos lisiados anteriormente, para evitar el desarrollo de la artritis séptica. El(los) antagonista(s) puede(n) administrarse después del diagnóstico con tal infección, pero antes del desarrollo de los síntomas clínicos de la artritis séptica .

Mal de Whipple Tropheryma whippelii es la bacteria causaníe del Mal de Whipple, también conocido como lipodistrofia inteslinal y lipophagia granulomatosis. La enfermedad se caracteriza por esíealorrea, linfadenopalía frecuentemente generalizada, artritis, fiebre y tos. También se reporla en pacientes con Mal de Whipple una abundancia de macrófagos "espumosos" en la lamina propria yeyunal , y los nodos linfáticos que contienen partículas positivas de ácido-schiffi periódico con apariencia baciliforme por microscopía elecfrónica (Steadman's Medical Dictionary, 26a Edición , Williams & Wilkins, Ballimore, MD, 1 995). El uso del(os) anlagonisla(s) de I L-4 puede beneficiar a pacienles que tengan (o se encuentren en riesgo de desarrollar) el Mal de Whipple, recuperando un balance normal entre los componentes TH 1 y TH2 de la respuesta inmunológica del pacieníe. La producción crecienle de I L-4 (un citoquina de lipo TH2) y los niveles disminuidos de algunas citoquinas de tipo TH 1 se han asociado con el Mal de Whipple. Las citoquinas de TH2 pueden contribuir a la persisíencia baclerial, mientras que una respuesta de TH 1 desempaña un papel en el despeje de las bacíerias causaníes. Los anlagonistas de I L-4 pueden administrarse a pacientes infectados con T. Whippelii, sea que el pacieníe exhiba o no los síntomas clínicos del Mal de Whipple.

Dermatiíis herpefiformis La dermalitis herpeliformis, conocida fambién como mal de Duhring , es una condición crónica cutánea caracterizada por las lesiones culáneas de ampollas, depósiíos de IgA cuíáneo, y prurilo. Los pacienles tienen un padecimiento cutáneo inmunoampollado con una enteropatía sensible al gluíen asociado, que se media por una respuesla inmunológica de Th2. El(los) anlagonista(s) se administra(n) de acuerdo con la presente invención, para inhibir la I L-4 y la respuesta Th2, mejorando así la cicatrización de lesiones actuales y para reducir o evilar la formación de ampollas en las superficies de cuerpo exlensor.

Marcado con cicaíriz hiperírófica De acuerdo con la preseníe invención , el(los) anlagonisía(s) de I L-4 se adminislra(n) a pacientes que tienen , o que son suscepíibles, a desarrollar, marcado con cicalriz hipertrófica. En un método proporcionado en la presente, se administra un antagonista de I L-4 a un paciente con quemadura. Se considera que una respuesta inmunológica a la quemaduras y a oirás heridas desempeña un papel en la palogénesis del marcado con cicatriz hipertrófica. Se ha reportado producción creciente de ciloquinas de tipo TH2, incluyendo la I L-4, y los niveles reducidos de algunas citoquinas de tipo TH 1 en pacieníes quemados que íienen marcado con cicatriz hipertrófica. El uso de anlagonisías de I L-4 puede beneficiar a pacienles que lengan (o se encuentren en riesgo de desarrollar) marcado con cicatriz hipertrófica, suprimiendo una respuesía de tipo TH2.

Uríicaria La urlicaria, formas especialmenle crónicas de la misma tales como la urticaria idiopálica crónica (CI U) pueden íraíarse con un anlagonisía de I L-4 de acuerdo con la presente invención . Los pacientes de CI U lienen niveles de suero más alíos de I L-4 que los conlroles, y pueden lener un perfil de ciloquina de lipo TH2. Las células cebadas y las células T de lipo Th2 se encuentran involucradas como células ejecutoras primarias en la urticaria crónica. La I L-4 estimula la proliferación de células cebadas. La degeneración de células cebadas conduce a la liberación de hislamina, eriíema subsecueníe, eosinofilia, coloración roja de la piel , y prurito. Los anlagonistas de I L-4 se adminisíran para inhibir la I L-4 y reducir la respuesla de lipo TH2, ayudando así a controlar la urticaria de un paciente.

Colitis ulcerante; otros padecimientos del tracto gastrointestinal La I L-4 se encuentra involucrada en la patogénesis de la colitis ulcerante. Las citoquinas de tipo Th-2 que incluyen I L-4 pueden predominar en la mucosa colónica de pacientes con este padecimienlo. El uso de antagonista(s) de I L-4 para suprimir la respuesta de TH2 puede aliviar esla condición . Además de la colitis ulcerante, pueden tratarse otros padecimientos del tracto gastrointestinal o del sistema digestivo con el(los) antagonista(s) de I L-4. Los ejemplos de tales padecimientos incluyen , pero no se limilan a, enfermedad del iníesíino inflamado (I BD), con colitis ulcerante y Mal de Crohn encontrándose en formas de I BD, gastritis, úlceras, e inflamación mucosal . Cualquier condición gastroinfestinal en la cual la I L-4 desempeña un papel puede tratarse con un aníagonisla de I L-4 de acuerdo con la presenie invención. Por ejemplo, las condiciones que implican inflamación inducida por ! L-4 de parle del tracto gastrointestinal pueden tratarse con un antagonisía de I L-4. Las modalidades parliculares se encuentran dirigidas al tratamiento de condiciones inflamatorias crónicas en el tracío gastrointeslinal. Oirás modalidades se encuenfran dirigidas a condiciones en las cuales la interrupción de la barrera inducida por I L-4 desempeña un papel, por ejemplo, condiciones caracíerizadas por una función de barrera epiíelial disminuida en al menos una porción del íracfo gaslroinlesíinal . Tales condiciones pueden , por ejemplo, implican el daño al epitelio que se encueníra inducido por I L-4, direclamenle, o indireclamenfe. El epilelio iníestinal forma una barrera relalivamenle impermeable entre el lumen y la submucosa. La interrupción de la barrera de epitelio se ha asociado con condiciones tales como enfermedad del intestino inflamado. Ver la descripción en Youakim , A. y M . Ahdieh (Am. J. Physiol. 276 (Gastrointest. Liver Physiol. 39) G 1279-G 1288, 1 999), incorporada en la presente para referencia en su fofalidad. Una barrera dañada o "con fugas" puede permilir que los anlígenos crucen la barrera , lo cual a su vez produce una respuesla inmunológica que puede ocasionar daño adicional al tejido gastrointestinal . Tal respuesta inmunológica puede incluir la agrupación de neutrófilos o células T, por ejemplo. Puede administrarse un antagonista de I L-4 para inhibir la estimulación indeseable de una respuesta inmunológica.

Padecimientos pulmonares En la presente se proporcionan los métodos para tratar los padecim ientos pulmonares inducidos por I L-4. Tales padecimientos incluyen , pero no se limitan a, fibrosis pulmonar, incluyendo enfermedad pulmonar fibrótica crónica, oirás condiciones caraclerizadas por proliferación de fibroblaslos inducida por I L-4 o acumulación de colágeno en los pulmones, condiciones pulmonares en las cuales una respuesla inmunológica de lipo TH2 desempeña un papel, condiciones caracterizadas por una función de barrera disminuida en el pulmón (por ejemplo, resultado de daño inducido por I L-4 al epitelio), o condiciones en las cuales la I L-4 desempeña un papel en una respuesta inflamatoria. La fibrosis cística se caracteriza por la sobreproducción de mucus y desarrollo de infecciones crónicas. Inhibir la respuesta de IL-4 y Th2 reducirá la producción de m ucus y ayudará a controlar infecciones tales como aspergilosis broncopulmonar alérgica (ABPA) . La micosis broncopulmonar alérgica ocurre principalmente en pacientes con fibrosis cística o asma, donde es dominante una respuesta inmunológica de Th2. Inhibir la respuesla de I L-4 y Th2 ayudará a despejar y conlrolar estas infecciones. La enfermedad pulmonar obstructiva crónica se encuentra asociada con hipersecreción de mucus y fibrosis. I nhibir la respuesta de IL-4 y Th2 reducirá la producción de mucus y el desarrollo de fibra mejorando así la función respiratoria y retrasando el progreso de la enfermedad. La neumopatía y la fibrosis inducidas por bleomicina, y la fibrosis pulmonar inducida por radiación son padecimienfos caracíerizados por fibrosis del pulmón la cual se manifiesla por el influjo de Th2 , células CD4+ y macrófagos, los cuales producen I L-4 lo que a su vez media el desarrollo de la fibrosis. Inhibir la respuesla de I L-4 y Th2 reducirá o evitará el desarrollo de eslos padecimieníos.

La proteinosis alveolar pulmonar se caracleriza por la iníerrupción del despeje del ageníe tensioacíivo. La I L-4 aumenfa el producío de agenle lensioaclivo. El uso de antagonistas de I L-4 diminuirá la producción de agente tensioacíivo y dism inuirá la necesidad de un lavado de pulmón completo. El síndrome de diestrés respiratorio adulto (ARDS) puede ser atribuible a un cierto número de factores, uno de los cuales es la exposición a químicos tóxicos. Una población paciente susceptible al ARDS son pacientes críticamenle enfermos quienes sobreviven por ventiladores. El ARDS es una complicación frecuente en tales pacienles. Los antagonistas de I L-4 pueden aliviar el ARDS reduciendo la inflamación y las moléculas de adhesión, aunque los métodos para íralar lales pacientes de acuerdo con la presente invención no se encuentran limitados por un mecanismo particular de acción. Pueden utilizarse los aníagonisías de I L-4 para evilar íraíar el ARDS . La sarcoidosis se caracteriza por lesiones de granulomatus. El uso de aníagonistas de IL-4 para tratar la sarcoidosis, particularmeníe sarcoidosis pulmonar, se coníempla en la presente. Las condiciones en las cuales la barrera de interrupción inducida por I L-4 desempeña un papel (por ejemplo, condiciones caracterizadas por una función disminuida de la barrera epitelial en el pulmón) pueden tratarse con antagonisla(s) de I L-4. El daño a la barrera epiíelial en los pulmones puede inducirse por I L-4 direcíamente o indirecíamente. El epitelio en el pulmón funciona como una barrera selectiva que evila el contenido del lumen pulmonar entre a la submucosa. Una barrera dañada o "con fugas" permile le permile a los antígenos cruzar la barrera, la cual a su vez produce una respuesla inmunológica que puede ocasionar daño adicional al íejido pulmonar.

Tal respuesla inmunológica puede incluir la reagrupación de eosinófilos o células cebadas, por ejemplo. Puede administrarse un antagonista de I L-4 para inhibir tal estimulación indeseable de una respuesta inmunológica. Los antagonistas de I L-4 pueden emplearse para mejorar la cicatrización del epitelio pulmonar, reestableciendo así la función de la barrera. Los antagonisías de I L-4 pueden emplearse para mejorar la cicatrización del epitelio pulmonar en asmáticos, por ejemplo.

Alternaíivamente, se determina el antagonisía para propósitos profilácticos, a fin de evitar daño inducido por I L-4 al epitelio pulmonar.

Tuberculosis Una respuesla inmunológica de tipo TH-2 se encuentra involucrada para desempeñar un papel en el origen de daño de tejido (por ejemplo, necrosis del tejido pulmonar) en pacientes con tuberculosis (TB). Se encuentran niveles elevados de I L-4 asociados con TB. La producción de I L-4 puede elevarse particularmente en la tuberculosis caviíaria (es decir, en pacientes de TB quienes han desarrollado cavidades pulmonares, las cuales pueden detecíarse/visualizarse por íales íécnicas como radiografías de pecho). Los anfagonistas de I L-4 pueden beneficiar a los pacientes de TB (especialmente aquellos con TB cavilar) suprimiendo una respuesta inmunológica de tipo TH2 antagonisla de I L-4, o uniendo (y desaclivando) la IL-4 segregada en exceso. Sin embargo, los mélodos para íratar tales pacientes de acuerdo con la presente invención no se encuenlran limiíados por un mecanismo parlicular de acción. Los anlagonisías de I L-4 se adminisfran ventajosamenle en una canlidad que reeslablece el balance deseado entre los componeníes TH 1 y TH2 de la respuesía inmunológica, y reduce el daño de íejido inducido por I L-4 en un pacieníe.

Síndrome de Churg-Sírauss El síndrome de Churg-Slrauss, una enfermedad conocida íambién como granulomalous angiiíis, se caracíeriza por la inflamación de los vasos sanguíneos en personas con una historia de asma o alergia, y por eosinofilia. El(los) antagonista(s) de I L-4 puede(n) administrarse para aliviar la inflamación en pacientes con este síndrome. El uso de antagonistas de I L-4 para suprimir una respuesta inmunológica de lipo TH2, y para combatir la eosinofilia, beneficiará a los pacientes.

Pre-eclampsia La pre-eclam psia es una toxemia de embarazo tardío. La condición se caracteriza por un aumenío marcado en la presión sanguínea, acompañado generalmenle de edema y albuminuria, duranfe el tercer íérmino del embarazo. Las respueslas inmunológicas de lipo TH 1 y lipo TH2 pueden desempeñar un papel en la condición. Un método proporcionado en la presente comprende administrar un antagonista de I L-4 a una mujer embarazada que ha desarrollado pre-eclampsia. El antagonista de I L-4 se administra en una cantidad, y para un periodo de tiempo, suficiente para reducir el nivel de I L-4 (o de citoquinas de tipo TH2 colectivamente) hasta un nivel que se considera normal durante el embarazo. En general , el antagonista de I L-4 se administra repetidamente mientras dure el embarazo.

Escleroderma El(los) antagonista(s) de I L-4 se administra(n) a pacientes con escleroderma de acuerdo con la invención. Los antagonistas reducen la síntesis de colágeno inducida por I L-4 por fibroblastos en los pacientes. Los antagonistas pueden emplearse para evitar o reducir la fibrosis en la piel o íejidos pulmonares, así como íambién oíros lejidos en los cuales ocurre la fibrosis en pacieníes con escleroderma, suprimiendo la síntesis de colágeno en tales lejidos, y para íratar la enfermedad pulmonar relacionada con escleroderma.

Hiperplasia de próstata benigna La hiperplasia de próstata benigna (BPH), también conocida como hiperírofia de próslala benigna, puede traíarse con anlagonisla(s) de I L-4. Mieníras no se desee unir a un mecanismo particular de acción, la administración de un inhibidor de I L-4 puede beneficiar a un pacieníe con BPH suprimiendo una inflamación inducida por IL-4, o suprimiendo una respuesía inmunológica de lipo TH2.

Mal de Grave Los anlicuerpos dirigidos contra el receptor de tirotropina desempeñan un papel imporíanle en el Mal de Grave, un padecimienío caracterizado por hipertiroidismo. Los esíudios de la producción de citoquina en pacientes con Mal de Grave muestran un cambio hacia una respuesta de citoquina de tipo TH2. El uso de un antagonista de I L-4 suprime la respuesta inmunológica de tipo TH2, y suprime la producción de anticuerpos, beneficiando a los pacientes con Mal de Grave.

Enfermedad de Células Falciformes Los pacienles con la enfermedad de células falciformes experimenlan típicamente periodos intermitenles de exacerbación aguda llamados crisis, cafegorizándose las crisis como anémicas o vaso-oclusivas. Los antagonistas de I L-4 encuentran uso para tratar o evitar crisis de células falciformes, especialmente en pacieníes con niveles de IL-4 elevados o cuya respuesta inmunológica ha cambiado hacia una respuesta de tipo TH2. El mal de las células falciformes respuesta inmunológica (especialmente la crisis de células falciformes) ha estado asociado con una suscepíibilidad creciente a enfermedades infecciosas, incluyendo infecciones bacterianas. Administrar antagonislas de I L-4 a pacienles con enfermedad de células falciformes puede ayudarle al paciente a montar una respuesta inm unológica contra enfermedades infecciosas.

Síndrome de Sjogren La enfermedad autoinmune conocida como síndrome de Sjogren o síndrome de sicca combina típicamenle ojos secos y boca seca con un padecimienlo de los lejidos conectivos, tales como artritis reumatoide, lupus, escleroderma, o polimiositis. La gran mayoría de pacientes son mujeres de edad media (o mayores) . El síndrome de Sjogren es una enfermedad inflamatoria de las glándulas (por ejemplo, glándulas lacrimales y salivales) y otros lejidos del cuerpo. El síndrome se encuenlra asociado típicamente con la producción de autoanticuerpos. Los antagonisías de I L-4 pueden adminisírarse para reducir la respuesla inflamaíoria (tal como inflamación de glándulas, incluyendo las glándulas lacrimales) en tales pacientes. Los antagonislas de I L-4 pueden beneficiar a los pacienles con síndrome de Sjogren suprimiendo una respuesta inm unológica de tipo TH2, o uniendo (y desactivando) el exceso de I L-4 en lesiones inflamatorias. Sin embargo, los métodos para tratar pacientes de acuerdo con la presente invención no se encueníran limitados por un mecanismo parlicular de acción.

Síndrome linfoproliferante auíoinmune Las manifestaciones del síndrome linfoproliferante autoinmune incluyen linfoproliferación y producción de anticuerpos. Los pacientes con el síndrome tienen repelidamenle una deficiencia heredada de apópíosis. Los anfagonislas de I L-4 pueden beneficiar a los pacientes con este síndrome suprimiendo una respuesta inmunológica de tipo TH2 , o uniendo (y desactivando) el exceso de I L-4 en los sitios de inflamación. Sin embargo, los métodos para tratar tales pacientes de acuerdo con la presente invención no se encuentran limitados por un mecanismo de acción en particular.

Anemia hemolítica auíoinmune La secreción excesiva de I L-4, y una deficiencia de citoquinas de tipo TH 1 , se encuentran involucradas para contribuir a la patogénesis de anemia hemolítica autoinmune. Los antagonistas de I L-4 se administran de acuerdo con la presente invención, para beneficiar a los pacientes reduciendo la producción de autoanlicuerpos, y reestableciendo un balance más normal enlre los componeníes TH 1 y TH2 de la respuesta inmunológica.

Uveítis autoinmune La uveítis implica la inflamación de la úvea (se considera q ue generalmeníe incluye la iris, cuerpo ciliar, y coroides, conjuntamenle consideradas) . El exceso de secreción de IL-4 se encuentra implicada para desempeñar un papel en la patogénesis de la enfermedad del ojo inflamado que amenaza la vista. De acuerdo con la presente invención, el(los) antagonisía(s) de I L-4 se administra(n) al pacieníe con uveííis a fin de reducir la severidad de la enfermedad. En una modalidad, el(los) aníagonista(s) de I L-4 se administra(n) a un individuo que liene uveoreliniíis autoinmune.

Mal de Kawasaki También conocido como síndrome de nodo linfático mucocutáneo, el mal de Kawasaki (KD) aflige principalmenle a niños pequeños. El mal se caracíeriza por cambios paríiculares en las membranas mucosas que recubren los labios y la boca , y por glándulas linfáticas agrandadas, suaves. Los síntomas incluyen íípicameníe fiebre, conjunlivitis, inflamación de los labios y las membranas mucosas de la boca, glándulas hinchadas en el cuello, y un sarpullido que cubre manos y pies, que lleva a una piel endurecida, hinchada y que se pela en manos y pies. En los niños con Mal de Kawasaki (KD), puede desarrollarse la inflamación de las arterias (vasculiíis) . Debido al efecto de la enfermedad del sisíema vascular, KD es frecuenfemeníe la causa principal de enfermedad cardiaca adquirida en niños. Los antagonisías de I L-4 pueden administrarse a pacientes con Mal de Kawasaki, para reducir los niveles elevados de I L-4 en el pacienle. El exceso de secreción de IL-4 y una deficiencia en las citoquinas de íipo TH 1 coníribuyen a la paíogénesis de la enfermedad.

Esófago de Barreíí El esófago de Barrelt es una condición caracterizada por alteración (subsecuente a la irritación) de las células en el tejido epitelial que recubre la porción inferior del esófago. El flujo frecuente del contenido estomacal en el esófago, con el transcurso del liempo, puede conducir al esófago de Barreíl. Los pacientes con esófago de Barrett se encuentran en riesgo de desarrollar cáncer de esófago (por ejemplo, adenocarcinoma) . Mientras no se desee unirse a algún mecanismo de acción en particular, la administración de un antagonista de I L-4 puede beneficiar a un paciente con esófago de Barrett al • suprimir una respuesta inmunológica de tipo TH2. En una modalidad, se administra una antagonisfa de I L-4 a un pacienle con esofaguitis, para inhibir la progresión del esófago de Barreíí.

Nefrosis La nefrosis, íambién conocida como síndrome nefróíico, es una enfermedad renal que es no inflamaloria y no maligna. En la condición conocida como nefrosis de cambio mínimo, el daño glomerular (considerado que surge a parlir de cambios eslrucíurales en las células epiteliales viscerales glomeruales) da como resultado anormalidades que incluyen proteinuria. Una respuesla inmunológica de lipo TH2 (especialmente la secreción de las citoquinas de tipo TH2 I L-4 e I L-1 3) se encuentra implicada desempañando un papel en la palogénesis de la nefrosis de cambio m ínimo.

Oirás indicaciones Ejemplos adicionales de condiciones que pueden íratarse de acuerdo con la presenie invención incluyen pero no se limitan a lo siguiente. Pueden emplearse aníagonislas de I L-4 para tratar o evitar el síndrome de hiper IgE , síndrome de hipereosinófilo idiopático, reacciones alérgicas al medicamento, enfermedades de ampollado auíoinmunes (por ejemplo, pemphigus vulgaris o bullous penfigoide) , miastenia grave (una enfermedad muscular autoinmune) , y síndrome de faliga crónica. Pueden emplearse inhibidores de I L-4 para tralar GVHD; los métodos particulares para tratar la terapia de combinación de GVHD con otros agentes terapéuticos como se describe a continuación . Los inhibidores de I L-4 también encuentran uso para tratar o evitar la hipertoxicidad inducida por drogas tales como diclofenaco (una droga anti-inflamatoria no esteroidal) . Puede emplearse un aníagonista de I L-4 como adyuvante al tralamiento de inmunoíerapia a la alergia. Los antagonistas de I L-4 encuentran uso adicional como adyuvaníes de vacunas, tales como adyuvantes para las vacunas de cáncer y las vacunas de enfermedades infecciosas. El uso de antagonislas de I L-4 es especialmenle ventajoso cuando se favorece una respuesta inmunológica de tipo TH 1 será benéfico para evitar o tratar la condición para la cual se administra la vacuna. Pueden emplearse antagonisías de I L-4 cuando se desea reducir una respuesla inmunológica mediada con anlicuerpos y/o que mejore una respuesta inmunológica mediada con células T.

