MX2014008526A - Sintesis de compuestos polihidroxi cromenona y sus efectos anti-tumor. - Google Patents

Abstract

La presente invención está dirigida a compuestos de cromenona de la fórmula (I), sales farmacéuticamente aceptables, profármacos de las mismas y la composición que comprende compuestos o los similares. Estas pueden utilizarse para modular la función del receptor de estrógeno ER-a36 evitando y/o tratando los padecimiento relacionados con estrógeno, tales como cáncer de seno, leucemia, cáncer de hígado y etc.

Description

SÍNTESIS DE COMPUESTOS POLIHIDROXI CROMENONA Y SUS EFECTOS ANTI-TUMOR Campo de la Invención La presente invención está dirigida a compuestos de polihidroxi cromenona, sales farmacéuticamente aceptadas, profármacos de las mismas y una composición farmacéutica que comprende los compuestos o los similares. La presente invención también está dirigida al uso de compuestos, sales farmacéuticamente aceptables, profármacos de las mismas y una composición farmacéutica en la preparación de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de los padecimientos relacionados con tumores.

Antecedentes de la Invención Los estrógenos son un grupo de hormonas que están involucradas con muchas funciones fisiológicas críticas en el cuerpo humano. Las funciones del estrógeno incluyen promover el desarrollo de los órganos sexuales femeninos, preparar completamente los senos y el útero para el embarazo y la lactancia después del alumbramiento. Los estrógenos también juegan papeles importantes para mantener las funciones cardiovasculares y la densidad de los huesos adecuada. Es bien sabido que los estrógenos pueden estimular la proliferación celular y pueden incrementar el riesgo en las mujeres de padecer cáncer, especialmente cáncer de seno y cáncer de útero.

Los estrógenos se enlazan a receptores de estrógeno en las células objetivo para regular las funciones celulares. Se han descubierto dos tipos de receptores de hidrógeno (ERs) en las células humanas, ER-a y ER-ß. Estos tienen una estructura proteínica similar, cada una tiene tres dominios funcionales separados pero que interactúan: El dominio de terminal N (dominio A/B), dominio de enlace de ADN central (dominio C), y el dominio de enlace de ligando de terminal C (dominio D/E/F). El dominio de terminal N tiene una función de activación independiente de ligando (AF-1), la cual está involucrada en la interacción con co-activadores y activación de transcripción de los genes objetivos en la ausencia de ligandos. El dominio de enlace de ADN juega un papel importante en la dimerización de receptor y enlace de la secuencia de ADN especial. El dominio de enlace de ligando de terminal C media el enlace de ligando y tiene una función de transactivación dependiente de ligando (AF-2), para activar la transcripción de genes en la presencia de ligandos.

La longitud completa de ER-a es identificada como una proteína 66kDa y es denominada como ER-a66. ER-a66 contienen los tres dominios funcionales. Una variante de empalme de ER-a66 es descubierta lateralmente y denominada como ER-a46. La ER-a46, tiene un peso molecular de aproximadamente 46KDa y carece del dominio AF-1 de terminal N de ER-a66. Recientemente, se ha identificado una variante de ERa de 36kDa. Esta carece del dominio AF-1 de terminal N y el dominio AF-2 de terminal C de Er-a66 (Wang y asociados., Biochem. Biophys. Res.Commun. 336, páginas 1023 a 1027 (2005)).

La ER-a66 es considerada bien por mediar la proliferación celular estimulada por estrógenos por medio de la activación de transcripción de sus genes objetiva. El enlace de estrógeno a ER-a66 activa el dominio de transactivación de ER-a66 y por lo tanto, estimula la expresión de los genes objetivo en corriente descendente y eventualmente conduce a la proliferación celular. ER-a46 se descubrió que media la síntesis NO rápida iniciada por membrana y estimulada por estrógeno (Li y asociados, Proc. Nati. Acad. Sci., E.U.A. 100: 4807-4812 (2003)). También se muestra que la ER-a46, que carece del dominio AF-1 , inhibe la actividad AF-1 de ER-a66 (Flouriot, G., EMBO, 19, páginas 4688 a 4700, (2000)). Debido a que la ER-a36 carece, tanto de los dominios de activación de transcripción AF-1 como AF-2 funciona como un inhibidor negativo dominante para inhibir las funciones tanto de AF-1 como de AF-2 de la ER-a y la ER-ß. Adicionalmente, ER-a36 está localizada principalmente sobre la membrana de plasma y media la señalización de estrógeno mitogénica iniciada por membrana que estimula la proliferación celular. (Wang y asociados, Biochem. Biophys. Res.Commun. 336, páginas 1023 a 1027 (2005); Wang y asociados, Proc. Nati. Acad. Sci., E.U.A. 103: páginas 9063 a 9068 (2006)).

Los estudios extensivos han mostrado que ia señalización de estrógenos es mediada por medio de las trayectorias de activación de transcripción nuclear clásicas, así como también las trayectorias de señalización iniciadas por membrana no clásicas. Parece tanto de ER-a66 como ER-a46 funcionan principalmente en el núcleo, mientras que ER-a36 funciona principalmente a través del exterior del núcleo.

Esta también ha mostrado que ER-a36 carece de la hélice 8-12 del dominio de enlace de ligando de la ER-a66 original, la cual cambia totalmente la especificidad de enlace de ligando de ER-a36. Por lo tanto, ER-a36 puede enlazarse a ligandos diferentes de aquellos enlazados a ER-a66 y ER-ß.

Como los padecimientos relacionados con el receptor de estrógeno continúan afectando a muchos individuos, existe todavía una necesidad urgente de descubrir compuestos y métodos novedosos útiles para evitar y/o tratar dichos padecimientos.

Breve Descripción de la Invención La presente invención proporciona los compuestos de cromenona mostrados como la fórmula (I), la sal o fármaco farmacéuticamente aceptado de los mismos para modular el receptor de estrógeno nuevo ER-a36 y una composición farmacéutica que comprende los compuestos o los similares. en donde: R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, (C1 6) alquilo, y (Ci.6) alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno; R2, R3, R4, R5 y R6 son seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (Ci. ) alquilo, (C1-4) alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno, halógeno, ciano, (C^Ce) alcoxi sustituido con uno o más átomos de halógeno; y R2, R3, R4, R5 y R6 que no son hidrógeno en forma simultánea; cuando R1 es metilo y R3 y R5 son hidrógeno, entonces R4 no es cloro.

Breve Descripción de los Dibujos La figura 1, muestra los resultados de manchado Western que representan la expresión de ER-a66, ER-a46 y ER-a36 en muestras de cáncer de seno humano, línea 1: tejido de seno normal; línea 2: carcinoma ductal de infiltración; línea 3: carcinoma ductal de infiltración; línea 4: carcinoma ductal invasivo; línea 5: carcinoma lobular de infiltración; línea 6: carcinoma lobular de infiltración; línea 7: carcinoma ductal no invasivo.

La figura 2, (figura superior) muestra el resultado de manchado de inmunofluorescencia de células M DA-M B-231. Las células MDA-MB-231 son de la línea celular de cáncer de seno ER-negat¡va que carece de ER-a66 y ER-a46, manchadas con un anticuerpo que enlaza de manera especifica a ER-a36 (mostrado a la izquierda de la figura etiquetada como "ER-a36 Ab": positivo mostrado en verde). El núcleo celular también está manchado con 4,6-diamidina-2-fenilidole (mostrado en la figura media etiquetado como "DAPI": manchado positivo mostrado en azul). Las señales de manchado combinadas se muestran en una línea etiquetada como "Combinado" El manchado negativo se observa cuando el anticuerpo es incubado previamente con péptidos inmunogénicos que se enlazan al anticuerpo (figura inferior).

La figura 3, muestra los resultados de manchado Western que representan la expresión de ER-a36 en líneas celulares de tumor diferentes. Línea 1: 293 líneas celulares epiteliales renales de humano que tiene una expresión transitoria de ER-a36; Línea 2 a 4: líneas celulares SK-BR-3 de cáncer de seno humano de laboratorios diferentes; Línea 5 a 7: líneas celulares de MCF-7 de cáncer de seno humano de laboratorios diferentes; Línea 8-9: líneas celulares HL-60 de leucemia humana de laboratorios diferentes; Línea 10 a 11: líneas celulares de MV-4-11 de leucemia humana de laboratorios diferentes; Línea 12 a 13: líneas celulares K562 de leucemia mieloide crónica humana de laboratorios diferentes; línea 14: línea celular A2780 de cáncer de hígado; línea 15. línea celular HEL-7402 de cáncer de hígado; línea 16: línea celular HEL-9204 de cáncer de hígado; línea 17: línea celular Hep-11 primaria de cáncer de hígado de un paciente; línea 18: línea celular Hep-12 primaria de cáncer de hígado de un paciente.

Las figuras 4 a 8, muestran la inhibición in vitro de la línea celular BGC-823 de cáncer gástrico, la línea celular H460 de cáncer de pulmón, línea celular LS174T de carcinoma de colon, línea celular PANC-1 de cáncer pancreático y la línea celular PC-3 de cáncer prostético con el compuesto 1, probado mediante el método MTT. Los resultados muestran que el compuesto 1 tiene una inhibición dominante sobre estas células de cáncer con una buena dependencia de la dosis. IC50 está dentro del rango de 1 a 4 µ?.

La figura 9, muestra el peso de tumor promedio (bar a) de un tumor BCAP-37 de cáncer ce seno humano que porta un ratón sin peo después de 20 días de administración continua, respectivamente con control positivo de tamoxifen (0.7 mg/ratón/día), compuesto 1 (0.7 mg/ratón/d ía) y el control negativo del vehículo (0.2mg/ratón/d ía) , y el resultado muestra la inhibición del compuesto sobre los tumores.

La figura 10, muestra la curva de crecimiento de tumor de células de linfoma B Daudi que portan ratones sin pelo que han sido administrados en forma continua respectivamente con control positivo de rituximab, compuesto 1 (0.7 mg/ratón/día) y control negativo de vehículo (0.2 mL/ratón/día) durante 21 días.

