MX2015005698A - Formulacion liquida del conjugado de proteina que comprende la oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina. - Google Patents

Formulacion liquida del conjugado de proteina que comprende la oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina.

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Myung Hyun Jang
Hyung Kyu Lim
Hyun Uk Kim
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Abstract

La presente invención se refiere a una formulación líquida libre de albúmina que comprende un conjugado de oxintomodulina de larga duración en el que un péptido de oxintomodulina que comprende un derivado, variante, precursor o fragmento de oxintomodulina está ligado con una región de inmunoglobulina Fc, que puede aumentar la duración de la actividad fisiológica del conjugado de oxintomodulina de larga duración y mantener su estabilidad in vivo durante un período de tiempo prolongado, en comparación con la oxintomodulina nativa, así como un procedimiento para preparar la formulación líquida. La formulación líquida comprende un tampón, un alcohol de azúcar y un tensioactivo no iónico y no contiene una albúmina sérica humana ni factores que son potencialmente nocivos para el cuerpo humano y, así, no es susceptible de una infección vírica. Además, el conjugado de oxintomodulina de la invención comprende oxintomodulina ligada con una región de inmunoglobulina Fc y, así, tiene un gran peso molecular, prolongada actividad fisiológica y excelente estabilidad en almacenamiento, en comparación con la oxintomodulina nativa.

Description

FORMULACIÓN LÍQUIDA DEL CONJUGADO DE PROTEÍNA QUE COMPRENDE LA OXINTOMODULINA Y UN FRAGMENTO DE INMUNOGLOBULINA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una formulación líquida sin albúmina que comprende un conjugado de oxintomodulina de larga duración en que un peptido de oxintomodulina que comprende un derivado, variante, precursor o fragmento de oxintomodulina se une a una región de inmunoglobulina Fe, que puede aumentar la duración de actividad fisiológica del conjugado de oxintomodulina de larga duración y mantener su estabilidad in vivo durante un período de tiempo extendido, en comparación con la oxintomodulina nativa. La presente invención también se refiere a un procedimiento para preparar la formulación líquida.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La obesidad se define como una afección de acumulación anormal o excesiva de grasa que puede alterar la salud que proviene de un desequilibrio energético en el que la ingesta de energía excede el gasto de energía. La obesidad no era un problema de salud serio en el pasado, pero con el crecimiento económico, la población obesa está aumentando con el aumento de la riqueza económica, y el número de diversas enfermedades relacionadas con la obesidad también está aumentando. Según el informe de la Organización Mundial de la Salud (OMS), más de 1 ,5 mil millones de adultos en todo el mundo tienen sobrepeso, más de 500 millones de ellos son obesos, y la población de la obesidad aumentó casi el doble entre 1980 y 2008 (OMS, hoja informativa sobre la obesidad y el sobrepeso, 2011). No sólo en los países de altos ingresos, sino también en los países de bajos ingresos, el porcentaje de personas obesas está aumentando. El sobrepeso y la obesidad son responsables del aumento de la presión arterial y los niveles de colesterol y causan o empeoran varias enfermedades. Además, el problema de la obesidad es más grave en los niños o adolescentes, aumenta la incidencia de diabetes, enfermedades del corazón, hipertensión o hiperlipidemia, y también puede causar muertes o discapacidades.
Como se describió anteriormente, la obesidad es una enfermedad y problema social mundial, pero en el pasado, se creía que la obesidad se podría superar mediante esfuerzos individuales, y por lo tanto no se puso énfasis particular en el tratamiento de la obesidad. Sin embargo, la obesidad no es fácil de tratar, debido a que es una enfermedad compleja asociada con los mecanismos de control del apetito y el metabolismo energético. En consecuencia, el tratamiento de la obesidad requiere no solo de los esfuerzos propios del paciente, sino también un procedimiento capaz de tratar mecanismos anormales asociados con el control del apetito y el metabolismo energético. Por lo tanto, se han hecho esfuerzos para desarrollar fármacos para el tratamiento de la obesidad.
Como resultado de estos esfuerzos, se desarrollaron fármacos, que incluyen Rimonabant (Sanofi-Aventis), sibutramina (Abbott), Contrave (Takeda), Orlistat (Roche) y similares, se han desarrollado, pero estos fármacos tienen inconvenientes ya que muestran efectos secundarios fetales o tienen un efecto insuficiente en el tratamiento de la obesidad. Se informó de que Rimonabant (Sanofi-Aventis) mostró trastornos del sistema nervioso central, Sibutramina (Abbott) y Contrave (Takeda) mostraron efectos secundarios cardiovasculares, y Orlistat (Roche) mostró un efecto de reducción de peso de solo aproximadamente 4 kg cuando se administra durante 1 año. Por lo tanto, en la actualidad existen pocos o ningún agente terapéutico que se pueden prescribir con seguridad para pacientes con obesidad.
Recientemente, los derivados de glucagón han recibido mucha atención. El glucagón se produce en el páncreas cuando los niveles de glucosa en la sangre empiezan a caer debido a los medicamentos, enfermedades, deficiencias de hormonas o enzimas, o similares. Las funciones de glucagón de estimular las celulas hepáticas para degradar el glucógeno almacenado en glucosa que se libera en la sangre para elevar el nivel de glucosa en la sangre a un nivel normal. Además del efecto de aumentar el nivel de glucosa en sangre, se informó que el glucagón suprime el apetito y activar la lipasa sensible a hormonas (HSL) de los adipocitos para facilitar la lipolisis, de este modo se demuestran los efectos antiobesidad. Entre los derivados de glucagón, el péptido tipo glucagón-1 (GLP-1) está en desanollo como un agente terapéutico para la reducción de la hiperglucemia en pacientes diabéticos y actúa para estimular la síntesis y secreción de insulina, inhibir la secreción de glucagón, suprimir el vaciado gástrico, aumentar la utilización de glucosa e inhibir la ingesta de alimentos. Se sabe que la exendina-4 que se aísla del veneno de lagarto tiene una homología de aminoácidos de aproximadamente el 50% con el GLP-1 y activa el receptor de GLP-1 para reducir la hiperglucemia en pacientes diabéticos. Sin embargo, se informó que los fármacos terapéuticos para obesidad, que incluyen GLP-1, para causar efectos secundarios tales como vómitos y náuseas.
Por lo tanto, como una alternativa a la de GLP-1 , la oxintomodulina capaz de unirse a ambos receptores para dos péptidos (GLP-1 y glucagón) está recibiendo atención. La oxintomodulina es un péptido hecho de preglucagón, un precursor de glucagón, y es un agente antiobesidad potente, debido a que inhibe la ingesta de alimentos, como GLP-1 , promueve la saciedad, y muestra la actividad lipolítica, como glucagón.
Sobre la base de la función dual del peptido de oxintomodulina, se han llevado a cabo activamente los estudios sobre el desarrollo de fármacos para el tratamiento de la obesidad. Por ejemplo, registro de patente coreana N 0925017 describe una composición farmacéutica para administración oral, parenteral, mucosa, rectal, subcutánea o transdérmica para el tratamiento de la obesidad humana, que comprende oxintomodulina como un ingrediente activo. Sin embargo, se informó que los agentes terapéuticos para la obesidad que comprenden oxintomodulina tienen una corta vida media in vivo y muestran un bajo efecto en el tratamiento de la obesidad, incluso cuando estos se administran a una alta dosis tres veces al día. Por lo tanto, se han hecho esfuerzos para aumentar la vida media in vivo o el tratamiento de la obesidad de oxintomodulina mediante la modificación de la oxintomodulina.
Por ejemplo, el agonista dual de oxintomodulina (Merck) se obtiene mediante la sustitución de L-serina con D-serina en el aminoácido 2 de la oxintomodulina para aumentar la resistencia a la dipeptidil peptidasa-IV (DPP-IV) y la unión al resto de colesterol al extremo C- erminal para aumentar la vida media de la sangre. ZP2929 (Zealand) se obtiene mediante la sustitución de L-serina con D-serina en el aminoácido 2 de oxintomodulina para aumentar la resistencia a la DPP-IV, la sustitución de arginina por alanina en el aminoácido 17 para aumentar la resistencia a la proteasa, la sustitución de metionina con lisina en el aminoácido 27 para aumentar la estabilidad oxidativa, y la sustitución de glutaminas en los aminoácidos 20 y 24 y asparagina en el aminoácido 28 con ácido aspártico, alanina y serina, respectivamente, para aumentar la estabilidad de la desamidación. El agonista dual oxintomodulina (Merck) tiene un aumento de la vida media in vivo de 1,7 horas, que es más larga que la vida media (8-12 minutos) de oxintomodulina nativa, pero todavía tiene un tiempo muy corto en la vida media in vivo y se administra a una dosis muy alta de varios mg/kg. Por lo tanto, la oxintomodulina o sus derivados tienen dos grandes desventajas, es decir, una vida media corta y efectos medicinales bajos. Debido a estas desventajas, se deben administrar diariamente a dosis altas. A fin de superar estos inconvenientes, se estudió un procedimiento para aumentar la vida media en sangre de oxintomodulina mientras se mantiene la actividad de estos in vivo, y como resultado, se desarrolló un derivado de oxintomodulina. Además, mediante el uso de esta teenología, un polímero no peptidilo se preparó por conjugación de un portador a un derivado de oxintomodulina, y se halló que el conjugado de proteína puede mostrar un efecto antiobesidad mejor como resultado del aumento de la vida media en sangre de estos mientras se mantiene la actividad in vivo (solicitud de patente coreana N.° 10-2012-0064110).
En general, las proteínas y peptidos tienen una vida media muy corta, y se someten a la desnaturalización, tales como la precipitación mediante la agregación de monómeros, y la adsorción en las superficies de los vasos, después de la exposición a varios factores, tales como temperaturas desfavorables, interfaz agua-aire, presión alta, estrés físico/mecánico, solventes orgánicos y contaminación microbiana. Esta desnaturalización es irreversible, y por lo tanto las proteínas y péptidos desnaturalizados pierden propiedades fisicoquímicas intrínsecas y efectos fisiológicamente activos. Además, las proteínas y péptidos son inestables y susceptibles a factores extrínsecos tales como temperatura, humedad, oxígeno, rayos UV o similares y experimentan cambios físicos o químicos que incluyen asociación, polimerización u oxidación, lo que produce pérdida sustancial de la actividad (registro de patente coreana N.° 10-0.389.726).
Además, las proteínas y los péptidos adsorbidos son agregados fácilmente por el proceso de desnaturalización, y las proteínas y péptidos desnaturalizados, cuando se administra al cuerpo humano, actúan como la causa de la formación de anticuerpos en el cuerpo humano, y por esta razón, las proteínas y péptidos se deben administraren una forma suficientemente estable. En consecuencia, se han estudiado diversos procedimientos para la prevención de la desnaturalización de las proteínas y péptidos en solución (John Geigert, J. Parenteral Sci. Tech., 43, No5, 220-224, 1989; David Wong, Pharm. Tech. October, 34-48, 1997; Wei Wang., Int. J. Pharm., 185, 129-188, 1999; Willem Norde, Adv. Colloid Interface Sci., 25, 267-340, 1986; Michelleetal., Int. J. Pharm.120, 179-188, 1995.
La liofilización se aplica a algunos fármacos de proteínas y péptidos para lograr el objetivo de estabilidad. Sin embargo, los productos liofilizados no son convenientes ya que se deben redisolveren agua para inyección para su uso. Además, en el caso de la liofilización, se requiere una inversión masiva en liofilizadores de gran capacidad o similares, debido a que el proceso de liofilización se incluye en los procesos de producción. Además, también se está usando un procedimiento para la producción de proteínas y péptidos en polvo mediante un secador por pulverización, pero en este caso, la eficiencia económica se reduce debido a un bajo rendimiento, y la exposición a temperaturas elevadas puede afectar negativamente a la estabilidad de las proteínas..
Con el fin de superar estas limitaciones, se han realizado estudios en los que se añadieron estabilizantes a proteínas y péptidos en solución para suprimir los cambios fisicoquímicos de las proteínas y péptidos, mientras que se mantiene la eficacia in vivo de estos incluso después del almacenamiento a largo plazo. La albúmina sérica humana, un tipo de proteína, se ha usado ampliamente como un estabilizante para diversos fármacos de proteínas, y se ha demostrado su rendimiento (Edward Tarelli et al., Biologicals, (1998) 26, 331-346).