Antagonisías de I L-4 Los antagonistas de I L-4 que pueden emplearse de acuerdo con la presente invención incluyen compuestos que inhiben una actividad biológica de I L-4. Las aclividades biológicas inducidas por I L-4 a inhibirse por los métodos proporcionados en la presente son cavidades que directamenle o indirectamenle desempeñan un papel en la condición a íraíarse. Los ejemplos de antagonistas de I L-4 incluyen, pero no se limitan a, recepíores de I L-4 (I L-4R) , anlicuerpos, oirás moléculas de unión de I L-4, y muleínas de I L-4 como se describe a continuación. Los anticuerpos pueden unir I L-4 o pueden unir un receptor de I L-4, por ejemplo. Los antagonislas que unen I L-4 incluyen pero no se limitan a receptores de I L-4 y anticuerpos anti-I L-4. Se evita así que el I L-4 endógeno unido a tal antagonista se una a su receptor natural en superficies celulares in vivo, y no pueda manifestar consecuentemente actividades biológicas mediadas por I L-4. Diferentes tipos de antagonisías pueden aduar en diferentes sitios o por diferenles mecanismos de acción. Los ejemplos incluyen pero no se limitan a antagonistas que interfieren con la unión de I L-4 a los receptores de superficie celular o que inhiben la transducción de señales. El sitio de acción puede ser intracelular (por ejemplo, interfiriendo con una cascada de señalización intracelular) , en una superficie celular, o exíracelular. Los antagonisías que actúan iníerfiriendo con la interacción de I L-4 con I L-4R pueden unirse sea a I L-4 o al receptor. Un antagonisía no inhibe completamente una actividad inducida por I L-4 para encontrar uso en la presente invención; en cambio, los antagonislas que reducen una aclividad particular de I L-4 se encuentran también contemplados para su uso. Las descripciones anteriormenle presenfadas de mecanismo parliculares de acción para los aníagonislas de I L-4 para tratar enfermedades particulares son solamente ilustralivas, y los métodos aquí presentados no se encuentran limitados por ellas. Los mecanismos de acción por los cuales los antagonislas de I L-4 alivian enfermedades no se encuentran limilados a aquellos descritos con anterioridad. Para tratar padecimientos paríiculares, un antagonista de I L- 4 puede reducir la cantidad de I L-4 activa en un sitio particular dentro del cuerpo que se ve involucrado en el padecimienlo. Los aníagonistas que unen I L-4 de tal manera que no pueden unir por más tiempo a los recepíores celulares endógenos reducen funcionalmeníe la cantidad de I L-4 activa disponible para inducir respuestas biológicas. Un aníagonisía de I L-4 puede aliviar un padecimienío al reducir la cantidad de I L-4 endógeno libre que se encuentra circulando en el cuerpo, por ejemplo, en el lorreníe sanguíneo o en un lejido en particular. Cuando la acción de I L-4 en tal íejido desempeña un papel en la palogénesis de la enfermedad, el antagonista sirve para bloquear la acción de I L-4 en el tejido, aliviando así el padecimiento. En un ejemplo adicional , los antagonistas pueden inhibir la reagrupación de células inducida por I L-4 a un sitio o tejido dentro del cuerpo, en el que tal reagrupación desempeña un papel para ocasionar o exacerbar una enfermedad. Los antagonistas pueden inhibir un influjo de células mediadas por I L-4 involucradas en una respuesta inmunológica o inflamatoria. Un antagonisía puede aduar al reducir la proliferación , aclivación, migración, influjo, o acumulación de un íipo celular paríicular, o al inhibir una respuesla biológica directamente o indirectamenfe afribuible a un fipo celular paríicular. Los ejemplos de tipos celulares parliculares son los fibroblastos, las células cebadas y los eosinófilos. Como se describió con anterioridad, pueden íralarse algunas condiciones suprimiendo una respuesta inmunológica de tipo TH2. La I L-4 se encuentra asociada con una respuesla de TH2 , y es una de las citoquinas segregadas por las células auxiliares T de tipo 2 (células TH2) . Puede administrarse un antagonista de I L-4 para reducir una respuesta inmunológica de lipo TH2. Se dice que el anlagonista de I L-4 reduce la proliferación de células TH2, para suprimir una respuesta de TH2, a fin de cambiar la respuesía inmune hacia una respuesía de TH 1 , o para favorecer un respuesta de tipo TH 1 . El uso de antagonisías de oirás ciloquinas asociadas con una respuesta inmunológica de tipo TH2 se describe a conlinuación. Los anlagonisías de olra(s) ciíoquina(s) de fipo TH2, tal(es) como I L-5, I L-10, o I L-1 3, pueden administrarse a pacientes que íienen un padecimienío que involucran niveles elevados de lales citoquinas. Las técnicas para medir la cantidad de tales citoquinas en un paciente, por ejemplo, en el suero del pacienle, son bien conocidas. Una modalidad de la invención se refiere a un méíodo para inhibir el daño inducido por I L-4 al epitelio, que comprende administrar un antagonista de I L-4 a un individuo que tiene, o que se encuentra en riesgo de desarrollar, una condición en la cual desempeña un papel una interrupción de barrera epitelial mediada con I L-4. De acuerdo con la presente invención , los estudios de función de barrera revelaron que la IL-4 desempeña un papel en la reducción de la función de barrera en modelos de epiíelio pulmonar y del epitelio intesíinal, y que un polipépíido de receplor de I L-4 humana soluble (un anlagonista de I L-4) inhibe la reducción mediada con I L-4 de la función de barrera (ver el Ejemplo 7). Las modalidades particulares de métodos proporcionados en la presente comprenden administrar un antagonisías de I L-4 para inhibir el daño inducido por I L-4 al epitelio en el tracío gasíroinleslinal o el pulmón. Tales méíodos pueden emplearse para evifar el daño epitelial , o para reestablecer la función de barrera epitelial (es decir, mejorar la reparación o cicatrización del epitelio). La capacidad de un antagonislas de I L-4 para inhibir el daño inducido por I L-4 al epitelio puede confirmarse en cualquiera de entre un cierto número de pruebas adecuadas, tales como aquellas descritas en el Ejemplo 7 a continuación. Cualquier inflamación asociada con (o subsecueníe a) una infección puede tratarse también con un anlagonisía de I L-4. El aníagonista puede administrarse para inhibir cualquier componeníe inducido por I L-4 de una respuesta inflamatoria que sea resultado de una infección microbial en el tracío gaslroiníesíinal, por ejemplo. La combinación de dos o más anlagonislas puede emplearse en los méíodos y composiciones de la presente invención. Los ejemplos de antagonistas de I L-4 adecuados son como se cita a conlinuación.

Recepíor de I L-4 Un aníagonisfa de IL-4 preferido es un receplor de IL-4 (IL- 4R). Cuando se administra in vivo, los polipéptidos IL-4R circulan en el cuerpo para unirse a las moléculas de I L-4 endógena circuíanle, evitando la interacción de la IL-4 con receptores de IL-4 de superficie celular endógena, inhibiendo así la transducción de señales biológicas inducidas por I L-4. Los receptores de I L-4 se describen en la Patenle de E.U. No. 5,599,905; Idzerda, et al., J. Exp. Med. 171:861-873, Marzo de 1990 (IL-4R humana); y Mosley et al., Cell 59:335-348, 20 de Ocíubre de 1989 (IL-4R murina); cada una de las cuales se incorpora en la preseníe para referencia. La proíeína descriía en esas íres referencias es referida algunas veces como IL-4Ra en la literatura científica. A menos que se especifique de olra manera, los términos "IL-4R" y "receptor de IL-4" como se utilizan en la presente contemplan esta proteína de diversas formas que son capaces de funcionar como antagonistas de IL-4, incluyendo pero no limitándose a fragmentos solubles, proteínas de fusión, oligómeros, y variantes que son capaces de unirse a I L-4, como se describe más detalladamenle a continuación. La secuencia de nucleótido de un cADN de IL-4R humana, y la secuencia de aminoácido codificada por la misma, se establecen en las Figuras 1A-1C. El clon de cADN se aisló a partir de una biblioteca de cADN derivada de una célula T humana CD4+/CD8 designado T22, como se describe en idzerda, et al., J. Exp. Med., 171:861. Marzo de 1990, y en la Palenfe de E.U. No. 5,599,905, las cuales se incorporan en la presenie para referencia en sus totalidades. El ADN y las secuencias de aminoácido de las Figuras 1A-1C se presentan en el NO DE I D DE SEC: 1 y el NO DE I D DE SEC: 2, respectivamente. La proteína I L-4R humana codificada comprende (del término N al C) un pépíido de señal lerminal en N , seguido de un dominio exlracelular, una región de íransmembrana, y un dominio ciloplásmico. La región de íransmembrana, la cual se encueníra subrayada en la Figura 1 A, corresponde a los aminoácidos 208 a 231 . El dominio ciíoplásmico comprende los aminoácidos 232 a 800. Un péplido de señal incluye los aminoácidos -25 a -1 del NO DE I D DE SEC:2. Un sitio de segmentación de pépíido de señal alíernativa ocurre eníre los residuos -3 y -2 del NO DE I D DE SEC:2, de manera fal que el péplido de señal corresponde a los residuos -25 a -3. Como se reconoce en el campo perlinente, el sitio de segmentación de péptido de señal para una determinada proteína puede variar de acuerdo con factores lales como el sistema de expresión particular (especialmente las células huésped) en el cual se expresa la proteína. Las fronteras exactas del péptido de señal, y consecuentemente el dominio extracelular, de una deíerminada proteína recombinante pueden depender consecuentemente del sistema de expresión empleado. Además, el péptido de señal puede segmentarse en más de una posición , generando más de una especie de polipéptido en una preparación de proteína recombinante. En una modalidad, en la cual un vecíor de expresión que comprende ADN que codifica los aminoácidos 25 a 207 del NO DE I D DE SEC:2, la I L-4R recombinanle expresada incluye dos especies de I L-4R humana soluble madura . Los polipépíidos expresados incluyen una especie principal correspondieníe a los aminoácidos -2 a 207 y una especie menor correspondiente a los aminoácidos 1 a 207 del NO DE I D DE SEC: 2. Dos formas alternalívas del dominio exlracelular de la I L-4R humana corresponden a los residuos -2 a 207 y 1 a 207 del NO DE I D DE SEC: 2. El férmino "maduro" se refiere a una proleína en una forma que carece un péplido de señal o secuencia líder, como se comprende en la materia pertinente. Entre los receptores de I L-4 adecuados para su uso en la presente se encuentran los fragmentos de I L-4R. Los polipéptidos de I L-4R truncado pueden generarse de manera nalural, por ejemplo, como resultado de segmentación protolítica, proceso de post-traducción , o división alternativa del mARN . Alternaíivamente, los fragmentos pueden construirse eliminando las porciones terminales o internas de una secuencia de I L-4R, por ejemplo, a través de íecnolog ía de ADN recombinanle. Los frag enlos que mantienen la capacidad de unir I L-4 pueden identificarse en pruebas de unión convencionales. Tales fragmentos pueden ser fragmentos solubles, como se describe a continuación En una modalidad preferida de la invención, el antagonista com prende una forma soluble de I L-4R. Un receptor de I L-4 soluble es un polipéptido que se segrega a partir de la célula en la cual se expresa, en lugar de mantenerse en la superficie celular. La proíeína I L-4R humana de tramo completo del NO DE I D DE SEC:2 es una proteína de transmembrana, la cual, como se describió con aníerioridad, comprende un pépfido de señal terminal en N, seguido de un dominio extracelular, una región de íransmembrana, y un dominio ciíoplásmico íerminal en C. Los polipéplidos de IL-4R solubles carecen de la región de íransmembrana que ocasionaría la relención en la célula, y consecueníemeníe se segregan los polipépíidos solubles en el medio de cultivo. La región de transmembrana y el dominio inlracelular de I L-4R pueden eliminarse o substituirse con residuos hidrofílicos a fin de facilitar la secreción del receptor en el medio de cultivo celular. Las modalidades particulares de los polipépíidos I L-4R solubles carecen de región de íransmembrana pero comprenden el dominio exíracelular (el dominio extracelular completo o un fragmenío del mismo que es capaz de unirse a I L-4) . Como una opción , el polipépíido comprende todo o parte del dominio citoplásmico, así como también el dominio extracelular (o fragmento del dominio extracelular) , pero carece de la región de transmembrana. Los ejemplos de polipéptidos de I L-4R humana soluble incluyen , pero no se limitan a, polipéptidos que comprenden residuos de aminoácidos x a y del NO DE I D DE SEC:2, donde x représenla 1 o -2 y representa un entero de 1 97 a 207. Las modalidades preferidas incluyen polipéptidos que comprenden los residuos 1 a 207 o -2 a 207 del NO DE I D DE SEC: 2. Una preparación de proteína administrada como un antagonista de I L-4 puede comprender más de una forma de I L-4R. Por ejemplo, la preparación puede comprender moléculas de polipéptido que consisten en aminoácidos de 1 a 207 del NO DE I D DE SEC:2, así como también los polipépíidos que consislen en los aminoácidos -2 a 207 del NO DE I D DE SEC: 2. Los polipéptidos I L-4R que se originan a partir de construcciones de mARN alternativo, por ejemplo, los cuales pueden atribuirse a diferentes eventos de segmentación de mARN después de la trascripción , y los cuales enlregan íraducciones de polipéptido capaces de unirse a I L-4, se encuentran entre los polipéptidos de I L-4R descrilos en la preseníe. Tales mARNs divididos alfernalivamenle pueden originar lales polipéptidos. Ejemplos adicionales de receptores de I L-4 que pueden emplearse en los métodos proporcionados en la presente son variantes que tienen secuencias de aminoácidos las cuales son substancialmente similares a la secuencia de aminoácido de receptor de interleuquina-4 naliva del NO DE I D DE SEC:2, o fragmentos de la misma. Los polipéptidos receptores de I L-4 variante que son capaces de funcionar como antagonislas de I L-4 pueden emplearse en los métodos de la presenie invención . Cualquiera de entre un cierto número de técnicas de prueba convencionales puede emplearse pata confirmar que una determinada forma de I L-4R (por ejemplo, un fragmento o variante de I L-4R) funciona como un antagonista de I L-4. Los ejemplos incluyen pruebas de unión o pruebas que analizan la capacidad de un determinado polipéptido de antagonista de IL-4R de inhibir la íransducción de una señal biológica inducida por I L-4. A continuación se describen los ejemplos de pruebas in vitro adecuadas. Los receptores de I L-4 "substancialmente similares" incluyen aquellos que lienen aminoácidos o secuencias de aminoácido que varían de una secuencia naliva por una o más subslituciones, eliminaciones, o añadiduras, pero que mantienen una aclividad biológica deseada de la proleína I L-4R. Los ejemplos de moléculas de ácido nucleico que codifican los receplores I L-4 incluyen , pero no se limitan a: (a) ADN derivado de la región de codificación de un gen de I L-4R de mam ífero nativo; (b) ADN que es capaz de hibridación a un ADN de (a) bajo condiciones moderadamente severas y que codifica un I L-4R que tiene una actividad biológica de una I L-4R nativa; o (c) ADN que se degenera como resultado del código genético a un ADN definido en (a) o (b) y que codifica un I L-4R que tiene una actividad biológica de un I L-4R nativa. Debido a la degeneración de código, puede existir una variación considerable en secuencias de nucleótido que codifican la misma secuencia de aminoácidos. Las variantes pueden generarse de manera naíural, lales como varianles alélicas o aquellas que surgen a partir de segmentación alternativa de mARN . Alternalivameníe, las varianíes pueden prepararse por lales lécnicas conocidas como mutagénesis in vitro. Una secuencia de variante identificada por Idzerda et al. , supra, comprende un codón de GTC que codifica la valina de aminoácido (Val) en posición 50, en lugar de isoleucina (lie) . La secuencia de varianle es de olra manera idénlica a la secuencia de los NOS DE I D DE SEC: 1 y 2. Los fragmeníos de I L-4R, íales como fragmentos solubles, que comprenden Val en la posición 50 se proporcionan en la presente. En las modalidades particulares, un ADN o secuencia de aminoácido de receptor de I L-4 es al menos de 80 por ciento idéníica a la secuencia de un I L-4R naíiva. Prefereníemeníe, un ADN o polipépíido de I L-4R comprende una secuencia que es al menos 90 por cienlo idéníica a un ADN de I L-4R naíiva o secuencia de aminoácido. Un ejemplo es una I L-4R humana que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 80 por cienío idéntica a la secuencia presentada en el NO DE I D DE SEC:2. Otro ejemplo es una I L-4R adecuada que comprende una secuencia de aminoácido al menos 80 por ciento idéntica a la secuencia del dominio exlracelular de la I L-4R humana. Los ejemplos adicionales son polipépíidos que comprenden secuencias de aminoácido que son al menos 90 por ciento idénticas a la secuencia presentada en el NO DE I D DE SEC:2, o un fragmenlo de la misma. En una modalidad paríicular, el polipépfido comprende no más de 1 0 subsíiluciones de aminoácidos. Los polipéplidos de I L-4R que mantienen la capacidad de unir I L-4 pueden identificarse en pruebas de unión convencionales. La similitud porceníual o idenlidad porcenlual pueden determinarse, por ejemplo, al comparar información de ADN o secuencia de aminoácido utilizando el programa de computadora GAP, versión 6.0, disponible por The University of Wisconsin Genetics Com puter Group (UWGCG) . El programa GAP utiliza el método de alineación de Needleman y Wunsch (J. Mol. Biol. 48:443, 1 970), como se revisa por Smith y Waterman {Adv. Appl. Math. 2:482, 1 981 ). Brevemente, el programa GAP define la similitud como el número de símbolos alineados (es decir, nucleótidos o aminoácidos) los cuales son similares, dividido por el número total de símbolos en la más corta de entre dos secuencias. Los parámetros por defaull preferidos para el programa GAP incluyen: (1 ) una malriz de comparación unaria (que conliene un valor de 1 para identidades y 0 para no identidades) para nucleólidos, y la maíriz de comparación ponderada de Gribskov y Burgess, Nuc. Acid. Res. 14: 6745, 1 986, como se describe por Schwarlz y Dayhoff, ed. , Atlas of Protein Sequence and Structure, Nalional Biomedical Research Foundation, págs. 353-358, 1 979; (2) una penalización de 3.0 para cada hueco y un penalización adicional de 0.1 0 para cada símbolo en cada hueco; y (3) sin penalización para los huecos de extremo. Los polipéptidos de I L-4R que varían de las proteínas naíivas pero que poseen una propiedad deseada pueden consíruirse, por ejemplo, subsíiíuyendo o eliminando los residuos no requeridos para la acíividad biológica parlicular. Las subsíiíuciones pueden ser subslituciones conservadoras, de manera tal que se mantenga una propiedad biológica deseada de la proíeína. Los aminoácidos pueden reemplazarse con residuos que íienen características fisicoquímicas similares. Los residuos de cisteína pueden deíecíarse o reemplazarse con oíros aminoácidos para evifar la formación de pueníes de bisulfuro inlramolecular incorrectos tras la renaturalización. Oirás alíeraciones de una secuencia nativa implican la modificación de los residuos adyacentes de aminoácido dibásico, para mejorar la expresión en las células huésped de levadura en las que se encuenlra presenfe la actividad de proteasa de KEX2.

