MX2014007337A - Composiciones que generan peracidos. - Google Patents

Abstract

En la presente se describen cintas blanqueadoras dentales que incluyen una película adhesiva hidratable que tiene un ingrediente blanqueador granular adherido a la misma, donde al hidratarse, el ingrediente blanqueador granular libera peróxido de hidrógeno que lo utiliza un catalizador enzimático que tiene actividad perhidrolítica para producir enzimáticamente una cantidad eficaz de un agente blanqueador perácido a partir de un sustrato donante de acilo. También se proporcionan métodos para la elaboración y uso de las cintas blanqueadoras dentales.

Description

COMPOSICIONES QUE GENERAN PERÁCIDOS ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Existe una necesidad de cintas blanqueadoras aptas para su uso doméstico que tengan niveles totales inferiores de peróxido y que aun así tengan una mejor actividad blanqueadora .

RESUMEN La invención proporciona cintas blanqueadoras que incluyen un ingrediente blanqueador granular en combinación con una enzima que tiene actividad perhidrolítica ("perhidrolasa") que incluye el motivo estructural conservado de la familia 7 de carbohidrato esterasas y un donante de acilo de forma tal que, al utilizarlas, el peróxido liberado por el ingrediente blanqueador granular reaccione con el donante de acilo en la presencia de la perhidrolasa y forme un perácido en directa proximidad con los dientes, sin una dilución considerable con los excipientes de la formulación y que, por consiguiente, permitan mejorar el blanqueamiento de los dientes con cantidades totales muy inferiores de peróxido .

Las cintas incluyen una película adhesiva, ya sea de capa única o de múltiples capas (por ejemplo, de dos capas) que, cuando se hidrata con agua o saliva, se torna lo suficientemente adhesiva como para adherirse a los dientes.

El ingrediente blanqueador granular se adhiere a un lado de la película para colocarlo en contacto con los dientes. Luego de la aplicación, el ingrediente blanqueador se coloca directamente sobre los dientes (es decir, entre los dientes y la capa adhesiva) . Los gránulos luego liberan peróxido mediante su disolución rápida en agua. El ingrediente blanqueador puede opcionalmente recubrirse con un material de disolución rápida, tal como sulfato de sodio, almidón de maíz o goma arábiga. Opcionalmente, las cintas proporcionan una segunda capa en la película presente para alargar el tiempo de exposición. Esta segunda capa puede ser insoluble en agua, lo que hace necesario que el usuario retire la cinta luego del tratamiento, o puede erosionarse en agua, lo que provoca que la cinta se disuelva luego de un tratamiento suficiente. La cinta además incluye una perhidrolasa (una enzima capaz de catalizar la reacción del éster de ácido carboxílico y peróxido de hidrógeno para formar un perácido) , que también puede proporcionarse en forma granular sobre la superficie de la película, y un donante de acilo, por ejemplo, seleccionado de ácidos carboxílicos y compuestos de acilo, por ejemplo, triacetina o hexaacetato de sorbitol, donde el donante de acilo reacciona con la fuente de peróxido en la cinta en la presencia de la perhidrolasa para formar un perácido, que mejora la acción blanqueadora de la cinta.

Algunas modalidades de la presente invención proporcionan una cinta blanqueadora dental que incluye una película adhesiva hidratable con un primer lado y un segundo lado, donde el primer lado tiene un ingrediente blanqueador granular adherido al mismo, y donde la cinta blanqueadora dental además incluye, en o sobre la película o en la forma de gránulos adheridos al primer lado de la película; a) una enzima que tiene actividad perhidrolítica, enzima ésta que tiene un motivo distintivo de la familia 7 de carbohidrato esterasas (CE-7) que se alinea con una secuencia de referencia SEQ ID NO: 1, donde el motivo distintivo incluye : i) un motivo RGQ en las posiciones correspondientes a las posiciones 118-120 de la SEQ ID NO: 1; ii) un motivo GXSQG en las posiciones correspondientes a las posiciones 186-190 de la SEQ ID NO: 1; y iii) un motivo HE en las posiciones correspondientes a las posiciones 303-304 de la SEQ ID NO: 1; y (b) al menos un sustrato donante de acilo, sustrato éste que se selecciona del grupo que consiste en: i) ésteres que tienen la estructura [X] mR5 donde X = un grupo éster de la fórmula R6C(0)0 R6 = grupo hidrocarbilo Cl a C7 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente sustituido con grupos hidroxilo o grupos alcoxi Cl a C4, donde R6 opcionalmente incluye uno o más enlaces éter para R6 = C2 a C7; R5 = un grupo hidrocarbilo Cl a C6 lineal, ramificado, o cíclico o un grupo heteroaromático cíclico de 5 miembros o un grupo aromático o heteroaromático cíclico de seis miembros opcionalmente sustituido con grupos hidroxilo; donde cada átomo de carbono en R5 individualmente incluye no más de un grupo hidroxilo o no más de un grupo éster o un grupo ácido carboxílico; donde R5 opcionalmente incluye uno o más enlaces éter; M es un número entero que oscila entre 1 y el número de átomos de carbono en R5; y donde dichos ésteres tienen una solubilidad en agua de al menos 5 ppm a 25 °C; ii) glicéridos que tienen la estructura donde Ri = alquilo Cl a C7 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido con un hidroxilo o un grupo alcoxi Cl a C4 y R3 y R4 individualmente son H o RiC(O) ; iii) uno o más ésteres de la fórmula donde Ri es un alquilo Cl a C7 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido con un hidroxilo o un grupo alcoxi Cl a C4 y R2 es un alquilo Cl a CIO de cadena recta o ramificada, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, alquilheteroarilo, heteroarilo, (CH2CH20)n, o (CH2CH (CH3) -0) nH y n es 1 a 10; y iv) sacáridos acetilados seleccionados del grupo que consiste en monosacáridos acetilados, disacáridos acetilados, y polisacárido acetilado; donde al hidratarse la película adhesiva hidratable, el ingrediente blanqueador granular libera peróxido de hidrógeno y la enzima cataliza la formación de una cantidad eficaz de un perácido.

Otras modalidades de la presente invención proporcionan un método de blanqueamiento dental que incluye proporcionar un sistema de envasado que incluye la cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden; retirar la cinta blanqueadora dental del sistema de envasado; y poner en contacto la cinta blanqueadora dental directamente con los dientes durante un periodo de tiempo suficiente para blanquear los dientes; donde la cinta blanqueadora dental se hidrata con la humedad presente en la cavidad oral o sobre la superficie dental o se hidrata luego del paso (b) pero antes del paso (c) .

Otras áreas de aplicación de la presente invención serán evidentes a partir de la descripción detallada incluida más adelante en la presente. Se entenderá que, aunque indican la modalidad preferente de la invención, se prevé que la descripción detallada y los ejemplos específicos tengan fines meramente ilustrativos y que no se prevé limiten el alcance de la invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS SECUENCIAS BIOLÓGICAS Las siguientes secuencias cumplen con 37 C.F.R. §§ 1.821-1.825 ("Requisitos para Solicitudes de Patente que Contienen Secuencias de Nucleótidos y/o de Aminoácidos - Las Normas de las Secuencias") y son consistentes con la Norma ST.25 (2009) de la Organización Mundial de la Propiedad Intelectual (WIPO, por sus siglas en inglés) y con los requisitos para listados de secuencias del Convenio Europeo de Patentes (EPC, por sus siglas en inglés) y con las Reglas 5.2 y 49.5(a-bis) del Tratado de Cooperación en Materia de Patentes (PCT, por sus siglas en inglés), y la Sección 208 y el Anexo C de las Instrucciones Administrativas. Los símbolos y el formato utilizados en los datos de secuencias de nucleótidos y aminoácidos cumplen con las reglas expuestas en 37 C.F.R. § 1.822.

La SEQ ID NO: 1 es la secuencia de aminoácidos de la perhidrolasa de variante Thermotoga marítima C277S.

La SEQ ID NO: 2 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión que incluye la perhidrolasa de variante Thermotoga marítima C277S acoplada a un dominio de unión dental (también conocido como "EZ-7" en la Publicación de la Solicitud de Patente Internacional No. WO2012/087970A2 otorgada a Butterick et al.) .

La SEQ ID NO: 3 es la secuencia de ácidos nucleicos que codifica una cefalosporina C deacetilasa de Bacillus subtilis ATCC® 31954™.

La SEQ ID NO: 4 es la secuencia de aminoácidos de una cefalosporina C deacetilasa de Bacillus subtilis ATCC® 31954™.

La SEQ ID NO: 5 es la secuencia de aminoácidos de una cefalosporina C deacetilasa de la cepa 168 Bacillus subtilis subespecie subtilis .

La SEQ ID NO: 6 es la secuencia de aminoácidos de una cefalosporina C deacetilasa de B. subtilis ATCC® 6633™.

La SEQ ID NO: 7 es la secuencia de aminoácidos de una cefalosporina C deacetilasa de B. licheniformis ATCC® 14580™.

La SEQ ID NO: 8 es la secuencia de aminoácidos de una acetil xilano esterasa de B. pumilus PS213.

La SEQ ID NO: 9 es la secuencia de aminoácidos de una acetil xilano esterasa de Clostridium thermocellum ATCC® 27405™.

La SEQ ID NO: 10 es la secuencia de aminoácidos de una acetil xilano esterasa de Thermotoga neapolitana .

La SEQ ID NO: 11 es la secuencia de aminoácidos de una acetil xilano esterasa de Thermotoga marítima MSB8.

La SEQ ID NO: 12 es la secuencia de aminoácidos de una acetil xilano esterasa de Thermoanaerobacterium sp. JW/SL YS485.

La SEQ ID NO: 13 es la secuencia de aminoácidos de una cefalosporina C deacetilasa de Bacillus halodurans C-125.

La SEQ ID NO: 14 es la secuencia de aminoácidos de una cefalosporina C deacetilasa de Bacillus clausii KSM-K16.

La SEQ ID NO: 15 es la secuencia de aminoácidos de una variante de la acetil xilano esterasa de Thermotoga neapolitana de la Publicación de la Solicitud de Patente de los EE.UU. No. 2010-0087529 (incorporada en la presente a titulo de referencia en su totalidad) , donde el residuo Xaa en la posición 277 es Ala, Val, Ser, o Thr.

La SEQ ID NO: 16 es la secuencia de aminoácidos de una variante de la acetil xilano esterasa de Thermotoga marítima MSB8 de la Publicación de la Solicitud de Patente de los EE.UU. No. 2010-0087529, donde el residuo Xaa en la posición 277 es Ala, Val, Ser, o Thr.

La SEQ ID NO: 17 es la secuencia de aminoácidos deducida de una variante de la acetil xila-no esterasa de Thermotoga lettingae de la Publicación de la Solicitud de Patente de los EE.UU. No. 2010-0087529, donde el residuo Xaa en la posición 277 es Ala, Val, Ser, o Thr.

La SEQ ID NO: 18 es la secuencia de aminoácidos de una variante de la acetil xilano esterasa de Thermotoga petrophila de la Publicación de la Solicitud de Patente de los EE.UU. No. 2010-0087529, donde el residuo Xaa en la posición 277 es Ala, Val, Ser, o Thr.

La SEQ ID NO: 19 es la secuencia de aminoácidos de una variante de la acetil xilano esterasa de Thermotoga especie RQ2 derivada de "RQ2 (a) " de la Publicación de la Solicitud de Patente de los EE.UU. No. 2010-0087529, donde el residuo Xaa en la posición 277 es Ala, Val, Ser, o Thr.

La SEQ ID NO: 20 es la secuencia de aminoácidos de una variante de la acetil xilano esterasa de Thermotoga especie RQ2 derivada de "RQ2 (b) " de la Publicación de la Solicitud de Patente de los EE.UU. No. 2010-0087529, donde el residuo Xaa en la posición 278 es Ala, Val, Ser, o Thr.

La SEQ ID NO: 21 es la secuencia de aminoácidos de una acetil xilano esterasa de Thermotoga lettingae .

La SEQ ID NO: 22 es la secuencia de aminoácidos de una acetil xilano esterasa de Thermotoga petrophila .

La SEQ ID NO: 23 es la secuencia de aminoácidos de una primera acetil xilano esterasa de Thermotoga especie RQ2 descrita como "RQ2 (a) " .

La SEQ ID NO: 24 es la secuencia de aminoácidos de una segunda acetil xilano esterasa de Thermotoga especie RQ2 descrita como "RQ2 (b) " .

La SEQ ID NO: 25 es la secuencia de aminoáciaos de una cefalosporina C deacetilasa de Thermoanearobacterium saccharolyticum .

La SEQ ID NO: 26 es la secuencia de aminoácidos de la acetil xilano esterasa de Lactococcus lactis (número de acceso GENBANK® ABX75634.1) .

La SEQ ID NO: 27 es la secuencia de aminoácidos de la acetil xilano esterasa de Mesorhizobium loti (número de acceso GENBANK® BAB53179.1).

La SEQ ID NO: 28 es la secuencia de aminoácidos de la acetil xilano esterasa de Geobacillus stearothermophilus (número de acceso GENBANK® AAF70202.1).

Las SEQ ID NO 29-163 son las secuencias de aminoácidos de los péptidos que tienen afinidad hacia una superficie de la cavidad oral .

Las SEQ ID NO: 164-177 son las secuencias de aminoácidos de los enlazadores/espaciadores de péptidos.

Las SEQ ID NO: 178-197 son las secuencias de aminoácidos de diversos constructos de fusión de perhidrolasas diana que incluyen una enzima perhidrolitica acoplada a través de un enlazador peptídico a un dominio de unión que tiene afinidad hacia una superficie oral (véase la Publicación de la Solicitud de Patente Internacional No. WO2012/087970A2 otorgada a Butterick et al.) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La siguiente descripción de la o las modalidades preferentes es de naturaleza meramente ilustrativa y no se prevé que de manera alguna limite la invención, su aplicación, o usos.

Conforme se utilizan en la presente, se prevé que los artículos "un", "una", y "el/la" que preceden a un elemento o componente de la invención no sean taxativos en lo que respecta al número de instancias (es decir, apariciones) del elemento o componente. Por consiguiente, "un", "una", y "el/la" se deben leer como que incluyen uno o al menos uno, y la forma de la palabra en singular del elemento o componente también incluye el plural a no ser que evidentemente se prevea que el número sea singular.

Conforme se utiliza en la presente, el término "que incluye" significa la presencia de las características, números enteros, pasos, o componentes indicados a los que se hace referencia en las reivindicaciones, pero no excluye la presencia o adición de una o más características, números enteros, pasos, componentes o grupos diferentes de los mismos. El término "que incluye" pretende incluir las modalidades que abarcan los términos "que consiste esencialmente de" y "que consiste de". Asimismo, el término "que consiste esencialmente de" pretende incluir las modalidades que abarca el término "que consiste de".

Conforme se utiliza en la presente, el término "alrededor de" que modifica la cantidad de un ingrediente o reactivo utilizado se refiere a la variación en la cantidad numérica que puede ocurrir, por ejemplo, a través de los procedimientos típicos de medición y manipulación de líquidos utilizados para preparar concentrados o usar soluciones en la realidad; a través de un error accidental en estos procedimientos/ a través de diferencias en la elaboración, fuente, o pureza de los ingredientes utilizados para preparar las composiciones o llevar a cabo los métodos; y similares. El término "alrededor de" también abarca las cantidades que difieren debido a condiciones de equilibrio diferentes de una composición producto de una mezcla inicial en particular. Independientemente de si se modifican o no con el término "alrededor de", las reivindicaciones incluyen los equivalentes de las cantidades.

Cuando están presentes, todos los intervalos son inclusivos y combinables. Por ejemplo, cuando se cita un intervalo de "1 a 5", se entenderá que el intervalo citado incluye los intervalos de "1 a 4", "1 a 3", "1-2", "1-2 y 4-5", "1-3 y 5", y similares.

