BR112014016635B1

BR112014016635B1 - Composto, composição, e, uso de um composto

Info

Publication number: BR112014016635B1
Application number: BR112014016635-8A
Authority: BR
Inventors: Hongxia Ding; Jin Li; Kun Meng
Original assignee: Beijing Shenogen Pharma Group Ltd
Priority date: 2012-01-13
Filing date: 2012-12-31
Publication date: 2021-07-13
Also published as: CA2860999A1; US20150011618A1; CN103204838B; JP6113751B2; JP2015503596A; BR112014016635B8; BR112014016635A8; EP2803665A4; WO2013104263A1; ES2627316T3; KR20140109498A; CA2860999C; CN103204838A; US9221781B2; KR102030207B1; EP2803665B1; MX364833B; AU2012365712B2; EP2803665A1; AU2012365712A1

Abstract

composto, composição, e, uso de um composto. são fornecidos um composto de poli- hidroxibenzopiranocetona que tem a estrutura conforme representada pela fórmula (i) e sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou sua pró-droga, e também composição farmacêutica que contém o composto. o composto pode ser usado para regular e controlar um novo receptor de estrogênio er-alfa3, e para prevenir e/ou tratar as doenças relacionadas com tumores mediados pelo receptor er-alfa3, como câncer de mama, leucemia e câncer hepático e semelhantes.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A presente invenção é direcionada aos compostos de poli- hidróxi-cromenona, sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, às suas pró-drogas, e a uma composição farmacêutica que compreende os compostos ou semelhantes. A presente invenção também é direcionada ao uso dos compostos, dos sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, de suas pró- drogas e de uma composição farmacêutica na preparação de uma medicação para prevenção e/ou tratamento de doenças relacionadas com tumor.

FUNDAMENTOS DA TÉCNICA

[0002] Os estrogênios são um grupo de hormônios que estão envolvidos em muitas funções fisiológicas críticas no corpo humano. As funções de estrogênios incluem promover o desenvolvimento de órgãos sexuais femininos, preparar totalmente as mamas e o útero para a gravidez e a amamentação após o parto. Os estrogênios também desempenham uma função importante na manutenção das funções cardiovasculares apropriadas e da densidade óssea. E bem sabido que os estrogênios podem estimular a proliferação celular e podem aumentar o risco para mulheres sofrerem de câncer, especialmente de câncer de mama e de câncer de útero.

[0003] Os estrogênios aglutinam-se aos receptores de estrogênios em células alvo para regular as funções celulares. São descobertos dois tipos de receptores de estrogênios (ERs) em células de humano, ER-α e ER-β. Eles têm uma estrutura de proteína similar, cada uma tem três domínios funcionais separados mas interagentes: domínio N-terminal (domínio A/B), domínio de aglutinação de DNA central DNA (domínio C), e domínio de aglutinação de ligante C-terminal (domínio D/E/F). O domínio N-terminal tem função de ativação independente de ligante (AF-1), que está envolvido em interação com coativadores e ativação transcricional de genes alvo na ausência de ligantes. O domínio de aglutinação de DNA desempenha uma função importante em dimerização de receptor e aglutinação de sequência de DNA especial. O domínio de aglutinação de ligante C-terminal medeia a aglutinação de ligante e tem uma função de transativação dependente de ligante (AF-2), para ativar a transcrição de gene na presença de ligantes.

[0004] O ER-a de comprimento total é identificado como uma proteína de 66kDa e é chamado de ER-α66. ER-a66 contêm todos os três domínios funcionais. Uma variante de encadeamento {splice) de ER-a66 é recentemente descoberta e chamada de ER-α46. ER-a46 tem um peso molecular de cerca de 46KDa e está destituída de domínio AF-1 N-terminal de ER-a66. Recentemente, é identificada uma nova variante de ERa de 36kDa, ER-a36. Ela está destituída de domínio AF-1 N-terminal e de domínio AF-2 C-terminal de ER-α66 (Wang et al., Biochem. Biophys. Res.Commun. 336, 1023-1027 (2005)).

[0005] E bem aceito que ER-a66 medeia a proliferação celular estimulada por estrogênios via ativação transcricional de seus genes alvo. A aglutinação de estrogênio a ER-a66 ativa o domínio de transcrição de ER-a66 e desta forma estimula a expressão de genes alvo a jusantes e finalmente leva à proliferação celular. E descoberto que ER-a46 medeia a rápida síntese de NO estimulada por estrogênios e iniciada em membrana (Li et al., Proc. Natl. Acad. Sei., USA 100: 4807-4812 (2003)). Também é mostrado que ER-a46, que está destituído de domínio AF-1, inibe a atividade de AF-1 de ER-a66 (Flouriot, G., EMBO, 19, 4688-4700, (2000)). Visto quer ER-a36 está destituído de ambos os domínios de ativação transcricional AF-1 e AF-2, ele funciona como um inibidor dominante-negativo para inibir ambas as funções AF-1 e AF-2 de ER-a e de ER-β. Em adição, ER-a36 está localizado principalmente em membrana plasmática e medeia a sinalização de estrogênios mitogênica iniciada na membrana que estimula a proliferação celular. (Wang et al., Biochem. Biophys. Res.Commun. 336, 1023-1027 (2005); Wang et al., Proc.Natl.Acad.Sci., USA 103: 9063-9068 (2006)).

[0006] Estudos extensivos têm demonstrado que a sinalização de estrogênios é mediada via rotas de ativação transcricional nuclear clássicas e também rotas de sinalização iniciadas em membrana não clássicas. Parece que ambos ER-α66 e ER-a46 funcionam principalmente no núcleo enquanto que ER-a36 funciona principalmente fora do núcleo.

[0007] Também tem sido demonstrado que ER-ct36 está destituído da hélice 8-12 do domínio de aglutinação de ligante do ER-a66 original, o que modifica totalmente a especificidade de aglutinação de ligante de ER-a36. Desta forma, ER-a36 pode se aglutinar a ligantes diferentes a partir daqueles ligados em ER-α66 e ER-β.

[0008] Visto que as doenças relacionadas com o receptor de estrogênio continuam a afetar muitos indivíduos, ainda permanece uma necessidade urgente para descobrir compostos e métodos novos úteis para prevenir e/ou tratar tais doenças.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0009] A presente invenção fornece compostos de cromenona mostrados como fórmula (I), sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou sua pró-droga para modular novo receptor de estrogênio ER-a36 e uma composição farmacêutica que compreende os compostos ou semelhantes.

Em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila (Ci-é), e alquila (CM) substituída com um ou mais átomos de halogênio; R2, R3, R4, R5 e R6 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, alquila (CM), alquila (CM) substituída com um ou mais átomos de halogênio, halogênio, ciano, alcoxila (C1-C4) substituída com um ou mais átomos de halogênio; e R2, R3, R4, R5 e R6 não são simultaneamente hidrogênio; quando R1 é metila e R3 e R5 são hidrogênio, então R4 não é cloro.

DESCRIÇÃO BREVE DAS FIGS.

[00010] A FIG. 1 mostra os resultados de transferência de Western representando a expressão de ER-α66, ER-α46 e ER-α36 em amostras de câncer de mama de humano. Raia 1: tecido de mama normal; Raia 2: carcinoma dutal infiltrante; Raia 3: carcinoma dutal infiltrante; Raia 4: carcinoma dutal invasivo; Raia 5: carcinoma lobular infiltrante; Raia 6: carcinoma lobular infiltrante; Raia 7: carcinoma dutal não invasivo.

[00011] A FIG. 2 (FIG. superior) mostra o resultado de coloração de imunofluorescência de células MDA-MB-231. As células MDA-MB-231 são linhagem de célula de câncer de mama ER-negativas que estão destituídas de ER-α66 e ER-α46, coradas com um anticorpo que especificamente se aglutina em ER-α36 (mostrado na FIG. esquerda com a legenda “Anticorpo anti-ER- α36”: positivo mostrada em verde). O núcleo da célula também está corado com 4,6-diamidina-2-fenilindol (mostrado na FIG. do meio com a legenda “DAPI”: coloração positiva mostrada em azul). Os sinais de coloração unidos são mostrados em uma raia com a legenda “unidos”. Coloração negativa é observada quando o anticorpo é pré-incubado com peptídeos imunogênicos que se aglutinam no anticorpo (FIG. inferior).

[00012] A FIG. 3 mostra os resultados de transferência de Western representando a expressão de ER-α36 em linhagens de célula de tumor diferentes. Raia 1: linhagens de célula epitelial renal de humano 293 que têm expressão transiente de ER-α36; Raias 2-4: linhagens de célula SK-BR-3 de câncer de mama de humano de laboratórios diferentes; Raias 5-7: linhagens de célula MCF-7 de câncer de mama de humano de laboratórios diferentes; Raias 8-9: linhagens de célula HL-60 de leucemia de humano de laboratórios diferentes; Raias 10-11: linhagens de célula MV-4-11 de leucemia de humano de laboratórios diferentes; Raia 12-13: linhagens de célula K562 de leucemia mielóide crônica de humano de laboratórios diferentes; Raia 14: linhagem de célula A2780 de câncer hepático; Raia 15: linhagem de célula HEL-7402 de câncer hepático; Raia 16: linhagem de célula HEL-9204 de câncer hepático; Raia 17: linhagem de célula primária Hep-11 de câncer hepático de um paciente; Raia 18: linhagem de célula primária Hep-12 de câncer hepático de um paciente.