La figura 11, muestra el peso de tumor promedio de carcinoma endometrial humano Ishikawa que porta ratón sin pelo después de 20 días de administración continua, respectivamente con control positivo de D PA (acetato de progesterona depomedroxi) (120 mg/kg) compuesto 1 de dosis baja (17.5 mg/kg), dosis media (35 mg/kg), dosis alta (70 mg/kg) y control negativo del vehículo (0.2 mL/ratón/día). El compuesto 1, tiene inhibición dominante sobre el crecimiento de tumor de tumor portado por ratón, y el efecto de inhibición es mayor que en el fármaco de control.

Descripción Detallada de la Invención Compuesto y Derivados En algunas modalidades de la presente invención, se proporcionan los compuestos de cromenona, las sales farmacéuticamente aceptables, profármacos del mismo y la composición farmacéutica que comprende el compuesto o los similares. Estos pueden funcionar para regular el receptor de estrógeno ER-a36, evitar y/o tratar el padecimiento mediado por el receptor ER-a36, tal como cáncer, etc.

En algunas modalidades, la presente invención proporciona el compuesto de fórmula (I), las sales farmacéuticamente aceptables, profármacos del mismo y la composición farmacéutica que comprende el compuesto o los similares, en donde: (I ) R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, (C1-6) alquilo, y (Ci.6) alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno; R2, R3, R4, R5 y R6 son seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C-i-4) alquilo, (C1-4) alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno, halógeno, ciano, y (CÍ-C4) alcoxi sustituido con uno o más átomos de halógeno; y R2, R3, R4, R5 y R6 que no son hidrógeno en forma simultánea; cuando R1 es metilo y R3 y R5 son hidrógeno, entonces R4 no es cloro.

En una modalidad determinada, el compuesto de la fórmula (I) comprende el compuesto de la fórmula (II) el cual tiene la siguiente estructura: (II) en donde: R2, R3, R4, R5 y R6 son seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C1.4) alquilo, (C1-4) alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno , halógeno, ciano, y (Ci-4) alcoxi sustituido con uno o más átomos de halógeno; y R2, R3, R4, R5 y R6 que no son hidrógeno en forma simultánea; En una modalidad determinada, el compuesto de la fórmula (I) comprende el compuesto de la fórmula (III) el cual tiene la siguiente estructura: en donde: R2, R3, R4, R5 y R6 son seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (Ci-C4) alquilo, (Ci-C4) alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno , halógeno, ciano, y (Ci. ) alcoxi sustituido con uno o más átomos de halógeno, y R2, R3, R4, R5 y R6 que no son hidrógeno en forma simultánea; Y cuando R3 y R5 son hidrógeno, R4 no es cloro.

Los compuestos especialmente preferidos de la fórmula (I) comprenden, sin limitación, los siguientes compuestos: 2-(4-trifluorometilfenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten- 1- ¡l)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-fluorometilfenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)- H-cromen-4-ona; 2-(3-fluoro-4-clorofenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-clorofenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-tnfluorometoxifenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona; 2-(3,4-diclorofenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 - ¡l)-4H -cromen -4 -ona; 2-(3-trifluorometil-4-clorofenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil- 2- buten-1-il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-bromofenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona; 2-(3,4-difluorofenil)-3-metoxi-5,7-dihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-trifluorometilfenil)-3-metoxi-5,7-dihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-trifluorometoxifenil)-3-metoxi-5,7-dihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona; 2-(3-trifluorometil-4-clorofenil)-3-metoxi-5,7-dihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-bromofenil)-3-metoxi-5,7-dihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona; Los compuestos y derivados de los mismos en la presente invención son denominados de acuerdo con el Sistema de Denominación IUPAC ("Unión Internacional de Química Pura y Aplicada" (International Union of Puré and Applied Chemistry)) o el Sistema de Denominación CAS ("Servicio de Compendio Químico" (Chemial Abstract Service), Columbus, OH) A continuación está la definición de los términos utilizados en la presente invención. A menos que sea indicado de otra forma, las definiciones primarias de los grupos o términos que comprenden un grupo independiente o una parte de otros grupos, se pueden aplicar a la totalidad de la descripción.

El término "sustituido" significa que un átomo de hidrógeno de una molécula ha sido reemplazado con un átomo o molécula diferente. El átomo o molécula que reemplaza el átomo de hidrógeno es denotado como un "sustituyente".

El valor mínimo y máximo del número de átomos de carbono del CnHn- es denotado con el prefijo, tal como el prefijo de (Ca-Cb) alquilo, significa cualquier alquilo que comprende los números de átomos de carbono de "a" a "b". Por lo tanto, tal como (d-Cs) alquilo significa que el alquile comprende átomos de carbono de 1 a 6.

El término "alcoxi" significa el grupo de cadena grasa monovalente lineal o ramificado enlazado con un átomo de oxígeno en un extremo, que incluye sin limitación, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, iso-butoxi, ter-butoxi o los similares.

El término "alquil" significa una cadena grasa saturada, monovalente, recta o ramificada, que comprende sin limitar al grupo, tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, pentiio, iso-pentilo, hexilo o los similares.

El término "halógeno" o "átomo de halógeno" significa el átomo de cloro, bromo, flúor o yodo o el grupo correspondiente.

El término "heteroarilo" significa el grupo aromático de monociclo o policiclo, en donde uno o más átomos de carbono es/son reemplazados por uno o más heteroátomos, tales como nitrógeno, oxígeno o azufre. Los ejemplos de anillos de heterocicloalquilo incluyen, sin limitar a benzofuranilo, benzotiofenilo, benzimidazolilo, benzoxazolilo, benzotiazolilo, benzopiranilo, furilo, imidazolilo, indazolilo, indolizinilo, indolilo, isobenzofurilo, isoindolilo, isoquinolilo, isotiazole, isoxazole, naftiridinilo, oxadizolil, oxazinilo, oxazolil, ftalazinilo, pteridinilo, guaninilo, piranil, pirazinilo, pirazolilo, piridazinilo, pirido[3,4-b] indolilo, piridinilo, pirimidinilo, pirrolidinilo, quinolizilo, quinolinilo, quinoxalinilo, tiadizolilo, tiatrizolilo, tiazolilo, tienilo, triazinilo, triazolilo, xanteniio o los similares.

El término "-oxo" significa un grupo carbonilo formado mediante la combinación de un átomo(s) de carbono y un átomo(s) de oxígeno.

Los profármacos, solvatos de los compuestos de la presente invención, también se tienen en consideración. El término "profármaco" se refiere a un compuesto que es un precursor de fármaco, el cual, después de la administración a un sujeto, libera el fármaco activo in vivo, por medio de un proceso químico o de metabolismo (por ejemplo, al ser llevado a un pH fisiológico o a través de actividad enzimática). Un planteamiento de la síntesis y uso del profármaco, puede encontrarse en la publicación "Profármacos como sistemas de administración novedosos" (Produgs as Novel Delivery Systems), vol. 14 de la ACS Symposium Series, y en la publicación "Portadores bioreversibles en diseño de fármacos" (Bioreversible Carriers in Drug Design), ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association y Pergamon Press, 1987, ambos estando incorporados en a presente descripción como referencia. El término "profármaco" puede incluir un precursor metabólico de un compuesto de la presente invención. El profármaco puede estar inactivo cuando es administrado a un sujeto, aunque puede convertirse in vivo a un compuesto de la fórmula (I) de la presente invención. El profármaco puede ser, un compuesto existente naturalmente o compuestos sintéticos.

El compuesto de la fórmula (I) en la presente invención puede estar en la forma de no solvatada, o solvatada, tal como farmacéuticamente hidratado, etanolado o los similares. Y se pretende que la presente invención incluya todos los solvatos y no solvatos de los compuestos. El solvato preferido del compuesto de la fórmula (I) es hidrato.

Todo lo estereoisomérico de los compuestos, tal como estereoisomérico posible del átomo de carbono asimétrico del grupo de sustituyente R de la fórmula (I) que incluye el enantiómero y diastereómero están dentro del alcance de la presente invención. Lo estereoisomérico y la mezcla de los compuestos mostrados en la fórmula (I) que incluyen la mezcla racémica también son parte de la presente invención. Adicionalmente, todos los geometricisómeros y positionalisómeros, tales como, si el compuesto de la fórmula (I) tienen un enlace doble, el cis- y trans- y la mezcla de los mismos, están todos dentro del alcance de la presente invención .

Las mezclas diasterioméricas pueden ser separadas en sus diastereómeros individuales con base en sus diferencias químicas mediante los métodos bien conocidos por aquellos expertos en la materia, tales como cromatografía y/o cristalización fraccional. Los enantiómeros pueden ser separados convirtiendo la mezcla enantiomérica en una mezcla diasteriomérica mediante la reacción con un compuesto ópticamente activo adecuado, separando entonces los diasteriómeros y convirtiendo (por ejemplo, hidrolizando) los diasteriómeros a los enantiómetros puros correspondientes. También, algunos compuestos de la fórmula (I) pueden ser altropisómeros (por ejemplo, biarilos sustituidos), los cuales también son considerados como parte de la presente invención.

La frase "farmacéuticamente aceptable" indica que el portador, vehículo, diluyentes, excipiente(s) y/o sales designados son/es generalmente compatibles químicamente y/o físicamente con los otros ingredientes que comprenden la formulación y fisiológicamente compatibles con el receptor de la misma.

El término "sales" y "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a una sal de ácido y/o una sal básica formada mediante los compuestos de la fórmula (I) o estereoisómero de la misma en ácido inorgánico y/u orgánico y la base. Las sales y sales farmacéuticamente aceptables, también comprenden la sal anfotérica (sal intramolecular), y la sal de amonio cuaternario, tal como la sal de amonio alquilo. Las sales pueden obtenerse directamente después del aislamiento y purificación. Adicionalmente, las sales pueden ser obtenidas a partir de los compuestos de la fórmula (I) o el estereoisómero, profármaco del mismo mezclado con el ácido o base adecuados (por ejemplo, equivalente). Las sales pueden ser recolectadas filtrando el precipitado de la solución o por evaporación del solvente, o por secado congelado después de la reacción en el medio de agua.