La présenle invención incluye también I L-4R con o sin glucosilación de patrón nativa. El patrón de glucosilación puede variar de acuerdo con el tipo de células huésped en las cuales se produce la proteína. Otra opción es la desactivación de siíios de N-glucosilación por muíagénesis específico de silio. Los siíios de N-glucosilación en las proíeínas eucarióticas se caracterizan por el triplete de aminoácidos Asn-A^Z, donde A^ es cualquier aminoácido excepto Pro, y Z es Ser o Thr. En esta secuencia, la asparagina proporciona una cadena lateral del grupo amino para la anexión covalente de carbohidrato. Tal sitio puede eliminarse al sustituir otro aminoácido por Asn o por el residuo Z, eliminando Asn o Z, o insertando un aminoácido no Z entre A-i y Z, o un aminoácido diferente que Asn enlre Asn y A^ Los procedimienlos de mulagénesis específicos de sitio dirigidos por oligonucleótido pueden emplearse para proporcionar un gen alíerado que tiene codones particulares de acuerdo con la substitución , eliminación , o inserción req ueridos. Los ejemplos de técnicas para elaborar lales alleraciones se describen en Walder et al. {Gene 42: 1 33, 1 986); Bauer et al. (Gene 37: 73, 1 985) ; Craik (BioTechniques, Enero de 1 985, 12-19); Smith et al. (Genetic Engineering: Principies and Methods, Plenum Press, 1981 ) ; y la Palenle de E. U. No. 4, 51 8,584 y 4,737,462. Los receptores de I L-4 que pueden emplearse ¡ncluyen también derivados, por ejemplo, diversas formas esírucíurales de la proleína primaria las cuales retienen una actividad biológica deseada. Debido a la presencia de grupos amino y carboxilo ionizables, por ejemplo, una proteína I L-4R puede enconírarse en la forma de sales acídicas o básicas, o en forma neuíral . Los residuos de aminoácido individuales pueden modificarse lambién por oxidación o reducción. La eslructura de aminoácido primario puede modificarse al formar conjugados covalentes o agregación con otras mitades químicas, tales como grupos glucosilo, lípidos, fosfato, grupos aceíilo, y lo similar, o creando mutantes de secuencia de aminoácidos. Se contemplan los derivados PEGilados (modificados con polietilenglicol) . Los derivados covalentes pueden prepararse al enlazar grupos funcionales parliculares a cadenas laíerales de aminoácido de I L-4R o en los íérminos N o C. Los derivados de I L-4R pueden obtenerse también por ageníes de reliculación , íales como éster de succinimida M-maleimidobenzóilo y N-hidroxisuccinimida, en residuos de cisteína y lisina. Las proteínas de I L-4R pueden unirse covalentemente a través de grupos laterales reactivos para diversos subsíratos insolubles, íales como eslrucíuras activadas con bromuro cianógeno, activadas con bisoxirano, activadas con carbonildiim idazola, o de agarosa aclivada con íosilo, o al absorberse a superficies de poliolefina (con o sin reliculación de glularaldehído). Otros derivados de I L-4R dentro del alcance de esta invención incluyen conjugados covalentes o de agregación de I L-4R o sus fragmentos con otras proleínas o polipéptidos, tales como por proteínas de expresión o de fusión recombinante que comprenden polipépíidos heterólogos fusionados al término N o término C de un polipéptido de I L-4R. Por ejemplo, el péptido conjugado puede ser un polipépíido de señal heíeróloga (o l íder) , por ejemplo, el líder de a- factor de levadura, o un péptido tal como una etiquela de epííope. Las proíeínas de fusión con coníenido de I L-4R pueden comprender pépíidos agregados para facilitar la purificación o identificación de I L-4R (por ejemplo, poli-His). Los ejemplos específicos de construcciones de fusión de poli-His que son biológicamente activas son la His His de I L-4R humana soluble (por ejemplo, que comprende los residuos -2 a 207 o 1 -207 del NO DE I D DE SEC:2) y la His His His His H is His de I L-4R humana soluble. Una secuencia de aminoácidos de receptor de I L-4 puede enlazarse íambién al pépfido Flag® Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys (DYKDDDDK) (NO DE I D DE SEC: 3) como se describe en Hopp eí al. , Bio/Technology 6: 1204, 1 988, y la Paíeníe de E. U . No. 5, 01 1 ,912. El péptido Flag® es altamenle antigénico y proporciona un epítope unido reversiblemeníe por un anlicuerpo monoclonal específico, que permite la rápida prueba y fácil purificación de la proteína recombinante expresada. Los agentes reaclivos útiles para preparar las proteínas de fusión en las cuales se fusiona el péptido Flag® a un delerminado polipéptido se encuentran comercialmeníe disponibles (Sigma, Sí. Louis, MO). Los oligómeros que contienen los polipéptidos de I L-4R pueden emplearse como anlagonislas de I L-4. Los oligómeros pueden esíar en forma de dímeros, írímeros, u oligómeros superiores enlazados covalenfemenle o no covaleníemeníe. Los oligómeros que comprenden dos o más polipéptidos de I L-4R se contemplan para su uso, siendo el homodímero un ejemplo. Oíros oligómeros incluyen heterod ímeros, heterotrímeros, y lo similar, los cuales comprenden un polipéplido de I L- 4R así como íambién al menos un polipéplido que no se deriva a parlir del I L-4R del NO DE I D DE SEC:2. Una modalidad se refiere a los oligómeros que comprenden múltiples polipéptidos de I L-4R unidos a través de interacciones covalentes o no covaleníes enlre los residuos de pépíido fusionados a los polipéplidos de I L-4R. Tales péplidos pueden ser enlazadores de péptido (espaciadores), o péptidos que tienen la propiedad de mejorar la oligomerización . Los cierres de leucina y algunos polipéptidos derivados de los anticuerpos se encuenlran entre los polipéptidos que pueden mejorar la oligomerización de los polipéplidos de I L-4R unidos a ellos, como se describe más detalladamente a continuación. En las modalidades parficulares, los oligómeros comprenden de dos a cuatro polipépíidos de I L-4R. Las mifades de I L-4R del oligómero pueden encontrarse en las formas descritas anteriormente, por ejemplo, variantes o fragmentos. Preferenfemeníe, los oligómeros comprenden polipépíidos de I L-4R solubles. Como una alfernativa, se prepara un oligómero ulilizando polipéplidos derivados de inmunoglobulinas. Se ha descrilo la preparación de proteínas de fusión que comprende algunos polipéptidos heterólogos fusionados a diversas porciones de polipéptidos derivados de anlicuerpos (incluyendo el dominio de Fc), por ejemplo, por Askenazi eí al . (PNAS USA 88: 1 0535, 1 991 ); Byrn et al. (Nature 344:677, 1 990); y Hollenbaugh y Aruffo ("Construcíion of Immunoglobulin Fusión Proteins", en Current Protocols in Immunology, Suppl. 4, páginas 1 0.1 9.1 -10.9.1 1 , 1 992).

Una modalidad de la présenle invención se refiere a un dímero que comprende dos proteínas de fusión creadas al fusionar I L-4R a la región Fc de un anticuerpo. Un a fusión genética que codifica la proteína de fusión I L-4R/Fc se inserta en un veclor de expresión apropiado. Las proteínas de fusión I L-4R/Fc se expresan en células huésped transformadas con el veclor de expresión recombinanle, y se dejan ensamblar como las moléculas de anticuerpo, donde se forman los enlaces de bisulfuro de intercadena entre las mitades Fc para entregar el I L-4R bivalente. El término "polipéptido de Fc" como se utiliza en la presente incluye formas nativas y muteínas de polipéptidos derivados de la región Fc de un anticuerpo. Se incluyen también las formas truncadas de lales polipéptidos que contienen la región de bisagra que mejora la dimerización. Las proteínas de fusión que comprenden las mitades de Fc (y oligómeros formados en las mismas) que ofrecen la ventaja de purificación fácil por cromatografía de afinidad sobre las colum nas de Proíeína A o Proleína G. Un polipéptido de Fc adecuado, descrito en la solicitud de PCT WO 93/1 01 51 (incorporada en ia presente para referencia) , es un polipéptido de cadena individual que se exíiende de la región de bisagra íerminal en N al término C nativo de la región Fc de un anticuerpo IgG 1 humano. Otro polipéptido Fc úíil es la muleína de Fc descriía en la Palenle de E. U . No. 5,457, 035 y en Baum el al. , (EMBO J. 1 3: 3992-4001 , 1 994) . La secuencia de aminoácidos de esta muteína es idéntica a la de la secuencia de Fc nativa presentada en WO 93/1 01 51 , excepío que ese aminoácido 1 9 se ha cambiado de Leu a Ala, el aminoácido 20 se ha cambiado de Leu a Glu , y el aminoácido 22 se ha cambiado de Gly a Ala. La muíeína exhibe afinidad reducida para los receplores de Fc. En oirás modalidades, la I L-4R puede substituirse por la porción variable de una cadena pesada o ligera de anticuerpos. Si las proteínas de fusión se encuentran hechas tanto con cadenas pesadas como ligeras de un anticuerpo, es posible formar un oligómero con tantas como cuatro regiones extracelulares de I L-4R. Las proíeínas de fusión recombinaníes solubles que comprenden una I L-4R y diversas porciones de la región constante de una inmunoglobulina se describen en EP 464, 533, j unto con procedimieníos para preparar íales proteínas de fusión y dímeros de las mismas. Entre las proíeínas de fusión descriías en EP 464, 533 se encuentran aquellas que comprenden la porción extracelular de la I L-4R humana y un polipéptido de Fc. Alternativamente, el oligómero es una proteína de fusión que comprende polipéptidos de I L-4R múlíiples, con o sin enlazadores de pépíido (péptidos espaciadores). Entre los enlazadores de péptido adecuados se encuentran aquellos descritos en las Patentes de E. U . No. 4, 751 , 1 80, y 4,935,233. Otro método para preparar la I L-4R oligomérica implica el uso de un cierre de leucina. Los dominios de cierre de leucina son pépíidos que mejoran la oligomerización de las proleínas en las cuales se encuentran . Los cierres de leucina se identificaron originalmente en varias proteínas de unión de ADN (Landschuiz et al . , Science 240: 1 759, 1 988) , y se han enconírado desde enlonces en una variedad de diferentes proteínas. Entre los cierres de leucína conocidos se encuenlran los péplidos que se generan de manera naíural y derivados de los mismos que se dimerizan o trimerizan. Los ejemplos de dominios de cierre de leucina adecuados para producir proteínas oligoméricas solubles se describen en la solicitud PCT WO 94/1 0308, y el cierre de leucina derivado de la proteína D de agente tensioactivo pulmonar (SPD) descritos en Hoppe eí al (FEBS Letters 344: 191 , 1994), incorporados en la presente para referencia . El uso de un cierre de leucina modificada que permite que permile la trimerizacíón estable de una proteína heteróloga fusionada al mismo se describe en Fanslow et al . (Semin. Immunol. 6:267-278, 1 994). En un planteamienío, las proleínas de fusión recombinanles que comprenden un polipéptido de I L-4R soluble fusionado a un péptido de cierre de leucina se expresan en células huésped adecuadas, y la I L-4R oligomérica soluble que forma se recupera a partir del sobrenadante de culfivo. Un ejem plo de heíerodímero comprende un polipépíido de I L-4R derivado de la I L-4R humana del NO DE I D DE SEC:2 , y un polipépíido I L-2R?. I L-2R? (íambién conocido como I L-2R?c) se describe en la Patente de E. U . No. 5, 510,259 y en Takeshita ef al . (Science 257: 379, 1 7 de Julio de 1 992), las cuales se incorporan en la présenle para referencia. Los polipéplidos pueden encontrarse en una de las diversas formas descritas en la presente, por ejemplo, fragmentos solubles, variantes, y lo similar, derivados de las proteínas indicadas. Una modalidad de tal heterodímero comprende una proteína de fusión IL-4R/Fc soluble y una proíeína de fusión IL-2R?/Fc. Tales heíerodímeros se describen en WO 96/11213, junio con los homodímeros IL-4R. Oíros ejemplos de heterodímeros comprenden una subunidad de IL-4R (preferentemente un fragmento soluble de la proteína del NO DE ID DE SEC:2) y al menos una subunidad recepíora de I L-13. Los complejos receptores de I L-13 (IL-13R) y los polipéptidos IL-13R (íales como los polipéptidos designados IL-13Ra1 e IL-13Ra2) se describen en Zurawski et al., J. Biol.. Chem. 270 (23), 13869, 1995; de Vries, J. Allergy Clin. Immunol. 102(2):165, Agosto de 1998; Callard et al. Immunology Today, 17(3):108, Marzo de 1996, y la Pateníe de E.U. No. 5,710,023, cada una de las cuales se incorpora para referencia en la présenle. En una modalidad, un heterodímero comprende una IL-4R humana soluble y una IL-13R soluble (preferentemente una forma soluble del polipéptido descrito en la Pateníe de E.U. No. 5,710,023 o IL-13Ra1). Los componenles de heterodímeros pueden ser cualquier forma adecuada de polipéptidos que mantenga la acíividad deseada, íal como fragmentos, variantes, o proteínas de fusión (por ejemplo, fusiones de polipéptidos de recepíor soluble con polipéptidos de Fc, péptidos de cierre de leucina, enlazadores de péptido, o etiqueías de epílope). Los polipépíidos receplores de I L-4 y las proleínas de fusión descritos en la presente pueden prepararse por cualquiera de entre un cierto número de técnicas convencionales. Los polipéptidos de IL-4R pueden purificarse de células que expresan naturalmente el receptor (tal como las células descritas en Park et al. , Proc Nati. Acad. Sci. USA 84: 1 669-673, 1 987) , o pueden producirse en sistemas de expresión recombinantes, utilizando técnicas bien conocidas. Los sistemas de expresión para su uso en la producción de I L-4R incluyen aquellos descritos e I L-4R la Patente de E. U . No. 5, 599, 905, la cual se incorpora en la presente para referencia. Una variedad de sislemas de expresión son conocidos para su uso en la producción de proleínas recombinantes. En general , las células huésped se transforman con un vector de expresión recombinante que comprende el ADN q ue codifica un polipépíido de I L-4R deseado. Entre las células huésped que pueden emplearse se encuentran las procariolas, células de levadura o eucarióticas superiores. Las procariotas incluyen organismos de gramo negativo o de gramo positivo, por ejemplo, E. Coli o bacilli. Las células eucarióticas superiores incluyen células de insectos y líneas celulares establecidas de origen mam ífero. Los ejemplos de l íneas celulares de huésped mamífero adecuado incluyen la línea COS-7 de células de riñon de mono (ATCC CRL 1 651 ) (Guzmán et al . , Cell 23: 1 75, 1 981 ) , células L, células 293, células 3T3 (ATCC CCL 1 63) , células de ovarios de hámster chino (CHO) , células HeLa, líneas celulares BHK (ATCC CRL 1 0), y la línea celular CVI/EBNA derivada de la línea celular de riñon de mono verde africano CVI (ATCC CCL 70) como se describe por McMahan et al. (EMBO J. 1 0: 2821 , 1 991 ). La clonación y vectores de expresión apropiados para su uso con huéspedes celulares bacterianos, fúngicos, de levadura, y mamíferos se describen por Pouweis et al (Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, Nueva York, 1 985). Las células íransformadas se cullivan bajo condiciones que mejoran la expresión de la I L-4R, y se recupera el polipépíido por procedimientos convencionales de purificación de proteína. Uno de tales procedimientos de purificación incluye el uso de cromalografía de afinidad , por ejemplo, sobre una matriz que tiene la I L-4 unida a la misma. La I L-4 expresada se deposiíará en la membrana celular o se segregará en el sobrenadanle de cultivo, dependiendo del ADN de I L-4R seleccionado. Los polipéptidos contemplados para su uso en la presente incluyen substancialmente polipéptidos de I L-4R de mamífero recombinaníe homogénea subslancialmente libre de materiales endógenos contaminantes.

Anticuerpos Los anlicuerpos que funcionan como anlagonisías de I L-4 pueden emplearse en los mélodos de la presente invención. Los anticuerpos son preferenlemenle anlicuerpos monoclonales o fragmentos de unión de antígeno de los mismos. Venlajosamente, se emplean anlicuerpos monoclonales humanos o quiméricos. Son más preferidos los anticuerpos monoclonales humanos preparados que utilizan raíones íransgénicos, como se describe a conlinuación. Los anticuerpos humanos pueden prepararse utilizando lécnicas de exhibición de fagos. Los ejemplos de anlicuerpos adecuados son aq uellos que iníerfieren con la unión de I L-4 a un recepíor de I L-4. Tales anlicuerpos, referidos en la présenle como aníicuerpos de bloqueo, pueden cullivarse sea contra la I L-4 o la I L-4R, y examinarse en pruebas convencionales para la capacidad de interferir con la unión de I L-4 a los recepíores de I L-4. Los ejemplos de pruebas adecuadas y pruebas que analizan la capacidad de los anlicuerpos para inhibir la unión de I L-4 a células que expresan I L-4R, o que prueban la capacidad de los anticuerpos para reducir una respuesta biológica o celular que es resullado de la unión de I L-4 a los receptores de I L-4 de superficie celular. Se ha observado que la I L-4Ra es un componente de algunos com plejos de I L-13 de m ulti-subunidad (Zurawski , el al . , J. Biol. Chem. 270 (23) , 1 3869, 1 995; de Vries, J. Allergy Clin. Immunol. 102(2): 165, Agoslo de 1998; y Callard et al. Immunology Today, 1 7(3) : 108, Marzo de 1 996, incorporadas cada una de ellas en la presente para referencia). Consecuentemente, algunos anticuerpos cultivados contra la I L-4Ra pueden interferir con la unión de I L-1 3 a tales complejos receptores. En una modalidad, los anticuerpos dirigidos contra la unión de I L-4R bloquean la unión de I L-4 y también de I L-1 3 a las células. Los anlicuerpos inhiben la actividad biológica inducida por I L-4e inhiben también la aclividad inducida por I L- 1 3, y consecueníemenle pueden emplearse para íralar condiciones inducidas sea por una o más cifoquinas. Los ejemplos de tales condiciones incluyen pero no se limitan a condiciones mediadas por Ig E, asma, condiciones alérgicas, rinitis alérgica, y dermatifis incluyendo dermafifis aíópica.