[00013] As FIGS. 4-8 mostram a inibição in vitro sobre a linhagem de célula BGC-823 de câncer gástrico, linhagem de célula H460 de câncer pulmonar, linhagem de célula LS174T de carcinoma de cólon, linhagem de célula PANC-1 de câncer pancreático e linhagem de célula PC-3 de câncer prostático com composto 1, testado pelo método MTT. Os resultados mostram que o composto 1 tem inibição dominante sobre estas células de câncer com boa dependência de dosagem. IC50 está na faixa de l-4μM.

[00014] A FIG. 9 mostra o peso médio de tumor (barra a) de camundongos nus possuindo tumor BCAP-37 de câncer de mama de humano após 20 dias de administração contínua respectivamente com controle positivo de tamoxifeno (0,7mg/camundongo/dia), composto 1 (0,7mg/camundongo/dia) e controle negativo de veículo (0,2mg/camundongo/dia), o resultado mostra inibição dos tumores pelo composto.

[00015] A FIG. 10 mostra a curva de crescimento de tumor de camundongos nus possuindo células Daudi de linfoma B de humano sendo continuamente administrados respectivamente com controle positivo de rituximab, composto 1 (0,7mg/camundongo/dia) e controle negativo de veículo (0,2mL/camundongo/dia) durante 21 dias.

[00016] A FIG. 11 mostra o peso médio de tumor de camundongos nus possuindo carcinoma endometrial de humano Ishikawa após 20 dias de administração contínua respectivamente com controle positivo de DMPA (acetato de medroxiprogesterona) (120mg/kg), composto 1 em dosagem baixa (17,5mg/kg), em dosagem média (35mg/kg), em dosagem alta (70mg/kg) e controle negativo de veículo (0,2mL/camundongo/dia). Composto 1 tem inibição dominante sobre o crescimento de tumor de camundongos possuindo tumor, e o efeito de inibição é mais alto que o da droga de controle.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Composto e derivados

[00017] Em algumas modalidades da presente invenção, são fornecidos os compostos de cromenona, sais farmaceuticamente aceitáveis, suas pró- drogas e a composição farmacêutica compreendendo o composto ou semelhantes. Eles podem funcionar para regular o receptor de estrogênio ER- a36, prevenir e/ou tratar a doença mediada pelo receptor ER-a36, como câncer, etc.

[00018] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece o composto de fórmula (I), os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, as suas pró-drogas, e a composição farmacêutica compreendendo o composto ou semelhantes, na qual:

substituída com um ou mais átomos de halogênio; e R2, R3, R4, R5 e R6 não são simultaneamente hidrogênio; quando R1 é metila e R3 e R5 são hidrogênio, então R4 não é cloro.

[00019] Em uma certa modalidade, o composto de fórmula (I) compreende o composto de fórmula (II) que tem a seguinte estrutura:

em que: R2, R3, R4, R5 e R6 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, alquila (C1-4), alquila (C1-4) substituída com um ou mais átomos de halogênio, halogênio, ciano, e alcoxila (C1-4) substituída com um ou mais átomos de halogênio; e R2, R3, R4, R5 e R6 não são simultaneamente hidrogênio.

[00020] Em uma certa modalidade, o composto de fórmula (I) compreende o composto de fórmula (III) que tem a seguinte estrutura:

em que, R2, R3, R4, R5 e R6 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, alquila (C1-C4), alquila (C1-C4) substituída com um ou mais átomos de halogênio, halogênio, ciano, e alcoxila (C1-4) substituída com um ou mais átomos de halogênio, e R2, R3, R4, R5 e R6 não são simultaneamente hidrogênio, e quando R3 e R5 são hidrogênio, R4 não é cloro.

[00021] Os compostos de fórmula (I) especialmente preferidos compreendem mas não se limitam aos seguintes compostos:

[00022] 2-(4-trifluorometilfenil)-3,5,7-tri-hidroxi-8-(3-metil-2-buten-1- il)-4H-cromen-4-ona;

[00023] 2-(4-fluorofenil)-3,5,7-tri-hidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H- cromen-4-ona;

[00024] 2-(3-fluoro-4-clorofenil)-3,5,7-tri-hidroxi-8-(3-metil-2-buten- 1-il)-4H-cromen-4-ona;

[00025] 2-(4-clorofenil)-3,5,7-tri-hidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H- cromen-4-ona;

[00026] 2-(4-trifluorometoxifenil)-3,5,7-tri-hidroxi-8-(3-metil-2-buten- 1-il)-4H-cromen-4-ona;

[00027] 2-(3,4-diclorofenil)-3,5,7-tri-hidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)- 4H-cromen-4-ona;

[00028] 2-(3-trifluorometil-4-clorofenil)-3,5,7-tri-hidroxi-8-(3-metil-2- buten-1-il)-4H-cromen-4-ona;

[00029] 2-(4-bromofenil)-3,5,7-tri-hidroxi-8-(3-metil-2-buten-1-il)-4H- cromen-4-ona;

[00030] 2-(3,4-difluorofenil)-3-metoxi-5,7-di-hidroxi-8-(3-metil-2- buten-1-il)-4H-cromen-4-ona;

[00031] 2-(4-trifluorometilfenil)-3-metoxi-5,7-di-hidroxi-8-(3-metil-2- buten-1-il)-4H-cromen-4-ona;

[00032] 2-(4-trifluorometoxifenil)-3-metoxi-5,7-di-hidroxi-8-(3-metil- 2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona;

[00033] 2-(3-trifluorometil-4-clorofenil)-3-metoxi-5,7-di-hidroxi-8-(3- metil-2-buten-1-il)-4H-cromen-4-ona;

[00034] 2-(4-bromofenil)-3-metoxi-5,7-di-hidroxi-8-(3-metil-2-buten- 1-il)-4H-cromen-4-ona;

[00035] O composto de fórmula (IV):

em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila (C1-6), alquila (C1-6) substituída com um ou mais átomos de halogênio R2, R3, R4, R5 e R6 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, alquila (C1-4), alquila (C1-4) substituída com um ou mais átomos de halogênio, halogênio, ciano, e alcoxila (C1-4) substituída com um ou mais átomos de halogênio; e R2, R3, R4, R5 e R6 não são simultaneamente hidrogênio; quando R1 é metila e R3 e R5 são hidrogênio, então R4 não é cloro.

[00036] O composto (IV) é um intermediário do composto (I).

[00037] Os compostos e os seus derivados na presente invenção são nomeados de acordo com o Sistema de Nomenclatura da IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry) ou o Sistema de Nomenclatura do CAS (Chemical Abstract Service, Columbus, OH).

[00038] A seguir são apresentadas as definições dos termos usados na presente invenção. Salvo indicação em contrário, as definições primárias dos grupos ou dos termos que compreendem um grupo independente ou uma parte de outros grupos são aplicáveis à toda a descrição. O termo “substituído” significa que um átomo de hidrogênio de uma molécula tem sido substituído por um átomo ou uma molécula diferente. O átomo ou a molécula que substitui o átomo de hidrogênio é chamado (chamada) de um “substituinte”.

[00040] Os valores mínimo e máximo de número de átomos de carbono do CnHn- são denotados com o prefixo, como, o prefixo de alquila (Ca-Cb) significa qualquer alquila que compreende o número de átomos de carbono de “a” a “b”. Desta forma, uma tal alquila (CI-CÓ) significa a alquila que compreende 1 a 6 átomos de carbono.

[00041] O termo “alcoxila” significa o grupo de cadeia graxa saturada monovalente linear ou ramificada ligada com um átomo de oxigênio em uma extremidade, incluindo mas não limitado a, metoxila, etoxila, propoxila, butoxila, iso-butoxila, terc-butoxila ou semelhantes.

[00042] O termo “alquila” significa cadeia graxa saturada, monovalente, linear ou ramificada, compreendendo mas não se limitando ao grupo tal como metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, pentila, isopentila, hexila ou semelhantes.

[00043] O termo “halogênio” ou “átomo de halogênio” significa o átomo de cloro, bromo, flúor e iodo ou o grupo correspondente.

[00044] O termo “heteroarila” significa grupo aromático de monociclo ou policiclo no qual um ou mais átomos de carbono está/estão substituído(s) por um ou mais heteroátomos como nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Exemplos de anéis de heterocicloalquila incluem, mas não se limitam a benzofuranila, benzotiofenila, benzimidazolila, benzoxazolila, benzotiazolila, benzopiranila, furila, imidazolila, indazolila, indolizinila, indolila, isobenzofúrila, isoindolila, isoquinolila, isotiazol, isoxazol, naftiridinila, oxadizolila, oxazinila, oxazolila, ftalazinila, pteridinila, guaninila, piranila, pirazinila, pirazolila, piridazinila, pirido[3,4-b] indolila, piridinila, pirimidinila, pirrolidinila, quinolizila, quinolinila, quinoxalinila, tiadizolila, tiatrizolila, tiazolila, tienila, triazinila, triazolila, xantenila ou semelhantes.

[00045] O termo “-oxo” significa um grupo carbonila formado pela combinação de um átomo(s) de carbono e átomo(s) de oxigênio.

[00046] As pró-drogas, os solvatos dos compostos da presente invenção também são considerados. O termo “pró-droga” refere-se a um composto que é um precursor de droga que, após a administração a um indivíduo, libera a droga ativa in vivo via um processo químico ou de metabolismo (por exemplo, ao ser trazido para o pH fisiológico ou através de atividade enzimática). Uma discussão da síntese e do uso da pró-droga é encontrada em “Produgs as Novel Delivery Systems”, vol. 14 da ACS Symposium Series, e em “Bioreversible Carriers in Drug Design”, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, ambos os quais são aqui incorporados como referências. O termo “pró-droga” pode incluir um precursor metabólico de um composto da presente invenção. A pró-droga pode ser inativa quando administrada a um indivíduo mas pode ser convertida in vivo em um composto de fórmula (I) da invenção. A pró-droga pode ser compostos de existência natural ou compostos sintético.