Las sales de adición de ácido incluyen hidrobromuro, hidroyoduro, hidrocloruro, sulfato, hidrosulfato, nitrato, acetato (que incluye a las sales formadas con ácido acético o tricloroacético, por ejemplo, trifluoroacético), oxalato, alginato, ascorbato, aspartato, butirato, camforato, camforsulfonato, ciclopentilo propionato, digluconato, etileno sulfonato, 2-hidroxi etil sulfonato, 2-naftaleno sulfonato, nicotinato, persulfato, 3-fenil propionato, picrato, pivalato, propionato, salicilato, benceno sulfonato, palmitato, estearato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, tiocianato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato, dodecil sulfonato, adipato o los similares.

Las sales básicas (por ejemplo, la sal formada con carboxi o fenoxi de sustituyente R) incluye amonio, la sal de metal alcalino (tal como sodio, litio y potasio), la sal de metal alcalinotérreo (tal como calcio y magnesio), la sal formada con una base orgánica (tal como amina orgánica) (que incluye sin limitar a dibencilo etileno amina, diciclohexilamina, hidrabamina, N-metil-D-glucosamina, tetrabutilamina) o las sales formadas con aminoácido, tales como arginina, Usina y los similares. Adicionalmente, las sales básicas incluyen amonio cuaternario formado con el agente alcalino que comprende nitrógeno, y no limitadas a amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina o los similares. Para ejemplos adicionales, véase la publicación de Berge y asociados, J. Pharm. Sci., 66, páginas 1 a 19 (1977).

También es posible que los compuestos de la fórmula (I) puedan existir como isómeros tautoméricos en equilibrio, y todas dichas formas están abarcadas dentro del alcance de la presente invención.

En una modalidad, los compuestos etiquetados en forma isotópica de la fórmula (I), la cual es idéntica a aquella planteada en la presente descripción, aunque por el hecho de que uno o más átomos es/son reemplazados por otro átomo que tiene una masa atómica o número de masa diferente de aquel que existe comúnmente en la naturaleza, se proporcionan en la presente invención. Los ejemplos de los isótopos que pueden ser incorporados en los compuestos de la fórmula (I) incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como 2H, 3H, 13C, 1 C, 15N, 170, 180, 31P, 32P, 35S, 18F y 36CI. Los compuestos de la fórmula (I), que comprenden los isótopos anteriores y/o aquellos de otros átomos, los estereoisómeros y profármacos de los mismos, y la sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos, estereoisómeros o profármacos se pretenden estén dentro del alcance de la presente invención.

Ciertos compuestos etiquetados en forma isotópica de la fórmula (I), por ejemplo, aquellos compuestos etiquetados con 3H y 1 C, o los similares, pueden ser utilizados en el compuesto y/o ensayos de distribución de tejido de sustrato. Son particularmente preferidos los isótopos de tritio (es decir, 3H) y los isótopos de carbono 14 (es decir 1 C) por su fácil preparación relativa y fácil detección. Adicionalmente, algunos isótopos, tales como deuterio, (es decir, 2H) pueden producir ciertas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica (por ejemplo, incrementando la vida útil in vivo, o requerimientos de dosificación reducidos) y por lo tanto, pueden ser preferidos en algunas circunstancias. Los compuestos etiquetados en forma isotópica de la fórmula (I) generalmente pueden ser preparados mediante los métodos conocidos por un experto en la materia, tales como sustituyente un reactivo etiquetado en forma isotópica por un reactivo etiquetado en forma no isotópica.

Uso de la Invención El compuesto de la presente invención es un modulador nuevo para un receptor de estrógeno ER-a36, y puede modular la función de ER-a36 en células in vivo e in vitro. Por consiguiente, el compuesto de la fórmula (I) de la presente invención puede utilizarse para el tratamiento y/o prevención de padecimientos por medio de ER-a36, especialmente relacionadas con tumor.

En ciertas modalidades, se proporciona el método para modular la función de ER-a36 en las células. El método comprende la administración del compuesto de la fórmula (I) a las células en forma endógena o exógeno que expresa ER-a36 mediante ingeniería genética, también, a células con o sin otro receptor de estrógenos (tal como, ER-a66, ER-a46 y ER-ß). En una modalidad determinada, las células expresan en forma endógena ER-a36. En una modalidad preferida, la célula es una célula de cáncer que expresa ER-a36 en forma endógena. Las células que expresan ER-a36 comprenden, sin limitar a, las células de cáncer de seno, leucemia, cáncer de hígado, linfoma, cáncer de pulmón, mieloma, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de endometrio, cáncer de colon y cáncer gástrico. En una modalidad más preferida, las células que expresan ER-a36 son células de cáncer de seno, leucemia, cáncer de hígado, linfoma, cáncer de endometrio y cáncer de ovario, las cuales expresan en forma endógena ER-a36. Las células de cáncer de seno que expresan ER-a36 comprenden sin limitar a las células de MCF7, MDA-MB-231 y SKBR-3. Las células de leucemia comprenden, sin limitar a células de K562, MV-4-11, SUM159, HL-60 y Molt-4. Las células de cáncer de endometrio que expresan ER-a36 comprenden sin limitar a células HedA. Las células de cáncer de hígado que expresan ER-a36 comprenden sin limitar a A2780, BEL7402, BEL7404, HEL-9204, Hep2G, Hep3B y células madre de cáncer de hígado primarias Hep-12 originadas de los pacientes. Las células de linfoma que expresan ER-a36 comprenden sin limitar a Daudi. La expresión de ER-a36 endógeno puede ser incrementada o disminuida mediante el tratamiento de un reactivo que comprende suero, ?2ß (17p-estradiol), tamoxifen y fulvestrant. (ICI 182, 780) En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para preparar las células que expresan ER-a36 exógeno. Las células pueden ser preparadas mediante ingeniería genética conocida por aquellos expertos en la materia (hágase referencia a Sambook, etc., "Clonación molecular, un manual de laboratorio" (Molecular Cloning, A laboratory manual) (2a. Ed. 1989) (Cold Spring Harbor Laboratory)) . En breve, un gen ER-a36 exógeno se prepara e inserta en un vector de expresión, posteriormente es transfectado a células huésped, y posteriormente, las células huésped son cultivadas en el medio de cultivo que se puede aplicar para expresión de ER-a36 exógeno. La secuencia genética de ER-a36 humano se describe en la publicación Biochem. Biophys. Res. Commun. 336, páginas 1023 a 1027 (2005) Wang y asociados (Registro GenBank No. BX640939). Las células que expresan ER-a36 exógeno pueden expresar o no ER-a36 endógeno. El nivel de expresión endógeno o exógeno de ER-a36 en las células puede ser incrementado o disminuido mediante el tratamiento de un reactivo que comprende suero, ?2ß (173-estradiol), tamoxifen y fulvestrant. (ICI 182,780) Por lo tanto, los compuestos de la fórmula (I) de la presente invención, pueden ser utilizados para la preparación de medicamentos para la prevención y/o tratamiento del cáncer relacionado con ER-ct36 que comprende sin limitar a cáncer anal, cáncer de conducto biliar, cáncer de vejiga, cáncer de huesos, cáncer colorectal (cáncer de colon, cáncer rectal), cáncer de cerebro, cáncer de mama, el carcinoide, cáncer cervical, cáncer de relación endocrina, cáncer de endometrio, cáncer de ojo, cáncer de vesícula biliar, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de sarcoma de Kaposi, carcinoma renal, carcinoma de laringe, leucemia, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, linfoma, melanoma, mesotelioma, mieloma, cáncer neuroendocrino, cáncer de esófago, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de pene, cáncer de próstata, cáncer de piel, sarcoma de tejido suave, cáncer de médula espinal, cáncer gástrico, cáncer de testículos, cáncer de tiroides, cáncer de vagina, cáncer de vulva o cáncer de útero. En la modalidad preferida, el cáncer relacionado con ER-a36 incluye cáncer de seno, cáncer cervical, cáncer de colon, cáncer de endometrio, leucemia, cáncer de hígado, linfoma, cáncer de pulmón, mieloma, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer gástrico, cáncer pancreático, carcinoma renal, melanoma, cáncer de tiroides, cáncer de sarcoma de tejido blando o cáncer de útero. En la modalidad más preferida, el cáncer relacionado con ER-a36 incluye cáncer de seno, cáncer de hígado, linfoma, cáncer de próstata, cáncer gástrico, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer pancreático, cáncer de endometrio, cáncer de ovario y leucemia.

El sujeto puede ser un mamífero, tal como un perro, gato, vaca, oveja, caballo o humano, preferentemente, un ser humano. La cantidad efectiva de los compuestos varía de acuerdo con la diferencia de enfermedad y puede ser determinado fácilmente por un experto en la materia que tiene el beneficio de la presente descripción.

En ciertas modalidades, los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con uno o más agentes anticáncer diferentes. Los agentes anticáncer adecuados incluyen, sin limitar a agentes de alquilación, mostazas de nitrógeno, antagonistas de folato, antagonistas de purina, antagonistas de pirimidina, venenos eje, inhibidores de topoisomerasa, agentes de inducción de apoptosis, inhibidores de angiogénesis, podofilotoxinas, nitrosoureas, antimetabolitos, inhibidores de síntesis de proteína, inhibidores de cinasa, antiestrogenos, cisplatina, carboplatina, interferona, arsparginasa, leuprolido, flutamido, megestrol, mitomicina, bleomicina, doxorubicina, adriamicina, lirinotecan y taxol. En una modalidad, los agentes anticáncer son antiestrogenos, tales como tamoxifen y fulvestrant (ICI182,750).

En ciertas modalidades de la presente invención, un compuesto de la fórmula (I), un estereoisómero , o profármacos del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del estereoisómero o profármaco puede ser administrada en la forma de una composición farmacéutica que comprende un portador, vehículo, o diluyente farmacéuticamente aceptable.

Estos pueden ser preparados para la medicación para la prevención y/o tratamiento de un sujeto que padece de enfermedades relacionadas con ER-a36.

