ES2605158T3 - Composiciones que generan perácidos - Google Patents

Abstract

Tira de blanqueamiento dental que comprende una película adhesiva hidratable con un primer lado y un segundo lado, teniendo el primer lado un componente de blanqueo granular fijado al mismo, en la que la tira de blanqueamiento dental comprende además, en o sobre la película o en forma de gránulos unidos al primer lado de la película: (a) una enzima que comprende una secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 1; y (b) al menos un sustrato donador de acilo, en el que el sustrato donador de acilo es 1,2,3-triacetoxipropano.

Description

Composiciones que generan peracidos

Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud estadounidense n.° 61/577.499, presentada el 19 de diciembre de 2011, que se incorpora como referencia en su totalidad.

5 Antecedentes

La solicitud de patente WO 2005/110344 A1, da a conocer tiras de blanqueamiento dental en las que el sistema de blanqueo dental en la tira puede ser una enzima que libera un peroxido de blanqueo (especfficamente oxidorreductasa, lacasa, oxidasa, glucosa/hexosa oxidasa o peroxidasa). Existe la necesidad de tiras de blanqueamiento adecuadas para uso domestico, que tengan niveles totales reducidos de peroxido, proporcionando 10 aun una actividad de blanqueamiento mejorada.

Sumario

La invencion proporciona tiras de blanqueamiento segun la reivindicacion 1 que comprenden un componente de blanqueo granular en combinacion con una enzima que tiene actividad perhidrolftica (“perhidrolasa”) que comprende el motivo estructural conservado de la familia de carbohidrato esterasa 7 y un donador de acilo, de manera que, tras 15 el uso, el peroxido liberado por el componente de blanqueo granular reacciona con el donador de acilo en presencia de la perhidrolasa para formar un peracido, en proximidad directa con los dientes, sin dilucion sustancial de los excipientes de formulacion, permitiendo de ese modo un blanqueo mejorado de los dientes con cantidades totales mucho menores de peroxido.

Las tiras comprenden una pelfcula adhesiva, o bien de una unica capa o bien de multiples capas (por ejemplo, dos 20 capas), que cuando se hidrata con agua o saliva llega a ser lo suficientemente adhesiva como para pegarse a los dientes. El componente de blanqueo granular se fija al lado de la pelfcula que va a ponerse en contacto con los dientes. Tras la aplicacion, el componente de blanqueo se coloca directamente sobre los dientes (es decir, entre los dientes y la capa adhesiva). Entonces los granulos liberan peroxido disolviendose rapidamente en agua. El componente de blanqueo puede recubrirse opcionalmente por un material que se disuelve rapidamente, tal como 25 sulfato de sodio, almidon de mafz o goma arabiga. Opcionalmente, las tiras proporcionan una segunda capa en la pelfcula que esta presente para prolongar el tiempo de exposicion. Esta segunda capa puede ser insoluble en agua, lo que requirirfa que el usuario retirase la tira tras el tratamiento, o erosionable en agua, lo que provocarfa que la tira se disolviese despues de un tratamiento suficiente. La tira comprende ademas una perhidrolasa (una enzima que puede catalizar la reaccion de ester del acido carboxflico y peroxido de hidrogeno para formar un peracido), que 30 tambien puede proporcionarse en forma granular sobre la superficie de la pelfcula, y un donador de acilo, por ejemplo, seleccionado de compuestos de acilo y acidos carboxflicos, por ejemplo, triacetina o hexaacetato de sorbitol, en el que el donador de acilo reacciona con la fuente de peroxido en la tira en presencia de la perhidrolasa para formar un peracido, que mejora la accion de blanqueo de la tira.

La presente invencion proporciona una tira de blanqueamiento dental que comprende una pelfcula adhesiva 35 hidratable con un primer lado y un segundo lado, teniendo el primer lado un componente de blanqueo granular unido al mismo, en la que la tira de blanqueamiento dental comprende ademas, en o sobre la pelfcula o en forma de granulos unidos al primer lado de la pelfcula;

a) una enzima que comprende una secuencia de aminoacidos segun SEQ ID NO: 1; y

b) al menos un sustrato donador de acilo, en el que el donador de acilo es 1,2,3-triacetoxipropano.

40 Otras realizaciones de la presente invencion proporcionan un metodo de blanqueamiento dental que comprende proporcionar un sistema de envasado que comprende la tira de blanqueamiento dental segun cualquier reivindicacion anterior; retirar la tira de blanqueamiento dental del sistema de envasado; y poner en contacto la tira de blanqueamiento dental directamente con los dientes durante un periodo de tiempo suficiente para blanquear los dientes; en el que la tira de blanqueamiento dental se hidrata por la humedad presente en la cavidad bucal o sobre 45 la superficie dental o se hidrata despues de la etapa (b) pero antes de la etapa (c).

Breve descripcion de las secuencias biologicas

Se describen las siguientes secuencias.

SEQ ID NO: 1 es la secuencia de aminoacidos de la perhidrolasa variante de Thermotoga maritima C277S.

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SEQ ID NO: 2 es la secuencia de aminoacidos de protefna de fusion que comprende la perhidrolasa variante de Thermotoga maritima C277S acoplada al dominio de union al diente (tambien conocida como “EZ-7” en la publicacion de solicitud de patente internacional n.° WO2012/087970A2 concedida a Butterick et al.).

SEQ ID NO: 3 de referencia es la secuencia de acido nucleico que codifica para una cefalosporina C desacetilasa de Bacillus subtilis ATCC® 31954™.

SEQ ID NO: 4 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una cefalosporina C desacetilasa de Bacillus subtilis ATCC® 31954™.

SEQ ID NO: 5 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una cefalosporina C desacetilasa de Bacillus subtilis subesp. subtilis cepa 168.

SEQ ID NO: 6 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una cefalosporina C desacetilasa de B. subtilis ATCC® 6633™.

SEQ ID NO: 7 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una cefalosporina C desacetilasa de B. licheniformis ATCC® 14580™.

SEQ ID NO: 8 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una acetilxilano esterasa de B. pumilus PS213.

SEQ ID NO: 9 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una acetilxilano esterasa de Clostridium thermocellum ATCC®27405™.

SEQ ID NO: 10 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una acetilxilano esterasa de Thermotoga neapolitana.

SEQ ID NO: 11 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una acetilxilano esterasa de Thermotoga maritima MSB8.

SEQ ID NO: 12 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una acetilxilano esterasa de Thermoanaerobacterium sp. JW/SL YS485.

SEQ ID NO: 13 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una cefalosporina C desacetilasa de Bacillus halodurans C-125.

SEQ ID NO: 14 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una cefalosporina C desacetilasa de Bacillus clausii KSMK16.

SEQ ID NO: 15 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una variante de acetilxilano esterasa de Thermotoga neapolitana de la publicacion de solicitud de patente estadounidense n.° 2010-0087529 (incorporada en el presente documento como referencia en su totalidad), en donde el residuo Xaa en la posicion 277 es Ala, Val, Ser o Thr.

SEQ ID NO: 16 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una variante de acetilxilano esterasa de Thermotoga maritima MSB8 de la publicacion de solicitud de patente estadounidense n.° 2010-0087529, en donde el residuo Xaa en la posicion 277 es Ala, Val, Ser o Thr.

SEQ ID NO: 17 de referencia es la secuencia de aminoacidos deducida de una variante de acetilxilano esterasa de Thermotoga lettingae de la publicacion de solicitud de patente estadounidense n.° 2010-0087529, en donde el residuo Xaa en la posicion 277 es Ala, Val, Ser o Thr.

SEQ ID NO: 18 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una variante de acetilxilano esterasa de Thermotoga petrophila de la publicacion de solicitud de patente estadounidense n.° 2010-0087529, en donde el residuo Xaa en la posicion 277 es Ala, Val, Ser o Thr.

SEQ ID NO: 19 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una variante de acetilxilano esterasa de Thermotoga sp. RQ2 derivada de “RQ2(a)” de la publicacion de solicitud de patente estadounidense n.° 20100087529, en donde el residuo Xaa en la posicion 277 es Ala, Val, Ser o Thr.

SEQ ID NO: 20 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una variante de acetilxilano esterasa de Thermotoga sp. RQ2 derivada de “RQ2(b)” de la publicacion de solicitud de patente estadounidense n.° 2010- 0087529, en donde el residuo Xaa en la posicion 278 es Ala, Val, Ser o Thr.

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SEQ ID NO: 21 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una acetilxilano esterasa de Thermotoga lettingae.

SEQ ID NO: 22 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una acetilxilano esterasa de Thermotoga petrophila.

SEQ ID NO: 23 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una primera acetilxilano esterasa de Thermotoga sp. RQ2 descrita como “RQ2(a)”.

SEQ ID NO: 24 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una segunda acetilxilano esterasa de Thermotoga sp. RQ2 descrita como “RQ2(b)”.

SEQ ID NO: 25 de referencia es la secuencia de aminoacidos de una cefalosporina C desacetilasa de Thermoanearobacterium saccharolyticum.

SEQ ID NO: 26 de referencia es la secuencia de aminoacidos de la acetilxilano esterasa de Lactococcus lactis (numero de registro de GENBANK ® ABX75634.1).

SEQ ID NO: 27 de referencia es la secuencia de aminoacidos de la acetilxilano esterasa de Mesorhizobium loti (numero de registro de GENBANK ® BAB53179.1).

SEQ ID NO: 28 de referencia es la secuencia de aminoacidos de la acetilxilano esterasa de Geobacillus stearothermophilus (numero de registro de GENBANK® AAF70202.1).

SEQ ID NO 29-163 son las secuencias de aminoacidos de peptidos que tienen afinidad por una superficie de la cavidad bucal.

SEQ ID NO: 164-177 son las secuencias de aminoacidos de ligadores/espaciadores peptfdicos.

SEQ ID NO: 178-197 son las secuencias de aminoacidos de diversos constructos de fusion de perhidrolasa seleccionados como diana que comprenden una enzima perhidrolftica que se acopla por medio de un ligador peptfdico a un dominio de union que tiene afinidad por una superficie bucal (vease la publicacion de solicitud de patente internacional n.° WO2012/087970A2 concedida a Butterick et al.).

Descripcion detallada

La siguiente descripcion de la(s) realizacion(es) preferida(s) es solamente a modo de ejemplo en naturaleza y no pretende limitar la invencion, su aplicacion, o usos.

Tal como se usa en el presente documento, los artfculos “un”, “una” y “el/la” precediendo a un elemento o componente de la invencion no pretenden ser restrictivos respecto al numero de ejemplos (es decir, apariciones) del elemento o componente. Por tanto “un”, “una” y “el/la” deben leerse como que incluyen uno o al menos uno, y la forma de la palabra en singular del elemento o componente incluye tambien el plural a menos que el numero signifique obviamente el singular.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “que comprende” significa la presencia de las caracterfsticas, numeros enteros, etapas o componentes establecidos tal como se hace referencia en las reivindicaciones, pero no excluye la presencia o adicion de una u mas caracterfsticas, numeros enteros, etapas, componentes o grupos de los mismos adicionales. El termino “que comprende” pretende incluir realizaciones englobadas por los terminos “que consiste esencialmente en” y “que consiste en”. De manera similar, el termino “que consiste esencialmente en” pretende incluir realizaciones englobadas por el termino “que consiste en”.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “aproximadamente” modificando la cantidad de un componente o reactante empleado, se refiere a una variacion en la cantidad numerica que puede producirse, por ejemplo, a traves de procedimientos de manejo de lfquidos y medicion tfpicos usados para obtener concentrados o disoluciones de uso en el mundo real; a traves de errores inadvertidos en estos procedimientos; a traves de diferencias en la fabricacion, fuente o pureza de los componentes empleados para obtener las composiciones o llevar a cabo los metodos; y similares. El termino “aproximadamente” engloba tambien cantidades que difieren debido a diferentes condiciones de equilibrio para una composicion que resulta de una mezcla inicial particular. Modificadas o no por el termino “aproximadamente”, las reivindicaciones incluyen equivalentes a las cantidades.

Cuando esten presentes, todos los intervalos son inclusivos y combinables. Por ejemplo, cuando se menciona un intervalo de “de 1 a 5”, debe interpretarse que el intervalo mencionado incluye los intervalos “de 1 a 4”, “de 1 a 3”, “12”, “1 -2 y 4-5”, “1 -3 y 5”, y similares.

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Tal como se usa en el presente documento, los terminos “sustrato”, “sustrato adecuado”, “donador de acilo” y “sustrato de ester del acido carbox^lico” se refieren de manera intercambiable especfficamente a:

(a) uno o mas esteres que tienen la estructura

imagen1

en la que

X es un grupo ester de formula R6C(O)O;

R6 es un resto hidrocarbilo lineal, ramificado o cfclico Ci a C7, opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo o grupo alcoxilo Ci a C4, en la que R6 comprende opcionalmente uno o mas enlaces eter en donde R6 es C2 a C7;

R5 es un resto hidrocarbilo lineal, ramificado o cfclico Ci a C6 o un resto heteroaromatico de cinco miembros cfclico o aromatico o heteroaromatico de seis miembros cfclico opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo; en la que cada atomo de carbono en R5 comprende individualmente no mas de un grupo hidroxilo o no mas de un grupo ester, y en la que R5 comprende opcionalmente uno o mas enlaces eter;

m es un numero entero que oscila entre 1 y el numero de atomos de carbono de R5,

teniendo dichos uno o mas esteres una solubilidad en agua de al menos 5 ppm a 25°C; o

(b) uno o mas gliceridos que tienen la estructura

O

R1--------C--------O--------CH2--------CH--------CH2---------OR4

OR3

en la que R1 es un alquilo de cadena lineal o cadena ramificada C1 a C7 opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo o alcoxilo Ci a C4 y R3 y R4 son individualmente H o RiC(O); o

(c) uno o mas esteres de formula

O

II

R'l C O R2

en la que Ri es un alquilo de cadena lineal o cadena ramificada Ci a C7 opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo o alcoxilo Ci a C4 y R2 es un alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, acilheteroarilo, heteroarilo de cadena lineal o de cadena ramificada Ci a Ci0, (CH2CH2O)n, o (CH2CH(CH3)-O)nH y n es de i a i0; o

(d) uno o mas monosacaridos acetilados, disacaridos acetilados o polisacaridos acetilados; o

(e) cualquier combinacion de (a) a (d).