Un proceso para la purificación de albúmina sérica humana incluye la inactivación de contaminantes biológicos tales como micoplasma, priones, bacterias y virus y detección o examen de uno o más contaminantes o patógenos biológicos. Sin embargo, siempre existe el riesgo de que los pacientes esten expuestos a los contaminantes biológicos que no están completamente eliminados o inactivados. Por ejemplo, el proceso de selección incluye examinar si la sangre humana de donantes contiene un virus determinado, pero este proceso no siempre es confiable. Particularmente, no se puede detectar un virus específico existente en un muy pequeño número de donantes.
Las diferentes proteínas se pueden inactivar gradualmente a diferentes tasas en diferentes condiciones durante el almacenamiento, debido a sus diferencias químicas. Es decir, la extensión del término de almacenamiento mediante un estabilizante no es idéntica para diferentes proteínas. Por esta razón, la relación adecuada, la concentración y tipo de estabilizante que se utiliza para proporcionar estabilidad de almacenamiento varían de acuerdo con las propiedades fisicoquímicas de la proteína blanco. Cuando se utilizan estabilizantes en combinación, pueden causar efectos adversos diferentes de los efectos deseados debido a la competición e interacción entre ellos. Además, debido a que la naturaleza o concentración de proteínas puede cambiar durante el almacenamiento, los estabilizantes utilizados pueden mostrar efectos diferentes de los deseados. Por lo tanto, se requiere una gran cantidad de esfuerzo y precauciones necesarias para estabilizar las proteínas en solución.
En particular, un conjugado de oxintomodulina y Fe de la inmunoglobulina es un conjugado en el que oxintomodulina que es un péptido fisiológicamente activo está ligado a una región Fe de la inmunoglobulina. Por lo tanto, debido a que el peso molecular y el volumen del conjugado sin duda difieren de los de la oxintomodulina nativa, se requiere una composición especial para la estabilización de la proteína.
Además, debido a que la oxintomodulina (que es un peptido fisiológicamente activo) y la región de la inmunoglobulina Fe son péptidos o proteínas que tienen diferentes propiedades fisicoquímicas, se deben estabilizar de forma simultánea. Sin embargo, como se describió anteriormente, diferentes proteínas o proteínas se pueden inactivar gradualmente a diferentes tasas en diferentes condiciones durante el almacenamiento, debido a sus diferencias químicas, y cuando los estabilizantes adecuados para las proteínas o péptidos se usan en combinación, pueden causar efectos adversos diferentes de los efectos deseados debido a la competición e interacción entre ellos. Por lo tanto, en el caso de un conjugado de oxintomodulina de larga duración, hay mucha dificultad en la búsqueda de una composición para la estabilización de forma simultánea oxintomodulina, que es un péptido fisiológicamente activo, y la región Fe de la inmunoglobulina En tales circunstancias, los presentes inventores han hecho grandes esfuerzos para proporcionar una formulación líquida estable que se puede almacenar durante un largo periodo de tiempo sin preocupación sobre la contaminación vírica, y como resultado, han hallado que un estabilizante, que incluye un tampón, un alcohol de azúcar y un agente tensioactivo no iónico y que también puede incluir un aditivo, tal como un agente isotónico o un aminoácido, y un conservante para un uso repetido, puede aumentar la estabilidad de un derivado de oxintomodulina de larga duración, y se puede preparar una formulación líquida rentable y estable usando el estabilizante, de este modo se completando la presente invención.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Problema téenico Un objeto de la presente invención es proporcionar una formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración, que comprende una cantidad farmacológicamente efectiva de un conjugado de oxintomodulina de larga duración en la que una oxintomodulina que es un peptido fisiológicamente activo está ligada a una región de inmunoglobulina Fe; y un estabilizante libre de albúmina.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar un procedimiento para preparar la anterior formulación líquida.
Otro objeto más de la presente invención es proporcionar una composición para evitar o tratar la obesidad o diabetes, que comprende un formulación de conjugado de oxintomodulina líquida que comprende un péptido fisiológicamente activo oxintomodulina ligado a una región de inmunoglobulina Fe.
Otro objeto más de la presente invención es proporcionar un procedimiento para evitar o tratar la obesidad o diabetes, que comprende administrar la formulación líquida anterior a un sujeto.
Solución téenica Para obtener los objetos anteriores, en un aspecto, la presente invención proporciona una formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración, que comprende una cantidad farmacológicamente efectiva de un conjugado de oxintomodulina de larga duración en la que una oxintomodulina que es un péptido fisiológicamente activo está ligado a una región de inmunoglobulina Fe; y un estabilizante libre de albúmina, en la que el estabilizante contiene un tampón, un alcohol de azúcar y un tensioactivo no iónico.
Como se usa en la presente, la expresión‘formulación líquida” se refiere a una formulación de fármaco procesado en una forma líquida y está destinada a incluir todas las formulaciones líquidas para uso interno y formulaciones para uso extemo. En la técnica previa, no se informó una formulación líquida de la invención adecuada para una cantidad farmacológicamente efectiva del conjugado de oxintomodulina que comprende oxintomodulina unida al dominio de Fe de la inmunoglobulina. En consecuencia, la formulación líquida de la presente invención puede comprender una cantidad farmacológicamente efectiva del conjugado de oxintomodulina que comprende oxintomodulina ligada al dominio de Fe de la inmunoglobulina, y un estabilizante libre de albúmina, en la que el estabilizante contiene un tampón, un alcohol de azúcar y un tensioactivo no iónico. Además, la formulación líquida de la presente invención tambien puede comprender un conservante.
En la presente invención, el estabilizante también puede comprender uno o más componentes seleccionados del grupo que consiste en agentes isotónicos, azúcares, alcoholes polihídricos y aminoácidos. El alcohol de azúcar puede ser uno o más seleccionados del grupo que consiste en manitol, sorbitol y glicerol, y la concentración del alcohol de azúcar en la formulación líquida puede ser 2-15% (p/v). Además, el tampón puede ser uno o más seleccionado del grupo que consiste en lampones de citrato, acetato, histidina y fosfato y puede tener un pH que varía de 4,5 a 7,0. El agente isotónico puede ser cloruro de sodio, y el tensioactivo no iónico puede ser polisorbato o polóxamero y estar presente a una concentración de 0,001-0,1% (p/v). El aminoácido puede ser metionina. En consecuencia, la formulación líquida de la presente invención pueden comprender un estabilizante que contiene un tampón que tiene un pH que varía de 4,8 a 6,0, uno o más alcoholes de azúcar seleccionados del grupo que consiste en manitol y sorbitol, y polisorbato 20.
Además, la formulación líquida de la presente invención también puede comprender uno o más conservantes seleccionados del grupo que consiste en m-cresol, fenol y alcohol bencílico. La concentración del conservante en la formulación líquida puede ser 0,001-1 % (p/v).
En particular, la formulación líquida de la presente invención puede comprender una cantidad farmacológicamente efectiva del conjugado de oxintomodulina de larga duración, histidina 5-50 mM, 2-15% (p/v) de manitol, 0,01-1 mg/ml de metionina y 0,001-0,1% (p/v) de polisorbato 20. Además de estos componentes, la formulación líquida tambien puede comprender 0,001-1 % (p/v) de m-cresol.
Como se usa en la presente, el término “estabilizante” se refiere a una sustancia que mantiene en forma estable a los ingredientes tales como ingredientes activos durante un período de tiempo específico. Para el fin de la presente invención, el término se refiere a una sustancia que permite almacenar en forma estable el conjugado de oxintomodulina de larga duración. La estabilidad de almacenamiento de las proteínas tales como el conjugado de oxintomodulina de larga duración es importante no solo para garantizar una dosis precisa, sino también para inhibir la potencial producción de una sustancia antigénica para el conjugado derivado de oxintomodulina.
El estabilizante en la presente invención con preferencia contiene un tampón, un alcohol de azúcar y un tensioactivo no iónico a fin de impartir estabilidad al conjugado de oxintomodulina de larga duración. Además, el estabilizante con preferencia también puede comprender uno o más componentes seleccionados del grupo que consiste en agentes isotónicos, azúcares, alcoholes polihídrícos y aminoácidos.
El tampón actúa para mantener el pH de la formulación líquida de modo que el pH de la formulación líquida no cambie rápidamente para preparar el conjugado de oxintomodulina de larga duración estable. Los ejemplos del tampón pueden incluir tampones de pH farmacéuticamente aceptables, que incluyen una sal alcalina (fosfato de sodio, fosfato de potasio, o una sal hidrógeno o dihidrógeno de estos), citrato de sodio, ácido cítrico, acetato de sodio, ácido acetico, e histidina, o también se puede usar una mezcla de estos tampón. El tampón con preferencia es un tampón citrato o histidina, y con más preferencia un tampón histidina. La concentración del tampón con preferencia es 5-100 mM, y con más preferencia 5-50 mM. El pH del tampón con preferencia es 4, 0-8,0, con más preferencia 4, 5-7,0, e incluso con más preferencia 5, 0-6,0.
En un ejemplo de la presente invención, se midió la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con el pH del tampón de la formulación líquida. Es decir, después de que el conjugado de oxintomodulina de larga duración se almacenó a 25 °C durante 0-4 semanas mientras que cambia el pH del tampón, se analizó la cantidad restante del conjugado, y como resultado, se demostró que el conjugado de oxintomodulina fue más estable a pH 5,6, pH 5,8 y pH 6,0 (Ejemplo 3, Tablas 2 a 5, Ejemplo 7, Tablas 18 a 21 , Ejemplo 8 y Tablas 22 a 25). En consecuencia, se halló que el pH del tampón más estable de la presente invención varía de 5,0 a 6,0. En un ejemplo de la presente invención, se midió la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con la clase de tampón de la formulación liquida. En forma específica, después que el conjugado de oxintomodulina se almacenó con 0,02% de polisorbato 20, 0,1 mg/ml de metionina y 5% manitol a 25 °C durante 0-4 semanas, se analizó la cantidad restante del conjugado. Los resultados del análisis de SE-HPLC indicaron que la cantidad restante del conjugado no difirió mucho entre los tampones al mismo pH. Los resultados del análisis de IE-HPLC o RP-HPLC indicaron que la histidina fue más estable al mismo pH (Ejemplo 8 y Tablas 22 a 25).
El alcohol de azúcar actúa para aumentar la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración. En la presente invención, el alcohol de azúcar puede ser uno o más seleccionado del grupo que consiste en manitol, sorbitol y glicerol. Con preferencia, el alcohol de azúcar puede ser manitol. La concentración del alcohol de azúcar en la formulación líquida con preferencia es 1-20% (p/v), y con más preferencia 2-15% (p/v).
En un ejemplo de la presente invención, se analizó la influencia de la clase de alcohol de azúcar como estabilizante sobre la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración. En forma específica, el conjugado de oxintomodulina se almacenó en tampón citrato (pH 5,6) a 25 °C durante 0-4 semanas, y luego se analizó por IE-HPLC, SE-HPLC y RP-HPLC. Como resultado, el conjugado fue más estable en presencia de manitol o sorbitol que en presencia de glicerol a la misma concentración. Los resultados del análisis RP-HPLC indicaron que el conjugado fue un poco más estable en presencia de manitol en comparación con la presencia de sorbitol (Ejemplo 4 y Tablas 6 a 9). En otras palabras, se demostró que la adición de manitol o sorbitol presentaba excelente estabilidad, pero el conjugado fue más estable en presencia de manitol.
En un ejemplo de la presente invención, se analizó la influencia de la concentración del alcohol de azúcar como un estabilizante sobre la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración. En forma específica, el conjugado de oxintomodulina se almacenó a 25 °C durante 0-4 semanas, y luego se analizó por IE-HPLC, SE-HPLC y RP-HPLC. Como resultado, en presencia de 2% de manitol o 15% manitol, se produjo un precipitado de proteína, y en presencia de 5% manitol o 10% manitol, el conjugado fue estable (Ejemplo 5, Tablas 10 a 13, Ejemplo 7 y Tablas 18 a 21).
El tensioactivo no iónico actúa para reducir la tensión superficial de la solución de proteína para evitar que la proteína se adsorba sobre una superficie hidrófoba o se agregue. Los ejemplos preferidos de un tensioactivo no iónico que se puede usar en la presente invención incluyen tensioactivos no iónicos basados en polisorbato y tensioactivos no iónicos basados en polóxamero, que se pueden usar solos o en combinación de dos o más. No es apropiado usar el tensioactivo no iónico en concentraciones altas en la formulación líquida. La formulación líquida de la presente invención contiene el tensioactivo no iónico a una concentración de 0,2% (p/v) o menos y con preferencia 0,001-0,1% (p/v).
El estabilizante de la presente invención puede contener un aminoácido tal como metionina. La metionina actúa para estabilizar adicionalmente la proteína mediante la inhibición de la producción de impurezas que pueden ser causadas, por ejemplo, por la reacción oxidativa de la proteína.