Los anticuerpos que se unen a I L-4R e inhiben la unión de IL-4 pueden examinarse en diversas pruebas convencionales para idenlificar aquellos aníicuerpos que inlerfieren lambién con la unión de I L-1 3 a tales complejos receptores. Los anticuerpos pueden examinarse en pruebas de unión o probarse para conocer su capacidad de inhibir una actividad biológica inducida por I L-4 y una inducida por I L-1 3. Se ilustra un ejemplo de prueba adecuada en el Ejemplo 5 a continuación mostrado. Los anticuerpos específicos para I L-4 o I L-4R pueden prepararse por procedimieníos bien conocidos. Ver, por ejemplo, Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimensión in Biological Analyses, Kennet et al . (eds. ) , Plenum Press, Nueva York ( 1 980); y Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow y Land (eds. ), Cold Spring Harbor Laboralory Press, Cold Spring Harbor, NY, ( 1 988) . Los fragmeníos de unión de antígeno de tales anticuerpos pueden producirse por lécnicas convencionales. Los ejemplos de íales fragmeníos incluyen , pero no se limilan a, fragmentos Fab, F(ab')2, y Fv. Los fragmentos de anticuerpo y derivados producidos por técnicas de diseño genéíico también se contemplan para su uso. A menos que se especifique de olra manera, los términos "anticuerpo" y "anticuerpo monoclonal" como se utilizan en la presenie coníemplan lanto anticuerpos completos como fragmentos de unión de antígeno de los mismos. Las modalidades adicionales incluyen anticuerpos quiméricos, por ejemplos, versiones humanizadas de anticuerpos monoclonales murinos. Tales aníicuerpos humanizados pueden prepararse por lécnicas conocidas, y ofrecen la venlaja de una inmunogenicidad reducida cuando se adminislran los anlicuerpos a seres humanos. En una modalidad, un anticuerpo monoclonal humanizado comprende la región variable de un anticuerpo murino (o solo el sitio de unión de antígeno del mismo) y una región constante derivada de un anticuerpo humano. Alternativamenle, un frag menío de aníicuerpo humanizado puede comprender el silio de unión de anlígeno de un anlicuerpo monoclonal murino y un fragmenlo de región variable (que carece del silio de unión de anlígeno) derivado de un anlicuerpo humano. Los procedimientos para la producción de anticuerpos monoclonales q uiméricos y diseñados adicíonalmente incluyen aquellos descritos en Riechmann et al. (Nature 332:323, 1 988), Liu et al . , (PNAS 84:3439, 1 987), Larrick et al. , (Bio/Technology 7:934, 1 989) , y Winter y Harris ( TIPS 74: 1 39, Mayo de 1 993) . Un éíodo para producir un aníicuerpo que com prende inmunizar un animal no humano, íal como un ratón transgénico, con un polipéptido de I L-4R, por el cual los anticuerpos dirigidos contra el polipéptido de I L-4R se generan en dicho animal. Los procedimientos se han desarrollado para generar anticuerpos humanos en animales no humanos. Los anlicuerpos pueden ser parcialmeníe humanos, o prefereníemeníe complelamenle humanos. Por ejemplo, pueden emplearse ratones transgénicos en los cuales se ha introducido el material genético que codifica una o más cadenas de inmunoglobulina humana. Tales ratones pueden alterarse genéíicameníe en una variedad de maneras. La manipulación genética puede ser resultado de cadenas de polipéptido de inmunoglobulina humana que reemplazan las cadenas de inmunoglobulina endógenas en al menos algunos anticuerpos (preferentemeníe virlualmenle iodos) producidos por el animal Iras la inmunización . Se han preparado ratones en los cuales se han desactivado uno o más genes de inm unoglobulina endógena por diversos medios. Los genes de inmunoglobulina humana se han introducido a los ratones para reemplazar los genes de ratón desactivados. Los anticuerpos producidos en los animales incorporan cadenas de polipéptido de inm unoglobulina humana codificadas por el material genético humano introducido en el animal. Los ejemplos de íécnicas para la producción y uso de lales animales Iransgénicos se describen en las Patentes de E. U . No. 5, 814, 31 8, 5, 569, 825, y 5, 545, 806, los cuales se incorporan para referencia en la presente. Los Ejemplos 2-4 a continuación < proporcionan la descripción adicional de la preparación de ratones íransgénicos úíiles para generar anticuerpos humanos dirigidos contra un antígeno de interés. Los aníicuerpos producidos al inmunizar animales no humanos Iransgénicos con un polipéptido de I L-4R se proporcionan en la presente. Los ratones Iransgénicos en los cuales se ha introducido el material genéíico que codifica la(s) cadena(s) de polipépíido de inmunoglobulina humana se encuentran entre los animales transgénicos adecuados. Los ejemplos de tales ratones incluyen , pero no se limilan a, aquellos que conlienen alferaciones genélicas descrifas en los ejemplos a continuación citados. Un ejemplo de un inmunogen adecuado es una I L-4R humana soluble, lal como un polipéptido que comprende el dominio extracelular de la proteína del NO DE I D DE SEC:2, u otro fragmento inmunogénico de la proteína del NO DE I D DE SEC :2. Los anticuerpos monoclonales pueden producirse por procedimientos convencionales, por ejemplo, al inmortalizar células de bazo cosechadas del animal transgénico después del término del programa de inmunización. Las células de bazo pueden fusionarse con células de mieloma para producir hibridomas, por procedimienlos convencionales. Un mélodo para producir una línea celular de hibridoma comprende inmunizar tal animal transgénico con un inmunogen de I L-4R; cosechar células de bazo del animal inmunizado; fusionar las células de bazo cosechadas a una línea celular de mieloma, generar así células de hibridoma; e identificar una línea celular de hibridoma que produce un aníicuerpo monoclonal que une un polipéptido de I L-4R. Tales líneas celulares de hibridoma, y los anticuerpos monoclonales anti-IL-4R producidos a paríir de ellos, se coníemplan por la presenie invención . Los anlicuerpos monoclonales segregados por la línea celular de hibridoma se purifican por técnicas convencionales. Los hibridomas o Mabs pueden examinarse adicionalmente para idenlificar Mabs con propiedades particulares, tales como la capacidad de bloquear una actividad inducida por IL-4, y para bloquear una actividad inducida por 1 L-1 3 (ver la prueba en el Ejemplo 5) . Los aníicuerpos humanos que unen I L-4R se proporcionan por la presente invención. En una modalidad de la invención , los anticuerpos humanos cultivados contra la I L-4R y producidos por técnicas que implican el uso de ratones transgénicos, bloquean la unión de I L-4 y también de I L-1 3 a las células. Tales aníicuerpos son antagonislas de I L-4 y funcionan adicionalmente como antagonislas de I L-1 3. Entre los usos de anticuerpos dirigidos contra una I L-4R se encuentra el uso en pruebas para deteclar la presencia de polipépíidos de I L-4R, sea in vitro o in vivo. Los aníicuerpos pueden emplearse también para purificar las proteínas de I L-4R por cromaíografía de ¡nmunoafinidad. Pueden uíilizarse aquellos aníicuerpos que pueden bloquear adicionalmenle la unión de I L-4 o I L-4R para inhibir una aclividad biológica que sea resullado de lal unión . Los anlicuerpos de unión encuentran uso en los métodos de la presente invención . Pueden emplearse tales anticuerpos que funcionan como antagonistas de I L-4 para tratar cualquier condición inducida por IL-4, que incluyen pero que no se limitan a asma y alergias, por ejemplo, rinitis alérgica, dermatitis de contacto, y dermatitis atópica. En una modalidad, se emplea un anticuerpo monoclonal de anti-I L-4R humano generado por procedimientos que implican la inmunización de ratones Iransgénicos para tratar tales condiciones. Los aníicuerpos pueden emplearse en un procedimienío in vitro, o se administran in vivo para inhibir una aclividad biológica inducida por I L-4. Consecuentemenle, pueden íratarse los padecimieníos ocasionados o exacerbados (direclamenle o indireclamente) por la iníeracción de IL-4 con recepíores de IL-4 de superficie celular. Un mélodo íerapéufico involucra la adminisíración in vivo de un anlicuerpo de bloqueo a un mamífero en una caníidad eficaz para reducir una acíividad biológica inducida por I L-4. Los anticuerpos de la invención incluyen , pero no se limitan a, anticuerpos monoclonales parcialmente humanos (preferentemente completamente humanos) que inhiben una actividad biológica de I L-4 e inhiben también una actividad biológica de IL-13. Una modalidad se refiere a un anlicuerpo monoclonal humano que al menos bloquea parcialmenle la unión de I L-4 a una célula, y bloquea al menos parcialmeníe la unión de I L-1 3 a una célula. Los anlicuerpos de la presenie invención incluyen pero no se limilan a anticuerpos generados al inmunizar un ratón transgénico con un inmunogen de receptor de I L-4, en el que el ratón transgénico se selecciona a partir de las cepas de ratón descritas en el Ejemplo 3 citado a continuación. Los anticuerpos deseados son al menos parcialmente humanos, y preferentemenle compleíameníe humanos. En una modalidad, el inmunogen es un polipéptido de receptor de I L-4 humana. Las l íneas celulares de hibridoma derivadas de los ratones inmunizados, en los que el hibridoma segrega un anticuerpo monoclonal que une I L-4R, se proporcionan lambién en la présenle. Los ejemplos de anticuerpos producidos al inmunizar tales ratones transgénicos son los anticuerpos monoclonales humanos designados 6-2 (descritos en el Ejemplo 6) ; 1 2B5 (descrito en el Ejemplo 8) ; y Mabs 63, 1 B7, 5A1 , y 27A1 (descritos todos en el Ejemplo 9). Los anticuerpos monoclonales 6-2, 12B5, 63, 1 B7, 5A1 , y 27A1 , son anticuerpos completamenle humanos, y son capaces de inhibir la actividad tanlo de I L-4 como de I L-1 3. Los Mabs 1 2B5, 63, y 1 B7 son antagonisías preferidos de la I L-4 humana y la I L-1 3 humana. Los aníicuerpos monoclonales paríiculares de la invención se seleccionan a parlir del grupo que consiste en el Mab 6-2; un Mab q ue es reactivo-cruzado con 6-2; un Mab que se une al mismo epííope que 6-2; un Mab que compile con 6-2 para unirse a una célula q ue expresa la I L-4R humana; un MAb que posee una aclividad biológica de 6-2; y un fragmento de unión de antígeno de cualquiera de los anticuerpos anteriores. En una modalidad, el anticuerpo tiene una afinidad de unión para la I L-4R humana que es substancialmente equivalente a la afinidad de unión de 6-2 para la I L-4R humana. El Mab 6-2 es un anticuerpo de IgM. Los Mabs de otros isotipos (que incluyen pero que no se limilan a lgG 1 e lgG4) , derivados de 6-2 , se encuentran también contemplados por la presente invención . Las líneas celulares de hibridoma que producen cualquiera de lales anlicuerpos monoclonales también se proporcionan por la presente invención. Un ejemplo de una actividad biológica de 6-2 es la capacidad de funcionar tanto como un antagonista de I L-4 y un antagonisfa de I L-1 3. En una modalidad, un Mab de la invención posee aclividad de bloqueo de I L-4 substancialmente equivalente a la de 6-2 ; y posee actividad de bloqueo de I L-1 3 substancialmeníe eq uivalenle a la de 6-2. Tal actividad puede medirse en cualquier prueba convencional adecuada (por ejemplo, como se mide en la prueba de expresión de CD23 descrita en el Ejemplo 5) . La secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera de Mab 6-2 se presenta en el NO DE I D DE SEC: 5, y la secuencia de aminoácido codificado se presenta en el NO DE I D DE SEC:6. La secuencia de ADN para la región variable de la cadena pesada de Mab 6-2 se presenta como el NO DE I D DE SECJ, y la secuencia de aminoácido codificada se presenta en el NO DE I D DE SEC:8. Los anticuerpos de la presente invención incluyen , pero no se limitan a, anticuerpos monoclonales que comprenden, en su cadena ligera, los residuos 1 a 1 07 del NO DE I D DE SEC:6; y los anticuerpos que comprenden adicionalmenle o alíernaíivameníe, en su cadena pesada, los residuos 1 a 1 1 8 del NO DE I D DE SEC: 8. Las regiones de deíerminación de complemeníariedad (CDRs) de un anticuerpo determinado pueden identificarse utilizando el sistema descrito por Kabat et al. en Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed . , Departamento de Salud y Servicios Humanos de E. U . , PHS, N I H , Publicación no. 91 -3242 de N I H , 1 991 ) . Las modalidades particulares de anticuerpos de la presente invención comprenden , deníro de la región variable o su cadena ligera, al menos una de las regiones de delerminación de complemeníariedad (CDRs) , o regiones hipervariables, encontradas en la región ligera de 6-2. Las CDRs de 6-2 se describen en el Ejemplo 6. Consecuentemente, entre los anticuerpos proporcionados en la presente se encuentran aquellos que comprenden de uno hasta las íres secuencias siguienles en su región variable de cadena ligera: los residuos de aminoácido 24-35 del NO DE I D DE SEC:6; los residuos 51 -57 del NO DE I D DE SEC:6; y los residuos 90-97 del NO DE I D DE SEC:6. Los aníicuerpos paríiculares proporcionados en la présenle comprenden , en la región variable de su cadena pesada, al menos una de las CDRs enconlradas en la cadena pesada de 6-2. Consecuentemente, entre los anticuerpos proporcionados en la presente se encuenlran aquellos que comprenden de uno a las íres siguientes secuencias en la región variable de cadena pesada : los residuos 31 -35; los residuos 50-66; y los residuos 99-1 07 del NO DE I D DE SEC: 8. Los anticuerpos monoclonales parliculares de la invención se seleccionan de enfre el grupo que consisíe en Mab 1 2B5; un Mab que es reacíivo cruzado con 1 2B5; un Mab que se une al mismo epííope que 1 2B5; un Mab que compile con 1 2B5 para unirse a una célula que expresa la I L-4R humana ; una Mab que posee una aclividad biológica de 1 2B5; y un fragmento de unión de antígeno de cualquiera de los anticuerpos anteriores. En una modalidad , el anticuerpo tiene una afinidad de unión para la I L-4R humana que es substancialmente equivalente a la afinidad de unión de 1 2B5 para la I L-4R humana. Mab 12B5 es un anticuerpo lgG1 . Los Mabs de otros isotipos, derivados de 1 2B5, se contemplan también por la presente invención. En las modalidades particulares, el isotipo de Mab es lgG 1 ' , lgG4, o IgM . Las líneas celulares de hibridoma que producen cualq uiera de lales anticuerpos monoclonales se proporcionan también por la presente invención . Un ejemplo de una actividad biológica de 1 2B5 es la capacidad de funcionar tanto como un antagonisla de I L-4 como con un antagonista de I L-1 3. En una modalidad , un Mab de la invención posee actividad de bloqueo de I L-4 substancialmente equivalente a la de 1 2B5, y posee una actividad de bloqueo de I L-1 3 subslancialmenle equivalenle a la de 1 2B5. Tal acíividad puede medirse en cualquier prueba convencional adecuada (por ejemplo, como se mide en la prueba de expresión CD23 descrita en el Ejemplo 5) . Los anticuerpos monoclonales de Ig4 derivados de 1 2B5 se proporcionan en la presente. Otra modalidad se refiere a anticuerpos monoclonales de IgM derivados de 1 2B5. Los procedimientos para cambiar (alterar) la subclase o isotipo de un anlicuerpo son conocidos en el campo perlinenle. Tales procedimieníos pueden implicar, por ejem plo, tecnolog ía de ADN recombinante, por la que el ADN que codifica las cadenas de polipéptido de anlicuerpo que confieren la subclase deseada se subsíiluye por ADN que codifica la cadena de polipépíido correspondiente del anticuerpo padre. La secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera de Mab 1 2B5 se presenta en el NO DE I D DE SEC: 9, y la secuencia de aminoácido codificada se presenta en el NO DE I D DE SEC: 1 0. La secuencia de ADN para la región variable de la cadena pesada de Mab 1 2B5 se presenta como el NO DE I D DE SEC: 1 1 , y la secuencia de aminoácido codificada se présenla en el NO DE I D DE SEC: 12. Los aníicuerpos de la presenie invención incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos monoclonales que comprenden, en su cadena ligera, los residuos 1 a 1 09 del NO DE I D DE SEC: 1 0, y los anticuerpos q ue adicionalmente o alternalivameníe comprenden, en su cadena pesada, los residuos 1 a 1 1 5 de NO DE I D DE SEC: 1 2. Las modalidades particulares de anticuerpos de la presenie invención, en la región variable o su cadena ligera, al menos una de las regiones de delerminación de complementariedad (CDRs) , o reg iones hipervariables, encontradas en la cadena ligera de 1 2B5. Las CDRs de 12B5 se describen en el Ejemplo 8. Consecuentemente, entre los anticuerpos proporcionados en la presente se encuentran aquellos que comprenden de una a fres de las siguieníes secuencias en la región variable de cadena ligera: residuos de aminoácido 24-35 del NO DE I D DE SEC: 1 0; los residuos 51 -57 del NO DE I D DE SEC: 1 0; y los residuos 90-99 del NO DE I D DE SEC: 1 0. Los anticuerpos particulares proporcionados en la présenle comprenden, en la región variable de su cadena pesada, al menos una de las CDRs enconíradas en la cadena pesada de 12B5. Consecuenlemente, entre los anticuerpos proporcionados en la presente se encuentran aquellos que comprenden de una a las tres siguientes secuencias en la región variable de cadena pesada: los residuos 31 -35; los residuos 50-65; y los residuos 98- 104 del NO DE I D DE SEC: 1 2. Los anlicuerpos monoclonales parliculares de la invención se seleccionan a paríir del grupo que consisle en Mab 27a 1 ; un Mab que es reacíivo cruzado con 27A1 ; un Mab que se une al mismo epítope que 27A1 ; un Mab que compite con 27A1 para unirse a una célula que expresa I L-4R humana; un Mab que posee una acíividad biológica de 27A1 ; y un fragmenío de unión de anfígeno de cualquiera de entre los anticuerpos anleriores. En una modalidad , el anticuerpo tiene una afinidad de unión para la I L-4R humana que es substancialmeníe equivalenle a la afinidad de unión de 27A1 para la IL-4R human. 27A1 es un anlicuerpo de lgG 1 . Los Mabs de oíros isolipos, derivados de 27A1 , se coníemplan también por la presente invención . Las l íneas celulares de hibridoma que producen cualquiera de tales anticuerpos monoclonales se proporcionan también por la presenie invención. Un ejemplo de actividad biológica de 27A1 es la capacidad de funcionar tanto como un antagonista de I L-4 como un antagonista de I L- 1 3. En una modalidad , un Mab de la invención posee actividad de bloqueo de I L-4 subslancialmenle equivalenle a la de 27A1 ; y posee la aclividad de bloqueo de I L-13 substancialmente equivalente a la de 27A1 . Tal actividad puede medirse en cualq uier prueba convencional adecuada (por ejemplo, como se mide en la prueba de expresión CD23 descrita en el Ejemplo 5). La secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera de Mab 27A1 se presenta en el NO DE I D DE SEC: 1 3, y la secuencia de aminoácido codificado se presenta en el NO DE I D DE SEC: 14. La secuencia de ADN para la región variable de la cadena pesada de Mab 27A1 se presenta como el NO DE I D DE SEC: 1 5, y la secuencia de aminoácido codificada se presenta en el NO DE I D DE SEC: 16. Los anticuerpos de la preseníe invención incluyen, pero no se limitan a, los anticuerpos monoclonales que comprenden, en su cadena ligera, los residuos 1 a 1 09 del NO DE I D DE SEC: 14; y los anlicuerpos que adicionalmenle o alíernalivamente comprenden , en su cadena pesada, los residuos 1 a 1 16 del NO DE I D DE SEC: 16. Las modalidades paríiculares de aníicuerpos de la presente invención comprenden , en la región variable de su cadena ligera , al menos una de las regiones de determinación de complementariedad (CDRs), o regiones hipervariables, encontradas en la cadena ligera de 27A1 . Las CDRs de 27A1 se describen en el Ejemplo 9.