En ciertas modalidades, la composición de la presente invención puede ser utilizada para el tratamiento de padecimientos animales. El veterinario ordinario puede administrarlos en la forma de una preparación farmacéuticamente aceptable de los compuestos presentes o sal veterinariamente aceptable, o solvente veterinariamente aceptable del profármaco del mismo. El veterinario puede determinar la dosificación adecuada y el método de administración a un animal.

Si una combinación de los compuestos activos se utiliza, ésta puede ser administrada en forma simultánea, separada o secuencialmente.

Métodos para la Preparación de los Compuestos Los compuestos de la fórmula (I) pueden ser preparados mediante métodos sintéticos diferentes. Normalmente, el método de preparación se demuestra de la siguiente forma. R1, R2, R3, R4, R5, R6 son como se definieron anteriormente, a menos que sea indicado de otra forma.

Es evidente para los expertos en la materia, que los métodos detallados para la preparación de los compuestos varían ligeramente a partir de la diferencia de las estructuras de los compuestos. Adicionalmente, es necesario proteger a los grupos inestables o activos mediante el grupo de protección convencional (mostrado como P) en la mayoría de los métodos de preparación que siguen. La propiedad de los grupos de protección y los métodos para inducir o desechar los grupos es conocida en la materia. Para los ejemplos, hágase referencia a la publicación de Greene T. W. "Grupos de protección en síntesis orgánica" (Protective Groups in Organic Synthesis), John Wiley & Sons, Nueva York, 1991). Los siguientes esquemas 1 a 3 y la descripción relacionada son como los ejemplos de preparación de los compuestos de la fórmula (I) y no pretenden limitar el alcance de la presente invención.

Esquema 1 Los compuestos de la fórmula (I) pueden ser preparados través de varios pasos. El compuesto iii puede ser preparado través de la reacción de Houben-Hoesch (acilación Friedel- Crafts) del compuesto i y ii y bajo catálisis de ácido Lewis. El ácido Lewis que puede aplicarse a la reacción comprende cloruro de zinc anhidro, cloruro de aluminio anhidro, cloruro férrico, tetracloruro de titanio, cloruro esténica, complejos de eterato de boro triflúor dietilo y etc. Esta reacción tendrá una duración de 1 a 20 horas a temperaturas entre 0°C y 120°C.

El compuesto v puede prepararse a partir del compuesto Mi y el compuesto ív sustituido en solvente inerte a través de reacción de condensación. El solvente inerte que se puede aplicar a la reacción comprende, tal como DME, 1,2-dietoxietano, THF, 1,4-dioxano, DMF, N ,N-dimetilacetamida, piridina, N-metil-2-pirrolidona. El alquilo que se puede aplicar a la reacción comprende, por ejemplo, hidróxido de potasio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, hidruro de sodio, metóxido de sodio, ter-butóxido de potasio, DBU, (1,8-diazabiciclo-diciclo (5,4,0)-7-hendeceno), butillitio, LDA (diisopropillitio), LHMDS (litio hexametildisilazido) y etc. el catalizador de transferencia de fase (tal como 18-corona-6, TBAB (bromuro de tetrabutilamonio), TBAF (fluoruro de tetrabutilamonio, etc.) de la cantidad estequiométrica o catalítica que será agregada durante la reacción. Y la temperatura de reacción es de aproximadamente 0 a 100°C el tiempo de reacción es de 1 a 20 horas.

El compuesto vii puede ser preparado a partir de bromuro de prenilo y el compuesto v bajo condición alcalina. El solvente que se puede aplicar a la reacción comprende, tal como metanol, DMF (?,?-dimetil acetamina), THF (tetrahidrofurano), agua, tolueno, DME, (1 ,2-dimetoxi etano), y mezcla de solventes, tales como metanol-agua, DMF-agua, THF-agua, y etc. El solvente preferido en la reacción es agua. El alcalino que se puede aplicar a la reacción comprende tal como hidróxido de potasio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, metóxido de sodio, hidróxido de sodio, ter-butóxido de potasio, DBU (1 ,8-diazabiciclo-diciclo (5,4,0)-7-hendeceno), butillitio, LDA (diisopropillitio), LHMDS (litio hexametildisilazido) y etc. La temperatura de reacción convencionalmente está entre aproximadamente 0 y 100°C, preferentemente, el tiempo de reacción es de a 20 horas.

En los métodos de síntesis química, los dos pasos importantes son respectivamente la inducción de isopentenilo y el cierre del anillo de base de cromenona. La secuencia de dos pasos puede ser modulada de acuerdo con la propiedad de grupos sustituyentes diferentes. Por lo tanto, el compuesto de la presente invención puede prepararse a través del esquema 2.

Esquema 2 En el esquema 2, la condición de reacción de todo tipo de reacción es similar a aquel del esquema 1. El compuesto viii puede ser preparado a partir del compuesto iii y bromuro de prenilo bajo condición alcalina. El solvente que se puede aplicar a la reacción comprende, tal como metanol, DMF (n;N-dimetil acetamina), THF (tetrahidrofurano), agua, tolueno, DME, (1 ,2-dimetoxi etano), y mezcla de solventes, tales como metanol-agua, DMF-agua, THF-agua, y etc. El solvente preferido en la reacción es agua. El alcalino que se puede aplicar a la reacción comprende tal como hidróxido de potasio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, metóxido de sodio, hidróxido de sodio, ter-butóxido de potasio, DBU (1,8-diazabiciclo-diciclo (5,4,0)-7-hendeceno), butillitio, LDA (diisopropillitio), LHMDS (litio hexametildisilazido) y etc. La temperatura de reacción convencionalmente está entre aproximadamente 0 y 100°C, preferentemente, el tiempo de reacción es de a 20 horas.

El compuesto vii puede prepararse a partir del compuesto viii y cloruro de acilo sustituido iv a través de reacción de condensación. El solvente inerte que se puede aplicar a la reacción comprende, tal como D E, 1 ,2-dietoxietano, THF, 1,4-dioxano, DMF, N , N-metilacetamida, piridina, N-metil-2-pirrolidona. La reacción se puede aplicar a la condición alcalina, que comprende dicho hidróxido de potasio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, hidróxido de sodio, metóxido de sodio, ter-butóxido de potasio DBU, (1 ,8-diazabiciclo-diciclo (5,4,0)-7-hendeceno), butllitio, LDA (diisopropillitio), LHMDS (hexametildisilazido de litio) y etc. La cantidad esteq uiométrica o catalítica del catalizador de transferencia de fase puede agregarse en la reacción, tal como 18-corona-6, TBAB (bromuro de tetrabutilamonio) , TBAF (fluoruro de tetrabutilamonio) y etc. La temperatura de reacción convencionalmente es desde aproximadamente 0 hasta 140°C, preferentemente, el tiempo de reacción es de 1 a 20 horas bajo reflujo de solvente. Cuando R1 s hidrógeno, el compuesto de la fórmula (I) puede ser preparado de acuerdo con el siguiente esquema 3.

Esquema 3 P es un grupo de protección para el grupo hidroxi en el esquema 3. El compuesto xii puede ser preparado a través de la remoción del grupo de protección del compuesto xi. Los métodos de remoción varían de acuerdo con los grupos de protección diferentes, y los métodos principalmente pueden ser la referencia a "grupos de protección en síntesis orgánica" (protective groups in organic synthesis) (Greene T.W et. John Wiley & Sons, Nueva York, 1991). El grupo de protección preferido se selecciona del grupo que consiste en bencilo, benzoilo, Cabobenzoxi, TBDMS (terbutildimetilsililo), THP (tetrahidopirano), metilo, MOM (metoximetilo), PMB (para-metoxibencilo) y etc.

El compuesto xiii puede ser preparado por la reacción de bromuro de prenilo con el compuesto xii bajo condición alcalina. El solvente que se puede aplicar a la reacción comprende, tal como metanol, DMF (n;N-dimetil acetamina), THF (tetrahidrofurano), agua, tolueno, DME, (1 ,2-dimetoxi etano), y mezcla de solventes, tales como metanol-agua, DMF-agua, tetrahidrofurano-agua, y etc. El solvente preferido en la reacción es agua. El álcali que se puede aplicar a la reacción comprende, por ejemplo, hidróxído de potasio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, metóxido de sodio, hidruro de sodio, ter-butóxido de potasio, DBU (1 ,8-diazabiciclo-diciclo (5,4,0)-7-hendeceno), butillitio, LDA (diisopropillitio), LHMDS (litio hexametildisilazido) y etc. Y la temperatura de reacción está entre aproximadamente 0 y 100°C, el tiempo de reacción es de a 20 horas.

EJEMPLOS La presente invención está ilustrada en los siguientes ejemplos no limitantes, en los cuales, a menos que sea establecido de otra forma, la temperatura ambiente se refiere al rango de 18 a 25°C. La evaporación del solvente se realizó utilizando un evaporador giratorio bajo presión reducida; las reacciones fueron monitoreadas por cromatografía de capa delgada (TLC) y los tiempos de reacción fueron provistos únicamente como ilustración. La estructura y pureza de todos los compuestos aislados se aseguraron mediante al menos una de las siguientes técnicas: TLC, espectrometría de masa, resonancia magnética nuclear (RMN), cromatografía líquida de presión alta (HPLC). Las producciones son provistas únicamente con propósitos de ilustración Ejemplo 1 2-(4-trifluorometilfenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona (compuesto 1) Paso 1: preparación de 2-metoxi-1 -(2,4,6-trihidroxifenil)etanona Se disolvió floroglucinol (35.1 g, 279 mmol) en solución de etil éter (500 ml_), seguido por cloruro de zinc (8 g, 59 mmol) y 2-metoxi acetonitrilo (18 g, 253 mmol) agregado en la solución bajo una condición de baño de agua helada. El gas seco de HCI se hizo burbujear dentro de la mezcla de reacción, agitando vigorosamente durante 5 horas, y se formó el precipitado. El precipitado se filtró y recolectó seguido por la disolución en agua y se sometió a reflujo durante 3 horas. Después del enfriarse, se recolectó el precipitado color rosa y el compuesto blanco deseado se puede obtener después de la nueva cristalización con agua. (45 g, producción 81%) 1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): 6 = 12.14 (s, 2H), 10.41 (s, 1H), 5.79 (s, 2H), 4.56 (s, 2H), 3.32 (s, 3H).