Tal como se usa en el presente documento, el termino “peracido” es sinonimo de peroxiacido, acido peroxicarboxflico, acido peroxi, acido percarboxflico y acido peroxoico.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “acido peracetico” se abrevia como “PAA” y es sinonimo de acido peroxiacetico, acido etanoperoxoico y todos los otros sinonimos de numero de registro CAS 79-2i-0.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “monoacetina” es sinonimo de monoacetato de glicerol, monoacetato de glicerina y monoacetato de glicerilo.

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glicerina, diacetato de glicerilo, y todos los demas sinonimos de numero de registro CAS 25395-31-7.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “triacetina” es sinonimo de triacetato de glicerina; triacetato de glicerol; triacetato de glicerilo, 1,2,3-triacetoxipropano; triacetato de 1,2,3-propanotriol y todos los demas sinonimos de numero de registro CAS 102-76-1.

Tal como se usa en el presente documento, los terminos “azucar acetilado” y “sacarido acetilado” se refieren a mono-, di- y polisacaridos que comprenden al menos un grupo acetilo. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a pentaacetato de glucosa; tetraacetato de xilosa; xilano acetilado; fragmentos de xilano acetilado; 1,2,3,5-tetraacetato de p-D-ribofuranosa; tri-O-acetil-D-galactal; y tri-O-acetil-glucal.

Tal como se usan en el presente documento, los terminos “hidrocarbilo”, “grupo hidrocarbilo” y “resto hidrocarbilo” quieren decir una disposicion de cadena lineal, ramificada o cfclica de atomos de carbono conectados mediante enlaces carbono-carbono sencillos, dobles o triples y/o mediante enlaces eter, y sustituidos por consiguiente con atomos de hidrogeno. Tales grupos hidrocarbilo pueden ser alifaticos y/o aromaticos. Los ejemplos de grupos hidrocarbilo incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, ciclopropilo, ciclobutilo, pentilo, ciclopentilo, metilciclopentilo, hexilo, ciclohexilo, bencilo y fenilo. En una realizacion preferida, el resto hidrocarbilo es una disposicion de cadena lineal, ramificada o cfclica de atomos de carbono conectados por enlaces carbono- carbono sencillos y/o mediante enlaces eter, y sustituidos por consiguiente con atomos de hidrogeno.

Tal como se usa en el presente documento, los terminos “monoesteres” y “diesteres” de 1,2-etanodiol; 1,2- propanodiol; 1,3-propanodiol; 1,2-butanodiol; 1,3-butanodiol; 2,3-butanodiol; 1,4-butanodiol; 1,2-pentanodiol; 2,5- pentanodiol; 1,5-pentandiol; 1,6-pentanodiol; 1,2-hexanodiol; 2,5-hexanodiol; 1,6-hexanodiol; y mezclas de los mismos, se refieren a dichos compuestos que comprenden al menos un grupo ester de formula RC(O)O, en la que R es un resto hidrocarbilo lineal C1 a C7. En una realizacion, el sustrato de ester del acido carboxflico se selecciona del grupo que consiste en diacetato de propilenglicol (PGDA), diacetato de etilenglicol (EDGA), y mezclas de los mismos.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “diacetato de propilenglicol” es sinonimo de 1,2- diacetoxipropano, diacetato de propileno, diacetato de 1,2-propanodiol, y todos los demas sinonimos de numero de registro CaS 623-84-7.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “diacetato de etilenglicol” es s inonimo de 1,2-diacetoxietano, diacetato de etileno, diacetato de glicol, y todos los demas sinonimos de numero de registro CAS 111-55-7.

Tal como se usa en el presente documento, los terminos “mezcla de reaccion enzimatica adecuada”, “componentes adecuados para la generacion in situ de un peracido”, “componentes de reaccion adecuados”, “mezcla de reaccion acuosa adecuada”, “mezcla de reaccion”, y “componentes que generan peracidos” se refieren a los materiales y el agua (de la saliva y/o aplicada por el usuario a la pelfcula adhesiva hidratable antes de su uso) en los que los reactantes y el catalizador enzimatico perhidrolftico entran en contacto. Los componentes que generan peracidos incluiran al menos una enzima que tiene actividad perhidrolftica, preferiblemente en la que la enzima perhidrolftica es al menos una perhidrolasa cE-7 (opcionalmente en forma de una protefna de fusion dirigida a una superficie corporal), al menos un sustrato de ester del acido carboxflico adecuado, una fuente de peroxfgeno y agua (de la saliva y/o aplicada por el usuario a la pelfcula adhesiva hidratable antes de su uso).

Tal como se usa en el presente documento, el termino “perhidrolisis” se define como la reaccion de un sustrato seleccionado con peroxido para formar un peracido. Normalmente, se hace reaccionar peroxido inorganico con el sustrato seleccionado en presencia de un catalizador para producir el acido peroxicarboxflico. Tal como se usa en el presente documento, el termino “perhidrolisis qmmica” incluye reacciones de perhidrolisis en las que un sustrato (un precursor de acido peroxicarboxflico) se combina con una fuente de peroxido de hidrogeno en las que se forma acido peroxicarboxflico en ausencia de un catalizador enzimatico. Tal como se usa en el presente documento, el termino “perhidrolisis enzimatica” incluye reacciones de perhidrolisis en las que un sustrato de ester del acido carboxflico (un precursor de peracido; el “donador de acilo”) se combina con una fuente de peroxido de hidrogeno y agua mediante lo cual el catalizador enzimatico cataliza la formacion de peracido.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “actividad perhidrolasa” se refiere la actividad del catalizador por masa unitaria (por ejemplo, miligramos) de protefna, peso de celulas en seco o peso de catalizador inmovilizado.

Tal como se usa en el presente documento, “una unidad de actividad enzimatica” o “una unidad de actividad” o “U” se define como la cantidad de actividad perhidrolasa requerida para la produccion de 1 pmol de producto de acido peroxicarboxflico por minuto a una temperatura especificada.

Tal como se usa en el presente documento, los terminos “catalizador enzimatico” y “catalizador de perhidrolasa” se refieren a un catalizador que comprende una enzima que tiene actividad de perhidrolisis y puede estar en forma de

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una celula microbiana completa, celula(s) microbianas permeabilizadas, uno o mas componentes celulares de un extracto de celulas microbianas, enzima parcialmente purificada o enzima purificada. El catalizador enzimatico tambien puede modificarse qufmicamente (tal como mediante pegilacion o mediante reaccion con reactivos de reticulacion). El catalizador de perhidrolasa tambien puede inmovilizarse sobre un soporte soluble o insoluble usando metodos bien conocidos por los expertos en la tecnica; vease por ejemplo, Immobilization of Enzymes and Cells; Gordon F. Bickerstaff, Editor; Humana Press, Totowa, NJ, EE.UU.; 1997. En una realizacion, el catalizador de perhidrolasa puede inmovilizarse de manera no covalente en o sobre una tira de cuidado bucal (por ejemplo, una tira de blanqueamiento) o bandeja dental. En una realizacion adicional, la inmovilizacion no covalente a la tira o bandeja dental puede ser a traves del uso de un dominio de union peptfdico que tiene fuerte afinidad por un material en o sobre la tira o bandeja (por ejemplo, una protefna de fusion que comprende una enzima perhidrolftica acoplada a traves de un espaciador peptfdico opcional a un dominio de union peptfdico). En otra realizacion, la bandeja dental es una bandeja deformable. En aun una realizacion adicional, el catalizador de perhidrolasa se inmoviliza en o sobre la bandeja deformable tras la formacion de la impresion dental.

Tal como se usa en el presente documento, “acetilxilano esterasas” se refiere a una enzima (E.C. 3.1.1.72; AXE) que cataliza la desacetilacion de xilanos acetilados y otros sacaridos acetilados.

Tal como se usa en el presente documento, los terminos “cefalosporina C desacetilasa” y “cefalosporina C acetil hidrolasa” se refieren a una enzima (E.C. 3.1.1.41) que cataliza la desacetilacion de cefalosporinas tales como cefalosporina C y acido 7-aminocefalosporanico (Mitsushima et al., (1995) Appl. Env. Microbiol. 61(6):2224-2229). Se proporcionan en el presente documento las secuencias de aminoacidos de varias cefalosporina C desacetilasas que tienen una actividad perhidrolftica significativa.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “Bacillus subtilis ATCC® 31954™” se refiere a una celula bacteriana depositada en la Coleccion Americana de Cultivos Tipo (ATCC) que tiene el numero de registro de deposito internacional ATCC® 31954™. Tal como se describe en el presente documento, se proporciona una enzima que tiene actividad perhidrolasa significativa a partir de B. subtilis ATCC® 31954™ como SEQ ID NO: 4 (vease la publicacion de solicitud de patente estadounidense n.° 2010-0041752).

Tal como se usa en el presente documento, el termino “Thermotoga maritima MSB8” se refiere a una celula bacteriana que se notifica que tiene actividad acetilxilano esterasa (GENBANK® NP_227893.1; vease la publicacion de solicitud de patente estadounidense n.° 2008-0176299). La secuencia de aminoacidos de la enzima que tiene actividad perhidrolasa de Thermotoga maritima MSB8 se proporciona como SEQ ID NO: 11. Se proporcionan variantes de la perhidrolasa de Thermotoga maritima MSB8 como SEQ ID NO: 1 y 16.

Tal como se usa en el presente documento, una “molecula de acido nucleico aislada”, “polinucleotido aislado” y “fragmento de acido nucleico aislado” se usaran de manera intercambiable y se refieren a un polfmero de ARN o ADN que es mono o bicatenario, que contiene opcionalmente bases de nucleotidos sinteticas, no naturales o alteradas. Una molecula de acido nucleico aislada en forma de un polfmero de ADN puede estar compuesta por uno o mas segmentos de ADNc, ADN genomico o ADN sintetico.

El termino “aminoacido” se refiere a la unidad estructural qmmica basica de una proterna o un polipeptido. Las siguientes abreviaturas se usan en el presente documento para identificar aminoacidos especfficos:

Aminoacido

Abreviatura de tres letras Abreviatura de una letra

Alanina

Ala A

Arginina

Arg R

Asparagina

Asn N

Acido aspartico

Asp D

Cistefna

Cys C

Glutamina

Gln Q

Acido glutamico

Glu E

Glicina

Gly G

Histidina

His H

Isoleucina

Ile I

Leucina

Leu L

Lisina

Lys K

Metionina

Met M

Fenilalanina

Phe F

Prolina

Pro P

Serina

Ser S

Treonina

Thr T

Triptofano

Trp W

Tirosina

Tyr Y

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40

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50

Aminoacido

Abreviatura de tres letras Abreviatura de una letra

Valina

Val V

Cualquier aminoacido o tal como se define en el presente documento

Xaa X

Tal como se usa en el presente documento, el termino “aproximadamente” modificando la cantidad de un componente o reactante empleado se refiere a una variacion en la cantidad numerica que puede producirse, por ejemplo, a traves de procedimientos de manipulacion de lfquidos y medicion tipicos usados para preparar concentrados o, tal como se usa en el presente documento, los terminos “motivo de firma” y “motivo de diagnostico” se refieren a estructuras conservadas compartidas entre una familia de enzimas que tienen una actividad definida. El motivo de firma puede usarse para definir y/o identificar la familia de enzimas relacionadas estructuralmente que tienen actividad enzimatica similar por una familia definida de sustratos. El motivo de firma puede ser una unica secuencia de aminoacidos contiguos o una coleccion de motivos conservados, no contiguos que juntos forman el motivo de firma. Normalmente, el/los motivo(s) conservado(s) se representa(n) mediante una secuencia de aminoacidos. En una realizacion, las enzimas perhidrolfticas usadas en las presentes composiciones y metodos comprenden un motivo de firma de carbohidrato esterasa CE-7.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “software de analisis de secuencias” se refiere a cualquier algoritmo informatico o programa de software que sea util para el analisis de secuencias de nucleotidos o aminoacidos. El “software de analisis de secuencias” puede estar disponible comercialmente o desarrollarse independientemente. El software de analisis de secuencias tfpico incluira, pero no se limita a, el conjunto GCG de programas (Wisconsin Package version 9.0, Accelrys Software Corp., San Diego, CA), BLASTP, BLASTN, BLASTX (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)), y DNASTAR (DNASTAR, Inc. 1228 S. Park St. Madison, WI 53715 EE.UU.), CLUSTALW (por ejemplo, version 1.83; Thompson et al., Nucleic Acids Research, 22(22):4673-4680 (1994)), y el programa FASTA que incorpora el algoritmo de Smith-Waterman (W. R. Pearson, Comput. Methods Genome Res., [Proc. Int. Symp.] (1994), Meeting Date 1992, 111-20. Editor(es): Suhai, Sandor. Editorial: Plenum, Nueva York, NY), Vector nTi (Informax, Bethesda, MD) y Sequencher v. 4.05. Dentro del contexto de esta solicitud, se entendera que cuando el software de analisis de secuencias se usa para analisis, los resultados del analisis se basaran en los “valores por defecto” del programa al que se hace referencia, a menos que se especifique otra cosa. Tal como se usa en el presente documento “valores por defecto” significara cualquier conjunto de valores o parametros fijados por el fabricante del software que se cargan originalmente con el software cuando se inicia por primera vez.

El termino “superficie corporal” se refiere a cualquier superficie del cuerpo humano que pueda servir como diana para un agente de beneficio, tal como un agente de beneficio de peracido. Los presentes metodos y composiciones se refieren a productos y aplicaciones para el cuidado bucal. Como tal, la superficie corporal comprende una superficie/material de cavidad. En una realizacion, el material de cavidad bucal comprende esmalte dental.