[00047] O composto de fórmula (I) na presente invenção pode estar sob uma forma não solvatada, ou solvatada, como hidrato, etanolatos farmaceuticamente aceitável ou semelhantes. E é intencionado que a presente invenção inclua todos os solvatos e não solvatos dos compostos. O solvato preferido do composto de fórmula (I) é hidrato.

[00048] Todos os estereoisômeros dos compostos, como os estereoisômeros possíveis do átomo de carbono assimétrico do grupo substituinte R de (I) incluindo enanciômero e diastereoisômero estão dentro do escopo da presente invenção. O estereoisômero e a mistura de compostos mostrados em fórmula (I) incluindo mistura racêmica também são uma parte da presente invenção. Ademais, todos os isômeros geométricos e os isômeros posicionais como, se o composto de fórmula (I) tem uma ligação dupla, isômeros cis e trans e a sua mistura estão dentro do escopo da presente invenção.

[00049] Misturas de diastereoisômeros podem ser separadas em seus diastereoisômeros individuais com base em suas diferenças físico-químicas por métodos bem conhecidos por aquelas pessoas comumente versadas na técnica, tal como por cromatografía e/ou cristalização fracionada. Os enanciômeros podem ser separados pela conversão da mistura de enanciômeros em uma mistura de diastereoisômeros pela reação com um composto opticamente ativo apropriado, e então separação dos diastereoisômeros e conversão (por exemplo, hidrólise) dos diastereoisômeros para os enanciômeros puros correspondentes. Também, alguns dos compostos de fórmula (I) podem ser isômeros alotrópicos (por exemplo, biarilas substituídas), que também são considerados como parte da invenção.

[00050] A frase “farmaceuticamente aceitável” indica que o agente de transporte, veículo, diluentes, excipiente(s), e/ou sal é/são em geral quimicamente e/ou fisicamente compatível (compatíveis) com os outros ingredientes que compõem a formulação e fisiologicamente compatíveis com o seu indivíduo recipiente.

[00051] O termo “sais” e “sais farmaceuticamente aceitáveis” referem- se aos sal de ácido e/ou ao sal de base formado pelos compostos de fórmula (I) ou seu estereoisômero e ácido orgânico e/ou inorgânico e base orgânica e/ou inorgânica. Os sais e sais farmaceuticamente aceitáveis também compreendem sal anfotérico (sal intramolecular), e sal de amónio quaternário como sal de alquilamônio). Os sais podem ser obtidos diretamente após isolamento e purificação. Ademais, os sais podem ser obtidos dos compostos de fórmula (I) do seu estereoisômero, de sua pró-droga misturados com um ácido apropriado ou uma base apropriada (por exemplo equivalente). Os sais podem ser coletados por filtração do precipitado da solução ou por evaporação do solvente, ou por secagem por congelamento após a reação no meio aquoso.

[00052] Os sais de adição de ácido incluem bromidrato, iodidrato, cloridrato, sulfato, hidrogenossulfato, nitrato, acetato (incluindo os sais formados com ácido acético, por exemplo ácido tricloroacético, ácido trifluoroacético), oxalato, alginato, ascorbato, aspartato, butirato, canforato, cânforossulfonato, ciclopentil-propionato, digliconato, etilenossulfonato, 2- hidroxietilsulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, persulfato, 3- fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, salicilato, benzenossulfonato, palmitato, estearato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartarato, tiocianato, naftilato, mesilato, glico-heptanoato, lactobionato, dodecilsulfonato, adipato ou semelhantes.

[00053] Os sais básicos (for exemplo: o sal formado com carboxila ou fenoxila como substituinte R) incluem amónio, o sal de metal alcalino (tal como sódio, lítio, e potássio), o sal de metal alcalino-terroso (tal como cálcio e magnésio), o sal formado com base orgânica (tal como amina orgânica) (incluindo mas não limitada a dibenziletilenoamina, diciclo-hexilamina, hidrabamina, N-metil-D-glicosamina, tetrabutilamina) e os sais formados com aminoácido como arginina, lisina ou semelhantes. Ademais, os sais básicos incluem amónio quaternário formado com agente alcalino que compreende nitrogênio, e não limitado a amónio, tetrametilamônio, tetraetilamônio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina ou semelhantes. Para exemplos adicionais consulte, Berge, et al., J. Pharm. Sei., 66, 1-19(1977).

[00054] Também é possível que os compostos de fórmula (I) possam existir como isômeros tautoméricos em equilíbrio, e todas tais formas estão incluídas dentro do escopo da invenção.

[00055] Em uma modalidade, são fornecidos na presente invenção os compostos de fórmula (I) isotopicamente marcados, que são idênticos àqueles aqui citados, mas que diferem apenas pelo fato de que um ou mais átomos está / estão substituído(s) por um outro átomo isótopo que tem uma massa atômica ou um número de massa diferente daquele átomo comumente existente. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos de fórmula (I) incluem isótipos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor e cloro, tais como 2H 3H, 13C, 14C, 15N, 17O, 180,31P, 32P, 35S, 18F e 36C1. Os compostos de fórmula (I) que compreendem os isótopos acima e/ou aqueles de outros átomos, os seus estereoisômeros e suas pró-drogas, e os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos, estereoisômeros, ou pró-drogas são intencionados para estarem dentro do escopo da presente invenção.

[00056] Certos compostos de fórmula (I) isotopicamente marcados, por exemplo aqueles compostos marcados com 3H e l4C ou semelhantes podem ser usados em ensaios de distribuição de composto e/ou substrato em tecido. Devido ao fato de serem relativamente fáceis de preparar e de detectar o isótopo trítio (isto é 3H) e o isótopo carbono 14 (isto é l4C) são particularmente preferidos. Ademais, alguns isótopos como o deutério (isto é H) podem conferir certas vantagens terapêuticas resultantes da maior estabilidade metabólica, (por exemplo, meia-vida in vivo aumentada, ou necessidades de dosagem reduzidas) e consequentemente, podem ser preferidos em algumas circunstâncias. Os compostos de fórmula (I) isotopicamente marcados podem ser em geral preparados por métodos conhecidos por uma pessoa comumente versada na técnica, tal como por substituição de um reagente não isotopicamente marcado por um reagente isotopicamente marcado.

Uso da invenção

[00057] O composto da presente invenção é um modulador novo para receptor de estrogênio ER-α36, e pode modular a função de ER-a36 em células in vivo e in vitro. Portanto, o composto de fórmula (I) da presente invenção pode ser usado para o tratamento e/ou a prevenção de doenças via ER-a36, especialmente relacionadas com tumor.

[00058] Em certas modalidades, é fornecido o método de modular a função d ER-a36 em células. O método compreende administrar o composto de fórmula (I) às células endógena ou exogenamente expressando ER-α36 por engenharia genética, também, às células com ou sem outro receptor de estrogênio (como, ER-α66, ER-α46 e ER-β). Em uma certa modalidade, as células endogenamente expressam ER-a36. Em uma modalidade preferida, a célula é uma célula de câncer endogenamente expressando ER-a36. As células expressando ER-a36 compreendem mas não se limitam às células de câncer de mama, leucemia, câncer hepático, linfoma, câncer pulmonar, mieloma, câncer prostático, câncer ovariano, câncer endometrial, câncer de cólon e câncer gástrico. Em uma modalidade mais preferida, as células expressando ER-a36 são células de câncer de mama, leucemia, câncer hepático, linfoma, câncer endometrial e câncer ovariano que endogenamente expressam ER-α36. As células de câncer de mama expressando ER-a36 compreendem mas não se limitam às células de MCF7, MDA-MB-231 e SKBR-3. As células de leucemia compreendem mas não se limitam às células de K562, MV-4-11, SUM159, HL-60 e Molt-4. As células de câncer endometrial expressando ER-a36 compreendem mas não se limitam às células HeclA. As células de câncer hepático expressando ER-a36 compreendem mas não se limitam às células de A2780, BEL7402, BEL7404, HEL-9204, Hep2G, Hep3B e célula-tronco de câncer hepático primário Hep-12 originadas de pacientes. As células de linfoma expressando ER-a36 compreendem mas não se limitam a Daudi. A expressão endógena de ER-a36 pode ser aumentada ou decrescida pelo tratamento com um reagente compreendendo soro, E2β (17β-estradiol), tamoxifeno e fulvestrant. (ICI 182,780)

[00059] Em outra modalidade, a presente invenção fornece um método de preparar as células expressando ER-a36 exógeno. As células podem ser preparadas por engenharia genética conhecida pela pessoa versada na técnica (consultar Sambrook etc.,” Molecular Cloning, A Laboratory Manual” (2nd Ed. 1989) (Cold Spring Harbor Laboratory)). De modo resumido, um gene exógeno ER-α36 é preparado e inserido em um vetor de expressão, então o vetor de expressão é transfectado para as células hospedeiras, e então as células hospedeiras são cultivadas no meio de cultura aplicável para expressar ER-a36 exógeno. A sequência de gene de ER-a36 de humano é descrita em Biochem. Biophys. Res. Commun. 336, 1023-1027 (2005) Wang et al. (número de registro no GenBank de BX640939). As células expressando ER- a36 exógeno podem expressar ou não ER-a36 endógeno. O nível de expressão endógena ou exógena de ER-a36 em células pode ser aumentado ou decrescido pelo tratamento com um reagente que compreende soro, E2β (17β-estradiol), tamoxifeno e fúlvestrant. (ICI 182,780)