Paso 2: preparación de 2-(4-trifluorometilfenil)-3-metoxi-5,7-dihioxi- 4H-cromen-4-ona Se disolvió 2-metoxi-1 -(2,4,6-trihidroxifenil) etanona (30 g, 151 mmol) y 4-trifluometil benzoilcloru ro (37.5g, 180mmol) en 250 ml_ de piridina seca. Se agregó en forma de gotas DUB (53.2 g 350 mmol) en la solución a temperatura ambiente. Después de que se terminó la adición en gotas, la temperatura de la solución se elevó a 75°C, y se mantuvo en agitación durante la noche. En el segundo día, la solución se enfrió a temperatura ambiente, y la mayor parte del solvente se removió bajo presión reducida. El residuo de la solución fuer vertido en solución de clorhidrato ligero. La solución mezclada se extrajo 3 veces con500 ml_ de acetato de etilo. El extracto se combinó junto, se lavó con 300 mi de solución acuosa de carbonato de sodio 2N, se secó en sulfato de sodio anhidro y se condensó. El compuesto deseado se obtuvo (21 g, producción del 40%) después de que se cristalizó el producto crudo con la mezcla de éter de petróleo y acetato de etilo (10: 1) Paso 3: preparación de 2-(4-trifluorometilfenil)-3,5,7-trihidroxi-4H- cromen-4-ona 2-(4-trifluorometilfenil)-3-metoxi-5,7-dihidroxi-4H-cromen-4-ona (10g, 28.3mmol) se disolvió en 150 ml_ de diclorometano en una matraz de 250 mi tres cuellos. El tribromuro de boro (21.2 g, 84.9 mmol) se agregó en forma de gotas lentamente en la solución a una temperatura de 0°C. Después de eso, la solución se calentó a temperatura ambiente y se hizo reaccionar durante 4 horas, y se enfrió con 80 ml_ en agua helada para terminar la reacción química. La solución se extrajo con 500 mL de acetato de etilo 3 veces. Los extractos fueron combinados, lavados con solución acuosa de cloruro de sodio saturada una vez y se secó con sulfato de sodio anhidro. Después de la filtración, el producto crudo se mezcló con 20 mL de acetato de etilo/petróleo (1:10) y fue agitado, y se obtuvo el compuesto amarillo objetivo después de la filtración y secado. (7 g, producción del 70%).

Paso 4: preparación de 2-(4-trifluorometilfenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3- metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona (compuesto 1) El compuesto 2-(4-trifluometilfenil)-3,5,7-trih¡droxi-4H-crom-4-ona (3.38 g, 10 mmol) y carbonato de cesio (33 g, 100 mmol) se disolvieron en 100 mL de agua, y se chorreo bromuro de prenilo (1.9 g, 10 mmol) en la solución bajo condición de baño de agua helada. Después de eso, la solución se mantuvo durante la noche bajo temperatura ambiente, y el pH se ajustó aproximadamente a 6 con 2H de clorhidrato. La solución se extrajo con 500 mL de acetato de etilo 2 veces. Las fases orgánicas fueron combinadas, lavadas con solución acuosa de cloruro de sodio saturada una vez y se secaron con sulfato de sodio anhidro. Después de filtración, el producto crudo se extrajo con actato de etilo/petróleo (1:25) a través de columna de gel de sílice. Se obtuvo el compuesto objetivo color amarillo (508 mg, producción del 12.5%). 1 HR N (300 Hz, DMSO-d6): d = 12.20 (s, 1H), 10.87 (brs, 1H), 10.07 (brs, 1H), 8.35 (d, 2H, J = 8.1Hz), 7.94 (d, 2H, J = 7.7Hz), 6.33 (s, 1H), 5.19 (t, 1H, J = 5.4Hz), 3.45 (d, 2H, J = 6.0Hz), 1.75 (s, 3H), 1.64 (s, 3H); LC-MS (ESI, m/z): 407.0[M + H]\ Haciendo referencia al método del ejemplo 1, del compuesto 2 al compuesto 8 se prepararon haciendo reaccionar el intermediario 2-metoxi-1 -(2,4,6-trihidroxifenil)etanona como el material de partida con muchos diferentes de cloruro de alquilo sustituido, cloruro de arilo o cloruro de heteroarilo, los detalles de los compuestos se muestran en la siguiente Tabla 1.

Tabla 1 Ejemplo 9 2-(4-trifluorometilfenil)-3-metox¡-5-7-dihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona (compuesto 9) El intermediario 2-(4-trifluofenil)-3-metoxi-5,7-dihidroxi-4H-crom-4-ona (500 mg, 1.42 mmol) del compuesto 1 y carbonato de cesio (4.95 g, 15 mmol) se disolvieron en 25 mide agua, y se agregó en forma de gotas bromuro de prenilo (220 mg, 1.5 mmol) en la solución bajo condición de baño de agua helada. Después de eso, la solución se mantuvo durante la noche bajo temperatura ambiente, y el pH se ajustó aproximadamente a 6 con 2H de clorhidrato. La solución se extrajo con 500 mL de acetato de etilo 2 veces. Las fases orgánicas fueron combinadas, lavadas con solución acuosa de cloruro de sodio saturada y se secaron con sulfato de sodio anhidro. Después de filtración, el producto crudo se extrajo con actato de etilo/petróleo a través de columna de gel de sílice. Se obtuvo el compuesto objetivo color amarillo (95 mg, producción del 16.5%). 1 HRMN (300 MHz, DMSO-d6): d=12.41 (1H, s), 10.92 (1H, brs), 8.20 (2H, d, J = 8.1 Hz), 7.96 (2H, d, J = 7.7 Hz), 6.34 (1H, S), 5.15 (1H, t, J = 5.4Hz), 3.84 (3H, s), 3.41 (2H, d, J = 6.0Hz), 1.68 (3H, s), 1.62 (3H, s); LC-MS (ESI, miz): 421.1 [M + H]\ Ejemplo 10 2-(3,4-difluorofenil)-3-metoxi-5-7-dihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona (compuesto 10) Paso 1: preparación de 2-metoxi-1 -[2 ,4,6-trihidroxi-3-(3-metilbut-2-eno)fenil] etanona El compuesto 2-metoxi-1 -(2,4,6-trihidroxifenil)etanona (2.0 g, 10.09 mmol) se disolvió en solución de hidróxido de potasio al 5% (1.132 g, 20.18 mmoL), seguido por la adición en gotas lentamente de bromuro de prenilo (1.504 g, 10.09 mmol) dentro de la solución bajo condición de baño de agua helada. La mezcla se hizo reaccionar durante 2 horas bajo temperatura ambiente y se vertió en agua helada. El pH de la solución se ajustó hasta aproximadamente 2 y se extrajo con acetato de etilo 3 veces. Las fases orgánicas fueron combinadas, secadas con sulfato de sodio anhidro. Después de filtración, el producto crudo se purificó (extrajo con clorometano/metanol (100:1)) a través de columna de gel de sílice. Se obtuvo el compuesto objetivo color amarillo (0.5g, producción del 18.6%). 1 HRMN (400 MHz, DMSO-d6): 5=13.70 (s, 1H), 10.70 (s, 1H), 10.33 (9s, 1H), 5.97 (s, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.02 (m, 2H), 1.66 (s, 3H), 1.57 (s, 3H).

Paso 2: preparación de 2-(3,4-difluorofenil)-3-metoxi-5,7-dihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona (compuesto 10) 2-metoxi-1 - [2,4,6-trihidroxi-3,5-di(3-metil-2-buten-1 -il)fenil]etanona (250 mg, 0.94 mmol, carbonato de potasio anhidro en polvo (779 mg, 5.63 mmol), TBAB (bromuro de tetrabutil amonio, 454 mg, 1.41 mmol) y benzoilcloruro de 3,4-difluorometilo (331 mg, 1.88 mmol) se disolvieron en 30mL de tolueno, se sometieron a reflujo para reacción durante 6 horas. Después de enfriarse, se removió el tolueno y se agregaron 20 m I de agua dentro de la solución. La solución acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas fueron combinadas, lavadas con solución acuosa de NaCI saturado, y se secaron con solución de sulfato de sodio anhidro, posteriormente se obtuvo un residuo color marrón después de remover el solvente. El residuo se disolvió en 20 mi de mezcla de metanol-agua (proporción 4:1), y se agregó hidróxido de potasio (1 g). La solución de mezcla se calentó y se sometió a reflujo durante 2 horas, se enfrió a temperatura ambiente, se acidificó a un pH = 4 con 1N de clorhidrato, y se extrajo con diclorometano tres veces. Las fases orgánicas combinadas se secaron con sulfato de sodio anhidro para remover el solvente. Se obtuvo el compuesto deseado (13.1 mg, producción del 3.59%), después se purificó el producto crudo a través de columna de gel de sílice (eluyente: acetato de etilo/éter de petróleo = 1:50) 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 = 12.45 (s, 1H), 7.98-7.89 (m, 2H), 7.35-7.30 (m, 1H), 6.34 (s, 2H), 5.25 (br, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.55 (d, 2H, J = 6.8Hz,2H), 1.84 (s, 3H), 1.77 (s, 3H); LC-MS: 390.1 [M + H] + ; pureza: 98.6% (254 nm).

Haciendo referencia al método del ejemplo 9, del compuesto 11 al compuesto 13 se prepararon haciendo reaccionar los intermediarios correspondientes respectivos como los materiales de partida con bromuro de prenilo a través de un mecanismo de sustitución único. Los detalles de los compuestos se muestran como la siguiente tabla 2.

Tabla 2 Ensayo de Prueba para Actividad Biológica Las actividades del compuestos de la fórmula (I) pueden probarse mediante los siguientes ensayos.