Tal como se usa en el presente documento, los terminos “blanqueamiento dental” y “blanqueo dental” se usan de manera intercambiable, para referirse a la mejora del brillo (por ejemplo, blanqueamiento) de un diente o dientes. Se describen tiras de blanqueamiento en el presente documento que comprenden componentes adecuados para generar enzimaticamente una cantidad eficaz de un peracido para blanquear los dientes cuando se hidratan.

Tal como se usa en el presente documento, “manchas intrmsecas” en dientes se refieren al color resultante de cromogenos dentro del esmalte y la dentina subyacente. El color intrmseco de los dientes humanos tiende a volverse mas amarillo con el envejecimiento, debido al adelgazamiento del esmalte y el oscurecimiento de la dentina amarilla subyacente. La eliminacion de manchas intrmsecas requiere habitualmente el uso de peroxidos u otros productos qmmicos oxidantes, que penetran en el esmalte y decoloran los cromogenos internos.

En contraste con las manchas intrmsecas, las “manchas extrmsecas” se forman sobre la superficie de los dientes cuando materiales cromogenos exogenos se unen al esmalte, habitualmente dentro de pelmula que recubre de manera natural los dientes. La mayona de las personas acumulan algun grado de manchas extrmsecas antiesteticas sobre los dientes a lo largo del tiempo. Este proceso de manchado se promueve por factores tales como: (1) la ingestion de alimentos que contienen taninos y bebidas tales como cafe, te o vino tinto; (2) el uso de productos de tabaco; y/o (3) la exposicion a determinadas sustancias cationicas (por ejemplo, estano, hierro y clorhexidina). Estas sustancias tienden a adherirse a la estructura de hidroxiapatita del esmalte, lo que conduce a alteracion del color de los dientes y a una reduccion concomitante en la blancura de los dientes. A lo largo de un periodo de anos, las manchas extrmsecas pueden penetrar en la capa de esmalte y dar como resultado manchas intrmsecas.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “destenir” o “decolorar” se refiere al proceso de eliminar una mancha de una superficie de la cavidad bucal. La(s) mancha(s) puede(n) ser manchas intrmsecas, manchas extrmsecas, o una combinacion de las mismas.

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enzima perhidrolasa necesaria para lograr la actividad enzimatica requerida en la aplicacion especffica. Tales cantidades eficaces las determina facilmente un experto habitual en la tecnica y se basan en muchos factores, tales como la variante enzimatica particular usada.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “fuente de peroxfgeno” se refiere a compuestos que pueden proporcionar peroxido de hidrogeno a una concentracion de aproximadamente 1 mM o mas cuando estan en una disolucion acuosa incluyendo, pero sin limitarse a, peroxido de hidrogeno, aductos de peroxido de hidrogeno (por ejemplo, aducto de urea-peroxido de hidrogeno (peroxido de carbamida)), perboratos y percarbonatos. Tal como se describe en el presente documento, la fuente de peroxfgeno en las presentes tiras de blanqueamiento esta en forma de partfculas granulares, en la que el usuario hidrata las partfculas de peroxido granulares para liberar una cantidad eficaz de peroxido de hidrogeno. Tal como se describe en el presente documento, la concentracion del peroxido de hidrogeno proporcionado por el compuesto de peroxfgeno en la formulacion de reaccion acuosa es inicialmente de al menos 0,1 mM o mas tras combinar los componentes de la reaccion. En una realizacion, la concentracion de peroxido de hidrogeno en la formulacion de reaccion acuosa es de al menos 0,5 mM. En una realizacion, la concentracion de peroxido de hidrogeno en la formulacion de reaccion acuosa es de al menos 1 mM. En otra realizacion, la concentracion de peroxido de hidrogeno en la formulacion de reaccion acuosa es de al menos 10 mM. En otra realizacion, la concentracion de peroxido de hidrogeno en la formulacion de reaccion acuosa es de al menos 100 mM. En otra realizacion, la concentracion de peroxido de hidrogeno en la formulacion de reaccion acuosa es de al menos 200 mM. En otra realizacion, la concentracion de peroxido de hidrogeno en la formulacion de reaccion acuosa es de 500 mM o mas. En aun otra realizacion, la concentracion de peroxido de hidrogeno en la formulacion de reaccion acuosa es de 1000 mM o mas. La razon molar del peroxido de hidrogeno con respecto a sustrato enzimatico, por ejemplo, triglicerido, (H2O2:sustrato) en la formulacion puede ser de desde aproximadamente 0,002 hasta 20, preferiblemente de aproximadamente 0,1 a 10, y lo mas preferiblemente de aproximadamente 0,5 a 5.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “oligosacarido” se refiere a compuestos que contienen entre 2 y al menos 24 unidades de monosacarido unidas por enlaces glicosfdicos. El termino “monosacarido” se refiere a un compuesto de formula empfrica (CH2O)n, en la que n>3, el esqueleto de carbono no esta ramificado, cada atomo de carbono excepto uno contiene un grupo hidroxilo, y el atomo de carbono restante es un aldehfdo o una cetona en el atomo de carbono 1. El termino “monosacarido” tambien se refiere a formas de hemiacetal o hemicetal cfclico intracelulares.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “adhesivo hidratable” se referira a un material adhesivo que puede hidratarse. El adhesivo hidratable esta sustancialmente seco y no es adhesivo hasta que se hidrata. Tras la hidratacion, el adhesivo hidratable llega a ser suficientemente adhesivo como para unir la tira/pelfcula de blanqueamiento dental a la superficie de un diente. La pelfcula adhesiva hidratable tambien comprende un componente de blanqueo granular mediante lo cual tras la hidratacion se libera una cantidad eficaz de peroxido de hidrogeno que va a usarse en la formacion enzimatica de un agente de blanqueo de peracido. La tira/pelfcula de blanqueamiento es normalmente delgada (normalmente menos de 2 mm), conformada y dimensionada para ajustarse dentro de la cavidad bucal, y suficientemente flexible de manera que la pelfcula puede aplicarse y colocarse en contacto con una pluralidad de dientes mediante lo cual el adhesivo hidratado ayuda a mantener la pelfcula/tira sobre la superficie del diente y proporcionar una cantidad suficiente de tiempo para que el agente de blanqueo de peracido blanquee los dientes.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “cantidad eficaz” se referira a la cantidad de material necesaria para lograr el efecto deseado.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “sustancialmente no adhesivo hasta que se hidrata” se referira a la falta de fuerza adhesiva suficiente para adherir la pelfcula de blanqueamiento dental a la superficie de una pluralidad de dientes antes de la hidratacion. Como tal, la pelfcula adhesiva hidratable sera facil de manejar y manipular antes de la aplicacion/hidratacion por el usuario.

Por “identidad de secuencia” quiere decirse la identidad de aminoacidos usando un programa de alineacion de secuencias, por ejemplo, ClustalW o BLAST, por ejemplo, generalmente tal como se describe en Altschul SF, Gish W, Miller W, Myers eW, Lipman DJ, “Basic local alignment search tool”, J Mol Biol (1990) 215 (3): 403-410, y Goujon M, McWilliam H, Li W, Valentin F, Squizzato S, Paern J, Lopez R, Nucleic Acids Research (2010) 38 Supl.: W695-9.

El donador de acilo es 1,2,3-triacetoxipropano (algunas veces denominado en el presente documento triacetina o triacetato de glicerina).

Los donadores de acilo y/o enzimas pueden encapsularse opcionalmente. Hay una amplia variedad de opciones de encapsulacion bien conocidas en la tecnica, tanto naturales como sinteticas. Almidones modificados y goma arabiga son particularmente muy adecuados ya que son de calidad alimentaria, relativamente baratos, se disuelven rapidamente y pueden adsorber niveles bastante altos de aceites lfquidos. No es necesario considerar ningun impacto sobre la viscosidad final.

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En algunas realizaciones, los granulos comprenden un agente antisensibilidad que puede desensibilizar los nervios u ocluir los tubulos de dentina. En algunas realizaciones, el agente antisensibilidad se selecciona de una fuente de ion potasio, un silicato, una fuente de ion estannoso, un aminoacido basico, una arcilla y una combinacion de los mismos. En algunas realizaciones, la fuente de ion potasio es una sal de potasio aceptable por via oral y esta presente en una cantidad eficaz para reducir la sensibilidad de la dentina. En algunas realizaciones, la fuente de ion potasio se selecciona de cloruro de potasio, nitrato de potasio y una combinacion de los mismos. En algunas realizaciones, el aminoacido basico es arginina. En algunas realizaciones, el aminoacido basico se selecciona de fosfato de arginina, bicarbonato de arginina y clorhidrato de arginina. En algunas realizaciones, el silicato es silicato de calcio.

Perhidrolasas CE-7

Las presentes composiciones y metodo comprenden enzimas que tiene actividad perhidrolftica que se clasifican estructuralmente como miembros familia de carbohidrato esterasa 7 (familia CE-7) de enzimas (vease Coutinho, P.M., Henrissat, B. “Carbohydrate-active enzymes: an integrated databasa approach” en Recent Advances in Carbohydrate Bioengineering, H.J. Gilbert, G. Davies, B. Henrissat y B. Svensson eds., (1999) The Royal Society of Chemistry, Cambridge, pags. 3-12) y que comprende la secuencia de aminoacidos SEQ ID NO: 1. Se ha demostrado que la familia CE-7 de enzimas es particularmente eficaz para producir acidos peroxicarboxflicos a partir de una variedad de sustratos de ester del acido carboxflico cuando se combinan con una fuente de peroxfgeno (patentes estadounidenses 7.794.378; 7.951.566; 7.723.083; y 7.964.378 y la publicaciones de solicitud de patente estadounidense n.os 2008-0176299, 2010-0087529, 2011-0081693, y 2011-0236335 concedidas a DiCosimo et al.; cada una incorporada en el presente documento como referencia).

Los miembros de la familia CE-7 incluyen cefalosporina C desacetilasas (CAH; E.C. 3.1.1.41) y acetilxilano esterasas (AXE; E.C. 3.1.1.72). Los miembros de la familia de esterasas CE-7 comparten un motivo de firma conservado (Vincent et al., J. Mol. Biol., 330:593-606 (2003)). Las perhidrolasas que comprenden el motivo de firma de CE-7 (“perhidrolasas CE-7”) y/o una estructura sustancialmente similar son adecuadas para su uso en las composiciones y los metodos descritos en el presente documento. Se conocen bien en la tecnica medios para identificar moleculas biologicas sustancialmente similares (por ejemplo, protocolos de alineacion de secuencias, hibridaciones de acidos nucleicos y/o la presencia de un motivo de firma conservado). Por ejemplo, la perhidrolasa incluye una enzima que comprende el motivo de firma de CE-7 y una identidad de secuencia de al menos el 20%, preferiblemente al menos el 30%, mas preferiblemente al menos el 33%, mas preferiblemente al menos el 40%, mas preferiblemente al menos el 42%, mas preferiblemente al menos el 50%, mas preferiblemente al menos el 60%, mas preferiblemente al menos el 70%, mas preferiblemente al menos el 80%, mas preferiblemente al menos el 90%, y lo mas preferiblemente de al menos el 90%, el 91%, el 92%, el 93%, el 94%, el 95%, el 96%, el 97%, el 98% o el 99% con una de las secuencias proporcionadas en el presente documento.

Tal como se usa en el presente documento, la frase “la enzima se clasifica estructuralmente como una enzima CE - 7”, “perhidrolasa CE-7” o “clasificada estructuralmente como una enzima de la familia de carbohidrato esterasa 7” se usara para referirse a enzimas que tienen actividad perhidrolftica que se clasifican estructuralmente como una carbohidrato esterasa CE-7. Esta familia de enzimas puede definirse por la presencia de un motivo de firma (Vincent et al., citado anteriormente). El motivo de firma para esterasas CE-7 comprende tres motivos conservados (numeracion de posicion de residuos en relacion con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 1; una variante C277S de la perhidrolasa de Thermotoga maritima).

Arg 118-Gly 119-Gln 120;

Gly186-Xaa187-Ser188-Gln189-Gly190; y

His303-Glu304.

Normalmente, el Xaa en la posicion de residuo de aminoacido 187 es glicina, alanina, prolina, triptofano o treonina. Dos de los tres residuos de aminoacido que pertenecen a la trfada catalftica estan en negrita. En una realizacion, el Xaa en la posicion de residuo de aminoacido 187 se selecciona del grupo que consiste en glicina, alanina, prolina, triptofano y treonina.

El analisis adicional de los motivos conservados dentro de la familia de carbohidrato esterasa CE-7 indica la presencia de un motivo conservado adicional (LXD en las posiciones de aminoacido 272-274 de SEQ ID NO: 1) que puede usarse para definir adicionalmente una perhidrolasa que pertenece a la familia de carbohidrato esterasa CE- 7. El motivo de firma definido anteriormente puede incluir un motivo conservado adicional (cuarto) definido como:

Leu272-Xaa273-Asp274.

El Xaa en la posicion de residuo de aminoacido 273 es normalmente isoleucina, valina o metionina. El cuarto motivo

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incluye el residuo de acido aspartico (negrita) que pertenece a la trfada catalftica (Ser188-Asp274-His303).

Las perhidrolasas CE-7 pueden estar en forma de protefnas de fusion que tienen al menos un componente peptfdico que tiene afinidad por al menos una superficie corporal. En una realizacion, todas las alineaciones usadas para determinar si una perhidrolasa seleccionada como diana (protefna de fusion) comprende el motivo de firma de CE-7 se basaran en la secuencia de aminoacidos de la enzima perhidrolftica sin el componente peptfdico que tiene la afinidad por una superficie corporal.