Conforme se utilizan en la presente, los términos "sustrato", "sustrato adecuado", "donante de acilo", y "sustrato de éster de ácido carboxilico" de forma intercambiable se refieren específicamente a: (a) uno o más ásteres que tienen la estructura [X]mRs donde X es un grupo éster de la fórmula R6C(0)0; R¾ es un grupo hidrocarbilo Cl a C7 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo o un grupo alcoxi Cl a C4, donde R6 opcionalmente incluye uno o más enlaces éter cuando R6 es C2 a C7; R5 es un grupo hidrocarbilo Cl a C6 lineal, ramificado, o cíclico o un grupo heteroaromático cíclico de cinco miembros o un grupo aromático o heteroaromático cíclico de seis miembros opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo; donde cada átomo de carbono en R5 individualmente incluye no más de un grupo hidroxilo o no más de un grupo éster, y donde R5 opcionalmente incluye uno o más enlaces éter; m es un número entero que oscila entre 1 y el número de átomos de carbono en R5, donde los uno o más ésteres tienen una solubilidad en agua de al menos 5 ppm a 25 °C; o (b) uno o más glicéridos que tienen la estructura donde recta o ramificada opcionalmente sustituido con un hidroxilo o un grupo alcoxi Cl a C4 y R3 y R4 individualmente son H o RiC(O); (c) uno o más ésteres de la fórmula donde Ri es un alquilo Cl a C7 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido con un hidroxilo o un grupo alcoxi Cl a C4 y R2 es un alquilo Cl a CIO de cadena recta o ramificada, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, alquilheteroarilo, heteroarilo, (CH2CH20)n, o (CH2CH (CH3) -0) nH y n es l a 10; o (d) uno o más monosacáridos acetilados, disacáridos acetilados, o polisacáridos acetilados; o (e) cualquier combinación de (a) a (d) .

Conforme se utiliza en la presente, el término "perácido" es sinónimo de peroxiácido, ácido peroxicarboxilico, ácido peroxi, ácido percarboxilico y ácido peroxoico .

Conforme se utiliza en la presente, el término "ácido peracético" se abrevia como "PAA" y es sinónimo de ácido peroxiacético, ácido etanoperoxoico y todos los demás sinónimos del Número de Registro CAS 79-21-0.

Conforme se utiliza en la presente, el término "monoacetina" es sinónimo de monoacetato de glicerol, monoacetato de glicerina, y monoacetato de glicerilo.

Conforme se utiliza en la presente, el término "diacetina" es sinónimo de diacetato de glicerol, diacetato de glicerina, diacetato de glicerilo, y todos los demás sinónimos del Número de Registro CAS 25395-31-7.

Conforme se utiliza en la presente, el término "triacetina" es sinónimo de triacetato de glicerina, triacetato de glicerol, triacetato de glicerilo, 1,2,3-triacetoxipropano, triacetato de 1 , 2 , 3-propanotriol y todos los demás sinónimos del Número de Registro CAS 102-76-1.

Conforme se utilizan en la presente, los términos "azúcar acetilado" y "sacárido acetilado" se refieren a mono- , di- y polisacáridos que incluyen al menos un grupo acetilo. Algunos ejemplos de modo no taxativo incluyen pentaacetato de glucosa, tetraacetato de xilosa, xilano acetilado, fragmentos de xilano acetilado, 1 , 2 , 3 , 5-tetraacetato de ß-D-ribofuranosa; tri-O-acetil-D-galactal; y tri-O-acetil-glucal .

Conforme se utilizan en la presente, los términos "hidrocarbilo", "grupo hidrocarbilo", y "fracción hidrocarbilo" significan una configuración de cadena recta, de cadena ramificada o cíclica de átomos de carbono conectados por enlaces simples, dobles, o triples carbono a carbono y/o por enlaces éter, y sustituidos en conformidad con átomos de hidrógeno. Estos grupos hidrocarbilo pueden ser alifáticos y/o aromáticos. Algunos ejemplos de grupos hidrocarbilo incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, ciclopropilo, ciclobutilo, pentilo, ciclopentilo, metilciclopentilo, hexilo, ciclohexilo, bencilo, y fenilo. En una modalidad preferente, el grupo hidrocarbilo es una configuración de cadena recta, de cadena ramificada o cíclica de átomos de carbono conectados por enlaces simples carbono a carbono y/o por enlaces éter, y. sustituidos en conformidad con átomos de hidrógeno .

Conforme se utilizan en la presente, los términos "monoésteres" y "diésteres" de 1 , 2-etanodiol ; 1,2- propanodiol ; 1 , 3-propanodiol ; 1, 2-butanodiol; 1 , 3-butanodiol; 2, 3-butanodiol; 1, 4-butanodiol; 1, 2-pentanodiol; 2,5-pentanodiol; 1, 5-pentanodiol; 1, 6-pentanodiol; 1,2-hexanodiol; 2 , 5-hexanodiol ; 1, 6-hexanodiol; y sus combinaciones, se refieren a los compuestos que incluyen al menos un grupo éster de la fórmula RC(0)0, donde R es un grupo hidrocarbilo Cl a C7 lineal. En una modalidad, el sustrato de éster de ácido carboxilico se selecciona del grupo que consiste en diacetato de propilenglicol (PGDA) , diacetato de etilenglicol (EDGA) , y sus combinaciones.

Conforme se utiliza en la presente, el término "diacetato de propilenglicol" es sinónimo de 1,2-diacetoxipropano, diacetato de propileno, diacetato de 1,2-propanodiol, y todos los demás sinónimos del Número de Registro CAS 623-84-7.

Conforme se utiliza en la presente, el término "diacetato de etilenglicol" es sinónimo de 1,2-diacetoxietano, diacetato de etileno, diacetato de glicol, y todos los demás sinónimos del Número de Registro CAS 111-55-7.

Conforme se utilizan en la presente, los términos "mezcla de reacción enzimática adecuada", "componentes adecuados para la generación in situ de un perácido", "componentes de reacción adecuados", "mezcla de reacción acuosa adecuada", "mezcla de reacción", y "componentes que generan perácidos" se refieren a los materiales y el agua (de la saliva y/o aplicada por el usuario a la película adhesiva hidratable antes de utilizarla) en que se ponen en contacto los reactivos y el catalizador de la enzima perhidrolítica . Los componentes que generan perácidos incluyen al menos una enzima que tiene actividad perhidrolítica, preferentemente donde la enzima perhidrolítica es al menos una perhidrolasa CE-7 (opcionalmente en la forma de una proteína de fusión dirigida a una superficie corporal), al menos un sustrato de éster de ácido carboxílico adecuado, una fuente de peroxígeno, y agua (de la saliva y/o aplicada por el usuario a la película adhesiva hidratable antes de utilizarla) .

Conforme se utiliza en la presente, el término "perhidrólisis" se define como la reacción de un determinado sustrato con peróxido para formar un perácido. Típicamente, se lleva a cabo la reacción de un peróxido inorgánico con el sustrato elegido en la presencia de un catalizador para producir el ácido peroxicarboxilico. Conforme se utiliza en la presente, el término "perhidrólisis química" incluye las reacciones de perhidrólisis en las que se combina un sustrato (un precursor del ácido peroxicarboxilico) con una fuente de peróxido de hidrógeno, donde el ácido peroxicarboxilico se forma en la ausencia de un catalizador enzimático. Conforme se utiliza en la presente, el término "perhidrólisis enzimática" incluye las reacciones de perhidrólisis en las que se combina un sustrato de éster de ácido carboxílico (un precursor del perácido; el "donante de acilo") con una fuente de peróxido de hidrógeno y agua, donde el catalizador enzimático cataliza la formación del perácido.

Conforme se utiliza en la presente, el término "actividad perhidrolasa" se refiere a la actividad del catalizador por unidad de masa (por ejemplo, miligramo) de proteina, peso celular seco, o peso del catalizador inmovilizado .

Conforme se utiliza en la presente, "una unidad de actividad enzimática" o "una unidad de actividad" o "U" se define como la cantidad de actividad perhidrolasa necesaria para producir 1 µp??? del producto ácido peroxicarboxilico por minuto a una temperatura especifica.

Conforme se utilizan en la presente, los términos "catalizador enzimático" y "catalizador de perhidrolasa" se refieren a un catalizador que incluye una enzima que tiene actividad de perhidrólisis y que puede asumir la forma de una célula microbiana completa, de una o más células microbianas permeables, de uno o más componentes celulares de un extracto de células microbianas, de una enzima parcialmente purificada, o de una enzima purificada. El catalizador enzimátíco también puede modificarse químicamente (tal como por pegilación o mediante su reacción con reactivos de reticulación) . El catalizador de perhidrolasa también puede inmovilizarse sobre un soporte soluble o insoluble utilizando métodos ampliamente conocidos por aquellos con experiencia en la técnica; véase, por ejemplo, Immobilization of Enzymes and Celis; Gordon F. Bickerstaff, Editor; Humana Press, Totowa, NJ, USA; 1997. En una modalidad, el catalizador de perhidrolasa puede inmovilizarse de forma no covalente en o sobre una cinta de cuidado oral (por ejemplo, una cinta blanqueadora) o un molde dental. En otra modalidad, la inmovilización no covalente a la cinta o molde dental puede realizarse a través del uso de un dominio de unión peptídico con una fuerte afinidad hacia un material en o sobre la cinta o molde (por ejemplo, una proteína de fusión que incluye una enzima perhidrolítica acoplada a través de un espaciador peptídico opcional a un dominio de unión peptídico) . En otra ¦modalidad, el molde dental es un molde deformable. En incluso otra modalidad, el catalizador de perhidrolasa se inmoviliza en o sobre el molde deformable luego de formar la impresión dental.

Conforme se utiliza en la presente, "acetil xilano esterasas" se refiere a una enzima (E.C. 3.1.1.72; AXEs) que cataliza la desacetilación de los xilanos acetilados y otros sacáridos acetilados.

Conforme se utilizan en la presente, los términos "cefalosporina C deacetilasa" y "cefalosporina C acetil hidrolasa" se refieren a una enzima (E.C. 3.1.1.41) que cataliza la desacetilación de cefalosporinas tales como cefalosporina C y ácido 7-aminocefalosporánico ( itsushima et al., (1995) Appl. Env. Microbiol. 61 ( 6) : 2224-2229) . En la presente se proporcionan las secuencias de aminoácidos de diversas cefalosporina C deacetilasas que tienen una actividad perhidrolitica considerable.

Conforme se utiliza en la presente, el término "Bacillus subtilis ATCC® 31954™" se refiere a una célula bacteriana depositada en la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC, por sus siglas en inglés) que tiene el número de acceso de depósito internacional ATCC® 31954™. Conforme se describe en la presente, se proporciona una enzima que tiene una actividad perhidrolasa considerable de B. subtilis ATCC® 31954™ como SEQ ID NO: 4 (véase la Publicación de la Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 2010-0041752) .

Conforme se utiliza en la presente, el término "Thermotoga marítima MSB8" se refiere a una célula bacteriana que se informa tiene actividad acetil xilano esterasa (GENBANK® NP_227893.1; véase la Publicación de la Solicitud de Patente de los EE.UU. No. 2008-0176299) . Se proporciona la secuencia de aminoácidos de la enzima que tiene actividad perhidrolasa de Thermotoga marítima MSB8 como la SEQ ID NO: 11. Se proporcionan variantes de la perhidrolasa de Thermotoga marítima MSB8 como las SEQ ID NO: 1 y 16.

Conforme se utilizan en la presente, una "molécula de ácido nucleico aislada", un "polinucleótido aislado", y un "fragmento de ácido nucleico aislado" se utilizan de forma intercambiable y se refieren a un polímero de ARN o ADN que es mono- o bicatenario y que opcionalmente contiene bases nucleotídicas sintéticas, no naturales o alteradas. Una molécula de ácido nucleico aislada en la forma de un polímero de ADN puede consistir de uno o más segmentos de ADNc, ADN genómico o ADN sintético.

El término "aminoácido" se refiere a la unidad estructural química básica de una proteína o un polipéptido. En la presente se utilizan las siguientes abreviaturas para identificar aminoácidos específicos: Conforme se utiliza en la presente, el término "alrededor de" que modifica la cantidad de un ingrediente o reactivo utilizado se refiere a la variación en la cantidad numérica que puede ocurrir, por ejemplo, a través de los procedimientos típicos de medición y manipulación de líquidos utilizados para elaborar concentrados. Conforme se utilizan en la presente, los términos "motivo distintivo" y "motivo de diagnóstico" se refieren a estructuras conservadas compartidas por una familia de enzimas que tienen una actividad definida. Se puede utilizar el motivo distintivo para definir y/o identificar la familia de enzimas estructuralmente relacionadas que tienen una actividad enzimática similar hacia una familia definida de sustratos. El motivo distintivo puede ser una única secuencia de aminoácidos contiguos o una agrupación de motivos conservados no contiguos que juntos forman el motivo distintivo. Típicamente, el o los motivos conservados se representan con una secuencia de aminoácidos. En una modalidad, las enzimas perhidrolíticas utilizadas en las presentes composiciones y métodos incluyen un motivo distintivo de la carbohidrato esterasa CE-7.

Conforme se utiliza en la presente, el término "software de análisis de secuencias" se refiere a cualquier algoritmo informático o programa de software que sea de utilidad en el análisis de secuencias de nucleótidos o de aminoácidos. El "software de análisis de secuencias" puede estar disponible a nivel comercial o puede desarrollarse independientemente. El software típico de análisis secuencias de modo no taxativo incluye la suite GCG de programas (Wisconsin Package Versión 9.0, Accelrys Software Corp., San Diego, CA) , BLASTP, BLASTN, BLASTX (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)), y DNASTAR (DNASTAR, Inc. 1228 S. Park St. Madison, WI 53715 USA), CLUSTALW (por ejemplo, versión 1.83; Thompson et al., Nucleic Acids Research, 22 (22) : 4673-4680 (1994)), y el programa FASTA que incorpora el algoritmo de Smith-Waterman (W. R. Pearson, Comput. Methods Genome Res., [Proc. Int. Symp.] (1994), Fecha de Reunión 1992, 111-20. Editor (es) : Suhai, Sandor. Editor: Plenum, New York, NY) , Vector NTI (Informax, Bethesda, MD) y Sequencher v. 4.05. Dentro del contexto de la presente solicitud, se entenderá que cuando se utiliza el software de análisis de secuencias en el análisis, los resultados del análisis se basan en los "valores por defecto" del programa en cuestión, a no ser que se especifique algo diferente. Conforme se utilizan en la presente, "valores por defecto" significan cualquier conjunto de valores o parámetros fijados por el fabricante del software que originalmente se cargan con el software cuando se inicializa por primera vez.

El término "superficie corporal" se refiere a cualquier superficie del cuerpo humano que pueda fungir como diana de un agente beneficioso, tal como un agente beneficio perácido. Los presentes métodos y composiciones se dirigen a aplicaciones y productos para el cuidado oral. Como tal, la superficie corporal incluye un material/superficie de la cavidad oral. En una modalidad, el material de la cavidad oral incluye el esmalte dental.

Conforme se utilizan en la presente, los términos "blanqueamiento dental" y "blanqueamiento de los dientes" se utilizan de forma intercambiable para referirse a mejorar el brillo (por ejemplo, blanquear) de uno o más dientes. En la presente de describen cintas blanqueadoras que incluyen ingredientes adecuados para generar enzimáticamente una cantidad eficaz de un perácido para blanquear los dientes cuando se hidrata.