En un ejemplo de la presente invención, se analizó la influencia de la concentración del tensioactivo no iónico como estabilizante y la presencia o ausencia de un aminoácido sobre la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración. En forma específica, el conjugado de oxintomodulina se almacenó en tampón citrato (pH 5,6) y 10% de manitol a 25 °C durante 0-4 semanas, y luego se analiza por IE-HPLC, SE-HPLC y RP-HPLC. Como resultado, el conjugado de oxintomodulina fue más estable en presencia de 0,02% de polisorbato 20 y 0,1 mg/ml de metionina (Ejemplo 6 y Tablas 14 a 17).
El agente ¡sotónico actúa para mantener la presión osmótica en un nivel adecuado cuando se administra el conjugado de oxintomodulina de larga duración en solución in vivo y puede actuar adicionalmente para estabilizar tambien el conjugado de oxintomodulina de larga duración en solución. Los ejemplos típicos del agente ¡sotónico incluyen sales inorgánicas hidrosolubles, tales como cloruro de sodio, sulfato de sodio, citrato de sodio y similares. La concentración del agente isotónico con preferencia es 0-200 mM, y su contenido se puede controlar adecuadamente.
El estabilizante de la presente invención con preferencia no contiene albúmina. La albúmina sérica humana que se puede utilizar como un estabilizante de proteínas se prepara a partir de sangre humana, y por lo tanto se puede contaminar con virus patógeno humano, y gelatina o albúmina bovina sérica puede causar enfermedades o puede causar reacciones alérgicas en algunos pacientes. El estabilizante libre de albúmina de la presente invención no contiene una proteína extraña tal como gelatina o albúmina sérica humana o animal, y por lo tanto no es susceptible a la infección vírica.
Los ejemplos preferidos de azúcares entre los azúcares y alcoholes polihídricos que se pueden usar adicionalmente para aumentar la estabilidad de almacenamiento del conjugado de oxintomodulina de larga duración incluyen monosacáridos tales como mañosa, glucosa, fucosa y xilosa, y polisacáridos tales como lactosa, maltosa, sacarosa, rafinosa y dextrano, y los ejemplos preferidos de los alcoholes polihídricos incluyen polipropileno, polietilenglicol de bajo peso molecular, glicerol, polipropilenglicol de bajo peso molecular y similares. Estos azúcares y alcoholes polihidroxilados se pueden usar solos o en combinación de dos o más.
Además del tampón, agente ¡sotónico, alcohol de azúcar, aminoácido y tensioactivo no iónico descriptos anteriormente, la formulación líquida de la presente invención también puede comprender otros componentes o sustancias conocidas en la téenica dentro de un rango que no altera el efecto de la presente invención.
La formulación líquida de la invención de un conjugado de oxintomodulina de larga duración comprende una cantidad farmacológicamente efectiva del conjugado de oxintomodulina de larga duración que comprende el péptido fisiológicamente activo de oxintomodulina ligado a una región Fe de la inmunoglobulina, y un estabilizante libre de albúmina, en la que el estabilizante puede contener un tampón que tiene un pH que varía de 4,8 a 7,0, uno o más alcohol de azúcar seleccionados del grupo que consiste en manitol y sorbitol, y polisorbato 20. En forma más específica, el estabilizante puede contener un tampón que tiene un pH que varía de 5,0 a 6,0, manitol y polisorbato 20. Además, el estabilizante tambien puede comprender uno o más componentes seleccionados del grupo que consiste en agentes ¡sotónicos, azúcares, alcoholes polihídricos y aminoácidos.
La formulación líquida de la invención sin albúmina que contiene una alta concentración del conjugado de oxintomodulina de larga duración, que imparte estabilidad al conjugado de oxintomodulina de larga duración, no es susceptible a la infección vírica, es simple y muestra excelente estabilidad de almacenamiento, y en consecuencia puede ser provisto de una manera económica en comparación con otros estabilizantes o formulaciones liofilizadas.
Además, debido a que la formulación líquida de la presente invención comprende el conjugado de oxintomodulina de larga duración que tiene actividad fisiológica durante un período de tiempo extendido en comparación con la oxintomodulina nativa, puede mantener la actividad de la proteína en el cuerpo humano durante un período de tiempo extendido en comparación con las formulaciones de oxintomodulina convencionales, y en consecuencia se puede usar como una formulación del fármaco eficiente. Además, la formulación líquida de la presente invención imparte excelente estabilidad incluso a una alta concentración del conjugado de oxintomodulina de larga duración.
Como se usa en la presente, el término “oxintomodulina” se refiere a un péptido producido a partir del pre-glucagón que es un precursor de glucagón. En la presente invención, la oxintomodulina significa que incluye oxintomodulina nativa y su precursor, derivado, fragmento y variante. Con preferencia, la oxintomodulina tiene una secuencia de aminoácidos deSEQ ID NO: 1 (HSQGTFTSDYSKILDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA).
Como se usa en la presente, la expresión “derivado de oxintomodulina” significa que incluye un peptido, un derivado de péptido o un mínimo de péptido que se obtiene por la adición, supresión o sustitución de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de oxintomodulina y puede activar los receptores de glucagón y GLP-1 a un nivel más alto que el activado por la oxintomodulina nativa. En la presente invención, el derivado de oxintomodulina puede tener alguna de las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOS: 2 a 34. Con preferencia, el derivado de oxintomodulina puede tener una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 23 o 25. Con más preferencia, puede tener una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25.
Como se usa en la presente, la expresión “fragmento de oxintomodulina” se refiere a un fragmento que tiene uno o más aminoácidos en el extremo amino o carboxilo terminal de oxintomodulina nativa, en que los aminoácidos añadidos también pueden ser aminoácidos no naturales (por ejemplo, aminoácido tipo D). Este fragmento de oxintomodulina tiene una función de regular los niveles de glucosa en sangre in vivo.
Como se usa en la presente, la expresión “variante de oxintomodulina” es un péptido que tiene uno o más residuos de aminoácidos diferentes de los de la secuencia de aminoácidos de oxintomodulina nativa y posee una función de activación de los receptores de GLP-1 y glucagón. La variante de oxintomodulina se puede preparar por alguna de sustitución, adición, supresión, modificación, o una combinación de estos de algunos aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de oxintomodulina nativa.
Los procedimientos para preparar la variante, derivado y fragmento de oxintomodulina se puede usar solo o en combinación. Por ejemplo, la presente invención también incluye un péptido, que tiene uno o más aminoácidos diferentes de los de la oxintomodulina nativa y desaminación de los residuos de aminoácidos N-temninal y tiene una función de activar el receptor de GLP-1 y receptor de glucagón.
Los aminoácidos mencionados en la presente se abrevian de acuerdo con las reglas de la nomenclatura de IUPAG-IUB de la siguiente manera: Alanina A; Arginina R; Asparagina N; Ácido aspártico D; Cisteína C; Ácido glutámico E; Glutamina Q; Glicina G; Histidina H; Isoleucina I; Leucina L; Usina K; Metionina M; Fenilalanina F Prolina P; Serina S; T reonina T ; T riptófano W; Tirosina Y; Valina V.
En la presente invención, el derivado de oxintomodulina abarca cualquier peptido, que se prepara mediante la sustitución, adición, supresión o modificación pos-traducción (por ejemplo, metilación, acilación, ubiquitinación, o unión covalente intramolecular) de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y puede activar los receptores de t glucagón y GLP-1. Para la sustitución o adición de los aminoácidos, se pueden usar no solo los 20 aminoácidos comúnmente hallados en las proteínas humanas, sino también los aminoácidos atípicos o no naturales. Las fuentes comerciales de aminoácidos típicos incluyen Sigma-Aldrich, ChemPep Inc., y Genzyme Pharmaceuticals. Los péptidos, que incluyen estos aminoácidos, y secuencias peptídicas atípicas pueden ser sintetizadas y comercializadas por proveedores comerciales, por ejemplo, American Peptide Company o Bachem (USA) o Anygen (Korea).
En una forma de realización específica de la presente invención, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un nuevo peptido que Incluye la secuencia de aminoácidos de la siguiente fórmula 1 : Fórmula 1 R1 -X1 -X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X1 -X15- X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-R2 en la que R1 es histidina, desamino-histidilo, dimetil— histidil (N— d imeti I— h istid i lo) , beta-hidroxiimidazopropionilo, 4-imidazoacetilo, beta-carboxi imidazopropionilo o tirosina; X1 es Aib (ácido aminoisobutírico), d-alanina, glicina, Sar (N-metilglicina), serina o d-serina; X2 es ácido glutámico o glutamina; X3 es leucina o tirosina; X4 es serina o alanina; X5 es lisina o arginina X6 es glutamina o tirosina; X7 es leucina o metionina; X8 es ácido aspártico o ácido glutámico; X9 es ácido glutámico, serina o ácido alfa-metil-glutámico o está suprimido; X10 es glutamina, ácido glutámico, lisina, arginina o serina o está suprimido; X11 es alanina, arginina o valina o está suprimido; X12 es alanina, arginina, serina o valina o está suprimido; X13 es lisina, glutamina, arginina o ácido alfa-metil-glutámico o está suprimido; X14 es ácido aspártico, ácido glutámico o leucina o está suprimido; X15 es fenilalanina o está suprimido; X16 es isoleucina o valina o está suprimido; X17 es alanina, cisteína, ácido glutámico, lisina, glutamina o ácido alfa-metil-glutárnico o está suprimido; X18 es triptófano o está suprimido; X19 es alanina, isoleucina, leucina, serína o valina o está suprimido; X20 es alanina, lisina, metionina, glutamina o arginina o está suprimido; X21 es asparagina o está suprimido; X22 es alanina, glicina o treonina o está suprimido; X23 es cisteína o lisina o está suprimido; X24 es un peptido que tiene 2 a 10 aminoácidos que consiste en una combinación de alanina, glicina y serína o está suprimido; y R2 es KRNRNNIA (SEQ ID NO: 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 36), GPSSGAPPPSK (SEQ ID NO: 37), HSQGTFTSDYSKILD (SEQ ID NO: 38), HSQGTFTSDYSRILDK (SEQ ID NO: 39), HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEQ ID NO: 40) o está suprimido (con la excepción del caso en que la secuencia de aminoácidos de fórmula 1 es idéntica a la de la SEQ ID NO: 1).
A fin de aumentar la actividad de oxintomodulina tipo salvaje para el receptor de glucagón y el receptor de GLP-1 , el derivado de oxintomodulina de la presente invención se puede sustituir con 4-imidazoacetilo obtenido por la supresión del carbono alfa de histidina en la posición 1 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 , desamino-histidilo obtenido por supresión del grupo amino N-terminal, dimetil— histidil (N— d imeti I— h istid i I) obtenido por modificación del grupo amino N-terminal con dos grupos metilo, beta-hidroxi imidazopropionilo obtenido por substitución del grupo amino N-terminal con un grupo hidroxilo, o beta-carboxi imidazopropionilo obtenido por substitución del grupo amino N-terminal con un grupo carboxilo. Además, el receptor de la región de unión de GLP-1 puede estar sustituido con aminoácidos que aumentan los enlaces hidrófobos y iónicos o una combinación de estos. Además, una porción de la secuencia de oxintomodulina se puede sustituir con la secuencia de aminoácidos de GLP-1 o Exendin 4 para aumentar la actividad del receptor de GLP-1.
Además, una porción de la secuencia de oxintomodulina se puede sustituir con una secuencia que aumenta el alfa hélice. Con preferencia, los aminoácidos en las posiciones 10, 14, 16, 20, 24 y 28 de la secuencia de aminoácidos de fórmula 1 se puede sustituir con aminoácidos o derivados de aminoácidos que consisten en Tyr(4-Me), Phe, Phe(4-Me), Phe(4-CI), Phe(4-CN), Phe(4-NC>2), Phe(4-NH2), Phg, Pal, Nal, Ala(2-tienilo) y Ala(benzotienilo) que se sabe que estabilizan el alfa hélice, y el tipo y número de aminoácidos o derivados de aminoácidos estabilizadores de alfa hélice para insertar no están limitados. Con preferencia, los aminoácidos de las posiciones 10 y 14, 12 y 16, 16 y 20, 20 y 24, y 24 y 28 de la secuencia de aminoácidos también se puede sustituir con ácido glutámico o lisina para formar anillos, y el número de anillos para insertar no está limitado. Con máxima preferencia, el derivado de oxintomodulina puede tener una secuencia de aminoácidos seleccionada entre las siguientes fórmulas 2 a 6.