Consecuentemeníe, enlre los anlicuerpos proporcionados en la presenie son aquellos que comprenden de una a íres de las siguientes secuencias en la región variable de cadena ligera: los residuos de aminoácido 24-35 del NO DE I D DE SEC: 14; los residuos 51 -57 del NO DE I D DE SEC: 14; y los residuos90-99 del NO DE ID DE SEC: 14. Los anticuerpos particulares proporcionados en la presenie comprenden, en la región variable de su cadena pesada, al menos una de las CDRs enconlradas en la cadena pesada de 27A1 . Consecuentemente, entre los anticuerpos proporcionados en la presente se encuentran aquellos que comprenden de una a las tres siguientes secuencias en la región variable de cadena pesada: los residuos 31 -35; los residuos 50-66; y los residuos 99-1 05 del NO DE I D DE SEC: 1 6. Los anticuerpos monoclonales particulares de la invención se seleccionan a partir del grupo que consisten en Mab 5A1 ; un Mab que es reactivo cruzado con Mab 5A1 ; un Mab que se une al mismo epítope que 5A1 ; un Mab que compite con 5A1 para unirse a una célula que expresa la IL-4R humana; un MAb que posee una actividad biológica de 5A1 ; y un fragmenío de unión de anlígeno de cualquiera de enlre los anticuerpos anteriores. En una modalidad, el anlicuerpo liene una afinidad de unión para la I L-4R humana que es subsfancialmente equivalenle a la afinidad de unión de 5A1 para la I L-4R humana. 5A1 es un anlicuerpo lgG 1 . Los Mabs de otros isotipos, derivados de 5A1 , se encuenlran conlemplados íambién por la presente invención . Las líneas celulares de hibridoma que producen cualquiera de tales anticuerpos monoclonales se proporcionan por la presente invención. Un ejemplo de una actividad biológica de 5A1 es la capacidad de funcionar tanío como antagonisía de I L-4 como antagonisla de I L-1 3. En una modalidad, un MAb de la invención posee acíividad de bloqueo de I L-4 subsíancialmente equivalente a la de 5A1 ; y posee aclividad de bloqueo de I L- 1 3 subslancialmente equivalente a la de 5A1 . Tal actividad puede medirse en cualquier prueba convencional adecuada (por ejemplo, como se mide en la prueba de expresión CD23 descrita en el Ejemplo 5) . La secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera de MAb 5A1 se présenla en el NO DE I D DE SEC: 1 7, y la secuencia de aminoácido codificada se présenla en el NO DE I D DE SEC: 1 8. La secuencia de ADN para la región variable de la cadena pesada de MAb 5A1 se presenta como NO DE I D DE SEC: 1 9, y la secuencia de aminoácido codificado se presenta en el NO DE ID DE SEC:20. Los anticuerpos de la presente invención incluyen , pero no se limitan a, anticuerpos monoclonales que comprenden, en su cadena ligera, los residuos 1 a 1 07 del NO DE I D DE SEC: 1 8; y los anticuerpos que comprenden adicionalmente o alternalivamente, en su cadena pesada, los residuos 1 a 1 23 del NO DE I D DE SEC: 20. Las modalidades parliculares de los anlicuerpos de la presenie invención comprenden, en la región variable de su cadena ligera, al menos una de las regiones de determinación de complementariedad (CDRs), o regiones hipervariables, encontradas en la cadena ligera de 5A1 . Las CDRs de 5A1 se describen en el Ejemplo 9. Consecuentemente, entre los anticuerpos proporcionados en la presente se encuenlran aquellos que comprenden de una a las tres de las siguientes secuencias en la región variable de cadena ligera: los residuos de aminoácido 24-34 del NO DE I D DE SEC: 1 8, los residuos 50-56 del NO DE I D DE SEC: 18; y los residuos 89-97 del NO DE ID DE SEC: 1 8. Los anficuerpos parliculares proporcionados en la presenie comprenden , en la región variable de su cadena pesada, al menos una de las CDRs encontradas en la cadena pesada de 5A1 . Consecuentemente, entre los anticuerpos proporcionados en la presente se encuentran aquellos que comprenden de una a las tres siguientes secuencias en la región variable de cadena pesada: los residuos 31 -35; los residuos 50-65; y los residuos 98-1 1 2 del NO DE I D DE SEC:20. Los anticuerpos monoclonales particulares de la invención se seleccionan a parlir del grupo que consisíe en MAb 63; un Mab que es reaclivo cruzado con MAb 63; un MAb que se une al mismo epítope que 63; un MAb que compite con 63 para unirse a una célula que expresa la I L-4R humana; un MAb que posee una aclívidad biológica de 63; y un fragmenío de unión de anlígeno de cualquiera de los aníícuerpos aníeriores. En una modalidad , el aníicuerpo íiene una afinidad de unión para la I L-4R humana que es subslancialmeníe equivalenle a la afinidad de unión de 63 para la I L-4R humana. El MAb 63 es un anlicuerpo de Ig M . Los Mabs de otros isotipos, derivados de 63, se encuenlran lambién conlemplados por la presente invención. Las líneas celulares de hibridoma que producen cualquiera de tales anticuerpos monoclonales se proporcionan tam bién por la presente invención . Un ejemplo de actividad biológica de 63 es la capacidad de funcionar tanto como antagonista de I L-4 como de antagonisía de I L-1 3. En una modalidad, un MAb de la invención posee actividad de bloqueo de I L-4 substancialmeníe equivaleníe a la de 63; y posee actividad de bloqueo de I L-1 3 substancialmeníe equivalente a la de 63. Tal actividad puede medirse en cualquiera prueba convencional adecuada (por ejemplo, como se mide en la prueba de expresión CD23 descrita en el Ejemplo 5) . La secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera de MAb 63 se presenta en el NO DE I D DE SEC: 21 , y la secuencia de aminoácido codificada se presenta en el NO DE I D DE SEC:22. La secuencia de ADN para la región variable de la cadena pesada de MAb 63 se presenta como el NO DE I D DE SEC:23, y la secuencia de aminoácido codificada se presenta en el NO DE ID DE SEC:24. Los anticuerpos de la presente invención incluyen , pero no se limitan a, anticuerpos monoclonales que comprenden , en su cadena ligera , los residuos 1 a 1 07 del NO DE I D DE SEC: 22; y los anticuerpos que comprenden adicionalmeníe o alíernafivamenfe, en su cadena pesada, los residuos 1 a 1 1 7 del NO DE I D DE SEC:24. Las modalidades parliculares de anticuerpos de la presente invención comprenden, en la región variable de su cadena ligera, al menos una de las regiones de determinación de complementariedad (CDRs), o regiones hipervariables, encontradas en la cadena ligera 63. Las CDRs de 63 se describen en el Ejemplo 9. Consecuentemenle, entre los anticuerpos proporcionados en la présenle se encuentran aq uellos que comprenden de una a las tres siguientes secuencias en la región variable de cadena ligera: los residuos de aminoácido 24-34 del NO DE ID DE SEC:22, los residuos 50-56 del NO DE I D DE SEC:22; y los residuos 89-97 del NO DE I D DE SEC:22. Los anticuerpos particulares proporcionados en la presente comprenden , en la región variable de su cadena pesada, al menos una de las CDRs encontradas en la cadena pesada de 63. Consecuentemente, entre los anticuerpos proporcionados en la presente se encuentran aquellas que comprenden de una a tres de las siguientes secuencias en la región variable de cadena pesada : los residuos 31 -35; los residuos 50-66; y los residuos 99-1 06 del NO DE I D DE SEC: 24. Los anticuerpos monoclonales particulares de la invención se seleccionan a partir del grupo que consiste en MAb 1 B7; un Mab que es reactivo cruzado con 1 B7; un MAb que se une al m ismo epítope q ue 1 B7; un MAb que compile con 1 B7 para unirse a una célula que expresa la I L-4R humana; un MAb que posee una actividad biológica de 1 B7; y un fragmento de unión de antígeno de cualquiera de los anticuerpos anteriores. En una modalidad, el anticuerpo tiene una afinidad de unión para la I L-4R humana que es substancialmenle equivaleníe a la afinidad de unión de 1 B7 para la I L-4R humana. Los Mabs de oíros isofipos, derivados de 1 B7 , se encuenlran íambién coníemplados por la presenie invención . Las líneas celulares de hibridoma que producen cualquiera de tales anticuerpos monoclonales se proporcionan también por la presente invención. Un ejemplo de actividad biológica de 1 B7 es la capacidad de funcionar tanto como antagonista de I L-4 como de antagonisía de I L-1 3. En una modalidad, un MAb de la invención posee acíividad de bloqueo de IL-4 subsíancialmenle equivalente a la de 1 B7; y posee actividad de bloqueo de I L-1 3 substancialmente equivalente a la de 1 B7. Tal acíividad puede medirse en cualquiera prueba convencional adecuada (por ejemplo, como se mide en la prueba de expresión CD23 descrita en el Ejemplo 5). El MAb 1 B7 se derivó del MAb 63. La secuencia de aminoácido de la cadena pesada de MAb 1 B7 es idéntica a la de MAb 63. Las únicas diferencias entre los dos anticuerpos se encuentran en la cadena ligera. La secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera de MAb 1 B7 se presenta en el NO DE I D DE SEC: 25, y la secuencia de aminoácido codificada se presenta en el NO DE I D DE SEC:26. La secuencia de ADN para la región variable de la cadena pesada de MAb 1 B7 se presenta como el NO DE I D DE SEC:23, y la secuencia de aminoácido codificada se présenla en el NO DE I D DE SEC:24 (la misma que para MAb 63). Los anlicuerpos de la presente invención incluyen, pero no se limiían a, aníicuerpos monoclonales que comprenden, en su cadena ligera, los residuos 1 a 1 07 del NO DE I D DE SEC:26; y los anticuerpos que comprenden adicionalmente o alternalivamenle, en su cadena pesada, los residuos 1 a 1 1 7 del NO DE I D DE SEC:24. Las modalidades particulares de los anticuerpos de la presenie invención comprenden, en la región variable de su cadena ligera, al menos una de las regiones de deferminación de complementariedad (CDRs) , o regiones hipervariables, encontradas regiones de determinación de complementariedad (CDRs) en la cadena ligera de 1 B7. Las CDRs de 1 B7 se describen en el Ejemplo 9. Consecuentemente, entre los anticuerpos proporcionados en la presente se encuentran aquellos que comprenden de una a las tres siguienles secuencias en la región variable de cadena ligera: los residuos de aminoácido 24-34 del NO DE ID DE SEC:26; los residuos 50-56 del NO DE I D DE SEC:26; y los residuos 89-97 del NO DE I D DE SEC: 26. Los anticuerpos particulares proporcionados en la preseníe invención comprenden, en la región variable de su cadena pesada, al menos una de las CDRs encontradas en la cadena pesada de 1 B7. Consecuentemente, entre los anticuerpos proporcionados en la presente se encuentran aquellos que comprenden de una a las tres siguientes secuencias en la región variable de cadena pesada: los residuos 31 -35; los residuos 50-66; y los residuos 99-106 del NO DE I D DE SEC: 24. La Figura 4 presenía una alineación de las secuencias de aminoácido para la región variable de cadena ligera para los aníicuerpos 1 B7, 63, 1 2B5, 6-2, 5A1 , y 27A1 . La primera secuencia en la alineación es para el aníicuerpo 1 B7. En las secuencias para los demás aníicuerpos, se muesíran los residuos de aminoácido que difieren del residuo enconlrado en la posición correspondieníe en la secuencia 1 B7, y los residuos que son idénlicos al residuo enconlrado en esa posición en 1 B7 se encuentran indicados por "-" . La Figura 5 presenta una alineación de las secuencias de aminoácido para la región variable de cadena pesada para los anticuerpos 1 B7, 63, 1 2B5, 6-2, 5A1 , y 27A1 . La primera secuencia en la alineación es para el anticuerpo 1 B7. En las secuencias para los demás anticuerpos, se muestran los residuos de aminoácido que difieren del residuo encontrado en la posición correspondiente en la secuencia 1 B7, y los residuos que son idénticos al residuo enconírado en esa posición en 1 B7 se encueníran indicados por "-" . Como puede observarse en las Figuras 4 y 5, un cierto número de residuos se encuentra altamente conservados, porque el residuo aparece en una posición correspondiente en los seis anticuerpos. Los anticuerpos particulares de la invención comprenden , en la región variable de su cadena ligera , los residuos de aminoácido que se encuentran en la posición correspondienle en al menos tres de las secuencias de la Figura 4. En algunas modalidades, los anticuerpos comprenden los residuos encontrados en una posición correspondiente en al menos cuatro o al menos cinco, o al menos seis, de las secuencias de la Figura 4. Los anticuerpos particulares de la invención comprenden, en la región variable de su cadena pesada, los residuos de aminoácido que se encuentran en la posición correspondiente en al menos tres de las secuencias de la Figura 5. En algunas modalidades, los anlicuerpos comprenden los residuos enconlrados en una posición correspondienle en ai menos cualro, o al menos cinco, o al menos seis, de las secuencias de la Figura 5. Pueden prepararse los derivados de los anticuerpos monoclonales dirigidos contra I L-4R, y se examinan para las propiedades deseadas, por cualquiera de entre un cierto número de técnicas conocidas. Algunas de las íécnicas involucran aislar el ADN que codifica una cadena de polipéptido (o porción de la misma) de un MAb de interés, y manipular el ADN a través de tecnolog ía de ADN recombinante. El ADN puede fusionarse a otro ADN de interés, o alterarse (por ejemplo, por muíagénesis u oirás íécnicas convencionales) para agregar, eliminar, o sustituir uno o más residuos de aminoácido, por ejemplo. El ADN que codifica los polipéptidos de anlicuerpo (por ejemplo, cadena pesada o ligera, solamenle región variable o tramo completo) puede aislarse a partir de células B de ralones que se han inmunizado con I L-4R. El ADN puede aislarse por procedimientos convencionales tales como reacción de cadena de polimerasa (PCR). La exhibición de fagos es olro ejemplo de lécnica conocida por la cual pueden prepararse los derivados de aníicuerpos. En un planíeamiento, los polipépíidos que son componenles de un aníicuerpo de inferes se expresan en cualquier sisíema de expresión recombinaníe adecuado, y los polipépfidos expresados se dejan agrupar para formar moléculas de anlicuerpos. Los aníicuerpos de cadena individual pueden formarse al enlazar fragmenlos de región variable de cadena pesada y de cadena ligera (región Fv) a íravés de un puenle de aminoácido (enlazador de péplido corlo), dando como resultado una cadena de péptido individual. Tales Fvs de cadena individual (scFvs) se han preparado fusionando ADN que codifica un enlazador de péptido entre los ADNs que codifican los dos polipéptidos de región variable (VL y Vh) . Los fragmentos de anticuerpo resultantes pueden formar dímeros o trímeros, que dependen del largo de un enlazador flexible entre los dos dominios variable (Kortt et al . , Protein Engineering 1 0:423, 1 997) . Las técnicas desarrolladas para la producción de anticuerpos de cadena individual incluyen aquellos descritos en la Patente de E. U . No. 4,946,778; Bird (Science 242:423, 1 988); Huston eí al., (Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85: 5879, 1 988); y Ward eí al. (Nature 334: 544, 1 989) . Los anticuerpos de cadena individual derivados de los anticuerpos proporcionados en la presenie (que incluyen pero que no se limitan a scFvs derivados de los Mabs 6-2, 1 2B5, 63, 1 B7, 5A1 , y 27A1 ) se encuentran contempladas por la presente invención. Las técnicas son bien conocidas para derivar un anticuerpo de una subclase o ísotipo diferenle de un anticuerpo de interés, es decir, cambio de subclase. Consecuenlemenle, los aníicuerpos monoclonales IgG 1 o lgG4 pueden derivarse de un aníicuerpo monoclonal de IgM , por ejemplo, y viceversa. Tales íécnicas permilen la preparación de nuevos anlicuerpos que poseen las propiedades de unión de antígeno de un determinado anticuerpo (el anlicuerpo padre), sino que exhiben lambién propiedades biológicas asociadas con un isolipo o subclase de anticuerpo diferente a la del anticuerpo padre. Pueden emplearse técnicas de ADN recombinantes. Puede emplearse el ADN clonado que codifica los polipéptidos de anticuerpo particulares en tales procedimientos, por ejemplo, el ADN que codifica la región constanle de un aníicuerpo del isoíipo deseado. En las modalidades paríiculares, los aníicuerpos cultivados contra I L-4R tienen una afinidad de unión (Ka) por I L-4R de al menos 1 * 1 08. En otras modalidades, los anticuerpos exhiben un Ka de al menos 1 * 109 o al menos 1 * 1010. También se contemplan los derivados PEGilados de anticuerpos (modificados con polietilenglicol) y pueden prepararse por técnicas convencionales. También se proporcionan en la presente conjugados que comprenden un agente detecíable (por ejemplo, diagnóstico) o terapéulico, unido a un anlicuerpo dirigido conlra I L-4R. Los ejemplos de tales agentes son bien conocidos, e incluyen pero no se limiían a radionúclídos diagnósticos, radionúclidos terapéuficos, y drogas cifoíóxicas. Los conjugados encueníran uso en procedimieníos in vitro o in vivo. Las modalidades paríiculares de la invención se refieren a novedosas moléculas de ácido nucleico y polipépíidos. La información de secuencia de ADN y aminoácido se ha delerminado para los polipépíidos que son componenles de algunos anlicuerpos de la preseníe invención , como se describe en los Ejemplos 6, 8, y 9 a continuación citados. Entre los ácidos nucleicos de la presente invención se aisla ADN que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de entre el grupo que consisíe en la secuencia de nucleólido presenlada en el NO DE ID DE SEC:5, NO DE ID DE SEC:7, NO DE ID DE SEC:9, NO DE ID DE SEC:11, NO DE ID DE SEC:13, NO DE ID DE SEC:15, NO DE ID DE SEC:17, NO DE ID DE SEC:19, NO DE ID DE SEC:21, NO DE ID DE SEC:23, y NO DE ID DE SEC:25. Eníre los polipéptidos de la presente invención se encuentra un polipéptido purificado que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en la secuencia de aminoácidos preseniada en el NO DE ID DE SEC:6, NO DE ID DE SEC:8, NO DE ID DE SEC:10, NO DE ID DE SEC:12, NO DE ID DE SEC:14, NO DE ID DE SEC:16, NO DE ID DE SEC:18, NO DE ID DE SEC:20, NO DE ID DE SEC:22, NO DE ID DE SEC:24, y NO DE ID DE SEC:26. Para su uso in vivo, los polipépíidos se purifican ventajosamente. Puede purificarse un polipéptido individualmenle, o en forma de un anticuerpo purificado del cual el polipéptido es un componenle. Ejemplos adicionales de anlagonislas de IL-4 son los anticuerpos que unen IL-4 e inhiben la unión de I L-4 a los receptores de superficie celular. Tales anticuerpos pueden prepararse, y examinarse para identificar aquellos que son aníicuerpos de bloqueo, por procedimienlos convencionales. Los fragmenlos de unión de anfígeno de tales anticuerpos encuentran uso como antagonistas, como lo hacen los derivados de los mismos humanizados o los diseñados genéticamente.

Los ejemplos de procedimienfos para preparar aníicuerpos dirigidos contra la I L-4 humana (que incluyen anticuerpos monoclonales), pruebas por las cuales se identifican los anlicuerpos de bloqueo, y íécnicas para generar derivados humanizados o diseñados genéíicameníe de anlicuerpos anli-I L-4, se describen en las Palenles de E. U . No. 5,041 , 381 , 5,863, 537 , 5,928, 904, y 5,676,940, las cuales se incorporan para referencia en la presente. Se describen ejemplos adicionales de anticuerpos que pueden emplearse como antagonistas de I L-4 en WO 91 /09059, incorporados también para referencia en la presente.

Otros aníagonisías Puede emplearse cualquier compueslo que funciona como un antagonista de I L-4 y sea adecuado para la administración de acuerdo con los métodos de la presenie invención de la presenie invención. Los antagonistas no necesitan abolir completamente la actividad biológica inducida por I L-4 para ser útiles. En cambio, un antagonisla delerminado puede reducir una acíividad biológica de I L-4. Pueden emplearse los derivados, mutantes/muteínas, y otras variantes de I L-4 que funcionan como anlagonislas de I L-4. Los péptidos (los cuales pueden o no pueden ser muteínas) derivados de I L-4 que se unen a una I L-4R sin inducir la transducción de una señal biológica encuentran uso en la presente. Tales péptidos funcionan como bloqueadores inerles, que interfieren con la unión de I L-4 endógena biológicamente activa a los receptores de superficie celular. Por ende, se inhibe la íransducción de señal inducida por I L-4. Las muleínas u oíros anlagonislas que inducen una respuesía biológica en un nivel reducido o en un grado menor, comparadas con la respuesta inducida por la IL-4 nativa, encuentran lambién uso como anlagonistas de I L-4. En las modalidades particulares, una muteína de I L-4 humana es capaz de inhibir la actividad biológica inducida por I L-4 y la inducida por I L-1 3. Tales muteínas pueden emplearse en aquellos mélodos descritos a continuación que involucran el uso de un antagonisla íanto de I L-4 como de I L- 1 3 para íratar padecimientos paríiculares. Ver, por ejemplo, la m uleína de I L-4 humana (un polipéptido variante con dos mutaciones de punto) descrita en Fitch et al. (J. Allergy Clin. Immunol. , Vol. 107, no. 2, pág . S61 , resumen no. 209, 2001 ). Ejemplos adicionales de antagonistas de I L-4, que incluyen muteínas de I L-4, y los procedimientos para preparación de los mismos se describen en Muller et al . , J. Mol. Biol.. 237:423-436, 1 994; Patente de E. U . No. 6, 028, 1 76, y la Patenle de E. U . No. 5, 723, 1 1 8, las cuales se incorporan en la presenie para referencia. Otras opciones son las moléculas de antidetección (oligonucleótidos) que inhiben la expresión de IL-4. Alternativamente, la molécula de antidelección puede suprimir la expresión de oirás moléculas involucradas en la transducción de señal inducida por I L-4. Puede utilizarse cualquier prueba adecuada, que incluya pruebas in vitro, para delerminar si un compuesto determinado inhibe una aclividad biológica inducida por I L-4. Puede probarse un antagonista para la capacidad de inhibir la incorporación de 3H-íimidina en células que proliferan normalmente en respuesta a I L-4. Una alternaíiva involucra el uso de lécnicas de prueba de unión convencionales para probar la capacidad de un anlagonista para inhibir la unión de células I L-4 que expresan receptores de I L-4 nativos o recombinantes. Para su uso en tales pruebas, la I L-4 humana recombinante puede expresarse y purificarse como se describe en la Patente de E. U . No. 5,01 7,691 , incorporada en la presente para referencia, o en Park et al . , J. Exp. Med. 166:476 ( 1 987) . Las proteínas purificada puede etiquetarse con un agente deteclable (por ejemplo, radioeliquelarse) por cualquiera de entre un cierto número lécnicas convencionales. Puede emplearse un ageníe reactivo de radioyodación de enzimocuenta comercialmente disponible (BioRad) para radioetiquetar la I L-4 con 125l , por ejemplo. La capacidad de un antagonista de I L-4 para inhibir el daño inducido por I L-4 al epitelio, tal como epiíelio pulmonar o epitelio intestinal (lo cual puede dar como resultado la pérdida de función de la barrera) , puede confirmarse en cualquiera de entre un cierto número de pruebas adecuadas. Entre las lécnicas de prueba adecuadas se encueníran aquellas descriías en el Ejemplo 7 a continuación citado.

Métodos Terapéuticos y Administración de Antagonistas Los métodos proporcionados en la presente comprenden administrarle un antagonista de I L-4 a un paciente, reduciendo así una respuesta biológica inducida por I L-4 que desempeña un papel en una condición parlicular. En las modalidades particulares, los métodos de la invención implican coníacíar I L-4 endógena con un antagonista de I L-4, por ejemplo, en un procedimiento ex vivo. El traíamiento comprende el alivio de al menos un síntoma de un padecimiento, o la reducción en la severidad de la enfermedad, y lo similar. Un antagonisla no necesila una "cura" compleía, o erradicar cada sínloma o manifeslación de una enfermedad , para constituir un agente terapéutico viable. Como se reconoce en el campo pertinente, las drogas empleadas como agentes terapéulicos pueden reducir la severidad de un determinado estado de enfermedad, pero no necesita abolir cada manifestación de la enfermedad para considerarse como agentes lerapéuíicos úíiles. Una modalidad de la invención se refiere a un mélodo que comprende adminislrarle a un pacienle un anlagonisla de I L-4 en una caníidad y durante un tiempo suficiente para inducir una mejora sostenida sobre la línea base de un indicador que refleja la severidad del padecimiento en particular. Los anticuerpos que inhiben la unión tanto de células I L-4 como de células I L-13 se describen en la presente. Un método para suprimir las actividades inducidas por I L-4 e inducidas por I L-1 3 en seres humanos comprende administrar una cantidad eficaz de tal anticuerpo. Consecuentemente, pueden tratarse las condiciones inducidas por I L-4 o I L-1 3, o por ambas citoquinas. Como se comprende en la maleria períinente, los antagonislas se le administran al paciente de manera apropiada a la indicación . Los antagonistas pueden administrarse por cualquier técnica adecuada, que incluye pero que no se limita a parenleral, íópica, o por inhalación. Si se inyecla, puede administrarse el antagonista, por ejemplo, a través de rutas intra-articular, intravenosa, intramuscular, intralesional, ¡nlraperiíoneal, o subculánea, por inyección de bolo, o infusión continua . La administración localizada se conlempla, por ejemplo, en un siíio de enfermedad o lesión , como son el suminislro transdérmico y la liberación sostenida derivada de implantes. El suministro por inhalación incluye, por ejemplo, la inhalación nasal u oral , el uso de un nebulizador, inhalación del antagonista en forma de aerosol, y lo similar. Otras alternativas incluyen gotas para los ojos; preparaciones orales que incluyen pastillas, jarabes, tabletas o goma de mascar; y preparaciones tópicas tales como lociones, geles, esprays, y ungüentos. Se conlempla el uso de antagonistas de I L-4 en procedimientos ex vivo. Por ejemplo, la sangre de un pacieníe (fluido corporal con contenido de I L-4) puede contactarse con un antagonisla que une I L-4 ex vivo, reduciendo así la canlidad de I L-4 en el fluido cuando se regresa al paciente. El antagonisía puede unirse a una malriz insoluble adecuada o maierial de soporte sólido. Ventajosamente, los antagonistas se administran en forma de una composición que comprende al menos un antagonista de I L-4 antagonista de I L-4 y uno o más componentes adicionales tales como un portador farmacéuticameníe aceplable, excipieníe o diluyente. La presente invención proporciona lales composiciones que comprenden una canfidad eficaz de un anlagonista de I L-4, para su uso en los métodos proporcionados en la presente. Las composiciones contienen antagonista(s) en cualq uiera de las formas descriías en la présenle. El antagonista puede ser un anticuerpo completo o un fragmento de unión de antígeno o un derivado diseñado del mismo, por ejemplo. Para las composiciones que contienen un receptor de I L-4, el receptor puede ser cualquiera de los fragmentos, varianles, u olígómeros de la proteína del NO DE I D DE SEC:2, descritos en la presente, por ejemplo. Las composiciones pueden, por ejemplo, com prender un antagonista junto con un regulador, antioxidante tal como ácido ascórbico, polipéptido de peso molecular bajo (tal como aquellos que tienen menos de 10 aminoácidos), proteína, aminoácido, carbohidrato tal como glucosa, sacarosa o dextrinas, agenles quelanles lales como EDTA, glulationa , y otros estabilizadores y excipientes. La salmuera regulada neutral o la salmuera mezclada con albúmina de suero conespecífico son ejemplos de diluyentes apropiados. De acuerdo con las normas industriales apropiadas, pueden agregarse preparativos tales como alcohol de bencilo. La composición puede formularse como un liofilizado que utiliza soluciones de excipiente apropiadas (por ejemplo, sacarosa) como diluyentes. Los componeníes adecuados son no tóxicos a los recipientes en las dosis y concentraciones empleadas. Ejemplos adicionales de componentes que pueden emplearse en formulaciones farmacéuticas se presentan en Remington 's Pharmaceutical Sciences, 16a Ed. , Mack Publishing Company, Easton, PA, 1980. Los juegos para su uso por los médicos incluyen un anlagonisla de I L-4 y una eliquela u otras instrucciones para su uso al íralar cualquiera de la condiciones descriías en la presente. El juego incluye preferentemente una preparación estéril de uno o más antagonistas de I L-4, los cuales pueden encontrarse en forma de una composición como se describió anteriormente, y pueden estar en uno o más frascos. Las dosis y la frecuencia de adminisíración pueden variar de acuerdo con facíores lales como la ruta de administración, el antagonista en particular empleado, la naturaleza y severidad de la enfermedad a tratarse, sea la condición aguda o crónica , y el tamaño y condición general del paciente. Las dosis apropiadas pueden determinarse por procedimientos conocidos en la materia pertinente, por ejemplo, en pruebas clínicas que pueden involucrar estudios de aumento de dosis. Puede administrarse un antagonista una vez, o repetidamente. En las modalidades particulares, se deíermina el anlagonista durante un periodo de al menos un mes o más, por ejemplo, durante uno, dos, o íres meses o incluso indefinidameníe. Para traíar condiciones crónicas, generalmente es más eficaz el írafamienlo a largo plazo. Sin embargo, para tralar condiciones agudas, la administración durante periodos más corlos, por ejemplo, de una a seis semanas, puede ser suficiente. En general, el antagonista se administra hasta que el pacieníe manifiesta un grado médicamente relevante o una mejora sobre la línea base para el indicador o indicadores seleccionado(s) .