Conforme se utilizan en la presente, "manchas intrínsecas" en los dientes se refieren al color resultante de los cromógenos dentro del esmalte y que yacen bajo la dentina. El color intrínseco de los dientes humanos tiende a tornarse más amarillo con la edad, debido al adelgazamiento del esmalte y al oscurecimiento de la dentina amarilla subyacente. La eliminación de una mancha intrínseca usualmente requiere el uso de peróxidos u otros agentes químicos oxidantes, que penetran el esmalte y decoloran los cromógenos internos.

A diferencia de las manchas intrínsecas, se forman "manchas extrínsecas" sobre la superficie de los dientes cuando se adhieren materiales cromogénicos exógenos al esmalte, usualmente dentro de la película natural que recubre los dientes. La mayoría de las personas acumulan cierto grado de manchas extrínsecas desagradables sobre sus dientes con el tiempo. Este proceso de coloración lo promueven factores tales como: (1) la ingesta de alimentos y bebidas que contienen taninos tales como café, té, o vino tinto; (2) el uso de productos de tabaco; y/o (3) la exposición a ciertas sustancias catiónicas (por ejemplo, estaño, hierro, y clorhexidina) . Estas sustancias tienden a adherirse a la estructura de hidroxiapatita del esmalte, lo que conlleva a decoloración de los dientes y una reducción concomitante en la blancura de los dientes. Durante un período de años, las manchas extrínsecas pueden penetrar la capa de esmalte y tener como resultado manchas intrínsecas.

Conforme se utiliza en la presente, el término "desmanchar" o "desmanchado" se refiere al proceso de eliminación de una mancha de una superficie de la cavidad oral. La o las manchas pueden ser manchas intrínsecas, manchas extrínsecas, o una combinación de ambas.

Conforme se utiliza en la presente, "cantidad eficaz de la enzima perhidrolasa" se refiere a la cantidad de la enzima perhidrolasa necesaria para lograr la actividad enzimática necesaria en la aplicación especifica. Estas cantidades eficaces son determinadas con facilidad por una persona con conocimientos básicos en la técnica y se basan en numerosos factores, tales como la variante particular de la enzima utilizada .

Conforme se utiliza en la presente, el término "fuente de peroxigeno" se refiere a los compuestos capaces de proporcionar peróxido de hidrógeno a una concentración de alrededor de 1 mM o más cuando se encuentran en una solución acuosa, lo que de modo no taxativo incluye peróxido de hidrógeno, aductos de peróxido de hidrógeno (por ejemplo, un aducto de urea-peróxido de hidrógeno (peróxido de carbamida)), perboratos, y percarbonatos . Conforme se describe en la presente, la fuente de peroxigeno en las presentes cintas blanqueadoras asume la forma de partículas granulares, donde el usuario hidrata las partículas granulares de peróxido para liberar una cantidad eficaz de peróxido de hidrógeno. Conforme se describe en la presente, la concentración de peróxido de hidrógeno proporcionada por el compuesto de peroxigeno en la formulación de reacción acuosa inicialmente es al menos 0,1 mM o más luego de combinar los componentes de reacción. En una modalidad, la concentración de peróxido de hidrógeno en la formulación de reacción acuosa es al menos 0,5 mM. En una modalidad, la concentración de peróxido de hidrógeno en la formulación de reacción acuosa es al menos 1 mM. En otra modalidad, la concentración de peróxido de hidrógeno en la formulación de reacción acuosa es al menos 10 mM. En otra modalidad, la concentración de peróxido de hidrógeno en la formulación de reacción acuosa es al menos 100 mM. En otra modalidad, la concentración de peróxido de hidrógeno en la formulación de reacción acuosa es al menos 200 mM. En otra modalidad, la concentración de peróxido de hidrógeno en la formulación de reacción acuosa es 500 mM o más. En incluso otra modalidad, la concentración de peróxido de hidrógeno en la formulación de reacción acuosa es 1000 mM o más. La relación molar de peróxido de hidrógeno a sustrato enzimático, por ejemplo, triglicérido, (H2O2: sustrato) en la formulación puede ser de alrededor de 0,002 a 20, preferentemente de alrededor de 0,1 a 10, y más preferentemente de alrededor de 0,5 a 5.

Conforme se utiliza en la presente, el término "oligosacárido" se refiere a los compuestos que contienen entre 2 y al menos 24 unidades monosacárido unidas por enlaces glicosídicos . El término "monosacárido" se refiere a un compuesto de la fórmula empírica (CH20) n, donde n=3, el esqueleto de carbono no es ramificado, cada átomo de carbono salvo uno contiene un grupo hidroxilo, y el átomo de carbono restante es un aldehido o una cetona en el átomo de carbono 1. El término "monosacárido" también se refiere a las formas hemiacetal o hemicetal intracelulares cíclicas.

Conforme se utiliza en la presente, el término "adhesivo hidratable" se refiere a un material adhesivo capaz de hidratarse. El adhesivo hidratable se mantiene esencialmente seco y no adhesivo hasta hidratarse. Luego de su hidratación, el adhesivo hidratable se torna lo suficientemente adhesivo como para adherir la cinta/película blanqueadora dental a la superficie de un diente. La película adhesiva hidratable también incluye un ingrediente blanqueador granular y, por consiguiente, luego de su hidratación, se libera una cantidad eficaz de peróxido de hidrógeno que se utiliza en la formación enzimática de un agente blanqueador perácido. La cinta/película blanqueadora típicamente es delgada (típicamente menos de 2 mm) , se conforma y dimensiona para ajustarse al interior de la cavidad oral, y es lo suficientemente flexible como para que la película pueda aplicarse y colocarse en contacto con una pluralidad de dientes y, por consiguiente, el adhesivo hidratado ayuda a mantener la película/cinta sobre la superficie dental y disponer de una cantidad de tiempo suficiente para que el agente blanqueador perácido blanquee los dientes.

Conforme se utiliza en la presente, el término "cantidad eficaz" se refiere a la cantidad de material necesaria para lograr el efecto deseado.

Conforme se utiliza en la presente, el término "esencialmente no adhesivo hasta hidratarse" se refiere a la falta de fuerza adhesiva suficiente para adherir la película blanqueadora dental a la superficie de una pluralidad de dientes antes de su hidratación. Como tal, la película adhesiva hidratable es fácil de manejar y manipular antes de su aplicación/hidratación por el usuario.

"Identidad de secuencia" significa la identidad de los aminoácidos utilizando un programa de alineación de secuencias, por ejemplo, Clustal o BLAST, por ejemplo, generalmente como se describe en Altschul SF, Gish W, Miller W, yers E , Lipman DJ, "Basic local alignment search tool", J Mol Biol (1990) 215 (3): 403-410, y Goujon M, McWilliam H, Li , Valentín F, Squizzato S, Paern J, López R, Nucleic Acids Research (2010) 38 Suppl: W695-9.

Los donantes de acilo utilizados en la presente invención, por ejemplo, para formar perácidos luego de su reacción con peróxido, se seleccionan de uno o más de (i) ácidos carboxílicos C2-i8, po ejemplo, ácidos carboxílicos C2- 6 (por ejemplo, ácido acético) , lo que incluye los ácidos carboxilicos de alquilos inferiores lineales o ramificados, opcionalmente sustituidos con hidroxi y/o alcoxi C1-4; (ii) sus ésteres hidrolizables y aceptables (por ejemplo, mono-, di-, y tri-glicéridos y sacáridos acilados) y (iii) sus combinaciones. Por ejemplo, los donantes de acilo incluyen 1 , 2 , 3-triacetoxipropano (a veces denominado en la presente triacetina o triacetato de glicerina) y sacáridos acilados, por ejemplo, sacáridos acetilados. En una modalidad particular, los ésteres con este uso pueden, por ejemplo, ser ésteres que tienen una solubilidad en agua de al menos 5 ppm a 25 °C.

Los donantes de acilo y/o enzimas pueden opcionalmente encapsularse . Existe una variedad de opciones de encapsulación ampliamente conocidas en la técnica, tanto naturales como sintéticas. Los almidones modificados y la goma arábiga son particularmente ideales por cuanto son de grado alimenticio, son relativamente poco costosos, son rápidos de disolver, y pueden adsorber niveles bastante altos de aceites líquidos. Se debe considerar cualquier impacto sobre la viscosidad final.

En algunas modalidades, los gránulos incluyen un agente antisensibilidad capaz de desensibilizar los nervios o de ocluir los túbulos dentinarios. En algunas modalidades, el agente antisensibilidad se selecciona de una fuente de iones de potasio, un silicato, una fuente de iones de estaño, un aminoácido básico, una arcilla, y una combinación de ellos. En algunas modalidades, la fuente de iones de potasio es una sal de potasio oralmente aceptable y está presente en una cantidad eficaz para reducir la sensibilidad dentinal. En algunas modalidades, la fuente de iones de potasio se selecciona de cloruro de potasio, nitrato de potasio y una combinación de ellos. En algunas modalidades, el aminoácido básico es arginina. En algunas modalidades, el aminoácido básico se selecciona de fosfato de arginina, bicarbonato de arginina, y clorhidrato de arginina. En algunas modalidades, el silicato es silicato de calcio.

Perhidrolasas CE-7 Las presentes composiciones y el presente método incluyen enzimas que tienen actividad perhidrolitica que estructuralmente se clasifican como miembros de la familia 7 de carbohidrato esterasas (familia CE-7) de enzimas (véase Coutinho, P.M., Henrissat, B. "Carbohydrate-active enzymes: an integrated datábase approach" en Recent Advances in Carbohydrate Bioengineering, H.J. Gilbert, G. Davies, B. Henrissat y B. Svensson editores, (1999) The Royal Society of Chemistry, Cambridge, pp. 3-12.). Se demostró que la familia CE-7 de enzimas es particularmente eficaz para producir ácidos peroxicarboxílieos a partir de una variedad de sustratos de ásteres de ácidos carboxilicos cuando se combinan con una fuente de peroxigeno (Patentes de los EE.UU. 7.794.378; 7.951.566; 7.723.083; y 7.964.378 y Publicación de las Solicitudes de Patente de los EE.UU. No. 2008-0176299, 2010-0087529, 2011-0081693, y 2011-0236335 otorgadas a DiCosimo et al.} cada una incorporada en la presente a titulo de referencia) .

Los miembros de la familia CE-7 incluyen las cefalosporina C deacetilasas (CAHs, por sus siglas en inglés; E.C. 3.1.1.41) y las acetil xilano esterasas (AXEs, por sus siglas en inglés; E.C. 3.1.1.72). Los miembros de la familia de las esterasas CE-7 comparten un motivo distintivo conservado (Vincent et al., J. Mol. Biol., 330:593-606 (2003) ) . Las perhidrolasas que incluyen el motivo distintivo de CE-7 ("perhidrolasas CE-7") y/o una estructura esencialmente similar se pueden utilizar en las composiciones y métodos descritos en la presente. Los medios para identificar moléculas biológicas esencialmente similares son ampliamente conocidos en la técnica (por ejemplo, protocolos de alineación de secuencias, hibridizaciones de ácidos nucleicos y/o la presencia de un motivo distintivo conservado) . En un aspecto, la perhidrolasa incluye una enzima que incluye el motivo distintivo de CE-7 y al menos 20%, preferentemente al menos 30%, más preferentemente al menos 33%, más preferentemente al menos 40%, más preferentemente al menos 42%, más preferentemente al menos 50%, más preferentemente al menos 60%, más preferentemente al menos 70%, más preferentemente al menos 80%, más preferentemente al menos 90%, y más preferentemente al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de aminoácidos con una de las secuencias proporcionadas en la presente.

Conforme se utiliza en la presente, la frase "enzima que estructuralmente se clasifica como una enzima CE-7", "perhidrolasa CE-7" o "que estructuralmente se clasifica como una enzima de la familia 7 de carbohidrato esterasas" se utiliza para referirse a las enzimas que tienen actividad perhidrolitica y que se clasifican estructuralmente como una carbohidrato esterasa CE-7. Esta familia de enzimas puede definirse mediante la presencia de un motivo distintivo (Vincent et al., supra) . El motivo distintivo de las esterasas CE-7 incluye tres motivos conservados (numeración de la posición del residuo con respecto a la secuencia de referencia SEQ ID NO: 1; una variante C277S de la perhidrolasa de Thermotoga marítima) .

Argll8-Glyll9-Glnl20; Glyl86-Xaal87-Serl88-Glnl89-Glyl90; e His303-Glu304.

Típicamente, el Xaa en la posición del residuo de aminoácidos 187 es glicina, alanina, prolina, triptófano, o treonina. Dos de los tres residuos de aminoácidos pertenecientes a la tríada catalítica están en negrillas. En una modalidad, el Xaa en la posición del residuo de aminoácidos 187 se selecciona del grupo que consiste en glicina, alanina, prolina, triptófano, y treonina.

Un análisis adicional de los motivos conservados dentro de la familia CE-7 de carbohidrato esterasas indica la presencia de un motivo conservado adicional (LXD en las posiciones de aminoácidos 272-274 de la SEQ ID NO: 1) que se puede utilizar para definir mejor una perhidrolasa perteneciente a la familia CE-7 de carbohidrato esterasas. En otra modalidad, el motivo distintivo antes definido puede incluir un (cuarto) motivo conservado adicional definido como : Leu272-Xaa273-Asp274.

El Xaa en la posición del residuo de aminoácidos 273 típicamente es isoleucina, valina, o metionina. El cuarto motivo incluye el residuo de ácido aspártico (negrilla) que pertenece a la tríada catalítica (Serl88-Asp274-His303) .

Las perhidrolasas CE-7 pueden asumir la forma de proteínas de fusión que tienen al menos un componente peptídico que tiene afinidad hacia al menos una superficie corporal. En una modalidad, todas las alineaciones utilizadas para determinar si una perhidrolasa diana (proteina de fusión) incluye el motivo distintivo de CE-7 se basan en la secuencia de aminoácidos de la enzima perhidrolítica sin el componente peptídico que tiene la afinidad hacia una superficie corporal.

Se puede utilizar un número de algoritmos de alineación global ampliamente conocidos (es decir, software de análisis de secuencias) para alinear dos o más secuencias de aminoácidos que representan las enzimas que tienen actividad perhidrolasa para determinar si la enzima consiste del presente motivo distintivo. Se comparan la o las secuencias alineadas con la secuencia de referencia (SEQ ID NO: 1) para determinar la existencia del motivo distintivo. En una modalidad, se utiliza una alineación CLUSTAL (tal como CLUSTAL ) utilizando una secuencia de aminoácidos de referencia (como se utiliza en la presente, la secuencia de perhidrolasas (SEQ ID NO: 1)) para identificar las perhidrolasas que pertenecen a la familia de las esterasas CE-7. La numeración relativa de los residuos de aminoácidos conservados se basa en la numeración de residuos de la secuencia de aminoácidos de referencia para dar razón de las pequeñas inserciones o eliminaciones (por ejemplo, típicamente cinco aminoácidos de menos) dentro de la secuencia alineada.

Algunos ejemplos de otros algoritmos adecuados que se pueden utilizar para identificar las secuencias que incluyen el presente motivo distintivo (cuando se comparan con la secuencia de referencia) incluyen, de modo no taxativo, Needleman y Wunsch (J. Mol. Biol. 48, 443-453 (1970); una herramienta de alineación global) y Smith-Waterman (J. Mol. Biol. 147:195-197 (1981); una herramienta de alineación local) . En una modalidad, se aplica una alineación de Smith-Waterman utilizando los parámetros por defecto. Un ejemplo de parámetros por defecto adecuados incluye el uso de una matriz de evaluación BLOSUM62 con penalizacion de la apertura de GAP = 10 y una penalizacion de la extensión de GAP = 0,5.

En una modalidad, las perhidrolasas adecuadas incluyen las enzimas que incluyen el motivo distintivo de CE-7 y al menos 20%, preferentemente al menos 30%, 33%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de aminoácidos con la SEQ ID NO: 1.