[00060] Com isso, os compostos de fórmula (I) da presente invenção podem ser usados para a preparação de medicação para a prevenção e/ou o tratamento do câncer relacionado com ER-a36 compreendendo mas não limitado a câncer anal, câncer de duto biliar, câncer de bexiga, câncer de osso, câncer colorretal, (câncer de cólon, câncer retal), câncer cerebral, câncer carcinóide, câncer cervical, câncer relacionado à glândula endócrina, câncer endometrial, câncer de olho, câncer de vesícula biliar, câncer de cabeça e pescoço, câncer sarcoma de Kaposi, carcinoma renal, carcinoma laringeal, leucemia, câncer hepático, câncer pulmonar, linfoma, melanoma, mesotelioma, mieloma, câncer neuroendócrino, câncer esofágico, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de pênis, câncer de próstata, câncer de pele, sarcoma de tecido mole, câncer de medula espinhal, câncer gástrico, câncer de testículo, câncer de tireoide, câncer de vagina, câncer de vulva ou câncer de útero. Em modalidades preferidas, o câncer relacionado com ER- a36 inclui câncer de mama, câncer cervical, câncer de cólon, câncer endometrial, leucemia, câncer hepático, linfoma, câncer pulmonar, mieloma, câncer de ovário, câncer de próstata, câncer gástrico, câncer pancreático, carcinoma renal, melanoma, câncer de tireoide, câncer de sarcomas de tecido mole ou câncer de útero. Em modalidade mais preferida, o câncer relacionado com ER-α36 inclui câncer de mama, câncer hepático, linfoma, câncer de próstata, câncer gástrico, câncer pulmonar, câncer de cólon, câncer pancreático, câncer endometrial, câncer ovariano e leucemia.

[00061] O indivíduo pode ser um mamífero, tal como um cão, um gato, uma vaca, uma ovelha, um cavalo ou um humano, preferencialmente um ser humano. A quantidade efetiva dos compostos varia de acordo com a diferença de doença e é facilmente determinável por uma pessoa comumente versada na técnica tendo o benefício da presente descrição.

[00062] Em certas modalidades, os compostos da invenção podem ser usados em combinação com um ou mais agentes anticâncer. Agentes anticâncer adequados incluem, mas não se limitam a agentes alquilante, mostardas de nitrogênio, antagonistas de folato, antagonistas de purina, antagonistas de pirimidina, venenos de fuso acromático que interrompem a divisão celular, inibidores de topoisomerase, agentes indutores de apoptose, inibidores de angiogênese, podofolotoxinas, nitrosoureias, antimetabólitos, inibidores de sínteses de proteínas, inibidores de quinase, Antiestrogênios, Cisplatina, Carboplatina, Interferon, Asparginase, Leuprolida, Flutamida, Megestrol, Mitomicina, Bleomicina, Doxorubicina, Adriamicina, lirinotecan e Taxol. Em uma modalidade, os agentes anticâncer são antiestrogênios como tamoxifeno e fulvestrant (ICI 182,750).

[00063] Em certas modalidades da presente invenção, um composto de tórmula (I), um seu estereoisômero, ou suas pró-drogas, ou um sal farmaceuticamente aceitável do estereoisômero, ou da pró-droga, pode ser administrado sob a forma de uma composição farmacêutica compreendendo um agente de transporte, veículo, ou diluente farmaceuticamente aceitável. Podem ser preparados para dar a medicação para a prevenção e/ou o tratamento de um indivíduo sofrendo de doenças relacionadas com ER-a36.

[00064] Em certas modalidades, a composição da presente invenção pode ser usada para o tratamento de doenças em animais. O veterinário comum pode administrar em uma forma de preparação farmaceuticamente aceitável dos presentes compostos, ou sal veterinariamente aceitável, ou solvente veterinariamente aceitável ou a sua pró-droga. O veterinário pode determinar a dosagem apropriada e o método de administração adequado para um animal.

[00065] Se uma combinação de compostos ativos é usada, eles podem ser administrados simultânea, separada ou sequencialmente.

Métodos de preparar os compostos

[00066] Os compostos de fórmula (I) podem ser preparados por métodos de síntese diferentes. Tipicamente, os métodos de preparação são demonstrados como segue. R1, R2, RJ, R4, R', R6 são definidos como supracitado, salvo indicação em contrário.

[00067] É óbvio para a pessoa versada na técnica, que os detalhes dos métodos de preparação dos compostos variam levemente de acordo com a diferença das estruturas dos compostos. Ademais, é necessário proteger os grupos ativos ou instáveis por grupo protetor convencional (mostrado como P) na maioria dos seguintes métodos de preparação. A propriedade dos grupos protetores e os métodos de induzir ou dispor os grupos protetores são conhecidos na técnica. (Para exemplos consultar Greene T. W. “Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley & Sons, New York, 1991) Os seguintes esquemas de 1 a 3 e a descrição relacionada são exemplos de preparação dos compostos de fórmula (I), e não são intencionados para limitarem o escopo da presente invenção.

Esquema 1

[00068] Os compostos de fórmula (I) podem ser preparados através de várias etapas. O composto iii pode ser preparado através da reação de Houben-Hoesch (acilação de Friedel-Crafts) a partir de compostos i e ii sob catálise por ácido de Lewis. O ácido de Lewis aplicável à reação compreende cloreto de zinco anidro, cloreto de alumínio anidro, cloreto férrico, tetracloreto de titânio, cloreto estânico, complexos de dietil-eterato de trifluoreto de boro e etc. Esta reação demorará 1-20 horas entre 0°C e 120°C.

[00069] O composto v pode ser preparado a partir de composto iii e composto iv substituído em solvente inerte através de reação de condensação. O solvente inerte aplicável à reação compreende, por exemplo, DME, 1,2- dietoxietano, THF, 1,4-dioxano, DMF, N, N-dimetilacetamida, piridina, N- metil-2-pirrolidona. O álcali aplicável à reação compreende por exemplo hidróxido de potássio, carbonato de potássio, carbonato de césio, hidreto de sódio, monóxido de sódio, terc-butóxido de potássio, DEU (1,8-diazabiciclo- diciclo(5,4,0)-7-hendeceno), butil-lítio, LDA [sic] (diisopropil-lítio), LHMDS (hexametildissilazida de lítio) e etc. O catalisador de transferência de fase (tal como 18-coroa-6, TBAB (brometo de tetrabutilamônio), TBAF (fluoreto de tetrabutilamônio etc.) em quantidade estequiométrica ou catalítica será adicionado durante a reação. E a temperatura da reação é cerca de 0-100°C, o tempo de reação é 1-20 horas.

[00070] O composto vii pode ser preparado a partir de brometo de prenila e o composto v sob condição alcalina. O solvente aplicável à reação compreende por exemplo metanol, DMF (N,N-dimetilacetamina [sic]), THF (tetra-hidro-furano), água, tolueno, DME (1,2-dimetoxietano), e mistura de solventes, como metanol-água, DMF-água, THF-água, e etc. O solvente preferido na reação é água. O álcali aplicável à reação compreende por exemplo hidróxido de potássio, carbonato de potássio, carbonato de césio, metóxido de sódio, hidróxido de sódio, terc-butóxido de potássio, DBU (1,8- diazabiciclo-diciclo (5,4,0) -7-hendeceno), butil-litio, LDA [sic] (diisopropil- litio), LHMDS (hexametildissilazida de litio) e etc. A temperatura é convencionalmente cerca de 0-100°C, preferencialmente, o tempo de reação é 1-20 horas.

[00071] Em métodos de síntese química, as duas etapas importantes são respectivamente indução de isopentenila e fechamento de anel parental de cromenona. A sequência das duas etapas pode ser modulada de acordo com a propriedade de grupos substituintes diferentes. Portanto, o composto da presente invenção pode ser preparado através do esquema 2.

Esquema 2

[00072] Em esquema 2, a condição de reação de cada tipo de reação é similar àquela de esquema 1. O composto viii pode ser preparado a partir de composto ui e brometo de prenila sob condição alcalina. O solvente aplicável à reação compreende por exemplo metanol, DMF (N, N-dimetilacetamina [sic]), THF (tetra-hidro-furano), água, tolueno, DME (1,2-dimetoxietano), e mistura de solventes, por exemplo metanol-água, DMF-água, THF-água, e etc. O solvente preferido na reação é água. O álcali aplicável à reação compreende por exemplo hidróxido de potássio, carbonato de potássio, carbonato de césio, metóxido de sódio, hidróxido de sódio, terc-butóxido de potássio, DBU (1,8-diazabiciclo-diciclo (5,4,0)-7-hendeceno), butil-lítio, LDA (diisopropil-lítio), LHMDS (hexametildissilazida de lítio) e etc. A temperatura de reação é convencionalmente cerca de 0-100°C, preferencialmente, o tempo de reação é 1-20 horas.

[00073] O composto vii pode ser preparado a partir de composto viii e cloreto de acila substituído iv em solvente inerte através de reação de condensação. O solvente inerte aplicável à reação compreende éter, por exemplos DME, 1,2-dietoxietano, THF, 1,4-dioxano, DMF, N,N- metilacetamida, piridina, N-metil-2-pirrolidona. A reação é aplicável à condição alcalina, que compreende por exemplo hidróxido de potássio, carbonato de potássio, carbonato de césio, hidróxido de sódio, metóxido de sódio, terc-butóxido de potássio, DBU (1,8-diazabiciclo-diciclo (5,4,0)-7- hendeceno), butil-lítio, LDA (diisopropil-lítio), LHMDS (hexametildissilazida de lítio) e etc. Quantidade estequiométrica ou catalítica de catalisador de transferência de fase pode ser adicionada na reação, tal como 18-coroa-6, TBAB (brometo de tetrabutilamônio), TBAF (fluoreto de tetrabutilamônio) e etc. A temperatura de reação é convencionalmente cerca de 0-140°C, preferencialmente, o tempo de reação é 1-20 horas sob refluxo de solvente. Quando R.' é hidrogênio, o composto de fórmula (I) pode ser preparado de acordo com o seguinte esquema 3.