Pueden usarse varios algoritmos de alineacion global bien conocidos (es decir, software de analisis de secuencias) para alinear dos o mas secuencias de aminoacidos que representan enzimas que tienen actividad perhidrolasa para determinar si la enzima comprende el presente motivo de firma. La(s) secuencia(s) alineada(s) se compara(n) con la secuencia de referencia (sEq ID NO: 1) para determinar la existencia del motivo de firma. En una realizacion, se usa una alineacion CLUSTAL (tal como CLUSTALW) usando una secuencia de aminoacidos de referencia (tal como se usa en el presente documento la secuencia de perhidrolasa (SEQ ID NO: 1)) para identificar perhidrolasas que pertenecen a la familia de esterasas CE-7. La numeracion relativa de los residuos de aminoacido conservados se basa en la numeracion de residuos de la secuencia de aminoacidos de referencia para explicar pequenas inserciones o deleciones (por ejemplo, normalmente cinco aminoacidos de menos) dentro de la secuencia alienada.

Los ejemplos de otros algoritmos adecuados que pueden usarse para identificar secuencias que comprenden el presente motivo de firma (en comparacion con la secuencia de referencia) incluyen, pero no se limitan a, Needleman y Wunsch (J. Mol. Biol. 48, 443-453 (1970); una herramienta de alineacion global) y Smith-Waterman (J. Mol. Biol. 147:195-197 (1981); una herramienta de alineacion local). En una realizacion, se implementa una alineacion de Smith-Waterman usando parametros por defecto. Un ejemplo de parametros por defecto adecuados incluye el uso de una matriz de puntuacion BLOSUM62 con penalizacion por hueco abierto = 10 y una penalizacion por extension de hueco = 0,5.

Las carbohidrato esterasas CE-7 segun la presente invencion que tienen actividad perhidrolftica incluyen una secuencia de aminoacidos SEQ ID NO: 1.

Tal como se usa en el presente documento, una molecula de acido nucleico puede “hibridarse” con otra molecula d e acido nucleico, tal como un ADNc, ADN genomico o ARN, cuando una unica hebra de la primera molecula puede aparearse con la otra molecula en condiciones de temperatura y fuerza ionica de la disolucion apropiadas. Se conocen bien condiciones de hibridacion y lavado y se ejemplifican en Sambrook, J. y Russell, D., T. Molecular Clowning: A Laboratory Manual, tercera edicion, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor (2001). Las condiciones de temperatura y fuerza ionica determinan la “rigurosidad” de la hibridacion. Las condiciones de rigurosidad pueden ajustarse para examinar moleculas moderadamente similares, tales como secuencias homologas de organismos relacionados de manera distante, con moleculas altamente similares, tales como genes que duplican enzimas funcionales de organismos estrechamente relacionados. Los lavados tras la hibridacion determinan normalmente las condiciones de rigurosidad. Un conjunto de condiciones preferidas usa una serie de lavados que comienzan con 6X SSC, SDS al 0,5% a temperatura ambiente durante 15 min, luego se repite con 2X SSC, SDS al 0,5% a 45°C durante 30 min, y luego se repite dos veces con 0,2X SSC, SDS al 0,5% a 50°C durante 30 min. Un conjunto mas preferido de condiciones usa temperaturas superiores en las que los lavados son identicos a los anteriores excepto porque la temperatura de los dos lavados de 30 min finales en 0,2X SSC, SDS al 0,5% se aumento hasta 60°C. Otro conjunto preferido de condiciones de hibridacion altamente rigurosas es 0,1X SSC, SDS al 0,1%, 65°C y lavado con 2X SSC, SDS al 0,1% seguido por un lavado final de 0,1X SSC, SDS al 0,1%, 65°C.

La hibridacion requiere que los dos acidos nucleicos contengan secuencias complementarias, aunque dependiendo de la rigurosidad de la hibridacion, son posibles apareamientos erroneos entre bases. La rigurosidad apropiada para hibridar acidos nucleicos depende de la longitud de los acidos nucleicos y el grado de complementacion, variables bien conocidas en la tecnica. Cuanto mayor es el grado de similitud u homologfa entre dos secuencias de nucleotidos, mayor es el valor de Tm para hfbridos de acidos nucleicos que tienen esas secuencias. La estabilidad relativa (correspondiente a Tm superior) de hibridaciones de acidos nucleicos disminuye en el siguiente orden: ARN:ARN, AdN:ARN, ADN:ADN. Para hfbridos de mas de 100 nucleotidos de longitud, se han derivado ecuaciones para calcular Tm (Sambrook y Russell, citado anteriormente). Para hibridaciones con acidos nucleicos mas cortos, es decir, oligonucleotidos, la posicion de los apareamientos erroneos se vuelve mas importante, y la longitud del oligonucleotido determina su especificidad (Sambrook y Russell, citado anteriormente). En un aspecto, la longitud de un acido nucleico que puede hibridarse es de al menos aproximadamente 10 nucleotidos. Preferiblemente, una longitud minima para un acido nucleico que puede hibridarse es de al menos aproximadamente 15 nucleotidos de longitud, mas preferiblemente al menos aproximadamente 20 nucleotidos de longitud, incluso mas preferiblemente al menos 30 nucleotidos de longitud, incluso mas preferiblemente al menos 300 nucleotidos de longitud y lo mas preferiblemente al menos 800 nucleotidos de longitud. Ademas, el experto en la tecnica reconocera que la temperatura y la concentracion de sal de la disolucion de lavado pueden ajustarse segun sea necesario segun factores tales como longitud de la sonda.

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secuencias de polipeptido o dos o mas secuencias de polinucleotido, tal como se determina comparando las secuencias. En la tecnica, “identidad” tambien significa el grado de relacion de secuencias entre secuencias de polinucleotido o polipeptido, tal como puede ser el caso, tal como se determina mediante la coincidencia entre hebras de tales secuencias. La “identidad” y “similitud” pueden calcularse facilmente mediante metodos conocidos, incluyendo pero sin limitarse a los descritos en: Computational Molecular Biology (Lesk, A. M., ed.) Oxford University Press, NY (1988); Biocomputing: Informatics and Genome Projects (Smith, D. W., ed.) Academic Press, NY (1993); Computer Analysis of Sequence Data, Part I (Griffin, A. M., y Griffin, H. G., eds.) Humana Press, NJ (1994); Sequence Analysis in Molecular Biology (von Heinje, G., ed.) Academic Press (1987); y Sequence Analysis Primer (Gribskov, M. y Devereux, J., eds.) Stockton Press, NY (1991). Los metodos para determinar la identidad y similitud estan codificados en programas informaticos disponibles publicamente. Pueden realizarse alineaciones de secuencias y calculos del porcentaje de identidad usando el programa Megalign del conjunto de calculo de bioinformatica LASERGENE (DNASTAR Inc., Madison, WI), el programa AlignX de Vector NTI v. 7.0 (Informax, Inc., Bethesda, MD), o el conjunto de software abierto EMBOSS (EMBLEBI; Rice et al., Trends in Genetics 16, (6):276- 277 (2000)). Pueden realizarse alineaciones multiples de las secuencias usando el metodo CLUSTAL (tal como CLuStAlW; por ejemplo version 1.83) de alineacion (Higgins y Sharp, CABIOS, 5:151-153 (1989); Higgins et al., Nucleic Acids Res. 22:4673-4680 (1994); y Chenna et al., Nucleic Acids Res 31 (13):3497-500 (2003)), disponible del European Molecular Biology Laboratory por medio del European Bioinformatics Institute) con los parametros por defecto. Los parametros adecuados para alineaciones de protefnas en CLUSTALW incluyen penalizacion por existencia de huecos=15, extension de hueco=0,2, matriz= Gonnet (por ejemplo, Gonnet250), protefna ENDGAP = -1, protefna GAPDIST=4 y KTUPLE=1. En una realizacion, se usa una alineacion rapida o lenta con los ajustes por defecto en donde se prefiere una alineacion lenta. Alternativamente, los parametros al usar el metodo CLUSTALW metodo (por ejemplo, version 1.83) pueden modificarse para usar tambien KTUPLE =1, penalizacion por hueco=10, extension de hueco =1, matriz = BLOSUM (por ejemplo, BLOSUM64), ventana=5 y diagonales superiores guardadas=5.

Perhidrolasas seleccionadas como diana

Tal como se usa en el presente documento, el termino “perhidrolasa seleccionada como diana” y “enzima seleccionada como diana que tiene actividad perhidrolftica” se referiran a protemas de fusion que comprenden al menos una enzima perhidrolftica (tipo natural o variante de la misma) fusionada/acoplada a al menos un componente peptfdico que tiene afinidad por una superficie diana, preferiblemente una superficie corporal seleccionada como diana. La enzima perhidrolftica dentro de la perhidrolasa seleccionada como diana puede ser cualquier carbohidrato esterasa CE-7 que tiene actividad perhidrolftica y que comprende SEQ ID NO: 1.

La protefna de fusion comprende por tanto una enzima perhidrolftica que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1.

Tal como se usan en el presente documento los terminos “componente peptfdico”, “componente peptfdico que tiene afinidad por una superficie de la cavidad bucal”, “dominio de union a la cavidad bucal” y “OCBD” se referiran a un componente de la protefna de fusion que no es parte de la enzima perhidrolftica que comprende al menos un polfmero de dos o mas aminoacidos unidos por un enlace peptfdico; en el que el componente tiene afinidad por la superficie de la cavidad bucal diana. En un aspecto preferido, el OCBD tiene afinidad por el esmalte dental.

En una realizacion, el componente peptfdico que tiene afinidad por una superficie corporal puede ser un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo Fab, un anticuerpo de fragmento variable de cadena sencilla (scFv), un anticuerpo de Camelidae (Muyldermans, S., Rev. Mol. Biotechnol. (2001) 74:277-302), una protefna de presentacion de armazon distinto de anticuerpo (Hosse et al., Prot. Sci. (2006) 15(1): 14-27 y Binz, H. et al. (2005) Nature Biotechnology 23, 1257-1268 para una revision de diversos enfoques asistidos por armazon) o un polipeptido de cadena sencilla que carece de un plegamiento de inmunoglobulina. En otro aspecto, el componente peptfdico que tiene afinidad por el tejido/la superficie de la cavidad bucal (tal como esmalte dental) es un peptido de cadena sencilla que carece de un plegamiento de inmunoglobulina.

El componente peptfdico que tiene afinidad por una superficie de la cavidad bucal puede separarse de la enzima perhidrolftica mediante un ligador peptfdico opcional. Determinados ligadores/espaciadores peptfdicos tienen desde 1 hasta 100 o de 1 a 50 aminoacidos de longitud. En algunas realizaciones, los espaciadores peptfdicos tienen de aproximadamente 1 a aproximadamente 25, de 3 a aproximadamente 40, o de 3 a aproximadamente 30 aminoacidos de longitud. En otras realizaciones son espaciadores que tienen de aproximadamente 5 a aproximadamente 20 aminoacidos de longitud. Pueden usarse multiples ligadores peptfdicos. En una realizacion, esta presente al menos un ligador peptfdico y puede repetirse hasta 10 veces.

En una realizacion, el peptido de fusion comprende al menos un peptido de union a la superficie de la cavidad bucal seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 178-197.

En otra realizacion la superficie diana es un material que es parte del envase, tal como la tira de blanqueamiento o la capa de soporte polimerica (cuando se usa una capa de soporte polimerica a la que se aplica el adhesivo hidratable)

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y/o el metodo de administracion a la cavidad bucal. El componente peptfdico se selecciona por su afinidad a un material o materiales en uso tales como polfmeros, plasticos y pelfculas. El diseno de la protefna de fusion de perhidrolasa seleccionada como diana permite la administracion y eliminacion controladas de la perhidrolasa por el usuario manteniendola en un dispositivo retirable tal como, pero sin limitarse a, una tira o bandeja bucal.

El componente peptfdico que tiene afinidad por una superficie de la cavidad oral puede separarse de la perhidrolasa CE-7 mediante un ligador peptfdico opcional. Determinados ligadores/espaciadores peptfdicos tienen desde 1 hasta 100 o de 1 a 50 aminoacidos de longitud. En algunas realizaciones, los espaciadores peptfdicos tienen de aproximadamente 1 a aproximadamente 25, de 3 a aproximadamente 40, o de 3 a aproximadamente 30 aminoacidos de longitud. En otras realizaciones son espaciadores que tienen de aproximadamente 5 a aproximadamente 20 aminoacidos de longitud. Pueden usarse multiples ligadores peptfdicos. Se proporcionan ejemplos de ligadores peptfdicos como SEQ ID NO: 164 - 177.

Como tales, los ejemplos de perhidrolasas CE-7 seleccionadas como diana pueden incluir, pero no se limitan a, cualquiera de las perhidrolasas CE-7 que tienen una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO 1 acopladas a un componente peptfdico que tiene afinidad por una superficie de la cavidad bucal. En una realizacion preferida, los ejemplos de perhidrolasas seleccionadas como diana pueden incluir, pero no se limitan a, cualquiera de las perhidrolasas CE-7 que tienen una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO 1 acopladas a uno o mas peptidos de union a la superficie corporal que tienen afinidad por una superficie de la cavidad bucal (opcionalmente a traves de un espaciador peptfdico).

En una realizacion, la perhidrolasa es una perhidrolasa CE-7 en forma de una protefna de fusion que tiene la siguiente estructura general:

PAH-[L]y-OCBD u OCBD-[L]y-PAH

en la que PAH es la enzima que tiene actividad perhidrolftica, por ejemplo, que tiene un motivo de firma de CE-7, SEQ iD NO: 1, y OCBD es un componente peptfdico que tiene afinidad por una superficie de la cavidad bucal; y L es un ligador opcional; e y es un numero entero que oscila entre 0 y 10. En una realizacion, el ligador (L) esta presente y es un peptido ligador que oscila entre 1 y 100 aminoacidos de longitud.

Por ejemplo SEQ ID NO: 2 es una protefna de fusion que tiene una secuencia de perhidrolasa de SEQ ID NO: 1 acoplada a un dominio de direccionamiento C-terminal con una afinidad por tejidos bucales.

Las perhidrolasas para su uso en los productos y metodos de la invencion pueden estar en forma libre, protegida (por ejemplo, acetilada) o de sal.