Las modalidades particulares de la presente invención implican administrar un antagonisía en una dosis desde aproximadamente 1 ng/kg/día hasta aproximadamente 1 0 mg/kg/día, más preferentemeníe desde aproximadameníe 500 ng/kg/día hasla aproximadamenle 5 mg/kg/día, y muy preferentemente desde aproximadamente 5 ug/kg/día hasta aproximadamente 2 mg/kg/día , a un paciente. En las modalidades adicionales, se administra un antagonista tal como un polipépíido de I L-4R humano soluble a los adultos una vez por semana, o tres o más veces por semana , para tralar los padecimienlos médicos descritos en la presente. Si se inyecta, la cantidad eficaz de aníagonista por dosis de adulto puede oscilar de 1 -20 mg/m2, y preferentemente es de aproximadamente 5-1 2 mg/m2. Alternaíivamente, puede administrarse una dosis plana; la cantidad puede oscilar de 5-1 00 mg/dosis. Un rango para una dosis plana es de aproximadamente 20-30 mg por dosis. En una modalidad de la invención , una dosis plana de 25 mg/dosis se administra repeíidameníe por inyección. Si se uíiliza una ruta de administración diferente a la inyección, la dosis se ajusta apropiadamenle de acuerdo con las prácíicas médicas convencionales. Un ejemplo de régimen terapéutico involucra inyectar una dosis de aproximadamente 20-30 mg de I L-4R u otro antagonista de una a tres veces por semana duranle un periodo de al menos íres semanas, aunque el traía iento para periodos más largos puede ser necesario para inducir el grado de mejora deseado. Para pacientes pediáíricos (edad 4-1 7) , un régimen adecuado implica la inyección subculánea de 0.4 mg/kg , hasía una dosis máxima de 25 mg de I L-4R, adminislradas de dos a tres veces por semana. Las modalidades particulares de los métodos proporcionados en la presente implican la inyección subcutánea de desde 0.5 mg hasta 1 0 mg , preferentemente desde 3 hasta 5 mg , de una I L-4R adecuada , una vez o dos veces por semana. Otra modalidad se refiere a la administración pulmonar (por ejemplo, por nebulizador) de 3 o más mg de una I L-4 soluble una vez a la semana. Los ejemplos de reg ímenes terapéuticos proporcionados en la presente comprenden la inyección subcutánea de una I L-4R humana soluble una vez a la semana, a una dosis de 1 .5 a 3 mg , para tralar sarcoídosis pulmonía, nefrosis de cambio m ínimo, uveítis autoínmune, crisis de células falciformes, síndrome de Churg-Strauss, síndrome de Sjogren, síndrome linfoproliferante autoinmune, pre-eclampsia, anemia hemolítica autoinmune, esófago de Barretí, Mal de Grave, Mal de Kawasaki, y íuberculosis cavilaría. La adminísíración semanal de I L-4R se conlinúa hasta que disminuyen los síntomas. El tralamienlo puede continuar conforme se necesite o, alternativamente, pueden administrarse las dosis de mantenimiento. Se le administra un antagonista al paciente en una canlidad y duranle un tiempo suficiente para inducir una mejora, preferentemente una mejora sostenida, en al menos un indicador que refleja la severidad del padecimiento que se trata. Pueden evaluarse diversos indicadores que reflejan el grado de enfermedad del paciente para determinar si es suficiente la cantidad y tiem po del tratamiento. Tales indicadores incluyen , por ejemplo, indicadores reconocidos clínicamente de severidad de la enfermedad , síntomas, o manifestaciones del padecimiento en cueslión. En la mayoría de los casos, una mejora se considera soslenida si el pacieníe exhibe la mejora en al menos dos ocasiones separadas por dos a cuatro semanas. El grado de mejora se determina generalmente por el médico del paciente quien puede hacer esta determinación con base en señas o síntomas, y quien puede emplear fambién cueslionarios que se le administran al paciente, tal como los cuestionarios sobre la calidad de vida desarrollados para una enfermedad determinada. Como ejemplo, para traíar la hiperplasia de prósíata benigna , se le administra un inhibidor de I L-4 al paciente en una cantidad y durante un tiempo eficaz en la regresión de la marca o cicalrización complela. Las dosis de mantenimienlo pueden deíerminarse o continuarse por tratamiento según sea necesario. Los niveles elevados de I L-4 se encuentran asociados con un cierío número de padecimieníos, como se describe a conlinuación . Pueden examinarse los pacientes con un determinado padecimienfo, para identificar aquellos individuos que tengan niveles elevados de I L-4, o para identificar aquellos con una respuesta inmunológica de lipo TH2 elevada , ideníificando así a los pacientes que pueden beneficiar a la mayoría del tratamiento con un antagonista de I L-4. Consecuentemeníe, los métodos de tratamienlo proporcionados en la presenie comprenden opcionalmenle una primera etapa para medir el nivel de I L-4 de un paciente. Puede administrársele un antagonista de I L-4 a un paciente en el cual los niveles de I L-4 se encuentran elevados sobre lo normal.

Allernafivamenle o adicionalmeníe, puede pre-examinarse un pacienle para delerminar si el pacienfe liene una respuesla inmunológica de lipo TH2 elevada, antes de la administración del(os) antagonista(s) contra una o más citoquinas de tipo TH2. Los niveles de I L-4 de un paciente (y, opcionalmente, de oirás citoquinas de tipo TH2) pueden monitorearse durante y/o después del tratamiento con un antagonisía de I L-4, para deíeclar la reducción en los niveles de las citoquinas. Para algunos padecimientos, la incidencia de niveles elevados de I L-4, y el balance entre las respuestas inmunológicas de tipo TH 1 y de tipo TH2, pueden variar de acuerdo con tales factores como la etapa de la enfermedad o la forma particular de la enfermedad. Pueden emplearse técnicas conocidas para medir los niveles de I L-4, por ejemplo, en el suero de un pacienle, y para evaluar respueslas inmunológicas de tipo TH2. Los niveles de citoquína en mueslras sanguíneas pueden medirse por ELISA, por ejemplo. Las modalidades parliculares de mélodos y composiciones de la invención involucran el uso de dos o más antagonistas de I L-4 diferentes. En modalidades adicionales, el(los) antagonista(s) de I L-4 se administran solos o en combinación con otros agentes útiles para traíar la condición con la que se encuentra afligido el paciente. Los ejemplos de tales agentes incluyen tanlo drogas proíeináceas como no proíeináceas. Cuando se co-administran múltiples terapéuticos, las dosis pueden ajustarse de acuerdo con lo anterior, como se reconoce en la materia pertineníe. La "co-administración" y la terapia de combinación no se limilan a la administración simultanea, sino q ue incluyen regímenes de traíamienlo en los cuales se adminisíra un anlagonisla de I L-4 al menos una vez duranle un Iranscurso de tratamiento que implica administrar al menos un ageníe lerapéutico al paciente. Los ejemplos de otros agentes que pueden co-administrarse con anlagonistas de I L-4 son oíros aníicuerpos, ciíoquinas o receptores de citoquina, los cuales se seleccionan de acuerdo con la condición paríicular a íralarse. Allernalivamenle, las drogas no proteináceas que son útiles para tralar una de las condiciones particulares descritas con anterioridad pueden administrarse con un antagonista de I L-4. Para traíar condiciones mediadas por Ig E, puede co-adminisírarse un anlagonista de I L-4 con un antagonista de Ig E . U n ejemplo es un anticuerpo anti-lgE. Los anticuerpos monoclonales anti-IgE humanizados se describen en Presía el al . (J. Immunol. 1 51 (5):2623-2632, 1 993) y Adelroth et al. (J. Allergy Clin. Immunol. 1 06(2) :253-259, 2000), por ejemplo. Los antagonislas de I L-4 pueden co-administrarse con un antagonista de I L-5, el cual puede ser una molécula que interfiera con la unión de I L-5 a un receplor de I L-5, tal como un anticuerpo de anti-I L-5 (por ejemplo, un anticuerpo monoclonal anti-I L-5 humano o humanizado) , o un receptor tal como un polipéptido de recepíor de I L-5 humano soluble. Consecueníemeníe, se coníempla la adminisíración de anlagonisía(s) de I L-4 e I L-5 para el íratamiento de reacciones alérgicas, que incluyen pero que no se limitan a asma alérgico. Pueden emplearse antagonistas de I L-4 en conj unto con olro(s) agente(s) para traíar las condiciones inducidas por I L-4 en paríicular descriías con aníerioridad. Por ejemplo, las drogas empleadas actualmente para traíar las condiciones pueden coadministrarse con uno o más aníagonislas de I L-4. Para íraíar el asma, puede co-adminisírarse un aníagonisía de I L-4 con oíros medicamenlos anli-asma, íales como corlicoesleroides inhalados, beta agonistas, antagonislas de leucotrieno, xantinas, fluticasona , salmeterol, albuterol , agentes no esteroides tales como la cromolina, y lo similar. Los antagonisías de I L-4 pueden co-administrarse con otros medicamentos anli-alérgicos para íralar reacciones alérgicas. Una modalidad de la presente invención se refiere a la coadministración de un anlagonisla de I L-4 (lal como I L-4R humana soluble) y la fluticasona y salmeterol para tratar un padecimiento íal como el asma. Las composiciones que comprenden un inhibidor de I L-4 (por ejemplo, I L-4R humana soluble), fluíicasona, y salmeíerol se proporcionan en la preseníe. Advair Diskus (Glaxo Wellcome) comprende propionalo de fluticasona y xinafoato de salmeterol. Para tratar el asma, Advair Diskus y el antagonista de I L-4 se suministran preferentemente por inhalación . Otro ejemplo de terapia de combinación comprende la co-adminislración de un anfagonista de I L-4 y un antagonisla de I L-9 a un pacienfe que tiene asma. Puede emplearse cualquier antagonista de I L-9 adecuado, tal como un receptor de I L-9 (preferentemenle una forma soluble del mismo) , un anficuerpo q ue interfiere con la unión de I L-9 a un receptor de superficie celular (en el que el anticuerpo puede cultivarse contra IL-9 o un polipéptido de receptor de IL-9), u olro compuesío que inhibe la aclividad biológica inducida por IL-9. Los receplores de IL-9 incluyen aquellos descritos en WO 93/18047 y Patentes de E.U. No.5,789,237 y 5,962,269, las cuales se incorporan en la presente para referencia. En una modalidad adicional de terapia de combinación, un método para traíar la colitis ulcerante comprende la co-adminisíración de al menos un antagonista de I L-4 y al menos un antagonisla de IL-1. Los ejemplos de antagonislas de IL-1 incluyen el receptor IL-1 de tipo I, el receptor IL-1 de tipo II, el antagonista de receptor IL-1 (IL-1Ra), los anticuerpos antagonísticos (de bloqueo) dirigidos contra IL-1, y los anticuerpos antagonísíicos dirigidos coníra un receptor de IL-1. Pueden emplearse diversas formas de receptores, tales como fragmentos, variantes y análogos de fusión a aquellos descritos con anterioridad para el receptor de IL-4. Un anlagonisla de IL-1 preferido es una forma soluble de receplor de IL-1 lipo II, la cual se describe en la Patente de E.U. No. 5,350,683, incorporada en la presente para referencia. Un método de la presente invención comprende co-administrarle antagonista(s) de I L-4 y antagonisla(s) de I L-13 a un paciente que tiene nefrosis de cambio mínimo. Las modalidades alternalivas implican adminisírarle el(los) aníagonista(s) de I L-4 solos, o el(los) antagonistas de I L-13 solos, a un paciente con nefrosis de cambio mínimo. El(los) antagonisla(s) de I L-4 y/o el(los) anlagonistas de IL-13 pueden adminislrarse para reducir la severidad de la enfermedad. Otro méíodo proporcionado en la presente es un método para traíar diversas condiciones inflamatorias alérgicas, que comprende co-administrar anlagonisla(s) de I L-4 y aníagonista(s) de I L-1 3. Condiciones tales como asma, alergias, y enfermedades pulmonares crónicas tales como fibrosis cística y enfermedad pulmonar obsíructiva crónica son tratadas por tal método. Puede emplearse cualquier aníagonista de I L-1 3 adecuado, incluyendo pero sin limitarse a receptores de I L- 1 3 (preferenlemente formas solubles del mismo) , antagonislas receptores de IL-13, anticuerpos dirigidos contra I L-1 3 o un receptor de I L-1 3, otras proteínas que interfieren con la unión de I L-1 3 a un receptor de I L- 1 3, y compuestos que inhiben la transducción de señal mediada por I L-1 3. Los receptores de I L-13 y los heíerodímeros que comprenden los polipéptidos I L-1 3R como componentes de los mismos se describieron con anterioridad. Pueden examinarse los aníicuerpos que se cultivan contra I L-4R para la capacidad de funcionar íambién como antagonislas de I L-1 3, como se describió con anterioridad . Un método para tratar o evitar una condición caracterizada por la función de barrera epitelial reducida comprende co-administrar antagonista(s) de I L-4 y uno o más antagonistas de I L-1 3. Tales condiciones se describieron con anterioridad . En una modalidad , la condición es asma. Las modalidades particulares se refieren a coadministrar uno o más anfagonistas de I L-4 y uno o más anlagonisías de IL- 13 a un pacienfe que fiene una condición que implica la reducción de la función de barrera epitelial pulmonar o función de barrera epitelial inteslinal , donde ambas I L-4 e I L-1 3 desempeñan un papel en la función de barrera reducida. El método inhibe así tanto la reducción inducida por I L-4 de la función de barrera como la reducción inducida por I L-1 3 de la función de barrera. El efecto adverso de I L-1 3 sobre la función de barrera pulmonar y epitelial intestinal puede confirmarse utilizando técnicas de prueba tales como las descritas en el Ejemplo 7 a continuación citado. (Ver también Zund et al. , J. Biol. Chem. 271 (1 3):7460-7464, 1 996) . Otro método proporcionado en la presente comprende coadministrar antagonista(s) de I L-4 e interferón-? (I FN-?) a un paciente que tiene una condición que implica reducción de la función de barrera epitelial pulmonar. Opcionalmente, tal mélodo comprende además co-adminislrarle uno o más aníagonistas de I L-1 3 al paciente (es decir, co-administrar un aníagonisía de I L-4, I FN-Y, y un anlagonista de I L-1 3). Oíros méíodos comprenden administrarle I FN-Y como un solo evento, o co-adminisírarle I FN-Y y un antagonista de I L-1 3, a un paciente que tiene una condición que involucra la reducción de la función de la barrera epitelial pulmonar. En una modalidad, se le co-administra I FN-Y a un asmático, junto con un aníicuerpo que funciona como un aníagonista tanlo de I L-4 como de I L-1 3. Tales aníicuerpos se describen en oíros momenlos en la présenle. Un solo evento puede funcionar como un antagonista de I L-4 y como antagonista de I L-1 3, como se describió con anterioridad. Como ejemplo de tal agente, algunos anticuerpos cultivados contra I L-4Ra pueden interferir con la unión tanlo de los complejos receplores I L-4 como I L-1 3, debido al componenle I L-4Ra compartido en tales complejos receptores multi-subunidad (descritos con anterioridad) .

Consecuentemeníe, puede emplearse un solo agente en un método para inhibir la reducción de la función de barrera. Los antagonistas pueden co-administrarse con uno o más aníagonislas receptores de leucotrieno para tratar padecimientos tales como enfermedades inflamatorias alérgicas, por ejemplo, asma y alergias. Los ejemplos de aníagonislas receplores de leucotrieno incluyen pero no se limitan a montelucast, pranlucast, y zafirlucast. Las drogas que funcionan como inhibidores de 5-lipoxigenasa pueden coadministrarse con un antagonista de IL-4 para traíar el asma. Los métodos proporcionados en la presente comprenden administrar uno o más de los siguientes a pacientes con el Síndrome de Churg-Sírauss: anlagonisla(s) de I L-4, anlagonisla(s) de I L-5, antagonista(s) de l L-1 3 o aníagonista(s) de Ig E. Un ejemplo de íales métodos involucra co-administrar anlagonista(s) de I L-4 y anlagonisla(s) de I L-5 a un pacieníe con Síndrome de Churg-Sírauss. En olra modalidad, el(los) aníagonisía(s) de I L-4 y el(los) aníagonista(s) de I L-1 3 se le co-administra(n) al pacienle. La hormona relaxina puede co-administrarse con un antagonista de I L-4 para tralar la escleroderma (esclerosis sislémica) , fibrosis pulmonar idiopática, o cualquier otro padecimienlo caraclerizado por fibrosis pulmonar, íal como las condiciones que implican la fibrosis de pulmón que se describen con anterioridad . Se prefiere la relaxina humana recombinanle para su uso para traíar seres humanos. Un mélodo para tralar la hiperplasia de próstata benigna comprende co-administrar antagonista(s) de I L-4 y uno o más agentes anti-inflamatorios adicionales. Los ejemplos de agentes que inhiben la inflamación incluyen antagonistas de factor de necrosis tumoral (TN F) y antagonistas de I L-1 7. Puede emplearse cualquier antagonista de I L-1 7, que incluye pero que no se limita a, un receptor de I L-17 (preferentemente formas solubles del mismo) , antagonisías recepíores de I L-1 7, anticuerpos dirigidos contra I L-1 o un receptor de I L- 1 7, otras proteínas que interfieren con la unión de l L-17 a un receptor de I L-1 7, y compuestos que inhiben la transducción de señal mediada por I L-1 7. Un recepíor de I L-17, que incluye formas solubles del mismo y los oligómeros del mismo, se describe en WO 96/29408 incorporada en la preseníe para referencia . Un méíodo alíernativo proporcionado en la presente comprende administrar un antagonisla de I L-4 para íralar a un pacienle con hiperplasia de próstata benigna. De manera similar, puede emplearse cualquier antagonisla de TN F adecuado, que incluye pero que no se limita a, un receptor de TNF (preferentemenle formas solubles del mismo) , proleínas de fusión que comprenden un receplor de TNF (o que comprenden la porción de unión de TNF de un receptor de TNF), antagonistas receptores de TNF, anticuerpos dirigidos coníra TNF o un receptor de TNF, otras proleínas que inlerfieren con la unión de TNF a un receptor de TNF, y compuestos que inhiben la transducción de señal mediada con TN F. Ejemplos adicionales de inhibidores de TN F son las drogas talidomida y pentoxifilina. Se em plea preferentemente la proteína receptora de TN F conocida como TNF-R p75 o p80. Un antagonista de TNF preferido es un receptor de TNF humano soluble (sTN F-R) en forma dimérica, tal como los dímeros de las proteínas de fusión sTN F-R/Fc. Uno de tales dímeros es etanercept (Enbrel®, I mmunex Corporation, Seatlle, WA) . El TNF-R p75/80, que incluye fragmenlos solubles y oirás formas de los mismos, se describe en WO 91 /03533, incorporada en la presente para referencia. De acuerdo con la presente invención , se co-adm inistra un antagonisía de I L-4 con un aníagonista de TN F para tratar cualquier condición en la cual desempeñan un papel las respuestas inmunológicas inducidas por IL-4 e inducidas por TNF, tal como inflamación . Un método proporcionado en la presente comprende co-administrarle un antagonista de I L-4 y un antagonista de TNF a un paciente con enfermedad del intestino inflamado, mal de Crohn, o colitis ulcerante. Oirás modalidades se refieren a un mélodo que comprende coadministrarle un antagonista de I L-4 y un antagonista de TN F a un paciente que tiene Mal de Kawasaki, anemia hemolítica autoinmune, uveoretinilis autoinmune, síndrome linfoproliferante autoinmune, síndrome de Sjogren, síndrome de faliga crónica, o hepatoxicidad inducida por una droga tal como diclofenaco. Otro método proporcionado en la presente comprende coadministrarle un antagonisfa de I L-4y un aníagonisía de TNF a una mujer embarazada que ha desarrollado la pre-eclampsia. La adminisíración del anlagonisla de I L-4 y el anlagonisía de TNF conlinúa preferenlemente para la duración del embarazo. Las dosis de etanercepl adecuadas (Enbrel®, I mmunex Corporalion, Seallle, WA) variarán de acuerdo con la naíuraleza de la enfermedad a íraíarse, severidad de la enfermedad, íamaño del paciente (por ejemplo, adulto o niño), y otros factores, como se reconoce en el campo pertinente. En una modalidad de los métodos proporcionados en la presenie, se adminislra Enbrel® dos veces a la semana por inyección subcutánea en una dosis desde 1 a 25 mg . Una modalidad de dosis pediátrica es 0.4 mg/kg . Los métodos particulares proporcionados en la presente comprenden la co-administración de un antagonista de I L-4 y Enbrel® a un paciente que tiene síndrome linfoproliferanle autoinmune o síndrome de Sjogren , en el que se administra Enbrel® por inyección subcutánea a una dosis de desde 1 a 25 mg . Para traíar la enfermedad de injerto contra huésped , se coadministra el antagonista de I L-4 con al menos uno de los siguientes agentes: un antagonista de TNF, un antagonista de I L-1 , esteroides, o coríicoesteroides. El inhibidor de TNF es preferentemeníe Enbrel®. Un antagonisla de I L-1 preferido es una forma soluble de receptor de I L-1 tipo I I , la cual se describe en la Patente de E. U. No. 5,350,683. En una modalidad, el GVHD se encuentra asociado con (por ejemplo, se desarrolla subsecuente a) el transplante de médula ósea. Puede emplearse un antagonista de I L-4 en combinación con al menos uno de los agentes lisiados con anterioridad , en métodos para suprimir una respuesta inmunológica dirigida contra las células, tejido, y/o aloaníígeno transplantados. Se describe un cierto número de anlagonislas de ciíoquina y oíros agentes/drogas en la presente por ser útiles para la terapia de combinación (por ejemplo, co-administración con un antagonisía de I L-4) en el íratamiento de enfermedades particulares. Se comprende que tales antagonislas, agentes, o drogas encuentran también uso como agentes individuales para tralar esas enfermedades. También se comprende que la descripción de mélodos que involucran la administración de un antagonista a una citoquina particular, para tralar una enfermedad , abarca la administración de un íipo de anlagonista, y abarca también la administración de dos o más antagonistas diferentes para esa citoquina, a menos que se especifique de otra manera. Se ofrecen los siguieníes ejemplos a manera de iluslración , y no a manera de limiíación.