En una forma de realización específica, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un nuevo péptido que incluye la secuencia de aminoácidos de al siguiente fórmula 2, obtenida por la sustitución de la secuencia de aminoácidos de oxintomodulina con la de la exendina o GLP-1 : Fórmula 2 R1-A-R3 En otra forma de realización específica, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un nuevo peptido que incluye la secuencia de aminoácidos de la siguiente fórmula 3, que se prepara por la unión de una porción de la secuencia de aminoácidos de oxintomodulina y una porción de la secuencia de aminoácidos de exendina o GLP-1 por medio de un ligador de aminoácidos apropiado: Fórmula 3 R1-B-C-R4 En otra forma de realización específica más, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un nuevo péptido que incluye la secuencia de aminoácidos de la siguiente fórmula 4, en la que una porción de la secuencia de aminoácidos de oxintomodulina se sustituye con un aminoácido que aumenta la unión hidrófoba al receptor de GLP-1. Por ejemplo, es un péptido en el que Leu en la posición 26 se sustituye con el aminoácido lie o Val que aumenta la hidrofobicidad.
Fórmula 4 R1-SQGTFTSDYSKILD-D1-D2-D3-D4-D5-LFVQW-D6-D7-N-D8-R3 En otra forma de realización específica más, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un nuevo péptido que incluye la secuencia de aminoácidos de la siguiente fórmula 5, en la que una porción de la secuencia de aminoácidos de oxintomodulina nativa está suprimida, añadida o sustituida con otros aminoácidos a fin de aumentar las capacidades de la oxintomodulina nativa para activar el receptor de GLP-1 y receptor de glucagón: Fórmula 5 R1 -E 1 -QGTFTSDYSKI LD-E2-E3-RA-E4-E5-FV-E6-WLM NT-E7-R5 En las fórmulas 2 a 5, R1 es como se describe en la fórmula 1 ; A se selecciona del grupo que consiste en SQGTFTSDYSKILDSRRAQDFVQWLMNT (SEQ ID NO: 41), SQGTFTSDYSKILDEEAVRLFIEWLMNT (SEQ ID NO: 42), SQGTFTSDYSKILDERRAQDFVAWLKNT (SEQ ID NO: 43), GQGTFTSDYSRILEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID NO: 44), GQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID NO: 45), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEWAA (SEQ ID NO: 46), y SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNG (SEQ ID NO: 47); B se selecciona del grupo que consiste en SQGTFTSDYSKILDSRRAQDFVQWLMNT (SEQ ID NO: 41), SQGTFTSDYSKILDEEAVRLFIEWLMNT (SEQ ID NO: 42), SQGTFTSDYSKILDERRAQDFVAWLKNT (SEQ ID NO: 43), GQGTFTSDYSRILEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID NO: 44), GQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID NO: 45), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEWAA (SEQ ID NO: 46), SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNG (SEQ ID NO: 47), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEW (SEQ ID NO: 48), y SQGTFTSDYSRILD (SEQ ID NO: 49); C es un peptido que tiene 2 a 10 aminoácidos que consiste en una combinación de alanina, glicina y serina; D1 es serina, ácido glutámico o arginina; D2 es arginina, ácido glutámico o serina; D3 es arginina, alanina o valina; D4 es arginina, valina o serína; D5 es glutamina, arginina o lisina; D6 es isoleucina, valina o serína; D7 es metionina, arginina o glutamina; D8 es treonina, glicina o alanina; E1 es serína, Aib, Sar, d-alanina o d-serina; E2 es serína o ácido glutámico; E3 es arginina o lisina; E4 es glutamina o lisina; E5 es ácido aspártico o ácido glutámico; E6 es glutamina, cisteína o lisina; E7 es cisteína o lisina o está suprimido; R3 es KRNRNNIA (SEQ ID NO: 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 36) o GPSSGAPPPSK (SEQ ID NO: 37); R4 es HSQGTFTSDYSKILD (SEQ ID NO: 38), HSQGTFTSDYSRILDK (SEQ ID NO: 39) o HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEQ ID NO: 40); y, R5 es KRNRNNIA (SEQ ID NO: 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 36) o GPSSGAPPPSK (SEQ ID NO: 37) o está suprimido (con la excepción del casos en que las secuencias de aminoácidos de las fórmulas 2 a 5 son identicas a las de la de la SEQ ID NO: 1).
Con preferencia, el derivado de oxintomodulina de la presente invención puede ser un nuevo péptido de la siguiente fórmula 6: Fórmula 6 R 1 -X 1 -X2-GTFTS D-X3-X— X5-X6-X7-X8-X9-X 10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-R2 en la que R1 es histidina, desamino-histidilo, 4-imidazoacetilo o tirosina; XI es ácido Aib(aminoisobutírico), glicina o serina; X2 es ácido glutámico o glutamina; X3 es leucina o tirosina; X4 es serina o alanina; X5 es lisina o arginina; X6 es glutamina o tirosina; X7 es leucina o metionina; X8 es ácido aspártico o ácido glutámico; X9 es ácido glutámico o ácido alfa-metil-glutámico o está suprimido; X10 es glutamina, ácido glutámico, lisina o arginina o está suprimido; XI I es alanina o arginina o está suprimido; X12 es alanina o valina o está suprimido; X13 es lisina, glutamina, arginina o ácido alfa-metil-glutámico o está suprimido; X14 es ácido aspártico, ácido glutámico o leucina o está suprimido; X15 es fenilalanina o está suprimido; X16 es isoleucina o valina o está suprimido; X17 es alanina, cisteína, ácido glutámico, glutamina o ácido alfa-metil-glutámico o está suprimido; X18 es triptófano o está suprimido; X19 es alanina, isoleucina, leucina o valina o está suprimido; X20 es alanina, lisina, metionina o arginina o está suprimido; X21 es asparagina o está suprimido; X22 es treonina o está suprimido; X23 es cisteína, lisina o está suprimido; X24 es un peptido que tiene 2 a 10 aminoácidos que consisten en glicina o está suprimido; y R2 es KRNRNNIA (SEQ ID NO: 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 36), GPSSGAPPPSK (SEQ ID NO: 37), HSQGTFTSDYSKILD (SEQ ID NO: 38), HSQGTFTSDYSRILDK (SEQ ID NO: 39) o HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEQ ID NO: 40) o está suprimido (con la excepción del caso en que la secuencia de aminoácidos de fórmula 6 sea idéntica a la de la SEQ ID NO: 1).
Con más preferencia, el derivado de oxintomodulina de la presente invención se puede seleccionar del grupo que consiste en los péptidos de las SEQ ID NO: 2 a 34. Aun con más preferencia, el derivado de oxintomodulina de la presente invención puede ser un derivado de oxintomodulina descripto en la Tabla 1 del Ejemplo 1.
Oxintomodulina tiene las actividades de dos péptidos, GLP-1 y glucagón. GLP-1 tiene el efecto de reducir los niveles de glucosa en la sangre por la secreción de insulina, pero el glucagón tiene el efecto de aumentar los niveles de glucosa en sangre. Además, el GLP-1 inhibe la ingesta de alimentos y suprime el vaciado gástrico, y el glucagón tiene el efecto de reducir el peso corporal, mediante la facilitación de la lipolisis y el aumento del metabolismo de energía. Por lo tanto, GLP-1 y glucagón tienen diferentes efectos biológicos. Por lo tanto, en el caso en el que los dos péptidos estén presentes como un conjugado, si el efecto de uno de los dos péptidos es mayor que el del otro, puede ocurrir un efecto adverso. Por ejemplo, si el efecto del glucagón es mayor que el de GLP-1 , los niveles de glucosa en sangre pueden aumentar, y si el efecto de GLP-1 es mayor que el del glucagón, pueden ocurrir efectos secundarios tales como náuseas y vómitos. Además, el efecto de los dos péptidos puede variar de acuerdo con la relación de las actividades de los dos péptidos. Por lo tanto, los derivados de oxintomodulina y sus conjugaciones no se limitan solamente a los derivados que tienen aumento de las actividades.
Como se usa en la presente, la expresión “conjugado de oxintomodulina” se refiere a un conjugado que comprende oxintomodulina y otro elemento. El otro elemento puede ser cualquier sustancia que tiene funciones beneficiosas, que incluyen el aumento de la vida media en sangre de oxintomodulina o retrasar la liberación de oxintomodulina en los riñones. El conjugado de la presente invención se puede unir covalentemente a oxintomodulina o formar microesferas para aumentar la estabilidad en suero de la oxintomodulina o retrasar la liberación de oxintomodulina en los riñones o cambiar la actividad de unión de oxintomodulina a su receptor. El portador que puede formar un conjugado que comprende oxintomodulina se puede seleccionar del grupo que consiste en albúmina, transferrina, anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, elastina, heparina, polisacáridos tales como quitina, fibronectina, y similares, que se pueden unir a oxintomodulina para aumentar la estabilidad en suero de la oxintomodulina. Con preferencia, el portador es una región Fe de la inmunoglobulina.
El Fe de la inmunoglobulina que se puede utilizar en la presente invención puede ser un Fe de la inmunoglobulina humana, un Fe de la inmunoglobulina que tiene la secuencia de un análogo de este, o un Fe de la inmunoglobulina derivada de animales, que incluyen vacas, cabras, cerdos, ratones, conejos, hámsteres, ratas y cobayos. Además, la región de la inmunoglobulina Fe puede derivar de IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, o una combinación o híbrido de estas. Además, cada dominio de la región de la inmunoglobulina Fe de la presente invención puede ser un híbrido de los dominios originados de diferentes inmunoglobulinas seleccionadas del grupo que consiste en IgG, IgA, IgD, IgE, e IgM. Alternativamente, la región de la inmunoglobulina Fe es un dímero o multímero que consiste en inmunoglobulinas de cadena única compuesta de dominios del mismo origen. Con preferencia, la región de la inmunoglobulina Fe es una derivada de IgG o IgM, que es la más abundante en la sangre humana. Con máxima preferencia, es una Fe de la inmunoglobulina derivada de IgG conocida para aumentar la vida media de las proteínas de unión al ligando. La Fe de la inmunoglobulina se puede preparar ya sea por el tratamiento de IgG nativa con una proteasa específica o a partir de celulas transformadas utilizando la téenica de recombinación. Con preferencia, esa una Fe de la inmunoglobulina humana recombinante preparada en E. coli.
Mientras tanto, la IgG también se puede subclasificar en lgG1 , lgG2, lgG3 e lgG4, y en la presente invención, o también pueden ser posible una combinación o híbrido de estas subclases. Con preferencia, la IgG es de las subclases lgG2 e lgG4, y con máxima preferencia, es la región Fe de lgG4 que carece sustancialmente de funciones efectoras tales como la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC). En otras palabras, la región de la inmunoglobulina Fe de máxima preferencia que se utiliza como portador del fármaco en la presente invención es una región Fe no glucosilada derivada de la lgG4 humana. Una región Fe derivada humana es más preferible que una región Fe no derivado de ser humano, que puede actuar como un antígeno en el cuerpo humano y causar respuestas inmunitarias indeseables tales como la producción de un nuevo anticuerpo contra el antígeno.
En la presente invención, el conjugado de oxintomodulina se puede preparar mediante el uso de un polímero no peptldilo o por la teenica de recombinación de genes. Con preferencia, el conjugado se puede preparar mediante la unión de oxintomodulina a la región de la inmunoglobulina Fe mediante un polímero no peptidilo.
El polímero no peptidilo se puede ligar a una oxintomodulina y la región Fe de la inmunoglobulina. Cada extremo del polímero no peptidilo se puede ligar a la región de la inmunoglobulina Fe y el grupo amina o tiol del derivado oxintomodulina, respectivamente.
Como se usa en la presente, la expresión “conjugado de oxintomodulina” se refiere a uno que tiene un aumento del efecto de larga duración en comparación con la oxintomodulina nativa. Los ejemplos del conjugado de larga duración incluyen, pero sin limitación, un conjugado en el que un derivado de oxintomodulina resultante de la modificación, sustitución, adición o supresión de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de oxintomodulina nativa está ligado a un polímero biodegradable, tal como polietilenglicol (PEG), un conjugado en el que una proteína que tiene excelentes propiedades de larga duración, tales como albúmina o inmunoglobulina, se une a la oxintomodulina, un conjugado en el que un ácido graso que tiene capacidad de unirse a la albúmina in vivo se une a oxintomodulina, o un conjugado en el que la oxintomodulina se encapsula en nanopartículas biodegradables.
Como se usa en la presente, la expresión “polímero no peptidilo” se refiere a un polímero biocompatible que incluye dos o más unidades de repetición ligadas entre sí por cualquier enlace covalente en lugar de un enlace peptídico. En la presente invención, el polímero no peptidilo se puede usar de modo intercambiable con el ligador no peptidilo.