Algunos ejemplos de las carbohidrato esterasas CE-7 adecuadas que tienen actividad perhidrolítica incluyen, de modo no taxativo, las enzimas que tienen una secuencia de aminoácidos tal como las SEQ ID NO: 1, y 4-28. En una modalidad, la enzima incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en 1, 10, 11, 15, y 16.

Conforme se utiliza en la presente, el término "variante de CE-7", "variante de perhidrolasa" o "variante" se refiere a las perhidrolasas CE-7 que tienen una modificación genética que tiene como resultado al menos una adición, eliminación, y/o sustitución de aminoácidos cuando se comparan con la enzima correspondiente (típicamente la enzima de tipo silvestre) de la que se deriva la variante; siempre que se conserven el motivo distintivo de CE-7 y la actividad perhidrolítica asociada. También se pueden utilizar perhidrolasas de la variante CE-7 en las presentes composiciones y métodos. Se incluyen ejemplos de las variantes CE-7 como las SEQ ID NO: 1, 15, 16, 17, 18, 19, y 20. En una modalidad, las variantes pueden incluir las SEQ ID NO: 1 y 16.

Una persona con experiencia en la técnica reconocerá que también se pueden utilizar secuencias de perhidrolasas CE-7 esencialmente similares (conservando los motivos distintivos) en las presentes composiciones y métodos. En una modalidad, se definen secuencias esencialmente similares por su capacidad de hibridización, bajo condiciones sumamente rigurosas, con las moléculas de ácido nucleico asociadas con las secuencias ilustradas en la presente. En otra modalidad, se pueden utilizar algoritmos de alineación de secuencias para definir enzimas esencialmente similares en función de la identidad porcentual con las secuencias de ADN o aminoácidos proporcionadas en la presente.

Conforme se utiliza en la presente, una molécula de ácido nucleico se "híbrida" en' otra molécula de ácido nucleico, tal como un ADNc, un ADN genómico, o un ARN, cuando una cadena única de la primera molécula puede hibridar con la otra molécula bajo condiciones apropiadas de temperatura y fuerza iónica de la solución. Las condiciones de hibridación y lavado son ampliamente conocidas y se ilustran en Sambrook, J. y Russell, D. , T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Tercera Edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor (2001). Las condiciones de temperatura y fuerza iónica determinan la "severidad" de la hibridación. Se pueden ajustar las condiciones de severidad para identificar moléculas moderadamente similares, tales como las secuencias homologas de organismos lejanamente relacionados, a moléculas de alta similitud, tales como los genes que duplican enzimas funcionales de organismos estrechamente relacionados. Los lavados Post-hibridación típicamente determinan las condiciones de severidad. Un conjunto de condiciones preferentes utiliza una serie de lavados partiendo de SSC 6X, SDS al 0,5% a temperatura ambiente durante 15 minutos, luego se repite con SSC 2X, SDS al 0,5% a 45°C durante 30 minutos, y luego se repite dos veces con SSC 0,2X, SDS al 0,5% a 50°C durante 30 minutos. Un conjunto más preferente de condiciones utiliza temperaturas superiores en las que los lavados son idénticos a los que anteceden, excepto que se incrementa la temperatura de los últimos dos lavados de 30 minutos en SSC 0,2X, SDS al 0,5% a 60°C. Otro conjunto preferente de condiciones de hibridación de alta severidad es SSC 0,1X, SDS al 0,1%, 65°C y lavado con SSC 2X, SDS al 0,1% seguido de un lavado final de SSC 0,1X, SDS al 0,1%, 65°C.

La hibridación requiere que los dos ácidos nucleicos contengan secuencias complementarias aunque, dependiendo de la severidad de la hibridación, son posibles incompatibilidades entre bases. La severidad apropiada de la hibridación de ácidos nucleicos depende de la longitud de los ácidos nucleicos y del grado de complementación, variables ampliamente conocidas en la técnica. Mientras mayor sea el grado de similitud u homología entre dos secuencias de nucleótidos, mayor será el valor de Tzr¡ de los híbridos de ácidos nucleicos que tienen esas secuencias. La estabilidad relativa (correspondiente a un Tm superior) de las hibridaciones de ácidos nucleicos disminuye en el siguiente orden: ARN: ARN, ADN: ARN, ADN: ADN. En los híbridos de más de 100 nucleótidos de longitud, se han derivado ecuaciones para el cálculo de Tm (Sambrook y Russell, supra) . En las hibridaciones con ácidos nucleicos más cortos, es decir, oligonucleótidos , la posición de las incompatibilidades asume más importancia, y la longitud del oligonucleótido determina su especificidad (Sambrook y Russell, supra) . En un aspecto, la longitud de un ácido nucleico hibridable es al menos alrededor de 10 nucleótidos. Preferentemente, una longitud mínima de un ácido nucleico hibridable es de al menos alrededor de 15 nucleótidos en longitud, más preferentemente al menos alrededor de 20 nucleótidos en longitud, incluso más preferentemente al menos 30 nucleótidos en longitud, incluso más preferentemente al menos 300 nucleótidos en longitud, y más preferentemente al menos 800 nucleótidos en longitud. Además, una persona con experiencia en la técnica apreciará que, de ser necesario, se pueden ajustar la temperatura y la concentración de sales de la solución de lavado de acuerdo con factores tal como la longitud de la sonda.

Conforme se utiliza en la presente, el término "identidad porcentual" es una relación entre dos o más secuencias de polipéptidos o dos o más secuencias de polinucleótidos , que se determina mediante la comparación de las secuencias. En la técnica, "identidad" también significa el grado de relevancia de secuencias entre las secuencias de polipéptidos o polinucleótidos, según sea el caso, determinado por la correspondencia entre las cadenas de estas secuencias. Se pueden calcular la "identidad" y la "similitud" con facilidad mediante métodos conocidos, lo que de modo no taxativo incluye los descritos en: Computational Molecular Biology (Lesk, A. M. , editores) Oxford University Press, NY (1988); Biocomputing : Informatics y Genome Projects (Smith, D. W., editor) Academic Press, NY (1993); Computer Analysis of Sequence Data, Parte I (Griffin, A. M . , y Griffin, H. G., editores) Humana Press, NJ (1994); Sequence Analysis in Molecular Biology (von Heinje, G., editor) Academic Press (1987) ; y Sequence Analysis Primer (Gribskov, M. y Devereux, J. , editores) Stockton Press, NY (1991). Los métodos para determinar la identidad y similitud se codifican en programas informáticos a la disposición del público. Se pueden llevar a cabo alineaciones de secuencias y cálculos de la identidad porcentual utilizando el programa Megalign de la suite de cálculo bioinformática LASERGENE (DNASTAR Inc., Madison, WI) , el programa AlignX de Vector NTI v. 7.0 (Informax, Inc., Bethesda, MD) , o la Suite de Software Abierto EMBOSS (EMBL-EBI; Rice et al., Trends in Genetics 16, (6) :276-277 (2000)) . Se puede llevar a cabo la alineación múltiple de las secuencias utilizando el método CLUSTAL (tal como CLUSTALW; por ejemplo, versión 1.83) de alineación (Higgins y Sharp, CABIOS, 5:151-153 (1989); Higgins et al., Nucleic Acids Res. 22:4673-4680 (1994); y Chenna et al., Nucleic Acids Res 31 (13) : 3497-500 (2003)), a la disposición en el Laboratorio Europeo de Biología Molecular a través del Instituto Europeo de Bioinformática) con los parámetros por defecto. Los parámetros adecuados en las alineaciones de proteínas CLUSTALW incluyen una penalización de Existencia de GAP=15, una extensión de GAP = 0,2, una matriz = Gonnet (por ejemplo, Gonnet250), un ENDGAP de la proteína = -1, un GAPDIST de la proteína =4, y un KTUPLE=1. En una modalidad, se utiliza una alineación rápida o lenta con los ajustes por defecto y se prefiere utilizar una alineación lenta. Alternativamente, los parámetros que utilizan el método CLUSTALW (por ejemplo, versión 1.83) se pueden modificar para también usar KTUPLE =1, PENALIZACIÓN DE GAP =10, extensión de GAP =1, matriz = BLOSUM (por ejemplo, BLOSUM64), VENTANA=5, y PRINCIPALES DIAGONALES GUARDADAS=5.

En un aspecto, las moléculas de ácido nucleico aisladas adecuadas codifican un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos alrededor de 20%, preferentemente al menos 30%, 33%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ó 99% idéntica a las secuencias de aminoácidos documentadas en la presente. En otro aspecto, las moléculas de ácido nucleico aisladas adecuadas codifican un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos alrededor de 20%, preferentemente al menos 30%, 33%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ó 99% idéntica a las secuencias de aminoácidos documentadas en la presente. Las moléculas de ácido nucleico adecuadas no sólo tienen las homologías que anteceden, sino que también típicamente codifican un polipéptido que tiene alrededor de 210 a 340 aminoácidos de longitud, alrededor de 300 a alrededor de 340 aminoácidos, preferentemente alrededor de 310 a alrededor de 330 aminoácidos, y más preferentemente alrededor de 318 a alrededor de 325 aminoácidos en longitud, donde cada polipéptido se caracteriza por tener actividad perhidrolítica .

Perhidrolasas Diana Conforme se utilizan en la presente, los términos "perhidrolasa diana" y "enzima diana que tiene actividad perhidrolítica" se refieren a una proteína de fusión que incluye al menos una enzima perhidrolítica (de tipo silvestre o una variante de la misma) fusionada/acoplada a al menos un componente peptídico que tiene afinidad hacia una superficie diana, preferentemente una superficie corporal diana. La enzima perhidrolítica dentro de la perhidrolasa diana puede ser cualquier carbohidrato esterasa CE-7 que tenga actividad perhidrolítica. La perhidrolasa CE-7 puede identificarse por la presencia del motivo distintivo de CE-7 que se alinea con una secuencia de referencia SEQ ID NO: 1, donde el motivo distintivo incluye: i) un motivo RGQ en las posiciones correspondientes a las posiciones 118-120 de la SEQ ID NO: 1; ii) un motivo GXSQG en las posiciones correspondientes a las posiciones 186-190 de la SEQ ID NO: 1; y iii) un motivo HE en las posiciones correspondientes a las posiciones 303-304 de la SEQ ID NO: 1.

En una modalidad, las enzimas perhidroliticas pueden ser aquellas que tienen una secuencia de aminoácidos que es al menos alrededor de 20%, preferentemente al menos 30%, 33%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ó 99% idéntica a cualquiera de las secuencias de aminoácidos documentadas en la presente (es decir, las SEQ ID NO 1, y 4-28) .

En otra modalidad, la proteina de fusión incluye una enzima perhidrolitica que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1, y 4-28.

Conforme se utilizan en la presente, los términos "componente peptidico", "componente peptidico que tiene afinidad hacia una superficie de la cavidad oral", "dominio de unión a la cavidad oral", y "OCBD" se refieren al componente de la proteína de fusión que no forma parte de la enzima perhidrolítica que incluye al menos un polímero de dos o más aminoácidos unido por un enlace peptídico; donde el componente posee afinidad hacia la superficie diana de la cavidad oral. En un aspecto preferente, el OCBD posee afinidad hacia al esmalte dental.

En una modalidad, el componente peptídico que tiene afinidad hacia una superficie corporal puede ser un anticuerpo, un fragmento de un anticuerpo Fab, un anticuerpo de un fragmento variable de cadena única (scFv) , un anticuerpo de Camelidae (Muyldermans, S., Rev. Mol. Biotechnol. (2001) 74:277-302), una proteína de despliegue de andamios no anticuerpo (Hosse et al., Prot. Sci. (2006) 15(1) : 14-27 y Binz, H. et al. (2005) Nature Biotechnology 23, 1257-1268 para una revisión de diversos enfoques asistidos con andamios) o un polipéptido monocatenario que carece de un pliegue de inmunoglobulina . En otro aspecto, el componente peptídico que tiene afinidad hacia el tejido/superficie de la cavidad oral (tal como el esmalte dental) es un péptido monocatenario que carece de un pliegue de inmunoglobulina.

El componente peptídico que tiene afinidad hacia una superficie de la cavidad oral puede separarse de la enzima perhidrolitica con un enlazador peptidico opcional. Ciertos enlazadores/espaciadores de péptidos tienen una longitud de 1 a 100 o de 1 a 50 aminoácidos. En algunas modalidades, los espaciadores peptidicos tienen una longitud de alrededor de 1 a alrededor de 25, de 3 a alrededor de 40, o de 3 a alrededor de 30 aminoácidos. En otras modalidades, son espaciadores que tienen una longitud de alrededor de 5 a alrededor de 20 aminoácidos. Se pueden utilizar múltiples enlazadores peptidicos. En una modalidad, al menos un enlazador peptidico está presente y puede repetirse hasta 10 veces.

En una modalidad, el péptido de fusión incluye al menos un péptido que se une a una superficie de la cavidad oral seleccionado del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 178-197.

En otra modalidad, la superficie diana es un material que forma parte del empaque, tal como la cinta blanqueadora o la capa dorsal polimérica (cuando se utiliza una capa dorsal polimérica a la que se aplica el adhesivo hidratable) y/o el método de aplicación a la cavidad oral. El componente peptidico se selecciona por su afinidad hacia un material o materiales en uso tales como polímeros, plásticos y películas. El diseño de la proteína de fusión perhidrolasa diana hace posible la liberación controlada y eliminación de la perhidrolasa del usuario manteniéndola sobre un dispositivo removióle tal como, de modo no taxativo, un molde o cinta dental.

El componente peptidico que tiene afinidad hacia una superficie de la cavidad oral puede separarse de la perhidrolasa CE-7 con un enlazador peptidico opcional. Ciertos enlazadores/espaciadores de péptidos tienen una longitud de 1 a 100 o de 1 a 50 aminoácidos. En algunas modalidades, los espaciadores peptidicos tienen una longitud de alrededor de 1 a alrededor de 25, de 3 a alrededor de 40, o de 3 a alrededor de 30 aminoácidos. En otras modalidades, son espaciadores que tienen una longitud de alrededor de 5 a alrededor de 20 aminoácidos. Se pueden utilizar múltiples enlazadores peptidicos. Se proporcionan algunos ejemplos de enlazadores peptidicos como las SEQ ID NO: 164 - 177.

Como tales, los ejemplos de perhidrolasas CE-7 diana pueden incluir, de modo no taxativo, cualquiera de las perhidrolasas CE-7 que tienen una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO 1, y 4-28 acoplada a un componente peptidico que posee afinidad hacia una superficie de la cavidad oral. En una modalidad preferente, los ejemplos de perhidrolasas diana pueden, de modo no taxativo, incluir cualquiera de las perhidrolasas CE-7 que tienen una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO 1, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, y 28 acoplada a uno o más péptidos de unión a la superficie corporal con afinidad hacia una superficie de la cavidad oral (opcionalmente a través de un espaciador peptídico) . En una modalidad preferente, la perhidrolasa diana incluye una perhidrolasa CE-7 que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 y 16.

En una modalidad, la perhidrolasa es una perhidrolasa CE-7 en la forma de una proteina de fusión que tiene la siguiente estructura general: PAH- [L] -OCBD u OCBD- [L] y-PAH donde PAH es la enzima que tiene actividad perhidrolítica, por ejemplo, que tiene un motivo distintivo de CE-7, por ejemplo, la SEQ ID NO: 1, y OCBD es un componente peptídico que tiene afinidad hacia una superficie de la cavidad oral; y L es un enlazador opcional; e y es un número entero que oscila entre 0 y 10. En una modalidad, el enlazador (L) está presente y es un enlazador peptídico que tiene una longitud que oscila entre 1 y 100 aminoácidos.