EJ EM PLO 1 : Preparación de Anticuerpos Monoclonales Pueden emplearse polipépfidos receptores de I L-4 como inmunogenes para generar anticuerpos monoclonales por técnicas convencionales, por ejemplo, las técnicas descritas en la Patente de E . U . No. 5, 599,905, incorporadas en la presente para referencia. Se reconoce que pueden emplearse polipéplidos de diversas formas como inmunogenes, por ejemplo, proleínas de tramo completo, fragmentos de las mismas, proteínas de fusión de las mismas tales como fusiones de Fc, células que expresan la proteína recombinante sobre la superficie celular, etc.

Para resumir un ejemplo de íal procedimienlo, se inyecla un inmunogen de I L-4R emulsionado en el adyuvante de Freund completo subcuíáneamenle en raías de Lewis, en caníidades que oscilan de 1 0-1 00 µl . Tres semanas después, se refuerzan los animales inmunizados con inmunogen adicional emulsionado en adyuvanle de Freund incomplelo y se refuerzan cada tres semanas después de ello. Las muestras de suero se toman periódicamente por sangrado relro-orbital o la extirpación cola-punta para probar mediante la prueba de manchado sanguíneo, ELISA (prueba inmunoabsorbente enlazada por enzimas), o la inhibición de la unión de 125l-I L-4 a los extractos de células de expresión de I L-4R. Después de la detección de un compuesío principal de anticuerpo apropiado, se les dio a los animales positivos una inyección intravenosa final de antígeno en salmuera. Tres a cuatro días después, se sacrificaron los animales, se cosecharon los esplenocitos, y se fusionaron a la línea celular de mieloma murino AG8653. Las líneas celulares de hibridoma resultantes se colocan en múltiples placas de microlitulación en un medio seleclivo de HAT (hipoxaníina , aminopíerina, y limidina) para inhibir la proliferación de células no fusionadas, híbridos de mieloma, e híbridos de células de mieloma. Los clones de hibridoma así generados se examinan para la reacíividad con I L-4R. La examinación inicial de sobrenadantes de hibridoma utiliza una captura de anticuerpo y unión de receptor 1 25l-I L-4 parcialmente purificado. Los hibrídomas que son positivos en este método de examinación se prueban por una captura de anticuerpo modificado para detectar las líneas celulares de hibridoma que se encuenlran produciendo anlicuerpos de bloqueo. Los hibridomas que segregan un anticuerpo monoclonal capaz de inhibir la unión de 125l-I L-4 a las células que expresan la I L-4 son así detectados. Tales hibridomas se inyectan después en las cavidades peritoneales de ratones desnudos para producir ascitas que conlienen concenfraciones elevadas (>1 mg/ml) de anticuerpo monoclonal aníi-I L-4R. Los anticuerpos monoclonales de exclusión pueden purificarse por la precipilación de sulfalo de amonio seguida de cromaíografía de exclusión de gel, y/o cromaíografía de afinidad con base en la unión del aníicuerpo a la Proleína G .

EJ EM PLO 2: Generación de ratones objetivo Cmu Este ejemplo describe los procedimientos para generar ratones transgénicos. Los procedimientos adicionales para generar ratones íransgénicos, y el uso de tales ratones para preparar anticuerpos humanos, se describen en los Ejemplos 3 y 4. Construcción de un vector obietivo CMD. El plásmido pICEmu contiene un fragmento de EcoRI/Xhol del lugar de cadena pesada Ig murino, expandiendo el gen mu, q ue se obtuvo a partir de una biblioteca de fagos lambda genómica Balb/C (Marcu et al . Cell 22: 1 87, 1 980) . Este fragmento genómico se subclonó en los siíios Xhol/EcoRI del plásmido pICEMITH (Marsh el al; Gene 32, 481 -485, 1 984). Las secuencias de cadena pesada incluidas en pICEmu se exíienden corrienle abajo del sitio EcoRI colocado a solo 3' del mejorador intrónico mu, al sitio Xhol colocado aproximadamente 1 kb corriente debajo del último de exón de transmembrana del gen mu; sin embargo, la mayor parte de la región de repetición de cambio mu se ha eliminado por el paso en E. coli. El vecíor objeíivo se consíruyó como se explica a coníinuación. (Ver las Figuras 2A-2C, las cuales represenlan deíalles adicionales). Se exlirpó un fragmento de Hindlll/Smal de 1.3 kb a partir de pICEmu y se subclonó en pBluescipt codificado por Hindlll/Smal (Stratagene, La Jolla, CA). Este fragmento de pICEmu se extiende desde el sitio Hindlll colocado aproximadamente a 1 kb 5' de Cmu1 al sitio Smal colocado dentro de Cmu1. El plásmido resultante se codificó con Smal/Spel y se insertó el fragmenío Smal/Xbal de aproximadamenle 4 kb derivado de pICEmu, que se extiende desde el sitio Sma I en Cmu1 3' al sitio Xbal colocado justo corrienle abajo del último exón de Cmu. El plásmido resultanle, pTAR1, se linealizó en el siíio Smal, y se inserló un cásete de expresión neo. Este cásete consiste en el gen neo bajo el control de trascripción del mejorador de quinada (pgk) de fosfoglicerato de ratón (fragmenío Xbal/Taql; Adra et al. (1987) Gene 60: 65-74) y que contiene el sitio de poliadenilación pgk (fragmento Pvul l/Hind lll); Boer et al. (1990) Biochemicals Genetics 28: 299-308). Este cásete se obluvo a paríir del plásmido pKJ1 (descrilo por Tybulewicz el al. (1991) Cell 65: 1153-1163) desde el cual se extirpó el cásete neo como un fragmento EcoRI/HindIII y se subclonó en pGEM-7Zf (+) codificado con EcoRI/HindIII para generar pGEM-7 (KJ1). El cásete neo se extirpó de pGEM-7 (KJ1) por codificación, se acható y se subclonó en el sitio Smal del plásmido pTAR1, en la orientación opuesía de las secuencias genóm icas Cmu. El plásmido resullanle se linealizó con Noí I , y se inserló el cásete de quinasa de timidina (tk) del virus del herpes simple para permilir el enriquecimiento de clones ES que soporten recombinantes homólogos, como se describe por Mansour et al. ( 1 988) Nature 336: 348-352. Esle cásele consisle en las secuencias de codificación del gen tk acarteladas por el mejorador pgk de ratón y el sitio de poliadenílación, como se describe por Tybulewicz et al. ( 1 991 ) Cell 65: 1 1 53- 1 163. El vector objetivo CMD resultante contiene un íolal de aproximadamente 5.3 kb de homolog ía al lugar de cadena pesada y se diseña para generar un gen mu mutante en el cual se ha insertado un caseíe de expresión neo en el único siíio Smal del primer exón Cmu . El vector objetivo se linealizó con Pvul , el cual se corla en las secuencias de plásmido, anles de la electroporación a las células ES. Generación y análisis de células ES obietivo. Las células ES AB-1 (McMahon, A. P. y Bradley, A. ( 1 990) Cell 62: 1 073-1 085) se desarrollaron en capas alímentadoras de células SNL76/7 mitóíicamente inactivas (ibid.) , esencialmente como se describe en Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: a Practical Approach, E. J . Roberlson, Ed . , Oxford: I RL Press, 1 987, págs. 71 -1 1 2. El vector objetivo CMD linealizado se somelió a electrofóresis en las células AB-1 por los métodos descritos en Hasly eí al. (1 991 ) Nature 350: 243-246. Las células sometidas a electrofóresis se colocaron en placas en platos de 100 mm con una densidad de 1 -2 * 106 células/plato. Después de 24 horas, se agregaron G41 8 (200 microorganismos/ml de componenle aclivo) y FIAU (5 * 10"7 M) al medio, y se dejaron desarrollar los clones resisíenles a la droga duranle 8-9 días. Se recoleclaron los clones, se triptinizaron, se dividieron en dos porciones, y se expandieron adicionalmente. La mitad de las células derivadas de cada clon se congelaron después y se analizó la otra miíad para la recombinación homologa eníre secuencias de veclor y objeíivo. El análisis de ADN se llevó a cabo por hibridación de Soulhern blot. El ADN se aisló de los clones como se describe por Laird eí al. , (1 991 ) Nucleic Acids Res. 1 9:4293. El ADN genómico aislado se codificó con Spel y se probó con un fragmento Sacl de 91 5 bp, sonda A (Figura 2C), el cual se hibridiza a una secuencia entre el mejorador inlrónico mu y la región de cambio mu. La sonda A delecía un fragmenío Spel de 9.9 kb derivado del lugar lipo silvestre, y una banda diagnóstica de 7.6 kb derivada de un lugar mu el cual se recombinó homólogamente con el vector objetivo CMD (el cásete de expresión neo conliene un sitio Spel) . De 1 1 32 clones resistentes G41 8 y FIAU examinados por el análisis Southern blot, 3 exhibieron la banda Spe I de 7.6 kb indicativa de recombinación homologa en el lugar mu. Estos 3 clones se codificaron adicionalmente con las enzimas Bgl l , BsíXI , y EcoRI para verificar que el veclor se inlegró homólogamente en el gen mu . Cuando se hibridizó con la sonda A, los análisis Southern blot de ADN de íipo silvestre codificados con Bg l l , BstXI , o EcoRI producen fragmenlos de 1 5.7, 7.3, y 12.5 kb , respeclivamente, mientras que la presencia de un alelo mu objelivo se indica por los fragmenlos de 7.7, 7.6, y 14.3 kb, respeclivamente. Los 3 clones positivos detectados por la codificación Spel mostraron los fragmenlos de reslricción esperados Bg l l , BstXI , y EcoRI diagnósticos de la inserción del cásete neo en el exón Cmu 1 . Generación de raíones que soportan el gen mu mutado. Se congelaron e inyectaron los tres clones ES objetivo, designados con los números 264, 272, y 408, en blaslocilos C57BL/6J como se describe por A. Bradley en Teracarcinomas and Embryonic Stem Cells: a Practical Approach, E. J . Roberlson, E. , Oxford: I RL Press, 1 987 , págs. 1 1 3-1 51 . Los blaslocilos inyectados se transfirieron a los úteros de hembras pseudoembarazadas para generar ratones quiméricos que representan una mezcla de células derivadas de las células ES de entrada y el blastocito huésped. El alcance de la contribución de las células ES a la quimera puede calcularse visualmente por la cantidad de coloración de recubrimienlo agouli , derivado de la línea celular ES, en el enlomo de C57BL/6J negro. Los clones 272 y 408 produjeron solamente un bajo porcentaje de quimeras (es decir, un bajo porcentaje de pigmentación agouti) pero el clon 264 produjo un alto porceníaje de quimeras macho. Esías quimeras se criaron con hembras C57BL/6J y se generó un resullado agouíi , indicalivo de la transmisión de línea germinal del genoma celular ES. La examinación del gen mu objetivo se llevó a cabo por el análisis Southern blot del ADN codificado por Bg l l derivado de las biopsias de cola (como se describe con anterioridad para el análisis del ADN de las células ES). Aproximadameníe 50% del resullado de agouíi moslró una banda Bgl l hibridizante de 7.7 kb además de la banda de íipo silveslre de 15.7 kb, demosírando una íransmisión de línea germinal del gen mu objeíivo. Análisis de raíones íransgénicos para la desacíivación funcional de gen mu. Para delerminar si la inserción del caseíe neo en Cmu 1 ha desaclivado el gen de cadena pesada Ig , se crió una quimera de clon 264 con un raíón homocigolo para la mutación de J H D, que desactiva la expresión de cadena pesada como resultado de la eliminación de los segmentos de gen JH (Chen eí al . , ( 1 993) Immunol. 5:647-656) . Se generaron cuatro resultados de agouti. Se obtuvo suero a partir de estos animales a la edad de 1 mes y se analizaron por ELI SA para la presencia de IgM murino. Dos de los cualro resulíados carecieron compleíameníe de IgM (Tabla 1 ) . El genolipo de los cualro animales por el análisis de Souíhern bloí de ADN derivado de las biopsias de cola por codificación de Bgl l e hibridación con la sonda A (Figura 2C), y por la codificación de Slu l e hibridación con un fragmenío de EcoRI/Slul de 475 bp (ibid .) demostró que los animales que fallan para expresar el IgM de suero son aquellos en los cuales un alelo del lugar de cadena pesada porta la mutación de J H D, el otro alelo la mutación Cmu 1 . Los ratones heterocigotos para la mutación de JHD exhiben niveles de tipo silvesíre de Ig de suero. Esíos dalos demuesíran que la mutación de Cmu 1 desactiva la expresión del gen mu. La Tabla 1 presenta el nivel de IgM de suero, detectado por ELISA, para ratones que porlan íanío la mulación de CMD como la de JHD (CMD/JHD), para rafones heíerocigoíos para la muíación de JHD (+/JHD), para ratones (129Sv * C57BL/6J) de íipo silvestre (+/+), y para ratones hpmocigoíos deficienles de células B para la mutación de JHD (JHD/JHD). TABLA 1 EJEMPLO 3: Generación de ratones transgénicos Transgen de cadena pesada humana Hco12. El transgen de Hco12 se generó por coinyección de la inserción de 80 kb de pHC2 (Taylor et al., 1994, Int. Immunol., 6: 579-591) y la inserción de 25 kb de pVx6. Se construyó el plásmido pVx6 como se describe a continuación. Se subclonó un fragmento de ADN de HindI I l/Sal I de 8.5 kb, que comprende el gen VH1-18 (DP-14) humano de línea germinal junio con aproximadameníe 2.5 kb de la secuencia genómica de distinción 5', y 5kb de la secuencia genómica de distinción en el vector de plásmido pSP72 (Promega, Madison, Wl) a fin de generar el plásmido p343.7.16. Un fragmento de 7kb de ADN BamHI/HindIII, que comprende el gen VH5- 51 (DP-73) humano de línea germinal junto con aproximadamente 5 kb de la secuencia genómica de distinción de 5' y 1 kb de la secuencia genómica de distinción de 3', se clonó en el vector pGP1f de clonación de plásmido basado en pBR322 (Taylor et al. 1992, Nucleic Acids Res. 20:6287-6295), a fin de generar el plásmido p251f. Un nuevo vector de clonación derivado de pGP1f, pGP1k (la secuencia que se présenla en las Figuras 3A y 3B y el NO DE ID DE SEC:4), se codificó con EcoRV/BamHI, y se ligó a un fragmenlo de ADN EcoRV/BamHI de 10 kb, que comprende el gen VH3-23 (DP47) humano de línea germinal junto con aproximadamente 4 kb de la secuencia genómica de distinción 5' y 5 kb de la secuencia genómica de distinción 3'. El plásmido resultanle, p112.2RRJ, se codificó con BamHI/Sall y se ligó con los 7 kb de inserción de BamHI/Sall purificada de p25f1. El plásmido resultanfe, pVx4, se codificó con Xhol y se ligó con los 8.5 kb de inserción de Xhol/Sall. El plásmido resultante, pVx4, se codificó con Xhol y se ligó con los 8.5 kb de la inserción de Xhol/Sall de p343.7.16. Se obtuvo un clon con el gen VH1-18 en la misma orientación que los otros dos genes V. Esle clon, designado pVx6, se codificó después con Notl y se coinyectó la inserción de 26 kb, junto con la inserción de 80 kb de Notl de pHC2 a una proporción molar de 1:1, en los pronúcleos de embriones de medio día (C57BL/6J*DBA/2J)F2 como se describe por Hogan eí al. (B. Hogan eí al., Manipulating the Mouse Embryo, A Laboratory Manual, 2a edición, 1994, Cold Spring Harbor Laboraíory Press, Plainview NY). Se eslablecieron tres líneas independientes de raíones íransgénicos que comprenden secuencias íanto de VX6 como de HC2 a partir de rafones que se desarrollaron a parlir de los embriones inyecíados. Esfas líneas se designan (Hco12)14881 , (Hco12)15083, y (Hco12)15087. Cada una de las tres líneas se criaron con ratones que comprenden la mutación de CMD descrila en el Ejemplo 2, la mutación de JKD (Chen eí al. 1993, EMBO J 12:811-820), y el transgen (KCo5)9272 (Fishwild eí al. 1996, Nature Biotechnology 14: 845-851). Los ratones resulíanles expresan los transgenes de cadena ligera kappa y pesada humana en un homocigoto de entorno para la interrupción de los lugares de cadena ligera kappa y pesada de ratón endógeno. Cepas de ratón íransgénico adicionales. Las cepas particulares de ratones que pueden utilizarse para generar anticuerpos monoclonales reactivos a IL-4R son la cepa ((CMD) + + ; (JKD)++; (Hco7)11952+/+ + ; (KCo5)9272+/+++) y la cepa ((CMD) + + ; (JKD) + + ; (Hco12)15087+/+ + ; (KCo5)9272+/++). Cada una de estas cepas transgéncias es homocigótica para las interrupciones de lugares de cadena pesada endógena (CMD) y cadena ligera kappa (JKD). Ambas cepas comprenden también un transgen de cadena ligera kappa humana (Hco7), con animales individuales sean hemicigólicos u homocigóticos para la inserción #11952. Las dos cepas difieren en el íransgen de cadena pesada humana utilizada. Los ratones fueron hemicigóticos u homocigóticos para el transgen HCo7 o el HCo12. La mutación CMD se describió con anterioridad en el Ejemplo 2. La generación de (HCo12)15087 se describió con anterioridad (en este ejemplo). La mutación de JKD (Chen eí al. 1993, EMBO J. 12: 811-820) y los rafones (KCo5)9272 (Fishwild ef al. 1996, Nature Bioíechnology 14: 845-851) y (HCo7)11952, se describen en la Palenle de E.U. No. 5,770,429, la cual se incorpora en la preseníe para referencia.

EJEMPLO 4: Generación de Anticuerpos Monoclonales Anti-IL-4R Humanos Raíones transgénicos. La cepa ((CMD)++; (JKD)++; (HCo7) 1 1 952+/++; (KCo5)9272+/++) que es homocigótica para interrupciones de lugares de cadena pesada endógena (CMD) y de cadena ligera kappa (JKD) (ver el Ejemplo 3) , se ufilizó para generar anlicuerpos monoclonales reacíivos a I L-4R. Esta cepa comprende también un transgen de cadena ligera kappa humano (HCo7) con animales individuales sean hemicigóticos u homocigóticos para la inserción #1 1952. Los ratones fueron hemicigóticos u homocigóticos para el transgen HCo7. La mulación de CMD se describe anteriormente en el Ejemplo 2. La mutación de JKD (Chen eí al. 1 993, EMBO J . 1 2: 81 1 -820) y los ratones (KCo5)2972 (Fishwild eí al. 1 996, Nalure Biolechnology 14: 845-851 ) y (HCo7) 1 1 952, se describen en la Patente de E. U . No. 5,770,429, la cual se incorpora en la presente para referencia. I nmunización. Los ratones transgénicos se inm unizaron inicialmente i . p. con 25 ug de proleína de I L-4R en adyuvanle (Titermax, disponible por Cytrx Corporation, Norcross, GA). El inmunogen fue un polipéptido de IL-4R humano que comprende el dominio extracelular de la proteína del NO DE I D DE SEC:2. Los ratones inmunizados se reforzaron subsecuentemenle cada 4 semanas i. p. con el inmunogen de IL-4R en adyuvanle de Freund incomplelo. Los animales se mantuvieron en protocolo durante 2 a 5 meses. Antes de la fusión, los animales se reforzaron i.v. los días -4 y -3 con 5 a 8 ug de inmunogen . Fusiones. Las células de bazo cosechadas provenientes de ratones inmunizados se fusionaron a células de mieloma de ratón NS-1 por procedimientos convencionales (Harlow y Lañe, 1 988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor New York; Kennett et al. 1980, Monoclonal Anlibodies, Hybridomas: A New Dimensión in Biological Analysis. Plenum , New York; Oi y Hertzenberg , 1980, I mmunoglobulin Producing Hybrid Cell Lines, en Selected Methods I n Cellular I mmunology, ed. Mishell y Shiigi, págs. 357-372. Freeman , San Francisco). Se cultivaron las células en DMEM , y medios condicionados de FBS al 1 0%, OPI (Sigma O-5003) , BME (Gibco 21985-023) , Factor de Clonación de Hibridoma de Origen al 3% (Igen IG50-061 5) , y P388d 1 al 5% (ATCC TI B 63) . Se ag regó complemento de HAT o HT al medio durante el crecim iento inicial y la selección . Examinación de Hibridoma. Para identificar los hibridomas que segregan anticuerpos humanos contra el I L-4R, se recubrieron placas de ELISA (Nunc MaxiSorp) toda la noche a 4°C con 1 00 ul/cavidad de I L-4R humana a 2.0 ug/ml en PBS. Las placas se enjuagaron con 100 ul/cavidad de PBS-Tween (PBST) con contenido de BSA al 1 % . Se agregaron cincuenta ul de sobrenadante de cultivo celular seguido de una incubación de 1 .0 hora. Las placas se enjuagaron y se incubaron después durante una hora con 1 00 ul/cavidad de IgG anfi-humano de cabra conjugado con peroxidasa de rábano picante (Sigma #A-381 3, o #A-7164). Las placas se enjuagaron íres veces en PBS-Tween enlre cada etapa. Las cavidades que leen positivas por ELISA se examinaron para su capacidad de bloquear la unión de I L-4 a I L-4R. Las placas de ELISA se recubrieron foda la noche con un aníicuerpo de I L-4R antihumano de ratón no neuíralizanfe M10 a 2 ug/ml . Se enjuagaron las placas 3X con PBST. Se agregaron 1 00 ul de I L-4R humana a 1 0 ng/ml en PBST y se incubaron duranle 1 .0 hora. Las placas se enjuagaron 4X con PBST y se agregaron 1 00 ul de muestras de sobrenadante y se incubaron durante 1 .0 hora. Se enjuagaron las cavidades 4X con PBST. Se agregaron 5.0 ng/ml de I L-4 biotinilada en PBST y se incubó durante 1 .0 hora. Se agregaron 100 ul/cavidad de peroxidasa de rábano picanle polidO (RDI) a 1 :5000 en PBST y se incubó durante 45 minutos. Las placas se enjuagaron 5X con PBST, y se agregó un agente reacíivo colorimélrico (3, 3' , 5, 5' feframeíilbencidina, disponible por Kirkegaard y Perry) a 1 00 ul/cavidad hasla que se desarrolló color. Se deluvo la reacción con 1 00 ul de ácido fosfórico y se leyeron las placas a 450 nm . Una señal ausente o reducida se interpretó como la unión de anticuerpo al receptor de manera que se bloqueó la I L-4 a partir de la unión al receptor. Las cavidades que parecieron bloquear la unión se expandieron y se probaron para IL-4 e I L-1 3 bloqueando en una expresión de CD23 (ver el Ejemplo 5).