Ejemplo 14. Expresiones de ER-a Variantes en Especímenes de Cáncer de Seno Humano Una membrana cubierta previamente con tejidos de cáncer de seno humano se adquirió de ProSci Incorporated (Poway, CA). La membrana se probó con anticuerpo anti-ER-a36 que reconoce de manera específica ER-a36 y un anticuerpo secundario conjugado por HRP, y se visualizó con reactivos de detección de quimioluminiscencia mejorados (ECL) (Amersham Pharmacia BiotecH). Los marcadores en la misma membrana se extrajeron posteriormente y se detectaron con un anticuerpo H222 de receptor-a anti-estrógeno (Novocastra Laboratories Ltd, UK) que reconoce los tres subtipos de ER-a: ER-a66, ER-a46 y ER-a36. La figura 1, muestra que ER-a66, ER-a46 y ER-a36 no son expresados en el tejido de seno normal (Línea 1) aunque son expresados en un espécimen para infiltrar el carcinoma ductal (Línea 2), un espécimen de carcinoma de infiltración lobular (Línea 5) y carcinoma ductal no invasivo (Línea 7). Adicionalmente, ER-a36 se expresó en carcinoma ductal invasivo (Línea 4) y otro espécimen de carcinoma de infiltración lobular (Línea 6). Las líneas 2 y 3, tuvieron carcinoma de infiltración ductal, respectivamente, de dos pacientes diferentes. Las líneas 5 y 6, tuvieron carcinoma de infiltración lobular, respectivamente, de dos pacientes diferentes. Estos resultados indican que ER-a36 no se expresa en tejido de seno normal, pero se expresa en muestras de cáncer de seno ER-negativo que no expresan ER-a66 y ER-a46.

Ejemplo 15: ER-a36 expresado en la Línea Celular de Cáncer de Seno ER-negativo, MDA-MB-231 La línea celular MDA-MB-231 es bien conocida por carecer de 'ER-a66 y ER-a46 ("Relevancia de líneas celulares de cáncer de seno como modelos para tumores de seno: una actualización" (Relevance of breast cáncer cell lines as models for breast tumors: an update). Marc Lacroix, Guy Leclercq, Breast Cáncer Research and Treatment 83: páginas 249-289 (2004)). Las células MDA-MB-231 se obtuvieron de American Type Culture Collection (ATCC). Las células MDA-MB-231 se cultivaron en portaobjetos de cámara de 8 depósitos BIOCOAT (BD Science Discovery Labware) en una atmósfera de C02 al 8% en MedioEagle modificado de bobino fetal al 10% a una temperatura de 37°C durante 12 horas. Entonces, las células fueron lavadas dos veces con solución salina amortiguada por fosfato (PBS) esterilizado y se fijó con el 4% de paraformaldehído en PBS (pH de 7.4) durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después de eso, las células fueron lavadas con PBS, permeabilizadas con 0.5% (v/v de Tritón X-100 durante 10 minutos. Las células fueron entonces lavadas con PBS nuevamente, y bloqueadas con el 3% de suero en PBS a temperatura ambiente durante 1 hora. Los portaobjetos fueron incubados con anticuerpo específicos de ER-a36 o el mismo anticuerpo incubado previamente con péptidos inmunogenéticos que enlazas en de manera específica al anticuerpo ER-a36 durante 30 minutos a temperatura ambiente durante 1 hora y se lavaron tres veces con PBS que contiene el 0.5% de Tritón X-100 (PBST), posteriormente fueron incubadas con un anticuerpo secundario etiquetado con isotiocianato de fluoresceina (FITC)-Finalmente, los portaobjetos fueron lavados tres veces con PBST, una vez con PBS, posteriormente fueron cubiertos con una etiqueta inmunofluorescente (Sondas moleculares, Egene, OE) y se examinaron bajo un microscopio Nikon E600 y las imágenes fueron capturadas mediante un sistema de formación de imágenes confocal MRC-1024 (Bio-Rad). La figura 2 (panel superior) muestra que las células MDA-MB-231 fueron manchadas en forma positiva por un anticuerpo anti-ER-a36. Con el objeto de probar la confiabilidad de este resultado, la imagen con el mismo anticuerpo anti-ER-a36 incubado previamente con péptidos inmunogenéticos no muestra manchado alguno (Figura 2, panel inferior), que indica la especificidad del anticuerpo.

Ejemplo 16: Expresión de ER-a36 en líneas celulares de tumor diferentes mediante manchado Western Las células muestra fueron cultivadas a una temperatura de 37°C, 5% de C02 (MDA-MB-231, y el medio de cultivo es 10% de FBS-DMEM). Las células fueron recolectadas hasta que las células en cada depósito alcanzaron una confluencia del 60 al 90%, y fueron centrifugadas durante 5 minutos a una temperatura de 4°C, 4300 rpm. El sobrenadante de la solución se removió, y el lisado adecuado. El amortiguador de lisis que comprende el 1% de NP-40 y 0.7 EDTA, y el inhibidor de proteasa se agregaron, las células en la solución se mantuvieron en lisis durante 30 minutos hasta 1 hora en un baño de hielo. La solución se centrifugó durante 15 minutos a una velocidad de 14000 rmp y el sobrenadante se recolectó para separarse en cuartos con proteína. El procedimiento general de manchado western se mostró de la siguiente manera: transmembrana sobre pegamento prefabricado o pegamento mezclado, electroforesis, bloqueo de anticuerpo anti-ER-a36, elución, anticuerpo secundario de bloqueo, elución, exposición de expresión en el laboratorio fotográfico y que muestra los resultados. La figura 3, muestra el resultado de manchado Western de la Expresión ER-a en diferentes células de tumor.

Línea 1: 293 líneas celulares epiteliales renales de humano de una expresión transitoria de ER-a36; Línea 2 a 4: líneas celulares SK-BR-3 de cáncer de seno humano de laboratorios diferentes; Línea 5 a 7: líneas celulares de CF-7 de cáncer de seno humano de laboratorios diferentes; Línea 8-9: líneas celulares HL-60 de leucemia humana de laboratorios diferentes; Línea 10 a 11: líneas celulares de V-4-11 de leucemia humana de laboratorios diferentes; Línea 12 a 13: líneas celulares K562 de leucemia mieloide crónica humana de laboratorios diferentes; línea 14: línea celular A2780 de cáncer de hígado; línea 15: línea celular HEL-7402 de cáncer de hígado; línea 16: cáncer celular HEL-9204 de cáncer de hígado; línea 17: línea celular Hep-11 primaria de cáncer de hígado de un paciente; línea 18: línea celular Hep-12 primaria de cáncer de hígado de un paciente.

Ejemplo 17: el compuesto que Inhibe el Crecimiento In vitro de Células de Cáncer de Seno Diferentes A: Ensayo de viabilidad de célula luminiscente CelITiter-Glo® sobre cáncer de seno ER-negativo MDA-MB-231 in vitro: Las células MDA-MB-231 se mantuvieron a una temperatura de 37°C, en una atmósfera de C02 al 5% en DMEM y suero de bobino fetal al 10%. Las células fueron colocadas a una densidad de 6x1 O3 células por depósito en una placa de 96 depósitos. Las células MDA- B-231 fueron tratadas con un compuesto de prueba disuelto en DMSO a la concentración de 0, 0.3µ?, 0.5µ?, 1µ?, 2µ?, 3µ?, 5µ?, 10µ?, 20µ?, 30µ?, 50µ? y 100µ? durante 72 horas. Las células tratadas fueron examinadas bajo el equipo de ensayo de célula luminiscente CelITiter-Glo® (Promega), y se registró la luminiscencia con E n v i s i o n .

B: Ensayo de viabilidad de célula luminiscente CelITiter-Glo® sobre células MCF-7 de cáncer de seno ER-positivo in vitro : La línea celular MCF7 es una línea celular de cáncer de seno que expresa fuertemente ER66, ER-46 y ER-36 ("Relevancia de líneas celulares de cáncer de seno como modelos de tumores de seno: una actualización", (Relevance of breast cáncer cell Unes as models for breast tumours: an update)) Marc Lacroix, Guy Leclercq, Breast Cáncer Research and Treatment (2004) 83, páginas 249 a 289; Wang y asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. E.U.A. 103: páginas 9063 a 9068 (2006)). Las células MCF7 de ATCC se mantuvieron en un medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM), y suero de bobino fetal al 10% a 37 en una atmósfera de C02 al 5%. Las células fueron colocadas a una densidad de 6x103 células por depósito en una placa de 96 depósitos. Las células MCF 7 fueron tratadas con un compuesto de prueba disuelto en DMSO a la concentración de 0, 0.3µ?, ?.dµ?, 1µ?, 2µ?, 3µ?, 5µ?, 10µ?, 20µ?, 30µ?, 50µ? y 100µ? durante 72 horas. Las células tratadas fueron examinadas a través del equipo de ensayo de célula luminiscente CelITiter-Glo® (Promega), y se registró la luminiscencia con Envision.

La tabla 3, muestra la viabilidad de las diferentes células de cáncer de seno influidas por algunos compuestos de la presente invención.

Tabla 3 Inhibición de viabilidad de células de cáncer de seno IC50 (µ ) Células MDA- B-231 Células MCF7 Tamoxifen a) 20.90±1.51b) 22.55±4.15 1 1.066 2.012 2 NAC) 3.167 3 2.867 8.603 4 4.325 16.011 5 4.476 6.854 6 1.875 6.854 7 9.303 7.542 9 N/A N/A 10 N/A 31.46 a) tamoxifen como un compuesto de control positivo. b) cuando el compuesto se probó más de tres veces, el IC50 se ilustró con una desviación estándar de valor promedio ±. c) NA significa sin actividad, e IC50 estuvo por encima de 100µ? d): ND significa que no está siendo detectado.