Por ejemplo, la SEQ ID NO: 2 es una proteína de fusión que tiene una secuencia de perhidrolasas de la SEQ ID NO: 1 acoplada a un dominio dirigido al extremo C con una afinidad hacia los tejidos orales.

Las perhidrolasas utilizadas en los productos y métodos de la invención pueden asumir la forma de una sal libre protegida (por ejemplo, acetilada) .

En otra modalidad, la superficie diana es un material que forma parte del empaque y o que se libera en la cavidad oral. El componente peptidico se selecciona por su afinidad hacia uno o más de los materiales utilizados tales como polímeros, plásticos y películas. El diseño de la proteína de fusión perhidrolasa diana CE-7 hace posible la liberación controlada y eliminación de la perhidrolasa del usuario manteniéndola sobre un dispositivo removible tal como un molde o cinta dental.

Afinidad de Unión El componente peptidico que tiene afinidad hacia la superficie de la cavidad oral incluye una afinidad de unión a una superficie de la cavidad oral de 10"5 molar (M) o menos. En ciertas modalidades, el componente peptidico es uno o más péptidos de unión y/o dominios de unión a la superficie de la cavidad oral que tienen una afinidad de unión de 10~5 molar (M) o menos hacia el esmalte dental. En algunas modalidades, los péptidos o dominios de unión tienen un valor de afinidad de unión de 10"5 M o menos en la presencia de una sal al menos alrededor de 50 - 500 mM. El término "afinidad de unión" se refiere a la fuerza de la interacción de un péptido de unión con su sustrato respectivo. Se puede definir o medir la afinidad de unión en términos de la constante de disociación del péptido de unión ("KD") , o de "MB50".

"KD" corresponde a la concentración del péptido a la que se ocupa a medias el sitio de unión en la diana, es decir, cuando la concentración de la diana con el péptido unido (material diana unido) es igual a la concentración de la diana sin el péptido unido. Mientras menor sea la constante de disociación, más estrecha será la unión del péptido. Por ejemplo, un péptido con una constante de disociación nanomolar (nM) se une más estrechamente que un péptido con una constante de disociación micromolar (µ?) . Ciertas modalidades de la invención tienen un valor de KD de 10~5 o menos .

"MB50" se refiere a la concentración del péptido de unión que genera una señal que es 50% de la señal máxima obtenida en un ensayo de unión a base de ELISA. Véase, por ejemplo, el Ejemplo 3 de la Publicación de la Solicitud de Patente de los EE.UU. 2005/022683; aquí incorporado a título de referencia. El MB50 proporciona una indicación de la fuerza de la interacción o afinidad de unión de los componentes del complejo. Mientras menor sea el valor de MB50, mayor será, es decir, "mejor" será la interacción del péptido con su sustrato correspondiente. Por ejemplo, un péptido con un MB50 nanomolar (nM) se une más más estrechamente que un péptido con un MB50 micromolar (µ?) . Ciertas modalidades de la invención tienen un valor de MB50 de 10~5 o menos.

En algunas modalidades, el componente peptidico que tiene afinidad hacia una superficie de la cavidad oral puede tener una afinidad de unión, medida mediante los valores de KD o MB50, inferior o igual a alrededor de 10~5 M, inferior o igual a alrededor de 10~6 M, inferior o igual a alrededor de 10~7 M, inferior o igual a alrededor de 10~8 M, inferior o igual a alrededor de 10"9 M, o inferior o igual a alrededor de 10"10 M.

En algunas modalidades, los péptidos que se unen a la superficie de la cavidad oral y/o los dominios que se unen a la superficie de la cavidad oral pueden tener una afinidad de unión, medida mediante los valores de KD o MB50, inferior o igual a alrededor de 10"5 M, inferior o igual a alrededor de 10~6 M, inferior o igual a alrededor de 10~7 M, inferior o igual a alrededor de 1CT8 M, inferior o igual a alrededor de 10~9 , o inferior o igual a alrededor de 10~10 M.

Conforme se utiliza en la presente, el término "afinidad fuerte" se refiere a una afinidad de unión que tiene un valor de KD o MB50 inferior o igual a alrededor de 10"5 M, preferentemente inferior o igual a alrededor de 10~6 , más preferentemente inferior o igual a alrededor de 10~7 M, más preferentemente inferior o igual a alrededor de 10 M, inferior o igual a alrededor de 10"9 M, o más preferentemente inferior o igual a alrededor de 10~10 M.

Polvos Enzimáticos En algunas modalidades, las composiciones para el cuidado personal pueden utilizar un catalizador enzimático en la forma de un polvo enzimático estable. Los métodos para la preparación y estabilización de formulaciones que incluyen un polvo enzimático se describen en las Publicaciones de las Solicitudes de Patente de los EE.UU. No. 2010-0086534 y 2010-0086535.

En una modalidad, la enzima puede estar presente en el polvo enzimático en una cantidad en un intervalo de alrededor de 0,5 por ciento en peso (% en peso) a alrededor de 75 % en peso, por ejemplo, de 1 % en peso a alrededor de 60 % en peso, en función del peso seco del polvo enzimático. Un intervalo porcentual en peso preferente de la enzima en el polvo enzimático/mezcla secada por aspersión se ubica entre alrededor de 10 % en peso y 50 % en peso, y un intervalo porcentual en peso más preferente de la enzima en el polvo enzimático/mezcla secada por aspersión se ubica entre alrededor de 20 % en peso y 33 % en peso.

En una modalidad, el polvo enzimático puede además incluir un excipiente. En un aspecto, el excipiente se incluye en una cantidad en un intervalo de entre alrededor de 95 % en peso a alrededor de 25 % en peso en función del peso seco del polvo enzimático. Un intervalo % en peso preferente del excipiente en el polvo enzimático se ubica entre alrededor de 90 % en peso y 50 % en peso, y un intervalo % en peso más preferente del excipiente en el polvo enzimático se ubica entre alrededor de 80 % en peso y 67 % en peso.

En una modalidad, el excipiente utilizado para preparar un polvo enzimático puede ser un excipiente oligosacárido . En una modalidad, el excipiente oligosacárido tiene un peso molecular promedio numérico de al menos alrededor de 1250 y un peso molecular promedio ponderado de al menos alrededor de 9000. En algunas modalidades, el excipiente oligosacárido tiene un peso molecular promedio numérico de al menos alrededor de 1700 y un peso molecular promedio ponderado de al menos alrededor de 15000. Algunos oligosacáridos específicos pueden incluir, de modo no taxativo, maltodextrina, xilano, mañano, fucoidano, galactomanano, quitosana, rafinosa, estaquiosa, pectina, insulina, levano, graminano, amilopectina, sacarosa, lactulosa, lactosa, maltosa, trehalosa, celobiosa, nigerotriosa, maltotriosa, melezitosa, maltotriosa, rafinosa, cestosa, y sus combinaciones. En una modalidad preferente, el excipiente oligosacárido es maltodextrina. Los excipientes a base de oligosacáridos también pueden incluir, de modo no taxativo, éteres de celulosa no iónicos solubles en agua, tales como hidroximetilcelulosa e hidroxipropilmetilcelulosa, y sus combinaciones. En incluso otra modalidad, el excipiente puede seleccionarse de modo no taxativo a partir de uno o más de los siguientes compuestos: trehalosa, lactosa, sacarosa, manitol, sorbitol, glucosa, celobiosa, -ciclodextrina, y carboximetilcelulosa .

Sustratos de Esteres / Donantes de Acilo Adecuados Los sustratos de ésteres de ácidos carboxilicos adecuados pueden incluir los ésteres que tienen la fórmula: (a) uno o más éstéres que tienen la estructura [X]mR5 donde X es un grupo éster de la fórmula R6C(0)0; R6 es un grupo hidrocarbilo Cl a C7 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo o un grupo alcoxi Cl a C4, donde R6 opcionalmente incluye uno o más enlaces éter cuando R6 es C2 a C7; R5 es un grupo hidrocarbilo Cl a C6 lineal, ramificado, o cíclico o un grupo heteroaromático cíclico de 5 miembros o un grupo aromático o heteroaromático cíclico de seis miembros opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo; donde cada átomo de carbono en R5 individualmente incluye no más de un grupo hidroxilo o no más de un grupo éster o grupo ácido carboxilico, y donde R5 opcionalmente incluye uno o más enlaces éter; m es un número entero que oscila entre 1 y el número de átomos de carbono en R5, donde los uno o más ésteres tienen una solubilidad en agua de al menos 5 ppm a 25 °C; o (b) uno o más glicéridos que tienen la estructura donde Ri es un alquilo Cl a C7 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido con un hidroxilo o un grupo alcoxi Cl a C4 y R3 y R4 individualmente son H o RiC(O); o (c) uno o más ésteres de la fórmula donde Rx es un alquilo Cl a C7 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido con un hidroxilo o un grupo alcoxi Cl a C4 y R2 es un alquilo Cl a CIO de cadena recta o ramificada, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, alquilheteroarilo, heteroarilo, (CH2CH20)n, o (CH2CH (CH3) -0) nH y n es l a lO; o (d) uno o más monosacáridos acetilados, disacáridos acetilados, o polisacáridos acetilados; o (e) cualquier combinación de (a) a (d) .

Los sustratos adecuados también pueden incluir incluir uno o más sacáridos acilados seleccionados del grupo que consiste en mono-, di-, y polisacáridos acetilados. En otra modalidad, los sacáridos acilados se seleccionan del grupo que consiste en xilano acetilado; fragmentos de xilano acetilado; xilosa acetilada (tal como tetraacetato de xilosa) ; glucosa acetilada (tal como a-D-pentaacetato de glucosa; ß-D-pentaacetato de glucosa; 2, 3, 4 , 6-tetraacetato de l-tio-p-D-glucosa) ; pentaacetato de ß-D-galactosa ; hexaacetato de sorbitol; octaacetato de sacarosa; 1,2,3,5-tetraacetato de ß-D-ribofuranosa; 1, 2, 3, 4-tetraacetato de ß-D-ribofuranosa; tri-O-acetil-D-galactal ; tri-O-acetil-D-glucal; tetraacetato de ß-D-xilofuranosa, pentaacetato de ß-D-glucopiranosa; 1 , 2 , 3 , -tetraacetato de ß-D-glucopiranosa; 2 , 3 , 4 , 6-tetraacetato de ß-D-glucopiranosa; 2-acetamido-2-desoxi-1, 3, 4, 6-tetraacetil^-D-glucopiranosa ; 2-acetamido-2-desoxi-3, 4, 6-triacetil-l-cloruro-a-D-glucopiranosa; pentaacetato de ß-D-manopiranosa, y celulosa acetilada. En una modalidad preferente, el sacárido acetilado se selecciona del grupo que consiste en 1, 2, 3, 5-tetraacetato de ß-D-ribofuranosa; tri-O-acetil-D-galactal; tri-O-acetil-D-glucal; octaacetato de sacarosa; y celulosa acetilada.

En otra modalidad, los sustratos adicionales adecuados pueden también incluir 5-acetoximetil-2-furaldehido; 3,4-diacetoxi-l-buteno; ácido 4-acetoxibenzoico; acetato de vainillina; acetato de éter metílico de propilenglicol ; lactato de metilo; lactato de etilo; glicolato de metilo; glicolato de etilo; metoxiacetato de metilo; metoxiacetato de etilo; 3-hidroxibutirato de metilo; 3-hidroxibutirato de etilo; y 2-acetil citrato de trietilo.

En otra modalidad, se seleccionan los sustratos adecuados del grupo que consiste en: monoacetina; diacetina; triacetina; monopropionina; dipropionina; tripropionina; monobutirina; dibutirina; tributirina; pentaacetato de glucosa; tetraacetato de xilosa; xilano acetilado; fragmentos de xilano acetilado; 1 , 2 , 3 , 5-tetraacetato de ß-D-ribofuranosa; tri-O-acetil-D-galactal; tri-O-acetil-D-glucal; los monoésteres o diésteres de 1 , 2-etanodiol ; 1,2-propanodiol; 1 , 3-propanodiol ; 1 , 2-butanodiol ; 1, 3-butanodiol; 2 , 3-butanodiol; 1 , -butanodiol; 1 , 2-pentanodiol ; 2,5-pentanodiol; 1, 5-pentanodiol; 1, 6-pentanodiol; 1,2-hexanodiol; 2 , 5-hexanodiol ; 1 , 6-hexanodiol ; y sus combinaciones. En otra modalidad, el sustrato es un poliol Cl a C6 que incluye uno o más grupos éster. En una modalidad preferenté, uno o más de los grupos hidroxilo del poliol Cl a C6 se sustituyen con uno o más grupos acetoxi (tales como diacetato de 1, 3-propanodiol; diacetato de 1, 2-propanodiol; diacetato de 1, 4-butanodiol; diacetato de 1, 5-pentanodiol, etc.)- En otra modalidad, el sustrato es diacetato de propilenglicol (PGDA) , diacetato de etilenglicol (EGDA) , o una combinación de ellos.

En otra modalidad, se seleccionan los sustratos adecuados del grupo que consiste en monoacetina, diacetina, triacetina, monopropionina, dipropionina, tripropionina, monobutirina, dibutirina, y tributirina. En incluso otro aspecto, el se selecciona el sustrato del grupo que consiste en diacetina y triacetina. En una modalidad más preferente, el sustrato adecuado incluye triacetina.

El éster de ácido carboxilico está presente a una concentración suficiente para producir la concentración deseada de ácido peroxicarboxilico luego de la perhidrólisis catalizada enzimáticamente . El éster de ácido carboxilico no tiene que ser totalmente soluble en la formulación de reacción, pero tiene una solubilidad suficiente para permitir la conversión del éster con el catalizador de perhidrolasa en el correspondiente ácido peroxicarboxilico. El éster de ácido carboxilico está presente en la formulación de reacción a una concentración de 0,05 % en peso a 40 % en peso de la formulación de reacción, preferentemente a una concentración de 0,1 % en peso a 20 % en peso de la formulación de reacción, y más preferentemente a una concentración de 0,5 % en peso a 10 % en peso de la formulación de reacción.

La fuente de peroxigeno se proporciona en la forma de gránulos depositados en o sobre la película adhesiva hidratable y puede incluir aductos de peróxido de hidrógeno (por ejemplo, un aducto de urea-peróxido de hidrógeno (peróxido de carbamida) ) sales de perborato, sales de percarbonato y sales de peróxido. La concentración del compuesto de peroxigeno en la formulación de reacción puede oscilar entre 0, 0033 % en peso y alrededor de 50 % en peso, preferentemente entre 0,033 % en peso y alrededor de 40 % en peso, más preferentemente entre 0,1 % en peso y alrededor de 30 % en peso.

Se ha documentado que muchos catalizadores de perhidrolasas (células completas, células completas permeables, y extractos de células completas parcialmente purificadas) poseen actividad catalasa (EC 1.11.1.6). Las catalasas catalizan la conversión de peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua. En un aspecto, el catalizador de perhidrólisis carece de actividad catalasa. En otro aspecto, se puede agregar un inhibidor de catalasas a la formulación de reacción. De ser necesario, una personal con experiencia en la técnica puede ajustar la concentración del inhibidor de catalasas. La concentración del inhibidor de catalasas típicamente oscila entre 0,1 mM y alrededor de 1 M; preferentemente entre alrededor de 1 mM y alrededor de 50 mM; más preferentemente entre alrededor de 1 mM y alrededor de 20 mM.

En otra modalidad, el catalizador enzimático carece de una actividad catalasa considerable o puede diseñarse para disminuir o erradicar la actividad catalasa. La actividad catalasa en una célula huésped puede regularse de forma descendente o erradicarse mediante la alteración de la expresión del o de los genes responsables de la actividad catalasa utilizando técnicas ampliamente conocidas, lo que de modo no taxativo incluye la mutagénesis con transposones, la expresión antisentido de ARN, la mutagénesis dirigida, y la mutagénesis aleatoria.