EJEMPLO 5: Prueba para evaluar la actividad de bloqueo Esta prueba se basa en la capacidad tanío de IL-4 como de I L- 1 3 de mejorar la expresión del aníígeno CD23 de superficie asociado con la activación en las células B humanas. Los anticuerpos se prueban para su capacidad de inhibir la expresión de CD23 inducida por I L-4 y por I L-1 3. Los anticuerpos cultivados conlra la I L-4R humana (hu l L-4R) se probaron sea en forma de sobrenadantes de hibridoma o proteína purificada . Antes de la adición a cultivos, los anticuerpos se intercambiaron con regulador conlra el medio de culíivo (RPMI 1 640 más suero bovino fetal desactivado con calor al 1 0%) por centrifugación , utilizando dispositivos de filtro Centricon (Amicon) con un coríe de 1 0kDa. Las células B de sangre periférica humana se purificaron como se describe anleriormente (Morris et al. , J. Biol.. Chem. 274:41 8-423, 1999). Las células B (3*105/cavidad) en medio de cultivo se colocaron en placas de microtitulación de fondo redondo de 96 cavidades y se preincubaron a temperatura ambiente duraníe 30 minulos con aníicuerpos de prueba en las concentraciones finales indicadas. Después se agregó I L-4 o I L-13 humana recombinante a los cultivos en las concentraciones indicadas, y se cultivaron las células durante 20-24 horas a 37°C en una atmósfera humidificada de CO2 al 5%. Al final del periodo de cultivo, se enjuagaron las células una vez en PBS + NaN3 al 0.02% en la placa de cultivo de 96 cavidades y se volvieron a suspender en regulador de bloqueo (suero de conejo normal al 2% + suero de cabra normal al 1 % en PBS + NaN3) . Después se agregó el anticuerpo monoclonal (mAb) CD23 conjugado con ficoerilrina (PE) o el mAb de conlrol de isoíipo conjugado con PE (ambos de Pharmigen) a las células en una dilución final de 1 : 1 0. Se incubaron las células duraníe 30 minulos a 4°C, se enjuagaron x3 en PBS + NaN3 y se analizaron en un FacScan (Beckfon Dickinson) para la expresión de CD23. En todos los experimentos, se incluyeron controles negativos los cuales consistieron de células cultivadas con medio de desarrollo de hibridoma o anlicuerpo aníi-hl L-4R humano de no bloqueo acoplado al isolipo. Un mAb murino anti-hul L-4R (R&D Sysíems), anleriormente mostrado para bloquear la unión y función íanío de hlL-4 como de h I L- 3, se utilizó como un control posiíivo para la neulralización de la inducción de CD23 por I L-4 e I L-1 3.

EJEM PLO 6: Línea Celular de Hibridoma Una línea celular de hibridoma generada por procedimienlos descritos con anterioridad (ver el Ejemplo 4) se designa 6-2. El anticuerpo monoclonal anti-I L-4R segregado por esfe hibridoma es un anlicuerpo de bloqueo, como se delermina en una prueba convencional de unión de placa, y funciona así como un antagonista de I L-4. El anticuerpo monoclonal producido por 6-2 exhibe también la capacidad de reducir una actividad biológica inducida por IL-13. Una modalidad de la invención se refiere a una línea celular de hibridoma producida como se describió con anterioridad , en la que el hibridoma segrega un MAb de IgM de isotipo dirigido contra la I L-4R humano. También se proporcionan en la presente los anticuerpos monoclonales lgG1 derivados a partir de anticuerpos monoclonales de igM. Se ha deíerminado la secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera de MAb 6-2, y se présenla en el NO DE I D DE SEC: 5; la secuencia de aminoácido codificada así se présenla en el NO DE I D DE SEC:6. Se considera que las regiones de determinación de complementariedad 1 a 3 (CDR 1 -3) corresponden a los aminoácidos 24-35, 51 -57 , y 90-97 , del NO DE I D DE SEC:6, respectivamente. Se ha determinado que la secuencia de ADN de la región variable de la cadena pesada de MAb 6-2, y se presenta en el NO DE I D DE SEC:7; la secuencia de aminoácido codificado por ella se presenta en el NO DE I D DE SEC:8. Se considera que las regiones de determinación de complementariedad 1 a 3 (CDR 1 a 3) corresponden a los aminoácidos 31 -35, 50-66, y 99-1 07 del NO DE I D DE SEC:8, respectivamente.

EJEM PLO 7: Pruebas para Medir la Pérdida de la Función de Barrera Un método proporcionado en la presente involucra el uso de antagonislas de I L-4 para inhibir el daño inducido por I L-4 al epitelio, incluyendo pero no limitándose a, epitelio pulmonar o epitelio intestinal. El daño al epitelio puede dar como resultado la pérdida de la función de barrera. Se conoce un cierto número de técnicas para deíerminar si se encueníra inlacla una capa de epiíelio. Los siguieníes son ejemplos de técnicas que pueden emplearse para evaluar la capacidad de un antagonisla de I L-4 de inhibir el daño inducido por I L-4 al epiíelio y pérdida de la función de la barrera epitelial.

Son conocidas las células que pueden emplearse para preparar modelos in vitro de epitelio (barreras epiteliales). Por ejemplo, las células epiteliales pulmonares humanas Calu-3 son adecuadas para su uso en esludios de función de barrera. Olra línea celular adecuada es la línea celular epitelial intestinal humana designada T84. Las células T84 se cultivan bajo condiciones que dan como resultado la formación de una monocapa de células epiteliales en un soporte permeable, como se describe en Madara, J . y Dharmasalhaphorn (J. Cell Biol., 1 01 :2124-21 33, 1 985), Madara, J . y J . Slafford (J. Clin. Invest. 82: 724-727, 1 989), y Youakim , A. y M. Ahdieh (Am. J. Physiol. 276 (Gastrointest. Liver Physiol. 39):G1279-G 1288, 1999) . Se prueban las monocapas culíivadas para propiedades lales como la resistencia al flujo iónico transepitelial pasivo (tal resistencia indica una monocapa intacta que realiza una función de barrera) . La monocapa epitelial así generada eslimula la barrera epiíelial intesíinal. Un íipo de prueba delermina si un compueslo radioetiquetado particular es capaz de cruzar una monocapa epitelial (por ejemplo, una monocapa generada como se describe con anterioridad) . El transporte del compuesto radioetiquetado a través de la monocapa indica que la barrera permanece permeable en lugar de intacla. Uno de íales procedimieníos es la prueba de flujo de manitol, la cual evalúa el movimiento de manitol radioetiqueíado (por ejemplo, 3H maniíol) a través de una monocapa (ver Madara y Stafford, supra). Los métodos para representar una monocapa se identifican en Madara y Stafford, supra. Tales métodos de representación son una alternativa para evaluar la condición de una capa epitelial , después de la exposición a I L-4 con o sin un antagonisía. Youakim y Ahdieh , supra, describen las profeínas que son parte de los complejos de "unión estrecha" en las barrera epiteliales intestinales intaclas, y reporfan estudios del efecto de I FN-? en las proteínas asociadas con las uniones estrechas. Se describen otras técnicas para estudiar el efecto de una citoquina en la función de la barrera . Por ejemplo, el efecío de una ciíoquína en la permeabilidad de la monocapa puede evaluarse por mediciones de resisíencia eléclrica transepiteliales, ufilizando las técnicas descritas en la referencia. La Patente de E. U . No. 6, 033,688 describe tam bién los procedimieníos que pueden em plearse en los esíudios de permeabilidad de barrera; ver especialmeníe los ejemplos 1 y 4 de la patente. Las células epiteliales traqueales humanas se culíivaron bajo condiciones que enlregaron una monocapa que exhibe resisíencia eléctrica transepilelial. La resisíencia transepitelial (que indica una barrera iníacía) se deíerminó utilizando un voltímetro. El efecto de un agente reactivo particular (HGH) en la monocapa epitelial se evaluó al exponer la monocapa a HGH , y al medir después las actividades de transporíe de ion en cámaras de Ussing, por métodos convencionales (columna 8, líneas 40-56) . Los estudios similares se llevaron a cabo en monocapas que se generaron a partir de células epiteliales bronquiales derivadas de un paciente con fibrosis cística humana (Ejemplo 4, columna 1 1 ) . Utilizando cualquiera de los procedimieníos de prueba de función de barrera anteriormente descritos, se expone una monocapa epitelial a IL-4 sola, o se expone a I L-4 en presencia de un antagonista de I L-4. La capacidad del antagonisía de inhibir la reducción inducida de l L-4 en la función de barrera asi evaluada. En lal prueba, una monocapa de células T84 sirvió como un modelo in vitro de una barrera epitelial intestinal, como se describe con anterioridad . Se descubrió que la IL-4 agregada al costado basolaleral de las células epiteliales polarizadas redujo la función de barrera en 70% a las 48-72 horas de tratamienlo. Cuando se agregó un polipéplido de recepíor de I L-4 al mismo liempo que I L-4, se eviló la reducción en la función de barrera, y se maníuvo la barrera al mismo nivel que las células no íraladas (control). Se empleó en la prueba un polipéptido recepíor de I L-4 humana, consisteníe en el dominio extracelular. El procedimiento de prueba se llevó a cabo también en una monocapa derivada de células epiteliales pulmonares, las cuales sirvieron como modelo in vitro de una barrera epitelial pulmonar. Se encontró que la IL-4 agregada al costado basolateral de las células epiteliales pulmonares polarizadas redujo la función de barrea en 50% a las 48-72 horas de tratamiento. Cuando se agregó el dominio extracelular de polipéptido de I L-4 al mismo liempo que la I L-4, se eviló la reducción en la función de la barrera, y se mantuvo la barrera al mismo nivel que las células no tratadas (control).

EJEMPLO 8: Anticuerpo monoclonal designado 12B5. Se preparó un anticuerpo monoclonal humano contra el receptor de IL-4 humana por el siguiente procedimiento. El anticuerpo monoclonal, el cual se designó 1 2B5, es un anticuerpo de bloqueo q ue funciona como un antagonista de IL-4 y como un antagonisla de I L-1 3. El procedimiento comenzó con la inmunización de un ratón íransgénico con un polipéptido receptor de IL-4 humana soluble. Se empleó la cepa de ratón ((CMD) + + ; (JKD) + + ; (HCo7) 1 1 952+/+ + ; (KCo5)9272+/++) ; descriía en el Ejemplo 3 anleriormeníe mencionado. El antígeno para la inmunización fue I L-4R soluble purificada, que comprende el dominio extraceíular de recepíor de I L-4 humana (500 ug/ml). El ratón se inmunizó inicialmente con 50 ug de antígeno emulsionado en Adyuvante de Freund Completo, seguido de dos o más inmunizaciones con Adyuvante de Freund I ncompleto a 50 ug y después 25 ug . La inmunización fue cada dos semanas por inyección intraperiíoneal . Se llevó a cabo una titulación de anti-I L-4R de IgG humano específico derivado del suero por ELISA, ocho d ías después de la úllima inyección. Se detecíó una buena titulación contra el objetivo, y el ratón se reforzó después IV/I P con 25 ug cada uno el día "3 (es decir, 3 d ías antes de haber sacrificado al ratón) y 1 5ug IV el día ~2. Se sacrificó el ratón, y se extrajeron las células de bazo y se fusionaron con la línea celular de mieloma murino P3*63Ag8.653 (ATCC CRL 1 580). Se siguió un protocolo de fusión PEG convencional. Se examinó la fusión para HulgG y HuKappa, seguida de una reexaminación para la gamma y kappa específicas a I L-4R. Se evaluaron los clones positivos, y se identificó el clon 12B5 como un anlicuerpo de bloqueo. Se subclonó el clon; se aisló una línea celular de hibridoma que produce MAb 12B5; y se purificó el MAb 1 2B5 a parlir del sobrenadaníe. Se determinó que 1 2B5 es un anticuerpo de lgG 1 , y es complelamenfe humano. Los anlicuerpos de otras subclases, tales como los anticuerpos monoclonales de lgG4 o IgM , pueden derivarse a parlir de 1 2B5. Son conocidas las lécnicas para alterar (cambiar) la subclase/isotipo de una anticuerpo. Puede reemplazarse la región constante de 1 2B5, por ejemplo, con una región constante derivada de un anticuerpo de lgG4 humano. La información de secuencia para una cadena pesada de lgG4 se presenta, por ejemplo, en Ellison et al . (DNA Vol . 1 , no. 1 , págs. 1 1 -1 8, 1 981 ), la cual se incorpora para referencia en la presente. Se aisló el ADN que codifica la región variable de la cadena ligera de MAb 12B5, y se determinó la secuencia de nucleótido de la misma. La secuencia de ADN para la región variable de cadena ligera se présenla como el NO DE I D DE SEC:9; la secuencia de aminoácido así codificada se présenla en el NO DE I D DE SEC: 1 0. Se considera que las regiones de determinación de complementariedad 1 a 3 (CDR 1 -3) corresponden a los aminoácidos 24-35, 51 -57, y 90-99, del NO DE ID DE SEC: 1 0, respectivamenle. Se aisló el ADN que codifica la región variable de la cadena pesada de MAb 1 2B5, y se determinó la secuencia de nucleótido del mismo. La secuencia de ADN para la región variable de cadena pesada se presenta como el NO DE I D DE SEC: 1 1 ; la secuencia de aminoácido así codificada se presenta en el NO DE I D DE SEC: 1 2. La Se considera que la CDR-1 de la cadena pesada corresponde a los aminoácidos 31 -35; CDR-2 a los aminoácidos 50-65; y la CDR-3 a los aminoácidos 98-104 del NO DE I D DE SEC: 12.

EJ EMPLO 9: Anticuerpos Monoclonales Ad icionales que inhi ben tanto la IL-4 como la IL-13. Los anticuerpos monoclonales humanos adicionales se cultivaron contra el receptor de I L-4 humana, al inmunizar ratones transgénicos con un polipéptido de IL-4R humana soluble. Los ratones transgénicos empleados se seleccionaron a partir de las cepas de ratón transgénico descritas en el Ejemplo 3. Se identificaron y se aislaron las líneas celulares de hibridoma que segregan anticuerpos monoclonales que unen específicamente I L-4R humana, y los cuales son capaces de funcionar como antagonistas de I L-4 y antagonistas de I L-1 3. Los Mabs se designan 27A1 , 5A1 , y 63. Otro MAb, designado 1 B7, se derivó a partir del MAb 63, y difiere del anticuerpo padre solamente en la cadena ligera. 1 B7 mantiene la capacidad de unir I L-4R y de funcionar como un antagonista de I L-4 y un antagonista de IL-13. La secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera del MAb 27A1 se presenta en el NO DE I D DE SEC: 1 3, y la secuencia de aminoácido codificada se presenta en el NO DE ID DE SEC: 14. Se considera que las regiones de determinación de complementariedad 1 a 3 (CDR 1 -3) corresponden a los aminoácidos 24-35, 51 -57, y 90-99, del NO DE ID DE SEC: 14, respectivameníe. La secuencia de ADN para la región variable de la cadena pesada del MAb 27A1 se presenta como el NO DE I D DE SEC: 15, y la secuencia de aminoácido codificado se presenta en el NO DE I D DE SEC: 16. Se considera que las regiones de determinación de complementariedad 1 a 3 (CDR 1 -3) corresponden a los aminoácidos 31 -35, 50-66, y 99-105, del NO DE I D DE SEC: 16, respectivamente. La secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera de MAb 5A1 se presenta en el NO DE I D DE SEC: 1 7, y la secuencia de aminoácido codificado se presenta en el NO DE I D DE SEC: 18. Se considera que las regiones de determinación de complementariedad 1 a 3 (CDR 1 -3) corresponden a los aminoácidos 24- 34, 50-56, y 89-97 del NO DE I D DE SEC: 1 8, respectivamenle. La secuencia de ADN de la región variable de la cadena pesada de MAb 5A1 se présenla en el NO DE I D DE SEC: 1 9, y la secuencia de aminoácido codificado se presenta en el NO DE I D DE SEC:20. Se considera que las regiones de determinación de complementariedad 1 a 3 (CDR 1 -3) corresponden a los aminoácidos 31 - 35, 50-65, y 98-1 1 2 del NO DE I D DE SEC: 20, respectivamente. La secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera de MAb 63 se presenta en el NO DE I D DE SEC:21 , y la secuencia de aminoácido codificado se presenta en el NO DE ID DE SEC:22. Se considera que las regiones de determinación de complementariedad 1 a 3 (CDR 1 -3) corresponden a los aminoácidos 24-34, 50-56, y 89-97 del NO DE ID DE SEC:22, respectivamente. La secuencia de ADN de la región variable de la cadena pesada de MAb 63 se presenta en el NO DE I D DE SEC:23, y la secuencia de aminoácido codificado se presenta en el NO DE I D DE SEC:24. Se considera que las regiones de determinación de complementariedad 1 a 3 (CDR 1 -3) corresponden a los aminoácidos 31 -35, 50-66, y 99- 1 06 del NO DE I D DE SEC:24, respecfivamente. La secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera de MAb 1 B7 se presenta en el NO DE I D DE SEC: 25, y la secuencia de aminoácido codificado se presenta en el NO DE I D DE SEC: 26. Se considera que las regiones de determinación de complementa riedad 1 a 3 (CDR 1 -3) corresponden a los aminoácidos 24-34, 50-56, y 89-97 del NO DE I D DE SEC:26, respectivamenle. Se derivó el MAb 1 B7 a paríir del MAb 63, y las cadenas pesadas de los dos MAbs son idénticas. Consecuentemeníe, la secuencia de ADN para la región variable de la cadena pesada del MAb 1 B7 se présenla como el NO DE I D DE SEC: 23, y la secuencia de aminoácido codificado se présenla en el NO DE I D DE SEC:24. Se considera que las regiones de complementariedad 1 a 3 (CDRs 1 -3) corresponden a los aminoácidos 31 -35, 50-66, y 99-1 06 del NO DE I D DE SEC:24, respectivamente.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo humano que une el receptor de IL-4 (IL-4R), caracterizado porque dicho anticuerpo es capaz de inhibir una actividad biológica inducida por IL-4.

2. Un anticuerpo según la reivindicación 1, caracterizado porque dicho anticuerpo adicionalmente es capaz de inhibir una actividad biológica inducida por IL-1

3. 3. Un anticuerpo según la reivindicación 2, caraclerizado porque la cadena ligera de dicho aníicuerpo comprende una secuencia de aminoácido seleccionada a parfir de la secuencia de aminoácido presentada en el NO DE ID DE SEC:6, NO DE ID DE SEC:10, NO DE ID DE SEC:14, NO DE ID DE SEC:18, NO DE ID DE SEC:22, o NO DE ID DE SEC:26.

4. Un anticuerpo según la reivindicación 2, caraclerizado porque la cadena pesada de dicho anticuerpo comprende una secuencia de aminoácido seleccionado a partir de la secuencia de aminoácido presentada en el NO DE ID DE SEC:8, NO DE ID DE SEC:12, NO DE ID DE SEC:16, NO DE ID DE SEC:20, o NO DE ID DE SEC:24.

5. Un método para inhibir una actividad biológica inducida por I L-4 in vivo, caracterizado porque comprende adminislrarle un anlicuerpo de la reivindicación 1 en uno humano.

6. Un méíodo para inhibir una actividad biológica inducida por IL-4 y una actividad biológica inducida por I L- 3 in vivo, caracfep'zado porque comprende adminislrarle un aníicuerpo de la reivindicación 2 en uno humano.

7. Un mélodo según la reivindicación 5, caracíerizado porque dicho anlicuerpo se administra en forma de una composición que comprende adicionalmente un diluyeníe, excipieníe, o poríador.

8. Un método según la reivindicación 6, caracterizado porque dicho anticuerpo se administra en forma de una composición que comprende adicionalmenle un diluyente, excipiente, o portador.

9. Un método para tratar la artritis séplica, caraclerizado porque comprende adminislrarle un antagonista de I L-4 a un mamífero afligido con artrilis séplica. 1 0. Un método para tratar artritis séptica, caracterizado porque comprende administrarle un anticuerpo de la reivindicación 1 a un ser humano afligido con artritis séptica . 1 1 . Un mélodo según la reivindicación 9, caraclerizado porque dicho antagonista es una forma soluble del receptor de I L-4 humana (I L-4R) del NO DE I D DE SEC: 2, y el mam ífero es un ser humano. 12. Un método según la reivindicación 9, caracterizado porque dicho antagonista es un anticuerpo que inhibe la unión de I L-4 a una I L-4R. 1 3. Un método según la reivindicación 9, caracterizado porque dicho antagonista se administra en forma de una composición que comprende adicionalmente un diluyeníe, excipieníe, o poríador. RESU MEN Méfodos para írafar condiciones médicas inducidas por iníerleuquina-4 implican adminisírarle un antagonista de I L-4 a un paciente afligido con lal condición . Los anlagonistas de I L-4 adecuados incluyen , pero no se limitan a, receptores de I L-4 (tales como un receplor de I L-4 humana soluble), anlicuerpos que unen I L-4, anticuerpos que unen I L-4R, muteínas de I L-4 que se unen a I L-4R pero que no inducen una respuesta biológica, moléculas que inhiben la transducción de señal inducida por I L-4, y oíros compuestos que inhiben un efecto biológico que es resulíado de la unión de I L-4 a un superficie celular I L-4R. Los anlicuerpos particulares proporcionados en la presente incluyen anticuerpos monoclonales humanos generados por los procedimientos que involucran la inmunización de raíones íransgénicos. Tales anlicuerpos humanos pueden culíivarse coníra el receptor de I L-4 humana. Algunos de los anticuerpos inhiben lanío las aclividades biológicas inducidas por antagonistas como las inducidas por I L-1 3.