En otra realizacion, la superficie diana es un material que es parte del envase y o administracion a la cavidad bucal. El componente peptfdico se selecciona por su afinidad a un material o materiales en uso tales como polfmeros, plasticos y pelfculas. El diseno de la protefna de fusion de perhidrolasa CE-7 seleccionada como diana permite la administracion y eliminacion controladas de la perhidrolasa por el usuario manteniendola en un dispositivo retirable tal como una tira o bandeja bucal.

Afinidad de union

El componente peptfdico que tiene afinidad por la superficie de la cavidad bucal comprende una afinidad de union por una superficie de la cavidad bucal de 10-5 molar (M) o menos. En determinadas realizaciones, el componente peptfdico es uno o mas peptidos de union a la superficie de la cavidad bucal y/o dominio(s) de union que tiene(n) una afinidad de union de 10-5 molar (M) o menos por el esmalte dental. En algunas realizaciones, los dominios o peptidos de union tendran un valor de afinidad de union de 10-5 M o menos en presencia de al menos aproximadamente 50 - 500 mM de sal. El termino “afinidad de union” se refiere a la fuerza de la interaccion de un peptido de union con su sustrato respectivo. La afinidad de union puede definirse o medirse en cuanto a la constante de disociacion del peptido de union (“Kd”), o “MB50”.

“Kd” corresponde a la concentracion de peptido a la que el sitio de union en la diana esta ocupado a la mitad, es decir, cuando la concentracion de diana con peptido unido (material diana unido) es igual a la concentracion de diana sin peptido unido. Cuanto menor es la constante de disociacion, mas fuertemente se une el peptido. Por ejemplo, un peptido con una constante de disociacion nanomolar (nM) se une mas fuertemente que un peptido con una constante de disociacion micromolar (pM). Determinadas realizaciones de la invencion tendran un valor de Kd de 10-5 o menos.

“MB50” se refiere a la concentracion del peptido de union que proporciona una serial que es el 50% de la serial maxima obtenida en un ensayo de union basado en ELISA. Vease, por ejemplo, el ejemplo 3 de la publicacion de solicitud de patente estadounidense 2005/022683; incorporada por el presente documento como referencia. La MB50

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proporciona una indicacion de la fuerza de la interaccion o afinidad de union de los componentes del complejo. Cuando menor es el valor de MB50, mas fuerte, es decir, “mejor” es la interaccion del peptido con su correspondiente sustrato. Por ejemplo, un peptido con una MB50 nanomolar (nM) se une mas fuertemente que un peptido con una MB50 micromolar (pM). Determinadas realizaciones de la invencion tendran un valor de MB50 de 10"5 M o menos.

El componente peptfdico que tiene afinidad por una superficie de la cavidad bucal puede tener una afinidad de union, tal como se mide mediante los valores de Kd o MB50, de menos de o igual a aproximadamente 10"5 M, menos de o igual a aproximadamente 10"6 M, menos de o igual a aproximadamente 10"7 M, menos de o igual a aproximadamente 10"8 M, menos de o igual a aproximadamente 10"9 M, o menos de o igual a aproximadamente 10"10 M.

Los peptidos de union a la superficie de la cavidad bucal y/o dominios de union a la superficie de la cavidad bucal pueden tener una afinidad de union, tal como se mide mediante los valores de Kd o MB50, de menos de o igual a aproximadamente 10"5 M, menos de o igual a aproximadamente 10"6 M, menos de o igual a aproximadamente 107 M, menos de o igual a aproximadamente 10"8 M, menos de o igual a aproximadamente 10"9 M, o menos de o igual a aproximadamente 10"19 M.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “afinidad fuerte” se referira a una afinidad de union que tiene un valor de Kd o MB50 de menos de o igual a aproximadamente 10"5 M, preferiblemente menos de o igual a aproximadamente 10"6 M, mas preferiblemente menos de o igual a aproximadamente 10"7 M, mas preferiblemente menos de o igual a aproximadamente 10"8 M, menos de o igual a aproximadamente 10"9 M, o lo mas preferiblemente menos de o igual a aproximadamente 10"10 M.

Polvos enzimaticos

Las composiciones de cuidado personal pueden usar un catalizador enzimatico en forma de un polvo enzimatico estabilizado. Se describen metodos para preparar y estabilizar formulaciones que comprenden un polvo enzimatico en las publicaciones de solicitud de patente estadounidense n.os 2010-0086534 y 2010-0086535.

La enzima puede estar en el polvo enzimatico en una cantidad en un intervalo de desde aproximadamente el 0,5 por ciento en peso (% en peso) hasta aproximadamente el 75% en peso, por ejemplo, del 1% en peso a aproximadamente el 60% en peso, basandose en el peso seco del polvo enzimatico. Un intervalo de porcentaje en peso preferido de la enzima en el polvo enzimatico/mezcla secada por pulverizacion es de desde aproximadamente el 10% en peso hasta el 50% en peso, y un intervalo de porcentaje en peso mas preferido de la enzima en el polvo enzimatico/mezcla secada por pulverizacion es de desde aproximadamente el 20% en peso hasta el 33% en peso.

El polvo enzimatico puede comprender ademas un excipiente. En un aspecto, el excipiente se proporciona en una cantidad en un intervalo de desde aproximadamente el 95% en peso hasta aproximadamente el 25% en peso basandose en el peso seco del polvo enzimatico. Un intervalo de % en peso preferido del excipiente en el polvo enzimatico es de desde aproximadamente el 90% en peso hasta el 50% en peso, y un intervalo de % en peso mas preferido del excipiente en el polvo enzimatico es de desde aproximadamente el 80% en peso hasta el 67% en peso.

El excipiente usado para preparar un polvo enzimatico puede ser un excipiente de oligosacarido. En una realizacion, el excipiente de oligosacarido tiene un peso molecular promedio en numero de al menos aproximadamente 1250 y un peso molecular promedio en peso de al menos aproximadamente 9000. El excipiente de oligosacarido tiene un peso molecular promedio en numero de al menos aproximadamente 1700 y un peso molecular promedio en peso de al menos aproximadamente 15000. Los oligosacaridos especfficos pueden incluir, pero no se limitan a, maltodextrina, xilano, manano, fucoidano, galactomanano, quitosano, rafinosa, estaquiosa, pectina, insulina, levano, graminano, amilopectina, sacarosa, lactulosa, lactosa, maltosa, trehalosa, celobiosa, nigerotriosa, maltotriosa, melezitosa, maltotriulosa, rafinosa, cestosa, y mezclas de los mismos. En una realizacion preferida, el excipiente de oligosacarido es maltodextrina. Los excipientes a base de oligosacarido pueden incluir tambien, pero no se limitan a, eteres de celulosa no ionicos solubles en agua, tales como hidroximetil-celulosa e hidroxipropilmetilcelulosa, y mezclas de los mismos. En aun una realizacion adicional, el excipiente puede seleccionarse de, pero sin limitarse a, uno o mas de los siguientes compuestos: trehalosa, lactosa, sacarosa, manitol, sorbitol, glucosa, celobiosa, a- ciclodextrina y carboximetilcelulosa.

Donadores de acilo/sustratos de ester adecuados

Los sustratos de ester del acido carboxflico de referencia pueden incluir esteres que tienen la siguiente formula:

(a) uno o mas esteres que tienen la estructura

[X]mR5

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en la que X es un grupo ester de formula R6C(O)O;

R6 es un resto hidrocarbilo lineal, ramificado o dclico C1 a C7, opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo o grupo alcoxilo C1 a C4, en la que R6 comprende opcionalmente uno o mas enlaces eter en donde R6 es C2 a C7;

R5 es un resto hidrocarbilo lineal, ramificado o dclico C1 a C6 o un resto heteroaromatico dclico de cinco miembros o resto aromatico o heteroaromatico dclico de seis miembros opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo; en la que cada atomo de carbono en R5 comprende individualmente no mas de un grupo hidroxilo o no mas de un grupo ester o grupo acido carboxflico, y en la que R5 comprende opcionalmente uno o mas enlaces eter;

m es un numero entero que oscila entre 1 y el numero de atomos de carbono de R5,

teniendo dicho uno o mas esteres solubilidad en agua de al menos 5 ppm a 25°C; o

(b) uno o mas gliceridos que tienen la estructura

O

II

R,-------C------O------CH2-------CH------CH2-------OR4

OR3

en la que R1 es un alquilo de cadena lineal o cadena ramificada C1 a C7 opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo o alcoxilo C1 a C4 y R3 y R4 son individualmente H o R1C(O); o

(c) uno o mas esteres de formula

0

II

R-j 0 O R2

en la que R1 es un alquilo de cadena lineal o cadena ramificada C1 a C7 opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo o alcoxilo C1 a C4 y R2 es un alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, alquilheteroarilo, heteroarilo de cadena lineal o de cadena ramificada C1 a C10, (CH2CH2O)n o (CH2CH(CH3)-O)nH y n es de 1 a 10; o

(d) uno o mas monosacaridos acetilados, disacaridos acetilados o polisacaridos acetilados; o

(e) cualquier combinacion de (a) a (d).

Los sustratos de referencia tambien pueden incluir uno o mas sacaridos acetilados seleccionados del grupo que consiste en mono-, di- y polisacaridos acilados. En otra realizacion, los sacaridos acilados se seleccionan del grupo que consiste en xilano acetilado; fragmentos de xilano acetilado; xilosa acetilada (tal como tetraacetato de xilosa); glucosa acetilada (tal como pentaacetato de a-D-glucosa; pentaacetato de p-D-glucosa; 2,3,4,6-tetraacetato de 1-tio- P-D-glucosa); pentaacetato de p-D-galactosa; hexaacetato de sorbitol; octaacetato de sacarosa; 1,2,3,5-tetraacetato de p-D-ribofuranosa; 1,2,3,4-tetraacetato de p-D-ribofuranosa; tri-O-acetil-D-galactal; tri-O-acetil-D-glucal; tetraacetato de p-D-xilofuranosa, pentaacetato de p-D-glucopiranosa; 1,2,3,4-tetraacetato de P-D-glucopiranosa; 2,3,4,6-tetraacetato de p-D-glucopiranosa; 2-acetamido-2-desoxi-1,3,4,6-tetracetil-p-D-glucopiranosa; 2-acetamido-2- desoxi-3,4,6-triacetil-1-cloruro-a-D-glucopiranosa; pentaacetato de p-D-manopiranosa y celulosa acetilada. En una realizacion preferida, el sacarido acetilado se selecciona del grupo que consiste en 1,2,3,5-tetraacetato de p-D- ribofuranosa; tri-O-acetil-D-galactal; tri-O-acetil-D-glucal; octaacetato de sacarosa; y celulosa acetilada.

Los sustratos de referencia adicionales tambien pueden incluir 5-acetoximetil-2-furaldefndo; 3,4-diacetoxi-1-buteno; acido 4-acetoxibenzoico; acetato de vainillina; acetato de metil eter de propilenglicol; lactato de metilo; lactato de etilo; glicolato de metilo; glicolato de etilo; metoxiacetato de metilo; metoxiacetato de etilo; 3-hidroxibutirato de metilo; 3-hidroxibutirato de etilo; y citrato de trietil-2-acetilo.

Se seleccionan sustratos de referencia adecuados adicionales del grupo que consiste en: monoacetina; diacetina; triacetina; monopropionina; dipropionina; tripropionina; monobutirina; dibutirina; tributirina; pentaacetato de glucosa; tetraacetato de xilosa; xilano acetilado; fragmentos de xilano acetilado; 1,2,3,5-tetraacetato de p-D-ribofuranosa; tri- O-acetil-D-galactal; tri-O-acetil-D-glucal; monoesteres o diesteres de 1,2-etanodiol; 1,2-propanodiol; 1,3-propanodiol;

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1,2-butanodiol; 1,3-butanodiol; 2,3-butanodiol; 1,4-butanodiol; 1,2-pentanodiol; 2,5-pentanodiol; 1,5-pentanodiol; 1,6- pentanodiol; 1,2-hexanodiol; 2,5-hexanodiol; 1,6-hexanodiol; y mezclas de los mismos. En otra realizacion, el sustrato es un poliol C1 a C6 que comprende uno o mas grupos ester. En una realizacion preferida, uno o mas de los grupos hidroxilo en el poliol C1 a C6 se sustituyen con uno o mas grupos acetoxilo (tal como diacetato de 1,3- propanodiol; diacetato de 1,2-propanodiol; diacetato de 1,4-butanodiol; diacetato de 1,5-pentanodiol, etc.). En una realizacion adicional, el sustrato es diacetato de propilenglicol (PGDA), diacetato de etilenglicol (EGDA), o una mezcla de los mismos.

Se seleccionan sustratos de referencia adecuados adicionales del grupo que consiste en monoacetina, diacetina, triacetina, monopropionina, dipropionina, tripropionina, monobutirina, dibutirina y tributirina. Sustratos de referencia adicionales son diacetina y triacetina. En la presente invencion, el sustrato adecuado comprende triacetina.

El ester del acido carboxflico esta presente a una concentracion suficiente para producir la concentracion deseada de acido peroxicarboxflico tras la perhidrolisis catalizada por enzima. No es necesario que el ester del acido carboxflico sea completamente soluble en la formulacion de reaccion, sino que tenga una solubilidad suficiente para permitir la conversion del ester por el catalizador de perhidrolasa en el correspondiente acido peroxicarboxflico. El ester del acido carboxflico esta presente en la formulacion de reaccion a una concentracion del 0,05% en peso al 40% en peso de la formulacion de reaccion, preferiblemente a una concentracion del 0,1% en peso al 20% en peso de la formulacion de reaccion, y mas preferiblemente a una concentracion del 0,5% en peso al 10% en peso de la formulacion de reaccion.