La concentración de ácido peroxicarboxílico generada (por ejemplo, ácido peracético) por la perhidrólisis de al menos un éster de ácido carboxilico es de al menos alrededor de 0,1 ppm, preferentemente al menos 0,5 ppm, 1 ppm, 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 500 ppm, 700 ppm, 1000 ppm, 2000 ppm, 5000 ppm ó 10.000 ppm de perácido a los 10 minutos, preferentemente a los 5 minutos, de iniciar la reacción de perhidrólisis . Evidentemente, una persona con experiencia en la técnica puede ajustar los componentes de reacción para lograr la concentración de perácido deseada.

En un aspecto, el tiempo de reacción necesario para producir la concentración de perácido deseada no es superior a alrededor de dos horas, preferentemente no es superior a alrededor de 30 minutos, más preferentemente no es superior a alrededor de 10 minutos, y más preferentemente es de alrededor de 5 minutos o menos. En otros aspectos, se pone en contacto una superficie de la cavidad oral con el ácido peroxicarboxllico formado de acuerdo con los procesos descritos en la presente a los 5 minutos de hidratar y combinar los componentes de reacción. En una modalidad, se pone en contacto el esmalte dental con el ácido peroxicarboxllico producido con los procesos y composiciones descritos en la presente luego de alrededor de 5 minutos a alrededor de 24 horas o luego de alrededor de 5 minutos a 2 horas de combinar (mediante hidratación por el usuario) los componentes de reacción presentes en o sobre la cinta/pelicula blanqueadora.

Método de Ensayo por HPLC para Determinar la Concentración de Ácido Peroxicarboxllico y Peróxido de Hidrógeno Se puede utilizar una variedad de métodos analíticos para analizar los reactivos y productos, lo que de modo modo taxativo incluye titulación, cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC, por sus siglas en inglés), cromatografía de gases (GC, por sus siglas en inglés), espectrometría de masas (MS, por sus siglas en inglés) , electroforesis capilar (CE, por sus siglas en inglés), el procedimiento analítico descrito por U. Pinkernell et al., (Anal. Chem., 69 (17 ) : 3623-3627 (1997)), y el ensayo con 2,2'-azino-bis ( 3-etilbenzotiazolina) -6-sulfonato (ABTS) (U. Pinkernell et. al. Analyst, 122: 567-571 (1997) y Dinu et. al. Adv. Funct. Mater., 20: 392-398 (2010)) que se describe en los presentes ejemplos.

Modalidades Ilustrativas: Modalidad 1. Una cinta blanqueadora dental (Cinta 1) que incluye una película adhesiva hidratable con un primer lado y un segundo lado, donde el primer lado tiene un ingrediente blanqueador granular adherido al mismo, donde la cinta incluye, en o sobre la película o en los gránulos adheridos al primer lado de la película, (i) una proteína que tiene actividad perhidrolítica y que contiene el motivo distintivo de un miembro de la familia 7 de carbohidrato esterasas; (ii) un donante de acilo, por ejemplo, seleccionado de ácido carboxilico ésteres y compuestos de acilo, Modalidad 2. La cinta 1 donde la proteína que tiene actividad perhidrolasa incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada de: a ) MAFFDLPLEELKKYRPERYEEKDFDEFWEETLAESEKFPLDPVFERMES HLKTVEAYDVTFSGYRGQRIKGWLLVPKLEEEKLPCVVQYIGYNGGRGFPHDWLFWPS GY ICFVMDTRGQGSGWLKGDTPDYPEGPVDPQYPGFMTRGILDPRTYYYRRVFTDAVRAVEAA ASFPQVDQERIVIAGGSQGGGIALAVSALSKKAKALLCDVPFLCHFRRAVQLVDTHPYAEI TNFLKTHRDKEEIVFRTLSYFDGVNFAARAKIPALFSVGLMDNISPPSTVFAAYNYYAGPK EIRIYPYNNHEGGGSFQAVEQVKFLKKLFEKG (SEQ ID NO: 1) , b) una secuencia de aminoácidos que tiene i) un motivo RGQ en las posiciones correspondientes a las posiciones 118-120 de la SEQ ID NO: 1; ii) un motivo GXSQG en las posiciones correspondientes a las posiciones 186-190 de la SEQ ID NO: 1; y iii) un motivo HE en las posiciones correspondientes a las posiciones 303-304 de la SEQ ID NO: 1; y c) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 1.

Modalidad 3. La modalidad 1 ó 2 donde la proteina que tiene actividad perhidrolitica incluye una secuencia de aminoácidos que tiene afinidad hacia, por ejemplo, se une a o forma complejos con las superficies orales o alternativamente posee afinidad, por ejemplo, se une a o forma complejos con, uno o más componentes de la cinta blanqueadora.

Modalidad 4. Cualquiera de las cintas que anteceden que incluye una proteína que tiene actividad perhidrolasa que se une a o forma complejos con las superficies orales (por ejemplo, la película o el esmalte dental) y que incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada de a) MAFFDLPLEELKKYRPERYEEKDFDEFWEETLAESEKFPLDPVFERMES HLKTVEAYDVTFSGYRGQRIKG LLVPKLEEEKLPCVVQYIGYNGGRGFPHDWLFWPSMGY ICFVMDTRGQGSGWLKGDTPDYPEGPVDPQYPGF TRGILDPRTYYYRRVFTDAVRAVEAA ASFPQVDQERIVIAGGSQGGGIALAVSALSKKAKALLCDVPFLCHFRRAVQLVDTHPYAEI TNFLKTHRDKEEIVFRTLSYFDGVNFAARAKIPALFSVGLMDNISPPSTVFAAYNYYAGPK EIRIYPYNNHEGGGSFQAVEQVKFLKKLFEKGGPGSGGAGSPGSAGGPGSTKPPRTPTANT SRPHHNFGSGGGGSPHHHHHH (SEQ ID NO: 2), y b) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2.

Modalidad 5. Cualquiera de las cintas que anteceden donde la proteína que tiene actividad perhidrolítica está presente en forma granular sobre la primera superficie de la película .

Modalidad 6. Cualquiera de las cintas que anteceden donde el segundo lado de la película adhesiva hidratable se adhiere a una capa que inhibe la disolución de la película adhesiva hidratable.

Modalidad 7. Cualquiera de las cintas que anteceden donde el ingrediente blanqueador granular se recubre con un material de disolución rápida, tal como almidón de maíz, sulfato de sodio, goma arábiga, y sus combinaciones.

Modalidad 8. Cualquiera de las cintas que anteceden donde el ingrediente blanqueador granular se selecciona de gránulos que incluyen oxidantes orgánicos y/o inorgánicos, por ejemplo, seleccionados de peróxido de hidrógeno, peróxido de urea, percarbonatos , perboratos, peroximonofosfatos , peroxidisulfatos , peroxiácidos, y ácido peracético.

Modalidad 9. Cualquiera de las cintas que anteceden donde el ingrediente blanqueador granular se selecciona de peróxidos sólidos y donantes de peróxidos sólidos, por ejemplo, seleccionados de sales o complejos de peróxidos (por ejemplo, tales como sales de peroxifosfato, peroxicarbonato, perborato, peroxisilicato, o persulfato; por ejemplo, peroxifosfato de calcio, perborato de sodio, carbonato de sodio peroxidado, peroxifosfato de sodio, y persulfato de potasio) ; hipocloritos ; peróxido de urea; complejos poliméricos de peróxido de hidrógeno tales como complejos poliméricos de peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona; peróxidos metálicos, por ejemplo, peróxido de zinc y peróxido de calcio; perácidos, y sus combinaciones.

Modalidad 10. Cualquiera de las cintas que anteceden donde el ingrediente blanqueador granular incluye peróxido de urea, un complejo polimérico de peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona, percarbonato de sodio, o una combinación de dos o más de ellos.

Modalidad 11. Cualquiera de las cintas que anteceden donde el tamaño de partícula (D50) de los gránulos sobre la primera superficie de la película, por ejemplo, el ingrediente blanqueador granular, o la perhidrolasa o el donante de acilo en forma granular, es de 0,1-300 micrones, por ejemplo, de 10-275 micrones, por ejemplo, de 100-250 micrones .

Modalidad 12. Cualquiera de las cintas que anteceden donde el ingrediente blanqueador granular incluye más de 0,01%, por ejemplo, de 0,01-0,1%, por ejemplo, de 0,02-0,08%, del peso total de la película adhesiva hidratable y un ingrediente blanqueador granular adherido a la misma.

Modalidad 13. Cualquiera de las cintas que anteceden donde la cantidad del agente blanqueador granular sobre el primer lado de la película adhesiva hidratable es de 0,001 -10 mg/ cm2, por ejemplo, de 0,001 - 1 mg/ cm2, por ejemplo, de 0, 005 - 0, 015 mg/ cm2.

Modalidad 14. Cualquiera de las cintas que anteceden donde el donante de acilo se selecciona de (i) uno o más ásteres de ácidos carboxílicos C2-i8r P°r ejemplo, ésteres de ácidos carboxílicos C2-6 (por ejemplo, ésteres de acetilo) , lo que incluye los ésteres de ácidos carboxílicos de alquilos inferiores lineales o ramificados, opcionalmente sustituidos con hidroxi y/o alcoxi Ci_4; (ii) uno o más glicéridos acilados (por ejemplo, mono-, di-, y tri-glicéridos) , (iii) sacáridos acilados, y (iv) sus combinaciones.

Modalidad 15. Cualquiera de las cintas que anteceden donde se selecciona el donante de acilo de 1,2,3-triacetoxipropano (a veces denominado en la presente triacetina o triacetato de glicerina) y sacáridos acilados, por ejemplo, sacáridos acilados.

Modalidad 16. Cualquiera de las cintas que anteceden que incluye un donante de acilo que incluye un compuesto éster que tiene una solubilidad en agua de al menos 5 ppm a 25 °C.

Modalidad 17. Cualquiera de las cintas que anteceden que incluye un perácido o que genera un perácido al utilizarse.

Modalidad 18. Cualquiera de las cintas que anteceden donde los ingredientes están presentes en cantidades suficientes para proporcionar, luego de mezclarse, un agente blanqueador en una cantidad y concentración eficaces para blanquear los dientes.

Modalidad 19. Cualquiera de las cintas que anteceden donde la película adhesiva hidratable incluye uno o más polímeros solubles en agua seleccionados de éteres de celulosa hidrofílicos (por ejemplo, carboximetil celulosa, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil metilcelulosa, ) , acetatos de polivinilo, carbómeros (por ejemplo, CARBOPOL® 971P) , gomas de polisacáridos (por ejemplo, goma de xantano) , almidones alimenticios modificados, gelatina (por ejemplo, gelatina de origen animal o de pescado) , copolimeros de carboxivinilo reticulados, polivinilpirrolidonas reticuladas, óxido de polietileno (por ejemplo, POLYOX™) , ácidos poliacrilicos y poliacrilatos , alcoholes polivinilicos, alginato, caseína, pululano, y sus combinaciones.

Modalidad 20. Cualquiera de las cintas que anteceden donde la película adhesiva hidratable incluye uno o más polímeros solubles en agua seleccionados de éteres de celulosa hidrofílicos (por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa o hidroxipropil celulosa) , óxido de polietileno, acetatos de polivinilo, y carbómeros (por ejemplo, CARBOPOL® 971P) ; y sus combinaciones.

Modalidad 21. Cualquiera de las cintas que anteceden donde la película adhesiva hidratable incluye hidroxipropilmetilcelulosa, acetatos de polivinilo, y un carbómero, por ejemplo, en una relación en peso seco de 10-20 HPMC: 2- 10 PVAc: 1 carbómero.

Modalidad 22. Cualquiera de las cintas que anteceden donde la película adhesiva hidratable además incluye un plastificante, por ejemplo, propilenglicol , polietilenglicol o triacetina.

Modalidad 23. Cualquiera de las cintas que anteceden donde el primer lado de la película adhesiva hidratable se cubre con una capa protectora antes de utilizarla.

Modalidad 24. Cualquiera de las cintas que anteceden donde la película adhesiva hidratable tiene una viscosidad de al menos 100.000 cps luego de su activación, por ejemplo, una viscosidad de 100.000 a 200.000 cps.

Modalidad 25. Cualquiera de las cintas que anteceden donde la película adhesiva hidratable se encuentra esencialmente seca antes de su aplicación.

Modalidad 26. Cualquiera de las cintas que anteceden donde el espesor de la película adhesiva hidratable es de 0,1-5 mm, por ejemplo, de 0,5-5 mm.

Modalidad 27. Cualquiera de las cintas que anteceden donde las dimensiones totales aproximadas son 2-10 cm de longitud x 0,5-2 cm de ancho x 0,1-10 mm de espesor, por ejemplo, 1-10 mm de espesor, por ejemplo, una cinta donde el área superficial de un lado es 5 - 20 cm2, por ejemplo, alrededor de 5 - 15 cm2, por ejemplo, alrededor de 10 cm2.

Modalidad 28. Cualquiera de las cintas que anteceden que incluye gránulos recubiertos de un complejo polimérico de peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona, peróxido de urea y/o percarbonato de sodio y gránulos de perhidrolasa sobre la primera superficie de la película, con triacetina dispersa en la película.

Modalidad 29. Cualquiera de las cintas que anteceden, que además incluye gránulos de un agente antisensibilidad, por ejemplo, nitrato de potasio o arginina.

Modalidad 30. Un método (Método 2) de blanqueamiento dental que incluye aplicar el primer lado de una cinta de acuerdo con la descripción que antecede, por ejemplo, la Cinta 1 y siguientes, directamente a los dientes, y dejarla durante un tiempo suficiente, por ejemplo, al menos 5 minutos, por ejemplo, 10-60 minutos, por ejemplo, 10-30 minutos, para blanquear los dientes.

Modalidad 31. Un método (Método 3) para elaborar una cinta para el blanqueamiento de los dientes, por ejemplo, una cinta de acuerdo con la descripción que antecede, de acuerdo con la Cinta 1 y siguientes, que incluye proveer una película adhesiva hidratable semi-seca, por ejemplo, de acuerdo con la descripción que antecede, por ejemplo, película ésta que se vacía con agua y no se seca por completo, o película ésta que se humedece, agregar a una superficie de la película gránulos de un ingrediente blanqueador granular, por ejemplo, de acuerdo con la descripción que antecede, y secar la película con los gránulos agregados a una superficie.

Por ejemplo, las cintas pueden elaborarse primero elaborando la película adhesiva hidratable, utilizando medios convencionales y luego agregando el ingrediente blanqueador granulado a una superficie. Las cintas con la película adhesiva hidratable pueden vaciarse con agua de una variedad de maneras conocidas en la técnica, tal como por extrusión, o por vaciado con una suspensión acuosa (por ejemplo, a un nivel de sólidos de 10-30%) sobre una correa caliente, cuya agua se evapora. Alternativamente, la película se seca, pero luego se humedece de nuevo. Los gránulos pueden agregarse a la superficie de esta película mientras la película se mantiene semi-seca, es decir, lo suficientemente húmeda para ser adherente, de forma tal que los gránulos se adhieran a la superficie de la película. Una vez que la película se encuentra totalmente seca y se enfría a temperatura ambiente, los gránulos continúan adhiriéndose a la superficie de la película. Por consiguiente, antes de usarlas, la película adhesiva hidratable y la cinta como un todo se encuentran esencialmente secas. Por cuanto el peróxido se encuentra sobre la superficie de la película únicamente, se necesita una cantidad relativamente pequeña de gránulos para lograr una concentración eficaz en la superficie.