Esquema 3

[00074] P é um grupo protetor para grupo hidroxila em esquema 3. O composto xii pode ser preparado através da remoção do grupo protetor de composto 2Ú- Os métodos de remoção variam de acordo com os grupo protetores diferentes, e os métodos referem-se principalmente a “Protective Groups in Organic Synthesis” (Greene T.W et. John Wiley & Sons, New York, 1991). O grupo protetor preferido é selecionado do grupo consistindo em benzila, benzoíla, Carbobenzoxila, TBDMS (terc-butildimetilsilila), THP (tetra-hidro-pirano), metila, MOM (metoximetila), PMB (para-metoxibenzila) e etc.

[00075] O composto xiii pode ser preparado pela reação de brometo de prenila com composto xii sob condição alcalina. O solvente aplicável à reação compreende por exemplo metanol, DMF (N,N-dimetilacetamina [sic]), THF (tetra-hidro-fiirano), água, tolueno, DME (1,2-dimetoxietano), e mistura de solventes como metanol-água, DMF-água, tetra-hidro-furano-água e etc. O solvente preferido na reação é água. O álcali aplicável à reação compreende por exemplo hidróxido de potássio, carbonato de potássio, carbonato de césio, metóxido de sódio, hidreto de sódio, terc-butóxido de potássio, DBU (1,8- diazabiciclo-diciclo(5,4,0)-7-hendeceno), butil-litio, LDA [sic] (diisopropil- lítio), LHMDS (hexametildissilazida de lítio) e etc. E a temperatura de reação é cerca de 0-100°C, o tempo de reação é 1-20 horas.

EXEMPLOS

[00076] A invenção é ilustrada nos seguintes exemplos não limitadores nos quais, salvo indicação em contrário, a temperatura ambiente ou temperatura ambiental refere-se à faixa de 18-25°C. Evaporação de solvente foi realizada com o uso de um evaporador rotativo sob pressão reduzida; as reações foram monitoradas por cromatografia em camada fina (TLC, thin layer cromatography) e os tempos de reação foram fornecidos apenas para ilustração. As estruturas e as purezas de todos os compostos isolados foram confirmadas por pelo menos uma das seguintes técnicas: TLC, espectrometria de massas, ressonância nuclear magnética (RNM), cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC, high pressure liquid chromatography). Os rendimentos são fornecidos apenas para propósito de ilustração. Exemplo 1 2-(4-Trifluorometilfenil)-3,5,7-tri-hidroxi-8-(3-metil-2-buten-l-il)-4H- cromen-4-ona (composto 1) Etapa 1: Preparação de 2-metoxi-l-(2,4,6-tri-hidroxifenil)etanona

[00077] Floroglicinol (35,1 g, 279 mmol) foi dissolvido em solução de éter etílico (500 mL), seguido por cloreto de zinco (8g, 59mmol) e 2- metoxiacetonitrila (18 g, 253mmol) foi adicionada na solução sob condição de banho de água-gelo. Gás HC1 seco foi borbulhado na mistura de reação, vigorosamente agitando durante 5 horas, e precipitado foi formado. O precipitado foi filtrado, e coletado, seguido por dissolução em água e refluxado durante 3 horas. Após esfriamento, foi coletado precipitado rosa, e o composto branco desejado pode ser obtido por recristalização em água. (45 g, rendimento de 81%) 'HRNM (400 MHz, DMSO-d6): δ=12,14 (s, 2H), 10,41 (s, 1H), 5,79 (s, 2H), 4,56 (s, 2H), 3,32 (s, 3H). Etapa 2: Preparação de 2-(4-trifluorometilfenil)-3-metoxi-5,7-di-hidroxi-4H- cromen-4-ona

[00078] 2-Metoxi-l-(2,4,6-tri-hidroxifenil)etanona (30 g, 151 mmol) e cloreto de 4-trifluometilbenzoíla (37,5g, 180mmol) foram dissolvidos em 250mL de piridina seca. DUB (53,2g 350mmol) foi adicionado por gotejamento na solução à temperatura ambiente. Após o término da adição por gotejamento, a temperatura da solução foi aumentada para 75°C, e a mistura de reação mantida sob agitação de um dia para outro. No segundo dia, a solução foi esfriada para a temperatura ambiente, e a maior parte do solvente foi removida sob pressão reduzida. O resíduo da solução foi derramado em solução de cloridrato diluída. A solução misturada foi extraída 3 vezes com 500 mL de acetato de etila. Os extratos foram combinados, e lavados com 300 mL de solução aquosa de carbonato de sódio 2N, secos com sulfato de sódio anidro e condensados. O composto desejado foi obtido (21 g, rendimento de 40%) após o produto bruto ter sido cristalizado com mistura de éter de petróleo e acetato de etila (10:1) Etapa 3: Preparação de 2-(4-trifluorometilfenil)-3,5,7-tri-hidroxi-4H-cromen- 4-ona

[00079] 2-(4-Trifluorometilfenil)-3-metoxi-5,7-di-hidroxi-4H-cromen- 4-ona (10g, 28,3mmol) foi dissolvida em 150mL diclorometano em um frasco de três bocas de 250mL. Tribrometo de boro (21,2g, 84,9mmol) foi lentamente adicionado na solução a 0°C. Após isto, a solução foi aquecida para a temperatura ambiente e reagida durante 4 horas, e inativada com 80 mL de água gelada para terminar a reação química. A solução foi extraída 3 vezes com 500 mL de acetato de etila. Os extratos foram combinados, lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio uma vez e secos com sulfato de sódio anidro. Após filtração, o produto bruto foi misturado com 200 mL de acetato de etila / éter de petróleo (1:10) e agitado, e o composto amarelo desejado foi obtido após filtração e secagem. (7g, rendimento de 70%). Etapa 4: Preparação de 2-(4-trifluorometilfenil)-3,5,7-tri-hidroxi-8-(3- metil- 2-buten-l-il)-4H-cromen-4-ona (composto 1)

[00080] Composto 2-(4-trifluometilfenil)-3,5,7-tri-hidroxi-4H-crom-4- ona (3,38g, lOmmol) e carbonato de césio (33g, lOOmmol) foram dissolvidos em lOOmL de água, e brometo de prenila (l,9g, lOmmol) foi adicionado por gotejamento na solução sob condição de banho de água gelada. Após isto, a solução foi mantida de um dia para outro à temperatura ambiente, e o pH foi ajustado para cerca de 6 com ácido clorídrico 2N. A solução foi extraída 2 vezes com acetato de etila. As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secas com sulfato de sódio anidro. Após filtração, o produto bruto foi eluído com acetato de etila / éter de petróleo (1:25) através de coluna de gel de sílica. O composto amarelo desejado foi obtido (508mg, rendimento de 12,5%). 'H RNM (300 MHz, DMSO-d6): δ=12,20 (s, 1H), 10,87 (brs, 1H), 10,07 (brs, 1H), 8,35 (d, 2H, J=8,lHz), 7,94 (d, 2H, J=7,7Hz), 6,33 (s, 1H), 5,19 (t, 1H, J=5,4Hz), 3,45 (d, 2H, J=6,0Hz), 1,75 (s, 3H), 1,64 (s, 3H); LC-MS (ESI, m/z): 407,0[M+H]‘.

[00081] Referindo-se ao método de exemplo 1, o composto 2 até o composto 8 foram preparados pela reação de intermediário 2-metoxi-1 -(2,4,6- tri-hidroxifenil)etanona como matéria-prima com cloreto de alquila, cloreto de arila ou cloreto de heteroarila substituído diferente, os detalhes dos compostos são mostrados na seguinte tabela 1. Tabla 1

Exemplo 9 2-(4-Trifluorometilfenil)-3-metoxi-5,7-di-hidroxi-8-(3-metil-2-buten-l-il)- 4H-cromen-4-ona (composto 9)

[00082] Intermediário 2-(4-trifluorofenil)-3-metoxi-5,7-di-hidroxi-4H- crom-4-ona (500 mg, 1,42 mmol) de composto 1 e carbonato de césio (4,95g, 15mmol) foram dissolvidos em 25mL água, e brometo de prenila (220mg, l,5mmol) foi adicionado por gotejamento na solução sob condição de banho de água gelada. Após isto, a solução foi mantida de um dia para outro à temperatura ambiente, e o pH foi ajustado para cerca de 6 com ácido clorídrico 2N. A solução foi extraída 2 vezes com acetato de etila. As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secas com sulfato de sódio anidro. Após filtração, o produto bruto foi eluído com acetato de etila / éter de petróleo através de coluna de gel de sílica. Foi obtido o composto amarelo desejado (95mg, rendimento de 16,5%). *H RNM(300 MHZ, DMSO-dô): δ= 12,41 (1H, s), 10,92 (1H, brs), 8,20 (2H, d, J=8,l Hz), 7,96 (2H, d, J=7,7 Hz), 6,34 (1H, s), 5,15 (1H, t, J=5,4Hz), 3,84 (3H, s), 3,41 (2H, d, J=6,0Hz), 1,68 (3H, s), 1,62 (3H, s); LC-MS (ESI, m/z): 421,1 [M+H]’. Exemplo 10 2-(3,4-Difluorofenil)-3-metoxi-5,7-di-hidroxi-8-(3-metil-2-buten-l-il)-4H- cromen-4-ona (composto 10) Etapa 1: Preparação de 2-metoxi-l-[2,4,6-tri-hidroxi-3-(3-metilbut-2- eno)fenil]etanona