La fuente de peroxfgeno se proporciona como granulos depositados en o sobre la pelfcula adhesiva hidratable y puede incluir aductos de peroxido de hidrogeno (por ejemplo, aducto de urea-peroxido de hidrogeno (peroxido de carbamida)), sales de perborato, sales de percarbonato y sales de peroxido. La concentracion de compuesto de peroxfgeno en la formulacion de reaccion puede oscilar entre el 0,0033% en peso y aproximadamente el 50% en peso, preferiblemente entre el 0,033% en peso y aproximadamente el 40% en peso, mas preferiblemente entre el 0,1% en peso y aproximadamente el 30% en peso.

Se ha notificado que muchos catalizadores de perhidrolasa (celulas completas, celulas completas permeabilizadas y extractos de celulas completas parcialmente purificados) tienen actividad catalasa (EC 1.11.1.6). Las catalasas catalizan la conversion de peroxido de hidrogeno en oxfgeno y agua. En un aspecto, el catalizador de perhidrolisis carece de actividad catalasa. En otro aspecto, puede anadirse un inhibidor de catalasa a la formulacion de reaccion. Un experto en la tecnica puede ajustar la concentracion de inhibidor de catalasa segun sea necesario. La concentracion del inhibidor de catalasa normalmente oscila entre 0,1 mM y aproximadamente 1 M; preferiblemente entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 50 mM; mas preferiblemente entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM.

El catalizador enzimatico puede carecer de actividad catalasa significativa o puede modificarse por ingenierfa genetica para disminuir o eliminar la actividad catalasa. La actividad catalasa en una celula huesped puede regularse por disminucion o eliminarse alterando la expresion del/de los gene(s) responsable(s) de la actividad catalasa usando tecnicas bien conocidas incluyendo, pero sin limitarse a, mutagenesis de transposones, expresion de ARN antisentido, mutagenesis dirigida y mutagenesis al azar.

La concentracion de acido peroxicarboxflico generado (por ejemplo acido peracetico) mediante la perhidrolisis de al menos un ester del acido carboxflico es de al menos aproximadamente 0,1 ppm, preferiblemente de al menos 0,5 ppm, 1 ppm, 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 500 ppm, 700 ppm, 1000 ppm, 2000 ppm, 5000 ppm o 10.000 ppm de peracido en el plazo de 10 minutos, preferiblemente en el plazo de 5 minutos, del inicio de la reaccion de perhidrolisis. Claramente un experto en la tecnica puede ajustar los componentes de la reaccion para lograr la concentracion de peracido deseada.

El tiempo de reaccion requerido para producir la concentracion de peracido deseada puede no ser mayor de aproximadamente dos horas, preferiblemente no mayor de aproximadamente 30 minutos, mas preferiblemente no mayor de aproximadamente 10 minutos, y lo mas preferiblemente en aproximadamente 5 minutos o menos. En otros aspectos, se pone en contacto una superficie de la cavidad bucal con el acido peroxicarboxflico formado segun los procedimientos descritos en el presente documento en el plazo de 5 minutos de la hidratacion y combinacion de los componentes de la reaccion. El esmalte dental puede ponerse en contacto con el acido peroxicarboxflico producido con los procedimientos y las composiciones descritas en el presente documento en el plazo de aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 24 horas o en el plazo de aproximadamente 5 minutos a 2 horas de la combinacion (por medio de hidratacion por el usuario) de dichos componentes de la reaccion en o sobre la tira/pelfcula de blanqueamiento.

Metodo de ensayo de HPLC para determinar la concentracion de acido peroxicarboxflico y peroxido de hidrogeno Puede usarse una variedad de metodos analfticos para analizar los reactantes y productos incluyendo, pero sin

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limitarse a, valoracion, cromatograffa de liquidos de alta resolucion (HPLC), cromatograffa de gases (CG), espectroscopfa de masas (EM), electroforesis capilar (EC), el procedimiento analftico descrito por U. Pinkernell et al., (Anal. Chem., 69(17):3623-3627 (1997)), y el ensayo de 2,2'-azino-bis (3-etilbenzotiazolin)-6-sulfonato (ABTS) (U. Pinkernell et al. Analyst, 122: 567-571 (1997) y Dinu et al. Adv. Funct. Mater., 20: 392-398 (2010)) tal como se describe en los presentes ejemplos.

Realizaciones a modo de ejemplo:

Realizacion 1. Una tira de blanqueamiento dental (tira 1) que comprende una pelfcula adhesiva hidratable con un primer lado y un segundo lado, teniendo el primer lado un componente de blanqueo granular fijado al mismo, en la que la tira comprende, en o sobre la pelfcula o en granulos unidos al primer lado de la pelfcula,

(i) una protefna que tiene actividad perhidrolftica que comprende una secuencia de aminoacidos segun SEQ ID NO:

1;

(ii) un donador de acilo, por ejemplo, seleccionado de esteres del acido carboxflico y compuestos de acilo, en la que el sustrato donador de acilo es 1,2,3-triacetoxipropano.

Realizacion 2. Tira 1 en la que la protefna que tiene actividad perhidrolasa comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de:

a) MAFFDLPLEELKKYRPERYEEKDFDEFWEETLAESEKFPLDPVFERMESHLK

TVEAYDVTFSGYRGQRIKGWLLVPKLEEEKLPCVVQYIGYNGGRGFPHDWL

FWPSMGYICFVMDTRGQGSGWLKGDTPDYPEGPVDPQYPGFMTRGILDPRT

YYYRRVFTDAVRAVEAAASFPQVDQERIVIAGGSQGGGIALAVSALSKKAK

ALLCDVPFLCHFRRAVQLVDTHPYAEITNFLKTHRDKEEIVFRTLSYFDGVN

FAARAKIPALFSVGLMDNISPPSTVFAAYNYYAGPKEIRIYPYNNHEGGGSFQ AVEQVKFLKKLFEKG (SEQ ID NO: 1).

Realizacion 3. Realizacion 1 o 2, en la que la protefna que tiene actividad perhidrolftica comprende una secuencia de aminoacidos que tiene afinidad por, por ejemplo, se une a o se compleja con superficies bucales o alternativamente tiene afinidad, por ejemplo, se une a o se compleja con, uno o mas componentes de la tira de blanqueamiento.

Realizacion 4. Cualquiera de las tiras anteriores que comprende una protefna que tiene actividad perhidrolasa que se une a o se compleja con superficies bucales (por ejemplo, esmalte o pelfcula dental) que comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de

a) MAFFDLPLEELKKYRPERYEEKDFDEFWEETLAESEKFPLDPVFERMESHLK

TVEAYDVTFSGYRGQRIKGWLLVPKLEEEKLPCVVQY1GYNGGRGFPHDWL

FWPSMGYICFVMDTRGQGSGWLKGDTPDYPEGPVDPQYPGFMTRGILDPRT

YYYRRVFTDAVRAVEAAASFPQVDQERIVIAGGSQGGGIALAVSALSKKAK

ALLCDVPFLCHFRRAVQLVDTHPYAEITNFLKTHRDKEEIVFRTLSYFDGVN

FAARAKIPALFSVGLMDNISPPSTVFAAYNYYAGPKEIRIYPYNNHEGGGSFQ

AVEQVKFLKKLFEKGGPGSGGAGSPGSAGGPGSTKPPRTPTANTSRPHHNFG SGGGGSPHHHHHH (SEQ ID NO: 2), y

b) una secuencia de aminoacidos que tiene una identidad de secuencia de al menos el 80% con SEQ ID NO: 2.

Realizacion 5. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que la protefna que tiene actividad perhidrolftica se proporciona en forma granular sobre la primera superficie de la pelfcula.

Realizacion 6. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que el segundo lado de la pelfcula adhesiva hidratable se fija a una capa que inhibe la disolucion de la pelfcula adhesiva hidratable.

Realizacion 7. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que el componente de blanqueo granular se recubre con un material que se disuelve rapidamente, tal como almidon de mafz, sulfato de sodio, goma arabiga, y combinaciones de los mismos.

Realizacion 8. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que el componente de blanqueo granular se selecciona de granulos que comprenden oxidantes organicos y/o inorganicos, por ejemplo, seleccionados de peroxido de hidrogeno, peroxido de urea, percarbonatos, perboratos, peroximonofosfatos, peroxidisulfatos, peroxiacidos y acido peracetico.

Realizacion 9. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que el componente de blanqueo granular se selecciona de peroxidos solidos y donadores de peroxidos solidos, por ejemplo, seleccionados de sales o complejos de peroxido (por ejemplo, tales como sales de peroxifosfato, peroxicarbonato, perborato, peroxisilicato o persulfato; por ejemplo peroxifosfato de calcio, perborato de sodio, peroxido de carbonato de sodio, peroxifosfato de sodio y persulfato de 5 potasio); hipocloritos; peroxido de urea; complejos de polfmero de peroxido de hidrogeno tales como complejos de polfmero de peroxido de hidrogeno-polivinilpirrolidona; peroxidos de metal por ejemplo peroxido de zinc y peroxido de calcio; peracidos, y combinaciones de los mismos.

Realizacion 10. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que el componente de blanqueo granular comprende peroxido de urea, un complejo de polfmero de peroxido de hidrogeno-polivinilpirrolidona, percarbonato de sodio, o 10 una combinacion de dos o mas de los mismos.

Realizacion 11. Cualquiera de las tiras anteriores, en donde el tamano de partfcula (D50) de los granulos sobre la primera superficie de la pelfcula, por ejemplo, el componente de blanqueo granular, o perhidrolasa o donador de acilo en forma granular, es de 0,1-300 micrometros, por ejemplo 10-275 micrometros, por ejemplo, 100-250 micrometres.

15 Realizacion 12. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que el componente de blanqueo granular comprende mas del 0,01%, por ejemplo el 0,01-0,1%, por ejemplo el 0,02-0,08%, del peso total de la pelfcula adhesiva hidratable y un componente de blanqueo granular fijado a la misma.

Realizacion 13. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que la cantidad de agente de blanqueo granular sobre el primer lado de la pelfcula adhesiva hidratable es de 0,001 - 10 mg/cm2, por ejemplo, 0,001 - 1 mg/cm2, por ejemplo 20 0,005 - 0,015 mg/cm2.

Realizacion 14. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que el donador de acilo es 1,2,3-triacetoxipropano.

Realizacion 15. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que el donador de acilo se selecciona de 1,2,3- triacetoxipropano (algunas veces denominado en el presente documento triacetina o triacetato de glicerina).

Realizacion 16. Cualquiera de las tiras anteriores que comprende un donador de acilo que comprende un compuesto 25 de ester que tiene una solubilidad en agua de al menos 5 ppm a 25°C.

Realizacion 17. Cualquiera de las tiras anteriores que comprende un peracido o que genera un peracido tras su uso.

Realizacion 18. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que los componentes estan presentes en cantidades suficientes para proporcionar, tras el mezclado, un agente de blanqueo en una cantidad y concentracion eficaces para blanquear los dientes.

30 Realizacion 19. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que la pelfcula adhesiva hidratable comprende uno o mas polfmeros solubles en agua seleccionados de eteres de celulosa hidrofilos (por ejemplo carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa,), poli(acetatos de vinilo), carbomeros (por ejemplo, CARBOPOL® 971 P), gomas de polisacarido (por ejemplo goma xantana), almidones alimentarios modificados, gelatina (por ejemplo gelatina de origen animal o de pescado), copolfmeros de carboxivinilo reticulados, polivinilpirrolidonas 35 reticuladas, poli(oxido de etileno) (por ejemplo, POLlOx™), poli(acidos acnlicos) y poliacrilatos, poli(alcoholes vinflicos), alginato, casefna, pululano, y combinaciones de los mismos.

Realizacion 20. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que la pelfcula adhesiva hidratable comprende uno o mas polfmeros solubles en agua seleccionados de eteres de celulosa hidrofilos (por ejemplo hidroxipropilmetilcelulosa o hidroxipropilcelulosa), poli(oxido de etileno), poli(acetatos de vinilo) y carbomeros (por ejemplo, CARBOPOL® 971P); 40 y combinaciones de los mismos.

Realizacion 21. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que la pelfcula adhesiva hidratable comprende hidroxipropilmetilcelulosa, poli(acetatos de vinilo) y un carbomero, por ejemplo, en una razon en peso seco de 10-20 HPMC:2-10 PVAc:1 carbomero.

Realizacion 22. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que la pelfcula adhesiva hidratable comprende ademas un 45 plastificante, por ejemplo propilenglicol, polietilenglicol o triacetina.

Realizacion 23. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que el primer lado de la pelfcula adhesiva hidratable esta cubierto por una cubierta protectora antes de su uso.

Realizacion 24. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que la pelfcula adhesiva hidratable tiene una viscosidad de

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al menos 100.000 cps tras la activacion, por ejemplo, una viscosidad de 100.000 a 200.000 cps.

Realizacion 25. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que la pelfcula adhesiva hidratable esta sustancialmente seca antes de su aplicacion.

Realizacion 26. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que el grosor de la pelfcula adhesiva hidratable es de 0,15 mm, por ejemplo, 0,5-5 mm.

Realizacion 27. Cualquiera de las tiras anteriores, en la que las dimensiones globales aproximadas son de 2-10 cm de largo x 0,5-2 cm de ancho x 0,1-10 mm de grosor, por ejemplo, 1-10 mm de grosor, por ejemplo una tira en la que el area de superficie de un lado es de 5 - 20 cm2, por ejemplo, aproximadamente 5 - 15 cm2, por ejemplo, aproximadamente 10 cm2.

Realizacion 28. Cualquiera de las tiras anteriores que comprende granulos recubiertos de un complejo de polfmero de peroxido de hidrogeno-polivinilpirrolidona, peroxido de urea y/o percarbonato de sodio y granulos de perhidrolasa sobre la primera superficie de la pelfcula, con triacetina dispersada en la pelfcula.

Realizacion 29. Cualquiera de las tiras anteriores, que comprende ademas granulos de un agente antisensibilidad, por ejemplo nitrato de potasio o arginina.