Modalidades Preferentes: Cuando se exponen a la saliva u otras fuentes de agua (tales como agua de grifo) , los gránulos se disuelven y liberan los componentes de reacción para producir enzimáticamente el perácido deseado. La hidratación de la capa adhesiva hidratable incrementa la adherencia de la película y permite que la película/cinta blanqueadora se adhiera a la superficie diana (es decir, el esmalte dental) .

La película adhesiva hidratable incluye uno o más polímeros solubles en agua y oralmente aceptables seleccionados de éteres de celulosa hidrofílicos (por ejemplo, carboximetil celulosa, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil metilcelulosa) , acetatos de polivinilo, carbómeros (por ejemplo, CARBOPOL® 971P) , gomas de polisacáridos (por ejemplo, goma de xantano) , almidones alimenticios modificados, gelatina (por ejemplo, gelatina de origen animal o de pescado) , copolímeros de carboxivinilo reticulados, polivinilpirrolidonas reticuladas, óxido de polietileno (por ejemplo, POLYOX™) , ácidos poliacrílieos y poliacrilatos , alcoholes polivinílicos, alginato, caseína, pululano, y sus combinaciones. Las formulaciones de geles adhesivos que se utilizan con agentes de blanqueamiento dental son conocidos en la técnica, por ejemplo, como se describe en las Patentes de los EE.UU. 7.862.801; 5.746.598; 6.730.316; y 7.128.899; cada una incorporada a título de referencia en su totalidad. La película adhesiva permite que el agente blanqueador perácido permanezca en contacto con los dientes durante períodos prolongados de tiempo y protege los tejidos blandos y, por consiguiente, debe aportar una alta viscosidad, por ejemplo, una viscosidad luego de su aplicación de al menos 100.000 centipoise (cps) (alrededor de 100 Pascal-segundo (Pa-s)), preferentemente de 100.000 a 200.000 cps (de 100 a 200 Pa-s).

Cuando se utiliza una segunda capa de película para proteger la película adhesiva hidratable de una degradación o disolución rápida, el material portador o de respaldo puede elaborarse de textiles, tela, compuesto de madera, una resina, un elastómero, papel, derivados de celulosa insolubles o menos solubles tales como etilcelulosa y acetato de celulosa, cloruro de polivinilo, una cera, PARAFILM™, polietileno, alcohol polivinílico, TEFLON™, cloruro de polivinilo, acetato de polivinilo y sus derivados.

El ingrediente blanqueador granular puede ser un peróxido sólido o un donante de peróxido sólido seleccionado de sales o complejos de peróxidos (tales como sales de peroxifosfato, peroxicarbonato, perborato, peroxisilicato, o persulfato; por ejemplo, peroxifosfato de calcio, perborato de sodio, carbonato de sodio peroxidado, peroxifosfato de sodio, y persulfato de potasio) , hipocloritos ; peróxido de urea; complejos poliméricos de peróxido de hidrógeno tales como complejos poliméricos de peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona, y peróxidos metálicos, por ejemplo, peróxido de zinc y peróxido de calcio; un perácido sólido; y sus combinaciones. En modalidades particulares, el ingrediente blanqueador granular es peróxido de urea o un complejo polimérico de peróxido de hidrógeno polivinilpirrolidona. El ingrediente blanqueador granular puede opcionalmente recubrirse para conferirle mayor estabilidad bajo almacenamiento (por ejemplo, recubrirse con sulfato de sodio, almidón de maíz o goma arábiga) .

Listado de las Modalidades Preferentes: Modalidad Preferente 1. Una cinta blanqueadora dental que incluye una película adhesiva hidratable con un primer lado y un segundo lado, donde el primer lado tiene un ingrediente blanqueador granular adherido al mismo, y donde la cinta blanqueadora dental además incluye, en o sobre la película o en la forma de gránulos adheridos al primer lado de la película; a) una enzima que tiene actividad perhidrolítica, donde la enzima tiene un motivo distintivo de la familia 7 de carbohidrato esterasas (CE-7) que se alinea con una secuencia de referencia SEQ ID NO: 1, y donde el motivo distintivo incluye : i) un motivo RGQ en las posiciones correspondientes a las posiciones 118-120 de la SEQ ID NO: 1; ii) un motivo GXSQG en las posiciones correspondientes a las posiciones 186-190 de la SEQ ID NO: 1; y üi) un motivo HE en las posiciones correspondientes a las posiciones 303-304 de la SEQ ID NO: 1; y (b) menos un sustrato donante de acilo, donde sustrato se selecciona del grupo gue consiste en: i) ésteres que tienen la estructura [X]mR5 donde X = un grupo éster de la fórmula R6C(0)0 R6 = grupo hidrocarbilo Cl a C7 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente sustituido con grupos hidroxilo o grupos alcoxi Cl a C4, donde R6 opcionalmente incluye uno o más enlaces éter cuando R6 = C2 a C7; R5 = un grupo hidrocarbilo Cl a C6 lineal, ramificado, o cíclico o un grupo heteroaromático cíclico de 5 miembros o un grupo aromático o heteroaromático cíclico de seis miembros opcionalmente sustituido con grupos hidroxilo; donde cada átomo de carbono en R5 individualmente incluye no más de un grupo hidroxilo o no más de un grupo éster o grupo ácido carboxílico; donde R5 opcionalmente incluye uno o más enlaces éter; M es un número entero que oscila entre 1 y el número de átomos de carbono en R5; y donde dichos ésteres tienen una solubilidad en agua de al menos 5 ppm a 25 °C; ii) glicéridos que tienen la estructura donde Ri= alquilo Cl a C7 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido con un hidroxilo o un grupo alcoxi Cl a C4 y R3 y R4 individualmente son H o RiC(O); iii) uno o más ésteres de la fórmula donde Ri es un alquilo Cl a C7 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido con un hidroxilo o un grupo alcoxi Cl a C4 y R2 es un alquilo Cl a CIO de cadena recta o ramificada, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, alquilheteroarilo, heteroarilo, (CH2CH20)n, o (CH2CH (CH3) -O) nH y n es l a 10; y iv) sacáridos acetilados seleccionados del grupo que consiste en monosacáridos acetilados, disacáridos acetilados, y polisacárido acetilado; donde al hidratarse la película adhesiva hidratable, el ingrediente blanqueador granular libera peróxido de hidrógeno y la enzima cataliza la formación de una cantidad eficaz de un perácido.

Modalidad Preferente 2. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con la modalidad preferente 1 donde la enzima que tiene actividad perhidrolitica incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada de: a) la SEQ ID NO: 1; y b) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de la secuencia de aminoácidos con la SEQ ID NO: 1.

Modalidad Preferente 3. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con la Modalidad Preferente 1 donde la enzima que tiene actividad perhidrolitica además incluye un dominio de unión fusionado al extremo N o C de la enzima, dominio de unión éste que tiene afinidad hacia un tejido oral o hacia la cinta blanqueadora dental.

Modalidad Preferente 4. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con la Modalidad Preferente 3 donde el dominio de unión que tiene afinidad hacia un tejido oral incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ D NO: 178-197.

Modalidad Preferente 5. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la enzima que tiene actividad perhidrolitica posee afinidad hacia un tejido oral e incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada de a) la SEQ ID NO: 2, y b) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de la secuencia de aminoácidos con la SEQ ID NO: 2.

Modalidad Preferente 6. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden que además incluye una capa de respaldo adherida al segundo lado de la película adhesiva hidratable, donde la capa de respaldo es capaz de inhibir la disolución de la película adhesiva hidratable.

Modalidad Preferente 7. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde el ingrediente blanqueador granular se recubre con un recubrimiento soluble en agua capaz de disolverse al hidratarse.

Modalidad Preferente 8. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde el ingrediente blanqueador granular se selecciona de peróxidos sólidos y donantes de peróxidos sólidos .

Modalidad Preferente 9. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las . modalidades preferentes que anteceden donde el ingrediente blanqueador granular se selecciona de sales de peróxido, complejos de peróxido, peroxifosfato, peroxicarbonato, perborato, peroxisilicato, sales de persulfato, peroxifosfato de calcio, perborato de sodio, carbonato de sodio peroxidado, peroxifosfato de sodio, persulfato de potasio, hipocloritos, peróxido de urea, complejos poliméricos de peróxido de hidrógeno, complejos poliméricos de peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona, peróxidos metálicos, peróxido de zinc, peróxido de calcio, y sus combinaciones.

Modalidad Preferente 10. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde el ingrediente blanqueador granular incluye peróxido de urea. En algunas modalidades, el ingrediente blanqueador granular incluye un complejo polimérico de peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona. En algunas modalidades, el complejo polimérico de peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona es un complejo polimérico de peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona reticulada .

Modalidad Preferente 11. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) del ingrediente blanqueador granular oscila entre 10 micrones y 300 micrones, por ejemplo, entre 10 micrones y 200 micrones .

Modalidad Preferente 12. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la cinta blanqueadora dental incluye de alrededor de 0,01 % en peso a alrededor de 0,1 % en peso de un perácido. En algunas modalidades, el ingrediente blanqueador granular incluye de alrededor de 0,1 % en peso a alrededor de 30 % en peso de una fuente de peroxigeno.

Modalidad Preferente 13. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la cantidad del agente blanqueador granular sobre el primer lado de la película adhesiva hidratable oscila entre 0,001 mg/cm2 y 10 mg/cm2, por ejemplo, entre 0,001 mg/ cm2 y 1 mg/ cm2.

Modalidad Preferente 14. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde el sustrato donante de acilo es 1,2,3-triacetoxipropano .

Modalidad Preferente 15. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la película adhesiva hidratable incluye uno o más polímeros solubles en agua seleccionados de un éter de celulosa hidrofílico, carboximetil celulosa, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil metilcelulosa, un acetato de polivinilo, un carbómero, una goma de polisacáridos, goma de xantano, un almidón alimenticio modificado, gelatina, gelatina de origen animal o de pescado, un copolimero de carboxivinilo reticulado, una polivinilpirrolidona reticulada, óxido de polietileno, un ácido poliacrilico, un poliacrilato, un alcohol polivinilico, alginato, caseína, pululano, y una combinación de dos o más de ellos.

Modalidad Preferente 16. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la película adhesiva hidratable incluye uno o más polímeros solubles en agua seleccionados de un éter de celulosa hidrofílico, un acetato de polivinilo, un carbómero, y una combinación de dos o más de ellos.

Modalidad Preferente 17. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la película adhesiva hidratable incluye hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) , acetato de polivinilo (PVAc) , y un carbómero en una relación en peso seco de HMPC : PVAc: carbómero de 10-20:2-10:1.

Modalidad Preferente 18. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la película adhesiva hidratable además incluye un plastificante .

Modalidad Preferente 19. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden que además incluye propilenglicol .

Modalidad Preferente 20. Un método de blanqueamiento dental que incluye a) proveer un sistema de envasado que incluye la cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden; b) extraer la cinta blanqueadora dental del sistema de envasado; y c) poner la cinta blanqueadora dental en contacto directo con los dientes durante un periodo de tiempo suficiente para blanquear los dientes; donde la cinta blanqueadora dental se hidrata con la humedad presente en la cavidad oral o sobre la superficie dental o se hidrata luego del paso (b) pero antes del paso (c) .

Modalidad Preferente 21. El método de la Modalidad Preferente 20 donde la cinta blanqueadora además incluye una capa de respaldo adherida al segundo lado de la película adhesiva hidratable, donde la capa de respaldo es capaz de inhibir la disolución de la película adhesiva hidratable.

Modalidad Preferente 22. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) del ingrediente blanqueador granular oscila entre 10 micrones y 200 micrones.

Modalidad Preferente 23. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde el ingrediente blanqueador granular incluye más de 0,01 % en peso del peso total de la película adhesiva hidratable y un ingrediente blanqueador granular adherido a la misma. En algunas modalidades, el ingrediente blanqueador granular incluye más de 0,05 % en peso del peso total de la película adhesiva hidratable y un ingrediente blanqueador granular adherido a la misma. En algunas modalidades, el ingrediente blanqueador granular incluye de alrededor de 0,01 % en peso a alrededor de 0,1 % en peso del peso total de la película adhesiva hidratable y un ingrediente blanqueador granular adherido a la misma.

Modalidad Preferente 24. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la cantidad del agente blanqueador granular sobre el primer lado de la película adhesiva hidratable oscila entre 0,001 mg/ cm2 y 1 mg/ cm2.

Modalidad Preferente 25. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde el sustrato donante de acilo es 1 , 2 , 3-triacetoxipropano .

Modalidad Preferente 26. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la película adhesiva hidratable incluye uno o más polímeros solubles en agua seleccionados de un éter de celulosa hidrofilico, carboximetil celulosa, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil metilcelulosa, un acetato de polivinilo, un carbómero, una goma de polisacáridos , goma de xantano, un almidón alimenticio modificado, gelatina, gelatina de origen animal o de pescado, un copolimero de carboxivinilo reticulado, una polivinilpirrolidona reticulada, óxido de polietileno, un ácido poliacrilico, un poliacrilato, un alcohol polivinilico, alginato, caseína, pululano, y una combinación de dos o más de ellos.

Modalidad Preferente 27. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la película adhesiva hidratable incluye uno o más polímeros solubles en agua seleccionados de un éter de celulosa hidrofilico, un acetato de polivinilo, un carbómero, y una combinación de dos o más de ellos.

Modalidad Preferente 28. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la película adhesiva hidratable incluye hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) , acetato de polivinilo (PVAc) , y un carbómero en una relación en peso seco de HMPC : PVAc: carbómero de 10-20:2-10:1.

Modalidad Preferente 29. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la película adhesiva hidratable además incluye un plastificante .

Modalidad Preferente 30. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde la película adhesiva hidratable además incluye propilenglicol .

Modalidad Preferente 31. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades preferentes que anteceden donde el ingrediente blanqueador granular se recubre con un recubrimiento soluble en agua capaz de disolverse al hidratarse .

Modalidad Preferente 32. Un método para elaborar una cinta blanqueadora dental que incluye: a) proveer una película adhesiva hidratable semi-seca, b) aplicar a una superficie de la película gránulos de un ingrediente blanqueador granular, donde los gránulos se adhieren a la superficie, y c) secar la película.

En algunas modalidades, el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) del ingrediente blanqueador granular se ubica entre 10 micrones y 300 micrones. En algunas modalidades, el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) del ingrediente blanqueador granular se ubica entre 25 micrones y 200 micrones. En algunas modalidades, el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) del ingrediente blanqueador granular se ubica entre 35 micrones y 150 micrones. En algunas modalidades, el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) del ingrediente blanqueador granular se ubica entre 50 micrones y 125 micrones. En algunas modalidades, el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) del ingrediente blanqueador granular se ubica entre 60 micrones y 100 micrones. En algunas modalidades, el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) del ingrediente blanqueador granular es de alrededor de 64 micrones. En algunas modalidades, el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) del ingrediente blanqueador granular es de alrededor de 94 micrones .

En algunas modalidades, el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) de la enzima que tiene actividad perhidrolítica se ubica entre 100 micrones y 300 micrones. En algunas modalidades, el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) de la enzima que tiene actividad perhidrolítica se ubica entre 150 micrones y 275 micrones. En algunas modalidades, el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) de la enzima que tiene actividad perhidrolítica se ubica entre 175 micrones y 250 micrones.

Todos los ingredientes utilizados en las cintas descritas en la presente deben ser oralmente aceptables. "Oralmente aceptable", conforme se utiliza el término en la presente, significa un ingrediente que está presente en una cinta como la descrita en una cantidad y forma que no hacen que el uso de la cinta sea inseguro en la cavidad oral.