Un ligador peptídico que se utiliza en una proteína de fusión obtenida por un procedimiento de fusión en marco convencional tiene inconvenientes en que se escinde fácilmente por proteinasa in vivo, y en consecuencia no se puede obtener el efecto deseado de aumentar la vida media en suero del fármaco activo mediante un portador. Sin embargo, en la presente invención, el polímero que tiene resistencia a la proteinasa se puede usar para mantener la vida media en suero del peptido, similar al portador. Por lo tanto, cualquier polímero no peptidilo se puede utilizar sin limitación en la presente invención, siempre que sea un polímero que tiene la función mencionada anteriormente, es decir, un polímero que tiene resistencia a la proteinasa in vivo. El polímero no peptidilo tiene un peso molecular en el intervalo de 1 a 100 kDa, y con preferencia de 1 a 20 kDa. El polímero no peptidilo de la presente invención, que está unido a la región Fe de la inmunoglobulina, puede ser una clase de polímero o una combinación de diferentes polímeros.
El polímero no peptidilo que se utiliza en la presente invención puede tener un grupo reactivo capaz de unirse a la región de la inmunoglobulina Fe y el fármaco de proteína. El grupo reactivo en ambos extremos del polímero no peptidilo se selecciona con preferencia del grupo que consiste de un grupo reactivo aldehido, un grupo propionaldehído, un grupo butiraldehído, un grupo maleimida y un derivado de succinimida.
El derivado de succinimida puede ser propionato de succinimidilo, hidroxi succinimidilo, succinimidil carboximetilo, o carbonato de succinimidilo. En particular, cuando el polímero no peptidilo tiene un grupo aldehido reactivo en ambos extremos de estos, se pueden minimizar las reacciones no específicas, y un polipéptido fisiológicamente activo y una inmunoglobulina se pueden unir efectivamente a ambos extremos del polímero no peptidilo, respectivamente. Un producto final generado por alquilación reductora con un enlace aldehido es mucho más estable que el unido por un enlace amida. El grupo reactivo aldehido se une selectivamente a un extremo ISWerminal a un pH bajo y puede formar un enlace covalente con un residuo de lisina a un pH alto tal como pH 9,0.
Los grupos reactivos en ambos extremos del polímero no peptidilo pueden ser los mismos o diferentes. Por ejemplo, el polímero no peptidilo puede poseer un grupo maleimida en un extremo, y un grupo aldehido, un grupo propionaldehído o un grupo butiraldehído en el otro extremo. Cuando un polietilenglicol que tiene un grupo hidroxi reactivo en ambos extremos de este se utiliza como el polímero no peptidilo, el grupo hidroxi puede ser activado en varios grupos reactivos por reacciones químicas conocidas, o se puede utilizar un polietilenglicol que tiene un grupo reactivo modificado disponible a fin de preparar el conjugado de acción prolongada de la presente invención.
El conjugado de la presente invención puede ser uno en el que cada extremo del polímero no peptidilo está unido a la región de la inmunoglobulina Fe y al grupo amina o tiol del derivado oxintomodulina, respectivamente.
Mientras tanto, en la presente invención, ambos extremos del polímero no peptidilo incluyen grupos reactivos a los que pueden unirse una región de la inmunoglobulina Fe y un fármaco de proteína. Los ejemplos de los grupos reactivos incluyen, pero sin limitación, un grupo aldehido, un grupo propionaldehído o un grupo butiraldehído, un grupo maleimida, un derivado de succinimida (succinimidil propionato, hidroxil succinimidilo, succinimidil carboximetilo o carbonato de succinimidilo) y similares.
Los grupos reactivos en ambos extremos de la ligador que es el polímero no peptidilo pueden ser iguales o diferentes. Por ejemplo, el polímero no peptidilo puede tener un grupo maleimida en un extremo y un grupo aldehido, un grupo propionaldehído o un grupo butiraldehído en el otro extremo. Por ejemplo, cuando el polímero no peptidilo tiene un grupo aldehido reactivo en un extremo y un grupo maleimida reactivo en el otro extremo, se pueden minimizar las reacciones no específicas, y un polipeptido fisiológicamente activo y una inmunoglobulina se pueden unir efectivamente a ambos extremos del polímero no peptidilo. El polímero no peptidilo que se puede usar en la presente invención se puede seleccionar entre el grupo que consiste en polietilenglicol, polipropilenglicol, un copolímero de etileng I icol/propi leng I icol , polio! polioxietilado, alcohol polivinílico, polisacáridos, dextrano, eter poliviniletílico, polímeros biodegradables tales como PLA (ácido poliláctico) y PLGA (ácido poliláctico— glicólico), polímeros de lípidos, quitinas, ácido hialurónico, y sus combinaciones. Con preferencia, el polímero no peptidilo es polietilenglicol. Además, los derivados de estos conocidos en la téenica y los derivados que se pueden preparar fácilmente mediante un procedimiento conocido en la técnica se incluyen en el alcance de la presente invención.
En un ejemplo de la presente invención, un conjugado se sintetizó mediante la unión de oxintomodulina o su derivado a la región de la inmunoglobulina Fe a través de un enlace covalente con el polímero no peptidilo PEG que incluye un grupo propionaldehído solo o un grupo maleimida y un grupo aldehido.
El conjugado de la presente invención tiene excelentes actividades del receptor GLP-1 y receptor de glucagón en comparación con oxintomodulina nativa. Asimismo, tiene unido a este una región Fe que aumenta su vida media en sangre in vivo para mantener su actividad in vivo durante un período de tiempo extendido.
Como se usa en la presente, el término “conservante” se refiere a una sustancia que se utiliza para evitar reacciones anormales, o la descomposición causada por la contaminación microbiana. La formulación líquida de la presente invención puede comprender además un conservante. Un conservante se utiliza generalmente en formulaciones de dosis múltiples que es mucho más probable que se contaminen con microorganismos, pero sin limitación y también se puede utilizar en formulaciones liofilizadas o formulaciones de dosis única para evitar la contaminación microbiana. La formulación líquida de la presente invención puede comprender uno o más conservantes seleccionados de m-cresol, fenol y alcohol bencílico. La concentración del conservante en la formulación líquida puede ser 0,001-1% (p/v). En particular, el conservante que se incluye en la formulación líquida de la presente invención es con preferencia m -cresol. La formulación líquida de la presente invención puede ser una formulación de múltiples dosis.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento para preparar una formulación liquida de un conjugado oxintomodulina de larga duración.
En forma específica, en una forma de realización de la presente invención, el procedimiento para la preparación de la formulación líquida puede comprender las etapas de: a) preparar un conjugado de oxintomodulina de larga duración, y b) mezclar el conjugado de oxintomodulina de larga duración preparado con un estabilizante que contiene un tampón, un alcohol de azúcar y un agente tensioactivo no iónico.
En otra forma de realización de la presente invención, el procedimiento para la preparación de la formulación líquida puede comprender las etapas de: a) preparar un conjugado de oxintomodulina de larga duración, y b) mezclar el conjugado oxintomodulina de larga duración preparado con un estabilizante, que contiene un tampón, un alcohol de azúcar y un agente tensioactivo no iónico, y un conservante.
Con preferencia, el estabilizante de la etapa b) puede comprender además uno o más seleccionados del grupo que consiste de agentes isotónicos, azúcares, alcoholes polihídricos y aminoácidos.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar obesidad o diabetes, que comprende la formulación líquida anterior.
Como se usa en la presente, el termino “prevención” se refiere a todas las acciones que inhiben o retrasan el desarrollo de una enfermedad blanco. Como se usa en la presente, el término “prevención” significa la administración del conjugado de la presente invención para inhibir o retrasar el desarrollo de afecciones diabéticas, tales como los niveles anormales de glucosa en sangre o la secreción anormal de insulina o las afecciones de obesidad tales como un aumento en el peso corporal o grasa corporal.
Como se usa en la presente, el término “tratamiento” se refiere a todas las acciones que reduce, mejoran o alivian los síntomas de la enfermedad desarrollada. Como se usa en la presente, el término “tratamiento” significa la administración del conjugado de la presente invención para aliviar, mejorar o reducir las afecciones diabéticas anteriores o afecciones de la obesidad para normalizar los niveles de glucosa en sangre y la secreción de la insulina y reducir el peso corporal o la grasa corporal.
Como se usa en la presente, el término “obesidad” se refiere a una cantidad excesiva de grasa corporal. Un índice de masa corporal (= peso (kg) dividido por la altura (m)) de 25 o más se define como la obesidad. La obesidad generalmente proviene de un desequilibrio energético en el que la ingesta de energía excede el gasto de energía. La obesidad es una enfermedad metabólica que afecta el cuerpo entero y tiene una alta probabilidad de llevar a diabetes e hiperlipidemia. Además, la obesidad está relacionada con disfunción sexual, artritis, y aumento del riesgo del desarrollo de enfermedades cardiovasculares, y también está relacionado con el desarrollo de cáncer en algunos casos.
Como se usa en la presente, el término “diabetes” es un tipo de enfermedad metabólica en la que no se realizan la secreción de insulina es insuficiente o normal funciones. La diabetes se caracteriza por el aumento de los niveles de glucosa en la sangre y provoca diversos problemas de salud. En el caso de la diabetes, la glucosa se excreta con la orina.
La composición farmaceutica de la presente invención también puede comprender un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. Como se usa en la presente, la expresión “farmacéuticamente aceptable” significa una cantidad que es suficiente para exhibir efectos terapéuticos y no causa efectos secundarios. La dosis del ingrediente activo de la composición farmacéutica de la presente invención puede ser determinada fácilmente por los expertos en la téenica de acuerdo con el tipo de enfermedad, la edad dei paciente, peso, condición de salud, sexo, y sensibilidad al fármaco, la vía de administración, el modo de administración, la frecuencia de administración, la duración del tratamiento, fármacos utilizados en combinación o coincidentes con la composición de esta invención, y otros factores conocidos en el campo de la medicina.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona un procedimiento para prevenir o tratar obesidad o diabetes, que comprende administrar la formulación líquida a un sujeto.
En la presente, la formulación líquida, la obesidad y la diabetes son como se describieron anteriormente.
Como se usa en la presente, el término “sujeto” se refiere a un sujeto que se sospecha que padece obesidad o diabetes. Específicamente, el término implica mamíferos, e incluye seres humanos, ratas y animales domésticos, que tienen o están en riesgo de desarrollar la enfermedad antes. Además, el sujeto puede ser cualquier sujeto que puede ser tratado con el derivado de formulación líquida de la presente invención.
El procedimiento terapéutico de la presente invención puede comprender la administración de una cantidad farmacéuticamente efectiva de la composición farmacéutica que comprende la formulación líquida. La dosis diaria total de la composición puede ser determinada mediante el criterio médico apropiado por un médico, y la composición se puede administrar una vez o varias veces. Sin embargo, en vista del propósito de la presente invención, la dosis terapéuticamente efectiva específica de la composición para cualquier paciente particular puede variar de acuerdo con varios factores bien conocidos en el campo de la medicina, que incluyen la clase y grado de respuesta por lograr, las composiciones concretas de acuerdo con si otros agentes se utilizan con esta o no, la edad del paciente, peso corporal, estado de salud, sexo y dieta, tiempo y vía de administración, la tasa de secreción de la composición, la duración del tratamiento, otros fármacos utilizados en combinación o coincidentes con la composición de la presente invención, y otros factores conocidos en el campo de la medicina.
Efectos ventajosos de la invención La formulación líquida de la invención que comprende el conjugado de oxintomodulina de larga duración comprende un tampón, un alcohol de azúcar y un tensioactivo no iónico y no contiene una albúmina sérica humana ni factores que son potencialmente nocivos para el cuerpo humano y, así, no es susceptible de una infección vírica. Además, el conjugado de oxintomodulina de la presente invención comprende oxintomodulina ligada a una región de inmunoglobulina Fe y, así, tiene un gran peso molecular, prolongada actividad fisiológica y excelente estabilidad en almacenamiento, en comparación con la oxintomodulina nativa.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La FIG. 1a es un gráfico que muestra los resultados obtenidos por purificación de un derivado mono-PEGilado de oxintomodulina (SEQ ID NO: 25) a través de una columna de purificación SOURCE S.
La FIG. 1 b es un gráfico que muestra los resultados obtenidos por purificación de un conjugado de un derivado mono-PEGilado de oxintomodulina (SEQ ID NO: 25) y una inmunoglobulina Fe a traves de una columna de purificación SOURCE 15Q.
La FIG. 1c es un gráfico que muestra los resultados obtenidos por purificación de un conjugado de un derivado mono-PEGilado de oxintomodulina (SEQ ID NO: 25) y una inmunoglobulina Fe a través de una columna de purificación SOURCE ISO.