Ejemplo 18: Inhibición de Crecimiento de Células de Leucemia Crónica in vitro por los Compuestos A: detección de viabilidad de células de leucemia crónica K562 mediante el Ensayo Luminiscente CellTiter-Glo® in vitro Las células de leucemia crónica K562 de ATCC se mantuvieron en IMDM y suero de bobino fetal al 10% a una temperatura de 37°C en una atmósfera de C02 al 5%. Las células fueron subsembradas en una placa de cultivo de 96 depósitos a una concentración de 6 x 103 células/depósito. Las células Las células k562 fueron tratadas con un compuesto de prueba disuelto en DMSO a la concentración de 0, 0.3µ?, 0.5µ?, 1µ?, 2µ?, 3µ?, 5µ?, 10µ?, 20µ?, 30µ?, 50µ? y 100µ? durante 72 horas. Las células tratadas fueron examinadas mediante el equipo de ensayo de célula luminiscente CelITiter-Glo® (Promega), y se registró la luminiscencia con Envision.

Ejemplo 19: Inhibición de Crecimiento de Células Daudi de Linfoma B Humano in vitro por los Compuestos A: Inhibición de células de Daudi de linfoma B humano por el Ensayo luminiscente CellTiter-Glo® in vitro Las células de Daudi de linfoma B humano de ATCC se mantuvieron en IMDM y suero de bobino fetal al 10% a una temperatura de 37"C en una atmósfera de C02 al 5%. Las células fueron subsembradas en una placa de cultivo de 96 depósitos a una concentración de 6 x 103 células/depósito. Las células de Daudi de linfoma B humano fueron tratadas con un compuesto de prueba disuelto en DMSO a la concentración de 0, 0.3µ?, 0.5µ?, 1µ?, 2µ?, 3µ?, 5µ?, 10µ?, 20µ?, 30µ?, 50µ? y 100µ? durante 72 horas. Las células tratadas fueron examinadas mediante el equipo de ensayo de célula luminiscente CelITiter-Glo® (Promega), y se registró la luminiscencia con Envision.

La tabla 4, muestra la viabilidad de las células de leucemia crónica K562 y las células de Daudi de linfoma B humano influidas por algunos compuestos de la presente invención.

Tabla 4 No. de Inhibición de viabilidad de células in vitro IC50 (µ?) Compuesto Células K562 Células de Daudi Gleeveca) 0.751 NDD) citarabina ND 10.033 1 1.035 0.824 2 6.139 9.234 3 1.849 2.909 4 0.974 2.638 5 1.475 1.486 6 0.935 1.983 7 6.140 4.068 10 N/A 21.75 11 N/A N/A a) : respectivamente, gleevec y citarabina fueron el compuesto de control para el modelo de células K562 y modelo de células Daudi b) : Nd significa sin detección c) NA significa sin actividad, e IC50 estuvo por encima de 100µ? Ejemplo 20: Inhibición de Crecimiento de Células de Leucemia Aguda in vitro por los Compuestos A: Inhibición de crecimiento de células HL-60 de leucemia mieloblástica aguda mediante los compuestos detectado por el método MTT Las células HL-60 de leucemia mieloblástica aguda de ATCC se mantuvieron en IMDM y suero de bobino fetal al 10% a una temperatura de 37°C en una atmósfera de C02 al 5%. Las células fueron subsembradas en una placa de cultivo de 96 depósitos a una concentración de 6 x 103 células/depósito. Las células HL-60 fueron tratadas con un compuesto de prueba disuelto en DMSO a la concentración de de 0, 10-4M, 10-5M, 10-6M, 10-7M, 10-8M durante 72 horas. El valor OD fue probado mediante el método MTT, y la proporción de inhibición se calculó.

B: Inhibición de crecimiento de células HL-60 de leucemia linfoblástica aguda mediante los compuestos detectado por el método MTT Las células Molt-4 de leucemia linfoblástica aguda de ATCC se mantuvieron en RPMI-1640 y suero de bobino fetal al 10% a una temperatura de 37°C en una atmósfera de C02 al 5%. Las células fueron subsembradas en una placa de cultivo de 96 depósitos a una concentración de 6x103 células/depósito y se mantuvieron en RPMI-1640 y suero de bobino fetal al 10% a una temperatura de 37°C en una atmósfera de C02 al 5%. Las células Molt-4 fueron tratadas con un compuesto de prueba disuelto en DMSO a la concentración de de 0, 10-4M, 10-5M, 10-6M, 10-7M, 10-8M durante 72 horas. El valor OD fue probado mediante el método MTT, y la proporción de inhibición se calculó.

La viabilidad de las células de leucemia diferentes influidas por algunos compuestos de la presente invención se relacionó en la siguiente Tabla 5.

Tabla 5 Porcentaje de inhibición de proliferación celular No. de mediante los compuestos con una concentración Compuesto de 1Q-6M (%) Células HL-60 Células Molt-4 Doxorubicina3' 79.0 90.1 1 60.7 43.7 2 Nab) N/A 3 28.5 14.4 4 0.974 14.7 5 59.8 69.4 6 61.9 67.4 7 N/A 57.0 9 N/A N/A 11 N/A N/A a) : Doxorubicina como un compuesto de control positivo b) : NA significa, sin actividad, y el porcentaje de inhibición por el compuesto con una concentración de 10-6M estuvo por debajo del 10%.

Ejemplo 21: Inhibición de Células de Cáncer de Hígado in vitro por los Compuestos A: Inhibición de Células BEL-7402 de cáncer de hígado in vitro por los Compuestos detectado por SRB Las células HL-60 de cáncer de hígado de ATCC se mantuvieron en DMDM, NCS al 10% y 50 pg/ml de KANA a una temperatura de 37°C en una atmósfera de C02 al 5%, y fueron subsembradas en una placa de cultivo de 96 depósitos a una concentración de 6x103 células/depósito. Las células BEL-7402 fueron tratadas con un compuesto de prueba disuelto en DMSO a la concentración de de 0, 10-4M, 10-5M, 10-6M, 10-7M, 10-8M durante 72 horas. El valor OD fue probado mediante el método SRB, y el porcentaje de inhibición se calculó.

La inhibición de las células de cáncer de hígado por algunos compuestos de la presente invención se relacionó en la siguiente Tabla 6.

Tabla 6 Porcentaje de inhibición de proliferación celular No. de mediante los compuestos con una concentración Compuesto de 10"6M (%) Células BEL-7402 Doxorubicinaa) 55.2 1 23.7 2 21.8 3 28.6 4 46.4 5 15.6 6 14.9 7 19.8 9 11.7 a): a) Doxorubicina como un compuesto de control positivo Ejemplo 22: Inhibición de Células de Cáncer Gástrico in vitro por los Compuestos A: Inhibición de Células BGC-823 de cáncer gástrico in vitro por los Compuestos mediante el método TT Las células BGC-823 de cáncer gástrico fueron subsembradas en una placa de cultivo de 96 depósitos a una concentración de 3x103 células/depósito y se mantuvieron en medio DMEM libre de rojo fenol que contiene CS-FBS al 2.5% a una temperatura de 37°C en una atmósfera de C02 al 5%. Las células BGC-823 fueron tratadas con un compuesto de prueba disuelto en DMSO a la concentración de 0, 1, 2, 4, 8, 10 y 20µ? durante 72 horas. El valor OD fue probado mediante el método MTT, y el porcentaje de inhibición se calculó. El resultado se muestra en la Tabla 4.

Ejemplo 23: Inhibición de Células de Cáncer de Pulmón in vitro por los Compuestos A: Inhibición de Células H460 de cáncer de pulmón in vitro por los Compuestos mediante el método MTT Las células H460 de cáncer de pulmón fueron subsembradas en una placa de cultivo de 96 depósitos a una concentración de 4.0x103 células/depósito y se mantuvieron en medio libre de rojo fenol que contiene CS-FBS al 2.5% a una temperatura de 37°C en una atmósfera de C02 al 5%. Las células H460 fueron tratadas con un compuesto de prueba disuelto en DMSO a la concentración de 0, 1, 2, 4, 8, 10 y 20µ? durante 72 horas. El valor OD fue probado mediante el método MTT, y el porcentaje de inhibición se calculó. El resultado se muestra en la Tabla 5.

Ejemplo 24: Inhibición de Células de Cáncer de Pulmón in vitro por los Compuestos A: Inhibición de Células LS174T de cáncer de colon in vitro por los Compuestos mediante el método MTT Las células LS174T de cáncer de colon fueron subsembradas en una placa de cultivo de 96 depósitos a una concentración de 4.5x103 células/depósito y se mantuvieron en medio 1640 libre de rojo fenol que contiene CS-FBS al 2.5% a una temperatura de 37°C en una atmósfera de C02 al 5%. Las células LS174T fueron tratadas con un compuesto de prueba disuelto en DMSO a la concentración de 0, 1, 2, 4, 8, 10 y 20µ? durante 72 horas. El valor OD fue probado mediante el método MTT, y el porcentaje de inhibición se calculó. El resultado se muestra en la Tabla 6.

Ejemplo 25: Inhibición de Células de Cáncer Pancreático in vitro por los Compuestos A: Inhibición de Células PANC-1 de cáncer pancreático in vitro por los Compuestos mediante el método MTT Las células PANC-1 de cáncer pancreático fueron subsembradas en una placa de cultivo de 96 depósitos a una concentración de 3x103 células/depósito y se mantuvieron en medio 1640 libre de rojo fenol que contiene CS-FBS al 2.5% a una temperatura de 37°C en una atmósfera de C02 al 5%. Las células PANC-1 fueron tratadas con un compuesto de prueba disuelto en DMSO a la concentración de 0, 1, 2, 4, 8, 10 y 20µ? durante 72 horas. El valor OD fue probado mediante el método MTT, y el porcentaje de inhibición se calculó. El resultado se muestra en la figura 7.

Ejemplo 26: Inhibición en Células de Cáncer de Próstata in vitro por los Compuestos A: Inhibición de Células PC-3 de cáncer de próstata in vitro por los Compuestos mediante el método MTT Las células PC-3 de cáncer pancreático fueron subsembradas en una placa de cultivo de 96 depósitos a una concentración de 3x103 células/depósito y se mantuvieron en medio que contiene suero de bovino fetal F12K al 10%. Las células PC-3 fueron tratadas con un compuesto de prueba disuelto en DMSO a la concentración de 0, 1, 2, 4, 8, 10 y 20 µ? durante 72 horas. El valor OD fue probado mediante el método MTT, y el porcentaje de inhibición se calculó. El resultado se muestra en la figura 8.