En todo momento, se utilizan intervalos como herramienta para describir todos y cada uno de los valores que se ubican dentro del intervalo. Se puede seleccionar cualquier valor dentro del intervalo como el extremo del intervalo. Además, todas las referencias citadas en la presente se incorporan a titulo de referencia en su totalidad. En caso de un conflicto en una definición en la presente descripción y aquella de una referencia citada, prevalece la presente descripción .

A no ser que se especifique algo diferente, se entenderá que todos los porcentajes y cantidades expresados en la presente y en cualquier otro lugar en la memoria descriptiva se refieren a porcentajes en peso. Las cantidades dadas se basan en el peso activo del material.

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos se incluyen para demostrar los aspectos preferentes de la invención. Aquellos con experiencia en la técnica apreciarán que las técnicas descritas en los ejemplos siguen técnicas que funcionan bien en la puesta en práctica de la invención y, por consiguiente, se puede considerar que constituyen modos preferentes en su puesta en práctica. Sin embargo, aquellos con experiencia en la técnica, a la luz de la presente descripción, apreciarán que se pueden efectuar numerosos cambios en las modalidades especificas que se describen y aun asi obtener un resultado similar sin alejarse del espíritu y alcance de los métodos y ejemplos descritos en la presente.

Todos los reactivos y materiales se obtuvieron de DIFCO Laboratories (Detroit, MI), GIBCO/BRL (Gaithersburg, MD) , TCI America (Portland, O) , Roche Diagnostics Corporation ( Indianápolis, EN), Thermo Scientific (Pierce Protein Research Products) (Rockford, IL) o Sigma/Aldrich Chemical Company (St. Louis, MO) , a no ser que se especifique algo diferente .

Las siguientes abreviaturas en la memoria descriptiva corresponden a las unidades de medición, técnicas, propiedades, o compuestos: "seg" o "s" significa segundo (s) , "min" significa minuto (s), "h" o "hr" significa hora (s) , " L" significa microlitro ( s ) , "mL" significa mililitro (s ) , "L" significa litro (s) , "mM" significa milimolar, "M" significa molar, "mmol" significa milimol (es) , "ppm" significa parte (s) por millón, "p" significa peso, "% en peso" significa porcentaje en peso, "g" significa gramo (s), "mg" significa miligramo (s) , " g" significa microgramo (s) , y "ng" significa nanogramo (s) .

Ejemplo 1 Se preparó una cinta de acuerdo con la descripción que antecede, formando la película adhesiva hidratable y luego, mientras la película permanecía adhesiva, agregando el agente blanqueador granulado y la enzima granulada a la superficie de un lado, utilizando los ingredientes en la Tabla 1. La cinta se erosiona lentamente en la boca luego de su aplicación y, por consiguiente, no tiene que extraerse.

Tabla 1 La cinta en el ejemplo 1 se vacía con agua por extrusión, o por vaciado con una suspensión acuosa (por ejemplo, a un nivel de sólidos de 10-30%) sobre una correa caliente, en la cual se evapora el agua. Los gránulos se agregan a la superficie de esta película cuando la película se encuentra semi-seca o seca, pero aún adherente. Una vez que se enfría a temperatura ambiente, los gránulos se adhieren a la superficie de la película. En una cinta con un área de 10 cm2 y un peso de 10 mg/cm2, esta fórmula libera 5 mg de triacetina. Asumiendo que se distribuyen 1, 4 mg de gránulos blanqueadores sobre la cinta, junto con 0,3 mg de gránulos de la enzima, esta dosis es suficiente para producir suficiente ácido peracético directamente en la superficie dental como para funcionar considerablemente mejor que una cinta blanqueadora con únicamente peróxido. (Las cintas con únicamente peróxido típicamente tienen una dosis total de aproximadamente 3-10 mg de peróxido) .

Cuando se exponen a la saliva u otras fuentes de agua (tal como agua de grifo) , los gránulos se disuelven de inmediato y se activan. La capa adhesiva también se activa y adhiere a los dientes de una manera eficaz. Se diseñó el Ejemplo 1 para erosionarse lentamente en la boca con el tiempo, de forma tal que el usuario no tenga que extraerla.

Ejemplo 2 Se preparó una cinta de acuerdo con la descripción que antecede, formando la película adhesiva hidratable y luego, mientras la cinta aún se encuentra adherente, agregando los agentes granulados a un lado y la capa protectora de respaldo al otro lado, utilizando los ingredientes en la Tabla 2. Dado que la capa de respaldo no se disuelve, el usuario debe extraerla luego de transcurrido un período suficiente para permitir que tenga lugar el blanqueamiento, típicamente alrededor de 10-30 minutos. Las dos capas pueden también producirse simultáneamente por extrusión o vaciado a base de solventes y luego se puede agregar el agente blanqueador granulado a la superficie de la película adhesiva hidratable.

Tabla 2 Ejemplo 3 Se evaluaron diversos tamaños de partículas de un complejo de peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona y una enzima que tiene actividad perhidrolítica ("enzima") en términos de su capacidad de generar ácido peracético uniformemente a lo largo de la superficie de una cinta adhesiva hidratable que contiene triacetina.

Para evaluar la generación de ácido peracético de este producto, se cortaron discos de 3/8" de la película. Cada disco se hidrató con 20 ]xL de buffer de fosfato de sodio 50 mM, pH 7,2 y se incubó a 37 °C durante 15 minutos. Se agregaron 380 \i de ácido fosfórico 0,1 M a la película para detener la reacción enzimática y diluir la muestra para detección. Se analizó el ácido peracético presente en la solución por análisis de HPLC de ácido peracético utilizando el método previamente descrito en la Patente de los EE.UU. 7.829.315 otorgada a DiCosimo et al. En cada evaluación, se cortó un mínimo de tres muestras de la cinta a lo largo de una longitud de 24 pulgadas de la película.

Las muestras de la cinta con la enzima y el recubrimiento de peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona se elaboraron primero incorporando la enzima en una película polimérica de pululano. La película seca que contenía la enzima se molió y tamizó a un tamaño de partícula de malla 60 a 80 (de 177 µ?? a 250 µp?) . La forma particulada de la enzima luego se combinó con peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona (PEROXYDONE™ XL-10, Ashland Inc., ilmington, DE) . Esta mezcla se depositó sobre una estructura de una película de dos capas con una capa adhesiva hidratable que principalmente contenía óxido de polietileno y triacetina y una capa de respaldo de alcohol polivinílico para obtener una capa de apoyo insoluble. Los resultados de la evaluación de la generación de ácido peracético de dos operaciones consecutivas se enumeran en la Tabla 3. Las muestras se evaluaron al comienzo y al final de la operación de producción y demostraron tener una consistencia pobre de ácido peracético.

Tabla 3 : Producción de ácido peracético de las cintas adhesivas hidratables producidas con un recubrimiento de la enzima perhidrolasa en pululano y PEROXYDONE™ XL-10.

Luego se procesó el PEROXYDONE™ XL-10 para formar partículas más grandes con granulación de alto corte con etanol. Luego de la granulación, la muestra se tamizó a un tamaño de partícula de malla 60 a 200 (de 75 µp? a 250 µ??) . La distribución del tamaño de partícula del PEROXYDONE™ XL- 10, utilizado para producir las muestras descritas en la Tabla 3, y el PEROXYDONE™ XL-10 luego de la granulación de alto corte y el tamizado se describen en la Tabla 4. Las muestras se midieron en un Beckman Coulter LS13320 provisto de un alimentador en seco Tornado. Los polvos se analizaron directamente sin dispersarse en un líquido.

Tabla 4: Distribución del tamaño de partícula del PEROXYDONE™ XL-10 utilizado en la deposición antes y después de la granulación.

Se llevó a cabo otra operación de producción de cintas primero preparando una muestra de la enzima cargada en la matriz de pululano a dos veces la concentración de las muestras de la Tabla 3. La película de pululano se molió y tamizó a una malla 60 a 80 (de 177 µ?a a 250 µ?a) y luego se combinó con el PEROXYDONE™ XL-10 granulado. La mezcla luego se aplicó sobre una estructura de una película de dos capas similar de acuerdo con la descripción que antecede. La evaluación de esta muestra en términos de la generación de ácido peracético se incluye en la Tabla 4, y demostró tener una producción superior y más consistente de ácido peracético a lo largo de la operación de producción.

Tabla 5: Producción de ácido peracético de las cintas adhesivas hidratables producidas con un recubrimiento de la enzima perhidrolasa en pululano y PEROXYDO E™ XL-10 granulado con un alto grado de corte.

Claims (23)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento, se- considera como una novedad y, por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes. REIVINDICACIONES ;

1. Se reivindica una cinta blanqueadora dental que incluye una película adhesiva hidratable con un primer lado y un segundo lado, donde el primer lado tiene un ingrediente blanqueador granular adherido al mismo, y donde la cinta blanqueadora dental además incluye, en o sobre la película o en la forma de gránulos adheridos al primer lado de la película ; a) una enzima que tiene actividad perhidrolítica, donde la enzima tiene un motivo distintivo de la familia 7 de carbohidrato esterasas (CE-7) que se alinea con una secuencia de referencia SEQ ID NO: 1, y donde el motivo distintivo incluye : i) un motivo RGQ en las posiciones correspondientes a las posiciones 118-120 de la SEQ ID NO: 1; ii) un motivo GXSQG en las posiciones correspondientes a las posiciones 186-190 de la SEQ ID NO: 1; y iii) un motivo HE en las posiciones correspondientes a las posiciones 303-304 de la SEQ ID NO: 1; y (b) al menos un sustrato donante de acilo, donde el sustrato se selecciona del grupo que consiste en: i) ésteres que tienen la estructura [X]mR5 donde X = un grupo éster de la fórmula R6C(0)0 R6 = grupo hidrocarbilo Cl a C7 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente sustituido con grupos hidroxilo o grupos alcoxi Cl a C4, donde R6 opcionalmente incluye uno o más enlaces éter cuando R& = C2 a C7; R5 = un grupo hidrocarbilo Cl a C6 lineal, ramificado, o cíclico o un grupo heteroaromático cíclico de 5 miembros o un grupo aromático o heteroaromático cíclico de seis miembros opcionalmente sustituido con grupos hidroxilo; donde cada átomo de carbono en R¾ individualmente incluye no más de un grupo hidroxilo o no más de un grupo éster o un grupo ácido carboxílico; donde R5 opcionalmente incluye uno o más enlaces éter; M es un número entero que oscila entre 1 y el número de átomos de carbono en R5; y donde dichos ésteres tienen una solubilidad en agua de al menos 5 ppm a 25 °C; ii) glicéridos que tienen la estructura donde Ri= alquilo Cl a C7 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido con un hidroxilo o un grupo alcoxi Cl a C4 y R3 y R4 individualmente son H o RiC(O); iii) uno o más ésteres de la fórmula donde Ri es un alquilo Cl a C7 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido con un hidroxilo o un grupo alcoxi Cl a C4 y R2 es un alquilo Cl a CIO de cadena recta o ramificada, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, alquilheteroarilo, heteroarilo, (CH2CH20)n, o (CH2CH (CH3) -O) nH y n es 1 a 10; y iv) sacáridos acetilados seleccionados del grupo que consiste en monosacáridos acetilados, disacáridos acetilados, y polisacárido acetilado; donde al hidratarse la película adhesiva hidratable, el ingrediente blanqueador granular libera peróxido de hidrógeno y la enzima cataliza la formación de una cantidad eficaz de un perácido.

2. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con la reivindicación 1 donde la enzima que tiene actividad perhidrolitica incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada de: a) la SEQ ID NO: 1; y b) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de la secuencia de aminoácidos con la SEQ ID NO: 1.

3. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con la reivindicación 1 donde la enzima que tiene actividad perhidrolitica además incluye un dominio de unión fusionado al extremo N o C de la enzima, y donde el dominio de unión tiene afinidad hacia un tejido oral o hacia la cinta blanqueadora dental.

4. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con la reivindicación 3 donde el dominio de unión que tiene afinidad hacia un tejido oral incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ D NO: 29-163.

5. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con la reivindicación 4 donde la enzima que tiene actividad perhidrolitica posee afinidad hacia un tejido oral e incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada de a) la SEQ ID NO: 2, y b) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de la secuencia de aminoácidos con la SEQ ID NO: 2.

6. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, que además incluye una capa de respaldo adherida al segundo lado de la película adhesiva hidratable, donde la capa de respaldo es capaz de inhibir la disolución de la película adhesiva hidratable .

7. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde el ingrediente blanqueador granular se recubre con un recubrimiento soluble en agua capaz de disolverse al hidratarse .

8. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde el ingrediente blanqueador granular se selecciona de peróxidos sólidos y donantes de peróxidos sólidos.

9. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde el ingrediente blanqueador granular se selecciona de sales de peróxido, complejos de peróxido, peroxifosfato, peroxicarbonato, perborato, peroxisilicato, sales de persulfato, peroxifosfato de calcio, perborato de sodio, carbonato de sodio peroxidado, peroxifosfato de sodio, persulfato de potasio, hipocloritos, peróxido de urea, complejos poliméricos de peróxido de hidrógeno, complejos poliméricos de peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona, peróxidos metálicos, peróxido de zinc, peróxido de calcio, y sus combinaciones.

10. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde el ingrediente blanqueador granular se selecciona de peróxido de urea, percarbonato de sodio, un complejo polimérico de peróxido de hidrógeno-polivinilpirrolidona, y una combinación de dos o más de ellos.

11. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) del ingrediente blanqueador granular se ubica entre 10 micrones y 300 micrones .

12. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) del ingrediente blanqueador granular se ubica entre 100 micrones y 250 micrones .

13. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde el diámetro medio del tamaño de partícula (D50) de la enzima que tiene actividad perhidrolítica se ubica entre 100 micrones y 250 micrones.

14. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde la cinta genera al menos alrededor de 0,1 % en peso de un perácido .

15. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde la cantidad del agente blanqueador granular sobre el primer lado de la película adhesiva hidratable oscila entre 0,001 mg/ cm2 y 1 mg/ cm2.

16. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde el sustrato donante de acilo es 1 , 2 , 3-triacetoxipropano .

17. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde la película adhesiva hidratable incluye uno o más polímeros solubles en agua seleccionados de un éter de celulosa hidrofílico, carboximetil celulosa, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil metilcelulosa, un acetato de polivinilo, un carbómero, una goma de polisacáridos , goma de xantano, un almidón alimenticio modificado, gelatina, gelatina de origen animal o de pescado, un copolímero de carboxivinilo reticulado, una polivinilpirrolidona reticulada, óxido de polietileno, un ácido poliacrílico, un poliacrilato, un alcohol polivinílico, alginato, caseína, pululano, y una combinación de dos o más de ellos.

18. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde la película adhesiva hidratable incluye uno o más polímeros solubles en agua seleccionados de un éter de celulosa hidrofílico, un alcohol polivinílico, un carbómero, y una combinación de dos o más de ellos.

19. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde la película adhesiva hidratable además incluye un plastificante .

20. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde la película adhesiva hidratable además incluye propilenglicol .

21. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde el ingrediente blanqueador granular se recubre con un recubrimiento soluble en agua capaz de disolverse al hidratarse .

22. La cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, donde se genera una cantidad eficaz de un perácido a una concentración esencialmente uniforme a lo largo de la superficie de la cinta blanqueadora dental.

23. Un método de blanqueamiento dental que incluye a) proveer un sistema de envasado que incluye la cinta blanqueadora dental de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden; b) extraer la cinta blanqueadora dental del sistema de envasado; y c) poner la cinta blanqueadora dental en contacto directo con los dientes durante un periodo de tiempo suficiente para blanquear los dientes; donde la cinta blanqueadora dental se hidrata con la humedad presente en la cavidad oral o sobre la superficie dental o se hidrata luego del paso (b) pero antes del paso (c) .