La FIG.2a es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con el pH por IE- S HPLC en el Ejemplo 3 después de 0-2 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG. 2a muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.2b es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con el pH por SE-HPLC en el Ejemplo 3 después de 0-2 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG. 2b muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.2c es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con pH por RP-HPLC en el Ejemplo 3 después de 0-2 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG. 2c muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.3a es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con el tipo de alcohol de azúcar y la presencia o ausencia de un agente ¡sotónico por IE-HPLC en el Ejemplo 4 despues de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.3a muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
El FIG.3b es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con el tipo de alcohol de azúcar y la presencia o ausencia de un agente isotónico por SE-HPLC en el Ejemplo 4 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.3b muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.3c es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con el tipo de alcohol de azúcar y la presencia o ausencia de un agente isotónico por RP-HPLC en el Ejemplo 4 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.3c muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
El FIG.4a es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con la concentración de alcohol de azúcar por IE-HPLC en el Ejemplo 5 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.4a muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.4b es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con la concentración de alcohol de azúcar por SE-HPLC en el Ejemplo 5 despues de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.4b muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.4c es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con la concentración de alcohol de azúcar por RP-HPLC en el Ejemplo 5 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.4c muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.5a es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con la concentración de un tensioactivo y la presencia o ausencia de un aminoácido por IE-HPLC en el Ejemplo 6 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.5a muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.5b es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con la concentración de un tensioactivo y la presencia o ausencia de un aminoácido por SE-HPLC en el Ejemplo 6 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG. 5b muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.5c es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con la concentración de un tensioactivo y la presencia o ausencia de un aminoácido por RP-HPLC en el Ejemplo 6 despues de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG. 5c muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.6a es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con pH y la concentración de alcohol de azúcar por IE-HPLC en el Ejemplo 7 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.6a muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.6b es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con pH y la concentración de alcohol de azúcar por SE-HPLC en el Ejemplo 7 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.6b muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.6c es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con pH y la concentración de alcohol de azúcar por RP-HPLC en el Ejemplo 7 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.6c muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.7a es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con pH y el tipo de tampón de alcohol por IE-HPLC en el Ejemplo 8 despues de C semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.7a muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.7b es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con pH y el tipo de tampón de alcohol por SE-HPLC en el Ejemplo 8 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.7b muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.7c es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con pH y el tipo de tampón de alcohol por RP-HPLC en el Ejemplo 8 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG.7c muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.8a es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con la presencia o ausencia de un conservante y la concentración de oxintomodulina de larga duración por IE-HPLC en el Ejemplo 9 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG. 8a muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.8b es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con la presencia o ausencia de un conservante y la concentración de oxintomodulina de larga duración por SE-HPLC en el Ejemplo 9 después de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG. 8b muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
La FIG.8c es un diagrama gráfico que muestra los resultados obtenidos al evaluar la estabilidad de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con la presencia o ausencia de un conservante y la concentración de oxintomodulina de larga duración por RP-HPLC en el Ejemplo 9 despues de 0-4 semanas de almacenamiento a 25 °C. Cada gráfico en la FIG. 8c muestra el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial.
MODO DE LA INVENCIÓN De ahora en más en este documento, la presente invención se describirá con mayor detalle con referencia a los ejemplos. Se ha de entender, sin embargo, que estos ejemplos son sólo con fines ilustrativos y no pretenden limitar el alcance de la presente invención.
Ejemplo 1: Síntesis de oxintomodulina v derivados de oxintomodulina A fin de medir las estabilidades de la oxintomodulina y los derivados de oxintomodulina en la formulación líquida de la presente invención, se sintetizaron derivados de oxintomodulina que tenían las secuencias de aminoácidos mostradas en la siguiente Tabla 1.
Tabla 1 Oxintomodulina y derivados de oxintomodulina En la Tabla a anterior, los residuos de aminoácidos indicados con letras en negrita implican aminoácidos que forman anillos y los residuos de aminoácidos indicados por X implican ácido alfa-metil-glutámico que es un aminoácido no nativo. Además, CA indica 4-imidazoacetilo, DA indica desamino-histidilo y (d)S indica d-serina.
Ejemplo 2: Preparación de conjugado que comprende el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO: 25) e inmunoglobulina Fe (derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO: 25) ligado con la región de inmunoglobulina Fe) En primer lugar, a fin de PEGilar MAL-10K-ALD PEG en el residuo cisteína en la posición de aminoácido 30 de un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO: 25), se dejó reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO: 25) y MAL-10K-ALD PEG entre sí en una relación molar de 1 :3 y una concentración de proteína de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En la presente, la reacción se llevó a cabo en 50 mM de tampón Tris (pH 8,0) en presencia de 1 M de guanidina. Despues de completar la reacción, la solución de reacción se aplicó a una columna SOURCE S para purificar un derivado de oxintomodulina mono-PEGilado en la cisteína (columna: SOURCE S, tasa de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ®100% 50 min B (A: 20 mM de citrato de sodio, pH 3,0 + 45% de etanol, B: A + 1 M de KCI)) (FIG. 1a). La FIG. 1a es un gráfico que muestra los resultados obtenidos por purificación del derivado mono-PEGilado de oxintomodulina (SEQ ID NO: 25) a través de la columna de purificación SOURCE S.
A continuación, el derivado mono-PEGilado purificado de oxintomodulina (SEQ ID NO: 25) y una inmunoglobulina Fe se hicieron reaccionar entre sí en una relación molar de 1 :5 y una concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. La reacción se llevó a cabo en 100 mM de tampón de fosfato de potasio (pH 6,0) en presencia de 20 mM de SCB en forma de un agente de reducción. Después de completar la reacción, la reacción se aplicó a una columna de purificación SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, tasa de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 4% 1 min B 20% 80 min B (A: 20 mM de Tris-HCI, pH 7,5, B: A + 1 M de NaCI)) (FIG. 1b) y una fuente de purificación SOURCE ISO (columna: SOURCE ISO, tasa de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 100% 100 min A (A: 20 mM de Tris-HCI, pH 7,5, B: A + 1 ,1 M AS)) (FIG.1 c) para purificar un conjugado que comprende el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO: 25) y la inmunoglobulina Fe. FIG.1b es un gráfico que muestra los resultados obtenidos por purificación del conjugado, que comprende el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO: 25) y la inmunoglobulina Fe, a través de la columna de purificación SOURCE 15Q y la FIG.1c es un gráfico que muestra los resultados obtenidos por purificación del conjugado, que comprende el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO: 25) y la inmunoglobulina Fe, a través de la columna de purificación SOURCE ISO.
El conjugado de oxintomodulina preparado tal como se describió con anterioridad se desarrolló para incrementar la vida media en sangre de oxintomodulina. Comprende la región de inmunoglobulina Fe, el polímero no peptidilo y la oxintomodulina, ligados covalentemente entre sí de una manera dirigida a sitio y tiene una vida media en sangre significativamente incrementada.
Ejemplo 3: Evaluación de la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con pH A fin de evaluar la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración (preparado en el Ejemplo 2) en formulaciones líquidas, el conjugado de oxintomodulina de larga duración se almacenó en las composiciones mostradas en la Tabla 2 a 25 °C durante 0-2 semanas y luego se analizó por cromatografía líquida de alto rendimiento con intercambio iónico (IE-HPLC), cromatografía líquida de alto rendimiento por exclusión de tamaño (SE-HPLC) y cromatografía líquida de alto rendimiento en fase inversa (RP-HPLC). Para el almacenamiento del conjugado de oxintomodulina, se usaron tampón de citrato como tampón, manitol como alcohol de azúcar y polisorbato 20 como un tensioactivo no iónico. En las Tablas 3, 4 y 5 siguientes, la IE-HPLC (%), SE-HPLC (%) y RP-HPLC (%) indican el % de área /% de área inicial que indica el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial. La Tabla 3 muestra el área (%) por IE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento, la Tabla 4 muestra el área (%) por SE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento y la Tabla 5 muestra el área (%) por RP-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento.
Tabla 2 Tabla 3 Tabla 4 Tabla 5 Como puede verse de los resultados de IE-HPLC (%) en la Tabla 3 anterior, el conjugado de oxintomodulina era más estable con un pH inferior. En los resultados de la SE-HPLC en la Tabla 4, el conjugado de oxintomodulina era más estable con un pH de 5,2 y en los resultados de la RP-HPLC en la Tabla 5, el conjugado de oxintomodulina era más estable con un pH de 5,6. A pesar de que la estabilidad en el pH no difiere entre los procedimientos de análisis, la diferencia de la retención entre los pH era la más grande en el procedimiento de análisis por RP-HPLC. Esto sugiere que el conjugado de oxintomodulina era más estable con un pH de 5,6.
Ejemplo 4: Evaluación de estabilidad de conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con el tipo de alcohol de azúcar v la presencia o ausencia de agente isotónico Los presentes inventores ensayaron las influencias del tipo de alcohol de azúcar como un estabilizante y la presencia o ausencia de cloruro de sodio como un agente isotónico sobre la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración. Específicamente, usando el tampón de citrato (pH 5,6) seleccionado en el Ejemplo 3, el conjugado de oxintomodulina de larga duración se almacenó en las composiciones mostradas en la siguiente Tabla 6 a 25 °C durante 0-4 semanas y luego se analizó por medio de IE-HPLC, SE-HPLC y RP-HPLC. En las Tablas 7, 8 y 9 siguientes, IE-HPLC (%), SE-HPLC (%) y RP-HPLC (%) indican el % de área/% de área inicial que indica el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial. La Tabla 7 muestra el área (%) por IE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento, la Tabla 8 muestra el área (%) por SE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento y la Tabla 9 muestra el área (%) por RP-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento.
Tabla 6 Tabla 7 Tabla 8 Tabla 9 Como puede verse en las Tablas 6 a 9 anteriores, el conjugado de oxintomodulina de larga duración era más estable en manitol o sorbitol que en glicerol en la misma concentración. Los resultados de RP-HPLC indicaban que el conjugado de oxintomodulina de larga duración era un poco más estable en manitol que en sorbitol. Además, la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración no difirió significativamente entre presencia y ausencia de cloruro de sodio como un agente isotónico.
Ejemplo 5: Evaluación de la estabilidad de conjugado de oxintomodulina de larga duración de acuerdo con concentración de alcohol de azúcar Los presentes inventores ensayaron la influencia de la concentración de alcohol de azúcar como un estabilizante sobre la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración. Específicamente, usando el tampón de citrato (pH 5,6 y manitol seleccionados en los Ejemplos anteriores, el conjugado de oxintomodulina de larga duración se almacenó en las composiciones mostradas en la siguiente Tabla 10 a 25 °C durante 0-4 semanas y luego se analizó por IE-HPLC, SE-HPLC y RP-HPLC. En las siguientes Tablas 11 , 12 y 13, IE-HPLC (%), SE-HPLC (%) y RP-HPLC (%) indican el % de área/% de área inicial, que indica el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial. La Tabla 11 muestra el área (%) por IE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración despues del almacenamiento, la Tabla 12 muestra el área (%) por SE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento y la Tabla 13 muestra el área (%) por RP-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento.
Tabla 10 Tabla 11 Tabla 12 Tabla 13 Como puede verse en las Tablas 10 a 13, el conjugado de oxintomodulina de larga duración era estable en presencia de 5% de manitol o 10% de manitol. Sin embargo, se formó un precipitado de proteína en presencia de 2% de manitol o 15% de manitol. Los resultados de IE-HPLC o SE-HPLC indicaban que la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración era similar entre 10% de manitol y 5% de manitol. Los resultados de RP-HPLC indicaban que la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración era más estable en 10% de manitol que en 5% de manitol.
Ejemplo 6: Evaluación de estabilidad de conjugado de oxintomodulina de lama duración de acuerdo con la concentración de tensioactivo v la presencia o ausencia de aminoácido Los presentes inventores ensayaron las influencias de la concentración de un tensioactivo como un estabilizante y la presencia o ausencia de un aminoácido sobre la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración. Usando el tampón de citrato (pH 5,6) y tampón de citrato y 10% de manitol seleccionados en los Ejemplos anteriores, el conjugado de oxintomodulina de larga duración se almacenó en las composiciones mostradas en la siguiente Tabla 14 a 25 °C durante 0-4 semanas y luego se analizó por IE-HPLC, SE-HPLC y RP-HPLC. En las siguientes Tablas 15, 16 y 17, IE-HPLC (%), SE-HPLC (%) y RP-HPLC (%) indican el % de área /% de área inicial, que indica el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial. La Tabla 15 muestra el área (%) por IE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento, la Tabla 16 muestra el área (%) por SE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento y la Tabla 17 muestra el área (%) por RP-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento.