[00083] Composto 2-metoxi-l-(2,4,6-tri-hidroxifenil)etanona (2,0g, 10,09mmol) foi dissolvido em solução de hidróxido de potássio 5% (1,132g, 20,18 mmol), seguido por adição lenta por gotejamento de brometo de prenila (l,504g, 10,09 mmol) para dentro da solução sob condição de banho de água gelada. A mistura foi reagida durante 2 horas à temperatura ambiente, e derramada em água gelada. The pH da solução foi ajustado para cerca de 2 e a solução foi extraída 3 vezes com acetato de etila. As fases orgânicas foram combinadas, secas com sulfato de sódio anidro. Após filtração, o produto bruto foi purificado (eluído com diclorometano / metanol (100:1)) através de coluna de gel de sílica. Foi obtido o composto desejado (0,5g, rendimento de 18,6%). 'HRNM (400 MHz, DMSO-d6): δ=13,70 (s, 1H), 10,70 (s, 1H), 10,33 (9s, 1H), 5,97 (s, 1H), 5,08 (s, 1H), 4,56 (s, 2H), 3,30 (s, 3H), 3,02 (m, 2H), 1,66 (s, 3H), 1,57 (s,3H). Etapa 2: Preparação de 2-(3,4-difluorofenil)-3-metoxi-5,7-di-hidroxi-8-(3- metil- 2-buten-l-il)-4H-cromen-4-ona (composto 10)

[00084] 2-Metoxi-l-[2,4,6-tri-hidroxi-3,5-di(3-metil-2-buten-l- il)fenil]etanona (250 mg, 0,94mmol, carbonato de potássio em pó anidro (779mg, 5,63mmol), TBAB (brometo de tetrabutilamônio, 454mg, 1,41 mmol) e cloreto de 3,4-difluorometilbenzoíla (331 mg, l,88mmol) foram dissolvidos em 30mL tolueno, refluxados para reação durante 6 horas. Após esfriamento, tolueno foi removido e 20 mL água foram adicionados na solução. A solução aquosa foi extraída com acetato de etila. As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com solução aquosa saturada de NaCl, e secas com sulfato de sódio anidro, então foi obtido resíduo marrom após remoção de solvente. O resíduo foi dissolvido em 20 mL de mistura de metanol-água (razão de 4:1), e hidróxido de potássio (lg) foi adicionado. A solução da mistura foi aquecida e refluxada durante 2 horas, esfriada para a temperatura ambiente, acidulada para pH = 4 com ácido clorídrico 1 N, e extraída três vezes com diclorometano. As fases orgânicas combinadas foram secas com sulfato de sódio anidro para remover o solvente. Foi obtido o composto desejado (13,lmg, rendimento de 3,59%) após o produto bruto ter sido purificado através de coluna de gel de sílica (eluente: acetato de etila / éter de petróleo =1:50) 'H RNM (400 MHz, CDClj): δ=12,45 (s, 1H), 7,98-7,89 (m, 2H), 7,35-7,30 (m, 1H), 6,34 (s, 2H), 5,25 (br, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,55 (d, 2H, J=6,8Hz,2H), 1,84 (s, 3H), 1,77 (s, 3H); LC-MS: 390,1 [M+H]+; pureza: 98,6% (254 nm).

[00085] Referindo-se ao método do exemplo 9, o composto 9, o composto 11 até o composto 13 foram preparados por reação dos intermediários correspondentes respectivos como matérias-primas com brometo de prenila através de mecanismo de substituição única. Os detalhes dos compostos são mostrados na seguinte tabela 2. Tabela 2

Ensaio de teste para atividade biológica

[00086] As atividades do composto de fórmula (I) podem ser testadas através dos seguintes ensaios. Exemplo 14. Expressão de variantes de ER-a em espécimes de célula de câncer de mama de humano

[00087] Uma membrana pré-revestida com tecidos de câncer de mama de humano foi comprada junto à ProSci Incorporated (Poway, CA). A membrana foi sondada com um anticorpo anti-ER-a36 que especificamente reconhece ER-a36 e um anticorpo secundário conjugado com HRP, e visualizada com reagentes de detecção por quimioluminescência intensificada (ECL, enhanced chemiluminescence) (Amersham Pharmacia Biotech). Os marcadores sobre a mesma membrana foram então eluídos e detectados com um anticorpo H222 anti-receptor de estrogênio-a (Novocastra Laboratories Ltd, RU) que reconhece todos os três subtipos de ER-a: ER-a66, ER-a46 e ER-a36. A FIG. 1 mostra que ER-α66, ER-α46 e ER-a36 não são expressados em tecido de mama normal (Raia 1) mas são expressados em um espécime de carcinoma dutal infíltrante (Raia 2), em um espécime de carcinoma lobular infiltrante (Raia 5) e em carcinoma dutal não invasivo (Raia 7). Em adição, ER-a36 foi expressado em carcinoma dutal invasivo (Raia 4), em outro espécime de carcinoma lobular infiltrante (Raia 6). Raias 2 e 3 tiveram carcinoma dutal infiltrante respectivamente de dois pacientes diferentes. Raias 5 e 6 tiveram carcinoma lobular infiltrante de dois pacientes diferentes, respectivamente. Este resultado indica que ER-a36 não é expressado em tecido de mama normal mas é expressado em amostras de câncer de mama ER-negativas que não expressam ER-α66 e ER-a46. Exemplo 15: ER-a36 expressado em linhagem de célula de câncer de mama ER-negativa, MDA-MB-231

[00088] É sabido que a linhagem de célula MDA-MB-231 está destituída de ER-α66 e ER-α46 (“Relevance of breast cancer cell lines as models for breast tumours: an update”. Marc Lacroix, Guy Leclercq, Breast Cancer Research and Treatment (2004) 83, 249-289; Wang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USJM 9063-9068 (2006)). As células MDA-MB-231 foram obtidas junto à “American Type Culture Collection” (ATCC). As células MDA-MB-231 foram crescidas sobre lâminas de câmara BIOCOAT de 8 cavidades (BD Science Discovery Labware) em uma atmosfera de 8% de CO2 em meio de Eagle modificado por Dulbecco (Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium, DMEM) e 10% de soro fetal bovino a 37°C durante 12 horas. Então as células foram lavadas duas vezes com Solução Salina Tamponada com Fosfato (Phosphate Buffered Saline, PBS) estéril e fixadas com paraformaldeído 4% em PBS (pH 7,4) durante 30 minutos à temperatura ambiente. Após isto, as células foram lavadas com PBS, permeabilizadas com Triton X-100 0,5% (v/v) durante 10 minutos. As células foram então lavadas de novo com PBS, e bloqueadas com 3% de soro em PBS à temperatura ambiente durante 1 hora. As lâminas foram incubadas com um anticorpo específico para ER-a36 ou o mesmo anticorpo pré-incubado com peptídeos imunogênicos que especificamente se agltutinam ao anticorpo anti -ER-α36 durante 30 minutos à temperatura ambiente durante 1 hora e lavadas três vezes com PBS contendo 0,5% de Triton X-100 (PBST), então incubadas com anticorpo secundário marcado com isotiocianato de fluoresceína (fluorescein isotiocyanate, FITC). Finalmente, as lâminas foram lavadas três vezes com PBST, uma vez com PBS, então foram revestidas com marcador imunofluorescente (Molecular Probes, Eugene, OR) e examinadas sob um Microscópio Nikon E600 e as imagens foram capturadas por sistema de imageamento confocal MRC-1024 (Bio-Rad). A FIG. 2 (painel superior) mostra que as células MDA-MB-231 foram positivamente coradas por um anticorpo anti-ER-a36. Com o objetivo de provar a confiabilidade deste resultado, a imagem como mesmo anticorpo anti-ER-a36 pré-incubado com peptídeos imunogênicos não mostrou nenhuma mancha (FIG. 2, painel inferior), indicando a especificidade do anticorpo. Exemplo 16: Expressão de ER-a36 em diferentes linhagens de célula de tumor detectada por Transferência de Western

[00089] As células de amostra foram cultivadas a 37°C, 5% de CO2 (MDA-MB-231, e o meio de cultura é FBS 10%-DMEM). As células foram coletadas até que as células em cada cavidade alcançassem confluência de 60-90% e foram centrifugadas durante 5 minutos a 4°C, 4.300 rpm. O sobrenadante da solução foi removido, e o lisado apropriado, tampão de Lise compreendendo 1% de NP-40 e EDTA 0,7mM, e inibidor de protease foram adicionados, as células na solução foram mantidas lisando durante 30 minutos a 1 hora em banho de gelo. A solução foi centrifugada durante 15 minutos a 14.000 rpm e o sobrenadante foi coletado e quantificado com proteína. O procedimento geral de transferência de Western é mostrado como segue: transmembrana sobre cola pré-fabricada ou cola misturada, eletroforese, bloqueio de anticorpo anti-ER-a36, eluição, bloqueio de anticorpo secundário, eluição, exposição da expressão no laboratório fotográfico e apresentação dos resultados. A FIG. 3 mostra o resultado da transferência de Western da expressão de ER-a em diferentes células de tumor.