Realizacion 30. Un metodo (metodo 2) de blanqueamiento dental que comprende aplicar el primer lado de una tira tal como se describio anteriormente en el presente documento, por ejemplo la tira 1 y siguientes directamente a los dientes, y dejarla sobre los mismos durante un tiempo suficiente, por ejemplo, al menos 5 minutos, por ejemplo 1060 minutos, por ejemplo, 10-30 minutos, para blanquear los dientes.

Realizacion 31. Un metodo (metodo 3) de preparacion de una tira para blanqueamiento dental, por ejemplo, una tira tal como se describio anteriormente en el presente documento, segun la tira 1 y siguientes, que comprende proporcionar una pelfcula adhesiva hidratable semiseca, por ejemplo, tal como se describio anteriormente en el presente documento, por ejemplo, pelfcula que se ha colado en agua y no se ha secado completamente, o pelfcula que se ha humedecido, anadir a una superficie de la pelfcula granulos de un componente de blanqueo granular, por ejemplo, tal como se describio anteriormente en el presente documento, y secar la pelfcula con los granulos anadidos a una superficie.

Por ejemplo, las tiras pueden prepararse preparando en primer lugar la pelfcula adhesiva hidratable, usando medios convencionales y luego anadiendo el componente de blanqueamiento granulado a una superficie. Las tiras de pelfcula adhesiva hidratable pueden colarse en agua en una variedad de modos conocidos en la tecnica, tal como mediante extrusion, o mediante colada en una suspension de agua (por ejemplo a un nivel de solidos del 10-30%) sobre una cinta calentada, de la que se evapora el agua. Alternativamente, la pelfcula se seca, pero luego vuelve a humedecerse. Los granulos pueden anadirse a la superficie de esta pelfcula mientras la pelfcula esta semiseca, es decir justo la humedad suficiente para que sea pegajosa, de modo que los granulos se pegan a la superficie de la pelfcula. Una vez que la pelfcula se seca completamente y se enfrfa hasta temperatura ambiente, los granulos continuan adhiriendose a la superficie de la pelfcula. Antes de su uso, por tanto, la pelfcula adhesiva hidratable y la tira como un todo estan sustancialmente secas. Debido a que el peroxido esta sobre la superficie de la pelfcula solo, se requiere una cantidad relativamente pequena de granulos para proporcionar una concentracion eficaz en la superficie.

Realizaciones preferidas:

Cuando se exponen a la saliva u otras fuentes de agua (tal como agua corriente), los granulos se disuelven y liberan los componentes de la reaccion para producir enzimaticamente el peracido deseado. La hidratacion de la capa de adhesivo hidratable aumenta la pegajosidad de la pelfcula, permitiendo que la pelfcula/tira de blanqueamiento se una a la superficie diana (es decir, esmalte dental).

La pelfcula adhesiva hidratable comprende uno o mas polfmeros solubles en agua, aceptables por via oral seleccionados de eteres de celulosa hidrofilos (por ejemplo, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa,), poli(acetatos de vinilo), carbomeros (por ejemplo, CARBOPOL® 971P), gomas de polisacarido (por ejemplo, goma xantana), almidones alimentarios modificados, gelatina (por ejemplo, gelatina de origen animal o de pescado), copolfmeros de carboxivinilo reticulados, polivinilpirrolidonas reticuladas, poli(oxido de etileno) (por ejemplo, POLIOX™), poli(acidos acnlico) y poliacrilatos, poli(alcoholes vimlico), alginato, casefna, pululano, y combinaciones de los mismos. Se conocen en la tecnica formulaciones de gel adhesivo para su uso con agentes de blanqueamiento dental, por ejemplo, tal como se describen en las patentes estadounidenses 7.862.801; 5.746.598; 6.730.316; y 7.128.899; cada una incorporada como referencia en su totalidad. La pelfcula adhesiva permite que el agente de blanqueo de peracido permanezca en contacto sobre los dientes durante periodos de tiempo prolongados y proteja los tejidos blandos, y por tanto debe proporcionar una alta viscosidad, por ejemplo, una

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viscosidad tras la aplicacion de al menos 100.000 centipoise (cps) (aproximadamente 100 Pascales-segundo (Pas)), preferiblemente de 100.000 a 200.000 cps (de 100 a 200 Pas).

Cuando se usa una segunda capa de pelfcula para proteger la pelfcula adhesiva hidratable de la degradacion o disolucion rapida, el material de soporte o portador puede prepararse a partir de materiales textiles, tela, material compuesto de madera, resina, elastomero, papel, derivados de celulosa insolubles o menos solubles tales como etilcelulosa y acetato de celulosa, poli(cloruro de vinilo), cera, PARAFILM™, polietileno, poli(alcohol vimlico), TEFLON™, poli(cloruro de vinilo), poli(acetato de vinilo) y sus derivados.

El componente de blanqueo granular puede ser un peroxido solido o donador de peroxido solido seleccionado de sales o complejos de peroxido (tales como sales de peroxifosfato, peroxicarbonato, perborato, peroxisilicato o persulfato; por ejemplo peroxifosfato de calcio, perborato de sodio, peroxido de carbonato de sodio, peroxifosfato de sodio y persulfato de potasio), hipocloritos; peroxido de urea; complejos de polfmero de peroxido de hidrogeno tales como complejos de polfmero de peroxido de hidrogeno-polivinilpirrolidona, y peroxidos de metal, por ejemplo, peroxido de zinc y peroxido de calcio; un peracido solido; y combinaciones de los mismos. En realizaciones particulares, el componente de blanqueo granular es peroxido de urea o un complejo de polfmero de peroxido de hidrogeno-polivinilpirrolidona. El componente de blanqueo granular puede estar recubierto opcionalmente para proporcionar una estabilidad en almacenamiento mejorada (por ejemplo, recubierto con sulfato de sodio, almidon de mafz o goma arabiga).

La invencion se refiere a una tira de blanqueamiento dental que comprende una pelfcula adhesiva hidratable con un primer lado y un segundo lado, teniendo el primer lado que tiene un componente de blanqueo granular fijado al mismo, en la que la tira de blanqueamiento dental comprende ademas, en o sobre la pelfcula o en forma de granulos unidos al primer lado de la pelfcula;

a) una enzima que tiene actividad perhidrolftica, comprendiendo dicha enzima una secuencia de aminoacidos segun SEQ ID NO: 1,

b) al menos un sustrato donador de acilo, en la que el sustrato donador de acilo es 1,2,3-triacetoxipropano.

La tira de blanqueamiento dental segun la invencion presenta una enzima que tiene actividad perhidrolftica y que comprende secuencia de aminoacidos seleccionada de:

a) SEQ ID NO: 1.

La tira de blanqueamiento dental mencionada anteriormente en la que la enzima que tiene actividad perhidrolftica comprende ademas un dominio de union fusionado al extremo N- o C-terminal de la enzima, teniendo dicho dominio de union afinidad por un tejido bucal o por la tira de blanqueamiento dental.

La tira de blanqueamiento dental mencionada anteriormente, en la que el dominio de union que tiene afinidad por un tejido bucal comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ D NO: 178-197.

Realizacion preferida 5. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que la enzima que tiene actividad perhidrolftica tiene afinidad por un tejido bucal y comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de

a) SEQ ID NO: 2, y

b) una secuencia de aminoacidos que tiene una identidad de secuencia de aminoacidos de al menos el 80% con SEQ ID NO: 2.

Realizacion preferida 6. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores que comprende ademas una capa de soporte unida a dicho segundo lado de la pelfcula adhesiva hidratable, pudiendo dicha capa de soporte inhibir la disolucion de la pelfcula adhesiva hidratable.

Realizacion preferida 7. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que el componente de blanqueo granular se recubre con un recubrimiento soluble en agua que puede disolverse tras la hidratacion.

Realizacion preferida 8. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que el componente de blanqueo granular se selecciona de peroxidos solidos y donadores de peroxidos solidos.

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Realizacion preferida 9. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que el componente de blanqueo granular se selecciona de sales de peroxido, complejos de peroxido, sales de peroxifosfato, peroxicarbonato, perborato, peroxisilicato, persulfato, peroxifosfato de calcio, perborato de sodio, peroxido de carbonato de sodio, peroxifosfato de sodio, persulfato de potasio, hipocloritos, peroxido de urea, complejos de polfmero de peroxido de hidrogeno, complejos de polfmero de peroxido de hidrogeno-polivinilpirrolidona, peroxidos de metal, peroxido de zinc, peroxido de calcio, y combinaciones de los mismos.

Realizacion preferida 10. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que el componente de blanqueo granular comprende peroxido de urea. En algunas realizaciones, el componente de blanqueo granular comprende un complejo de polfmero de peroxido de hidrogeno-polivinilpirrolidona. En algunas realizaciones, el complejo de polfmero de peroxido de hidrogeno-polivinilpirrolidona es un complejo de polfmero de peroxido de hidrogeno-polivinilpirrolidona reticulada.

Realizacion preferida 11. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) del componente de blanqueo granular oscilaba entre 10 micrometres y 300 micrometres, por ejemplo, entre 10 micrometres y 200 micrometres.

Realizacion preferida 12. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que la tira de blanqueamiento dental comprende desde aproximadamente el 0,01% en peso hasta aproximadamente el 0,1% en peso de un peracido. En algunas realizaciones, el componente de blanqueo granular comprende desde aproximadamente el 0,1% en peso hasta el aproximadamente 30% en peso de una fuente de peroxfgeno.

Realizacion preferida 13. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que la cantidad de agente de blanqueo granular en el primer lado de la pelfcula adhesiva hidratable

oscila entre 0,001 mg/cm2 y 10 mg/cm2

por ejemplo, entre 0,001 mg/cm2 y 1 mg/cm2.

Realizacion preferida 14. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que el sustrato donador de acilo es 1,2,3-triacetoxipropano.

Realizacion preferida 15. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que la pelfcula adhesiva hidratable comprende uno o mas polfmeros solubles en agua seleccionados de un eter de celulosa hidrofilo, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, un poli(acetato de vinilo), un carbomero, una goma de polisacarido, goma xantana, un almidon alimentario modificado, gelatina, gelatina de origen animal o de pescado, un copolfmero de carboxivinilo reticulado, una polivinilpirrolidona reticulada, poli(oxido de etileno), un poli(acido acrflico), un poliacrilato, un poli(alcohol vinflico), alginato, casefna, pululano, y una combinacion de dos o mas de los mismos.

Realizacion preferida 16. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que la pelfcula adhesiva hidratable comprende uno o mas polfmeros solubles en agua seleccionados de un eter de celulosa hidrofilo, un poli(acetato de vinilo), un carbomero, y una combinacion de dos o mas de los mismos.

Realizacion preferida 17. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que la pelfcula adhesiva hidratable comprende hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), poli(acetato de vinilo) (PVAc) y un carbomero en una razon en peso seco para HMPC:PVAc:carbomero de 10-20:2-10:1.

Realizacion preferida 18. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en la que la pelfcula adhesiva hidratable comprende ademas un plastificante.

Realizacion preferida 19. La tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores que comprende ademas propilenglicol.

Realizacion preferida 20. Un metodo de blanqueamiento dental que comprende

a) proporcionar un sistema de envasado que comprende la tira de blanqueamiento dental segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores;

b) retirar la tira de blanqueamiento dental del sistema de envasado; y

c) poner en contacto la tira de blanqueamiento dental directamente con los dientes durante un periodo de tiempo suficiente para blanquear los dientes;

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en el que la tira de blanqueamiento dental se hidrata por la humedad presente en la cavidad bucal o sobre la superficie del diente o se hidrata despues de la etapa (b) pero antes de la etapa (c).

Realizacion preferida 21. El metodo de la realizacion preferida 20, en el que la tira de blanqueamiento comprende ademas una capa de soporte unida a dicho segundo lado de la pelfcula adhesiva hidratable, pudiendo dicha capa de soporte inhibir la disolucion de la pelfcula adhesiva hidratable.

Realizacion preferida 22. El metodo segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en el que la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) del componente de blanqueo granular oscilaba entre 10 micrometros y 200 micrometros.

Realizacion preferida 23. El metodo segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en el que el componente de blanqueo granular comprende mas del 0,01% en peso del peso total de la pelfcula adhesiva hidratable y un componente de blanqueo granular fijado al mismo. En algunas realizaciones, el componente de blanqueo granular comprende mas del 0,05% en peso del peso total de la pelfcula adhesiva hidratable y un componente de blanqueo granular fijado al mismo. En algunas realizaciones, el componente de blanqueo granular comprende desde aproximadamente el 0,01% en peso hasta aproximadamente el 0,1% en peso del peso total de la pelfcula adhesiva hidratable y un componente de blanqueo granular fijado al mismo.

Realizacion preferida 24. El metodo segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en el que la cantidad de agente de blanqueo granular en el primer lado de la pelfcula adhesiva hidratable oscila entre 0,001 mg/cm2 y 1 mg/cm2.

Realizacion preferida 25. El metodo segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en el que el sustrato donador de acilo es 1,2,3-triacetoxipropano.

Realizacion preferida 26. El metodo segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en el que la pelfcula adhesiva hidratable comprende uno o mas polfmeros solubles en agua seleccionados de un eter de celulosa hidrofilo, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, un poli(acetato de vinilo), un carbomero, una goma de polisacarido, goma xantana, un almidon alimentario modificado, gelatina, gelatina de origen animal o de pescado, un copolfmero de carboxivinilo reticulado, una polivinilpirrolidona reticulada, poli(oxido de etileno), un poli(acido acrflico), un poliacrilato, un poli(alcohol vinflico), alginato, casefna, pululano, y una combinacion de dos o mas de los mismos.

Realizacion preferida 27. El metodo segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en el que la pelfcula adhesiva hidratable comprende uno o mas polfmeros solubles en agua seleccionados de un eter de celulosa hidrofilo, un poli(acetato de vinilo), un carbomero, y una combinacion de dos o mas de los mismos.

Realizacion preferida 28. El metodo segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en el que la pelfcula adhesiva hidratable comprende hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), poli(acetato de vinilo) (PVAc) y un carbomero en una razon en peso seco para HMPC:PVAc:carbomero de 10-20:2-10:1.