Tabla 14 Tabla 15 Tabla 16 Tabla 17 Como puede verse de los resultados en las Tablas 14 a 17, el conjugado de oxintomodulina de larga duración era más estable en la composición que contenía 0,02% de polisorbato 20 y 0,1 mg/ml de metionina.
Ejemplo 7: Evaluación de estabilidad de conjugado de oxintomodulina de laroa duración de acuerdo con pH v la concentración de alcohol de azúcar Los presentes inventores ensayaron las influencias de pH y la concentración de alcohol de azúcar como un estabilizante sobre la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración. Específicamente, usando 0,02% de polisorbato 20 y 0,1 mg/ml de metionina seleccionados en los Ejemplos anteriores, el conjugado de oxintomodulina de larga duración se almacenó en las composiciones mostradas en la siguiente Tabla 18 a 25 °C durante 0-4 semanas y luego se analizó por IE-HPLC, SE-HPLC y RP-HPLC. En las siguientes Tablas 19, 20 y 21, IE-HPLC (%), SE-HPLC (%) y RP-HPLC (%) indican el % de área/% de área inicial, que indica el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial. La Tabla 19 muestra el área (%) por IE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración despues del almacenamiento, la Tabla 20 muestra el área (%) por SE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento y la Tabla 21 muestra el área (%) por RP-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento.
Tabla 18 Tabla 19 Tabla 20 Tabla 21 Como puede verse de los resultados en las Tablas anteriores, los resultados de IE-HPLC indicaban que la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración era mayor en el orden del pH 5,2, pH 5,6 y pH 6,0. Los resultados de RP-HPLC indicaban que la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración era mayor en el orden de pH 6,0, pH 5,6 y pH 5,2. Los resultados de SE-HPLC indicaban que la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración no difirió significativamente entre pH 5,2, pH 5,6 y pH 6,0. En otras palabras, los resultados de IE-HPLC, RP-HPLC y SE-HPLC indicaban que el conjugado de oxintomodulina de larga duración era estable a pH 5,6.
Mientras tanto, los resultados de IE-HPLC y SE-HPLC indicaban que el conjugado de oxintomodulina de larga duración no difirió significativamente entre concentraciones de manitol a pH 5,6. Sin embargo, en los resultados de RP-HPLC, el conjugado de oxintomodulina de larga duración era más estable en 5% de manitol que en 10% o 15% de manitol a pH 5,6.
Ejemplo 8: Evaluación de estabilidad de conjugado de oxintomodulina de laroa duración de acuerdo con pH v el tipo de tampón Los presentes inventores ensayaron las influencias de pH y el tipo de tampón como un estabilizante sobre la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración. Específicamente, usando 0,02% de polisorbato 20, 0,1 mg/ml de metionina y 5% de manitol seleccionados en los Ejemplos anteriores, el conjugado de oxintomodulina de larga duración se almacenó en las composiciones mostradas en la siguiente Tabla 22 a 25 °C durante 0-4 semanas y luego se analizó por IE-HPLC, SE-HPLC y RP-HPLC.
En las siguientes Tablas 23, 24 y 25, IE-HPLC (%), SE-HPLC (%) y RP-HPLC (%) indican el % de área/% de área inicial, que indica el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial. Tabla 23 muestra el área (%) por IE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración despues del almacenamiento, la Tabla 24 muestra el área (%) por SE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento y la Tabla 25 muestra el área (%) por RP-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento.
Tabla 22 Tabla 23 Tabla 24 Tabla 25 Como puede verse de los resultados en las Tablas 23 a 25, los resultados de SE-HPLC o RP-HPLC indicaban que la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración no difirió significativamente entre pH 5,6 y pH 5,8. Los resultados de IE-HPLC indicaban que el conjugado de oxintomodulina de larga duración era más estable a pH 5,6 que a pH 5,8. Los resultados de SE-HPLC mostraron que la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración no difirió significativamente entre los tampones con el mismo pH. Además, los resultados de IE-HPLC o RP-HPLC indicaban que el conjugado de oxintomodulina de larga duración era más estable en histidina con el mismo pH.
Ejemplo 9: Evaluación de las influencias de la presencia o ausencia de conservante v la concentración de conjugado de oxintomodulina de larga duración on la estabilidad de conjugado de oxintomodulina de larga duración Los presentes inventores ensayaron las influencias de la presencia o ausencia de un conservante como un estabilizante y la concentración del conjugado de oxintomodulina de larga duración sobre la estabilidad del conjugado de oxintomodulina de larga duración. Específicamente, usando tampón de histidina (pH 5,6), 0,02% de polisorbato 20, 0,1 mg/ml de metionina y 5% de manitol, seleccionados en los Ejemplos anteriores, el conjugado de oxintomodulina de larga duración se almacenó en las composiciones mostradas en la siguiente Tabla 26 a 25 °C durante 0-4 semanas y luego se analizó por IE-HPLC, SE-HPLC y RP-HPLC. En las siguientes Tablas 27, 28 y 29, IE-HPLC (%), SE-HPLC (%) y RP-HPLC (%) indican el % de área 1% de área inicial, que indica el porcentaje de retención del conjugado de oxintomodulina de larga duración respecto del valor inicial. La Tabla 27 muestra el área (%) por IE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración despues del almacenamiento, la Tabla 28 muestra el área (%) por SE-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento y la Tabla 29 muestra el área (%) por RP-HPLC del conjugado de oxintomodulina de larga duración después del almacenamiento.
Tabla 26 Tabla 27 Tabla 28 Tabla 29 Como puede verse en las Tablas 26 a 29, los resultados de IE-HPLC, SE-HPLC o RP-HPLC indicaban que la estabilidad de conjugado de oxintomodulina de larga duración no cambiaba incluso en presencia del conservante y no difería de acuerdo con su concentración.
A pesar de que las realizaciones preferidas de la presente invención se describieron con fines ilustrativos, los expertos en el arte apreciarán que son posibles diversas modificaciones, adiciones y sustituciones, sin apartarse del alcance y el espíritu de la invención, tal como se describe en las reivindicaciones acompañantes.

Claims (31)

REIVINDICACIONES
1. Una formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración, caracterizada porque comprende una cantidad farmacológicamente activa de un conjugado de oxintomodulina de larga duración, en la que una oxintomodulina, que es un péptido fisiológicamente activo, está ligada con una región de inmunoglobulina Fe; y un estabilizante libre de albúmina, en la que el estabilizante contiene un tampón, un alcohol de azúcar y un tensioactivo no iónico.
2. La formulación líquida de conformidad con un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el estabilizante también contiene uno o más seleccionados del grupo que consiste en agentes ¡sotónicos, azúcares, alcoholes polihídricos y aminoácidos.
3. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la oxintomodulina es un péptido hecho de preglucagón, un precursor de glucagón y tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.
4. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la oxintomodulina es oxintomodulina nativa o uno de sus precursores, derivados, fragmentos o variantes.
5. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque el derivado tiene cualquiera de las secuencias de aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en SEQ ID NOS: 2 a 34.
6. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque la región de inmunoglobulina Fe es una región Fe derivada de IgG, IgA, IgD, IgE o IgM.
7. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque cada dominio de la región de inmunoglobulina Fe es un híbrido de dominios que se originan de diferentes inmunoglobulinas seleccionadas del grupo que consiste en IgG, IgA, IgD, IgE e IgM.
8. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque la región de inmunoglobulina Fe es un dímero o multímero que consiste en inmunoglobulinas de cadena simple compuestas de dominios del mismo origen.
9. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque la región de inmunoglobulina Fe es una región Fe de lgG4.
10. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque la región de inmunoglobulina Fe es una región Fe de lgG4 aglucosilada humana.
11. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque el conjugado se prepara usando un polímero no peptidilo o téenica de recombinación.
12. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque el polímero no peptidilo está seleccionado del grupo que consiste en polipropilenglicol, un copolímero de etilenglicol/propilenglicol, poliol polioxietilado, alcohol polivinílico, polisacáridos, dextrano, éter poliviniletílico, polímeros biodegradables, incluyendo ácido poliláctico (PLA) y ácido poliláctico— glicólico (PLGA); polímeros lipidíeos; quitinas; ácidos hialurónicos; y combinaciones de ellos.
13. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque el polímero no peptidilo es polietilenglicol.
14. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque el alcohol de azúcar es uno o más seleccionados del grupo que consiste en manitol, sorbitol y glicerol.
15. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque la concentración del alcohol de azúcar en la formulación líquida es del 2-15% (p/v).
16. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el tampón es uno o más seleccionados del grupo que consiste en tampón de citrato, acetato, histidina y fosfato.
17. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque el tampón tiene un pH que varía de 4,5 a 7,0.
18. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el agente ¡sotónico es cloruro de sodio.
19. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el tensioactivo no iónico es polisorbato o poloxámero.
20. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada porque la concentración del tensioactivo no iónico en la formulación líquida es del 0,001-0,1% (p/v).
21. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el aminoácido es metionina.
22. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque el estabilizante contiene un tampón que tiene un pH que varía de 4,8 a 6,0, uno o más alcoholes de azúcar seleccionados del grupo que consiste en manitol y sorbitol y polisorbato 20.
23. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque tambien comprende uno o más conservantes seleccionados del grupo que consiste en m-cresol, fenol y alcohol bencílico.
24 La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 23, en la que la concentración del conservante en la formulación líquida es del 0,001-1% (p/v).
25. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el conservante es m-cresol.
26. La formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque la formulación es para una administración multidosis.
27. Una formulación líquida de un conjugado de oxintomodulina de larga duración, caracterizada porque comprende una cantidad farmacológicamente efectiva de un conjugado de oxintomodulina de larga duración, en la que una oxintomodulina, que es un péptido fisiológicamente activo, está ligada con una región de inmunoglobulina Fe; 5-50 mM de histidina; 2-15% (p/v) de manitol; 0,01-1 mg/ml de metionina; y 0,001-0, 1 % (p/v) de polisorbato 20.
28. La formulación líquida de conformidad con la reivindicación 27, caracterizada porque también comprende el 0,001-1% (p/v) de m-cresol.
29. Un procedimiento para preparar la formulación líquida como la que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 y 27, dicho procedimiento caracterizado porque comprende las etapas de: a) preparar un conjugado de oxintomodulina de larga duración; y b) mezclar el conjugado de oxintomodulina de larga duración, preparado en la etapa a), con un estabilizante que contiene un tampón, un alcohol de azúcary un tensioactivo no iónico.
30. Un procedimiento para preparar la formulación líquida como la que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 23 a 26 y 28, dicho procedimiento caracterizado porque comprende las etapas de: a) preparar un conjugado de oxintomodulina de larga duración; y b) mezclar el conjugado de oxintomodulina de larga duración, preparado en la etapa a), con un estabilizante, que contiene un tampón, un alcohol de azúcar y un tensioactivo no iónico y un conservante.
31. El procedimiento de conformidad con la reivindicación 29 o 30, caracterizado porque el estabilizante también contiene uno o más seleccionados del grupo que consiste en agentes ¡sotónicos, azúcares, alcoholes polihídricos y aminoácidos.
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MX2020004114A MX2020004114A (es) 2012-11-06 2015-05-06 Formulacion liquida del conjugado de proteina que comprende la oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina.

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Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3434687B1 (en) 2011-06-10 2021-03-10 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
TR201901402T4 (tr) 2011-06-17 2019-02-21 Hanmi Science Co Ltd Oksintomodulin ve bir immünoglobulin fragmanı içeren bir konjugat ve onun kullanımı.
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
PH12018501454A1 (en) 2012-11-06 2020-02-17 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Liquid formulation of protein conjugate comprising the oxyntomodulin and an immunoglubin fragment
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
CN104870009B (zh) 2012-12-21 2021-05-18 赛诺菲 官能化的毒蜥外泌肽-4衍生物
EP3080154B1 (en) 2013-12-13 2018-02-07 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
EP3080152A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
EP3080149A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
TW201609795A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 作為雙重ｇｌｐ－１／ｇｉｐ受體促效劑的艾塞那肽－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）胜肽類似物
MX369656B (es) 2014-01-20 2019-11-15 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Insulina de accion prolongada y uso de la misma.