[00090] Raia 1: linhagens de célula epitelial renal de humano 293 de expressão transiente de ER-a36; Raia 2-4: linhagens de célula SK-BR-3 de câncer de mama de humano de laboratórios diferentes; Raia 5-7: linhagens de célula MCF-7 de câncer de mama de humano de laboratórios diferentes; Raia 8-9: linhagens de célula HL-60 de leucemia de humano de laboratórios diferentes; Raia 10-11: linhagens de célula MV-4-11 de leucemia de humano de laboratórios diferentes; Raia 12-13: linhagens de célula K562 de leucemia mielóide crônica de humano de laboratórios diferentes; Raia 14: linhagem de célula A2780 de câncer hepático; Raia 15: linhagem de célula HEL-7402 de câncer hepático; Raia 16: célula cancerosa HEL-9204 de câncer hepático; Raia 17: linhagem de célula primária Hep-11 de câncer hepático de um paciente; Raia 18: linhagem de célula primária Hep-12 de câncer hepático de um paciente. Exemplo 17: O composto inibe in vitro o crescimento de células de câncer de mama diferentes A: Ensaio de Viabilidade de Célula Luminescente CellTiter-Glo® em células de câncer de mama MDA-MB-231 ER-negativas in vitro:

[00091] Células MDA-MB-231 foram mantidas a 37°C, em uma atmosfera de 5% de CO? em DMEM e 10% de soro fetal bovino. As células foram ajustadas para uma densidade de 6x10J células por cavidade em uma placa de 96 cavidades. Células MDA-MB-231 foram tratadas com um composto de teste dissolvido em DMSO na concentração de 0, 0,3 μM, 0,5μM, IμM, 2μM, 3μM, 5μM, lOμM, 20μM, 30μM, 50μM e lOOμM durante 72 horas. As células tratadas foram examinadas através de Ensaio de Viabilidade de Célula Luminescente CellTiter-Glo® (Promega), e luminescência foi registrada com Envision. B: Ensaio de Viabilidade de Célula Luminescente CellTiter-Glo® em células de câncer de mama MCF-7 ER-positivas in vitro:

[00092] Linhagem de célula MCF7 é uma linhagem de célula câncer de mama que fortemente expressa ER-66, ER-46 e ER-36 (“Relevance of breast cancer cell lines as models for breast tumours: an update”. Marc Lacroix, Guy Leclercq, Breast Cancer Research and Treatment (2004) 83, 249-289; Wang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.AAQ3: 9063-9068 (2006)). As células MCF7 da ATCC foram mantidas em um meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM), e 10% de soro fetal bovino a 37 em uma atmosfera de 5% de CO?. As células foram ajustadas para uma densidade de 6x103 células por cavidade em uma placa de 96 cavidades. As células MCF 7 foram tratadas com um composto de teste dissolvido em DMSO na concentração de 0, 0,3μM, 0,5μM, IμM, 2μM, 3μM, 5μM, lOμM, 20μM, 30μM, 50μM e lOOμM durante 72 horas. As células tratadas foram examinadas através de kit de Ensaio de Viabilidade de Célula Luminescente CellTiter-Glo® (Promega), e luminescência foi registrada com Envision.

[00093] A Tabela 3 mostra que a viabilidade de células de câncer de mama diferentes foi influenciada por alguns compostos da presente invenção. Tabela 3

a) tamoxifeno como composto de controle positivo. b) quando o composto foi testado mais de três vezes, IC50 foi ilustrada com valor médio ± desvio padrão. c) NA significa sem atividade, e IC50 foi acima de 100μM d): ND significa não detectado. Exemplo 18: Inibição de crescimento de células de leucemia crônica in vitro pelos compostos A: Detecção da viabilidade de células de leucemia crônica K562 pelo Ensaio Luminescente CellTiter-Glo® in vitro

[00094] As células de leucemia crônica K562 da ATCC foram mantidas em IMDM e 10% de soro fetal bovino a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2. As células foram subsemeadas em uma placa de cultura de 96 cavidades em uma concentração de 6x103 células/cavidade. As células K562 foram tratadas com um composto de teste dissolvido em DMSO na concentração de 0, 0,3μM, 0,5μM, IμM, 2μM, 3μM, 5μM, lOμM, 20μM, 30μM, 50μM and lOOμM durante 72 horas. As células tratadas foram examinadas por Ensaio de Viabilidade de Célula Luminescente CellTiter- Glo® (Promega), e luminescência foi registrada com Envision. Exemplo 19: Inibição de crescimento de linfoma de células B Daudi de humano in vitro pelos compostos A: Inibição de linfoma de células B Daudi de humano detectada pelo Ensaio Luminescente CellTiter-Glo® in vitro

[00095] As linfoma de células B Daudi de humano da ATCC foram mantidas em IMDM e 10% de soro fetal bovino a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2. As células foram subsemeadas em uma placa de cultura de 96 cavidades em uma concentração de 6x10 células/cavidade. Linfoma de células B Daudi de humano foram tratadas com um composto de teste dissolvido em DMSO na concentração de 0, 0,3μM, 0,5μM, IμM, 2μM, 3μM, 5μM, lOμM, 20μM, 30μM, 50μM e lOOμM durante 72 horas. As células tratadas foram examinadas por kit de Ensaio de Viabilidade de Célula Luminescente CellTiter-Glo® (Promega), e luminescência foi registrada com Envision.

[00096] Tabela 4 mostra a viabilidade de células de leucemia crônica K562 e de linfoma de células B Daudi de humano influenciada por alguns compostos da presente invenção. Tabela 4

a): gleevec e cytarabinen respectivamente foram compostos de controle positivo para modelo de células K562 e modelo de células Daudi b): Nd significa sem detecção c) NA significa sem atividade, e IC50 foi acima de lOOμM Exemplo 20: Inibição de crescimento de células de leucemia aguda in vitro pelos compostos A: Inibição de crescimento de células dc leucemia mieloblástica aguda HL-60 pelos compostos detectada pelo método MTT

[00097] As células de leucemia mieloblástica aguda HL-60 da ATCC foram mantidas em IMDM e 10% de soro fetal bovino a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2. As células foram subsemeadas em uma placa de cultura de 96 cavidades em uma concentração de 6x10 células/cavidade. As células HL-60 foram tratadas com um composto de teste dissolvido em DMSO na concentração de 0, 10‘4M, 10’5M, 10'6M, 10’7M, 10’8M durante 72 horas. O valor de OD foi testado pelo método MTT, e a taxa de inibição foi calculada. B: Inibição de crescimento de células de leucemia linfoblástica aguda Molt-4 pelos compostos detectada pelo método MTT

[00098] As células de leucemia linfoblástica aguda Molt-4 da ATCC foram mantidas em RPMI-1640 e 10% de soro fetal bovino a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2. As células foram subsemeadas em uma placa de cultura de 96 cavidades em uma concentração de 6x10J células/cavidade e mantidas em RPMI-1640 e 10% de soro fetal bovino a 37°C em atmosfera de 5% de CO2. As células Molt-4 foram tratadas com um composto de teste dissolvido em DMSO na concentração de 0, 10'4M, lO'^M, 10'6M, 10‘7M, 10‘ o M durante 72horas. O valor de OD foi testado pelo método MTT, e a taxa de inibição foi calculada.

[00099] A viabilidade de células de leucemia diferentes influenciada por alguns compostos da invenção é listada na seguinte tabela 5 Tabela 5

a): Doxorubicina como composto de controle positivo b): NA significa sem atividade, e a percentagem de inibição pelo composto com uma concentração de lO^M foi menor que 10%. Exemplo 21: A inibição de células de câncer hepático in vitro pelos compostos A: Inibição de célula de câncer hepático BEL-7402 in vitro pelos compostos detectada por SRB

[000100] As células de câncer hepático BEL-7402 da ATCC foram mantidas em DMDM, 10% de NCS e 50μg/ mL de KA.NA a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2, e foram subsemeadas em uma placa de cultura de 96 cavidades em uma concentração de 6x10 células/cavidade. As células BEL-7402 foram tratadas com um composto de teste dissolvido em DMSO na concentração de 0, 10'4M, 10‘5M, 10’6M, 10’7M, 10'8M durante 72 horas. O valor de OD foi testado pelo método SRB, e a percentagem de inibição foi calculada.

[000101] A inibição de células de câncer hepático por alguns compostos da invenção é listada na seguinte Tabela 6 Tabela 6

a): Doxorubicina como composto de controle positivo Exemplo 22: A inibição de células de câncer gástrico in vitro pelos compostos A: Inibição de célula de câncer gástrico BGC-823 in vitro pelos compostos pelo método MTT

[000102] As células de câncer gástrico BGC-823 foram subsemeadas □ em uma placa de cultura de 96 cavidades em uma concentração de 3x10 células/cavidade e mantidas em meio DMEM isento de vermelho de fenol contendo 2,5% de CS-FBS a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2. As células BGC-823 foram tratadas com um composto de teste dissolvido em DMSO na concentração de 0, 1, 2, 4, 8, 10 e 20μM durante 72 horas. O valor de OD foi testado pelo método MTT, e a percentagem de inibição foi calculada. O resultado é mostrado na FIG. 4. Exemplo 23: A inibição de células de câncer pulmonar in vitro pelos compostos

[000103] A: Inibição de células de câncer pulmonar H460 in vitro pelos compostos determinada pelo método MTT

[000104] As células de câncer pulmonar H460 foram subsemeadas em uma placa de cultura de 96 cavidades em uma concentração de 4,0x10J células/cavidade e mantidas em meio isento de vermelho de fenol contendo 2,5% de CS-FBS a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2. As células H460 foram tratadas com um composto de teste dissolvido em DMSO na concentração de 0, 1, 2, 4, 8, 10 e 20μM durante 72 horas. O valor de OD foi testado pelo método MTT, e a percentagem de inibição foi calculada. O resultado é mostrado na FIG. 5. Exemplo 24: A inibição células de câncer pulmonar [sic] in vitro pelos compostos A: Inibição de células de câncer de cólon LS174T in vitro pelos compostos detectada pelo método MTT