Realizacion preferida 29. El metodo segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en el que la pelfcula adhesiva hidratable comprende ademas un plastificante.

Realizacion preferida 30. El metodo segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en el que la pelfcula adhesiva hidratable comprende ademas propilenglicol.

Realizacion preferida 31. El metodo segun cualquiera de las realizaciones preferidas anteriores, en el que el componente de blanqueo granular se recubre con un recubrimiento soluble en agua que puede disolverse tras la hidratacion.

Realizacion preferida 32. Un metodo de preparacion de una tira de blanqueamiento dental que comprende:

a) proporcionar una pelfcula adhesiva hidratable semiseca,

b) aplicar a una superficie de la pelfcula granulos de un componente de blanqueo granular mediante lo cual los granulos se adhieren a la superficie, y

c) secar la pelfcula.

En algunas realizaciones, la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) del componente de blanqueo granular es de desde 10 micrometros hasta 300 micrometres. En algunas realizaciones, la mediana del diametro de

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tamano de partfcula (D50) del componente de blanqueo granular es de desde 25 micrometros hasta 200 micrometros. En algunas realizaciones, la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) del componente de blanqueo granular es de desde 35 micrometros hasta 150 micrometros. En algunas realizaciones, la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) del componente de blanqueo granular es de desde 50 micrometros hasta 125 micrometros. En algunas realizaciones, la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) del componente de blanqueo granular es de desde 60 micrometros hasta 100 micrometros. En algunas realizaciones, la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) del componente de blanqueo granular es de aproximadamente 64 micrometros. En algunas realizaciones, la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) del componente de blanqueo granular es de aproximadamente 94 micrometros.

En algunas realizaciones, la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) de la enzima que tiene actividad perhidrolftica es de desde 100 micrometros hasta 300 micrometros. En algunas realizaciones, la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) de la enzima que tiene actividad perhidrolftica es de desde 150 micrometros hasta 275 micrometros. En algunas realizaciones, la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) de la enzima que tiene actividad perhidrolftica es de desde 175 micrometros hasta 250 micrometros.

Todos los componentes para su uso en las tiras descritas en el presente documento deben ser aceptables por via oral. Por “aceptable por via oral” tal como se usa el termino en el presente documento quiere decirse un componente que esta presente en una tira tal como se describe en una cantidad y forma que no hace que la tira sea insegura para su uso en la cavidad bucal.

Tal como se usa a lo largo de todo el documento, se usan intervalos como abreviatura para describir todos y cada uno de los valores que estan dentro del intervalo. Cualquier valor dentro del intervalo puede seleccionarse como extremo terminal del intervalo.

A menos que se especifique otra cosa, todos los porcentajes y cantidades expresadas en el presente documento y en cualquier lugar en la memoria descriptiva debe entenderse que se refieren a porcentajes en peso. Las cantidades proporcionadas se basan en el peso activo del material.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos se proporcionan para demostrar aspectos preferidos de la invencion. Los expertos en la tecnica deben apreciar que las tecnicas dadas a conocer en los ejemplos siguen tecnicas que funcionan bien en la practica de la invencion, y por tanto puede considerarse que constituyen modos preferidos para su puesta en practica. Sin embargo, los expertos en la tecnica, en vista de la presente divulgacion, deben apreciar que pueden hacerse muchos cambios en las realizaciones especfficas que se dan a conocer y todavfa obtener un resultado igual o similar sin apartarse del espfritu y alcance de los metodos y ejemplos dados a conocer en el presente documento.

Todos los materiales y reactivos se obtuvieron de DIFCO Laboratories (Detroit, MI), GIBCO/BRL (Gaithersburg, MD), TCI America (Portland, OR), Roche Diagnostics Corporation (Indianapolis, IN), Thermo Scientific (Pierce Protein Research Products) (Rockford, IL) o Sigma/Aldrich Chemical Company (St. Louis, MO), a menos que se especifique otra cosa.

Las siguientes abreviaturas en la memoria descriptiva corresponden a unidades de medida, tecnicas, propiedades o compuestos tal como sigue: “seg” o “s” significa segundo(s), “min” significa minuto(s), “h” o “hr” significa hora(s), “pl” significa microlitro(s), “ml” significa mililitro(s), “l” significa litro(s), “mM” significa milimolar, “M” significa molar, “mmol” significa milimol(es), “ppm” significa parte(s) por millon, “p” significa peso, “% en peso” significa porcentaje en peso, “g” significa gramo(s), “mg” significa miligramo(s), “pg” significa microgramo(s) y “ng” significa nanogramo(s).

Ejemplo 1

Se prepara una tira tal como se describio anteriormente, formando la pelfcula adhesiva hidratable y entonces mientras la pelfcula esta todavfa pegajosa, anadiendo el agente de blanqueamiento granulado y la enzima granulada a la superficie de un lado, usando los componentes de la tabla 1. La tira se erosionara lentamente en la boca tras la aplicacion, y de ese modo no es necesario retirarla.

Tabla 1

Componentes en la tira

Concentracion en tira seca (% en peso)

Hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC)

59

Poli(acetato de vinilo) (PVAc)

30

Carbopol, 971

5

Triacetina

5

Componentes en la tira

Concentracion en tira seca (% en peso)

Dioxido de titanio

1

Total

100

Componentes en granulo blanqueador

Concentracion (% en peso)

Peroxido de urea

100

Componentes en granulo enzimatico

Concentracion (% en peso)

Almidon de mafz

99

Enzima perhidrolasa

1

La tira en el ejemplo 1 se cuela en agua mediante extrusion, o colando en una suspension de agua (por ejemplo a un nivel de solidos del 10-30%) sobre una cinta calentada, de la que se evapora el agua. Se anaden los granulos a la superficie de esta pelfcula cuando la pelfcula esta semiseca o seca, pero todavfa pegajosa. Una vez enfriada hasta temperatura ambiente, los granulos se adhieren a la superficie de la pelfcula. Para una tira con un area de 5 10 cm2 y un peso de 10 mg/cm2, esta formula administra 5 mg de triacetina. Suponiendo que se distribuyen 1,4 mg

de granulos de blanqueo sobre la tira, junto con 0,3 mg de granulos enzimaticos, esta dosis es suficiente para producir acido peracetico suficiente directamente en la superficie del diente para superar significativamente a una tira de blanqueamiento de solo peroxido. (Las tiras de solo peroxido tienen normalmente una dosis total de aproximadamente 3-10 mg de peroxido.)

10 Cuando se expone a saliva u otras fuentes de agua (tal como agua corriente), los granulos se disuelven inmediatamente y se vuelven activos. La capa adhesiva tambien se activa y se pega a los dientes eficazmente. Se disena el ejemplo 1 para que se erosione lentamente en la boca a lo largo del tiempo, de modo que no es necesario que el usuario la retire.

Ejemplo 2

15 Se prepara una tira tal como se describio anteriormente, formando la pelfcula adhesiva hidratable y entonces mientras la pelfcula esta todavfa pegajosa, anadiendo los agentes granulados a un lado y la capa de soporte protectora al otro lado, usando los componentes de la tabla 2. Puesto que la capa de soporte no se disolvera, el usuario debe retirarla despues de que haya transcurrido un periodo suficiente como para permitir que tenga lugar el blanqueamiento, normalmente 10-30 minutos aproximadamente. Las dos capas tambien pueden producirse

20 simultaneamente mediante extrusion o colada basada en disolvente, entonces el agente de blanqueamiento granulado puede anadirse a la superficie de la pelfcula adhesiva hidratable.

Tabla 2

Componentes en la capa n.° 1

Concentracion en tira seca (% en peso)

Etilcelulosa

94

Propilenglicol

5

Dioxido de titanio

1

Total

100

Componentes en la capa n.° 2

Concentracion en tira seca (% en peso)

Hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC)

69

Poli(acetato de vinilo) (PVAc)

15

Carbopol, 971

5

Triacetina

5

Dioxido de titanio

1

Saborizante

5

Total

100

Componentes en granulo blanqueador

Concentracion (% en peso)

Goma arabiga

10

Peroxido de urea

90

Componentes en granulo enzimatico

Concentracion (% en peso)

Almidon de mafz

99

Enzima perhidrolasa

1

Ejemplo 3

Claims (13)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   1. Tira de blanqueamiento dental que comprende una pelfcula adhesiva hidratable con un primer lado y un segundo lado, teniendo el primer lado un componente de blanqueo granular fijado al mismo, en la que la tira de blanqueamiento dental comprende ademas, en o sobre la pelfcula o en forma de granulos unidos al primer lado de la pelfcula:

   (a) una enzima que comprende una secuencia de aminoacidos segun SEQ ID NO: 1; y

   (b) al menos un sustrato donador de acilo, en el que el sustrato donador de acilo es 1,2,3-triacetoxipropano.
2. 2. Tira de blanqueamiento dental segun la reivindicacion 1, en la que la enzima que tiene actividad perhidro lftica comprende ademas un dominio de union fusionado al extremo N- o C-terminal de la enzima, teniendo dicho dominio de union afinidad por un tejido oral o por la tira de blanqueamiento dental.
3. 3. Tira de blanqueamiento dental segun la reivindicacion 2, en la que el dominio de union que tiene afinidad por un tejido oral comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 29-163.
4. 4. Tira de blanqueamiento dental segun la reivindicacion 3, en la que la enzima que tiene actividad perhidrolftica tiene afinidad por un tejido oral y comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de

   a) SEQ ID NO: 2, y

   b) una secuencia de aminoacidos que tiene una identidad de secuencia de aminoacidos de al menos el 80% con SEQ ID NO: 2.
5. 5. Tira de blanqueamiento dental segun cualquier reivindicacion anterior, que comprende ademas una capa de soporte unida a dicho segundo lado de la pelfcula adhesiva hidratable, pudiendo dicha capa de soporte inhibir la disolucion de la pelfcula adhesiva hidratable, y/o en la que el componente de blanqueo granular se recubre con un recubrimiento soluble en agua que puede disolverse tras la hidratacion, y/o en la que el componente de blanqueo granular se selecciona de peroxidos solidos y donadores de peroxidos solidos.
6. 6. Tira de blanqueamiento dental segun cualquier reivindicacion anterior, en la que el componente de blanqueo granular se selecciona de sales peroxido, complejos de peroxido, sales de peroxifosfato, peroxicarbonato, perborato, peroxisilicato, persulfato, peroxifosfato de calcio, perborato de sodio, peroxido de carbonato de sodio, peroxifosfato de sodio, persulfato de potasio, hipocloritos, peroxido de urea, complejos de polfmero de peroxido de hidrogeno, complejos de polfmero de peroxido de hidrogeno-polivinilpirrolidona polfmero, peroxidos de metal, peroxido de zinc, peroxido de calcio, y combinaciones de los mismos.
7. 7. Tira de blanqueamiento dental segun cualquier reivindicacion anterior, en la que el componente de blanqueo granular se selecciona de peroxido de urea, percarbonato de sodio, un complejo de polfmero de peroxido de hidrogeno-polivinilpirrolidona, y una combinacion de dos o mas de los mismos.
8. 8. Tira de blanqueamiento dental segun cualquier reivindicacion anterior, en la que la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) del componente de blanqueo granular es de desde 10 micrometros hasta 300 micrometres, y/o en la que la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) del componente de blanqueo granular es de desde 100 micrometros hasta 250 micrometros, y/o en la que la mediana del diametro de tamano de partfcula (D50) de la enzima que tiene actividad perhidrolftica es de desde 100 micrometros hasta 250 micrometros.
9. 9. Tira de blanqueamiento dental segun cualquier reivindicacion anterior, en la que la tira genera al menos aproximadamente el 0,1% en peso de un peracido, y/o en la que la cantidad de agente de blanqueo granular en el primer lado de la pelfcula adhesiva hidratable oscila entre 0,001 mg/cm2 y 1 mg/cm2.
10. 10. Tira de blanqueamiento dental segun cualquier reivindicacion anterior, en la que la pelfcula adhesiva hidratable comprende uno o mas polfmeros solubles en agua seleccionados de un eter de celulosa hidrofilo, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, un poli(acetato de vinilo), un carbomero, una goma de polisacarido, goma xantana, un almidon alimentario modificado, gelatina, gelatina de origen animal o de pescado, un copolfmero de carboxivinilo reticulado, una polivinilpirrolidona reticulada, poli(oxido de etileno), un poli(acido acrflico), un poliacrilato, un poli(alcohol vinflico), alginato, casefna, pululano, y una combinacion de dos o mas de los mismos.
11. 11. Tira de blanqueamiento dental segun cualquier reivindicacion anterior, en la que la pelfcula adhesiva hidratable comprende uno o mas polfmeros solubles en agua seleccionados de un eter de celulosa hidrofilo, un poli(alcohol

    vinflico), un carbomero, y una combinacion de dos o mas de los mismos.
12. 12. Tira de blanqueamiento dental segun cualquier reivindicacion anterior, en la que la pelfcula adhesiva hidratable comprende ademas un plastificante, y/o en la que la pelfcula adhesiva hidratable comprende ademas propilenglicol, y/o en la que el componente de blanqueo granular se recubre con un recubrimiento soluble en agua que puede

    5 disolverse tras la hidratacion, y/o en la que se genera una cantidad eficaz de un peracido en una concentracion sustancialmente uniforme a lo largo de la superficie de la tira de blanqueamiento dental.
13. 13. Metodo de blanqueamiento dental que comprende

    a) proporcionar un sistema de envasado que comprende la tira de blanqueamiento dental segun cualquier reivindicacion anterior;

    10 b) retirar la tira de blanqueamiento dental del sistema de envasado; y

    c) poner en contacto la tira de blanqueamiento dental directamente con los dientes durante un periodo de tiempo suficiente para blanquear los dientes;

    en el que la tira de blanqueamiento dental se hidrata por la humedad presente en la cavidad bucal o sobre la superficie del diente o se hidrata despues de la etapa (b) pero antes de la etapa (c).