KR102385120B1 (ko) * 2014-03-31 2022-04-12 한미약품 주식회사 면역글로불린 Fc 단편 결합을 이용한 단백질 및 펩타이드의 용해도를 개선시키는 방법
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
TWI684458B (zh) * 2014-05-30 2020-02-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 包含胰島素及ｇｌｐ-１/昇糖素雙重促效劑之治療糖尿病之組成物
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
CN105435221B (zh) * 2014-09-22 2021-09-28 正大天晴药业集团股份有限公司 一种针对血管内皮生长因子的人源化抗体的药物组合物
KR102418477B1 (ko) 2014-12-30 2022-07-08 한미약품 주식회사 글루카곤 유도체
WO2016108586A1 (ko) 2014-12-30 2016-07-07 한미약품 주식회사 안정성이 증가된 글루카곤 유도체
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
PE20180449A1 (es) * 2015-06-30 2018-03-05 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Derivado de glucagon y una composicion que comprende un conjugado de accion prolongada del mismo
TW201706291A (zh) 2015-07-10 2017-02-16 賽諾菲公司 作為選擇性肽雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑之新毒蜥外泌肽（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）衍生物
UY36870A (es) 2015-08-28 2017-03-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Análogos de insulina novedosos
KR102429287B1 (ko) * 2015-12-10 2022-08-05 가부시끼가이샤 메니콘 펩티드 조성물
HRP20220995T1 (hr) 2015-12-31 2022-11-11 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Trostruki aktivator koji aktivira glukagonski, glp-1 i gip receptore
TN2018000452A1 (en) * 2016-06-29 2020-06-15 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Glucagon derivative, conjugate thereof, composition comprising same and therapeutic use thereof
KR20180033105A (ko) 2016-09-23 2018-04-02 한미약품 주식회사 인슐린 수용체와의 결합력이 감소된, 인슐린 아날로그 및 이의 용도
JOP20190095A1 (ar) 2016-10-27 2019-04-28 Janssen Pharmaceutica Nv مركبات ببتيد تيروسين-تيروسين الحلقية كمعدلات لمستقبلات الببتيد العصبي y
CN108299553B (zh) * 2017-01-13 2021-07-16 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 胃泌酸调节素修饰物
EP3604328A4 (en) 2017-03-23 2021-01-06 Hanmi Pharm. Co., Ltd. REDUCED INSULIN ANALOGUE COMPLEX FOR INSULIN RECEPTOR AND ITS USE
JP2021530533A (ja) * 2018-07-19 2021-11-11 ディーアンドディー ファーマテック インコーポレイテッド ポリペプチドを含む医薬組成物
US20200262887A1 (en) 2018-11-30 2020-08-20 Opko Ireland Global Holdings, Ltd. Oxyntomodulin peptide analog formulations
US20220242913A1 (en) * 2019-02-15 2022-08-04 Hanmi Fine Chemical Co., Ltd. Novel intermediate used for biologically active polypeptide and method for preparing same
AU2021276071A1 (en) 2020-05-22 2023-02-02 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Liquid formulation

Family Cites Families (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
WO1997034631A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
US6776983B1 (en) 1998-03-06 2004-08-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Protein free formulations
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6677136B2 (en) 2000-05-03 2004-01-13 Amgen Inc. Glucagon antagonists
GB0121709D0 (en) 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
US7737260B2 (en) 2003-11-13 2010-06-15 Hanmi Pharm. Co., Ltd Protein complex using an immunoglobulin fragment and method for the preparation thereof
WO2005003296A2 (en) 2003-01-22 2005-01-13 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US7217845B2 (en) 2002-11-25 2007-05-15 Sun Bio, Inc. Bifunctional polyethylene glycol derivatives
GB0300571D0 (en) 2003-01-10 2003-02-12 Imp College Innovations Ltd Modification of feeding behaviour
US7772188B2 (en) 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US20050176108A1 (en) 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
WO2005035761A1 (en) 2003-10-16 2005-04-21 Compugen Ltd. Splice variants of preproglucagon, glucagon-like peptide-1 and oxyntomodulin
US20090238838A1 (en) 2003-11-13 2009-09-24 Hanmi Pharm. Ind. Co. Ltd. Insulinotropic peptide conjugate using an immunoglobulin fc
US8263084B2 (en) * 2003-11-13 2012-09-11 Hanmi Science Co., Ltd Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate
KR101135244B1 (ko) * 2007-11-29 2012-04-24 한미사이언스 주식회사 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물
NZ555464A (en) 2004-12-02 2010-03-26 Domantis Ltd Bispecific domain antibodies targeting serum albumin and glp-1 or pyy
EP2390264A1 (en) 2005-02-11 2011-11-30 Amylin Pharmaceuticals Inc. GIP analog and hybrid polypeptides with selectable propperties
US20090286723A1 (en) 2005-02-11 2009-11-19 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Hybrid Polypeptides with Selectable Properties
KR100754667B1 (ko) 2005-04-08 2007-09-03 한미약품 주식회사 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물
GB0511986D0 (en) 2005-06-13 2005-07-20 Imp College Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
ATE553124T1 (de) 2005-06-13 2012-04-15 Imp Innovations Ltd Oxyntomodulinanaloga und ihre wirkungen auf das fressverhalten
US20090297496A1 (en) 2005-09-08 2009-12-03 Childrens Hospital Medical Center Lysosomal Acid Lipase Therapy for NAFLD and Related Diseases
EP2471810A1 (en) 2006-02-22 2012-07-04 Merck Sharp & Dohme Corporation Oxyntomodulin derivatives
BRPI0712383A2 (pt) 2006-06-07 2012-07-10 Human Genome Sciences Inc proteìnas de fusão da albumina
GB0624868D0 (en) 2006-12-13 2007-01-24 Imp Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
TWI428346B (zh) 2006-12-13 2014-03-01 Imp Innovations Ltd 新穎化合物及其等對進食行為影響
US20090098130A1 (en) 2007-01-05 2009-04-16 Bradshaw Curt W Glucagon-like protein-1 receptor (glp-1r) agonist compounds
JP2008169195A (ja) * 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
BRPI0807728A2 (pt) 2007-02-15 2012-04-17 Univ Indiana Res & Tech Corp co-agonistas de receptor glucagon/glp-1
BRPI0813699B1 (pt) 2007-07-10 2021-06-22 Eli Lilly And Company Formulação de proteína de fusão glp-1-fc
CN106106497B (zh) 2007-07-27 2022-02-22 拜耳知识产权有限责任公司 三元活性化合物结合物
CA2698690A1 (en) 2007-09-11 2009-04-09 Mondobiotech Laboratories Ag Thyrotropin releasing hormone for therapeutic applications
ES2558155T3 (es) 2007-10-30 2016-02-02 Indiana University Research And Technology Corporation Compuestos que muestran actividad antagonista de glucacón y agonista de GLP-1
EP2214700A4 (en) 2007-11-02 2012-08-22 Janssen Biotech Inc HALF-SYNTHETIC GLP-1 PEPTIDE FUSION CONSTRUCTS, METHOD AND USES
CA2713348C (en) 2008-01-30 2018-10-09 Indiana University Research And Technology Corporation Ester-based peptide prodrugs
AU2009260302B2 (en) 2008-06-17 2014-10-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
CN102088989B (zh) 2008-06-17 2014-11-26 印第安纳大学研究及科技有限公司 在生理pH缓冲液中具有增强的溶解性和稳定性的胰高血糖素类似物
WO2010013012A2 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Lund University Bioscience Ab Novel polypeptides and uses thereof
MX2011003117A (es) 2008-09-19 2011-04-21 Nektar Therapeutics Conjugados polimericos de peptidos terapeuticos.
EP2344200A2 (en) 2008-09-19 2011-07-20 Nektar Therapeutics Modified therapeutics peptides, methods of their preparation and use
BRPI0823379A2 (pt) 2008-12-15 2015-07-14 Zealand Pharma As Análogos de glucagon
PE20120332A1 (es) 2008-12-19 2012-04-14 Univ Indiana Res & Tech Corp Profarmacos de peptido de la superfamilia de glucagon basado en amida
WO2010096052A1 (en) 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
MX347291B (es) 2009-03-20 2017-04-17 Amgen Inc Inmunoglobulinas portadoras y usos de las mismas.
ES2587397T3 (es) 2009-03-20 2016-10-24 Hanmi Science Co., Ltd. Procedimiento para preparar un conjugado específico de sitio de un polipéptido fisiológicamente activo
MX2011013625A (es) 2009-06-16 2012-01-20 Univ Indiana Res & Tech Corp Compuestos glucagon activo de receptor de gip.
DK2454282T3 (en) 2009-07-13 2015-05-04 Zealand Pharma As acetylated glucagonanaloger
US20120294855A1 (en) 2009-11-03 2012-11-22 Eli Lilly & Company Glp-1 receptor agonist compounds for obstructive sleep apnea
EP2509997B1 (en) 2009-12-07 2017-08-30 i2 Pharmaceuticals, Inc. Conjugates comprising an antibody surrogate scaffold with improved pharmacokinetic properties
US8703701B2 (en) 2009-12-18 2014-04-22 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
AR079345A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
CA2788304A1 (en) 2010-01-27 2011-08-04 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon antagonist - gip agonist conjugates and compositions for the treatment of metabolic disorders and obesity
CA2792663A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Novo Nordisk A/S Novel glucagon analogues
AR081066A1 (es) 2010-04-02 2012-06-06 Hanmi Holdings Co Ltd Conjugado de insulina donde se usa un fragmento de inmunoglobulina
WO2011143208A1 (en) 2010-05-13 2011-11-17 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon superfamily peptides exhibiting g protein-coupled receptor activity
MX2012014576A (es) 2010-06-24 2013-02-21 Univ Indiana Res & Tech Corp Profarmacos de peptido de la superfamilia de glucagon basado en amida.
KR101314865B1 (ko) * 2010-07-06 2013-10-04 김덕중 모바일 환경에서 ｔｖ 화면과 연동하는 증강 현실을 제공하는 방법, 이를 위한 부가 서비스 서버 및 방송 시스템
KR101337797B1 (ko) * 2010-07-14 2013-12-06 한미사이언스 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬 결합체 액상 제제
KR101382593B1 (ko) 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
JP5282146B2 (ja) 2010-09-06 2013-09-04 パナソニック株式会社 表示装置及びその制御方法
CN101974077A (zh) 2010-09-15 2011-02-16 南京瑞年天平医药科技有限公司 一种新颖的多肽化合物
KR101767570B1 (ko) 2010-10-26 2017-08-14 한미사이언스 주식회사 항 비만 펩타이드의 지속형 결합체
KR101303388B1 (ko) * 2010-10-26 2013-09-03 한미사이언스 주식회사 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제
CN102010473A (zh) * 2010-11-10 2011-04-13 曹鹏 重组胃泌酸调节素融合蛋白及其制备和应用
AU2011348202A1 (en) 2010-12-22 2013-07-04 Marcadia Biotech, Inc. Methods for treating metabolic disorders and obesity with GIP and GLP-1 receptor-active glucagon-based peptides
EP2492749A1 (en) 2011-02-28 2012-08-29 Rohm and Haas Electronic Materials LLC Photoresist compositions and methods of forming photolithographic patterns
KR101161526B1 (ko) 2011-05-16 2012-07-02 숭실대학교산학협력단 연료전지용 촉매전극을 위한 코어/쉘 구조의 나노 지지체 및 그 제조방법
EP3434687B1 (en) 2011-06-10 2021-03-10 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
TR201901402T4 (tr) 2011-06-17 2019-02-21 Hanmi Science Co Ltd Oksintomodulin ve bir immünoglobulin fragmanı içeren bir konjugat ve onun kullanımı.
JP6184404B2 (ja) * 2011-06-22 2017-08-23 インディアナ ユニヴァーシティ リサーチ アンド テクノロジー コーポレイション グルカゴン／ｇｌｐ−１レセプターコアゴニスト
KR101665009B1 (ko) 2012-03-09 2016-10-11 한미사이언스 주식회사 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
JP2015520128A (ja) 2012-04-19 2015-07-16 オプコ バイオロジクス リミテッド 長時間作用性オキシントモジュリン変異体とその作製方法
JP6311708B2 (ja) 2012-06-21 2018-04-18 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｇｉｐ受容体活性を示すグルカゴンアナローグ
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
KR101373563B1 (ko) 2012-07-25 2014-03-12 전북대학교산학협력단 Ｔｏｆ-ｍｒａ를 이용한 혈류특성 및 ｍｒ-신호강도구배(전단율) 유도방법
AR092873A1 (es) 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
PH12018501454A1 (en) 2012-11-06 2020-02-17 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Liquid formulation of protein conjugate comprising the oxyntomodulin and an immunoglubin fragment
JP6137046B2 (ja) 2014-05-09 2017-05-31 信越化学工業株式会社 単量体、高分子化合物、レジスト材料及びパターン形成方法
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
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