Ensayo in vivo: Ejemplo 27: Inhibición de Crecimiento de Células de Tumor de Xenoinierto BCAP-37 de Cáncer de Seno Humano en Ratas sin Pelo Mediante los Compuestos Las ratas sin pelo con xenoinjertos de cáncer de seno fueron tratados con los compuestos de prueba para probar su efecto en la inhibición de crecimiento de tumor. Los tejidos de tumor fueron tomados de ratas sin pelo que portan cáncer de seno BCAP-37 y se cortaron en piezas pequeñas. Varias piezas de los tejidos de tumor fueron implantadas en la axila bajo el limbo frontal derecho de las ratas sin pelo hembra. Después de la implantación, las ratas son alimentadas con solución ?2ß una vez al día a una dosificación de 7ig por ratón durante 6 días para estimular el crecimiento del tumor en la rata de experimento. Empezando el día siete, las ratas fueron administradas en forma intragástrica con la solución de prueba que contiene los compuestos y aceite de maíz a una dosificación de 35 mg/kg. Se utilizó tamoxifen como un control positivo. El aceite de maíz se utilizó como control negativo. La solución de prueba se preparó mediante la dispersión del compuesto de prueba en solución de aceite de maíz. (20 mg/mL). Las ratas fueron administradas con la solución de prueba y Tamoxifen a una dosificación de 35 mg/kg o aceite de maíz una vez al día durante 15 días. Posteriormente, las ratas fueron sacrificadas y los tejidos de tumor fueron disectados y pesados. El índice de inhibición de crecimiento de tumor estuvo fue un porcentaje calculado utilizando la fórmula: índice de inhibición de crecimiento de tumor = (peso promedio del tumor en el control negativo - peso promedio del tumor tratado con el compuesto de prueba) / peso promedio del tumor en el control negativo. Los resultados se dibujan como una gráfica de barras y se relacionan en la figura 9.

Ejemplo 28: Inhibición de Crecimiento de Tumor de Xenoinierto de linfomas de Daudi en Célula B Humana en Ratas sin Pelo Mediante los Compuestos Las ratas sin pelo con xenoinjertos de tumor de linfomas de Daudi en células B humanas fueron tratadas con los compuestos de prueba para probar su efecto en la inhibición de crecimiento de tumor. Los linfomas de célula B humana fueron de ATCC. 1x107 células con 0.2 mL de Matrigel después de 5 pasos fueron implantadas en la axila bajo el limbo frontal derecho de las ratas sin pelo hembra. Cuando el tumor de la rata sin pelo alcanzó un tamaño de 150 200 mm3, se agruparon en forma aleatoria las ratas sin pelo portadoras del tumor. Cada 10 ratas sin pelo forman un grupo. La administración intragástrica con el aceite mezclado fue como el control negativo y la administración intravenosa con rituximab fue un control positivo. El compuesto de prueba se disolvió en el aceite mezclado. El periodo de administración fue de 21 días en forma continua, y la suspensión de aceite mezclado (35 mg/kg) con el compuesto de prueba se administró sobre las ratas sin pelo del grupo positivo una vez al día. El Rituximab (20 mg/kg) se inyectó al control positivo dos veces por semana. El grupo negativo con el aceite mezclado fue administrado en forma intragástrica todos los días. Durante el período de administración, el volumen del tumor y el peso de las ratas sin pelo se midieron dos veces por semana. Se dibujó la figura de crecimiento del tumor con base en el volumen del tumor y el tiempo de administración (figura 10), por lo tanto, el efecto del compuesto en el crecimiento del tumor podría ser estimado.

Ejemplo 29: Inhibición de Crecimiento de Células de Xenoiniertos Ishikawa de Cáncer de Endometrio Humano por los CompyestOS Las ratas sin pelo con xenoinjertos de tumor de células Ishikawa de cáncer de endometrio humano fueron tratadas con los compuestos de prueba para probar su efecto en la inhibición de crecimiento de tumor. Los tumores fueron tomados de ratas sin pelo con células Ishikawa y se cortaron en piezas pequeñas. Varias piezas de tumor fueron implantadas en la axila bajo el limbo frontal derecho de las ratas sin pelo hembra. Después de la implantación, las ratas fueron inyectadas con solución ?2ß una vez al día a una dosificación de 7 ig por ratón durante 6 días para estimular el crecimiento en la rata de experimento. Empezando el día siete, las ratas fueron administradas en forma intragástrica con una solución que contiene los compuestos y aceite de maíz a una dosificación de 35 mg/kg. Se utilizó medroxiprogesterona como un control positivo. El aceite mezclado se utilizó como control negativo. El compuesto de prueba se dispersó en aceite mezclado (20 mg/mL). Las ratas fueron administradas, respectivamente, con el compuesto de prueba, acetato de medroxiprogesterona y aceite mezclado a una dosificación de 35 mg/kg durante 15 a 21 días. Posteriormente, las ratas fueron sacrificadas y los tejidos de tumor fueron disectados y pesados. El índice de inhibición de crecimiento de tumor estuvo fue un porcentaje calculado utilizando la fórmula: índice de inhibición de crecimiento de tumor = (peso promedio del tumor en el control negativo - peso promedio del tumor tratado con el compuesto de prueba) / peso promedio del tumor en el control negativo. Los resultados se dibujan como una gráfica de barras y se relacionan en la figura 11.

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la fórmula (I) o una sal solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, (Ci-6) alquilo, y (Ci-6) alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno; R2, R3, R4, R5 y R6 son seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C -4) alquilo, (C1-4) alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno , halógeno, ciano, y (C1-4) alcoxi sustituido con uno o más átomos de halógeno; y R2, R3, R4, R5 y R6 que no son hidrógeno en forma simultánea; cuando R1 es metilo y R3 y R5 son hidrógeno, entonces R4 no es cloro.

2. Un compuesto de la fórmula (I) tal y como se describe en la reivindicación 1, o una sal solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, (I) caracterizado además porque R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, metilo, etilo, trifluorometilo y difluorometilo. R2, R3, R4, R5 y R6 son seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropllo, butilo, halógeno, ciano, (C1-4) alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno y (Ci-4) alcoxi sustituido con uno o más átomos de halógeno; y R2, R3, R4, R5 y R6 que no son hidrógeno en forma simultánea; cuando R1 es metilo y R3 y R5 son hidrógeno, entonces R4 no es cloro.

3. El compuesto tal y como se describe en la reivindicación 2, caracterizado además porque cuando R1 es hidrógeno, la estructura del compuesto es como en la fórmula en donde: R2, R3, R4, R5 y R6 son seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, halógeno, ciano, (C1-4) alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno y (Ci-6) alcoxi sustituido con uno o más átomos de halógeno; y R2, R3, R4, R5 y R6 que no son hidrógeno en forma simultánea.

4. El compuesto tal y como se describe en la reivindicación 2, caracterizado además porque cuando R1 es metilo, la estructura del compuesto es como en la fórmula (III) en donde: R2, R3, R4, R5 y R6 son seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, halógeno, ciano, (Ci-4) alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno y (Ci-6) alcoxi sustituido con uno o más átomos de halógeno; y R2, R3, R4, R5 y R6 que no son hidrógeno en forma simultánea; y cuando R3 y R5 son hidrógeno, R4 no es cloro.

5. El compuesto tal y como se describe en la reivindicación 1 a 4, caracterizado además porque es seleccionado del grupo que consiste en: 2-(4-trifluoromet¡lfenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten- 1- il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-fluorometilfenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona; 2-(3-fluoro-4-clorofenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-clorofenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-trifluorometoxifenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona; 2-(3,4-diclorofenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona; 2-(3-trifluorometil-4-clorofenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil- 2- buten-1-il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-bromofenil)-3,5,7-trihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona; 2-(3,4-difluorofenil)-3-metoxi-5,7-dihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 -il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-trifluorometilfenil)-3-metoxi-5,7-dihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1 - il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-trifluorometoxifenil)-3-metoxi-5,7-dihidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona. 2-(3-trifluorometil-4-clorofenil)-3-metoxi-5,7-dihidroxi-8- (3-metil-2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona; 2-(4-bromofenil)-3-metoxi-5,7-d¡hidrox¡-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona.

6. Una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto, sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable tal y como se describe en la reivindicación 1 a 5, en combinación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

7. El uso del compuesto tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo en la preparación de un medicamento para la prevención o tratamiento de un cáncer relacionado con ER-a36.

8. El uso tal y como se describe en la reivindicación 7, caracterizado además porque el cáncer se seleccionado del grupo que consiste en colangiocarcinoma, cáncer de vejiga, cáncer de huesos, cáncer colorectal (cáncer de colon, cáncer colorectal), cáncer de cerebro, cáncer de seno, cáncer cervical, cáncer endometrial, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de sarcoma de Kaposi, cáncer de riñón, laringocarcinoma, leucemia, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, linfoma, melanoma, celiotelioma, mieloma, cáncer neuroendocrino, cáncer de esófago, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de pene, cáncer prostático, cáncer cutáneo, cáncer de sarcoma de tejido blando, cáncer de médula espinal, cáncer gástrico, cáncer testicular, cáncer de tiroides, y cáncer uterino.

9. El uso tal y como se describe en la reivindicación 8, caracterizado además porque el cáncer se selecciona del grupo que consiste de cáncer de seno, cáncer cervical, cáncer de colon, cáncer de endometrio, leucemia, cáncer de hígado, linfoma, cáncer de pulmón, mieloma, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer gástrico, cáncer pancreático, cáncer de riñón, melanoma, cáncer de tiroides, cáncer de sarcoma de tejido blando y cáncer uterino.

10. El uso tal y como se describe en la reivindicación 9, caracterizado además porque el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de seno, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer pancreático, cáncer de endometrio, cáncer de ovario y leucemia.