[000105] As célula de câncer de cólon LS174T foram subsemeadas em uma placa de cultura de 96 cavidades em uma concentração de 4,5x103 células/cavidade e mantidas em meio 1640 isento de vermelho de fenol contendo 2,5% de CS-FBS a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2. As células LS174T foram tratadas com um composto de teste dissolvido em DMSO na concentração de 0, 1, 2, 4, 8, 10 e 20μM durante 72 horas. O valor de OD foi testado pelo método MTT, e a percentagem de inibição foi calculada. O resultado é mostrado na FIG. 6. Exemplo 25: A inibição de células de câncer pancreático in vitro pelos compostos A: Inibição de células de câncer pancreático PANC-1 in vitro pelos compostos detectada pelo método MTT

[000106] As células de câncer pancreático PANC-1 foram subsemeadas em uma placa de cultura de 96 cavidades em uma concentração de 3x10 células/cavidade e mantidas em meio 1640 isento de vermelho de fenol contendo 2,5% de CS-FBS a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2. As células PANC-1 tratadas com um composto de teste dissolvido em DMSO na concentração de 0, 1, 2, 4, 8, 10 e 20μM durante 72 horas. O valor de OD foi testado pelo método MTT, e a percentagem de inibição foi calculada. O resultado é mostrado na figura7. Exemplo 26: A inibição de células de câncer de próstata in vitro pelos compostos

[000107] A: Inibição de células de câncer de próstata PC-3 in vitro pelos compostos detectada pelo método MTT

[000108] As células de câncer pancreático PC-3 foram subsemeadas em 3 uma placa de cultura de 96 cavidades em uma concentração de 3x10 células/cavidade e mantidas em um meio contendo 10% de soro fetal bovino F12K. As células PC-3 foram tratadas com o composto de teste dissolvido em DMSO na concentração de 0, 1, 2, 4, 8, 10 e 20μM durante 72 horas. O valor de OD foi testado pelo método MTT, e a percentagem de inibição foi calculada. O resultado é mostrado na figuraδ. Ensaio in vivo: Exemplo 27: Inibição de crescimento de tumor de xenoenxerto de células de câncer de mama de humano BCAP-37 em camundongos nus pelos compostos

[000109] Camundongos nus com xenoenxertos de câncer de mama foram tratados com os compostos de teste para o efeito deles sobre a inibição do crescimento de tumor. Os tecidos de tumor foram retirados dos camundongos nus possuindo câncer de mama BCAP-37 e foram cortados em pedaços pequenos. Os vários pedaços dos tecidos de tumor foram na axila sob o membro frontal direito de camundongos nus fêmeas. Após o implante, os camundongos foram alimentados com solução de E2β uma vez ao dia na dosagem de 7μg por camundongo durante 6 dias para estimular o crescimento de tumor nos camundongos de experimento. Partindo-se do sétimo dia, os camundongos foram administrados intragastricamente com a solução de teste contendo os compostos e óleo de milho na dosagem de 35mg/kg. Tamoxifeno foi usado como um controle positivo. Oleo de milho foi utilizado como um controle negativo. A solução de teste foi preparada pela dispersão do composto de teste em solução de óleo de milho. (20 mg/mL). Os camundongos receberam a solução de teste e Tamoxifeno na dosagem de 35mg/kg ou óleo de milho uma vez ao dia durante 15 dias. Então os camundongos foram mortos e os tecidos de tumor foram dissecados e pesados. A taxa de inibição de crescimento de tumor foi uma percentagem calculada com uso da fórmula: taxa de inibição de crescimento de tumor = (peso médio do tumor no controle negativo - peso médio do tumor tratado com o composto de teste) / peso médio do tumor no controle negativo. O resultado é apresentado como gráfico de barras e listado na FIG. 9. Exemplo 28: Inibição de crescimento de tumor de xenoenxerto de linfoma de células B Daudi de humano em camundongos nus pelos compostos

[000110] Tumor de xenoenxerto de linfoma de células B Daudi de humano foi tratado com os compostos de teste para testar o efeito deles sobre a inibição do crescimento de tumor. Os linfomas de células B foram da ATCC. 1x107 Células com 0,2 mL de Matrigel após 5 passagens foram implantadas na axila sob o membro frontal direito de camundongos nus fêmeas. Quando o tumor dos camundongos nus alcançou 150-200mmJ, os camundongos nus possuindo tumor foram agrupados aleatoriamente. Cada 10 camundongos nus pertenciam a um grupo. A administração intragástrica com o óleo misturado foi um controle negativo e a administração intravenosa com rituximab foi como controle positivo. O composto de teste foi dissolvido no óleo misturado. O período de administração foi de 21 dias continuamente, e a suspensão de óleo misturado (35mg/kg) com o composto de teste foi administrada aos camundongos nus do grupo positivo uma vez ao dia. O Rituximab (20mg/kg) foi injetado no controle positivo duas vezes por semana. O grupo negativo com o óleo misturado foi intragastricamente administrado todos os dias. Durante o período de administração, o volume de tumor e os pesos de camundongos nus foram medidos duas vezes por semana. Com a curva de crescimento de tumor com base no volume de tumor e no tempo de administração (FIG. 10), pôde ser estimado o efeito do composto sobre o crescimento de tumor. Exemplo 29: Inibição de crescimento de xenoenxerto de células de câncer endometrial de humano Ishikawa pelos compostos

[000111] Camundongos nus com tumor de xenoenxerto de células de câncer endometrial de humano Ishikawa foram tratados com os compostos de teste para o efeito deles sobre a inibição do crescimento de tumor. O tumor foi retirado dos camundongos nus com células Ishikawa e cortado em pedaços pequenos. Os pedaços pequenos foram implantados na axila do membro frontal direito de camundongos nus fêmeas. Após o implante, os camundongos receberam injeção de solução de E2β uma vez ao dia na dosagem de 7μg por camundongo durante 6 dias para estimular o crescimento nos camundongos de experimento. Partindo-se do sétimo dia, os camundongos foram administrados intragastricamente com uma solução contendo os compostos de teste e óleo de milho na dosagem de 35mg/kg. Acetato de medroxiprogesterona foi usado como um controle positivo. O óleo misturado foi usado como um controle negativo. O composto de teste foi dispersado em óleo misturado (20 mg/mL). Os camundongos foram respectivamente administrados com o composto de teste, acetato de medroxiprogesterona e óleo misturado na dosagem de 35mg/kg durante 15-21 dias. Então os camundongos foram mortos e os tecidos de tumor foram dissecados e pesados. A taxa de inibição de crescimento de tumor foi uma percentagem calculada com uso da fórmula: taxa de inibição de crescimento de tumor = (peso médio do tumor no controle negativo - peso médio do tumor tratado com o composto de teste) / peso médio do tumor no controle negativo. O resultado é apresentado como gráfico de barras, com referência à FIG. 11.

Claims

1. Composto, caracterizado pelo fato de ser de fórmula (I)

ou sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, em que: R2, R3, R5 e R6 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, alquila (C1-4), alquila (C1-4) substituída com um ou mais átomos de halogênio, halogênio, ciano e alcoxila (C1-4) substituída com um ou mais átomos de halogênio, e R4 é alquila (C1-4) substituída com um ou mais átomos de halogênio.

2. Composto, caracterizado pelo fato de ser de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, ou sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, em que R2, R3, R5 e R6 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, metila, etila, propila, isopropila, butila, halogênio, ciano, alquila (C1-4) substituída com um ou mais átomos de halogênio, e alcoxila (C1-4) substituída com um ou mais átomos de halogênio; e R4 é alquila (C1-4) substituída com um ou mais átomos de halogênio.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que dito composto é: 2-(4-trifluorometilfenil)-3,5,7-tri-hidroxi-8-(3-metil-2-buten-1- il)-4H-cromen-4-ona.

4. Composição, caracterizada pelo fato de compreender uma quantidade terapeuticamente efetiva do composto, do sal farmaceuticamente aceitável ou do solvato como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em combinação com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

5. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou de um sal farmaceuticamente aceitável ou de um solvato, caracterizado pelo fato de ser na preparação de uma medicação para a prevenção ou o tratamento de um câncer relacionado com ER-a36.

6. Uso de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo consistindo em colangiocarcinoma, câncer de bexiga, câncer de osso, câncer colorretal (câncer de cólon, câncer retal), câncer de cérebro, câncer de mama, câncer cervical, câncer endometrial, câncer de cabeça e pescoço, câncer de sarcoma de Kaposi, câncer renal, laringocarcinoma, leucemia, câncer hepático, câncer pulmonar, linfoma, melanoma, celiotelioma, mieloma, câncer neuroendócrino, câncer esofágico, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de pênis, câncer prostático, câncer cutâneo, câncer de sarcoma de tecido mole, câncer de medula espinhal, câncer gástrico, câncer testicular, câncer de tireoide, e câncer uterino.

7. Uso de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo consistindo em câncer de mama, câncer cervical, câncer de cólon, câncer endometrial, leucemia, câncer hepático, linfoma, câncer pulmonar, mieloma, câncer ovariano, câncer prostático, câncer gástrico, câncer pancreático, câncer renal, melanoma, câncer de tireoide, câncer de sarcoma de tecido mole, e câncer uterino.

8. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo consistindo em câncer de mama, câncer hepático, câncer pulmonar, câncer de cólon, câncer pancreático, câncer endometrial, câncer ovariano, e leucemia.